癌に関係するタンパク質
本発明は、卵巣癌及び肺癌の診断、スクリーニング、治療及び予防におけるＦＬＪ２０５８４の新しい使用に関するものである。本発明は、ＦＬＪ２０５８４を含む組成物、例えばワクチン、ＦＬＪ２０５８４と免疫特異的な抗体、及びＦＬＪ２０５８４の発現若しくは活性と相互作用するか又はそれを調整する物質、又はＦＬＪ２０５８４をコードする核酸の発現を調整する物質を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリペプチドＦＬＪ２０５８４を標的にすることを含む癌の治療及び／又は予防のための方法、前記ポリペプチドと相互に作用するかその発現又は活性を調整する物質、そのような物質の同定方法、並びに癌の診断におけるＦＬＪ２０５８４の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
卵巣癌は婦人科の癌で最も致命的な癌であり、患者の約７０％が一般的な上皮性卵巣癌を有するがこれは疾病後期の段階で初めて表れる。癌は上腹部に広がっているので、生存率は疾病初期の段階と比較してかなり低くなる。卵巣癌は通常シスプラチンをベースにした化学療法で治療されるが、獲得したシスプラチン抵抗性のためにしばしば再発し（Ｙａｈａｔａ，Ｈ．ら、２００２、Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１２８：６２１〜６頁）、それ故に新薬及び新治療標的に対する要求がある。また、現在のマーカーは大集団で適用できる十分な感度及び特異性が不足しているので、卵巣癌の新たなマーカーに対する要求もある（Ｒａｉ，Ａ．ら、２００２、Ａｒｃｈ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．１２６：１５１８〜２６頁）。
【０００３】
肺癌は、男性と女性の両方の癌死の大きな割合を占める。肺癌には、非小細胞肺癌及び小細胞肺癌の２つの主要な型がある。治療は手術に制限され、可能な場合には化学療法及び放射線療法が用いられる。肺癌治療の課題は、前癌状態の疾患を有する者をより詳細にモニターして化学的予防薬剤で治療することができるように早期発見のより良い手段を開発すること、及び肺癌治療のためのより良い療法を開発することである。
【０００４】
ＦＬＪ２０５８４に対応するヌクレオチド配列は、国際公開０１／９８３５３及び国際公開０２／４４３４０で開示されているが、どちらの出願もＦＬＪ２０５８４の具体的な有用性を開示していない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、ＦＬＪ２０５８４が卵巣癌及び／又は肺癌などの癌の治療及び／又は予防のための新規治療標的となるとの知見に基づく。ＦＬＪ２０５８４は、卵巣癌及び／又は肺癌などの癌のスクリーニング及び／又は診断のための新規マーカーともなる。
【０００６】
したがって、本発明は癌を治療及び／又は予防するための方法であって、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用するかその発現又は活性を調整する物質の治療的有効量を投与することを含む方法を提供する。
【０００７】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかそれからなるポリペプチド、
（ｂ）ＦＬＪ２０５８４活性を保持する配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ又は複数のアミノ酸置換、修飾、欠失又は挿入を有する誘導体であるポリペプチド、或いは
（ｃ）長さが少なくとも１０アミノ酸であり且つＦＬＪ２０５８４の活性を保持する、前記（ａ）又は（ｂ）の断片であるポリペプチドを含む。
【０００８】
用語「ポリペプチド」は、ペプチド、ポリペプチド及びタンパク質を含む。これらは、特に明記しない限り互換的に使用される。
【０００９】
本出願では、用語「癌腫」又は「癌」は互換的に使用され、皮膚、又はより一般的に体器官、例えば卵巣、乳腺、前立腺、肺、腎臓、膵臓、胃若しくは腸の内層で見られる、上皮に起因する悪性腫瘍を含む。癌腫は隣接した組織に浸潤して、例えば骨、肝臓、肺又は脳などの離れた臓器に広がる（転移する）傾向がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の一実施形態において、前記癌腫は卵巣癌である。他の実施形態では、前記癌腫は肺癌である。他の実施形態では、前記癌は骨肉腫である。
【００１１】
本発明の方法で使用する物質としては、それには限定されないが、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又はＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードしている核酸分子と相互作用すること（例えば結合すること若しくは認識すること）ができる物質、或いはＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの相互作用、発現、活性、又はＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードしている核酸分子の発現を調整することができる物質がある。そのような物質には、それに限定されるものではないが、抗体、核酸（例えばＤＮＡ及びＲＮＡ）、炭水化物、脂質、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ペプチド様物質、小分子及び他の物質が含まれる。
【００１２】
したがって、本発明は、癌の治療及び／又は予防のための医薬品の製造のための、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用するかその発現又は活性を調整する物質の使用も提供する。
【００１３】
最も好ましくは、癌の治療及び／又は予防に用いられる物質は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用する（すなわち、結合するかそれを認識する）か又はその活性を調整する抗体である。したがって、癌の治療及び／又は予防のための医薬品の製造のための、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用する抗体の使用が提供される。また、対象における癌を治療及び／又は予防するための方法であって、前記対象に対してＦＬＪ２０５８４と相互に作用する抗体の治療的有効量を投与することを含む方法も提供される。一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用する抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介するために使用することができる。そのような場合、抗体は好ましくは完全長のそのままの抗体である。本発明の他の態様では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用する抗体は、前記ポリペプチドの活性を阻止するために使用することができる。
【００１４】
最も好ましいものは、特異的にＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する抗体である。特異的に相互作用する（例えば認識又は結合する）とは、抗体が他のポリペプチドに対してよりもＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに対して強い親和性を有することを意味する。
【００１５】
任意選択に治療的な部分とコンジュゲートされた抗体は、単独で又は細胞傷害性因子及び／又はサイトカインと組合せて、治療的に使用することができる。詳細には、ＦＬＪ２０５８４抗体は、ある特定の生物反応を修飾するために細胞傷害剤、放射性核種又は薬剤部分などの治療剤とコンジュゲートすることができる。前記治療剤は、古典的な化学療法剤に限られるとはみなされない。例えば、前記治療剤は、所望の生物学的活性を有するタンパク質又はポリペプチドである薬剤部分でよい。そのような部分としては、それには限定されないものの、例えばアブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素又はジフテリア毒素などの毒素、メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）（ＤＭ１）、腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子又は組織プラスミノーゲン活性化因子などのタンパク質、血栓剤又は抗血管形成剤、例えばアンギオスタチン若しくはエンドスタチン；アンギオゲニン、ゲロニン、ドルスタチン（ｄｏｌｓｔａｔｉｎ）、副溝結合剤、ビス−ヨード−フェノールマスタード、又は生体応答調節剤、例えばリンホカイン、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）又は他の成長因子などを挙げることができる。
【００１６】
また治療剤としては、細胞に有害である（例えば殺傷性のある）いかなる物質を含む、細胞毒又は細胞傷害剤を挙げることができる。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンカアルカロイド、例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、４−デスアセチルビンブラスチン−３−カルボヒドラジド、ビンデシン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアンスラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール及びピューロマイシン、並びにそれらの類似体又は同族体がある。また治療剤としては、それには限定されないが、葉酸拮抗薬（例えばアミノプテリン及びメトトレキサート）、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン、５−フルオロ−２’−デオキシウリジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロソスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、及びシスジクロロジアミンプラチナ（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン類（例えば、ダウノルビシン（旧ダウノマイシン）及びドキソルビシン、アドリアマイシン、イダルビシン、モルホリノドキソルビシン、エピルビシン、ドキソルビシンヒドラジド）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、アントラマイシン（ＡＭＣ）、カリシェアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）又はデュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）、ＣＣ−１０６５、エネジエン（ｅｎｅｄｉｙｅｎｅ）、ネオカルチノスタチン）、並びに細胞分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン及びビンブラスチン）もある。詳細は、Ｇａｒｎｅｔｔ、２００１、Ａｄｖａｎｃｅｄ ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５３：１７１〜２１６頁を参照されたい。
【００１７】
他の治療的部分としては、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ及び９０Ｙ、Ｌｕ１７７、ビスマス２１３、ビスマス２１２、カリホルニウム２５２、イリジウム１９２及びタングステン１８８／レニウム１８８、２１１アスタチンなどの放射性核種、又は例えばそれには限定されないが、アルキルホスホコリン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、タキソイド（ｔａｘｏｉｄ）及びスラミンなどの薬剤を挙げることができる。
【００１８】
抗体にそのような治療剤をコンジュゲートする手法は当技術分野で既知である（例えばＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら編、１９８５、２４３〜５６頁、編Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．中のＡｒｎｏｎら、「癌療法における薬剤のイムノターゲッティングのためのモノクローナル抗体（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ）」；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、第２版、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編、１９８７、６２３〜５３頁、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．中のＨｅｌｌｓｔｒｏｍら「薬物送達のための抗体（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら編、１９８５、４７５〜５０６頁中のＴｈｏｒｐｅ、「癌療法における細胞傷害剤の抗体担体：レビュー（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（編）、１９８５、３０３〜１６頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ中の「癌療法における放射性標識抗体の治療的利用の分析、結果、及び将来の見通し（Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ）」；Ｔｈｏｒｐｓら、１９８２「抗体−毒素コンジュゲートの調製及び細胞傷害的性質（Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９〜５８頁、及びＤｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９９、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、８３、６７〜１２３頁を参照）。
【００１９】
本発明に用いられる抗体としては、それには限定されないが、例えば任意の種類の分子の共有結合によって修飾される類似体及び誘導体がある。好ましくは、前記結合は免疫特異的結合を害しない。一態様では、抗体を第二抗体にコンジュゲートして抗体ヘテロ複合体を形成することができる（米国特許第４６７６９８０号を参照）。
【００２０】
処理された抗体断片は、かなりの有効量の薬剤を腫瘍に対して選択的にターゲッティングさせるために、立体配置的に安定化された（ステルス）リポソームの表面に結合することもできる（例えばＰａｒｋら、１９９５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９２：１３２７〜１３３１頁；Ｐａｒｋら、１９９７、Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．１１８：１５３〜１６０頁を参照）。
【００２１】
一実施形態では、放射性核種及びプロドラッグなどの細胞傷害剤は、腫瘍をプレターゲッティングすることができる。詳細には、抗体依存性酵素媒介性のプロドラッグ療法（ＡＤＥＰＴ）は、腫瘍に対するプロドラッグのプレターゲティングを含む（Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚら、１９９９、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．１４：５１７〜５３８頁；Ｓｙｒｉｇｏｓら、１９９９、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９：６０５〜６１３頁）。
【００２２】
他の実施形態では、本発明は、抗体（又はその機能的活性断片）の融合タンパク質の治療的使用を提供し、抗体又はその断片は、例えば、それには限定されないが、共有結合（例えばペプチド結合）により任意選択にＮ末端又はＣ末端で他のタンパク質（又はその部分、好ましくはそのタンパク質の少なくとも１０、２０若しくは５０アミノ酸部分）のアミノ酸配列と融合されている。好ましくは、抗体又はその断片は、その抗体の定常ドメインのＮ末端で他のタンパク質に結合される。他の態様において、抗体融合タンパク質は本明細書で記載されるポリペプチドの消耗又は精製を助長し、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期を長くし、上皮性関門を越えて抗原が免疫系に送達されるのを促進することができる。
【００２３】
融合タンパク質がエフェクター又はレポーター分子に結合されている抗体断片である場合、これは標準の化学手法又は組換えＤＮＡ手法によって調製することができる。好ましいエフェクター基はポリマー分子であり、それはそのｉｎ ｖｉｖｏ半減期を長くするために修飾されたＦａｂフラグメントに結合することができる。他のエフェクター基としては、デキストラン、ヒト血清アルブミン及びヒドロキシプロピルメタクリルアミド（ＨＰＭＡ）がある。
【００２４】
前記ポリマー分子は、一般に合成又は自然発生のポリマーでよく、例えば任意選択に置換された直鎖又は分枝鎖のポリアルキレン、ポリアルケニレン又はポリオキシアルキレンポリマー或いは分枝又は非分岐の多糖、例えばホモ又はヘテロの多糖がある。
【００２５】
前述合成ポリマー上で存在することができる特定の任意選択の置換基としては、１つ又は複数のヒドロキシ基、メチル基又はメトキシ基がある。合成ポリマーの特定の例としては、任意選択に置換された直鎖又は分枝鎖のポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）、ポリ（ビニルアルコール）又はそれらの誘導体、特にメトキシポリ（エチレングリコール）などの任意選択に置換されたポリ（エチレングリコール）又はその誘導体がある。
【００２６】
自然に存在する特定のポリマーとしては、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン又はそれらの誘導体がある。
【００２７】
本明細書で使用されるとき「誘導体」は、反応性誘導体、例えばマレイミドなどのようなチオール選択性反応基を含むものとする。この反応基は、直接又はリンカー部分を通してポリマーと結合することができる。そのような基の残基は、場合によっては抗体断片及びポリマーの間の結合基として、生成物の一部を形成することは理解されよう。
【００２８】
ポリマーの大きさは所望により変更することができるが、平均分子量は通常５００Ｄａから５００００Ｄａの範囲の平均分子量、好ましくは５０００から４００００Ｄａの範囲の平均分子量、より好ましくは２５０００から４００００Ｄａの範囲の平均分子量である。ポリマーの大きさは、特に生成物の目的とする用途に基づいて選択することができる。従って、例えば腫瘍の治療のために生成物が循環系を離れて組織に浸入するものとするならば、小分子量のポリマー、例えば約５０００Ｄａの分子量のものを使うことが有利であると言える。生成物が循環系中に残る用途の場合ならば、高分子量ポリマー、例えば２５０００Ｄａから４００００Ｄａの範囲の分子量を有するものを使うことが有利であると言えよう。
【００２９】
特に好ましいポリマーは、ポリアルキレンポリマー、例えばポリ（エチレングリコール）、或いは特にメトキシポリ（エチレングリコール）又はその誘導体であり、特に約２５０００Ｄａから約４００００Ｄａの範囲の分子量のものが好しい。
【００３０】
修飾された抗体断片に結合された各ポリマー分子は、断片中に位置するシステイン残基の硫黄原子と共有結合で結合することができる。この共有結合は、通常、ジスルフィド結合、又は、特に硫黄−炭素結合である。
【００３１】
所望ならば、前記抗体断片はそれに結合した１つ又は複数のエフェクター分子又はレポーター分子を有することができる。このエフェクター分子又はレポーター分子は、断片上の利用可能なアミノ酸側鎖又は末端アミノ酸官能基、例えば遊離アミノ基、イミノ基、ヒドロキシル基又はカルボキシル基を通じて、抗体断片と結合することができる。
【００３２】
活性化ポリマーは、先に述べたようなポリマーで修飾された抗体断片の調製において、出発物質として使用することができる。活性化ポリマーは、α−ハロカルボン酸又はエステル（例えばヨードアセトアミド）、イミド（例えばマレイミド）、ビニルスルホン又はジスルフィドなどのチオール反応基を含んでいるいかなるポリマーであってもよい。そのような出発物質は市販品を入手できるか（例えばＮｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）から）、又は市販の出発物質から従来の化学手法を使って調製することができる。
【００３３】
抗体断片が活性化ポリマーとの反応の前又は後に、エフェクター又はレポーター分子と直接又はカップリング剤を通じて連結される標準的な化学手法又は組換えＤＮＡ手法を適宜使用することができる。特定の化学手法としては、例えば、国際公開９３／０６２３１、国際公開９２／２２５８３、国際公開９０／０９１９５、国際公開８９／０１４７６、国際公開９９／１５５４９及び国際公開０３／０３１５８１で記載されているものがある。或いはエフェクター又はレポーター分子がタンパク質又はポリペプチドである場合ならば、前記結合は組換えＤＮＡ手法、例えば国際公開８６／０１５３３及び欧州特許第０３９２７４５号で記載されているものを用いて達成することができる。
【００３４】
最も好ましくは、抗体はポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）部分に結合される。好ましくは、修飾されたＦａｂフラグメントは、例えば欧州特許第０９４８５４４号で開示されている方法に従ってＰＥＧ化され、すなわち共有結合でそれと結合したＰＥＧ（ポリ（エチレングリコール））を有する［「ポリ（エチレングリコール）の化学、バイオ技術的及び生物医学的な応用（Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、１９９２、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ Ｈａｒｒｉｓ（編）、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、「ポリ（エチレングリコール）の化学及び生物学的応用（Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、１９９７、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ Ｈａｒｒｉｓ及びＳ．Ｚａｌｉｐｓｋｙ（編）、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ、及び「生物医学科学のためのバイオコンジュゲーションタンパク質結合技術（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」、１９９８、Ｍ．Ａｓｌａｍ及びＡ．Ｄｅｎｔ、Ｇｒｏｖｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｃｈａｐｍａｎ，Ａ．、２００２、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２００２、５４：５３１〜５４５頁も参照］。一実施形態では、ＰＥＧで修飾されたＦａｂフラグメントは、修飾されたヒンジ部において単一のチオール基と共有結合で結合しているマレイミド基を有する。リジン残基は、前記マレイミド基と共有結合で結合することができる。リジン残基上の各アミン基には、約２０，０００Ｄａの分子量のメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーを結合することができる。エフェクター分子全体の総分子量は、したがって約４０，０００Ｄａであってよい。
【００３５】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又は前記ポリペプチドを発現している細胞は、例えば前記ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを特異的に認識する抗体を産生するために使用することができる。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに対して生成される抗体は、前記ポリペプチドを動物、好ましくはヒト以外の動物に既知の常用のプロトコルを用いて投与することによって得ることができる。
【００３６】
抗ＦＬＪ２０５８４抗体は機能的に活性な断片、誘導体又は類似体を含み、それには限定されないがポリクローナル、モノクローナル、二価、三価又は四価の抗体、ヒト化又はキメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’及びＦａｂ’２フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリによって作製される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、並びに上のいずれかのエピトープ結合断片でよい。ヒト化抗体は、ヒト以外の種からの１つ又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト免疫グロブリン分子からの枠組み領域とを有する、ヒト以外の種に由来する抗体分子である（例えば、米国特許第５５８５０８９号を参照）。抗体には、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的活性部分、すなわち抗原と特異的に結合する抗原結合部位を含む分子が含まれる。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子のいかなるクラス（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＡ）又はサブクラスでもよい。
【００３７】
モノクローナル抗体は、当技術分野で既知のいかなる方法、例えばハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５〜４９７頁）、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ、４：７２）及びＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、７７〜９６頁、Ａｌａｎ Ｒ Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、１９８５）によって調製することができる。
【００３８】
キメラ抗体は、軽鎖及び重鎖遺伝子が異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子部分から構成されるように遺伝子操作されている免疫グロブリン遺伝子によってコードされる抗体である。これらのキメラ抗体の抗原性は低いようである。二価抗体は、当技術分野で既知の方法によって作ることができる（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、１９８３、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７〜５３９頁；国際公開９３／０８８２９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、１９９１、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５〜３６５９頁）。二価、三価及び四価の抗体は複数の特異性を含むことができ、又は単一特異性でもよい（例えば国際公開９２／２２８５３を参照）。
