新規の微生物トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１及びバチルスファーメンティクスＫＪＳ−２、並びにこれらを含む魚類用飼料添加剤
新規の微生物トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１及びバチルスファーメンティクスＫＪＳ−２を開示する。また、微生物トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１、バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２及びバチルスリケニホルミスの凍結乾燥物を含む魚類用飼料添加剤を開示する。本発明は、抗菌性及び抗真菌性を表すので、菌類及び真菌類による養殖魚類の集団死を防止することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規の微生物であるトラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）及びバチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）、並びに前記新規の微生物とバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）を含む魚類用飼料添加剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
現在まで魚類用飼料添加剤は抗菌作用を目的で使用した場合があり、浄化の目的で微生物自体を使用した例もある。また、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ；Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）を供給する目的でＤＨＡを投与したプランクトンと、アルテミア（Ａｒｔｅｍｉａ）またはワムシ（Ｒｏｔｉｆｅｒ）を生育させて魚類、特に稚魚に供給した事例も知られている。ＤＨＡは魚類の必須営養分であって、不足の際、成長阻害と免疫欠乏などによって養殖魚類の品質が落ちる問題を発生させると知られている。ＤＨＡは、まぐろの目またはイカの皮から抽出して使用するか、抽出されたＤＨＡを加工して使用した。
【０００３】
大韓民国特許第１０−３３８１９３号によると、ＤＨＡを新規の微生物であるシゾキトリウム属Ｓπ−２（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ ｓｐ． Ｓπ−２）を利用して供給する技術が開示されている。前記シゾキトリウムは真核生物の一種であって、ワムシ（Ｒｏｔｉｆｅｒ）のえさとして供給して、ワムシを生育させた後、養殖魚類用ＤＨＡを供給するのに用いられる。アメリカ特許６、５６６、１２３号によれば、低塩度での微生物培養とその微生物を利用した不飽和脂肪酸の生産及び抽出に対する方法が開示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明はＤＨＡを含む新規の微生物トラウストキトリウムＫＪＳ−１及び抗菌性に優れた新規の微生物バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２を提供することにその目的がある。
【０００５】
本発明の他の目的は、魚類の必須営養分であるドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を供給し、抗菌及び抗真菌作用を表して、細菌及び真菌による魚類の集団死を防止する魚類用飼料添加剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の一面によれば、韓国微生物培養センター（ＫＣＣＭ）に寄託番号ＫＣＣＭ１０６６７Ｐで寄託され、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）を生産することを特徴とする、新規の微生物トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）が提供される。
【０００７】
本発明の他の面によれば、韓国微生物培養センター（ＫＣＣＭ）に寄託番号ＫＣＣＭ１０７６９Ｐで寄託され、抗菌性及び抗真菌性を有することを特徴とする、新規の微生物バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）が提供される。
【０００８】
本発明のさらに他の面によれば、トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）、バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）及びバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の凍結乾燥物が所定の重量比で混合された混合物を含むことを特徴とする、魚類用飼料添加剤が提供される。
【０００９】
本発明の好適な一変形例によれば、前記混合物は、トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）、バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）及びバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の凍結乾燥物が５：１：２．６の重量比でなる。
【００１０】
本発明の好適な他の変形例によれば、前記バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２菌株（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）及びバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の凍結乾燥物はそれぞれグラム当たり１×１０１０コロニーを含み、前記トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）の凍結乾燥物はグラム当たり７７ミリグラム（ｍｇ）のドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）を含む。
