損傷した創傷治癒組成物および治療
治療を必要とする対象における、慢性創傷、治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、および離開創を含めた、予測される速度で治癒しない創傷を治療する１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む方法、化合物、組成物、キット、および製品。一実施形態において、本発明は、慢性創傷を有する対象を治療する方法であって、有効量のギャップジャンクション調節剤を含む組成物の創傷への投与を含む方法を対象とする。コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ギャップジャンクションならびに創傷および創傷治癒、特に、治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、慢性創傷、および離開創など、予測される速度で治癒しない創傷に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
以下は、本発明の理解に有用でありうる情報を含む。このことは、本明細書に記載される情報が、本明細書に記載または特許請求されている発明に対する先行技術であるか、もしくはこれに関連していることを認めるものでも、明示的にもしくは暗黙に言及される刊行物もしくは文書が先行技術であることを認めるものでもない。
【０００３】
ヒトおよび他の哺乳動物において、創傷は、細胞イベントおよび生化学的イベントの組織化された複雑なカスケードを誘発し、この結果、大半の場合において創傷の治癒がもたらされる。理想的に治癒した創傷とは、細胞レベル、組織レベル、器官レベル、および生物レベルにおける正常な解剖学的構造、機能、および外見が回復しているものである。外傷、微生物、または外来物質のいずれにより誘発されたものでも、創傷の治癒は、炎症、上皮形成、新脈管形成、およびマトリックス沈着を含めたいくつものオーバーラップした段階を包含する複雑な過程により進行する。通常、これらの過程により、創傷の完成（ｍａｔｕｒｅ ｗｏｕｎｄ）およびある程度の瘢痕形成がもたらされる。炎症および修復は、規定の経過に沿って生じることが大半であるが、この過程の感度は、例えば、調節サイトカインおよび増殖因子の複合ネットワークを含む、各種の創傷治癒分調節因子の均衡に依存する。
【０００４】
ギャップジャンクションは、直接的な細胞間情報伝達（ｃｅｌｌ−ｃｅｌｌ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）を促進する細胞膜構造である。ギャップジャンクションチャネルは、各々が６つずつのコネキシンサブユニットからなる２つのコネクソン（ヘミチャネル）から形成される。各６量体コネクソンは、向い側の膜内のコネクソンとドッキングして、単一のギャップジャンクションを形成する。ギャップジャンクションチャネルは、全身において見出される。例えば、角膜上皮などの組織は、６〜８層の細胞層を有するが、異なる層では異なるギャップジャンクションチャネルを発現することが報告されており、基底層ではコネキシン４３を有し、基底層から中翼細胞層ではコネキシン２６を有する。一般に、コネキシンは１つのタンパク質ファミリーであり、通常、それらの分子量により命名されるか、または系統発生に基づき、アルファ、ベータ、およびガンマのサブクラスに分類されている。ヒトで少なくとも２０種のアイソフォームが、また、マウスで少なくとも１９種のアイソフォームが同定されている。特徴的なパターンのコネキシンタンパク質発現を有する様々な組織および細胞型が報告されており、角膜などの組織は、傷害または移植後において、コネキシンタンパク質の発現パターンを変化させることが示されている（Ｑｕｉら（２００３年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第１３巻、１９６７〜１７０３頁； Ｂｒａｎｄｅｒ ら（２００４年）、Ｊ． Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、第１２２巻、１３１０〜２０頁）。
【０００５】
異常なコネキシン機能は、特定の疾患状態（例えば、心疾患）と関連し得ることが報告されている（Ａ． Ｃ． ｄｅ Ｃａｒｖａｌｈｏら、Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ、１９９４年、第５巻、６８６頁）。ある種のコネキシンタンパク質では、ギャップジャンクションを介した細胞間情報伝達レベルに影響を及ぼしうる外因性物質の追加により、代謝回転特性および輸送特性の変化が誘導されうる（Ｄａｒｒｏｗら（１９９５年）、Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ、第７６巻、３８１頁； Ｌｉｎ（２００１年）、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、第１５４巻、第４号、８１５頁）。ウイルス性疾患、真菌性疾患、および代謝性疾患に関係する遺伝子の発現調節について、アンチセンス技術もまた報告されている。例えば、特許文献１（ＨＩＶに対するオリゴヌクレオチド阻害剤）、特許文献２（単純ヘルペスウイルスのＶｍｗ６５ ｍＲＮＡにハイブリダイズし、複製を阻害するオリゴマー）を参照されたい。また、ＢｅｃｋｅｒおよびＧｒｅｅｎへの特許文献３（コネキシンに対するアンチセンスヌクレオチドを含む製剤）も参照されたい。ギャップジャンクションおよびヘミチャネルに対するペプチド阻害剤もまた報告されている。例えば、Ｂｅｒｔｈｏｕｄら、Ａｍ Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．、第２７９巻、Ｌ６１９〜Ｌ６２２頁（２０００年）； Ｅｖａｎｓ， Ｗ．Ｈ．およびＢｏｉｔａｎｏ， Ｓ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｔｒａｎｓ．、第２９巻、６０６〜６１２頁；ならびにＤｅ Ｖｒｉｅｓｅ Ａ．Ｓ． ら、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．、第６１巻、１７７〜１８５頁（２００１年）を参照されたい。また、ＢｅｃｋｅｒおよびＧｒｅｅｎ、特許文献４（「Ａｎｔｉ−ｃｏｎｎｅｘｉｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｕｓｅ」）も参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第５，１６６，１９５号明細書
【特許文献２】米国特許第５，００４，８１０号明細書
【特許文献３】米国特許第７，０９８，１９０号明細書
【特許文献４】国際公開第２００６／１３４４９４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
創傷治癒過程の基礎をなす原理に対する理解の進展にもかかわらず、治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、および慢性創傷など、予測される速度で治癒しない創傷を含む創傷治療に適する治療選択肢に対する必要は、依然としてほとんど満たされていない。本出願では、このような治療組成物および治療が記載および特許請求される。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
簡単な要旨
本明細書で記載および特許請求される発明は、この「簡単な要旨」において説明または記載または言及される属性および実施形態を含むがこれらに限定されない多くの属性および実施形態を有する。それは包括的であることが意図されるものでなく、本明細書で記載および特許請求される発明は、限定ではなくて例示だけを目的として組み入れられているこの「簡単な要旨」に限定されるものでも、「簡単な要旨」において特定される特徴または実施形態により限定されるものでもない。
【０００９】
本開示の態様および実施形態は一般に、治癒が遅い創傷、治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、離開創、および慢性創傷など、予測される速度で治癒しない創傷について対象を治療する方法であって、ギャップジャンクション調節剤を含む組成物または製剤を創傷に投与するステップを含む方法に関する。コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。
【００１０】
一実施形態において、本発明は、慢性創傷を有する対象を治療する方法であって、有効量のギャップジャンクション調節剤を含む組成物の創傷への投与を含む方法を対象とする。コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。一実施形態において、慢性創傷は褥瘡である。一実施形態において、慢性創傷は褥瘡性潰瘍である。別の実施形態において、慢性創傷は動脈性潰瘍である。別の実施形態において、慢性創傷は静脈性潰瘍である。別の実施形態において、慢性創傷は静脈鬱血性潰瘍である。別の実施形態において、慢性創傷は血管炎性潰瘍である。さらに別の実施形態において、慢性創傷は、糖尿病性足部潰瘍など糖尿病性潰瘍である。さらなる実施形態において、慢性創傷は外傷性潰瘍または熱傷潰瘍である。別の実施形態において、慢性創傷は感染性潰瘍であり、別の実施形態において、慢性創傷は壊疽性膿皮症と関連する潰瘍形成を特徴とする。またさらなる実施形態において、慢性創傷は混合潰瘍である。一実施形態において、創傷は持続性上皮欠損である。
【００１１】
一実施形態において、本発明は、離開創を有する対象を治療する方法に関し、有効量のギャップジャンクション調節剤、好ましくは、コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤を含む組成物をこの創傷へ投与する工程を含む。
【００１２】
一実施形態において、対象は哺乳動物である。別の実施形態において、対象はヒトである。別の実施形態において、対象は糖尿病を有するヒトである。一実施形態において、対象は１型糖尿病を有するヒトである。別の実施形態において、対象は２型糖尿病を有するヒトである。
【００１３】
別の実施形態において、哺乳動物は競技動物またはペット動物である。一態様において、競技動物はウマまたはイヌである。別の態様において、ペット動物はイヌまたはネコである。
【００１４】
一実施形態において、本発明は、治癒が遅延している創傷を有する対象を治療する方法に関し、有効量のギャップジャンクション調節剤を含む組成物をこの創傷へ投与する工程を含む。別の実施形態において、本発明は、治癒が不完全な創傷を有する対象を治療する方法に関し、有効量のギャップジャンクション調節剤を含む組成物をこの創傷へ投与する工程を含む。コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。
【００１５】
さらなる態様により、ある持続時間にわたるある量のギャップジャンクション調節剤の創傷への持続投与が提供される。さらにこの態様により、治癒が遅延している創傷、治癒障害の創傷、および慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷の創傷治癒が促進される。一実施形態において、創傷は、糖尿病性潰瘍、糖尿病性足部潰瘍、血管炎性潰瘍、静脈性潰瘍、静脈鬱血性潰瘍、動脈性潰瘍、褥瘡、褥瘡性潰瘍、感染性潰瘍、外傷誘導性潰瘍、熱傷潰瘍、壊疽性膿皮症と関連する潰瘍形成、または１もしくは複数の潰瘍の混合である。本発明には、反復適用が含まれる。創傷閉鎖の進行が見られるまでの反復適用の後、創傷治癒が再び停滞するかまたは遅延している場合における反復適用（または複数回の反復適用）を行うことが好ましい。
【００１６】
本発明の他の態様により、創傷の再上皮形成および／または肉芽組織の形成が促進される。
【００１７】
さらなる態様において、本発明は、治癒が遅延している創傷または治癒が不完全な創傷または慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷を有する対象における創傷治癒を促進する方法であって、抗コネキシン４３ペプチドおよび抗コネキシン３１．１ペプチドの投与を含む方法を提供する。本発明には、反復適用が含まれる。
【００１８】
本発明の代替的な態様は、皮膚創傷の再上皮形成を促進する方法であって、例えば、治癒が遅延している創傷または治癒が不完全な創傷または慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷を有する対象に、再上皮形成を促進するのに有効な量でギャップジャンクション調節剤、例えば、抗コネキシンペプチドを投与するステップを含む方法を対象とする。抗コネキシンペプチドは、コネキシン２６、コネキシン３０、コネキシン３１．１およびコネキシン４３から選択されたコネキシンを標的としうる。ここでは、コネキシン４３が好ましい標的である。
【００１９】
追加のさらなる態様において、本発明は、例えば、治癒が遅延している創傷または治癒が不完全な創傷または慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷を有する対象における創傷治癒を促進する方法であって、上皮基底細胞の分裂および増殖を調節するのに有効なギャップジャンクション調節剤の持続投与を含む方法を提供する。追加のさらなる態様において、本発明は、例えば、治癒が遅延している創傷または治癒が不完全な創傷または慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷を有する対象における創傷治癒を促進する方法であって、外層におけるケラチン分泌を調節するのに有効なギャップジャンクション調節剤の持続投与を含む方法を提供する。一実施形態において、上皮基底細胞の分裂および増殖を調節するのに有効なギャップジャンクション調節剤、例えば、抗コネキシンペプチドは、抗コネキシン２６ペプチドもしくは抗コネキシン４３ペプチドまたはこれらの混合物である。代替的な実施形態により、外層のケラチン化を調節するのに投与されるギャップジャンクション調節剤、例えば、抗コネキシンペプチドは、抗コネキシン３１．１ペプチドである。本発明には、反復適用が含まれる。
【００２０】
別の態様により、本発明は、予測される速度で治癒しない創傷（治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、および慢性創傷を含む）を有する対象における創傷治癒または創傷閉鎖の速度を増大させる方法であって、対象に有効量のギャップジャンクション調節剤を投与するステップを含む方法を提供する。
【００２１】
一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ギャップジャンクションチャネルを隔てた細胞間連絡分子の流動を全体的または部分的に阻止または低減する。一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ギャップジャンクションを全体的または部分的に閉鎖することにより、細胞間連絡を阻害する。別の態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルの結合によるギャップジャンクションの形成を全体的または部分的に阻止または低減する。別の態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの全体的または部分的な閉鎖を誘導する。さらに別の態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルの開口を、全体的または部分的に遮断または阻害する。一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの開口を、全体的または部分的に低減させるかまたは阻止する。一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの活性または機能を阻止または低減する。本明細書で説明されるコネキシン４３ギャップジャンクションおよびコネキシン４３ヘミチャネルを調節するコネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。
【００２２】
一態様において、本発明は、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤をさらに含むことが好ましい。例えば、本発明は、（ａ）治療有効量の薬学的に許容されるコネキシン４３ギャップジャンクション調節剤と、（ｂ）薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物を含む。
【００２３】
本発明はまた、包帯材、包帯、マトリックス、および被覆と組み合わせたギャップジャンクション調節剤の使用にも関する。一態様において、本発明は、ギャップジャンクション調節剤、好ましくは、コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤を含む合成または天然の創傷治癒マトリックスを含む。ある実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤、例えば、抗コネキシン４３ペプチドまたは抗コネキシン４３ペプチド模倣剤である。
【００２４】
これらはまた、例えば、治癒が完了するかまたは望ましい形となるまで毎週１回の反復適用における、単独での、または包帯材、包帯、マトリックス、および被覆と組み合わせてのギャップジャンクション調節剤の使用にも関する。
【００２５】
一態様において、ギャップジャンクション調節剤はペプチド化合物である。一態様において、ペプチド化合物は、ペプチド模倣剤、ペプチド模倣剤、抗体、またはこの抗原結合フラグメントである。一態様において、抗原結合フラグメントは、Ｆ（ｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２による抗コネキシン４３抗体フラグメントである。一態様において、抗体はキメラ抗体またはヒト化抗体である。一態様において、抗体フラグメントは、キメラ抗体フラグメントまたはヒト化抗体フラグメントである。別の態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ギャップジャンクションリン酸化誘導剤、好ましくはコネキシン４３ギャップジャンクションリン酸化化合物ある。
【００２６】
本発明の一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、局所投与用に処方される。本発明の一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ゲルとして処方される。さらに別の態様において、ギャップジャンクション調節剤は、徐放または持続放出用に処方される。本発明には、ギャップジャンクション調節剤の反復適用が含まれる。コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
発明の詳細な説明
治癒が遅い創傷、治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、離開創、および慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷は、結果として感染症をもたらすことが多く、切断術または死亡をもたらしうる。創傷治癒においては、ギャップジャンクションを通る細胞間連絡が中枢的な役割を果たす。本明細書で説明されるかまたは言及される化合物を含む特定の化合物の使用により、細胞連絡を遮断するか、阻害するか、または変化させることが可能であり、これにより、治癒が遅い創傷、治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、離開創、および慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷の閉鎖および治癒が促進される。すべての適用について、コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。
【００２８】
定義
本明細書で用いられる「障害」とは、創傷治癒を促進し、かつ／または瘢痕形成を軽減する薬剤から利益を得る任意の障害、疾患、または状態である。例えば、神経障害性、虚血性、および微小血管性の病態；骨領域全体［尾骨（仙骨）、股関節（転子骨）、臀部（坐骨）、または足のかかと］にわたる圧迫；再灌流による傷害；ならびに弁逆流による病因と関連する状態および関連の状態と関連する創傷関連の異常が含まれる。
【００２９】
本明細書で用いられる「対象」とは、ヒト；イヌ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウシなどの家畜動物および農場動物、ならびに動物園動物、競技動物、およびペット動物を含む任意の哺乳動物を指す。本明細書で好ましい哺乳動物は、成人、小児、および老齢者を含むヒトである。
【００３０】
本明細書で用いられる「予防」とは、全体的もしくは部分的な予防、または改善もしくは抑制を意味する。
【００３１】
本明細書で用いられる「治療」という用語は、治療的処置および予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃまたはｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）措置の両方を指す。
【００３２】
本発明の化合物または組成物に関して本明細書で用いられる「治療有効量」とは、所望の生物学的結果、薬学的結果、または治療結果を誘導するのに十分な量を指す。その結果は、疾患もしくは障害もしくは状態の徴候、症状、もしくは原因の緩和、または生物学的系の他の任意の望ましい変化でありうる。本発明において、結果は、創傷治癒および創傷閉鎖の速度を含む、創傷治癒の全体的または部分的な促進および／または改善を伴う。他の利益は、腫脹、炎症、および／または瘢痕形成の全体的または部分的な軽減を含む。
【００３３】
本明細書で用いられる「同時に」が、本発明の１または複数のギャップジャンクション調節剤（例えば、ペプチドまたは遮断薬）を共時的に投与することを意味するように用いられるのに対し、「組み合わせて」という用語は、同時にまたは物理的に混合してではないにせよ、それらの両方を治療的な作用に用いられる時間枠内で「逐次的に」投与することを意味するように用いられる。したがって、「逐次的に」投与することにより、１または複数のギャップジャンクション調節剤が有効量で共時的に存在する限りにおいて、１つの薬剤を、他の薬剤の投与後数分（例えば、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０分）、または約数時間、数日、数週間、もしくは数カ月以内に投与することが可能となりうる。成分の投与における時間の遅延は、それらの成分の正確な性質、それらの間における相互作用、およびそれら各々の半減期に応じて変化する。
【００３４】
「ペプチド模倣剤」および「模倣剤」という用語は、それらが模倣するタンパク質領域と同じ構造的特徴および機能的特徴を実質的に有しうる天然化合物および合成化合物が含まれる。コネキシンの場合、これらは、例えば、コネクソン間結合および細胞間のチャネル形成、ならびに／またはヘミチャネルコネキシンの細胞外ループに関与する、向かい合うコネキシンの細胞外ループを模倣しうる。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、「ペプチド類似体」とは、鋳型のペプチドの特性に類似する特性を有する化合物を指し、それらは非ペプチド薬剤でありうる。ペプチドベースの化合物を含む「ペプチド模倣剤」（また、「模倣ペプチド」としても公知）はまた、ペプチド類似体などの非ペプチドベースの化合物も含む。治療的に有用なペプチドに対して構造的に類似するペプチド模倣剤を用いて、同等であるかまたは増強された治療効果または予防効果をもたらすことができる。一般に、ペプチド模倣剤は、パラダイムポリペプチド（すなわち、生物学的または薬理学的な機能または活性を有するポリペプチド）と構造上または機能上の模倣物（例えば、同一または類似）であるが、また、場合によって、例えば、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、および−ＣＨ２ＳＯ−からなる群から選択される結合により置換される１または複数のペプチド結合も有しうる。模倣剤は、天然のアミノ酸、合成化学化合物、非天然のアミノ酸類似体だけから構成されたものであっても、部分的に天然のペプチドアミノ酸と部分的に非天然のアミノ酸類似体からなるキメラ分子であってもよい。任意量の天然アミノ酸に対する保存的置換もまた実質的に模倣剤の活性を変化させない限りにおいて、模倣剤はまたこのような置換も含みうる。コネキシンの場合、これらは、例えば、コネクソン間結合および細胞間のチャネル形成に関与する、向かい合うコネキシンの細胞外ループを模倣しうる。例えば、コネクソンの結合によるギャップジャンクションを介する細胞間連絡の形成に対する阻害、またはコネクソンの開口による細胞質の細胞外環境への曝露に対する阻害など、コネクソンの生物学的な作用または活性を下方調節することが可能な場合、例えば、模倣組成物は、ギャップジャンクション調節剤として有用でありうる。ペプチド模倣剤は、本明細書に記載のペプチド模倣剤のほか、現在公知の場合であれ将来的に開発される場合であれ、当技術分野において公知でありうるペプチド模倣剤を包含する。
【００３６】
一般に、本明細書においてその各形態において用いられるギャップジャンクション活性の「調節剤」および「調節」という用語は、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルの発現または作用または活性に対する全体的または部分的な阻害を指し、ギャップジャンクション調節剤として機能しうる。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、「タンパク質」という用語は、１つのアミノ酸（またはアミノ酸残基）のアルファ炭素に結合したカルボン酸基のカルボキシル炭素原子が、隣接するアミノ酸のアルファ炭素に結合したアミノ基のアミノ窒素原子に共有結合する場合に生じるペプチド結合により連結される、２つ以上の個々のアミノ酸（天然の場合であれ非天然の場合であれ）による任意のポリマーを指す。これらのペプチド結合、およびこれらを含む原子（すなわち、アルファ炭素原子、カルボキシルの炭素原子（およびこれらの置換基の酸素原子）、およびアミノの窒素原子（およびこれらの置換基の水素原子））は、タンパク質の「ポリペプチド骨格」を形成する。加えて、本明細書で用いられる「タンパク質」という用語は、「ポリペプチド」および「ペプチド」（本明細書では、場合によって、互換的に用いられうる）という用語を含む形で理解される。同様に、本明細書では、タンパク質のフラグメント、類似体、誘導体、および変異体も「タンパク質」と称し、別段に示されない限り、「タンパク質」であるとみなされるものとする。タンパク質の「フラグメント」という用語は、タンパク質のすべてのアミノ酸残基よりも少数のアミノ酸残基を含むポリペプチドを指す。タンパク質の「ドメイン」もまたフラグメントであり、多くの場合、活性または機能を付与することが必要とされる、タンパク質のアミノ酸残基を含む。
【００３８】
「創傷包帯材」という用語は、創傷に対する局所適用のための包帯材を指し、全身投与に適する組成物を除外する。例えば、１または複数のギャップジャンクション調節剤は、創傷接触材料（例えば、織られた布材料または不織の布材料）の固体シート中または固体シート上に分散させることもでき、ポリウレタン発泡体などの発泡体層中またはポリウレタンヒドロゲル、ポリアクリル酸ヒドロゲル、ゼラチン、カルボキシメチルセルロース、ペクチン、アルギネート、および／もしくはヒアルロン酸ヒドロゲルなどのヒドロゲル中、例えば、ゲルまたは軟膏中に分散させることもできる。一部の実施形態において、１または複数のギャップジャンクション調節剤は、創傷中への有効成分の持続的な放出をもたらす生体分解性のシート材料、例えば、凍結乾燥コラーゲンシート、凍結乾燥したコラーゲン／アルギネート混合物（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｍｉｔｅｄ社から登録商標ＦＩＢＲＡＣＯＬの下に入手可能）、または凍結乾燥コラーゲン／酸化再生セルロース（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｍｉｔｅｄ社から登録商標ＰＲＯＭＯＧＲＡＮの下に入手可能）の中またはこの上に分散される。
【００３９】
本明細書で用いられる「創傷促進マトリックス」は、例えば、コラーゲン、無細胞マトリックス、架橋生体足場分子、組織ベースの生体改変構造フレームワーク、生体加工による生体装具、また例えば、創傷治癒の促進に有用な細胞の浸潤および増殖に適する血管グラフトなど、他の植え込み構造物など、合成または天然のマトリックスを含む。さらなる適切な生体マトリックス材料は、抗原性および免疫原性を軽減する化学修飾したコラーゲン組織を含みうる。他の適切な例は、創傷包帯材用のコラーゲンシート、抗原を含まないかまたは抗原を低減した無細胞マトリックス（Ｗｉｌｓｏｎ ＧＪら、Ｔｒａｎｓ Ａｍ Ｓｏｃ Ａｒｔｉｆ Ｉｎｔｅｒｎ、１９９０年、第３６巻、３４０〜３４３頁）、または異種移植材料に対する抗原反応を軽減するように改変された他の生体マトリックスを含む。創傷治癒を促進するのに有用な他のマトリックスは、例えば、不溶性のコラーゲンおよびエラスチンを含む加工済みのウシ心膜タンパク質（Ｃｏｕｒｔｍａｎ ＤＷら、Ｊ Ｂｉｏｍｅｄ Ｍａｔｅｒ Ｒｅｓ、１９９４年、第２８巻、６５５〜６６６頁）、および宿主細胞の移動が組織再生を加速させるための天然の微小環境をもたらすのに有用でありうる他の無細胞組織（Ｍａｌｏｎｅら、Ｊ Ｖａｓｃ Ｓｕｒｇ、１９８４年、第１巻、１８１〜９１頁）を含みうる。本発明は、本明細書に記載される１または複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤（抗コネキシン４３ペプチドおよび抗コネキシン４３ペプチド模倣剤）を含む合成または天然のマトリックスを意図する。
【００４０】
本明細書で用いられる「創傷」という用語は、例えば、治癒が遅延しているかまたは困難な創傷、および慢性創傷を含めた、任意の組織に対する傷害を含む。創傷の例は、開放創傷および閉鎖創傷の両方を含みうる。「創傷」という用語はまた、例えば、異なる形で誘発され（例えば、長期間の横臥静養に由来する褥瘡、および外傷により誘導される創傷）、また多様な特性を有する、皮膚および皮下組織に対する傷害も含みうる。創傷は、創傷の深さに応じて、ｉ）グレードＩ：上皮に限局される創傷；ｉｉ）グレードＩＩ：真皮内に拡張する創傷；ｉｉｉ）グレードＩＩＩ：皮下組織内に拡張する創傷；およびｉｖ）グレードＩＶ（または全層創傷）：骨が露出する創傷（例えば、転子または仙骨などの骨圧点）の４つのグレードのうちの１つに分類することができる。
【００４１】
「部分層創傷」という用語は、グレードＩ〜ＩＩＩを包含する創傷を指し、部分層創傷の例は、褥瘡、静脈鬱血性潰瘍、および糖尿病性潰瘍を含む。本発明は、治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、および慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない種類のすべての創傷の治療を意図する。
【００４２】
「ある／予測される速度で治癒しない創傷」とは、任意の組織に対する傷害を意味し、治癒が遅延しているかまたは困難な創傷（治癒が遅延しているかまたは不完全な創傷を含む）、および慢性創傷を含む。予測される速度で治癒しない創傷の例は、糖尿病性潰瘍、糖尿病性足部潰瘍、血管性潰瘍、動脈性潰瘍、静脈性潰瘍、静脈鬱血性潰瘍、熱傷潰瘍、感染性潰瘍、外傷誘導性潰瘍、褥瘡、褥瘡性潰瘍、壊疽性膿皮症と関連する潰瘍形成、および混合潰瘍などの潰瘍を含む。予測される速度で治癒しない他の創傷は、離開創を含む。
【００４３】
本明細書で用いられる、治癒が遅延しているかまたは困難な創傷は、例えば、１）炎症期の持続、２）細胞外マトリックスの形成遅延、および／または３）上皮形成速度の低下を少なくとも部分的に特徴とする創傷を含みうる。
【００４４】
「慢性創傷」という用語は、治癒しなかった創傷を指す。例えば、３か月以内に治癒しない創傷は、慢性であると考えられる。慢性創傷は、例えば、褥瘡、糖尿病性潰瘍、糖尿病性足部潰瘍、静脈性潰瘍、静脈鬱血性潰瘍、動脈性潰瘍、血管性潰瘍、熱傷潰瘍、外傷誘導性潰瘍、感染性潰瘍、混合潰瘍、および壊疽性膿皮症を含む。慢性創傷は、完全動脈遮断または部分動脈遮断から生じる潰瘍形成を含む動脈性潰瘍でありうる。慢性創傷は、静脈弁の機能不全および関連する血管疾患から生じる潰瘍形成を含む静脈性潰瘍または静脈鬱血性潰瘍でありうる。一部の実施形態において、慢性創傷を治療する方法は、慢性創傷が、以下の褥瘡のＡＨＣＰＲ病期：病期１、病期２、病期３、および／または病期４のうちの１つまたは複数を特徴とする場合に提供される。
【００４５】
本明細書で用いられる慢性創傷はまた、例えば、１）創傷炎症の慢性自己永続状態、２）創傷細胞外マトリックスの欠損および欠陥、３）（老化）創傷細胞（例えば、線維芽細胞）の応答不十分、４）細胞外マトリックス生成の制約、ならびに／または５）必要な細胞外マトリックスの組織化の欠如および移動のための足場の欠如に部分的に起因する再上皮形成不全を少なくとも部分的に特徴とする創傷も含みうる。慢性創傷はまた、１）炎症およびタンパク質分解活性の持続による、例えば、糖尿病性潰瘍、褥瘡（褥瘡性潰瘍）、静脈性潰瘍、および動脈性潰瘍を含む潰瘍性病変の惹起、２）罹患領域におけるマトリックスの進行性沈着、３）修復時間の長期化、４）創傷収縮の低減、５）再上皮形成の遅延、ならびに６）肉芽組織の肥厚も特徴とする。
【００４６】
例示的な慢性創傷は、「褥瘡」を含みうる。例示的な褥瘡は、例えば、病期１を含む、ＡＨＣＰＲ（米国保健福祉省、健康管理政策研究局）ガイドラインに基づく創傷分類の全４病期を含みうる。病期１の褥瘡は、身体上で隣接するかまたは反対側の領域と比較したその指標が、以下：皮膚温度（温熱または低温）、組織の硬さ（しまった感じかまたはゆるい感じ）、および／または感覚（疼痛、刺激）のうちの１つまたは複数における変化を含みうる、圧力と関連する無傷皮膚の観察可能な変化である。潰瘍は、わずかに色素沈着した皮膚における、明確な持続性の発赤領域として現れる一方、皮膚の色調がより暗色の場合、潰瘍は、持続性の赤色、青色、または紫色を伴って現れうる。病期１の潰瘍は、無傷皮膚の消退しない発赤、および皮膚潰瘍形成の前兆となる病変を含みうる。皮膚が暗色化している個体においては、皮膚の変色、温熱、浮腫、硬結、硬化もまた、病期１の潰瘍形成の指標でありうる。病期２：病期２の潰瘍形成は、表皮、真皮、またはこれらの両方に及ぶ部分層皮膚喪失を特徴としうる。潰瘍は表面的であり、臨床的には表皮剥離、水膨れ、または表層的な陥没として現れる。病期３：病期３の潰瘍形成は、基層の筋膜を貫通しないがこれへと拡張しうる、皮下組織に対する損傷またはこの壊死を伴う全層皮膚喪失を特徴としうる。潰瘍は、臨床的には、隣接組織を蝕む場合であれ、そうでない場合であれ、深い陥没として現れる。病期４：病期４の潰瘍形成は、筋肉、骨、または支持構造（例えば、腱、関節被膜）に対する広範な破壊、組織壊死、または損傷を伴う全層皮膚喪失を特徴としうる。一部の実施形態において、慢性創傷を治療する方法は、慢性創傷が、以下の褥瘡のＡＨＣＰＲ病期：病期１、病期２、病期３、および／または病期４のうちの１つまたは複数を特徴とする場合に提供される。
【００４７】
例示的な慢性創傷は、「褥瘡性潰瘍」を含みうる。例示的な褥瘡性潰瘍は、虚血をもたらす骨の突出部上において、圧力が長期間にわたり軽減されないことの結果として生じうる。創傷は、麻痺患者、意識喪失患者、または重度の衰弱患者など、自ら体位を変えて体重の負荷を除去することができない患者において生じる傾向がある。米国保健福祉省により定義される通り、主要な防止措置は、危険性の高い患者の同定；頻繁な評価；および定期的な体位変換、適切な圧力除去横臥、防湿バリア、および十分な栄養状態などの予防措置を含む。治療選択肢は、例えば、圧力の除去、手術による創面切除および酵素的創面切除、湿潤創傷の治療、および細菌負荷の抑制を含みうる。一部の実施形態では、虚血をもたらす骨の突出部上において、圧力が長期間にわたり軽減されないことの結果として生じる褥瘡性潰瘍または同潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。一部の実施形態では、虚血をもたらす骨の突出部上において、圧力が長期間にわたり軽減されないことの結果として生じる褥瘡性潰瘍または同潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００４８】
例示的な慢性創傷は、「動脈性潰瘍」を含みうる。慢性動脈性潰瘍とは一般に、動脈硬化性および高血圧性の心血管疾患を伴う潰瘍形成であると理解される。これらは、有痛で、境界が明瞭であり、下肢側部およびつま先において見出されることが多い。動脈性潰瘍は、組織の壊死および／または潰瘍形成をもたらしうる完全動脈遮断または部分動脈遮断を特徴とする潰瘍を含みうる。動脈性潰瘍の徴候は、例えば、下肢の無脈；有痛の潰瘍形成；極めて限局性であることが通常な、小型の点状潰瘍；低温皮膚または寒冷皮膚；毛細血管復帰時間の遅延（つま先の端部を軽く押して放し、約３秒間以内につま先に正常な色彩が戻るものとする）；皮膚の萎縮外見（例えば、光沢、薄化、乾燥）；ならびに指および足の体毛喪失を含みうる。
【００４９】
例示的な慢性創傷は、「静脈性潰瘍」を含みうる。例示的な静脈性潰瘍は、下肢が罹患する最も一般的な種類の潰瘍を含む場合があり、静脈弁の機能不全を特徴としうる。正常な静脈は、血液の逆流を防止する弁を有する。これらの弁が不全化すると、静脈血の逆流により、静脈鬱血が引き起こされる。赤血球からヘモグロビンが逸失して血管外腔へと漏出し、これにより、一般に言及される褐色の変色が引き起こされる。静脈性潰瘍を取り巻く皮膚の経皮酸素圧が低下することが示されており、これにより、領域の正常な血管形成を妨げる力が存在することが示唆される。リンパ液のドレナージおよび流動もまた、これらの潰瘍において役割を果たす。静脈性潰瘍は、内果近傍に現れる場合があり、通常、下肢の浮腫形成および硬結との組合せで生じ、浅く、それほど有痛でない場合があり、罹患部位からの滲出物の分泌を伴って現れる場合がある。一部の実施形態では、完全動脈遮断または部分動脈遮断に起因する動脈性潰瘍または同潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５０】
例示的な慢性創傷は、「静脈鬱血性潰瘍」を含みうる。鬱血性潰瘍とは、静脈機能不全と関連する病変であり、より一般的には内果全体に現れ、通常、圧痕性浮腫、静脈瘤、斑点状の色素沈着、紅斑、ならびに触知不能の点状出血および紫斑を伴う。鬱血性皮膚炎および鬱血性潰瘍は一般に、有痛ではなくて掻痒性である。例示的な静脈鬱血性潰瘍は、局所的低酸素症を結果としてもたらす下肢の慢性受動性静脈鬱血を特徴としうる。これらの創傷の１つの可能な発症機構は、厚い血管周囲のフィブリンカフを超える組織内への酸素拡散が妨害されることを含む。別の機構は、血管周囲組織内への高分子の漏出により、皮膚の完全性を維持するのに必要とされる成長因子が捕捉されることである。加えて、静脈鬱血により高分子である白血球の流動が遅くなり、白血球が毛細血管を閉塞させ、活性化し、血管内皮を損傷して潰瘍形成に対する素因を与える。一部の実施形態では、静脈弁の機能不全および関連する血管疾患に起因する静脈性潰瘍または同潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。一部の実施形態では、下肢の慢性受動性静脈鬱血および／または結果として生じる局所的低酸素症に起因する静脈鬱血性潰瘍または同潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５１】
例示的な慢性創傷は、「糖尿病性潰瘍」を含みうる。糖尿病患者は、神経学的合併症および血管合併症の両方に起因する足部潰瘍形成を含む潰瘍形成に罹患しやすい傾向がある。末梢の神経障害は、足部および／または脚部における感覚の変化または感覚の完全な喪失を引き起こしうる。神経障害が進行した糖尿病患者は、とがったもの／まるいものを区別するすべての能力を失う。神経障害を有する患者では、足部に対する任意の切開または外傷が、数日間または数週間にわたって完全に知覚されないままの場合がある。神経障害を有する患者の場合、実際には潰瘍が現れてかなりの時間が経過していても、潰瘍が「今現れた」と知覚することがまれではない。神経障害患者の場合、グルコースの厳密な制御により疾患の進行が遅くなることが示されている。感覚低下の結果として、シャルコー足部変形もまた生じうる。自らの足部において「正常な」感覚を有する者は、足部領域上にある圧力が大きすぎる場合、これを自然に感知する能力を有する。それが同定されると、われわれの身体は、この圧迫を緩和するように体位を本能的に変える。神経障害が進行した患者は、持続的な圧迫を感知するこの能力を失い、結果として、例えば、足底部の潰瘍形成をもたらす組織の虚血および壊死が生じうる。加えて、足部骨における微小骨折が感知および治療されずにおかれると、結果として、変形、慢性腫脹、およびさらなる骨の突出が生じうる。微小血管疾患は、これもまた潰瘍形成ももたらしうる、糖尿病の著明な合併症の１つである。一部の実施形態では、糖尿病の神経学的合併症および血管合併症の両方に起因する糖尿病性足部潰瘍および／または同潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５２】