【００３９】
本発明に用いられる抗体は、例えば、Ｂａｂｃｏｏｋ，Ｊ．ら、１９９６、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３（１５）：７８４３〜７８４８頁及び国際公開９２／０２５５１で記載されている、特異抗体の産生のために選択された単一のリンパ球から生成される免疫グロブリン可変部ｃＤＮＡの分子クローニング及び発現に基づく単一リンパ球抗体法を使って生成することができる。
【００４０】
本発明に用いられる抗体は、当技術分野で既知の様々なファージディスプレイ方法を使って生成することもでき、例えばＢｒｉｎｋｍａｎら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９９５、１８２：４１〜５０頁）、Ａｍｅｓら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９９５、１８４：１７７〜１８６頁）、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４、２４：９５２〜９５８頁）、Ｐｅｒｓｉｃら（Ｇｅｎｅ、１９９７ １８７９〜１８頁）、Ｂｕｒｔｏｎら（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９４、５７：１９１〜２８０頁）及び国際公開９０／０２８０９、国際公開９１／１０７３７、国際公開９２／０１０４７、国際公開９２／１８６１９、国際公開９３／１１２３６、国際公開９５／１５９８２、国際公開９５／２０４０１、並びに米国特許第５６９８４２６号、５２２３４０９号、５４０３４８４号、５５８０７１７号、５４２７９０８号、５７５０７５３号、５８２１０４７号、５５７１６９８号、５４２７９０８号、５５１６６３７号、５７８０２２５号、５６５８７２７号、５７３３７４３号及び５９６９１０８号によって開示されているものがある。米国特許第４９４６７７８号で記載されているような単鎖抗体の産生のための技術も、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに対する単鎖抗体を産生するために応用することができる。また、トランスジェニックマウス又は他の哺乳類を含む他の生物は、ヒト化抗体を発現するために使用することができる。
【００４１】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、本発明に従う治療及び／又は予防の方法で用いる剤の識別のために使用することができる。
【００４２】
本発明の他の態様は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する抗癌剤をスクリーニングする方法であって、
（ａ）前記ポリペプチドを候補物質と接触させること、及び
（ｂ）前記候補物質が前記ポリペプチドと相互作用するか否かを測定することを含む方法を提供する。
【００４３】
好ましくは、前記候補物質及びＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの間の相互作用の判定は、前記候補物質及び前記ポリペプチドの結合を定量的に検出することを含む。
【００４４】
更に、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現又は活性を調整する抗癌剤をスクリーニングする方法であって、
（ｉ）候補物質の存在下での前記ポリペプチドの発現又は活性を、前記候補物質が非存在下又は対照物質の存在下での前記ポリペプチドの発現又は活性と比較すること、及び
（ｉｉ）前記候補物質が前記ポリペプチドの発現又は活性の変化を起こすか否かを測定することを含む方法が提供される。
【００４５】
好ましくは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現及び／又は活性は、所定の基準範囲（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｒａｎｇｅ）又は対照と比較される。
【００４６】
より好ましくは、前記方法は癌の治療及び／又は予防での使用のための更なる試験のために、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用するか、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの相互作用、発現又は活性を調整することができる物質を選択することを更に含む。上記のスクリーニング法はＦＬＪ２０５８４核酸分子の発現又は活性と相互に作用するかそれを調整する抗癌剤のスクリーニングにも適当であることは、当業者にとって明らかであるだろう。
【００４７】
本発明は、癌の治療剤及び／又は予防剤の効力を同定するか検証するための、創薬（ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）で用いるためのアッセイも提供する。これらの方法を使って同定される物質は、創薬のためのリード物質として使用したり、治療的に使用したりすることができる。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現は、例えばイムノアッセイ、ゲル電気泳動法及びその後の可視化、ｍＲＮＡ又はＦＬＪ２０５８４ポリペプチド活性の検出、或いは本明細書で教示されているか当業者に既知の他のいかなる方法によっても分析することができる。そのようなアッセイは、候補物質をスクリーニングするために、臨床モニタリングにおいて、又は薬剤開発において使用することができる。
【００４８】
物質は、多種多様な候補物質から選択することができる。候補物質の例としては、それに限定されるものではないが、核酸（例えばＤＮＡ及びＲＮＡ）、炭水化物、脂質、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ペプチド様物質、小分子及び他の物質が含まれる。物質は、当技術分野で既知の組合せライブラリ方法の多数の手法のいずれかを用いて得ることができ、それの例としては生物学的ライブラリ、空間的にアドレス可能な平行固相又は溶液相ライブラリ、デコンボリューションを必要とする合成ライブラリ方法、「１ビーズ１化合物」ライブラリ方法、及びアフィニティークロマトグラフィー選択を用いる合成ライブラリ方法がある。生物学的ライブラリ手法はペプチドライブラリに適し、その他の４つの手法は化合物のペプチド、非ペプチドオリゴマー又は小分子ライブラリに適用できる（Ｌａｍ、１９９７、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．１２：１４５、米国特許第５７３８９９６号、及び米国特許第５８０７６８３）。
【００４９】
分子ライブラリの合成のための本記載に基づく適当な方法の例は当技術分野で見つけることができ、例えば、ＤｅＷｉｔｔら、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６９０９；Ｅｒｂら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら、１９９４、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８；Ｃｈｏら、１９９３、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら、１９９４、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒｒｅｌｌら、１９９４、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１；及びＧａｌｌｏｐら、１９９４、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３などで見られる。
【００５０】
化合物のライブラリは、例えば溶液（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ、１９９２、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４１２〜４２１頁）で、又はビーズ（Ｌａｍ、１９９１、Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８２〜８４頁）、チップ（Ｆｏｄｏｒ、１９９３、Ｎａｔｕｒｅ ３６４：５５５〜５５６頁）、細菌（米国特許第５２２３４０９号）、胞子（米国特許第５５７１６９８号、５４０３４８４号及び５２２３４０９号）、プラスミド（Ｃｕｌｌら、１９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１８６５〜１８６９頁）若しくはファージ（Ｓｃｏｔｔ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６〜３９０頁、Ｄｅｖｌｉｎ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：４０４〜４０６頁、Ｃｗｉｒｌａら、１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６３７８〜６３８２頁、及びＦｅｌｉｃｉ、１９９１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１〜３１０頁）上で提示することができる。
【００５１】
一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する（例えば、結合する）剤は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現している細胞集団を候補物質と接触させ、候補物質が前記ポリペプチドと相互作用する能力を測定する細胞ベースのアッセイで同定される。好ましくは、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する能力は、基準範囲又は対照と比較される。他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現する細胞の第１及び第２の集団を候補物質又は対照物質と接触させ、候補物質がポリペプチドと相互作用する能力を、候補物質及び対照物質の間の相互作用の差を比較することにより測定する。所望により、この種のアッセイは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現する複数の細胞集団を使って複数の（例えばライブラリの）候補物質をスクリーニングするために使用することができる。所望により、このアッセイは、複数の（例えばライブラリの）候補物質をスクリーニングするために使用することができる。前記細胞は、例えば、原核生物起源（例えば大腸菌）又は真核生物起源（例えば酵母若しくは哺乳動物）でよい。更に、前記細胞は内因的にＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現すること、又は前記ポリペプチドを発現するように遺伝子操作することができる。一部の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又は候補物質は、ポリペプチド及び候補物質の間の相互作用の検出を可能にするために、例えば放射性標識（例えば３２Ｐ、３５Ｓ又は１２５Ｉ）或いは蛍光標識（例えば蛍光イソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド又はフルオレサミン）で標識される。
【００５２】
他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する（例えば、結合する）物質は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現している試料を候補物質と接触させ、候補物質が前記ポリペプチドと相互作用する能力を測定する無細胞系のアッセイで同定される。好ましくは、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する能力は、基準範囲又は対照と比較される。好ましい実施形態では、天然又は組換え体のＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを含んでいる第１及び第２の試料を候補物質又は対照物質と接触させ、候補物質がポリペプチドと相互作用する能力を、候補物質及び対照物質の間の相互作用の差を比較することにより測定する。所望により、このアッセイは、複数のＦＬＪ２０５８４ポリペプチド試料を用いて複数の（例えばライブラリの）候補物質をスクリーニングするために使用することができる。好ましくは、前記ポリペプチドは最初に、例えばポリペプチドを、それを特異的に認識して結合する固定化抗体と接触させることによって、又はポリペプチドの精製調製物をタンパク質と結合する構造になっている表面と接触させることによって固定化される。前記ポリペプチドは部分的に又は完全に精製されていてもよいし（例えば、他のポリペプチドを部分的に又は完全に含まない）、又は細胞溶解物の一部でもよい。更に、前記ポリペプチドはＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又はその生物学的活性部分と、グルタチオンＳ−転移酵素などのドメインとを含んでいる融合タンパク質であってもよい。或いは、前記ポリペプチドは、当業者に既知の技術（例えばビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を使ってビオチン化することができる。ポリペプチドと相互作用する候補物質の能力は、当業者に既知の方法によって２倍にすることができる。
【００５３】
一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと結合するか相互作用する他のタンパク質を同定するための２ハイブリッドアッセイ又は３ハイブリッドアッセイにおいて、「餌タンパク質（ｂａｉｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）」として使用される（例えば米国特許第５２８３３１７号、Ｚｅｒｖｏｓら、１９９３、Ｃｅｌｌ ７２：２２３〜２３２頁、Ｍａｄｕｒａら、１９９３、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２０４６〜１２０５４頁、Ｂａｒｔｅｌら、１９９３、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４：９２０〜９２４頁、Ｉｗａｂｕｃｈｉら、１９９３、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ８：１６９３〜１６９６頁、及び国際公開９４／１０３００を参照）。当業者ならば理解するように、そのような結合タンパク質もＦＬＪ２０５８４ポリペプチドによるシグナルの伝搬に関与するようである。例えば、それらはＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを含んでいる情報伝達経路の上流側要素又は下流側要素であってよい。或いは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用するポリペプチドは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを含んでいるタンパク質複合体（前記ポリペプチドは、直接又は間接的に１つ又は複数の他のポリペプチドと相互作用することができる）を単離し、当技術分野で既知の方法、例えば質量分析又はウェスタンブロット法を使って関連タンパク質を同定することによって同定することができる（例えば、Ｂｌａｃｋｓｔｏｃｋ、Ｗ．＆Ｗｅｉｒ，Ｍ．、１９９９、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１７：１２１〜１２７頁、Ｒｉｇａｕｔ，Ｇ．、１９９９、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１７：１０３０〜１０３２頁、Ｈｕｓｉ，Ｈ．２０００、Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３：６６１〜６６９頁、Ｈｏ，Ｙ．ら、２００２、Ｎａｔｕｒｅ、４１５：１８０〜１８３頁、Ｇａｖｉｎ，Ａ．ら、２００２、Ｎａｔｕｒｅ、４１５：１４１〜１４７頁を参照）。
【００５４】
総ての場合において、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと直接又は間接に相互作用する能力は、当業者に既知の方法によって測定することができる。例えば、それには限定されないが、候補物質及びＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの間の相互作用は、フローサイトメトリー、シンチレーションアッセイ、活性アッセイ、質量分析、顕微鏡検査、免疫沈降法又はウェスタンブロット解析で測定することができる。
【００５５】
他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと競合的に相互作用する（すなわち競合的に結合する）物質は競合結合検定法で同定され、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する能力を測定する。好ましくは、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する能力は、基準範囲又は対照と比較される。好ましい一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及びＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用することが知られているタンパク質の両方を発現する細胞の第１及び第２の集団を、候補物質又は対照物質と接触させる。次いで、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと競合的に相互作用する能力を、細胞の第１及び第２の集団における相互作用を比較することによって測定する。他の実施形態では、代わりの第２の集団又は更なる細胞集団を、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと競合的に相互作用することが既知の物質と接触させることができる。或いは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと競合的に相互作用する物質は、無細胞アッセイ系でＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及びにＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用することが知られているタンパク質を含んでいる第１及び第２の試料を、候補物質又は対照物質と接触させることにより同定される。次いで、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと競合的に相互作用する能力を、第１及び第２の試料における相互作用を比較することによって測定する。他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを含んでいる代わりの第２の試料又は更なる試料を、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと競合的に相互作用することが知られている物質と接触させることができる。いずれの場合も、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及び既知の相互作用するタンパク質は、自然に発現させることができるか、組換えで発現させることができる。候補物質は外因的に加えることができるか、自然に又は組換えで発現させることができる。
【００５６】
他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及び他の物質（例えばそれには限定されないがタンパク質）の間の相互作用を調整する物質は、細胞ベースのアッセイにおいて、既知の相互作用物質の存在下でＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現する細胞及び候補調整物質を接触させ、相互作用を調整する候補物質を選択することによって同定することができる。或いは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及び他の物質（例えばそれには限定されないがタンパク質）の間の相互作用を調整する物質は、無細胞アッセイ系において、候補物質の存在下で前記ポリペプチドを、前記ポリペプチドと相互作用することが知られている物質と接触させることによって同定することができる。調整剤は、抗体、補因子、阻害剤、活性化剤として作用することができるが、又は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及び既知の物質の間の相互作用に対してアンタゴニスト作用又はアゴニスト作用を及ぼすことができる。上述したように、既知の物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する能力は、当業者に既知の方法によって測定することができる。細胞ベースであれ無細胞系であれ、これらのアッセイは複数の（例えばライブラリの）候補物質をスクリーニングするために使用することができる。
【００５７】
他の実施形態では、細胞ベースのアッセイ系は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性を調整する（すなわち、刺激又は阻止する）ことができる物質を同定するために使用される。したがって、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性を、候補物質の存在下で、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを自然に又は組換えで発現する細胞の集団において測定する。好ましくは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性は、基準範囲又は対照と比較される。好ましい一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性を、物質の存在下又は候補物質の非存在下（例えば対照物質の存在下で）、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを自然に又は組換えで発現する細胞の第１及び第２の集団において測定し、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性が比較される。次いで、候補物質をこの比較に基づいてＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性のモジュレーターとして同定することができる。或いは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性を、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドが天然又は組換えである無細胞アッセイ系で測定することができる。好ましくは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性は、基準範囲又は対照と比較される。好ましい一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性を候補物質の存在下又は非存在下で第１及び第２の試料において測定し、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性が比較される。次に、候補物質をこの比較に基づいてＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性のモジュレーターとして同定することができる。
【００５８】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性は、下流側エフェクターに及ぼすその影響、例えばそれには限定されないが、２次メッセンジャー（例えばｃＡＭＰ、細胞内Ｃａ２＋、ジアシルグリセロール、ＩＰ３、その他）の活性レベルを検出することにより、触媒活性又は酵素活性を検出することにより、レポーター遺伝子（例えばルシフェラーゼ）の誘発を検出することにより、或いは細胞反応、例えば当業者ならば知っているような増殖、分化又は形質転換を適宜検出することにより評価することができる（活性測定技術については例えば米国特許第５４０１６３９号を参照）。次いで、候補物質は候補物質の効果を対照物質と比較することにより、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性のモジュレーターとして同定することができる。適当な対照物質としては、ＰＢＳ又は通常の生理食塩水がある。
【００５９】
他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの産生又は分解を担うか、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの翻訳後修飾を担う、酵素などの物質、又はその生物学的活性部分を同定することができる。一次スクリーニングでは、そのような物質を同定するために、実質的に純粋な、天然若しくは組換え発現されたＦＬＪ２０５８４のポリペプチド、核酸又は細胞抽出物或いは天然若しくは組換え発現されたＦＬＪ２０５８４のポリペプチド若しくは核酸を含む他の試料を、ＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸のプロセシングを担うことができる複数の候補物質（例えばそれには限定されないがライブラリとして提示される複数の物質）と接触させる。候補物質がＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の産生、分解又は翻訳後修飾を調整する能力は、当業者に既知の方法、例えばそれには限定されないが、フローサイトメトリー、放射能標識、キナーゼアッセイ、ホスファターゼアッセイ、免疫沈降反応及びウェスタンブロット分析又はノーザンブロット分析で測定することができる。
【００６０】
他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現する細胞を複数の候補物質と接触させる。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの産生、分解又は翻訳後修飾を調整するそのような物質の能力は、先に述べたように当業者に既知の方法で測定することができる。
【００６１】
一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現を調整する（例えば、下方制御する）物質は、細胞ベースのアッセイ系で同定される。したがって、ＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸を発現する細胞の集団を候補物質と接触させ、候補物質がＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現を変化させる能力を、基準範囲又は対照との比較により測定する。他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現する細胞の第１及び第２の集団を候補物質又は対照物質と接触させ、候補物質がＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現を変化させる能力を、第１及び第２の細胞集団間におけるＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現レベルの差を比較することにより測定する。他の実施形態では、第１の集団におけるＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現を、基準範囲又は対照と更に比較することができる。所望により、このアッセイは、複数の（例えばライブラリの）候補物質をスクリーニングするために使用することができる。前記細胞は、例えば、原核生物起源（例えば大腸菌）又は真核生物起源（例えば酵母若しくは哺乳動物）でよい。更に、前記細胞は内因的にＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸を発現することができるか、遺伝子操作することでＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸を発現することができる。候補物質がＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現を変化させる能力は、当業者に既知の方法、例えばそれには限定されないがフローサイトメトリー、放射能標識、シンチレーションアッセイ、免疫沈降反応、ウェスタンブロット分析又はノーザンブロット分析によって測定することができる。
