燃料電池、燃料電池の製造方法、電子機器、酵素固定化電極、バイオセンサー、バイオリアクター、エネルギー変換素子および酵素反応利用装置
【課題】一種または複数種の酵素および補酵素を微小な空間に閉じ込め、この空間を反応場として酵素反応を行うことにより燃料から効率的に電子を取り出して電気エネルギーを発生させることができ、これらの酵素および補酵素の電極への固定化も容易に行うことができる燃料電池およびその製造方法を提供する。
【解決手段】酵素反応に必要な酵素および補酵素をリポソーム12に封入し、このリポソーム12を多孔質カーボンなどからなる電極11の表面に固定化して酵素固定化電極を形成する。リポソーム12には必要に応じてトランスポーターを組み込む。電極11の表面には電子メディエーターも固定化する。この酵素固定化電極を例えばバイオ燃料電池の負極として用いる。
【解決手段】酵素反応に必要な酵素および補酵素をリポソーム12に封入し、このリポソーム12を多孔質カーボンなどからなる電極11の表面に固定化して酵素固定化電極を形成する。リポソーム12には必要に応じてトランスポーターを組み込む。電極11の表面には電子メディエーターも固定化する。この酵素固定化電極を例えばバイオ燃料電池の負極として用いる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
この発明は、燃料電池、燃料電池の製造方法、電子機器、酵素固定化電極、バイオセンサー、バイオリアクター、エネルギー変換素子および酵素反応利用装置に関し、例えば、酵素を用いたバイオ燃料電池、バイオセンサーおよびバイオリアクターならびにバイオ燃料電池を電源に用いた各種の電子機器に適用して好適なものである。
【背景技術】
【0002】
燃料電池は、正極(酸化剤極)と負極(燃料極)とが電解質(プロトン伝導体)を介して対向した構造を有する。従来の燃料電池では、負極に供給された燃料(水素)が酸化されて電子とプロトン(H+ )とに分離し、電子は負極に渡され、H+ は電解質を通って正極まで移動する。正極では、このH+ が、外部から供給された酸素および負極から外部回路を通って送られた電子と反応してH2 Oを生成する。
【0003】
このように、燃料電池は燃料の持つ化学エネルギーを直接電気エネルギーに変換する高効率な発電装置であり、天然ガス、石油、石炭などの化石エネルギーが持つ化学エネルギーを使用場所や使用時によらずに、しかも高い変換効率で電気エネルギーとして取り出すことができる。このため、従来から大規模発電用途などとしての燃料電池の開発研究が活発に行われている。例えば、スペースシャトルに燃料電池が搭載され、電力と同時に乗組員用の水を補給できることや、クリーンな発電装置であることを証明した実績がある。
【0004】
さらに、近年、固体高分子型燃料電池など、室温から90℃程度の比較的低温の作動温度域を示す燃料電池が開発され、注目を集めている。このため、大規模発電用途のみならず、自動車の駆動用電源、パーソナルコンピュータやモバイル機器などのポータブル電源などの小型システムへの応用が模索されつつある。
このように、燃料電池は大規模発電から小規模発電まで幅広い用途が考えられ、高効率な発電装置として多くの注目を集めている。しかしながら、燃料電池では、燃料として通常、天然ガス、石油、石炭などを改質器により水素ガスに変換して用いており、限りある資源を消費するとともに、高温に加熱する必要があったり、白金(Pt)などの高価な貴金属の触媒を必要としたりするなど、種々の問題点がある。また、水素ガスやメタノールを直接燃料として用いる場合でも、その取り扱いには注意を要する。
【0005】
そこで、生物内で行われている生体代謝が高効率なエネルギー変換機構であることに着目し、これを燃料電池に適用する提案がなされている。ここでいう生体代謝には、微生物体細胞内で行われる呼吸、光合成などが含まれる。生体代謝は、発電効率が極めて高く、また、室温程度の穏やかな条件で反応が進行するという特長を兼ね備えている。
例えば、呼吸は、糖類、脂肪、タンパク質などの栄養素を微生物または細胞内に取り込み、これらの化学エネルギーを、数々の酵素反応ステップを有する解糖系およびクエン酸(TCA)回路を介して二酸化炭素(CO2 )を生成する過程でニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD+ )を還元して還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)とすることで酸化還元エネルギー、すなわち電気エネルギーに変換し、さらに電子伝達系においてこれらのNADHの電気エネルギーをプロトン勾配の電気エネルギーに直接変換するとともに酸素を還元し、水を生成する機構である。ここで得られた電気エネルギーは、アデノシン三リン酸(ATP)合成酵素を介して、アデノシン二リン酸(ADP)からATPを生成し、このATPは微生物や細胞が生育するために必要な反応に利用される。このようなエネルギー変換は、細胞質ゾルおよびミトコンドリアで行われている。
【0006】
また、光合成は、光エネルギーを取り込み、電子伝達系を介してニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADP+ )を還元して還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADPH)とすることで電気エネルギーに変換する過程で、水を酸化し酸素を生成する機構である。この電気エネルギーは、CO2 を取り込み炭素固定化反応に利用され、炭水化物の合成に利用される。
上述したような生体代謝を燃料電池に利用する技術としては、微生物中で発生した電気エネルギーを電子メディエーターを介して微生物外に取り出し、この電子を電極に渡すことで電流を得る微生物電池が報告されている(例えば、特許文献1参照。)。
【0007】
しかしながら、微生物および細胞には化学エネルギーから電気エネルギーへの変換といった目的の反応以外にも不要な反応が多く存在するため、上述した方法では望まない反応に化学エネルギーが消費されて十分なエネルギー変換効率が発揮されない。
そこで、酵素を用いて所望の反応のみを行う燃料電池(バイオ燃料電池)が提案されている(例えば、特許文献2〜11参照。)。このバイオ燃料電池は、燃料を酵素により分解してプロトンと電子とに分離するもので、燃料としてメタノールやエタノールのようなアルコール類あるいはグルコースのような単糖類あるいはデンプンのような多糖類を用いたものが開発されている。
【0008】
このバイオ燃料電池においては、電極に対する酵素の固定化・配列が非常に重要であることが分かっている。また、電子を伝達する役目を果たす電子メディエーターが酵素とともに有効に存在する必要性もあることが分かっている。従来の酵素の固定化方法は様々なものがあるが、その中でも本発明者らは、プラスに電荷を帯びたポリマーとマイナスに電荷を帯びたポリマーとを酵素と適当な割合で混合して多孔質カーボンなどからなる電極上に塗布することにより、電極との接着性を保ちつつ固定化膜を安定化させるポリイオンコンプレックス法やグルタルアルデヒド法を主体に開発してきた。
【0009】
【特許文献1】特開2000−133297号公報
【特許文献2】特開2003−282124号公報
【特許文献3】特開2004−71559号公報
【特許文献4】特開2005−13210号公報
【特許文献5】特開2005−310613号公報
【特許文献6】特開2006−24555号公報
【特許文献7】特開2006−49215号公報
【特許文献8】特開2006−93090号公報
【特許文献9】特開2006−127957号公報
【特許文献10】特開2006−156354号公報
【特許文献11】特開2007−12281号公報
【非特許文献1】秋吉一成、辻井薫監修、リポソーム応用の新展開「人口細胞の開発に向けて」、株式会社エヌ・ティー・エス、2005年6月1日発行
【非特許文献2】Biotechnology and Bioengineering,Vol.81,No.6,pp.695-704(2003)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【0010】
しかしながら、上述のポリイオンコンプレックスを用いる固定化方法は、酵素の物理化学的性質、特に電荷に大きく依存しており、外部溶液の変化、使用中の環境変化などにより固定化の状態が絶えず変化することが懸念され、固定化した酵素などが溶出しやすい。また、一般的に酵素は熱に対する耐性が低いが、バイオ燃料電池の実用化に向けて酵素を改変してゆく際に、酵素そのものの物理化学的性質が変わり、その都度、固定化膜作製方法の最適化を図る必要があり、煩雑である。さらに、燃料からより多くの電子を取り出したいときには、より多くの酵素が必要となるが、これらの酵素を固定化する場合、その固定化条件の最適化に多大な労力を費やすことになる。
【0011】
そこで、この発明が解決しようとする課題は、一種または複数種の酵素および補酵素を微小な空間に閉じ込め、この空間を反応場として酵素反応を行うことにより燃料から効率的に電子を取り出して電気エネルギーを発生させることができ、これらの酵素および補酵素の電極への固定化も容易に行うことができる燃料電池およびその製造方法、この燃料電池を用いた高性能の電子機器、この燃料電池に適用して好適な酵素固定化電極ならびに高効率のバイオセンサー、バイオリアクター、エネルギー変換素子および電極反応利用装置を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0012】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、バイオ燃料電池において、酵素反応に必要な酵素および補酵素を人工細胞であるリポソームに封入した場合には、同量の酵素および補酵素をリポソームに封入しないで用いる場合に比べて、酵素反応をはるかに効率的に行って極めて高い触媒電流を得たり、電極への固定化を容易にしたりすることができることを見出し、実験でその有効性を確認し、さらにこの手法の適用が可能な範囲について様々な観点から検討を行い、この発明を案出するに至った。また、この手法は、バイオ燃料電池だけでなく、酵素および補酵素を用いる各種の素子または装置に適用して好適なものである。
【0013】
酵素反応に必要な酵素および補酵素をリポソームに封入することにより酵素反応をはるかに効率的に行うことができ、極めて高い触媒電流を得ることができるという本発明者らが独自に得た知見は、従来の定説を覆すものである。すなわち、従来は、リポソーム内に封入された酵素を生体触媒として捉えたとき、リポソームを構成する脂質二重層に対する基質の透過速度が制限されるため、反応速度は低いと考えられていた。例えば、非特許文献1の第454頁右欄の2行目から6行目には「リポソーム内封入酵素を生体触媒として使用する際、脂質膜の高い透過選択性のため、リポソーム外水相に添加された親水性あるいは高分子量の基質に対するリポソーム内封入酵素の反応性が過度に制限されることが問題となる」と記載されている。また、非特許文献2の第695頁右欄下から8行目から下から5行目には「一般に、リポソーム内に封入された酵素の外部から添加された基質に対する反応性はリポソームの二重層を横断する基質透過性に著しく依存する」と記載されている。
【0014】
すなわち、上記課題を解決するために、第1の発明は、
正極と負極とがプロトン伝導体を介して対向した構造を有し、酵素および補酵素を用いて燃料から電子を取り出すように構成され、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されている燃料電池である。
【0015】
第2の発明は、
正極と負極とがプロトン伝導体を介して対向した構造を有し、酵素および補酵素を用いて燃料から電子を取り出す燃料電池を製造する場合に、少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素をリポソームに封入する工程を有する燃料電池の製造方法である。
【0016】
第1および第2の発明において、リポソームは、リン脂質などからなる脂質二重層により形成された閉鎖小胞であり、内部が水相となっている。このリポソームには、一層の脂質二重層からなる単層リポソーム(SUV:小さな一枚膜リポソーム、GUV:巨大一枚膜リポソーム)だけでなく、小さなリポソーム(SUV)が大きいリポソーム(GUV)に取り込まれて入れ子になった多重層リポソーム(MUV)も含まれる。リポソームは、例えば、直径100nm程度のものから10μmに及ぶ大きなものまで作製することができ、直径は必要に応じて選ばれるが、具体例を挙げると2〜7μmである。リン脂質としては基本的にはどのようなものを用いてもよく、グリセロリン脂質、スフィンゴリン脂質のいずれを用いてもよい。グリセロリン脂質としては、ホスファチジン酸、ホスファチジルコリン(レシチン)、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール(カルジオリピン)などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。スフィンゴリン脂質としては、スフィンゴミエリンなどが挙げられるが、これに限定されるものではない。ホスファチジルコリンの代表例はジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)である。リポソームの形成およびリポソーム内部への酵素および補酵素の封入には従来公知の方法を用いることができる。
【0017】
このリポソームには、酵素反応に必要な酵素および補酵素のうち、少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素を封入するが、酵素反応に必要な全ての酵素および補酵素をリポソームに封入してもよいし、一部の酵素または補酵素をリポソームに封入せず、このリポソームを構成する脂質二重層に組み込んだり、固定化したり、リポソームの外部に存在させるようにしてもよい。酵素または補酵素をリポソームを構成する脂質二重層に固定化する場合には、例えばポリエチレングリコール鎖などのアンカーを用いることができる。
【0018】
使用する燃料が、リポソームを構成する脂質二重層を通過してリポソーム内部に取り込まれることが困難である場合には、この脂質二重層に燃料または燃料の分解生成物の輸送を行うトランスポーター(輸送タンパク質)を組み込むことができる。あるいは、脂質の種類、組成、粒子径などを適切に選択することによっても燃料の透過性を向上させることが可能である。
【0019】
このリポソームは、好適には負極に固定化されるが、必ずしも固定化する必要はなく、プロトン伝導体に緩衝液(緩衝物質)を含む電解質を用いるような場合にはその緩衝液に含ませるようにしてもよい。リポソームの固定には、例えば細胞の固定に用いられる従来公知の各種の固定化方法を用いることができる。また、この場合、負極に対するリポソームの固定を安定化するために、負極とリポソームとの間に中間層を形成してもよい。この中間層としては、タンパク質やDNAなどの生体高分子のみならず、親水、疎水の両方の性質を持つような高分子電解質や、ミセル、逆ミセル、ラメラなどの構造体を形成することができるものや、ナノメートル構造を持ち、一つまたは複数の性質を持つ化合物であって生体親和性の高い化合物を用いることができる。タンパク質としては、例えば、アルブミンを代表とした、アルコールデヒドロゲナーゼ、ラクテートデヒドロゲナーゼ、オボアルブミン、ミオキナーゼなどの酸性タンパク質のほか、等電点をアルカリ側に持つリゾチウム、チトクロームc、ミオグロビン、トリプシノーゲンなどを用いることができる。このようなタンパク質などからなる中間層を電極表面に物理的に吸着させ、この中間層にリポソームを固定化することにより、負極に対してリポソームを安定に固定化することが可能である。
【0020】
燃料(基質)としては、各種のものを用いることができ、必要に応じて選ばれるが、代表的なものを挙げると、メタノールやエタノールなどのアルコール、単糖類、多糖類などである。単糖類、多糖類などを燃料に用いる場合、典型的には、これらをリン酸緩衝液やトリス緩衝液などの従来公知の緩衝液に溶かした燃料溶液の形で用いる。
燃料としての基質と酵素との組み合わせの例を表1に示す。
【0021】
【表1】
【0022】
リポソームに封入する酵素は、典型的には、燃料の酸化を促進し分解する酸化酵素を含み、さらに、燃料の酸化に伴って還元された補酵素を酸化体に戻すとともに電子メディエーターを介して電子を負極に渡す補酵素酸化酵素を含む。
【0023】
電子メディエーターとしては基本的にはどのようなものを用いてもよいが、好適には、キノン骨格を有する化合物が用いられ、具体的には、例えば、2,3−ジメトキシ−5−メチル−1,4−ベンゾキノン(Q0)や、ナフトキノン骨格を有する化合物、例えば、2−アミノ−1,4−ナフトキノン(ANQ)、2−アミノ−3−メチル−1,4−ナフトキノン(AMNQ)、2−メチル−1,4−ナフトキノン(VK3)、2−アミノ−3−カルボキシ−1,4−ナフトキノン(ACNQ)、ビタミンK1などの各種のナフトキノン誘導体が用いられる。キノン骨格を有する化合物としては、例えば、アントラキノンやその誘導体を用いることもできる。電子メディエーターには、必要に応じて、キノン骨格を有する化合物以外に、電子メディエーターとして働く一種または二種以上の他の化合物を含ませてもよい。この電子メディエーターは、酵素および補酵素が封入されたリポソームとともに負極に固定化してもよいし、このリポソームの内部に封入してもよいし、このリポソームに固定してもよいし、燃料溶液に含ませるようにしてもよい。
【0024】
例えば、燃料としてアルコールを用いる場合には、リポソームに封入する酵素は、アルコールの酸化を促進し分解する酸化酵素と、この酸化酵素によって還元される補酵素を酸化体に戻す補酵素酸化酵素とを含む。この補酵素酸化酵素の作用により、補酵素が酸化体に戻るときに電子が生成され、補酵素酸化酵素から電子メディエーターを介して負極に電子が渡される。酸化酵素としては例えばアルコールデヒドロゲナーゼ(ADH)(特に、NAD依存型アルコールデヒドロゲナーゼ)が、補酵素としては例えばニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD+ )またはニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADP+ )が、補酵素酸化酵素としては例えばジアホラーゼ(DI)が用いられる。
【0025】
また、燃料としてグルコースのような単糖類を用いる場合には、好適には、リポソームに封入する酵素は、単糖類の酸化を促進し分解する酸化酵素と、この酸化酵素によって還元される補酵素を酸化体に戻す補酵素酸化酵素とを含む。この補酵素酸化酵素の作用により、補酵素が酸化体に戻るときに電子が生成され、補酵素酸化酵素から電子メディエーターを介して負極に電子が渡される。酸化酵素としては例えばグルコースデヒドロゲナーゼ(GDH)(特に、NAD依存型グルコースデヒドロゲナーゼ)が、補酵素としては例えばNAD+ またはNADP+ が、補酵素酸化酵素としては例えばDIが用いられる。リポソーム内部にグルコースを取り込むために、この場合、好適には、リポソームを構成する脂質二重層にグルコーストランスポーター(糖輸送担体)が組み込まれる。グルコーストランスポーターとしては従来公知の各種のものを用いることができ、必要に応じて選択される。例えば、リポソーム内外のグルコース濃度差に基づく促通拡散(促進拡散)機構によりグルコースの輸送を行う場合には、促通拡散を担うグルコーストランスポーターとして、六種類のアイソフォームGLUT1〜GLUT6やこれらの変異体を用いることができる。
【0026】
燃料として多糖類(広義の多糖類であり、加水分解によって2分子以上の単糖を生じる全ての炭水化物を指し、二糖、三糖、四糖などのオリゴ糖を含む)を用いる場合には、上記の酸化酵素、補酵素酸化酵素および補酵素に加えて、多糖類の加水分解などの分解を促進し、グルコースなどの単糖類を生成する分解酵素も用いる。この場合、例えば、上記の酸化酵素、補酵素酸化酵素および補酵素はリポソームに封入し、分解酵素は、リポソームを構成する脂質二重層に組み込むか、固定化するか、リポソームの外部に存在させるようにする。この分解酵素は、リポソームの外部に存在させる場合には、好適には負極に固定化されるが、必ずしも固定化する必要はなく、プロトン伝導体に緩衝液(緩衝物質)を含む電解質を用いるような場合にはその緩衝液に含ませるようにしてもよい。多糖類としては、具体的には、例えば、デンプン、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲン、セルロース、マルトース、スクロース、ラクトースなどが挙げられる。これらは単糖類が二つ以上結合したものであり、いずれの多糖類においても結合単位の単糖類としてグルコースが含まれている。なお、アミロースとアミロペクチンとはデンプンに含まれる成分であり、デンプンはアミロースとアミロペクチンとの混合物である。多糖類の分解酵素としてグルコアミラーゼを用い、単糖類を分解する酸化酵素としてグルコースデヒドロゲナーゼを用いた場合には、グルコアミラーゼによりグルコースにまで分解することができる多糖類、例えばデンプン、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲン、マルトースのいずれかを含むものであれば、これを燃料として発電することが可能となる。なお、グルコアミラーゼはデンプンなどのα−グルカンを加水分解しグルコースを生成する分解酵素であり、グルコースデヒドロゲナーゼはβ−D−グルコースをD−グルコノ−δ−ラクトンに酸化する酸化酵素である。
【0027】
分解酵素としてセルラーゼを用い、酸化酵素としてグルコースデヒドロゲナーゼを用いた燃料電池では、セルラーゼによりグルコースにまで分解することができるセルロースを燃料とすることができる。セルラーゼは、より詳しくはセルラーゼ(EC 3.2.1.4)、エキソセロビオヒドラーゼ(EC 3.2.1.91)、β−グルコシダーゼ(EC 3.2.1.21)などのいずれか少なくとも一種である。なお、分解酵素としてグルコアミラーゼとセルラーゼとを混合して用いてもよく、この場合には、自然界で生産される多糖類の大半を分解することができるため、これらを多く含むもの、例えば生ごみなどを燃料とすることが可能となる。
【0028】
また、分解酵素としてα−グルコシダーゼを用い、酸化酵素としてグルコースデヒドロゲナーゼを用いた燃料電池では、α−グルコシダーゼによりグルコースに分解されるマルトースを燃料とすることができる。
また、分解酵素としてスクラーゼを用い、酸化酵素としてグルコースデヒドロゲナーゼを用いた燃料電池では、スクラーゼによりグルコースとフルクトースとに分解されるスクロースを燃料とすることができる。スクラーゼは、より詳しくはα−グルコシダーゼ(EC 3.2.1.20)、スクロース−α−グルコシダーゼ(EC 3.2.1.48)、β−フルクトフラノシダーゼ(EC 3.2.1.26)などの少なくともいずれか一種である。
また、分解酵素としてβ−ガラクトシダーゼを用い、酸化酵素としてグルコースデヒドロゲナーゼを用いた燃料電池では、β−ガラクトシダーゼによりグルコースとガラクトースとに分解されるラクトースを燃料とすることができる。
必要に応じて、これらの燃料となる多糖類も負極上に固定化してもよい。
【0029】
特に、デンプンを燃料とする燃料電池では、デンプンを糊化してゲル状の固形化燃料としたものを用いることもできる。この場合、糊化したデンプンを例えば酵素および補酵素が封入されたリポソームが固定化された負極に接触させるか、あるいは負極上にこのリポソームなどとともに固定化する方法をとることができる。このようにすることにより、負極表面のデンプン濃度を、溶液中に溶解したデンプンを用いた場合よりも高い状態に保持することができ、酵素による分解反応がより速くなり、出力が向上するとともに、燃料の取り扱いが溶液の場合よりも容易で、燃料供給システムを簡素化することができ、しかも燃料電池を天地無用とする必要がないため、モバイル機器に用いたときに非常に有利である。
【0030】
