新種微生物、セレンオキシアニオン吸着剤およびセレンオキシアニオンの除去方法
【課題】セレンオキシアニオンの吸着能に優れる新種微生物、該微生物を有効成分とするセレンオキシアニオン吸着剤および該微生物を用いるセレンオキシアニオンの除去方法を提供する。
【解決手段】クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）が属する種に属する微生物；１８ＳｒＤＮＡの塩基配列が特定塩基配列と９６％以上の相同性を有し、セレンオキシアニオン吸着能を有するクリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物；クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）；かかる微生物を有効成分とするセレンオキシアニオン吸着剤；かかる微生物を用いるセレンオキシアニオンの除去方法。
【解決手段】クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）が属する種に属する微生物；１８ＳｒＤＮＡの塩基配列が特定塩基配列と９６％以上の相同性を有し、セレンオキシアニオン吸着能を有するクリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物；クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）；かかる微生物を有効成分とするセレンオキシアニオン吸着剤；かかる微生物を用いるセレンオキシアニオンの除去方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新種微生物、該微生物を有効成分とするセレンオキシアニオン吸着剤および該微生物を用いるセレンオキシアニオンの除去方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
セレンは、半導体材料や感光性材料として有用であることが知られているほか、ガラスの着色剤、脱色剤としても利用されるなど、産業界において利用価値の高い元素である。
その一方で、微量のセレンは人体にとって必須元素であるが、必要量以上に摂取すると毒性を示すことが知られている。そこで、水質汚濁および土壌汚染を防止するために、環境基準の指定項目となっている。
このような中、上記のような産業界においては、工場排水中にセレンが混入する可能性があり、また、セレンは石炭中にも微量含まれていることから、火力発電所等の排水にも混入する可能性があるため、このような排水中のセレンの除去は重要な課題となっている。
【０００３】
工場排水中などで問題となるセレンは、セレン（６価）の化合物であるセレン酸（Ｈ２ＳｅＯ４）またはその塩、セレン（４価）の化合物である亜セレン酸（Ｈ２ＳｅＯ３）またはその塩である。通常これらセレン酸化合物は、工場排水などの水溶液中では、セレン酸イオン（ＳｅＯ４２−）の形態で、ごく一部は亜セレン酸（ＳｅＯ３２−）イオンの形態で、すなわち、セレンオキシアニオンとして存在していると考えられる。
【０００４】
ところで、自然界の微生物には、これらセレンオキシアニオンを吸着するものがあることが知られている（特許文献１参照）。具体的には、特定の微生物を液体中においてセレンオキシアニオンと共存させることにより、該微生物はその細胞表面に存在する多糖類や脂質などの細胞外高分子にセレンオキシアニオンを吸着させるのである。この現象はバイオアドソープション（バイオソープション）として知られている。この現象を利用することで、液体中からセレンオキシアニオンを除去することができると考えられ、その他のアニオン種の除去への利用も期待されている。
このように微生物を利用して、セレン酸化合物を排水中から除去する方法は、環境負荷も少なく優れた方法であると言える。
【特許文献１】特表平７−５０６００６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、特許文献１をはじめとする、従来のバイオアドソープションを利用したセレンオキシアニオンの除去については、実用的な方法がまだ確立されていないのが現状である。
本発明は上記事情に鑑みて為されたものであり、セレンオキシアニオンの吸着能に優れる新種微生物、該微生物を有効成分とするセレンオキシアニオン吸着剤および該微生物を用いるセレンオキシアニオンの除去方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するため、
請求項１に記載の発明は、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）が属する種に属する微生物である。
請求項２に記載の発明は、１８ＳｒＤＮＡの塩基配列が配列番号1に示す塩基配列と９６％以上の相同性を有し、セレンオキシアニオン吸着能を有するクリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物である。
請求項３に記載の発明は、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）である。
請求項４に記載の発明は、請求項１〜３のいずれか一項に記載の微生物を有効成分とするセレンオキシアニオン吸着剤である。
請求項５に記載の発明は、請求項１〜３のいずれか一項に記載の微生物を用いるセレンオキシアニオンの除去方法である。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、試料中のセレンオキシアニオンを効率的に除去できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明について詳しく説明する。
なお、以下において、「クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）」のことを「ＪＰＣＣＹ００７５」と略記することがある。
また、本発明においては、「セレン（６価）オキシアニオン」とは「セレン酸イオン（ＳｅＯ４２−）」のことを指し、「セレン（４価）オキシアニオン」とは「亜セレン酸（ＳｅＯ３２−）イオン」のこと指す。そして、「セレンオキシアニオン」とは、「セレン（６価）オキシアニオンおよび／またはセレン（４価）オキシアニオン」のことを指す。
【０００９】
＜ＪＰＣＣＹ００７５の獲得＞
下記手順で分離培地を作製した。
分離培地：酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、人工海水３７ｇ、クロラムフェニコール０．３ｇ、ストレプトマイシン０．１５ｇ、アンピシリン０．１ｇ、粉末寒天１２ｇを純水１Ｌに添加し、１２１℃で１０分間滅菌処理した後、適量を滅菌済み平板に分取して、寒天平板を作製した。
次いで、西表島の仲間川にあるマングローブ林より採取した泥（汽水域の表層泥）を生理食塩水で１００倍希釈して平板に塗布して植菌し、２５℃でインキュベーションを行なった。植菌後３日目に確認できたコロニーを滅菌済み爪楊枝で釣菌し、新たな酵母培地に植菌し、生育を繰り返すことで単菌化を行い、ＪＰＣＣＹ００７５を獲得した。
【００１０】
＜ＪＰＣＣＹ００７５の同定＞
ＪＰＣＣＹ００７５の同定は、株式会社テクノスルガに委託して実施した。そして取得した検体を用いて、形態的性質、培養的性質、生理学的性質を確認し、１８ＳｒＤＮＡの塩基配列の同定を行った。
【００１１】
［形態的性質、培養的性質、生理学的性質］
（試験方法）
以下の方法で形態観察、生化学性状試験を行った。
１．培養条件
以下の条件で培養した菌株を供試菌体とした。
（１）培地；
・２％Ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ液体培地（Ｋｕｒｔｚｍａｎ，１９９８）（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＭＤ，ＵＳＡ）
・Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ−Ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ（ＹＭ）平板培地（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＭＤ，ＵＳＡ）
・ポテトデキストロース寒天培地（ＰＤＡ平板培地）「ダイゴ」（日本製薬、東京）
・２％Ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ平板培地（Ｋｕｒｔｚｍａｎ，１９９８）
・１／５Ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ平板培地（Ｋｕｒｔｚｍａｎ，１９９８）
（２）培養温度；２５℃
（３）培養期間；２日間〜１月間
２．形態観察
以下を用いて、巨視的観察（コロニー観察）および微視的観察（形態性状観察）を行った。
（１）顕微鏡；光学顕微鏡ＢＸ５０Ｆ４（オリンパス、東京）（微分干渉観察）
（２）マウント波；滅菌蒸留水
３．生化学性状試験
以下の２項目について試験を行い、方法はＹａｒｒｏｗ（１９９８）に準拠した。
（１）ジアゾニウム・ブルーＢ（ＤＢＢ）反応
（２）尿素の加水分解試験（ウレアーゼ活性）
【００１２】
（試験結果）
結果を以下に示す。
（１）巨視的観察（コロニー観察）
ＹＭ平板培地、ＰＤＡ平板培地および１／５ＭＡ平板培地上で２５℃・培養７日間、ＹＭ平板培地で２５℃・培養３０日間において、コロニーは以下の性状を示した。あわせて撮影した画像を図１に示す。
（Ａ）ＹＭ平板培地（２５℃・培養７日間）
・周縁の形状 全縁
・隆起状態 扁平でわずかに中央突起形
・表面の形状 平滑
・光沢および性状 光沢あり、湿性
