抗ＭＲＳＡ化合物
【課題】ＭＲＳＡに対して優れた抗菌活性を有する新規化合物の提供。
【解決手段】ヒマワリなどの半身萎ちょう病の病原菌である土壌伝染性糸状菌に属するバーティシリウムダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の培養液から分離精製にて取得することができる、下記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）。
【解決手段】ヒマワリなどの半身萎ちょう病の病原菌である土壌伝染性糸状菌に属するバーティシリウムダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の培養液から分離精製にて取得することができる、下記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＭＲＳＡに対して有効な新規化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペニシリン系抗生物質に属するメチシリンに対する薬剤耐性を獲得した黄色ブドウ球菌であるＭＲＳＡ（Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ａｕｒｅｕｓ：メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）の出現は、臨床の現場に多くの問題を引き起こし、国内外を問わずその対策に苦慮していることは周知の通りである。そのため、ＭＲＳＡへの感染の予防方法や治療方法に関する種々の研究開発が精力的に行われている。その１つにＭＲＳＡに対して抗菌活性を有する化合物の探索が挙げられ、例えば特許文献１には、海洋細菌が産生するシクロプロジギオシンがＭＲＳＡに対する抗菌活性を有することが記載されている。しかしながら、ＭＲＳＡに対して優れた抗菌活性を有するとともに、毒性が低くて安全な化合物の探索は、今なお意義深い状況にある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平１０−１２０５６４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そこで本発明は、ＭＲＳＡに対して優れた抗菌活性を有するとともに、毒性が低くて安全な新規化合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記の点に鑑みて鋭意研究を重ねた結果、ヒマワリなどの半身萎ちょう病の病原菌として知られている土壌伝染性糸状菌に属するバーティシリウム ダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の培養液に、ＭＲＳＡに対して優れた抗菌活性を有するとともに、細胞毒性が低い化合物が含まれていることを知見した。
【０００６】
上記の知見に基づいてなされた本発明は、請求項１記載の通り、下記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）である。
【化１】
また、本発明は、請求項２記載の通り、バーティシリウム ダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の培養液から分離精製することによる上記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）の取得方法である。
また、本発明は、請求項３記載の通り、上記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）またはその薬学的に許容される塩を有効成分とする抗ＭＲＳＡ剤である。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、ＭＲＳＡに対して優れた抗菌活性を有するとともに、毒性が低くて安全な新規化合物を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明の化合物は、下記の一般式（１）で表される（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）。本発明の化合物において、Ｒのアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉｓｏ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基などの炭素数が１〜４の低級アルキル基が挙げられる。本発明の具体的な化合物としては、Ｒがメチル基である化合物（デオキシネオフサピロン）とＲが水素原子である化合物（７−デスメチルデオキシネオフサピロン）が挙げられる。
【化２】
【０００９】