正極に酵素が固定化される場合、この酵素は、典型的には酸素を還元する酵素を含む。この酸素を還元する酵素としては、例えば、ビリルビンオキシダーゼ、ラッカーゼ、アスコルビン酸オキシダーゼなどを用いることができる。この場合、正極には、好適には、酵素に加えて電子メディエーターも固定化される。電子メディエーターとしては、例えば、ヘキサシアノ鉄酸カリウム、オクタシアノタングステン酸カリウムなどを用いる。電子メディエーターは、好適には、十分に高濃度、例えば、平均値で0.64×10-6mol/mm2 以上固定化する。
【0031】
プロトン伝導体としては種々のものを用いることができ、必要に応じて選択されるが、具体的には、例えば、セロハン、パーフルオロカーボンスルホン酸(PFS)系の樹脂膜、トリフルオロスチレン誘導体の共重合膜、リン酸を含浸させたポリベンズイミダゾール膜、芳香族ポリエーテルケトンスルホン酸膜、PSSA−PVA(ポリスチレンスルホン酸ポリビニルアルコール共重合体)や、PSSA−EVOH(ポリスチレンスルホン酸エチレンビニルアルコール共重合体)、含フッ素カーボンスルホン酸基を有するイオン交換樹脂(ナフィオン(商品名、米国デュポン社)など)などからなるものが挙げられる。
【0032】
プロトン伝導体として緩衝液(緩衝物質)を含む電解質を用いる場合には、高出力動作時に十分な緩衝能を得ることができ、酵素が本来持っている能力を十分に発揮することができるようにするのが望ましい。このために、電解質に含まれる緩衝物質の濃度を0.2M以上2.5M以下にすることが有効であり、好適には0.2M以上2M以下、より好適には0.4M以上2M以下、さらに好適には0.8M以上1.2M以下とする。緩衝物質は、一般的には、pKa が6以上9以下のものであれば、どのようなものを用いてもよいが、具体例を挙げると、リン酸二水素イオン(H2 PO4 - )、2−アミノ−2−ヒドロキシメチル−1,3−プロパンジオール(略称トリス)、2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、カコジル酸、炭酸(H2 CO3 )、クエン酸水素イオン、N−(2−アセトアミド)イミノ二酢酸(ADA)、ピペラジン−N,N’−ビス(2−エタンスルホン酸)(PIPES)、N−(2−アセトアミド)−2−アミノエタンスルホン酸(ACES)、3−(N−モルホリノ)プロパンスルホン酸(MOPS)、N−2−ヒドロキシエチルピペラジン−N’−2−エタンスルホン酸(HEPES)、N−2−ヒドロキシエチルピペラジン−N’−3−プロパンスルホン酸(HEPPS)、N−[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]グリシン(略称トリシン)、グリシルグリシン、N,N−ビス(2−ヒドロキシエチル)グリシン(略称ビシン)などである。リン酸二水素イオン(H2 PO4 - )を生成する物質は、例えば、リン酸二水素ナトリウム(NaH2 PO4 )やリン酸二水素カリウム(KH2 PO4 )などである。緩衝物質としてはイミダゾール環を含む化合物も好ましい。イミダゾール環を含む化合物は、具体的には、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン誘導体、ビピリジン誘導体、イミダゾール誘導体(ヒスチジン、1−メチルイミダゾール、2−メチルイミダゾール、4−メチルイミダゾール、2−エチルイミダゾール、イミダゾール−2−カルボン酸エチル、イミダゾール−2−カルボキシアルデヒド、イミダゾール−4−カルボン酸、イミダゾール−4,5−ジカルボン酸、イミダゾール−1−イル−酢酸、2−アセチルベンズイミダゾール、1−アセチルイミダゾール、N−アセチルイミダゾール、2−アミノベンズイミダゾール、N−(3−アミノプロピル) イミダゾール、5−アミノ−2−(トリフルオロメチル) ベンズイミダゾール、4−アザベンズイミダゾール、4−アザ−2−メルカプトベンズイミダゾール、ベンズイミダゾール、1−ベンジルイミダゾール、1−ブチルイミダゾール)などである。必要に応じて、これらの緩衝物質に加えて、例えば、塩酸(HCl)、酢酸(CH3 COOH)、リン酸(H3 PO4 )および硫酸(H2 SO4 )からなる群より選ばれた少なくとも一種の酸を中和剤として加えてもよい。こうすることで、酵素の活性をより高く維持することができる。緩衝物質を含む電解質のpHは、好適には7付近であるが、一般的には1〜14のいずれであってもよい。
【0033】
正極および負極の電極材料としては各種のものを用いることができるが、例えば、多孔質カーボン、カーボンペレット、カーボンフェルト、カーボンペーパーなどのカーボン系材料が用いられる。電極の材料としては、多孔体材料からなる骨格と、この骨格の少なくとも一部の表面を被覆する、カーボン系材料を主成分とする材料とを含む多孔体導電材料を用いることもできる。この多孔体導電材料は、多孔体材料からなる骨格の少なくとも一部の表面に、カーボン系材料を主成分とする材料をコーティングすることにより得ることができる。この多孔体導電材料の骨格を構成する多孔体材料は、多孔率が高くても骨格を安定に維持することができるものであれば、基本的にはどのようなものであってもよく、導電性の有無も問わない。多孔体材料としては、好適には、高多孔率および高導電性を有する材料が用いられる。このような高多孔率および高導電性を有する多孔体材料としては、具体的には、金属材料(金属または合金)や骨格を強固にした(もろさを改善した)カーボン系材料などを用いることができる。多孔体材料として金属材料を用いる場合、金属材料は溶液のpHや電位などの使用環境との兼ね合いにより状態安定性が異なることから様々な選択肢が考えられるが、例えば、ニッケル、銅、銀、金、ニッケル−クロム合金、ステンレス鋼などの発泡金属あるいは発泡合金は入手しやすい材料の一つである。多孔体材料としては、上記の金属材料やカーボン系材料以外に樹脂材料(例えば、スポンジ状のもの)を用いることもできる。この多孔体材料の多孔率および孔径(孔の最小径)は、この多孔体材料からなる骨格の表面にコーティングする、カーボン系材料を主成分とする材料の厚さとの兼ね合いで、多孔体導電材料に要求される多孔率および孔径に応じて決められる。この多孔体材料の孔径は一般的には10nm〜1mm、典型的には10nm〜600μmである。一方、骨格の表面を被覆する材料は、導電性を有し、想定される作動電位において安定なものを用いる必要がある。ここでは、このような材料としてカーボン系材料を主成分とする材料を用いる。カーボン系材料は一般に電位窓が広く、しかも化学的に安定なものが多い。このカーボン系材料を主成分とする材料は、具体的には、カーボン系材料のみからなるものと、カーボン系材料を主成分とし、多孔体導電材料に要求される特性などに応じて選ばれる副材料を微量含む材料とがある。後者の材料の具体例を挙げると、カーボン系材料に金属などの高導電性材料を添加することにより電気伝導性を向上させた材料や、カーボン系材料にポリテトラフルオロエチレン系材料などを添加することにより表面撥水性を付与するなど、導電性以外の機能を付与した材料である。カーボン系材料にも様々な種類が存在するが、いかなるカーボン系材料であってもよく、カーボン単体のほか、カーボンに他の元素を添加したものであってもよい。このカーボン系材料は、特に、高導電性・高表面積を有する微細粉末カーボン材料が好ましい。このカーボン系材料としては、具体的には、例えば、KB(ケッチェンブラック)などの高導電性を付与したものや、カーボンナノチューブ、フラーレンなどの機能性カーボン材料などを用いることができる。このカーボン系材料を主成分とする材料のコーティング方法は、必要に応じて適当な結着剤を用いるなどして多孔体材料からなる骨格の表面にコーティング可能であれば、いかなるコーティング方法を用いてもよい。この多孔体導電材料の孔径は、その孔を通して基質などを含む溶液が容易に出入り可能な程度の大きさに選ばれ、一般的には9nm〜1mm、あるいは1μm〜1mm、あるいは1〜600μmである。多孔体材料からなる骨格の少なくとも一部の表面がカーボン系材料を主成分とする材料により被覆された状態、あるいは、多孔質材料からなる骨格の少なくとも一部の表面をカーボン系材料を主成分とする材料によりコーティングした状態では、孔が全て互いに連通し、あるいは、カーボン系材料を主成分とする材料による目詰まりが発生しないようにするのが望ましい。
【0034】
この燃料電池の全体構成は必要に応じて選ばれるが、例えば、コイン型またはボタン型の構成とする場合には、好適には、酸化剤が透過可能な構造を有する正極集電体と燃料が透過可能な構造を有する負極集電体との間に形成された空間の内部に、正極、電解質および負極が収納された構造とする。この場合、典型的には、正極集電体および負極集電体の一方の縁が絶縁性の密封部材を介して正極集電体および負極集電体の他方に対してかしめられることで、正極、電解質および負極を収納する空間が形成されるが、これに限定されるものではなく、必要に応じて他の加工方法によりこの空間を形成してもよい。正極集電体と負極集電体とは絶縁性の密封部材により互いに電気的に絶縁される。この絶縁性の密封部材としては、典型的には、シリコーンゴムなどの各種の弾性体からなるガスケットが用いられるが、これに限定されるものではない。これらの正極集電体および負極集電体の平面形状は必要に応じて選ぶことができるが、例えば、円形、楕円形、四角形、六角形などである。典型的には、正極集電体は一つまたは複数の酸化剤供給口を有し、負極集電体は一つまたは複数の燃料供給口を有するが、必ずしもこれに限定されるものではなく、例えば、正極集電体の材料として酸化剤が透過可能なものを用いたりすることにより酸化剤供給口を形成しないでもよく、負極集電体の材料として燃料が透過可能なものを用いたりすることにより燃料供給口を形成しないでもよい。負極集電体は、典型的には、燃料保持部を有する。この燃料保持部は負極集電体と一体に設けてもよいし、負極集電体に対して着脱自在に設けてもよい。燃料保持部は、典型的には、密閉用の蓋を有する。この場合、この蓋を外して燃料保持部に燃料を注入することができる。密閉用の蓋を用いないで、燃料保持部の側面などから燃料を注入するようにしてもよい。燃料保持部を負極集電体に対して着脱自在に設ける場合には、例えば、燃料保持部として、あらかじめ燃料が充填された燃料タンクや燃料カートリッジなどを取り付けてもよい。これらの燃料タンクや燃料カートリッジは、使い捨て形であってもよいが、資源の有効利用を図る観点より、燃料を充填することができるものが好ましい。また、使用済みの燃料タンクや燃料カートリッジを燃料が充填された燃料タンクや燃料カートリッジと交換してもよい。さらに、例えば、燃料保持部を燃料の供給口および排出口を有する密閉容器状に形成し、この供給口を介して外部から燃料を密閉容器内に連続的に供給することで燃料電池の連続使用が可能である。あるいは、燃料電池に燃料保持部を設けず、開放系の燃料タンクに入れられた燃料の上に燃料電池を負極側が下に、正極側が上になるようにして浮かべた状態で使用してもよい。
【0035】
この燃料電池は、所定の中心軸の周りに、負極、電解質、正極および酸化剤が透過可能な構造を有する正極集電体が順次設けられており、燃料が透過可能な構造を有する負極集電体が負極と電気的に接続されて設けられている構造としてもよい。この燃料電池において、負極は、断面形状が円、楕円、多角形などの筒状であってもよいし、断面形状が円、楕円、多角形などの柱状であってもよい。負極が筒状である場合、負極集電体は、例えば、負極の内周面側に設けてもよいし、負極と電解質との間に設けてもよいし、負極の少なくとも一端面に設けてもよいし、さらにはこれらの二箇所以上に設けてもよい。また、負極を燃料を保持することができるように構成し、例えば、負極を多孔質材料により形成し、この負極に燃料保持部を兼用させるようにしてもよい。あるいは、所定の中心軸上に柱状の燃料保持部を設けてもよい。この燃料保持部は、例えば、負極集電体が負極の内周面側に設けられる場合、この負極集電体により囲まれる空間そのものであってもよいし、この空間内に負極集電体とは別に設けられる燃料タンクや燃料カートリッジなどの容器であってもよく、この容器は着脱自在でも固定されたものでもよい。燃料保持部は、例えば、円柱状、楕円柱状、四角形、六角形などの多角柱状などであるが、これに限定されるものではない。電解質は、負極および負極集電体の全体を包み込むように袋状の容器に形成するようにしてもよい。こうすることで、燃料保持部に燃料を一杯に入れた場合、この燃料を負極の全体と接触させることができる。この容器のうちの少なくとも正極と負極との間に挟まれた部分を電解質により形成し、その他の部分はこの電解質と異なる材料により形成するようにしてもよい。この容器を燃料の供給口および排出口を有する密閉容器とし、この供給口を介して外部から燃料を容器内に連続的に供給することにより燃料電池の連続使用が可能である。負極としては、好適には、内部に燃料を十分に蓄えることができるようにするために、空隙率が大きいものが好ましく、例えば空隙率が60%以上のものが好ましい。
【0036】
正極および負極としてペレット電極を用いることもできる。このペレット電極は、カーボン系材料(特に、高導電性・高表面積を有する微細粉末カーボン材料が好ましい)、具体的には、例えば、KB(ケッチェンブラック)などの高導電性を付与したものや、カーボンナノチューブ、フラーレンなどの機能性カーボン材料などと、必要に応じてバインダー、例えばポリフッ化ビニリデンと、上述の酵素の粉末(あるいは酵素溶液)、補酵素の粉末(あるいは補酵素溶液)、電子メディエーターの粉末(あるいは電子メディエーター溶液)、固定化用のポリマーの粉末(あるいはポリマー溶液)などとを、めのう乳鉢などで混合し、適宜乾燥させたものを所定の形状にプレス加工することなどにより形成することができる。このペレット電極の厚さ(電極厚)も必要に応じて決められるが、一例を挙げると50μm程度である。例えば、コイン型の燃料電池を製造する場合には、上記のペレット電極形成用の材料を錠剤製造機により円形の形状(直径の一例を挙げると15mmであるが、直径はこれに限定されるものではなく、必要に応じて決められる)にプレス加工することによりペレット電極を形成することができる。このペレット電極を形成する場合、所要の電極厚とするためには、例えば、ペレット電極形成用の材料に占めるカーボン量やプレス圧などを制御する。コイン型の電池缶に正極または負極を挿入する場合、例えば、これらの正極または負極と電池缶との間に金属メッシュスペーサーを挿入することでそれらの電気的接触を取るのが好ましい。
【0037】
ペレット電極の製造方法としては、上記の方法以外に、例えば、カーボン系材料と、必要に応じてバインダーと、酵素固定化成分(酵素、補酵素、電子メディエーター、ポリマーなど)の混合溶液(水系あるいは有機溶媒混合溶液)とを集電体などに適宜塗布し、乾燥させ、全体をプレス加工した後、所望の電極サイズに切り分けるようにしてもよい。
この燃料電池はおよそ電力が必要なものすべてに用いることができ、大きさも問わないが、例えば、電子機器、移動体(自動車、二輪車、航空機、ロケット、宇宙船など)、動力装置、建設機械、工作機械、発電システム、コージェネレーションシステムなどに用いることができ、用途などによって出力、大きさ、形状、燃料の種類などが決められる。
【0038】
第3の発明は、
一つまたは複数の燃料電池を用い、
少なくとも一つの上記燃料電池が、
正極と負極とがプロトン伝導体を介して対向した構造を有し、酵素および補酵素を用いて燃料から電子を取り出すように構成され、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されているものである電子機器である。
【0039】
この電子機器は、基本的にはどのようなものであってもよく、携帯型のものと据え置き型のものとの双方を含むが、具体例を挙げると、携帯電話、モバイル機器(携帯情報端末機(PDA)など)、ロボット、パーソナルコンピュータ(デスクトップ型、ノート型の双方を含む)、ゲーム機器、カメラ一体型VTR(ビデオテープレコーダ)、車載機器、家庭電気製品、工業製品などである。
第3の発明においては、その性質に反しない限り、第1および第2の発明に関連して説明したことが成立する。
【0040】
第4の発明は、
少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素が封入されたリポソームが固定化されている酵素固定化電極である。
第4の発明においては、その性質に反しない限り、第1および第2の発明に関連して説明したことが成立する。
【0041】
第5の発明は、
酵素および補酵素を用い、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されているバイオセンサーである。
【0042】
第6の発明は、
酵素および補酵素を用い、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されているバイオリアクターである。
【0043】
第7の発明は、
少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素が封入されたリポソームを用いたエネルギー変換素子である。
ここで、このエネルギー変換素子は、燃料または基質が持つ化学エネルギーを酵素反応により電気エネルギーに変換する素子であり、上記の燃料電池、すなわちバイオ燃料電池はこのエネルギー変換素子の一種である。
【0044】
第8の発明は、
酵素および補酵素を用い、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されている酵素反応利用装置である。
この酵素反応利用装置には、上記の燃料電池、すなわちバイオ燃料電池のほか、バイオセンサー(グルコースセンサーなど)、バイオリアクターなどが含まれ、酵素としては個々の目的に応じたものが用いられる。
第5〜第8の発明においては、上記以外のことについては、その性質に反しない限り、第1および第2の発明に関連して説明したことが成立する。
【0045】
上述のように構成されたこの発明においては、酵素反応に関与する少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素が高活性を保ったままリポソームに封入されるので、このリポソームの内部の微小な空間を反応場として効率的に酵素反応が行われ、燃料または基質から効率的に電子を取り出すことができる。この場合、このリポソームの内部に封入された酵素および補酵素の濃度は極めて高く、従って酵素および補酵素の相互の間隔は極めて小さいため、これらの酵素および補酵素による触媒サイクルは極めて高速に進行し、酵素反応が高速に進行する。そして、このリポソームを負極または電極に固定化することにより、このリポソームの内部に封入された酵素および補酵素をこのリポソームを介して負極または電極に容易に固定化することができるので、燃料または基質から取り出された電子を確実に負極または電極に受け渡すことができる。この場合、リポソームの固定は、酵素や補酵素をポリイオンコンプレックスなどにより固定化する場合に比べて簡単に行うことができる。
【発明の効果】
【0046】
この発明によれば、酵素および補酵素が封入されたリポソームの内部の微小な空間を反応場として酵素反応を行うことができることにより燃料または基質から効率的に電子を取り出して電気エネルギーを発生させることができ、しかもこれらの酵素および補酵素の電極への固定化も容易な高効率の燃料電池を実現することができる。そして、このように高効率の燃料電池を用いることにより、高性能の電子機器などを実現することができる。また、同様に、高効率のバイオセンサー、バイオリアクター、エネルギー変換素子および酵素反応利用装置を実現することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【0047】
以下、この発明の実施形態について図面を参照しながら説明する。なお、実施形態の全図において、同一または対応する部分には同一の符号を付す。
図1はこの発明の第1の実施形態による酵素固定化電極を示す。
図1に示すように、この酵素固定化電極においては、多孔質カーボンなどからなる電極11の表面にリン脂質などの脂質二重層からなるリポソーム12が物理吸着などにより固定化されている。このリポソーム12の内部の水相に、目的とする酵素反応に関与する少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素が封入される。図2にこのリポソーム12の構造の詳細を示す。図2においては、リポソーム12の内部の水相12aに、二種類の酵素13、14および一種類の補酵素15が封入されているが、封入される酵素および補酵素の種類は適宜選択され、これに限定されるものではない。例えば、酵素13は燃料の酸化を促進し分解する酸化酵素、酵素14はこの燃料の酸化に伴って還元された補酵素15を酸化体に戻すとともに電子メディエーターを介して電子を電極11に渡す補酵素酸化酵素である。このリポソーム12の内部の水相12aには、これらの酵素13、14および補酵素15以外に、例えば電子メディエーターを封入してもよい。この電子メディエーターは、リポソーム12とともに電極11上に固定化してもよい。
【0048】
この酵素固定化電極は、例えば、酵素13、14および補酵素15が封入されたリポソーム12を作製した後、このリポソーム12を電極11上に固定化することにより製造することができる。より具体的には、例えば、酵素13を含む緩衝溶液、酵素14を含む緩衝溶液、補酵素15を含む緩衝溶液およびリポソーム12(内部に酵素13、14および補酵素15が封入されていないもの)を含む緩衝溶液をそれぞれ作製し、これらの緩衝溶液を混合した後、この混合溶液をゲルろ過カラムに通したりすることなどによりリポソーム12外の酵素13、14および補酵素15を除去する。
【0049】
図3にこの酵素固定化電極における酵素、補酵素および電子メディエーターによる電子の受け渡し反応の一例を模式的に示す。この例では、エチルアルコール(EtOH)の分解に関与する酵素がアルコールデヒドロゲナーゼ(ADH)、エチルアルコールの分解プロセスにおける酸化反応に伴って還元体が生成される補酵素がNAD+ 、補酵素の還元体であるNADHを酸化する補酵素酸化酵素がジアホラーゼ(DI)であり、補酵素酸化酵素から補酵素の酸化に伴って生じる電子を電子メディエーターが受け取って電極11に渡す。この場合、エチルアルコールは、リポソーム12を構成する脂質二重層を透過してリポソーム12の内部に入り、アルコールデヒドロゲナーゼによるこのエチルアルコールの分解によりアセトアルデヒドが生成され、このアセトアルデヒドがリポソーム12の外部に出る。電子メディエーターは、リポソーム12を構成する脂質二重層を出入りして電子伝達を行う。
【0050】
実施例について説明する。
ジアホラーゼ(DI)(EC 1.8.1.4、天野エンザイム製)を5mg秤量し、緩衝溶液(10mMリン酸緩衝液、pH7)1mLに溶解させ、DI酵素緩衝溶液(1)とした。
アルコールデヒドロゲナーゼ(ADH)(NAD依存型、EC 1.1.1.1、天野エンザイム製)を5mg秤量し、緩衝溶液(10mMリン酸緩衝液、pH7)1mLに溶解させ、ADH酵素緩衝溶液(2)とした。
上記の酵素を溶解させる緩衝溶液は直前まで冷蔵されていたものが好ましく、酵素緩衝溶液もできるだけ冷蔵保存しておくことが好ましい。
【0051】
NADH(シグマアルドリッチ製、N−8129)を35mg秤量し、緩衝溶液(10mMリン酸緩衝液、pH7)1mLに溶解させ、NADH緩衝溶液(3)とした。
2,3−ジメトキシ−5−メチル−1,4−ベンゾキノン(Q0)を15〜300mg秤量し、緩衝溶液(10mMリン酸緩衝液、pH7)1mLに溶解させ、Q0緩衝溶液(4)とした。
卵黄レシチン(Wako製)を100mg秤量し、緩衝溶液(10mMリン酸緩衝液、pH7)10mLに溶解させてホモジナイザーで均一化し、リポソーム緩衝溶液(5)とした。
上記のようにして作製した各種の溶液を、下記に示す量ずつ採取して混合し、凍結融解を3度繰り返した。
DI酵素緩衝溶液(1):50μL
ADH酵素緩衝溶液(2):50μL
NADH緩衝溶液(3):50μL
リポソーム緩衝溶液(5):50μL
上記の混合溶液をゲルろ過カラムに通し、リポソーム外の酵素およびNADHを除去する。ここで得たリポソーム溶液をADH、DI、NADH封入リポソーム溶液(6)とした。
【0052】