【発明の効果】
【００１１】
本発明による魚類用飼料添加剤は新規の微生物であるトラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）及びバチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）とバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の混合物を含むもので、抗菌及び抗真菌作用を現して、細菌及び真菌による魚類の集団死を防止する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】新規の海洋微細藻類トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１の系統図である。
【図２】新規の微生物バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２の１６Ｓ−ｒＲＮＡの塩基配列を同属の菌株３種（ＡＹ９４７３、ＤＱ５９７１４６及びＢＳ）の塩基配列とともに示す。
【図３】新規の微生物バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２の系統図である。
【図４】トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１の成長速度を示す。
【図５】バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２の成長速度を示す。
【図６】バチルスリケニホルミスの成長速度を示す。
【図７】はトラウストキトリウム属ＫＪＳ−１の温度及び塩濃度による培養特性を示すグラフである。
【００１３】
本発明者らは大韓民国の南海岸地域で不飽和脂肪酸を作る新規の微生物を発見し、その中で不飽和脂肪酸を高収率で生産する微生物を選択し、遺伝子分析による菌株分類を行い、１８ＳｒＲＮＡ分析によって真核生物である微細藻類トラウストキトリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）属であることを証明した。一方、前記新規の微細藻類をトラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１、以下‘Ｔ−１’という）と名付けられた。この新規の微生物は２００５年８月１０日付けで韓国微生物培養センターに寄託された（寄託番号ＫＣＣＭ１０６６７Ｐ）。
【００１４】
微細藻類Ｔ−１が生産するＤＨＡの細胞内含有量を分析するための抽出方法及び分析結果は次のようである。まず、固形検体を１０５℃で３時間乾燥した後、固体試料１ｇに抽出溶媒１０ｍｌを加えて抽出物を得る。この際、抽出溶媒としては、クロロホルムとメタノールを２：１の比で混合したものを使用する。抽出物を得た後、これを減圧濃縮し、３．４％塩酸−メタノール試液５ｍｌで処理してエステル化する。また、ヘキサン２０ｍｌでエステル化物質を抽出して減圧乾燥させた後、乾燥物をエチルアルコール２ｍｌにとかして検液として使用して気体クロマトグラフィー（ＧＣ）分析を行った結果、微細藻類Ｔ−１が生産するＤＨＡの細胞内含有量は、乾燥重量の平均７．７％をであった。このときの培養条件は、温度２５℃、培養時間７２時間、酸度（ｐＨ）６〜６．５、撹拌速度４５ｒｐｍであり、培養培地は、海水１リットルに酵母抽出物１ｇ、ポリペプトン０．５ｇ、グルコース５０ｇであった。クリスタルバイオレット染色で真核生物の特徴である明らかな核を観察することができた。微細藻類であるＴ−１は藻類の特性を表し、栄養状態によって大きさ及び形状が変わるため、細菌類との区別が難しい。しかし、染色法による顕微鏡観察で細菌と明らかに区分することできる。一方、培養して凍結乾燥したＴ−１はアンチョビのにおいがして魚類に対する誘引作用に寄与すると判断される。
【００１５】
バチルスファーメンティクス（以下’ＢＰ−１’という）の３７℃液体発酵による菌株自体を利用した動物用飼料添加剤は本発明者などが特許登録（特許第１０−４５８４８７号）を受けた。前記発明で使用しものは、遺産菌を発酵して胞子形態で動物に投与したものである。
【００１６】
一方、本発明者は、バチルスファーメンティクスルを新たに検索して、抗菌作用に優れるだけでなく、残り２種の微生物と共生作用をするバチルスファーメンティクスを見つけ、その特性を把握した後、この菌株をバチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２、以下‘ＢＰ−２’という）と名付け、２００６年８月１６日付けで韓国微生物培養センターに寄託した（寄託番号ＫＣＣＭ１０７６９Ｐ）。既存のバチルスファーメンティクス（ＢＰ−１）と新規のバチルスポリファーメンティクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２、以下‘ＢＰ−２’という）を観察した結果、コロニーの形状に違いあった。ＢＰ−１はコロニー（ｃｏｌｏｎｙ）が広がる特徴を持ち、淡黄色を表す一方、ＢＰ−２はコロニーの明らかな円形を有し、色はＢＰ−１に比べてちょっと濃いことを特徴とする。ＢＰ−２は３６．９分の世代時間を有するが、これはＢＰ−１の世代時間４７分に比べて成長速度が速かった。バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、以下‘ＢＬ’という）は３２分の世代時間を有し、ＢＰ−２に比べて成長速度がちょっと速かった（図５及び図６参照）。ＢＰ−２はＢＰ−１に似ている抗菌性スペクトルを有する。しかし、ＢＰ−１はラクトコッカス症原因菌（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｒｖｉｅａｅ）に対する抗菌性がないが、ＢＰ−２は抗菌性を表してＢＰ−１とは異なる。
