抗ＭＲＳＡ組成物
【課題】 従来の化学的な抗菌活性剤に代えて、天然由来の抗菌活性剤であって、且つＭＲＳＡに対する抗菌活性を有している抗ＭＲＳＡの物質を得ること。
【解決手段】 本発明に係る抗ＭＲＳＡ組成物は、ハプト藻類イソクリシス目のプリュウロクリシス属に属する微細藻の抽出物を有効成分として含有していることを特徴とするものであって、抗ＭＲＳＡ組成物は、天然物由来の微細藻から抽出された抗菌活性剤であるため、人体に対する安全性が高く、この抗ＭＲＳＡ組成物をＭＲＳＡの侵入経路である喉等の粘膜や手指に直接噴霧してＭＲＳＡの体内への侵入を防ぐことができる。
【解決手段】 本発明に係る抗ＭＲＳＡ組成物は、ハプト藻類イソクリシス目のプリュウロクリシス属に属する微細藻の抽出物を有効成分として含有していることを特徴とするものであって、抗ＭＲＳＡ組成物は、天然物由来の微細藻から抽出された抗菌活性剤であるため、人体に対する安全性が高く、この抗ＭＲＳＡ組成物をＭＲＳＡの侵入経路である喉等の粘膜や手指に直接噴霧してＭＲＳＡの体内への侵入を防ぐことができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微細藻から抽出された抽出物を有効成分として含有する抗ＭＲＳＡ組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
メチシリン耐性黄色ぶどう球菌（以下、ＭＲＳＡという）は、新たな抗生物質を開発しても、必ずその耐性菌が誕生し、更に悪い状況を作り出すことから、抗生物質が効かなくなったＭＲＳＡは、院内感染の原因細菌として、社会的な問題になっている。
【０００３】
しかし、天然由来の抗菌活性剤を用いた場合には、これまで耐性菌が作り出されたという報告は殆どなく、また、天然物由来であるため、天然由来の抗菌活性剤を用いたことによって生じる副作用が少ないという特徴がある。
【０００４】
そこで、天然由来の抗菌活性剤としては、例えば、ハプト藻綱（Haptophyceae）のイソクリシス目（Isochrysidales）に属するゲフィロカプサ属（Gephyrocapsa）又は、プレウロクリシス属（Pleurochrysis） の藻体から分離される多糖、またはこれを含有した抗菌・抗癌剤がある（特許文献１参照）。
【０００５】
この特許文献１の公知技術においては、ハプト藻綱のイソクリシス目に属するゲフィロカプサ属又は、プレウロクリシス（プリュウロクリシス）属の藻体から分離された多糖類が抗菌活性を有しているというものである。
【０００６】
【特許文献１】特開平７−２５７８０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、前記特許文献１の公知技術においては、ハプト藻綱のイソクリシス目に属するゲフィロカプサ属又は、プレウロクリシス（プリュウロクリシス）属の藻体から分離された多糖類が抗菌活性を有しているというだけであり、ＭＲＳＡに対する抗菌活性については、未だ報告されていない。
【０００８】
従って、従来の抗菌活性剤においては、天然由来の抗菌活性剤であって、且つＭＲＳＡに対する抗菌活性を有している抗ＭＲＳＡの物質を得るということに解決しなければならない課題を有している。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記した従来例の課題を解決するために、本発明者等は種々の微細藻について研究し実験した結果、ハプト藻綱（Haptopheceae）イソクリシス目（Isochrysisdales）のプリュウロクリシス属（Pleurochrysis）の微細藻の抽出物が抗ＭＲＳＡ活性を有していることを見出したのであり、そのプリュウロクリシス属（Pleurochrysis）の微細藻として、その代表的なものとしてP.carteraeまたはP.haptonemafera等を挙げることができる。
【００１０】
そして、課題を解決する具体的手段として本発明に係る抗ＭＲＳＡ組成物は、ハプト藻類イソクリシス目のプリュウロクリシス属に属する微細藻の抽出物を有効成分として含有していることを最も主要な特徴とする。
【００１１】
この発明において、前記抽出物は、水もしくは熱水またはアルコールにより抽出されること；前記抽出物は、分子量が略１００００以下の水溶性物質であること；を付加的な要件として含むものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係る抗ＭＲＳＡ組成物は、ハプト藻類イソクリシス目のプリュウロクリシス属に属する微細藻の抽出物を有効成分として含有していることにより、天然物由来の微細藻から抽出された抗菌活性剤であるため、人体に対する安全性が高く、且つＭＲＳＡに対する抗菌活性を有している抗ＭＲＳＡの物質であるため、抗ＭＲＳＡ組成物をＭＲＳＡの侵入経路である喉等の粘膜や手指に直接噴霧してＭＲＳＡの体内への侵入を防ぐことができるという優れた効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
次に、本発明を具体的な実施の形態に基づいて詳しく説明する。
本発明の実施の形態に係る抗ＭＲＳＡ組成物を得る上で、まず、該抗ＭＲＳＡ組成物を得るために用いるハプト藻綱（Haptopheceae）イソクリシス目（Isochrysisdales）のプリュウロクリシス属（Pleurochrysis）の微細藻を生産または培養する方法について説明する。