図4、図5および図6は、シアニン色素Cy2で蛍光ラベル化したADH、シアニン色素Cy3で蛍光ラベル化したDIおよびNADHを封入したリポソームの蛍光顕微鏡写真である。図4、図5および図6において、Ex(Excitation) は励起光を示し、Exの右に記載されている波長を有し、DM(Dichroic mirror)は励起光と蛍光を分離するミラーを示し、DMの右に記載されている波長以上の光のみを透過し、BA(Barrier filter)
は蛍光と散乱光を分離するフィルターを示し、BAの右に記載されている波長以上の光を透過する。この蛍光顕微鏡では、励起光により色素を励起し、それによって得られる光をDMおよびBAに順次通して不要な光を除去し、色素からの蛍光のみを検出する。図4は波長450〜490nmの励起光でCy2を励起して蛍光を発生させたものでADHの分布を示す。図5は波長510〜560nmの励起光でCy3を励起して蛍光を発生させたものでDIの分布を示す。図6は波長380〜420nmの励起光でNADHを励起して蛍光を発生させたものでNADHの分布を示す。
【0053】
図4、図5および図6より、リポソームの直径は平均4.6μm、標準偏差は2.0μmであった。ただし、リポソームの平均直径は、図4、図5および図6中の30個のリポソームの直径を測定し、それらの平均を取ることにより求めた。
【0054】
図7、図8および図9は、Cy2で蛍光ラベル化したADH、Cy3で蛍光ラベル化したDIおよびNADHを封入したリポソームを蛍光モニタリングした結果を示すグラフであり、図7はCy2で蛍光ラベル化したADHからの蛍光強度、図8はCy3で蛍光ラベル化したDIからの蛍光強度、図9はNADHからの蛍光強度を示す。図7、図8および図9において、Em(Emission)は励起光Exにより色素を励起した時に放出される光を示し、Emの右に記載されている波長を有し、Exの波長およびEmの波長の右の括弧内の数値は半値幅である。図7、図8および図9から分かるように、いずれの場合も、エチルアルコール濃度100mMまで蛍光強度は変化しなかった。つまり、少なくともエチルアルコール濃度100mMまではリポソームは安定で、リポソーム内部にADH、DIおよびNADHが確実に封入されていることが分かった。また、界面活性剤である0.3%TritonXを添加したところ、蛍光強度が増加した。これは、0.3%TritonXによりリポソームが破壊され、内部のADH、DIおよびNADHがリポソーム外に放出され、蛍光強度が増加したことを意味する。この時の様子をNADHを例に取って図10に示す。図10に示すように、リポソームの内部にNADHが封入されていた状態ではNADHによる蛍光強度は低いが、リポソームが破壊され、内部に封入されていたNADHがリポソームの外部に放出されるとNADHによる蛍光強度が増加する。
【0055】
こうして得たADH、DIおよびNADH封入リポソーム溶液(6)とQ0緩衝溶液(4)とを混合して総体積100μLの測定溶液を作製し、カーボンフェルトを作用電極とし、参照電極Ag|AgClに対して、0.3Vと電子メディエーターの酸化還元電位より十分高い電位に設定し、溶液攪拌下においてクロノアンペロメトリーを行った。クロノアンペロメトリー中に測定溶液に、エチルアルコールが終濃度1、10、100mMとなるよう添加したものを順次添加した。
【0056】
ADH、DIおよびNADH封入リポソームを含む上記測定溶液に上述のようにしてエチルアルコールを添加した際のクロノアンペロメトリーの結果を図11の曲線(a)に示す。この曲線(a)から明らかなように、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入した場合にはエチルアルコール由来の触媒電流が観察され、エチルアルコールの濃度が高くなるに従って触媒電流は増加する。すなわち、人工細胞であるADH、DIおよびNADH封入リポソームによる電気化学的触媒活性が観察された。一方、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入した場合と同量のADH、DIおよびNADHをリポソームに封入せず、単にQ0緩衝溶液(4)中に分散させた場合について、上記と同様にしてクロノアンペロメトリーを行った。その結果を図11の曲線(b)に示す。この曲線(b)から明らかなように、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入せず、単にQ0緩衝溶液(4)中に分散させた場合にはエチルアルコール由来の触媒電流はほとんど観測されない。例えば、エチルアルコールの濃度が100mMの場合で比較すると、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入せず、単にQ0緩衝溶液(4)中に分散させた場合に得られる触媒電流は、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入した場合に得られる触媒電流の約30分の1程度に過ぎない。このことから、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入した場合には、封入しない場合に比べてはるかに高い触媒電流を得ることができることが明らかである。
【0057】
このように、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入した場合には、封入しない場合に比べてはるかに高い触媒電流が得られる理由について説明する。図12に示すように、リポソーム12内にADH(横線を施した○で示す)、DI(縦線を施した○で示す)およびNADH(空白の○で示す)を封入したものが緩衝液S中に正方格子状に配列している場合を考える。一方、図13に示すように、図12に示すものと同じ体積の緩衝液S中に、図12に示すものと同じ量のADH(横線を施した○で示す)、DI(縦線を施した○で示す)およびNADH(空白の○で示す)が六方格子状に配列している場合を考える。緩衝液Sの体積は例えば100μL、リポソーム12の内部の体積は例えば約0.17μLである。ただし、リポソーム12の脂質二重層を構成するリン脂質は緩衝液S中に5.5×10-3μmol存在し、リポソーム12の内部の体積の合計はリポソーム1μmol当たりに換算すると30μL/μmolである。図13に示すようにADH、DIおよびNADHが緩衝液S中に単に分散されている場合におけるADH、DIおよびNADHの濃度に比べて、図12に示すようにリポソーム12内にADH、DIおよびNADHが封入されている場合におけるこれらのADH、DIおよびNADHの局所的な濃度は約600倍も高い。すなわち、リポソーム12内にADH、DIおよびNADHを封入することにより、これらのADH、DIおよびNADHの濃度を著しく高くすることができ、これらのADH、DIおよびNADHの相互の間隔を極めて小さくすることができる。このため、リポソーム12内では、ADH、DIおよびNADHによる触媒サイクルが極めて高速に進行し、図11に示すような結果が得られる。
【0058】
以上のように、この第1の実施形態によれば、リポソーム12の内部に酵素反応に必要な酵素および補酵素を封入し、このリポソーム12を電極11上に固定化している。このため、酵素反応をリポソーム12の内部の微小な空間を反応場として効率的に行うことができ、基質から効率的に電子を取り出し、電極11に受け渡すことができる。また、酵素などをポリイオンコンプレックスなどにより電極11上に直接固定化する場合に比べて固定化を簡単に行うことができる。
【0059】
図14はこの発明の第2の実施形態による酵素固定化電極を示す。
図14に示すように、この酵素固定化電極においては、第1の実施形態と同様に、電極11上にリポソーム12が物理吸着などにより固定化され、このリポソーム12の内部の水相に、目的とする酵素反応に関与する少なくとも一種類の酵素および少なくとも一種の補酵素が封入されていることに加えて、このリポソーム12を構成する脂質二重層にトランスポーター16が組み込まれている。図15にこのリポソーム12の構造の詳細を示す。トランスポーター16は、酵素反応の基質が、リポソーム12を構成する脂質二重層を通って内部に取り込まれにくい場合にこの基質を輸送するためのものであり、基質に応じて適宜選択されたものが用いられる。例えば、基質がグルコースである場合は、トランスポーター16としてグルコーストランスポーターが用いられる。
この酵素固定化電極の上記以外のことは第1の実施形態と同様である。
【0060】
図16にこの酵素固定化電極における酵素、補酵素および電子メディエーターによる電子の受け渡し反応の一例を模式的に示す。この例では、リポソーム12に組み込まれたトランスポーター16がグルコーストランスポーター、グルコースの分解に関与する酵素がグルコースデヒドロゲナーゼ(GDH)、グルコースの分解プロセスにおける酸化反応に伴って還元体が生成される補酵素がNAD+ 、補酵素の還元体であるNADHを酸化する補酵素酸化酵素がジアホラーゼ(DI)であり、補酵素酸化酵素から補酵素の酸化に伴って生じる電子を電子メディエーターが受け取って電極11に渡す。
この第2の実施形態によれば、第1の実施形態と同様な利点を得ることができる。
【0061】
次に、この発明の第3の実施形態について説明する。この第3の実施形態においては、バイオ燃料電池の負極として、第2の実施形態による酵素固定化電極を用いる。
図17はこのバイオ燃料電池を模式的に示す。このバイオ燃料電池では、燃料としてグルコースを用いるものとする。図18は、このバイオ燃料電池の負極の構成の詳細ならびにこの負極に固定化されたリポソーム12に封入された酵素群および補酵素の一例およびこの酵素群および補酵素による電子の受け渡し反応を模式的に示す。
【0062】
図17および図18に示すように、このバイオ燃料電池は、負極21と正極22とが電解質層23を介して対向した構造を有する。負極21は、燃料として供給されたグルコースを酵素により分解し電子を取り出すとともにプロトン(H+ )を発生する。正極22は、負極21から電解質層23を通って輸送されたプロトンと負極21から外部回路を通って送られた電子と例えば空気中の酸素とにより水を生成する。
【0063】
負極21は、例えば多孔質カーボンなどからなる電極11(図18参照)上に、グルコースの分解に関与する酵素と、グルコースの分解プロセスにおける酸化反応に伴って還元体が生成される補酵素(例えば、NAD+ )と、補酵素の還元体(例えば、NADH)を酸化する補酵素酸化酵素(例えば、ジアホラーゼ(DI))とが封入されたリポソーム12が固定化され、必要に応じてこれに加えて、補酵素酸化酵素から補酵素の酸化に伴って生じる電子を受け取って電極11に渡す電子メディエーター(例えば、ACNQ)が、第2の実施形態による酵素固定化電極と同様に固定化されて構成されている。リポソーム12を構成する脂質二重層にはトランスポーター16としてグルコーストランスポーターが組み込まれているが、図18においては図示が省略されている。
【0064】
グルコースの分解に関与する酵素としては、例えば、グルコースデヒドロゲナーゼ(GDH)、好適にはNAD依存型グルコースデヒドロゲナーゼを用いることができる。この酸化酵素を存在させることにより、例えば、β−D−グルコースをD−グルコノ−δ−ラクトンに酸化することができる。
【0065】
さらに、このD−グルコノ−δ−ラクトンは、グルコノキナーゼとフォスフォグルコネートデヒドロゲナーゼ(PhGDH)との二つの酵素を存在させることにより、2−ケト−6−フォスフォ−D−グルコネートに分解することができる。すなわち、D−グルコノ−δ−ラクトンは、加水分解によりD−グルコネートになり、D−グルコネートは、グルコノキナーゼの存在下、アデノシン三リン酸(ATP)をアデノシン二リン酸(ADP)とリン酸とに加水分解することでリン酸化されて、6−フォスフォ−D−グルコネートになる。この6−フォスフォ−D−グルコネートは、酸化酵素PhGDHの作用により、2−ケト−6−フォスフォ−D−グルコネートに酸化される。
【0066】
また、グルコースは上記分解プロセスのほかに、糖代謝を利用してCO2 まで分解することもできる。この糖代謝を利用した分解プロセスは、解糖系によるグルコースの分解およびピルビン酸の生成ならびにTCA回路に大別されるが、これらは広く知られた反応系である。
単糖類の分解プロセスにおける酸化反応は、補酵素の還元反応を伴って行われる。この補酵素は作用する酵素によってほぼ定まっており、GDHの場合、補酵素にはNAD+ が用いられる。すなわち、GDHの作用によりβ−D−グルコースがD−グルコノ−δ−ラクトンに酸化されると、NAD+ がNADHに還元され、H+ を発生する。
【0067】
生成されたNADHは、ジアホラーゼ(DI)の存在下で直ちにNAD+ に酸化され、二つの電子とH+ とを発生する。したがって、グルコース1分子につき1段階の酸化反応で二つの電子と二つのH+ とが生成されることになる。2段階の酸化反応では、合計四つの電子と四つのH+ とが生成される。
上記プロセスで生成された電子はジアホラーゼから電子メディエーターを介して電極11に渡され、H+ は電解質層23を通って正極22へ輸送される。
【0068】
上記の酵素および補酵素が封入されたリポソーム12および電子メディエーターは、電極反応が効率よく定常的に行われるようにするために、電解質層23に含まれるリン酸緩衝液やトリス緩衝液などの緩衝液によって、酵素にとって最適なpH、例えばpH7付近に維持されていることが好ましい。リン酸緩衝液としては、例えばNaH2 PO4 やKH2 PO4 が用いられる。さらに、イオン強度(I.S.)は、あまり大きすぎても小さすぎても酵素活性に悪影響を与えるが、電気化学応答性も考慮すると、適度なイオン強度、例えば0.3程度であることが好ましい。ただし、pHおよびイオン強度は、用いる酵素それぞれに最適値が存在し、上述した値に限定されない。
【0069】
図18には、一例として、グルコースの分解に関与する酵素がグルコースデヒドロゲナーゼ(GDH)、グルコースの分解プロセスにおける酸化反応に伴って還元体が生成される補酵素がNAD+ 、補酵素の還元体であるNADHを酸化する補酵素酸化酵素がジアホラーゼ(DI)、補酵素酸化酵素から補酵素の酸化に伴って生じる電子を受け取って電極11に渡す電子メディエーターがACNQである場合が図示されている。
【0070】
正極22は、多孔質カーボン電極などに、例えばビリルビンオキシダーゼ、ラッカーゼ、アスコルビン酸オキシダーゼなどの酸素を分解する酵素を固定化したものである。この正極22の外側の部分(電解質層23と反対側の部分)は通常、多孔質カーボンよりなるガス拡散層により形成されるが、これに限定されるものではない。正極22には、好適には、酵素に加えて、この正極22との間で電子の受け渡しを行う電子メディエーターも固定化される。
この正極22においては、上記の酸素を分解する酵素の存在下で、電解質層23からのH+ と負極21からの電子とにより空気中の酸素を還元し水を生成する。
【0071】
電解質層23は負極21において発生したH+ を正極22に輸送するためのもので、電子伝導性を持たず、H+ を輸送することが可能な材料により構成されている。電解質層23としては、具体的には、例えば、セロハンなどの既に挙げたものが用いられる。
【0072】
以上のように構成されたバイオ燃料電池において、負極21側にグルコースが供給されると、このグルコースが酸化酵素を含む分解酵素により分解される。この単糖類の分解プロセスで酸化酵素が関与することで、負極21側で電子とH+ とを生成することができ、負極21と正極22との間で電流を発生させることができる。
【0073】
次に、バイオ燃料電池の具体的な構造例について説明する。
図19AおよびBに示すように、このバイオ燃料電池は、負極21と正極22とが電解質層23を介して対向した構成を有している。この場合、正極22の下および負極21の下にそれぞれTi集電体41、42が置かれ、集電を容易に行うことができるようになっている。符号43、44は固定板を示す。これらの固定板43、44はねじ45により相互に締結され、それらの間に、正極22、負極21、電解質層23およびTi集電体41、42の全体が挟み込まれている。固定板43の一方の面(外側の面)には空気取り込み用の円形の凹部43aが設けられ、この凹部43aの底面に他方の面まで貫通した多数の穴43bが設けられている。これらの穴43bは正極22への空気の供給路となる。一方、固定板44の一方の面(外側の面)には燃料装填用の円形の凹部44aが設けられ、この凹部44aの底面に他方の面まで貫通した多数の穴44bが設けられている。これらの穴44bは負極21への燃料の供給路となる。この固定板44の他方の面の周辺部にはスペーサー46が設けられており、固定板43、44をねじ45により相互に締結したときにそれらの間隔が所定の間隔になるようになっている。
図19Bに示すように、Ti集電体41、42の間に負荷47を接続し、固定板44の凹部44aに燃料として例えばリン酸緩衝液にグルコースを溶かしたグルコース溶液を入れて発電を行う。
【0074】
この第3の実施形態によれば、酵素反応に必要な酵素群および補酵素が封入され、かつトランスポーター16としてグルコーストランスポーターが組み込まれたリポソーム12を電極11上に固定化した酵素固定化電極を負極21として用いていることにより、酵素反応をリポソーム12の内部の微小な空間を反応場として効率的に行うことができ、燃料であるグルコースから効率的に電子を取り出し、電極11に受け渡すことができるとともに、酵素などをポリイオンコンプレックスなどにより電極11上に直接固定化する場合に比べて固定化を簡単に行うことができる。このように負極21として用いられる酵素固定化電極が高効率であることにより、高効率のバイオ燃料電池を実現することができる。また、バイオ燃料電池の高出力化のためには燃料であるグルコースから2電子よりも多くの電子を取り出す必要があり、このためには三種類以上の酵素が適切な位置に固定化された酵素固定化電極を負極21に用いる必要があるが、リポソーム12の内部に三種類以上の酵素を封入することによりこのような要求も満たすことができる。また、互いに異なる三種類以上の酵素が封入された多種類のリポソームを混在させることにより多種類の燃料への対応が容易になる。さらには、負極リポソームと正極リポソームとを配列させたマイクロバイオ燃料電池の実現も可能である。
【0075】
次に、この発明の第4の実施形態によるバイオ燃料電池について説明する。
このバイオ燃料電池においては、燃料として、多糖類であるデンプンを用いる。また、デンプンを燃料に用いることに伴い、負極21にデンプンをグルコースに分解する分解酵素であるグルコアミラーゼも固定化する。具体的には、例えば、グルコアミラーゼを電極11に直接固定化したり、リポソーム12に例えばポリエチレングリコール鎖などをアンカーとして固定化したりする。
【0076】
このバイオ燃料電池においては、負極21側に燃料としてデンプンが供給されると、このデンプンがグルコアミラーゼによりグルコースに加水分解され、さらにこのグルコースがグルコーストランスポーターによりリポソーム12の内部に取り込まれてグルコースデヒドロゲナーゼにより分解され、この分解プロセスにおける酸化反応に伴ってNAD+ が還元されてNADHが生成され、このNADHがジアホラーゼにより酸化されて2個の電子とNAD+ とH+ とに分離する。したがって、グルコース1分子につき1段階の酸化反応で2個の電子と2個のH+ とが生成される。2段階の酸化反応では合計4個の電子と4個のH+ とが生成される。こうして発生する電子は負極21の電極11に渡され、H+ は電解質層23を通って正極22まで移動する。正極22では、このH+ が、外部から供給された酸素および負極21から外部回路を通って送られた電子と反応してH2 Oを生成する。
上記以外のことは第3の実施形態によるバイオ燃料電池と同様である。
この第4の実施形態によれば、第3の実施形態と同様な利点を得ることができるほか、デンプンを燃料に用いていることにより、グルコースを燃料に用いる場合に比べて発電量を増加させることができるという利点を得ることができる。
【0077】
次に、この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池について説明する。
図20A、BおよびCならびに図21はこのバイオ燃料電池を示し、図20A、BおよびCはこのバイオ燃料電池の上面図、断面図および裏面図、図21はこのバイオ燃料電池の各構成要素を分解して示す分解斜視図である。
【0078】
図20A、BおよびCならびに図21に示すように、このバイオ燃料電池においては、正極集電体51と負極集電体52との間に形成された空間の内部に、正極22、電解質層23および負極21が、その上下を正極集電体51と負極集電体52とにより挟まれて収納されている。これらの正極集電体51、負極集電体52、正極22、電解質層23および負極21の隣同士のものは互いに密着している。この場合、これらの正極集電体51、負極集電体52、正極22、電解質層23および負極21は円形の平面形状を有し、このバイオ燃料電池の全体も円形の平面形状を有する。
【0079】
正極集電体51は、正極22で発生した電流を集めるためのものであり、この正極集電体51から外部に電流が取り出される。また、負極集電体52は、負極21で発生した電流を集めるためのものである。これらの正極集電体51および負極集電体52は、一般的には、金属や合金などにより形成されるが、これに限定されるものではない。正極集電体51は偏平でほぼ円筒状の形状を有する。負極集電体52も偏平でほぼ円筒状の形状を有する。そして、正極集電体51の外周部51aの縁が、例えばシリコーンゴムなどの絶縁性の材料からなるリング状のガスケット56aおよび例えばポリテトラフルオロエチレン(PTFE)などのリング状の疎水性樹脂56bを介して負極集電体52の外周部52aに対してかしめられることにより、正極22、電解質層23および負極21を収納する空間が形成されている。疎水性樹脂56bは正極22、正極集電体51およびガスケット56aにより囲まれた空間に、これらの正極22、正極集電体51およびガスケット56aに密着した状態で設けられている。この疎水性樹脂56bにより、燃料の正極22側への過剰な染み込みを効果的に抑制することができる。電解質層23の端部は正極22および負極21の外側に延在しており、ガスケット56aと疎水性樹脂56bとの間に挟まれている。正極集電体51は、その底面の全面に複数の酸化剤供給口51bを有し、これらの酸化剤供給口51bの内部に正極22が露出している。図21Cおよび図22には13個の円形の酸化剤供給口51bが図示されているが、これは一例に過ぎず、酸化剤供給口51bの個数、形状、大きさおよび配置とも適宜選ぶことができる。負極集電体52も、その上面の全面に複数の燃料供給口52bを有し、これらの燃料供給口52bの内部に負極21が露出している。図22には7個の円形の燃料供給口52bが図示されているが、これは一例に過ぎず、燃料供給口52bの個数、形状、大きさおよび配置とも適宜選ぶことができる。
【0080】
負極集電体52は負極21と反対側の面に円筒形状の燃料タンク57を有する。この燃料タンク57は負極集電体52と一体に形成されている。この燃料タンク57の中に、使用する燃料(図示せず)、例えば、グルコース溶液やこれにさらに電解質を加えたものなどが入れられる。この燃料タンク57には円筒形状の蓋58が取り外し可能に取り付けられている。この蓋58は、例えば、燃料タンク57に嵌め込まれ、あるいは、ねじ止めされるようになっている。この蓋58の中央部には円形の燃料供給口58aが形成されている。この燃料供給口58aは、例えば、図示省略した密封シールを貼り付けたりすることなどにより密封される。
このバイオ燃料電池の上記以外の構成は、その性質に反しない限り、第3の実施形態と同様である。
【0081】
次に、このバイオ燃料電池の製造方法の一例について説明する。この製造方法を図22A〜Dに示す。
図22Aに示すように、まず、一端が開放した円筒形状の正極集電体51を用意する。この正極集電体51の底面の全面には複数の酸化剤供給口51bが形成されている。この正極集電体51の内部の底面の外周部の上にリング状の疎水性樹脂56bを載せ、この底面の中央部の上に、正極22、電解質層23および負極21を順次重ねる。
【0082】
一方、図22Bに示すように、一端が開放した円筒形状の負極集電体52上に円筒形状の燃料タンク57を一体に形成したものを用意する。この負極集電体52には全面に複数の燃料供給口52bが形成されている。この負極集電体52の外周面の縁にU字状の断面形状のガスケット56aを取り付ける。そして、この負極集電体52をその開放部側を下にして負極21の上にかぶせ、正極集電体51とこの負極集電体52との間に、正極22、電解質層23および負極21を挟む。