【００１７】
ＢＬは本発明による前記２種の新規菌株と共生作用をし、特にＢＰ−２によって抑制できなかった海洋由来の病原性菌に対する抗菌性を表した。したがって、ＢＬ菌株とＢＰ−２菌株の混合使用すると、協同作用によって抗菌範囲を広げて商業的価値が高いと考えられる。ＢＬは味噌から由来したものを使用する例が多く、プロテアーゼを生産するための菌株として多く使用される。韓国では、アジュ薬品から“ゾングザングセン”という商標で、整腸剤として市販されている。また、韓国内での多くの研究によれば、ＢＬを利用した味噌は血圧降下作用がある。
【００１８】
ＢＰ−２とＢＬは既存の一般的な培養法によって培養することができる。すなわち、グルコース３％、水溶性澱粉１％、ペプトン３％、及びミネラルＭ９を培地として使用した。ミネラルＭ９は、硫酸鉄０．００２％、硫酸亜鉛０．００２％、硫酸銅０．００１％、硫酸マンガン０．００２％、硫酸マグネシウム０．０３％、硫酸アンモニウム０．２％、塩化カルシウム０．１％、リン酸２カリウム３％、及びリン酸１カリウム３％でなる。培養温度は、ＢＰ−２とＢＬの対し、３７℃、撹拌速度２００ｒｐｍで６５時間培養して菌株を得た後、凍結乾燥した。ここで、凍結乾燥は安定した保管のために行った。
【００１９】
本発明において、共生作用とともに抗菌力の範囲を広げるＢＰ−２とＢＬを選択し、ＤＨＡを多量含む海洋由来の微細藻類Ｔ−１を混合して魚類用飼料添加剤に使用される。
【００２０】
以下、本発明の構成を本発明を限定しなくて例示するための目的で提示する以降の実施例によってより明らかに理解可能であろう。
【００２１】
以下の実施例において、各菌株の特徴とＢＰ−２及びＢＬの共生作用及び抗菌性の試験資料を提供する。臨床試験は韓国慶南統営に位置するセボ水産で実施した。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
［実施例１］
発酵法によって生産されたＴ−１に対する培養及び研究結果である。この際、培養条件は、培養時間７２時間、酸度（ｐＨ）６−６．５、撹拌速度４５ｒｐｍであり、培養培地は、海水１リットルに酵母抽出物１ｇ、ポリペプトン０．５ｇ、グルコース５０ｇを使用した。温度別最適条件を決定するために培養温度を変化させた。２５℃で培養するとき、Ｔ−１の凍結乾燥物がリットル当り８ｇであることから最高値を表した。また、Ｔ−１は海洋来由の菌株であるので、塩濃度別最適培養濃度を正確に決定する必要がある。海水の塩濃度である３％（海水濃度１００）を基準として濃度を変化させながら培養するとき、１．５％塩濃度（海水濃度５０）以上から６％塩濃度（海水濃度２００）まで同一水準の培養物が収去され、１リットル当たり約８ｇの凍結乾燥物を得ることができた。凍結乾燥物は薄黄色を帯びて特異的なにおいがし、アンチョビのにおいと類似のにおいがした。ＤＨＡの含量を求めるために、凍結乾燥物を有機溶媒で１次抽出した後、メタノールでエステル化した後、この物質をヘキサンにとかして抽出した後、減圧乾燥し、乾燥物をエチルアルコールにとかして検液として使用した。分析は気体クロマトグラフィー（ＧＣ法）で行った。この検液のＤＨＡ含量は、Ｔ−１の凍結乾燥物は平均７．７％のＤＨＡを含むことが発見された。
【００２３】
［実施例２］
ＢＰ−２とＢＬを一般的な培養法で培養した。すなわち、グルコース３％、水溶性澱粉１％、ペプトン３％、及びミネラルＭ９を培地として使用した。ミネラルＭ９は、硫酸鉄０．００２％、硫酸亜鉛０．００２％、硫酸銅０．００１％、硫酸マンガン０．００２％、硫酸マグネシウム０．０３％、硫酸アンモニウム０．２％、塩化カルシウム０．１％、リン酸２カリウム３％、及びリン酸１カリウム３％でなる。培養温度３７℃、撹拌速度２００ｒｐｍで６５時間培養して２種の菌株を得た後、凍結乾燥した。このときに収得された凍結乾燥物の量は２．２−２．３１ｇであった。
【００２４】
［実施例３］
新規の微生物ＢＰ−２とＢＬの抗菌作用を分析した。Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ ｓｏｙ Ａｇａｒ（ＴＳＡ）に、Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ ｓｏｙ Ｂｒｏｔｈ液体培地で前培養したＢＰ−２とＢＬをそれぞれ接種用ループ（ｌｏｏｐ）で一線を描いた後、１６時間培養し、その培養培地上に１６時間培養したそれぞれの海洋由来の有害菌５００ｕｌを含むＴＳＡ１０ｍｌ培地を注ぎ、室温で固めた後、さらに一晩培養して抗菌性有無を調査した。抗菌性がある場合、ＢＰ−２及びＢＬが分泌する代謝産物が有害菌に拡散して成長を阻害する結果を肉眼で観察することができた。抗菌性実験の結果の具体的な特徴は次のようである。Ｆｌａｘｉｂａｃｔｅｒ ｔｒａｃｔｕｏｓｕｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｒｖｉｅａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ ｏｒｄａｌｉｉ、及びＶｉｂｒｉｏ ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓに対し、ＢＰ−２及びＢＬはいずれも抗菌性を表し、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｉａｅに対しては、ＢＰ−２がちょっと弱抗菌性を表し、ＢＬは依然として強抗菌性を表した。特に、Ｖｉｂｒｉｏｈａｒｖｅｙｉに対しては、ＢＰ−２は抗菌性を表したが、ＢＬは抗菌性を表さなかった。一方、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐａｒａｕｂｅｒｉｓの場合は、ＢＰ−２は抗菌性を表すことができなかったが、ＢＬは抗菌性を表して、相互に補完作用した。また、複合作用を確認するために、ＢＰ−２とＢＬを同一割合で混合し、これを前記と同様な方法で実験した場合にも、実験を実施したすべての海洋由来の有害菌に抗菌性があることが確認された。