【００１４】
ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻を得る方法としては、例えば、天然に生育している微細藻を収穫して使用すること等ができるが、微細藻の安定した供給と品質保持との理由から、培養により増殖させた微細藻を使用することが好ましい。微細藻は、光合成を行って自らのエネルギーとしているため、培養は光照射下に藻類培養用の培地を用い、通常の培養方法により培養することができる。なお、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻としては、代表的に、P.carteraeまたはP.haptonemafera等の微細藻を培養して用いることにした。
【００１５】
（培養例１）
この培養例１においては、例えば、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻としてP.carteraeを用いて該微細藻を培養する具体的な方法の一例について説明する。
【００１６】
培地としては、一般的に用いられている海産性ハプト藻綱を培養する際に用いられるものであれば格別な制限はなく、この培養例１においては、Eppley's mediumを用いて培養を行った。
【００１７】
この培地においては、新鮮な濾過海水１０００ｍｌに対してＫＮＯ３ ５０．５ｍｇ及びＫ２ＨＰＯ４ ８．７ｍを添加した溶液に、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ １９．６ｍｇ／ｌ、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ４４ｍｇ／ｌ、ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ２０ｍｇ／ｌ、ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ ３６０ｍｇ／ｌ、Ｎａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ １２．６ｍｇ／ｌ及びＦｅ−ＥＤＴＡ １０ｇ／ｌからなる微量元素混合溶液１ｍｌを添加し、次いでチアミン塩酸塩２００ｍｇ／ｌ、ビオチン１ｍｇ／ｌ、シアノコバラミン０．２ｍｇ／ｌを含有するビタミン混合溶液１ｍｌを添加することにより培地を調整した。
【００１８】
培養は、P.carteraeの細胞数が１０−２０×１０５ cells／ｍｌになるように培地に接種し、２リットル容量のガラス扁平フラスコを用いて行った。培養期間は、５−７日間程度が適当であり、培養は適当な通気手段により空気が導入する好気的条件下で、且つ蛍光灯を光源として照度を４０μEinsteins／ｍ２／secに設定し、連続光照射下において行うのが好ましい。このときの培養温度は、２０−２５℃程度であり、２３℃程度の温度が好ましい。このような条件にして、前記P.carteraeに限らず、P.haptonemafera等のハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻を培養することができる。
【００１９】
（抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法１）
次に、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻から抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法について説明する。この抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法１においては、前記微細藻の藻体濃度が１−７０％程度になるように水を添加し、室温−９５℃程度の温度下で略１−２４時間程度抽出処理して抽出液を得る。次いで、その抽出液を濾過してその濾液を凍結乾燥させることにより抗ＭＲＳＡ組成物を得ることができる。なお、室温で抽出処理することは可能であるが、処理時間が長くなって工業生産的には適さないので、好ましくは８０℃以上の熱湯で抽出処理した方が処理時間が短くて済み工業的に適する。
【００２０】
（抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法２）
この抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法２においては、前記微細藻の藻体濃度が１−７０％程度になるように略１０−９０％の濃度のエタノールまたはメタノール溶液を添加し、室温−７０℃程度の温度下で略１−２４時間程度抽出処理して抽出液を得る。次いで、その抽出液を濾過してその濾液を得た後、該濾液からエタノールまたはメタノールを除去してから凍結乾燥させることにより抗ＭＲＳＡ組成物を得ることができる。なお、エタノールまたはメタノールのアルコール濃度が低いと抽出処理時間が長くなるので、好ましくは３０−６０％の濃度で抽出処理した方が処理時間が短くて済み工業的に適する。
【００２１】
（抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法３）
この抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法３においては、前記抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法１で得られた抗ＭＲＳＡ組成物に水を加え、さらに最終濃度が略８０％になるようにエタノールを添加し、得られた上清画分のエタノールを除去してから凍結乾燥させることにより抗ＭＲＳＡ組成物を得ることができる。
【００２２】
（抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法４）
この抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法４においては、前記抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法２または抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法３で得られた抗ＭＲＳＡ組成物を分子量１００００で限外濾過し、その濾液を凍結乾燥させることにより抗ＭＲＳＡ組成物を得ることができる。
【００２３】
（抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法５）
この抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法５においては、前記抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法４で得られた抗ＭＲＳＡ組成物を水に溶解させ、等量ヘキサンを加えて分画し、得られた水溶性画分に等量クロロホルムを加えて分画し、得られた水溶性画分に等量の酢酸エチルを加え、得られた水溶性画分を凍結乾燥させることにより抗ＭＲＳＡ組成物を得ることができる。
【００２４】
このようにして抗ＭＲＳＡ組成物を得ることができるが、これら得られた抗ＭＲＳＡ組成物においては、抗ＭＲＳＡ活性が認められたが、濾過後の残渣や濾液分配後の有機層には抗ＭＲＳＡ活性が認められなかった。このことは、抗ＭＲＳＡ活性物質の分子量が小さく（低分子物質）、水に溶解しやすい（水溶性物質）物質であるものと推察される。
【００２５】
そして、前記得られた抗ＭＲＳＡ組成物は、天然物由来の微細藻から抽出されたものであるから、人体に対する安全性が高く、また、ＭＲＳＡが薬剤耐性を持ち難い極めて有効な抗ＭＲＳＡ剤となることが期待できる。そのため、抗ＭＲＳＡ組成物をＭＲＳＡの侵入経路である喉等の粘膜や手指に直接噴霧することにより、ＭＲＳＡの脅威から開放され、更に、他人が触れる可能性のあるものに対しても、抗ＭＲＳＡ組成物を噴霧または塗布する等により、広範囲に利用することが可能である。
【実施例１】
【００２６】
次に、本発明の実施の形態に係る抗ＭＲＳＡ組成物をより具体的な実施例を挙げて説明する。この実施例１においては、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻としてP.carteraeを用い、該微細藻の乾燥藻体略５ｇに略９０℃の熱水５００ｍｌを加え、室温にて１時間撹拌抽出した。その抽出液をガラス繊維ろ紙にて濾過後、その濾液を凍結乾燥させることにより実施例１の抗ＭＲＳＡ組成物を得た。
【実施例２】
【００２７】
この実施例２においては、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻としてP.carteraeを用い、該微細藻の乾燥藻体略５ｇに略５０％のエタノール溶液５００ｍｌを加え、室温にて１時間撹拌抽出した。その抽出液をガラス繊維ろ紙にて濾過後、その濾液を減圧濃縮によってエタノールを除去してから凍結乾燥させることにより実施例２の抗ＭＲＳＡ組成物を得た。
【実施例３】
【００２８】
実施例３においては、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻としてP.carteraeを用い、該微細藻の乾燥藻体略５ｇに略９０℃の熱水５００ｍｌを加え、室温にて１時間撹拌抽出した。このように熱水により抽出して得た抽出液に、最終濃度が略８０％になるようにエタノールを添加して、室温にて一晩（２４時間）放置後、エタノール可溶画分を分画して凍結乾燥させることにより実施例３の抗ＭＲＳＡ組成物を得た。なお、上記各実施例においては、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻の代表としてP.carteraeを用いたが、他の同じプリュウロクリシスに属し同じ性質を有する例えば、P.haptonemafera等を用いることができることは当然のことである。
【００２９】
（比較例１）
この比較例１においては、前記実施例１のエタノール不溶画分を分画して凍結乾燥させることにより比較例１の組成物を得た。
【００３０】
（試験例１）
この試験例１においては、前記実施例１、２、３により得られた抗ＭＲＳＡ組成物と、比較例１により得られた組成物とを用いると共に、従来から知られているペニシリンとを用い、これらにおける抗ＭＲＳＡ活性をペーパーディスク法にて試験した。
【００３１】
まず、酵母抽出物を０．５％程度含むTryptic Soy寒天平板を予め作製しておき、前培養したＭＲＳＡ菌液を略１０６個／ｍｌになるように酵母抽出物を０．５％程度含むTryptic Soy液体培地で希釈し、これに軟寒天を加え、前記０．５％程度含むTryptic Soy寒天平板に撒いた。
【００３２】