【００６２】
他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現を調整する物質を、動物モデルで同定する。適当な動物の例には、それには限定されないが、マウス、ラット、ウサギ、サル、モルモット、イヌ及びネコが含まれる。好ましくは、使用する動物は癌のモデルを表す。したがって、哺乳動物の第１及び第２の群に候補物質又は対照物質を投与し、候補物質がＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現を調整する能力を、第１及び第２の哺乳動物群の間の発現レベルの差を比較することにより測定する。所望ならば、第１及び第２の哺乳動物群におけるＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現量は、対照哺乳動物群におけるＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸のレベルと比較することができる。候補物質又は対照物質は、当技術分野で既知の手段によって投与することができる（例えば経口、経直腸又は非経口、例えば腹腔内若しくは静脈内投与）。ポリペプチド又は核酸の発現の変化は、上で概説されている方法によって評価することができる。特定の実施形態では、疾患の開始又は進行を遅らせるための物質の治療的有効量は、症状の緩和又は改善、例えばそれには限定されないが腫瘍の大きさの縮小をモニターすることによって決定することができる。候補物質が疾患と関連する１つ又は複数の症状を変化させたかどうか測定するためには、癌に精通している医師に既知の技術を使用することができる。
【００６３】
当業者ならば、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを、このポリペプチドの活性を調整する（例えば、刺激又は阻止する）作用をする物質、特に小分子の構造に基づく設計のための、
１）前記ポリペプチドの三次元構造を決定すること、
２）前記物質の可能性のある反応部位又は結合部位の前記ポリペプチド内での三次元構造を推測すること、
３）推測された反応部位又は結合部位と反応又は結合することが予測される候補物質を合成すること、及び
４）候補物質が前記ポリペプチドの活性を調整することが可能かどうかを調べることを含む方法で使用できることも理解しよう。
【００６４】
上述の方法は繰り返しの工程となりそうなことは理解されよう。
【００６５】
本明細書で議論されるように、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する物質は、癌の治療及び／又は予防で用いられる。そのような使用のために、前記剤は通常医薬組成物の形で投与される。
【００６６】
かくして、本発明によれば、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する物質と、薬剤として許容される希釈剤、賦形剤及び／又は担体とを含む医薬組成物が提供される。医薬組成物はワクチンとしても使用され、ワクチン用に許容される更なる成分を含むことができ、また当業者に既知の１つ又は複数の適当なアジュバントを更に含むことができる。
【００６７】
以下において、本発明で用いられる物質、治療及び／又は予防で用いられるＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及びＦＬＪ２０５８４核酸は、「活性物質」と称される。本明細書で、特定の活性物質又は物質の組合せを用いて疾患又は病態を治療又は予防する方法に言及する場合は、そのような言及は、その疾患又は病態の治療及び／又は予防のための医薬品の調製におけるその活性物質又は物質の組合せの使用を含むものと理解されたい。また、癌の療法に用いられる抗体も提供される。
【００６８】
通常、前記組成物は、薬剤として許容される担体を通常含む無菌医薬組成物の一部として供給される。この組成物はいかなる適当な形態でもよい（患者に対する所望の投与方法によって決まる）。
【００６９】
本発明の活性物質は、薬剤投与のために従来使用されている経路のいずれかにより対象に投与することができ、例えばそれらは非経口、経口、局所（口内、舌下又は経皮を含む）或いは吸入の経路により投与することができる。任意の特定のケースにおける最も適当な投与経路は、特定の活性物質、関係する癌腫、対象、並びに疾患の性質及び重大度及び対象の身体条件によって決まる。
【００７０】
前記活性物質は１つ又は複数の他の治療活性のある、例えば抗腫瘍性の化合物と組合せて、例えば同時に、逐次的に又は別々に投与することができる。
【００７１】
医薬組成物は、本発明の活性物質の単位用量当たりの所定量を含んでいる単位用量形態で提供するのが便利である。そのような単位は、例えば、それには限定されないが、治療する病態、投与経路及び対象の年齢、体重及び状態に従い、７５０ｍｇ／ｋｇから０．１ｍｇ／ｋｇ含むことができる。
【００７２】
本発明で用いられる薬剤として許容される担体は、例えば投与経路によって多種多様な形態をとることができる。
【００７３】
経口投与用組成物は、液体又は固体でよい。経口液状製剤は、例えば水性若しくは油性の懸濁液、溶液、乳剤、シロップ又はエリキシルの形態でもよいし、使用時に水又は他の適当な溶媒で元に戻すための乾燥製品として提供することもできる。当技術分野で既知であるように、経口液状製剤は懸濁化剤を含むことができる。
【００７４】
散剤、カプセル及び錠剤のような経口固形製剤の場合、デンプン、砂糖、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、滑剤、結合剤、崩壊剤、などの担体を含むことができる。投与の容易さのため、錠剤及びカプセルは固形医薬担体が通常使用される最も有利な経口用の投薬単位剤形となる。上で提示される一般的な剤形に加えて、本発明の活性物質は、放出制御手段により且つ／又は送達器具により投与することもできる。錠剤及びカプセルは、結着剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカンタ又はポリビニルピロリドン；充填剤、例えばラクトース、砂糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール又はグリシン；錠剤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール又はシリカ；崩壊剤、例えばジャガイモデンプン；或いはラウリル硫酸ナトリウムなどの許容される湿展剤などの従来の担体又は賦形剤を含むことができる。錠剤は、通常の製薬業務で知られている方法により、標準の水性又は非水性の技術でコーティングすることができる。
【００７５】
経口投与のために適当な本発明の医薬組成物は、カプセル、カシェ剤又は錠剤などの活性物質の所定量をそれぞれ含む別々の単位として、散剤又は顆粒剤として、或いは水性液体、非水性液体、水中油型乳剤又は油中水形乳濁液の中の溶液又は懸濁液として提供することができる。そのような組成物はいかなる製剤方法でも調製することができるが、全ての方法は１つ又は複数の必要成分を構成する担体と活性物質とを結合させるステップを含む。一般に、前記組成物は、活性物質を液状の担体又は微粉固体担体或いはその両方と一様に且つ密接に混ぜ合わせ、次に必要に応じて生成物を所望の形に成形することによって調製される。例えば、錠剤は圧縮又は成型により、任意選択に１つ又は複数の副成分と一緒に調製することができる。
【００７６】
非経口投与のために適当な医薬組成物は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性物質と適切に混合されている、本発明の活性物質の水性の溶液又は懸濁液として調製することができる。分散液は、油ベースのグリセリン、液体ポリエチレングリコール及びそれらの混合物で調製することもできる。普通の貯蔵条件及び使用条件下では、これらの調製物は微生物の増殖を予防するために防腐剤を含む。
【００７７】
注射に適当な医薬剤形としては、酸化防止剤、緩衝液、静菌薬、及びその組成物を予定受容個体の血液と等張性にする溶質を含むことができる水性又は非水性の無菌注射溶液、並びに懸濁化剤及び増粘剤を含むことができる水性及び非水性の無菌懸濁液がある。即時使用の注射液、分散液及び懸濁液は、無菌の散剤、顆粒剤及び錠剤から調製することができる。
【００７８】
医薬組成物は、当技術分野で既知の医療器具で投与できる。例えば、好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は針不要の皮下注射器具で投与でき、そのような器具は、例えば米国特許第５３９９１６３号、第５３８３８５１号、第５３１２３３５号、第５０６４４１３号、第４９４１８８０号、第４７９０８２４号、又は第４５９６５５６号で開示されている。本発明に役立つ既知のインプラント及びモジュールの例として以下が含まれる：米国特許第４４８７６０３号は、制御された速度で医薬品を注入するための植込型マイクロ薬物注入ポンプを開示している；米国特許第４４８６１９４号は、皮膚を通して薬物を投与するための治療器具を開示している；米国特許第４４４７２３３号は、投薬を正確な注入速度で実施するための投薬注入ポンプを開示している；米国特許第４４４７２２４号は、連続薬物送達のための可変流植込型注入器具を開示している；米国特許第４４３９１９６号は、多室コンパートメントを有する浸透圧薬物送達システムを開示している；米国特許第４４７５１９６号は、浸透圧薬物送達システムを開示している。他にも多くのそのようなインプラント、送達系及びモジュールが当業者には既知である。
【００７９】
ある実施形態では、本発明の医薬組成物は、ｉｎ ｖｉｖｏで確実に適切な分布を示すように製剤することができる。例えば、血液脳関門は多くの非常に親水性の化合物を排除するので、医薬組成物をリポソームに入れて送達することが好ましいかもしれない。このように、本発明の一実施形態では、本発明の活性物質はリポソームで製剤化される。より好ましい実施形態において、前記リポソームはターゲティング部分を含む。最も好ましい実施形態では、リポソーム内の治療化合物は、腫瘍近くの部位にボーラス注射によって送達される。リポソームの製造方法に関しては、例えば米国特許第４５２２８１１号；第５３７４５４８号；第５３９９３３１号を参照。リポソームは、特定の細胞又は器官に選択的に輸送され、目標への薬物送達を強化する１つ又は複数の部分を含むことができる（例えば、Ｒａｎａｄｅ，ＶＶ．１９８９、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５を参照）。例示的なターゲティング部分としては以下がある：葉酸塩又はビオチン（例えば米国特許第５４１６０１６を参照）；マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａら、１９８８、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）；抗体（Ｂｌｏｅｍａｎ，ＰＧ．ら、１９９５、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３５７：１４０；Ｍ．Ｏｗａｉｓら、１９９５、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０）；界面活性物質プロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅら、１９９５、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）、それの異なる種類は本発明の製剤、並びに発明された分子の成分を含むことができる；ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒら、１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０）；また、Ｋｅｉｎａｎｅｎ，Ｋ．＆Ｌａｕｋｋａｎｅｎ，ＭＬ．１９９４、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３４６：１２３；Ｋｉｌｌｉｏｎ，ＪＪ．＆Ｆｉｄｌｅｒ，ＩＪ．、１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２７３も参照。組成物は安定性を強化するために単位投与又は多回投与容器で、例えば密封アンプル及びバイアルで提供することができ、また、使用直前に無菌の液状担体、例えば注射用水を添加するだけで済むフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存することができる。無菌の液状担体は別個のバイアル又はアンプルで供給することができ、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセリン、プロピレングリコール及び液状ポリエチレングリコール）、それらの適当な混合物並びに植物油を含む溶媒又は分散媒でよい。有利なことに、局部麻酔薬、防腐剤及び緩衝剤などの物質を無菌の液状担体に含むことができる。
【００８０】
局所投与のために適応させる医薬組成物は、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、散剤、溶液、ペースト、ゲル、含浸包帯、スプレー剤、エアゾール又は油、経皮器具、粉剤、などとして製剤化することができる。これらの組成物は、活性物質を含む従来法を通して調製することができる。このように、それらは適合する従来の担体及び添加剤、例えば保存料、薬剤浸透に役立つ溶媒、クリーム又は軟膏ベースの緩和剤及びローションのためのエタノール又はオレイルアルコールを含むこともできる。そのような担体は、組成物の約１％から約９８％まで存在してもよい。より一般的には、それらは組成物の最高約８０％を構成する。例示としてだけであるが、クリーム又は軟膏は十分な量の親水性材料及び水を混ぜることによって調製され、化合物の約５から１０重量％を含有し、所望の粘凋度を有するクリーム又は軟膏を産生するのに十分な量である。
【００８１】
経皮投与に適応した医薬組成物は、長時間にわたってレシピエントの表皮と密接に接触し続けるようになっている個別のパッチとして提供することができる。例えば、活性物質はパッチからイオン導入法により送達することができる。
【００８２】
外部組織、例えば口及び皮膚への適用のためには、前記組成物は好ましくは局所用の軟膏又はクリームとして適用される。軟膏剤形の場合は、活性物質はパラフィン又は水溶性軟膏基剤のいずれかと共に使用することができる。或いは、活性物質は水中油クリーム基剤又は油中水基剤と一緒にクリーム剤形にすることができる。
【００８３】
口への局所投与に適応した医薬組成物としては、ロゼンジ、トローチ及び口内洗剤がある。
【００８４】
目への局所投与に適応した医薬組成物としては、活性物質が適当な担体、特に水性溶媒に溶解又は懸濁した点眼液がある。それらには、上記のような局所用の軟膏又はクリームも含まれる。
【００８５】
担体が固体である直腸投与に適する医薬組成物は、最も好ましくは単位用量坐薬として提供される。適当な担体としてはカカオ脂又は他のグリセリド又は当技術分野で通常使用する材料があり、坐薬は前記組合せと軟化又は溶解担体との混合とその後のチリング及び成型によって都合よく作ることができる。それらは、浣腸として投与することもできる。
【００８６】
膣投与に適応した医薬組成物は、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム又はスプレー組成物として提供することができる。これらは、通常当技術分野で使用される緩和剤又は基剤を含むことができる。
【００８７】
ワクチンとしての使用に適応した医薬組成物は、サイトカイン、ケモカイン、副刺激分子又は免疫反応を増幅及び指示する他の免疫調節剤などのアジュバントを含むことができる。例えば、医薬組成物はＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを、樹状細胞補充を誘導するサイトカイン（例えばＧＭコロニー刺激因子）及び樹状細胞成熟を誘導する副刺激分子（例えばＣＤ４０Ｌ又は拮抗的抗ＣＤ４０）の相乗的組合せにより、ＩＬ−１２及びＩＬ−１５などの他のＴｈ１／細胞傷害性Ｔ細胞支持サイトカインと組み合わせて含むことができる。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドでプレインキュベートされる樹状細胞は、ｅｘ ｖｉｖｏで生成することができる。他の相乗的組合せは、動物モデルで記載されている（Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙら、２００１、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１、２０９〜２１９頁）。他のアジュバントは、ＣｐＧ−オリゴデオキシヌクレオチドである。医薬組成物はＦＬＪ２０５８４ポリペプチド、広域ＭＨＣクラスＩＩ結合、例えばｐａｎ−ＨＬＡ−ＤＲ−結合ペプチド、内因性のヘルパーエピトープ、又は強化ヘルパーエピトープも含むこともできる。
【００８８】
投与される活性物質の用量は、特定の活性物質、関係する癌腫、対象、並びに疾患の性質及び重大度及び対象の身体条件、及び選択される投与経路によって異なる。適当な投薬量は、当業者によって容易に決定される。ヒト及び動物の癌の治療及び／又は予防のために、抗体を含んでいる医薬組成物をいかなる適当な投与経路、例えば注射及び抗体ベースの臨床製品のための当技術分野で既知の他の投与経路を使用して、治療的又は予防的有効量（例えば腫瘍成長の阻止及び／又は腫瘍細胞の移動の阻止をもたらす投薬量）で患者（例えばヒト対象）に投与することができる。
【００８９】
前記組成物は、投与方法により本発明の活性物質の０．１重量％から、好ましくは１０重量％から６０重量％、又はそれ以上を含むことができる。
【００９０】
本発明の活性物質の個々の投薬量の最適量及び間隔は治療される病態の性質及び程度、投与の形態、経路及び部位、並びに治療される特定の対象の年齢及び状態によって決められ、また、医師が最終的に使用する適当な投薬量を決定することは、当業者ならば理解しよう。この投薬は、適当な限り度々繰り返すことができる。副作用が起こる場合は、通常の医療慣行に従って投薬の量及び／又は頻度を変更するか減少させることができる。
【００９１】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、癌の治療及び／又は予防でも役に立つことができる。したがって、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを好ましくはワクチンとして含んでいる組成物の治療的有効量を投与することを含む、癌の治療及び／又は予防のための方法が提供される。癌の治療及び／又は予防のための医薬品の製造のための、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの使用も提供される。それらが本発明の方法での使用のために提供される場合は、ＦＬＪ２０５８４は好ましくは単離された形態で提供される。より好ましくは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、少なくともある程度精製されている。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは組換え方法を使って産生すること、合成的に産生すること、又はこれらの方法の組合せによって産生することもできる。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは実質的に純粋な形態で、すなわち実質的に他のタンパク質を含まない形態で提供することができる。
【００９２】
組換えＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、発現系を含んでいる遺伝子操作された宿主細胞から、当技術分野で既知の方法によって調製することができる。したがって、本発明はＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又はＦＬＪ２０５８４核酸を含む発現系、そのような発現系で遺伝子操作されている宿主細胞、及び組換え技術によるＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの産生にも関する。組換えポリペプチドを産生するために無細胞翻訳系を使用することもできる（例えばウサギ網状赤血球溶解物、コムギ麦芽溶解物、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｌｔｄ．、Ｌｅｗｅｓ、ＵＫからのＳＰ６／Ｔ７ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ＆Ｔ及びＲＴＳ １００ Ｅ．Ｃｏｌｉ ＨＹ転写及び翻訳キット、並びにＰｒｏｍｅｇａ ＵＫ、Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ、ＵＫからのＴＮＴ Ｑｕｉｃｋ ｃｏｕｐｌｅｄ転写／翻訳システム）。
【００９３】
組換えＦＬＪ２０５８４ポリペプチド産生のために、宿主細胞はＦＬＪ２０５８４核酸のための発現系又はその部分を組み込むように遺伝子操作することができる。そのような組込みは、当技術分野で既知の方法、例えばリン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＤ−デキストラン媒介性トランスフェクション、トランスベクション、マイクロインジェクション、カチオン脂質媒介性トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレープローディング、遺伝子銃による導入又は感染などで実施することができる（例えばＤａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、１９８６及びＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ、ＮＹ、１９８９を参照）。
【００９４】
宿主細胞の代表例としては、大腸菌、連鎖球菌、ブドウ球菌、ストレプトマイセス及び枯草菌細胞などの細菌細胞；酵母細胞及びアスペルギルス細胞などの糸状菌の細胞；ショウジョウバエＳ２及びスポドプテラ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ）Ｓｆ９細胞などの昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ及びボーズ黒色腫細胞などの動物細胞；並びに植物細胞がある。
【００９５】
多種多様な発現系を利用でき、例として、それには限定されないが、染色体、エピソーム及びウイルス由来の系、例えば細菌性プラスミド、バクテリオファージ、トランスポゾン、酵母エピソーム、挿入要素、酵母染色体要素、ウイルス（例えばバキュロウイルス、ＳＶ４０などのパポバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス及びレトロウイルス）などに由来するベクター、並びにその組合せに由来するベクターがあり、例えばプラスミド及びバクテリオファージ遺伝因子（例えばコスミド及びファージミドなど）がある。発現系は、発現を起こすだけでなく調節する制御領域を含むことができる。通常、核酸を維持、増殖、又は発現してポリペプチドを宿主内で産生することができるいかなる系又はベクターでも使用することができる。適当な核酸配列は、上記Ｓａｍｂｒｏｏｋらで示されているようないかなる種類の既知の常用技術によっても、発現系に挿入することができる。小胞体の内腔、ペリプラスム間隙又は細胞外の環境への翻訳されたタンパク質の分泌を可能にするために、適当な分泌シグナルをＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに組み込むことができる。これらのシグナルはＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに対して内因性であっても、又は異種シグナルであってもよい。
【００９６】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドが細胞ベースのスクリーニングアッセイのために発現させられるならば、ポリペプチドは細胞表面に産生されることが好ましい。この場合、細胞はスクリーニングアッセイで使うより前に収集することができる。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドが培地に分泌されるならば、培地は前記ポリペプチドを単離するために回収することができる。細胞内産生の場合は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを回収する前に細胞を先ず溶解しなければならない。
【００９７】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、組換え細胞培養から又は他の生物源から、硫安又はエタノール沈殿、酸抽出、アニオン又はカチオンイオン交換クロマトグラフィー、リン酸セルロースクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、分子篩クロマトグラフィー、遠心分離法、電気泳動法及びレクチンクロマトグラフィーなどの既知の方法により回収及び精製することができる。一実施形態では、これらの方法の組合せが使用される。他の実施形態では、高速液体クロマトグラフィーが使用される。他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを含んでいる試料から前記ポリペプチドを除去するために、又は前記ポリペプチドを精製するためにＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと特異的に結合する抗体を用いることができる。単離又は精製の間にポリペプチドが変性したときは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの未変性又は活性な高次構造を再生させるリフォールディングのために、当技術分野で既知の技術を使用することができる。本発明との関連で、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドはいかなる供与源からの生体試料からでも、例えばそれには限定されないが、血液試料又は組織試料、例えば卵巣又は肺の組織試料などから得ることができる。
