抗真菌性組成物及びその製造方法
【課題】 従来知見による技術では安全性が高く、優れた抗真菌活性の抗真菌性組成物及びその製造方法が工業的優位に出来ていない。即ち、一般の木酢液を主体とする抗真菌性組成物ではホルムアルデヒドや他の発ガン性物質が含まれており、また木酢液の強い臭気は不快を感を覚える人も多く、マスキング剤を添加しても消臭できなかった。
【解決手段】 ヒノキ木酢液をエーテル抽出し、更に分画することを特徴とするβカジネンを含むフェノール化合物の混合物は安全性が高く、木酢液特有の臭気もない。優れた抗真菌活性をもった抗真菌活性組成物として工業的優位に製造できる。
【解決手段】 ヒノキ木酢液をエーテル抽出し、更に分画することを特徴とするβカジネンを含むフェノール化合物の混合物は安全性が高く、木酢液特有の臭気もない。優れた抗真菌活性をもった抗真菌活性組成物として工業的優位に製造できる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は水虫など治療予防の抗真菌性組成物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
木炭製造の際、木材またはオガ屑を炭化するが、その副生成物として木酢液が採取される。木酢液の生成は木材またはオガ屑の熱分解によるものであり、その量は原料の木材またはオガ屑の約半量と非常に多い。これまで木酢液は、トイレ、し尿処理、家畜舎または魚市場などの悪臭の脱臭用、ヒノキやアカマツなどの種子をまく前に土壌に撒布する土壌消毒液として使用されている。そのほかにも雑草防除用、植物成長促進用、害虫忌避剤用、家畜飼料添加用など幅広い用途を持っているが、その利用の程度は生産量のほんのわずかにしか過ぎない。即ち木酢液の殆んどは目下、産業廃棄物として焼却または埋め立てされており有効利用が待たれている。
一方、植物の抽出物による白癬菌に対する抗菌殺菌作用を利用した水虫治療薬に関する提案は、従来より種々なされている。
【０００３】
特開平８−３５９５０４号公報では木酢液を主剤として利用することが提案されている。しかしこの木酢液は異臭が強く患者に不快感を与える難点がある。また木酢液にはいろんな不純物が含まれている。
特開２００１−２８８０９６号公報では木酢液に梅酢液を併用することを提案している。しかし異臭は梅酢液の持つ甘い香りによるマスキング効果で減少するものの、不快感は残っている。また木酢液のいろんな不純物はそのまま残っている。
【特許文献１】特開平８−３５９５０４号公報
【特許文献２】特開２００１−２８８０９６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って本発明は植物の抽出物を利用した新たな水虫治療予防物質を開発するものであり、産業廃棄物であるヒノキ木酢液を有効に活用出来、水虫など治療予防の抗真菌性組成物及びその製造方法を工業的優位に提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らはヒノキ木酢液中に含まれる化合物の生理活性性を鋭意研究した結果、βカジネンを含むフェノール化合物との混合物が白癬菌に対し、抗真菌活性に優れることを見出し、本発明を完結するに至った。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の効果としては、先ず第１に悪臭などのしない水虫など治療予防の抗真菌性組成物を工業的優位に提供できることであり次には産業廃棄物を有効利用できることであり、しかも不純物を分画除去しており安全性が高いことである。すなわち、本発明の目的は産業廃棄物を利用して水虫など治療予防の抗真菌性組成物を工業上有利に提供することにある。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明におけるβカジネンは合成品でも良いが、ヒノキ木酢液をエーテル抽出し、更に分画して得られたフェノール成分をカラムクロマトグラフィーにより分画したものが産業廃棄物利用の点から好ましい。フェノール成分の内、２−メトキシ−４−メチルフェノールは単独では抗真菌活性を殆んど示さない。フェノール、Ｏ−クレゾール及びＯ−エチルフェノールも単独では夫々弱い抗真菌活性しか示さない。フェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノールはいずれもヒノキ木酢液をエーテル抽出し、更に分画して得られたフェノール成分をカラムクロマトグラフィーにより分画したβカジネンとともに含まれているのでそのまま利用でき、経済的である。即ち、ヒノキ木酢液をエーテル抽出し、更に分画して得られたフェノール成分をカラムクロマトグラフィーにより分画して得られるβカジネン、フェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノールの５成分混合物が抗真菌活性をあげる効果が優れていることが判明している。その抗真菌性活性発現に必要なβカジネン成分は少なくとも６０％である。
