【課題】標的分子に対するポリペプチドの親和性を調節する方法を提供する。
【解決手段】（１）異性化を受けやすいアスパラチル残基を同定し；（２）代替残基を置換し、得られた変異体を標的分子に対する親和性でスクリーニングする。好適な実施態様では、残基の置換方法は、ファージディスプレイでの親和性成熟(ＡＭＰＤ)である。更に好適な実施態様では、ポリペプチドは抗体で、標的分子は抗原である。更に好適な実施態様では、抗体は抗ＩｇＥであり、標的分子はＩｇＥである。他の実施態様では、ＩｇＥに対する親和性が改善された抗ＩｇＥ抗体である。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスパルチル異性化の不活性化を示さず、無修飾ポリペプチド以上である標的分子ＩｇＥに対する親和性を有する抗ＩｇＥ抗体である修飾ポリペプチドを調製する方法において、
ａ）異性化を受けやすいアスパラチル残基を同定し；
ｂ）代替残基を置換し、得られた変異体を標的分子に対する親和性に対して、ファージディスプレイを使用する親和成熟法でスクリーニングし、該工程が、
(i) ポリペプチドのアミノ酸配列の変化を生じるポリペプチドをコードしている遺伝子における一又は複数のコドンの置換、欠失、又は挿入により、ファージコートタンパク質に融合した構造的に関連するポリペプチドのライブラリを調製し、
(ii) 該ポリペプチドをコードしているＤＮＡを含むファージミド粒子の表面に各関連ポリペプチドの単一の複製を示すことを更に含み；
ｃ）アスパラチル残基が変化し、無修飾ポリペプチド以上である標的分子に対する親和性を有する修飾ポリペプチドを選択する；
ことを含んでなる方法。
【請求項２】
無修飾抗体が図１２[配列番号：１３−１４]に「Ｅ２５」として示された配列を有している請求項１に記載の方法。
【請求項３】
置換された残基が可変軽鎖ＣＤＲ１残基Ａｓｐ３２Ｇｌｕ、Ｇｌｎ２７Ｌｙｓ及びＳｅｒ２８Ｐｒｏである請求項２に記載の方法。
【請求項４】
更に置換された残基が可変重鎖ＣＤＲ２残基Ｔｈｒ５３Ｌｙｓ、Ａｓｐ５５Ｓｅｒ、Ｓｅｒ５７Ｇｌｕ及びＡｓｎ５９Ｌｙｓである請求項３に記載の方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法を実施することを含んでなる、抗体のブタクサ誘発性ヒスタミン放出阻害性を改良する方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１０Ｃ】

【図１０Ｄ】

【図１０Ｅ】

【図１０Ｆ】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【公開番号】特開２００９−５５９０２（Ｐ２００９−５５９０２Ａ）
【公開日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２００８−１５１３４３（Ｐ２００８−１５１３４３）
【出願日】平成２０年６月１０日（２００８．６．１０）
【分割の表示】特願平１１−５０７２６１の分割
【原出願日】平成１０年６月３０日（１９９８．６．３０）
【出願人】（５９６１６８３１７）ジェネンテック・インコーポレーテッド (372)
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ，ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】