例示的な慢性創傷は、「外傷性潰瘍」を含みうる。例示的な外傷性潰瘍の形成は、身体に対する外傷性傷害の結果として生じうる。これらの傷害は、例えば、動脈系、静脈系、またはリンパ系に対する損傷；骨格の骨構造に対する変化；組織層（表皮、真皮、皮下軟組織、筋肉、または骨）の喪失；身体部分または臓器に対する損傷および身体部分または臓器の喪失を含む。一部の実施形態では、身体に対する外傷性傷害と関連する潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５３】
例示的な慢性創傷は、例えば、第１度熱傷（すなわち、皮膚表面の発赤領域）；第２度熱傷（水膨れ液を除去した後で自然治癒しうる水膨れの傷害部位）；第３度熱傷（皮膚全層に及ぶ熱傷で、通常、創傷治癒には手術による介入を要する）；熱湯熱傷（熱湯、熱湯熱傷を引き起こすグリースまたはラジエータ液により生じうる）；火炎熱傷（火炎により生じる場合があり、通常、深部熱傷である）；化学熱傷（酸およびアルカリにより生じる場合があり、通常、深部熱傷である）；電気熱傷（家庭周辺の低電圧または業務地における高電圧）；爆発閃光熱傷（通常は表面的な傷害）；および接触熱傷（通常、深部熱傷であり、マフラーテールパイプ、高温のアイロン、およびストーブにより生じうる）を含む熱傷の結果として生じる潰瘍形成を含む「熱傷潰瘍」を含みうる。一部の実施形態では、身体に対する熱傷と関連する潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５４】
例示的な慢性創傷は、「血管炎性潰瘍」を含みうる。血管炎性潰瘍もまた、下肢において生じ、有痛で境界が明瞭な病変であり、病変は、触知可能な紫斑および出血性水泡と関連しうる。膠原病、敗血症、および各種の血液学的障害（例えば、血小板減少症、異タンパク血症）が、この重度で急性の状態の原因となりうる。
【００５５】
例示的な慢性創傷は、壊疽性膿皮症を含みうる。壊疽性膿皮症は、単独または複数で圧痛の激しい下肢部の潰瘍として生じる。暗赤色〜紫色の穿掘性辺縁部により、化膿性の中央部欠損が取り囲まれる。生検では、血管炎が明らかとならないことが典型的である。患者の半数において、それは、潰瘍性大腸炎、限局性回腸炎、または白血病などの全身疾患と関連する。一部の実施形態では、壊疽性膿皮症と関連する潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５６】
例示的な慢性創傷は、角膜潰瘍または無痛性潰瘍を含む、眼潰瘍を含みうる。また、目の持続性上皮欠損も含まれる。これらはヒトにおいて生じる場合があり、また、競技動物（ウマなど）およびペット動物（イヌを含む）においても生じる場合がある。
【００５７】
例示的な慢性創傷は、感染性潰瘍を含みうる。感染性潰瘍は、各種生物の直接的接種の後に生じ、著明な限局性リンパ節肥大と関連しうる。Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ感染、炭疽病、ジフテリア、ブラストミセス症、スポロトリクム症、野兎病、および猫引っかき熱が例である。第１期梅毒の生殖器潰瘍は、清浄、堅固な基底を伴う無圧痛性であることが典型的である。軟性下疳および鼠径部肉芽腫の生殖器潰瘍は、ぼろぼろに汚れていっそうひどい病変となる傾向がある。一部の実施形態では、感染症と関連する潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５８】
本明細書で用いられる「離開創」という用語は、破裂または裂開した、通常は手術による創傷である創傷を指す。一部の実施形態では、離開を特徴とする、予測される速度では治癒しない創傷を治療する方法が提供される。
【００５９】
ギャップジャンクション調節剤
本明細書で説明される一部の薬剤は、細胞内へ、また細胞からの分子の輸送を調節するかまたはこれに影響を及ぼす（例えば、遮断するかまたは阻害する）ことが可能である。したがって、本明細書で説明される一部のギャップジャンクション調節剤は、細胞連絡（例えば、細胞間）を調節する。一部のギャップジャンクション調節剤は、細胞質とペリプラズム腔または細胞外腔との間における分子の移送を調節するかまたはこれに影響を及ぼす。このような薬剤は一般に、細胞質と細胞外腔または組織との間における小分子の交換に個別に関与しうるヘミチャネル（コネクソンとも呼ばれる）を標的とする。したがって、本明細書で提供される化合物は、細胞間（ギャップジャンクションを介する）または細胞と細胞外腔もしくは組織との間（ヘミチャネルを介する）における結合を直接的または間接的に低減させることが可能であり、細胞から細胞外腔内への分子の輸送の調節は、本発明の一部の化合物および実施形態の範囲内にある。
【００６０】
本発明の実施形態では、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルを通る分子の通過（例えば、輸送）に対する所望の阻害を誘発することが可能な任意の分子を用いることができる。ギャップジャンクションまたはヘミチャネルを通る分子の通過を調節する化合物はまた、特定の実施形態（例えば、細胞質から細胞外腔内への分子の通過を調節する実施形態）においても提供される。このような化合物は、ギャップジャンクションの結合解除を伴う場合であれ、伴わない場合であれ、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルを通る分子の通過を調節しうる。このような化合物は、例えば、全体的または部分的にギャップジャンクションまたはヘミチャネルの機能または活性を遮断しうる、例えば、結合タンパク質、ポリペプチド、および他の有機化合物を含む。
【００６１】
一部のギャップジャンクション阻害剤は、Ｅｖａｎｓ， Ｗ．Ｈ．およびＢｏｉｔａｎｏ， Ｓ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｔｒａｎｓ．、２９巻、６０６〜６１２頁（２００１年）において列挙されている。ギャップジャンクションおよびヘミチャネルに対するペプチド阻害剤（ペプチド模倣剤を含む）が報告されている。例えば、Ｂｅｒｔｈｏｕｄ， Ｖ．Ｍ．ら、Ａｍ Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．、２７９巻、６１９〜６２２頁（２０００年）； Ｄｅ Ｖｒｉｅｓｅら、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．、６１巻、１７７〜１８５頁（２００１年）；Ｂｏｉｔａｎｏ Ｓ．およびＥｖａｎｓ Ｗ．、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ、２７９：Ｌ６２３〜Ｌ６３０頁（２０００年）を参照されたい。
【００６２】
本明細書で用いられる「ギャップジャンクション調節剤」とは、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの活性、機能、または形成を全体的または部分的に阻止するか、低減させるか、または調節する薬剤または化合物を広く含みうる。一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの機能を全体的または部分的に阻止または低減する。一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの全体的または部分的な閉鎖を誘導する。他の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションを全体的または部分的に遮断する。一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの開口を、全体的または部分的に低減させるかまたは阻止する。一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤によるギャップジャンクションまたはヘミチャネルの前記遮断または閉鎖は、細胞外腔またはペリプラズム腔へ、また細胞外腔またはペリプラズム腔からの開口チャネルを通る低分子の流動を阻止または低減することにより、細胞外ヘミチャネル連絡を低減させることも可能であり、これを阻害することも可能である。ここでは、ヘミチャネルおよび／またはギャップジャンクションの開口を遮断するペプチド模倣剤およびギャップジャンクションリン酸化化合物が好ましい。
【００６３】
一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの活性または機能を阻止するか、低減させるか、または変化させる。本明細書で用いられるギャップジャンクションの活性または機能の調節は、ギャップジャンクションの閉鎖、ヘミチャネルの閉鎖、ならびに／またはギャップジャンクションおよび／もしくはヘミチャネルを通る分子もしくはイオンの通過を含みうる。
【００６４】
ある別の態様において、ギャップジャンクション調節剤は、例えば、脂肪族アルコール；オクタノール；ヘプタノール；麻酔剤（例えば、ハロタン）、エトレン（ethrane）、フルオタン、プロポフォール、およびチオペンタール；アナンダミド；アリールアミノベンゾアート（ＦＦＡ：親油性であるフルフェナム酸および類似の誘導体）；カルベンオキソロン；カルコン（２’５’−ジヒドロキシカルコン）；ＣＨＦ（クロロヒドロキシフラノン）；ＣＭＣＦ（３−クロロ−４−（クロロメチル）−５−ヒドロキシ−２（５Ｈ）−フラノン）；デキサメタゾン；ドキソルビシン（および他のアントラキノン誘導体）；エイコサノイドであるトロンボキサンＡ（２）（ＴＸＡ（２））模倣剤；ＮＯ（一酸化窒素）；脂肪酸（例えば、アラキドン酸、オレイン酸、およびリポキシゲナーゼ代謝物）；フェナム酸（フルフェナム酸（ＦＦＡ）、ニフルミン酸（ＮＦＡ）、およびメクロフェナム酸（ＭＦＡ））；ゲニステイン；グリチルレチン酸（ＧＡ）：１８ａ−グリチルレチン酸および１８−β−グリチルレチン酸、ならびにこれらの誘導体；リンダン；リゾホスファチジン酸；メフロキン；メナジオン；２−メチル−１，４−ナフトキノン、ビタミンＫ（３）；ナフェノピン；オカダ酸；オレアミド；オレイン酸；ＰＨ、細胞間酸化によるゲーティング、例えば、酸化剤；多価不飽和脂肪酸；脂肪酸ＧＪＩＣ阻害剤（例えば、オレイン酸およびアラキドン酸）；キニジン；キニーネ；オールトランスレチノイン酸；およびタモキシフェンを含みうる。
【００６５】
例示的なギャップジャンクション調節剤は、限定なしに述べると、ポリペプチド（例えば、ペプチド模倣剤、抗体、これらの結合フラグメント、および合成構築物）、および他のギャップジャンクション遮断剤、およびギャップジャンクションタンパク質リン酸化剤を含みうる。ギャップジャンクションを閉鎖するのに用いられる例示的な化合物（例えば、コネキシン４３のチロシン残基をリン酸化する）は、Ｊｅｎｓｅｎらによる米国特許第７，１５３，８２２号、米国特許第７，２５０，３９７号、および分類された特許公報において報告されている。例示的なペプチドおよびペプチド模倣剤は、Ｇｒｅｅｎら、ＷＯ２００６１３４４９４において報告されている。また、Ｇｏｕｒｄｉｅら、ＷＯ２００６０６９１８１；およびＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＷＯ２００３０３２９６４も参照されたい。
【００６６】
本明細書で用いられる「ギャップジャンクションリン酸化剤」は、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルの閉鎖、また、したがって、ギャップジャンクションの調節を誘導するために、コネキシンのアミノ酸残基上においてリン酸化を誘導することが可能な薬剤または化合物を含みうる。例示的なリン酸化部位は、コネキシンタンパク質上における１もしくは複数のチロシン残基、セリン残基、またはトレオニン残基を含む。一部の実施形態において、リン酸化の調節は、１または複数のコネキシンタンパク質上における１または複数の残基上において生じうる。例示的なギャップジャンクションリン酸化剤は当技術分野において周知であり、例えば、ｃ−Ｓｒｃチロシンキナーゼまたは他のＧタンパク質結合受容体アゴニストを含みうる。Ｇｉｅｐｍａｎｓ Ｂ（２００１年）、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２７６巻、１１号、８５４４〜８５４９頁を参照されたい。一実施形態において、１または複数のこれらの残基上におけるリン酸化の調節は、特に、ヘミチャネルの閉鎖を介して、ヘミチャネルの機能に影響を及ぼす。別の実施形態において、１または複数のこれらの残基上におけるリン酸化の調節は、特に、ギャップジャンクションの閉鎖を介して、ギャップジャンクションの機能に影響を及ぼす。コネキシン４３ギャップジャンクションおよびコネキシン４３ヘミチャネルの閉鎖を標的とするギャップジャンクションリン酸化剤が好ましい。
【００６７】
結合タンパク質（例えば、抗体、抗体フラグメントなど）、ペプチド、ペプチド模倣剤、およびペプチド模倣剤を含むポリペプチド化合物が、適切なギャップジャンクション調節剤である。
【００６８】
結合タンパク質は、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメント；単鎖抗体；単鎖Ｆｖ；また例えば、特定の抗体または他の結合分子と接触する抗原決定基（すなわち、一般にエピトープと称する分子の部分）に結合可能な結合ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン、組換え抗体、ならびに抗体フラグメントを含む単鎖結合分子などの単鎖結合分子を含む）を含む。抗体、抗体フラグメントなどを含むこれらの結合タンパク質は、キメラの場合もあり、ヒト化される場合もあり、他の形でこれらが投与される対象における免疫原性を低減させる場合もあり、また、合成する場合もあり、組換えにより作製する場合もあり、発現ライブラリー内において作製する場合もある。本明細書で言及され、かつ／または当技術分野においてより詳細に説明される結合分子など、当技術分野において公知であるかまたは将来的に発見される任意の結合分子が意図される。例えば、結合タンパク質は、抗体などだけではなく、リガンド、受容体、ペプチド模倣剤、または標的（例えば、コネキシン、コネクソン、ギャップジャンクション、または関連する分子）に結合する他の結合フラグメントもしくは分子（例えば、ファージディスプレイにより作製される）も含む。
【００６９】
結合分子は一般に、結合特異性を含むがこれに限定されない所望の特異性、および所望の親和性を有する。親和性は、例えば、約１０４Ｍ−１以上、約１０６Ｍ−１以上、約１０７Ｍ−１以上、約１０８Ｍ−１のＫａでありうる。約１０９Ｍ−１以上、約１０１０Ｍ−１以上、約１０１１Ｍ−１以上、および約１０１２Ｍ−１以上の親和性など、約１０８Ｍ−１をさらに超える親和性が適する。本発明による結合タンパク質の親和性は、従来の技法、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら、１９４９年、Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．、第５１巻、６６０頁により説明される技法を用いて容易に決定することができる。
【００７０】
本発明は、ギャップジャンクションおよびヘミチャネルを調節するペプチド（ペプチド模倣剤および複数のペプチド模倣剤が含まれる）の使用を含む。ヒドロパシープロットから得られるデータを用いることにより、コネキシンは、４つの膜貫通領域および２つの短い細胞外ループを含有すると仮定されている。コネキシンの第１および第２の細胞外領域の配置は、分離されたギャップジャンクション上における対応するエピトープの免疫学的局在決定に用いられる抗ペプチド抗体の作製報告によりさらに特徴づけられた（Ｇｏｏｄｅｎｏｕｇｈ Ｄ．Ａ．、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、第１０７巻、１８１７〜１８２４頁（１９８８年）； Ｍｅｙｅｒ Ｒ．Ａ．、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、第１１９巻、１７９〜１８９頁（１９９２年））。
【００７１】
ペプチドまたはこれらの変異体は、例えば、固相ペプチド合成法によっても、酵素触媒ペプチド合成によっても、組換えＤＮＡ法を援用しても、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成することができる。固相ペプチド合成法は確立されて広く用いられている方法であり、以下：Ｓｔｅｗａｒｔら（１９６９年）、「Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ； Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３年）、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、８５巻、２１４９頁； Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ、「Ｈｏｒｍｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｃ．Ｈ． Ｌｉ編、２巻（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９７３年）、４８〜２６７頁； ならびにＢａｖａａｙおよびＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｅ． ＧｒｏｓｓおよびＦ． Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、２巻（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８０年）、３〜２８５頁などの参考文献中において説明されている。これらのペプチドは、免疫親和性カラムまたはイオン交換カラム上における画分化；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカまたはＤＥＡＥなどの陰イオン交換樹脂上におけるクロマトグラフィ；等電点電気泳動；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿；例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−７５を用いるゲル濾過；リガンド親和性クロマトグラフィ；または非極性溶媒もしくは非極性／極性溶媒の混合物からの結晶化もしくは沈殿によりさらに精製することができる。結晶化または沈殿による精製が好ましい。
【００７２】
隣接する２つの細胞が寄与するヘミチャネルの細胞外ドメインが互いに「結合」して、完全なギャップジャンクションチャネルが形成される。これらの細胞外ドメインの相互作用に干渉する試薬は、細胞間連絡または細胞外環境に対するヘミチャネルの開口を損なわせ得る。
【００７３】
ギャップジャンクション調節剤は、コネキシン（例えば、コネキシン４５、４３、２６、３０、３１．１、および３７）の膜貫通領域（例えば、第１〜第４）に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含む。コネキシン４３の膜貫通領域の一部に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含むギャップジャンクション調節剤が、本発明における使用に好ましい。
【００７４】
ギャップジャンクション調節剤は、コネキシン４５の膜貫通ドメインの一部に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含みうる。ギャップジャンクション調節剤は、配列番号１の約５〜２０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号１の約８〜１５の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、または配列番号１の約１１〜１３の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他の実施形態は、配列番号１の少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドであるギャップジャンクション調節剤を対象とする。本明細書で提供される一部のギャップジャンクション調節剤では、配列番号１の位置４６〜７５および１９９〜２２８にあるアミノ酸に対応するコネキシン４５の細胞外ドメインを用いて、特定のペプチド配列を開発することができる。本明細書に記載の一部のペプチドは、配列番号１の位置４６〜７５および１９９〜２２８にある領域に対応するアミノ酸配列を有する。ペプチドは、配列番号１のこれらの部分と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、ペプチドが結合活性または機能活性を保持するような保存的アミノ酸変化を作製することができる。代替的に、ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質の領域（例えば、位置４６〜７５および１９９〜２２８に対応しない配列番号１の部分）も標的としうる。
【００７５】
また、適切なギャップジャンクション調節剤は、コネキシン４３の膜貫通領域の一部に対応するアミノ酸配列を含むペプチドも含み得る。ギャップジャンクション調節剤は、配列番号２の約５〜２０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号２の約８〜１５の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、または配列番号２の約１１〜１３の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他のギャップジャンクション調節剤は、配列番号２の少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他のギャップジャンクション調節剤は、配列番号２の位置３７〜７６および１７８〜２０８にあるアミノ酸に対応するコネキシン４３の細胞外ドメインを含む。ギャップジャンクション調節剤は、配列番号２の位置３７〜７６および１７８〜２０８にある領域に対応するアミノ酸配列を有する、本明細書に記載のペプチドを含む。ペプチドは、配列番号２のこれらの部分と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、ペプチドが結合活性または機能活性を保持するような保存的アミノ酸変化を作製することができる。代替的に、ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質の領域（例えば、位置３７〜７６および１７８〜２０８に対応しない配列番号２の部分）も標的としうる。
【００７６】
他のギャップジャンクション調節剤は、カルボキシ末端ポリペプチドを含む。
【００７７】
【化１】
【００７８】
【化２】
【００７９】
【化３】
ギャップジャンクション調節ペプチドは、ペプチドが機能的に活性なギャップジャンクション調節化合物であるような保存的アミノ酸置換を伴う、コネキシンの細胞外ドメインの一部に対応する配列を含みうる。例示的な保存的アミノ酸置換は、例えば、別の非極性アミノ酸による非極性アミノ酸の置換、別の芳香族アミノ酸による芳香族アミノ酸の置換、別の脂肪族アミノ酸による脂肪族アミノ酸の置換、別の極性アミノ酸による極性アミノ酸の置換、別の酸性アミノ酸による酸性アミノ酸の置換、別の塩基性アミノ酸による塩基性アミノ酸の置換、および別のイオン性アミノ酸によるイオン性アミノ酸の置換を含む。
【００８０】
コネキシン４３を標的とする例示的なペプチドを、以下の表１に示す。Ｍ１、２、３、および４は、それぞれ、コネキシン４３タンパク質の第１〜第４の膜貫通領域を指す。Ｅ２は、それぞれ、第１および第２の細胞外ループを指す。
【００８１】
表１：細胞間連絡に対するペプチド阻害剤（ｃｘ４３）
【００８２】
【表１】
表２は、ヘミチャネル機能またはギャップジャンクション機能を阻害するのに用いられる、さらなる例示的なコネキシンペプチドについて記載する。他の実施形態では、ペプチドまたはこれらのフラグメントに対して保存的なアミノ酸変化が作製される。
【００８３】
表２：細胞間連絡に対するさらなるペプチド阻害剤（ｃｘ３２、ｃｘ４３）
【００８４】
【表２】
表３は、本明細書で説明されるペプチド阻害剤を開発するのに用いられるコネキシンファミリーメンバーの細胞外ループについて記載する。表４に記載されるペプチドおよびこれらのフラグメントは、一部の非限定的な実施形態においてペプチド阻害剤として用いられる。他の非限定的な実施形態では、この表中のペプチドの約８〜約１５、または約１１〜約１３の連続アミノ酸を含むペプチドが、本発明のペプチド阻害剤である。ペプチドまたはこれらのフラグメントには、保存的なアミノ酸変化を作製することができる。Ｂｏｉｔａｎｏ Ｓ．およびＥｖａｎｓ Ｗ．、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ、２７９巻、６２３〜６３０頁（２０００年）を参照されたい。
【００８５】
表３：各コネキシンファミリーメンバーの細胞外ループ
【００８６】
【表３−１】
【００８７】
【表３−２】
異なるコネキシンアイソタイプのＥ２ドメイン配列を表３に示す。配列番号７のペプチドの最後の４アミノ酸が第４膜ドメインの一部であることに注意されたい。
【００８８】
表４は、ペプチドによるギャップジャンクション調節剤を開発するのに用いうるコネキシンファミリーメンバーの細胞外ドメインについて記載する。表４に記載されるペプチドおよびこれらのフラグメントもまた、ペプチドによるギャップジャンクション調節剤として用いることができる。このようなペプチドは、この表４中のペプチド配列の約８〜約１５、または約１１〜約１３の連続アミノ酸を含みうる。ペプチドまたはこれらのフラグメントには、保存的なアミノ酸変化を作製することができる。
【００８９】
表４：細胞外ドメイン
【００９０】
【表４−１】
【００９１】
【表４−２】
表５は、コネキシン４０の細胞外ループ（Ｅ１およびＥ２）に関して示されるコネキシン４０に対するペプチド阻害剤について記載する。太字のアミノ酸は、コネキシン４０の膜貫通領域を対象とする。
【００９２】
表５：Ｃｘ４０ペプチド阻害剤
【００９３】
【表５】
表６は、コネキシン４５の細胞外ループ（Ｅ１およびＥ２）に関して示されるコネキシン４５に対するペプチド阻害剤について記載する。太字のアミノ酸は、コネキシン４５の膜貫通領域を対象とする。
【００９４】
表６：Ｃｘ４５ペプチド阻害剤
【００９５】
【表６】
一部の実施形態では、一部のペプチド阻害剤が、ギャップジャンクションに対する所望の遮断なしに、ヘミチャネルを遮断することが好ましい。特定の理論または機構に拘束されることを望まないが、一部のペプチド模倣剤（例えば、ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号１１））はまた、ギャップジャンクションの結合解除を引き起こすことなくヘミチャネルを遮断するとも考えられている。ペプチドＳＲＧＧＥＫＮＶＦＩＶ（配列番号９５）は、対照配列として用いることができる（ＤｅＶｒｉｅｓｅら、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔ．、第６１巻、１７７〜１８５頁（２００２年））。コネキシン４５に対するペプチド阻害剤の例は、ＹＶＣＳＲＬＰＣＨＰ（配列番号９６）、ＱＶＨＰＦＹＶＣＳＲＬ（配列番号９７）、ＦＥＶＧＦＬＩＧＱＹＦＬＹ（配列番号９８）、ＧＱＹＦＬＹＧＦＱＶＨＰ（配列番号９９）、ＧＦＱＶＨＰＦＹＶＣＳＲ（配列番号１００）、ＡＶＧＧＥＳＩＹＹＤＥＱ（配列番号１０１）、ＹＤＥＱＳＫＦＶＣＮＴＥ（配列番号１０２）、ＮＴＥＱＰＧＣＥＮＶＣＹ（配列番号１０３）、ＣＹＤＡＦＡＰＬＳＨＶＲ（配列番号１０４）、ＦＡＰＬＳＨＶＲＦＷＶＦ（配列番号１０５）およびＬＩＧＱＹ（配列番号１０６）、ＱＶＨＰＦ（配列番号１０７）、ＹＶＣＳＲ（配列番号１０８）、ＳＲＬＰＣ（配列番号１０９）、ＬＰＣＨＰ（配列番号１１０）およびＧＥＳＩＹ（配列番号１１１）、ＹＤＥＱＳＫ（配列番号１１２）、ＳＫＦＶＣＮ（配列番号１１３）、ＴＥＱＰＧＣＥＮ（配列番号１１４）、ＶＣＹＤＡＦＡＰ（配列番号１１５）、ＬＳＨＶＲＦＷＶＦＱ（配列番号１１６）である。ペプチドは、ＳＲＬ、ＰＣＨ、ＬＣＰ、ＣＨＰ、ＩＹＹ、ＳＫＦ、ＱＰＣ、ＶＣＹ、ＡＰＬ、ＨＶＲを含む３アミノ酸長だけの場合もあり、例えば、ＬＩＱＹＦＬＹＧＦＱＶＨＰＦ（配列番号１１７）、ＶＨＰＦＹＣＳＲＬＰＣＨＰ（配列番号１１８）、ＶＧＧＥＳＩＹＹＤＥＱＳＫＦＶＣＮＴＥＱＰＧ（配列番号１１９）、ＴＥＱＰＧＣＥＮＶＣＹＤＡＦＡＰＬＳＨＶＲＦ（配列番号１２０）、ＡＦＡＰＬＳＨＶＲＦＷＶＦＱ（配列番号１２１）など、より長い場合もある。
【００９６】
例示的なペプチドはまた、例えば、コネキシンタンパク質、ＶＣＹＤＱＡＦＰＩＳＨＩＲ（配列番号：１２２）、ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号：１２３）、ＳＲＰＴＥＫＴＩＦＩＩ（配列番号：１２４）、ＳＲＰＴＥＫＮＶＦＩＶ（配列番号：１２５）、ＲＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫ（配列番号：１２６）、ＰＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫ（配列番号：１２７）、ＩＶＤＣＹＶＳＲＰＴＥＫ（配列番号：１２８）、ＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号：１２９）、ＶＣＹＤＱＡＦＰＩＳＨＩＲ（配列番号：１３０）、ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲＩ（配列番号：１３１）、ＳＲＰＴＥＫＴＩＦＩＩ（配列番号：１３２）、ＳＲＰＴＥＫＮＶＦＩＶ（配列番号：１３３）、ＲＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫ（配列番号：１３４）、ＰＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫ（配列番号：１３５）、およびＩＶＤＣＹＶＳＲＰＴＥＫ（配列番号：１３６）、ＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号：１３７）のギャップ２６および２７の細胞外ループ部分の１または複数に対して相同的な合成ペプチドを含む、ＧｒｉｆｆｉｔｈによるＷＯ２００３０３２９６４において報告されるペプチドも含みうる。
【００９７】
本明細書では、相同性および相同体について論じる。このようなポリヌクレオチドは、例えば、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約４０、少なくとも約１００以上の連続ポリヌクレオチドの領域にわたって、対象の配列と少なくとも約７０％の相同性、好ましくは少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、または少なくとも約９９％の相同性を有することが典型的である。
【００９８】
相同性は、当技術分野における任意の方法に基づいて計算することができる。例えば、ＵＷＧＣＧパッケージでは、相同性を計算するのに用いうるＢＥＳＴＦＩＴプログラム（例えば、そのデフォルト設定で用いられる）が提供される（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら（１９８４年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１２巻、３８７〜３９５頁）。ＰＩＬＥＵＰアルゴリズムおよびＢＬＡＳＴアルゴリズムは、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｓ． Ｆ．（１９９３年）、Ｊ Ｍｏｌ Ｅｖｏｌ、３６巻、２９０〜３００頁； Ａｌｔｓｃｈｕｌ， Ｓ， Ｆら（１９９０年）、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、２１５巻、４０３〜１０頁において説明される通り、相同性を計算するか、または配列を整列するのに用いることができる（それらのデフォルト設定における場合が典型的である）。
【００９９】
ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、米国立バイオテクノロジー情報センター（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）により公開されている。このアルゴリズムは、まず、データベース配列中における同じ長さのワードにより整列する場合、ある正の値の閾値スコアＴにマッチするかまたはこれを満たすクエリー配列中における長さＷの短いワードを同定することによる、高スコアリング配列対（ＨＳＰ）の同定を伴う。Ｔを、近傍ワードスコア閾値（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、前出）と称する。これらの初期近傍ワードヒットは、それらを含有するＨＳＰを見出す検索を開始するための契機として作用する。ワードヒットは、累積のアライメントスコアが増大しうる限りにおいて、各配列に沿って両方向に延長される。各方向におけるワードヒットの延長は、累積アライメントスコアが、達成されたその最大値から量Ｘだけ低減する場合；累積スコアが、１または複数の負のスコアの残基アライメントの累積により、ゼロ以下に低減する場合；またはいずれかの配列の端部に到達する場合に停止される。
【０１００】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ、およびＸにより、整列の感度および速度が決定される。ＢＬＡＳＴプログラムでは、ワード長（Ｗ＝１１）、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９９２年）、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８９巻、１０９１５〜１０９１９頁を参照されたい）によるアラインメント（Ｂ＝５０）、期待値（Ｅ＝１０）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、および両方の鎖の比較が、デフォルトのパラメータとして用いられる。
【０１０１】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムでは、２つの配列間における類似性に対する統計学的解析が実施される。例えば、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３年）、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、９０巻、５８７３〜５７８７頁を参照されたい。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の１つの尺度は、２つのアミノ酸配列の間におけるマッチが偶然に生じる確率を示す、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））である。例えば、第２の配列に対して第１の配列を比較した場合の最小合計確率が約１未満、好ましくは約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、また最も好ましくは約０．００１未満である場合、ある配列は別の配列に対して類似すると考えられる。
【０１０２】
相同配列は、少なくとも約２、５、１０、１５、２０以上（または約２、５、１０、１５、２０だけ）の変異（置換、欠失、または挿入でありうる）により対象配列と異なることが典型的である。これらの変異は、相同性の計算との関連で、上述の領域のいずれかにわたって測定することができる。
【０１０３】
相同配列は、バックグラウンドを著明に上回るレベルで、元の配列に選択的にハイブリダイズすることが典型的である。選択的なハイブリダイゼーションは、中程度〜高度に厳密な条件を用いて達成することが典型的である。しかし、このようなハイブリダイゼーションは、当技術分野（Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９年）、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」を参照されたい）において公知の任意の適切な条件下で実施することができる。
【０１０４】
ギャップジャンクション改変剤：他の抗コネキシン剤
ギャップジャンクション調節剤は、ギャップジャンクションおよび／またはヘミチャネルを閉鎖もしくは遮断するか、またはギャップジャンクションを介する細胞間情報伝達を別の形で防止するかもしくは低下させるか、またはヘミチャネルを介する細胞外環境への細胞の情報伝達を別の形で防止するかもしくは低下させる薬剤を含む。これらは、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの活性、機能、または形成を、全体的または部分的に防止するか、低下させるか、または阻害する薬剤または化合物を含む。
【０１０５】
一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの全体的または部分的な閉鎖を誘導する。他の実施形態において、ギャップジャンクション改変剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションを、全体的または部分的に遮断する。一部の実施形態において、ギャップジャンクション改変剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの開口を、全体的または部分的に低下させるかまたは防止する。
【０１０６】
一部の実施形態において、ギャップジャンクション改変剤によるギャップジャンクションまたはヘミチャネルの前記遮断または閉鎖は、細胞外腔またはペリプラズム腔への開口チャネルを介する低分子の流動を防止するかまたは低下させることにより、、また細胞外腔またはペリプラズム腔からの開口チャネルを介する低分子の流動を防止するかまたは低下させることにより、細胞外ヘミチャネル情報伝達を低下させることも可能であり、これを阻害することも可能である。
【０１０７】
ヘミチャネルまたはギャップジャンクションを閉鎖するのに用いられるギャップジャンクション改変剤（例えば、コネキシン４３のチロシン残基をリン酸化する）は、Ｊｅｎｓｅｎらへの米国特許第７，１５３，８２２号、米国特許第７，２５０，３９７号、および分類された特許公報において報告されている。例えば、ＺＯ−１タンパク質の結合を阻害すると言われるコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドに関しては、Ｇｏｕｒｄｉｅら、ＷＯ２００６０６９１８１もまた参照されたい。Ｇｏｕｒｄｉｅら、ＷＯ２００６０６９１８１は、このようなペプチドを含む製剤の使用について説明している。
【０１０８】
本明細書で用いられる「ギャップジャンクションリン酸化剤」は、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルの閉鎖を誘導するために、コネキシンのアミノ酸残基上においてリン酸化を誘導することが可能な薬剤または化合物を含みうる。例示的なリン酸化部位は、コネキシンタンパク質上における１つもしくは複数のチロシン残基、セリン残基、またはトレオニン残基を含む。一部の実施形態において、リン酸化の調節は、１または複数のコネキシンタンパク質上における１つまたは複数の残基上において生じうる。例示的なギャップジャンクションリン酸化剤は当技術分野において周知であり、例えば、ｃ−Ｓｒｃチロシンキナーゼまたは他のＧタンパク質共役受容体アゴニストを含みうる。Ｇｉｅｐｍａｎｓ Ｂ， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、第２７６巻、第１１号、８５４４〜８５４９頁、２００１年３月１６日を参照されたい。一実施形態において、１つまたは複数のこれらの残基上におけるリン酸化の調節は、特に、ヘミチャネルの閉鎖によって、ヘミチャネルの機能に影響を及ぼす。別の実施形態において、１つまたは複数のこれらの残基上におけるリン酸化の調節は、特に、ギャップジャンクションの閉鎖によって、ギャップジャンクションの機能に影響を及ぼす。コネキシン４３ギャップジャンクションおよびコネキシン４３ヘミチャネルの閉鎖を標的とするギャップジャンクションリン酸化剤が好ましい。
【０１０９】
さらに他の抗コネキシン剤は、コネキシンカルボキシ末端ポリペプチドを含む。Ｇｏｕｒｄｉｅら、ＷＯ２００６／０６９１８１を参照されたい。
【０１１０】
ある別の態様において、ギャップジャンクション改変剤は、例えば、脂肪族アルコール；オクタノール；ヘプタノール；麻酔剤（例えば、ハロタン）、エトレン、フルオタン、プロポフォール、およびチオペンタール；アナンダミド；アリールアミノベンゾアート（ＦＦＡ：親油性であるフルフェナム酸および類似の誘導体）；カルベンオキソロン；カルコン（２’，５’−ジヒドロキシカルコン）；ＣＨＦ（クロロヒドロキシフラノン）；ＣＭＣＦ（３−クロロ−４−（クロロメチル）−５−ヒドロキシ−２（５Ｈ）−フラノン）；デキサメタゾン；ドキソルビシン（および他のアントラキノン誘導体）；エイコサノイドであるトロンボキサンＡ（２）（ＴＸＡ（２））模倣剤；ＮＯ（一酸化窒素）；脂肪酸（例えば、アラキドン酸、オレイン酸、およびリポキシゲナーゼ代謝物）；フェナム酸（フルフェナム酸（ＦＦＡ）、ニフルミン酸（ＮＦＡ）、およびメクロフェナム酸（ＭＦＡ））；ゲニステイン；グリチルレチン酸（ＧＡ）：１８ａ−グリチルレチン酸および１８−β−グリチルレチン酸、ならびにこれらの誘導体；リンダン；リゾホスファチジン酸；メフロキン；メナジオン；２−メチル−１，４−ナフトキノン、ビタミンＫ（３）；ナフェノピン；オカダ酸；オレアミド；オレイン酸；ＰＨ、細胞内酸性化によるゲーティング、例えば、酸性化剤；多価不飽和脂肪酸；脂肪酸ＧＪＩＣ阻害剤（例えば、オレイン酸およびアラキドン酸）；キニジン；キニーネ；全 トランス−レチノイン酸；およびタモキシフェンを含みうる。
