家禽におけるコクシジウム症の処置のためのシマルバアマラ及び／又はモモルディカカランティア抽出物
家禽におけるコクシジウム症の処置用の医薬品の製造のための、単独の、又はモモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）と組み合わせられた、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ（Ｓｉｍａｒｏｕｂａ ａｍａｒａ）の使用が記載される。さらに、該医薬品の投与に基づく家禽におけるコクシジウム症を抑制する方法が記載される。また、タンパク質、ビタミン及びミネラルのような添加剤を含むか又は含まない粉砕された植物及び／又は動物に基づく乾燥家禽飼料の他に、単独の、又はモモルディカカランティア果実抽出物と組み合わせられた、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物を含む、家禽におけるコクシジウム症の抑制のための家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料も記載される。該医薬品の製造、及び家禽におけるコクシジウム感染の予防的又は治療的な処置のための、乾燥又は湿性の家禽食料又は飲料水への添加剤としての該活性成分の使用も記載される。もう一つの記載された実施態様は、一つ以上の生理学的に許容される担体と一緒の、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の投与と、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物の投与との循環を含む、家禽におけるコクシジウム症を引き起こす耐性エイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）株の発生を防止するための管理に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、家禽におけるコクシジウム症の処置用の医薬品の製造のための、単独の、又はモモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）と組み合わせられた、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ（Ｓｉｍａｒｏｕｂａ ａｍａｒａ）の使用に関する。それは、さらに、該医薬品の投与に基づく家禽におけるコクシジウム症を抑制する方法に関する。本発明は、タンパク質、ビタミン及びミネラルのような添加剤を含むか又は含まない粉砕された植物及び／又は動物に基づく乾燥家禽飼料の他に、単独の、又はモモルディカカランティア果実抽出物と組み合わせられた、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物を含む、家禽におけるコクシジウム症の抑制のための家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料も包含する。本発明は、該医薬品の製造、及び家禽におけるコクシジウム感染の予防的又は治療的な処置のための、乾燥もしくは湿性の家禽食料又は飲料水への添加剤としての該活性成分の使用にも関する。さらに、本発明は、一つ以上の生理学的に許容される担体と一緒の、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の投与と、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物の投与との循環を含む、家禽におけるコクシジウム症を引き起こす耐性エイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）株の発生を防止するための管理にも関する。
【０００２】
コクシジウム症は、全ての大陸に蔓延している一方で、家禽産業に対して重大な経済的損失を引き起こすため、家禽における最も重要な疾患のうちの一つである。
【０００３】
コクシジウム症は、家禽の腸及び盲腸における重度の病態を引き起こす。それは、主として、小腸の上部、中央部及び下部、直腸、結腸、並びに盲腸に影響を与える。コクシジウム症は、（コクシジウムと呼ばれる）エイメリア属の原生動物（アピコンプレクサ（ａｐｉｃｏｍｐｌｅｘａ））による感染により引き起こされる。家禽（ニワトリ、シチメンチョウ）において問題を引き起こす一般的な種は、エイメリアアセルブリナ（ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）、Ｅ．ブルネット（ｂｒｕｎｅｔｔ）、Ｅ．マキシマ（ｍａｘｉｍａ）、Ｅ．ミバティ（ｍｉｖａｔｉ）、Ｅ．ネカトリックス（ｎｅｃａｔｒｉｘ）、Ｅ．テネラ（ｔｅｎｅｌｌａ）、Ｅ．アデノエイデス（ａｄｅｎｏｅｉｄｅｓ）、Ｅ．ジスペルサ（ｄｉｓｐｅｒｓａ）、Ｅ．ガロパボニス（ｇａｌｌｏｐａｖｏｎｉｓ）、Ｅ．メレアグリディス（ｍｅｌｅａｇｒｉｄｉｓ）、Ｅ．エイシアエ（ａｙｔｈｙａｅ）及びＥ．ブルセファラエ（ｂｕｒｃｅｐｈａｌａｅ）である。鳥類におけるエイメリアの寄生部位は、エイメリアの種及び家禽の種に依る。コクシジウムは、小腸の上部、中央部及び下部、直腸、結腸、腎臓、並びに盲腸に寄生し得る。
【０００４】
本発明に関して、家禽という表現は、齢と無関係に、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、メンドリ、ハト、シチメンチョウ及びダチョウを含む、家畜化されたトリのあらゆる品種について使用される。該表現は、好ましくは、ニワトリ、アヒル、ガチョウ及びシチメンチョウについて使用され、最も好ましくは、ニワトリについて使用される。
【０００５】
トリは、通常、感染性の段階、即ち、胞子形成した接合子嚢により汚染された水、飼料又は敷きわら材料を摂取することにより感染する。腸内で、接合子嚢壁が機械的にかつ／又は酵素的に破壊される。スポロシストが遊離し、酵素に曝され、スポロゾイトを放出する。スポロゾイトは活発に移動し、上皮細胞に侵入し、そこで、さらに発達する。細胞内で、スポロゾイトは、第１世代シゾントへと発達する。シゾント内に、数百〜数千のメロゾイトが形成される。宿主細胞が破壊されると、メロゾイトが放出され、他の上皮細胞に侵入し、第二世代のシゾント及びさらなるメロゾイトを形成する。いくつかのエイメリア種は、そのサイクルを繰り返し、第３世代のシゾントを形成する。有性発達段階への切り替えのための誘発因子は未知である。
【０００６】
しかしながら、誘発された場合には、大配偶子及び小配偶子が形成される。小配偶子が大配偶子と受精し、細胞内接合子の形成に至る。接合子は接合子嚢になり、宿主細胞を破壊して、糞便を介して動物を去る。胞子形成していない接合子嚢は、暖かく湿った土壌又はわらに曝されると、胞子形成を行い、それにより、感染性の生活段階になる。上皮細胞の侵襲及び死滅が、コクシジウム症の疾患をもたらす。
【０００７】
疾患は、出血、盲腸内の血液の蓄積、糞中への血液の通過、衰弱及び消化不良により顕在化する。疾患は、しばしば、動物の死亡に終わるが、重度の感染から生き延びたメンドリでは、感染の結果として市場価値は実質的に低下する。従って、コクシジウム症は、経済的に極めて重要な疾患であり、家禽におけるコクシジウム感染の抑制及び処置のための新たな、改善された方法を見出すため、広範な研究が行われてきた。
【０００８】
家禽産業においては、コクシジウム症の流行を抑制又は防止するため、トリの一生の大部分において、抗コクシジウム剤を家禽飼料に含めることが、一般的な実務である。現在の抑制法は、コクシジウム抑制剤（アンプロリウム（ａｍｐｒｏｌｉｕｍ）、クロピドール（ｃｌｏｐｉｄｏｌ）、ハロフジノン（ｈａｌｏｆｕｇｉｎｏｎｅ）、ラサロシド（ｌａｓａｌｏｃｉｄ）、モネンシン（ｍｏｎｅｎｓｉｎ）、ニカルバジン（ｎｉｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ニトロフラゾン（ｎｉｔｒｏｆｕｒａｚｏｎｅ）、ニトロミド（ｎｉｔｒｏｍｉｄｅ）、スルファジメトキシン（ｓｕｌｆａｄｉｍｅｔｈｏｘｉｎｅ）、スルファキノキシリン（ｓｕｌｆａｑｕｉｎｏｘｙｌｉｎｅ）、サリノマイシン（ｓａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ゾアレン（ｚｏａｌｅｎｅ））又はワクチンのいずれかの使用に頼っている。生病原性ワクチン、生弱毒化ワクチン及び組換えワクチンが、研究中である。いくつかのワクチンが市場に存在するが、これらに関連した問題には、免疫応答の特異性、入手可能性、継続的な効力を保証するためにワクチンを再利用する必要性が含まれる。ワクチンは、主に、トリの育種において役割を果たしている。
【０００９】
コクシジウム抑制剤は、典型的には、３〜６日又はそれ以上の間、３〜２５０ppmの割合で飼料又は水に添加される。しかしながら、コクシジウム抑制剤による処置は、重大な短所を有している。
【００１０】
全てのコクシジウム抑制剤に関して、屠殺前の休薬時間が存在し、大部分が、産卵用のトリにおいて使用することは許可されていない。この休薬時間は、消費が見込まれる食肉が、消費者の健康に影響を与えるかもしれない薬物の残留を含有していないことを保証する。販売承認を有する各生産物について、休薬時間は、各国の機関により定義されており、製品ラベル上に表示されなければならない。投与量、処置時間の長さ及び休薬時間は、正確に追跡されるべきである。そうでない場合には、休薬時間が影響を受け、違法な薬物残留がもたらされるかもしれない。投与量又は処置時間の増加は、トリにおける不要もしくは有害な副作用を来たし、又は死亡させることすらあるかもしれない。
【００１１】
休薬時間のない生産物は、家禽市場における明らかな競争上の優位を有している。
【００１２】
コクシジウム抑制剤は、病原体を殺すことはないが、例えば、病原体が正しく発達し得ないよう、特定のタンパク質の産生に介入することにより、特定の生活段階の発達を阻止する。特定の点におけるこの相互作用により、それらは、腸及び盲腸に対するエイメリアの有害な影響を減少させ、家禽の免疫系が構築され感染に対抗するための時間を与える。コクシジウム抑制剤は、典型的には、３〜６日又はそれ以上の間、３〜２５０ppmの割合で飼料又は水に添加される。
【００１３】
コクシジウム抑制剤は、種々の化学的な型に分類される（例えば、イオノフォア、抗生物質及びスルホンアミド）。化学的なクラス及び正確な化合物に依って、作用の様式又は阻止される生活段階が異なる。例えば、クロピドールは、スポロゾイト段階に対して作用し、発達なしの宿主細胞透過を可能にする。ハロフジノンは、無性段階に対して有効である。作用機序は未知である。
【００１４】
全ての化学的コクシジウム抑制剤についての主要な短所は、特定の薬物への継続的又は反復的な曝露の後には、原因生物が迅速に耐性を発達させるリスクが存在する点である。さらに、スルファニルアミド、ニトロフラン、キノリン、アンチチアミン、ベンゾアミド及びポリエーテルに基づく抗生物質のような従来使用されている抗コクシジウム剤は、しばしば、宿主にとって毒性である。従って、化学的に完全に新しいか、又は耐性発達の速度を減少させ、かつ／もしくは多耐性寄生動物株を抑制するような組み合わせからなる、新たな抗コクシジウム化合物を同定する必要が引き続き存在している。
【００１５】
最後に、可能性のある抗生物質の乱用及び交差耐性のため、これらのコクシジウム抑制剤のうちのいくつかについては、健康及び安全性に関する懸念が存在する。従って、それらの全てが、今後、世界中で入手可能になるとは限らない。現在、既に、アンプロリウム及びメチクロルピンドール（ｍｅｔｉｃｌｏｒｐｉｎｄｏｌ）を含むいくつかのコクシジウム抑制剤が、欧州連合において禁止されている。
【００１６】
このため、改善された、より安全な生成物、特に、耐性の発達を誘発しない生成物が、明らかに必要とされている。化学物質に対する耐性の発達は、単細胞真核生物における重大な問題である。その主な理由は、そのような生物は、極めて急速に複製し、迅速に環境変化に代謝を適応させることができるためである。これは、化学物質が一年中予防的に投与されており、病原体が永続的に化学物質に直面している家禽において、コクシジウム症を引き起こす原生動物に、特に当てはまる。そのような環境においては、極めて急速に耐性が発達し得る。
【００１７】