・色調 クリーム色
（Ｂ）ＰＤＡ平板培地（２５℃・培養７日間）
・周縁の形状 全縁
・隆起状態 扁平でわずかに半レンズ形
・表面の形状 平滑
・光沢および性状 光沢あり、湿性
・色調 クリーム色
（Ｃ）１／５ＭＡ平板培地（２５℃・培養７日間）
・周縁の形状 乱糸状
・隆起状態 扁平
・表面の形状 平滑
・光沢および性状 中央部は光沢あり、湿性
・色調 クリーム色
（Ｄ）ＹＭ平板培地（２５℃・培養３０日間）
・周縁の形状 全縁
・隆起状態 扁平な中央突起形
・表面の形状 平滑、環紋状
・光沢および性状 光沢あり、バター様、湿性
・色調 黄色味を帯びたクリーム色
【００１３】
（２）微視的観察（形態性状観察）
２％Ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ液体培地で２５℃・培養開始５日目に、栄養細胞は（３〜７）×（２．８〜３．５）μｍの倒洋梨形、球形から楕円形などを含む多形性を示し、増殖は極出芽によることが確認された。この時の撮影画像を図２に示す。
ＹＭ平板培地においても動揺の特徴を示した。この時の撮影画像を図３に示す。
１／５ＭＡ平板培地においては、２５℃・培養開始４日目に、栄養細胞は多形性を示したが、球形のものが多数観察された。この時の撮影画像を図４に示す。
ＹＭ平板培地で２５℃・培養開始６〜１０日目に、菌糸および偽菌糸が確認された。この時の撮影画像を図５に示す。
１／５ＭＡ平板培地においては、２５℃・培養開始４日目に、ラケット形の細胞が繋がった菌糸が確認された。この時の撮影画像を図６に示す。
また、培養１ヶ月を経過した平板で有性生殖器官の形成は認められなかった。
【００１４】
（３）生化学性状試験
ジアゾニウム・ブルーＢ（ＤＢＢ）反応と尿素の加水分解試験（ウレアーゼ活性）を行った結果、いずれも陽性を示した。
【００１５】
（４）考察
ＪＰＣＣＹ００７５は、クリーム色から黄色味を帯びた、周縁部が全縁から乱糸状のコロニーを形成し、その栄養細胞は多形性で、極出芽により増殖し、菌糸および偽菌糸を形成し、有性生殖器官の形成は認められなかった。これらの形態的特徴は、「Ｔｈｅ Ｙｅａｓｔｓ， ａ ｔａｘｏｎｏｍｉｃ ｓｔｕｄｙ，第４版，Ｋｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ，１９９８」や「Ｙｅａｓｔｓ，第３版，Ｂａｒｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，２０００」に記載されているクリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属（以下、クリプトコッカス属と略記する）の特徴と一致していた。
また、ジアゾニウム・ブルーＢ（ＤＢＢ）反応は、子のう菌系酵母で陰性（淡黄色か無色）、担子菌系酵母で陽性（赤色）を示し、尿素の加水分解試験（ウレアーゼ活性）は、子のう菌系酵母のほとんどで陰性、担子菌系酵母で陽性を示すことがすでに報告されており（Ｙａｒｒｏｗ，１９９８）、ＪＰＣＣＹ００７５は、ジアゾニウム・ブルーＢ（ＤＢＢ）反応と尿素の加水分解試験（ウレアーゼ活性）でいずれも陽性を示したことから、ＪＰＣＣＹ００７５は、担子菌系酵母であると判断された。
【００１６】
（試験方法）
以下に示す項目について、生理性状試験を行った。
試験方法は、Ｂａｒｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，（２０００）およびＫｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ（１９９８）に準拠し、培養は温度耐性試験を除き２５℃で行った。糖類発酵性試験、炭素源資化性試験、各種耐性試験においては、４週間まで培養し、生育の有無を確認した。
試験項目；糖類発酵性試験、炭素源資化性試験、窒素源資化性試験、ビタミン要求性試験、温度耐性試験（３０℃および３５℃）、薬剤耐性試験
【００１７】
（試験結果）
結果を表１〜５に示す。表１〜５中の符号は以下の意味を有する。
＋・・・反応が陽性
−・・・反応が陰性
Ｗ・・・反応が弱い陽性（ｗｅａｋ）
Ｓ・・・試験開始後に２週間から３週間以上かけて徐々に陽性反応が認められた（ｓｌｏｗ）
Ｌ・・・試験開始２週間以降に急速に陽性反応が認められた（ｌａｔｅｎｔ）
なお、糖類発酵性培地における培養では、皮膜（ｒｉｎｇ）と沈殿（ｓｅｄｉｍｅｎｔ）を生じた。
【００１８】
【表１】
【００１９】
【表２】
【００２０】
【表３】
【００２１】
【表４】
【００２２】
【表５】
【００２３】
（考察）
ＪＰＣＣＹ００７５の生理性状を、「Ｔｈｅ Ｙｅａｓｔｓ， ａ ｔａｘｏｎｏｍｉｃ ｓｔｕｄｙ，第４版，Ｋｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ，１９９８」に記載されているクリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属の特徴と比較した。その結果、表１〜５に示すように、ＪＰＣＣＹ００７５は、ウレアーゼ活性およびジアゾニウム・ブルーＢ（ＤＢＢ）によるコロニーの呈色を示し、糖類発酵性を示さず、これらの特徴はクリプトコッカス属の特徴と一致した。
また、クリプトコッカス属の公知種の中では、クリプトコッカス ポゾリカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｏｄｚｏｌｉｃｕｓ）に類似した特徴を示したが、ＪＰＣＣＹ００７５が可溶性デンプンの資化性、リビトールの培養開始４週目の急速な資化性、３０℃での生育性、１０％ＮａＣｌ／５％グルコース培地での緩やかな生育性を示し、ビタミン欠乏培地での生育性が弱かった点において、クリプトコッカス ポゾリカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｏｄｚｏｌｉｃｕｓ）とは相違が認められた。
以上より、ＪＰＣＣＹ００７５は、クリプトコッカス属に属する新種であると判断された。
【００２４】
（塩基配列）
ＪＰＣＣＹ００７５の１８SｒＤＮＡを、公知の方法により同定した結果、配列番号１に示す塩基配列を有することが確認された。
【００２５】
本発明のＪＰＣＣＹ００７５は、平成１９年９月２５日付けで受託番号ＮＩＴＥ Ｐ−４１４として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受託されている。
【００２６】
＜新種微生物＞
本発明の微生物は、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株である。そして本発明は、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株が属する種に属する微生物、および１８ＳｒＤＮＡの塩基配列が配列番号1に示す塩基配列と９６％以上の相同性を有し、セレンオキシアニオン吸着能を有するクリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物を包含する。このような微生物は、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株と同種の微生物であると考えられる。
【００２７】
本発明の微生物は、セレンオキシアニオンを、可逆的または不可逆的に捕捉するものであり、「セレンオキシアニオン吸着能」とは、このような捕捉する能力のことを指す。
本発明の微生物がセレンオキシアニオン吸着能を有するのは、該微生物の細胞表層に存在する多糖類や脂質等の細胞外高分子にセレンオキシアニオンが捕捉されたり、細胞内にセレンオキシアニオンが取り込まれたりすることによるものと推測される。
また、本発明の微生物は、セレンオキシアニオン以外のイオン種を高濃度で含有する試料中においても、セレンオキシアニオンを吸着できる。特に、陰イオンの存在下においてもセレンオキシアニオンを吸着でき、セレンオキシアニオンを選択的に吸着する能力が高い。
【００２８】
本発明の微生物は、前記分離培地で分離後、生育用培地で前培養および本培養を行ってから用いるのが好ましい。生育用培地は、酵母エキス、グルコース、ペプトン等の生育に好適な成分を含有するものであれば良く、液体培地および固体培地のいずれでも良いが、液体培地が好ましい。液体培地を用いる場合には、振とう培養または撹拌培養することが好ましく、振とう培養することがより好ましい。
培養に用いる培地は、例えば、１００〜１３０℃で５〜１５分間滅菌処理することが好ましい。
また、本発明の効果を損なわない範囲において、培地にはその他の成分を含有させても良い。
培地のｐＨ、培養温度、培養時間、微生物の植菌量等の培養条件は、目的に応じて適宜調整できるが、概ね以下の通りである。
培地のｐＨは、例えば、生育用の液体培地であれば、２．０〜８．０であることが好ましく、３．５〜７．５であることがより好ましい。
培養温度は、１５〜３８℃であることが好ましく、２０〜３０℃であることがより好ましい。
培養時間は、生育状況に応じて適宜選択すれば良いが、通常２０時間以上であることが好ましく、３０時間以上であることがより好ましい。
試料へ添加する前の培養時における微生物の植菌量は特に限定されない。
【００２９】
＜セレンオキシアニオン吸着剤＞
本発明のセレンオキシアニオン吸着剤は、上記本発明の微生物を有効成分として含有するものである。そして、含有される本発明の微生物は、一種単独でも良いし、二種以上でも良い。二種以上である場合には、その組み合わせおよび比率は、目的に応じて任意に選択できる。
【００３０】
セレンオキシアニオン吸着剤としては、例えば、本発明の微生物を培養して得られた培養液をそのまま用いても良いし、該培養液をろ過して得られるろ過物を用いても良く、該ろ過物を乾燥して用いても良い。または、培養後の本発明の微生物を精製処理したものを用いても良い。乾燥する場合には、送風乾燥、凍結乾燥等、公知の方法で乾燥すれば良い。