【００２５】
［実施例４］
現場試験（ｆｉｅｌｄ）及び誘引作用に対する試験内容は次のようである。Ｔ−１、ＢＰ−２及びＢＬそれぞれの発酵凍結乾燥物をＴ−１０．７５ｇ、ＢＰ−２０．１５ｇ及びＢＬ０．３９ｇの割合（５:１:２．６の重量比）で混合し、この混合物１．２９ｇを稚魚用飼料７２ｇに混合した（飼料全重量の約１．８％にあたる飼料添加剤を混合）。これを１日３回で６日間にかけて均等に分けて稚魚２００匹に給餌した。このときに使用した発酵凍結乾燥物のＢＰ−２とＢＬの菌数はｇ当たりおよそ１×１０１０コロニーを含む。また、Ｔ−１の場合には、ｇ当たりおよそ７７ｍｇのＤＨＡを含むと考えられる（実施例１参照）。実験の結果、網仕切り養殖場で病気にかかった群からクロダイ２００匹を種魚場（ＦＲＰ水槽）に移して試したとき、給餌３回の後、１日間集団死した稚魚の数は８匹、給餌２日目は５匹、給餌３日目には２匹であったが、その後には稚魚の集団死が発生しなかった。試験を拡大するため、およそ２万匹を２９トン規模の種魚場に移し、前述したような給餌量及び給餌回数で給餌した場合にも同じ結果が得られ、給餌３日後からは魚の集団死は観察されなかった。また、ＢＰ−２とＢＬを投与したときは見えなかった誘引性（ａｔｔｒａｃｔｉｖｅ ａｃｔｉｏｎ）が現れた。これはアンチョビのにおいがするＴ−１による効果であると判断される。
【００２６】
［実施例５］
抗真菌試験を例示した。赤いかびが発生したモンガラカワハギの孵化場で、既存の市場で販売される製品と比較して抗真菌試験を行った。比較製品は、フランスのＩＮＶＥＡ ｑｕａｔｉｃｕｓ Ｈｅａｌｔｈ社製の製品名“Ｐｒｏ−Ｗ”であった。比較製品は、製品に表記された使用方法にしたがって試験し、使用量は２００ＰＰＭであった。比較製品を使用した結果、３日後に赤いかびが観察されなかった。本発明の試料は実施例２のような方法で投与し、添加剤を１．５日間供給した後、赤いかびが観察されなかった。前記のような実験結果は真菌の一種である麹菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）に対する抗菌性試験の結果（実施例３参照）とともに本発明による飼料添加剤及び飼料が抗真菌能力を持っていることを示す。
【産業上の利用可能性】
【００２７】
以上説明したように、本発明は、新規の微生物であるトラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）及びバチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）、並びにバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の混合物含む養殖魚類用飼料添加剤は魚類に必須栄養分を提供するとともに抗菌性及び抗真菌性を表すので、水産業に広く適用可能である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規の微生物であるトラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）及びバチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）、並びに前記新規の微生物とバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）を含む魚類用飼料添加剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
現在まで魚類用飼料添加剤は抗菌作用を目的で使用した場合があり、浄化の目的で微生物自体を使用した例もある。また、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ；Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）を供給する目的でＤＨＡを投与したプランクトンと、アルテミア（Ａｒｔｅｍｉａ）またはワムシ（Ｒｏｔｉｆｅｒ）を生育させて魚類、特に稚魚に供給した事例も知られている。ＤＨＡは魚類の必須営養分であって、不足の際、成長阻害と免疫欠乏などによって養殖魚類の品質が落ちる問題を発生させると知られている。ＤＨＡは、まぐろの目またはイカの皮から抽出して使用するか、抽出されたＤＨＡを加工して使用した。
【０００３】
大韓民国特許第１０−３３８１９３号によると、ＤＨＡを新規の微生物であるシゾキトリウム属Ｓπ−２（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ ｓｐ． Ｓπ−２）を利用して供給する技術が開示されている。前記シゾキトリウムは真核生物の一種であって、ワムシ（Ｒｏｔｉｆｅｒ）のえさとして供給して、ワムシを生育させた後、養殖魚類用ＤＨＡを供給するのに用いられる。アメリカ特許６、５６６、１２３号によれば、低塩度での微生物培養とその微生物を利用した不飽和脂肪酸の生産及び抽出に対する方法が開示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明はＤＨＡを含む新規の微生物トラウストキトリウムＫＪＳ−１及び抗菌性に優れた新規の微生物バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２を提供することにその目的がある。
【０００５】
本発明の他の目的は、魚類の必須営養分であるドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を供給し、抗菌及び抗真菌作用を表して、細菌及び真菌による魚類の集団死を防止する魚類用飼料添加剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の一面によれば、韓国微生物培養センター（ＫＣＣＭ）に寄託番号ＫＣＣＭ１０６６７Ｐで寄託され、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）を生産することを特徴とする、新規の微生物トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）が提供される。