滅菌した直径１０ｍｍのペーパーディスクに前記実施例１、２、３により得られた抗ＭＲＳＡ組成物と、比較例１により得られた組成物とからなるそれぞれの試料溶液５０ｍｇ／ｍｌを７０μｌアプライし、同様にペニシリン１ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．２５ｍｇ／ｍｌをそれぞれアプライし、乾燥後に前記０．５％程度含むTryptic Soy寒天平板上にのせ、３７℃の条件下で２４時間倒置培養した。そして、ペーパーディスクの周囲に生じた阻止円により、抗ＭＲＳＡ活性を評価した。
【００３３】
表１に、この試験例１について、ペーパーディスクの周囲に生じた阻止円による抗ＭＲＳＡ活性の評価を示す。この表１においては、阻止円が大きいほど抗ＭＲＳＡ活性が高いことを示している。
【００３４】
【表１】
【００３５】
この表１から明らかなように、比較例１により得られた組成物には抗ＭＲＳＡ活性が認められなかったが、前記実施例１、２、３により得られた抗ＭＲＳＡ組成物には高い抗ＭＲＳＡ活性が認められ、特に、ペニシリンと同等以上の抗ＭＲＳＡ活性が認められたことから、該実施例１、２、３により得られた抗ＭＲＳＡ組成物は、天然由来の抗菌活性剤であり、且つＭＲＳＡに対する抗菌活性を有している抗ＭＲＳＡの物質であることが理解できる。また、時間を要するがハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻を室温（２５℃）で抽出処理した抽出物であっても、上記実施例１と略同等の抗菌活性を有していることが確認された。
【実施例４】
【００３６】
この実施例４においては、前記実施例２の熱水抽出物エタノール可溶画分について、限外濾過を行い、分子量１００００以下の画分を分画して凍結乾燥させることにより実施例３の抗ＭＲＳＡ組成物を得た。
【００３７】
（比較例２）
この比較例２においては、前記実施例４における分子量１００００以上の画分を分画して凍結乾燥させることにより比較例２の組成物を得た。
【００３８】
（試験例２）
この試験例２においては、これら実施例４により得られた抗ＭＲＳＡ組成物と、比較例２により得られた組成物とを用い、これらにおける抗ＭＲＳＡ活性を前記試験例１と同様にしてペーパーディスク法にて試験した。
【００３９】
表２に、この試験例２について、ペーパーディスクの周囲に生じた阻止円による抗ＭＲＳＡ活性の評価を示す。この表２においては、阻止円が大きいほど抗ＭＲＳＡ活性が高いことを示している。
【００４０】
【表２】
【００４１】
この表２から明らかなように、比較例２により得られた組成物には抗ＭＲＳＡ活性が認められなかったが、前記実施例４により得られた抗ＭＲＳＡ組成物には高い抗ＭＲＳＡ活性が認められた。
【実施例５】
【００４２】
この実施例５においては、前記実施例４の抗ＭＲＳＡ組成物を水で溶解し、等量のヘキサンを加えて分画し、得られた水溶性画分に等量クロロホルムを加えて分画し、得られた水溶性画分に等量の酢酸エチルを加え、得られた水溶性画分を凍結乾燥させることにより実施例５の抗ＭＲＳＡ組成物を得た。
【００４３】
（比較例３）
この比較例３においては、前記実施例４の抗ＭＲＳＡ組成物を水で溶解し、等量のヘキサンを加えて凍結乾燥させることにより比較例３の組成物を得た。
【００４４】
（比較例４）
この比較例４においては、前記実施例４の抗ＭＲＳＡ組成物を水で溶解し、等量のクロロホルムを加えて凍結乾燥させることにより比較例４の組成物を得た。
【００４５】
（比較例５）
この比較例５においては、前記実施例３の抗ＭＲＳＡ組成物を水で溶解し、等量の酢酸エチルを加えて凍結乾燥させることにより比較例５の組成物を得た。
【００４６】
（試験例３）
この試験例３においては、これら実施例５により得られた抗ＭＲＳＡ組成物と、比較例３、４、５により得られた組成物とを用い、これらにおける抗ＭＲＳＡ活性を前記試験例１と同様にしてペーパーディスク法にて試験した。
【００４７】
表３に、この試験例３について、ペーパーディスクの周囲に生じた阻止円による抗ＭＲＳＡ活性の評価を示す。この表３においては、阻止円が大きいほど抗ＭＲＳＡ活性が高いことを示している。
【００４８】
【表３】
【００４９】
この表３から明らかなように、比較例３、４、５により得られた組成物には抗ＭＲＳＡ活性が認められなかったが、前記実施例５により得られた抗ＭＲＳＡ組成物には抗ＭＲＳＡ活性が認められた。
【００５０】
いずれにしても、本発明においては、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻からの抽出物が抗ＭＲＳＡ活性を有することを発見し、その抽出物を抗ＭＲＳＡ組成物として有効に広く利用できるようにしたものである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微細藻から抽出された抽出物を有効成分として含有する抗ＭＲＳＡ組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
メチシリン耐性黄色ぶどう球菌（以下、ＭＲＳＡという）は、新たな抗生物質を開発しても、必ずその耐性菌が誕生し、更に悪い状況を作り出すことから、抗生物質が効かなくなったＭＲＳＡは、院内感染の原因細菌として、社会的な問題になっている。
【０００３】
しかし、天然由来の抗菌活性剤を用いた場合には、これまで耐性菌が作り出されたという報告は殆どなく、また、天然物由来であるため、天然由来の抗菌活性剤を用いたことによって生じる副作用が少ないという特徴がある。