【0083】
次に、図22Cに示すように、こうして正極集電体51と負極集電体52との間に正極22、電解質層23および負極21を挟んだものを、かしめ機の台61の上に載せ、押圧部材62により負極集電体52を押圧して正極集電体51、正極22、電解質層23、負極21および負極集電体52の隣同士を互いに密着させ、この状態でかしめ具63を下降させて正極集電体51の外周部51bの縁をガスケット56aおよび疎水性樹脂56bを介して負極集電体52の外周部52bに対してかしめる。このかしめを行う際には、ガスケット56aが徐々に潰れて正極集電体51とガスケット56aとの間および負極集電体52とガスケット56aとの間に隙間ができないようにする。また、この際、疎水性樹脂56bも徐々に圧縮されて正極22、正極集電体51およびガスケット56aと密着するようにする。こうすることで、正極集電体51と負極集電体52とがガスケット56aにより互いに電気的に絶縁された状態でそれらの内部に、正極22、電解質層23および負極21を収納する空間が形成される。この後、かしめ具63を上昇させる。
【0084】
こうして、図22Dに示すように、正極集電体51と負極集電体52との間に形成された空間の内部に正極22、電解質層23および負極21が収納されたバイオ燃料電池が製造される。
次に、燃料タンク57に蓋58を取り付け、この蓋58の燃料供給口58aより燃料および電解質を注入した後、この燃料供給口58aを密封シールを貼り付けたりすることにより閉じる。ただし、燃料および電解質は、図22Bに示す工程で燃料タンク57に注入してもよい。
【0085】
このバイオ燃料電池においては、燃料タンク57に入れる燃料として例えばグルコース溶液を用いる場合、負極21は、供給されたグルコースを酵素により分解して電子を取り出すとともに、H+ を発生する。正極22は、負極21からそれぞれ電解質層23を通って輸送されたH+ と負極21から外部回路を通って送られた電子と例えば空気中の酸素とにより水を生成する。そして、正極集電体51と負極集電体52との間に出力電圧が得られる。
【0086】
図23に示すように、このバイオ燃料電池の正極集電体51および負極集電体52にそれぞれメッシュ電極71、72を形成してもよい。この場合、メッシュ電極71の穴を通して外部の空気が正極集電体51の酸化剤供給口51bに入り、メッシュ電極72の穴を通って燃料が蓋58の燃料供給口58aから燃料タンク57に入る。
【0087】
図24は2個のバイオ燃料電池を直列接続した場合を示す。この場合、一方のバイオ燃料電池(図中、上のバイオ燃料電池)の正極集電体51と他方のバイオ燃料電池(図中、下のバイオ燃料電池)の蓋58との間にメッシュ電極73を挟む。この場合、メッシュ電極73の穴を通って外部の空気が正極集電体51の酸化剤供給口51bに入るようになっている。燃料の供給は燃料供給システムを用いて行うことも可能である。
【0088】
図25は2個のバイオ燃料電池を並列接続した場合を示す。この場合、一方のバイオ燃料電池(図中、上のバイオ燃料電池)の燃料タンク57と他方のバイオ燃料電池(図中、下のバイオ燃料電池)の燃料タンク57とをそれらの蓋58の燃料供給口58a同士が一致するように互いに接触させ、これらの燃料タンク57の側面から電極74を引き出す。また、上記一方のバイオ燃料電池の正極集電体51と上記他方のバイオ燃料電池の正極集電体51とにそれぞれメッシュ電極75、76を形成する。これらのメッシュ電極75、76は互いに接続する。メッシュ電極75、76の穴を通って外部の空気が正極集電体51の酸化剤供給口51bに入る。
【0089】
この第5の実施形態によれば、燃料タンク57を除くとコイン型またはボタン型のバイオ燃料電池において、第3の実施形態と同様な利点を得ることができる。また、このバイオ燃料電池においては、正極集電体51と負極集電体52との間に正極22、電解質層23および負極21を挟み、正極集電体51の外周部51aの縁をガスケット56を介して負極集電体52の外周部52aに対してかしめることにより、各構成要素同士を均一に密着させることができるので、出力のばらつきを防止することができるとともに、各構成要素間の界面から燃料や電解質などの電池溶液が漏液するのを防止することができる。また、このバイオ燃料電池は製造工程が簡単である。また、このバイオ燃料電池は小型化が容易である。さらに、このバイオ燃料電池は、燃料としてグルコース溶液やデンプンを用い、使用する電解質のpHを7付近(中性)に選ぶことにより、万が一、燃料や電解質が外部に漏れても、安全である。
また、現在実用化されている空気電池では燃料および電解質を製造時に添加する必要があり、製造後に添加することは困難であるのに対し、このバイオ燃料電池では、製造後に燃料および電解質を添加することが可能であるので、このバイオ燃料電池は現在実用化されている空気電池に比べて製造が容易である。
【0090】
次に、この発明の第6の実施形態によるバイオ燃料電池について説明する。
図26に示すように、この第6の実施形態においては、第5の実施形態によるバイオ燃料電池から、負極集電体52に一体に設けられた燃料タンク57を取り除き、さらに正極集電体51および負極集電体52にそれぞれメッシュ電極71、72を形成したものを用い、開放系の燃料タンク57に入れられた燃料57aの上にこのバイオ燃料電池を負極21側が下に、正極22側が上になるようにして浮かべた状態で使用する。
この第6の実施形態の上記以外のことは、その性質に反しない限り、第3および第5の実施形態と同様である。
この第6の実施形態によれば、第3および第5の実施形態と同様な利点を得ることができる。
【0091】
次に、この発明の第7の実施形態によるバイオ燃料電池について説明する。第5の実施形態によるバイオ燃料電池がコイン型またはボタン型であるのに対し、このバイオ燃料電池は円筒型である。
図27AおよびBならびに図28はこのバイオ燃料電池を示し、図27Aはこのバイオ燃料電池の正面図、図27Bはこのバイオ燃料電池の縦断面図、図28はこのバイオ燃料電池の各構成要素を分解して示す分解斜視図である。
【0092】
図27AおよびBならびに図28に示すように、このバイオ燃料電池においては、円柱状の燃料保持部77の外周に、それぞれ円筒状の負極集電体52、負極21、電解質層23、正極22および正極集電体51が順次設けられている。この場合、燃料保持部77は、円筒状の負極集電体52により囲まれた空間からなる。この燃料保持部77の一端は外部に突き出ており、この一端には蓋78が取り付けられている。図示は省略するが、燃料保持部77の外周の負極集電体52にはその面の全体に複数の燃料供給口52bが形成されている。また、電解質層23は負極21および負極集電体52を包む袋状になっている。電解質層23と燃料保持部77の一端の負極集電体52との間の部分は例えばシール部材(図示せず)などによりシールされており、この部分から燃料が外部に漏れないようになっている。
【0093】
このバイオ燃料電池においては、燃料保持部77に燃料および電解質を入れる。これらの燃料および電解質は負極集電体52の燃料供給口52bを通って負極21に到達し、この負極21の空隙部に浸透することにより、この負極21の内部に蓄えられるようになっている。負極21の内部に蓄えることができる燃料の量を多くするためには、負極21の空隙率は例えば60%以上とすることが望ましいが、これに限定されるものではない。
【0094】
このバイオ燃料電池においては、耐久性向上のために、正極集電体51の外周面に気液分離層を設けてもよい。この気液分離層の材料としては、例えば、防水性透湿性素材(ポリテトラフルオロエチレンを延伸加工したフィルムとポリウレタンポリマーとを複合化した素材)(例えば、WLゴア&アソシエイツ社製のゴアテックス(商品名))を用いる。このバイオ燃料電池の各構成要素同士を均一に密着させるために、好適には、この気液分離層の外側または内側に、外部から空気が透過可能な網目構造を有する伸縮性ゴム(バンド状でもシート状でも可)を巻き付けてこのバイオ燃料電池の構成要素の全体を締め付ける。
この第7の実施形態の上記以外のことは、その性質に反しない限り、第3および第5の実施形態と同様である。
この第7の実施形態によれば、第3および第5の実施形態と同様な利点を得ることができる。
【0095】
次に、この発明の第8の実施形態によるバイオ燃料電池について説明する。
この第8の実施形態によるバイオ燃料電池は、負極21の電極材に図29AおよびBに示すような多孔体導電材料を用いることを除いて、第3の実施形態によるバイオ燃料電池と同様な構成を有する。
図29Aはこの多孔体導電材料の構造を模式的に示し、図29Bはこの多孔体導電材料の骨格部の断面図である。図29AおよびBに示すように、この多孔体導電材料は、三次元網目状構造の多孔体材料からなる骨格79aと、この骨格79aの表面を被覆するカーボン系材料79bとからなり、このカーボン系材料79bの表面に、第3の実施形態と同様なリポソーム12が固定化されている。この多孔体導電材料は、カーボン系材料79bに囲まれた多数の孔80が網目に相当する三次元網目状構造を有する。この場合、これらの孔80同士は互いに連通している。カーボン系材料79bの形態は問わず、繊維状(針状)、粒状などのいずれであってもよい。
【0096】
多孔体材料からなる骨格79aとしては、発泡金属あるいは発泡合金、例えば発泡ニッケルが用いられる。この骨格79aの多孔率は一般的には85%以上、あるいは90%以上であり、その孔径は、一般的には例えば10nm〜1mm、あるいは10nm〜600μm、あるいは1〜600μm、典型的には50〜300μm、より典型的には100〜250μmである。カーボン系材料79bとしては、例えばケッチェンブラックなどの高導電性のものが好ましいが、カーボンナノチューブやフラーレンなどの機能性カーボン材料を用いてもよい。
この多孔体導電材料の多孔率は一般的には80%以上、あるいは90%以上であり、孔80の径は、一般的には例えば9nm〜1mm、あるいは9nm〜600μm、あるいは1〜600μm、典型的には30〜400μm、より典型的には80〜230μmである。
【0097】
次に、この多孔体導電材料の製造方法について説明する。
図30Aに示すように、まず、発泡金属あるいは発泡合金(例えば、発泡ニッケル)からなる骨格79aを用意する。
次に、図30Bに示すように、この発泡金属あるいは発泡合金からなる骨格79aの表面にカーボン系材料79bをコーティングする。このコーティング方法としては従来公知の方法を用いることができる。一例を挙げると、カーボン粉末や適当な結着剤などを含むエマルションをスプレーにより骨格79aの表面に噴射することによりカーボン系材料79bをコーティングする。このカーボン系材料79bのコーティング厚さは、発泡金属あるいは発泡合金からなる骨格79aの多孔率および孔径との兼ね合いで、多孔体導電材料に要求される多孔率および孔径に応じて決められる。このコーティングの際には、カーボン系材料79bに囲まれた多数の孔80同士が互いに連通するようにする。
こうして、目的とする多孔体導電材料が製造される。この後、この多孔体導電材料のカーボン系材料79bの表面にリポソーム12を固定化する。
上記以外のことは第3の実施形態と同様である。
【0098】
この第8の実施形態によれば、第3の実施形態と同様な利点に加えて次のような利点を得ることができる。すなわち、発泡金属あるいは発泡合金からなる骨格79aの表面をカーボン系材料79bにより被覆した多孔体導電材料は、孔80の径が十分に大きく、粗な三次元網目状構造を有しながら、高強度でしかも高い導電性を有し、必要十分な表面積を得ることもできる。このため、この多孔体導電材料を電極材に用い、これに酵素、補酵素および電子メディエーターを固定化することで得られる酵素/補酵素/電子メディエーター固定化電極からなる負極21は、その上での酵素代謝反応を高効率に行わせることができ、あるいは、電極の近傍で起こっている酵素反応現象を効率よく電気信号として捉えることが可能であり、しかも使用環境によらずに安定であり、高性能のバイオ燃料電池を実現することが可能である。
【0099】
次に、この発明の第9の実施形態によるバイオリアクターについて説明する。このバイオリアクターは、第1または第2の実施形態による酵素固定化電極を用いたものである。図31はこのバイオリアクターを示す。
図31に示すように、このバイオリアクターにおいては、反応槽81内に反応溶液82が入れられており、その中にワーキング電極83、参照電極84および対向電極85が浸漬されている。ワーキング電極83としては、第1または第2の実施形態による酵素固定化電極が用いられる。参照電極84と対向電極85との間には定電圧発生装置86が接続されており、参照電極84が一定電圧に保持されるようになっている。ワーキング電極83は、定電圧発生装置86の参照電極84が接続された端子に接続されている。
このバイオリアクターにおいては、基質(例えば、アルコール、グルコースなど)をワーキング電極83に送り込み、酵素反応を起こさせて所望の生成物を生成する。
【0100】
この第9の実施形態によれば、酵素反応に必要な酵素群および補酵素が封入されたリポソーム12を電極11上に固定化した酵素固定化電極を用いていることにより、酵素反応をリポソーム12の内部の微小な空間を反応場として効率的に行うことができ、所望の生成物を効率的に得ることができるとともに、酵素などをポリイオンコンプレックスなどにより電極11上に直接固定化する場合に比べて固定化を簡単に行うことができる。このように電極として用いられる酵素固定化電極が高効率であることにより、高効率のバイオリアクターを実現することができる。また、三種類以上の酵素を用いる必要がある場合、リポソーム12の内部に三種類以上の酵素を封入することにより、このような要求も満たすことができる。
【0101】
以上、この発明の実施形態について具体的に説明したが、この発明は、上述の実施形態に限定されるものではなく、この発明の技術的思想に基づく各種の変形が可能である。
例えば、上述の実施形態において挙げた数値、構造、構成、形状、材料などはあくまでも例に過ぎず、必要に応じてこれらと異なる数値、構造、構成、形状、材料などを用いてもよい。また、必要に応じて、第4〜第8の実施形態のいずれか二つ以上を組み合わせてもよい。
【図面の簡単な説明】
【0102】
【図1】この発明の第1の実施形態による酵素固定化電極を示す略線図である。
【図2】この発明の第1の実施形態による酵素固定化電極において用いられる酵素および補酵素が封入されたリポソームを示す略線図である。
【図3】この発明の第1の実施形態による酵素固定化電極においてリポソームに封入された酵素群および補酵素による電子の受け渡し反応を模式的に示す略線図である。
【図4】この発明の実施例において蛍光ラベル化したアルコールデヒドロゲナーゼ、蛍光ラベル化したジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームの蛍光顕微鏡像を示す図面代用写真である。
【図5】この発明の実施例において蛍光ラベル化したアルコールデヒドロゲナーゼ、蛍光ラベル化したジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームの蛍光顕微鏡像を示す図面代用写真である。
【図6】この発明の実施例において蛍光ラベル化したアルコールデヒドロゲナーゼ、蛍光ラベル化したジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームの蛍光顕微鏡像を示す図面代用写真である。
【図7】この発明の実施例において蛍光ラベル化したアルコールデヒドロゲナーゼ、蛍光ラベル化したジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームを蛍光モニタリングした結果を示す略線図である。
【図8】この発明の実施例において蛍光ラベル化したアルコールデヒドロゲナーゼ、蛍光ラベル化したジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームを蛍光モニタリングした結果を示す略線図である。
【図9】この発明の実施例において蛍光ラベル化したアルコールデヒドロゲナーゼ、蛍光ラベル化したジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームを蛍光モニタリングした結果を示す略線図である。
【図10】この発明の実施例においてリポソームの安定性を説明するための略線図である。
【図11】この発明の実施例においてアルコールデヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームを所定の溶液中に分散させた場合ならびにアルコールデヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼおよびNADHを単に所定の溶液中に分散させた場合に行ったクロノアンペロメトリーの結果を示す略線図である。
【図12】この発明の実施例においてアルコールデヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームを緩衝液中に分散させた状態を示す略線図である。
【図13】この発明の実施例においてアルコールデヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼおよびNADHを単に緩衝液中に分散させた状態を示す略線図である。
【図14】この発明の第2の実施形態による酵素固定化電極を示す略線図である。
【図15】この発明の第2の実施形態による酵素固定化電極において用いられる酵素および補酵素が封入され、トランスポーターが組み込まれたリポソームを示す略線図である。
【図16】この発明の第2の実施形態による酵素固定化電極においてリポソームに封入された酵素群および補酵素による電子の受け渡し反応を模式的に示す略線図である。
【図17】この発明の第3の実施形態によるバイオ燃料電池を示す略線図である。
【図18】この発明の第3の実施形態によるバイオ燃料電池の負極の構成の詳細ならびにこの負極に固定化されたリポソームに封入された酵素群および補酵素の一例およびこの酵素群および補酵素による電子の受け渡し反応を模式的に示す略線図である。
【図19】この発明の第3の実施形態によるバイオ燃料電池の具体的な構成例を示す略線図である。
【図20】この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池を示す上面図、断面図および裏面図である。
【図21】この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池を示す分解斜視図である。
【図22】この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池の製造方法を説明するための略線図である。
【図23】この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池の使用方法の第1の例を説明するための略線図である。
【図24】この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池の使用方法の第2の例を説明するための略線図である。
【図25】この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池の使用方法の第3の例を説明するための略線図である。
【図26】この発明の第6の実施形態によるバイオ燃料電池およびその使用方法を示す略線図である。
【図27】この発明の第7の実施形態によるバイオ燃料電池を示す正面図および縦断面図である。
【図28】この発明の第7の実施形態によるバイオ燃料電池を示す分解斜視図である。
【図29】この発明の第8の実施形態によるバイオ燃料電池において負極の電極材料に用いる多孔体導電材料の構造を説明するための略線図および断面図である。
【図30】この発明の第8の実施形態によるバイオ燃料電池において負極の電極材料に用いる多孔体導電材料の製造方法を説明するための略線図である。
【図31】この発明の第9の実施形態によるバイオリアクターを示す略線図である。
【符号の説明】
【0103】
11…電極、12…リポソーム、13、14…酵素、15…補酵素、16…トランスポーター、21…負極、22…正極、23…電解質層、41、42…Ti集電体、43、44…固定板、47…負荷
【技術分野】
【0001】
この発明は、燃料電池、燃料電池の製造方法、電子機器、酵素固定化電極、バイオセンサー、バイオリアクター、エネルギー変換素子および酵素反応利用装置に関し、例えば、酵素を用いたバイオ燃料電池、バイオセンサーおよびバイオリアクターならびにバイオ燃料電池を電源に用いた各種の電子機器に適用して好適なものである。
【背景技術】
【0002】
燃料電池は、正極(酸化剤極)と負極(燃料極)とが電解質(プロトン伝導体)を介して対向した構造を有する。従来の燃料電池では、負極に供給された燃料(水素)が酸化されて電子とプロトン(H+ )とに分離し、電子は負極に渡され、H+ は電解質を通って正極まで移動する。正極では、このH+ が、外部から供給された酸素および負極から外部回路を通って送られた電子と反応してH2 Oを生成する。
【0003】
このように、燃料電池は燃料の持つ化学エネルギーを直接電気エネルギーに変換する高効率な発電装置であり、天然ガス、石油、石炭などの化石エネルギーが持つ化学エネルギーを使用場所や使用時によらずに、しかも高い変換効率で電気エネルギーとして取り出すことができる。このため、従来から大規模発電用途などとしての燃料電池の開発研究が活発に行われている。例えば、スペースシャトルに燃料電池が搭載され、電力と同時に乗組員用の水を補給できることや、クリーンな発電装置であることを証明した実績がある。
【0004】
さらに、近年、固体高分子型燃料電池など、室温から90℃程度の比較的低温の作動温度域を示す燃料電池が開発され、注目を集めている。このため、大規模発電用途のみならず、自動車の駆動用電源、パーソナルコンピュータやモバイル機器などのポータブル電源などの小型システムへの応用が模索されつつある。
このように、燃料電池は大規模発電から小規模発電まで幅広い用途が考えられ、高効率な発電装置として多くの注目を集めている。しかしながら、燃料電池では、燃料として通常、天然ガス、石油、石炭などを改質器により水素ガスに変換して用いており、限りある資源を消費するとともに、高温に加熱する必要があったり、白金(Pt)などの高価な貴金属の触媒を必要としたりするなど、種々の問題点がある。また、水素ガスやメタノールを直接燃料として用いる場合でも、その取り扱いには注意を要する。
【0005】
そこで、生物内で行われている生体代謝が高効率なエネルギー変換機構であることに着目し、これを燃料電池に適用する提案がなされている。ここでいう生体代謝には、微生物体細胞内で行われる呼吸、光合成などが含まれる。生体代謝は、発電効率が極めて高く、また、室温程度の穏やかな条件で反応が進行するという特長を兼ね備えている。
例えば、呼吸は、糖類、脂肪、タンパク質などの栄養素を微生物または細胞内に取り込み、これらの化学エネルギーを、数々の酵素反応ステップを有する解糖系およびクエン酸(TCA)回路を介して二酸化炭素(CO2 )を生成する過程でニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD+ )を還元して還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)とすることで酸化還元エネルギー、すなわち電気エネルギーに変換し、さらに電子伝達系においてこれらのNADHの電気エネルギーをプロトン勾配の電気エネルギーに直接変換するとともに酸素を還元し、水を生成する機構である。ここで得られた電気エネルギーは、アデノシン三リン酸(ATP)合成酵素を介して、アデノシン二リン酸(ADP)からATPを生成し、このATPは微生物や細胞が生育するために必要な反応に利用される。このようなエネルギー変換は、細胞質ゾルおよびミトコンドリアで行われている。
【0006】