【０００７】
本発明の他の面によれば、韓国微生物培養センター（ＫＣＣＭ）に寄託番号ＫＣＣＭ１０７６９Ｐで寄託され、抗菌性及び抗真菌性を有することを特徴とする、新規の微生物バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）が提供される。
【０００８】
本発明のさらに他の面によれば、トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）、バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）及びバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の凍結乾燥物が所定の重量比で混合された混合物を含むことを特徴とする、魚類用飼料添加剤が提供される。
【０００９】
本発明の好適な一変形例によれば、前記混合物は、トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）、バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）及びバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の凍結乾燥物が５：１：２．６の重量比でなる。
【００１０】
本発明の好適な他の変形例によれば、前記バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２菌株（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）及びバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の凍結乾燥物はそれぞれグラム当たり１×１０１０コロニーを含み、前記トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）の凍結乾燥物はグラム当たり７７ミリグラム（ｍｇ）のドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）を含む。
【発明の効果】
【００１１】
本発明による魚類用飼料添加剤は新規の微生物であるトラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）及びバチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）とバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の混合物を含むもので、抗菌及び抗真菌作用を現して、細菌及び真菌による魚類の集団死を防止する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】新規の海洋微細藻類トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１の系統図である。
【図２】新規の微生物バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２の１６Ｓ−ｒＲＮＡの塩基配列を同属の菌株３種（ＡＹ９４７３、ＤＱ５９７１４６及びＢＳ）の塩基配列とともに示す。
【図３】新規の微生物バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２の系統図である。
【図４】トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１の成長速度を示す。
【図５】バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２の成長速度を示す。
【図６】バチルスリケニホルミスの成長速度を示す。
【図７】はトラウストキトリウム属ＫＪＳ−１の温度及び塩濃度による培養特性を示すグラフである。
【００１３】
本発明者らは大韓民国の南海岸地域で不飽和脂肪酸を作る新規の微生物を発見し、その中で不飽和脂肪酸を高収率で生産する微生物を選択し、遺伝子分析による菌株分類を行い、１８ＳｒＲＮＡ分析によって真核生物である微細藻類トラウストキトリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）属であることを証明した。一方、前記新規の微細藻類をトラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１、以下‘Ｔ−１’という）と名付けられた。この新規の微生物は２００５年８月１０日付けで韓国微生物培養センターに寄託された（寄託番号ＫＣＣＭ１０６６７Ｐ）。
【００１４】
微細藻類Ｔ−１が生産するＤＨＡの細胞内含有量を分析するための抽出方法及び分析結果は次のようである。まず、固形検体を１０５℃で３時間乾燥した後、固体試料１ｇに抽出溶媒１０ｍｌを加えて抽出物を得る。この際、抽出溶媒としては、クロロホルムとメタノールを２：１の比で混合したものを使用する。抽出物を得た後、これを減圧濃縮し、３．４％塩酸−メタノール試液５ｍｌで処理してエステル化する。また、ヘキサン２０ｍｌでエステル化物質を抽出して減圧乾燥させた後、乾燥物をエチルアルコール２ｍｌにとかして検液として使用して気体クロマトグラフィー（ＧＣ）分析を行った結果、微細藻類Ｔ−１が生産するＤＨＡの細胞内含有量は、乾燥重量の平均７．７％をであった。このときの培養条件は、温度２５℃、培養時間７２時間、酸度（ｐＨ）６〜６．５、撹拌速度４５ｒｐｍであり、培養培地は、海水１リットルに酵母抽出物１ｇ、ポリペプトン０．５ｇ、グルコース５０ｇであった。クリスタルバイオレット染色で真核生物の特徴である明らかな核を観察することができた。微細藻類であるＴ−１は藻類の特性を表し、栄養状態によって大きさ及び形状が変わるため、細菌類との区別が難しい。しかし、染色法による顕微鏡観察で細菌と明らかに区分することできる。一方、培養して凍結乾燥したＴ−１はアンチョビのにおいがして魚類に対する誘引作用に寄与すると判断される。