【０１１１】
用量、製剤、および投与
本発明のギャップジャンクション調節剤（本明細書で論じられる製剤の形態における場合が典型的）は、本明細書で言及される創傷のいずれかを有する対象など、治療を必要とする対象に投与することができる。こうして、対象の創傷を改善することができる。したがって、ギャップジャンクション調節剤および製剤は、治療による対象の身体の処置に用いることができる。これらは、本明細書で言及される創傷のいずれかを治療する医薬の製造において用いることができる。
【０１１２】
したがって、本発明により、細胞間連絡および／またはヘミチャネル連絡を一過性におよび部位特異的な形で下方調節しうる製剤が提供される。ギャップジャンクション調節剤は、所望の最終濃度を与える薬学的に許容される担体により処方されると好都合でありうる。
【０１１３】
ギャップジャンクション調節剤は、実質的に単離形態で存在しうる。生成物は、生成物の意図される目的に干渉しない担体または希釈剤と混合することができ、これをなおも実質的に単離状態にあるとみなしうることが理解される。本発明の生成物はまた、実質的に精製形態の場合もあり、この場合、生成物は一般に、ペプチド（または他のギャップジャンクション調節剤）の、または調製物の乾燥質量の、約８０％、８５％、または９０％、例えば、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％を含む。
【０１１４】
意図される投与の経路に応じて、本発明の医薬品、医薬組成物、組合せ調製物、および薬剤は、例えば、溶液、懸濁液、点滴、軟膏剤（ｓａｌｖｅｓ）、クリーム、ゲル、泡沫、スプレー、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、エマルジョン、ローション、ペイント、持続放出製剤、または粉末の形態をとる可能性があり、（１または複数の）有効成分の０．１％〜約１％、（１または複数の）有効成分の約１％〜約５０％、（１または複数の）有効成分の約２％〜約６０％、（１または複数の）有効成分の約２％〜約７０％、または（１または複数の）有効成分の約９０％までを含有することが典型的である。他の適切な製剤は、プロニックゲルベースの製剤、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）ベースの製剤、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ｈｙｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）（ＨＰＭＣ）ベースの製剤を含む。プルロニックゲルを含む適切な製剤は、例えば、約１０〜約１５パーセント、適切には約１２パーセントを含む。他の有用な製剤は、徐放調製物または遅延放出調製物を含む。
【０１１５】
ゲルまたはゼリーは、ゼラチン、トラガカント、またはセルロース誘導体を含むがこれらに限定されない適切なゲル化剤を用いて作製することができ、保湿剤、皮膚軟化剤、および防腐剤としてグリセロールを含みうる。軟膏は、脂肪基剤、蝋基剤、または合成基剤中に組み込まれた有効成分からなる半固体調製物である。適切なクリームの例は、油中水エマルジョンおよび水中油エマルジョンを含むがこれらに限定されない。油中水クリームは、セチルアルコールまたはセトステアリルアルコールなどの脂肪族アルコールによる乳化剤および乳化蝋と類似するがこれらに限定されない特性を有する適切な乳化剤を用いて調合することができる。水中油クリームは、セトマクロゴール乳化蝋などの乳化剤を用いて調合することができる。適切な特性は、エマルジョンの粘稠度を変化させる能力、および広範なｐＨにわたる物理および化学の両面における安定性を含む。水溶性または混和性のクリーム基剤は、防腐剤系を含有する場合があり、また、許容される生理学的なｐＨを維持するように緩衝化することもできる。
【０１１６】
泡沫調製物は、不活性の噴霧剤を用いる適切なアプリケーターにより、加圧エアゾールキャニスターから送達するように調合することができる。泡沫基剤の製剤に適する賦形剤は、プロピレングリコール、乳化蝋、セチルアルコール、およびステアリン酸グリセリルを含むがこれらに限定されない。潜在的な防腐剤は、メチルパラベンおよびプロピルパラベンを含む。
【０１１７】
本発明のギャップジャンクション調節剤を薬学的に許容される担体または希釈剤と組合せて、医薬組成物を作製することが好ましい。適切な担体および希釈剤は、等張性の食塩液、例えば、リン酸塩緩衝化食塩液を含む。適切な希釈剤および賦形剤はまた、例えば、水、食塩液、デキストロース、グリセロールなど、およびこれらの組合せ物も含む。加えて、所望の場合、保湿剤または乳化剤、安定化剤またはｐｈ緩衝剤などの物質もまた存在しうる。
【０１１８】
「薬学的に許容される担体」という用語は、組成物を投与される個体に有害な抗体の生成をそれ自体では誘導せず、不適切な毒性なしに投与しうる任意の薬学的な担体を指す。適切な担体は、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、およびアミノ酸コポリマーなどの大型でゆっくりと代謝される高分子でありうる。
【０１１９】
例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩などのような鉱酸塩、および酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩などの有機酸塩など、薬学的に許容される塩もまた存在しうる。
【０１２０】
適切な担体物質は、局所投与用のクリーム、ローション、スプレー、泡沫、ゲル、エマルジョン、ローション、またはペイントのための基剤として一般に用いられる任意の担体またはビヒクルを含む。例は、乳化剤、炭化水素による基剤を含む不活性担体、乳化基剤、非毒性溶媒、または水溶性の基剤を含む。特に適切な例は、プルロニック、ＨＰＭＣ、ＣＭＣ、および他のセルロース基剤の成分、ラノリン、硬質パラフィン、液体パラフィン、軟質黄色パラフィン、または軟質白色パラフィン、白色蜜蝋、黄色蜜蝋、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、ジメチコーン、乳化蝋、ミリスチン酸イソプロピル、微晶質蝋、オレイルアルコール、およびステアリルアルコールを含む。
【０１２１】
薬学的に許容される担体またはビヒクルは、ゲルであることが好ましく、非イオン性ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーゲル、例えば、プルロニックゲル、好ましくはＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７（ＢＡＳＦ Ｃｏｒｐ．）であることが適切である。このゲルは、低温では液体であるが、生理学的温度では急速に固まり、これにより、ＯＤＮ成分の放出が適応部位またはその部位にすぐの近接部位に限定されるので特に好ましい。
【０１２２】
カゼイン、ゼラチン、アルブミン、膠、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、またはポリビニルアルコールなどの補助剤もまた、本発明の製剤中に組み入れることができる。
【０１２３】
他の適切な製剤は、プロニックゲル基剤の製剤、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）基剤の製剤、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）基剤の製剤を含む。組成物は、局所投与、点滴投与、非経口投与、筋肉内投与、皮下投与、または経皮投与を含む、任意の所望の送達形態に応じて調合することができる。他の有用な製剤は、徐放調製物または遅延放出調製物を含む。
【０１２４】
所与の対象または創傷に対して有効な用量は、日常的な実験または当技術分野において公知であるかもしくは将来的に開発される他の方法により決定することができる。例えば、ある範囲の用量値を調合するために、細胞培養アッセイおよび動物試験を用いることができる。このような化合物の用量は、集団の少なくとも５０％に対して治療的に有効な用量内にあり、このレベルにおいてほとんどまたはまったく毒性を示さないことが好ましい。
【０１２５】
本発明の方法および組成物において用いられる各ギャップジャンクション調節剤の有効用量は、多数の因子（用いられる１または複数の特定のギャップジャンクション調節剤、投与方式、投与頻度、治療される創傷、治療される創傷の重症度、投与経路、治療される患者部分集団の要件、またはその患者の異なる要件が、その患者に特異的な年齢、性別、体重、対象の治療創傷に起因しうる個々の患者の要件が挙げられる）に応じて異なりうる。
【０１２６】
患者にギャップジャンクション調節剤が投与される場合の用量は、患者の年齢、体重、および全般的な創傷、治療される創傷、ならびに投与される特定のギャップジャンクション調節剤など、各種の因子に依存する。
【０１２７】
適切な用量は対象の体重ｋｇ当たりのギャップジャンクション調節剤の量に基づく場合があり、これは、約０．０１〜約４０ｍｇ／体重ｋｇなど、約０．００１〜約１００ｍｇ／体重ｋｇを含む。しかし、適切な用量は、約０．０１〜約０．０５０ｍｇ／体重ｋｇなど、約０．００１〜約０．１ｍｇ／体重ｋｇでありうる。
【０１２８】
適切な用量は、約０．０１〜約０．１ｍｇ／体重ｋｇなど、約０．００１〜約０．１ｍｇ／体重ｋｇでありうる。しかし、適切な用量は、約０．００１〜約０．０５０ｍｇ／体重ｋｇを含む、約０．００１〜約０．２５ｍｇ／体重ｋｇでありうる。代替的に、例えば、一部の実施形態において、各対象化合物の用量は一般に、体重ｋｇ当たり約１ｎｇ〜約１マイクログラム、体重ｋｇ当たり約１ｎｇ〜約０．１マイクログラム、体重ｋｇ当たり約１ｎｇ〜約１０ｎｇ、体重ｋｇ当たり約１０ｎｇ〜約０．１マイクログラム、体重ｋｇ当たり約０．１マイクログラム〜約１マイクログラム、体重ｋｇ当たり約２０ｎｇ〜約１００ｎｇ、体重ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約１００ｍｇ、体重ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇ、または体重ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約１ｍｇの範囲である。一部の実施形態において、各対象化合物の用量は一般に、約０．００１ｍｇ〜約０．０１ｍｇ、体重ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約０．１ｍｇ、体重ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約１ｍｇ、または体重ｋｇ当たり約１ｍｇ〜約１０ｍｇの範囲である。複数種のギャップジャンクション調節剤を用いる場合、各ギャップジャンクション調節剤の用量は、他の用量と同じ範囲である必要はない。
【０１２９】
適用当たり約１〜１００、２００、３００、４００、５００マイクログラム、および最大１ミリグラムの用量が適切である。ギャップジャンクション調節剤の投与量は、例えば、約１、約２、約３、約４、または約５マイクログラム、約５〜約１０マイクログラム、約１０〜約１５マイクログラム、約１５〜約２０マイクログラム、約２０〜約３０マイクログラム、約３０〜約４０マイクログラム、約４０〜約５０マイクログラム、約５０〜約７５マイクログラム、約７５〜約１００マイクログラム、約１００マイクログラム〜約２５０マイクログラム、および２５０マイクログラム〜約５００マイクログラムを含む。０．５〜約１．０ミリグラム以上の投与量もまた提供される。
【０１３０】
代替的に、本発明の組成物中における各ギャップジャンクション調節剤の用量は、それが適用される領域のサイズ、長さ、深さ、面積、または容積に対する組成物の濃度を基準として決定することができる。例えば、一部の局所適用において、医薬組成物の用量は、医薬組成物の質量（例えば、グラム）または適用領域の長さ、深さ、面積、もしくは容積当たりの医薬組成物の濃度（例えば、μｇ／ｕｌ）に基づいて計算することができる。したがって、他の有用な用量は、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１〜約１０マイクログラムの範囲にある。一部の用量は、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１〜２、約１〜５、約２〜４、約５〜７、および約８〜１０マイクログラムである。他の有用な用量は、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１０マイクログラムを超え、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１５マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約２０マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約２５マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約３０マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約３５マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約４０マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約５０マイクログラム、および創傷サイズの平方センチメートル当たり約１００〜約１５０マイクログラムを含む。他の用量は、平方センチメートル当たり約１５０〜２００マイクログラム、平方センチメートル当たり約２００〜２５０マイクログラム、平方センチメートル当たり約２５０〜３００マイクログラム、平方センチメートル当たり約３００〜３５０マイクログラム、平方センチメートル当たり約３５０〜４００マイクログラム、および平方センチメートル当たり約４００〜５００マイクログラムを含む。さらに他の用量は、平方センチメートル当たり５００〜１０００マイクログラムの範囲の用量を含む。他の用量は、平方センチメートル当たり１〜１０ミリグラムでありうる。持続放出製剤は、抗コネキシンペプチドおよび抗コネキシンペプチド模倣剤に特に適切でありうる。
【０１３１】
一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤組成物は、治療部位において、かつ／または治療部位に隣接して、約０．０１マイクロモル濃度（μＭ）または０．０５μＭ〜約２００μＭ、または最大３００μＭ、または最大１０００μＭ、または最大２０００μＭ、または最大３２００μＭ以上の最終濃度、およびこれらの用量数値内にある任意の用量および用量範囲で適用することができる。抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤の組成物を含むギャップジャンクション調節剤は約０．０５μＭ〜約１００μＭの最終濃度で適用されることが好ましく、ギャップジャンクション調節剤組成物は約１．０μＭ〜約５０μＭの最終濃度で適用されることがより好ましく、ギャップジャンクション調節剤組成物は約５〜１０μＭ〜約３０〜５０μＭの最終濃度で適用されることがより好ましい。加えて、混合されたギャップジャンクション調節剤組成物は約８μＭ〜約２０μＭの最終濃度で適用され、また代替的に、ギャップジャンクション調節剤組成物は約１０μＭ〜約２０μＭの最終濃度、または約１０〜約１５μＭの最終濃度で適用される。他の一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、約１０μＭの最終濃度で適用される。他の実施形態において、抗コネキシン剤は、約２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ、１０〜２００μＭ、２００〜３００μＭ、３００〜４００μＭ、４００〜５００μＭ、５００〜６００μＭ、６００〜７００μＭ、７００〜８００μＭ、８００〜９００μＭ、９００〜１０００、または１０００〜１５００μＭ、もしくは１５００μＭ〜２０００μＭ、もしくは２０００μＭ〜３０００μＭ以上の最終濃度、またはこれらの範囲内の任意の用量で適用される。
【０１３２】
さらに別の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、約１〜１５μＭの最終濃度で適用される。
【０１３３】
ギャップジャンクション調節剤の投与量は、例えば、約０．１〜１、１〜２、２〜３、３〜４、または４〜５マイクログラム（μｇ）、約５〜約１０μｇ、約１０〜約１５μｇ、約１５〜約２０μｇ、約２０〜約３０μｇ、約３０〜約４０μｇ、約４０〜約５０μｇ、約５０〜約７５μｇ、約７５〜約１００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、および２５０μｇ〜約５００μｇを含む。上記で言及した通り、０．５〜約１．０ミリグラム以上の投与量もまた提供される。
【０１３４】
投与容量は治療される部位のサイズに依存し、例えば、約２５〜１００μＬ〜約１００〜２００μＬ、約２００〜５００μＬ〜約５００〜１０００μＬの範囲でありうる。より大きな治療部位には、ミリリットル用量もまた適切である。
【０１３５】
上記組成物は、投与後少なくとも約０．５〜１時間、少なくとも約１〜２時間、少なくとも約２〜４時間、少なくとも約４〜６時間、少なくとも約６〜８時間、少なくとも約８〜１０時間、少なくとも約１２時間、または少なくとも約２４時間にわたって上記コネキシンタンパク質の発現を下方調節するか、またはギャップジャンクションの形成もしくはコネクソンの開口を調節するのに十分な量で投与されると好都合である。
【０１３６】
本発明の組成物および方法における各ギャップジャンクション調節剤の用量はまた、それが適用される領域のサイズ、長さ、深さ、面積、または体積に対する組成物の濃度を基準として決定することもできる。例えば、一部の局所適用および他の適用、例えば、点滴において、医薬組成物の用量は、医薬組成物の質量（例えば、マイクログラム）または適用領域の長さ、深さ、面積、もしくは体積当たりの医薬組成物の濃度（例えば、μｇ／ｕｌ）に基づいて計算することができる。
【０１３７】
複数種のギャップジャンクション調節剤を組み合わせて用いることにより、異なる成分の効果の発生および持続が補完的となりうるため、任意の個々の成分に対して必要とされる用量を低減することができる。このような組合せ療法において、異なる活性薬剤は、共に送達することもでき、個別に送達することもでき、また、同時に送達することもでき、１日のうちの異なる時点において送達することもできる。
【０１３８】
用量は、単一の適用で投与することもでき、適用を分割して投与することもできる。用量は、一度に投与することもでき、適用を反復することもできる。約毎週１回、または創傷治癒が停滞するかもしくは遅れると考えられうる場合に反復適用を行うことが典型的である。用量は、１〜７日間以上の間隔で適用することができる。例えば、毎週、もしくは隔週、もしくは毎月、または他の頻度、例えば、創傷治癒が遅れるかもしくは停滞する場合および時点において反復適用を行うことができる。代替的に、一部の眼科使用など一部の適応の場合、最高１時間ごとのより高頻度の投与を用いることができる。
【０１３９】
１または複数のギャップジャンクション調節剤を、同じ経路または異なる経路を介して投与することができる。１または複数のギャップジャンクション調節剤は、固体支持体（包帯材および他のマトリックスなど）および医薬製剤（ゲル、混合物、懸濁液、および軟膏など）を用いる局所投与を含むがこれらに限定されない局所投与（末梢投与または部位への直接投与）により送達されることが好ましい。一実施形態において、固体支持体は、生体適合膜または治療部位内への挿入を含む。別の実施形態において、固体支持体は、包帯材またはマトリックスを含む。本発明の一実施形態において、固体支持体組成物は、１または複数のギャップジャンクション調節剤が、アルギン酸塩、コラーゲン、または合成の生体吸収性ポリマーのマトリックスなどの徐放固体マトリックス中に分散される、徐放の固体支持体組成物でありうる。固体支持体組成物は、無菌であるかまたは低バイオバーデンであることが好ましい。一実施形態では、１つ以上のギャップジャンクション調節剤を含む洗浄液を用いることができる。
【０１４０】
製剤のギャップジャンクション調節剤成分を、ある時間、場合によって、約１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８、または約２４時間以上にわたり送達することは、一部の整形外科治療、またはより重度の傷害もしくは創傷、または慢性創傷もしくは治癒が遅延している創傷において特に有利でありうる。場合によって、細胞喪失は、手術部位をはるかに超えて、周囲の細胞にまで拡大しうる。このような喪失は、元の手術から２４時間以内に生じる可能性があり、ギャップジャンクションによる細胞間連絡を介する。したがって、例えば、コネキシン発現の下方調節、またはコネクソン開口の遮断のための（１または複数の）ギャップジャンクション調節剤の投与により、細胞間連絡、またはコネクソン調節の場合には細胞外腔内への喪失が調節され、さらなる細胞の喪失もしくは傷害または傷害の帰結が最小化される。
【０１４１】
下方調節が誘導される部位および所望される治療効果の両方に送達時間が依存する一方で、約１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８時間、または約２４時間以上にわたる連続送達または徐放送達がもたらされる。本発明によれば、これは、ギャップジャンクション調節剤を、薬学的に許容される担体または媒体と併せた製剤中に組み入れることにより達成される。
【０１４２】
ある態様により、ギャップジャンクション調節剤は、局所投与（治療される部位において投与）することができる。一態様では、ギャップジャンクション調節剤を薬学的に許容される担体または希釈剤と混合して、医薬組成物を作製することが好ましい。適切な担体および希釈剤は、等張性の生理食塩液、例えば、リン酸緩衝生理食塩液を含む。別の態様において、組成物は、筋肉内投与、皮下投与、または経皮投与用に処方することができる。
【０１４３】
本明細書で説明される投与経路および用量は、任意の特定の患者および創傷に対する用量の指針だけのものとして意図される。
【０１４４】
包帯材およびマトリックス
一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、包帯材またはマトリックスの形態で提供される。一部の実施形態では、本発明のギャップジャンクション調節剤が直接的な適用のための液体組成物、半固体組成物、もしくは固体組成物の形態で提供されるか、あるいは組成物が包帯材ガーゼもしくはマトリックスなどの固体接触層の表面へと適用されるか、またはこの中へと組み込まれる。包帯材組成物は、例えば、流体またはゲルの形態で提供することができる。１または複数のギャップジャンクション調節剤は、局所適用のための従来の医薬賦形剤と組合せて提供することができる。適切な担体は、プルロニックゲル、ポロキサマーゲル、セルロース誘導体（ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびこれらの混合物を含む）を含有するヒドロゲル；ならびにポリアクリル酸を含有するヒドロゲル（Ｃａｒｂｏｐｏｌｓ）を含む。適切な担体はまた、局所医薬調製物に用いられるクリーム／軟膏、例えば、セトマクロゴール乳化軟膏に基づくクリームも含む。上記の担体は、アルギン酸塩（増粘剤または刺激剤として）、ベンジルアルコールなどの防腐剤、リン酸水素二ナトリウム／リン酸二水素ナトリウムなどのｐＨ調整のための緩衝液、塩化ナトリウムなどの浸透圧を調整するための薬剤、およびＥＤＴＡなどの安定化剤を含みうる。
【０１４５】
一実施形態において、１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、例えば、抗コネキシン４３ペプチドまたは抗コネキシン４３ペプチド模倣剤は、天然または合成のマトリックス上において投与される。
【０１４６】
適切な包帯材またはマトリックスは、例えば、１または複数のギャップジャンクション調節剤を伴う以下のものを含みうる。コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。
【０１４７】
１）吸収材：適切な吸収材は、例えば、セルロース、木綿、またはレーヨンなどの高度に吸収性の繊維層と組み合わせた、例えば、半接着質または非接着層をもたらしうる、例えば、吸収性包帯材を含みうる。代替的に、吸収材は、主要な（ｐｒｉｍａｒｙ）包帯材または補助的な（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ）包帯材として用いることができる。
【０１４８】
２）アルギン酸塩：適切なアルギン酸塩は、例えば、天然の多糖繊維または海藻に由来するキセロゲルからなる不織パッド、非接着パッド、およびリボンである包帯材を含む。適切なアルギン酸塩包帯材は、例えば、滲出物との接触の場合イオン交換過程を介して湿潤ゲルを形成しうる。一部の実施形態において、アルギン酸塩包帯材は、やわらかく快適であり、不規則的な形状をした領域上での填塞、陥入、または適合が容易であるように設計される。一部の実施形態において、アルギン酸塩包帯材は、第２の包帯材と共に用いることができる。
【０１４９】
３）抗菌包帯材：適切な抗菌包帯材は、例えば、例えば銀およびポリヘキサメチレンビグアニド（ＰＨＭＢ）などの生体活性薬剤の送達を促進して、これが必要であるかまたは望ましい場所で、感染に対する効力を維持しうる包帯材を含みうる。一部の実施形態において、適切な抗菌包帯材は、例えば、スポンジ、浸透化織りガーゼ、フィルム包帯材、吸収性製品、アイランド包帯材、ナイロン繊維、非接着バリア、または材料の組合せとして入手可能でありうる。
【０１５０】
４）生体物質および生合成物質：適した生体物質包帯材または生合成物質包帯材は、例えば、天然供給源に由来するゲル、溶液、または半透性シートを含みうる。一部の実施形態において、ゲルまたは溶液は、治療部位に適用され、バリア保護のための包帯材により被覆される。別の実施形態では、膜として作用する可能性があり、単回の適用後においてその場に残存するシートをｉｎ ｓｉｔｕで配置する。
【０１５１】
５）コラーゲン：適切なコラーゲン包帯材は、例えば、ウシ、ブタ、もしくは鳥類の供給源、または他の天然の供給源もしくはドナーに由来する、例えば、ゲル、パッド、粒子、ペースト、粉末、シート、または溶液を含みうる。一部の実施形態において、コラーゲン包帯材は、治療部位における滲出物と相互作用してゲルを形成しうる。一部の実施形態において、コラーゲン包帯材は、補助的な包帯材と組み合わせて用いることができる。
【０１５２】
６）複合材料：適切な複合材料包帯材は、例えば、物理的に異なる成分を単一の生成物へと混合して、例えば、細菌バリア、吸収、および接着など複数の機能を提供する包帯材を含みうる。一部の実施形態において、複合材料包帯材は、例えば、複数の層からなり、半接着パッドまたは非接着パッドを組み込む。一部の実施形態において、複合材料はまた、例えば、接着性の輪郭を有する不織布製テープまたは透明フィルムも含む。他の一部の実施形態において、複合材料包帯材は、例えば、主要な包帯材としても補助的な包帯材としても機能することが可能であり、さらに別の実施形態において、包帯材は、局所医薬組成物と組み合わせて用いることができる。
【０１５３】
７）接触層：適切な接触層包帯材は、例えば、ある領域上に配置されて、例えば、治療部位に適用された他の薬剤または包帯材との直接的な接触から組織を保護する、薄型の非接着シートを含みうる。一部の実施形態において、接触層は、治療部位領域の形状に調和するように配置することができ、また多孔性であるため、透過する滲出物を、上部の補助的な包帯材に吸収させることができる。さらに別の実施形態において、接触層包帯材は、局所医薬組成物と組み合わせて用いることができる。
【０１５４】
８）弾性包帯：適切な弾性包帯は、例えば、伸縮して身体の外形に調和する包帯材を含みうる。一部の実施形態において、繊維成分は、例えば、木綿、ポリエステル、レーヨン、またはナイロンを含みうる。他の一部の実施形態において、弾性包帯は、例えば、第２層としてのまたは補助的包帯材としての吸収をもたらし、被覆をその場に保持するか、圧力を加えるか、または治療部位にクッションを与えることができる。さらに別の実施形態において、接触層包帯材は、局所医薬組成物と組み合わせて用いることができる。
【０１５５】
９）発泡体：適切な発泡体包帯材は、例えば、流体の保持が可能な小さな開放セルを有する、発泡ポリマー溶液（ポリウレタンを含む）のシートおよび他の形状を含みうる。例示的な発泡体は、例えば、他の材料と組み合わせて浸透化または層状化することができる。一部の実施形態では、発泡体の厚さおよび組成に基づいて吸収能を調製することができる。他の一部の実施形態において、治療部位と接触する領域は、取り外しを容易とするために非接着性でありうる。さらに別の実施形態において、発泡体は、接着性の輪郭および／または抗感染性バリアとして働きうる透明のフィルムコーティングと組み合わせて用いることができる。
【０１５６】
１０）ガーゼおよび不織包帯材：適切なガーゼ包帯材および織地包帯材は、例えば、吸収性の程度が多様な乾燥織地スポンジまたは吸収性の程度が多様な乾燥不織スポンジおよび吸収性の程度が多様な乾燥織地ラップまたは吸収性の程度が多様な乾燥不織ラップを含みうる。例示的な繊維組成物は、例えば、木綿、ポリエステル、レーヨンを含みうる。一部の実施形態において、ガーゼおよび不織包帯材は、バルクにおいて滅菌の場合であれ非滅菌の場合であれ、また、接着性の輪郭を伴う場合であれ伴わない場合であれ入手可能でありうる。例示的なガーゼ包帯材および不織包帯材は、各種の治療部位を消毒、パッキング、被覆に用いることができる。
【０１５７】
１１）親水コロイド：適切な親水コロイド包帯材は、例えば、ゼラチン、ペクチン、またはカルボキシメチルセルロースからなるウェハー、粉末、またはペーストを含みうる。一部の実施形態において、ウェハーは自己接着性であり、接着性の輪郭を伴う場合であれ伴わない場合であれ入手可能であり、また多種多様な形状およびサイズで入手可能である。例示的なハイドロコロイドは、外形合わせを必要とする領域において有用である。一部の実施形態において、粉末およびペーストの親水コロイドは、第２の包帯材と組み合わせて用いることができる。
【０１５８】
１２）ヒドロゲル（アモルファス）：適切なアモルファスヒドロゲル包帯材は、例えば、水分を与え、湿潤性の治癒環境を維持し、治療部位に水分を補給するように設計された、水、ポリマー、および不定形の他の成分による製剤を含みうる。一部の実施形態において、ヒドロゲルは、補助的な包帯材カバーと組み合わせて用いることができる。
【０１５９】
１３）ヒドロゲル：浸透化包帯材：適切な浸透化ヒドロゲル包帯材は、例えば、アモルファスヒドロゲルに浸したガーゼおよび不織スポンジ、ロープ、ならびにストリップを含みうる。アモルファスヒドロゲルは、例えば、乾燥治療部位に水分を与え、湿潤性の治癒環境を維持するように設計された、水、ポリマー、および不定形の他の成分による製剤を含みうる。
【０１６０】
１４）ヒドロゲルシート：適切なヒドロゲルシートは、例えば、水中において不溶性であり、膨潤により水溶液と相互作用する、架橋された親水性ポリマーの三次元ネットワークを含みうる。例示的なヒドロゲルは、高度に適合性でありそして透過性であり、それらの組成に応じて、広範な量のドレナージを吸収できる。一部の実施形態において、ヒドロゲルは、治療部位に対して非接着性であるか、または取り外しが容易であるように処置される。
【０１６１】
１５）浸透化包帯材：適切な浸透化包帯材は、例えば、溶液、エマルジョン、油、ゲル、または例えば、食塩液、油、亜鉛塩、ワセリン、ゼロフォーム（ｘｅｒｏｆｏｒｍ）、およびスカーレットレッド（ｓｃａｒｌｅｔ ｒｅｄ）のほか、本明細書に記載の化合物を含む、他の一部の薬学的に活性な化合物もしくは担体薬剤に浸したガーゼおよび不織スポンジ、ロープ、ならびにストリップを含みうる。
【０１６２】
１６）シリコンゲルシート：適切なシリコンゲルシート包帯材は、例えば、メッシュまたは布により補強されるかまたはこれに結合した架橋ポリマーからなる軟質カバーを含みうる。
【０１６３】
１７）溶液：適切な液体包帯材は、例えば、細胞外マトリックス中に見出される多タンパク質物質および他のエレメントの混合物を含みうる。一部の実施形態では、デブリドマンおよび洗浄の後において例示的な溶液を治療部位に適用し、次いで、吸収性包帯材または非接着性パッドにより被覆することができる。
【０１６４】
１８）透明フィルム：適切な透明フィルム包帯材は、片面が接着剤によりコーティングされる、多様な厚さのポリマー膜を含みうる。一部の実施形態において、透明フィルムは液体、水、および細菌に対しては不透過性であるが、水蒸気および大気中の気体に対しては透過性である。一部の実施形態では、透明性により、治療部位が視覚化される。
【０１６５】
１９）充填剤：適切な充填剤包帯材は、例えば、ビーズ、クリーム、発泡体、ゲル、軟膏、パッド、ペースト、クッション（ｐｉｌｌｏｗ）、粉末、ストランド、または他の調合物を含みうる。一部の実施形態において、充填剤は非接着性であり、経時放出型抗菌剤を含みうる。例示的な充填剤は、湿潤環境の維持、滲出物の管理、また、例えば、部分層創傷および全層創傷、感染創傷、排液性創傷、およびパッキングを要する深部創傷の治療に有用でありうる。
【０１６６】
本明細書で言及または説明される疾患、障害、および／または状態を有するか、またはこれらを有することが疑われる対象を治療する方法のいずれかでは、本明細書で説明される用量、剤形、製剤、および／または組成物のいずれかが投与されうる。
【０１６７】
ペプチドおよび他のギャップジャンクション調節組成物
本発明は、ギャップジャンクション調節化合物（ペプチド模倣剤を含む）を含む医薬組成物に関する。組成物は、例えば、慢性創傷、また本明細書で説明される他の創傷を含む、治癒が遅延しているかまたは困難な創傷の治癒を増強または促進するのに有用である。同様に、他の組織損傷の場合、本発明の方法および組成物は、創傷治癒過程の促進および炎症の軽減の両方において有効である。したがって、本発明の製剤および組成物は、慢性創傷および治癒の遅い創傷、ならびに本明細書で説明される他の創傷の治療において明らかな利益をもたらす。
【０１６８】
一部の実施形態において、本発明の組成物は、有効量の１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む。一実施形態において、組成物は、１つのコネキシンだけに関連するギャップジャンクションを標的とするギャップジャンクション調節剤を含有する。このギャップジャンクションは、コネキシン４３タンパク質と関連することが最も好ましい。
【０１６９】
代替的に、組成物は、複数種のコネキシンタンパク質と関連するギャップジャンクションを標的とする１または複数のギャップジャンクション調節剤を含みうる。調節物質が対象とする１種のコネキシンタンパク質は、コネキシン４３であることが好ましい。調節物質が対象とする他のギャップジャンクションは、例えば、コネキシン２６、３０、３０．３、３１．１、３２、３６、３７、４０、４０．１、４４．６、４５、および４６と関連するギャップジャンクションを含みうる。
【０１７０】
他の実施形態において、本発明の組成物は、（ａ）有効量の１または複数のギャップジャンクション調節剤と、（ｂ）薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む。一態様において、本発明は、（ａ）１または複数のポリペプチドと、（ｂ）薬学的に許容される担体または希釈剤とを提供する。好ましい実施形態において、ポリペプチドは、コネキシン２６、３１．１、３２、３７、４０、４３、もしくは４５のペプチド模倣剤またはこの相同体である。他の実施形態において、ポリペプチドは、コネキシン３０、３０．３、３６、４０．１、４４．６、４５、もしくは４６のペプチド模倣剤またはこの相同体である。
【０１７１】
一態様において、本発明は、（ａ）１または複数の結合タンパク質と、（ｂ）薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、結合タンパク質は抗体である。好ましい実施形態において、結合タンパク質は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ、単鎖結合分子である。一実施形態において、結合タンパク質、例えば、抗体は、コネキシンポリペプチド、好ましくは、コネキシン２６、コネキシン３０、コネキシン３１．１、コネキシン３２、コネキシン３７、コネキシン４０、もしくはコネキシン４５のポリペプチドまたはこの任意の部分に特異的に結合する。好ましい一実施形態において、結合タンパク質、例えば、抗体は、コネキシン４３ポリペプチドまたはこの任意の部分に特異的に結合する。一実施形態において、結合タンパク質はコネキシンポリペプチドに特異的に結合し、約１０４Ｍ−１以上、約１０６Ｍ−１以上、約１０７Ｍ−１以上、約１０８Ｍ−１の親和性を有する。約１０９Ｍ−１、約１０１０Ｍ−１、約１０１１Ｍ−１、および約１０１２Ｍ−１以上の親和性など、約１０８Ｍ−１をさらに超える親和性が適する。
【０１７２】
別の態様において、医薬組成物は、（ａ）１または複数の結合タンパク質と、（ｂ）薬学的に許容される担体または希釈剤とを含み、結合タンパク質はペプチド阻害剤である。一実施形態において、ペプチド阻害剤は、コネキシン２６、コネキシン３０、コネキシン３１．１、コネキシン３２、コネキシン３７、コネキシン４０、またはコネキシン４５の膜貫通領域に対応するアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態において、ペプチド阻害剤は、コネキシン４３の膜貫通領域に対応するアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、配列番号１に記載の約５〜２０の連続アミノ酸を含む。別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、配列番号２に記載の約５〜２０の連続アミノ酸を含む。別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、配列番号２の位置３７〜７６および１７８〜２０８にある領域に対応するアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、または配列番号２６に記載の約５〜２０の連続アミノ酸を含む。別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、配列番号２７〜５４に記載の約８〜約１１の連続アミノ酸を含む。別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、配列番号１８、１９、または５５〜６８に記載の約８〜約１５の連続アミノ酸を含む。さらに別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、１または複数の保存的アミノ酸変化を有する。
【０１７３】
治療
本発明は、各種の疾患、障害、および創傷を全体的または部分的に治療および／または予防する方法を含み、例えば、予測される速度で治癒しない創傷を治療する方法を含む。これらは、治癒が遅延しているかまたは困難な創傷（治癒が遅延しているかまたは不完全な創傷を含む）、および慢性創傷を含む。予測される速度で治癒しない創傷の例は、糖尿病性潰瘍、血管炎性潰瘍、動脈性潰瘍、静脈性潰瘍、静脈鬱血性潰瘍、熱傷潰瘍、感染性潰瘍、外傷誘導性潰瘍、褥瘡、および褥瘡性潰瘍を含む。予測される速度で治癒しない他の創傷は、離開創を含む。
【０１７４】
本発明はまた、（ａ）創傷炎症の慢性自己永続状態、（ｂ）創傷細胞外マトリックスの欠損および欠陥、（ｃ）（老化）創傷細胞（例えば、線維芽細胞）の応答不十分、細胞外マトリックス生成の制約、（ｄ）必要な細胞外マトリックスの組織化の欠如および移動のための足場の欠如に部分的に起因する再上皮形成不全、（ｅ）炎症およびタンパク質分解活性の遷延による、例えば、糖尿病性潰瘍、褥瘡（褥瘡性潰瘍）、静脈性潰瘍、および動脈性潰瘍を含む潰瘍性病変の惹起、（ｆ）罹患領域におけるマトリックスの進行性沈着、（ｇ）修復時間の長期化、（ｈ）創傷収縮の低減、（ｉ）再上皮形成の遅延、ならびに／または（ｊ）肉芽組織の肥厚を全体的または部分的に特徴とする慢性創傷を、全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを投与するステップを含む方法も含む。
【０１７５】
本発明はまた、（ａ）炎症期の遷延、（ｂ）細胞外マトリックスの形成遅延、および／または（ｃ）上皮形成速度の低減を全体的または部分的に特徴とする、治癒が遅延しているかまたは困難な創傷を、全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを投与するステップを含む方法も含む。
【０１７６】
本発明はまた、動脈性潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一実施形態において、動脈性潰瘍または潰瘍形成は、完全または部分的な動脈遮断により引き起こされる。
【０１７７】