また、光合成は、光エネルギーを取り込み、電子伝達系を介してニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADP+ )を還元して還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADPH)とすることで電気エネルギーに変換する過程で、水を酸化し酸素を生成する機構である。この電気エネルギーは、CO2 を取り込み炭素固定化反応に利用され、炭水化物の合成に利用される。
上述したような生体代謝を燃料電池に利用する技術としては、微生物中で発生した電気エネルギーを電子メディエーターを介して微生物外に取り出し、この電子を電極に渡すことで電流を得る微生物電池が報告されている(例えば、特許文献1参照。)。
【0007】
しかしながら、微生物および細胞には化学エネルギーから電気エネルギーへの変換といった目的の反応以外にも不要な反応が多く存在するため、上述した方法では望まない反応に化学エネルギーが消費されて十分なエネルギー変換効率が発揮されない。
そこで、酵素を用いて所望の反応のみを行う燃料電池(バイオ燃料電池)が提案されている(例えば、特許文献2〜11参照。)。このバイオ燃料電池は、燃料を酵素により分解してプロトンと電子とに分離するもので、燃料としてメタノールやエタノールのようなアルコール類あるいはグルコースのような単糖類あるいはデンプンのような多糖類を用いたものが開発されている。
【0008】
このバイオ燃料電池においては、電極に対する酵素の固定化・配列が非常に重要であることが分かっている。また、電子を伝達する役目を果たす電子メディエーターが酵素とともに有効に存在する必要性もあることが分かっている。従来の酵素の固定化方法は様々なものがあるが、その中でも本発明者らは、プラスに電荷を帯びたポリマーとマイナスに電荷を帯びたポリマーとを酵素と適当な割合で混合して多孔質カーボンなどからなる電極上に塗布することにより、電極との接着性を保ちつつ固定化膜を安定化させるポリイオンコンプレックス法やグルタルアルデヒド法を主体に開発してきた。
【0009】
【特許文献1】特開2000−133297号公報
【特許文献2】特開2003−282124号公報
【特許文献3】特開2004−71559号公報
【特許文献4】特開2005−13210号公報
【特許文献5】特開2005−310613号公報
【特許文献6】特開2006−24555号公報
【特許文献7】特開2006−49215号公報
【特許文献8】特開2006−93090号公報
【特許文献9】特開2006−127957号公報
【特許文献10】特開2006−156354号公報
【特許文献11】特開2007−12281号公報
【非特許文献1】秋吉一成、辻井薫監修、リポソーム応用の新展開「人口細胞の開発に向けて」、株式会社エヌ・ティー・エス、2005年6月1日発行
【非特許文献2】Biotechnology and Bioengineering,Vol.81,No.6,pp.695-704(2003)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【0010】
しかしながら、上述のポリイオンコンプレックスを用いる固定化方法は、酵素の物理化学的性質、特に電荷に大きく依存しており、外部溶液の変化、使用中の環境変化などにより固定化の状態が絶えず変化することが懸念され、固定化した酵素などが溶出しやすい。また、一般的に酵素は熱に対する耐性が低いが、バイオ燃料電池の実用化に向けて酵素を改変してゆく際に、酵素そのものの物理化学的性質が変わり、その都度、固定化膜作製方法の最適化を図る必要があり、煩雑である。さらに、燃料からより多くの電子を取り出したいときには、より多くの酵素が必要となるが、これらの酵素を固定化する場合、その固定化条件の最適化に多大な労力を費やすことになる。
【0011】
そこで、この発明が解決しようとする課題は、一種または複数種の酵素および補酵素を微小な空間に閉じ込め、この空間を反応場として酵素反応を行うことにより燃料から効率的に電子を取り出して電気エネルギーを発生させることができ、これらの酵素および補酵素の電極への固定化も容易に行うことができる燃料電池およびその製造方法、この燃料電池を用いた高性能の電子機器、この燃料電池に適用して好適な酵素固定化電極ならびに高効率のバイオセンサー、バイオリアクター、エネルギー変換素子および電極反応利用装置を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0012】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、バイオ燃料電池において、酵素反応に必要な酵素および補酵素を人工細胞であるリポソームに封入した場合には、同量の酵素および補酵素をリポソームに封入しないで用いる場合に比べて、酵素反応をはるかに効率的に行って極めて高い触媒電流を得たり、電極への固定化を容易にしたりすることができることを見出し、実験でその有効性を確認し、さらにこの手法の適用が可能な範囲について様々な観点から検討を行い、この発明を案出するに至った。また、この手法は、バイオ燃料電池だけでなく、酵素および補酵素を用いる各種の素子または装置に適用して好適なものである。
【0013】
酵素反応に必要な酵素および補酵素をリポソームに封入することにより酵素反応をはるかに効率的に行うことができ、極めて高い触媒電流を得ることができるという本発明者らが独自に得た知見は、従来の定説を覆すものである。すなわち、従来は、リポソーム内に封入された酵素を生体触媒として捉えたとき、リポソームを構成する脂質二重層に対する基質の透過速度が制限されるため、反応速度は低いと考えられていた。例えば、非特許文献1の第454頁右欄の2行目から6行目には「リポソーム内封入酵素を生体触媒として使用する際、脂質膜の高い透過選択性のため、リポソーム外水相に添加された親水性あるいは高分子量の基質に対するリポソーム内封入酵素の反応性が過度に制限されることが問題となる」と記載されている。また、非特許文献2の第695頁右欄下から8行目から下から5行目には「一般に、リポソーム内に封入された酵素の外部から添加された基質に対する反応性はリポソームの二重層を横断する基質透過性に著しく依存する」と記載されている。
【0014】
すなわち、上記課題を解決するために、第1の発明は、
正極と負極とがプロトン伝導体を介して対向した構造を有し、酵素および補酵素を用いて燃料から電子を取り出すように構成され、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されている燃料電池である。
【0015】
第2の発明は、
正極と負極とがプロトン伝導体を介して対向した構造を有し、酵素および補酵素を用いて燃料から電子を取り出す燃料電池を製造する場合に、少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素をリポソームに封入する工程を有する燃料電池の製造方法である。
【0016】
第1および第2の発明において、リポソームは、リン脂質などからなる脂質二重層により形成された閉鎖小胞であり、内部が水相となっている。このリポソームには、一層の脂質二重層からなる単層リポソーム(SUV:小さな一枚膜リポソーム、GUV:巨大一枚膜リポソーム)だけでなく、小さなリポソーム(SUV)が大きいリポソーム(GUV)に取り込まれて入れ子になった多重層リポソーム(MUV)も含まれる。リポソームは、例えば、直径100nm程度のものから10μmに及ぶ大きなものまで作製することができ、直径は必要に応じて選ばれるが、具体例を挙げると2〜7μmである。リン脂質としては基本的にはどのようなものを用いてもよく、グリセロリン脂質、スフィンゴリン脂質のいずれを用いてもよい。グリセロリン脂質としては、ホスファチジン酸、ホスファチジルコリン(レシチン)、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール(カルジオリピン)などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。スフィンゴリン脂質としては、スフィンゴミエリンなどが挙げられるが、これに限定されるものではない。ホスファチジルコリンの代表例はジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)である。リポソームの形成およびリポソーム内部への酵素および補酵素の封入には従来公知の方法を用いることができる。
【0017】
このリポソームには、酵素反応に必要な酵素および補酵素のうち、少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素を封入するが、酵素反応に必要な全ての酵素および補酵素をリポソームに封入してもよいし、一部の酵素または補酵素をリポソームに封入せず、このリポソームを構成する脂質二重層に組み込んだり、固定化したり、リポソームの外部に存在させるようにしてもよい。酵素または補酵素をリポソームを構成する脂質二重層に固定化する場合には、例えばポリエチレングリコール鎖などのアンカーを用いることができる。
【0018】
使用する燃料が、リポソームを構成する脂質二重層を通過してリポソーム内部に取り込まれることが困難である場合には、この脂質二重層に燃料または燃料の分解生成物の輸送を行うトランスポーター(輸送タンパク質)を組み込むことができる。あるいは、脂質の種類、組成、粒子径などを適切に選択することによっても燃料の透過性を向上させることが可能である。
【0019】
このリポソームは、好適には負極に固定化されるが、必ずしも固定化する必要はなく、プロトン伝導体に緩衝液(緩衝物質)を含む電解質を用いるような場合にはその緩衝液に含ませるようにしてもよい。リポソームの固定には、例えば細胞の固定に用いられる従来公知の各種の固定化方法を用いることができる。また、この場合、負極に対するリポソームの固定を安定化するために、負極とリポソームとの間に中間層を形成してもよい。この中間層としては、タンパク質やDNAなどの生体高分子のみならず、親水、疎水の両方の性質を持つような高分子電解質や、ミセル、逆ミセル、ラメラなどの構造体を形成することができるものや、ナノメートル構造を持ち、一つまたは複数の性質を持つ化合物であって生体親和性の高い化合物を用いることができる。タンパク質としては、例えば、アルブミンを代表とした、アルコールデヒドロゲナーゼ、ラクテートデヒドロゲナーゼ、オボアルブミン、ミオキナーゼなどの酸性タンパク質のほか、等電点をアルカリ側に持つリゾチウム、チトクロームc、ミオグロビン、トリプシノーゲンなどを用いることができる。このようなタンパク質などからなる中間層を電極表面に物理的に吸着させ、この中間層にリポソームを固定化することにより、負極に対してリポソームを安定に固定化することが可能である。
【0020】
燃料(基質)としては、各種のものを用いることができ、必要に応じて選ばれるが、代表的なものを挙げると、メタノールやエタノールなどのアルコール、単糖類、多糖類などである。単糖類、多糖類などを燃料に用いる場合、典型的には、これらをリン酸緩衝液やトリス緩衝液などの従来公知の緩衝液に溶かした燃料溶液の形で用いる。
燃料としての基質と酵素との組み合わせの例を表1に示す。
【0021】
【表1】
【0022】
リポソームに封入する酵素は、典型的には、燃料の酸化を促進し分解する酸化酵素を含み、さらに、燃料の酸化に伴って還元された補酵素を酸化体に戻すとともに電子メディエーターを介して電子を負極に渡す補酵素酸化酵素を含む。
【0023】
電子メディエーターとしては基本的にはどのようなものを用いてもよいが、好適には、キノン骨格を有する化合物が用いられ、具体的には、例えば、2,3−ジメトキシ−5−メチル−1,4−ベンゾキノン(Q0)や、ナフトキノン骨格を有する化合物、例えば、2−アミノ−1,4−ナフトキノン(ANQ)、2−アミノ−3−メチル−1,4−ナフトキノン(AMNQ)、2−メチル−1,4−ナフトキノン(VK3)、2−アミノ−3−カルボキシ−1,4−ナフトキノン(ACNQ)、ビタミンK1などの各種のナフトキノン誘導体が用いられる。キノン骨格を有する化合物としては、例えば、アントラキノンやその誘導体を用いることもできる。電子メディエーターには、必要に応じて、キノン骨格を有する化合物以外に、電子メディエーターとして働く一種または二種以上の他の化合物を含ませてもよい。この電子メディエーターは、酵素および補酵素が封入されたリポソームとともに負極に固定化してもよいし、このリポソームの内部に封入してもよいし、このリポソームに固定してもよいし、燃料溶液に含ませるようにしてもよい。
【0024】
例えば、燃料としてアルコールを用いる場合には、リポソームに封入する酵素は、アルコールの酸化を促進し分解する酸化酵素と、この酸化酵素によって還元される補酵素を酸化体に戻す補酵素酸化酵素とを含む。この補酵素酸化酵素の作用により、補酵素が酸化体に戻るときに電子が生成され、補酵素酸化酵素から電子メディエーターを介して負極に電子が渡される。酸化酵素としては例えばアルコールデヒドロゲナーゼ(ADH)(特に、NAD依存型アルコールデヒドロゲナーゼ)が、補酵素としては例えばニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD+ )またはニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADP+ )が、補酵素酸化酵素としては例えばジアホラーゼ(DI)が用いられる。
【0025】
また、燃料としてグルコースのような単糖類を用いる場合には、好適には、リポソームに封入する酵素は、単糖類の酸化を促進し分解する酸化酵素と、この酸化酵素によって還元される補酵素を酸化体に戻す補酵素酸化酵素とを含む。この補酵素酸化酵素の作用により、補酵素が酸化体に戻るときに電子が生成され、補酵素酸化酵素から電子メディエーターを介して負極に電子が渡される。酸化酵素としては例えばグルコースデヒドロゲナーゼ(GDH)(特に、NAD依存型グルコースデヒドロゲナーゼ)が、補酵素としては例えばNAD+ またはNADP+ が、補酵素酸化酵素としては例えばDIが用いられる。リポソーム内部にグルコースを取り込むために、この場合、好適には、リポソームを構成する脂質二重層にグルコーストランスポーター(糖輸送担体)が組み込まれる。グルコーストランスポーターとしては従来公知の各種のものを用いることができ、必要に応じて選択される。例えば、リポソーム内外のグルコース濃度差に基づく促通拡散(促進拡散)機構によりグルコースの輸送を行う場合には、促通拡散を担うグルコーストランスポーターとして、六種類のアイソフォームGLUT1〜GLUT6やこれらの変異体を用いることができる。
【0026】
燃料として多糖類(広義の多糖類であり、加水分解によって2分子以上の単糖を生じる全ての炭水化物を指し、二糖、三糖、四糖などのオリゴ糖を含む)を用いる場合には、上記の酸化酵素、補酵素酸化酵素および補酵素に加えて、多糖類の加水分解などの分解を促進し、グルコースなどの単糖類を生成する分解酵素も用いる。この場合、例えば、上記の酸化酵素、補酵素酸化酵素および補酵素はリポソームに封入し、分解酵素は、リポソームを構成する脂質二重層に組み込むか、固定化するか、リポソームの外部に存在させるようにする。この分解酵素は、リポソームの外部に存在させる場合には、好適には負極に固定化されるが、必ずしも固定化する必要はなく、プロトン伝導体に緩衝液(緩衝物質)を含む電解質を用いるような場合にはその緩衝液に含ませるようにしてもよい。多糖類としては、具体的には、例えば、デンプン、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲン、セルロース、マルトース、スクロース、ラクトースなどが挙げられる。これらは単糖類が二つ以上結合したものであり、いずれの多糖類においても結合単位の単糖類としてグルコースが含まれている。なお、アミロースとアミロペクチンとはデンプンに含まれる成分であり、デンプンはアミロースとアミロペクチンとの混合物である。多糖類の分解酵素としてグルコアミラーゼを用い、単糖類を分解する酸化酵素としてグルコースデヒドロゲナーゼを用いた場合には、グルコアミラーゼによりグルコースにまで分解することができる多糖類、例えばデンプン、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲン、マルトースのいずれかを含むものであれば、これを燃料として発電することが可能となる。なお、グルコアミラーゼはデンプンなどのα−グルカンを加水分解しグルコースを生成する分解酵素であり、グルコースデヒドロゲナーゼはβ−D−グルコースをD−グルコノ−δ−ラクトンに酸化する酸化酵素である。
【0027】
分解酵素としてセルラーゼを用い、酸化酵素としてグルコースデヒドロゲナーゼを用いた燃料電池では、セルラーゼによりグルコースにまで分解することができるセルロースを燃料とすることができる。セルラーゼは、より詳しくはセルラーゼ(EC 3.2.1.4)、エキソセロビオヒドラーゼ(EC 3.2.1.91)、β−グルコシダーゼ(EC 3.2.1.21)などのいずれか少なくとも一種である。なお、分解酵素としてグルコアミラーゼとセルラーゼとを混合して用いてもよく、この場合には、自然界で生産される多糖類の大半を分解することができるため、これらを多く含むもの、例えば生ごみなどを燃料とすることが可能となる。
【0028】
また、分解酵素としてα−グルコシダーゼを用い、酸化酵素としてグルコースデヒドロゲナーゼを用いた燃料電池では、α−グルコシダーゼによりグルコースに分解されるマルトースを燃料とすることができる。
また、分解酵素としてスクラーゼを用い、酸化酵素としてグルコースデヒドロゲナーゼを用いた燃料電池では、スクラーゼによりグルコースとフルクトースとに分解されるスクロースを燃料とすることができる。スクラーゼは、より詳しくはα−グルコシダーゼ(EC 3.2.1.20)、スクロース−α−グルコシダーゼ(EC 3.2.1.48)、β−フルクトフラノシダーゼ(EC 3.2.1.26)などの少なくともいずれか一種である。
また、分解酵素としてβ−ガラクトシダーゼを用い、酸化酵素としてグルコースデヒドロゲナーゼを用いた燃料電池では、β−ガラクトシダーゼによりグルコースとガラクトースとに分解されるラクトースを燃料とすることができる。
必要に応じて、これらの燃料となる多糖類も負極上に固定化してもよい。
【0029】
特に、デンプンを燃料とする燃料電池では、デンプンを糊化してゲル状の固形化燃料としたものを用いることもできる。この場合、糊化したデンプンを例えば酵素および補酵素が封入されたリポソームが固定化された負極に接触させるか、あるいは負極上にこのリポソームなどとともに固定化する方法をとることができる。このようにすることにより、負極表面のデンプン濃度を、溶液中に溶解したデンプンを用いた場合よりも高い状態に保持することができ、酵素による分解反応がより速くなり、出力が向上するとともに、燃料の取り扱いが溶液の場合よりも容易で、燃料供給システムを簡素化することができ、しかも燃料電池を天地無用とする必要がないため、モバイル機器に用いたときに非常に有利である。
【0030】
正極に酵素が固定化される場合、この酵素は、典型的には酸素を還元する酵素を含む。この酸素を還元する酵素としては、例えば、ビリルビンオキシダーゼ、ラッカーゼ、アスコルビン酸オキシダーゼなどを用いることができる。この場合、正極には、好適には、酵素に加えて電子メディエーターも固定化される。電子メディエーターとしては、例えば、ヘキサシアノ鉄酸カリウム、オクタシアノタングステン酸カリウムなどを用いる。電子メディエーターは、好適には、十分に高濃度、例えば、平均値で0.64×10-6mol/mm2 以上固定化する。
【0031】
プロトン伝導体としては種々のものを用いることができ、必要に応じて選択されるが、具体的には、例えば、セロハン、パーフルオロカーボンスルホン酸(PFS)系の樹脂膜、トリフルオロスチレン誘導体の共重合膜、リン酸を含浸させたポリベンズイミダゾール膜、芳香族ポリエーテルケトンスルホン酸膜、PSSA−PVA(ポリスチレンスルホン酸ポリビニルアルコール共重合体)や、PSSA−EVOH(ポリスチレンスルホン酸エチレンビニルアルコール共重合体)、含フッ素カーボンスルホン酸基を有するイオン交換樹脂(ナフィオン(商品名、米国デュポン社)など)などからなるものが挙げられる。
【0032】
プロトン伝導体として緩衝液(緩衝物質)を含む電解質を用いる場合には、高出力動作時に十分な緩衝能を得ることができ、酵素が本来持っている能力を十分に発揮することができるようにするのが望ましい。このために、電解質に含まれる緩衝物質の濃度を0.2M以上2.5M以下にすることが有効であり、好適には0.2M以上2M以下、より好適には0.4M以上2M以下、さらに好適には0.8M以上1.2M以下とする。緩衝物質は、一般的には、pKa が6以上9以下のものであれば、どのようなものを用いてもよいが、具体例を挙げると、リン酸二水素イオン(H2 PO4 - )、2−アミノ−2−ヒドロキシメチル−1,3−プロパンジオール(略称トリス)、2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、カコジル酸、炭酸(H2 CO3 )、クエン酸水素イオン、N−(2−アセトアミド)イミノ二酢酸(ADA)、ピペラジン−N,N’−ビス(2−エタンスルホン酸)(PIPES)、N−(2−アセトアミド)−2−アミノエタンスルホン酸(ACES)、3−(N−モルホリノ)プロパンスルホン酸(MOPS)、N−2−ヒドロキシエチルピペラジン−N’−2−エタンスルホン酸(HEPES)、N−2−ヒドロキシエチルピペラジン−N’−3−プロパンスルホン酸(HEPPS)、N−[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]グリシン(略称トリシン)、グリシルグリシン、N,N−ビス(2−ヒドロキシエチル)グリシン(略称ビシン)などである。リン酸二水素イオン(H2 PO4 - )を生成する物質は、例えば、リン酸二水素ナトリウム(NaH2 PO4 )やリン酸二水素カリウム(KH2 PO4 )などである。緩衝物質としてはイミダゾール環を含む化合物も好ましい。イミダゾール環を含む化合物は、具体的には、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン誘導体、ビピリジン誘導体、イミダゾール誘導体(ヒスチジン、1−メチルイミダゾール、2−メチルイミダゾール、4−メチルイミダゾール、2−エチルイミダゾール、イミダゾール−2−カルボン酸エチル、イミダゾール−2−カルボキシアルデヒド、イミダゾール−4−カルボン酸、イミダゾール−4,5−ジカルボン酸、イミダゾール−1−イル−酢酸、2−アセチルベンズイミダゾール、1−アセチルイミダゾール、N−アセチルイミダゾール、2−アミノベンズイミダゾール、N−(3−アミノプロピル) イミダゾール、5−アミノ−2−(トリフルオロメチル) ベンズイミダゾール、4−アザベンズイミダゾール、4−アザ−2−メルカプトベンズイミダゾール、ベンズイミダゾール、1−ベンジルイミダゾール、1−ブチルイミダゾール)などである。必要に応じて、これらの緩衝物質に加えて、例えば、塩酸(HCl)、酢酸(CH3 COOH)、リン酸(H3 PO4 )および硫酸(H2 SO4 )からなる群より選ばれた少なくとも一種の酸を中和剤として加えてもよい。こうすることで、酵素の活性をより高く維持することができる。緩衝物質を含む電解質のpHは、好適には7付近であるが、一般的には1〜14のいずれであってもよい。
【0033】