【０００４】
そこで、天然由来の抗菌活性剤としては、例えば、ハプト藻綱（Haptophyceae）のイソクリシス目（Isochrysidales）に属するゲフィロカプサ属（Gephyrocapsa）又は、プレウロクリシス属（Pleurochrysis） の藻体から分離される多糖、またはこれを含有した抗菌・抗癌剤がある（特許文献１参照）。
【０００５】
この特許文献１の公知技術においては、ハプト藻綱のイソクリシス目に属するゲフィロカプサ属又は、プレウロクリシス（プリュウロクリシス）属の藻体から分離された多糖類が抗菌活性を有しているというものである。
【０００６】
【特許文献１】特開平７−２５７８０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、前記特許文献１の公知技術においては、ハプト藻綱のイソクリシス目に属するゲフィロカプサ属又は、プレウロクリシス（プリュウロクリシス）属の藻体から分離された多糖類が抗菌活性を有しているというだけであり、ＭＲＳＡに対する抗菌活性については、未だ報告されていない。
【０００８】
従って、従来の抗菌活性剤においては、天然由来の抗菌活性剤であって、且つＭＲＳＡに対する抗菌活性を有している抗ＭＲＳＡの物質を得るということに解決しなければならない課題を有している。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記した従来例の課題を解決するために、本発明者等は種々の微細藻について研究し実験した結果、ハプト藻綱（Haptopheceae）イソクリシス目（Isochrysisdales）のプリュウロクリシス属（Pleurochrysis）の微細藻の抽出物が抗ＭＲＳＡ活性を有していることを見出したのであり、そのプリュウロクリシス属（Pleurochrysis）の微細藻として、その代表的なものとしてP.carteraeまたはP.haptonemafera等を挙げることができる。
【００１０】
そして、課題を解決する具体的手段として本発明に係る抗ＭＲＳＡ組成物は、ハプト藻類イソクリシス目のプリュウロクリシス属に属する微細藻の抽出物を有効成分として含有していることを最も主要な特徴とする。
【００１１】
この発明において、前記抽出物は、水もしくは熱水またはアルコールにより抽出されること；前記抽出物は、分子量が略１００００以下の水溶性物質であること；を付加的な要件として含むものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係る抗ＭＲＳＡ組成物は、ハプト藻類イソクリシス目のプリュウロクリシス属に属する微細藻の抽出物を有効成分として含有していることにより、天然物由来の微細藻から抽出された抗菌活性剤であるため、人体に対する安全性が高く、且つＭＲＳＡに対する抗菌活性を有している抗ＭＲＳＡの物質であるため、抗ＭＲＳＡ組成物をＭＲＳＡの侵入経路である喉等の粘膜や手指に直接噴霧してＭＲＳＡの体内への侵入を防ぐことができるという優れた効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
次に、本発明を具体的な実施の形態に基づいて詳しく説明する。
本発明の実施の形態に係る抗ＭＲＳＡ組成物を得る上で、まず、該抗ＭＲＳＡ組成物を得るために用いるハプト藻綱（Haptopheceae）イソクリシス目（Isochrysisdales）のプリュウロクリシス属（Pleurochrysis）の微細藻を生産または培養する方法について説明する。
【００１４】
ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻を得る方法としては、例えば、天然に生育している微細藻を収穫して使用すること等ができるが、微細藻の安定した供給と品質保持との理由から、培養により増殖させた微細藻を使用することが好ましい。微細藻は、光合成を行って自らのエネルギーとしているため、培養は光照射下に藻類培養用の培地を用い、通常の培養方法により培養することができる。なお、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻としては、代表的に、P.carteraeまたはP.haptonemafera等の微細藻を培養して用いることにした。
【００１５】
（培養例１）
この培養例１においては、例えば、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻としてP.carteraeを用いて該微細藻を培養する具体的な方法の一例について説明する。
【００１６】
培地としては、一般的に用いられている海産性ハプト藻綱を培養する際に用いられるものであれば格別な制限はなく、この培養例１においては、Eppley's mediumを用いて培養を行った。
【００１７】