本発明はまた、静脈性潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一実施形態において、静脈性潰瘍または潰瘍形成は、静脈弁の機能不全および関連する血管疾患により引き起こされる。
【０１７８】
本発明はまた、静脈鬱血性潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一実施形態において、静脈鬱血性潰瘍または潰瘍形成は、下肢の慢性受動性静脈鬱血および／または結果として生じる局所的低酸素症により引き起こされる。
【０１７９】
本発明はまた、糖尿病性足部潰瘍または潰瘍形成を含む糖尿病性潰瘍を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一実施形態において、糖尿病性足部潰瘍または潰瘍形成は、糖尿病の神経学的合併症および／または血管合併症により引き起こされる。
【０１８０】
本発明はまた、外傷性潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一実施形態において、外傷性潰瘍または潰瘍形成は、身体に対する外傷性傷害と関連する。
【０１８１】
本発明はまた、熱傷潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一実施形態において、熱傷潰瘍または潰瘍形成は、身体に対する熱傷傷害と関連する。
【０１８２】
本発明はまた、褥瘡性潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。
【０１８３】
本発明はまた、感染性潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。
【０１８４】
本発明はまた、壊疽性膿皮症を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。
【０１８５】
本発明はまた、離開創を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。
【０１８６】
本発明はまた、持続性上皮欠損を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。
【０１８７】
本発明はまた、褥瘡または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一部の実施形態において、前記褥瘡または潰瘍形成は、ＡＨＣＰＲ病期１、病期２、病期３、および／または病期４の潰瘍または潰瘍形成である。
【０１８８】
またさらなる実施形態において、本発明は、患者における創傷治癒を促進する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルを閉鎖するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１８９】
さらなる実施形態において、本発明は、患者における炎症を軽減する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルを閉鎖するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９０】
またさらなる実施形態において、本発明は、患者における創傷治癒を促進する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルを遮断するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９１】
さらなる実施形態において、本発明は、患者における炎症を軽減する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルを遮断するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９２】
またさらなる実施形態において、本発明は、患者における創傷治癒を促進する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルの活性を全体的または部分的に阻止または低減するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９３】
さらなる実施形態において、本発明は、患者における炎症を軽減する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルの活性を全体的または部分的に阻止または低減するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９４】
またさらなる実施形態において、本発明は、患者における創傷治癒を促進する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルの開口を全体的または部分的に阻止または低減するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９５】
さらなる実施形態において、本発明は、患者における炎症を軽減する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルの開口を全体的または部分的に阻止または低減するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９６】
またさらなる実施形態において、本発明は、患者における創傷治癒を促進する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接する細胞外のヘミチャネル連絡を全体的または部分的に阻止または低減するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９７】
さらなる実施形態において、本発明は、患者における炎症を軽減する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接する細胞外のヘミチャネル連絡を全体的または部分的に阻止または低減するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９８】
一態様により、ギャップジャンクション調節剤は、再上皮形成の促進を介して上皮基底細胞の分裂および増殖を調節することにより、創傷治癒を促進する。
【０１９９】
一態様において、本発明は、対象における創傷治癒を促進または改善する方法であって、上皮基底細胞の分裂および増殖を調節するのに有効な量における１または複数のギャップジャンクション調節剤の投与を含む方法を対象とする。一実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、上皮基底細胞の分裂および増殖を調節するのに有効な抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤である。一実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、コネキシン２６ギャップジャンクション調節剤、コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤、またはこれらの混合物である。
【０２００】
一態様において、本発明は、創傷治癒を促進または改善する方法であって、外層におけるケラチン分泌を調節するのに有効な量における１または複数のギャップジャンクション調節剤の投与を含む方法を対象とする。一実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、外層におけるケラチン分泌を調節するのに有効な抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤である。一実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤、コネキシン３１．１ギャップジャンクション調節剤、またはこれらの混合物である。
【０２０１】
キットおよび製品
一態様において、本発明は、予測される速度で治癒しない創傷を治療するためのキットを提供する。
【０２０２】
キットは、本明細書で説明される１または複数の組成物を含みうる。例えば、キットは、有効量の１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を含みうる。一実施形態において、キットは、有効量の１または複数のポリペプチドを含む組成物を含む。一実施形態において、キットは、有効量の１または複数のポリペプチド相同体を含む組成物を含む。一実施形態において、キットは、有効量の１または複数のコネキシンリン酸化化合物を含む組成物を含む。
【０２０３】
別の態様において、本発明は、有効量の１または複数のギャップジャンクション調節剤を含有する容器と、予測される速度で治癒しない創傷を有する対象を治療するための使用を含む使用のための指示書とを含む製品を含む。
【０２０４】
したがって、本発明により、それにより細胞間連絡および／またはヘミチャネルの連絡、結合、もしくは開口が、一過性におよび部位特異的な形で下方調節されうる方法、組成物、形態、製剤、キット、および製品が提供される。したがって、製剤は、療法および他の治療において適用される。
【０２０５】
ここで、例示だけを目的として提示されるものであり、本発明の範囲に対する限定を構成するものではないと理解される以下の実施例を参照して、本発明の各態様について記載する。
【実施例】
【０２０６】
（実施例１）
ペプチドの親和性結合アッセイ
プルダウンアッセイを使用してタンパク質−ペプチド相互作用を確認することができる。このアッセイでは、試験ギャップジャンクション調節剤（例えば、ペプチド）を、セルロース、アガロースまたはニッケルビーズへの付着を介してタンパク質結合パートナーを捕捉および「プルダウン」するために使用されるタンパク質反応性または融合タグすなわち、ＧＳＴ（グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ）でタグ付けする。ＳＤＳ−ＰＡＧＥローディングバッファーまたは代替として競合的な分析物の溶出を利用した複合体の溶出に続いて、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上に流してウェスタン解析検出法を使用することによって、複合体を可視化する。当技術分野において公知の結合アッセイを行う方法は、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ａ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、３７〜５７頁（２００２年）のＥｉｎａｒｓｏｎ， Ｍ．Ｂ． ａｎｄ Ｏｒｌｉｎｉｃｋ， Ｊ．Ｒ．、「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ Ｓ−Ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１８．５５〜１８．５９頁（２００１年）のＥｉｎａｒｓｏｎ， Ｍ．Ｂ．、「Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＧＳＴ Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｌｌｄｏｗｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」；およびＰｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２６１号、Ｆｕ， Ｈ．編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、１７５〜１８６頁（２００４年）のＶｉｋｉｓ， Ｈ．Ｇ． ａｎｄ Ｇｕａｎ， Ｋ．Ｌ．、「Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ−Ｓ−Ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ−Ｆｕｓｉｏｎ Ｂａｓｅｄ Ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｓｔｕｄｙｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ」において記述されている。
【０２０７】
タンパク質および試験ペプチドの相互作用および親和性を、リアルタイムでこれらの相互作用の測定を可能にする表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡｃｏｒｅによって利用可能）を使用して評価する。このアプローチは、低親和性タンパク質相互作用を検出するという利点を有する。表面プラズモン共鳴は、生物特異的表面で分子の溶液濃度の変化を測定するために使用される光学現象による。このシグナルは、全内部反射条件下で薄い金属フィルムにおいて発生する。このシグナルは、表面と接触している溶液の屈折率によって決定する。生物特異的相互作用が起こる場合、溶液中の分子は屈折率の変化を示し、したがって測定可能なシグナルを生じさせる。
【０２０８】
典型的には、タンパク質を、いくつかの可能な方法のうちの１つによってカルボキシメチルデキストラン−金表面上に固定する。相互作用する対象のペプチドをこの表面上に注入し、結合動態をリアルタイムで測定する。当技術分野において公知の結合アッセイを行う方法は、Ｓｃｈｕｃｋ， Ｐ．、「Ｒｅｌｉａｂｌｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｕｓｉｎｇ ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌａｓｍｏｎ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ」、Ｃｕｒｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、８巻（４号）：４９８〜５０２頁（１９９７年）；およびＺｈａｎｇ， Ｘ．、Ｏｇｌｅｓｂｅｅ， Ｍ． 「Ｕｓｅ ｏｆ ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌａｓｍｏｎ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｌｏｗ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｂｉｎｄｉｎｇ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＨＳＰ７２ ａｎｄ ｍｅａｓｌｅｓ ｖｉｒｕｓ ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ．」Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ Ｏｎｌｉｎｅ．５巻（１号）：１７０〜１８１頁（２００３年）において記述されている。
【０２０９】
（実施例２）
機能アッセイ
機能アッセイを使用して、試験ギャップジャンクション調節ペプチド模倣体がギャップジャンクションまたはヘミチャネルの穴を遮断できるかどうかを判定することができる。ＨｅＬａヒト子宮頸癌細胞株を、Ｃｘ４３、Ｃｘ４５、または対象とする別の特定のコネキシンで安定にトランスフェクトする。細胞を、コネキシンヘミチャネルを活性化することが示されている（Ｂｒａｅｔ， Ｋ．ら、「Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＡＴＰ ｒｅｌｅａｓｅ ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｂｙ ｐｈｏｔｏｌｉｂｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｏｓｉｔｏｌ−１，４，５−ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｎｄ ｚｅｒｏ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｌｃｉｕｍ ｉｎ ｂｒａｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、１９７巻（２号）：２０５〜２１３頁（２００３年）；ＤｅＶｒｉｅｓ， Ｓ．Ｈ． ａｎｄ Ｅ．Ａ． Ｓｃｈｗａｒｔｚ、「Ｈｅｍｉ−ｇａｐ−ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｉｎ ｓｏｌｉｔａｒｙ ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｔｆｉｓｈ ｒｅｔｉｎａ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ４４５：２０１〜２３０頁（１９９２年）；およびＬｉ， Ｈ．ら、「Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃｅｌｌｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １３４巻（４号）：１０１９〜１０３０頁（１９９６年）を参照されたい）無カルシウム溶液（１ｍＭのＥＧＴＡを含有するＨＢＳＳ−ＨＥＰＥＳ）中でインキュベートする。細胞を、１ｍＭのＥＧＴＡおよび２ｍＭのヨウ化プロピジウムを含有するＨＢＳＳ−ＨＥＰＥＳ溶液中で３０分間インキュベートする。ヨウ化プロピジウムは、膜不透過性であるが、その低分子量のためにギャップジャンクション／ヘミチャネルから入ることができる蛍光色素である。ヨウ化プロピジウムの取り込みは、蛍光顕微鏡検査法を使用して測定される。細胞をペプチド模倣体の存在下でヨウ化プロピジウムとインキュベートし、これらが色素取り込みを妨害することができるかどうかを判定する。
【０２１０】
（実施例３）
ペプチド模倣体の設計および試験
ペプチド模倣体は、コネクソン連結過程に関与すると考えられている（Ｆｏｏｔｅら、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １４０巻（５号）：１１８７〜９７頁、（１９９８年））コネキシン４３細胞外ループ領域と同じアミノ酸配列を有するように設計することができる。いくつかのペプチドは、増強された機能阻害を示しうるアルファヘリックス膜貫通サブユニットの外側部分にマッチするアミノ酸を含む。これらのペプチドのすべてが、細胞外ループ領域におけるコネキシン配列の保存のために必ずしもコネキシン特異的というわけではない。
【０２１１】
ペプチドまたはそれらの変種は、例えば、Ｓｔｅｗａｒｔら、Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（１９６９年）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ， Ｊ、Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、８５巻 ２１４９頁（１９６３年）； Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ、「Ｈｏｒｍｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」Ｃ．Ｈ． Ｌｉ編、２巻（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９７３年）、４８〜２６７頁；およびＢａｖａａｙ ａｎｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」Ｅ． Ｇｒｏｓｓ ａｎｄ Ｆ． Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、２巻（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８０年）３〜２８５頁に記述されている固相ペプチド合成法によって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成することができる。これらのペプチドは、免疫親和性またはイオン交換カラムにおける分画；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカによる、またはＤＥＡＥなどのアニオン交換樹脂によるクロマトグラフィ；クロマトフォーカシング；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；硫安沈殿；例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−７５を使用したゲル濾過；リガンド親和性クロマトグラフィ；または非極性溶媒もしくは非極性／極性溶媒混合物からの結晶化もしくは沈殿によってさらに精製することができる。
【０２１２】
試験ペプチドを使用して、２つの機能試験を行うことができる。これらの機能試験は、（ｉ）脊髄切片中の細胞による色素（Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ）取り込みの遮断、および（ｉｉ）脊髄分節の浮腫の予防（陽性対照としてコネキシン４３特異的アンチセンスｏｄｎを使用して）であった。ペプチドは、Ｓｉｇｍａ−Ｇｅｎｏｓｙｓ（Ａｕｓｔｒａｌｉａ）によって合成する。
【０２１３】
脊髄切片中の細胞による色素（Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ）取り込みの遮断。
【０２１４】
Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗは、小さな水溶性の、固定可能な、ギャップジャンクションチャネルを介して細胞から細胞へ通過することができるが細胞膜は通過できない色素である。細胞外培地へのＬｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗの添加は、開いているギャップジャンクション／ヘミチャネルの存在を確認することを可能にする。色素は細胞の細胞質において見えるようになり、これは開いているチャネルを表す。
【０２１５】
Ｗｉｓｔａｒ ｐ７ラットに二酸化炭素で麻酔をかけ、ただちに断頭する。脊髄を切除し、ｐＨ７．４の冷ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）に移す。余分の枝神経および靭帯を除去し、脊髄を手動の組織チョッパーに移し、一連の５００ミクロンの薄さの切片をカットする。切片により引き起こされる損傷は、切片全体においてコネキシン４３の上方制御を誘導し（ギャップジャンクションを介する傍観者効果により増幅される）、コネキシンヘミチャネルの発現をもたらす。切片を、２４ウェルプレートの直径３ｃｍのＭｉｌｌｉｐｏｒｅインサート上に置き、ペプチド模倣体の存在下で培地中で培養する。すべての試験した９個のペプチドの最終濃度は、５００マイクロモルであった。対照は、ペプチド添加なし、またはいくつかのペプチドは、これらの化合物中に再溶解されうる場合は１％エタノール含有もしくは１％ＤＭＳＯ添加（ペプチドは凍結乾燥されて与えられる）であった。
【０２１６】
切片を３７℃で４時間インキュベートし、次いで１ｍｌ当たり２．５ｍｇのＬｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗを各ウェルに３０分間加える（暗所で）。次いで組織をＰＢＳ中で２回すすぎ、さらに１０分の洗浄を３回行い、切片を４％パラホルムアルデヒドで固定する。次いでこれらを、Ｌｅｉｃａ ＴＣＳ４Ｄレーザー走査型共焦点顕微鏡を使用して観察し、細胞中への色素取り込みがあるかどうかを評価する。各試料中への色素取り込みの量によって有効性を測定する。
【０２１７】
脊髄における浮腫の予防
「Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｔｏ Ｃｏｎｎｅｘｉｎｓ」という表題のＢｅｃｋｅｒ， Ｄ． ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ． Ｃ．のＷＯ２０００／４４４０９の実施例１に記述されている系を使用して、培養された脊髄分節に対する試験ペプチドの効果を検査し、これらの腫脹を阻止する能力を試験する。
【０２１８】
ＤＭＳＯを対照として使用する。５ｍｍ長の脊髄分節を、ＨＢＳＳ中で２４ウェルプレートの別々のウェル中に置く。Ｓｕｐｅｒｇｌｕｅの小液滴を使用して、分節をウェルの底部に保持する。ＨＢＳＳを除去し、５００マイクロモルの試験ペプチド（最終濃度）を培地に加える（培地のみまたはＤＭＳＯ対照にはペプチドを加えない）。プレートを２４時間インキュベートし、培地を除去し、組織をブアン固定液で２４時間固定する。分析は、分節の切断端の腫脹面積と比較した脊髄分節の総面積を計算するための、Ｉｍａｇｅ Ｊを用いた上方からの脊髄分節の撮影を含む。腫脹（浮腫）は、腫脹％を与える（培養面積−元の面積÷元の面積）として計算する。ｐ＝０．０５での有意性のカットオフ値で、Ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｖａｒｉａｎｃｅを使用して統計的有意性を決定する。
【０２１９】
脊髄分節における浮腫を阻止するために最も有効な試験ペプチド濃度の決定は、用量反応曲線を使用して同じプロトコールを使用して行う。１つの例示的な用量反応曲線は、５、１０、５０ ２５０および５００マイクロモルで使用されるペプチドの最終濃度で決定される。
【０２２０】
（実施例４）
本明細書に開示されている方法および組成物を使用して、慢性創傷（例えば、血管性潰瘍）を有するヒト対象を治療する。
【０２２１】
糖尿病、または末梢血管もしくは動脈基礎疾患を有するヒト対象は、まず、閉鎖していない足の創傷から生じる合併症を呈する。創傷を、適当な１つまたは複数の用量の抗コネキシンペプチドＳＲＰＴＥＫＴＩＦＩＩ（配列番号７）、例えば、１００〜５００マイクログラムで処置する。深さ約３〜４ｍｍで約７ｃｍ×５ｃｍ（約３５ｃｍ２）の創傷の大きさに基づいて、プルロニックゲル中の２ｍＬの２０μＭの配列番号７製剤（例えば、総用量約２００〜４００μｇ）を投与する（別の適切な投与される投薬量は、創傷の大きさに従って当業者が容易に決定することができる）。
【０２２２】
創傷部位に包帯をして７日間保護する。７日目に創傷の包帯を取り、創傷治癒結果を評価する。
【０２２３】
必要または所望に応じて上記で概説した処置を繰り返す（適切な投薬量で）。この処置の後、創傷および創傷の外観を評価する。２週間、１カ月および／または２カ月で患者を再度評価し、創傷（減少があれば）を再度評価する。
【０２２４】
（実施例５）
本明細書に開示されている方法および組成物を使用して、慢性静脈脚潰瘍を有するヒト対象を治療する。
【０２２５】
ヒト試験対象を、潰瘍の大きさならびに最小および最大潰瘍面積（例えば、２ｃｍ２および５０ｃｍ２）に従って群に分ける。患者の安静時足関節上腕ドップラー動脈血圧比をベースラインとして測定する（例えば、０．８０以上）。
【０２２６】
全ての患者に圧迫包帯をする。追跡することによって潰瘍の面積を測定し、プルロニックゲル製剤中の試験抗コネキシンペプチドＳＲＰＴＥＫＴＩＦＩＩ（配列番号７）の適当な投薬量、例えば、１００〜５００マイクログラムを投与する。
【０２２７】
試験製剤を創傷表面に適用する間、診察用長椅子に横になり、圧迫包帯を適用する前の１５分間そこにいるよう患者に求める。
【０２２８】
７日目に創傷の包帯を取り、創傷治癒結果を評価する。創傷液および血液試料を、バイオアッセイを使用して関連する創傷治癒バイオマーカーについて分析する。
【０２２９】
上記で概説した処置を繰り返す（適切な投薬量で）。この処置の後、創傷および創傷の外観を評価する。創傷閉鎖まで、この過程を毎週もしくは隔週、または治癒の状態を考慮して適切なように繰り返す。
【０２３０】
（実施例６）
以下を使用して、糖尿病性および別の慢性潰瘍の治癒速度の促進における、例示的な製剤の逐次投与の治療効果を判定する。
【０２３１】
有効性の主要エンドポイントは、１２〜２０週間以内で完全な創傷閉鎖を達成する患者の割合である。副次エンドポイントには、１００％閉鎖までの時間、８０％閉鎖までの時間、５０％閉鎖までの時間、ならびに３、５、１０、１５、および２０週におけるベースラインの創傷の大きさからの変化の割合としての創傷閉鎖量が含まれる。Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存分析技法を用いて、イベント発生までの時間エンドポイントを検査する。
【０２３２】
全ての患者は、最初の壊死組織切除（ｓｈａｒｐ ｄｅｂｒｉｄｅｍｅｎｔ）、創傷洗浄、創傷包帯、および創傷圧力軽減からなる標準的な糖尿病性（または別の）潰瘍治療のレジメンを受ける。最初の壊死組織切除および創傷洗浄によって潰瘍を処置する。プルロニックゲル製剤中の１００〜５００マイクログラムの抗コネキシンペプチドＳＲＰＴＥＫＴＩＦＩＩ（配列番号７）を投与する。創傷に、粘着防止包帯および圧迫包帯をまく。
【０２３３】
どちらが早いとしても１２〜２０週までまたは創傷閉鎖まで、週に２回、創傷を評価する。患者が臨床感染を発症した場合、または創傷状態が著しく悪化した場合は、患者を試験から排除する。各創傷評価時に（週に２回）、創傷面積の測定のために創傷周囲をトレースし、デジタルカメラで創傷を撮影する。患者登録時、ならびに５、１０、１５、および２０週で、血液化学および血液学試験を行う。基礎的な骨組成に対する作用を試験するために、Ｘ線評価を５週間ごとに実施してもよい。
【０２３４】
（実施例７）
抗コネキシン剤は、好都合には、本発明の方法による投与に適する形態に処方される。
【０２３５】
適当な製剤は、以下の処方剤の混合物を含む。１つまたは複数の個々の抗コネキシン剤の量は、予定される特定の用途に依存するはずである。
【０２３６】
【表７】
本明細書において参照されたかまたは言及されたすべての特許、出版物、科学論文、ウェブサイトならびに他の文書および資料は、本発明が属する技術分野の当業者の技術水準を示すものであり、これらの参照文書および資料はそれぞれ、個別にその全体が参照により組み込まれたか、またはその全体が本明細書に記載された場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。出願人は、任意の上記の特許、出版物、科学論文、ウェブサイト、電子的に利用可能な情報、および別の参照資料または文書の、任意のおよびすべての資料および情報を本明細書に物理的に組み込む権利を保有する。
【０２３７】
本明細書に記載されている具体的な方法および組成物は、好ましい実施形態を代表するものであり、それらは例示的であって本発明の範囲を限定するものではない。別の目的、態様、および実施形態が、本明細書を考慮すれば当業者には思いつくはずであり、本特許請求の範囲によって定義されている通り本発明の精神に包含される。本発明の範囲および精神から逸脱することなく、様々な置換および変更を本明細書に開示されている本発明に対して行ってもよいことが、当業者には容易に明らかとなるはずである。例示的に本明細書に適当に記載されている本発明は、本明細書において不可欠であると特に開示されていない任意の１つまたは複数の要素、あるいは１つまたは複数の限定の不在下で実施されてもよい。したがって、例えば、本発明の実施形態または実施例において、本明細書におけるそれぞれの場合において、「含む」、「から本質的になる」、および「からなる」のいずれかの用語は、本明細書中の他の２つの用語のいずれかと置き換えてもよい。また、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有している」などの用語は、包括的であって限定ではないと読み取るべきである。例示的に本明細書に記載されている方法およびプロセスは、異なる順序の工程で適当に実施されてもよく、必ずしも本明細書または本特許請求の範囲に示された工程の順序に制限されない。本明細書および添付の特許請求の範囲においても使用されているように、単数形「ａ」「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上別途明確に指示のない限り複数形への言及を含む。いかなる場合においても、本特許は、本明細書に特に開示されている具体的な実施例または実施形態または方法に限定されると解釈されるものではない。いかなる場合においても、本特許は、そのような陳述が、出願人による答弁書において明確に認められた限定または制限がなければ、特許商標庁のいかなる審査官またはいかなる別の当局者もしくは関係者によってなされたいかなる陳述によっても限定されると解釈されるものではない。
【０２３８】
採用されている用語および表現は、説明であって限定するものではない用語として使用され、このような用語および表現の使用において、示されているおよび説明されている特徴のいかなる均等物またはその一部も除外する意図はないが、請求されている本発明の範囲内で様々な変更形態が可能であることが認識される。したがって、本発明を、好ましい実施形態および任意選択の特徴によって具体的に開示してきたが、本明細書に開示されている概念の変更形態および変形形態が当業者によって用いられてもよいこと、およびこのような変更形態および変形形態が、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内であるとみなされることが理解されるはずである。
【０２３９】
本発明が、本明細書において広く一般的に記載された。一般的開示に含まれるそれぞれのより狭い種（ｓｐｅｃｉｅｓ）および亜属集団（ｓｕｂｇｅｎｅｒｉｃ ｇｒｏｕｐｉｎｇ）もまた、本発明の一部を形成する。これは、削除された材料が本明細書で具体的に挙げられているか否かに関係なく、その属の任意対象を除くという条件または否定的な限定を伴う本発明の一般的記載を含む。
【０２４０】
別の実施形態は以下の特許請求の範囲内である。加えて、本発明の特徴または態様がマーカッシュ（Ｍａｒｋｕｓｈ）グループに関して記載される場合、当業者は、本発明がマーカッシュグループの任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループに関してもそれによって記載されることを認識するはずである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ギャップジャンクションならびに創傷および創傷治癒、特に、治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、慢性創傷、および離開創など、予測される速度で治癒しない創傷に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
以下は、本発明の理解に有用でありうる情報を含む。このことは、本明細書に記載される情報が、本明細書に記載または特許請求されている発明に対する先行技術であるか、もしくはこれに関連していることを認めるものでも、明示的にもしくは暗黙に言及される刊行物もしくは文書が先行技術であることを認めるものでもない。
【０００３】
ヒトおよび他の哺乳動物において、創傷は、細胞イベントおよび生化学的イベントの組織化された複雑なカスケードを誘発し、この結果、大半の場合において創傷の治癒がもたらされる。理想的に治癒した創傷とは、細胞レベル、組織レベル、器官レベル、および生物レベルにおける正常な解剖学的構造、機能、および外見が回復しているものである。外傷、微生物、または外来物質のいずれにより誘発されたものでも、創傷の治癒は、炎症、上皮形成、新脈管形成、およびマトリックス沈着を含めたいくつものオーバーラップした段階を包含する複雑な過程により進行する。通常、これらの過程により、創傷の完成（ｍａｔｕｒｅ ｗｏｕｎｄ）およびある程度の瘢痕形成がもたらされる。炎症および修復は、規定の経過に沿って生じることが大半であるが、この過程の感度は、例えば、調節サイトカインおよび増殖因子の複合ネットワークを含む、各種の創傷治癒分調節因子の均衡に依存する。
【０００４】
ギャップジャンクションは、直接的な細胞間情報伝達（ｃｅｌｌ−ｃｅｌｌ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）を促進する細胞膜構造である。ギャップジャンクションチャネルは、各々が６つずつのコネキシンサブユニットからなる２つのコネクソン（ヘミチャネル）から形成される。各６量体コネクソンは、向い側の膜内のコネクソンとドッキングして、単一のギャップジャンクションを形成する。ギャップジャンクションチャネルは、全身において見出される。例えば、角膜上皮などの組織は、６〜８層の細胞層を有するが、異なる層では異なるギャップジャンクションチャネルを発現することが報告されており、基底層ではコネキシン４３を有し、基底層から中翼細胞層ではコネキシン２６を有する。一般に、コネキシンは１つのタンパク質ファミリーであり、通常、それらの分子量により命名されるか、または系統発生に基づき、アルファ、ベータ、およびガンマのサブクラスに分類されている。ヒトで少なくとも２０種のアイソフォームが、また、マウスで少なくとも１９種のアイソフォームが同定されている。特徴的なパターンのコネキシンタンパク質発現を有する様々な組織および細胞型が報告されており、角膜などの組織は、傷害または移植後において、コネキシンタンパク質の発現パターンを変化させることが示されている（Ｑｕｉら（２００３年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第１３巻、１９６７〜１７０３頁； Ｂｒａｎｄｅｒ ら（２００４年）、Ｊ． Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、第１２２巻、１３１０〜２０頁）。
【０００５】
異常なコネキシン機能は、特定の疾患状態（例えば、心疾患）と関連し得ることが報告されている（Ａ． Ｃ． ｄｅ Ｃａｒｖａｌｈｏら、Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ、１９９４年、第５巻、６８６頁）。ある種のコネキシンタンパク質では、ギャップジャンクションを介した細胞間情報伝達レベルに影響を及ぼしうる外因性物質の追加により、代謝回転特性および輸送特性の変化が誘導されうる（Ｄａｒｒｏｗら（１９９５年）、Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ、第７６巻、３８１頁； Ｌｉｎ（２００１年）、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、第１５４巻、第４号、８１５頁）。ウイルス性疾患、真菌性疾患、および代謝性疾患に関係する遺伝子の発現調節について、アンチセンス技術もまた報告されている。例えば、特許文献１（ＨＩＶに対するオリゴヌクレオチド阻害剤）、特許文献２（単純ヘルペスウイルスのＶｍｗ６５ ｍＲＮＡにハイブリダイズし、複製を阻害するオリゴマー）を参照されたい。また、ＢｅｃｋｅｒおよびＧｒｅｅｎへの特許文献３（コネキシンに対するアンチセンスヌクレオチドを含む製剤）も参照されたい。ギャップジャンクションおよびヘミチャネルに対するペプチド阻害剤もまた報告されている。例えば、Ｂｅｒｔｈｏｕｄら、Ａｍ Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．、第２７９巻、Ｌ６１９〜Ｌ６２２頁（２０００年）； Ｅｖａｎｓ， Ｗ．Ｈ．およびＢｏｉｔａｎｏ， Ｓ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｔｒａｎｓ．、第２９巻、６０６〜６１２頁；ならびにＤｅ Ｖｒｉｅｓｅ Ａ．Ｓ． ら、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．、第６１巻、１７７〜１８５頁（２００１年）を参照されたい。また、ＢｅｃｋｅｒおよびＧｒｅｅｎ、特許文献４（「Ａｎｔｉ−ｃｏｎｎｅｘｉｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｕｓｅ」）も参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第５，１６６，１９５号明細書
【特許文献２】米国特許第５，００４，８１０号明細書
【特許文献３】米国特許第７，０９８，１９０号明細書
【特許文献４】国際公開第２００６／１３４４９４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
創傷治癒過程の基礎をなす原理に対する理解の進展にもかかわらず、治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、および慢性創傷など、予測される速度で治癒しない創傷を含む創傷治療に適する治療選択肢に対する必要は、依然としてほとんど満たされていない。本出願では、このような治療組成物および治療が記載および特許請求される。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
簡単な要旨
本明細書で記載および特許請求される発明は、この「簡単な要旨」において説明または記載または言及される属性および実施形態を含むがこれらに限定されない多くの属性および実施形態を有する。それは包括的であることが意図されるものでなく、本明細書で記載および特許請求される発明は、限定ではなくて例示だけを目的として組み入れられているこの「簡単な要旨」に限定されるものでも、「簡単な要旨」において特定される特徴または実施形態により限定されるものでもない。
【０００９】