驚くべきことに、単独で、又は低濃度のモモルディカカランティア果実抽出物と組み合わせて得られたシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物が、特定の用量範囲内で使用された場合、コクシジウム抑制剤として作用し、家禽における傷害の減少及び生産に対して同じ型の影響を及ぼすことが、見出された。特に、コクシジウムにより引き起こされる腸及び盲腸の病変が減少し、このコクシジウム傷害の減少が、未処置のコクシジウム感染を有する家禽と比較して、体重増加及び飼料効率を改善する。
【００１８】
本発明の天然成分は、家禽飼料補助剤の形態又は薬用家禽飼料の形態でも適用され得る。従って、本発明は、そのような家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料、及び該家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料の製造のための、唯一の活性成分としての、又はモモルディカカランティア果実抽出物と組み合わせられた、シマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の使用にも関する。
【００１９】
本発明の獣医学的組成物は、好ましくは、家禽においてコクシジウム抑制活性を示し、かつ飼料効率及び体重増加を促進し、特に、家禽におけるエイメリア種感染の影響を減少させることを目的とした経口組成物である。
【００２０】
従って、本発明の重要な目的は、トリにとって生理学的によく容認される一つ以上の担体と一緒の、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物の投与と、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物の投与との循環、又は、別法として、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物とモモルディカカランティア果実抽出物との組み合わせの投与を含む、家禽におけるコクシジウム症を引き起こす耐性エイメリア株の発生を防止するための手段を提供することである。
【００２１】
さらに好ましいのは、ある時期に、シマルバアマラが投与され、次の季節に、モモルディカカランティアが投与される耐性管理ツール、又は、別法として、シマルバアマラとモモルディカカランティアとの組み合わせが投与される耐性管理ツールを提供することである。
【００２２】
シマルバアマラ及びモモルディカカランティアは、いずれも、コクシジウム抑制剤としての活性を有するかもしれないいくつかの異なる化合物を含有しており、従って、いずれか一方が、付加的及び／又は補足的な活性を有するいくつかの化合物の組み合わせを投与することに類似しているため、耐性を管理するための独特の機会を提供する。耐性は、単一の化合物を用いた場合に、発達する可能性が最も高い。シマルバアマラ及びモモルディカカランティアの化学的性質は相互に異なっており、従って、組み合わせて又は循環して使用された場合には、さらに多様な活性が存在する。特に、これらは、施設内で、４〜６ヶ月毎に使用され交換されることにより、循環して使用され得る（例えば、群れが４代変化する毎）。別法として、家禽の初期成長相で一方を使用し、完了期に他方を使用してもよい。
【００２３】
従って、本発明は、特に、生理学的に許容される一つ以上の担体と一緒に、コクシジウム抑制的に有効な量の、シマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物、もしくはモモルディカカランティア果実抽出物、又はコクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物とモモルディカカランティア果実抽出物との組み合わせを含む獣医学的組成物、及び家禽におけるコクシジウム症の抑制のためのそれらの使用に関する。
【００２４】
本発明の好ましい実施態様は、とりわけ、以下のものである。
【００２５】
家禽におけるコクシジウム症の処置用の医薬品の製造のためのコクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラの使用。好ましい実施態様において、活性成分は、シマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物である。さらなる好ましい実施態様は、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物と組み合わせられたシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の使用である。
【００２６】
もう一つの好ましい実施態様は、一つ以上の生理学的に許容される担体と一緒の、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の家禽への投与を含む、家禽におけるコクシジウム症を抑制する方法である。さらに好ましいのは、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物をさらに含む方法である。
【００２７】
本発明の同等に好ましい実施態様は、タンパク質、ビタミン及びミネラルのような添加剤を含むか又は含まない粉砕された植物及び／又は動物に基づく乾燥家禽飼料の他に、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物を含む、家禽におけるコクシジウム症の抑制のための家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料である。コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物をさらに含む家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料も、重要な実施態様である。
【００２８】
本発明の重要な局面は、家禽におけるコクシジウム感染の予防的又は治療的な処置のための、乾燥もしくは湿性の家禽食料又は飲料水への添加剤としての、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の使用である。コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物をさらに含む場合、該使用はさらに重要である。
【００２９】
トリにとって生理学的に許容される一つ以上の担体と、唯一の活性成分としてのコクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物との混合物、又はさらに第二の活性成分としてのコクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物との混合物を均質化することを含む、家禽におけるコクシジウム症の抑制のための獣医学的組成物を製造する方法も、好ましい実施態様である。
【００３０】
もう一つの重要な実施態様は、タンパク質、ビタミン及びミネラルのような添加剤を含むか又は含まない粉砕された植物及び／又は動物に基づく乾燥家禽飼料の他に、唯一の活性成分としてコクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物を含むか、又はさらに第二の活性成分としてコクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物を含む、家禽におけるコクシジウム症の抑制のための家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料である。
【００３１】
トリにとって生理学的によく容認される一つ以上の担体と一緒の、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の投与と、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物の投与との循環を含む、家禽におけるコクシジウム症を引き起こす耐性エイメリア株の発生を防止するための管理も、重要である。好ましいのは、シマルバアマラとモモルディカカランティアとの組み合わせの使用を含む耐性管理である。
【００３２】
上述の家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料は、天然成分のうちのいずれか一方、又は両方の組み合わせを含有している。該実施態様は、各々、同等に好ましい。
【００３３】
有利には、該家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料は、通常フィードミルにより製造されるペレットからなる。粉砕された穀類が、一般に、基剤として使用される。その基剤へ、油並びに植物性及び動物性のタンパク質のようなさらなる要素が添加される。全ての要素が、粉砕又は混合装置において充分に混合され、水を吹き付けられるか、又は蒸気により処理され、高温で、約２〜１５mmの直径を有している円形ノズルを通して成形される、即ち、押し出される。その押し出しの過程で、加湿された材料は圧縮され、比較的硬いバーの形態でノズルから出て、ノズルの出口において、切断装置を使用して、所望の長さ、例えば、約５〜２５mmの長さのピースへと切断される。生じたペレットは、まだ暖かく、排出される際に空気中で乾燥されるか、又は加熱チャンバーを通るコンベヤーベルトに乗せられ、約８０〜１２０℃で乾燥される。完成したペレットは、棒状又は円柱状であり；比較的滑らかな表面を有しており、崩壊したり塵を形成したりすることなく容易に注入可能である。それらは、一般に、約１．２g/cm3の密度を有している。
【００３４】
一般に、本発明に係る薬用飼料ペレットの製造のための手法は、通常の飼料ペレットの製造の場合と全く同様である。しかしながら、押し出し工程の前に、天然活性成分と、有機的な粉砕され均質化された飼料要素とが、充分に混合され、約５〜１０重量％の水又は蒸気により加湿され、約６０〜８０℃、好ましくは６５〜７５℃の高温で飼料ペレットへと圧縮される。良好な均質化は、まず、天然活性成分が、残りの飼料コンポーネントの比較的少量の一部と充分に混合され、その結果、比較的高い比率の天然活性成分を有している、いわゆる予備混合物が得られる場合に、最も有利に達成される。次いで、その予備混合物の一部が、さらなる飼料材料と混合され、さらなる部分混合物が形成され、その部分混合物が、最終工程において、さらなる飼料材料によって最終濃度へと希釈される。その希釈は、ペレット内に封入された活性成分の特に均一な分布をもたらす。
【００３５】
ペレットは、室温にまで冷却され、保管又は最終消費者への輸送のため、紙袋又はその他の適当な容器にパックされる。ペレットは、保管中の安定性が極めて高く、環境的影響から活性成分を保護するコーティングされた形態の中に活性成分を含むため、特別の予防措置は必要ない。活性成分は、これらの保管可能なペレットから外部へは移行しない。
【００３６】
しかしながら、本発明に係る天然活性成分又は獣医学的組成物が、通常の乾燥又は湿性の家禽食料又は飲料水と単純に混和されてもよいことは、言及するまでもない。
【００３７】
本発明に含まれる薬草は、トリにおけるコクシジウム感染の処置のためには使用されていないが、細菌、ウイルス及び真菌の処置における長い使用歴を有している。この歴史的な使用により、その植物材料の安全性が確認されている。シマルバアマラ及びモモルディカカランティアの標準化された抽出物及び植物材料は、商業的に入手可能である。
【００３８】