この培地においては、新鮮な濾過海水１０００ｍｌに対してＫＮＯ３ ５０．５ｍｇ及びＫ２ＨＰＯ４ ８．７ｍを添加した溶液に、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ １９．６ｍｇ／ｌ、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ４４ｍｇ／ｌ、ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ２０ｍｇ／ｌ、ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ ３６０ｍｇ／ｌ、Ｎａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ １２．６ｍｇ／ｌ及びＦｅ−ＥＤＴＡ １０ｇ／ｌからなる微量元素混合溶液１ｍｌを添加し、次いでチアミン塩酸塩２００ｍｇ／ｌ、ビオチン１ｍｇ／ｌ、シアノコバラミン０．２ｍｇ／ｌを含有するビタミン混合溶液１ｍｌを添加することにより培地を調整した。
【００１８】
培養は、P.carteraeの細胞数が１０−２０×１０５ cells／ｍｌになるように培地に接種し、２リットル容量のガラス扁平フラスコを用いて行った。培養期間は、５−７日間程度が適当であり、培養は適当な通気手段により空気が導入する好気的条件下で、且つ蛍光灯を光源として照度を４０μEinsteins／ｍ２／secに設定し、連続光照射下において行うのが好ましい。このときの培養温度は、２０−２５℃程度であり、２３℃程度の温度が好ましい。このような条件にして、前記P.carteraeに限らず、P.haptonemafera等のハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻を培養することができる。
【００１９】
（抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法１）
次に、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻から抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法について説明する。この抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法１においては、前記微細藻の藻体濃度が１−７０％程度になるように水を添加し、室温−９５℃程度の温度下で略１−２４時間程度抽出処理して抽出液を得る。次いで、その抽出液を濾過してその濾液を凍結乾燥させることにより抗ＭＲＳＡ組成物を得ることができる。なお、室温で抽出処理することは可能であるが、処理時間が長くなって工業生産的には適さないので、好ましくは８０℃以上の熱湯で抽出処理した方が処理時間が短くて済み工業的に適する。
【００２０】
（抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法２）
この抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法２においては、前記微細藻の藻体濃度が１−７０％程度になるように略１０−９０％の濃度のエタノールまたはメタノール溶液を添加し、室温−７０℃程度の温度下で略１−２４時間程度抽出処理して抽出液を得る。次いで、その抽出液を濾過してその濾液を得た後、該濾液からエタノールまたはメタノールを除去してから凍結乾燥させることにより抗ＭＲＳＡ組成物を得ることができる。なお、エタノールまたはメタノールのアルコール濃度が低いと抽出処理時間が長くなるので、好ましくは３０−６０％の濃度で抽出処理した方が処理時間が短くて済み工業的に適する。
【００２１】
（抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法３）
この抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法３においては、前記抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法１で得られた抗ＭＲＳＡ組成物に水を加え、さらに最終濃度が略８０％になるようにエタノールを添加し、得られた上清画分のエタノールを除去してから凍結乾燥させることにより抗ＭＲＳＡ組成物を得ることができる。
【００２２】
（抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法４）
この抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法４においては、前記抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法２または抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法３で得られた抗ＭＲＳＡ組成物を分子量１００００で限外濾過し、その濾液を凍結乾燥させることにより抗ＭＲＳＡ組成物を得ることができる。
【００２３】
（抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法５）
この抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法５においては、前記抗ＭＲＳＡ組成物を得る方法４で得られた抗ＭＲＳＡ組成物を水に溶解させ、等量ヘキサンを加えて分画し、得られた水溶性画分に等量クロロホルムを加えて分画し、得られた水溶性画分に等量の酢酸エチルを加え、得られた水溶性画分を凍結乾燥させることにより抗ＭＲＳＡ組成物を得ることができる。
【００２４】
このようにして抗ＭＲＳＡ組成物を得ることができるが、これら得られた抗ＭＲＳＡ組成物においては、抗ＭＲＳＡ活性が認められたが、濾過後の残渣や濾液分配後の有機層には抗ＭＲＳＡ活性が認められなかった。このことは、抗ＭＲＳＡ活性物質の分子量が小さく（低分子物質）、水に溶解しやすい（水溶性物質）物質であるものと推察される。