正極および負極の電極材料としては各種のものを用いることができるが、例えば、多孔質カーボン、カーボンペレット、カーボンフェルト、カーボンペーパーなどのカーボン系材料が用いられる。電極の材料としては、多孔体材料からなる骨格と、この骨格の少なくとも一部の表面を被覆する、カーボン系材料を主成分とする材料とを含む多孔体導電材料を用いることもできる。この多孔体導電材料は、多孔体材料からなる骨格の少なくとも一部の表面に、カーボン系材料を主成分とする材料をコーティングすることにより得ることができる。この多孔体導電材料の骨格を構成する多孔体材料は、多孔率が高くても骨格を安定に維持することができるものであれば、基本的にはどのようなものであってもよく、導電性の有無も問わない。多孔体材料としては、好適には、高多孔率および高導電性を有する材料が用いられる。このような高多孔率および高導電性を有する多孔体材料としては、具体的には、金属材料(金属または合金)や骨格を強固にした(もろさを改善した)カーボン系材料などを用いることができる。多孔体材料として金属材料を用いる場合、金属材料は溶液のpHや電位などの使用環境との兼ね合いにより状態安定性が異なることから様々な選択肢が考えられるが、例えば、ニッケル、銅、銀、金、ニッケル−クロム合金、ステンレス鋼などの発泡金属あるいは発泡合金は入手しやすい材料の一つである。多孔体材料としては、上記の金属材料やカーボン系材料以外に樹脂材料(例えば、スポンジ状のもの)を用いることもできる。この多孔体材料の多孔率および孔径(孔の最小径)は、この多孔体材料からなる骨格の表面にコーティングする、カーボン系材料を主成分とする材料の厚さとの兼ね合いで、多孔体導電材料に要求される多孔率および孔径に応じて決められる。この多孔体材料の孔径は一般的には10nm〜1mm、典型的には10nm〜600μmである。一方、骨格の表面を被覆する材料は、導電性を有し、想定される作動電位において安定なものを用いる必要がある。ここでは、このような材料としてカーボン系材料を主成分とする材料を用いる。カーボン系材料は一般に電位窓が広く、しかも化学的に安定なものが多い。このカーボン系材料を主成分とする材料は、具体的には、カーボン系材料のみからなるものと、カーボン系材料を主成分とし、多孔体導電材料に要求される特性などに応じて選ばれる副材料を微量含む材料とがある。後者の材料の具体例を挙げると、カーボン系材料に金属などの高導電性材料を添加することにより電気伝導性を向上させた材料や、カーボン系材料にポリテトラフルオロエチレン系材料などを添加することにより表面撥水性を付与するなど、導電性以外の機能を付与した材料である。カーボン系材料にも様々な種類が存在するが、いかなるカーボン系材料であってもよく、カーボン単体のほか、カーボンに他の元素を添加したものであってもよい。このカーボン系材料は、特に、高導電性・高表面積を有する微細粉末カーボン材料が好ましい。このカーボン系材料としては、具体的には、例えば、KB(ケッチェンブラック)などの高導電性を付与したものや、カーボンナノチューブ、フラーレンなどの機能性カーボン材料などを用いることができる。このカーボン系材料を主成分とする材料のコーティング方法は、必要に応じて適当な結着剤を用いるなどして多孔体材料からなる骨格の表面にコーティング可能であれば、いかなるコーティング方法を用いてもよい。この多孔体導電材料の孔径は、その孔を通して基質などを含む溶液が容易に出入り可能な程度の大きさに選ばれ、一般的には9nm〜1mm、あるいは1μm〜1mm、あるいは1〜600μmである。多孔体材料からなる骨格の少なくとも一部の表面がカーボン系材料を主成分とする材料により被覆された状態、あるいは、多孔質材料からなる骨格の少なくとも一部の表面をカーボン系材料を主成分とする材料によりコーティングした状態では、孔が全て互いに連通し、あるいは、カーボン系材料を主成分とする材料による目詰まりが発生しないようにするのが望ましい。
【0034】
この燃料電池の全体構成は必要に応じて選ばれるが、例えば、コイン型またはボタン型の構成とする場合には、好適には、酸化剤が透過可能な構造を有する正極集電体と燃料が透過可能な構造を有する負極集電体との間に形成された空間の内部に、正極、電解質および負極が収納された構造とする。この場合、典型的には、正極集電体および負極集電体の一方の縁が絶縁性の密封部材を介して正極集電体および負極集電体の他方に対してかしめられることで、正極、電解質および負極を収納する空間が形成されるが、これに限定されるものではなく、必要に応じて他の加工方法によりこの空間を形成してもよい。正極集電体と負極集電体とは絶縁性の密封部材により互いに電気的に絶縁される。この絶縁性の密封部材としては、典型的には、シリコーンゴムなどの各種の弾性体からなるガスケットが用いられるが、これに限定されるものではない。これらの正極集電体および負極集電体の平面形状は必要に応じて選ぶことができるが、例えば、円形、楕円形、四角形、六角形などである。典型的には、正極集電体は一つまたは複数の酸化剤供給口を有し、負極集電体は一つまたは複数の燃料供給口を有するが、必ずしもこれに限定されるものではなく、例えば、正極集電体の材料として酸化剤が透過可能なものを用いたりすることにより酸化剤供給口を形成しないでもよく、負極集電体の材料として燃料が透過可能なものを用いたりすることにより燃料供給口を形成しないでもよい。負極集電体は、典型的には、燃料保持部を有する。この燃料保持部は負極集電体と一体に設けてもよいし、負極集電体に対して着脱自在に設けてもよい。燃料保持部は、典型的には、密閉用の蓋を有する。この場合、この蓋を外して燃料保持部に燃料を注入することができる。密閉用の蓋を用いないで、燃料保持部の側面などから燃料を注入するようにしてもよい。燃料保持部を負極集電体に対して着脱自在に設ける場合には、例えば、燃料保持部として、あらかじめ燃料が充填された燃料タンクや燃料カートリッジなどを取り付けてもよい。これらの燃料タンクや燃料カートリッジは、使い捨て形であってもよいが、資源の有効利用を図る観点より、燃料を充填することができるものが好ましい。また、使用済みの燃料タンクや燃料カートリッジを燃料が充填された燃料タンクや燃料カートリッジと交換してもよい。さらに、例えば、燃料保持部を燃料の供給口および排出口を有する密閉容器状に形成し、この供給口を介して外部から燃料を密閉容器内に連続的に供給することで燃料電池の連続使用が可能である。あるいは、燃料電池に燃料保持部を設けず、開放系の燃料タンクに入れられた燃料の上に燃料電池を負極側が下に、正極側が上になるようにして浮かべた状態で使用してもよい。
【0035】
この燃料電池は、所定の中心軸の周りに、負極、電解質、正極および酸化剤が透過可能な構造を有する正極集電体が順次設けられており、燃料が透過可能な構造を有する負極集電体が負極と電気的に接続されて設けられている構造としてもよい。この燃料電池において、負極は、断面形状が円、楕円、多角形などの筒状であってもよいし、断面形状が円、楕円、多角形などの柱状であってもよい。負極が筒状である場合、負極集電体は、例えば、負極の内周面側に設けてもよいし、負極と電解質との間に設けてもよいし、負極の少なくとも一端面に設けてもよいし、さらにはこれらの二箇所以上に設けてもよい。また、負極を燃料を保持することができるように構成し、例えば、負極を多孔質材料により形成し、この負極に燃料保持部を兼用させるようにしてもよい。あるいは、所定の中心軸上に柱状の燃料保持部を設けてもよい。この燃料保持部は、例えば、負極集電体が負極の内周面側に設けられる場合、この負極集電体により囲まれる空間そのものであってもよいし、この空間内に負極集電体とは別に設けられる燃料タンクや燃料カートリッジなどの容器であってもよく、この容器は着脱自在でも固定されたものでもよい。燃料保持部は、例えば、円柱状、楕円柱状、四角形、六角形などの多角柱状などであるが、これに限定されるものではない。電解質は、負極および負極集電体の全体を包み込むように袋状の容器に形成するようにしてもよい。こうすることで、燃料保持部に燃料を一杯に入れた場合、この燃料を負極の全体と接触させることができる。この容器のうちの少なくとも正極と負極との間に挟まれた部分を電解質により形成し、その他の部分はこの電解質と異なる材料により形成するようにしてもよい。この容器を燃料の供給口および排出口を有する密閉容器とし、この供給口を介して外部から燃料を容器内に連続的に供給することにより燃料電池の連続使用が可能である。負極としては、好適には、内部に燃料を十分に蓄えることができるようにするために、空隙率が大きいものが好ましく、例えば空隙率が60%以上のものが好ましい。
【0036】
正極および負極としてペレット電極を用いることもできる。このペレット電極は、カーボン系材料(特に、高導電性・高表面積を有する微細粉末カーボン材料が好ましい)、具体的には、例えば、KB(ケッチェンブラック)などの高導電性を付与したものや、カーボンナノチューブ、フラーレンなどの機能性カーボン材料などと、必要に応じてバインダー、例えばポリフッ化ビニリデンと、上述の酵素の粉末(あるいは酵素溶液)、補酵素の粉末(あるいは補酵素溶液)、電子メディエーターの粉末(あるいは電子メディエーター溶液)、固定化用のポリマーの粉末(あるいはポリマー溶液)などとを、めのう乳鉢などで混合し、適宜乾燥させたものを所定の形状にプレス加工することなどにより形成することができる。このペレット電極の厚さ(電極厚)も必要に応じて決められるが、一例を挙げると50μm程度である。例えば、コイン型の燃料電池を製造する場合には、上記のペレット電極形成用の材料を錠剤製造機により円形の形状(直径の一例を挙げると15mmであるが、直径はこれに限定されるものではなく、必要に応じて決められる)にプレス加工することによりペレット電極を形成することができる。このペレット電極を形成する場合、所要の電極厚とするためには、例えば、ペレット電極形成用の材料に占めるカーボン量やプレス圧などを制御する。コイン型の電池缶に正極または負極を挿入する場合、例えば、これらの正極または負極と電池缶との間に金属メッシュスペーサーを挿入することでそれらの電気的接触を取るのが好ましい。
【0037】
ペレット電極の製造方法としては、上記の方法以外に、例えば、カーボン系材料と、必要に応じてバインダーと、酵素固定化成分(酵素、補酵素、電子メディエーター、ポリマーなど)の混合溶液(水系あるいは有機溶媒混合溶液)とを集電体などに適宜塗布し、乾燥させ、全体をプレス加工した後、所望の電極サイズに切り分けるようにしてもよい。
この燃料電池はおよそ電力が必要なものすべてに用いることができ、大きさも問わないが、例えば、電子機器、移動体(自動車、二輪車、航空機、ロケット、宇宙船など)、動力装置、建設機械、工作機械、発電システム、コージェネレーションシステムなどに用いることができ、用途などによって出力、大きさ、形状、燃料の種類などが決められる。
【0038】
第3の発明は、
一つまたは複数の燃料電池を用い、
少なくとも一つの上記燃料電池が、
正極と負極とがプロトン伝導体を介して対向した構造を有し、酵素および補酵素を用いて燃料から電子を取り出すように構成され、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されているものである電子機器である。
【0039】
この電子機器は、基本的にはどのようなものであってもよく、携帯型のものと据え置き型のものとの双方を含むが、具体例を挙げると、携帯電話、モバイル機器(携帯情報端末機(PDA)など)、ロボット、パーソナルコンピュータ(デスクトップ型、ノート型の双方を含む)、ゲーム機器、カメラ一体型VTR(ビデオテープレコーダ)、車載機器、家庭電気製品、工業製品などである。
第3の発明においては、その性質に反しない限り、第1および第2の発明に関連して説明したことが成立する。
【0040】
第4の発明は、
少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素が封入されたリポソームが固定化されている酵素固定化電極である。
第4の発明においては、その性質に反しない限り、第1および第2の発明に関連して説明したことが成立する。
【0041】
第5の発明は、
酵素および補酵素を用い、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されているバイオセンサーである。
【0042】
第6の発明は、
酵素および補酵素を用い、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されているバイオリアクターである。
【0043】
第7の発明は、
少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素が封入されたリポソームを用いたエネルギー変換素子である。
ここで、このエネルギー変換素子は、燃料または基質が持つ化学エネルギーを酵素反応により電気エネルギーに変換する素子であり、上記の燃料電池、すなわちバイオ燃料電池はこのエネルギー変換素子の一種である。
【0044】
第8の発明は、
酵素および補酵素を用い、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されている酵素反応利用装置である。
この酵素反応利用装置には、上記の燃料電池、すなわちバイオ燃料電池のほか、バイオセンサー(グルコースセンサーなど)、バイオリアクターなどが含まれ、酵素としては個々の目的に応じたものが用いられる。
第5〜第8の発明においては、上記以外のことについては、その性質に反しない限り、第1および第2の発明に関連して説明したことが成立する。
【0045】
上述のように構成されたこの発明においては、酵素反応に関与する少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素が高活性を保ったままリポソームに封入されるので、このリポソームの内部の微小な空間を反応場として効率的に酵素反応が行われ、燃料または基質から効率的に電子を取り出すことができる。この場合、このリポソームの内部に封入された酵素および補酵素の濃度は極めて高く、従って酵素および補酵素の相互の間隔は極めて小さいため、これらの酵素および補酵素による触媒サイクルは極めて高速に進行し、酵素反応が高速に進行する。そして、このリポソームを負極または電極に固定化することにより、このリポソームの内部に封入された酵素および補酵素をこのリポソームを介して負極または電極に容易に固定化することができるので、燃料または基質から取り出された電子を確実に負極または電極に受け渡すことができる。この場合、リポソームの固定は、酵素や補酵素をポリイオンコンプレックスなどにより固定化する場合に比べて簡単に行うことができる。
【発明の効果】
【0046】
この発明によれば、酵素および補酵素が封入されたリポソームの内部の微小な空間を反応場として酵素反応を行うことができることにより燃料または基質から効率的に電子を取り出して電気エネルギーを発生させることができ、しかもこれらの酵素および補酵素の電極への固定化も容易な高効率の燃料電池を実現することができる。そして、このように高効率の燃料電池を用いることにより、高性能の電子機器などを実現することができる。また、同様に、高効率のバイオセンサー、バイオリアクター、エネルギー変換素子および酵素反応利用装置を実現することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【0047】
以下、この発明の実施形態について図面を参照しながら説明する。なお、実施形態の全図において、同一または対応する部分には同一の符号を付す。
図1はこの発明の第1の実施形態による酵素固定化電極を示す。
図1に示すように、この酵素固定化電極においては、多孔質カーボンなどからなる電極11の表面にリン脂質などの脂質二重層からなるリポソーム12が物理吸着などにより固定化されている。このリポソーム12の内部の水相に、目的とする酵素反応に関与する少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素が封入される。図2にこのリポソーム12の構造の詳細を示す。図2においては、リポソーム12の内部の水相12aに、二種類の酵素13、14および一種類の補酵素15が封入されているが、封入される酵素および補酵素の種類は適宜選択され、これに限定されるものではない。例えば、酵素13は燃料の酸化を促進し分解する酸化酵素、酵素14はこの燃料の酸化に伴って還元された補酵素15を酸化体に戻すとともに電子メディエーターを介して電子を電極11に渡す補酵素酸化酵素である。このリポソーム12の内部の水相12aには、これらの酵素13、14および補酵素15以外に、例えば電子メディエーターを封入してもよい。この電子メディエーターは、リポソーム12とともに電極11上に固定化してもよい。
【0048】
この酵素固定化電極は、例えば、酵素13、14および補酵素15が封入されたリポソーム12を作製した後、このリポソーム12を電極11上に固定化することにより製造することができる。より具体的には、例えば、酵素13を含む緩衝溶液、酵素14を含む緩衝溶液、補酵素15を含む緩衝溶液およびリポソーム12(内部に酵素13、14および補酵素15が封入されていないもの)を含む緩衝溶液をそれぞれ作製し、これらの緩衝溶液を混合した後、この混合溶液をゲルろ過カラムに通したりすることなどによりリポソーム12外の酵素13、14および補酵素15を除去する。
【0049】
図3にこの酵素固定化電極における酵素、補酵素および電子メディエーターによる電子の受け渡し反応の一例を模式的に示す。この例では、エチルアルコール(EtOH)の分解に関与する酵素がアルコールデヒドロゲナーゼ(ADH)、エチルアルコールの分解プロセスにおける酸化反応に伴って還元体が生成される補酵素がNAD+ 、補酵素の還元体であるNADHを酸化する補酵素酸化酵素がジアホラーゼ(DI)であり、補酵素酸化酵素から補酵素の酸化に伴って生じる電子を電子メディエーターが受け取って電極11に渡す。この場合、エチルアルコールは、リポソーム12を構成する脂質二重層を透過してリポソーム12の内部に入り、アルコールデヒドロゲナーゼによるこのエチルアルコールの分解によりアセトアルデヒドが生成され、このアセトアルデヒドがリポソーム12の外部に出る。電子メディエーターは、リポソーム12を構成する脂質二重層を出入りして電子伝達を行う。
【0050】
実施例について説明する。
ジアホラーゼ(DI)(EC 1.8.1.4、天野エンザイム製)を5mg秤量し、緩衝溶液(10mMリン酸緩衝液、pH7)1mLに溶解させ、DI酵素緩衝溶液(1)とした。
アルコールデヒドロゲナーゼ(ADH)(NAD依存型、EC 1.1.1.1、天野エンザイム製)を5mg秤量し、緩衝溶液(10mMリン酸緩衝液、pH7)1mLに溶解させ、ADH酵素緩衝溶液(2)とした。
上記の酵素を溶解させる緩衝溶液は直前まで冷蔵されていたものが好ましく、酵素緩衝溶液もできるだけ冷蔵保存しておくことが好ましい。
【0051】
NADH(シグマアルドリッチ製、N−8129)を35mg秤量し、緩衝溶液(10mMリン酸緩衝液、pH7)1mLに溶解させ、NADH緩衝溶液(3)とした。
2,3−ジメトキシ−5−メチル−1,4−ベンゾキノン(Q0)を15〜300mg秤量し、緩衝溶液(10mMリン酸緩衝液、pH7)1mLに溶解させ、Q0緩衝溶液(4)とした。
卵黄レシチン(Wako製)を100mg秤量し、緩衝溶液(10mMリン酸緩衝液、pH7)10mLに溶解させてホモジナイザーで均一化し、リポソーム緩衝溶液(5)とした。
上記のようにして作製した各種の溶液を、下記に示す量ずつ採取して混合し、凍結融解を3度繰り返した。
DI酵素緩衝溶液(1):50μL
ADH酵素緩衝溶液(2):50μL
NADH緩衝溶液(3):50μL
リポソーム緩衝溶液(5):50μL
上記の混合溶液をゲルろ過カラムに通し、リポソーム外の酵素およびNADHを除去する。ここで得たリポソーム溶液をADH、DI、NADH封入リポソーム溶液(6)とした。
【0052】
図4、図5および図6は、シアニン色素Cy2で蛍光ラベル化したADH、シアニン色素Cy3で蛍光ラベル化したDIおよびNADHを封入したリポソームの蛍光顕微鏡写真である。図4、図5および図6において、Ex(Excitation) は励起光を示し、Exの右に記載されている波長を有し、DM(Dichroic mirror)は励起光と蛍光を分離するミラーを示し、DMの右に記載されている波長以上の光のみを透過し、BA(Barrier filter)
は蛍光と散乱光を分離するフィルターを示し、BAの右に記載されている波長以上の光を透過する。この蛍光顕微鏡では、励起光により色素を励起し、それによって得られる光をDMおよびBAに順次通して不要な光を除去し、色素からの蛍光のみを検出する。図4は波長450〜490nmの励起光でCy2を励起して蛍光を発生させたものでADHの分布を示す。図5は波長510〜560nmの励起光でCy3を励起して蛍光を発生させたものでDIの分布を示す。図6は波長380〜420nmの励起光でNADHを励起して蛍光を発生させたものでNADHの分布を示す。
【0053】
図4、図5および図6より、リポソームの直径は平均4.6μm、標準偏差は2.0μmであった。ただし、リポソームの平均直径は、図4、図5および図6中の30個のリポソームの直径を測定し、それらの平均を取ることにより求めた。
【0054】
図7、図8および図9は、Cy2で蛍光ラベル化したADH、Cy3で蛍光ラベル化したDIおよびNADHを封入したリポソームを蛍光モニタリングした結果を示すグラフであり、図7はCy2で蛍光ラベル化したADHからの蛍光強度、図8はCy3で蛍光ラベル化したDIからの蛍光強度、図9はNADHからの蛍光強度を示す。図7、図8および図9において、Em(Emission)は励起光Exにより色素を励起した時に放出される光を示し、Emの右に記載されている波長を有し、Exの波長およびEmの波長の右の括弧内の数値は半値幅である。図7、図8および図9から分かるように、いずれの場合も、エチルアルコール濃度100mMまで蛍光強度は変化しなかった。つまり、少なくともエチルアルコール濃度100mMまではリポソームは安定で、リポソーム内部にADH、DIおよびNADHが確実に封入されていることが分かった。また、界面活性剤である0.3%TritonXを添加したところ、蛍光強度が増加した。これは、0.3%TritonXによりリポソームが破壊され、内部のADH、DIおよびNADHがリポソーム外に放出され、蛍光強度が増加したことを意味する。この時の様子をNADHを例に取って図10に示す。図10に示すように、リポソームの内部にNADHが封入されていた状態ではNADHによる蛍光強度は低いが、リポソームが破壊され、内部に封入されていたNADHがリポソームの外部に放出されるとNADHによる蛍光強度が増加する。
【0055】
こうして得たADH、DIおよびNADH封入リポソーム溶液(6)とQ0緩衝溶液(4)とを混合して総体積100μLの測定溶液を作製し、カーボンフェルトを作用電極とし、参照電極Ag|AgClに対して、0.3Vと電子メディエーターの酸化還元電位より十分高い電位に設定し、溶液攪拌下においてクロノアンペロメトリーを行った。クロノアンペロメトリー中に測定溶液に、エチルアルコールが終濃度1、10、100mMとなるよう添加したものを順次添加した。
【0056】
ADH、DIおよびNADH封入リポソームを含む上記測定溶液に上述のようにしてエチルアルコールを添加した際のクロノアンペロメトリーの結果を図11の曲線(a)に示す。この曲線(a)から明らかなように、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入した場合にはエチルアルコール由来の触媒電流が観察され、エチルアルコールの濃度が高くなるに従って触媒電流は増加する。すなわち、人工細胞であるADH、DIおよびNADH封入リポソームによる電気化学的触媒活性が観察された。一方、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入した場合と同量のADH、DIおよびNADHをリポソームに封入せず、単にQ0緩衝溶液(4)中に分散させた場合について、上記と同様にしてクロノアンペロメトリーを行った。その結果を図11の曲線(b)に示す。この曲線(b)から明らかなように、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入せず、単にQ0緩衝溶液(4)中に分散させた場合にはエチルアルコール由来の触媒電流はほとんど観測されない。例えば、エチルアルコールの濃度が100mMの場合で比較すると、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入せず、単にQ0緩衝溶液(4)中に分散させた場合に得られる触媒電流は、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入した場合に得られる触媒電流の約30分の1程度に過ぎない。このことから、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入した場合には、封入しない場合に比べてはるかに高い触媒電流を得ることができることが明らかである。
【0057】