【０００８】
本発明におけるフェノール成分の製造は１例としてあげれば次の如くして行なわれる。先ず、ヒノキ木酢液に１０％硫酸、飽和食塩水を添加してエチルエーテルで抽出を行ない、そのエーテル層に１０％硫酸、飽和食塩水を添加してエーテル抽出を行なう。得られたエーテル層に４０％亜硫酸水素ナトリウムを添加して、エーテル層を得る。更に１０％炭酸ソーダ、２０％食塩水を添加して得られたエーテル層にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ワコーゲル Ｃ−２００：和光純薬製）により分画して得られる。このフェノール成分をｎ−へキサン、ｎ−へキサン／エチルエーテル（１：１）、エチルエーテルの各溶媒で転溶していき、この分画を繰返すことにより本発明に使用されるβカジネン、フェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノールが得られる。
【０００９】
即ち本発明におけるβカジネン、フェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノールは前記の如くして得られたフェノール成分を更にカラムクロマトグラフィーで分画を繰返すことにより製造される。
【実施例】
【００１０】
以下、本発明を実施例によって具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではない。
【００１１】
（抗真菌活性測定方法）内径３５ｍｍのシャーレにサブロウ培地１ｍｌを入れ、サンプルのメタノール溶液（２５〜２００ｍｇ／ｍｌ）２０ｍｌと白癬菌の生理食塩水縣濁溶液５０ｍｌを加えた。メタノール２０ｍｌのみを加えた菌ブランク、メタノール２０ｍｌと生理食塩水５０ｍｌを加えたものを培地ブランクとした。３０℃で静置培養した後、肉眼で菌の発育状態を観察した。発育状態の結果は、培地ブランクを０％、菌ブランクを１００％として決定した。
【００１２】
（白癬菌の保存）サブロウ寒天培地（ブドウ糖４ｇ、ペプトン１ｇ、寒天２ｇを純水１０００ｍｌに加温溶解し、試験管１０本に分注して１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌したもの）を用いて、３０℃で３〜４日間斜面培養した。新しいコロニーが増殖した後、４℃で保存した。但し、１ヶ月ごとに白金耳で古いコロニーを新しい斜面培地に移植して継代した。
【００１３】
（機器分析）ガスクロマトグラフィーは日立ガスクロマトグラフィーＧ−５０００（キャピラリーカラム ＤＢ−１）型を用いた。成分の定性及び定量には日立製クロマトパックＤ−２５００型を使用した。液体クロマトグラフィーは島津高速液体クロマトグラフＬＣ−６ＡＤ、及び日本分析工業ＬＣ−０９型を用いた。ＧＣ−ＭＳスペクトルは日本電子ＪＥＯＬ−ＪＭＮ−ＨＸ質量分析計を用いて測定した。
【００１４】
・ 実施例１
ヒノキ木酢液２０Lを分液ロートでエチルエーテル抽出し、エーテル濃縮後、２０９８ｇの抽出物を得た。常法（栗山旭、日本木材学会講要、１６、１９０、１９６６）により、ヒノキ木酢液抽出物を中性成分（Ａ）、塩基性成分（Ｂ）、フェノール成分（Ｃ）、酸性成分（Ｄ）およびカルボニル成分（Ｅ）に分画した。それらの抗真菌活性を測定した。
【表１】
上表よりフェノール成分（Ｃ）が良いことが判る。次に活性の認められたフェノール成分（Ｃ）についてシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ワコーゲル Ｃ−２００ ：和光純薬製）による分画を下表の如く行なった。
【表２】
フェノール成分をｎ−へキサン、ｎ−へキサン−エーテル（１：１）、エーテルの各溶媒で転溶していき、Ｃ1−１〜Ｃ1−３の３成分に分画した。それぞれについて抗真菌活性を測定した結果、Ｃ1−１に最も活性が認められた。
【表３】