シマルバは、直径５０〜８０cmの幹を有する、２０mの高さにまで生長する中型の木である。それは、２０〜５０cmの長さの明るい緑色の葉、小さな白い花及び小さな赤い果実を生ずる。それは、アマゾン熱帯雨林、並びにメキシコ、キューバ、ハイチ、ジャマイカ及び中央アメリカのその他の熱帯地域に固有である（科：ニガキ（Ｓｉｍａｒｏｕｂａｃｅａｅ）；属：シマルバ；種：アマラ）。その植物材料は、微量の広範囲の種々の化学物質、例えば、アイランチノン（ａｉｌａｎｔｈｉｎｏｎｅ）、ベンゾキノン、カンチン（ｃａｎｔｈｉｎ）、デヒドログラウカルビノン（ｄｅｈｙｄｒｏｇｌａｕｃａｒｕｂｉｎｏｎｅ）、グラウカルビン（ｇｌａｕｃａｒｕｂｉｎｅ）、グラウカルボロン（ｇｌａｕｃａｒｕｂｏｌｏｎｅ）、グラウカルビノン（ｇｌａｕｃａｒｕｂｉｎｏｎｅ）、ホラカントン（ｈｏｌａｃａｎｔｈｏｎｅ）、メリアノン（ｍｅｌｉａｎｏｎｅ）、シマルビジン（ｓｉｍａｒｏｕｂｉｄｉｎ）、シマロリド（ｓｉｍａｒｏｌｉｄｅ）、シマルビン（ｓｉｍａｒｕｂｉｎ）、シマルボリド（ｓｉｍａｒｕｂｏｌｉｄｅ）、シトステロール、チルカラ（ｔｉｒｕｃａｌｌａ）等を含有している。シマルバ植物は、類似の特性を有していることが既知である（ＰＥＮＧＵＩＮ ＢＯＯＫＳ出版、Ｍｒｓ Ｃ．Ｆ．ＬＥＹＥＬ編、「Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｒｂａｌ」という題名のＭｒｓ Ｍ．ＧＲＩＥＶＥによる書籍、７４１〜７４２ページを参照のこと）。シマルバアマラＡｕｂｌ．は、特に、ギアナにおいてかなり広く普及している木であり、そこでは、赤痢を処置し、腸の緊張力を改善し、腸の分泌を促進し、患者を眠りやすくするための療法として原住民により樹皮が使用されている。シマルバは、樹皮、木又は葉からの抽出物の形態で化粧品産業においても使用されている。米国特許第５，６７６，９４８号は、有意な皮膚脱色活性、皮膚の防御機能の増強、水バリア機能の増強及びケラチノサイト分化活性のような正の皮膚科的効果を記載している。シマルバのさらなる活性は、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓに記載されており：Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ１１０（０２）０１３４３２は、インビトロの抗アメーバ活性を証明するためのシマルバアマラ茎抽出物の使用を記載している。同様に、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ１０９（１０１）０００２８５は、抗マラリア薬の調製のためのシマルバアマラ果実抽出物を記載している。シマルバからの標準化された樹皮及び抽出物は、商業的に入手可能であるか、又は文献に記載された手法に沿って調製され得、例えば、シマルバ樹皮からの水性及びアルコール性の抽出物の作製が、米国特許第５，６７６，９４８号に開示されている。該米国特許において、シマルバ抽出物は、化粧用もしくは医薬的な組成物、特に、皮膚科用組成物、又は皮膚細胞培養培地を作製するために使用されている。得られた組成物も開示されている。その特許は、シマルバ抽出物の有意な皮膚脱色活性に言及している。米国特許第５，６７６，９４８号の教示に従って調製された抽出物は、本発明に従い使用されるのに適している。
【００３９】
一つの特定の実施態様によると、上記の抽出物は、シマルバアマラ、シマルバグラウカ（ｇｌａｕｃａ）、シマルババーシカラー（ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）、シマルバエクセルサ（ｅｘｃｅｌｓａ）又はモモルディカカランティアから、特に、これらの植物の幹の樹皮、茎又は根から入手される。もう一つの実施態様によると、上記の抽出物は、水、アルコール、好ましくは、メタノールもしくはエタノールのような低級アルコール、グリコール、特に、プロピレングリコール、又は任意の比率の水性−アルコール性混合物のような少なくとも一つの極性溶媒による抽出により得られた抽出物である。さらなる実施態様によると、上記の抽出物は、乾燥抽出物として表した場合、組成物の全重量に基づき０．００１〜５重量％、好ましくは０．０１〜１重量％、特に好ましくは０．１〜０．５重量％の濃度で、組成物中に存在する。さらなる適当な製剤は、下に記載される。
【００４０】
ウリ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ）科のメンバーであるモモルディカカランティアは、熱帯植物である（科：ウリ；属：モモルディカ；種：カランティア）。それは、ニガウリとして広く知られている。モモルディカカランティアは、東アフリカ、アジア、カリブ海及び南米の一部を含む熱帯地域に生長しており、そこでは、食料としても医薬としても使用されている。それは、至る所にヒョウタン様の隆起を有する緑色のキュウリ形の果実である。それは、不格好な薄緑色のキュウリのような外見を有する。果実は、キュウリのように、堅いはずである。それは、極めて苦い味がする。ニガウリの種子、葉及びつるは全て使用されているが、果実が、薬用に使用されている最も安全で最も広く流布している植物の部分である。未熟な果物は、ビタミンＣの良好な供給源であり、ある程度のビタミンＡ、リン及び鉄を提供する。モモルディカカランティアは、細い茎及び巻きひげを有する、生長が速く、匍匐性又はよじ登り性のつるである。モモルディカカランティアは、癌、糖尿病及び多くの感染性疾患のために原住民により使用されてきたため、極めて人気のある植物である。その植物材料は、微量の広範囲の種々の化学物質、例えば、アルカロイド、カランチン（ｃｈａｒａｎｔｉｎ）、カリン（ｃｈａｒｉｎｅ）、クリプトキサンチン、ククルビチン（ｃｕｃｕｒｂｉｔｉｎｓ）、ククルビタシン（ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎｓ）、ククルビタン（ｃｕｃｕｒｂｉｔａｎｅｓ）、シクロアルテノール、ジオスゲニン、エレオステアリン酸（ｅｌａｅｏｓｔｅａｒｉｃ ａｃｉｄｓ）、エリスロジオール（ｅｒｙｔｈｒｏｄｉｏｌ）、ガラクツロン酸、ゲンチシン酸、ゴーヤグリコシド（ｇｏｙａｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ）、ゴーヤサポニン（ｇｏｙａｓａｐｏｎｉｎｓ）、グアニル酸シクラーゼ阻害剤、ギプソゲニン（ｇｙｐｓｏｇｅｎｉｎ）、ヒドロキシトリプタミン、カロウニジオール（ｋａｒｏｕｎｉｄｉｏｌｓ）、ラノステロール、ラウリン酸、リノール酸、リノレン酸、モモルカラシド（ｍｏｍｏｒｃｈａｒａｓｉｄｅｓ）、モモルカリン（ｍｏｍｏｒｃｈａｒｉｎｓ）、モモルデノール（ｍｏｍｏｒｄｅｎｏｌ）、モモルジシリン（ｍｏｍｏｒｄｉｃｉｌｉｎ）、モモルジシン（ｍｏｍｏｒｄｉｃｉｎｓ）、モモルジシニン（ｍｏｍｏｒｄｉｃｉｎｉｎ）、モモルジコシド（ｍｏｍｏｒｄｉｃｏｓｉｄｅｓ）、モモルジン（ｍｏｍｏｒｄｉｎ）、モモルドロ（ｍｏｍｏｒｄｏｌｏ）、マルチフロレノール（ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｅｎｏｌ）、ミリスチン酸、ネロリドール（ｎｅｒｏｌｉｄｏｌ）、オレアノール酸、オレイン酸、シュウ酸、ペンタデカン、ペプチド、ペトロセリン酸、ポリペプチド、タンパク質、リボソーム不活化タンパク質、ロスマリン酸（ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、ルビキサンチン（ｒｕｂｉｘａｎｔｈｉｎ）、スピナステロール（ｓｐｉｎａｓｔｅｒｏｌ）、ステロイド性配糖体、スチグマスタジオール（ｓｔｉｇｍａｓｔａ−ｄｉｏｌｓ）、スチグマステロール、タラキセロール（ｔａｒａｘｅｒｏｌ）、トレハロース、トリプシン阻害剤、ウラシル、バシン（ｖａｃｉｎｅ）、ｖ−インスリン、ベルバスコシド（ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ）、ビシン（ｖｉｃｉｎｅ）、ゼアチン、ゼアチンリボシド、ゼアキサンチン及びゼイノキサンチンを含有している。
【００４１】
植物モモルディカカランティアＬ．の果実、ニガウリは、種々の国において長期にわたり食品として使用されてきた（ウリ科）。果実、種子及び空中部分の抽出物も、ヒトのための医薬としての使用の長い伝統を有しており、抗生物質、抗酸化剤、抗糖尿病剤及び降圧剤等として使用されている。インビボの研究は、ヒトにおける低い毒性を示している。静脈注射は、いくつかの実験動物研究において、毒性であることが示されている。果実及び葉の水及びエタノールによる抽出物の経口的な摂取は、妊娠中、安全であることが証明されている。
【００４２】
モモルディカカランティアのいくつかの活性も、特許文献に記載されている。例えば、米国特許第６，１２４，４４２号及び米国特許第６，１０３，２４０号は、カンゾウ抽出物と、ウリ科及び／又はモモルディカに属する植物から得られたモグロシド（ｍｏｇｒｏｓｉｄｅｓ）とを含む薬草甘味保存組成物を記載している。ＵＳ２００２１９３３１０は、モモルディカカランティアの経口的に活性な画分、その活性ペプチド及び糖尿病の処置におけるそれらの使用に関するものである。Ｗ０９８４３４８４は、ＭＣ６と名付けられたモモルディカカランティアの水溶性抽出物を記載しており、その調製法、及び高血糖障害の処置におけるその使用法が提供されている。この特許参照は、経口投与後ですら、該抽出物に低血糖活性があることに言及しており、活性薬剤が好ましくは経口投与される、高血糖障害、特に、糖尿病を処置するための活性薬剤の使用法も提供されている。
【００４３】
Ｂ．Ｈａｙａｔらは、「Ｔｈｅ Ｐａｋｉｓｔａｎ Ｖｅｔ．Ｊ．，１６（４）：１９９６，ｐｐ１６４−１６６」において、ニワトリにおけるコクシジウム症に関するテストを記載している。著者らは、抗生物質サリノマイシン（ｓａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ）と比較して、「バキン（ｂａｋｉｎ）」（メリアアゼダラッチ（Ｍｅｌｉａ ａｚｅｄａｒａｃｈ））及び「カレラ（ｋａｒｅｌａ）」（モモルディカカランティア）を含有している調製物の予防的な投与の後の、幼齢鶏の体重増加及び糞便中の卵母細胞の減少を比較している。高濃度、即ち、飼料５０Kgにつき１．５Kgの粉末形態のモモルディカカランティアで、正の効果が入手された。使用されたエイメリアの病原性が決定されておらず、病変スコアが提示されておらず、糞便状態の評価が提示されていないため（これらは、全て、コクシジウムが感染を引き起こしたことを決定するために必要である）、その粉末の効力は論文において確認され得ない。さらに、「カレラ」の型の確証が提示されていないため、研究は再現不可能である。今回、驚くべきことに、モモルディカカランティアの量の有意な減少が、病原性エイメリアにより引き起こされる病変スコアの減少をもたらすこと、及び濃縮レベルのモモルディカカランティアが、トリに対して毒性でないことが見出された。
【００４４】
ヒトに感染する様々な原生動物に対する植物シマルバアマラ及びモモルディカカランティアの両方の活性が、証明されている。しかしながら、寄生性原生動物の一つの種に対して活性な生成物は、その他の種もしくは属に対しては必ずしも活性ではなく、又はその生成物はその種もしくは属のその他の宿主において活性である。これは、異なる消化器系を有しているヒト及びトリの場合に特に当てはまる。さらに、家禽におけるエイメリア種に対する活性は、シマルバアマラでは以前に証明されていない。
【００４５】
従って、本発明は、シマルバアマラ樹皮及びその抽出物、並びに低濃度のモモルディカカランティア果実抽出物の、家禽におけるコクシジウム症を引き起こすエイメリア種に対する活性の発見、並びにコクシジウム抑制製剤における上記植物の適切な組成という技術的問題の解決に基づく。ここで、本発明の発明者らは、単独の又はモモルディカカランティア果実抽出物と組み合わせられたシマルバアマラ樹皮が、特定の用量範囲内で、家禽におけるエイメリア種の負の影響を減少させるのに特に有効であること、及び、以下に記載され例示されるインビボテストによってこの活性を証明することが可能であることを観察することができた。
【００４６】
天然成分は、家禽への全身投与、好ましくは、例えば、飼料又は水を介した経口投与のために製剤化される。それらは、カプセル剤、散剤、液剤及び懸濁剤のような適当な形態で、又は、上記のように、家禽飼料補助剤もしくは薬用家禽飼料の形態で、トリにとって生理学的によく容認される慣習的な賦形剤と共に製剤化され得る。
【００４７】
成分の用量は、飼料又は水の中のppmで表され、コクシジウム感染の重度、用途（処置であるか予防的であるか）及びトリの種に依って変動し得る。
【００４８】
コクシジウム感染の処置、及びコクシジウムにより引き起こされる腸及び盲腸の傷害の防止において使用されるモモルディカカランティアの材料は、１０％カランチン又は＞２．５％苦味成分（ｂｉｔｔｅｒｓ）のいずれかに標準化された抽出物であり、モモルジシンを含有していなければならない。この標準化された材料は、１０：１〜１５：１の抽出液対植物材料比を使用して、果実の熱水とアルコールとの抽出溶媒混合物（２０／８０）により得られる。次いで、その抽出物を乾燥させると、使用のための準備が整う。最終的なモモルディカカランティア乾燥抽出物粉末は、水又はエタノールに可溶性でなければならない。ＨＰＬＣ／ＵＶ又は重力測定法が、抽出物中の化合物の含有量を確証するために使用され得る。そのような抽出物の適当な供給元は、エキゾティックナチュラルズ（Ｅｘｏｔｉｃ Ｎａｔｕｒａｌｓ）（Ｍｕｍｂａｉ，Ｉｎｄｉａ）及びキングハーブインターナショナル（Ｋｉｎｇｈｅｒｂ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）（Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ，Ｃｈｉｎａ）である。