本開示の態様および実施形態は一般に、治癒が遅い創傷、治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、離開創、および慢性創傷など、予測される速度で治癒しない創傷について対象を治療する方法であって、ギャップジャンクション調節剤を含む組成物または製剤を創傷に投与するステップを含む方法に関する。コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。
【００１０】
一実施形態において、本発明は、慢性創傷を有する対象を治療する方法であって、有効量のギャップジャンクション調節剤を含む組成物の創傷への投与を含む方法を対象とする。コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。一実施形態において、慢性創傷は褥瘡である。一実施形態において、慢性創傷は褥瘡性潰瘍である。別の実施形態において、慢性創傷は動脈性潰瘍である。別の実施形態において、慢性創傷は静脈性潰瘍である。別の実施形態において、慢性創傷は静脈鬱血性潰瘍である。別の実施形態において、慢性創傷は血管炎性潰瘍である。さらに別の実施形態において、慢性創傷は、糖尿病性足部潰瘍など糖尿病性潰瘍である。さらなる実施形態において、慢性創傷は外傷性潰瘍または熱傷潰瘍である。別の実施形態において、慢性創傷は感染性潰瘍であり、別の実施形態において、慢性創傷は壊疽性膿皮症と関連する潰瘍形成を特徴とする。またさらなる実施形態において、慢性創傷は混合潰瘍である。一実施形態において、創傷は持続性上皮欠損である。
【００１１】
一実施形態において、本発明は、離開創を有する対象を治療する方法に関し、有効量のギャップジャンクション調節剤、好ましくは、コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤を含む組成物をこの創傷へ投与する工程を含む。
【００１２】
一実施形態において、対象は哺乳動物である。別の実施形態において、対象はヒトである。別の実施形態において、対象は糖尿病を有するヒトである。一実施形態において、対象は１型糖尿病を有するヒトである。別の実施形態において、対象は２型糖尿病を有するヒトである。
【００１３】
別の実施形態において、哺乳動物は競技動物またはペット動物である。一態様において、競技動物はウマまたはイヌである。別の態様において、ペット動物はイヌまたはネコである。
【００１４】
一実施形態において、本発明は、治癒が遅延している創傷を有する対象を治療する方法に関し、有効量のギャップジャンクション調節剤を含む組成物をこの創傷へ投与する工程を含む。別の実施形態において、本発明は、治癒が不完全な創傷を有する対象を治療する方法に関し、有効量のギャップジャンクション調節剤を含む組成物をこの創傷へ投与する工程を含む。コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。
【００１５】
さらなる態様により、ある持続時間にわたるある量のギャップジャンクション調節剤の創傷への持続投与が提供される。さらにこの態様により、治癒が遅延している創傷、治癒障害の創傷、および慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷の創傷治癒が促進される。一実施形態において、創傷は、糖尿病性潰瘍、糖尿病性足部潰瘍、血管炎性潰瘍、静脈性潰瘍、静脈鬱血性潰瘍、動脈性潰瘍、褥瘡、褥瘡性潰瘍、感染性潰瘍、外傷誘導性潰瘍、熱傷潰瘍、壊疽性膿皮症と関連する潰瘍形成、または１もしくは複数の潰瘍の混合である。本発明には、反復適用が含まれる。創傷閉鎖の進行が見られるまでの反復適用の後、創傷治癒が再び停滞するかまたは遅延している場合における反復適用（または複数回の反復適用）を行うことが好ましい。
【００１６】
本発明の他の態様により、創傷の再上皮形成および／または肉芽組織の形成が促進される。
【００１７】
さらなる態様において、本発明は、治癒が遅延している創傷または治癒が不完全な創傷または慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷を有する対象における創傷治癒を促進する方法であって、抗コネキシン４３ペプチドおよび抗コネキシン３１．１ペプチドの投与を含む方法を提供する。本発明には、反復適用が含まれる。
【００１８】
本発明の代替的な態様は、皮膚創傷の再上皮形成を促進する方法であって、例えば、治癒が遅延している創傷または治癒が不完全な創傷または慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷を有する対象に、再上皮形成を促進するのに有効な量でギャップジャンクション調節剤、例えば、抗コネキシンペプチドを投与するステップを含む方法を対象とする。抗コネキシンペプチドは、コネキシン２６、コネキシン３０、コネキシン３１．１およびコネキシン４３から選択されたコネキシンを標的としうる。ここでは、コネキシン４３が好ましい標的である。
【００１９】
追加のさらなる態様において、本発明は、例えば、治癒が遅延している創傷または治癒が不完全な創傷または慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷を有する対象における創傷治癒を促進する方法であって、上皮基底細胞の分裂および増殖を調節するのに有効なギャップジャンクション調節剤の持続投与を含む方法を提供する。追加のさらなる態様において、本発明は、例えば、治癒が遅延している創傷または治癒が不完全な創傷または慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷を有する対象における創傷治癒を促進する方法であって、外層におけるケラチン分泌を調節するのに有効なギャップジャンクション調節剤の持続投与を含む方法を提供する。一実施形態において、上皮基底細胞の分裂および増殖を調節するのに有効なギャップジャンクション調節剤、例えば、抗コネキシンペプチドは、抗コネキシン２６ペプチドもしくは抗コネキシン４３ペプチドまたはこれらの混合物である。代替的な実施形態により、外層のケラチン化を調節するのに投与されるギャップジャンクション調節剤、例えば、抗コネキシンペプチドは、抗コネキシン３１．１ペプチドである。本発明には、反復適用が含まれる。
【００２０】
別の態様により、本発明は、予測される速度で治癒しない創傷（治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、および慢性創傷を含む）を有する対象における創傷治癒または創傷閉鎖の速度を増大させる方法であって、対象に有効量のギャップジャンクション調節剤を投与するステップを含む方法を提供する。
【００２１】
一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ギャップジャンクションチャネルを隔てた細胞間連絡分子の流動を全体的または部分的に阻止または低減する。一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ギャップジャンクションを全体的または部分的に閉鎖することにより、細胞間連絡を阻害する。別の態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルの結合によるギャップジャンクションの形成を全体的または部分的に阻止または低減する。別の態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの全体的または部分的な閉鎖を誘導する。さらに別の態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルの開口を、全体的または部分的に遮断または阻害する。一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの開口を、全体的または部分的に低減させるかまたは阻止する。一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの活性または機能を阻止または低減する。本明細書で説明されるコネキシン４３ギャップジャンクションおよびコネキシン４３ヘミチャネルを調節するコネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。
【００２２】
一態様において、本発明は、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤をさらに含むことが好ましい。例えば、本発明は、（ａ）治療有効量の薬学的に許容されるコネキシン４３ギャップジャンクション調節剤と、（ｂ）薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物を含む。
【００２３】
本発明はまた、包帯材、包帯、マトリックス、および被覆と組み合わせたギャップジャンクション調節剤の使用にも関する。一態様において、本発明は、ギャップジャンクション調節剤、好ましくは、コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤を含む合成または天然の創傷治癒マトリックスを含む。ある実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤、例えば、抗コネキシン４３ペプチドまたは抗コネキシン４３ペプチド模倣剤である。
【００２４】
これらはまた、例えば、治癒が完了するかまたは望ましい形となるまで毎週１回の反復適用における、単独での、または包帯材、包帯、マトリックス、および被覆と組み合わせてのギャップジャンクション調節剤の使用にも関する。
【００２５】
一態様において、ギャップジャンクション調節剤はペプチド化合物である。一態様において、ペプチド化合物は、ペプチド模倣剤、ペプチド模倣剤、抗体、またはこの抗原結合フラグメントである。一態様において、抗原結合フラグメントは、Ｆ（ｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２による抗コネキシン４３抗体フラグメントである。一態様において、抗体はキメラ抗体またはヒト化抗体である。一態様において、抗体フラグメントは、キメラ抗体フラグメントまたはヒト化抗体フラグメントである。別の態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ギャップジャンクションリン酸化誘導剤、好ましくはコネキシン４３ギャップジャンクションリン酸化化合物ある。
【００２６】
本発明の一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、局所投与用に処方される。本発明の一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、ゲルとして処方される。さらに別の態様において、ギャップジャンクション調節剤は、徐放または持続放出用に処方される。本発明には、ギャップジャンクション調節剤の反復適用が含まれる。コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
発明の詳細な説明
治癒が遅い創傷、治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、離開創、および慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷は、結果として感染症をもたらすことが多く、切断術または死亡をもたらしうる。創傷治癒においては、ギャップジャンクションを通る細胞間連絡が中枢的な役割を果たす。本明細書で説明されるかまたは言及される化合物を含む特定の化合物の使用により、細胞連絡を遮断するか、阻害するか、または変化させることが可能であり、これにより、治癒が遅い創傷、治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、離開創、および慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない創傷の閉鎖および治癒が促進される。すべての適用について、コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。
【００２８】
定義
本明細書で用いられる「障害」とは、創傷治癒を促進し、かつ／または瘢痕形成を軽減する薬剤から利益を得る任意の障害、疾患、または状態である。例えば、神経障害性、虚血性、および微小血管性の病態；骨領域全体［尾骨（仙骨）、股関節（転子骨）、臀部（坐骨）、または足のかかと］にわたる圧迫；再灌流による傷害；ならびに弁逆流による病因と関連する状態および関連の状態と関連する創傷関連の異常が含まれる。
【００２９】
本明細書で用いられる「対象」とは、ヒト；イヌ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウシなどの家畜動物および農場動物、ならびに動物園動物、競技動物、およびペット動物を含む任意の哺乳動物を指す。本明細書で好ましい哺乳動物は、成人、小児、および老齢者を含むヒトである。
【００３０】
本明細書で用いられる「予防」とは、全体的もしくは部分的な予防、または改善もしくは抑制を意味する。
【００３１】
本明細書で用いられる「治療」という用語は、治療的処置および予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃまたはｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）措置の両方を指す。
【００３２】
本発明の化合物または組成物に関して本明細書で用いられる「治療有効量」とは、所望の生物学的結果、薬学的結果、または治療結果を誘導するのに十分な量を指す。その結果は、疾患もしくは障害もしくは状態の徴候、症状、もしくは原因の緩和、または生物学的系の他の任意の望ましい変化でありうる。本発明において、結果は、創傷治癒および創傷閉鎖の速度を含む、創傷治癒の全体的または部分的な促進および／または改善を伴う。他の利益は、腫脹、炎症、および／または瘢痕形成の全体的または部分的な軽減を含む。
【００３３】
本明細書で用いられる「同時に」が、本発明の１または複数のギャップジャンクション調節剤（例えば、ペプチドまたは遮断薬）を共時的に投与することを意味するように用いられるのに対し、「組み合わせて」という用語は、同時にまたは物理的に混合してではないにせよ、それらの両方を治療的な作用に用いられる時間枠内で「逐次的に」投与することを意味するように用いられる。したがって、「逐次的に」投与することにより、１または複数のギャップジャンクション調節剤が有効量で共時的に存在する限りにおいて、１つの薬剤を、他の薬剤の投与後数分（例えば、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０分）、または約数時間、数日、数週間、もしくは数カ月以内に投与することが可能となりうる。成分の投与における時間の遅延は、それらの成分の正確な性質、それらの間における相互作用、およびそれら各々の半減期に応じて変化する。
【００３４】
「ペプチド模倣剤」および「模倣剤」という用語は、それらが模倣するタンパク質領域と同じ構造的特徴および機能的特徴を実質的に有しうる天然化合物および合成化合物が含まれる。コネキシンの場合、これらは、例えば、コネクソン間結合および細胞間のチャネル形成、ならびに／またはヘミチャネルコネキシンの細胞外ループに関与する、向かい合うコネキシンの細胞外ループを模倣しうる。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、「ペプチド類似体」とは、鋳型のペプチドの特性に類似する特性を有する化合物を指し、それらは非ペプチド薬剤でありうる。ペプチドベースの化合物を含む「ペプチド模倣剤」（また、「模倣ペプチド」としても公知）はまた、ペプチド類似体などの非ペプチドベースの化合物も含む。治療的に有用なペプチドに対して構造的に類似するペプチド模倣剤を用いて、同等であるかまたは増強された治療効果または予防効果をもたらすことができる。一般に、ペプチド模倣剤は、パラダイムポリペプチド（すなわち、生物学的または薬理学的な機能または活性を有するポリペプチド）と構造上または機能上の模倣物（例えば、同一または類似）であるが、また、場合によって、例えば、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、および−ＣＨ２ＳＯ−からなる群から選択される結合により置換される１または複数のペプチド結合も有しうる。模倣剤は、天然のアミノ酸、合成化学化合物、非天然のアミノ酸類似体だけから構成されたものであっても、部分的に天然のペプチドアミノ酸と部分的に非天然のアミノ酸類似体からなるキメラ分子であってもよい。任意量の天然アミノ酸に対する保存的置換もまた実質的に模倣剤の活性を変化させない限りにおいて、模倣剤はまたこのような置換も含みうる。コネキシンの場合、これらは、例えば、コネクソン間結合および細胞間のチャネル形成に関与する、向かい合うコネキシンの細胞外ループを模倣しうる。例えば、コネクソンの結合によるギャップジャンクションを介する細胞間連絡の形成に対する阻害、またはコネクソンの開口による細胞質の細胞外環境への曝露に対する阻害など、コネクソンの生物学的な作用または活性を下方調節することが可能な場合、例えば、模倣組成物は、ギャップジャンクション調節剤として有用でありうる。ペプチド模倣剤は、本明細書に記載のペプチド模倣剤のほか、現在公知の場合であれ将来的に開発される場合であれ、当技術分野において公知でありうるペプチド模倣剤を包含する。
【００３６】
一般に、本明細書においてその各形態において用いられるギャップジャンクション活性の「調節剤」および「調節」という用語は、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルの発現または作用または活性に対する全体的または部分的な阻害を指し、ギャップジャンクション調節剤として機能しうる。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、「タンパク質」という用語は、１つのアミノ酸（またはアミノ酸残基）のアルファ炭素に結合したカルボン酸基のカルボキシル炭素原子が、隣接するアミノ酸のアルファ炭素に結合したアミノ基のアミノ窒素原子に共有結合する場合に生じるペプチド結合により連結される、２つ以上の個々のアミノ酸（天然の場合であれ非天然の場合であれ）による任意のポリマーを指す。これらのペプチド結合、およびこれらを含む原子（すなわち、アルファ炭素原子、カルボキシルの炭素原子（およびこれらの置換基の酸素原子）、およびアミノの窒素原子（およびこれらの置換基の水素原子））は、タンパク質の「ポリペプチド骨格」を形成する。加えて、本明細書で用いられる「タンパク質」という用語は、「ポリペプチド」および「ペプチド」（本明細書では、場合によって、互換的に用いられうる）という用語を含む形で理解される。同様に、本明細書では、タンパク質のフラグメント、類似体、誘導体、および変異体も「タンパク質」と称し、別段に示されない限り、「タンパク質」であるとみなされるものとする。タンパク質の「フラグメント」という用語は、タンパク質のすべてのアミノ酸残基よりも少数のアミノ酸残基を含むポリペプチドを指す。タンパク質の「ドメイン」もまたフラグメントであり、多くの場合、活性または機能を付与することが必要とされる、タンパク質のアミノ酸残基を含む。
【００３８】
「創傷包帯材」という用語は、創傷に対する局所適用のための包帯材を指し、全身投与に適する組成物を除外する。例えば、１または複数のギャップジャンクション調節剤は、創傷接触材料（例えば、織られた布材料または不織の布材料）の固体シート中または固体シート上に分散させることもでき、ポリウレタン発泡体などの発泡体層中またはポリウレタンヒドロゲル、ポリアクリル酸ヒドロゲル、ゼラチン、カルボキシメチルセルロース、ペクチン、アルギネート、および／もしくはヒアルロン酸ヒドロゲルなどのヒドロゲル中、例えば、ゲルまたは軟膏中に分散させることもできる。一部の実施形態において、１または複数のギャップジャンクション調節剤は、創傷中への有効成分の持続的な放出をもたらす生体分解性のシート材料、例えば、凍結乾燥コラーゲンシート、凍結乾燥したコラーゲン／アルギネート混合物（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｍｉｔｅｄ社から登録商標ＦＩＢＲＡＣＯＬの下に入手可能）、または凍結乾燥コラーゲン／酸化再生セルロース（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｍｉｔｅｄ社から登録商標ＰＲＯＭＯＧＲＡＮの下に入手可能）の中またはこの上に分散される。
【００３９】
本明細書で用いられる「創傷促進マトリックス」は、例えば、コラーゲン、無細胞マトリックス、架橋生体足場分子、組織ベースの生体改変構造フレームワーク、生体加工による生体装具、また例えば、創傷治癒の促進に有用な細胞の浸潤および増殖に適する血管グラフトなど、他の植え込み構造物など、合成または天然のマトリックスを含む。さらなる適切な生体マトリックス材料は、抗原性および免疫原性を軽減する化学修飾したコラーゲン組織を含みうる。他の適切な例は、創傷包帯材用のコラーゲンシート、抗原を含まないかまたは抗原を低減した無細胞マトリックス（Ｗｉｌｓｏｎ ＧＪら、Ｔｒａｎｓ Ａｍ Ｓｏｃ Ａｒｔｉｆ Ｉｎｔｅｒｎ、１９９０年、第３６巻、３４０〜３４３頁）、または異種移植材料に対する抗原反応を軽減するように改変された他の生体マトリックスを含む。創傷治癒を促進するのに有用な他のマトリックスは、例えば、不溶性のコラーゲンおよびエラスチンを含む加工済みのウシ心膜タンパク質（Ｃｏｕｒｔｍａｎ ＤＷら、Ｊ Ｂｉｏｍｅｄ Ｍａｔｅｒ Ｒｅｓ、１９９４年、第２８巻、６５５〜６６６頁）、および宿主細胞の移動が組織再生を加速させるための天然の微小環境をもたらすのに有用でありうる他の無細胞組織（Ｍａｌｏｎｅら、Ｊ Ｖａｓｃ Ｓｕｒｇ、１９８４年、第１巻、１８１〜９１頁）を含みうる。本発明は、本明細書に記載される１または複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤（抗コネキシン４３ペプチドおよび抗コネキシン４３ペプチド模倣剤）を含む合成または天然のマトリックスを意図する。
【００４０】
本明細書で用いられる「創傷」という用語は、例えば、治癒が遅延しているかまたは困難な創傷、および慢性創傷を含めた、任意の組織に対する傷害を含む。創傷の例は、開放創傷および閉鎖創傷の両方を含みうる。「創傷」という用語はまた、例えば、異なる形で誘発され（例えば、長期間の横臥静養に由来する褥瘡、および外傷により誘導される創傷）、また多様な特性を有する、皮膚および皮下組織に対する傷害も含みうる。創傷は、創傷の深さに応じて、ｉ）グレードＩ：上皮に限局される創傷；ｉｉ）グレードＩＩ：真皮内に拡張する創傷；ｉｉｉ）グレードＩＩＩ：皮下組織内に拡張する創傷；およびｉｖ）グレードＩＶ（または全層創傷）：骨が露出する創傷（例えば、転子または仙骨などの骨圧点）の４つのグレードのうちの１つに分類することができる。
【００４１】
「部分層創傷」という用語は、グレードＩ〜ＩＩＩを包含する創傷を指し、部分層創傷の例は、褥瘡、静脈鬱血性潰瘍、および糖尿病性潰瘍を含む。本発明は、治癒が遅延している創傷、治癒が不完全な創傷、および慢性創傷を含む、予測される速度で治癒しない種類のすべての創傷の治療を意図する。
【００４２】
「ある／予測される速度で治癒しない創傷」とは、任意の組織に対する傷害を意味し、治癒が遅延しているかまたは困難な創傷（治癒が遅延しているかまたは不完全な創傷を含む）、および慢性創傷を含む。予測される速度で治癒しない創傷の例は、糖尿病性潰瘍、糖尿病性足部潰瘍、血管性潰瘍、動脈性潰瘍、静脈性潰瘍、静脈鬱血性潰瘍、熱傷潰瘍、感染性潰瘍、外傷誘導性潰瘍、褥瘡、褥瘡性潰瘍、壊疽性膿皮症と関連する潰瘍形成、および混合潰瘍などの潰瘍を含む。予測される速度で治癒しない他の創傷は、離開創を含む。
【００４３】
本明細書で用いられる、治癒が遅延しているかまたは困難な創傷は、例えば、１）炎症期の持続、２）細胞外マトリックスの形成遅延、および／または３）上皮形成速度の低下を少なくとも部分的に特徴とする創傷を含みうる。
【００４４】
「慢性創傷」という用語は、治癒しなかった創傷を指す。例えば、３か月以内に治癒しない創傷は、慢性であると考えられる。慢性創傷は、例えば、褥瘡、糖尿病性潰瘍、糖尿病性足部潰瘍、静脈性潰瘍、静脈鬱血性潰瘍、動脈性潰瘍、血管性潰瘍、熱傷潰瘍、外傷誘導性潰瘍、感染性潰瘍、混合潰瘍、および壊疽性膿皮症を含む。慢性創傷は、完全動脈遮断または部分動脈遮断から生じる潰瘍形成を含む動脈性潰瘍でありうる。慢性創傷は、静脈弁の機能不全および関連する血管疾患から生じる潰瘍形成を含む静脈性潰瘍または静脈鬱血性潰瘍でありうる。一部の実施形態において、慢性創傷を治療する方法は、慢性創傷が、以下の褥瘡のＡＨＣＰＲ病期：病期１、病期２、病期３、および／または病期４のうちの１つまたは複数を特徴とする場合に提供される。
【００４５】
本明細書で用いられる慢性創傷はまた、例えば、１）創傷炎症の慢性自己永続状態、２）創傷細胞外マトリックスの欠損および欠陥、３）（老化）創傷細胞（例えば、線維芽細胞）の応答不十分、４）細胞外マトリックス生成の制約、ならびに／または５）必要な細胞外マトリックスの組織化の欠如および移動のための足場の欠如に部分的に起因する再上皮形成不全を少なくとも部分的に特徴とする創傷も含みうる。慢性創傷はまた、１）炎症およびタンパク質分解活性の持続による、例えば、糖尿病性潰瘍、褥瘡（褥瘡性潰瘍）、静脈性潰瘍、および動脈性潰瘍を含む潰瘍性病変の惹起、２）罹患領域におけるマトリックスの進行性沈着、３）修復時間の長期化、４）創傷収縮の低減、５）再上皮形成の遅延、ならびに６）肉芽組織の肥厚も特徴とする。
【００４６】
例示的な慢性創傷は、「褥瘡」を含みうる。例示的な褥瘡は、例えば、病期１を含む、ＡＨＣＰＲ（米国保健福祉省、健康管理政策研究局）ガイドラインに基づく創傷分類の全４病期を含みうる。病期１の褥瘡は、身体上で隣接するかまたは反対側の領域と比較したその指標が、以下：皮膚温度（温熱または低温）、組織の硬さ（しまった感じかまたはゆるい感じ）、および／または感覚（疼痛、刺激）のうちの１つまたは複数における変化を含みうる、圧力と関連する無傷皮膚の観察可能な変化である。潰瘍は、わずかに色素沈着した皮膚における、明確な持続性の発赤領域として現れる一方、皮膚の色調がより暗色の場合、潰瘍は、持続性の赤色、青色、または紫色を伴って現れうる。病期１の潰瘍は、無傷皮膚の消退しない発赤、および皮膚潰瘍形成の前兆となる病変を含みうる。皮膚が暗色化している個体においては、皮膚の変色、温熱、浮腫、硬結、硬化もまた、病期１の潰瘍形成の指標でありうる。病期２：病期２の潰瘍形成は、表皮、真皮、またはこれらの両方に及ぶ部分層皮膚喪失を特徴としうる。潰瘍は表面的であり、臨床的には表皮剥離、水膨れ、または表層的な陥没として現れる。病期３：病期３の潰瘍形成は、基層の筋膜を貫通しないがこれへと拡張しうる、皮下組織に対する損傷またはこの壊死を伴う全層皮膚喪失を特徴としうる。潰瘍は、臨床的には、隣接組織を蝕む場合であれ、そうでない場合であれ、深い陥没として現れる。病期４：病期４の潰瘍形成は、筋肉、骨、または支持構造（例えば、腱、関節被膜）に対する広範な破壊、組織壊死、または損傷を伴う全層皮膚喪失を特徴としうる。一部の実施形態において、慢性創傷を治療する方法は、慢性創傷が、以下の褥瘡のＡＨＣＰＲ病期：病期１、病期２、病期３、および／または病期４のうちの１つまたは複数を特徴とする場合に提供される。
【００４７】
例示的な慢性創傷は、「褥瘡性潰瘍」を含みうる。例示的な褥瘡性潰瘍は、虚血をもたらす骨の突出部上において、圧力が長期間にわたり軽減されないことの結果として生じうる。創傷は、麻痺患者、意識喪失患者、または重度の衰弱患者など、自ら体位を変えて体重の負荷を除去することができない患者において生じる傾向がある。米国保健福祉省により定義される通り、主要な防止措置は、危険性の高い患者の同定；頻繁な評価；および定期的な体位変換、適切な圧力除去横臥、防湿バリア、および十分な栄養状態などの予防措置を含む。治療選択肢は、例えば、圧力の除去、手術による創面切除および酵素的創面切除、湿潤創傷の治療、および細菌負荷の抑制を含みうる。一部の実施形態では、虚血をもたらす骨の突出部上において、圧力が長期間にわたり軽減されないことの結果として生じる褥瘡性潰瘍または同潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。一部の実施形態では、虚血をもたらす骨の突出部上において、圧力が長期間にわたり軽減されないことの結果として生じる褥瘡性潰瘍または同潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００４８】
例示的な慢性創傷は、「動脈性潰瘍」を含みうる。慢性動脈性潰瘍とは一般に、動脈硬化性および高血圧性の心血管疾患を伴う潰瘍形成であると理解される。これらは、有痛で、境界が明瞭であり、下肢側部およびつま先において見出されることが多い。動脈性潰瘍は、組織の壊死および／または潰瘍形成をもたらしうる完全動脈遮断または部分動脈遮断を特徴とする潰瘍を含みうる。動脈性潰瘍の徴候は、例えば、下肢の無脈；有痛の潰瘍形成；極めて限局性であることが通常な、小型の点状潰瘍；低温皮膚または寒冷皮膚；毛細血管復帰時間の遅延（つま先の端部を軽く押して放し、約３秒間以内につま先に正常な色彩が戻るものとする）；皮膚の萎縮外見（例えば、光沢、薄化、乾燥）；ならびに指および足の体毛喪失を含みうる。
【００４９】
例示的な慢性創傷は、「静脈性潰瘍」を含みうる。例示的な静脈性潰瘍は、下肢が罹患する最も一般的な種類の潰瘍を含む場合があり、静脈弁の機能不全を特徴としうる。正常な静脈は、血液の逆流を防止する弁を有する。これらの弁が不全化すると、静脈血の逆流により、静脈鬱血が引き起こされる。赤血球からヘモグロビンが逸失して血管外腔へと漏出し、これにより、一般に言及される褐色の変色が引き起こされる。静脈性潰瘍を取り巻く皮膚の経皮酸素圧が低下することが示されており、これにより、領域の正常な血管形成を妨げる力が存在することが示唆される。リンパ液のドレナージおよび流動もまた、これらの潰瘍において役割を果たす。静脈性潰瘍は、内果近傍に現れる場合があり、通常、下肢の浮腫形成および硬結との組合せで生じ、浅く、それほど有痛でない場合があり、罹患部位からの滲出物の分泌を伴って現れる場合がある。一部の実施形態では、完全動脈遮断または部分動脈遮断に起因する動脈性潰瘍または同潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５０】
例示的な慢性創傷は、「静脈鬱血性潰瘍」を含みうる。鬱血性潰瘍とは、静脈機能不全と関連する病変であり、より一般的には内果全体に現れ、通常、圧痕性浮腫、静脈瘤、斑点状の色素沈着、紅斑、ならびに触知不能の点状出血および紫斑を伴う。鬱血性皮膚炎および鬱血性潰瘍は一般に、有痛ではなくて掻痒性である。例示的な静脈鬱血性潰瘍は、局所的低酸素症を結果としてもたらす下肢の慢性受動性静脈鬱血を特徴としうる。これらの創傷の１つの可能な発症機構は、厚い血管周囲のフィブリンカフを超える組織内への酸素拡散が妨害されることを含む。別の機構は、血管周囲組織内への高分子の漏出により、皮膚の完全性を維持するのに必要とされる成長因子が捕捉されることである。加えて、静脈鬱血により高分子である白血球の流動が遅くなり、白血球が毛細血管を閉塞させ、活性化し、血管内皮を損傷して潰瘍形成に対する素因を与える。一部の実施形態では、静脈弁の機能不全および関連する血管疾患に起因する静脈性潰瘍または同潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。一部の実施形態では、下肢の慢性受動性静脈鬱血および／または結果として生じる局所的低酸素症に起因する静脈鬱血性潰瘍または同潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５１】
例示的な慢性創傷は、「糖尿病性潰瘍」を含みうる。糖尿病患者は、神経学的合併症および血管合併症の両方に起因する足部潰瘍形成を含む潰瘍形成に罹患しやすい傾向がある。末梢の神経障害は、足部および／または脚部における感覚の変化または感覚の完全な喪失を引き起こしうる。神経障害が進行した糖尿病患者は、とがったもの／まるいものを区別するすべての能力を失う。神経障害を有する患者では、足部に対する任意の切開または外傷が、数日間または数週間にわたって完全に知覚されないままの場合がある。神経障害を有する患者の場合、実際には潰瘍が現れてかなりの時間が経過していても、潰瘍が「今現れた」と知覚することがまれではない。神経障害患者の場合、グルコースの厳密な制御により疾患の進行が遅くなることが示されている。感覚低下の結果として、シャルコー足部変形もまた生じうる。自らの足部において「正常な」感覚を有する者は、足部領域上にある圧力が大きすぎる場合、これを自然に感知する能力を有する。それが同定されると、われわれの身体は、この圧迫を緩和するように体位を本能的に変える。神経障害が進行した患者は、持続的な圧迫を感知するこの能力を失い、結果として、例えば、足底部の潰瘍形成をもたらす組織の虚血および壊死が生じうる。加えて、足部骨における微小骨折が感知および治療されずにおかれると、結果として、変形、慢性腫脹、およびさらなる骨の突出が生じうる。微小血管疾患は、これもまた潰瘍形成ももたらしうる、糖尿病の著明な合併症の１つである。一部の実施形態では、糖尿病の神経学的合併症および血管合併症の両方に起因する糖尿病性足部潰瘍および／または同潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５２】
例示的な慢性創傷は、「外傷性潰瘍」を含みうる。例示的な外傷性潰瘍の形成は、身体に対する外傷性傷害の結果として生じうる。これらの傷害は、例えば、動脈系、静脈系、またはリンパ系に対する損傷；骨格の骨構造に対する変化；組織層（表皮、真皮、皮下軟組織、筋肉、または骨）の喪失；身体部分または臓器に対する損傷および身体部分または臓器の喪失を含む。一部の実施形態では、身体に対する外傷性傷害と関連する潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５３】
例示的な慢性創傷は、例えば、第１度熱傷（すなわち、皮膚表面の発赤領域）；第２度熱傷（水膨れ液を除去した後で自然治癒しうる水膨れの傷害部位）；第３度熱傷（皮膚全層に及ぶ熱傷で、通常、創傷治癒には手術による介入を要する）；熱湯熱傷（熱湯、熱湯熱傷を引き起こすグリースまたはラジエータ液により生じうる）；火炎熱傷（火炎により生じる場合があり、通常、深部熱傷である）；化学熱傷（酸およびアルカリにより生じる場合があり、通常、深部熱傷である）；電気熱傷（家庭周辺の低電圧または業務地における高電圧）；爆発閃光熱傷（通常は表面的な傷害）；および接触熱傷（通常、深部熱傷であり、マフラーテールパイプ、高温のアイロン、およびストーブにより生じうる）を含む熱傷の結果として生じる潰瘍形成を含む「熱傷潰瘍」を含みうる。一部の実施形態では、身体に対する熱傷と関連する潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５４】
例示的な慢性創傷は、「血管炎性潰瘍」を含みうる。血管炎性潰瘍もまた、下肢において生じ、有痛で境界が明瞭な病変であり、病変は、触知可能な紫斑および出血性水泡と関連しうる。膠原病、敗血症、および各種の血液学的障害（例えば、血小板減少症、異タンパク血症）が、この重度で急性の状態の原因となりうる。
【００５５】
例示的な慢性創傷は、壊疽性膿皮症を含みうる。壊疽性膿皮症は、単独または複数で圧痛の激しい下肢部の潰瘍として生じる。暗赤色〜紫色の穿掘性辺縁部により、化膿性の中央部欠損が取り囲まれる。生検では、血管炎が明らかとならないことが典型的である。患者の半数において、それは、潰瘍性大腸炎、限局性回腸炎、または白血病などの全身疾患と関連する。一部の実施形態では、壊疽性膿皮症と関連する潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５６】
例示的な慢性創傷は、角膜潰瘍または無痛性潰瘍を含む、眼潰瘍を含みうる。また、目の持続性上皮欠損も含まれる。これらはヒトにおいて生じる場合があり、また、競技動物（ウマなど）およびペット動物（イヌを含む）においても生じる場合がある。
【００５７】
例示的な慢性創傷は、感染性潰瘍を含みうる。感染性潰瘍は、各種生物の直接的接種の後に生じ、著明な限局性リンパ節肥大と関連しうる。Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ感染、炭疽病、ジフテリア、ブラストミセス症、スポロトリクム症、野兎病、および猫引っかき熱が例である。第１期梅毒の生殖器潰瘍は、清浄、堅固な基底を伴う無圧痛性であることが典型的である。軟性下疳および鼠径部肉芽腫の生殖器潰瘍は、ぼろぼろに汚れていっそうひどい病変となる傾向がある。一部の実施形態では、感染症と関連する潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療する方法が提供される。
【００５８】
本明細書で用いられる「離開創」という用語は、破裂または裂開した、通常は手術による創傷である創傷を指す。一部の実施形態では、離開を特徴とする、予測される速度では治癒しない創傷を治療する方法が提供される。
【００５９】
ギャップジャンクション調節剤
本明細書で説明される一部の薬剤は、細胞内へ、また細胞からの分子の輸送を調節するかまたはこれに影響を及ぼす（例えば、遮断するかまたは阻害する）ことが可能である。したがって、本明細書で説明される一部のギャップジャンクション調節剤は、細胞連絡（例えば、細胞間）を調節する。一部のギャップジャンクション調節剤は、細胞質とペリプラズム腔または細胞外腔との間における分子の移送を調節するかまたはこれに影響を及ぼす。このような薬剤は一般に、細胞質と細胞外腔または組織との間における小分子の交換に個別に関与しうるヘミチャネル（コネクソンとも呼ばれる）を標的とする。したがって、本明細書で提供される化合物は、細胞間（ギャップジャンクションを介する）または細胞と細胞外腔もしくは組織との間（ヘミチャネルを介する）における結合を直接的または間接的に低減させることが可能であり、細胞から細胞外腔内への分子の輸送の調節は、本発明の一部の化合物および実施形態の範囲内にある。
【００６０】
本発明の実施形態では、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルを通る分子の通過（例えば、輸送）に対する所望の阻害を誘発することが可能な任意の分子を用いることができる。ギャップジャンクションまたはヘミチャネルを通る分子の通過を調節する化合物はまた、特定の実施形態（例えば、細胞質から細胞外腔内への分子の通過を調節する実施形態）においても提供される。このような化合物は、ギャップジャンクションの結合解除を伴う場合であれ、伴わない場合であれ、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルを通る分子の通過を調節しうる。このような化合物は、例えば、全体的または部分的にギャップジャンクションまたはヘミチャネルの機能または活性を遮断しうる、例えば、結合タンパク質、ポリペプチド、および他の有機化合物を含む。
【００６１】
一部のギャップジャンクション阻害剤は、Ｅｖａｎｓ， Ｗ．Ｈ．およびＢｏｉｔａｎｏ， Ｓ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｔｒａｎｓ．、２９巻、６０６〜６１２頁（２００１年）において列挙されている。ギャップジャンクションおよびヘミチャネルに対するペプチド阻害剤（ペプチド模倣剤を含む）が報告されている。例えば、Ｂｅｒｔｈｏｕｄ， Ｖ．Ｍ．ら、Ａｍ Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．、２７９巻、６１９〜６２２頁（２０００年）； Ｄｅ Ｖｒｉｅｓｅら、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．、６１巻、１７７〜１８５頁（２００１年）；Ｂｏｉｔａｎｏ Ｓ．およびＥｖａｎｓ Ｗ．、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ、２７９：Ｌ６２３〜Ｌ６３０頁（２０００年）を参照されたい。
【００６２】
本明細書で用いられる「ギャップジャンクション調節剤」とは、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの活性、機能、または形成を全体的または部分的に阻止するか、低減させるか、または調節する薬剤または化合物を広く含みうる。一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの機能を全体的または部分的に阻止または低減する。一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの全体的または部分的な閉鎖を誘導する。他の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションを全体的または部分的に遮断する。一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの開口を、全体的または部分的に低減させるかまたは阻止する。一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤によるギャップジャンクションまたはヘミチャネルの前記遮断または閉鎖は、細胞外腔またはペリプラズム腔へ、また細胞外腔またはペリプラズム腔からの開口チャネルを通る低分子の流動を阻止または低減することにより、細胞外ヘミチャネル連絡を低減させることも可能であり、これを阻害することも可能である。ここでは、ヘミチャネルおよび／またはギャップジャンクションの開口を遮断するペプチド模倣剤およびギャップジャンクションリン酸化化合物が好ましい。