このように、ADH、DIおよびNADHをリポソームに封入した場合には、封入しない場合に比べてはるかに高い触媒電流が得られる理由について説明する。図12に示すように、リポソーム12内にADH(横線を施した○で示す)、DI(縦線を施した○で示す)およびNADH(空白の○で示す)を封入したものが緩衝液S中に正方格子状に配列している場合を考える。一方、図13に示すように、図12に示すものと同じ体積の緩衝液S中に、図12に示すものと同じ量のADH(横線を施した○で示す)、DI(縦線を施した○で示す)およびNADH(空白の○で示す)が六方格子状に配列している場合を考える。緩衝液Sの体積は例えば100μL、リポソーム12の内部の体積は例えば約0.17μLである。ただし、リポソーム12の脂質二重層を構成するリン脂質は緩衝液S中に5.5×10-3μmol存在し、リポソーム12の内部の体積の合計はリポソーム1μmol当たりに換算すると30μL/μmolである。図13に示すようにADH、DIおよびNADHが緩衝液S中に単に分散されている場合におけるADH、DIおよびNADHの濃度に比べて、図12に示すようにリポソーム12内にADH、DIおよびNADHが封入されている場合におけるこれらのADH、DIおよびNADHの局所的な濃度は約600倍も高い。すなわち、リポソーム12内にADH、DIおよびNADHを封入することにより、これらのADH、DIおよびNADHの濃度を著しく高くすることができ、これらのADH、DIおよびNADHの相互の間隔を極めて小さくすることができる。このため、リポソーム12内では、ADH、DIおよびNADHによる触媒サイクルが極めて高速に進行し、図11に示すような結果が得られる。
【0058】
以上のように、この第1の実施形態によれば、リポソーム12の内部に酵素反応に必要な酵素および補酵素を封入し、このリポソーム12を電極11上に固定化している。このため、酵素反応をリポソーム12の内部の微小な空間を反応場として効率的に行うことができ、基質から効率的に電子を取り出し、電極11に受け渡すことができる。また、酵素などをポリイオンコンプレックスなどにより電極11上に直接固定化する場合に比べて固定化を簡単に行うことができる。
【0059】
図14はこの発明の第2の実施形態による酵素固定化電極を示す。
図14に示すように、この酵素固定化電極においては、第1の実施形態と同様に、電極11上にリポソーム12が物理吸着などにより固定化され、このリポソーム12の内部の水相に、目的とする酵素反応に関与する少なくとも一種類の酵素および少なくとも一種の補酵素が封入されていることに加えて、このリポソーム12を構成する脂質二重層にトランスポーター16が組み込まれている。図15にこのリポソーム12の構造の詳細を示す。トランスポーター16は、酵素反応の基質が、リポソーム12を構成する脂質二重層を通って内部に取り込まれにくい場合にこの基質を輸送するためのものであり、基質に応じて適宜選択されたものが用いられる。例えば、基質がグルコースである場合は、トランスポーター16としてグルコーストランスポーターが用いられる。
この酵素固定化電極の上記以外のことは第1の実施形態と同様である。
【0060】
図16にこの酵素固定化電極における酵素、補酵素および電子メディエーターによる電子の受け渡し反応の一例を模式的に示す。この例では、リポソーム12に組み込まれたトランスポーター16がグルコーストランスポーター、グルコースの分解に関与する酵素がグルコースデヒドロゲナーゼ(GDH)、グルコースの分解プロセスにおける酸化反応に伴って還元体が生成される補酵素がNAD+ 、補酵素の還元体であるNADHを酸化する補酵素酸化酵素がジアホラーゼ(DI)であり、補酵素酸化酵素から補酵素の酸化に伴って生じる電子を電子メディエーターが受け取って電極11に渡す。
この第2の実施形態によれば、第1の実施形態と同様な利点を得ることができる。
【0061】
次に、この発明の第3の実施形態について説明する。この第3の実施形態においては、バイオ燃料電池の負極として、第2の実施形態による酵素固定化電極を用いる。
図17はこのバイオ燃料電池を模式的に示す。このバイオ燃料電池では、燃料としてグルコースを用いるものとする。図18は、このバイオ燃料電池の負極の構成の詳細ならびにこの負極に固定化されたリポソーム12に封入された酵素群および補酵素の一例およびこの酵素群および補酵素による電子の受け渡し反応を模式的に示す。
【0062】
図17および図18に示すように、このバイオ燃料電池は、負極21と正極22とが電解質層23を介して対向した構造を有する。負極21は、燃料として供給されたグルコースを酵素により分解し電子を取り出すとともにプロトン(H+ )を発生する。正極22は、負極21から電解質層23を通って輸送されたプロトンと負極21から外部回路を通って送られた電子と例えば空気中の酸素とにより水を生成する。
【0063】
負極21は、例えば多孔質カーボンなどからなる電極11(図18参照)上に、グルコースの分解に関与する酵素と、グルコースの分解プロセスにおける酸化反応に伴って還元体が生成される補酵素(例えば、NAD+ )と、補酵素の還元体(例えば、NADH)を酸化する補酵素酸化酵素(例えば、ジアホラーゼ(DI))とが封入されたリポソーム12が固定化され、必要に応じてこれに加えて、補酵素酸化酵素から補酵素の酸化に伴って生じる電子を受け取って電極11に渡す電子メディエーター(例えば、ACNQ)が、第2の実施形態による酵素固定化電極と同様に固定化されて構成されている。リポソーム12を構成する脂質二重層にはトランスポーター16としてグルコーストランスポーターが組み込まれているが、図18においては図示が省略されている。
【0064】
グルコースの分解に関与する酵素としては、例えば、グルコースデヒドロゲナーゼ(GDH)、好適にはNAD依存型グルコースデヒドロゲナーゼを用いることができる。この酸化酵素を存在させることにより、例えば、β−D−グルコースをD−グルコノ−δ−ラクトンに酸化することができる。
【0065】
さらに、このD−グルコノ−δ−ラクトンは、グルコノキナーゼとフォスフォグルコネートデヒドロゲナーゼ(PhGDH)との二つの酵素を存在させることにより、2−ケト−6−フォスフォ−D−グルコネートに分解することができる。すなわち、D−グルコノ−δ−ラクトンは、加水分解によりD−グルコネートになり、D−グルコネートは、グルコノキナーゼの存在下、アデノシン三リン酸(ATP)をアデノシン二リン酸(ADP)とリン酸とに加水分解することでリン酸化されて、6−フォスフォ−D−グルコネートになる。この6−フォスフォ−D−グルコネートは、酸化酵素PhGDHの作用により、2−ケト−6−フォスフォ−D−グルコネートに酸化される。
【0066】
また、グルコースは上記分解プロセスのほかに、糖代謝を利用してCO2 まで分解することもできる。この糖代謝を利用した分解プロセスは、解糖系によるグルコースの分解およびピルビン酸の生成ならびにTCA回路に大別されるが、これらは広く知られた反応系である。
単糖類の分解プロセスにおける酸化反応は、補酵素の還元反応を伴って行われる。この補酵素は作用する酵素によってほぼ定まっており、GDHの場合、補酵素にはNAD+ が用いられる。すなわち、GDHの作用によりβ−D−グルコースがD−グルコノ−δ−ラクトンに酸化されると、NAD+ がNADHに還元され、H+ を発生する。
【0067】
生成されたNADHは、ジアホラーゼ(DI)の存在下で直ちにNAD+ に酸化され、二つの電子とH+ とを発生する。したがって、グルコース1分子につき1段階の酸化反応で二つの電子と二つのH+ とが生成されることになる。2段階の酸化反応では、合計四つの電子と四つのH+ とが生成される。
上記プロセスで生成された電子はジアホラーゼから電子メディエーターを介して電極11に渡され、H+ は電解質層23を通って正極22へ輸送される。
【0068】
上記の酵素および補酵素が封入されたリポソーム12および電子メディエーターは、電極反応が効率よく定常的に行われるようにするために、電解質層23に含まれるリン酸緩衝液やトリス緩衝液などの緩衝液によって、酵素にとって最適なpH、例えばpH7付近に維持されていることが好ましい。リン酸緩衝液としては、例えばNaH2 PO4 やKH2 PO4 が用いられる。さらに、イオン強度(I.S.)は、あまり大きすぎても小さすぎても酵素活性に悪影響を与えるが、電気化学応答性も考慮すると、適度なイオン強度、例えば0.3程度であることが好ましい。ただし、pHおよびイオン強度は、用いる酵素それぞれに最適値が存在し、上述した値に限定されない。
【0069】
図18には、一例として、グルコースの分解に関与する酵素がグルコースデヒドロゲナーゼ(GDH)、グルコースの分解プロセスにおける酸化反応に伴って還元体が生成される補酵素がNAD+ 、補酵素の還元体であるNADHを酸化する補酵素酸化酵素がジアホラーゼ(DI)、補酵素酸化酵素から補酵素の酸化に伴って生じる電子を受け取って電極11に渡す電子メディエーターがACNQである場合が図示されている。
【0070】
正極22は、多孔質カーボン電極などに、例えばビリルビンオキシダーゼ、ラッカーゼ、アスコルビン酸オキシダーゼなどの酸素を分解する酵素を固定化したものである。この正極22の外側の部分(電解質層23と反対側の部分)は通常、多孔質カーボンよりなるガス拡散層により形成されるが、これに限定されるものではない。正極22には、好適には、酵素に加えて、この正極22との間で電子の受け渡しを行う電子メディエーターも固定化される。
この正極22においては、上記の酸素を分解する酵素の存在下で、電解質層23からのH+ と負極21からの電子とにより空気中の酸素を還元し水を生成する。
【0071】
電解質層23は負極21において発生したH+ を正極22に輸送するためのもので、電子伝導性を持たず、H+ を輸送することが可能な材料により構成されている。電解質層23としては、具体的には、例えば、セロハンなどの既に挙げたものが用いられる。
【0072】
以上のように構成されたバイオ燃料電池において、負極21側にグルコースが供給されると、このグルコースが酸化酵素を含む分解酵素により分解される。この単糖類の分解プロセスで酸化酵素が関与することで、負極21側で電子とH+ とを生成することができ、負極21と正極22との間で電流を発生させることができる。
【0073】
次に、バイオ燃料電池の具体的な構造例について説明する。
図19AおよびBに示すように、このバイオ燃料電池は、負極21と正極22とが電解質層23を介して対向した構成を有している。この場合、正極22の下および負極21の下にそれぞれTi集電体41、42が置かれ、集電を容易に行うことができるようになっている。符号43、44は固定板を示す。これらの固定板43、44はねじ45により相互に締結され、それらの間に、正極22、負極21、電解質層23およびTi集電体41、42の全体が挟み込まれている。固定板43の一方の面(外側の面)には空気取り込み用の円形の凹部43aが設けられ、この凹部43aの底面に他方の面まで貫通した多数の穴43bが設けられている。これらの穴43bは正極22への空気の供給路となる。一方、固定板44の一方の面(外側の面)には燃料装填用の円形の凹部44aが設けられ、この凹部44aの底面に他方の面まで貫通した多数の穴44bが設けられている。これらの穴44bは負極21への燃料の供給路となる。この固定板44の他方の面の周辺部にはスペーサー46が設けられており、固定板43、44をねじ45により相互に締結したときにそれらの間隔が所定の間隔になるようになっている。
図19Bに示すように、Ti集電体41、42の間に負荷47を接続し、固定板44の凹部44aに燃料として例えばリン酸緩衝液にグルコースを溶かしたグルコース溶液を入れて発電を行う。
【0074】
この第3の実施形態によれば、酵素反応に必要な酵素群および補酵素が封入され、かつトランスポーター16としてグルコーストランスポーターが組み込まれたリポソーム12を電極11上に固定化した酵素固定化電極を負極21として用いていることにより、酵素反応をリポソーム12の内部の微小な空間を反応場として効率的に行うことができ、燃料であるグルコースから効率的に電子を取り出し、電極11に受け渡すことができるとともに、酵素などをポリイオンコンプレックスなどにより電極11上に直接固定化する場合に比べて固定化を簡単に行うことができる。このように負極21として用いられる酵素固定化電極が高効率であることにより、高効率のバイオ燃料電池を実現することができる。また、バイオ燃料電池の高出力化のためには燃料であるグルコースから2電子よりも多くの電子を取り出す必要があり、このためには三種類以上の酵素が適切な位置に固定化された酵素固定化電極を負極21に用いる必要があるが、リポソーム12の内部に三種類以上の酵素を封入することによりこのような要求も満たすことができる。また、互いに異なる三種類以上の酵素が封入された多種類のリポソームを混在させることにより多種類の燃料への対応が容易になる。さらには、負極リポソームと正極リポソームとを配列させたマイクロバイオ燃料電池の実現も可能である。
【0075】
次に、この発明の第4の実施形態によるバイオ燃料電池について説明する。
このバイオ燃料電池においては、燃料として、多糖類であるデンプンを用いる。また、デンプンを燃料に用いることに伴い、負極21にデンプンをグルコースに分解する分解酵素であるグルコアミラーゼも固定化する。具体的には、例えば、グルコアミラーゼを電極11に直接固定化したり、リポソーム12に例えばポリエチレングリコール鎖などをアンカーとして固定化したりする。
【0076】
このバイオ燃料電池においては、負極21側に燃料としてデンプンが供給されると、このデンプンがグルコアミラーゼによりグルコースに加水分解され、さらにこのグルコースがグルコーストランスポーターによりリポソーム12の内部に取り込まれてグルコースデヒドロゲナーゼにより分解され、この分解プロセスにおける酸化反応に伴ってNAD+ が還元されてNADHが生成され、このNADHがジアホラーゼにより酸化されて2個の電子とNAD+ とH+ とに分離する。したがって、グルコース1分子につき1段階の酸化反応で2個の電子と2個のH+ とが生成される。2段階の酸化反応では合計4個の電子と4個のH+ とが生成される。こうして発生する電子は負極21の電極11に渡され、H+ は電解質層23を通って正極22まで移動する。正極22では、このH+ が、外部から供給された酸素および負極21から外部回路を通って送られた電子と反応してH2 Oを生成する。
上記以外のことは第3の実施形態によるバイオ燃料電池と同様である。
この第4の実施形態によれば、第3の実施形態と同様な利点を得ることができるほか、デンプンを燃料に用いていることにより、グルコースを燃料に用いる場合に比べて発電量を増加させることができるという利点を得ることができる。
【0077】
次に、この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池について説明する。
図20A、BおよびCならびに図21はこのバイオ燃料電池を示し、図20A、BおよびCはこのバイオ燃料電池の上面図、断面図および裏面図、図21はこのバイオ燃料電池の各構成要素を分解して示す分解斜視図である。
【0078】
図20A、BおよびCならびに図21に示すように、このバイオ燃料電池においては、正極集電体51と負極集電体52との間に形成された空間の内部に、正極22、電解質層23および負極21が、その上下を正極集電体51と負極集電体52とにより挟まれて収納されている。これらの正極集電体51、負極集電体52、正極22、電解質層23および負極21の隣同士のものは互いに密着している。この場合、これらの正極集電体51、負極集電体52、正極22、電解質層23および負極21は円形の平面形状を有し、このバイオ燃料電池の全体も円形の平面形状を有する。
【0079】
正極集電体51は、正極22で発生した電流を集めるためのものであり、この正極集電体51から外部に電流が取り出される。また、負極集電体52は、負極21で発生した電流を集めるためのものである。これらの正極集電体51および負極集電体52は、一般的には、金属や合金などにより形成されるが、これに限定されるものではない。正極集電体51は偏平でほぼ円筒状の形状を有する。負極集電体52も偏平でほぼ円筒状の形状を有する。そして、正極集電体51の外周部51aの縁が、例えばシリコーンゴムなどの絶縁性の材料からなるリング状のガスケット56aおよび例えばポリテトラフルオロエチレン(PTFE)などのリング状の疎水性樹脂56bを介して負極集電体52の外周部52aに対してかしめられることにより、正極22、電解質層23および負極21を収納する空間が形成されている。疎水性樹脂56bは正極22、正極集電体51およびガスケット56aにより囲まれた空間に、これらの正極22、正極集電体51およびガスケット56aに密着した状態で設けられている。この疎水性樹脂56bにより、燃料の正極22側への過剰な染み込みを効果的に抑制することができる。電解質層23の端部は正極22および負極21の外側に延在しており、ガスケット56aと疎水性樹脂56bとの間に挟まれている。正極集電体51は、その底面の全面に複数の酸化剤供給口51bを有し、これらの酸化剤供給口51bの内部に正極22が露出している。図21Cおよび図22には13個の円形の酸化剤供給口51bが図示されているが、これは一例に過ぎず、酸化剤供給口51bの個数、形状、大きさおよび配置とも適宜選ぶことができる。負極集電体52も、その上面の全面に複数の燃料供給口52bを有し、これらの燃料供給口52bの内部に負極21が露出している。図22には7個の円形の燃料供給口52bが図示されているが、これは一例に過ぎず、燃料供給口52bの個数、形状、大きさおよび配置とも適宜選ぶことができる。
【0080】
負極集電体52は負極21と反対側の面に円筒形状の燃料タンク57を有する。この燃料タンク57は負極集電体52と一体に形成されている。この燃料タンク57の中に、使用する燃料(図示せず)、例えば、グルコース溶液やこれにさらに電解質を加えたものなどが入れられる。この燃料タンク57には円筒形状の蓋58が取り外し可能に取り付けられている。この蓋58は、例えば、燃料タンク57に嵌め込まれ、あるいは、ねじ止めされるようになっている。この蓋58の中央部には円形の燃料供給口58aが形成されている。この燃料供給口58aは、例えば、図示省略した密封シールを貼り付けたりすることなどにより密封される。
このバイオ燃料電池の上記以外の構成は、その性質に反しない限り、第3の実施形態と同様である。
【0081】
次に、このバイオ燃料電池の製造方法の一例について説明する。この製造方法を図22A〜Dに示す。
図22Aに示すように、まず、一端が開放した円筒形状の正極集電体51を用意する。この正極集電体51の底面の全面には複数の酸化剤供給口51bが形成されている。この正極集電体51の内部の底面の外周部の上にリング状の疎水性樹脂56bを載せ、この底面の中央部の上に、正極22、電解質層23および負極21を順次重ねる。
【0082】
一方、図22Bに示すように、一端が開放した円筒形状の負極集電体52上に円筒形状の燃料タンク57を一体に形成したものを用意する。この負極集電体52には全面に複数の燃料供給口52bが形成されている。この負極集電体52の外周面の縁にU字状の断面形状のガスケット56aを取り付ける。そして、この負極集電体52をその開放部側を下にして負極21の上にかぶせ、正極集電体51とこの負極集電体52との間に、正極22、電解質層23および負極21を挟む。
【0083】
次に、図22Cに示すように、こうして正極集電体51と負極集電体52との間に正極22、電解質層23および負極21を挟んだものを、かしめ機の台61の上に載せ、押圧部材62により負極集電体52を押圧して正極集電体51、正極22、電解質層23、負極21および負極集電体52の隣同士を互いに密着させ、この状態でかしめ具63を下降させて正極集電体51の外周部51bの縁をガスケット56aおよび疎水性樹脂56bを介して負極集電体52の外周部52bに対してかしめる。このかしめを行う際には、ガスケット56aが徐々に潰れて正極集電体51とガスケット56aとの間および負極集電体52とガスケット56aとの間に隙間ができないようにする。また、この際、疎水性樹脂56bも徐々に圧縮されて正極22、正極集電体51およびガスケット56aと密着するようにする。こうすることで、正極集電体51と負極集電体52とがガスケット56aにより互いに電気的に絶縁された状態でそれらの内部に、正極22、電解質層23および負極21を収納する空間が形成される。この後、かしめ具63を上昇させる。
【0084】
こうして、図22Dに示すように、正極集電体51と負極集電体52との間に形成された空間の内部に正極22、電解質層23および負極21が収納されたバイオ燃料電池が製造される。
次に、燃料タンク57に蓋58を取り付け、この蓋58の燃料供給口58aより燃料および電解質を注入した後、この燃料供給口58aを密封シールを貼り付けたりすることにより閉じる。ただし、燃料および電解質は、図22Bに示す工程で燃料タンク57に注入してもよい。
【0085】
このバイオ燃料電池においては、燃料タンク57に入れる燃料として例えばグルコース溶液を用いる場合、負極21は、供給されたグルコースを酵素により分解して電子を取り出すとともに、H+ を発生する。正極22は、負極21からそれぞれ電解質層23を通って輸送されたH+ と負極21から外部回路を通って送られた電子と例えば空気中の酸素とにより水を生成する。そして、正極集電体51と負極集電体52との間に出力電圧が得られる。
【0086】
図23に示すように、このバイオ燃料電池の正極集電体51および負極集電体52にそれぞれメッシュ電極71、72を形成してもよい。この場合、メッシュ電極71の穴を通して外部の空気が正極集電体51の酸化剤供給口51bに入り、メッシュ電極72の穴を通って燃料が蓋58の燃料供給口58aから燃料タンク57に入る。
【0087】
図24は2個のバイオ燃料電池を直列接続した場合を示す。この場合、一方のバイオ燃料電池(図中、上のバイオ燃料電池)の正極集電体51と他方のバイオ燃料電池(図中、下のバイオ燃料電池)の蓋58との間にメッシュ電極73を挟む。この場合、メッシュ電極73の穴を通って外部の空気が正極集電体51の酸化剤供給口51bに入るようになっている。燃料の供給は燃料供給システムを用いて行うことも可能である。
【0088】
図25は2個のバイオ燃料電池を並列接続した場合を示す。この場合、一方のバイオ燃料電池(図中、上のバイオ燃料電池)の燃料タンク57と他方のバイオ燃料電池(図中、下のバイオ燃料電池)の燃料タンク57とをそれらの蓋58の燃料供給口58a同士が一致するように互いに接触させ、これらの燃料タンク57の側面から電極74を引き出す。また、上記一方のバイオ燃料電池の正極集電体51と上記他方のバイオ燃料電池の正極集電体51とにそれぞれメッシュ電極75、76を形成する。これらのメッシュ電極75、76は互いに接続する。メッシュ電極75、76の穴を通って外部の空気が正極集電体51の酸化剤供給口51bに入る。
【0089】
この第5の実施形態によれば、燃料タンク57を除くとコイン型またはボタン型のバイオ燃料電池において、第3の実施形態と同様な利点を得ることができる。また、このバイオ燃料電池においては、正極集電体51と負極集電体52との間に正極22、電解質層23および負極21を挟み、正極集電体51の外周部51aの縁をガスケット56を介して負極集電体52の外周部52aに対してかしめることにより、各構成要素同士を均一に密着させることができるので、出力のばらつきを防止することができるとともに、各構成要素間の界面から燃料や電解質などの電池溶液が漏液するのを防止することができる。また、このバイオ燃料電池は製造工程が簡単である。また、このバイオ燃料電池は小型化が容易である。さらに、このバイオ燃料電池は、燃料としてグルコース溶液やデンプンを用い、使用する電解質のpHを7付近(中性)に選ぶことにより、万が一、燃料や電解質が外部に漏れても、安全である。
また、現在実用化されている空気電池では燃料および電解質を製造時に添加する必要があり、製造後に添加することは困難であるのに対し、このバイオ燃料電池では、製造後に燃料および電解質を添加することが可能であるので、このバイオ燃料電池は現在実用化されている空気電池に比べて製造が容易である。
【0090】
次に、この発明の第6の実施形態によるバイオ燃料電池について説明する。
図26に示すように、この第6の実施形態においては、第5の実施形態によるバイオ燃料電池から、負極集電体52に一体に設けられた燃料タンク57を取り除き、さらに正極集電体51および負極集電体52にそれぞれメッシュ電極71、72を形成したものを用い、開放系の燃料タンク57に入れられた燃料57aの上にこのバイオ燃料電池を負極21側が下に、正極22側が上になるようにして浮かべた状態で使用する。