【００４９】
他の天然成分はシマルバアマラの樹皮である。樹皮は乾燥させられ、粉末へと粉砕される。樹皮は、クワシノイド（ｑｕａｓｓｉｎｏｉｄｓ）（例えば、アイランチノン、グラウカルビノン）を含有していなければならない。そのような標準化された植物材料の供給元は、シエロハーブズ（Ｃｉｅｌｏ Ｈｅｒｂｓ）（Ｕ．Ｓ．Ａ．）である。
【００５０】
本発明は、好ましくは、１０〜４００ppmの割合で与えられた場合の、最も好ましくは、飼料又は水と混和された場合の、家禽におけるコクシジウム感染の予防的又は治療的な抑制のための、単独の、又は相互に組み合わせられた、二つの定義された天然成分の使用に関する。両天然成分は、Ｅ．テネラ（ｔｅｎｅｌｌａ）に感染した家禽に与えられた場合、感染を有する未処置の家禽及び感染を有しない未処置の家禽と比較して、盲腸病変スコアを減少させ、体重増加を改善し、飼料効率を維持することが示された。
【００５１】
生物学的実施例：家禽におけるＥ．テネラの減少
研究は２工程からなっていた。工程１においては、単離されたＥ．テネラを、工程２において使用される株の病原性を証明するためにヒナに与えた。病原性であると見なすためには、感染は、非感染コントロールに対する、死亡率の有意な２５％の増加、体重増加速度の有意な２０％の減少及び／又は病変スコアの有意な２．５単位の増加を引き起こす必要があった（ｐ＝０．０５）。
【００５２】
工程１において使用された材料は、以下のものを含んでいた：
１．胞子形成した接合子嚢（水１ml中１００，０００個の濃度）
２．ニワトリ（幼齢鶏４０羽）、１日齢に達した時点で、１０羽ずつ４群に分割
３．シリコン処理された微量遠心管（１．５ml）
４．ピペット、ピペッタ及びピペットチップ
５．秤の確証のための分銅を含む、ニワトリを計量するための秤又は天秤。
【００５３】
テスト接種物及び測定は、以下の通りであった：
１．１２日齢で、ニワトリを計量する（体重増加と同時に群の飼料消費量を測定する）
２．１４日齢で、ニワトリを計量する
３．１４日齢で、予め形成された接種物をニワトリに経口接種する
ａ．胞子形成した接合子嚢を希釈し、６本のチューブを得る（各チューブ一本余分）：
１．１１チューブ：接種原１ml
２．１１チューブ：接種原０．１ml＆水０．９ml
３．１１チューブ：接種原０．０１ml＆水０．９９ml
４．１１チューブ：水１ml
４．２１日齢で、ニワトリを計量する
５．２１日齢で、ニワトリを安楽死させ、病変スコアを実施する（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｒｅｉｄ，１９７０）
ａ．０ 肉眼的病変なし
ｂ．＋１、盲腸壁に極めてわずかな点状出血が散在；盲腸壁の肥厚なし；正常な盲腸内容物が存在
ｃ．＋２ 盲腸内容物中の著しい血液を含むより多数の病変、盲腸壁がやや肥厚；正常な盲腸内容物が存在
ｄ．＋３ 大量の血液又は盲腸コアが存在；盲腸壁が大きく肥厚；盲腸内の糞便含有量は、たとえ存在したとしても、ほとんどなし
ｅ．＋４ 血液又は大きなチーズ状のコアにより盲腸壁が大きく膨張；糞便の残骸が欠如しているか又はコアに含まれる。死亡したトリは、＋４としてスコア化。
生存しているトリ及び死亡したトリについて体重増加を計算する。
【００５４】
工程２においては、二つの天然成分を使用した。工程２において、感染処置群の間の１病変スコア単位の差を、生物学的に有意と見なした。
【００５５】
使用された材料は、以下のものであった：
６．胞子形成した接合子嚢（水中、滴定された用量）；未処置コントロールと比較された病原性の用量を提供する適切な希釈率の接合子嚢を含有している４２本の別々のチューブとして調製した
７．ニワトリ（幼齢鶏５０羽）、１日齢に達した時点で、１０羽ずつ５群に分割
８．シリコーン処理された微量遠心管（１．５ml）
９．ピペット、ピペッタ及びピペットチップ
１０．テスト化合物
１１．秤の確証のための分銅を含む、ニワトリを計量するための秤又は天秤
【００５６】
テスト及び測定は、以下の通りであった：
６．１２日齢で、ニワトリを計量する（体重増加と同時に群の飼料摂取量を測定すべきである）
７．１２日齢で、テストされる生成物を与え始める（５群のうち３群に化合物を与える）：
１．１０羽：未処置コントロール
２．１０羽：未処置コントロール
３．１０羽：低用量（４０ppm）で処置
４．１０羽：中用量（４００ppm）で処置
５．１０羽：高用量（４０００ppm）で処置
８．１４日齢で、ニワトリを計量する
９．１４日齢で、予め形成された接種物をニワトリに経口接種する（５群のうち４群において各ニワトリに５００，０００個の接合子嚢を与える）
６．１０羽：未感染かつ未処置のコントロール
７．１０羽：感染させられた未処置のコントロール
８．１０羽：感染させられ低用量で処置された
９．１０羽：感染させられ中用量で処置された
１０．１０羽：感染させられ高用量で処置された
１０．コクシジウム症に起因するものであっても、又はその他の原因に起因するものであっても、全ての死亡率及び罹患率を、適切なテストにより診断するべきである。剖検結果を報告するべきである。診断されたコクシジウム症については、盲腸のウェットマウント（ｗｅｔ ｍｏｕｎｔ）調査を行い、コクシジウムを同定するべきである。死亡したトリの体重、死亡日及び性別を記録するべきである
１１．２１日齢で、ニワトリを計量する
１２．２１日齢で、ニワトリを安楽死させ、病変スコアを実施する（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｒｅｉｄ，１９７０）
ａ．０ 肉眼的病変なし
ｂ．＋１、盲腸壁に極めてわずかな点状出血が散在；盲腸壁の肥厚なし；正常な盲腸内容物が存在
ｃ．＋２ 盲腸内容物中の著しい血液を含むより多数の病変、盲腸壁がやや肥厚；正常な盲腸内容物が存在
ｄ．＋３ 大量の血液又は盲腸コアが存在；盲腸壁が大きく肥厚；盲腸内の糞便含有量は、たとえ存在したとしても、ほとんどなし
ｅ．＋４ 血液又は大きなチーズ状のコアにより盲腸壁が大きく膨張；糞便の残骸が欠如しているか又はコアに含まれる。死亡したトリは、＋４としてスコア化。
１３．生存しているトリ及び死亡したトリについて体重増加を計算する。
ａ．１２〜１４日齢（この測定は、抗コクシジウム天然生成物単独の効果を同定する）
ｂ．１４〜２１日齢（この測定は、感染に対する抗コクシジウム天然生成物の有効性を査定する）
ｃ．１２〜２１日齢（この測定は、実験期間を通した感染に対する抗コクシジウム天然生成物の有効性を査定する）
【００５７】
これらの研究は、モモルディカカランティア果実抽出物（４０ppm）及びシマルバアマラ樹皮（４００ppm）により処置されたニワトリが、非感染コントロールニワトリにおけるものとは有意に異なっていないが、非感染ニワトリにおけるものよりは有意に高い最終体重、全重量増加及び全体重増加率を有していることを証明した。
【００５８】
【表１】
【００５９】
飼料効率の改善は、（ニワトリの群化のため）統計的に測定され得なかったが、全てのレベルのモモルディカカランティア並びに低レベル及び中レベルのシマルバアマラを供給されたニワトリは、感染コントロール・ニワトリより良好な飼料効率比を有していた。
【００６０】
【表２】
【００６１】
研究において、病変スコアを減少させる天然成分の能力も証明された。モモルディカ４０ppm及びシマルバ４００ppmの両方が、少なくとも１、盲腸病変スコアを改善した。
【００６２】
【表３】
【００６３】
ｐ＝０．０５で統計的に有意に、モモルディカ４０ppm、シマルバ４０ppm及びシマルバ４００ppmが、平均（左右平均）盲腸スコアを改善した。モモルディカ４００ppm及び４０００ppmは、ｐ＝０．１で、平均スコアを改善した。
【００６４】
【表４】
【００６５】
これらのテスト結果は、これらの二つの天然成分が、コクシジウムでチャレンジされたニワトリにおいて、飼料中４０〜４００pmのレベルで、盲腸病変スコアを減少させ、体重増加を改善し、飼料効率を維持することを証明している。これらの二つの天然成分のこの能力は、以前に記載されていない。
【００６６】
これらの二つの天然成分の使用は、いくつかの利点を有する。ヒトにおける長い使用歴があるため、これらの成分の安全性に関しては広範囲な情報が入手可能であり、このことは、ニワトリ及びニワトリ生産物における残留に関する懸念を減少させる。また、これらの天然成分は、家禽におけるコクシジウムの抑制又は処置において以前に使用されていない化合物を含有しており、従って、耐性エイメリア株の抑制を可能にする。最後に、これらの天然成分は、いくつかの化合物を含有しており、従って、コクシジウムの抑制において多様な化合物を提供し、耐性が出現する速度を減少させる。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】コクシジウムを有していない家禽が、病変を有しておらず（スコア０）、未処置の感染を有しているものの５０％が、３以上の病変を有していることを証明している。シマルバアマラの適用は、２．５より高いスコアを防止する一方、４０ppmの割合のモモルディカカランティアは、２未満のスコアを維持する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、家禽におけるコクシジウム症の処置用の医薬品の製造のための、単独の、又はモモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）と組み合わせられた、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ（Ｓｉｍａｒｏｕｂａ ａｍａｒａ）の使用に関する。それは、さらに、該医薬品の投与に基づく家禽におけるコクシジウム症を抑制する方法に関する。本発明は、タンパク質、ビタミン及びミネラルのような添加剤を含むか又は含まない粉砕された植物及び／又は動物に基づく乾燥家禽飼料の他に、単独の、又はモモルディカカランティア果実抽出物と組み合わせられた、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物を含む、家禽におけるコクシジウム症の抑制のための家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料も包含する。本発明は、該医薬品の製造、及び家禽におけるコクシジウム感染の予防的又は治療的な処置のための、乾燥もしくは湿性の家禽食料又は飲料水への添加剤としての該活性成分の使用にも関する。さらに、本発明は、一つ以上の生理学的に許容される担体と一緒の、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の投与と、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物の投与との循環を含む、家禽におけるコクシジウム症を引き起こす耐性エイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）株の発生を防止するための管理にも関する。
【０００２】
コクシジウム症は、全ての大陸に蔓延している一方で、家禽産業に対して重大な経済的損失を引き起こすため、家禽における最も重要な疾患のうちの一つである。
【０００３】
コクシジウム症は、家禽の腸及び盲腸における重度の病態を引き起こす。それは、主として、小腸の上部、中央部及び下部、直腸、結腸、並びに盲腸に影響を与える。コクシジウム症は、（コクシジウムと呼ばれる）エイメリア属の原生動物（アピコンプレクサ（ａｐｉｃｏｍｐｌｅｘａ））による感染により引き起こされる。家禽（ニワトリ、シチメンチョウ）において問題を引き起こす一般的な種は、エイメリアアセルブリナ（ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）、Ｅ．ブルネット（ｂｒｕｎｅｔｔ）、Ｅ．マキシマ（ｍａｘｉｍａ）、Ｅ．ミバティ（ｍｉｖａｔｉ）、Ｅ．ネカトリックス（ｎｅｃａｔｒｉｘ）、Ｅ．テネラ（ｔｅｎｅｌｌａ）、Ｅ．アデノエイデス（ａｄｅｎｏｅｉｄｅｓ）、Ｅ．ジスペルサ（ｄｉｓｐｅｒｓａ）、Ｅ．ガロパボニス（ｇａｌｌｏｐａｖｏｎｉｓ）、Ｅ．メレアグリディス（ｍｅｌｅａｇｒｉｄｉｓ）、Ｅ．エイシアエ（ａｙｔｈｙａｅ）及びＥ．ブルセファラエ（ｂｕｒｃｅｐｈａｌａｅ）である。鳥類におけるエイメリアの寄生部位は、エイメリアの種及び家禽の種に依る。コクシジウムは、小腸の上部、中央部及び下部、直腸、結腸、腎臓、並びに盲腸に寄生し得る。