このように、本発明のセレンオキシアニオン吸着剤においては、生存状態の微生物（生菌）だけでなく、本発明の微生物を乾燥処理したもの（乾燥菌体）や精製処理したものを用いることもでき、有効成分である微生物の生死は問わない。
【００３１】
セレンオキシアニオン吸着剤には、必要に応じて本発明の効果を妨げない範囲で、各種添加剤を添加しても良い。さらに本発明の微生物を、例えば、寒天、ゲランガムなどの天然物高分子ゲル；アクリルアミド；紫外線硬化樹脂などの高分子樹脂；炭素繊維、中空子膜、不織布などの繊維；などに固定化して用いても良い。固定化は内包、表面固定のいずれでも良い。
【００３２】
セレンオキシアニオン吸着剤中における本発明の微生物の含有量は、特に限定されるものではなく、添加対象である試料の形態、該試料中のセレンオキシアニオンの含有量、セレンオキシアニオン吸着剤の形態等に応じて適宜選択し得る。通常は、本発明の微生物の含有量が多いほど、セレンオキシアニオンの吸着力が高くなる点で好ましい。
【００３３】
＜セレンオキシアニオンの除去方法＞
本発明のセレンオキシアニオンの除去方法は、上記本発明の微生物を用いるものである。
本発明の微生物はセレンオキシアニオン吸着能を有するので、セレンオキシアニオンを含有する試料に該微生物を添加することで、試料中のセレンオキシアニオンが該微生物に吸着される。この後、セレンオキシアニオンが吸着された前記微生物を試料から分離すれば、試料中からセレンオキシアニオンを除去できる。
【００３４】
ここで試料とは、セレンオキシアニオンを含有するものであれば特に限定されず、具体的には、排水、土壌、汚泥、地下水、貯水池の水等が例示できる。なかでも水分含有率の高いものが好適である。
試料中に、セレン（６価）の化合物であるセレン酸（Ｈ２ＳｅＯ４）やその塩、あるいはセレン（４価）の化合物である亜セレン酸（Ｈ２ＳｅＯ４）やその塩（以下、これらをセレン酸化合物と略記する）が存在すると、その一部は水共存下において遊離状態のセレンオキシアニオンとなり、本発明の微生物に吸着される。そして、試料中における遊離状態のセレンオキシアニオンの量が低下すると、残存しているセレン酸化合物の一部がさらに遊離状態のセレンオキシアニオンとなり、同様に本発明の微生物に吸着されると推測され、試料中における遊離状態のセレン酸化合物の量も低減できる。
【００３５】
試料に微生物を添加する際は、本発明のセレンオキシアニオン吸着剤を添加すれば良い。
前記微生物の添加量は、特に限定されるものではなく、添加対象である試料の形態、該試料のセレンオキシアニオンの含有量、セレンオキシアニオン吸着剤の形態等に応じて適宜選択し得る。例えば、１０ｐｐｍ以下のセレンオキシアニオンを含有する水溶液に、生菌を添加する場合には、添加後の微生物の濃度（細胞濃度）が１．０×１０７〜１．０×１０１１ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように添加することが好ましく、乾燥菌体を添加する場合には、添加後の微生物の濃度が１〜１００ｍｇ／ｍＬとなるように添加することが好ましい。
【００３６】
添加する前記微生物は、セレンオキシアニオン吸着剤の説明で述べたように、生存状態および非生存状態のいずれでも良い。ただし、非生存状態である場合には、例えば細胞構造、特に細胞表層構造が著しく損なわれていないものが好ましく、このようなものとしては、先に述べた微生物を乾燥処理したもの、特に凍結乾燥処理したものが例示できる。
【００３７】
生存状態の微生物を添加する場合には、添加後の試料中において該微生物が増殖できるように試料の組成を調整することが好ましい。そのためには、先に述べた微生物の獲得条件や培養条件を参考に、試料の組成を調整すれば良く、例えば、本発明の微生物の生育に好適な前記成分を試料に適宜添加したものを培地とし、それ以外は先に述べた培養条件を参考に培養すると良い。このような方法は、セレンオキシアニオンの除去対象が、例えば、排水、土壌、汚泥、地下水、貯水池の水等であっても適用できる。
【００３８】
前記微生物を添加後は、試料を混合することが好ましい。前記微生物を試料中に均一に分散させることにより、セレンオキシアニオンの吸着効率を高めることができる。試料の混合方法は、振とう、撹拌等の公知の方法から任意に選択できるが、振とうが好ましい。
微生物添加後の試料の温度、混合方法、混合時間等の各種条件は、適宜目的に応じて選択すれば良い。例えば、水溶液中のセレンオキシアニオンを除去する場合には、微生物が生存状態にあるか非生存状態にあるかを問わず、該微生物を培地で培養する際と同様の条件を適用できる。
【００３９】
セレンオキシアニオンが吸着された前記微生物を試料から分離する方法は、吸着時の試料の状態に応じて、公知の固液分離の手法から任意に選択できる。具体的には、例えば、フィルターを用いてろ過しても良いし、遠心分離機を用いて固液分離しても良い。固液分離前には適宜必要に応じて、希釈や洗浄等の前処理を行っても良い。
【実施例】
【００４０】
以下、具体的実施例により、本発明についてさらに詳しく説明する。ただし、本発明は、以下に示す実施例に何ら限定されるものではない。
【００４１】
［実施例１］
＜ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を用いた純水中のセレン（６価）オキシアニオンの除去＞
（菌体の調製）
酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、純水１Ｌからなる生育用酵母培地１０ｍＬをＬ字型試験管に分注し、獲得したＪＰＣＣＹ００７５を白金線で植菌し、２５℃で２日間、前培養を行った。次いで、生育用酵母培地２５０ｍＬを分注した１Ｌ三角フラスコに、得られた前培養液５ｍＬを分注して植菌した。そして、２５℃で２日間、１５０ｒｐｍで振とう培養後、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を回収した。
【００４２】
（純水中のセレン（６価）オキシアニオンの除去）
高純度のセレン酸ナトリウムを純水に混合して、セレン（６価）オキシアニオンの最終濃度を２．１ｐｐｍに調整した後、フィルター滅菌した。次いで、得られた滅菌液１０ｍＬに、回収したＪＰＣＣＹ００７５の菌体を細胞数が２．９×１０９ｃｅｌｌｓ、１．４×１０１０ｃｅｌｌｓ、２．３×１０１０ｃｅｌｌｓ、２．９×１０１０ｃｅｌｌｓとなるようにそれぞれ混合し、２４時間振とうしながらインキュベーションした。２４時間後に、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、菌体全量を回収すると共に、さらに上清をフィルターでろ過して硝酸を添加後、原子吸光によるセレン（６価）オキシアニオンの測定に供した。
【００４３】
（測定結果）
測定結果を図７に示す。図７に示すグラフの縦軸は上清のセレン（６価）オキシアニオンの濃度を示す。図７から明らかなように、セレン（６価）オキシアニオンの除去量は、細胞数が増加するに従って増加することが確認され、２．３×１０１０ｃｅｌｌｓ以上の細胞数において、セレン（６価）オキシアニオンの濃度が０．１ｐｐｍ以下となった。このことから、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌により、吸着によってセレン（６価）オキシアニオンを除去できることが確認された。
【００４４】
［実施例２］
＜ＪＰＣＣＹ００７５の乾燥菌体を用いた純水中のセレン（６価）オキシアニオンの除去＞
（菌体の調製）
酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、純水１Ｌからなる生育用酵母培地１０ｍＬをＬ字型試験管に分注し、獲得したＪＰＣＣＹ００７５を白金線で植菌し、２５℃で２日間、前培養を行った。次いで、生育用酵母培地２５０ｍＬを分注した１Ｌ三角フラスコに、得られた前培養液５ｍＬを分注して植菌した。そして、２５℃で２日間培養後、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、ＪＰＣＣＹ００７５の菌体を全量回収した。次いで、回収した菌体を−８０℃で凍結保存した後、凍結乾燥機にて乾燥し、乳鉢ですり潰して乾燥菌体とした。
【００４５】
（純水中のセレン（６価）オキシアニオンの除去）
高純度のセレン酸ナトリウムを純水に混合して、セレン（６価）オキシアニオンの最終濃度を２．１ｐｐｍに調整した後、フィルター滅菌した。次いで、得られた滅菌液１０ｍＬを、前記乾燥菌体０．１ｇ、０．３ｇ、０．５ｇにそれぞれ混合し、Ｌ字型試験管に全量を移して、振とう器で２４時間振とう培養を行った。２４時間後に、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、菌体全量を回収すると共に、さらに上清をフィルターでろ過して硝酸を添加後、原子吸光によるセレン（６価）オキシアニオンの測定に供した。
【００４６】
（測定結果）
測定結果を図８に示す。図８に示すグラフの縦軸は上清のセレン（６価）オキシアニオンの濃度を示す。図８から明らかなように、乾燥菌体を用いた場合でも、溶液中のセレン酸濃度が減少することが確認され、乾燥菌体添加量が最も多い０．５ｇの時に、約１．３ｐｐｍのセレン（６価）オキシアニオンが除去された。このことから、ＪＰＣＣＹ００７５の乾燥菌体により、吸着によってセレン（６価）オキシアニオンを除去できることが確認された。
【００４７】
［実施例３］
＜ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を用いた実排水中のセレン（６価）オキシアニオンの除去（１）＞