【００９８】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは「成熟」タンパク質の形でもよく、又は融合タンパク質などのより大きなタンパク質の一部でもよい。分泌配列又はリーダー配列を含む更なるアミノ酸配列、プレタンパク、プロタンパク若しくはプレプロタンパク配列、又は精製で役立つ配列、例えばそれには限定されないが複ヒスチジン残基、ＦＬＡＧ標識、ＨＡ標識若しくはｍｙｃ標識などの親和性標識を含むことはしばしば有利である。組換えを生成する間の安定性を提供することができる更なる配列も、使用することができる。そのような配列は、更なる配列又はその一部として切断可能な配列を組み込むことによって、必要に応じて任意選択に除去することができる。このように、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、他のポリペプチドを含む他の部分と融合することができる。このような追加の配列及び親和性標識は、当技術分野において周知である。
【００９９】
当技術分野で既知であるように、アミノ酸置換は保存的又は半保存的であることができ、ポリペプチドの所望の活性に有意な影響を及ぼさないことが好ましい。置換は自然発生でよく、又は例えば突然変異誘発を用いて導入することができる（例えばＨｕｔｃｈｉｎｓｏｎら、１９７８、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：６５５１）。従って、アミノ酸グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシンは、しばしばお互いに置換することができる（脂肪族側鎖を有するアミノ酸）。これらの可能な置換の中で、グリシン及びアラニンを互いに置換するために使用すること（それらは比較的短い側鎖を有することから）、また、バリン、ロイシン及びイソロイシンを互いに置換するために使用すること（それらは疎水性のより大きな脂肪族側鎖を有することから）が好ましい。しばしばお互いに置換される他のアミノ酸としては、それには限定されないが以下がある：
−フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン（芳香族側鎖を有するアミノ酸）；
−リジン、アルギニン及びヒスチジン（塩基側鎖を有するアミノ酸）；
−アスパラギン酸及びグルタミン酸（酸性側鎖を有するアミノ酸）；
−アスパラギン及びグルタミン（アミド側鎖を有するアミノ酸）；
−システイン及びメチオニン（硫黄含有側鎖を有するアミノ酸）；並びに
−アスパラギン酸及びグルタミン酸は、それぞれホスホセリン及びホスホトレオニンを置換することができる（酸性側鎖を有するアミノ酸）。
【０１００】
特定の一実施形態では、置換されたアミノ酸は実際にＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性にかなりの影響を及ぼし、ペプチドに対して特異的にドミナントネガティブな活性を与えるために選択することができる。他の実施形態では、置換されたアミノ酸は、ポリペプチドを特異的に構成的に活性にするために選択することができる。
【０１０１】
一実施形態では、ワクチンの効力を改善するために、通常エピトープ強化と称されるＦＬＪ２０５８４ポリペプチドのエピトープのアミノ酸配列の修飾が使用される。
【０１０２】
修飾には、それには限定されないが、翻訳後修飾などの自然に生じる修飾、更には突然変異誘発によって導入することができるような非自然発生の修飾が含まれる。
【０１０３】
好ましくは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの誘導体は図１で示されるアミノ酸配列（配列番号１）と少なくとも７０％の同一性、より好ましくは少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９８％の同一性を有する。同一性割合は当技術分野で既知の概念であって、それには限定されないが例えばＮＣＢＩから入手可能なＢＬＡＳＴ（商標）ソフトウェアを使用して計算することができる（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０頁；Ｇｉｓｈ，Ｗ．＆Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．、１９９３、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．３：２６６〜２７２頁；Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ら、１９９６、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１〜１４１頁；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９７、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９〜３４０２頁；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．＆Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．、１９９７、Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．７：６４９〜６５６頁）。
【０１０４】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの断片も本発明の方法で役に立つこともでき、例としては配列番号１のアミノ酸配列を有するポリペプチドの断片が含まれ、それは断片全体で少なくとも７０％の相同性を有する。好ましくは、前記断片は長さが少なくとも１０アミノ酸であり、好ましくは長さが少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも５０又は少なくとも１００アミノ酸である。断片は図１で示されるアミノ酸配列（配列番号１）と全体で少なくとも７０％の同一性を有し、より好ましくは少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９８％の同一性を有する。そのような断片は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性を保持する。そのような活性には、抗体結合能力が含まれる。
【０１０５】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドが癌の治療及び／又は予防に用いられる医薬組成物の活性物質である場合は、好ましくは組換えＦＬＪ２０５８４ポリペプチドが使用される。特定の実施形態では、細胞へ融合タンパク質が入るのを助長するＨＩＶ／Ｔａｔタンパク質のタンパク質形質導入ドメインなど他のポリペプチド（Ａｓｏｈ，Ｓ．ら、２００２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９９：１７１０７〜１７１１２頁）と融合されたＦＬＪ２０５８４ポリペプチドが、癌の治療及び／又は予防のための医薬品の製造のために提供される。
【０１０６】
他の態様において、有癌対象におけるＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの検出は、特に本発明の方法による治療に適当な患者集団を同定するために用いることができる。
【０１０７】
したがって、本発明は対象の癌のスクリーニング及び／又は診断若しくは予後診断のための、且つ／或いは癌療法の効果をモニターするための、前記対象から得られる生体試料においてＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを検出及び／又は定量するステップを含む方法を提供する。好ましくは前記スクリーニング及び／又は診断の方法に用いられるＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかそれからなるか、
（ｂ）ＦＬＪ２０５８４活性を保持する配列番号１のアミノ酸配列と比較して１つ又は複数のアミノ酸置換、修飾、欠失又は挿入を有する誘導体であるか、或いは
（ｃ）配列番号１のアミノ酸配列を有するポリペプチドの断片であり、長さが少なくとも１０アミノ酸であって、断片全体で少なくとも７０％の相同性を有する。
【０１０８】
一態様では、発現は前に測定された基準範囲と比較される。
【０１０９】
好ましくは、検出するステップは、
（ａ）試料を上の（ａ）から（ｃ）で定義されているポリペプチドに特異的な捕捉試薬と接触させること、及び
（ｂ）前記試料中の前記捕捉試薬及び前記ポリペプチドの間で結合が起こったかどうかを検出することを含む。
【０１１０】
他の態様において、捕捉されたポリペプチドは、固相上に固定されてもよい直接又は間接標識された検出試薬を用いて検出される。
【０１１１】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを検出／定量するための便利な手段は、抗体の使用を含む。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、先に述べた当技術分野で既知の方法を用いて、前記ポリペプチドと相互作用する（結合又は認識する）抗体を作製するためのイムノゲンとして用いることができる。このように他の態様では、本発明は、対象の癌のスクリーニング及び／又は診断のための或いは抗癌療法の効力をモニターするための、少なくとも１つのＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと特異的に結合する抗体の使用を提供する。特定の実施形態において、抗ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド抗体を用いる診断方法は、本発明の方法による治療に適当な患者集団を同定するために用いることができる。
【０１１２】
ＦＬＪ２０５８４抗体は、とりわけヒト組織及び／又はその亜分画、例えばそれには限定されないが、膜、サイトゾル若しくは核の亜分画の生体試料中のＦＬＪ２０５８４発現を検出することによる癌の診断のために用いることもできる。
【０１１３】
他の態様では、生体試料中のＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを検出する方法は、直接又は間接標識された検出試薬を用いて前記試料中のＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの量を検出及び／又は定量することを含む。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは当技術分野で既知のいかなるイムノアッセイによっても検出することができ、例えばそれには限定されないものの、免疫沈降反応とそれに続くドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法、２次元ゲル電気泳動法、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降反応アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集反応アッセイ、補体結合反応アッセイ、免疫放射測定アッセイ、蛍光免疫法及びプロテインＡイムノアッセイなどの技術を用いる競合的及び非競合的なアッセイ系で検出することができる。
【０１１４】
抗体と抗原との相互作用の検出は、抗体を検出可能な物質、例えばそれに限定されないが、酵素（例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ）、補欠分子族（例えばストレプトアビジン、アビジン、ビオチン）、蛍光物質（例えばウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、フィコエリトリン）、発光物質（例えばルミノール）、生物発光材料（例えばルシフェラーゼ、ルシフェリン、エクオリン）、放射性核種（例えば１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９９Ｔｃ）、陽電子放射金属又は非放射性常磁性金属イオンなどと結合することにより、容易にすることができる（米国特許第４７４１９００号を参照）。
【０１１５】
本発明は、上で定義されたＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに対する捕捉試薬（例えば抗体）を含む診断キットも提供する。更に、そのようなキットは任意選択に以下の１つ又は複数を含む：
（１）スクリーニング、診断、予後診断、治療モニタリング又はこれらの用途のいかなる組合せのための捕捉試薬の使用説明書、
（２）捕捉試薬に対する標識された結合パートナー、
（３）捕捉試薬が固定される固相（例えば試薬細片）、及び
（４）スクリーニング、診断、予後診断又は治療又はそのいかなる組合せのための使用の規制上の承認を示している表示又は挿入紙。
【０１１６】
捕捉試薬に対する標識された結合パートナーが提供されないならば、抗ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド捕捉試薬自体を検出可能なマーカー、例えば化学発光、酵素、蛍光又は放射性の部分（上記参照）で標識することができる。
【０１１７】
ＦＬＪ２０５８４核酸の検出及び／又は定量は、対象の癌のスクリーニング及び／又は診断若しくは予後診断の方法で、且つ／或いは癌療法の効果をモニターする方法で用いることができることも、当業者にとって明らかになる。
【０１１８】
別のものを示していない限り、ＦＬＪ２０５８４核酸は以下の特性の１つ又は複数を有することができる核酸分子を含み、したがって、
ｄ）配列番号２のＤＮＡ配列又はそのＲＮＡ同等物を含むかそれからなり、
ｅ）ｄ）の配列に相補性である配列を有し、
ｆ）ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードする配列を有し、
ｇ）ｄ）、ｅ）及びｆ）の配列のいずれかと実質的な同一性を示す配列を有し、或いは
ｈ）長さが少なくとも１５ヌクレオチドであるｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）の断片であり、
また、以下の特性の１つ又は複数を有することができる：
１）それらはＤＮＡでもＲＮＡでもよい；
２）それらは、一本鎖でも二本鎖でもよい；
３）それらは、実質的に純粋な形態であってもよい。したがって、それらは混在するタンパク質及び／又は他の核酸を実質的に含まない形態で提供することができる；
４）それらは、イントロンと一緒でもイントロンが無くてもよい（例えばｃＤＮＡとして）。
【０１１９】
ＦＬＪ２０５８４核酸の断片は、長さが好ましくは少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも５０、少なくとも１００又は少なくとも２５０ヌクレオチドである。
【０１２０】
本発明は、上の（ｄ）から（ｈ）で記載されているＦＬＪ２０５８４核酸に相補性であり、前記ＦＬＪ２０５８４核酸にハイブリダイズすることができる核酸の使用も提供する。そのような核酸分子は、「ハイブリッド形成」核酸分子と称される。例えば、しかしそれには限定されないが、ハイブリッド形成核酸分子は、プローブ又はプライマーとして役に立つことができる。ハイブリッド形成核酸分子は、その全長にわたって上の（ｄ）から（ｈ）の適用範囲内の核酸分子と高い配列同一性を有することができる（例えば少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９８％の配列同一性）。上で議論した核酸分子のいずれかとハイブリダイズすることができるハイブリッド形成核酸分子の、例えばハイブリッド形成アッセイにおける使用も、本発明の範囲内である。
【０１２１】
ハイブリッド形成アッセイは、対象の癌の療法のスクリーニング、予後診断、診断又はモニターのために用いることができる。したがって、そのようなハイブリッド形成アッセイは、
ｉ）対象から得た核酸を含む生体試料を、ハイブリダイゼーションが起こる条件下でＦＬＪ２０５８４核酸分子とハイブリダイズすることができる核酸プローブと接触させること、及び
ｉｉ）結果として生じるいかなるハイブリダイゼーションをも検出又は測定することを含む。
【０１２２】
好ましくは、そのようなハイブリッド形成分子は長さが少なくとも１０ヌクレオチドであり、好ましくは長さが少なくとも２５又は少なくとも５０ヌクレオチドである。より好ましくは、前記ハイブリッド形成核酸は、上の（ｄ）から（ｈ）のいずれかの適用範囲内の核酸と特異的にハイブリダイズする。最も好ましくは、ハイブリダイゼーションはストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で起こる。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の１例は、企図するハイブリダイゼーションが約０．９Ｍの塩溶液を用いて約３５℃から約６５℃の温度で実施される場合である。しかし、当業者は、プローブ長、塩基組成、存在するイオンの型、その他の変数を考慮するために適宜、そのような条件を変更することができる。
【０１２３】
本発明は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードするＲＮＡとハイブリダイズすることができる核酸プローブ、適当な試薬及び取扱説明書を含む診断キットも提供する。
【０１２４】
他の実施形態では、適当な反応条件下でＦＬＪ２０５８４核酸分子の少なくとも一部の増幅を、例えばポリメラーゼ連鎖反応（例えばＩｎｎｉｓら、１９９０、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州サンディエゴを参照）、リガーゼ連鎖反応（欧州特許第３２０３０８号を参照）、Ｑβレプリカーゼの使用、環式プローブ反応又は当技術分野で既知の他の方法により刺激することができる一対のプライマーを、１つ又は複数の容器に含んでいる診断キットが提供される。一般的に、プライマーは長さが少なくとも８ヌクレオチドであり、好ましくは長さは少なくとも１０から２５ヌクレオチド、より好ましくは１５から２５ヌクレオチドとなる。場合によっては、長さが少なくとも３０又は少なくとも３５のヌクレオチドのプライマーを用いることができる。
【０１２５】
他の態様では、本発明は、癌の治療及び／又は予防に用いられる医薬品の製造における少なくとも１つのＦＬＪ２０５８４核酸の使用を提供する。
【０１２６】
特定の実施形態において、ハイブリッド形成ＦＬＪ２０５８４核酸分子は、相補性のＦＬＪ２０５８４核酸との結合によりＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現を変化させるためのアンチセンス分子として用いられ、癌の治療及び／又は予防若しくは阻止で用いることができる。アンチセンス核酸は、多少の配列相補性のためにＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードするＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）の一部とハイブリダイズすることができるＦＬＪ２０５８４核酸を含む。アンチセンス核酸は、そのようなポリペプチドをコードするｍＲＮＡのコード領域及び／又は非コード領域と相補性であることができる。最も好ましくは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現は、アンチセンス核酸の使用によって阻止される。このように、本発明は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードする遺伝子又はｃＤＮＡにアンチセンスである少なくとも８のヌクレオチドを含む核酸の、治療的又は予防的使用を提供する。
【０１２７】
他の実施形態では、ポリペプチドの遺伝子発現を減少させるために本明細書で定義されているポリペプチドをコードする遺伝子配列を既知の遺伝子「ノックアウト」、リボザイム又は三重らせんの方法と共に用いることによってＦＬＪ２０５８４ポリペプチドのレベル又は活性を減少させることにより、癌の症状を改善することができる。この方法では、リボザイム又は三重らせん分子は、遺伝子の活性、発現又は合成を調整することにより、癌の症状を改善するために用いられる。そのような分子は、突然変異又は非突然変異の標的遺伝子の発現を低減させるか阻止するように設計することができる。そのような分子の産生及び使用のための技術は、当業者に既知である。
【０１２８】
内因性のＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現は、標的相同組換えを利用してポリペプチドをコードする遺伝子又はそのような遺伝子のプロモーターを不活性化又は「ノックアウト」することによって減少させることもできる（例えばＳｍｉｔｈｉｅｓら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ ３１７：２３０〜２３４頁；Ｔｈｏｍａｓ＆Ｃａｐｅｃｃｈｉ、１９８７、Ｃｅｌｌ ５１：５０３〜５１２頁；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、１９８９、Ｃｅｌｌ ５：３１３〜３２１頁；及びＺｉｊｌｓｔｒａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５〜４３８頁を参照）。例えば、内因性のＦＬＪ２０５８４遺伝子（ポリペプチドをコードする遺伝子のコード領域又は調節領域）と相同なＤＮＡが隣接する非機能性ポリペプチド（又は完全に無関係なＤＮＡ配列）をコードする突然変異遺伝子は、ｉｎ ｖｉｖｏで標的遺伝子を発現する細胞にトランスフェクトするために、選択可能なマーカー及び／又は負の選択可能なマーカーと一緒に又はそれ無しに用いることができる。標的相同組換えを通してのＤＮＡ構築物の挿入は、標的遺伝子の不活化をもたらす。
【０１２９】
他の実施形態では、核酸は遺伝子治療により投与される（例えばＨｏｓｈｉｄａ，Ｔ．ら、２００２、Ｐａｎｃｒｅａｓ、２５：１１１〜１２１頁；Ｉｋｕｎｏ，Ｙ．２００２、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２００２ ４３：２４０６〜２４１１頁；Ｂｏｌｌａｒｄ，Ｃ．、２００２、Ｂｌｏｏｄ ９９：３１７９〜３１８７頁；Ｌｅｅ Ｅ．、２００１、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７：７７３〜７８２頁を参照）。遺伝子治療は、発現された又は発現可能なＦＬＪ２０５８４核酸の対象への投与を指す。当技術分野で利用できる遺伝子治療法のいずれも、本発明に従い利用できる。
【０１３０】
患者への治療的ＦＬＪ２０５８４核酸の送達は、直接的ｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子治療（すなわち、患者は核酸又は核酸を含んでいるベクターに直接曝される）でも間接的ｅｘ ｖｉｖｏ遺伝子治療（すなわち、細胞は先ずｉｎ ｖｉｔｒｏで核酸により形質転換され、次に患者に移植される）でもよい。
【０１３１】
例えばｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子治療のためには、ＦＬＪ２０５８４核酸を含んでいる発現ベクターはそれが細胞内に入るように、すなわち例えば米国特許第４９８０２８６号又はＲｏｂｂｉｎｓら、１９９８、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．８０：３５〜４７頁に記載されている欠損若しくは弱毒化レトロウイルス又は他のウイルスベクターを用いた感染により投与される。
【０１３２】
当技術分野で既知の様々なレトロウイルスベクターは、Ｍｉｌｌｅｒら（１９９３、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１〜５９９頁）が記載している、ウイルスゲノムのパッケージング及び以降の宿主細胞ＤＮＡへの組込みのために必要とされないレトロウイルス配列を削除するように修飾されているものなどである。また、その非分裂細胞に感染する能力のために有利であるアデノウイルスベクターを用いることができ、そのような高容量アデノウイルスベクターはＫｏｃｈａｎｅｋ（１９９９、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、１０：２４５１〜２４５９頁）で記載されている。利用することができるキメラウイルスのベクターは、Ｒｅｙｎｏｌｄｓら（１９９９、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｔｏｄａｙ、１：２５〜３１頁）によって記載されているものである。ハイブリッドベクターも用いることができ、それらはＪａｃｏｂｙら（１９９７、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、４：１２８２〜１２８３頁）によって記載されている。
【０１３３】
裸のＤＮＡの直接注入、又は微小粒子ボンバードメント（例えばＧｅｎｅ Ｇｕｎ（登録商標）；微粒子銃、デュポン）の使用によるもの、又はそれを脂質でコーティングすることによるものも、遺伝子治療において用いることができる。細胞表面受容体／トランスフェクション化合物又はリポソーム、微小粒子若しくはマイクロカプセル内へのカプセル化によるもの、又は核に入ることが既知のペプチドと結合させて核酸を投与することによるもの、又は受容体依存性エンドサイトーシスの傾向があるリガンドと結合させてそれを投与することによるもの（Ｗｕ＆Ｗｕ、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６２：４４２９〜４４３２頁を参照）は、対象の受容体を特異的に発現する細胞型を標的にするために用いることができる。
【０１３４】
他の実施形態では、エンドソームを崩壊させるように設計された融合誘導ウイルスのペプチドを含むことにより、ＦＬＪ２０５８４核酸が以降のリソソーム分解を避けることを可能にするＦＬＪ２０５８４核酸を含む核酸リガンド化合物を産生することができる。ＦＬＪ２０５８４核酸は、国際公開９２／０６１８０、国際公開９３／１４１８８及び国際公開９３／２０２２１で記載されているような特定の受容体を標的にすることによって、ｉｎ ｖｉｖｏで細胞特異的なエンドサイトーシス及び発現のための標的にすることができる。或いは、核酸を細胞内に導入して、相同組換えによる発現のために宿主細胞ゲノム内に組み込むことができる（Ｚｉｊｌｓｔｒａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：４３５〜４２８頁を参照）。
【０１３５】
ｅｘ ｖｉｖｏ遺伝子治療では、遺伝子は組織培養を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞へ移され、これらの細胞は様々な方法、例えば皮下注入、植皮片への細胞の適用及び造血幹細胞若しくは前駆細胞などの組換え血球の静脈注射などによって患者に送達される。
【０１３６】
遺伝子治療の目的のためにＦＬＪ２０５８４核酸を導入することができる細胞としては、例えば、上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋細胞、肝細胞及び血球がある。利用することができる血球としては、例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球、造血性細胞又は前駆細胞などがある。
【０１３７】
一態様では、前記医薬組成物は、適当な宿主でＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又はそのキメラタンパク質を発現する発現ベクターの一部である、ＦＬＪ２０５８４核酸を含む。詳細には、そのような核酸は作動可能的にポリペプチドコード領域に結合されたプロモーターを有し、前記プロモーターは誘導可能であるか構成的である（また、任意選択に組織特異的である）。他の特定の実施形態では、コード配列及び他のいかなる所望の配列であれそこにゲノム中の所望の部位で相同組換えを促進する領域が隣接する核酸分子が利用され、このように前記核酸の染色体内の発現が可能になる（Ｋｏｌｌｅｒ＆Ｓｍｉｔｈｉｅｓ、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２〜８９３５頁；Ｚｉｊｌｓｔｒａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５〜４３８頁）。