【０００４】
本発明に関して、家禽という表現は、齢と無関係に、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、メンドリ、ハト、シチメンチョウ及びダチョウを含む、家畜化されたトリのあらゆる品種について使用される。該表現は、好ましくは、ニワトリ、アヒル、ガチョウ及びシチメンチョウについて使用され、最も好ましくは、ニワトリについて使用される。
【０００５】
トリは、通常、感染性の段階、即ち、胞子形成した接合子嚢により汚染された水、飼料又は敷きわら材料を摂取することにより感染する。腸内で、接合子嚢壁が機械的にかつ／又は酵素的に破壊される。スポロシストが遊離し、酵素に曝され、スポロゾイトを放出する。スポロゾイトは活発に移動し、上皮細胞に侵入し、そこで、さらに発達する。細胞内で、スポロゾイトは、第１世代シゾントへと発達する。シゾント内に、数百〜数千のメロゾイトが形成される。宿主細胞が破壊されると、メロゾイトが放出され、他の上皮細胞に侵入し、第二世代のシゾント及びさらなるメロゾイトを形成する。いくつかのエイメリア種は、そのサイクルを繰り返し、第３世代のシゾントを形成する。有性発達段階への切り替えのための誘発因子は未知である。
【０００６】
しかしながら、誘発された場合には、大配偶子及び小配偶子が形成される。小配偶子が大配偶子と受精し、細胞内接合子の形成に至る。接合子は接合子嚢になり、宿主細胞を破壊して、糞便を介して動物を去る。胞子形成していない接合子嚢は、暖かく湿った土壌又はわらに曝されると、胞子形成を行い、それにより、感染性の生活段階になる。上皮細胞の侵襲及び死滅が、コクシジウム症の疾患をもたらす。
【０００７】
疾患は、出血、盲腸内の血液の蓄積、糞中への血液の通過、衰弱及び消化不良により顕在化する。疾患は、しばしば、動物の死亡に終わるが、重度の感染から生き延びたメンドリでは、感染の結果として市場価値は実質的に低下する。従って、コクシジウム症は、経済的に極めて重要な疾患であり、家禽におけるコクシジウム感染の抑制及び処置のための新たな、改善された方法を見出すため、広範な研究が行われてきた。
【０００８】
家禽産業においては、コクシジウム症の流行を抑制又は防止するため、トリの一生の大部分において、抗コクシジウム剤を家禽飼料に含めることが、一般的な実務である。現在の抑制法は、コクシジウム抑制剤（アンプロリウム（ａｍｐｒｏｌｉｕｍ）、クロピドール（ｃｌｏｐｉｄｏｌ）、ハロフジノン（ｈａｌｏｆｕｇｉｎｏｎｅ）、ラサロシド（ｌａｓａｌｏｃｉｄ）、モネンシン（ｍｏｎｅｎｓｉｎ）、ニカルバジン（ｎｉｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ニトロフラゾン（ｎｉｔｒｏｆｕｒａｚｏｎｅ）、ニトロミド（ｎｉｔｒｏｍｉｄｅ）、スルファジメトキシン（ｓｕｌｆａｄｉｍｅｔｈｏｘｉｎｅ）、スルファキノキシリン（ｓｕｌｆａｑｕｉｎｏｘｙｌｉｎｅ）、サリノマイシン（ｓａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ゾアレン（ｚｏａｌｅｎｅ））又はワクチンのいずれかの使用に頼っている。生病原性ワクチン、生弱毒化ワクチン及び組換えワクチンが、研究中である。いくつかのワクチンが市場に存在するが、これらに関連した問題には、免疫応答の特異性、入手可能性、継続的な効力を保証するためにワクチンを再利用する必要性が含まれる。ワクチンは、主に、トリの育種において役割を果たしている。
【０００９】
コクシジウム抑制剤は、典型的には、３〜６日又はそれ以上の間、３〜２５０ppmの割合で飼料又は水に添加される。しかしながら、コクシジウム抑制剤による処置は、重大な短所を有している。
【００１０】
全てのコクシジウム抑制剤に関して、屠殺前の休薬時間が存在し、大部分が、産卵用のトリにおいて使用することは許可されていない。この休薬時間は、消費が見込まれる食肉が、消費者の健康に影響を与えるかもしれない薬物の残留を含有していないことを保証する。販売承認を有する各生産物について、休薬時間は、各国の機関により定義されており、製品ラベル上に表示されなければならない。投与量、処置時間の長さ及び休薬時間は、正確に追跡されるべきである。そうでない場合には、休薬時間が影響を受け、違法な薬物残留がもたらされるかもしれない。投与量又は処置時間の増加は、トリにおける不要もしくは有害な副作用を来たし、又は死亡させることすらあるかもしれない。
【００１１】
休薬時間のない生産物は、家禽市場における明らかな競争上の優位を有している。
【００１２】
コクシジウム抑制剤は、病原体を殺すことはないが、例えば、病原体が正しく発達し得ないよう、特定のタンパク質の産生に介入することにより、特定の生活段階の発達を阻止する。特定の点におけるこの相互作用により、それらは、腸及び盲腸に対するエイメリアの有害な影響を減少させ、家禽の免疫系が構築され感染に対抗するための時間を与える。コクシジウム抑制剤は、典型的には、３〜６日又はそれ以上の間、３〜２５０ppmの割合で飼料又は水に添加される。
【００１３】
コクシジウム抑制剤は、種々の化学的な型に分類される（例えば、イオノフォア、抗生物質及びスルホンアミド）。化学的なクラス及び正確な化合物に依って、作用の様式又は阻止される生活段階が異なる。例えば、クロピドールは、スポロゾイト段階に対して作用し、発達なしの宿主細胞透過を可能にする。ハロフジノンは、無性段階に対して有効である。作用機序は未知である。
【００１４】
全ての化学的コクシジウム抑制剤についての主要な短所は、特定の薬物への継続的又は反復的な曝露の後には、原因生物が迅速に耐性を発達させるリスクが存在する点である。さらに、スルファニルアミド、ニトロフラン、キノリン、アンチチアミン、ベンゾアミド及びポリエーテルに基づく抗生物質のような従来使用されている抗コクシジウム剤は、しばしば、宿主にとって毒性である。従って、化学的に完全に新しいか、又は耐性発達の速度を減少させ、かつ／もしくは多耐性寄生動物株を抑制するような組み合わせからなる、新たな抗コクシジウム化合物を同定する必要が引き続き存在している。
【００１５】
最後に、可能性のある抗生物質の乱用及び交差耐性のため、これらのコクシジウム抑制剤のうちのいくつかについては、健康及び安全性に関する懸念が存在する。従って、それらの全てが、今後、世界中で入手可能になるとは限らない。現在、既に、アンプロリウム及びメチクロルピンドール（ｍｅｔｉｃｌｏｒｐｉｎｄｏｌ）を含むいくつかのコクシジウム抑制剤が、欧州連合において禁止されている。
【００１６】
このため、改善された、より安全な生成物、特に、耐性の発達を誘発しない生成物が、明らかに必要とされている。化学物質に対する耐性の発達は、単細胞真核生物における重大な問題である。その主な理由は、そのような生物は、極めて急速に複製し、迅速に環境変化に代謝を適応させることができるためである。これは、化学物質が一年中予防的に投与されており、病原体が永続的に化学物質に直面している家禽において、コクシジウム症を引き起こす原生動物に、特に当てはまる。そのような環境においては、極めて急速に耐性が発達し得る。
【００１７】
驚くべきことに、単独で、又は低濃度のモモルディカカランティア果実抽出物と組み合わせて得られたシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物が、特定の用量範囲内で使用された場合、コクシジウム抑制剤として作用し、家禽における傷害の減少及び生産に対して同じ型の影響を及ぼすことが、見出された。特に、コクシジウムにより引き起こされる腸及び盲腸の病変が減少し、このコクシジウム傷害の減少が、未処置のコクシジウム感染を有する家禽と比較して、体重増加及び飼料効率を改善する。
【００１８】
本発明の天然成分は、家禽飼料補助剤の形態又は薬用家禽飼料の形態でも適用され得る。従って、本発明は、そのような家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料、及び該家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料の製造のための、唯一の活性成分としての、又はモモルディカカランティア果実抽出物と組み合わせられた、シマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の使用にも関する。
【００１９】
本発明の獣医学的組成物は、好ましくは、家禽においてコクシジウム抑制活性を示し、かつ飼料効率及び体重増加を促進し、特に、家禽におけるエイメリア種感染の影響を減少させることを目的とした経口組成物である。
【００２０】
従って、本発明の重要な目的は、トリにとって生理学的によく容認される一つ以上の担体と一緒の、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物の投与と、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物の投与との循環、又は、別法として、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物とモモルディカカランティア果実抽出物との組み合わせの投与を含む、家禽におけるコクシジウム症を引き起こす耐性エイメリア株の発生を防止するための手段を提供することである。
【００２１】
さらに好ましいのは、ある時期に、シマルバアマラが投与され、次の季節に、モモルディカカランティアが投与される耐性管理ツール、又は、別法として、シマルバアマラとモモルディカカランティアとの組み合わせが投与される耐性管理ツールを提供することである。
【００２２】
シマルバアマラ及びモモルディカカランティアは、いずれも、コクシジウム抑制剤としての活性を有するかもしれないいくつかの異なる化合物を含有しており、従って、いずれか一方が、付加的及び／又は補足的な活性を有するいくつかの化合物の組み合わせを投与することに類似しているため、耐性を管理するための独特の機会を提供する。耐性は、単一の化合物を用いた場合に、発達する可能性が最も高い。シマルバアマラ及びモモルディカカランティアの化学的性質は相互に異なっており、従って、組み合わせて又は循環して使用された場合には、さらに多様な活性が存在する。特に、これらは、施設内で、４〜６ヶ月毎に使用され交換されることにより、循環して使用され得る（例えば、群れが４代変化する毎）。別法として、家禽の初期成長相で一方を使用し、完了期に他方を使用してもよい。
【００２３】
従って、本発明は、特に、生理学的に許容される一つ以上の担体と一緒に、コクシジウム抑制的に有効な量の、シマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物、もしくはモモルディカカランティア果実抽出物、又はコクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物とモモルディカカランティア果実抽出物との組み合わせを含む獣医学的組成物、及び家禽におけるコクシジウム症の抑制のためのそれらの使用に関する。
【００２４】
本発明の好ましい実施態様は、とりわけ、以下のものである。
【００２５】
家禽におけるコクシジウム症の処置用の医薬品の製造のためのコクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラの使用。好ましい実施態様において、活性成分は、シマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物である。さらなる好ましい実施態様は、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物と組み合わせられたシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の使用である。
【００２６】
もう一つの好ましい実施態様は、一つ以上の生理学的に許容される担体と一緒の、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の家禽への投与を含む、家禽におけるコクシジウム症を抑制する方法である。さらに好ましいのは、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物をさらに含む方法である。
【００２７】