【００１５】
バチルスファーメンティクス（以下’ＢＰ−１’という）の３７℃液体発酵による菌株自体を利用した動物用飼料添加剤は本発明者などが特許登録（特許第１０−４５８４８７号）を受けた。前記発明で使用しものは、遺産菌を発酵して胞子形態で動物に投与したものである。
【００１６】
一方、本発明者は、バチルスファーメンティクスルを新たに検索して、抗菌作用に優れるだけでなく、残り２種の微生物と共生作用をするバチルスファーメンティクスを見つけ、その特性を把握した後、この菌株をバチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２、以下‘ＢＰ−２’という）と名付け、２００６年８月１６日付けで韓国微生物培養センターに寄託した（寄託番号ＫＣＣＭ１０７６９Ｐ）。既存のバチルスファーメンティクス（ＢＰ−１）と新規のバチルスポリファーメンティクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２、以下‘ＢＰ−２’という）を観察した結果、コロニーの形状に違いあった。ＢＰ−１はコロニー（ｃｏｌｏｎｙ）が広がる特徴を持ち、淡黄色を表す一方、ＢＰ−２はコロニーの明らかな円形を有し、色はＢＰ−１に比べてちょっと濃いことを特徴とする。ＢＰ−２は３６．９分の世代時間を有するが、これはＢＰ−１の世代時間４７分に比べて成長速度が速かった。バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、以下‘ＢＬ’という）は３２分の世代時間を有し、ＢＰ−２に比べて成長速度がちょっと速かった（図５及び図６参照）。ＢＰ−２はＢＰ−１に似ている抗菌性スペクトルを有する。しかし、ＢＰ−１はラクトコッカス症原因菌（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｒｖｉｅａｅ）に対する抗菌性がないが、ＢＰ−２は抗菌性を表してＢＰ−１とは異なる。
【００１７】
ＢＬは本発明による前記２種の新規菌株と共生作用をし、特にＢＰ−２によって抑制できなかった海洋由来の病原性菌に対する抗菌性を表した。したがって、ＢＬ菌株とＢＰ−２菌株の混合使用すると、協同作用によって抗菌範囲を広げて商業的価値が高いと考えられる。ＢＬは味噌から由来したものを使用する例が多く、プロテアーゼを生産するための菌株として多く使用される。韓国では、アジュ薬品から“ゾングザングセン”という商標で、整腸剤として市販されている。また、韓国内での多くの研究によれば、ＢＬを利用した味噌は血圧降下作用がある。
【００１８】
ＢＰ−２とＢＬは既存の一般的な培養法によって培養することができる。すなわち、グルコース３％、水溶性澱粉１％、ペプトン３％、及びミネラルＭ９を培地として使用した。ミネラルＭ９は、硫酸鉄０．００２％、硫酸亜鉛０．００２％、硫酸銅０．００１％、硫酸マンガン０．００２％、硫酸マグネシウム０．０３％、硫酸アンモニウム０．２％、塩化カルシウム０．１％、リン酸２カリウム３％、及びリン酸１カリウム３％でなる。培養温度は、ＢＰ−２とＢＬの対し、３７℃、撹拌速度２００ｒｐｍで６５時間培養して菌株を得た後、凍結乾燥した。ここで、凍結乾燥は安定した保管のために行った。
【００１９】
本発明において、共生作用とともに抗菌力の範囲を広げるＢＰ−２とＢＬを選択し、ＤＨＡを多量含む海洋由来の微細藻類Ｔ−１を混合して魚類用飼料添加剤に使用される。
【００２０】
以下、本発明の構成を本発明を限定しなくて例示するための目的で提示する以降の実施例によってより明らかに理解可能であろう。
【００２１】
以下の実施例において、各菌株の特徴とＢＰ−２及びＢＬの共生作用及び抗菌性の試験資料を提供する。臨床試験は韓国慶南統営に位置するセボ水産で実施した。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
［実施例１］
発酵法によって生産されたＴ−１に対する培養及び研究結果である。この際、培養条件は、培養時間７２時間、酸度（ｐＨ）６−６．５、撹拌速度４５ｒｐｍであり、培養培地は、海水１リットルに酵母抽出物１ｇ、ポリペプトン０．５ｇ、グルコース５０ｇを使用した。温度別最適条件を決定するために培養温度を変化させた。２５℃で培養するとき、Ｔ−１の凍結乾燥物がリットル当り８ｇであることから最高値を表した。また、Ｔ−１は海洋来由の菌株であるので、塩濃度別最適培養濃度を正確に決定する必要がある。海水の塩濃度である３％（海水濃度１００）を基準として濃度を変化させながら培養するとき、１．５％塩濃度（海水濃度５０）以上から６％塩濃度（海水濃度２００）まで同一水準の培養物が収去され、１リットル当たり約８ｇの凍結乾燥物を得ることができた。凍結乾燥物は薄黄色を帯びて特異的なにおいがし、アンチョビのにおいと類似のにおいがした。ＤＨＡの含量を求めるために、凍結乾燥物を有機溶媒で１次抽出した後、メタノールでエステル化した後、この物質をヘキサンにとかして抽出した後、減圧乾燥し、乾燥物をエチルアルコールにとかして検液として使用した。分析は気体クロマトグラフィー（ＧＣ法）で行った。この検液のＤＨＡ含量は、Ｔ−１の凍結乾燥物は平均７．７％のＤＨＡを含むことが発見された。
【００２３】
［実施例２］
ＢＰ−２とＢＬを一般的な培養法で培養した。すなわち、グルコース３％、水溶性澱粉１％、ペプトン３％、及びミネラルＭ９を培地として使用した。ミネラルＭ９は、硫酸鉄０．００２％、硫酸亜鉛０．００２％、硫酸銅０．００１％、硫酸マンガン０．００２％、硫酸マグネシウム０．０３％、硫酸アンモニウム０．２％、塩化カルシウム０．１％、リン酸２カリウム３％、及びリン酸１カリウム３％でなる。培養温度３７℃、撹拌速度２００ｒｐｍで６５時間培養して２種の菌株を得た後、凍結乾燥した。このときに収得された凍結乾燥物の量は２．２−２．３１ｇであった。
【００２４】
［実施例３］