【０１３８】
ＦＬＪ２０５８４核酸は標準的なクローニング及びスクリーニング技術を用い、発現配列標識（ＥＳＴ）の分析を利用してヒト細胞のｍＲＮＡに由来するｃＤＮＡライブラリから得ることができる（Ａｄａｍｓ，Ｍ．ら、１９９１、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５２：１６５１〜１６５６頁；Ａｄａｍｓ，Ｍ．ら、１９９２、Ｎａｔｕｒｅ ３５５：６３２〜６３４頁；Ａｄａｍｓ，Ｍ．ら、１９９５、Ｎａｔｕｒｅ、３７７：付録：３〜１７４頁）。ＦＬＪ２０５８４核酸はゲノムＤＮＡライブラリなどの天然供給源から得ることもでき、又は市販の既知技術を利用して合成することもできる。上述のＦＬＪ２０５８４ポリペプチドのコード配列を含んでいるＦＬＪ２０５８４核酸は、前記ポリペプチドの組換え産生のために用いることができる。ＦＬＪ２０５８４核酸は、成熟ポリペプチドのコード配列を単独で、又は成熟ポリペプチドのコード配列を他のコード配列、例えばリーダー配列若しくは分泌配列をコードするもの、プレタンパク、プロタンパク若しくはプレプロタンパクの配列、切断可能な配列又は親和性標識若しくはポリペプチド産生の間の安定性を付与する更なる配列などの他の融合ペプチド部分と読み枠内で含むことができる。好ましい親和性標識としては、複ヒスチジン残基（例えば、Ｇｅｎｔｚら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１〜８２４頁を参照）、ＦＬＡＧ標識、ＨＡ標識又はｍｙｃ標識がある。ＦＬＪ２０５８４核酸は、５’及び３’の非コード配列、例えば転写され、翻訳されない配列、スプライシング及びポリアデニル化シグナル、リボソーム結合部位並びにｍＲＮＡを安定させる配列を含むこともできる。
【０１３９】
上のＦＬＪ２０５８４ポリペプチド誘導体は、１つ又は複数のアミノ酸置換、付加又は欠失がコードされたタンパク質に導入されるように、１つ又は複数のヌクレオチド置換、付加又は欠失をＦＬＪ２０５８４核酸のヌクレオチド配列に導入することによって生成することができる。例えば部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲ媒介による突然変異誘発を含む変異を導入するために、当業者に既知の標準的な技術を用いることができる。好ましくは、保存的なアミノ酸置換は、１つ又は複数の予測される非必須アミノ酸残基で形成される。
【０１４０】
ヒト以外の種からの相同体及び相同分子種を含むＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードするＦＬＪ２０５８４核酸は、上の（ｄ）から（ｈ）で記載されているＦＬＪ２０５８４核酸の配列を有する標識プローブを用いてストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で適当なライブラリをスクリーニングするステップと、前記核酸配列を含む完全長ｃＤＮＡ及びゲノムクローンを単離するステップとを含む方法によって得ることができる。このようなハイブリダイゼーション技術は当技術分野において既知である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の１例は、企図するハイブリダイゼーションが約０．９Ｍの塩溶液を用いて約３５℃から約６５℃の温度で実施される場合である。しかし、当業者は、プローブ長、塩基組成、存在するイオンの型、その他の変数を考慮するために適宜、そのような条件を変更することができる。高度選択性のためには、低塩又は高温条件のような比較的ストリンジェントな条件を用いて二重鎖を形成する。非常にストリンジェントな条件としては、６５℃での０．５Ｍ ＮａＨＰＯ４、７％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、１ｍＭ ＥＤＴＡ中でのフィルター結合ＤＮＡへのハイブリダイゼーション、及び６８℃での０．１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中での洗浄が挙げられる（Ａｕｓｕｂｅｌ Ｆ．Ｍ．ら編、１９８９、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．Ｉ、Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．、及びＪｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ｐ．２．１０．３）。一部の適用では、二本鎖形成のためにより低いストリンジェント条件が要求される。適度にストリンジェントな条件としては、４２℃での０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中での洗浄が挙げられる（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９８９、前掲）。ハイブリッド二重鎖を不安定にするために、ホルムアミドの添加量を増加させることによってハイブリダイゼーション条件をより強くストリンジェントにすることもできる。このように、個々のハイブリダイゼーション条件は容易に操作することができ、通常、適宜選択される。一般に、５０％ホルムアミドの存在下での都合の良いハイブリダイゼーション温度は、本明細書で定義されているポリペプチドをコードする遺伝子断片と９５〜１００％同一であるプローブでは４２℃、９０〜９５％の同一性では３７℃、７０〜９０％の同一性では３２℃である。
【０１４１】
多くの場合、ポリペプチドをコードする領域はｃＤＮＡの５’末端で短く切断される点で、単離されたｃＤＮＡ配列は不完全なものとなることは当業者ならば理解しよう。これは、進行性（重合反応の間テンプレートと結合し続ける酵素の能力の測度）が本質的に低い酵素である逆転写酵素が、最初の鎖ｃＤＮＡ合成の間のｍＲＮＡテンプレートのＤＮＡコピーを完成できない結果である。
【０１４２】
完全長ｃＤＮＡを得る方法又は短いｃＤＮＡを伸長する方法は、例えばＲＡＣＥ（Ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ；例えばＦｒｏｈｍａｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：８９９８〜９００２頁）など当技術分野で既知である。この技術の最近の修正、例えばＭａｒａｔｈｏｎ（商標）技術（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．）は、より長いｃＤＮＡの探索をかなり単純化した。この技術では、選択された組織から抽出されるｍＲＮＡから調製されるｃＤＮＡを用い、その後各末端へアダプター配列をライゲーションする。次に、遺伝子特異的及びアダプター特異的オリゴヌクレオチドプライマーの組合せを用いて、ｃＤＮＡの欠落している５’末端を増幅するためにＰＣＲが実行される。次に、増幅生成物とアニールするように設計されているネステッドプライマー、一般的にアダプター配列の３’を更にアニールするアダプター特異的プライマー及び既知の遺伝子配列の５’を更にアニールする遺伝子特異的プライマーを用いてＰＣＲ反応を繰り返す。この反応の生成物は次にＤＮＡ塩基配列決定で分析することができ、完全長ｃＤＮＡは、生成物を既存のｃＤＮＡに直接結合させて完全な配列を得るか、又は５’プライマーの設計のための新しい配列情報を用いて別個の完全長ＰＣＲを実施することにより構築することができる。
【０１４３】
本発明の他の態様は、癌の治療及び／又は予防で役に立つワクチン組成物に関する。先に述べたＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又は核酸は、癌の治療及び／又は予防のためのワクチンの産生で用いることができる。そのような物質は抗原性且つ／又は免疫原性であってよい。抗原性物質としては、抗体を生成するために用いることができるか、対象で実際に抗体反応を誘導することができるタンパク質又は核酸がある。免疫原性物質としては、対象で免疫反応を導き出すことができるタンパク質又は核酸がある。このように、後者の場合、前記タンパク質又は核酸は抗体反応を起こすだけではなく、非抗体ベースの免疫反応、すなわち細胞性又は液性の反応をも起こすことができる。前記ポリペプチドの抗原性又は免疫原性を担う抗原性又は免疫原性のポリペプチドの領域、すなわち１つ又は複数のエピトープを同定することが可能なことは、当技術分野で既知である。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの抗原性指数（領域が抗原性である確率の測度）を予測するために、当業者に既知のアミノ酸及びペプチドの特性を利用することができる。例えば、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ、Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｔｚ分析、又は「Ｐｅｐｔｉｄｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ」プログラム（Ｊａｍｅｓｏｎ ａｎｄ Ｗｏｌｆ、１９８８、ＣＡＢＩＯＳ、４（１）：１８１）、及び「Ｔｈｒｅａｄｉｎｇ」（Ａｌｔｕｖｉａ Ｙ．ら、１９９５、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４９：２４４）と称される技術を用いることができる。このように、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは１つ又は複数のそのようなエピトープを含んでもよいし、又は、それらの抗原性／免疫原性を保持するようにそのような領域と十分に類似していてもよい。
【０１４４】
特定の実施形態では、ワクチンに用いられる医薬組成物の活性物質としてのＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは短いペプチドであり、好ましくは長さが５〜２０アミノ酸、より好ましくは７〜１５アミノ酸、最も好ましくは８〜１０アミノ酸である。そのようなペプチドは、ワクチンの効力を強化するために修飾されたエピトープを含むことができる。そのような修飾は、（ａ）ペプチドの主要組織適合遺伝子複合体分子との親和性を増加させ、（ｂ）Ｔ細胞受容体の誘発を増加させ、又は（ｃ）血清ペプチダーゼによるペプチドのタンパク質分解を阻止する役目を果たすことができる。
【０１４５】
ポリペプチド又は核酸は胃内で破壊される可能性があるので、前記ワクチン組成物は好ましくは非経口的に（例えば皮下、筋肉内、静脈内又は皮内の注射により）投与されるか、或いは、ＦＬＪ２０５８４核酸配列を含んでいる細菌又はウイルスのベクター、例えばアデノウイルスベクターを用いて細胞のトランスフェクション又は感染により投与される。
【０１４６】
したがって、他の実施形態において、本発明は、
ａ）対象で免疫反応を誘導するためのそのようなワクチンの使用、及び
ｂ）対象の癌の治療及び／若しくは予防のための、又は癌に対して対象にワクチン接種をするための、対象にＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の有効量を好ましくはワクチンとして投与するステップを含む方法を提供する。
【０１４７】
本発明の各実施形態の好ましい特性は、他の実施形態のそれぞれに準用される。それには限定されないが本明細書で引用されている特許及び特許出願を含む全ての刊行物は、個々の刊行物が完全に示されているかのように本明細書で参照により組み込まれていることを特に、また個々に示されるように、本明細書で参照により組み込まれている。
【０１４８】
本発明は次に以下の実施例に関して記載されるが、それらは例示だけが目的であり、いかなる形であれ本発明の範囲を限定するものとして解釈されてはならない。
【実施例】
【０１４９】
（実施例１）
腫瘍由来の細胞系からのＦＬＪ２０５８４タンパク質の単離
結腸直腸腫瘍由来の細胞系の膜のヘパリン結合分画内及び胃腫瘍由来の細胞系の膜内のタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離して分析した。
【０１５０】
１ａ−細胞培養
結直腸癌系の膜のプールを、以下のヒト結腸腺癌細胞系から調製した：ＨＣＴ−１５細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−２２５）；ＨＴ−２９細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ−３８）；ＬｏＶｏ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＣＬ−２２９）；ＬＳ１７４Ｔ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＬ−１８８）；ＳＷ６２０（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＣＬ−２２７）；及びＳＷ９４８（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＣＬ−２３７）。
【０１５１】
ＨＴ２９細胞は、ＭｃＣｏｙ’ｓ＋２ｍＭ Ｇｌｕｔ＋１０％ＦＢＳで培養した。ＬＳ１７４Ｔ細胞は、ＭＥＭ＋２ｍＭグルタミン＋１０％ＦＢＳ＋１％ＮＥＡＡで培養した。ＨＣＴ−１５細胞は、ＲＰＭＩ＋２０％ＦＢＳで培養した。ＬｏＶｏ細胞は、Ｈａｍｓ Ｆ１２＋１０％ＦＢＳで培養した。ＳＷ６２０及びＳＷ９４８細胞は、Ｌ−１５＋１０％ＦＢＳで培養した。
【０１５２】
胃癌系の膜のプールは、以下のヒト細胞系から調製した：ＡＧＳ胃腺癌細胞（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＲＬ−１７３９）；ＫＡＴＯ−ＩＩＩ胃癌細胞（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＨＴＢ−１０３）；ＮＣＩ−Ｎ８７胃腺癌細胞（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＲＬ−５８２２）；及びＮＣＩ−ＳＮＵ−１胃癌細胞（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＲＬ−５９７１）。ＡＧＳ細胞は、Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２＋２ｍＭ Ｇｌｕｔ＋１０％ＦＢＳで培養した。ＮＣＩ−Ｎ８７細胞は、ＲＰＭＩ＋２ｍＭ Ｇｌｕｔ＋１０％ＦＢＳで培養した。ＮＣＩ−ＳＮＵ−１細胞は、ＲＰＭＩ＋２ｍＭ Ｇｌｕｔ＋１０％ＦＢＳで培養した。ＫＡＴＯ−ＩＩＩ細胞は、ＲＰＭＩ＋２ｍＭ Ｇｌｕｔ＋２０％ＦＢＳで培養した。
【０１５３】
全ての細胞は、空気９５％及び二酸化炭素５％の加湿環境で、３７℃で増殖させた。
【０１５４】
１ｂ−細胞分画及び原形質膜生成
精製された膜標品を細胞系から単離した。付着細胞（２×１０８）をＰＢＳで３回洗浄して、プラスチック細胞リフターを用いて削り取った。細胞は４℃で５分間、１０００×ｇで遠心分離して、細胞ペレットはホモジナイゼーション緩衝液（２５０ｍＭショ糖、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭバナジン酸塩及び０．０２％アジ化物、プロテアーゼ阻害剤）で再懸濁させた。約９５％の細胞が破壊されるまで、ボールベアリングホモジナイザー（８．００２ｍｍボール、ＨＧＭ Ｌａｂ装置）を用いて細胞を分画した。膜は、Ｐａｓｑｕａｌｉら（Ｐａｓｑｕａｌｉ Ｃ．ら、１９９９ Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ７２２：８９〜１０２頁）が記載している方法を用いて分画した。分画された細胞は４℃で１０分間、３０００×ｇで遠心分離し、ポスト核の上清は６０％ショ糖クッション上へ重層して、１０００００×ｇで４５分間遠心分離した。膜はパスツールピペットを用いて収集し、予め形成させた１５〜６０％ショ糖勾配上へ重層して、１０００００×ｇで１７時間遠心分離した。分画されたショ糖勾配からのタンパク質を４〜２０％の１Ｄゲル（Ｎｏｖｅｘ）にかけ、ウェスタンブロット法で分析した。アルカリホスファターゼ及びトランスフェリン免疫反応性を含んでいるが酸化還元酵素ＩＩ及びカルネキシン免疫反応性を含まない分画をプールして、原形質膜分画とした。
【０１５５】
１ｃ−１Ｄ−ゲル分析のための原形質膜分画の調製
トランスフェリン免疫反応性を有していたが酸化還元酵素ＩＩ又はカルネキシン免疫反応性を有していなかった原形質膜分画を特定してプールした。原形質膜分画を表すこのプールは少なくとも４回、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭバナジン酸塩、０．０２％アジ化物で希釈し、ＳＷ４０又はＳＷ６０チューブに加えて１０００００×ｇで４５分間、遅い加減速により遠心分離した。上清は結果として生じる膜ペレットから除去し、ペレットはＰＢＳ−ＣＭで３回洗浄した。
【０１５６】
結腸癌腫細胞系からの再懸濁された膜ペレット（２５ｍＭトリス−ＨＣｌ ｐＨ７．５）をプールして、ＦＰＬＣ系を用いて５ｍｌヘパリンセファロースＨｉ−Ｔｒａｐカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）上を通過させた。ロードされたカラムは１０カラム容の洗浄緩衝液（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭトリス−ＨＣｌ ｐＨ７．５）で洗浄し、次に２５ｍＭトリス−ＨＣｌ ｐＨ７．５中の５ｍｌの１．０Ｍ ＮａＣｌで溶出した。溶出したタンパク質を濃縮し、緩衝液は３０ｋＤａカットオフフィルター（Ｖｉｖａｓｃｉｅｎｃｅ）を通した遠心分離により交換した。濃縮したタンパク質は、２％ＳＤＳ、６３ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ７．４にした。タンパク質アッセイを実施し、その後メルカプトエタノール（最終２％）、グリセリン（１０％）及びブロムフェノールブルー（最終０．００２５％）を加えた。１Ｄ−ゲルロードのために、１マイクログラム／マイクロリットルの最終タンパク質濃度を用いた。
【０１５７】
胃癌細胞系膜ペレットを、６３ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ７．４中の２％ＳＤＳで可溶化した。タンパク質アッセイを実施し、その後メルカプトエタノール（最終２％）、グリセリン（１０％）及びブロムフェノールブルー（最終０．００２５％）を加えた。１Ｄ−ゲルロードのために、１マイクログラム／マイクロリットルの最終タンパク質濃度を用いた。
【０１５８】
１ｄ−１Ｄ−ゲル技術
タンパク質又は膜のペレットを１Ｄ−試料緩衝液（約１ｍｇ／ｍｌ）で可溶化し、混合物は９５℃まで５分間加熱した。
【０１５９】
試料は、Ｂｉｏ−Ｒａｄ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｈｅｍｅｌ Ｈｅｍｐｓｔｅａｄ、英国）から購入したプレキャスト８〜１６％勾配ゲルによる１Ｄ−ゲル電気泳動法を用いて分離した。デタージェント抽出物から得られたタンパク質混合物の３０〜５０マイクログラムを含んでいる試料を、マイクロピペットを用いて濃縮用ゲルウェルに加えた。イメージングの後の分離ゲルの内挿による校正のために、分子量マーカー（１０、１５、２５、３７、５０、７５、１００、１５０及び２５０ｋＤａ）を含んでいるウェルを含めた。３０ｍＡの電流を約５時間、又はブロムフェノールブルーマーカー色素がゲルの底に届くまでゲルへ流すことにより、タンパク質の分離を実施した。
【０１６０】
電気泳動の後、ゲルプレートをこじ開け、ゲルを定着液（１０％酢酸、４０％エタノール、５０％水）のトレイに入れて一晩振盪した。ゲルは、次にプライマー溶液（逆浸透水中の７．５％酢酸、０．０５％ＳＤＳ）中で振盪し、その後振盪しながら蛍光染料（７．５％酢酸中の０．０６％ＯＧＳ色素）と３時間インキュベーションすることによって、３０分間プライミングした。好ましい蛍光染料は、米国特許第６３３５４４６号で開示されている。Ｓｙｐｒｏ Ｒｅｄ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．、オレゴン州、ユージン）は、この目的に適当な代替色素である。
【０１６１】
染色されたゲルのデジタル画像は、Ｓｔｏｒｍ Ｓｃａｎｎｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ Ｉｎｃ．、米国）を使用して青色蛍光モードでスキャンすることによって得た。取得した画像は、ゲル内タンパク質分解のために切り取るゲルの領域を決定するために用いた。
【０１６２】
１ｅ−選択されたタンパク質の回収及び分析
ゲルの各垂直レーンを、ステンレス鋼メスの刃を用いて切り取った。タンパク質は、トリプシン分解ペプチドを生成するためにトリプシン（修飾トリプシン、Ｐｒｏｍｅｇａ、米国ウィスコンシン州）によるゲル内消化を用いて処理した。回収した試料は、２つに分けた。ＭＡＬＤＩ分析の前に、Ｃ１８ Ｚｉｐ Ｔｉｐｓ（商標）（ミリポア、マサチューセッツ州ベッドフォード）を用いて試料を脱塩して濃縮した。タンデム型質量分析のための試料は、Ｃ１８ ＳＰＥ材料を取り込むナノＬＣ系（ＬＣ Ｐａｃｋｉｎｇｓ、オランダ、アムステルダム）を用いて精製した。回収したペプチドプールは、脱離のための３３７ｎｍ波長レーザー及びリフレクトロン分析モードを用いて、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析（Ｖｏｙａｇｅｒ ＳＴＲ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、マサチューセッツ州、フレイミンガム）によって分析した。プールは、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ（Ｑ−ＴＯＦ）質量分析計（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ、Ａｌｔｒｉｎｃｈａｍ、英国）を用いてナノ−ＬＣタンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）によっても分析した。部分アミノ酸配列決定及び胃及び結腸の癌細胞膜タンパクの識別のために、トリプシンペプチドの未解釈のタンデム質量スペクトルを、ＳＥＱＵＥＳＴサーチプログラム（Ｅｎｇら、１９９４、Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．５：９７６〜９８９頁）バージョンｖ．Ｃ．１を用いてｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／でアクセス可能なＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）によって維持されている非冗長データベース内のタンパク質エントリーで構築されるパブリックドメインタンパク質データベースから検索した。データベース識別のための基準には以下が含まれた：トリプシンの切断特異性、データベースから返されたペプチド内のａ、ｂ及びｙイオンのセット、並びにカルバミドメチル化を説明する全てのＣｙｓ残基の質量増加の検出。ＳＥＱＵＥＳＴプログラムを用いたスペクトル−スペクトル相関を通してのタンパク質の識別に続いて、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルで検出された質量を、同定されたタンパク質内のトリプシン分解ペプチドに割り当てた。ＳＥＱＵＥＳＴプログラムを用いたトリプシン分解ペプチドの未解釈のＭＳ／ＭＳスペクトルでの検索を通してアミノ酸配列が全く同定されなかった場合は、当技術分野で既知の方法を用いてペプチドのタンデム質量スペクトルを手動で解釈した。（ペプチドイオンの低エネルギーフラグメンテーション質量スペクトルの解釈の場合、Ｇａｓｋｅｌｌら、１９９２、Ｒａｐｉｄ Ｃｏｍｍｕｎ．Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．６：６５８〜６６２頁を参照）。国際公開０２／２１１３９で記載されている方法も、質量スペクトルを解釈するために用いた。
【０１６３】
タンデムスペクトル（図１で太字体及び下線付きで示す）は、両細胞系プールでＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＡＡ９１２７６．１と一致することがわかった。
【０１６４】
（実施例２）
定量的ＲＴ−ＰＣＲ（Ｔａｑｍａｎ）分析を用いた正常組織分布及びＦＬＪ２０５８４の疾患組織アップレギュレーション
組織試料は、Ａｒｄａｉｓ Ｃｏｒｐ．（マサチューセッツ州レキシントン）から得た。腫瘍組織及びマッチさせた対照におけるＦＬＪ２０５８４発現を量的に測定するために、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを用いた。ＰＣＲのために使われたプライマーは以下の通りである。
センス、５’−ｃａｔｔｃｃｃｃａｔｇａａｃａｇａａｇｃｔｃ−３’、（配列番号３）
アンチセンス、５’−ａｃｔｇｇａｇｃｇｃｔｔｇａｇｇｔａｇａａｇ−３’（配列番号４）
【０１６５】
５ｎｇのｃＤＮＡ、ＳＹＢＲグリーン配列検出試薬（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びセンス及びアンチセンスプライマーを含んでいる反応液を、ＡＢＩ７７００配列検出システム（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で分析した。ＰＣＲ条件は、５０℃で２分間を１サイクル、９５℃で１０分間を１サイクル、及び９５℃で１５秒、６５℃で１分間を４０サイクルであった。ＰＣＲ生成物の蓄積をＳＹＢＲグリーン蛍光の増加としてリアルタイムで測定し、データはＳｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒプログラムｖ１．６．３（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて分析した。最初のテンプレートコピー数を蛍光及び増幅サイクルと関連づける標準曲線は、増幅されたＰＣＲ生成物をテンプレートとして用いて生成され、それらは各試料でのＦＬＪ２０５８４コピー数を計算するために用いられた。
【０１６６】
ＦＬＪ２０５８４の比較的低い発現量は正常組織（図３）で見られ、最高レベルは脳及び精巣で見られた。対照的に、ＦＬＪ２０５８４発現量は正常卵巣と比較して卵巣癌試料で大きく増加し、また、発現量増加は全ての癌試料で見られた（図４）。ＦＬＪ２０５８４発現は、正常肺組織と比較して肺腫瘍試料でも増加した（図５）。これらのデータは、ＦＬＪ２０５８４が癌の診断マーカーであり、また、癌の治療的介入のための標的であることを示す。
【０１６７】
（実施例３）
ＦＬＪ２０５８４のクローニング
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８及びＤＭＳ１１４ｃＤＮＡの混合（これらの細胞系から単離されたＲＮＡから調製した）から増幅した。これらの配列を増幅するために用いたプライマーは以下である：センス５’ａｇａｃｃａｃｇｔｃａａｃｃａｃａｇａｇ３’（配列番号５）及びアンチセンス５’ａｇａｇｃａｔｇｇａａｇａｇｃｃａｇｇ３’（配列番号６）。増幅反応は、下記熱サイクルパラメータでＰｆｕポリメラーゼ（ストラタジーン）を用いて実施した：９４℃で２分間を１サイクル、９４℃で３０秒間、５０℃で３０秒間、７２℃で３０秒間を４０サイクル、及び７２℃で７分間を１サイクル。適当な大きさのＰＣＲ生成物をゲル精製して平滑末端のクローニングベクター（ｐＣＲ４Ｂｌｕｎｔ−ＴＯＰＯ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、ＤＮＡ配列を検査した。
【０１６８】
（実施例４）
ＦＬＪ２０５８４の細胞表面局在化