（菌体の調製）
酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、純水１Ｌからなる生育用酵母培地１０ｍＬをＬ字型試験管に分注し、獲得したＪＰＣＣＹ００７５を白金線で植菌し、２５℃で２日間、前培養を行った。次いで、生育用酵母培地２５０ｍＬを分注した１Ｌ三角フラスコに、得られた前培養液５ｍＬを分注して植菌した。そして、２５℃で２日間培養後、測定に必要な分量を分取して、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を回収した。
【００４８】
（実排水中のセレン（６価）オキシアニオンの除去）
高純度のセレン酸ナトリウムを発電所硝化槽排水に混合して、セレン（６価）オキシアニオンの最終濃度を２．３ｐｐｍに調整し、さらに５Ｎ塩酸でｐＨを４に調整してから、フィルター滅菌した。次いで、得られた滅菌液１０ｍＬを、回収したＪＰＣＣＹ００７５の菌体２．０×１０９ｃｅｌｌｓ、６．０×１０９ｃｅｌｌｓ、１．０×１０１０ｃｅｌｌｓ、１．６×１０１０ｃｅｌｌｓ、２．０×１０１０ｃｅｌｌｓにそれぞれ混合し、Ｌ字型試験管に全量を移して、振とう器で２４時間振とう培養を行った。２４時間後に、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、菌体全量を回収すると共に、さらに上清をフィルターでろ過して硝酸を添加後、原子吸光によるセレン（６価）オキシアニオンの測定に供した。
【００４９】
（測定結果）
測定結果を図９に示す。図９に示すグラフの縦軸は上清のセレン（６価）オキシアニオンの濃度を示す。図９から明らかなように、セレン（６価）オキシアニオンは、実排水中でも除去できることが確認され、１．６×１０１０ｃｅｌｌｓの細胞数において最も除去効果が高く、セレン（６価）オキシアニオンの濃度が１．７ｐｐｍとなり、セレン（６価）オキシアニオンの除去量は０．５ｍｇであった。純水中の場合よりも除去量が少ないが、除去を多段階で行い、除去処理の回数を増やすことで、実排水中のセレン（６価）オキシアニオンも全量除去することが可能である。
また、使用した硝化槽排水中には、カルシウムイオンが１５００ｐｐｍ程度、塩化物イオンが４０００ｐｐｍ程度、ナトリウムイオンが２５００ｐｐｍ程度、硫酸イオンが１５００ｐｐｍ程度それぞれ含有されるが、このように、その他のイオン種を高濃度で含有し、しかも陰イオンである塩化物イオン、硫酸イオン共存下においても、セレンオキシアニオンを除去できることが確認された。
【００５０】
［実施例４］
＜ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を用いた純水中のセレン（４価）オキシアニオンの除去＞
（菌体の調製）
酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、純水１Ｌからなる生育用酵母培地１０ｍＬをＬ字型試験管に分注し、獲得したＪＰＣＣＹ００７５を白金線で植菌し、２５℃で２日間、前培養を行った。次いで、生育用酵母培地２５０ｍＬを分注した１Ｌ三角フラスコに、得られた前培養液５ｍＬを分注して植菌した。そして、２５℃で２日間、１５０ｒｐｍで振とう培養後、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を回収した。
【００５１】
（純水中のセレン（４価）オキシアニオンの除去）
高純度の亜セレン酸ナトリウムを純水に混合して、セレン（４価）オキシアニオンの最終濃度を１．６ｐｐｍに調整した後、フィルター滅菌した。次いで、得られた滅菌液１０ｍＬに、回収したＪＰＣＣＹ００７５の菌体を２．０×１０９ｃｅｌｌｓ、１．０×１０１０ｃｅｌｌｓ、１．６×１０１０ｃｅｌｌｓ、２．０×１０１０ｃｅｌｌｓとなるようにそれぞれ混合し、２４時間振とうしながらインキュベーションした。２４時間後に、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、菌体全量を回収すると共に、さらに上清をフィルターでろ過して硝酸を添加後、原子吸光によるセレン（４価）オキシアニオンの測定に供した。
【００５２】
（測定結果）
測定結果を図１０に示す。図１０に示すグラフの縦軸は上清のセレン（４価）オキシアニオンの濃度を示す。図１０から明らかなように、２．０×１０９ｃｅｌｌｓの細胞数で１．５ｐｐｍ以上のセレン（４価）オキシアニオンが除去されており、それ以上の細胞数においても、セレン（４価）オキシアニオンの濃度は０．１ｐｐｍ以下となっていた。このことから、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌により、吸着によってセレン（４価）オキシアニオンを効率的に除去できることが確認された。
【００５３】
［実施例５］
＜ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を用いた実排水中のセレン（４価）オキシアニオンの除去＞
（菌体の調製）
酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、純水１Ｌからなる生育用酵母培地１０ｍＬをＬ字型試験管に分注し、獲得したＪＰＣＣＹ００７５を白金線で釣菌して植菌し、２５℃で２日間、前培養を行った。次いで、生育用酵母培地２５０ｍＬを分注した１Ｌ三角フラスコに、得られた前培養液５ｍＬを分注して植菌した。そして、２５℃で２日間培養後、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を回収した。
【００５４】
（実排水中のセレン（４価）オキシアニオンの除去）
高純度の亜セレン酸ナトリウムを発電所硝化槽排水に混合して、セレン（４価）オキシアニオンの最終濃度を２．２ｐｐｍに調整し、さらに５Ｎ塩酸でｐＨを４に調整してから、フィルター滅菌した。次いで、得られた滅菌液１０ｍＬに、回収したＪＰＣＣＹ００７５の菌体を２．０×１０９ｃｅｌｌｓ、１．０×１０１０ｃｅｌｌｓ、１．６×１０１０ｃｅｌｌｓ、２．０×１０１０ｃｅｌｌｓとなるようにそれぞれ混合し、２４時間振とうしながらインキュベーションした。２４時間後に、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、菌体全量を回収すると共に、さらに上清をフィルターでろ過して硝酸を添加後、原子吸光によるセレン（４価）オキシアニオンの測定に供した。
【００５５】
（測定結果）
測定結果を図１１に示す。図１１に示すグラフの縦軸は上清のセレン（４価）オキシアニオンの濃度を示す。図１１から明らかなように、実排水中でも、２．０×１０９ｃｅｌｌｓの細胞数で２．１ｐｐｍのセレン（４価）オキシアニオンを除去できることが確認された。それ以上の細胞数においても、セレン（４価）オキシアニオンの濃度は０．１ｐｐｍ以下になることが確認された。このことから、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌により、吸着によってセレン（４価）オキシアニオンを純水中の場合と同等レベルで除去できることが示された。
また、使用した硝化槽排水は実施例３で使用したものと同じであり、したがって、セレンオキシアニオン以外のイオン種を高濃度で含有し、しかも陰イオン共存下においても、セレンオキシアニオンを除去できることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
本発明は、排水、土壌および汚泥中などのセレン酸化合物の除去に利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】ＪＰＣＣＹ００７５のコロニーの撮影画像であり、（ａ）はＹＭ平板培地（２５℃・培養７日間）、（ｂ）はＰＤＡ平板培地（２５℃・培養７日間）、（ｃ）は１／５ＭＡ平板培地（２５℃・培養７日間）、（ｄ）ＹＭ平板培地（２５℃・培養３０日間）でそれぞれ培養した時のコロニーの撮影画像である。
【図２】２％Ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ液体培地（２５℃・培養５日間）上の栄養細胞の撮影画像（１５００倍）である。
【図３】ＹＭ平板培地（２５℃・培養４日間）上の栄養細胞の撮影画像（１５００倍）である。
【図４】１／５ＭＡ平板培地（２５℃・培養４日間）上の栄養細胞の撮影画像（１５００倍）である。
【図５】ＹＭ平板培地上の栄養細胞の撮影画像であり、（ａ）は２５℃・培養１０日間の撮影画像（６００倍）、（ｂ）は２５℃・培養４日間の撮影画像（１５００倍）である。
【図６】１／５ＭＡ平板培地（２５℃・培養４日間）上の菌糸の撮影画像（１５００倍）である。
【図７】実施例１におけるセレン（６価）オキシアニオンの除去活性を示すグラフである。
【図８】実施例２におけるセレン（６価）オキシアニオンの除去活性を示すグラフである。
【図９】実施例３におけるセレン（６価）オキシアニオンの除去活性を示すグラフである。
【図１０】実施例４におけるセレン（４価）オキシアニオンの除去活性を示すグラフである。
【図１１】実施例５におけるセレン（４価）オキシアニオンの除去活性を示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新種微生物、該微生物を有効成分とするセレンオキシアニオン吸着剤および該微生物を用いるセレンオキシアニオンの除去方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
セレンは、半導体材料や感光性材料として有用であることが知られているほか、ガラスの着色剤、脱色剤としても利用されるなど、産業界において利用価値の高い元素である。
