腫瘍特異性抗原ポリペプチド、および任意で、血管新生ポリペプチドを発現する組み換えリステリア株であって、これらのポリペプチドのうちの少なくとも１つをコードする核酸分子は、ＰＥＳＴ含有ポリペプチドをコードする核酸配列を伴うオープンリーディングフレームにおいてリステリアゲノムに機能可能に組み込まれる、組み換えリステリア株、それを調製する方法、ならびにそれを投与することを含む、免疫応答を誘導し、癌または腫瘍を治療、阻害、または抑制する方法を本明細書において提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の核酸分子と第２の核酸分子とを含む組み換えリステリア株であって、それぞれの前記核酸分子は、異種抗原ポリペプチドまたはその断片をコードし、前記第１の核酸分子は、内因性ＰＥＳＴ含有遺伝子を伴うオープンリーディングフレームにおいてリステリアゲノムに組み込まれる、組み換えリステリア株。
【請求項２】
前記組み換えリステリア株は、ファゴリソソームから抜け出ることが可能である、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項３】
前記第２の核酸分子は、前記内因性ＰＥＳＴ含有遺伝子を伴うオープンリーディングフレームにおいて、前記第１の核酸分子と共にリステリアゲノムに機能可能に組み込まれる、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項４】
前記組み換えリステリア株は、異種抗原をコードする前記第２の核酸分子を含むエピソーム発現ベクターを含む、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項５】
異種抗原をコードする前記第２の核酸分子は、ＰＥＳＴ含有ポリペプチドをコードする核酸配列を伴うオープンリーディングフレームにおける前記エピソーム発現ベクターに存在する、請求項４に記載の組み換えリステリア株。
【請求項６】
前記ＰＥＳＴ含有遺伝子は、ＬＬＯである、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項７】
前記ＰＥＳＴ含有遺伝子は、ＡｃｔＡである、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項８】
前記第１の核酸分子または前記第２の核酸分子は、腫瘍細胞によって発現されるポリペプチドをコードする、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項９】
前記第１の核酸分子または前記第２の核酸分子は、血管新生ポリペプチドをコードする、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項１０】
前記第１の核酸分子または前記第２の核酸分子は、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）をコードする、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項１１】
前記第１の核酸分子または前記第２の核酸分子は、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）をコードする、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項１２】
前記第１の核酸分子は、リステリアゲノムへの部位特異的相同的組み換えのために設計されるベクターである、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項１３】
前記断片は、免疫原性断片である、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項１４】
前記組み換えリステリア株は、栄養要求性リステリア株である、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項１５】
前記栄養要求性リステリア株は、ｄａｌ／ｄａｔ変異体である、請求項１４に記載の組み換えリステリア株。
【請求項１６】
前記栄養要求性リステリア株は、前記栄養要求性リステリア株の栄養要求性を補完する代謝酵素を含むエピソーム発現ベクターを含む、請求項１４に記載の組み換えリステリア株。
【請求項１７】
前記代謝酵素は、アミノ酸代謝酵素である、請求項１６に記載の組み換えリステリア株。
【請求項１８】
前記代謝酵素は、前記組み換えリステリア株における細胞壁合成のために使用されるアミノ酸の形成を触媒する、請求項１６に記載の組み換えリステリア株。
【請求項１９】
前記代謝酵素は、アラニンラセマーゼ酵素である、請求項１６に記載の組み換えリステリア株。
【請求項２０】
前記代謝酵素は、Ｄ−アミノ酸トランスフェラーゼ酵素である、請求項１６に記載の組み換えリステリア株。
【請求項２１】
前記組み換えリステリア株は、動物宿主に継代されている、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項２２】
前記組み換えリステリア株は、組み換えリステリアモノサイトゲネス株である、請求項１に記載の組み換えリステリア株。
【請求項２３】
請求項１に記載の組み換えリステリア株と、アジュバント、サイトカイン、ケモカイン、またはそれらの組み合わせとを含む、ワクチン。
【請求項２４】
組み換えリステリア株を対象に投与することを含む、前記対象における抗原に対する免疫応答を誘導する方法であって、前記組み換えリステリア株は、第１の核酸分子と第２の核酸分子とを含み、それぞれの前記核酸分子は、異種抗原ポリペプチドまたはその断片をコードし、前記第１の核酸分子は、内因性ＰＥＳＴ含有遺伝子を伴うオープンリーディングフレームにおいてリステリアゲノムに機能可能に組み込まれる、方法。
【請求項２５】