ＦＬＪ２０５８４−ＡＦＰ融合をコードする発現プラスミドを一過性にトランスフェクトしたＭｉａＰａｃａ−２細胞の免疫細胞化学的分析を用いて、ＦＬＪ２０５８４タンパク質の膜トポロジーを測定した。発現プラスミドは、Ｐｆｕ ＤＮＡポリメラーゼ（ＰｆｕＴｕｒｂｏ Ｈｏｔｓｔａｒｔ ＤＮＡポリメラーゼ、ストラタジーン）及び以下のプライマーを用いてプラスミドテンプレート（ｐＣＲ４Ｂｌｕｎｔ−ＴＯＰＯ中のＦＬＪ２０５８４、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からＦＬＪ２０５８４ ＯＲＦを増幅することによって構築した：順方向５’ｃｃａｔｇｇｔａｃｃｇｃｃａｃｃａｔｇｇｃａａａｔｔｔｃａａｇｇｇｃｃａｃｇ３’（配列番号７）及び逆方向５’ｃｃａｔａａｇｃｔｔｇｔｔｃｃｔｃａｔｃｔｇａｇｃｃａｃｔｃａａｇ３’（配列番号８）。Ｎ末端でＦＬＪ２０５８４からなる融合タンパク質を発現しＣ末端でＡＦＰを発現するために、ＰＣＲ生成物をＢｓｔＥＩＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素で消化して、同じ制限酵素で消化したｐＱＢＩ２５／５０−ｆｎ１ベクター（Ｑｕａｎｔｕｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）にクローニングした。
【０１６９】
ＭｉａＰａＣａ−２細胞を８穴スライドに播種し、３７℃の９５％空気及び５％ＣＯ２の加湿環境で２４時間維持し、次にＧｅｎｅ Ｊｕｉｃｅトランスフェクション試薬（Ｍｅｒｃｋ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてＦＬＪ２０５８４発現プラスミドでトランスフェクトした。トランスフェクション細胞を一晩培養し、ＰＢＳで洗浄し、４％パラホルムアルデヒドで固定して５％ロバ血清／ＰＢＳでブロックした後、一次抗体として抗ＡＦＰ抗体（３Ｅ６、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて免疫細胞化学的分析を実施した。細胞内エピトープを検出するために、固定後及び一次抗体の添加の前に細胞を０．１％サポニンで可透過性にした。細胞を一次抗体とインキュベートし、又は一次抗体との室温で１時間のインキュベーションの対照としてマウスＩｇＧとインキュベートし、５％ロバ血清／ＰＢＳで洗浄し、更にビオチン標識二次抗体（Ｂｉｏｔｉｎ−ＳＰ Ａｆｆｉｎｉｐｕｒｅ Ｄｏｎｋｅｙ抗マウス、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）と室温で１時間インキュベートした。細胞を次に５％ロバ血清／ＰＢＳで洗浄し、室温で３０分間ＥｘｔｒＡｖｉｄｉｎ−Ｃｙ３（Ｓｉｇｍａ）とインキュベートして、次に蛍光顕微鏡検査のために処理した。
【０１７０】
ＦＬＪ２０５８４をコードする発現プラスミドをトランスフェクトしたＭｉａＰａＣａ−２細胞で、特異的な原形質膜染色が見られた。トランスフェクトしなかった細胞及びｐＱＢＩ２５／５０−ｆｎ１ベクターをトランスフェクトした対照細胞では、染色は観測されなかった。
【図面の簡単な説明】
【０１７１】
【図１】ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１）を示す図である。
【図２】ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号２）を示す図である。
【図３】ＦＬＪ２０５８４ｍＲＮＡの正常組織分布を示す図である。ｍＲＮＡのレベルはリアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって定量され、複製数ｎｇ−１ ｃＤＮＡとして表されている。
【図４】正常組織（オープンバー）対卵巣癌組織（黒ベタのバー）及び卵巣癌由来の細胞系（斜線入りのバー）、並びに骨肉腫組織（点入りのバー）及び骨肉腫由来の細胞系（水平線入りのバー）におけるＦＬＪ２０５８４ｍＲＮＡの分布を示す図である。
【図５】正常組織（オープンバー）対肺癌組織（黒ベタのバー）及び肺癌由来の細胞系（斜線入りのバー）におけるＦＬＪ２０５８４ｍＲＮＡの分布を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリペプチドＦＬＪ２０５８４を標的にすることを含む癌の治療及び／又は予防のための方法、前記ポリペプチドと相互に作用するかその発現又は活性を調整する物質、そのような物質の同定方法、並びに癌の診断におけるＦＬＪ２０５８４の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
卵巣癌は婦人科の癌で最も致命的な癌であり、患者の約７０％が一般的な上皮性卵巣癌を有するがこれは疾病後期の段階で初めて表れる。癌は上腹部に広がっているので、生存率は疾病初期の段階と比較してかなり低くなる。卵巣癌は通常シスプラチンをベースにした化学療法で治療されるが、獲得したシスプラチン抵抗性のためにしばしば再発し（Ｙａｈａｔａ，Ｈ．ら、２００２、Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１２８：６２１〜６頁）、それ故に新薬及び新治療標的に対する要求がある。また、現在のマーカーは大集団で適用できる十分な感度及び特異性が不足しているので、卵巣癌の新たなマーカーに対する要求もある（Ｒａｉ，Ａ．ら、２００２、Ａｒｃｈ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．１２６：１５１８〜２６頁）。
【０００３】
肺癌は、男性と女性の両方の癌死の大きな割合を占める。肺癌には、非小細胞肺癌及び小細胞肺癌の２つの主要な型がある。治療は手術に制限され、可能な場合には化学療法及び放射線療法が用いられる。肺癌治療の課題は、前癌状態の疾患を有する者をより詳細にモニターして化学的予防薬剤で治療することができるように早期発見のより良い手段を開発すること、及び肺癌治療のためのより良い療法を開発することである。
【０００４】
ＦＬＪ２０５８４に対応するヌクレオチド配列は、国際公開０１／９８３５３及び国際公開０２／４４３４０で開示されているが、どちらの出願もＦＬＪ２０５８４の具体的な有用性を開示していない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、ＦＬＪ２０５８４が卵巣癌及び／又は肺癌などの癌の治療及び／又は予防のための新規治療標的となるとの知見に基づく。ＦＬＪ２０５８４は、卵巣癌及び／又は肺癌などの癌のスクリーニング及び／又は診断のための新規マーカーともなる。
【０００６】
したがって、本発明は癌を治療及び／又は予防するための方法であって、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用するかその発現又は活性を調整する物質の治療的有効量を投与することを含む方法を提供する。
【０００７】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかそれからなるポリペプチド、
（ｂ）ＦＬＪ２０５８４活性を保持する配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ又は複数のアミノ酸置換、修飾、欠失又は挿入を有する誘導体であるポリペプチド、或いは
（ｃ）長さが少なくとも１０アミノ酸であり且つＦＬＪ２０５８４の活性を保持する、前記（ａ）又は（ｂ）の断片であるポリペプチドを含む。
【０００８】
用語「ポリペプチド」は、ペプチド、ポリペプチド及びタンパク質を含む。これらは、特に明記しない限り互換的に使用される。
【０００９】
本出願では、用語「癌腫」又は「癌」は互換的に使用され、皮膚、又はより一般的に体器官、例えば卵巣、乳腺、前立腺、肺、腎臓、膵臓、胃若しくは腸の内層で見られる、上皮に起因する悪性腫瘍を含む。癌腫は隣接した組織に浸潤して、例えば骨、肝臓、肺又は脳などの離れた臓器に広がる（転移する）傾向がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の一実施形態において、前記癌腫は卵巣癌である。他の実施形態では、前記癌腫は肺癌である。他の実施形態では、前記癌は骨肉腫である。
【００１１】
本発明の方法で使用する物質としては、それには限定されないが、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又はＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードしている核酸分子と相互作用すること（例えば結合すること若しくは認識すること）ができる物質、或いはＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの相互作用、発現、活性、又はＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードしている核酸分子の発現を調整することができる物質がある。そのような物質には、それに限定されるものではないが、抗体、核酸（例えばＤＮＡ及びＲＮＡ）、炭水化物、脂質、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ペプチド様物質、小分子及び他の物質が含まれる。
【００１２】
したがって、本発明は、癌の治療及び／又は予防のための医薬品の製造のための、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用するかその発現又は活性を調整する物質の使用も提供する。
【００１３】
最も好ましくは、癌の治療及び／又は予防に用いられる物質は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用する（すなわち、結合するかそれを認識する）か又はその活性を調整する抗体である。したがって、癌の治療及び／又は予防のための医薬品の製造のための、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用する抗体の使用が提供される。また、対象における癌を治療及び／又は予防するための方法であって、前記対象に対してＦＬＪ２０５８４と相互に作用する抗体の治療的有効量を投与することを含む方法も提供される。一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用する抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介するために使用することができる。そのような場合、抗体は好ましくは完全長のそのままの抗体である。本発明の他の態様では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用する抗体は、前記ポリペプチドの活性を阻止するために使用することができる。
【００１４】
最も好ましいものは、特異的にＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する抗体である。特異的に相互作用する（例えば認識又は結合する）とは、抗体が他のポリペプチドに対してよりもＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに対して強い親和性を有することを意味する。
【００１５】
任意選択に治療的な部分とコンジュゲートされた抗体は、単独で又は細胞傷害性因子及び／又はサイトカインと組合せて、治療的に使用することができる。詳細には、ＦＬＪ２０５８４抗体は、ある特定の生物反応を修飾するために細胞傷害剤、放射性核種又は薬剤部分などの治療剤とコンジュゲートすることができる。前記治療剤は、古典的な化学療法剤に限られるとはみなされない。例えば、前記治療剤は、所望の生物学的活性を有するタンパク質又はポリペプチドである薬剤部分でよい。そのような部分としては、それには限定されないものの、例えばアブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素又はジフテリア毒素などの毒素、メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）（ＤＭ１）、腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子又は組織プラスミノーゲン活性化因子などのタンパク質、血栓剤又は抗血管形成剤、例えばアンギオスタチン若しくはエンドスタチン；アンギオゲニン、ゲロニン、ドルスタチン（ｄｏｌｓｔａｔｉｎ）、副溝結合剤、ビス−ヨード−フェノールマスタード、又は生体応答調節剤、例えばリンホカイン、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）又は他の成長因子などを挙げることができる。
【００１６】
また治療剤としては、細胞に有害である（例えば殺傷性のある）いかなる物質を含む、細胞毒又は細胞傷害剤を挙げることができる。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンカアルカロイド、例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、４−デスアセチルビンブラスチン−３−カルボヒドラジド、ビンデシン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアンスラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール及びピューロマイシン、並びにそれらの類似体又は同族体がある。また治療剤としては、それには限定されないが、葉酸拮抗薬（例えばアミノプテリン及びメトトレキサート）、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン、５−フルオロ−２’−デオキシウリジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロソスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、及びシスジクロロジアミンプラチナ（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン類（例えば、ダウノルビシン（旧ダウノマイシン）及びドキソルビシン、アドリアマイシン、イダルビシン、モルホリノドキソルビシン、エピルビシン、ドキソルビシンヒドラジド）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、アントラマイシン（ＡＭＣ）、カリシェアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）又はデュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）、ＣＣ−１０６５、エネジエン（ｅｎｅｄｉｙｅｎｅ）、ネオカルチノスタチン）、並びに細胞分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン及びビンブラスチン）もある。詳細は、Ｇａｒｎｅｔｔ、２００１、Ａｄｖａｎｃｅｄ ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５３：１７１〜２１６頁を参照されたい。
【００１７】
他の治療的部分としては、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ及び９０Ｙ、Ｌｕ１７７、ビスマス２１３、ビスマス２１２、カリホルニウム２５２、イリジウム１９２及びタングステン１８８／レニウム１８８、２１１アスタチンなどの放射性核種、又は例えばそれには限定されないが、アルキルホスホコリン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、タキソイド（ｔａｘｏｉｄ）及びスラミンなどの薬剤を挙げることができる。
【００１８】
抗体にそのような治療剤をコンジュゲートする手法は当技術分野で既知である（例えばＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら編、１９８５、２４３〜５６頁、編Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．中のＡｒｎｏｎら、「癌療法における薬剤のイムノターゲッティングのためのモノクローナル抗体（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ）」；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、第２版、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編、１９８７、６２３〜５３頁、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．中のＨｅｌｌｓｔｒｏｍら「薬物送達のための抗体（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら編、１９８５、４７５〜５０６頁中のＴｈｏｒｐｅ、「癌療法における細胞傷害剤の抗体担体：レビュー（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（編）、１９８５、３０３〜１６頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ中の「癌療法における放射性標識抗体の治療的利用の分析、結果、及び将来の見通し（Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ）」；Ｔｈｏｒｐｓら、１９８２「抗体−毒素コンジュゲートの調製及び細胞傷害的性質（Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９〜５８頁、及びＤｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９９、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、８３、６７〜１２３頁を参照）。
【００１９】
本発明に用いられる抗体としては、それには限定されないが、例えば任意の種類の分子の共有結合によって修飾される類似体及び誘導体がある。好ましくは、前記結合は免疫特異的結合を害しない。一態様では、抗体を第二抗体にコンジュゲートして抗体ヘテロ複合体を形成することができる（米国特許第４６７６９８０号を参照）。
【００２０】
処理された抗体断片は、かなりの有効量の薬剤を腫瘍に対して選択的にターゲッティングさせるために、立体配置的に安定化された（ステルス）リポソームの表面に結合することもできる（例えばＰａｒｋら、１９９５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９２：１３２７〜１３３１頁；Ｐａｒｋら、１９９７、Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．１１８：１５３〜１６０頁を参照）。
【００２１】
一実施形態では、放射性核種及びプロドラッグなどの細胞傷害剤は、腫瘍をプレターゲッティングすることができる。詳細には、抗体依存性酵素媒介性のプロドラッグ療法（ＡＤＥＰＴ）は、腫瘍に対するプロドラッグのプレターゲティングを含む（Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚら、１９９９、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．１４：５１７〜５３８頁；Ｓｙｒｉｇｏｓら、１９９９、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９：６０５〜６１３頁）。
【００２２】
他の実施形態では、本発明は、抗体（又はその機能的活性断片）の融合タンパク質の治療的使用を提供し、抗体又はその断片は、例えば、それには限定されないが、共有結合（例えばペプチド結合）により任意選択にＮ末端又はＣ末端で他のタンパク質（又はその部分、好ましくはそのタンパク質の少なくとも１０、２０若しくは５０アミノ酸部分）のアミノ酸配列と融合されている。好ましくは、抗体又はその断片は、その抗体の定常ドメインのＮ末端で他のタンパク質に結合される。他の態様において、抗体融合タンパク質は本明細書で記載されるポリペプチドの消耗又は精製を助長し、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期を長くし、上皮性関門を越えて抗原が免疫系に送達されるのを促進することができる。
【００２３】
融合タンパク質がエフェクター又はレポーター分子に結合されている抗体断片である場合、これは標準の化学手法又は組換えＤＮＡ手法によって調製することができる。好ましいエフェクター基はポリマー分子であり、それはそのｉｎ ｖｉｖｏ半減期を長くするために修飾されたＦａｂフラグメントに結合することができる。他のエフェクター基としては、デキストラン、ヒト血清アルブミン及びヒドロキシプロピルメタクリルアミド（ＨＰＭＡ）がある。
【００２４】
前記ポリマー分子は、一般に合成又は自然発生のポリマーでよく、例えば任意選択に置換された直鎖又は分枝鎖のポリアルキレン、ポリアルケニレン又はポリオキシアルキレンポリマー或いは分枝又は非分岐の多糖、例えばホモ又はヘテロの多糖がある。
【００２５】
前述合成ポリマー上で存在することができる特定の任意選択の置換基としては、１つ又は複数のヒドロキシ基、メチル基又はメトキシ基がある。合成ポリマーの特定の例としては、任意選択に置換された直鎖又は分枝鎖のポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）、ポリ（ビニルアルコール）又はそれらの誘導体、特にメトキシポリ（エチレングリコール）などの任意選択に置換されたポリ（エチレングリコール）又はその誘導体がある。
【００２６】
自然に存在する特定のポリマーとしては、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン又はそれらの誘導体がある。
【００２７】
本明細書で使用されるとき「誘導体」は、反応性誘導体、例えばマレイミドなどのようなチオール選択性反応基を含むものとする。この反応基は、直接又はリンカー部分を通してポリマーと結合することができる。そのような基の残基は、場合によっては抗体断片及びポリマーの間の結合基として、生成物の一部を形成することは理解されよう。
【００２８】
ポリマーの大きさは所望により変更することができるが、平均分子量は通常５００Ｄａから５００００Ｄａの範囲の平均分子量、好ましくは５０００から４００００Ｄａの範囲の平均分子量、より好ましくは２５０００から４００００Ｄａの範囲の平均分子量である。ポリマーの大きさは、特に生成物の目的とする用途に基づいて選択することができる。従って、例えば腫瘍の治療のために生成物が循環系を離れて組織に浸入するものとするならば、小分子量のポリマー、例えば約５０００Ｄａの分子量のものを使うことが有利であると言える。生成物が循環系中に残る用途の場合ならば、高分子量ポリマー、例えば２５０００Ｄａから４００００Ｄａの範囲の分子量を有するものを使うことが有利であると言えよう。
【００２９】
特に好ましいポリマーは、ポリアルキレンポリマー、例えばポリ（エチレングリコール）、或いは特にメトキシポリ（エチレングリコール）又はその誘導体であり、特に約２５０００Ｄａから約４００００Ｄａの範囲の分子量のものが好しい。
【００３０】
修飾された抗体断片に結合された各ポリマー分子は、断片中に位置するシステイン残基の硫黄原子と共有結合で結合することができる。この共有結合は、通常、ジスルフィド結合、又は、特に硫黄−炭素結合である。
【００３１】
所望ならば、前記抗体断片はそれに結合した１つ又は複数のエフェクター分子又はレポーター分子を有することができる。このエフェクター分子又はレポーター分子は、断片上の利用可能なアミノ酸側鎖又は末端アミノ酸官能基、例えば遊離アミノ基、イミノ基、ヒドロキシル基又はカルボキシル基を通じて、抗体断片と結合することができる。
【００３２】
活性化ポリマーは、先に述べたようなポリマーで修飾された抗体断片の調製において、出発物質として使用することができる。活性化ポリマーは、α−ハロカルボン酸又はエステル（例えばヨードアセトアミド）、イミド（例えばマレイミド）、ビニルスルホン又はジスルフィドなどのチオール反応基を含んでいるいかなるポリマーであってもよい。そのような出発物質は市販品を入手できるか（例えばＮｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）から）、又は市販の出発物質から従来の化学手法を使って調製することができる。
【００３３】
抗体断片が活性化ポリマーとの反応の前又は後に、エフェクター又はレポーター分子と直接又はカップリング剤を通じて連結される標準的な化学手法又は組換えＤＮＡ手法を適宜使用することができる。特定の化学手法としては、例えば、国際公開９３／０６２３１、国際公開９２／２２５８３、国際公開９０／０９１９５、国際公開８９／０１４７６、国際公開９９／１５５４９及び国際公開０３／０３１５８１で記載されているものがある。或いはエフェクター又はレポーター分子がタンパク質又はポリペプチドである場合ならば、前記結合は組換えＤＮＡ手法、例えば国際公開８６／０１５３３及び欧州特許第０３９２７４５号で記載されているものを用いて達成することができる。
【００３４】
最も好ましくは、抗体はポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）部分に結合される。好ましくは、修飾されたＦａｂフラグメントは、例えば欧州特許第０９４８５４４号で開示されている方法に従ってＰＥＧ化され、すなわち共有結合でそれと結合したＰＥＧ（ポリ（エチレングリコール））を有する［「ポリ（エチレングリコール）の化学、バイオ技術的及び生物医学的な応用（Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、１９９２、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ Ｈａｒｒｉｓ（編）、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、「ポリ（エチレングリコール）の化学及び生物学的応用（Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、１９９７、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ Ｈａｒｒｉｓ及びＳ．Ｚａｌｉｐｓｋｙ（編）、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ、及び「生物医学科学のためのバイオコンジュゲーションタンパク質結合技術（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」、１９９８、Ｍ．Ａｓｌａｍ及びＡ．Ｄｅｎｔ、Ｇｒｏｖｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｃｈａｐｍａｎ，Ａ．、２００２、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２００２、５４：５３１〜５４５頁も参照］。一実施形態では、ＰＥＧで修飾されたＦａｂフラグメントは、修飾されたヒンジ部において単一のチオール基と共有結合で結合しているマレイミド基を有する。リジン残基は、前記マレイミド基と共有結合で結合することができる。リジン残基上の各アミン基には、約２０，０００Ｄａの分子量のメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーを結合することができる。エフェクター分子全体の総分子量は、したがって約４０，０００Ｄａであってよい。
【００３５】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又は前記ポリペプチドを発現している細胞は、例えば前記ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを特異的に認識する抗体を産生するために使用することができる。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに対して生成される抗体は、前記ポリペプチドを動物、好ましくはヒト以外の動物に既知の常用のプロトコルを用いて投与することによって得ることができる。