【００２５】
そして、前記得られた抗ＭＲＳＡ組成物は、天然物由来の微細藻から抽出されたものであるから、人体に対する安全性が高く、また、ＭＲＳＡが薬剤耐性を持ち難い極めて有効な抗ＭＲＳＡ剤となることが期待できる。そのため、抗ＭＲＳＡ組成物をＭＲＳＡの侵入経路である喉等の粘膜や手指に直接噴霧することにより、ＭＲＳＡの脅威から開放され、更に、他人が触れる可能性のあるものに対しても、抗ＭＲＳＡ組成物を噴霧または塗布する等により、広範囲に利用することが可能である。
【実施例１】
【００２６】
次に、本発明の実施の形態に係る抗ＭＲＳＡ組成物をより具体的な実施例を挙げて説明する。この実施例１においては、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻としてP.carteraeを用い、該微細藻の乾燥藻体略５ｇに略９０℃の熱水５００ｍｌを加え、室温にて１時間撹拌抽出した。その抽出液をガラス繊維ろ紙にて濾過後、その濾液を凍結乾燥させることにより実施例１の抗ＭＲＳＡ組成物を得た。
【実施例２】
【００２７】
この実施例２においては、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻としてP.carteraeを用い、該微細藻の乾燥藻体略５ｇに略５０％のエタノール溶液５００ｍｌを加え、室温にて１時間撹拌抽出した。その抽出液をガラス繊維ろ紙にて濾過後、その濾液を減圧濃縮によってエタノールを除去してから凍結乾燥させることにより実施例２の抗ＭＲＳＡ組成物を得た。
【実施例３】
【００２８】
実施例３においては、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻としてP.carteraeを用い、該微細藻の乾燥藻体略５ｇに略９０℃の熱水５００ｍｌを加え、室温にて１時間撹拌抽出した。このように熱水により抽出して得た抽出液に、最終濃度が略８０％になるようにエタノールを添加して、室温にて一晩（２４時間）放置後、エタノール可溶画分を分画して凍結乾燥させることにより実施例３の抗ＭＲＳＡ組成物を得た。なお、上記各実施例においては、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻の代表としてP.carteraeを用いたが、他の同じプリュウロクリシスに属し同じ性質を有する例えば、P.haptonemafera等を用いることができることは当然のことである。
【００２９】
（比較例１）
この比較例１においては、前記実施例１のエタノール不溶画分を分画して凍結乾燥させることにより比較例１の組成物を得た。
【００３０】
（試験例１）
この試験例１においては、前記実施例１、２、３により得られた抗ＭＲＳＡ組成物と、比較例１により得られた組成物とを用いると共に、従来から知られているペニシリンとを用い、これらにおける抗ＭＲＳＡ活性をペーパーディスク法にて試験した。
【００３１】
まず、酵母抽出物を０．５％程度含むTryptic Soy寒天平板を予め作製しておき、前培養したＭＲＳＡ菌液を略１０６個／ｍｌになるように酵母抽出物を０．５％程度含むTryptic Soy液体培地で希釈し、これに軟寒天を加え、前記０．５％程度含むTryptic Soy寒天平板に撒いた。
【００３２】
滅菌した直径１０ｍｍのペーパーディスクに前記実施例１、２、３により得られた抗ＭＲＳＡ組成物と、比較例１により得られた組成物とからなるそれぞれの試料溶液５０ｍｇ／ｍｌを７０μｌアプライし、同様にペニシリン１ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．２５ｍｇ／ｍｌをそれぞれアプライし、乾燥後に前記０．５％程度含むTryptic Soy寒天平板上にのせ、３７℃の条件下で２４時間倒置培養した。そして、ペーパーディスクの周囲に生じた阻止円により、抗ＭＲＳＡ活性を評価した。
【００３３】
表１に、この試験例１について、ペーパーディスクの周囲に生じた阻止円による抗ＭＲＳＡ活性の評価を示す。この表１においては、阻止円が大きいほど抗ＭＲＳＡ活性が高いことを示している。
【００３４】
【表１】
【００３５】
この表１から明らかなように、比較例１により得られた組成物には抗ＭＲＳＡ活性が認められなかったが、前記実施例１、２、３により得られた抗ＭＲＳＡ組成物には高い抗ＭＲＳＡ活性が認められ、特に、ペニシリンと同等以上の抗ＭＲＳＡ活性が認められたことから、該実施例１、２、３により得られた抗ＭＲＳＡ組成物は、天然由来の抗菌活性剤であり、且つＭＲＳＡに対する抗菌活性を有している抗ＭＲＳＡの物質であることが理解できる。また、時間を要するがハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻を室温（２５℃）で抽出処理した抽出物であっても、上記実施例１と略同等の抗菌活性を有していることが確認された。
【実施例４】
【００３６】
この実施例４においては、前記実施例２の熱水抽出物エタノール可溶画分について、限外濾過を行い、分子量１００００以下の画分を分画して凍結乾燥させることにより実施例３の抗ＭＲＳＡ組成物を得た。
【００３７】
（比較例２）
この比較例２においては、前記実施例４における分子量１００００以上の画分を分画して凍結乾燥させることにより比較例２の組成物を得た。