本発明の同等に好ましい実施態様は、タンパク質、ビタミン及びミネラルのような添加剤を含むか又は含まない粉砕された植物及び／又は動物に基づく乾燥家禽飼料の他に、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物を含む、家禽におけるコクシジウム症の抑制のための家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料である。コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物をさらに含む家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料も、重要な実施態様である。
【００２８】
本発明の重要な局面は、家禽におけるコクシジウム感染の予防的又は治療的な処置のための、乾燥もしくは湿性の家禽食料又は飲料水への添加剤としての、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の使用である。コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物をさらに含む場合、該使用はさらに重要である。
【００２９】
トリにとって生理学的に許容される一つ以上の担体と、唯一の活性成分としてのコクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物との混合物、又はさらに第二の活性成分としてのコクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物との混合物を均質化することを含む、家禽におけるコクシジウム症の抑制のための獣医学的組成物を製造する方法も、好ましい実施態様である。
【００３０】
もう一つの重要な実施態様は、タンパク質、ビタミン及びミネラルのような添加剤を含むか又は含まない粉砕された植物及び／又は動物に基づく乾燥家禽飼料の他に、唯一の活性成分としてコクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物を含むか、又はさらに第二の活性成分としてコクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物を含む、家禽におけるコクシジウム症の抑制のための家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料である。
【００３１】
トリにとって生理学的によく容認される一つ以上の担体と一緒の、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の投与と、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物の投与との循環を含む、家禽におけるコクシジウム症を引き起こす耐性エイメリア株の発生を防止するための管理も、重要である。好ましいのは、シマルバアマラとモモルディカカランティアとの組み合わせの使用を含む耐性管理である。
【００３２】
上述の家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料は、天然成分のうちのいずれか一方、又は両方の組み合わせを含有している。該実施態様は、各々、同等に好ましい。
【００３３】
有利には、該家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料は、通常フィードミルにより製造されるペレットからなる。粉砕された穀類が、一般に、基剤として使用される。その基剤へ、油並びに植物性及び動物性のタンパク質のようなさらなる要素が添加される。全ての要素が、粉砕又は混合装置において充分に混合され、水を吹き付けられるか、又は蒸気により処理され、高温で、約２〜１５mmの直径を有している円形ノズルを通して成形される、即ち、押し出される。その押し出しの過程で、加湿された材料は圧縮され、比較的硬いバーの形態でノズルから出て、ノズルの出口において、切断装置を使用して、所望の長さ、例えば、約５〜２５mmの長さのピースへと切断される。生じたペレットは、まだ暖かく、排出される際に空気中で乾燥されるか、又は加熱チャンバーを通るコンベヤーベルトに乗せられ、約８０〜１２０℃で乾燥される。完成したペレットは、棒状又は円柱状であり；比較的滑らかな表面を有しており、崩壊したり塵を形成したりすることなく容易に注入可能である。それらは、一般に、約１．２g/cm3の密度を有している。
【００３４】
一般に、本発明に係る薬用飼料ペレットの製造のための手法は、通常の飼料ペレットの製造の場合と全く同様である。しかしながら、押し出し工程の前に、天然活性成分と、有機的な粉砕され均質化された飼料要素とが、充分に混合され、約５〜１０重量％の水又は蒸気により加湿され、約６０〜８０℃、好ましくは６５〜７５℃の高温で飼料ペレットへと圧縮される。良好な均質化は、まず、天然活性成分が、残りの飼料コンポーネントの比較的少量の一部と充分に混合され、その結果、比較的高い比率の天然活性成分を有している、いわゆる予備混合物が得られる場合に、最も有利に達成される。次いで、その予備混合物の一部が、さらなる飼料材料と混合され、さらなる部分混合物が形成され、その部分混合物が、最終工程において、さらなる飼料材料によって最終濃度へと希釈される。その希釈は、ペレット内に封入された活性成分の特に均一な分布をもたらす。
【００３５】
ペレットは、室温にまで冷却され、保管又は最終消費者への輸送のため、紙袋又はその他の適当な容器にパックされる。ペレットは、保管中の安定性が極めて高く、環境的影響から活性成分を保護するコーティングされた形態の中に活性成分を含むため、特別の予防措置は必要ない。活性成分は、これらの保管可能なペレットから外部へは移行しない。
【００３６】
しかしながら、本発明に係る天然活性成分又は獣医学的組成物が、通常の乾燥又は湿性の家禽食料又は飲料水と単純に混和されてもよいことは、言及するまでもない。
【００３７】
本発明に含まれる薬草は、トリにおけるコクシジウム感染の処置のためには使用されていないが、細菌、ウイルス及び真菌の処置における長い使用歴を有している。この歴史的な使用により、その植物材料の安全性が確認されている。シマルバアマラ及びモモルディカカランティアの標準化された抽出物及び植物材料は、商業的に入手可能である。
【００３８】
シマルバは、直径５０〜８０cmの幹を有する、２０mの高さにまで生長する中型の木である。それは、２０〜５０cmの長さの明るい緑色の葉、小さな白い花及び小さな赤い果実を生ずる。それは、アマゾン熱帯雨林、並びにメキシコ、キューバ、ハイチ、ジャマイカ及び中央アメリカのその他の熱帯地域に固有である（科：ニガキ（Ｓｉｍａｒｏｕｂａｃｅａｅ）；属：シマルバ；種：アマラ）。その植物材料は、微量の広範囲の種々の化学物質、例えば、アイランチノン（ａｉｌａｎｔｈｉｎｏｎｅ）、ベンゾキノン、カンチン（ｃａｎｔｈｉｎ）、デヒドログラウカルビノン（ｄｅｈｙｄｒｏｇｌａｕｃａｒｕｂｉｎｏｎｅ）、グラウカルビン（ｇｌａｕｃａｒｕｂｉｎｅ）、グラウカルボロン（ｇｌａｕｃａｒｕｂｏｌｏｎｅ）、グラウカルビノン（ｇｌａｕｃａｒｕｂｉｎｏｎｅ）、ホラカントン（ｈｏｌａｃａｎｔｈｏｎｅ）、メリアノン（ｍｅｌｉａｎｏｎｅ）、シマルビジン（ｓｉｍａｒｏｕｂｉｄｉｎ）、シマロリド（ｓｉｍａｒｏｌｉｄｅ）、シマルビン（ｓｉｍａｒｕｂｉｎ）、シマルボリド（ｓｉｍａｒｕｂｏｌｉｄｅ）、シトステロール、チルカラ（ｔｉｒｕｃａｌｌａ）等を含有している。シマルバ植物は、類似の特性を有していることが既知である（ＰＥＮＧＵＩＮ ＢＯＯＫＳ出版、Ｍｒｓ Ｃ．Ｆ．ＬＥＹＥＬ編、「Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｒｂａｌ」という題名のＭｒｓ Ｍ．ＧＲＩＥＶＥによる書籍、７４１〜７４２ページを参照のこと）。シマルバアマラＡｕｂｌ．は、特に、ギアナにおいてかなり広く普及している木であり、そこでは、赤痢を処置し、腸の緊張力を改善し、腸の分泌を促進し、患者を眠りやすくするための療法として原住民により樹皮が使用されている。シマルバは、樹皮、木又は葉からの抽出物の形態で化粧品産業においても使用されている。米国特許第５，６７６，９４８号は、有意な皮膚脱色活性、皮膚の防御機能の増強、水バリア機能の増強及びケラチノサイト分化活性のような正の皮膚科的効果を記載している。シマルバのさらなる活性は、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓに記載されており：Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ１１０（０２）０１３４３２は、インビトロの抗アメーバ活性を証明するためのシマルバアマラ茎抽出物の使用を記載している。同様に、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ１０９（１０１）０００２８５は、抗マラリア薬の調製のためのシマルバアマラ果実抽出物を記載している。シマルバからの標準化された樹皮及び抽出物は、商業的に入手可能であるか、又は文献に記載された手法に沿って調製され得、例えば、シマルバ樹皮からの水性及びアルコール性の抽出物の作製が、米国特許第５，６７６，９４８号に開示されている。該米国特許において、シマルバ抽出物は、化粧用もしくは医薬的な組成物、特に、皮膚科用組成物、又は皮膚細胞培養培地を作製するために使用されている。得られた組成物も開示されている。その特許は、シマルバ抽出物の有意な皮膚脱色活性に言及している。米国特許第５，６７６，９４８号の教示に従って調製された抽出物は、本発明に従い使用されるのに適している。
【００３９】
一つの特定の実施態様によると、上記の抽出物は、シマルバアマラ、シマルバグラウカ（ｇｌａｕｃａ）、シマルババーシカラー（ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）、シマルバエクセルサ（ｅｘｃｅｌｓａ）又はモモルディカカランティアから、特に、これらの植物の幹の樹皮、茎又は根から入手される。もう一つの実施態様によると、上記の抽出物は、水、アルコール、好ましくは、メタノールもしくはエタノールのような低級アルコール、グリコール、特に、プロピレングリコール、又は任意の比率の水性−アルコール性混合物のような少なくとも一つの極性溶媒による抽出により得られた抽出物である。さらなる実施態様によると、上記の抽出物は、乾燥抽出物として表した場合、組成物の全重量に基づき０．００１〜５重量％、好ましくは０．０１〜１重量％、特に好ましくは０．１〜０．５重量％の濃度で、組成物中に存在する。さらなる適当な製剤は、下に記載される。
【００４０】