【００６３】
一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの活性または機能を阻止するか、低減させるか、または変化させる。本明細書で用いられるギャップジャンクションの活性または機能の調節は、ギャップジャンクションの閉鎖、ヘミチャネルの閉鎖、ならびに／またはギャップジャンクションおよび／もしくはヘミチャネルを通る分子もしくはイオンの通過を含みうる。
【００６４】
ある別の態様において、ギャップジャンクション調節剤は、例えば、脂肪族アルコール；オクタノール；ヘプタノール；麻酔剤（例えば、ハロタン）、エトレン（ethrane）、フルオタン、プロポフォール、およびチオペンタール；アナンダミド；アリールアミノベンゾアート（ＦＦＡ：親油性であるフルフェナム酸および類似の誘導体）；カルベンオキソロン；カルコン（２’５’−ジヒドロキシカルコン）；ＣＨＦ（クロロヒドロキシフラノン）；ＣＭＣＦ（３−クロロ−４−（クロロメチル）−５−ヒドロキシ−２（５Ｈ）−フラノン）；デキサメタゾン；ドキソルビシン（および他のアントラキノン誘導体）；エイコサノイドであるトロンボキサンＡ（２）（ＴＸＡ（２））模倣剤；ＮＯ（一酸化窒素）；脂肪酸（例えば、アラキドン酸、オレイン酸、およびリポキシゲナーゼ代謝物）；フェナム酸（フルフェナム酸（ＦＦＡ）、ニフルミン酸（ＮＦＡ）、およびメクロフェナム酸（ＭＦＡ））；ゲニステイン；グリチルレチン酸（ＧＡ）：１８ａ−グリチルレチン酸および１８−β−グリチルレチン酸、ならびにこれらの誘導体；リンダン；リゾホスファチジン酸；メフロキン；メナジオン；２−メチル−１，４−ナフトキノン、ビタミンＫ（３）；ナフェノピン；オカダ酸；オレアミド；オレイン酸；ＰＨ、細胞間酸化によるゲーティング、例えば、酸化剤；多価不飽和脂肪酸；脂肪酸ＧＪＩＣ阻害剤（例えば、オレイン酸およびアラキドン酸）；キニジン；キニーネ；オールトランスレチノイン酸；およびタモキシフェンを含みうる。
【００６５】
例示的なギャップジャンクション調節剤は、限定なしに述べると、ポリペプチド（例えば、ペプチド模倣剤、抗体、これらの結合フラグメント、および合成構築物）、および他のギャップジャンクション遮断剤、およびギャップジャンクションタンパク質リン酸化剤を含みうる。ギャップジャンクションを閉鎖するのに用いられる例示的な化合物（例えば、コネキシン４３のチロシン残基をリン酸化する）は、Ｊｅｎｓｅｎらによる米国特許第７，１５３，８２２号、米国特許第７，２５０，３９７号、および分類された特許公報において報告されている。例示的なペプチドおよびペプチド模倣剤は、Ｇｒｅｅｎら、ＷＯ２００６１３４４９４において報告されている。また、Ｇｏｕｒｄｉｅら、ＷＯ２００６０６９１８１；およびＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＷＯ２００３０３２９６４も参照されたい。
【００６６】
本明細書で用いられる「ギャップジャンクションリン酸化剤」は、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルの閉鎖、また、したがって、ギャップジャンクションの調節を誘導するために、コネキシンのアミノ酸残基上においてリン酸化を誘導することが可能な薬剤または化合物を含みうる。例示的なリン酸化部位は、コネキシンタンパク質上における１もしくは複数のチロシン残基、セリン残基、またはトレオニン残基を含む。一部の実施形態において、リン酸化の調節は、１または複数のコネキシンタンパク質上における１または複数の残基上において生じうる。例示的なギャップジャンクションリン酸化剤は当技術分野において周知であり、例えば、ｃ−Ｓｒｃチロシンキナーゼまたは他のＧタンパク質結合受容体アゴニストを含みうる。Ｇｉｅｐｍａｎｓ Ｂ（２００１年）、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２７６巻、１１号、８５４４〜８５４９頁を参照されたい。一実施形態において、１または複数のこれらの残基上におけるリン酸化の調節は、特に、ヘミチャネルの閉鎖を介して、ヘミチャネルの機能に影響を及ぼす。別の実施形態において、１または複数のこれらの残基上におけるリン酸化の調節は、特に、ギャップジャンクションの閉鎖を介して、ギャップジャンクションの機能に影響を及ぼす。コネキシン４３ギャップジャンクションおよびコネキシン４３ヘミチャネルの閉鎖を標的とするギャップジャンクションリン酸化剤が好ましい。
【００６７】
結合タンパク質（例えば、抗体、抗体フラグメントなど）、ペプチド、ペプチド模倣剤、およびペプチド模倣剤を含むポリペプチド化合物が、適切なギャップジャンクション調節剤である。
【００６８】
結合タンパク質は、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメント；単鎖抗体；単鎖Ｆｖ；また例えば、特定の抗体または他の結合分子と接触する抗原決定基（すなわち、一般にエピトープと称する分子の部分）に結合可能な結合ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン、組換え抗体、ならびに抗体フラグメントを含む単鎖結合分子などの単鎖結合分子を含む）を含む。抗体、抗体フラグメントなどを含むこれらの結合タンパク質は、キメラの場合もあり、ヒト化される場合もあり、他の形でこれらが投与される対象における免疫原性を低減させる場合もあり、また、合成する場合もあり、組換えにより作製する場合もあり、発現ライブラリー内において作製する場合もある。本明細書で言及され、かつ／または当技術分野においてより詳細に説明される結合分子など、当技術分野において公知であるかまたは将来的に発見される任意の結合分子が意図される。例えば、結合タンパク質は、抗体などだけではなく、リガンド、受容体、ペプチド模倣剤、または標的（例えば、コネキシン、コネクソン、ギャップジャンクション、または関連する分子）に結合する他の結合フラグメントもしくは分子（例えば、ファージディスプレイにより作製される）も含む。
【００６９】
結合分子は一般に、結合特異性を含むがこれに限定されない所望の特異性、および所望の親和性を有する。親和性は、例えば、約１０４Ｍ−１以上、約１０６Ｍ−１以上、約１０７Ｍ−１以上、約１０８Ｍ−１のＫａでありうる。約１０９Ｍ−１以上、約１０１０Ｍ−１以上、約１０１１Ｍ−１以上、および約１０１２Ｍ−１以上の親和性など、約１０８Ｍ−１をさらに超える親和性が適する。本発明による結合タンパク質の親和性は、従来の技法、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら、１９４９年、Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．、第５１巻、６６０頁により説明される技法を用いて容易に決定することができる。
【００７０】
本発明は、ギャップジャンクションおよびヘミチャネルを調節するペプチド（ペプチド模倣剤および複数のペプチド模倣剤が含まれる）の使用を含む。ヒドロパシープロットから得られるデータを用いることにより、コネキシンは、４つの膜貫通領域および２つの短い細胞外ループを含有すると仮定されている。コネキシンの第１および第２の細胞外領域の配置は、分離されたギャップジャンクション上における対応するエピトープの免疫学的局在決定に用いられる抗ペプチド抗体の作製報告によりさらに特徴づけられた（Ｇｏｏｄｅｎｏｕｇｈ Ｄ．Ａ．、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、第１０７巻、１８１７〜１８２４頁（１９８８年）； Ｍｅｙｅｒ Ｒ．Ａ．、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、第１１９巻、１７９〜１８９頁（１９９２年））。
【００７１】
ペプチドまたはこれらの変異体は、例えば、固相ペプチド合成法によっても、酵素触媒ペプチド合成によっても、組換えＤＮＡ法を援用しても、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成することができる。固相ペプチド合成法は確立されて広く用いられている方法であり、以下：Ｓｔｅｗａｒｔら（１９６９年）、「Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ； Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３年）、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、８５巻、２１４９頁； Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ、「Ｈｏｒｍｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｃ．Ｈ． Ｌｉ編、２巻（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９７３年）、４８〜２６７頁； ならびにＢａｖａａｙおよびＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｅ． ＧｒｏｓｓおよびＦ． Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、２巻（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８０年）、３〜２８５頁などの参考文献中において説明されている。これらのペプチドは、免疫親和性カラムまたはイオン交換カラム上における画分化；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカまたはＤＥＡＥなどの陰イオン交換樹脂上におけるクロマトグラフィ；等電点電気泳動；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿；例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−７５を用いるゲル濾過；リガンド親和性クロマトグラフィ；または非極性溶媒もしくは非極性／極性溶媒の混合物からの結晶化もしくは沈殿によりさらに精製することができる。結晶化または沈殿による精製が好ましい。
【００７２】
隣接する２つの細胞が寄与するヘミチャネルの細胞外ドメインが互いに「結合」して、完全なギャップジャンクションチャネルが形成される。これらの細胞外ドメインの相互作用に干渉する試薬は、細胞間連絡または細胞外環境に対するヘミチャネルの開口を損なわせ得る。
【００７３】
ギャップジャンクション調節剤は、コネキシン（例えば、コネキシン４５、４３、２６、３０、３１．１、および３７）の膜貫通領域（例えば、第１〜第４）に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含む。コネキシン４３の膜貫通領域の一部に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含むギャップジャンクション調節剤が、本発明における使用に好ましい。
【００７４】
ギャップジャンクション調節剤は、コネキシン４５の膜貫通ドメインの一部に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含みうる。ギャップジャンクション調節剤は、配列番号１の約５〜２０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号１の約８〜１５の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、または配列番号１の約１１〜１３の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他の実施形態は、配列番号１の少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドであるギャップジャンクション調節剤を対象とする。本明細書で提供される一部のギャップジャンクション調節剤では、配列番号１の位置４６〜７５および１９９〜２２８にあるアミノ酸に対応するコネキシン４５の細胞外ドメインを用いて、特定のペプチド配列を開発することができる。本明細書に記載の一部のペプチドは、配列番号１の位置４６〜７５および１９９〜２２８にある領域に対応するアミノ酸配列を有する。ペプチドは、配列番号１のこれらの部分と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、ペプチドが結合活性または機能活性を保持するような保存的アミノ酸変化を作製することができる。代替的に、ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質の領域（例えば、位置４６〜７５および１９９〜２２８に対応しない配列番号１の部分）も標的としうる。
【００７５】
また、適切なギャップジャンクション調節剤は、コネキシン４３の膜貫通領域の一部に対応するアミノ酸配列を含むペプチドも含み得る。ギャップジャンクション調節剤は、配列番号２の約５〜２０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号２の約８〜１５の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、または配列番号２の約１１〜１３の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他のギャップジャンクション調節剤は、配列番号２の少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他のギャップジャンクション調節剤は、配列番号２の位置３７〜７６および１７８〜２０８にあるアミノ酸に対応するコネキシン４３の細胞外ドメインを含む。ギャップジャンクション調節剤は、配列番号２の位置３７〜７６および１７８〜２０８にある領域に対応するアミノ酸配列を有する、本明細書に記載のペプチドを含む。ペプチドは、配列番号２のこれらの部分と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、ペプチドが結合活性または機能活性を保持するような保存的アミノ酸変化を作製することができる。代替的に、ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質の領域（例えば、位置３７〜７６および１７８〜２０８に対応しない配列番号２の部分）も標的としうる。
【００７６】
他のギャップジャンクション調節剤は、カルボキシ末端ポリペプチドを含む。
【００７７】
【化１】
【００７８】
【化２】
【００７９】
【化３】
ギャップジャンクション調節ペプチドは、ペプチドが機能的に活性なギャップジャンクション調節化合物であるような保存的アミノ酸置換を伴う、コネキシンの細胞外ドメインの一部に対応する配列を含みうる。例示的な保存的アミノ酸置換は、例えば、別の非極性アミノ酸による非極性アミノ酸の置換、別の芳香族アミノ酸による芳香族アミノ酸の置換、別の脂肪族アミノ酸による脂肪族アミノ酸の置換、別の極性アミノ酸による極性アミノ酸の置換、別の酸性アミノ酸による酸性アミノ酸の置換、別の塩基性アミノ酸による塩基性アミノ酸の置換、および別のイオン性アミノ酸によるイオン性アミノ酸の置換を含む。
【００８０】
コネキシン４３を標的とする例示的なペプチドを、以下の表１に示す。Ｍ１、２、３、および４は、それぞれ、コネキシン４３タンパク質の第１〜第４の膜貫通領域を指す。Ｅ２は、それぞれ、第１および第２の細胞外ループを指す。
【００８１】
表１：細胞間連絡に対するペプチド阻害剤（ｃｘ４３）
【００８２】
【表１】
表２は、ヘミチャネル機能またはギャップジャンクション機能を阻害するのに用いられる、さらなる例示的なコネキシンペプチドについて記載する。他の実施形態では、ペプチドまたはこれらのフラグメントに対して保存的なアミノ酸変化が作製される。
【００８３】
表２：細胞間連絡に対するさらなるペプチド阻害剤（ｃｘ３２、ｃｘ４３）
【００８４】
【表２】
表３は、本明細書で説明されるペプチド阻害剤を開発するのに用いられるコネキシンファミリーメンバーの細胞外ループについて記載する。表４に記載されるペプチドおよびこれらのフラグメントは、一部の非限定的な実施形態においてペプチド阻害剤として用いられる。他の非限定的な実施形態では、この表中のペプチドの約８〜約１５、または約１１〜約１３の連続アミノ酸を含むペプチドが、本発明のペプチド阻害剤である。ペプチドまたはこれらのフラグメントには、保存的なアミノ酸変化を作製することができる。Ｂｏｉｔａｎｏ Ｓ．およびＥｖａｎｓ Ｗ．、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ、２７９巻、６２３〜６３０頁（２０００年）を参照されたい。
【００８５】
表３：各コネキシンファミリーメンバーの細胞外ループ
【００８６】
【表３−１】
【００８７】
【表３−２】
異なるコネキシンアイソタイプのＥ２ドメイン配列を表３に示す。配列番号７のペプチドの最後の４アミノ酸が第４膜ドメインの一部であることに注意されたい。
【００８８】
表４は、ペプチドによるギャップジャンクション調節剤を開発するのに用いうるコネキシンファミリーメンバーの細胞外ドメインについて記載する。表４に記載されるペプチドおよびこれらのフラグメントもまた、ペプチドによるギャップジャンクション調節剤として用いることができる。このようなペプチドは、この表４中のペプチド配列の約８〜約１５、または約１１〜約１３の連続アミノ酸を含みうる。ペプチドまたはこれらのフラグメントには、保存的なアミノ酸変化を作製することができる。
【００８９】
表４：細胞外ドメイン
【００９０】
【表４−１】
【００９１】
【表４−２】
表５は、コネキシン４０の細胞外ループ（Ｅ１およびＥ２）に関して示されるコネキシン４０に対するペプチド阻害剤について記載する。太字のアミノ酸は、コネキシン４０の膜貫通領域を対象とする。
【００９２】
表５：Ｃｘ４０ペプチド阻害剤
【００９３】
【表５】
表６は、コネキシン４５の細胞外ループ（Ｅ１およびＥ２）に関して示されるコネキシン４５に対するペプチド阻害剤について記載する。太字のアミノ酸は、コネキシン４５の膜貫通領域を対象とする。
【００９４】
表６：Ｃｘ４５ペプチド阻害剤
【００９５】
【表６】
一部の実施形態では、一部のペプチド阻害剤が、ギャップジャンクションに対する所望の遮断なしに、ヘミチャネルを遮断することが好ましい。特定の理論または機構に拘束されることを望まないが、一部のペプチド模倣剤（例えば、ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号１１））はまた、ギャップジャンクションの結合解除を引き起こすことなくヘミチャネルを遮断するとも考えられている。ペプチドＳＲＧＧＥＫＮＶＦＩＶ（配列番号９５）は、対照配列として用いることができる（ＤｅＶｒｉｅｓｅら、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔ．、第６１巻、１７７〜１８５頁（２００２年））。コネキシン４５に対するペプチド阻害剤の例は、ＹＶＣＳＲＬＰＣＨＰ（配列番号９６）、ＱＶＨＰＦＹＶＣＳＲＬ（配列番号９７）、ＦＥＶＧＦＬＩＧＱＹＦＬＹ（配列番号９８）、ＧＱＹＦＬＹＧＦＱＶＨＰ（配列番号９９）、ＧＦＱＶＨＰＦＹＶＣＳＲ（配列番号１００）、ＡＶＧＧＥＳＩＹＹＤＥＱ（配列番号１０１）、ＹＤＥＱＳＫＦＶＣＮＴＥ（配列番号１０２）、ＮＴＥＱＰＧＣＥＮＶＣＹ（配列番号１０３）、ＣＹＤＡＦＡＰＬＳＨＶＲ（配列番号１０４）、ＦＡＰＬＳＨＶＲＦＷＶＦ（配列番号１０５）およびＬＩＧＱＹ（配列番号１０６）、ＱＶＨＰＦ（配列番号１０７）、ＹＶＣＳＲ（配列番号１０８）、ＳＲＬＰＣ（配列番号１０９）、ＬＰＣＨＰ（配列番号１１０）およびＧＥＳＩＹ（配列番号１１１）、ＹＤＥＱＳＫ（配列番号１１２）、ＳＫＦＶＣＮ（配列番号１１３）、ＴＥＱＰＧＣＥＮ（配列番号１１４）、ＶＣＹＤＡＦＡＰ（配列番号１１５）、ＬＳＨＶＲＦＷＶＦＱ（配列番号１１６）である。ペプチドは、ＳＲＬ、ＰＣＨ、ＬＣＰ、ＣＨＰ、ＩＹＹ、ＳＫＦ、ＱＰＣ、ＶＣＹ、ＡＰＬ、ＨＶＲを含む３アミノ酸長だけの場合もあり、例えば、ＬＩＱＹＦＬＹＧＦＱＶＨＰＦ（配列番号１１７）、ＶＨＰＦＹＣＳＲＬＰＣＨＰ（配列番号１１８）、ＶＧＧＥＳＩＹＹＤＥＱＳＫＦＶＣＮＴＥＱＰＧ（配列番号１１９）、ＴＥＱＰＧＣＥＮＶＣＹＤＡＦＡＰＬＳＨＶＲＦ（配列番号１２０）、ＡＦＡＰＬＳＨＶＲＦＷＶＦＱ（配列番号１２１）など、より長い場合もある。
【００９６】
例示的なペプチドはまた、例えば、コネキシンタンパク質、ＶＣＹＤＱＡＦＰＩＳＨＩＲ（配列番号：１２２）、ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号：１２３）、ＳＲＰＴＥＫＴＩＦＩＩ（配列番号：１２４）、ＳＲＰＴＥＫＮＶＦＩＶ（配列番号：１２５）、ＲＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫ（配列番号：１２６）、ＰＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫ（配列番号：１２７）、ＩＶＤＣＹＶＳＲＰＴＥＫ（配列番号：１２８）、ＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号：１２９）、ＶＣＹＤＱＡＦＰＩＳＨＩＲ（配列番号：１３０）、ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲＩ（配列番号：１３１）、ＳＲＰＴＥＫＴＩＦＩＩ（配列番号：１３２）、ＳＲＰＴＥＫＮＶＦＩＶ（配列番号：１３３）、ＲＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫ（配列番号：１３４）、ＰＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫ（配列番号：１３５）、およびＩＶＤＣＹＶＳＲＰＴＥＫ（配列番号：１３６）、ＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号：１３７）のギャップ２６および２７の細胞外ループ部分の１または複数に対して相同的な合成ペプチドを含む、ＧｒｉｆｆｉｔｈによるＷＯ２００３０３２９６４において報告されるペプチドも含みうる。
【００９７】
本明細書では、相同性および相同体について論じる。このようなポリヌクレオチドは、例えば、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約４０、少なくとも約１００以上の連続ポリヌクレオチドの領域にわたって、対象の配列と少なくとも約７０％の相同性、好ましくは少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、または少なくとも約９９％の相同性を有することが典型的である。
【００９８】
相同性は、当技術分野における任意の方法に基づいて計算することができる。例えば、ＵＷＧＣＧパッケージでは、相同性を計算するのに用いうるＢＥＳＴＦＩＴプログラム（例えば、そのデフォルト設定で用いられる）が提供される（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら（１９８４年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１２巻、３８７〜３９５頁）。ＰＩＬＥＵＰアルゴリズムおよびＢＬＡＳＴアルゴリズムは、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｓ． Ｆ．（１９９３年）、Ｊ Ｍｏｌ Ｅｖｏｌ、３６巻、２９０〜３００頁； Ａｌｔｓｃｈｕｌ， Ｓ， Ｆら（１９９０年）、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、２１５巻、４０３〜１０頁において説明される通り、相同性を計算するか、または配列を整列するのに用いることができる（それらのデフォルト設定における場合が典型的である）。
【００９９】
ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、米国立バイオテクノロジー情報センター（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）により公開されている。このアルゴリズムは、まず、データベース配列中における同じ長さのワードにより整列する場合、ある正の値の閾値スコアＴにマッチするかまたはこれを満たすクエリー配列中における長さＷの短いワードを同定することによる、高スコアリング配列対（ＨＳＰ）の同定を伴う。Ｔを、近傍ワードスコア閾値（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、前出）と称する。これらの初期近傍ワードヒットは、それらを含有するＨＳＰを見出す検索を開始するための契機として作用する。ワードヒットは、累積のアライメントスコアが増大しうる限りにおいて、各配列に沿って両方向に延長される。各方向におけるワードヒットの延長は、累積アライメントスコアが、達成されたその最大値から量Ｘだけ低減する場合；累積スコアが、１または複数の負のスコアの残基アライメントの累積により、ゼロ以下に低減する場合；またはいずれかの配列の端部に到達する場合に停止される。
【０１００】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ、およびＸにより、整列の感度および速度が決定される。ＢＬＡＳＴプログラムでは、ワード長（Ｗ＝１１）、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９９２年）、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８９巻、１０９１５〜１０９１９頁を参照されたい）によるアラインメント（Ｂ＝５０）、期待値（Ｅ＝１０）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、および両方の鎖の比較が、デフォルトのパラメータとして用いられる。
【０１０１】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムでは、２つの配列間における類似性に対する統計学的解析が実施される。例えば、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３年）、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、９０巻、５８７３〜５７８７頁を参照されたい。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の１つの尺度は、２つのアミノ酸配列の間におけるマッチが偶然に生じる確率を示す、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））である。例えば、第２の配列に対して第１の配列を比較した場合の最小合計確率が約１未満、好ましくは約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、また最も好ましくは約０．００１未満である場合、ある配列は別の配列に対して類似すると考えられる。
【０１０２】
相同配列は、少なくとも約２、５、１０、１５、２０以上（または約２、５、１０、１５、２０だけ）の変異（置換、欠失、または挿入でありうる）により対象配列と異なることが典型的である。これらの変異は、相同性の計算との関連で、上述の領域のいずれかにわたって測定することができる。
【０１０３】
相同配列は、バックグラウンドを著明に上回るレベルで、元の配列に選択的にハイブリダイズすることが典型的である。選択的なハイブリダイゼーションは、中程度〜高度に厳密な条件を用いて達成することが典型的である。しかし、このようなハイブリダイゼーションは、当技術分野（Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９年）、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」を参照されたい）において公知の任意の適切な条件下で実施することができる。
【０１０４】
ギャップジャンクション改変剤：他の抗コネキシン剤
ギャップジャンクション調節剤は、ギャップジャンクションおよび／またはヘミチャネルを閉鎖もしくは遮断するか、またはギャップジャンクションを介する細胞間情報伝達を別の形で防止するかもしくは低下させるか、またはヘミチャネルを介する細胞外環境への細胞の情報伝達を別の形で防止するかもしくは低下させる薬剤を含む。これらは、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの活性、機能、または形成を、全体的または部分的に防止するか、低下させるか、または阻害する薬剤または化合物を含む。
【０１０５】
一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの全体的または部分的な閉鎖を誘導する。他の実施形態において、ギャップジャンクション改変剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションを、全体的または部分的に遮断する。一部の実施形態において、ギャップジャンクション改変剤は、ヘミチャネルまたはギャップジャンクションの開口を、全体的または部分的に低下させるかまたは防止する。
【０１０６】
一部の実施形態において、ギャップジャンクション改変剤によるギャップジャンクションまたはヘミチャネルの前記遮断または閉鎖は、細胞外腔またはペリプラズム腔への開口チャネルを介する低分子の流動を防止するかまたは低下させることにより、、また細胞外腔またはペリプラズム腔からの開口チャネルを介する低分子の流動を防止するかまたは低下させることにより、細胞外ヘミチャネル情報伝達を低下させることも可能であり、これを阻害することも可能である。
【０１０７】
ヘミチャネルまたはギャップジャンクションを閉鎖するのに用いられるギャップジャンクション改変剤（例えば、コネキシン４３のチロシン残基をリン酸化する）は、Ｊｅｎｓｅｎらへの米国特許第７，１５３，８２２号、米国特許第７，２５０，３９７号、および分類された特許公報において報告されている。例えば、ＺＯ−１タンパク質の結合を阻害すると言われるコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドに関しては、Ｇｏｕｒｄｉｅら、ＷＯ２００６０６９１８１もまた参照されたい。Ｇｏｕｒｄｉｅら、ＷＯ２００６０６９１８１は、このようなペプチドを含む製剤の使用について説明している。
【０１０８】
本明細書で用いられる「ギャップジャンクションリン酸化剤」は、ギャップジャンクションまたはヘミチャネルの閉鎖を誘導するために、コネキシンのアミノ酸残基上においてリン酸化を誘導することが可能な薬剤または化合物を含みうる。例示的なリン酸化部位は、コネキシンタンパク質上における１つもしくは複数のチロシン残基、セリン残基、またはトレオニン残基を含む。一部の実施形態において、リン酸化の調節は、１または複数のコネキシンタンパク質上における１つまたは複数の残基上において生じうる。例示的なギャップジャンクションリン酸化剤は当技術分野において周知であり、例えば、ｃ−Ｓｒｃチロシンキナーゼまたは他のＧタンパク質共役受容体アゴニストを含みうる。Ｇｉｅｐｍａｎｓ Ｂ， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、第２７６巻、第１１号、８５４４〜８５４９頁、２００１年３月１６日を参照されたい。一実施形態において、１つまたは複数のこれらの残基上におけるリン酸化の調節は、特に、ヘミチャネルの閉鎖によって、ヘミチャネルの機能に影響を及ぼす。別の実施形態において、１つまたは複数のこれらの残基上におけるリン酸化の調節は、特に、ギャップジャンクションの閉鎖によって、ギャップジャンクションの機能に影響を及ぼす。コネキシン４３ギャップジャンクションおよびコネキシン４３ヘミチャネルの閉鎖を標的とするギャップジャンクションリン酸化剤が好ましい。
【０１０９】
さらに他の抗コネキシン剤は、コネキシンカルボキシ末端ポリペプチドを含む。Ｇｏｕｒｄｉｅら、ＷＯ２００６／０６９１８１を参照されたい。
【０１１０】
ある別の態様において、ギャップジャンクション改変剤は、例えば、脂肪族アルコール；オクタノール；ヘプタノール；麻酔剤（例えば、ハロタン）、エトレン、フルオタン、プロポフォール、およびチオペンタール；アナンダミド；アリールアミノベンゾアート（ＦＦＡ：親油性であるフルフェナム酸および類似の誘導体）；カルベンオキソロン；カルコン（２’，５’−ジヒドロキシカルコン）；ＣＨＦ（クロロヒドロキシフラノン）；ＣＭＣＦ（３−クロロ−４−（クロロメチル）−５−ヒドロキシ−２（５Ｈ）−フラノン）；デキサメタゾン；ドキソルビシン（および他のアントラキノン誘導体）；エイコサノイドであるトロンボキサンＡ（２）（ＴＸＡ（２））模倣剤；ＮＯ（一酸化窒素）；脂肪酸（例えば、アラキドン酸、オレイン酸、およびリポキシゲナーゼ代謝物）；フェナム酸（フルフェナム酸（ＦＦＡ）、ニフルミン酸（ＮＦＡ）、およびメクロフェナム酸（ＭＦＡ））；ゲニステイン；グリチルレチン酸（ＧＡ）：１８ａ−グリチルレチン酸および１８−β−グリチルレチン酸、ならびにこれらの誘導体；リンダン；リゾホスファチジン酸；メフロキン；メナジオン；２−メチル−１，４−ナフトキノン、ビタミンＫ（３）；ナフェノピン；オカダ酸；オレアミド；オレイン酸；ＰＨ、細胞内酸性化によるゲーティング、例えば、酸性化剤；多価不飽和脂肪酸；脂肪酸ＧＪＩＣ阻害剤（例えば、オレイン酸およびアラキドン酸）；キニジン；キニーネ；全 トランス−レチノイン酸；およびタモキシフェンを含みうる。
【０１１１】
用量、製剤、および投与
本発明のギャップジャンクション調節剤（本明細書で論じられる製剤の形態における場合が典型的）は、本明細書で言及される創傷のいずれかを有する対象など、治療を必要とする対象に投与することができる。こうして、対象の創傷を改善することができる。したがって、ギャップジャンクション調節剤および製剤は、治療による対象の身体の処置に用いることができる。これらは、本明細書で言及される創傷のいずれかを治療する医薬の製造において用いることができる。
【０１１２】
したがって、本発明により、細胞間連絡および／またはヘミチャネル連絡を一過性におよび部位特異的な形で下方調節しうる製剤が提供される。ギャップジャンクション調節剤は、所望の最終濃度を与える薬学的に許容される担体により処方されると好都合でありうる。
【０１１３】
ギャップジャンクション調節剤は、実質的に単離形態で存在しうる。生成物は、生成物の意図される目的に干渉しない担体または希釈剤と混合することができ、これをなおも実質的に単離状態にあるとみなしうることが理解される。本発明の生成物はまた、実質的に精製形態の場合もあり、この場合、生成物は一般に、ペプチド（または他のギャップジャンクション調節剤）の、または調製物の乾燥質量の、約８０％、８５％、または９０％、例えば、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％を含む。
【０１１４】
意図される投与の経路に応じて、本発明の医薬品、医薬組成物、組合せ調製物、および薬剤は、例えば、溶液、懸濁液、点滴、軟膏剤（ｓａｌｖｅｓ）、クリーム、ゲル、泡沫、スプレー、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、エマルジョン、ローション、ペイント、持続放出製剤、または粉末の形態をとる可能性があり、（１または複数の）有効成分の０．１％〜約１％、（１または複数の）有効成分の約１％〜約５０％、（１または複数の）有効成分の約２％〜約６０％、（１または複数の）有効成分の約２％〜約７０％、または（１または複数の）有効成分の約９０％までを含有することが典型的である。他の適切な製剤は、プロニックゲルベースの製剤、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）ベースの製剤、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ｈｙｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）（ＨＰＭＣ）ベースの製剤を含む。プルロニックゲルを含む適切な製剤は、例えば、約１０〜約１５パーセント、適切には約１２パーセントを含む。他の有用な製剤は、徐放調製物または遅延放出調製物を含む。
【０１１５】
ゲルまたはゼリーは、ゼラチン、トラガカント、またはセルロース誘導体を含むがこれらに限定されない適切なゲル化剤を用いて作製することができ、保湿剤、皮膚軟化剤、および防腐剤としてグリセロールを含みうる。軟膏は、脂肪基剤、蝋基剤、または合成基剤中に組み込まれた有効成分からなる半固体調製物である。適切なクリームの例は、油中水エマルジョンおよび水中油エマルジョンを含むがこれらに限定されない。油中水クリームは、セチルアルコールまたはセトステアリルアルコールなどの脂肪族アルコールによる乳化剤および乳化蝋と類似するがこれらに限定されない特性を有する適切な乳化剤を用いて調合することができる。水中油クリームは、セトマクロゴール乳化蝋などの乳化剤を用いて調合することができる。適切な特性は、エマルジョンの粘稠度を変化させる能力、および広範なｐＨにわたる物理および化学の両面における安定性を含む。水溶性または混和性のクリーム基剤は、防腐剤系を含有する場合があり、また、許容される生理学的なｐＨを維持するように緩衝化することもできる。
【０１１６】
泡沫調製物は、不活性の噴霧剤を用いる適切なアプリケーターにより、加圧エアゾールキャニスターから送達するように調合することができる。泡沫基剤の製剤に適する賦形剤は、プロピレングリコール、乳化蝋、セチルアルコール、およびステアリン酸グリセリルを含むがこれらに限定されない。潜在的な防腐剤は、メチルパラベンおよびプロピルパラベンを含む。
【０１１７】
本発明のギャップジャンクション調節剤を薬学的に許容される担体または希釈剤と組合せて、医薬組成物を作製することが好ましい。適切な担体および希釈剤は、等張性の食塩液、例えば、リン酸塩緩衝化食塩液を含む。適切な希釈剤および賦形剤はまた、例えば、水、食塩液、デキストロース、グリセロールなど、およびこれらの組合せ物も含む。加えて、所望の場合、保湿剤または乳化剤、安定化剤またはｐｈ緩衝剤などの物質もまた存在しうる。
【０１１８】
「薬学的に許容される担体」という用語は、組成物を投与される個体に有害な抗体の生成をそれ自体では誘導せず、不適切な毒性なしに投与しうる任意の薬学的な担体を指す。適切な担体は、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、およびアミノ酸コポリマーなどの大型でゆっくりと代謝される高分子でありうる。
【０１１９】
例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩などのような鉱酸塩、および酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩などの有機酸塩など、薬学的に許容される塩もまた存在しうる。
【０１２０】
適切な担体物質は、局所投与用のクリーム、ローション、スプレー、泡沫、ゲル、エマルジョン、ローション、またはペイントのための基剤として一般に用いられる任意の担体またはビヒクルを含む。例は、乳化剤、炭化水素による基剤を含む不活性担体、乳化基剤、非毒性溶媒、または水溶性の基剤を含む。特に適切な例は、プルロニック、ＨＰＭＣ、ＣＭＣ、および他のセルロース基剤の成分、ラノリン、硬質パラフィン、液体パラフィン、軟質黄色パラフィン、または軟質白色パラフィン、白色蜜蝋、黄色蜜蝋、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、ジメチコーン、乳化蝋、ミリスチン酸イソプロピル、微晶質蝋、オレイルアルコール、およびステアリルアルコールを含む。
【０１２１】
薬学的に許容される担体またはビヒクルは、ゲルであることが好ましく、非イオン性ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーゲル、例えば、プルロニックゲル、好ましくはＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７（ＢＡＳＦ Ｃｏｒｐ．）であることが適切である。このゲルは、低温では液体であるが、生理学的温度では急速に固まり、これにより、ＯＤＮ成分の放出が適応部位またはその部位にすぐの近接部位に限定されるので特に好ましい。
【０１２２】
カゼイン、ゼラチン、アルブミン、膠、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、またはポリビニルアルコールなどの補助剤もまた、本発明の製剤中に組み入れることができる。
【０１２３】
他の適切な製剤は、プロニックゲル基剤の製剤、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）基剤の製剤、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）基剤の製剤を含む。組成物は、局所投与、点滴投与、非経口投与、筋肉内投与、皮下投与、または経皮投与を含む、任意の所望の送達形態に応じて調合することができる。他の有用な製剤は、徐放調製物または遅延放出調製物を含む。
【０１２４】