更にＣ1−１より分画した Ｃ２−１〜Ｃ２−７の抗真菌活性を測定した結果、Ｃ２−２〜Ｃ２−４に活性が認められた。次にＣ２−２〜Ｃ２−４より分画した Ｃ３−１〜Ｃ３−４の抗真菌活性を測定した結果、Ｃ３−３に活性が認められた。Ｃ３−３より分画した Ｃ４−１〜Ｃ４−４の抗真菌活性を測定した結果、Ｃ４−３に活性が認められた。Ｃ４−３より分画した Ｃ５−１〜Ｃ５−６の抗真菌活性を測定した結果、Ｃ５−５に活性が認められた。Ｃ５−５より分画したＣ６−１〜Ｃ６−４の抗真菌活性を測定した結果、Ｃ６−２に優れた活性が認められた。ＧＣ−ＭＳの開裂パターンによる同定を行なったところ、βカジネンが主体で他はフェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノールであった。
【００１５】
・ 実施例２比較例１
実施例１で得られたβカジネン、フェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノール各化合物単独の抗真菌活性を各化合物の標品を用いて測定した。
【表４】
上表の如くフェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノール及びβカジネン各化合物は単独では強い抗真菌活性を示さなかった。しかしβカジネンと各種フェノール化合物が共存すれば抗真菌活性は著しく改善されることが判明した。
【産業上の利用可能性】
【００１６】
本発明は植物の抽出物を利用した新たな水虫治療予防物質を開発するものであり、産業廃棄物であるヒノキ木酢液を有効に活用出来、水虫など治療予防の抗真菌性組成物及びその製造方法を工業的優位に提供することである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は水虫など治療予防の抗真菌性組成物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
木炭製造の際、木材またはオガ屑を炭化するが、その副生成物として木酢液が採取される。木酢液の生成は木材またはオガ屑の熱分解によるものであり、その量は原料の木材またはオガ屑の約半量と非常に多い。これまで木酢液は、トイレ、し尿処理、家畜舎または魚市場などの悪臭の脱臭用、ヒノキやアカマツなどの種子をまく前に土壌に撒布する土壌消毒液として使用されている。そのほかにも雑草防除用、植物成長促進用、害虫忌避剤用、家畜飼料添加用など幅広い用途を持っているが、その利用の程度は生産量のほんのわずかにしか過ぎない。即ち木酢液の殆んどは目下、産業廃棄物として焼却または埋め立てされており有効利用が待たれている。
一方、植物の抽出物による白癬菌に対する抗菌殺菌作用を利用した水虫治療薬に関する提案は、従来より種々なされている。
【０００３】
特開平８−３５９５０４号公報では木酢液を主剤として利用することが提案されている。しかしこの木酢液は異臭が強く患者に不快感を与える難点がある。また木酢液にはいろんな不純物が含まれている。
特開２００１−２８８０９６号公報では木酢液に梅酢液を併用することを提案している。しかし異臭は梅酢液の持つ甘い香りによるマスキング効果で減少するものの、不快感は残っている。また木酢液のいろんな不純物はそのまま残っている。
【特許文献１】特開平８−３５９５０４号公報
【特許文献２】特開２００１−２８８０９６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って本発明は植物の抽出物を利用した新たな水虫治療予防物質を開発するものであり、産業廃棄物であるヒノキ木酢液を有効に活用出来、水虫など治療予防の抗真菌性組成物及びその製造方法を工業的優位に提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らはヒノキ木酢液中に含まれる化合物の生理活性性を鋭意研究した結果、βカジネンを含むフェノール化合物との混合物が白癬菌に対し、抗真菌活性に優れることを見出し、本発明を完結するに至った。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の効果としては、先ず第１に悪臭などのしない水虫など治療予防の抗真菌性組成物を工業的優位に提供できることであり次には産業廃棄物を有効利用できることであり、しかも不純物を分画除去しており安全性が高いことである。すなわち、本発明の目的は産業廃棄物を利用して水虫など治療予防の抗真菌性組成物を工業上有利に提供することにある。