ウリ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ）科のメンバーであるモモルディカカランティアは、熱帯植物である（科：ウリ；属：モモルディカ；種：カランティア）。それは、ニガウリとして広く知られている。モモルディカカランティアは、東アフリカ、アジア、カリブ海及び南米の一部を含む熱帯地域に生長しており、そこでは、食料としても医薬としても使用されている。それは、至る所にヒョウタン様の隆起を有する緑色のキュウリ形の果実である。それは、不格好な薄緑色のキュウリのような外見を有する。果実は、キュウリのように、堅いはずである。それは、極めて苦い味がする。ニガウリの種子、葉及びつるは全て使用されているが、果実が、薬用に使用されている最も安全で最も広く流布している植物の部分である。未熟な果物は、ビタミンＣの良好な供給源であり、ある程度のビタミンＡ、リン及び鉄を提供する。モモルディカカランティアは、細い茎及び巻きひげを有する、生長が速く、匍匐性又はよじ登り性のつるである。モモルディカカランティアは、癌、糖尿病及び多くの感染性疾患のために原住民により使用されてきたため、極めて人気のある植物である。その植物材料は、微量の広範囲の種々の化学物質、例えば、アルカロイド、カランチン（ｃｈａｒａｎｔｉｎ）、カリン（ｃｈａｒｉｎｅ）、クリプトキサンチン、ククルビチン（ｃｕｃｕｒｂｉｔｉｎｓ）、ククルビタシン（ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎｓ）、ククルビタン（ｃｕｃｕｒｂｉｔａｎｅｓ）、シクロアルテノール、ジオスゲニン、エレオステアリン酸（ｅｌａｅｏｓｔｅａｒｉｃ ａｃｉｄｓ）、エリスロジオール（ｅｒｙｔｈｒｏｄｉｏｌ）、ガラクツロン酸、ゲンチシン酸、ゴーヤグリコシド（ｇｏｙａｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ）、ゴーヤサポニン（ｇｏｙａｓａｐｏｎｉｎｓ）、グアニル酸シクラーゼ阻害剤、ギプソゲニン（ｇｙｐｓｏｇｅｎｉｎ）、ヒドロキシトリプタミン、カロウニジオール（ｋａｒｏｕｎｉｄｉｏｌｓ）、ラノステロール、ラウリン酸、リノール酸、リノレン酸、モモルカラシド（ｍｏｍｏｒｃｈａｒａｓｉｄｅｓ）、モモルカリン（ｍｏｍｏｒｃｈａｒｉｎｓ）、モモルデノール（ｍｏｍｏｒｄｅｎｏｌ）、モモルジシリン（ｍｏｍｏｒｄｉｃｉｌｉｎ）、モモルジシン（ｍｏｍｏｒｄｉｃｉｎｓ）、モモルジシニン（ｍｏｍｏｒｄｉｃｉｎｉｎ）、モモルジコシド（ｍｏｍｏｒｄｉｃｏｓｉｄｅｓ）、モモルジン（ｍｏｍｏｒｄｉｎ）、モモルドロ（ｍｏｍｏｒｄｏｌｏ）、マルチフロレノール（ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｅｎｏｌ）、ミリスチン酸、ネロリドール（ｎｅｒｏｌｉｄｏｌ）、オレアノール酸、オレイン酸、シュウ酸、ペンタデカン、ペプチド、ペトロセリン酸、ポリペプチド、タンパク質、リボソーム不活化タンパク質、ロスマリン酸（ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、ルビキサンチン（ｒｕｂｉｘａｎｔｈｉｎ）、スピナステロール（ｓｐｉｎａｓｔｅｒｏｌ）、ステロイド性配糖体、スチグマスタジオール（ｓｔｉｇｍａｓｔａ−ｄｉｏｌｓ）、スチグマステロール、タラキセロール（ｔａｒａｘｅｒｏｌ）、トレハロース、トリプシン阻害剤、ウラシル、バシン（ｖａｃｉｎｅ）、ｖ−インスリン、ベルバスコシド（ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ）、ビシン（ｖｉｃｉｎｅ）、ゼアチン、ゼアチンリボシド、ゼアキサンチン及びゼイノキサンチンを含有している。
【００４１】
植物モモルディカカランティアＬ．の果実、ニガウリは、種々の国において長期にわたり食品として使用されてきた（ウリ科）。果実、種子及び空中部分の抽出物も、ヒトのための医薬としての使用の長い伝統を有しており、抗生物質、抗酸化剤、抗糖尿病剤及び降圧剤等として使用されている。インビボの研究は、ヒトにおける低い毒性を示している。静脈注射は、いくつかの実験動物研究において、毒性であることが示されている。果実及び葉の水及びエタノールによる抽出物の経口的な摂取は、妊娠中、安全であることが証明されている。
【００４２】
モモルディカカランティアのいくつかの活性も、特許文献に記載されている。例えば、米国特許第６，１２４，４４２号及び米国特許第６，１０３，２４０号は、カンゾウ抽出物と、ウリ科及び／又はモモルディカに属する植物から得られたモグロシド（ｍｏｇｒｏｓｉｄｅｓ）とを含む薬草甘味保存組成物を記載している。ＵＳ２００２１９３３１０は、モモルディカカランティアの経口的に活性な画分、その活性ペプチド及び糖尿病の処置におけるそれらの使用に関するものである。Ｗ０９８４３４８４は、ＭＣ６と名付けられたモモルディカカランティアの水溶性抽出物を記載しており、その調製法、及び高血糖障害の処置におけるその使用法が提供されている。この特許参照は、経口投与後ですら、該抽出物に低血糖活性があることに言及しており、活性薬剤が好ましくは経口投与される、高血糖障害、特に、糖尿病を処置するための活性薬剤の使用法も提供されている。
【００４３】
Ｂ．Ｈａｙａｔらは、「Ｔｈｅ Ｐａｋｉｓｔａｎ Ｖｅｔ．Ｊ．，１６（４）：１９９６，ｐｐ１６４−１６６」において、ニワトリにおけるコクシジウム症に関するテストを記載している。著者らは、抗生物質サリノマイシン（ｓａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ）と比較して、「バキン（ｂａｋｉｎ）」（メリアアゼダラッチ（Ｍｅｌｉａ ａｚｅｄａｒａｃｈ））及び「カレラ（ｋａｒｅｌａ）」（モモルディカカランティア）を含有している調製物の予防的な投与の後の、幼齢鶏の体重増加及び糞便中の卵母細胞の減少を比較している。高濃度、即ち、飼料５０Kgにつき１．５Kgの粉末形態のモモルディカカランティアで、正の効果が入手された。使用されたエイメリアの病原性が決定されておらず、病変スコアが提示されておらず、糞便状態の評価が提示されていないため（これらは、全て、コクシジウムが感染を引き起こしたことを決定するために必要である）、その粉末の効力は論文において確認され得ない。さらに、「カレラ」の型の確証が提示されていないため、研究は再現不可能である。今回、驚くべきことに、モモルディカカランティアの量の有意な減少が、病原性エイメリアにより引き起こされる病変スコアの減少をもたらすこと、及び濃縮レベルのモモルディカカランティアが、トリに対して毒性でないことが見出された。
【００４４】
ヒトに感染する様々な原生動物に対する植物シマルバアマラ及びモモルディカカランティアの両方の活性が、証明されている。しかしながら、寄生性原生動物の一つの種に対して活性な生成物は、その他の種もしくは属に対しては必ずしも活性ではなく、又はその生成物はその種もしくは属のその他の宿主において活性である。これは、異なる消化器系を有しているヒト及びトリの場合に特に当てはまる。さらに、家禽におけるエイメリア種に対する活性は、シマルバアマラでは以前に証明されていない。
【００４５】
従って、本発明は、シマルバアマラ樹皮及びその抽出物、並びに低濃度のモモルディカカランティア果実抽出物の、家禽におけるコクシジウム症を引き起こすエイメリア種に対する活性の発見、並びにコクシジウム抑制製剤における上記植物の適切な組成という技術的問題の解決に基づく。ここで、本発明の発明者らは、単独の又はモモルディカカランティア果実抽出物と組み合わせられたシマルバアマラ樹皮が、特定の用量範囲内で、家禽におけるエイメリア種の負の影響を減少させるのに特に有効であること、及び、以下に記載され例示されるインビボテストによってこの活性を証明することが可能であることを観察することができた。
【００４６】
天然成分は、家禽への全身投与、好ましくは、例えば、飼料又は水を介した経口投与のために製剤化される。それらは、カプセル剤、散剤、液剤及び懸濁剤のような適当な形態で、又は、上記のように、家禽飼料補助剤もしくは薬用家禽飼料の形態で、トリにとって生理学的によく容認される慣習的な賦形剤と共に製剤化され得る。
【００４７】
成分の用量は、飼料又は水の中のppmで表され、コクシジウム感染の重度、用途（処置であるか予防的であるか）及びトリの種に依って変動し得る。
【００４８】
コクシジウム感染の処置、及びコクシジウムにより引き起こされる腸及び盲腸の傷害の防止において使用されるモモルディカカランティアの材料は、１０％カランチン又は＞２．５％苦味成分（ｂｉｔｔｅｒｓ）のいずれかに標準化された抽出物であり、モモルジシンを含有していなければならない。この標準化された材料は、１０：１〜１５：１の抽出液対植物材料比を使用して、果実の熱水とアルコールとの抽出溶媒混合物（２０／８０）により得られる。次いで、その抽出物を乾燥させると、使用のための準備が整う。最終的なモモルディカカランティア乾燥抽出物粉末は、水又はエタノールに可溶性でなければならない。ＨＰＬＣ／ＵＶ又は重力測定法が、抽出物中の化合物の含有量を確証するために使用され得る。そのような抽出物の適当な供給元は、エキゾティックナチュラルズ（Ｅｘｏｔｉｃ Ｎａｔｕｒａｌｓ）（Ｍｕｍｂａｉ，Ｉｎｄｉａ）及びキングハーブインターナショナル（Ｋｉｎｇｈｅｒｂ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）（Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ，Ｃｈｉｎａ）である。
【００４９】
他の天然成分はシマルバアマラの樹皮である。樹皮は乾燥させられ、粉末へと粉砕される。樹皮は、クワシノイド（ｑｕａｓｓｉｎｏｉｄｓ）（例えば、アイランチノン、グラウカルビノン）を含有していなければならない。そのような標準化された植物材料の供給元は、シエロハーブズ（Ｃｉｅｌｏ Ｈｅｒｂｓ）（Ｕ．Ｓ．Ａ．）である。
【００５０】
本発明は、好ましくは、１０〜４００ppmの割合で与えられた場合の、最も好ましくは、飼料又は水と混和された場合の、家禽におけるコクシジウム感染の予防的又は治療的な抑制のための、単独の、又は相互に組み合わせられた、二つの定義された天然成分の使用に関する。両天然成分は、Ｅ．テネラ（ｔｅｎｅｌｌａ）に感染した家禽に与えられた場合、感染を有する未処置の家禽及び感染を有しない未処置の家禽と比較して、盲腸病変スコアを減少させ、体重増加を改善し、飼料効率を維持することが示された。
【００５１】
生物学的実施例：家禽におけるＥ．テネラの減少
研究は２工程からなっていた。工程１においては、単離されたＥ．テネラを、工程２において使用される株の病原性を証明するためにヒナに与えた。病原性であると見なすためには、感染は、非感染コントロールに対する、死亡率の有意な２５％の増加、体重増加速度の有意な２０％の減少及び／又は病変スコアの有意な２．５単位の増加を引き起こす必要があった（ｐ＝０．０５）。
【００５２】
工程１において使用された材料は、以下のものを含んでいた：
１．胞子形成した接合子嚢（水１ml中１００，０００個の濃度）
２．ニワトリ（幼齢鶏４０羽）、１日齢に達した時点で、１０羽ずつ４群に分割
３．シリコン処理された微量遠心管（１．５ml）
４．ピペット、ピペッタ及びピペットチップ
５．秤の確証のための分銅を含む、ニワトリを計量するための秤又は天秤。
【００５３】
テスト接種物及び測定は、以下の通りであった：
１．１２日齢で、ニワトリを計量する（体重増加と同時に群の飼料消費量を測定する）
２．１４日齢で、ニワトリを計量する
３．１４日齢で、予め形成された接種物をニワトリに経口接種する
ａ．胞子形成した接合子嚢を希釈し、６本のチューブを得る（各チューブ一本余分）：
１．１１チューブ：接種原１ml
２．１１チューブ：接種原０．１ml＆水０．９ml
３．１１チューブ：接種原０．０１ml＆水０．９９ml
４．１１チューブ：水１ml
４．２１日齢で、ニワトリを計量する
５．２１日齢で、ニワトリを安楽死させ、病変スコアを実施する（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｒｅｉｄ，１９７０）
ａ．０ 肉眼的病変なし
ｂ．＋１、盲腸壁に極めてわずかな点状出血が散在；盲腸壁の肥厚なし；正常な盲腸内容物が存在
ｃ．＋２ 盲腸内容物中の著しい血液を含むより多数の病変、盲腸壁がやや肥厚；正常な盲腸内容物が存在
ｄ．＋３ 大量の血液又は盲腸コアが存在；盲腸壁が大きく肥厚；盲腸内の糞便含有量は、たとえ存在したとしても、ほとんどなし
ｅ．＋４ 血液又は大きなチーズ状のコアにより盲腸壁が大きく膨張；糞便の残骸が欠如しているか又はコアに含まれる。死亡したトリは、＋４としてスコア化。
生存しているトリ及び死亡したトリについて体重増加を計算する。
【００５４】
工程２においては、二つの天然成分を使用した。工程２において、感染処置群の間の１病変スコア単位の差を、生物学的に有意と見なした。
【００５５】
使用された材料は、以下のものであった：
６．胞子形成した接合子嚢（水中、滴定された用量）；未処置コントロールと比較された病原性の用量を提供する適切な希釈率の接合子嚢を含有している４２本の別々のチューブとして調製した
７．ニワトリ（幼齢鶏５０羽）、１日齢に達した時点で、１０羽ずつ５群に分割
８．シリコーン処理された微量遠心管（１．５ml）
９．ピペット、ピペッタ及びピペットチップ
１０．テスト化合物
１１．秤の確証のための分銅を含む、ニワトリを計量するための秤又は天秤
【００５６】
テスト及び測定は、以下の通りであった：
６．１２日齢で、ニワトリを計量する（体重増加と同時に群の飼料摂取量を測定すべきである）
７．１２日齢で、テストされる生成物を与え始める（５群のうち３群に化合物を与える）：
１．１０羽：未処置コントロール
２．１０羽：未処置コントロール
３．１０羽：低用量（４０ppm）で処置
４．１０羽：中用量（４００ppm）で処置
５．１０羽：高用量（４０００ppm）で処置
８．１４日齢で、ニワトリを計量する
９．１４日齢で、予め形成された接種物をニワトリに経口接種する（５群のうち４群において各ニワトリに５００，０００個の接合子嚢を与える）
６．１０羽：未感染かつ未処置のコントロール
７．１０羽：感染させられた未処置のコントロール
８．１０羽：感染させられ低用量で処置された