本発明の化合物は、例えば、ヒマワリなどの半身萎ちょう病の病原菌として知られている土壌伝染性糸状菌に属するバーティシリウム ダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の培養液から分離精製することによって取得することができる。バーティシリウム ダーリエの培養は、糸状菌の一般的な培養方法に従って行えばよい。本発明の化合物の培養液からの分離精製は、一般的な微生物代謝産物の分離精製方法、例えば、アルコール（メタノールやエタノールなど）、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、アセトニトリルなどの有機溶媒や水を用いた抽出操作、イオン交換樹脂、非イオン性吸着樹脂、ゲルろ過クロマトグラフィー、活性炭やアルミナやシリカゲルなどの吸着剤によるクロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグラフィーを用いた分離操作の他、結晶化操作、減圧濃縮操作、凍結乾燥操作などの各種操作を単独または適宜組み合わせて行えばよい。なお、本発明の化合物は、有機合成化学的手法で合成されたものであってもよい。本発明の化合物には不斉炭素の存在に基づく全ての光学異性体が含まれる。
【００１０】
本発明の化合物やその薬学的に許容される塩は、例えば、その優れたＭＲＳＡに対する抗菌活性に基づいて抗ＭＲＳＡ剤の有効成分として用いることができる。この場合、本発明の化合物やその薬学的に許容される塩は、高度に精製された形態で製剤化されてもよいし、例えば、バーティシリウム ダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の培養液からの粗分離精製物の形態で製剤化されてもよい。製剤形態としては、例えば、液状剤、注射剤、錠剤、散剤などが挙げられる。製剤化の方法は特段限定されるものではなく、自体公知の方法で行うことができる。その投与量は、適用対象者の年齢や性別、症状の程度などに基づいて適宜設定すればよい。なお、本発明の化合物の薬学的に許容される塩としては、ナトリウム塩やカリウム塩などのアルカリ金属塩が挙げられる。
【実施例】
【００１１】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
【００１２】
実施例：
青森県（津軽地方）において半身萎ちょう病に感染したヒマワリから単離したバーティシリウム ダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の菌株を、ポテトスクロース培地（ポテト６８０ｇ、スクロース６８ｇ、３．４Ｌ：２００ｍＬ×１７）を用い、バッフルフラスコ内で温度２５℃にて２３日間振とう培養（１３０ｒｐｍ）した。各バッフルフラスコ内の培養液を２００ｍＬのメタノールで希釈した後、全てを合わせ、セライトパッドでろ過した後、得られた濾液を全量が約１Ｌになるまで３５℃にてロータリーエバポレーターを用いて濃縮した。得られた水性溶液をアンバーライトＸＡＤ−７（８００ｇ）にロードし、２０％メタノール／水と４０％メタノール／水を流して洗浄した後、６０％メタノール／水を流し、溶出した画分を集め、濃縮することで、３００ｍｇの固体を得た。次に、この固体を少量のメタノールに溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５０％メタノール／酢酸エチル）とＯＤＳ Ｓｅｐ−Ｐａｋ（１０ｇ、９０％メタノール／水）でさらに分画した後、ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ μ−ｂｏｎｄａｓｐｈｅｒｅ Ｃ１８、１５０×１９ｍｍ Ｉ．Ｄ．、０．１％のＴＦＡを含有する７０：３０のアセトニトリル：水、１０ｍＬ／分ｆｌｏｗ）で精製することにより、保持時間が２４分の物質１（１０．４ｍｇ）と保持時間が２０分の物質２（６．９ｍｇ）をそれぞれ無色の粘性オイル状物質として得た。
各種の機器分析の結果から、両者はいずれも４−ヒドロキシ−２−ピロン構造を有する新規化合物であり、物質１をデオキシネオフサピロン（ｄｅｏｘｙｎｅｏｆｕｓａｐｙｒｏｎｅ）、物質２を７−デスメチルデオキシネオフサピロン（７−ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｅｏｘｙｎｅｏｆｕｓａｐｙｒｏｎｅ）と命名した。両者のそれぞれの物性データを以下に示す。また、ＮＭＲスペクトルデータ（ｉｎ ＣＤ３ＯＤ）を表１に示す（炭素Ｎｏの帰属は下記の構造式を参照のこと）。
【００１３】
（物質１：デオキシネオフサピロン）
［α］Ｄ２５：−１６（ｃ０．２３，ＭｅＯＨ）、ＵＶ（８．４×１０−５ｍｏｌ／Ｌ ｉｎ ＭｅＯＨ）λｍａｘ：２０５（ε１７０００），２３７（ε１２０００），２８８（ε５０００）ｎｍ、ＩＲ（ｎｅａｔ）：３３７９，２９２４，１６７８，１３８５ｃｍ−１、ＥＳＩＭＳ（ｍ／ｚ＝５９１．３９２５）、Ｃ３４Ｈ５４Ｏ８