この第6の実施形態の上記以外のことは、その性質に反しない限り、第3および第5の実施形態と同様である。
この第6の実施形態によれば、第3および第5の実施形態と同様な利点を得ることができる。
【0091】
次に、この発明の第7の実施形態によるバイオ燃料電池について説明する。第5の実施形態によるバイオ燃料電池がコイン型またはボタン型であるのに対し、このバイオ燃料電池は円筒型である。
図27AおよびBならびに図28はこのバイオ燃料電池を示し、図27Aはこのバイオ燃料電池の正面図、図27Bはこのバイオ燃料電池の縦断面図、図28はこのバイオ燃料電池の各構成要素を分解して示す分解斜視図である。
【0092】
図27AおよびBならびに図28に示すように、このバイオ燃料電池においては、円柱状の燃料保持部77の外周に、それぞれ円筒状の負極集電体52、負極21、電解質層23、正極22および正極集電体51が順次設けられている。この場合、燃料保持部77は、円筒状の負極集電体52により囲まれた空間からなる。この燃料保持部77の一端は外部に突き出ており、この一端には蓋78が取り付けられている。図示は省略するが、燃料保持部77の外周の負極集電体52にはその面の全体に複数の燃料供給口52bが形成されている。また、電解質層23は負極21および負極集電体52を包む袋状になっている。電解質層23と燃料保持部77の一端の負極集電体52との間の部分は例えばシール部材(図示せず)などによりシールされており、この部分から燃料が外部に漏れないようになっている。
【0093】
このバイオ燃料電池においては、燃料保持部77に燃料および電解質を入れる。これらの燃料および電解質は負極集電体52の燃料供給口52bを通って負極21に到達し、この負極21の空隙部に浸透することにより、この負極21の内部に蓄えられるようになっている。負極21の内部に蓄えることができる燃料の量を多くするためには、負極21の空隙率は例えば60%以上とすることが望ましいが、これに限定されるものではない。
【0094】
このバイオ燃料電池においては、耐久性向上のために、正極集電体51の外周面に気液分離層を設けてもよい。この気液分離層の材料としては、例えば、防水性透湿性素材(ポリテトラフルオロエチレンを延伸加工したフィルムとポリウレタンポリマーとを複合化した素材)(例えば、WLゴア&アソシエイツ社製のゴアテックス(商品名))を用いる。このバイオ燃料電池の各構成要素同士を均一に密着させるために、好適には、この気液分離層の外側または内側に、外部から空気が透過可能な網目構造を有する伸縮性ゴム(バンド状でもシート状でも可)を巻き付けてこのバイオ燃料電池の構成要素の全体を締め付ける。
この第7の実施形態の上記以外のことは、その性質に反しない限り、第3および第5の実施形態と同様である。
この第7の実施形態によれば、第3および第5の実施形態と同様な利点を得ることができる。
【0095】
次に、この発明の第8の実施形態によるバイオ燃料電池について説明する。
この第8の実施形態によるバイオ燃料電池は、負極21の電極材に図29AおよびBに示すような多孔体導電材料を用いることを除いて、第3の実施形態によるバイオ燃料電池と同様な構成を有する。
図29Aはこの多孔体導電材料の構造を模式的に示し、図29Bはこの多孔体導電材料の骨格部の断面図である。図29AおよびBに示すように、この多孔体導電材料は、三次元網目状構造の多孔体材料からなる骨格79aと、この骨格79aの表面を被覆するカーボン系材料79bとからなり、このカーボン系材料79bの表面に、第3の実施形態と同様なリポソーム12が固定化されている。この多孔体導電材料は、カーボン系材料79bに囲まれた多数の孔80が網目に相当する三次元網目状構造を有する。この場合、これらの孔80同士は互いに連通している。カーボン系材料79bの形態は問わず、繊維状(針状)、粒状などのいずれであってもよい。
【0096】
多孔体材料からなる骨格79aとしては、発泡金属あるいは発泡合金、例えば発泡ニッケルが用いられる。この骨格79aの多孔率は一般的には85%以上、あるいは90%以上であり、その孔径は、一般的には例えば10nm〜1mm、あるいは10nm〜600μm、あるいは1〜600μm、典型的には50〜300μm、より典型的には100〜250μmである。カーボン系材料79bとしては、例えばケッチェンブラックなどの高導電性のものが好ましいが、カーボンナノチューブやフラーレンなどの機能性カーボン材料を用いてもよい。
この多孔体導電材料の多孔率は一般的には80%以上、あるいは90%以上であり、孔80の径は、一般的には例えば9nm〜1mm、あるいは9nm〜600μm、あるいは1〜600μm、典型的には30〜400μm、より典型的には80〜230μmである。
【0097】
次に、この多孔体導電材料の製造方法について説明する。
図30Aに示すように、まず、発泡金属あるいは発泡合金(例えば、発泡ニッケル)からなる骨格79aを用意する。
次に、図30Bに示すように、この発泡金属あるいは発泡合金からなる骨格79aの表面にカーボン系材料79bをコーティングする。このコーティング方法としては従来公知の方法を用いることができる。一例を挙げると、カーボン粉末や適当な結着剤などを含むエマルションをスプレーにより骨格79aの表面に噴射することによりカーボン系材料79bをコーティングする。このカーボン系材料79bのコーティング厚さは、発泡金属あるいは発泡合金からなる骨格79aの多孔率および孔径との兼ね合いで、多孔体導電材料に要求される多孔率および孔径に応じて決められる。このコーティングの際には、カーボン系材料79bに囲まれた多数の孔80同士が互いに連通するようにする。
こうして、目的とする多孔体導電材料が製造される。この後、この多孔体導電材料のカーボン系材料79bの表面にリポソーム12を固定化する。
上記以外のことは第3の実施形態と同様である。
【0098】
この第8の実施形態によれば、第3の実施形態と同様な利点に加えて次のような利点を得ることができる。すなわち、発泡金属あるいは発泡合金からなる骨格79aの表面をカーボン系材料79bにより被覆した多孔体導電材料は、孔80の径が十分に大きく、粗な三次元網目状構造を有しながら、高強度でしかも高い導電性を有し、必要十分な表面積を得ることもできる。このため、この多孔体導電材料を電極材に用い、これに酵素、補酵素および電子メディエーターを固定化することで得られる酵素/補酵素/電子メディエーター固定化電極からなる負極21は、その上での酵素代謝反応を高効率に行わせることができ、あるいは、電極の近傍で起こっている酵素反応現象を効率よく電気信号として捉えることが可能であり、しかも使用環境によらずに安定であり、高性能のバイオ燃料電池を実現することが可能である。
【0099】
次に、この発明の第9の実施形態によるバイオリアクターについて説明する。このバイオリアクターは、第1または第2の実施形態による酵素固定化電極を用いたものである。図31はこのバイオリアクターを示す。
図31に示すように、このバイオリアクターにおいては、反応槽81内に反応溶液82が入れられており、その中にワーキング電極83、参照電極84および対向電極85が浸漬されている。ワーキング電極83としては、第1または第2の実施形態による酵素固定化電極が用いられる。参照電極84と対向電極85との間には定電圧発生装置86が接続されており、参照電極84が一定電圧に保持されるようになっている。ワーキング電極83は、定電圧発生装置86の参照電極84が接続された端子に接続されている。
このバイオリアクターにおいては、基質(例えば、アルコール、グルコースなど)をワーキング電極83に送り込み、酵素反応を起こさせて所望の生成物を生成する。
【0100】
この第9の実施形態によれば、酵素反応に必要な酵素群および補酵素が封入されたリポソーム12を電極11上に固定化した酵素固定化電極を用いていることにより、酵素反応をリポソーム12の内部の微小な空間を反応場として効率的に行うことができ、所望の生成物を効率的に得ることができるとともに、酵素などをポリイオンコンプレックスなどにより電極11上に直接固定化する場合に比べて固定化を簡単に行うことができる。このように電極として用いられる酵素固定化電極が高効率であることにより、高効率のバイオリアクターを実現することができる。また、三種類以上の酵素を用いる必要がある場合、リポソーム12の内部に三種類以上の酵素を封入することにより、このような要求も満たすことができる。
【0101】
以上、この発明の実施形態について具体的に説明したが、この発明は、上述の実施形態に限定されるものではなく、この発明の技術的思想に基づく各種の変形が可能である。
例えば、上述の実施形態において挙げた数値、構造、構成、形状、材料などはあくまでも例に過ぎず、必要に応じてこれらと異なる数値、構造、構成、形状、材料などを用いてもよい。また、必要に応じて、第4〜第8の実施形態のいずれか二つ以上を組み合わせてもよい。
【図面の簡単な説明】
【0102】
【図1】この発明の第1の実施形態による酵素固定化電極を示す略線図である。
【図2】この発明の第1の実施形態による酵素固定化電極において用いられる酵素および補酵素が封入されたリポソームを示す略線図である。
【図3】この発明の第1の実施形態による酵素固定化電極においてリポソームに封入された酵素群および補酵素による電子の受け渡し反応を模式的に示す略線図である。
【図4】この発明の実施例において蛍光ラベル化したアルコールデヒドロゲナーゼ、蛍光ラベル化したジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームの蛍光顕微鏡像を示す図面代用写真である。
【図5】この発明の実施例において蛍光ラベル化したアルコールデヒドロゲナーゼ、蛍光ラベル化したジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームの蛍光顕微鏡像を示す図面代用写真である。
【図6】この発明の実施例において蛍光ラベル化したアルコールデヒドロゲナーゼ、蛍光ラベル化したジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームの蛍光顕微鏡像を示す図面代用写真である。
【図7】この発明の実施例において蛍光ラベル化したアルコールデヒドロゲナーゼ、蛍光ラベル化したジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームを蛍光モニタリングした結果を示す略線図である。
【図8】この発明の実施例において蛍光ラベル化したアルコールデヒドロゲナーゼ、蛍光ラベル化したジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームを蛍光モニタリングした結果を示す略線図である。
【図9】この発明の実施例において蛍光ラベル化したアルコールデヒドロゲナーゼ、蛍光ラベル化したジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームを蛍光モニタリングした結果を示す略線図である。
【図10】この発明の実施例においてリポソームの安定性を説明するための略線図である。
【図11】この発明の実施例においてアルコールデヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームを所定の溶液中に分散させた場合ならびにアルコールデヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼおよびNADHを単に所定の溶液中に分散させた場合に行ったクロノアンペロメトリーの結果を示す略線図である。
【図12】この発明の実施例においてアルコールデヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼおよびNADHを封入したリポソームを緩衝液中に分散させた状態を示す略線図である。
【図13】この発明の実施例においてアルコールデヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼおよびNADHを単に緩衝液中に分散させた状態を示す略線図である。
【図14】この発明の第2の実施形態による酵素固定化電極を示す略線図である。
【図15】この発明の第2の実施形態による酵素固定化電極において用いられる酵素および補酵素が封入され、トランスポーターが組み込まれたリポソームを示す略線図である。
【図16】この発明の第2の実施形態による酵素固定化電極においてリポソームに封入された酵素群および補酵素による電子の受け渡し反応を模式的に示す略線図である。
【図17】この発明の第3の実施形態によるバイオ燃料電池を示す略線図である。
【図18】この発明の第3の実施形態によるバイオ燃料電池の負極の構成の詳細ならびにこの負極に固定化されたリポソームに封入された酵素群および補酵素の一例およびこの酵素群および補酵素による電子の受け渡し反応を模式的に示す略線図である。
【図19】この発明の第3の実施形態によるバイオ燃料電池の具体的な構成例を示す略線図である。
【図20】この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池を示す上面図、断面図および裏面図である。
【図21】この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池を示す分解斜視図である。
【図22】この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池の製造方法を説明するための略線図である。
【図23】この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池の使用方法の第1の例を説明するための略線図である。
【図24】この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池の使用方法の第2の例を説明するための略線図である。
【図25】この発明の第5の実施形態によるバイオ燃料電池の使用方法の第3の例を説明するための略線図である。
【図26】この発明の第6の実施形態によるバイオ燃料電池およびその使用方法を示す略線図である。
【図27】この発明の第7の実施形態によるバイオ燃料電池を示す正面図および縦断面図である。
【図28】この発明の第7の実施形態によるバイオ燃料電池を示す分解斜視図である。
【図29】この発明の第8の実施形態によるバイオ燃料電池において負極の電極材料に用いる多孔体導電材料の構造を説明するための略線図および断面図である。
【図30】この発明の第8の実施形態によるバイオ燃料電池において負極の電極材料に用いる多孔体導電材料の製造方法を説明するための略線図である。
【図31】この発明の第9の実施形態によるバイオリアクターを示す略線図である。
【符号の説明】
【0103】
11…電極、12…リポソーム、13、14…酵素、15…補酵素、16…トランスポーター、21…負極、22…正極、23…電解質層、41、42…Ti集電体、43、44…固定板、47…負荷
【特許請求の範囲】
【請求項1】
正極と負極とがプロトン伝導体を介して対向した構造を有し、酵素および補酵素を用いて燃料から電子を取り出すように構成され、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されている燃料電池。
【請求項2】
上記リポソームが上記負極に固定化されている請求項1記載の燃料電池。
【請求項3】
上記負極に電子メディエーターが固定化されている請求項2記載の燃料電池。
【請求項4】
上記酵素が、燃料の酸化を促進し分解する酸化酵素を含む請求項3記載の燃料電池。
【請求項5】
上記酵素が、上記燃料の酸化に伴って還元された上記補酵素を酸化体に戻すとともに上記電子メディエーターを介して電子を上記負極に渡す補酵素酸化酵素を含む請求項4記載の燃料電池。
【請求項6】
上記補酵素の酸化体がNAD+ であり、上記補酵素酸化酵素がジアホラーゼである請求項5記載の燃料電池。
【請求項7】
上記酸化酵素がNAD依存型アルコールデヒドロゲナーゼである請求項6記載の燃料電池。
【請求項8】
上記プロトン伝導体が緩衝物質としてイミダゾール環を含む化合物を含む電解質からなる請求項7記載の燃料電池。
【請求項9】
上記イミダゾール環を含む化合物に塩酸、酢酸、リン酸および硫酸からなる群より選ばれた少なくとも一種の酸が添加されている請求項8記載の燃料電池。
【請求項10】
上記酵素が、単糖類の酸化を促進し分解する酸化酵素を含む請求項3記載の燃料電池。
【請求項11】
上記酵素が、上記単糖類の酸化に伴って還元された上記補酵素を酸化体に戻すとともに上記電子メディエーターを介して電子を上記負極に渡す補酵素酸化酵素を含む請求項10記載の燃料電池。
【請求項12】
上記補酵素の酸化体がNAD+ であり、上記補酵素酸化酵素がジアホラーゼである請求項11記載の燃料電池。
【請求項13】
上記酸化酵素がNAD依存型グルコースデヒドロゲナーゼである請求項12記載の燃料電池。
【請求項14】
上記リポソームを構成する脂質二重層にグルコーストランスポーターが組み込まれている請求項13記載の燃料電池。
【請求項15】
上記酵素が、上記リポソームを構成する脂質二重層に組み込まれるか固定化され、または、上記リポソームの外部に存在する、多糖類の分解を促進し単糖類を生成する分解酵素、および、生成した単糖類の酸化を促進し分解する酸化酵素を含む請求項3記載の燃料電池。
【請求項16】
上記分解酵素がグルコアミラーゼ、上記酸化酵素がNAD依存型グルコースデヒドロゲナーゼである請求項15記載の燃料電池。
【請求項17】
正極と負極とがプロトン伝導体を介して対向した構造を有し、酵素および補酵素を用いて燃料から電子を取り出す燃料電池を製造する場合に、少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素をリポソームに封入する工程を有する燃料電池の製造方法。
【請求項18】
一つまたは複数の燃料電池を用い、
少なくとも一つの上記燃料電池が、
正極と負極とがプロトン伝導体を介して対向した構造を有し、酵素および補酵素を用いて燃料から電子を取り出すように構成され、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されているものである電子機器。
【請求項19】
少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素が封入されたリポソームが固定化されている酵素固定化電極。
【請求項20】
酵素および補酵素を用い、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されているバイオセンサー。
【請求項21】
酵素および補酵素を用い、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されているバイオリアクター。
【請求項22】
少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素が封入されたリポソームを用いたエネルギー変換素子。
【請求項23】
酵素および補酵素を用い、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されている酵素反応利用装置。
【請求項1】
正極と負極とがプロトン伝導体を介して対向した構造を有し、酵素および補酵素を用いて燃料から電子を取り出すように構成され、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されている燃料電池。
【請求項2】
上記リポソームが上記負極に固定化されている請求項1記載の燃料電池。
【請求項3】
上記負極に電子メディエーターが固定化されている請求項2記載の燃料電池。
【請求項4】
上記酵素が、燃料の酸化を促進し分解する酸化酵素を含む請求項3記載の燃料電池。
【請求項5】
上記酵素が、上記燃料の酸化に伴って還元された上記補酵素を酸化体に戻すとともに上記電子メディエーターを介して電子を上記負極に渡す補酵素酸化酵素を含む請求項4記載の燃料電池。
【請求項6】
上記補酵素の酸化体がNAD+ であり、上記補酵素酸化酵素がジアホラーゼである請求項5記載の燃料電池。
【請求項7】
上記酸化酵素がNAD依存型アルコールデヒドロゲナーゼである請求項6記載の燃料電池。
【請求項8】
上記プロトン伝導体が緩衝物質としてイミダゾール環を含む化合物を含む電解質からなる請求項7記載の燃料電池。
【請求項9】
上記イミダゾール環を含む化合物に塩酸、酢酸、リン酸および硫酸からなる群より選ばれた少なくとも一種の酸が添加されている請求項8記載の燃料電池。
【請求項10】
上記酵素が、単糖類の酸化を促進し分解する酸化酵素を含む請求項3記載の燃料電池。
【請求項11】
上記酵素が、上記単糖類の酸化に伴って還元された上記補酵素を酸化体に戻すとともに上記電子メディエーターを介して電子を上記負極に渡す補酵素酸化酵素を含む請求項10記載の燃料電池。
【請求項12】
上記補酵素の酸化体がNAD+ であり、上記補酵素酸化酵素がジアホラーゼである請求項11記載の燃料電池。
【請求項13】
上記酸化酵素がNAD依存型グルコースデヒドロゲナーゼである請求項12記載の燃料電池。
【請求項14】
上記リポソームを構成する脂質二重層にグルコーストランスポーターが組み込まれている請求項13記載の燃料電池。
【請求項15】
上記酵素が、上記リポソームを構成する脂質二重層に組み込まれるか固定化され、または、上記リポソームの外部に存在する、多糖類の分解を促進し単糖類を生成する分解酵素、および、生成した単糖類の酸化を促進し分解する酸化酵素を含む請求項3記載の燃料電池。
【請求項16】
上記分解酵素がグルコアミラーゼ、上記酸化酵素がNAD依存型グルコースデヒドロゲナーゼである請求項15記載の燃料電池。
【請求項17】
正極と負極とがプロトン伝導体を介して対向した構造を有し、酵素および補酵素を用いて燃料から電子を取り出す燃料電池を製造する場合に、少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素をリポソームに封入する工程を有する燃料電池の製造方法。
【請求項18】
一つまたは複数の燃料電池を用い、
少なくとも一つの上記燃料電池が、
正極と負極とがプロトン伝導体を介して対向した構造を有し、酵素および補酵素を用いて燃料から電子を取り出すように構成され、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されているものである電子機器。
【請求項19】
少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素が封入されたリポソームが固定化されている酵素固定化電極。
【請求項20】
酵素および補酵素を用い、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されているバイオセンサー。
【請求項21】
酵素および補酵素を用い、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されているバイオリアクター。
【請求項22】
少なくとも一種の酵素および少なくとも一種の補酵素が封入されたリポソームを用いたエネルギー変換素子。
【請求項23】
酵素および補酵素を用い、
少なくとも一種の上記酵素および少なくとも一種の上記補酵素がリポソームに封入されている酵素反応利用装置。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【公開番号】特開2009−158458(P2009−158458A)
【公開日】平成21年7月16日(2009.7.16)
【国際特許分類】
【出願番号】特願2008−127888(P2008−127888)
【出願日】平成20年5月15日(2008.5.15)
【出願人】(000002185)ソニー株式会社 (34,172)
【Fターム(参考)】
【公開日】平成21年7月16日(2009.7.16)
【国際特許分類】
【出願日】平成20年5月15日(2008.5.15)
【出願人】(000002185)ソニー株式会社 (34,172)
【Fターム(参考)】
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