９．１０羽：感染させられ中用量で処置された
１０．１０羽：感染させられ高用量で処置された
１０．コクシジウム症に起因するものであっても、又はその他の原因に起因するものであっても、全ての死亡率及び罹患率を、適切なテストにより診断するべきである。剖検結果を報告するべきである。診断されたコクシジウム症については、盲腸のウェットマウント（ｗｅｔ ｍｏｕｎｔ）調査を行い、コクシジウムを同定するべきである。死亡したトリの体重、死亡日及び性別を記録するべきである
１１．２１日齢で、ニワトリを計量する
１２．２１日齢で、ニワトリを安楽死させ、病変スコアを実施する（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｒｅｉｄ，１９７０）
ａ．０ 肉眼的病変なし
ｂ．＋１、盲腸壁に極めてわずかな点状出血が散在；盲腸壁の肥厚なし；正常な盲腸内容物が存在
ｃ．＋２ 盲腸内容物中の著しい血液を含むより多数の病変、盲腸壁がやや肥厚；正常な盲腸内容物が存在
ｄ．＋３ 大量の血液又は盲腸コアが存在；盲腸壁が大きく肥厚；盲腸内の糞便含有量は、たとえ存在したとしても、ほとんどなし
ｅ．＋４ 血液又は大きなチーズ状のコアにより盲腸壁が大きく膨張；糞便の残骸が欠如しているか又はコアに含まれる。死亡したトリは、＋４としてスコア化。
１３．生存しているトリ及び死亡したトリについて体重増加を計算する。
ａ．１２〜１４日齢（この測定は、抗コクシジウム天然生成物単独の効果を同定する）
ｂ．１４〜２１日齢（この測定は、感染に対する抗コクシジウム天然生成物の有効性を査定する）
ｃ．１２〜２１日齢（この測定は、実験期間を通した感染に対する抗コクシジウム天然生成物の有効性を査定する）
【００５７】
これらの研究は、モモルディカカランティア果実抽出物（４０ppm）及びシマルバアマラ樹皮（４００ppm）により処置されたニワトリが、非感染コントロールニワトリにおけるものとは有意に異なっていないが、非感染ニワトリにおけるものよりは有意に高い最終体重、全重量増加及び全体重増加率を有していることを証明した。
【００５８】
【表１】
【００５９】
飼料効率の改善は、（ニワトリの群化のため）統計的に測定され得なかったが、全てのレベルのモモルディカカランティア並びに低レベル及び中レベルのシマルバアマラを供給されたニワトリは、感染コントロール・ニワトリより良好な飼料効率比を有していた。
【００６０】
【表２】
【００６１】
研究において、病変スコアを減少させる天然成分の能力も証明された。モモルディカ４０ppm及びシマルバ４００ppmの両方が、少なくとも１、盲腸病変スコアを改善した。
【００６２】
【表３】
【００６３】
ｐ＝０．０５で統計的に有意に、モモルディカ４０ppm、シマルバ４０ppm及びシマルバ４００ppmが、平均（左右平均）盲腸スコアを改善した。モモルディカ４００ppm及び４０００ppmは、ｐ＝０．１で、平均スコアを改善した。
【００６４】
【表４】
【００６５】
これらのテスト結果は、これらの二つの天然成分が、コクシジウムでチャレンジされたニワトリにおいて、飼料中４０〜４００pmのレベルで、盲腸病変スコアを減少させ、体重増加を改善し、飼料効率を維持することを証明している。これらの二つの天然成分のこの能力は、以前に記載されていない。
【００６６】
これらの二つの天然成分の使用は、いくつかの利点を有する。ヒトにおける長い使用歴があるため、これらの成分の安全性に関しては広範囲な情報が入手可能であり、このことは、ニワトリ及びニワトリ生産物における残留に関する懸念を減少させる。また、これらの天然成分は、家禽におけるコクシジウムの抑制又は処置において以前に使用されていない化合物を含有しており、従って、耐性エイメリア株の抑制を可能にする。最後に、これらの天然成分は、いくつかの化合物を含有しており、従って、コクシジウムの抑制において多様な化合物を提供し、耐性が出現する速度を減少させる。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】コクシジウムを有していない家禽が、病変を有しておらず（スコア０）、未処置の感染を有しているものの５０％が、３以上の病変を有していることを証明している。シマルバアマラの適用は、２．５より高いスコアを防止する一方、４０ppmの割合のモモルディカカランティアは、２未満のスコアを維持する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
家禽におけるコクシジウム症の治療用の医薬品の製造のための、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラの使用。
【請求項２】
活性成分がシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物である、請求項１記載の使用。
【請求項３】
シマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物が、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物と組み合わせられる、請求項２記載の使用。
【請求項４】
家禽におけるコクシジウム症を抑制する方法であって、一つ以上の生理学的に許容される担体と共に、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物を家禽に投与することを含む方法。
【請求項５】
コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物を投与することをさらに含む、請求項４記載の方法。
【請求項６】
タンパク質、ビタミン及びミネラルのような添加剤を含むか又は含まない粉砕された植物及び／又は動物に基づく乾燥家禽飼料の他に、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物を含む、家禽におけるコクシジウム症の抑制のための家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料。
【請求項７】
家禽におけるコクシジウム感染の予防的又は治療的な処置のための、乾燥もしくは湿性の家禽食料又は飲料水への添加剤としての、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の使用。
【請求項８】
コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物をさらに含む、請求項７記載の使用。
【請求項９】
家禽におけるコクシジウム症の抑制のための獣医学的組成物を製造する方法であって、トリにとって生理学的に許容される一つ以上の担体と、唯一の活性成分としてのコクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物との混合物、又はさらに第二の活性成分としてのコクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物との混合物を均質化することを含む方法。
【請求項１０】
一つ以上の生理学的に許容される担体と一緒の、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の投与と、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物の投与との循環を含む、家禽におけるコクシジウム症を引き起こす耐性エイメリア株の発生を防止するための管理。
【請求項１１】
シマルバアマラとモモルディカカランティアとの組み合わせが投与される、請求項１０記載の耐性管理。
【請求項１】
家禽におけるコクシジウム症の治療用の医薬品の製造のための、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラの使用。
【請求項２】
活性成分がシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物である、請求項１記載の使用。
【請求項３】
シマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物が、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物と組み合わせられる、請求項２記載の使用。
【請求項４】
家禽におけるコクシジウム症を抑制する方法であって、一つ以上の生理学的に許容される担体と共に、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物を家禽に投与することを含む方法。
【請求項５】
コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物を投与することをさらに含む、請求項４記載の方法。
【請求項６】
タンパク質、ビタミン及びミネラルのような添加剤を含むか又は含まない粉砕された植物及び／又は動物に基づく乾燥家禽飼料の他に、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物を含む、家禽におけるコクシジウム症の抑制のための家禽飼料補助剤又は薬用家禽飼料。
【請求項７】
家禽におけるコクシジウム感染の予防的又は治療的な処置のための、乾燥もしくは湿性の家禽食料又は飲料水への添加剤としての、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の使用。
【請求項８】
コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物をさらに含む、請求項７記載の使用。
【請求項９】
家禽におけるコクシジウム症の抑制のための獣医学的組成物を製造する方法であって、トリにとって生理学的に許容される一つ以上の担体と、唯一の活性成分としてのコクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮もしくはその抽出物との混合物、又はさらに第二の活性成分としてのコクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物との混合物を均質化することを含む方法。
【請求項１０】
一つ以上の生理学的に許容される担体と一緒の、コクシジウム抑制的に有効な量のシマルバアマラ乾燥樹皮又はその抽出物の投与と、コクシジウム抑制的に有効な量のモモルディカカランティア果実抽出物の投与との循環を含む、家禽におけるコクシジウム症を引き起こす耐性エイメリア株の発生を防止するための管理。
【請求項１１】
シマルバアマラとモモルディカカランティアとの組み合わせが投与される、請求項１０記載の耐性管理。
【図１】
【公表番号】特表２００７−５２０５１５（Ｐ２００７−５２０５１５Ａ）
【公表日】平成１９年７月２６日（２００７．７．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５５１７９８（Ｐ２００６−５５１７９８）
【出願日】平成１７年２月２日（２００５．２．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／００１０４１
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０７４９５４
【国際公開日】平成１７年８月１８日（２００５．８．１８）
【出願人】（５９７０１１４６３）ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト (942)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年７月２６日（２００７．７．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年２月２日（２００５．２．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／００１０４１
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０７４９５４
【国際公開日】平成１７年８月１８日（２００５．８．１８）
【出願人】（５９７０１１４６３）ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト (942)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]