（物質２：７−デスメチルデオキシネオフサピロン）
［α］Ｄ２５：−２９（ｃ０．３８，ＭｅＯＨ）、ＵＶ（８．６×１０−５ｍｏｌ／Ｌ ｉｎ ＭｅＯＨ）λｍａｘ：２０５（ε１５０００），２３８（ε１６０００），２８８（ε５０００）ｎｍ、ＩＲ（ｎｅａｔ）：３３８２，２９２７，１６８２，１４３５ｃｍ−１、ＥＳＩＭＳ（ｍ／ｚ＝５７７．３７５０）、Ｃ３３Ｈ５２Ｏ８
【００１４】
【表１】
【００１５】
【化３】
【００１６】
デオキシネオフサピロンのＭＲＳＡに対する抗菌活性を、ＭＲＳＡ（国立大学法人弘前大学付属病院において分離同定された菌株）を混濁したトリプチックソイ寒天培地のスポットにデオキシネオフサピロンを含有する被検溶液１０μＬを添加することで評価したところ、デオキシネオフサピロンは１０μｇで鮮明な生育阻止円を形成した。また、デオキシネオフサピロンは１μｇ／ｍＬの濃度でＨｅＬａ細胞とＨｅｐＧ２細胞に対して細胞毒性を示さなかった。以上の結果から、デオキシネオフサピロンは毒性が低くて安全な抗ＭＲＳＡ剤の有効成分になりうることがわかった。また、７−デスメチルデオキシネオフサピロンも同様の性質を有していた（別途の実験による）。
【００１７】
製剤例（注射剤）：
デオキシネオフサピロン１００ｍｇを適量のエタノールに溶解し、注射用水で希釈して全量を１０ｍＬとした後、ろ過滅菌してから５ｍＬバイアルに分注することで、注射剤を製造した。
【産業上の利用可能性】
【００１８】
本発明は、ＭＲＳＡに対して優れた抗菌活性を有するとともに、毒性が低くて安全な新規化合物を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＭＲＳＡに対して有効な新規化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペニシリン系抗生物質に属するメチシリンに対する薬剤耐性を獲得した黄色ブドウ球菌であるＭＲＳＡ（Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ａｕｒｅｕｓ：メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）の出現は、臨床の現場に多くの問題を引き起こし、国内外を問わずその対策に苦慮していることは周知の通りである。そのため、ＭＲＳＡへの感染の予防方法や治療方法に関する種々の研究開発が精力的に行われている。その１つにＭＲＳＡに対して抗菌活性を有する化合物の探索が挙げられ、例えば特許文献１には、海洋細菌が産生するシクロプロジギオシンがＭＲＳＡに対する抗菌活性を有することが記載されている。しかしながら、ＭＲＳＡに対して優れた抗菌活性を有するとともに、毒性が低くて安全な化合物の探索は、今なお意義深い状況にある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平１０−１２０５６４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そこで本発明は、ＭＲＳＡに対して優れた抗菌活性を有するとともに、毒性が低くて安全な新規化合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記の点に鑑みて鋭意研究を重ねた結果、ヒマワリなどの半身萎ちょう病の病原菌として知られている土壌伝染性糸状菌に属するバーティシリウム ダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の培養液に、ＭＲＳＡに対して優れた抗菌活性を有するとともに、細胞毒性が低い化合物が含まれていることを知見した。
【０００６】
上記の知見に基づいてなされた本発明は、請求項１記載の通り、下記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）である。
【化１】
また、本発明は、請求項２記載の通り、バーティシリウム ダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の培養液から分離精製することによる上記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）の取得方法である。