その一方で、微量のセレンは人体にとって必須元素であるが、必要量以上に摂取すると毒性を示すことが知られている。そこで、水質汚濁および土壌汚染を防止するために、環境基準の指定項目となっている。
このような中、上記のような産業界においては、工場排水中にセレンが混入する可能性があり、また、セレンは石炭中にも微量含まれていることから、火力発電所等の排水にも混入する可能性があるため、このような排水中のセレンの除去は重要な課題となっている。
【０００３】
工場排水中などで問題となるセレンは、セレン（６価）の化合物であるセレン酸（Ｈ２ＳｅＯ４）またはその塩、セレン（４価）の化合物である亜セレン酸（Ｈ２ＳｅＯ３）またはその塩である。通常これらセレン酸化合物は、工場排水などの水溶液中では、セレン酸イオン（ＳｅＯ４２−）の形態で、ごく一部は亜セレン酸（ＳｅＯ３２−）イオンの形態で、すなわち、セレンオキシアニオンとして存在していると考えられる。
【０００４】
ところで、自然界の微生物には、これらセレンオキシアニオンを吸着するものがあることが知られている（特許文献１参照）。具体的には、特定の微生物を液体中においてセレンオキシアニオンと共存させることにより、該微生物はその細胞表面に存在する多糖類や脂質などの細胞外高分子にセレンオキシアニオンを吸着させるのである。この現象はバイオアドソープション（バイオソープション）として知られている。この現象を利用することで、液体中からセレンオキシアニオンを除去することができると考えられ、その他のアニオン種の除去への利用も期待されている。
このように微生物を利用して、セレン酸化合物を排水中から除去する方法は、環境負荷も少なく優れた方法であると言える。
【特許文献１】特表平７−５０６００６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、特許文献１をはじめとする、従来のバイオアドソープションを利用したセレンオキシアニオンの除去については、実用的な方法がまだ確立されていないのが現状である。
本発明は上記事情に鑑みて為されたものであり、セレンオキシアニオンの吸着能に優れる新種微生物、該微生物を有効成分とするセレンオキシアニオン吸着剤および該微生物を用いるセレンオキシアニオンの除去方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するため、
請求項１に記載の発明は、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）が属する種に属する微生物である。
請求項２に記載の発明は、１８ＳｒＤＮＡの塩基配列が配列番号1に示す塩基配列と９６％以上の相同性を有し、セレンオキシアニオン吸着能を有するクリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物である。
請求項３に記載の発明は、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）である。
請求項４に記載の発明は、請求項１〜３のいずれか一項に記載の微生物を有効成分とするセレンオキシアニオン吸着剤である。
請求項５に記載の発明は、請求項１〜３のいずれか一項に記載の微生物を用いるセレンオキシアニオンの除去方法である。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、試料中のセレンオキシアニオンを効率的に除去できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明について詳しく説明する。
なお、以下において、「クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）」のことを「ＪＰＣＣＹ００７５」と略記することがある。
また、本発明においては、「セレン（６価）オキシアニオン」とは「セレン酸イオン（ＳｅＯ４２−）」のことを指し、「セレン（４価）オキシアニオン」とは「亜セレン酸（ＳｅＯ３２−）イオン」のこと指す。そして、「セレンオキシアニオン」とは、「セレン（６価）オキシアニオンおよび／またはセレン（４価）オキシアニオン」のことを指す。
【０００９】
＜ＪＰＣＣＹ００７５の獲得＞
下記手順で分離培地を作製した。
分離培地：酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、人工海水３７ｇ、クロラムフェニコール０．３ｇ、ストレプトマイシン０．１５ｇ、アンピシリン０．１ｇ、粉末寒天１２ｇを純水１Ｌに添加し、１２１℃で１０分間滅菌処理した後、適量を滅菌済み平板に分取して、寒天平板を作製した。
次いで、西表島の仲間川にあるマングローブ林より採取した泥（汽水域の表層泥）を生理食塩水で１００倍希釈して平板に塗布して植菌し、２５℃でインキュベーションを行なった。植菌後３日目に確認できたコロニーを滅菌済み爪楊枝で釣菌し、新たな酵母培地に植菌し、生育を繰り返すことで単菌化を行い、ＪＰＣＣＹ００７５を獲得した。
【００１０】
＜ＪＰＣＣＹ００７５の同定＞
ＪＰＣＣＹ００７５の同定は、株式会社テクノスルガに委託して実施した。そして取得した検体を用いて、形態的性質、培養的性質、生理学的性質を確認し、１８ＳｒＤＮＡの塩基配列の同定を行った。
【００１１】
［形態的性質、培養的性質、生理学的性質］
（試験方法）
以下の方法で形態観察、生化学性状試験を行った。
１．培養条件
以下の条件で培養した菌株を供試菌体とした。
（１）培地；
・２％Ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ液体培地（Ｋｕｒｔｚｍａｎ，１９９８）（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＭＤ，ＵＳＡ）
・Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ−Ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ（ＹＭ）平板培地（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＭＤ，ＵＳＡ）
・ポテトデキストロース寒天培地（ＰＤＡ平板培地）「ダイゴ」（日本製薬、東京）
・２％Ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ平板培地（Ｋｕｒｔｚｍａｎ，１９９８）
・１／５Ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ平板培地（Ｋｕｒｔｚｍａｎ，１９９８）
（２）培養温度；２５℃
（３）培養期間；２日間〜１月間
２．形態観察
以下を用いて、巨視的観察（コロニー観察）および微視的観察（形態性状観察）を行った。
（１）顕微鏡；光学顕微鏡ＢＸ５０Ｆ４（オリンパス、東京）（微分干渉観察）
（２）マウント波；滅菌蒸留水
３．生化学性状試験
以下の２項目について試験を行い、方法はＹａｒｒｏｗ（１９９８）に準拠した。
（１）ジアゾニウム・ブルーＢ（ＤＢＢ）反応
（２）尿素の加水分解試験（ウレアーゼ活性）
【００１２】
（試験結果）
結果を以下に示す。
（１）巨視的観察（コロニー観察）
ＹＭ平板培地、ＰＤＡ平板培地および１／５ＭＡ平板培地上で２５℃・培養７日間、ＹＭ平板培地で２５℃・培養３０日間において、コロニーは以下の性状を示した。あわせて撮影した画像を図１に示す。
（Ａ）ＹＭ平板培地（２５℃・培養７日間）
・周縁の形状 全縁
・隆起状態 扁平でわずかに中央突起形
・表面の形状 平滑
・光沢および性状 光沢あり、湿性
・色調 クリーム色
（Ｂ）ＰＤＡ平板培地（２５℃・培養７日間）
・周縁の形状 全縁
・隆起状態 扁平でわずかに半レンズ形
・表面の形状 平滑
・光沢および性状 光沢あり、湿性
・色調 クリーム色
（Ｃ）１／５ＭＡ平板培地（２５℃・培養７日間）
・周縁の形状 乱糸状
・隆起状態 扁平
・表面の形状 平滑
・光沢および性状 中央部は光沢あり、湿性
・色調 クリーム色
（Ｄ）ＹＭ平板培地（２５℃・培養３０日間）
・周縁の形状 全縁
・隆起状態 扁平な中央突起形
・表面の形状 平滑、環紋状
・光沢および性状 光沢あり、バター様、湿性
・色調 黄色味を帯びたクリーム色
【００１３】
（２）微視的観察（形態性状観察）
２％Ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ液体培地で２５℃・培養開始５日目に、栄養細胞は（３〜７）×（２．８〜３．５）μｍの倒洋梨形、球形から楕円形などを含む多形性を示し、増殖は極出芽によることが確認された。この時の撮影画像を図２に示す。
ＹＭ平板培地においても動揺の特徴を示した。この時の撮影画像を図３に示す。
１／５ＭＡ平板培地においては、２５℃・培養開始４日目に、栄養細胞は多形性を示したが、球形のものが多数観察された。この時の撮影画像を図４に示す。
ＹＭ平板培地で２５℃・培養開始６〜１０日目に、菌糸および偽菌糸が確認された。この時の撮影画像を図５に示す。
１／５ＭＡ平板培地においては、２５℃・培養開始４日目に、ラケット形の細胞が繋がった菌糸が確認された。この時の撮影画像を図６に示す。
また、培養１ヶ月を経過した平板で有性生殖器官の形成は認められなかった。
【００１４】
（３）生化学性状試験
ジアゾニウム・ブルーＢ（ＤＢＢ）反応と尿素の加水分解試験（ウレアーゼ活性）を行った結果、いずれも陽性を示した。
【００１５】
（４）考察