前記組み換えリステリア株は、ファゴリソソームから抜け出ることが可能である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記第２の核酸分子は、前記内因性ＰＥＳＴ含有遺伝子を伴うオープンリーディングフレームにおいて、前記第１の核酸分子と共にリステリアゲノムに機能可能に組み込まれる、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記組み換えリステリア株は、異種抗原をコードする前記第２の核酸分子を含むエピソーム発現ベクターを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
異種抗原をコードする前記第２の核酸分子は、ＰＥＳＴ含有ポリペプチドをコードする核酸配列を伴うオープンリーディングフレームにおける前記エピソーム発現ベクターに存在する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＰＥＳＴ含有遺伝子は、ＬＬＯである、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＰＥＳＴ含有遺伝子は、ＡｃｔＡである、請求項２４に記載の方法。
【請求項３１】
前記第１の核酸分子または前記第２の核酸分子は、腫瘍細胞によって発現されるポリペプチドをコードする、請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
前記第１の核酸分子または前記第２の核酸分子は、血管新生ポリペプチドをコードする、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
前記第１の核酸分子または前記第２の核酸分子は、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）をコードする、請求項２４に記載の方法。
【請求項３４】
前記第１の核酸分子または前記第２の核酸分子は、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）をコードする、請求項２４に記載の方法。
【請求項３５】
前記第１の核酸分子は、リステリアゲノムへの部位特異的相同的組み換えのために設計されるベクターである、請求項２４に記載の方法。
【請求項３６】
前記断片は、免疫原性断片である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３７】
前記組み換えリステリア株は、栄養要求性リステリア株である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３８】
前記栄養要求性リステリア株は、ｄａｌ／ｄａｔ変異体である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記栄養要求性リステリア株は、前記栄養要求性リステリア株の栄養要求性を補完する代謝酵素を含むエピソーム発現ベクターを含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記代謝酵素は、アミノ酸代謝酵素である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記代謝酵素は、前記組み換えリステリア株における細胞壁合成のために使用されるアミノ酸の形成を触媒する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記代謝酵素は、アラニンラセマーゼ酵素である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記代謝酵素は、Ｄ−アミノ酸トランスフェラーゼ酵素である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記組み換えリステリア株は、動物宿主に継代されている、請求項２４に記載の方法。
【請求項４５】
前記組み換えリステリア株は、組み換えリステリアモノサイトゲネス株である、．請求項２４に記載の方法。
【請求項４６】
前記組み換えリステリア株は、アジュバント、サイトカイン、ケモカイン、またはそれらの組み合わせと共に投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項４７】
前記組み換えリステリア株は、経口または非経口で投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項４８】
請求項１に記載の組み換えリステリア株を対象に投与することを含む、前記対象における癌を治療、抑制、または阻害する方法。
【請求項４９】
前記第１の核酸分子または前記第２の核酸分子は、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）をコードする、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記癌は、前立腺癌である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記癌は、卵巣癌、乳癌、またはそれらの組み合わせである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
前記第１の核酸分子または前記第２の核酸分子は、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）をコードする、請求項４８に記載の方法。
【請求項５３】
前記癌は、メラノーマである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記癌は、乳癌、脳癌、肺癌、消化管癌、肉腫、膵臓癌、またはそれらの組み合わせである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
請求項１に記載の組み換えリステリア株を対象に投与することを含む、前記対象における少なくとも１つの腫瘍を治療、抑制、または阻害する方法。
【請求項５６】