【００３６】
抗ＦＬＪ２０５８４抗体は機能的に活性な断片、誘導体又は類似体を含み、それには限定されないがポリクローナル、モノクローナル、二価、三価又は四価の抗体、ヒト化又はキメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’及びＦａｂ’２フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリによって作製される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、並びに上のいずれかのエピトープ結合断片でよい。ヒト化抗体は、ヒト以外の種からの１つ又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト免疫グロブリン分子からの枠組み領域とを有する、ヒト以外の種に由来する抗体分子である（例えば、米国特許第５５８５０８９号を参照）。抗体には、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的活性部分、すなわち抗原と特異的に結合する抗原結合部位を含む分子が含まれる。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子のいかなるクラス（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＡ）又はサブクラスでもよい。
【００３７】
モノクローナル抗体は、当技術分野で既知のいかなる方法、例えばハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５〜４９７頁）、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ、４：７２）及びＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、７７〜９６頁、Ａｌａｎ Ｒ Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、１９８５）によって調製することができる。
【００３８】
キメラ抗体は、軽鎖及び重鎖遺伝子が異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子部分から構成されるように遺伝子操作されている免疫グロブリン遺伝子によってコードされる抗体である。これらのキメラ抗体の抗原性は低いようである。二価抗体は、当技術分野で既知の方法によって作ることができる（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、１９８３、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７〜５３９頁；国際公開９３／０８８２９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、１９９１、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５〜３６５９頁）。二価、三価及び四価の抗体は複数の特異性を含むことができ、又は単一特異性でもよい（例えば国際公開９２／２２８５３を参照）。
【００３９】
本発明に用いられる抗体は、例えば、Ｂａｂｃｏｏｋ，Ｊ．ら、１９９６、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３（１５）：７８４３〜７８４８頁及び国際公開９２／０２５５１で記載されている、特異抗体の産生のために選択された単一のリンパ球から生成される免疫グロブリン可変部ｃＤＮＡの分子クローニング及び発現に基づく単一リンパ球抗体法を使って生成することができる。
【００４０】
本発明に用いられる抗体は、当技術分野で既知の様々なファージディスプレイ方法を使って生成することもでき、例えばＢｒｉｎｋｍａｎら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９９５、１８２：４１〜５０頁）、Ａｍｅｓら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９９５、１８４：１７７〜１８６頁）、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４、２４：９５２〜９５８頁）、Ｐｅｒｓｉｃら（Ｇｅｎｅ、１９９７ １８７９〜１８頁）、Ｂｕｒｔｏｎら（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９４、５７：１９１〜２８０頁）及び国際公開９０／０２８０９、国際公開９１／１０７３７、国際公開９２／０１０４７、国際公開９２／１８６１９、国際公開９３／１１２３６、国際公開９５／１５９８２、国際公開９５／２０４０１、並びに米国特許第５６９８４２６号、５２２３４０９号、５４０３４８４号、５５８０７１７号、５４２７９０８号、５７５０７５３号、５８２１０４７号、５５７１６９８号、５４２７９０８号、５５１６６３７号、５７８０２２５号、５６５８７２７号、５７３３７４３号及び５９６９１０８号によって開示されているものがある。米国特許第４９４６７７８号で記載されているような単鎖抗体の産生のための技術も、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに対する単鎖抗体を産生するために応用することができる。また、トランスジェニックマウス又は他の哺乳類を含む他の生物は、ヒト化抗体を発現するために使用することができる。
【００４１】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、本発明に従う治療及び／又は予防の方法で用いる剤の識別のために使用することができる。
【００４２】
本発明の他の態様は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する抗癌剤をスクリーニングする方法であって、
（ａ）前記ポリペプチドを候補物質と接触させること、及び
（ｂ）前記候補物質が前記ポリペプチドと相互作用するか否かを測定することを含む方法を提供する。
【００４３】
好ましくは、前記候補物質及びＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの間の相互作用の判定は、前記候補物質及び前記ポリペプチドの結合を定量的に検出することを含む。
【００４４】
更に、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現又は活性を調整する抗癌剤をスクリーニングする方法であって、
（ｉ）候補物質の存在下での前記ポリペプチドの発現又は活性を、前記候補物質が非存在下又は対照物質の存在下での前記ポリペプチドの発現又は活性と比較すること、及び
（ｉｉ）前記候補物質が前記ポリペプチドの発現又は活性の変化を起こすか否かを測定することを含む方法が提供される。
【００４５】
好ましくは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現及び／又は活性は、所定の基準範囲（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｒａｎｇｅ）又は対照と比較される。
【００４６】
より好ましくは、前記方法は癌の治療及び／又は予防での使用のための更なる試験のために、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互に作用するか、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの相互作用、発現又は活性を調整することができる物質を選択することを更に含む。上記のスクリーニング法はＦＬＪ２０５８４核酸分子の発現又は活性と相互に作用するかそれを調整する抗癌剤のスクリーニングにも適当であることは、当業者にとって明らかであるだろう。
【００４７】
本発明は、癌の治療剤及び／又は予防剤の効力を同定するか検証するための、創薬（ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）で用いるためのアッセイも提供する。これらの方法を使って同定される物質は、創薬のためのリード物質として使用したり、治療的に使用したりすることができる。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現は、例えばイムノアッセイ、ゲル電気泳動法及びその後の可視化、ｍＲＮＡ又はＦＬＪ２０５８４ポリペプチド活性の検出、或いは本明細書で教示されているか当業者に既知の他のいかなる方法によっても分析することができる。そのようなアッセイは、候補物質をスクリーニングするために、臨床モニタリングにおいて、又は薬剤開発において使用することができる。
【００４８】
物質は、多種多様な候補物質から選択することができる。候補物質の例としては、それに限定されるものではないが、核酸（例えばＤＮＡ及びＲＮＡ）、炭水化物、脂質、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ペプチド様物質、小分子及び他の物質が含まれる。物質は、当技術分野で既知の組合せライブラリ方法の多数の手法のいずれかを用いて得ることができ、それの例としては生物学的ライブラリ、空間的にアドレス可能な平行固相又は溶液相ライブラリ、デコンボリューションを必要とする合成ライブラリ方法、「１ビーズ１化合物」ライブラリ方法、及びアフィニティークロマトグラフィー選択を用いる合成ライブラリ方法がある。生物学的ライブラリ手法はペプチドライブラリに適し、その他の４つの手法は化合物のペプチド、非ペプチドオリゴマー又は小分子ライブラリに適用できる（Ｌａｍ、１９９７、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．１２：１４５、米国特許第５７３８９９６号、及び米国特許第５８０７６８３）。
【００４９】
分子ライブラリの合成のための本記載に基づく適当な方法の例は当技術分野で見つけることができ、例えば、ＤｅＷｉｔｔら、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６９０９；Ｅｒｂら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら、１９９４、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８；Ｃｈｏら、１９９３、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら、１９９４、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒｒｅｌｌら、１９９４、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１；及びＧａｌｌｏｐら、１９９４、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３などで見られる。
【００５０】
化合物のライブラリは、例えば溶液（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ、１９９２、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４１２〜４２１頁）で、又はビーズ（Ｌａｍ、１９９１、Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８２〜８４頁）、チップ（Ｆｏｄｏｒ、１９９３、Ｎａｔｕｒｅ ３６４：５５５〜５５６頁）、細菌（米国特許第５２２３４０９号）、胞子（米国特許第５５７１６９８号、５４０３４８４号及び５２２３４０９号）、プラスミド（Ｃｕｌｌら、１９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１８６５〜１８６９頁）若しくはファージ（Ｓｃｏｔｔ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６〜３９０頁、Ｄｅｖｌｉｎ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：４０４〜４０６頁、Ｃｗｉｒｌａら、１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６３７８〜６３８２頁、及びＦｅｌｉｃｉ、１９９１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１〜３１０頁）上で提示することができる。
【００５１】
一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する（例えば、結合する）剤は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現している細胞集団を候補物質と接触させ、候補物質が前記ポリペプチドと相互作用する能力を測定する細胞ベースのアッセイで同定される。好ましくは、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する能力は、基準範囲又は対照と比較される。他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現する細胞の第１及び第２の集団を候補物質又は対照物質と接触させ、候補物質がポリペプチドと相互作用する能力を、候補物質及び対照物質の間の相互作用の差を比較することにより測定する。所望により、この種のアッセイは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現する複数の細胞集団を使って複数の（例えばライブラリの）候補物質をスクリーニングするために使用することができる。所望により、このアッセイは、複数の（例えばライブラリの）候補物質をスクリーニングするために使用することができる。前記細胞は、例えば、原核生物起源（例えば大腸菌）又は真核生物起源（例えば酵母若しくは哺乳動物）でよい。更に、前記細胞は内因的にＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現すること、又は前記ポリペプチドを発現するように遺伝子操作することができる。一部の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又は候補物質は、ポリペプチド及び候補物質の間の相互作用の検出を可能にするために、例えば放射性標識（例えば３２Ｐ、３５Ｓ又は１２５Ｉ）或いは蛍光標識（例えば蛍光イソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド又はフルオレサミン）で標識される。
【００５２】
他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する（例えば、結合する）物質は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現している試料を候補物質と接触させ、候補物質が前記ポリペプチドと相互作用する能力を測定する無細胞系のアッセイで同定される。好ましくは、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する能力は、基準範囲又は対照と比較される。好ましい実施形態では、天然又は組換え体のＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを含んでいる第１及び第２の試料を候補物質又は対照物質と接触させ、候補物質がポリペプチドと相互作用する能力を、候補物質及び対照物質の間の相互作用の差を比較することにより測定する。所望により、このアッセイは、複数のＦＬＪ２０５８４ポリペプチド試料を用いて複数の（例えばライブラリの）候補物質をスクリーニングするために使用することができる。好ましくは、前記ポリペプチドは最初に、例えばポリペプチドを、それを特異的に認識して結合する固定化抗体と接触させることによって、又はポリペプチドの精製調製物をタンパク質と結合する構造になっている表面と接触させることによって固定化される。前記ポリペプチドは部分的に又は完全に精製されていてもよいし（例えば、他のポリペプチドを部分的に又は完全に含まない）、又は細胞溶解物の一部でもよい。更に、前記ポリペプチドはＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又はその生物学的活性部分と、グルタチオンＳ−転移酵素などのドメインとを含んでいる融合タンパク質であってもよい。或いは、前記ポリペプチドは、当業者に既知の技術（例えばビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を使ってビオチン化することができる。ポリペプチドと相互作用する候補物質の能力は、当業者に既知の方法によって２倍にすることができる。
【００５３】
一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと結合するか相互作用する他のタンパク質を同定するための２ハイブリッドアッセイ又は３ハイブリッドアッセイにおいて、「餌タンパク質（ｂａｉｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）」として使用される（例えば米国特許第５２８３３１７号、Ｚｅｒｖｏｓら、１９９３、Ｃｅｌｌ ７２：２２３〜２３２頁、Ｍａｄｕｒａら、１９９３、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２０４６〜１２０５４頁、Ｂａｒｔｅｌら、１９９３、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４：９２０〜９２４頁、Ｉｗａｂｕｃｈｉら、１９９３、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ８：１６９３〜１６９６頁、及び国際公開９４／１０３００を参照）。当業者ならば理解するように、そのような結合タンパク質もＦＬＪ２０５８４ポリペプチドによるシグナルの伝搬に関与するようである。例えば、それらはＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを含んでいる情報伝達経路の上流側要素又は下流側要素であってよい。或いは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用するポリペプチドは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを含んでいるタンパク質複合体（前記ポリペプチドは、直接又は間接的に１つ又は複数の他のポリペプチドと相互作用することができる）を単離し、当技術分野で既知の方法、例えば質量分析又はウェスタンブロット法を使って関連タンパク質を同定することによって同定することができる（例えば、Ｂｌａｃｋｓｔｏｃｋ、Ｗ．＆Ｗｅｉｒ，Ｍ．、１９９９、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１７：１２１〜１２７頁、Ｒｉｇａｕｔ，Ｇ．、１９９９、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１７：１０３０〜１０３２頁、Ｈｕｓｉ，Ｈ．２０００、Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３：６６１〜６６９頁、Ｈｏ，Ｙ．ら、２００２、Ｎａｔｕｒｅ、４１５：１８０〜１８３頁、Ｇａｖｉｎ，Ａ．ら、２００２、Ｎａｔｕｒｅ、４１５：１４１〜１４７頁を参照）。
【００５４】
総ての場合において、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと直接又は間接に相互作用する能力は、当業者に既知の方法によって測定することができる。例えば、それには限定されないが、候補物質及びＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの間の相互作用は、フローサイトメトリー、シンチレーションアッセイ、活性アッセイ、質量分析、顕微鏡検査、免疫沈降法又はウェスタンブロット解析で測定することができる。
【００５５】
他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと競合的に相互作用する（すなわち競合的に結合する）物質は競合結合検定法で同定され、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する能力を測定する。好ましくは、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する能力は、基準範囲又は対照と比較される。好ましい一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及びＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用することが知られているタンパク質の両方を発現する細胞の第１及び第２の集団を、候補物質又は対照物質と接触させる。次いで、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと競合的に相互作用する能力を、細胞の第１及び第２の集団における相互作用を比較することによって測定する。他の実施形態では、代わりの第２の集団又は更なる細胞集団を、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと競合的に相互作用することが既知の物質と接触させることができる。或いは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと競合的に相互作用する物質は、無細胞アッセイ系でＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及びにＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用することが知られているタンパク質を含んでいる第１及び第２の試料を、候補物質又は対照物質と接触させることにより同定される。次いで、候補物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと競合的に相互作用する能力を、第１及び第２の試料における相互作用を比較することによって測定する。他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを含んでいる代わりの第２の試料又は更なる試料を、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと競合的に相互作用することが知られている物質と接触させることができる。いずれの場合も、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及び既知の相互作用するタンパク質は、自然に発現させることができるか、組換えで発現させることができる。候補物質は外因的に加えることができるか、自然に又は組換えで発現させることができる。
【００５６】
他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及び他の物質（例えばそれには限定されないがタンパク質）の間の相互作用を調整する物質は、細胞ベースのアッセイにおいて、既知の相互作用物質の存在下でＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現する細胞及び候補調整物質を接触させ、相互作用を調整する候補物質を選択することによって同定することができる。或いは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及び他の物質（例えばそれには限定されないがタンパク質）の間の相互作用を調整する物質は、無細胞アッセイ系において、候補物質の存在下で前記ポリペプチドを、前記ポリペプチドと相互作用することが知られている物質と接触させることによって同定することができる。調整剤は、抗体、補因子、阻害剤、活性化剤として作用することができるが、又は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及び既知の物質の間の相互作用に対してアンタゴニスト作用又はアゴニスト作用を及ぼすことができる。上述したように、既知の物質がＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する能力は、当業者に既知の方法によって測定することができる。細胞ベースであれ無細胞系であれ、これらのアッセイは複数の（例えばライブラリの）候補物質をスクリーニングするために使用することができる。
【００５７】
他の実施形態では、細胞ベースのアッセイ系は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性を調整する（すなわち、刺激又は阻止する）ことができる物質を同定するために使用される。したがって、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性を、候補物質の存在下で、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを自然に又は組換えで発現する細胞の集団において測定する。好ましくは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性は、基準範囲又は対照と比較される。好ましい一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性を、物質の存在下又は候補物質の非存在下（例えば対照物質の存在下で）、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを自然に又は組換えで発現する細胞の第１及び第２の集団において測定し、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性が比較される。次いで、候補物質をこの比較に基づいてＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性のモジュレーターとして同定することができる。或いは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性を、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドが天然又は組換えである無細胞アッセイ系で測定することができる。好ましくは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性は、基準範囲又は対照と比較される。好ましい一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性を候補物質の存在下又は非存在下で第１及び第２の試料において測定し、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性が比較される。次に、候補物質をこの比較に基づいてＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性のモジュレーターとして同定することができる。