ＪＰＣＣＹ００７５は、クリーム色から黄色味を帯びた、周縁部が全縁から乱糸状のコロニーを形成し、その栄養細胞は多形性で、極出芽により増殖し、菌糸および偽菌糸を形成し、有性生殖器官の形成は認められなかった。これらの形態的特徴は、「Ｔｈｅ Ｙｅａｓｔｓ， ａ ｔａｘｏｎｏｍｉｃ ｓｔｕｄｙ，第４版，Ｋｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ，１９９８」や「Ｙｅａｓｔｓ，第３版，Ｂａｒｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，２０００」に記載されているクリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属（以下、クリプトコッカス属と略記する）の特徴と一致していた。
また、ジアゾニウム・ブルーＢ（ＤＢＢ）反応は、子のう菌系酵母で陰性（淡黄色か無色）、担子菌系酵母で陽性（赤色）を示し、尿素の加水分解試験（ウレアーゼ活性）は、子のう菌系酵母のほとんどで陰性、担子菌系酵母で陽性を示すことがすでに報告されており（Ｙａｒｒｏｗ，１９９８）、ＪＰＣＣＹ００７５は、ジアゾニウム・ブルーＢ（ＤＢＢ）反応と尿素の加水分解試験（ウレアーゼ活性）でいずれも陽性を示したことから、ＪＰＣＣＹ００７５は、担子菌系酵母であると判断された。
【００１６】
（試験方法）
以下に示す項目について、生理性状試験を行った。
試験方法は、Ｂａｒｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，（２０００）およびＫｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ（１９９８）に準拠し、培養は温度耐性試験を除き２５℃で行った。糖類発酵性試験、炭素源資化性試験、各種耐性試験においては、４週間まで培養し、生育の有無を確認した。
試験項目；糖類発酵性試験、炭素源資化性試験、窒素源資化性試験、ビタミン要求性試験、温度耐性試験（３０℃および３５℃）、薬剤耐性試験
【００１７】
（試験結果）
結果を表１〜５に示す。表１〜５中の符号は以下の意味を有する。
＋・・・反応が陽性
−・・・反応が陰性
Ｗ・・・反応が弱い陽性（ｗｅａｋ）
Ｓ・・・試験開始後に２週間から３週間以上かけて徐々に陽性反応が認められた（ｓｌｏｗ）
Ｌ・・・試験開始２週間以降に急速に陽性反応が認められた（ｌａｔｅｎｔ）
なお、糖類発酵性培地における培養では、皮膜（ｒｉｎｇ）と沈殿（ｓｅｄｉｍｅｎｔ）を生じた。
【００１８】
【表１】
【００１９】
【表２】
【００２０】
【表３】
【００２１】
【表４】
【００２２】
【表５】
【００２３】
（考察）
ＪＰＣＣＹ００７５の生理性状を、「Ｔｈｅ Ｙｅａｓｔｓ， ａ ｔａｘｏｎｏｍｉｃ ｓｔｕｄｙ，第４版，Ｋｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ，１９９８」に記載されているクリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属の特徴と比較した。その結果、表１〜５に示すように、ＪＰＣＣＹ００７５は、ウレアーゼ活性およびジアゾニウム・ブルーＢ（ＤＢＢ）によるコロニーの呈色を示し、糖類発酵性を示さず、これらの特徴はクリプトコッカス属の特徴と一致した。
また、クリプトコッカス属の公知種の中では、クリプトコッカス ポゾリカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｏｄｚｏｌｉｃｕｓ）に類似した特徴を示したが、ＪＰＣＣＹ００７５が可溶性デンプンの資化性、リビトールの培養開始４週目の急速な資化性、３０℃での生育性、１０％ＮａＣｌ／５％グルコース培地での緩やかな生育性を示し、ビタミン欠乏培地での生育性が弱かった点において、クリプトコッカス ポゾリカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｏｄｚｏｌｉｃｕｓ）とは相違が認められた。
以上より、ＪＰＣＣＹ００７５は、クリプトコッカス属に属する新種であると判断された。
【００２４】
（塩基配列）
ＪＰＣＣＹ００７５の１８SｒＤＮＡを、公知の方法により同定した結果、配列番号１に示す塩基配列を有することが確認された。
【００２５】
本発明のＪＰＣＣＹ００７５は、平成１９年９月２５日付けで受託番号ＮＩＴＥ Ｐ−４１４として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受託されている。
【００２６】
＜新種微生物＞
本発明の微生物は、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株である。そして本発明は、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株が属する種に属する微生物、および１８ＳｒＤＮＡの塩基配列が配列番号1に示す塩基配列と９６％以上の相同性を有し、セレンオキシアニオン吸着能を有するクリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物を包含する。このような微生物は、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株と同種の微生物であると考えられる。
【００２７】
本発明の微生物は、セレンオキシアニオンを、可逆的または不可逆的に捕捉するものであり、「セレンオキシアニオン吸着能」とは、このような捕捉する能力のことを指す。
本発明の微生物がセレンオキシアニオン吸着能を有するのは、該微生物の細胞表層に存在する多糖類や脂質等の細胞外高分子にセレンオキシアニオンが捕捉されたり、細胞内にセレンオキシアニオンが取り込まれたりすることによるものと推測される。
また、本発明の微生物は、セレンオキシアニオン以外のイオン種を高濃度で含有する試料中においても、セレンオキシアニオンを吸着できる。特に、陰イオンの存在下においてもセレンオキシアニオンを吸着でき、セレンオキシアニオンを選択的に吸着する能力が高い。
【００２８】
本発明の微生物は、前記分離培地で分離後、生育用培地で前培養および本培養を行ってから用いるのが好ましい。生育用培地は、酵母エキス、グルコース、ペプトン等の生育に好適な成分を含有するものであれば良く、液体培地および固体培地のいずれでも良いが、液体培地が好ましい。液体培地を用いる場合には、振とう培養または撹拌培養することが好ましく、振とう培養することがより好ましい。
培養に用いる培地は、例えば、１００〜１３０℃で５〜１５分間滅菌処理することが好ましい。
また、本発明の効果を損なわない範囲において、培地にはその他の成分を含有させても良い。
培地のｐＨ、培養温度、培養時間、微生物の植菌量等の培養条件は、目的に応じて適宜調整できるが、概ね以下の通りである。
培地のｐＨは、例えば、生育用の液体培地であれば、２．０〜８．０であることが好ましく、３．５〜７．５であることがより好ましい。
培養温度は、１５〜３８℃であることが好ましく、２０〜３０℃であることがより好ましい。
培養時間は、生育状況に応じて適宜選択すれば良いが、通常２０時間以上であることが好ましく、３０時間以上であることがより好ましい。
試料へ添加する前の培養時における微生物の植菌量は特に限定されない。
【００２９】
＜セレンオキシアニオン吸着剤＞
本発明のセレンオキシアニオン吸着剤は、上記本発明の微生物を有効成分として含有するものである。そして、含有される本発明の微生物は、一種単独でも良いし、二種以上でも良い。二種以上である場合には、その組み合わせおよび比率は、目的に応じて任意に選択できる。
【００３０】
セレンオキシアニオン吸着剤としては、例えば、本発明の微生物を培養して得られた培養液をそのまま用いても良いし、該培養液をろ過して得られるろ過物を用いても良く、該ろ過物を乾燥して用いても良い。または、培養後の本発明の微生物を精製処理したものを用いても良い。乾燥する場合には、送風乾燥、凍結乾燥等、公知の方法で乾燥すれば良い。
このように、本発明のセレンオキシアニオン吸着剤においては、生存状態の微生物（生菌）だけでなく、本発明の微生物を乾燥処理したもの（乾燥菌体）や精製処理したものを用いることもでき、有効成分である微生物の生死は問わない。
【００３１】
セレンオキシアニオン吸着剤には、必要に応じて本発明の効果を妨げない範囲で、各種添加剤を添加しても良い。さらに本発明の微生物を、例えば、寒天、ゲランガムなどの天然物高分子ゲル；アクリルアミド；紫外線硬化樹脂などの高分子樹脂；炭素繊維、中空子膜、不織布などの繊維；などに固定化して用いても良い。固定化は内包、表面固定のいずれでも良い。
【００３２】
セレンオキシアニオン吸着剤中における本発明の微生物の含有量は、特に限定されるものではなく、添加対象である試料の形態、該試料中のセレンオキシアニオンの含有量、セレンオキシアニオン吸着剤の形態等に応じて適宜選択し得る。通常は、本発明の微生物の含有量が多いほど、セレンオキシアニオンの吸着力が高くなる点で好ましい。
【００３３】
＜セレンオキシアニオンの除去方法＞
本発明のセレンオキシアニオンの除去方法は、上記本発明の微生物を用いるものである。
本発明の微生物はセレンオキシアニオン吸着能を有するので、セレンオキシアニオンを含有する試料に該微生物を添加することで、試料中のセレンオキシアニオンが該微生物に吸着される。この後、セレンオキシアニオンが吸着された前記微生物を試料から分離すれば、試料中からセレンオキシアニオンを除去できる。
【００３４】
ここで試料とは、セレンオキシアニオンを含有するものであれば特に限定されず、具体的には、排水、土壌、汚泥、地下水、貯水池の水等が例示できる。なかでも水分含有率の高いものが好適である。
試料中に、セレン（６価）の化合物であるセレン酸（Ｈ２ＳｅＯ４）やその塩、あるいはセレン（４価）の化合物である亜セレン酸（Ｈ２ＳｅＯ４）やその塩（以下、これらをセレン酸化合物と略記する）が存在すると、その一部は水共存下において遊離状態のセレンオキシアニオンとなり、本発明の微生物に吸着される。そして、試料中における遊離状態のセレンオキシアニオンの量が低下すると、残存しているセレン酸化合物の一部がさらに遊離状態のセレンオキシアニオンとなり、同様に本発明の微生物に吸着されると推測され、試料中における遊離状態のセレン酸化合物の量も低減できる。