前記第１の核酸分子または前記第２の核酸分子は、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）をコードする、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記腫瘍は、前立腺腫瘍である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記腫瘍は、卵巣腫瘍、乳房腫瘍、またはそれらの組み合わせである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記第１の核酸分子または前記第２の核酸分子は、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）をコードする、請求項５５に記載の方法。
【請求項６０】
腫瘍は、乳房腫瘍である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記腫瘍は、脳腫瘍、肺腫瘍、消化管腫瘍、膵臓腫瘍、またはそれらの組み合わせである、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
異種抗原ポリペプチドまたはその断片をコードする核酸分子を含む組み換えリステリア株であって、前記核酸分子は、内因性ＰＥＳＴ含有遺伝子を伴うオープンリーディングフレームにおいてリステリアゲノムに機能可能に組み込まれる、組み換えリステリア株。
【請求項６３】
前記組み換えリステリア株は、ファゴリソソームから抜け出ることが可能である、請求項６２に記載の組み換えリステリア株。
【請求項６４】
前記ＰＥＳＴ含有遺伝子は、ＬＬＯである、請求項６２に記載の組み換えリステリア株。
【請求項６５】
前記ＰＥＳＴ含有遺伝子は、ＡｃｔＡである、請求項６２に記載の組み換えリステリア株。
【請求項６６】
前記核酸分子は、腫瘍細胞によって発現されるポリペプチドをコードする、請求項６２に記載の組み換えリステリア株。
【請求項６７】
前記核酸分子は、血管新生ポリペプチドをコードする、請求項６２に記載の組み換えリステリア株。
【請求項６８】
前記核酸分子は、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）をコードする、請求項６２に記載の組み換えリステリア株。
【請求項６９】
前記核酸分子は、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）をコードする、請求項６２に記載の組み換えリステリア株。
【請求項７０】
前記核酸分子は、リステリアゲノムへの部位特異的相同的組み換えのために設計されるベクターである、請求項６２に記載の組み換えリステリア株。
【請求項７１】
前記断片は、免疫原性断片である、請求項６２に記載の組み換えリステリア株。
【請求項７２】
前記組み換えリステリア株は、栄養要求性リステリア株である、請求項６２に記載の組み換えリステリア株。
【請求項７３】
前記栄養要求性リステリア株は、ｄａｌ／ｄａｔ変異体である、請求項６２に記載の組み換えリステリア株。
【請求項７４】
前記栄養要求性リステリア株は、前記栄養要求性リステリア株の栄養要求性を補完する代謝酵素を含むエピソーム発現ベクターを含む、請求項７２に記載の組み換えリステリア株。
【請求項７５】
前記代謝酵素は、アミノ酸代謝酵素である、請求項７４に記載の組み換えリステリア株。
【請求項７６】
前記代謝酵素は、前記組み換えリステリア株における細胞壁合成のために使用されるアミノ酸の形成を触媒する、請求項７４に記載の組み換えリステリア株。
【請求項７７】
前記代謝酵素は、アラニンラセマーゼ酵素である、請求項７４に記載の組み換えリステリア株。
【請求項７８】
前記代謝酵素は、Ｄ−アミノ酸トランスフェラーゼ酵素である、請求項７６に記載の組み換えリステリア株。
【請求項７９】
前記組み換えリステリア株は、動物宿主に継代されている、請求項６２に記載の組み換えリステリア。
【請求項８０】
前記組み換えリステリア株は、組み換えリステリアモノサイトゲネス株である、請求項６２に記載の組み換えリステリア。
【請求項８１】
２つの抗原を発現する組み換えリステリア株を産生する方法であって、
（ａ）第１の抗原をコードする第１の核酸を、内因性ＰＥＳＴ含有遺伝子を伴うオープンリーディングフレームにおいてリステリアゲノムに遺伝子的に融合すること、
（ｂ）第２の抗原をコードする第２の核酸を含むエピソーム発現ベクターで、前記組み換えリステリアを形質転換すること、および
（ｃ）前記組み換えリステリア株における抗原発現を促す条件下で前記第１の抗原および前記第２の抗原を発現すること、
を含む、方法。
【請求項８２】
２つの抗原を発現する組み換えリステリア株を産生する方法であって、
（ａ）第１の抗原をコードする第１の核酸および第２の抗原をコードする第２の核酸を、内因性ＰＥＳＴ含有遺伝子を伴うオープンリーディングフレームにおいてリステリアゲノムに遺伝子的に融合すること、および
（ｂ）前記組み換えリステリア株における抗原発現を促す条件下で前記第１の抗体および前記第２の抗原を発現すること、
を含む、方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【公表番号】特表２０１１−５２９６８４（Ｐ２０１１−５２９６８４Ａ）
【公表日】平成２３年１２月１５日（２０１１．１２．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１０６５３（Ｐ２０１１−５１０６５３）
【出願日】平成２１年５月１９日（２００９．５．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４４５３８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１４３１６７
【国際公開日】平成２１年１１月２６日（２００９．１１．２６）
【出願人】（５０９２５０８７０）
【Ｆターム（参考）】