【００３８】
（試験例２）
この試験例２においては、これら実施例４により得られた抗ＭＲＳＡ組成物と、比較例２により得られた組成物とを用い、これらにおける抗ＭＲＳＡ活性を前記試験例１と同様にしてペーパーディスク法にて試験した。
【００３９】
表２に、この試験例２について、ペーパーディスクの周囲に生じた阻止円による抗ＭＲＳＡ活性の評価を示す。この表２においては、阻止円が大きいほど抗ＭＲＳＡ活性が高いことを示している。
【００４０】
【表２】
【００４１】
この表２から明らかなように、比較例２により得られた組成物には抗ＭＲＳＡ活性が認められなかったが、前記実施例４により得られた抗ＭＲＳＡ組成物には高い抗ＭＲＳＡ活性が認められた。
【実施例５】
【００４２】
この実施例５においては、前記実施例４の抗ＭＲＳＡ組成物を水で溶解し、等量のヘキサンを加えて分画し、得られた水溶性画分に等量クロロホルムを加えて分画し、得られた水溶性画分に等量の酢酸エチルを加え、得られた水溶性画分を凍結乾燥させることにより実施例５の抗ＭＲＳＡ組成物を得た。
【００４３】
（比較例３）
この比較例３においては、前記実施例４の抗ＭＲＳＡ組成物を水で溶解し、等量のヘキサンを加えて凍結乾燥させることにより比較例３の組成物を得た。
【００４４】
（比較例４）
この比較例４においては、前記実施例４の抗ＭＲＳＡ組成物を水で溶解し、等量のクロロホルムを加えて凍結乾燥させることにより比較例４の組成物を得た。
【００４５】
（比較例５）
この比較例５においては、前記実施例３の抗ＭＲＳＡ組成物を水で溶解し、等量の酢酸エチルを加えて凍結乾燥させることにより比較例５の組成物を得た。
【００４６】
（試験例３）
この試験例３においては、これら実施例５により得られた抗ＭＲＳＡ組成物と、比較例３、４、５により得られた組成物とを用い、これらにおける抗ＭＲＳＡ活性を前記試験例１と同様にしてペーパーディスク法にて試験した。
【００４７】
表３に、この試験例３について、ペーパーディスクの周囲に生じた阻止円による抗ＭＲＳＡ活性の評価を示す。この表３においては、阻止円が大きいほど抗ＭＲＳＡ活性が高いことを示している。
【００４８】
【表３】
【００４９】
この表３から明らかなように、比較例３、４、５により得られた組成物には抗ＭＲＳＡ活性が認められなかったが、前記実施例５により得られた抗ＭＲＳＡ組成物には抗ＭＲＳＡ活性が認められた。
【００５０】
いずれにしても、本発明においては、ハプト藻綱イソクリシス目のプリュウロクリシス属の微細藻からの抽出物が抗ＭＲＳＡ活性を有することを発見し、その抽出物を抗ＭＲＳＡ組成物として有効に広く利用できるようにしたものである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハプト藻類イソクリシス目のプリュウロクリシス属に属する微細藻の抽出物を有効成分として含有していること
を特徴とする抗ＭＲＳＡ組成物。
【請求項２】
前記抽出物は、
水もしくは熱水またはアルコールにより抽出されること
を特徴とする請求項１に記載の抗ＭＲＳＡ組成物。
【請求項３】
前記抽出物は、
分子量が略１００００以下の水溶性物質であること
を特徴とする請求項１または２に記載の抗ＭＲＳＡ組成物。
【請求項１】
ハプト藻類イソクリシス目のプリュウロクリシス属に属する微細藻の抽出物を有効成分として含有していること
を特徴とする抗ＭＲＳＡ組成物。
【請求項２】
前記抽出物は、
水もしくは熱水またはアルコールにより抽出されること
を特徴とする請求項１に記載の抗ＭＲＳＡ組成物。
【請求項３】
前記抽出物は、
分子量が略１００００以下の水溶性物質であること
を特徴とする請求項１または２に記載の抗ＭＲＳＡ組成物。
【公開番号】特開２００６−１５１８８９（Ｐ２００６−１５１８８９Ａ）
【公開日】平成１８年６月１５日（２００６．６．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−３４６３３０（Ｐ２００４−３４６３３０）
【出願日】平成１６年１１月３０日（２００４．１１．３０）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り ２００４年６月１７日 第７回マリンバイオテクノロジー学会大会大会実行委員会発行の「第７回 マリンバイオテクノロジー学会大会講演要旨集」に発表
【出願人】（５９９００２０４３）学校法人 名城大学 (142)
【出願人】（５９３２０６９６４）マイクロアルジェコーポレーション株式会社 (17)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年６月１５日（２００６．６．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１１月３０日（２００４．１１．３０）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り ２００４年６月１７日 第７回マリンバイオテクノロジー学会大会大会実行委員会発行の「第７回 マリンバイオテクノロジー学会大会講演要旨集」に発表
【出願人】（５９９００２０４３）学校法人 名城大学 (142)
【出願人】（５９３２０６９６４）マイクロアルジェコーポレーション株式会社 (17)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]