【００３５】
試料に微生物を添加する際は、本発明のセレンオキシアニオン吸着剤を添加すれば良い。
前記微生物の添加量は、特に限定されるものではなく、添加対象である試料の形態、該試料のセレンオキシアニオンの含有量、セレンオキシアニオン吸着剤の形態等に応じて適宜選択し得る。例えば、１０ｐｐｍ以下のセレンオキシアニオンを含有する水溶液に、生菌を添加する場合には、添加後の微生物の濃度（細胞濃度）が１．０×１０７〜１．０×１０１１ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように添加することが好ましく、乾燥菌体を添加する場合には、添加後の微生物の濃度が１〜１００ｍｇ／ｍＬとなるように添加することが好ましい。
【００３６】
添加する前記微生物は、セレンオキシアニオン吸着剤の説明で述べたように、生存状態および非生存状態のいずれでも良い。ただし、非生存状態である場合には、例えば細胞構造、特に細胞表層構造が著しく損なわれていないものが好ましく、このようなものとしては、先に述べた微生物を乾燥処理したもの、特に凍結乾燥処理したものが例示できる。
【００３７】
生存状態の微生物を添加する場合には、添加後の試料中において該微生物が増殖できるように試料の組成を調整することが好ましい。そのためには、先に述べた微生物の獲得条件や培養条件を参考に、試料の組成を調整すれば良く、例えば、本発明の微生物の生育に好適な前記成分を試料に適宜添加したものを培地とし、それ以外は先に述べた培養条件を参考に培養すると良い。このような方法は、セレンオキシアニオンの除去対象が、例えば、排水、土壌、汚泥、地下水、貯水池の水等であっても適用できる。
【００３８】
前記微生物を添加後は、試料を混合することが好ましい。前記微生物を試料中に均一に分散させることにより、セレンオキシアニオンの吸着効率を高めることができる。試料の混合方法は、振とう、撹拌等の公知の方法から任意に選択できるが、振とうが好ましい。
微生物添加後の試料の温度、混合方法、混合時間等の各種条件は、適宜目的に応じて選択すれば良い。例えば、水溶液中のセレンオキシアニオンを除去する場合には、微生物が生存状態にあるか非生存状態にあるかを問わず、該微生物を培地で培養する際と同様の条件を適用できる。
【００３９】
セレンオキシアニオンが吸着された前記微生物を試料から分離する方法は、吸着時の試料の状態に応じて、公知の固液分離の手法から任意に選択できる。具体的には、例えば、フィルターを用いてろ過しても良いし、遠心分離機を用いて固液分離しても良い。固液分離前には適宜必要に応じて、希釈や洗浄等の前処理を行っても良い。
【実施例】
【００４０】
以下、具体的実施例により、本発明についてさらに詳しく説明する。ただし、本発明は、以下に示す実施例に何ら限定されるものではない。
【００４１】
［実施例１］
＜ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を用いた純水中のセレン（６価）オキシアニオンの除去＞
（菌体の調製）
酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、純水１Ｌからなる生育用酵母培地１０ｍＬをＬ字型試験管に分注し、獲得したＪＰＣＣＹ００７５を白金線で植菌し、２５℃で２日間、前培養を行った。次いで、生育用酵母培地２５０ｍＬを分注した１Ｌ三角フラスコに、得られた前培養液５ｍＬを分注して植菌した。そして、２５℃で２日間、１５０ｒｐｍで振とう培養後、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を回収した。
【００４２】
（純水中のセレン（６価）オキシアニオンの除去）
高純度のセレン酸ナトリウムを純水に混合して、セレン（６価）オキシアニオンの最終濃度を２．１ｐｐｍに調整した後、フィルター滅菌した。次いで、得られた滅菌液１０ｍＬに、回収したＪＰＣＣＹ００７５の菌体を細胞数が２．９×１０９ｃｅｌｌｓ、１．４×１０１０ｃｅｌｌｓ、２．３×１０１０ｃｅｌｌｓ、２．９×１０１０ｃｅｌｌｓとなるようにそれぞれ混合し、２４時間振とうしながらインキュベーションした。２４時間後に、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、菌体全量を回収すると共に、さらに上清をフィルターでろ過して硝酸を添加後、原子吸光によるセレン（６価）オキシアニオンの測定に供した。
【００４３】
（測定結果）
測定結果を図７に示す。図７に示すグラフの縦軸は上清のセレン（６価）オキシアニオンの濃度を示す。図７から明らかなように、セレン（６価）オキシアニオンの除去量は、細胞数が増加するに従って増加することが確認され、２．３×１０１０ｃｅｌｌｓ以上の細胞数において、セレン（６価）オキシアニオンの濃度が０．１ｐｐｍ以下となった。このことから、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌により、吸着によってセレン（６価）オキシアニオンを除去できることが確認された。
【００４４】
［実施例２］
＜ＪＰＣＣＹ００７５の乾燥菌体を用いた純水中のセレン（６価）オキシアニオンの除去＞
（菌体の調製）
酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、純水１Ｌからなる生育用酵母培地１０ｍＬをＬ字型試験管に分注し、獲得したＪＰＣＣＹ００７５を白金線で植菌し、２５℃で２日間、前培養を行った。次いで、生育用酵母培地２５０ｍＬを分注した１Ｌ三角フラスコに、得られた前培養液５ｍＬを分注して植菌した。そして、２５℃で２日間培養後、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、ＪＰＣＣＹ００７５の菌体を全量回収した。次いで、回収した菌体を−８０℃で凍結保存した後、凍結乾燥機にて乾燥し、乳鉢ですり潰して乾燥菌体とした。
【００４５】
（純水中のセレン（６価）オキシアニオンの除去）
高純度のセレン酸ナトリウムを純水に混合して、セレン（６価）オキシアニオンの最終濃度を２．１ｐｐｍに調整した後、フィルター滅菌した。次いで、得られた滅菌液１０ｍＬを、前記乾燥菌体０．１ｇ、０．３ｇ、０．５ｇにそれぞれ混合し、Ｌ字型試験管に全量を移して、振とう器で２４時間振とう培養を行った。２４時間後に、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、菌体全量を回収すると共に、さらに上清をフィルターでろ過して硝酸を添加後、原子吸光によるセレン（６価）オキシアニオンの測定に供した。
【００４６】
（測定結果）
測定結果を図８に示す。図８に示すグラフの縦軸は上清のセレン（６価）オキシアニオンの濃度を示す。図８から明らかなように、乾燥菌体を用いた場合でも、溶液中のセレン酸濃度が減少することが確認され、乾燥菌体添加量が最も多い０．５ｇの時に、約１．３ｐｐｍのセレン（６価）オキシアニオンが除去された。このことから、ＪＰＣＣＹ００７５の乾燥菌体により、吸着によってセレン（６価）オキシアニオンを除去できることが確認された。
【００４７】
［実施例３］
＜ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を用いた実排水中のセレン（６価）オキシアニオンの除去（１）＞
（菌体の調製）
酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、純水１Ｌからなる生育用酵母培地１０ｍＬをＬ字型試験管に分注し、獲得したＪＰＣＣＹ００７５を白金線で植菌し、２５℃で２日間、前培養を行った。次いで、生育用酵母培地２５０ｍＬを分注した１Ｌ三角フラスコに、得られた前培養液５ｍＬを分注して植菌した。そして、２５℃で２日間培養後、測定に必要な分量を分取して、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を回収した。
【００４８】
（実排水中のセレン（６価）オキシアニオンの除去）
高純度のセレン酸ナトリウムを発電所硝化槽排水に混合して、セレン（６価）オキシアニオンの最終濃度を２．３ｐｐｍに調整し、さらに５Ｎ塩酸でｐＨを４に調整してから、フィルター滅菌した。次いで、得られた滅菌液１０ｍＬを、回収したＪＰＣＣＹ００７５の菌体２．０×１０９ｃｅｌｌｓ、６．０×１０９ｃｅｌｌｓ、１．０×１０１０ｃｅｌｌｓ、１．６×１０１０ｃｅｌｌｓ、２．０×１０１０ｃｅｌｌｓにそれぞれ混合し、Ｌ字型試験管に全量を移して、振とう器で２４時間振とう培養を行った。２４時間後に、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、菌体全量を回収すると共に、さらに上清をフィルターでろ過して硝酸を添加後、原子吸光によるセレン（６価）オキシアニオンの測定に供した。
【００４９】
（測定結果）
測定結果を図９に示す。図９に示すグラフの縦軸は上清のセレン（６価）オキシアニオンの濃度を示す。図９から明らかなように、セレン（６価）オキシアニオンは、実排水中でも除去できることが確認され、１．６×１０１０ｃｅｌｌｓの細胞数において最も除去効果が高く、セレン（６価）オキシアニオンの濃度が１．７ｐｐｍとなり、セレン（６価）オキシアニオンの除去量は０．５ｍｇであった。純水中の場合よりも除去量が少ないが、除去を多段階で行い、除去処理の回数を増やすことで、実排水中のセレン（６価）オキシアニオンも全量除去することが可能である。