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明におけるβカジネンは合成品でも良いが、ヒノキ木酢液をエーテル抽出し、更に分画して得られたフェノール成分をカラムクロマトグラフィーにより分画したものが産業廃棄物利用の点から好ましい。フェノール成分の内、２−メトキシ−４−メチルフェノールは単独では抗真菌活性を殆んど示さない。フェノール、Ｏ−クレゾール及びＯ−エチルフェノールも単独では夫々弱い抗真菌活性しか示さない。フェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノールはいずれもヒノキ木酢液をエーテル抽出し、更に分画して得られたフェノール成分をカラムクロマトグラフィーにより分画したβカジネンとともに含まれているのでそのまま利用でき、経済的である。即ち、ヒノキ木酢液をエーテル抽出し、更に分画して得られたフェノール成分をカラムクロマトグラフィーにより分画して得られるβカジネン、フェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノールの５成分混合物が抗真菌活性をあげる効果が優れていることが判明している。その抗真菌性活性発現に必要なβカジネン成分は少なくとも６０％である。
【０００８】
本発明におけるフェノール成分の製造は１例としてあげれば次の如くして行なわれる。先ず、ヒノキ木酢液に１０％硫酸、飽和食塩水を添加してエチルエーテルで抽出を行ない、そのエーテル層に１０％硫酸、飽和食塩水を添加してエーテル抽出を行なう。得られたエーテル層に４０％亜硫酸水素ナトリウムを添加して、エーテル層を得る。更に１０％炭酸ソーダ、２０％食塩水を添加して得られたエーテル層にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ワコーゲル Ｃ−２００：和光純薬製）により分画して得られる。このフェノール成分をｎ−へキサン、ｎ−へキサン／エチルエーテル（１：１）、エチルエーテルの各溶媒で転溶していき、この分画を繰返すことにより本発明に使用されるβカジネン、フェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノールが得られる。
【０００９】
即ち本発明におけるβカジネン、フェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノールは前記の如くして得られたフェノール成分を更にカラムクロマトグラフィーで分画を繰返すことにより製造される。
【実施例】
【００１０】
以下、本発明を実施例によって具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではない。
【００１１】
（抗真菌活性測定方法）内径３５ｍｍのシャーレにサブロウ培地１ｍｌを入れ、サンプルのメタノール溶液（２５〜２００ｍｇ／ｍｌ）２０ｍｌと白癬菌の生理食塩水縣濁溶液５０ｍｌを加えた。メタノール２０ｍｌのみを加えた菌ブランク、メタノール２０ｍｌと生理食塩水５０ｍｌを加えたものを培地ブランクとした。３０℃で静置培養した後、肉眼で菌の発育状態を観察した。発育状態の結果は、培地ブランクを０％、菌ブランクを１００％として決定した。
【００１２】
（白癬菌の保存）サブロウ寒天培地（ブドウ糖４ｇ、ペプトン１ｇ、寒天２ｇを純水１０００ｍｌに加温溶解し、試験管１０本に分注して１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌したもの）を用いて、３０℃で３〜４日間斜面培養した。新しいコロニーが増殖した後、４℃で保存した。但し、１ヶ月ごとに白金耳で古いコロニーを新しい斜面培地に移植して継代した。
【００１３】
（機器分析）ガスクロマトグラフィーは日立ガスクロマトグラフィーＧ−５０００（キャピラリーカラム ＤＢ−１）型を用いた。成分の定性及び定量には日立製クロマトパックＤ−２５００型を使用した。液体クロマトグラフィーは島津高速液体クロマトグラフＬＣ−６ＡＤ、及び日本分析工業ＬＣ−０９型を用いた。ＧＣ−ＭＳスペクトルは日本電子ＪＥＯＬ−ＪＭＮ−ＨＸ質量分析計を用いて測定した。
【００１４】
・ 実施例１
ヒノキ木酢液２０Lを分液ロートでエチルエーテル抽出し、エーテル濃縮後、２０９８ｇの抽出物を得た。常法（栗山旭、日本木材学会講要、１６、１９０、１９６６）により、ヒノキ木酢液抽出物を中性成分（Ａ）、塩基性成分（Ｂ）、フェノール成分（Ｃ）、酸性成分（Ｄ）およびカルボニル成分（Ｅ）に分画した。それらの抗真菌活性を測定した。