また、本発明は、請求項３記載の通り、上記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）またはその薬学的に許容される塩を有効成分とする抗ＭＲＳＡ剤である。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、ＭＲＳＡに対して優れた抗菌活性を有するとともに、毒性が低くて安全な新規化合物を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明の化合物は、下記の一般式（１）で表される（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）。本発明の化合物において、Ｒのアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉｓｏ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基などの炭素数が１〜４の低級アルキル基が挙げられる。本発明の具体的な化合物としては、Ｒがメチル基である化合物（デオキシネオフサピロン）とＲが水素原子である化合物（７−デスメチルデオキシネオフサピロン）が挙げられる。
【化２】
【０００９】
本発明の化合物は、例えば、ヒマワリなどの半身萎ちょう病の病原菌として知られている土壌伝染性糸状菌に属するバーティシリウム ダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の培養液から分離精製することによって取得することができる。バーティシリウム ダーリエの培養は、糸状菌の一般的な培養方法に従って行えばよい。本発明の化合物の培養液からの分離精製は、一般的な微生物代謝産物の分離精製方法、例えば、アルコール（メタノールやエタノールなど）、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、アセトニトリルなどの有機溶媒や水を用いた抽出操作、イオン交換樹脂、非イオン性吸着樹脂、ゲルろ過クロマトグラフィー、活性炭やアルミナやシリカゲルなどの吸着剤によるクロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグラフィーを用いた分離操作の他、結晶化操作、減圧濃縮操作、凍結乾燥操作などの各種操作を単独または適宜組み合わせて行えばよい。なお、本発明の化合物は、有機合成化学的手法で合成されたものであってもよい。本発明の化合物には不斉炭素の存在に基づく全ての光学異性体が含まれる。
【００１０】
本発明の化合物やその薬学的に許容される塩は、例えば、その優れたＭＲＳＡに対する抗菌活性に基づいて抗ＭＲＳＡ剤の有効成分として用いることができる。この場合、本発明の化合物やその薬学的に許容される塩は、高度に精製された形態で製剤化されてもよいし、例えば、バーティシリウム ダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の培養液からの粗分離精製物の形態で製剤化されてもよい。製剤形態としては、例えば、液状剤、注射剤、錠剤、散剤などが挙げられる。製剤化の方法は特段限定されるものではなく、自体公知の方法で行うことができる。その投与量は、適用対象者の年齢や性別、症状の程度などに基づいて適宜設定すればよい。なお、本発明の化合物の薬学的に許容される塩としては、ナトリウム塩やカリウム塩などのアルカリ金属塩が挙げられる。
【実施例】
【００１１】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
【００１２】
実施例：
青森県（津軽地方）において半身萎ちょう病に感染したヒマワリから単離したバーティシリウム ダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の菌株を、ポテトスクロース培地（ポテト６８０ｇ、スクロース６８ｇ、３．４Ｌ：２００ｍＬ×１７）を用い、バッフルフラスコ内で温度２５℃にて２３日間振とう培養（１３０ｒｐｍ）した。各バッフルフラスコ内の培養液を２００ｍＬのメタノールで希釈した後、全てを合わせ、セライトパッドでろ過した後、得られた濾液を全量が約１Ｌになるまで３５℃にてロータリーエバポレーターを用いて濃縮した。得られた水性溶液をアンバーライトＸＡＤ−７（８００ｇ）にロードし、２０％メタノール／水と４０％メタノール／水を流して洗浄した後、６０％メタノール／水を流し、溶出した画分を集め、濃縮することで、３００ｍｇの固体を得た。次に、この固体を少量のメタノールに溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５０％メタノール／酢酸エチル）とＯＤＳ Ｓｅｐ−Ｐａｋ（１０ｇ、９０％メタノール／水）でさらに分画した後、ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ μ−ｂｏｎｄａｓｐｈｅｒｅ Ｃ１８、１５０×１９ｍｍ Ｉ．Ｄ．、０．１％のＴＦＡを含有する７０：３０のアセトニトリル：水、１０ｍＬ／分ｆｌｏｗ）で精製することにより、保持時間が２４分の物質１（１０．４ｍｇ）と保持時間が２０分の物質２（６．９ｍｇ）をそれぞれ無色の粘性オイル状物質として得た。