また、使用した硝化槽排水中には、カルシウムイオンが１５００ｐｐｍ程度、塩化物イオンが４０００ｐｐｍ程度、ナトリウムイオンが２５００ｐｐｍ程度、硫酸イオンが１５００ｐｐｍ程度それぞれ含有されるが、このように、その他のイオン種を高濃度で含有し、しかも陰イオンである塩化物イオン、硫酸イオン共存下においても、セレンオキシアニオンを除去できることが確認された。
【００５０】
［実施例４］
＜ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を用いた純水中のセレン（４価）オキシアニオンの除去＞
（菌体の調製）
酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、純水１Ｌからなる生育用酵母培地１０ｍＬをＬ字型試験管に分注し、獲得したＪＰＣＣＹ００７５を白金線で植菌し、２５℃で２日間、前培養を行った。次いで、生育用酵母培地２５０ｍＬを分注した１Ｌ三角フラスコに、得られた前培養液５ｍＬを分注して植菌した。そして、２５℃で２日間、１５０ｒｐｍで振とう培養後、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を回収した。
【００５１】
（純水中のセレン（４価）オキシアニオンの除去）
高純度の亜セレン酸ナトリウムを純水に混合して、セレン（４価）オキシアニオンの最終濃度を１．６ｐｐｍに調整した後、フィルター滅菌した。次いで、得られた滅菌液１０ｍＬに、回収したＪＰＣＣＹ００７５の菌体を２．０×１０９ｃｅｌｌｓ、１．０×１０１０ｃｅｌｌｓ、１．６×１０１０ｃｅｌｌｓ、２．０×１０１０ｃｅｌｌｓとなるようにそれぞれ混合し、２４時間振とうしながらインキュベーションした。２４時間後に、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、菌体全量を回収すると共に、さらに上清をフィルターでろ過して硝酸を添加後、原子吸光によるセレン（４価）オキシアニオンの測定に供した。
【００５２】
（測定結果）
測定結果を図１０に示す。図１０に示すグラフの縦軸は上清のセレン（４価）オキシアニオンの濃度を示す。図１０から明らかなように、２．０×１０９ｃｅｌｌｓの細胞数で１．５ｐｐｍ以上のセレン（４価）オキシアニオンが除去されており、それ以上の細胞数においても、セレン（４価）オキシアニオンの濃度は０．１ｐｐｍ以下となっていた。このことから、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌により、吸着によってセレン（４価）オキシアニオンを効率的に除去できることが確認された。
【００５３】
［実施例５］
＜ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を用いた実排水中のセレン（４価）オキシアニオンの除去＞
（菌体の調製）
酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、純水１Ｌからなる生育用酵母培地１０ｍＬをＬ字型試験管に分注し、獲得したＪＰＣＣＹ００７５を白金線で釣菌して植菌し、２５℃で２日間、前培養を行った。次いで、生育用酵母培地２５０ｍＬを分注した１Ｌ三角フラスコに、得られた前培養液５ｍＬを分注して植菌した。そして、２５℃で２日間培養後、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌を回収した。
【００５４】
（実排水中のセレン（４価）オキシアニオンの除去）
高純度の亜セレン酸ナトリウムを発電所硝化槽排水に混合して、セレン（４価）オキシアニオンの最終濃度を２．２ｐｐｍに調整し、さらに５Ｎ塩酸でｐＨを４に調整してから、フィルター滅菌した。次いで、得られた滅菌液１０ｍＬに、回収したＪＰＣＣＹ００７５の菌体を２．０×１０９ｃｅｌｌｓ、１．０×１０１０ｃｅｌｌｓ、１．６×１０１０ｃｅｌｌｓ、２．０×１０１０ｃｅｌｌｓとなるようにそれぞれ混合し、２４時間振とうしながらインキュベーションした。２４時間後に、遠心分離機を用いて８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離を行い、菌体全量を回収すると共に、さらに上清をフィルターでろ過して硝酸を添加後、原子吸光によるセレン（４価）オキシアニオンの測定に供した。
【００５５】
（測定結果）
測定結果を図１１に示す。図１１に示すグラフの縦軸は上清のセレン（４価）オキシアニオンの濃度を示す。図１１から明らかなように、実排水中でも、２．０×１０９ｃｅｌｌｓの細胞数で２．１ｐｐｍのセレン（４価）オキシアニオンを除去できることが確認された。それ以上の細胞数においても、セレン（４価）オキシアニオンの濃度は０．１ｐｐｍ以下になることが確認された。このことから、ＪＰＣＣＹ００７５の生菌により、吸着によってセレン（４価）オキシアニオンを純水中の場合と同等レベルで除去できることが示された。
また、使用した硝化槽排水は実施例３で使用したものと同じであり、したがって、セレンオキシアニオン以外のイオン種を高濃度で含有し、しかも陰イオン共存下においても、セレンオキシアニオンを除去できることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
本発明は、排水、土壌および汚泥中などのセレン酸化合物の除去に利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】ＪＰＣＣＹ００７５のコロニーの撮影画像であり、（ａ）はＹＭ平板培地（２５℃・培養７日間）、（ｂ）はＰＤＡ平板培地（２５℃・培養７日間）、（ｃ）は１／５ＭＡ平板培地（２５℃・培養７日間）、（ｄ）ＹＭ平板培地（２５℃・培養３０日間）でそれぞれ培養した時のコロニーの撮影画像である。
【図２】２％Ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ液体培地（２５℃・培養５日間）上の栄養細胞の撮影画像（１５００倍）である。
【図３】ＹＭ平板培地（２５℃・培養４日間）上の栄養細胞の撮影画像（１５００倍）である。
【図４】１／５ＭＡ平板培地（２５℃・培養４日間）上の栄養細胞の撮影画像（１５００倍）である。
【図５】ＹＭ平板培地上の栄養細胞の撮影画像であり、（ａ）は２５℃・培養１０日間の撮影画像（６００倍）、（ｂ）は２５℃・培養４日間の撮影画像（１５００倍）である。
【図６】１／５ＭＡ平板培地（２５℃・培養４日間）上の菌糸の撮影画像（１５００倍）である。
【図７】実施例１におけるセレン（６価）オキシアニオンの除去活性を示すグラフである。
【図８】実施例２におけるセレン（６価）オキシアニオンの除去活性を示すグラフである。
【図９】実施例３におけるセレン（６価）オキシアニオンの除去活性を示すグラフである。
【図１０】実施例４におけるセレン（４価）オキシアニオンの除去活性を示すグラフである。
【図１１】実施例５におけるセレン（４価）オキシアニオンの除去活性を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）が属する種に属する微生物。
【請求項２】
１８ＳｒＤＮＡの塩基配列が配列番号1に示す塩基配列と９６％以上の相同性を有し、セレンオキシアニオン吸着能を有するクリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物。
【請求項３】
クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の微生物を有効成分とするセレンオキシアニオン吸着剤。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の微生物を用いるセレンオキシアニオンの除去方法。
【請求項１】
クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）が属する種に属する微生物。
【請求項２】
１８ＳｒＤＮＡの塩基配列が配列番号1に示す塩基配列と９６％以上の相同性を有し、セレンオキシアニオン吸着能を有するクリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物。
【請求項３】
クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ＪＰＣＣＹ００７５株（ＮＩＴＥ Ｐ−４１４）。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の微生物を有効成分とするセレンオキシアニオン吸着剤。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の微生物を用いるセレンオキシアニオンの除去方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【公開番号】特開２００９−１１２２２８（Ｐ２００９−１１２２２８Ａ）
【公開日】平成２１年５月２８日（２００９．５．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２８７７１６（Ｐ２００７−２８７７１６）
【出願日】平成１９年１１月５日（２００７．１１．５）
【出願人】（０００２１７６８６）電源開発株式会社 (207)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年５月２８日（２００９．５．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１１月５日（２００７．１１．５）
【出願人】（０００２１７６８６）電源開発株式会社 (207)
【Ｆターム（参考）】
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