【表１】
上表よりフェノール成分（Ｃ）が良いことが判る。次に活性の認められたフェノール成分（Ｃ）についてシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ワコーゲル Ｃ−２００ ：和光純薬製）による分画を下表の如く行なった。
【表２】
フェノール成分をｎ−へキサン、ｎ−へキサン−エーテル（１：１）、エーテルの各溶媒で転溶していき、Ｃ1−１〜Ｃ1−３の３成分に分画した。それぞれについて抗真菌活性を測定した結果、Ｃ1−１に最も活性が認められた。
【表３】
更にＣ1−１より分画した Ｃ２−１〜Ｃ２−７の抗真菌活性を測定した結果、Ｃ２−２〜Ｃ２−４に活性が認められた。次にＣ２−２〜Ｃ２−４より分画した Ｃ３−１〜Ｃ３−４の抗真菌活性を測定した結果、Ｃ３−３に活性が認められた。Ｃ３−３より分画した Ｃ４−１〜Ｃ４−４の抗真菌活性を測定した結果、Ｃ４−３に活性が認められた。Ｃ４−３より分画した Ｃ５−１〜Ｃ５−６の抗真菌活性を測定した結果、Ｃ５−５に活性が認められた。Ｃ５−５より分画したＣ６−１〜Ｃ６−４の抗真菌活性を測定した結果、Ｃ６−２に優れた活性が認められた。ＧＣ−ＭＳの開裂パターンによる同定を行なったところ、βカジネンが主体で他はフェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノールであった。
【００１５】
・ 実施例２比較例１
実施例１で得られたβカジネン、フェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノール各化合物単独の抗真菌活性を各化合物の標品を用いて測定した。
【表４】
上表の如くフェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノール及びβカジネン各化合物は単独では強い抗真菌活性を示さなかった。しかしβカジネンと各種フェノール化合物が共存すれば抗真菌活性は著しく改善されることが判明した。
【産業上の利用可能性】
【００１６】
本発明は植物の抽出物を利用した新たな水虫治療予防物質を開発するものであり、産業廃棄物であるヒノキ木酢液を有効に活用出来、水虫など治療予防の抗真菌性組成物及びその製造方法を工業的優位に提供することである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
βカジネンを含むフェノール化合物との混合物からなる抗真菌性組成物。
【請求項２】
フェノール化合物がフェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノールの１種類以上を含有することを特徴とする請求項１記載の抗真菌性組成物。
【請求項３】
ヒノキ木酢液をエーテル抽出し、更に分画して得られたフェノール成分をカラムクロマトグラフィーにより分画することを特徴とするβカジネンを含むフェノール化合物の混合物の製造方法。
【請求項１】
βカジネンを含むフェノール化合物との混合物からなる抗真菌性組成物。
【請求項２】
フェノール化合物がフェノール、Ｏ−クレゾール、Ｏ−エチルフェノール及び２−メトキシ−４−メチルフェノールの１種類以上を含有することを特徴とする請求項１記載の抗真菌性組成物。
【請求項３】
ヒノキ木酢液をエーテル抽出し、更に分画して得られたフェノール成分をカラムクロマトグラフィーにより分画することを特徴とするβカジネンを含むフェノール化合物の混合物の製造方法。
【公開番号】特開２００９−９１２７２（Ｐ２００９−９１２７２Ａ）
【公開日】平成２１年４月３０日（２００９．４．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２６１５０６（Ｐ２００７−２６１５０６）
【出願日】平成１９年１０月５日（２００７．１０．５）
【出願人】（５９１２１０９０９）協同組合ラテスト (6)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年４月３０日（２００９．４．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１０月５日（２００７．１０．５）
【出願人】（５９１２１０９０９）協同組合ラテスト (6)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]