所与の対象または創傷に対して有効な用量は、日常的な実験または当技術分野において公知であるかもしくは将来的に開発される他の方法により決定することができる。例えば、ある範囲の用量値を調合するために、細胞培養アッセイおよび動物試験を用いることができる。このような化合物の用量は、集団の少なくとも５０％に対して治療的に有効な用量内にあり、このレベルにおいてほとんどまたはまったく毒性を示さないことが好ましい。
【０１２５】
本発明の方法および組成物において用いられる各ギャップジャンクション調節剤の有効用量は、多数の因子（用いられる１または複数の特定のギャップジャンクション調節剤、投与方式、投与頻度、治療される創傷、治療される創傷の重症度、投与経路、治療される患者部分集団の要件、またはその患者の異なる要件が、その患者に特異的な年齢、性別、体重、対象の治療創傷に起因しうる個々の患者の要件が挙げられる）に応じて異なりうる。
【０１２６】
患者にギャップジャンクション調節剤が投与される場合の用量は、患者の年齢、体重、および全般的な創傷、治療される創傷、ならびに投与される特定のギャップジャンクション調節剤など、各種の因子に依存する。
【０１２７】
適切な用量は対象の体重ｋｇ当たりのギャップジャンクション調節剤の量に基づく場合があり、これは、約０．０１〜約４０ｍｇ／体重ｋｇなど、約０．００１〜約１００ｍｇ／体重ｋｇを含む。しかし、適切な用量は、約０．０１〜約０．０５０ｍｇ／体重ｋｇなど、約０．００１〜約０．１ｍｇ／体重ｋｇでありうる。
【０１２８】
適切な用量は、約０．０１〜約０．１ｍｇ／体重ｋｇなど、約０．００１〜約０．１ｍｇ／体重ｋｇでありうる。しかし、適切な用量は、約０．００１〜約０．０５０ｍｇ／体重ｋｇを含む、約０．００１〜約０．２５ｍｇ／体重ｋｇでありうる。代替的に、例えば、一部の実施形態において、各対象化合物の用量は一般に、体重ｋｇ当たり約１ｎｇ〜約１マイクログラム、体重ｋｇ当たり約１ｎｇ〜約０．１マイクログラム、体重ｋｇ当たり約１ｎｇ〜約１０ｎｇ、体重ｋｇ当たり約１０ｎｇ〜約０．１マイクログラム、体重ｋｇ当たり約０．１マイクログラム〜約１マイクログラム、体重ｋｇ当たり約２０ｎｇ〜約１００ｎｇ、体重ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約１００ｍｇ、体重ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇ、または体重ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約１ｍｇの範囲である。一部の実施形態において、各対象化合物の用量は一般に、約０．００１ｍｇ〜約０．０１ｍｇ、体重ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約０．１ｍｇ、体重ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約１ｍｇ、または体重ｋｇ当たり約１ｍｇ〜約１０ｍｇの範囲である。複数種のギャップジャンクション調節剤を用いる場合、各ギャップジャンクション調節剤の用量は、他の用量と同じ範囲である必要はない。
【０１２９】
適用当たり約１〜１００、２００、３００、４００、５００マイクログラム、および最大１ミリグラムの用量が適切である。ギャップジャンクション調節剤の投与量は、例えば、約１、約２、約３、約４、または約５マイクログラム、約５〜約１０マイクログラム、約１０〜約１５マイクログラム、約１５〜約２０マイクログラム、約２０〜約３０マイクログラム、約３０〜約４０マイクログラム、約４０〜約５０マイクログラム、約５０〜約７５マイクログラム、約７５〜約１００マイクログラム、約１００マイクログラム〜約２５０マイクログラム、および２５０マイクログラム〜約５００マイクログラムを含む。０．５〜約１．０ミリグラム以上の投与量もまた提供される。
【０１３０】
代替的に、本発明の組成物中における各ギャップジャンクション調節剤の用量は、それが適用される領域のサイズ、長さ、深さ、面積、または容積に対する組成物の濃度を基準として決定することができる。例えば、一部の局所適用において、医薬組成物の用量は、医薬組成物の質量（例えば、グラム）または適用領域の長さ、深さ、面積、もしくは容積当たりの医薬組成物の濃度（例えば、μｇ／ｕｌ）に基づいて計算することができる。したがって、他の有用な用量は、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１〜約１０マイクログラムの範囲にある。一部の用量は、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１〜２、約１〜５、約２〜４、約５〜７、および約８〜１０マイクログラムである。他の有用な用量は、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１０マイクログラムを超え、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１５マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約２０マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約２５マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約３０マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約３５マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約４０マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約５０マイクログラム、および創傷サイズの平方センチメートル当たり約１００〜約１５０マイクログラムを含む。他の用量は、平方センチメートル当たり約１５０〜２００マイクログラム、平方センチメートル当たり約２００〜２５０マイクログラム、平方センチメートル当たり約２５０〜３００マイクログラム、平方センチメートル当たり約３００〜３５０マイクログラム、平方センチメートル当たり約３５０〜４００マイクログラム、および平方センチメートル当たり約４００〜５００マイクログラムを含む。さらに他の用量は、平方センチメートル当たり５００〜１０００マイクログラムの範囲の用量を含む。他の用量は、平方センチメートル当たり１〜１０ミリグラムでありうる。持続放出製剤は、抗コネキシンペプチドおよび抗コネキシンペプチド模倣剤に特に適切でありうる。
【０１３１】
一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤組成物は、治療部位において、かつ／または治療部位に隣接して、約０．０１マイクロモル濃度（μＭ）または０．０５μＭ〜約２００μＭ、または最大３００μＭ、または最大１０００μＭ、または最大２０００μＭ、または最大３２００μＭ以上の最終濃度、およびこれらの用量数値内にある任意の用量および用量範囲で適用することができる。抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤の組成物を含むギャップジャンクション調節剤は約０．０５μＭ〜約１００μＭの最終濃度で適用されることが好ましく、ギャップジャンクション調節剤組成物は約１．０μＭ〜約５０μＭの最終濃度で適用されることがより好ましく、ギャップジャンクション調節剤組成物は約５〜１０μＭ〜約３０〜５０μＭの最終濃度で適用されることがより好ましい。加えて、混合されたギャップジャンクション調節剤組成物は約８μＭ〜約２０μＭの最終濃度で適用され、また代替的に、ギャップジャンクション調節剤組成物は約１０μＭ〜約２０μＭの最終濃度、または約１０〜約１５μＭの最終濃度で適用される。他の一部の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、約１０μＭの最終濃度で適用される。他の実施形態において、抗コネキシン剤は、約２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ、１０〜２００μＭ、２００〜３００μＭ、３００〜４００μＭ、４００〜５００μＭ、５００〜６００μＭ、６００〜７００μＭ、７００〜８００μＭ、８００〜９００μＭ、９００〜１０００、または１０００〜１５００μＭ、もしくは１５００μＭ〜２０００μＭ、もしくは２０００μＭ〜３０００μＭ以上の最終濃度、またはこれらの範囲内の任意の用量で適用される。
【０１３２】
さらに別の実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、約１〜１５μＭの最終濃度で適用される。
【０１３３】
ギャップジャンクション調節剤の投与量は、例えば、約０．１〜１、１〜２、２〜３、３〜４、または４〜５マイクログラム（μｇ）、約５〜約１０μｇ、約１０〜約１５μｇ、約１５〜約２０μｇ、約２０〜約３０μｇ、約３０〜約４０μｇ、約４０〜約５０μｇ、約５０〜約７５μｇ、約７５〜約１００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、および２５０μｇ〜約５００μｇを含む。上記で言及した通り、０．５〜約１．０ミリグラム以上の投与量もまた提供される。
【０１３４】
投与容量は治療される部位のサイズに依存し、例えば、約２５〜１００μＬ〜約１００〜２００μＬ、約２００〜５００μＬ〜約５００〜１０００μＬの範囲でありうる。より大きな治療部位には、ミリリットル用量もまた適切である。
【０１３５】
上記組成物は、投与後少なくとも約０．５〜１時間、少なくとも約１〜２時間、少なくとも約２〜４時間、少なくとも約４〜６時間、少なくとも約６〜８時間、少なくとも約８〜１０時間、少なくとも約１２時間、または少なくとも約２４時間にわたって上記コネキシンタンパク質の発現を下方調節するか、またはギャップジャンクションの形成もしくはコネクソンの開口を調節するのに十分な量で投与されると好都合である。
【０１３６】
本発明の組成物および方法における各ギャップジャンクション調節剤の用量はまた、それが適用される領域のサイズ、長さ、深さ、面積、または体積に対する組成物の濃度を基準として決定することもできる。例えば、一部の局所適用および他の適用、例えば、点滴において、医薬組成物の用量は、医薬組成物の質量（例えば、マイクログラム）または適用領域の長さ、深さ、面積、もしくは体積当たりの医薬組成物の濃度（例えば、μｇ／ｕｌ）に基づいて計算することができる。
【０１３７】
複数種のギャップジャンクション調節剤を組み合わせて用いることにより、異なる成分の効果の発生および持続が補完的となりうるため、任意の個々の成分に対して必要とされる用量を低減することができる。このような組合せ療法において、異なる活性薬剤は、共に送達することもでき、個別に送達することもでき、また、同時に送達することもでき、１日のうちの異なる時点において送達することもできる。
【０１３８】
用量は、単一の適用で投与することもでき、適用を分割して投与することもできる。用量は、一度に投与することもでき、適用を反復することもできる。約毎週１回、または創傷治癒が停滞するかもしくは遅れると考えられうる場合に反復適用を行うことが典型的である。用量は、１〜７日間以上の間隔で適用することができる。例えば、毎週、もしくは隔週、もしくは毎月、または他の頻度、例えば、創傷治癒が遅れるかもしくは停滞する場合および時点において反復適用を行うことができる。代替的に、一部の眼科使用など一部の適応の場合、最高１時間ごとのより高頻度の投与を用いることができる。
【０１３９】
１または複数のギャップジャンクション調節剤を、同じ経路または異なる経路を介して投与することができる。１または複数のギャップジャンクション調節剤は、固体支持体（包帯材および他のマトリックスなど）および医薬製剤（ゲル、混合物、懸濁液、および軟膏など）を用いる局所投与を含むがこれらに限定されない局所投与（末梢投与または部位への直接投与）により送達されることが好ましい。一実施形態において、固体支持体は、生体適合膜または治療部位内への挿入を含む。別の実施形態において、固体支持体は、包帯材またはマトリックスを含む。本発明の一実施形態において、固体支持体組成物は、１または複数のギャップジャンクション調節剤が、アルギン酸塩、コラーゲン、または合成の生体吸収性ポリマーのマトリックスなどの徐放固体マトリックス中に分散される、徐放の固体支持体組成物でありうる。固体支持体組成物は、無菌であるかまたは低バイオバーデンであることが好ましい。一実施形態では、１つ以上のギャップジャンクション調節剤を含む洗浄液を用いることができる。
【０１４０】
製剤のギャップジャンクション調節剤成分を、ある時間、場合によって、約１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８、または約２４時間以上にわたり送達することは、一部の整形外科治療、またはより重度の傷害もしくは創傷、または慢性創傷もしくは治癒が遅延している創傷において特に有利でありうる。場合によって、細胞喪失は、手術部位をはるかに超えて、周囲の細胞にまで拡大しうる。このような喪失は、元の手術から２４時間以内に生じる可能性があり、ギャップジャンクションによる細胞間連絡を介する。したがって、例えば、コネキシン発現の下方調節、またはコネクソン開口の遮断のための（１または複数の）ギャップジャンクション調節剤の投与により、細胞間連絡、またはコネクソン調節の場合には細胞外腔内への喪失が調節され、さらなる細胞の喪失もしくは傷害または傷害の帰結が最小化される。
【０１４１】
下方調節が誘導される部位および所望される治療効果の両方に送達時間が依存する一方で、約１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８時間、または約２４時間以上にわたる連続送達または徐放送達がもたらされる。本発明によれば、これは、ギャップジャンクション調節剤を、薬学的に許容される担体または媒体と併せた製剤中に組み入れることにより達成される。
【０１４２】
ある態様により、ギャップジャンクション調節剤は、局所投与（治療される部位において投与）することができる。一態様では、ギャップジャンクション調節剤を薬学的に許容される担体または希釈剤と混合して、医薬組成物を作製することが好ましい。適切な担体および希釈剤は、等張性の生理食塩液、例えば、リン酸緩衝生理食塩液を含む。別の態様において、組成物は、筋肉内投与、皮下投与、または経皮投与用に処方することができる。
【０１４３】
本明細書で説明される投与経路および用量は、任意の特定の患者および創傷に対する用量の指針だけのものとして意図される。
【０１４４】
包帯材およびマトリックス
一態様において、ギャップジャンクション調節剤は、包帯材またはマトリックスの形態で提供される。一部の実施形態では、本発明のギャップジャンクション調節剤が直接的な適用のための液体組成物、半固体組成物、もしくは固体組成物の形態で提供されるか、あるいは組成物が包帯材ガーゼもしくはマトリックスなどの固体接触層の表面へと適用されるか、またはこの中へと組み込まれる。包帯材組成物は、例えば、流体またはゲルの形態で提供することができる。１または複数のギャップジャンクション調節剤は、局所適用のための従来の医薬賦形剤と組合せて提供することができる。適切な担体は、プルロニックゲル、ポロキサマーゲル、セルロース誘導体（ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびこれらの混合物を含む）を含有するヒドロゲル；ならびにポリアクリル酸を含有するヒドロゲル（Ｃａｒｂｏｐｏｌｓ）を含む。適切な担体はまた、局所医薬調製物に用いられるクリーム／軟膏、例えば、セトマクロゴール乳化軟膏に基づくクリームも含む。上記の担体は、アルギン酸塩（増粘剤または刺激剤として）、ベンジルアルコールなどの防腐剤、リン酸水素二ナトリウム／リン酸二水素ナトリウムなどのｐＨ調整のための緩衝液、塩化ナトリウムなどの浸透圧を調整するための薬剤、およびＥＤＴＡなどの安定化剤を含みうる。
【０１４５】
一実施形態において、１もしくは複数の抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤、例えば、抗コネキシン４３ペプチドまたは抗コネキシン４３ペプチド模倣剤は、天然または合成のマトリックス上において投与される。
【０１４６】
適切な包帯材またはマトリックスは、例えば、１または複数のギャップジャンクション調節剤を伴う以下のものを含みうる。コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤が好ましい。
【０１４７】
１）吸収材：適切な吸収材は、例えば、セルロース、木綿、またはレーヨンなどの高度に吸収性の繊維層と組み合わせた、例えば、半接着質または非接着層をもたらしうる、例えば、吸収性包帯材を含みうる。代替的に、吸収材は、主要な（ｐｒｉｍａｒｙ）包帯材または補助的な（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ）包帯材として用いることができる。
【０１４８】
２）アルギン酸塩：適切なアルギン酸塩は、例えば、天然の多糖繊維または海藻に由来するキセロゲルからなる不織パッド、非接着パッド、およびリボンである包帯材を含む。適切なアルギン酸塩包帯材は、例えば、滲出物との接触の場合イオン交換過程を介して湿潤ゲルを形成しうる。一部の実施形態において、アルギン酸塩包帯材は、やわらかく快適であり、不規則的な形状をした領域上での填塞、陥入、または適合が容易であるように設計される。一部の実施形態において、アルギン酸塩包帯材は、第２の包帯材と共に用いることができる。
【０１４９】
３）抗菌包帯材：適切な抗菌包帯材は、例えば、例えば銀およびポリヘキサメチレンビグアニド（ＰＨＭＢ）などの生体活性薬剤の送達を促進して、これが必要であるかまたは望ましい場所で、感染に対する効力を維持しうる包帯材を含みうる。一部の実施形態において、適切な抗菌包帯材は、例えば、スポンジ、浸透化織りガーゼ、フィルム包帯材、吸収性製品、アイランド包帯材、ナイロン繊維、非接着バリア、または材料の組合せとして入手可能でありうる。
【０１５０】
４）生体物質および生合成物質：適した生体物質包帯材または生合成物質包帯材は、例えば、天然供給源に由来するゲル、溶液、または半透性シートを含みうる。一部の実施形態において、ゲルまたは溶液は、治療部位に適用され、バリア保護のための包帯材により被覆される。別の実施形態では、膜として作用する可能性があり、単回の適用後においてその場に残存するシートをｉｎ ｓｉｔｕで配置する。
【０１５１】
５）コラーゲン：適切なコラーゲン包帯材は、例えば、ウシ、ブタ、もしくは鳥類の供給源、または他の天然の供給源もしくはドナーに由来する、例えば、ゲル、パッド、粒子、ペースト、粉末、シート、または溶液を含みうる。一部の実施形態において、コラーゲン包帯材は、治療部位における滲出物と相互作用してゲルを形成しうる。一部の実施形態において、コラーゲン包帯材は、補助的な包帯材と組み合わせて用いることができる。
【０１５２】
６）複合材料：適切な複合材料包帯材は、例えば、物理的に異なる成分を単一の生成物へと混合して、例えば、細菌バリア、吸収、および接着など複数の機能を提供する包帯材を含みうる。一部の実施形態において、複合材料包帯材は、例えば、複数の層からなり、半接着パッドまたは非接着パッドを組み込む。一部の実施形態において、複合材料はまた、例えば、接着性の輪郭を有する不織布製テープまたは透明フィルムも含む。他の一部の実施形態において、複合材料包帯材は、例えば、主要な包帯材としても補助的な包帯材としても機能することが可能であり、さらに別の実施形態において、包帯材は、局所医薬組成物と組み合わせて用いることができる。
【０１５３】
７）接触層：適切な接触層包帯材は、例えば、ある領域上に配置されて、例えば、治療部位に適用された他の薬剤または包帯材との直接的な接触から組織を保護する、薄型の非接着シートを含みうる。一部の実施形態において、接触層は、治療部位領域の形状に調和するように配置することができ、また多孔性であるため、透過する滲出物を、上部の補助的な包帯材に吸収させることができる。さらに別の実施形態において、接触層包帯材は、局所医薬組成物と組み合わせて用いることができる。
【０１５４】
８）弾性包帯：適切な弾性包帯は、例えば、伸縮して身体の外形に調和する包帯材を含みうる。一部の実施形態において、繊維成分は、例えば、木綿、ポリエステル、レーヨン、またはナイロンを含みうる。他の一部の実施形態において、弾性包帯は、例えば、第２層としてのまたは補助的包帯材としての吸収をもたらし、被覆をその場に保持するか、圧力を加えるか、または治療部位にクッションを与えることができる。さらに別の実施形態において、接触層包帯材は、局所医薬組成物と組み合わせて用いることができる。
【０１５５】
９）発泡体：適切な発泡体包帯材は、例えば、流体の保持が可能な小さな開放セルを有する、発泡ポリマー溶液（ポリウレタンを含む）のシートおよび他の形状を含みうる。例示的な発泡体は、例えば、他の材料と組み合わせて浸透化または層状化することができる。一部の実施形態では、発泡体の厚さおよび組成に基づいて吸収能を調製することができる。他の一部の実施形態において、治療部位と接触する領域は、取り外しを容易とするために非接着性でありうる。さらに別の実施形態において、発泡体は、接着性の輪郭および／または抗感染性バリアとして働きうる透明のフィルムコーティングと組み合わせて用いることができる。
【０１５６】
１０）ガーゼおよび不織包帯材：適切なガーゼ包帯材および織地包帯材は、例えば、吸収性の程度が多様な乾燥織地スポンジまたは吸収性の程度が多様な乾燥不織スポンジおよび吸収性の程度が多様な乾燥織地ラップまたは吸収性の程度が多様な乾燥不織ラップを含みうる。例示的な繊維組成物は、例えば、木綿、ポリエステル、レーヨンを含みうる。一部の実施形態において、ガーゼおよび不織包帯材は、バルクにおいて滅菌の場合であれ非滅菌の場合であれ、また、接着性の輪郭を伴う場合であれ伴わない場合であれ入手可能でありうる。例示的なガーゼ包帯材および不織包帯材は、各種の治療部位を消毒、パッキング、被覆に用いることができる。
【０１５７】
１１）親水コロイド：適切な親水コロイド包帯材は、例えば、ゼラチン、ペクチン、またはカルボキシメチルセルロースからなるウェハー、粉末、またはペーストを含みうる。一部の実施形態において、ウェハーは自己接着性であり、接着性の輪郭を伴う場合であれ伴わない場合であれ入手可能であり、また多種多様な形状およびサイズで入手可能である。例示的なハイドロコロイドは、外形合わせを必要とする領域において有用である。一部の実施形態において、粉末およびペーストの親水コロイドは、第２の包帯材と組み合わせて用いることができる。
【０１５８】
１２）ヒドロゲル（アモルファス）：適切なアモルファスヒドロゲル包帯材は、例えば、水分を与え、湿潤性の治癒環境を維持し、治療部位に水分を補給するように設計された、水、ポリマー、および不定形の他の成分による製剤を含みうる。一部の実施形態において、ヒドロゲルは、補助的な包帯材カバーと組み合わせて用いることができる。
【０１５９】
１３）ヒドロゲル：浸透化包帯材：適切な浸透化ヒドロゲル包帯材は、例えば、アモルファスヒドロゲルに浸したガーゼおよび不織スポンジ、ロープ、ならびにストリップを含みうる。アモルファスヒドロゲルは、例えば、乾燥治療部位に水分を与え、湿潤性の治癒環境を維持するように設計された、水、ポリマー、および不定形の他の成分による製剤を含みうる。
【０１６０】
１４）ヒドロゲルシート：適切なヒドロゲルシートは、例えば、水中において不溶性であり、膨潤により水溶液と相互作用する、架橋された親水性ポリマーの三次元ネットワークを含みうる。例示的なヒドロゲルは、高度に適合性でありそして透過性であり、それらの組成に応じて、広範な量のドレナージを吸収できる。一部の実施形態において、ヒドロゲルは、治療部位に対して非接着性であるか、または取り外しが容易であるように処置される。
【０１６１】
１５）浸透化包帯材：適切な浸透化包帯材は、例えば、溶液、エマルジョン、油、ゲル、または例えば、食塩液、油、亜鉛塩、ワセリン、ゼロフォーム（ｘｅｒｏｆｏｒｍ）、およびスカーレットレッド（ｓｃａｒｌｅｔ ｒｅｄ）のほか、本明細書に記載の化合物を含む、他の一部の薬学的に活性な化合物もしくは担体薬剤に浸したガーゼおよび不織スポンジ、ロープ、ならびにストリップを含みうる。
【０１６２】
１６）シリコンゲルシート：適切なシリコンゲルシート包帯材は、例えば、メッシュまたは布により補強されるかまたはこれに結合した架橋ポリマーからなる軟質カバーを含みうる。
【０１６３】
１７）溶液：適切な液体包帯材は、例えば、細胞外マトリックス中に見出される多タンパク質物質および他のエレメントの混合物を含みうる。一部の実施形態では、デブリドマンおよび洗浄の後において例示的な溶液を治療部位に適用し、次いで、吸収性包帯材または非接着性パッドにより被覆することができる。
【０１６４】
１８）透明フィルム：適切な透明フィルム包帯材は、片面が接着剤によりコーティングされる、多様な厚さのポリマー膜を含みうる。一部の実施形態において、透明フィルムは液体、水、および細菌に対しては不透過性であるが、水蒸気および大気中の気体に対しては透過性である。一部の実施形態では、透明性により、治療部位が視覚化される。
【０１６５】
１９）充填剤：適切な充填剤包帯材は、例えば、ビーズ、クリーム、発泡体、ゲル、軟膏、パッド、ペースト、クッション（ｐｉｌｌｏｗ）、粉末、ストランド、または他の調合物を含みうる。一部の実施形態において、充填剤は非接着性であり、経時放出型抗菌剤を含みうる。例示的な充填剤は、湿潤環境の維持、滲出物の管理、また、例えば、部分層創傷および全層創傷、感染創傷、排液性創傷、およびパッキングを要する深部創傷の治療に有用でありうる。
【０１６６】
本明細書で言及または説明される疾患、障害、および／または状態を有するか、またはこれらを有することが疑われる対象を治療する方法のいずれかでは、本明細書で説明される用量、剤形、製剤、および／または組成物のいずれかが投与されうる。
【０１６７】
ペプチドおよび他のギャップジャンクション調節組成物
本発明は、ギャップジャンクション調節化合物（ペプチド模倣剤を含む）を含む医薬組成物に関する。組成物は、例えば、慢性創傷、また本明細書で説明される他の創傷を含む、治癒が遅延しているかまたは困難な創傷の治癒を増強または促進するのに有用である。同様に、他の組織損傷の場合、本発明の方法および組成物は、創傷治癒過程の促進および炎症の軽減の両方において有効である。したがって、本発明の製剤および組成物は、慢性創傷および治癒の遅い創傷、ならびに本明細書で説明される他の創傷の治療において明らかな利益をもたらす。
【０１６８】
一部の実施形態において、本発明の組成物は、有効量の１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む。一実施形態において、組成物は、１つのコネキシンだけに関連するギャップジャンクションを標的とするギャップジャンクション調節剤を含有する。このギャップジャンクションは、コネキシン４３タンパク質と関連することが最も好ましい。
【０１６９】
代替的に、組成物は、複数種のコネキシンタンパク質と関連するギャップジャンクションを標的とする１または複数のギャップジャンクション調節剤を含みうる。調節物質が対象とする１種のコネキシンタンパク質は、コネキシン４３であることが好ましい。調節物質が対象とする他のギャップジャンクションは、例えば、コネキシン２６、３０、３０．３、３１．１、３２、３６、３７、４０、４０．１、４４．６、４５、および４６と関連するギャップジャンクションを含みうる。
【０１７０】
他の実施形態において、本発明の組成物は、（ａ）有効量の１または複数のギャップジャンクション調節剤と、（ｂ）薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む。一態様において、本発明は、（ａ）１または複数のポリペプチドと、（ｂ）薬学的に許容される担体または希釈剤とを提供する。好ましい実施形態において、ポリペプチドは、コネキシン２６、３１．１、３２、３７、４０、４３、もしくは４５のペプチド模倣剤またはこの相同体である。他の実施形態において、ポリペプチドは、コネキシン３０、３０．３、３６、４０．１、４４．６、４５、もしくは４６のペプチド模倣剤またはこの相同体である。
【０１７１】
一態様において、本発明は、（ａ）１または複数の結合タンパク質と、（ｂ）薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、結合タンパク質は抗体である。好ましい実施形態において、結合タンパク質は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ、単鎖結合分子である。一実施形態において、結合タンパク質、例えば、抗体は、コネキシンポリペプチド、好ましくは、コネキシン２６、コネキシン３０、コネキシン３１．１、コネキシン３２、コネキシン３７、コネキシン４０、もしくはコネキシン４５のポリペプチドまたはこの任意の部分に特異的に結合する。好ましい一実施形態において、結合タンパク質、例えば、抗体は、コネキシン４３ポリペプチドまたはこの任意の部分に特異的に結合する。一実施形態において、結合タンパク質はコネキシンポリペプチドに特異的に結合し、約１０４Ｍ−１以上、約１０６Ｍ−１以上、約１０７Ｍ−１以上、約１０８Ｍ−１の親和性を有する。約１０９Ｍ−１、約１０１０Ｍ−１、約１０１１Ｍ−１、および約１０１２Ｍ−１以上の親和性など、約１０８Ｍ−１をさらに超える親和性が適する。
【０１７２】
別の態様において、医薬組成物は、（ａ）１または複数の結合タンパク質と、（ｂ）薬学的に許容される担体または希釈剤とを含み、結合タンパク質はペプチド阻害剤である。一実施形態において、ペプチド阻害剤は、コネキシン２６、コネキシン３０、コネキシン３１．１、コネキシン３２、コネキシン３７、コネキシン４０、またはコネキシン４５の膜貫通領域に対応するアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態において、ペプチド阻害剤は、コネキシン４３の膜貫通領域に対応するアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、配列番号１に記載の約５〜２０の連続アミノ酸を含む。別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、配列番号２に記載の約５〜２０の連続アミノ酸を含む。別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、配列番号２の位置３７〜７６および１７８〜２０８にある領域に対応するアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、または配列番号２６に記載の約５〜２０の連続アミノ酸を含む。別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、配列番号２７〜５４に記載の約８〜約１１の連続アミノ酸を含む。別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、配列番号１８、１９、または５５〜６８に記載の約８〜約１５の連続アミノ酸を含む。さらに別の実施形態において、ペプチド阻害剤は、１または複数の保存的アミノ酸変化を有する。
【０１７３】
治療
本発明は、各種の疾患、障害、および創傷を全体的または部分的に治療および／または予防する方法を含み、例えば、予測される速度で治癒しない創傷を治療する方法を含む。これらは、治癒が遅延しているかまたは困難な創傷（治癒が遅延しているかまたは不完全な創傷を含む）、および慢性創傷を含む。予測される速度で治癒しない創傷の例は、糖尿病性潰瘍、血管炎性潰瘍、動脈性潰瘍、静脈性潰瘍、静脈鬱血性潰瘍、熱傷潰瘍、感染性潰瘍、外傷誘導性潰瘍、褥瘡、および褥瘡性潰瘍を含む。予測される速度で治癒しない他の創傷は、離開創を含む。
【０１７４】
本発明はまた、（ａ）創傷炎症の慢性自己永続状態、（ｂ）創傷細胞外マトリックスの欠損および欠陥、（ｃ）（老化）創傷細胞（例えば、線維芽細胞）の応答不十分、細胞外マトリックス生成の制約、（ｄ）必要な細胞外マトリックスの組織化の欠如および移動のための足場の欠如に部分的に起因する再上皮形成不全、（ｅ）炎症およびタンパク質分解活性の遷延による、例えば、糖尿病性潰瘍、褥瘡（褥瘡性潰瘍）、静脈性潰瘍、および動脈性潰瘍を含む潰瘍性病変の惹起、（ｆ）罹患領域におけるマトリックスの進行性沈着、（ｇ）修復時間の長期化、（ｈ）創傷収縮の低減、（ｉ）再上皮形成の遅延、ならびに／または（ｊ）肉芽組織の肥厚を全体的または部分的に特徴とする慢性創傷を、全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを投与するステップを含む方法も含む。
【０１７５】
本発明はまた、（ａ）炎症期の遷延、（ｂ）細胞外マトリックスの形成遅延、および／または（ｃ）上皮形成速度の低減を全体的または部分的に特徴とする、治癒が遅延しているかまたは困難な創傷を、全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを投与するステップを含む方法も含む。
【０１７６】
本発明はまた、動脈性潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一実施形態において、動脈性潰瘍または潰瘍形成は、完全または部分的な動脈遮断により引き起こされる。
【０１７７】
本発明はまた、静脈性潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一実施形態において、静脈性潰瘍または潰瘍形成は、静脈弁の機能不全および関連する血管疾患により引き起こされる。
【０１７８】
本発明はまた、静脈鬱血性潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一実施形態において、静脈鬱血性潰瘍または潰瘍形成は、下肢の慢性受動性静脈鬱血および／または結果として生じる局所的低酸素症により引き起こされる。
【０１７９】
本発明はまた、糖尿病性足部潰瘍または潰瘍形成を含む糖尿病性潰瘍を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一実施形態において、糖尿病性足部潰瘍または潰瘍形成は、糖尿病の神経学的合併症および／または血管合併症により引き起こされる。
【０１８０】
本発明はまた、外傷性潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一実施形態において、外傷性潰瘍または潰瘍形成は、身体に対する外傷性傷害と関連する。
【０１８１】
本発明はまた、熱傷潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一実施形態において、熱傷潰瘍または潰瘍形成は、身体に対する熱傷傷害と関連する。
【０１８２】
本発明はまた、褥瘡性潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。
【０１８３】
本発明はまた、感染性潰瘍または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。
【０１８４】
本発明はまた、壊疽性膿皮症を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。
【０１８５】
本発明はまた、離開創を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。
【０１８６】
本発明はまた、持続性上皮欠損を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。
【０１８７】
本発明はまた、褥瘡または潰瘍形成を全体的または部分的に治療および／または予防する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法も含む。一部の実施形態において、前記褥瘡または潰瘍形成は、ＡＨＣＰＲ病期１、病期２、病期３、および／または病期４の潰瘍または潰瘍形成である。
【０１８８】
またさらなる実施形態において、本発明は、患者における創傷治癒を促進する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルを閉鎖するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１８９】
さらなる実施形態において、本発明は、患者における炎症を軽減する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルを閉鎖するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９０】
またさらなる実施形態において、本発明は、患者における創傷治癒を促進する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルを遮断するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９１】
さらなる実施形態において、本発明は、患者における炎症を軽減する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルを遮断するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９２】
またさらなる実施形態において、本発明は、患者における創傷治癒を促進する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルの活性を全体的または部分的に阻止または低減するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９３】
さらなる実施形態において、本発明は、患者における炎症を軽減する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルの活性を全体的または部分的に阻止または低減するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９４】
またさらなる実施形態において、本発明は、患者における創傷治癒を促進する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルの開口を全体的または部分的に阻止または低減するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９５】
さらなる実施形態において、本発明は、患者における炎症を軽減する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接するギャップジャンクションまたはヘミチャネルの開口を全体的または部分的に阻止または低減するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９６】
またさらなる実施形態において、本発明は、患者における創傷治癒を促進する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接する細胞外のヘミチャネル連絡を全体的または部分的に阻止または低減するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９７】
さらなる実施形態において、本発明は、患者における炎症を軽減する方法であって、１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を、前記創傷部位にあり、かつ／または同部位にすぐ隣接する細胞外のヘミチャネル連絡を全体的または部分的に阻止または低減するのに有効な量において、予測される速度で治癒しない創傷に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１９８】
一態様により、ギャップジャンクション調節剤は、再上皮形成の促進を介して上皮基底細胞の分裂および増殖を調節することにより、創傷治癒を促進する。
【０１９９】
一態様において、本発明は、対象における創傷治癒を促進または改善する方法であって、上皮基底細胞の分裂および増殖を調節するのに有効な量における１または複数のギャップジャンクション調節剤の投与を含む方法を対象とする。一実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、上皮基底細胞の分裂および増殖を調節するのに有効な抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤である。一実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、コネキシン２６ギャップジャンクション調節剤、コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤、またはこれらの混合物である。
【０２００】
一態様において、本発明は、創傷治癒を促進または改善する方法であって、外層におけるケラチン分泌を調節するのに有効な量における１または複数のギャップジャンクション調節剤の投与を含む方法を対象とする。一実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、外層におけるケラチン分泌を調節するのに有効な抗コネキシンペプチドまたは抗コネキシンペプチド模倣剤である。一実施形態において、ギャップジャンクション調節剤は、コネキシン４３ギャップジャンクション調節剤、コネキシン３１．１ギャップジャンクション調節剤、またはこれらの混合物である。
【０２０１】
キットおよび製品
一態様において、本発明は、予測される速度で治癒しない創傷を治療するためのキットを提供する。
【０２０２】