各種の機器分析の結果から、両者はいずれも４−ヒドロキシ−２−ピロン構造を有する新規化合物であり、物質１をデオキシネオフサピロン（ｄｅｏｘｙｎｅｏｆｕｓａｐｙｒｏｎｅ）、物質２を７−デスメチルデオキシネオフサピロン（７−ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｅｏｘｙｎｅｏｆｕｓａｐｙｒｏｎｅ）と命名した。両者のそれぞれの物性データを以下に示す。また、ＮＭＲスペクトルデータ（ｉｎ ＣＤ３ＯＤ）を表１に示す（炭素Ｎｏの帰属は下記の構造式を参照のこと）。
【００１３】
（物質１：デオキシネオフサピロン）
［α］Ｄ２５：−１６（ｃ０．２３，ＭｅＯＨ）、ＵＶ（８．４×１０−５ｍｏｌ／Ｌ ｉｎ ＭｅＯＨ）λｍａｘ：２０５（ε１７０００），２３７（ε１２０００），２８８（ε５０００）ｎｍ、ＩＲ（ｎｅａｔ）：３３７９，２９２４，１６７８，１３８５ｃｍ−１、ＥＳＩＭＳ（ｍ／ｚ＝５９１．３９２５）、Ｃ３４Ｈ５４Ｏ８
（物質２：７−デスメチルデオキシネオフサピロン）
［α］Ｄ２５：−２９（ｃ０．３８，ＭｅＯＨ）、ＵＶ（８．６×１０−５ｍｏｌ／Ｌ ｉｎ ＭｅＯＨ）λｍａｘ：２０５（ε１５０００），２３８（ε１６０００），２８８（ε５０００）ｎｍ、ＩＲ（ｎｅａｔ）：３３８２，２９２７，１６８２，１４３５ｃｍ−１、ＥＳＩＭＳ（ｍ／ｚ＝５７７．３７５０）、Ｃ３３Ｈ５２Ｏ８
【００１４】
【表１】
【００１５】
【化３】
【００１６】
デオキシネオフサピロンのＭＲＳＡに対する抗菌活性を、ＭＲＳＡ（国立大学法人弘前大学付属病院において分離同定された菌株）を混濁したトリプチックソイ寒天培地のスポットにデオキシネオフサピロンを含有する被検溶液１０μＬを添加することで評価したところ、デオキシネオフサピロンは１０μｇで鮮明な生育阻止円を形成した。また、デオキシネオフサピロンは１μｇ／ｍＬの濃度でＨｅＬａ細胞とＨｅｐＧ２細胞に対して細胞毒性を示さなかった。以上の結果から、デオキシネオフサピロンは毒性が低くて安全な抗ＭＲＳＡ剤の有効成分になりうることがわかった。また、７−デスメチルデオキシネオフサピロンも同様の性質を有していた（別途の実験による）。
【００１７】
製剤例（注射剤）：
デオキシネオフサピロン１００ｍｇを適量のエタノールに溶解し、注射用水で希釈して全量を１０ｍＬとした後、ろ過滅菌してから５ｍＬバイアルに分注することで、注射剤を製造した。
【産業上の利用可能性】
【００１８】
本発明は、ＭＲＳＡに対して優れた抗菌活性を有するとともに、毒性が低くて安全な新規化合物を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）。
【化１】
【請求項２】
バーティシリウム ダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の培養液から分離精製することによる下記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）の取得方法。
【化２】
【請求項３】
下記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）またはその薬学的に許容される塩を有効成分とする抗ＭＲＳＡ剤。
【化３】
【請求項１】
下記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）。
【化１】
【請求項２】
バーティシリウム ダーリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）の培養液から分離精製することによる下記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）の取得方法。
【化２】
【請求項３】
下記の一般式（１）で表される化合物（式中、Ｒはアルキル基または水素原子を示す）またはその薬学的に許容される塩を有効成分とする抗ＭＲＳＡ剤。
【化３】
【公開番号】特開２０１１−９３８５９（Ｐ２０１１−９３８５９Ａ）
【公開日】平成２３年５月１２日（２０１１．５．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２５１０１０（Ｐ２００９−２５１０１０）
【出願日】平成２１年１０月３０日（２００９．１０．３０）
【出願人】（５０４２２９２８４）国立大学法人弘前大学 (162)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年５月１２日（２０１１．５．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１０月３０日（２００９．１０．３０）
【出願人】（５０４２２９２８４）国立大学法人弘前大学 (162)
【Ｆターム（参考）】
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