新規の微生物ＢＰ−２とＢＬの抗菌作用を分析した。Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ ｓｏｙ Ａｇａｒ（ＴＳＡ）に、Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ ｓｏｙ Ｂｒｏｔｈ液体培地で前培養したＢＰ−２とＢＬをそれぞれ接種用ループ（ｌｏｏｐ）で一線を描いた後、１６時間培養し、その培養培地上に１６時間培養したそれぞれの海洋由来の有害菌５００ｕｌを含むＴＳＡ１０ｍｌ培地を注ぎ、室温で固めた後、さらに一晩培養して抗菌性有無を調査した。抗菌性がある場合、ＢＰ−２及びＢＬが分泌する代謝産物が有害菌に拡散して成長を阻害する結果を肉眼で観察することができた。抗菌性実験の結果の具体的な特徴は次のようである。Ｆｌａｘｉｂａｃｔｅｒ ｔｒａｃｔｕｏｓｕｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｒｖｉｅａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ ｏｒｄａｌｉｉ、及びＶｉｂｒｉｏ ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓに対し、ＢＰ−２及びＢＬはいずれも抗菌性を表し、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｉａｅに対しては、ＢＰ−２がちょっと弱抗菌性を表し、ＢＬは依然として強抗菌性を表した。特に、Ｖｉｂｒｉｏｈａｒｖｅｙｉに対しては、ＢＰ−２は抗菌性を表したが、ＢＬは抗菌性を表さなかった。一方、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐａｒａｕｂｅｒｉｓの場合は、ＢＰ−２は抗菌性を表すことができなかったが、ＢＬは抗菌性を表して、相互に補完作用した。また、複合作用を確認するために、ＢＰ−２とＢＬを同一割合で混合し、これを前記と同様な方法で実験した場合にも、実験を実施したすべての海洋由来の有害菌に抗菌性があることが確認された。
【００２５】
［実施例４］
現場試験（ｆｉｅｌｄ）及び誘引作用に対する試験内容は次のようである。Ｔ−１、ＢＰ−２及びＢＬそれぞれの発酵凍結乾燥物をＴ−１０．７５ｇ、ＢＰ−２０．１５ｇ及びＢＬ０．３９ｇの割合（５:１:２．６の重量比）で混合し、この混合物１．２９ｇを稚魚用飼料７２ｇに混合した（飼料全重量の約１．８％にあたる飼料添加剤を混合）。これを１日３回で６日間にかけて均等に分けて稚魚２００匹に給餌した。このときに使用した発酵凍結乾燥物のＢＰ−２とＢＬの菌数はｇ当たりおよそ１×１０１０コロニーを含む。また、Ｔ−１の場合には、ｇ当たりおよそ７７ｍｇのＤＨＡを含むと考えられる（実施例１参照）。実験の結果、網仕切り養殖場で病気にかかった群からクロダイ２００匹を種魚場（ＦＲＰ水槽）に移して試したとき、給餌３回の後、１日間集団死した稚魚の数は８匹、給餌２日目は５匹、給餌３日目には２匹であったが、その後には稚魚の集団死が発生しなかった。試験を拡大するため、およそ２万匹を２９トン規模の種魚場に移し、前述したような給餌量及び給餌回数で給餌した場合にも同じ結果が得られ、給餌３日後からは魚の集団死は観察されなかった。また、ＢＰ−２とＢＬを投与したときは見えなかった誘引性（ａｔｔｒａｃｔｉｖｅ ａｃｔｉｏｎ）が現れた。これはアンチョビのにおいがするＴ−１による効果であると判断される。
【００２６】
［実施例５］
抗真菌試験を例示した。赤いかびが発生したモンガラカワハギの孵化場で、既存の市場で販売される製品と比較して抗真菌試験を行った。比較製品は、フランスのＩＮＶＥＡ ｑｕａｔｉｃｕｓ Ｈｅａｌｔｈ社製の製品名“Ｐｒｏ−Ｗ”であった。比較製品は、製品に表記された使用方法にしたがって試験し、使用量は２００ＰＰＭであった。比較製品を使用した結果、３日後に赤いかびが観察されなかった。本発明の試料は実施例２のような方法で投与し、添加剤を１．５日間供給した後、赤いかびが観察されなかった。前記のような実験結果は真菌の一種である麹菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）に対する抗菌性試験の結果（実施例３参照）とともに本発明による飼料添加剤及び飼料が抗真菌能力を持っていることを示す。
【産業上の利用可能性】
【００２７】
以上説明したように、本発明は、新規の微生物であるトラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）及びバチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）、並びにバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の混合物含む養殖魚類用飼料添加剤は魚類に必須栄養分を提供するとともに抗菌性及び抗真菌性を表すので、水産業に広く適用可能である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
韓国微生物培養センター（ＫＣＣＭ）に寄託番号ＫＣＣＭ１０６６７Ｐで寄託され、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）を生産することを特徴とする、新規の微生物トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）。
【請求項２】
韓国微生物培養センター（ＫＣＣＭ）に寄託番号ＫＣＣＭ１０７６９Ｐで寄託され、抗菌性及び抗真菌性を有することを特徴とする、新規の微生物バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）。
【請求項３】
トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）、バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）及びバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の凍結乾燥物が所定の重量比で混合された混合物を含むことを特徴とする、魚類用飼料添加剤。