キットは、本明細書で説明される１または複数の組成物を含みうる。例えば、キットは、有効量の１または複数のギャップジャンクション調節剤を含む組成物を含みうる。一実施形態において、キットは、有効量の１または複数のポリペプチドを含む組成物を含む。一実施形態において、キットは、有効量の１または複数のポリペプチド相同体を含む組成物を含む。一実施形態において、キットは、有効量の１または複数のコネキシンリン酸化化合物を含む組成物を含む。
【０２０３】
別の態様において、本発明は、有効量の１または複数のギャップジャンクション調節剤を含有する容器と、予測される速度で治癒しない創傷を有する対象を治療するための使用を含む使用のための指示書とを含む製品を含む。
【０２０４】
したがって、本発明により、それにより細胞間連絡および／またはヘミチャネルの連絡、結合、もしくは開口が、一過性におよび部位特異的な形で下方調節されうる方法、組成物、形態、製剤、キット、および製品が提供される。したがって、製剤は、療法および他の治療において適用される。
【０２０５】
ここで、例示だけを目的として提示されるものであり、本発明の範囲に対する限定を構成するものではないと理解される以下の実施例を参照して、本発明の各態様について記載する。
【実施例】
【０２０６】
（実施例１）
ペプチドの親和性結合アッセイ
プルダウンアッセイを使用してタンパク質−ペプチド相互作用を確認することができる。このアッセイでは、試験ギャップジャンクション調節剤（例えば、ペプチド）を、セルロース、アガロースまたはニッケルビーズへの付着を介してタンパク質結合パートナーを捕捉および「プルダウン」するために使用されるタンパク質反応性または融合タグすなわち、ＧＳＴ（グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ）でタグ付けする。ＳＤＳ−ＰＡＧＥローディングバッファーまたは代替として競合的な分析物の溶出を利用した複合体の溶出に続いて、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上に流してウェスタン解析検出法を使用することによって、複合体を可視化する。当技術分野において公知の結合アッセイを行う方法は、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ａ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、３７〜５７頁（２００２年）のＥｉｎａｒｓｏｎ， Ｍ．Ｂ． ａｎｄ Ｏｒｌｉｎｉｃｋ， Ｊ．Ｒ．、「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ Ｓ−Ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１８．５５〜１８．５９頁（２００１年）のＥｉｎａｒｓｏｎ， Ｍ．Ｂ．、「Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＧＳＴ Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｌｌｄｏｗｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」；およびＰｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２６１号、Ｆｕ， Ｈ．編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、１７５〜１８６頁（２００４年）のＶｉｋｉｓ， Ｈ．Ｇ． ａｎｄ Ｇｕａｎ， Ｋ．Ｌ．、「Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ−Ｓ−Ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ−Ｆｕｓｉｏｎ Ｂａｓｅｄ Ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｓｔｕｄｙｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ」において記述されている。
【０２０７】
タンパク質および試験ペプチドの相互作用および親和性を、リアルタイムでこれらの相互作用の測定を可能にする表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡｃｏｒｅによって利用可能）を使用して評価する。このアプローチは、低親和性タンパク質相互作用を検出するという利点を有する。表面プラズモン共鳴は、生物特異的表面で分子の溶液濃度の変化を測定するために使用される光学現象による。このシグナルは、全内部反射条件下で薄い金属フィルムにおいて発生する。このシグナルは、表面と接触している溶液の屈折率によって決定する。生物特異的相互作用が起こる場合、溶液中の分子は屈折率の変化を示し、したがって測定可能なシグナルを生じさせる。
【０２０８】
典型的には、タンパク質を、いくつかの可能な方法のうちの１つによってカルボキシメチルデキストラン−金表面上に固定する。相互作用する対象のペプチドをこの表面上に注入し、結合動態をリアルタイムで測定する。当技術分野において公知の結合アッセイを行う方法は、Ｓｃｈｕｃｋ， Ｐ．、「Ｒｅｌｉａｂｌｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｕｓｉｎｇ ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌａｓｍｏｎ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ」、Ｃｕｒｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、８巻（４号）：４９８〜５０２頁（１９９７年）；およびＺｈａｎｇ， Ｘ．、Ｏｇｌｅｓｂｅｅ， Ｍ． 「Ｕｓｅ ｏｆ ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌａｓｍｏｎ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｌｏｗ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｂｉｎｄｉｎｇ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＨＳＰ７２ ａｎｄ ｍｅａｓｌｅｓ ｖｉｒｕｓ ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ．」Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ Ｏｎｌｉｎｅ．５巻（１号）：１７０〜１８１頁（２００３年）において記述されている。
【０２０９】
（実施例２）
機能アッセイ
機能アッセイを使用して、試験ギャップジャンクション調節ペプチド模倣体がギャップジャンクションまたはヘミチャネルの穴を遮断できるかどうかを判定することができる。ＨｅＬａヒト子宮頸癌細胞株を、Ｃｘ４３、Ｃｘ４５、または対象とする別の特定のコネキシンで安定にトランスフェクトする。細胞を、コネキシンヘミチャネルを活性化することが示されている（Ｂｒａｅｔ， Ｋ．ら、「Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＡＴＰ ｒｅｌｅａｓｅ ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｂｙ ｐｈｏｔｏｌｉｂｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｏｓｉｔｏｌ−１，４，５−ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｎｄ ｚｅｒｏ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｌｃｉｕｍ ｉｎ ｂｒａｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、１９７巻（２号）：２０５〜２１３頁（２００３年）；ＤｅＶｒｉｅｓ， Ｓ．Ｈ． ａｎｄ Ｅ．Ａ． Ｓｃｈｗａｒｔｚ、「Ｈｅｍｉ−ｇａｐ−ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｉｎ ｓｏｌｉｔａｒｙ ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｔｆｉｓｈ ｒｅｔｉｎａ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ４４５：２０１〜２３０頁（１９９２年）；およびＬｉ， Ｈ．ら、「Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃｅｌｌｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １３４巻（４号）：１０１９〜１０３０頁（１９９６年）を参照されたい）無カルシウム溶液（１ｍＭのＥＧＴＡを含有するＨＢＳＳ−ＨＥＰＥＳ）中でインキュベートする。細胞を、１ｍＭのＥＧＴＡおよび２ｍＭのヨウ化プロピジウムを含有するＨＢＳＳ−ＨＥＰＥＳ溶液中で３０分間インキュベートする。ヨウ化プロピジウムは、膜不透過性であるが、その低分子量のためにギャップジャンクション／ヘミチャネルから入ることができる蛍光色素である。ヨウ化プロピジウムの取り込みは、蛍光顕微鏡検査法を使用して測定される。細胞をペプチド模倣体の存在下でヨウ化プロピジウムとインキュベートし、これらが色素取り込みを妨害することができるかどうかを判定する。
【０２１０】
（実施例３）
ペプチド模倣体の設計および試験
ペプチド模倣体は、コネクソン連結過程に関与すると考えられている（Ｆｏｏｔｅら、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １４０巻（５号）：１１８７〜９７頁、（１９９８年））コネキシン４３細胞外ループ領域と同じアミノ酸配列を有するように設計することができる。いくつかのペプチドは、増強された機能阻害を示しうるアルファヘリックス膜貫通サブユニットの外側部分にマッチするアミノ酸を含む。これらのペプチドのすべてが、細胞外ループ領域におけるコネキシン配列の保存のために必ずしもコネキシン特異的というわけではない。
【０２１１】
ペプチドまたはそれらの変種は、例えば、Ｓｔｅｗａｒｔら、Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（１９６９年）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ， Ｊ、Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、８５巻 ２１４９頁（１９６３年）； Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ、「Ｈｏｒｍｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」Ｃ．Ｈ． Ｌｉ編、２巻（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９７３年）、４８〜２６７頁；およびＢａｖａａｙ ａｎｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」Ｅ． Ｇｒｏｓｓ ａｎｄ Ｆ． Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、２巻（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８０年）３〜２８５頁に記述されている固相ペプチド合成法によって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成することができる。これらのペプチドは、免疫親和性またはイオン交換カラムにおける分画；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカによる、またはＤＥＡＥなどのアニオン交換樹脂によるクロマトグラフィ；クロマトフォーカシング；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；硫安沈殿；例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−７５を使用したゲル濾過；リガンド親和性クロマトグラフィ；または非極性溶媒もしくは非極性／極性溶媒混合物からの結晶化もしくは沈殿によってさらに精製することができる。
【０２１２】
試験ペプチドを使用して、２つの機能試験を行うことができる。これらの機能試験は、（ｉ）脊髄切片中の細胞による色素（Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ）取り込みの遮断、および（ｉｉ）脊髄分節の浮腫の予防（陽性対照としてコネキシン４３特異的アンチセンスｏｄｎを使用して）であった。ペプチドは、Ｓｉｇｍａ−Ｇｅｎｏｓｙｓ（Ａｕｓｔｒａｌｉａ）によって合成する。
【０２１３】
脊髄切片中の細胞による色素（Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ）取り込みの遮断。
【０２１４】
Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗは、小さな水溶性の、固定可能な、ギャップジャンクションチャネルを介して細胞から細胞へ通過することができるが細胞膜は通過できない色素である。細胞外培地へのＬｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗの添加は、開いているギャップジャンクション／ヘミチャネルの存在を確認することを可能にする。色素は細胞の細胞質において見えるようになり、これは開いているチャネルを表す。
【０２１５】
Ｗｉｓｔａｒ ｐ７ラットに二酸化炭素で麻酔をかけ、ただちに断頭する。脊髄を切除し、ｐＨ７．４の冷ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）に移す。余分の枝神経および靭帯を除去し、脊髄を手動の組織チョッパーに移し、一連の５００ミクロンの薄さの切片をカットする。切片により引き起こされる損傷は、切片全体においてコネキシン４３の上方制御を誘導し（ギャップジャンクションを介する傍観者効果により増幅される）、コネキシンヘミチャネルの発現をもたらす。切片を、２４ウェルプレートの直径３ｃｍのＭｉｌｌｉｐｏｒｅインサート上に置き、ペプチド模倣体の存在下で培地中で培養する。すべての試験した９個のペプチドの最終濃度は、５００マイクロモルであった。対照は、ペプチド添加なし、またはいくつかのペプチドは、これらの化合物中に再溶解されうる場合は１％エタノール含有もしくは１％ＤＭＳＯ添加（ペプチドは凍結乾燥されて与えられる）であった。
【０２１６】
切片を３７℃で４時間インキュベートし、次いで１ｍｌ当たり２．５ｍｇのＬｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗを各ウェルに３０分間加える（暗所で）。次いで組織をＰＢＳ中で２回すすぎ、さらに１０分の洗浄を３回行い、切片を４％パラホルムアルデヒドで固定する。次いでこれらを、Ｌｅｉｃａ ＴＣＳ４Ｄレーザー走査型共焦点顕微鏡を使用して観察し、細胞中への色素取り込みがあるかどうかを評価する。各試料中への色素取り込みの量によって有効性を測定する。
【０２１７】
脊髄における浮腫の予防
「Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｔｏ Ｃｏｎｎｅｘｉｎｓ」という表題のＢｅｃｋｅｒ， Ｄ． ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ． Ｃ．のＷＯ２０００／４４４０９の実施例１に記述されている系を使用して、培養された脊髄分節に対する試験ペプチドの効果を検査し、これらの腫脹を阻止する能力を試験する。
【０２１８】
ＤＭＳＯを対照として使用する。５ｍｍ長の脊髄分節を、ＨＢＳＳ中で２４ウェルプレートの別々のウェル中に置く。Ｓｕｐｅｒｇｌｕｅの小液滴を使用して、分節をウェルの底部に保持する。ＨＢＳＳを除去し、５００マイクロモルの試験ペプチド（最終濃度）を培地に加える（培地のみまたはＤＭＳＯ対照にはペプチドを加えない）。プレートを２４時間インキュベートし、培地を除去し、組織をブアン固定液で２４時間固定する。分析は、分節の切断端の腫脹面積と比較した脊髄分節の総面積を計算するための、Ｉｍａｇｅ Ｊを用いた上方からの脊髄分節の撮影を含む。腫脹（浮腫）は、腫脹％を与える（培養面積−元の面積÷元の面積）として計算する。ｐ＝０．０５での有意性のカットオフ値で、Ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｖａｒｉａｎｃｅを使用して統計的有意性を決定する。
【０２１９】
脊髄分節における浮腫を阻止するために最も有効な試験ペプチド濃度の決定は、用量反応曲線を使用して同じプロトコールを使用して行う。１つの例示的な用量反応曲線は、５、１０、５０ ２５０および５００マイクロモルで使用されるペプチドの最終濃度で決定される。
【０２２０】
（実施例４）
本明細書に開示されている方法および組成物を使用して、慢性創傷（例えば、血管性潰瘍）を有するヒト対象を治療する。
【０２２１】
糖尿病、または末梢血管もしくは動脈基礎疾患を有するヒト対象は、まず、閉鎖していない足の創傷から生じる合併症を呈する。創傷を、適当な１つまたは複数の用量の抗コネキシンペプチドＳＲＰＴＥＫＴＩＦＩＩ（配列番号７）、例えば、１００〜５００マイクログラムで処置する。深さ約３〜４ｍｍで約７ｃｍ×５ｃｍ（約３５ｃｍ２）の創傷の大きさに基づいて、プルロニックゲル中の２ｍＬの２０μＭの配列番号７製剤（例えば、総用量約２００〜４００μｇ）を投与する（別の適切な投与される投薬量は、創傷の大きさに従って当業者が容易に決定することができる）。
【０２２２】
創傷部位に包帯をして７日間保護する。７日目に創傷の包帯を取り、創傷治癒結果を評価する。
【０２２３】
必要または所望に応じて上記で概説した処置を繰り返す（適切な投薬量で）。この処置の後、創傷および創傷の外観を評価する。２週間、１カ月および／または２カ月で患者を再度評価し、創傷（減少があれば）を再度評価する。
【０２２４】
（実施例５）
本明細書に開示されている方法および組成物を使用して、慢性静脈脚潰瘍を有するヒト対象を治療する。
【０２２５】
ヒト試験対象を、潰瘍の大きさならびに最小および最大潰瘍面積（例えば、２ｃｍ２および５０ｃｍ２）に従って群に分ける。患者の安静時足関節上腕ドップラー動脈血圧比をベースラインとして測定する（例えば、０．８０以上）。
【０２２６】
全ての患者に圧迫包帯をする。追跡することによって潰瘍の面積を測定し、プルロニックゲル製剤中の試験抗コネキシンペプチドＳＲＰＴＥＫＴＩＦＩＩ（配列番号７）の適当な投薬量、例えば、１００〜５００マイクログラムを投与する。
【０２２７】
試験製剤を創傷表面に適用する間、診察用長椅子に横になり、圧迫包帯を適用する前の１５分間そこにいるよう患者に求める。
【０２２８】
７日目に創傷の包帯を取り、創傷治癒結果を評価する。創傷液および血液試料を、バイオアッセイを使用して関連する創傷治癒バイオマーカーについて分析する。
【０２２９】
上記で概説した処置を繰り返す（適切な投薬量で）。この処置の後、創傷および創傷の外観を評価する。創傷閉鎖まで、この過程を毎週もしくは隔週、または治癒の状態を考慮して適切なように繰り返す。
【０２３０】
（実施例６）
以下を使用して、糖尿病性および別の慢性潰瘍の治癒速度の促進における、例示的な製剤の逐次投与の治療効果を判定する。
【０２３１】
有効性の主要エンドポイントは、１２〜２０週間以内で完全な創傷閉鎖を達成する患者の割合である。副次エンドポイントには、１００％閉鎖までの時間、８０％閉鎖までの時間、５０％閉鎖までの時間、ならびに３、５、１０、１５、および２０週におけるベースラインの創傷の大きさからの変化の割合としての創傷閉鎖量が含まれる。Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存分析技法を用いて、イベント発生までの時間エンドポイントを検査する。
【０２３２】
全ての患者は、最初の壊死組織切除（ｓｈａｒｐ ｄｅｂｒｉｄｅｍｅｎｔ）、創傷洗浄、創傷包帯、および創傷圧力軽減からなる標準的な糖尿病性（または別の）潰瘍治療のレジメンを受ける。最初の壊死組織切除および創傷洗浄によって潰瘍を処置する。プルロニックゲル製剤中の１００〜５００マイクログラムの抗コネキシンペプチドＳＲＰＴＥＫＴＩＦＩＩ（配列番号７）を投与する。創傷に、粘着防止包帯および圧迫包帯をまく。
【０２３３】
どちらが早いとしても１２〜２０週までまたは創傷閉鎖まで、週に２回、創傷を評価する。患者が臨床感染を発症した場合、または創傷状態が著しく悪化した場合は、患者を試験から排除する。各創傷評価時に（週に２回）、創傷面積の測定のために創傷周囲をトレースし、デジタルカメラで創傷を撮影する。患者登録時、ならびに５、１０、１５、および２０週で、血液化学および血液学試験を行う。基礎的な骨組成に対する作用を試験するために、Ｘ線評価を５週間ごとに実施してもよい。
【０２３４】
（実施例７）
抗コネキシン剤は、好都合には、本発明の方法による投与に適する形態に処方される。
【０２３５】
適当な製剤は、以下の処方剤の混合物を含む。１つまたは複数の個々の抗コネキシン剤の量は、予定される特定の用途に依存するはずである。
【０２３６】
【表７】
本明細書において参照されたかまたは言及されたすべての特許、出版物、科学論文、ウェブサイトならびに他の文書および資料は、本発明が属する技術分野の当業者の技術水準を示すものであり、これらの参照文書および資料はそれぞれ、個別にその全体が参照により組み込まれたか、またはその全体が本明細書に記載された場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。出願人は、任意の上記の特許、出版物、科学論文、ウェブサイト、電子的に利用可能な情報、および別の参照資料または文書の、任意のおよびすべての資料および情報を本明細書に物理的に組み込む権利を保有する。
【０２３７】
本明細書に記載されている具体的な方法および組成物は、好ましい実施形態を代表するものであり、それらは例示的であって本発明の範囲を限定するものではない。別の目的、態様、および実施形態が、本明細書を考慮すれば当業者には思いつくはずであり、本特許請求の範囲によって定義されている通り本発明の精神に包含される。本発明の範囲および精神から逸脱することなく、様々な置換および変更を本明細書に開示されている本発明に対して行ってもよいことが、当業者には容易に明らかとなるはずである。例示的に本明細書に適当に記載されている本発明は、本明細書において不可欠であると特に開示されていない任意の１つまたは複数の要素、あるいは１つまたは複数の限定の不在下で実施されてもよい。したがって、例えば、本発明の実施形態または実施例において、本明細書におけるそれぞれの場合において、「含む」、「から本質的になる」、および「からなる」のいずれかの用語は、本明細書中の他の２つの用語のいずれかと置き換えてもよい。また、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有している」などの用語は、包括的であって限定ではないと読み取るべきである。例示的に本明細書に記載されている方法およびプロセスは、異なる順序の工程で適当に実施されてもよく、必ずしも本明細書または本特許請求の範囲に示された工程の順序に制限されない。本明細書および添付の特許請求の範囲においても使用されているように、単数形「ａ」「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上別途明確に指示のない限り複数形への言及を含む。いかなる場合においても、本特許は、本明細書に特に開示されている具体的な実施例または実施形態または方法に限定されると解釈されるものではない。いかなる場合においても、本特許は、そのような陳述が、出願人による答弁書において明確に認められた限定または制限がなければ、特許商標庁のいかなる審査官またはいかなる別の当局者もしくは関係者によってなされたいかなる陳述によっても限定されると解釈されるものではない。
【０２３８】
採用されている用語および表現は、説明であって限定するものではない用語として使用され、このような用語および表現の使用において、示されているおよび説明されている特徴のいかなる均等物またはその一部も除外する意図はないが、請求されている本発明の範囲内で様々な変更形態が可能であることが認識される。したがって、本発明を、好ましい実施形態および任意選択の特徴によって具体的に開示してきたが、本明細書に開示されている概念の変更形態および変形形態が当業者によって用いられてもよいこと、およびこのような変更形態および変形形態が、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内であるとみなされることが理解されるはずである。
【０２３９】
本発明が、本明細書において広く一般的に記載された。一般的開示に含まれるそれぞれのより狭い種（ｓｐｅｃｉｅｓ）および亜属集団（ｓｕｂｇｅｎｅｒｉｃ ｇｒｏｕｐｉｎｇ）もまた、本発明の一部を形成する。これは、削除された材料が本明細書で具体的に挙げられているか否かに関係なく、その属の任意対象を除くという条件または否定的な限定を伴う本発明の一般的記載を含む。
【０２４０】
別の実施形態は以下の特許請求の範囲内である。加えて、本発明の特徴または態様がマーカッシュ（Ｍａｒｋｕｓｈ）グループに関して記載される場合、当業者は、本発明がマーカッシュグループの任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループに関してもそれによって記載されることを認識するはずである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
慢性創傷を有する対象を治療する方法であって、有効量のコネキシン４３ギャップジャンクション調節剤を含む組成物の前記創傷への投与を含む方法。
【請求項２】
前記慢性創傷が褥瘡である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記慢性創傷が褥瘡性潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記慢性創傷が動脈性潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記慢性創傷が静脈性潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記慢性創傷が静脈鬱血性潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記慢性創傷が糖尿病性足部潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記慢性創傷が外傷性潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記慢性創傷が熱傷潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
予測される速度で治癒しない創傷を有する対象を治療する方法であって、有効量のコネキシン４３ギャップジャンクション調節剤の前記創傷への投与を含む方法。
【請求項１１】
前記創傷が、治癒が遅延している創傷または治癒が不完全な創傷である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
離開創を有する対象を治療する方法であって、有効量のコネキシン４３ギャップジャンクション調節剤を含む組成物の前記創傷への投与を含む方法。
【請求項１３】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションを通る分子の流動を全体的または部分的に妨害または低減する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ヘミチャネルを通る分子の流動を全体的または部分的に妨害または低減する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションを全体的または部分的に閉鎖する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ヘミチャネルを全体的または部分的に閉鎖する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションを全体的または部分的に遮断する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ヘミチャネルを全体的または部分的に遮断する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションの全体的または部分的な閉鎖を誘導する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ヘミチャネルの全体的または部分的な閉鎖を誘導する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションの開口を全体的または部分的に低減または妨害する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ヘミチャネルの開口を全体的または部分的に低減または妨害する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションの活性または機能を妨害または低減する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ヘミチャネルの活性または機能を妨害または低減する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記ギャップジャンクション調節剤がペプチド化合物である、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記ペプチド化合物がペプチド模倣剤である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ギャップジャンクション調節剤が、抗体または抗体の抗原結合フラグメントである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗原結合フラグメントが、Ｆ（ｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２抗コネキシン４３抗体フラグメントである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗体が、キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗体フラグメントが、キメラ抗体フラグメントまたはヒト化抗体フラグメントである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションリン酸化誘導剤である、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記ギャップジャンクション調節剤が、局所投与用に処方される、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ゲルとして処方される、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
前記対象がヒトである、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記対象が非ヒト動物である、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
前記非ヒト動物が競技動物である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記競技動物がウマである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記競技動物がイヌである、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記非ヒト動物がペット動物である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
前記ペット動物がイヌである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ペット動物がネコである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記慢性創傷が持続性上皮欠損である、請求項１に記載の方法。
【請求項１】
慢性創傷を有する対象を治療する方法であって、有効量のコネキシン４３ギャップジャンクション調節剤を含む組成物の前記創傷への投与を含む方法。
【請求項２】
前記慢性創傷が褥瘡である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記慢性創傷が褥瘡性潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記慢性創傷が動脈性潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記慢性創傷が静脈性潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記慢性創傷が静脈鬱血性潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記慢性創傷が糖尿病性足部潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記慢性創傷が外傷性潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記慢性創傷が熱傷潰瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
予測される速度で治癒しない創傷を有する対象を治療する方法であって、有効量のコネキシン４３ギャップジャンクション調節剤の前記創傷への投与を含む方法。
【請求項１１】
前記創傷が、治癒が遅延している創傷または治癒が不完全な創傷である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
離開創を有する対象を治療する方法であって、有効量のコネキシン４３ギャップジャンクション調節剤を含む組成物の前記創傷への投与を含む方法。
【請求項１３】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションを通る分子の流動を全体的または部分的に妨害または低減する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ヘミチャネルを通る分子の流動を全体的または部分的に妨害または低減する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションを全体的または部分的に閉鎖する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ヘミチャネルを全体的または部分的に閉鎖する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションを全体的または部分的に遮断する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ヘミチャネルを全体的または部分的に遮断する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションの全体的または部分的な閉鎖を誘導する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ヘミチャネルの全体的または部分的な閉鎖を誘導する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションの開口を全体的または部分的に低減または妨害する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ヘミチャネルの開口を全体的または部分的に低減または妨害する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションの活性または機能を妨害または低減する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ヘミチャネルの活性または機能を妨害または低減する、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記ギャップジャンクション調節剤がペプチド化合物である、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記ペプチド化合物がペプチド模倣剤である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ギャップジャンクション調節剤が、抗体または抗体の抗原結合フラグメントである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗原結合フラグメントが、Ｆ（ｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２抗コネキシン４３抗体フラグメントである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗体が、キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗体フラグメントが、キメラ抗体フラグメントまたはヒト化抗体フラグメントである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ギャップジャンクションリン酸化誘導剤である、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記ギャップジャンクション調節剤が、局所投与用に処方される、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
前記ギャップジャンクション調節剤が、ゲルとして処方される、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
前記対象がヒトである、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記対象が非ヒト動物である、請求項１、１０、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
前記非ヒト動物が競技動物である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記競技動物がウマである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記競技動物がイヌである、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記非ヒト動物がペット動物である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
前記ペット動物がイヌである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ペット動物がネコである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記慢性創傷が持続性上皮欠損である、請求項１に記載の方法。
【公表番号】特表２０１１−５０６４４６（Ｐ２０１１−５０６４４６Ａ）
【公表日】平成２３年３月３日（２０１１．３．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３７９７０（Ｐ２０１０−５３７９７０）
【出願日】平成２０年１２月１１日（２００８．１２．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０１３６５５
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０７５８８１
【国際公開日】平成２１年６月１８日（２００９．６．１８）
【出願人】（５０９１３５５８８）コーダ セラピューティクス， インコーポレイテッド (16)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年３月３日（２０１１．３．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１２月１１日（２００８．１２．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０１３６５５
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０７５８８１
【国際公開日】平成２１年６月１８日（２００９．６．１８）
【出願人】（５０９１３５５８８）コーダ セラピューティクス， インコーポレイテッド (16)
【Ｆターム（参考）】
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