【請求項４】
前記混合物は、トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）、バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）及びバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の凍結乾燥物が５：１：２．６の重量比でなることを特徴とする、請求項３に記載の魚類用飼料添加剤。
【請求項５】
前記バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２菌株（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）及びバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の凍結乾燥物はそれぞれグラム当たり１×１０１０コロニーを含み、前記トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）の凍結乾燥物はグラム当たり７７ミリグラム（ｍｇ）のドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）を含むことを特徴とする、請求項３に記載の魚類用飼料組成物。
【請求項１】
韓国微生物培養センター（ＫＣＣＭ）に寄託番号ＫＣＣＭ１０６６７Ｐで寄託され、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）を生産することを特徴とする、新規の微生物トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）。
【請求項２】
韓国微生物培養センター（ＫＣＣＭ）に寄託番号ＫＣＣＭ１０７６９Ｐで寄託され、抗菌性及び抗真菌性を有することを特徴とする、新規の微生物バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）。
【請求項３】
トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）、バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）及びバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の凍結乾燥物が所定の重量比で混合された混合物を含むことを特徴とする、魚類用飼料添加剤。
【請求項４】
前記混合物は、トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）、バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）及びバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の凍結乾燥物が５：１：２．６の重量比でなることを特徴とする、請求項３に記載の魚類用飼料添加剤。
【請求項５】
前記バチルスファーメンティクスＫＪＳ−２菌株（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ ＫＪＳ−２）及びバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の凍結乾燥物はそれぞれグラム当たり１×１０１０コロニーを含み、前記トラウストキトリウム属ＫＪＳ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｓｐ． ＫＪＳ−１）の凍結乾燥物はグラム当たり７７ミリグラム（ｍｇ）のドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）を含むことを特徴とする、請求項３に記載の魚類用飼料組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【公表番号】特表２０１０−５０５３９２（Ｐ２０１０−５０５３９２Ａ）
【公表日】平成２２年２月２５日（２０１０．２．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３０２３９（Ｐ２００９−５３０２３９）
【出願日】平成１８年１２月８日（２００６．１２．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００６／００５３３９
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０４１７８６
【国際公開日】平成２０年４月１０日（２００８．４．１０）
【出願人】（５０９０８６６０４）インゼ ユニバーシティー インダストリ−アカデミック コーポレイション ファンデーション (1)
【出願人】（３０９０２９６７０）ユー ヤング ファーム．カンパニー．リミテッド． (1)
【出願人】（５０９０８６５８９）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年２月２５日（２０１０．２．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１２月８日（２００６．１２．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００６／００５３３９
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０４１７８６
【国際公開日】平成２０年４月１０日（２００８．４．１０）
【出願人】（５０９０８６６０４）インゼ ユニバーシティー インダストリ−アカデミック コーポレイション ファンデーション (1)
【出願人】（３０９０２９６７０）ユー ヤング ファーム．カンパニー．リミテッド． (1)
【出願人】（５０９０８６５８９）
【Ｆターム（参考）】
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