【００５８】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性は、下流側エフェクターに及ぼすその影響、例えばそれには限定されないが、２次メッセンジャー（例えばｃＡＭＰ、細胞内Ｃａ２＋、ジアシルグリセロール、ＩＰ３、その他）の活性レベルを検出することにより、触媒活性又は酵素活性を検出することにより、レポーター遺伝子（例えばルシフェラーゼ）の誘発を検出することにより、或いは細胞反応、例えば当業者ならば知っているような増殖、分化又は形質転換を適宜検出することにより評価することができる（活性測定技術については例えば米国特許第５４０１６３９号を参照）。次いで、候補物質は候補物質の効果を対照物質と比較することにより、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性のモジュレーターとして同定することができる。適当な対照物質としては、ＰＢＳ又は通常の生理食塩水がある。
【００５９】
他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの産生又は分解を担うか、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの翻訳後修飾を担う、酵素などの物質、又はその生物学的活性部分を同定することができる。一次スクリーニングでは、そのような物質を同定するために、実質的に純粋な、天然若しくは組換え発現されたＦＬＪ２０５８４のポリペプチド、核酸又は細胞抽出物或いは天然若しくは組換え発現されたＦＬＪ２０５８４のポリペプチド若しくは核酸を含む他の試料を、ＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸のプロセシングを担うことができる複数の候補物質（例えばそれには限定されないがライブラリとして提示される複数の物質）と接触させる。候補物質がＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の産生、分解又は翻訳後修飾を調整する能力は、当業者に既知の方法、例えばそれには限定されないが、フローサイトメトリー、放射能標識、キナーゼアッセイ、ホスファターゼアッセイ、免疫沈降反応及びウェスタンブロット分析又はノーザンブロット分析で測定することができる。
【００６０】
他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現する細胞を複数の候補物質と接触させる。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの産生、分解又は翻訳後修飾を調整するそのような物質の能力は、先に述べたように当業者に既知の方法で測定することができる。
【００６１】
一実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現を調整する（例えば、下方制御する）物質は、細胞ベースのアッセイ系で同定される。したがって、ＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸を発現する細胞の集団を候補物質と接触させ、候補物質がＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現を変化させる能力を、基準範囲又は対照との比較により測定する。他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを発現する細胞の第１及び第２の集団を候補物質又は対照物質と接触させ、候補物質がＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現を変化させる能力を、第１及び第２の細胞集団間におけるＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現レベルの差を比較することにより測定する。他の実施形態では、第１の集団におけるＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現を、基準範囲又は対照と更に比較することができる。所望により、このアッセイは、複数の（例えばライブラリの）候補物質をスクリーニングするために使用することができる。前記細胞は、例えば、原核生物起源（例えば大腸菌）又は真核生物起源（例えば酵母若しくは哺乳動物）でよい。更に、前記細胞は内因的にＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸を発現することができるか、遺伝子操作することでＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸を発現することができる。候補物質がＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現を変化させる能力は、当業者に既知の方法、例えばそれには限定されないがフローサイトメトリー、放射能標識、シンチレーションアッセイ、免疫沈降反応、ウェスタンブロット分析又はノーザンブロット分析によって測定することができる。
【００６２】
他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現を調整する物質を、動物モデルで同定する。適当な動物の例には、それには限定されないが、マウス、ラット、ウサギ、サル、モルモット、イヌ及びネコが含まれる。好ましくは、使用する動物は癌のモデルを表す。したがって、哺乳動物の第１及び第２の群に候補物質又は対照物質を投与し、候補物質がＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現を調整する能力を、第１及び第２の哺乳動物群の間の発現レベルの差を比較することにより測定する。所望ならば、第１及び第２の哺乳動物群におけるＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の発現量は、対照哺乳動物群におけるＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸のレベルと比較することができる。候補物質又は対照物質は、当技術分野で既知の手段によって投与することができる（例えば経口、経直腸又は非経口、例えば腹腔内若しくは静脈内投与）。ポリペプチド又は核酸の発現の変化は、上で概説されている方法によって評価することができる。特定の実施形態では、疾患の開始又は進行を遅らせるための物質の治療的有効量は、症状の緩和又は改善、例えばそれには限定されないが腫瘍の大きさの縮小をモニターすることによって決定することができる。候補物質が疾患と関連する１つ又は複数の症状を変化させたかどうか測定するためには、癌に精通している医師に既知の技術を使用することができる。
【００６３】
当業者ならば、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを、このポリペプチドの活性を調整する（例えば、刺激又は阻止する）作用をする物質、特に小分子の構造に基づく設計のための、
１）前記ポリペプチドの三次元構造を決定すること、
２）前記物質の可能性のある反応部位又は結合部位の前記ポリペプチド内での三次元構造を推測すること、
３）推測された反応部位又は結合部位と反応又は結合することが予測される候補物質を合成すること、及び
４）候補物質が前記ポリペプチドの活性を調整することが可能かどうかを調べることを含む方法で使用できることも理解しよう。
【００６４】
上述の方法は繰り返しの工程となりそうなことは理解されよう。
【００６５】
本明細書で議論されるように、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する物質は、癌の治療及び／又は予防で用いられる。そのような使用のために、前記剤は通常医薬組成物の形で投与される。
【００６６】
かくして、本発明によれば、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する物質と、薬剤として許容される希釈剤、賦形剤及び／又は担体とを含む医薬組成物が提供される。医薬組成物はワクチンとしても使用され、ワクチン用に許容される更なる成分を含むことができ、また当業者に既知の１つ又は複数の適当なアジュバントを更に含むことができる。
【００６７】
以下において、本発明で用いられる物質、治療及び／又は予防で用いられるＦＬＪ２０５８４ポリペプチド及びＦＬＪ２０５８４核酸は、「活性物質」と称される。本明細書で、特定の活性物質又は物質の組合せを用いて疾患又は病態を治療又は予防する方法に言及する場合は、そのような言及は、その疾患又は病態の治療及び／又は予防のための医薬品の調製におけるその活性物質又は物質の組合せの使用を含むものと理解されたい。また、癌の療法に用いられる抗体も提供される。
【００６８】
通常、前記組成物は、薬剤として許容される担体を通常含む無菌医薬組成物の一部として供給される。この組成物はいかなる適当な形態でもよい（患者に対する所望の投与方法によって決まる）。
【００６９】
本発明の活性物質は、薬剤投与のために従来使用されている経路のいずれかにより対象に投与することができ、例えばそれらは非経口、経口、局所（口内、舌下又は経皮を含む）或いは吸入の経路により投与することができる。任意の特定のケースにおける最も適当な投与経路は、特定の活性物質、関係する癌腫、対象、並びに疾患の性質及び重大度及び対象の身体条件によって決まる。
【００７０】
前記活性物質は１つ又は複数の他の治療活性のある、例えば抗腫瘍性の化合物と組合せて、例えば同時に、逐次的に又は別々に投与することができる。
【００７１】
医薬組成物は、本発明の活性物質の単位用量当たりの所定量を含んでいる単位用量形態で提供するのが便利である。そのような単位は、例えば、それには限定されないが、治療する病態、投与経路及び対象の年齢、体重及び状態に従い、７５０ｍｇ／ｋｇから０．１ｍｇ／ｋｇ含むことができる。
【００７２】
本発明で用いられる薬剤として許容される担体は、例えば投与経路によって多種多様な形態をとることができる。
【００７３】
経口投与用組成物は、液体又は固体でよい。経口液状製剤は、例えば水性若しくは油性の懸濁液、溶液、乳剤、シロップ又はエリキシルの形態でもよいし、使用時に水又は他の適当な溶媒で元に戻すための乾燥製品として提供することもできる。当技術分野で既知であるように、経口液状製剤は懸濁化剤を含むことができる。
【００７４】
散剤、カプセル及び錠剤のような経口固形製剤の場合、デンプン、砂糖、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、滑剤、結合剤、崩壊剤、などの担体を含むことができる。投与の容易さのため、錠剤及びカプセルは固形医薬担体が通常使用される最も有利な経口用の投薬単位剤形となる。上で提示される一般的な剤形に加えて、本発明の活性物質は、放出制御手段により且つ／又は送達器具により投与することもできる。錠剤及びカプセルは、結着剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカンタ又はポリビニルピロリドン；充填剤、例えばラクトース、砂糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール又はグリシン；錠剤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール又はシリカ；崩壊剤、例えばジャガイモデンプン；或いはラウリル硫酸ナトリウムなどの許容される湿展剤などの従来の担体又は賦形剤を含むことができる。錠剤は、通常の製薬業務で知られている方法により、標準の水性又は非水性の技術でコーティングすることができる。
【００７５】
経口投与のために適当な本発明の医薬組成物は、カプセル、カシェ剤又は錠剤などの活性物質の所定量をそれぞれ含む別々の単位として、散剤又は顆粒剤として、或いは水性液体、非水性液体、水中油型乳剤又は油中水形乳濁液の中の溶液又は懸濁液として提供することができる。そのような組成物はいかなる製剤方法でも調製することができるが、全ての方法は１つ又は複数の必要成分を構成する担体と活性物質とを結合させるステップを含む。一般に、前記組成物は、活性物質を液状の担体又は微粉固体担体或いはその両方と一様に且つ密接に混ぜ合わせ、次に必要に応じて生成物を所望の形に成形することによって調製される。例えば、錠剤は圧縮又は成型により、任意選択に１つ又は複数の副成分と一緒に調製することができる。
【００７６】
非経口投与のために適当な医薬組成物は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性物質と適切に混合されている、本発明の活性物質の水性の溶液又は懸濁液として調製することができる。分散液は、油ベースのグリセリン、液体ポリエチレングリコール及びそれらの混合物で調製することもできる。普通の貯蔵条件及び使用条件下では、これらの調製物は微生物の増殖を予防するために防腐剤を含む。
【００７７】
注射に適当な医薬剤形としては、酸化防止剤、緩衝液、静菌薬、及びその組成物を予定受容個体の血液と等張性にする溶質を含むことができる水性又は非水性の無菌注射溶液、並びに懸濁化剤及び増粘剤を含むことができる水性及び非水性の無菌懸濁液がある。即時使用の注射液、分散液及び懸濁液は、無菌の散剤、顆粒剤及び錠剤から調製することができる。
【００７８】
医薬組成物は、当技術分野で既知の医療器具で投与できる。例えば、好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は針不要の皮下注射器具で投与でき、そのような器具は、例えば米国特許第５３９９１６３号、第５３８３８５１号、第５３１２３３５号、第５０６４４１３号、第４９４１８８０号、第４７９０８２４号、又は第４５９６５５６号で開示されている。本発明に役立つ既知のインプラント及びモジュールの例として以下が含まれる：米国特許第４４８７６０３号は、制御された速度で医薬品を注入するための植込型マイクロ薬物注入ポンプを開示している；米国特許第４４８６１９４号は、皮膚を通して薬物を投与するための治療器具を開示している；米国特許第４４４７２３３号は、投薬を正確な注入速度で実施するための投薬注入ポンプを開示している；米国特許第４４４７２２４号は、連続薬物送達のための可変流植込型注入器具を開示している；米国特許第４４３９１９６号は、多室コンパートメントを有する浸透圧薬物送達システムを開示している；米国特許第４４７５１９６号は、浸透圧薬物送達システムを開示している。他にも多くのそのようなインプラント、送達系及びモジュールが当業者には既知である。
【００７９】
ある実施形態では、本発明の医薬組成物は、ｉｎ ｖｉｖｏで確実に適切な分布を示すように製剤することができる。例えば、血液脳関門は多くの非常に親水性の化合物を排除するので、医薬組成物をリポソームに入れて送達することが好ましいかもしれない。このように、本発明の一実施形態では、本発明の活性物質はリポソームで製剤化される。より好ましい実施形態において、前記リポソームはターゲティング部分を含む。最も好ましい実施形態では、リポソーム内の治療化合物は、腫瘍近くの部位にボーラス注射によって送達される。リポソームの製造方法に関しては、例えば米国特許第４５２２８１１号；第５３７４５４８号；第５３９９３３１号を参照。リポソームは、特定の細胞又は器官に選択的に輸送され、目標への薬物送達を強化する１つ又は複数の部分を含むことができる（例えば、Ｒａｎａｄｅ，ＶＶ．１９８９、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５を参照）。例示的なターゲティング部分としては以下がある：葉酸塩又はビオチン（例えば米国特許第５４１６０１６を参照）；マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａら、１９８８、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）；抗体（Ｂｌｏｅｍａｎ，ＰＧ．ら、１９９５、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３５７：１４０；Ｍ．Ｏｗａｉｓら、１９９５、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０）；界面活性物質プロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅら、１９９５、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）、それの異なる種類は本発明の製剤、並びに発明された分子の成分を含むことができる；ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒら、１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０）；また、Ｋｅｉｎａｎｅｎ，Ｋ．＆Ｌａｕｋｋａｎｅｎ，ＭＬ．１９９４、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３４６：１２３；Ｋｉｌｌｉｏｎ，ＪＪ．＆Ｆｉｄｌｅｒ，ＩＪ．、１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２７３も参照。組成物は安定性を強化するために単位投与又は多回投与容器で、例えば密封アンプル及びバイアルで提供することができ、また、使用直前に無菌の液状担体、例えば注射用水を添加するだけで済むフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存することができる。無菌の液状担体は別個のバイアル又はアンプルで供給することができ、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセリン、プロピレングリコール及び液状ポリエチレングリコール）、それらの適当な混合物並びに植物油を含む溶媒又は分散媒でよい。有利なことに、局部麻酔薬、防腐剤及び緩衝剤などの物質を無菌の液状担体に含むことができる。
【００８０】
局所投与のために適応させる医薬組成物は、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、散剤、溶液、ペースト、ゲル、含浸包帯、スプレー剤、エアゾール又は油、経皮器具、粉剤、などとして製剤化することができる。これらの組成物は、活性物質を含む従来法を通して調製することができる。このように、それらは適合する従来の担体及び添加剤、例えば保存料、薬剤浸透に役立つ溶媒、クリーム又は軟膏ベースの緩和剤及びローションのためのエタノール又はオレイルアルコールを含むこともできる。そのような担体は、組成物の約１％から約９８％まで存在してもよい。より一般的には、それらは組成物の最高約８０％を構成する。例示としてだけであるが、クリーム又は軟膏は十分な量の親水性材料及び水を混ぜることによって調製され、化合物の約５から１０重量％を含有し、所望の粘凋度を有するクリーム又は軟膏を産生するのに十分な量である。
【００８１】
経皮投与に適応した医薬組成物は、長時間にわたってレシピエントの表皮と密接に接触し続けるようになっている個別のパッチとして提供することができる。例えば、活性物質はパッチからイオン導入法により送達することができる。
【００８２】
外部組織、例えば口及び皮膚への適用のためには、前記組成物は好ましくは局所用の軟膏又はクリームとして適用される。軟膏剤形の場合は、活性物質はパラフィン又は水溶性軟膏基剤のいずれかと共に使用することができる。或いは、活性物質は水中油クリーム基剤又は油中水基剤と一緒にクリーム剤形にすることができる。
【００８３】
口への局所投与に適応した医薬組成物としては、ロゼンジ、トローチ及び口内洗剤がある。
【００８４】
目への局所投与に適応した医薬組成物としては、活性物質が適当な担体、特に水性溶媒に溶解又は懸濁した点眼液がある。それらには、上記のような局所用の軟膏又はクリームも含まれる。
【００８５】
担体が固体である直腸投与に適する医薬組成物は、最も好ましくは単位用量坐薬として提供される。適当な担体としてはカカオ脂又は他のグリセリド又は当技術分野で通常使用する材料があり、坐薬は前記組合せと軟化又は溶解担体との混合とその後のチリング及び成型によって都合よく作ることができる。それらは、浣腸として投与することもできる。
【００８６】
膣投与に適応した医薬組成物は、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム又はスプレー組成物として提供することができる。これらは、通常当技術分野で使用される緩和剤又は基剤を含むことができる。
【００８７】
ワクチンとしての使用に適応した医薬組成物は、サイトカイン、ケモカイン、副刺激分子又は免疫反応を増幅及び指示する他の免疫調節剤などのアジュバントを含むことができる。例えば、医薬組成物はＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを、樹状細胞補充を誘導するサイトカイン（例えばＧＭコロニー刺激因子）及び樹状細胞成熟を誘導する副刺激分子（例えばＣＤ４０Ｌ又は拮抗的抗ＣＤ４０）の相乗的組合せにより、ＩＬ−１２及びＩＬ−１５などの他のＴｈ１／細胞傷害性Ｔ細胞支持サイトカインと組み合わせて含むことができる。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドでプレインキュベートされる樹状細胞は、ｅｘ ｖｉｖｏで生成することができる。他の相乗的組合せは、動物モデルで記載されている（Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙら、２００１、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１、２０９〜２１９頁）。他のアジュバントは、ＣｐＧ−オリゴデオキシヌクレオチドである。医薬組成物はＦＬＪ２０５８４ポリペプチド、広域ＭＨＣクラスＩＩ結合、例えばｐａｎ−ＨＬＡ−ＤＲ−結合ペプチド、内因性のヘルパーエピトープ、又は強化ヘルパーエピトープも含むこともできる。
【００８８】
投与される活性物質の用量は、特定の活性物質、関係する癌腫、対象、並びに疾患の性質及び重大度及び対象の身体条件、及び選択される投与経路によって異なる。適当な投薬量は、当業者によって容易に決定される。ヒト及び動物の癌の治療及び／又は予防のために、抗体を含んでいる医薬組成物をいかなる適当な投与経路、例えば注射及び抗体ベースの臨床製品のための当技術分野で既知の他の投与経路を使用して、治療的又は予防的有効量（例えば腫瘍成長の阻止及び／又は腫瘍細胞の移動の阻止をもたらす投薬量）で患者（例えばヒト対象）に投与することができる。
【００８９】
前記組成物は、投与方法により本発明の活性物質の０．１重量％から、好ましくは１０重量％から６０重量％、又はそれ以上を含むことができる。
【００９０】
本発明の活性物質の個々の投薬量の最適量及び間隔は治療される病態の性質及び程度、投与の形態、経路及び部位、並びに治療される特定の対象の年齢及び状態によって決められ、また、医師が最終的に使用する適当な投薬量を決定することは、当業者ならば理解しよう。この投薬は、適当な限り度々繰り返すことができる。副作用が起こる場合は、通常の医療慣行に従って投薬の量及び／又は頻度を変更するか減少させることができる。
【００９１】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、癌の治療及び／又は予防でも役に立つことができる。したがって、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを好ましくはワクチンとして含んでいる組成物の治療的有効量を投与することを含む、癌の治療及び／又は予防のための方法が提供される。癌の治療及び／又は予防のための医薬品の製造のための、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの使用も提供される。それらが本発明の方法での使用のために提供される場合は、ＦＬＪ２０５８４は好ましくは単離された形態で提供される。より好ましくは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、少なくともある程度精製されている。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは組換え方法を使って産生すること、合成的に産生すること、又はこれらの方法の組合せによって産生することもできる。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは実質的に純粋な形態で、すなわち実質的に他のタンパク質を含まない形態で提供することができる。
【００９２】
組換えＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、発現系を含んでいる遺伝子操作された宿主細胞から、当技術分野で既知の方法によって調製することができる。したがって、本発明はＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又はＦＬＪ２０５８４核酸を含む発現系、そのような発現系で遺伝子操作されている宿主細胞、及び組換え技術によるＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの産生にも関する。組換えポリペプチドを産生するために無細胞翻訳系を使用することもできる（例えばウサギ網状赤血球溶解物、コムギ麦芽溶解物、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｌｔｄ．、Ｌｅｗｅｓ、ＵＫからのＳＰ６／Ｔ７ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ＆Ｔ及びＲＴＳ １００ Ｅ．Ｃｏｌｉ ＨＹ転写及び翻訳キット、並びにＰｒｏｍｅｇａ ＵＫ、Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ、ＵＫからのＴＮＴ Ｑｕｉｃｋ ｃｏｕｐｌｅｄ転写／翻訳システム）。
【００９３】
組換えＦＬＪ２０５８４ポリペプチド産生のために、宿主細胞はＦＬＪ２０５８４核酸のための発現系又はその部分を組み込むように遺伝子操作することができる。そのような組込みは、当技術分野で既知の方法、例えばリン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＤ−デキストラン媒介性トランスフェクション、トランスベクション、マイクロインジェクション、カチオン脂質媒介性トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレープローディング、遺伝子銃による導入又は感染などで実施することができる（例えばＤａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、１９８６及びＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ、ＮＹ、１９８９を参照）。
【００９４】
宿主細胞の代表例としては、大腸菌、連鎖球菌、ブドウ球菌、ストレプトマイセス及び枯草菌細胞などの細菌細胞；酵母細胞及びアスペルギルス細胞などの糸状菌の細胞；ショウジョウバエＳ２及びスポドプテラ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ）Ｓｆ９細胞などの昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ及びボーズ黒色腫細胞などの動物細胞；並びに植物細胞がある。
【００９５】
多種多様な発現系を利用でき、例として、それには限定されないが、染色体、エピソーム及びウイルス由来の系、例えば細菌性プラスミド、バクテリオファージ、トランスポゾン、酵母エピソーム、挿入要素、酵母染色体要素、ウイルス（例えばバキュロウイルス、ＳＶ４０などのパポバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス及びレトロウイルス）などに由来するベクター、並びにその組合せに由来するベクターがあり、例えばプラスミド及びバクテリオファージ遺伝因子（例えばコスミド及びファージミドなど）がある。発現系は、発現を起こすだけでなく調節する制御領域を含むことができる。通常、核酸を維持、増殖、又は発現してポリペプチドを宿主内で産生することができるいかなる系又はベクターでも使用することができる。適当な核酸配列は、上記Ｓａｍｂｒｏｏｋらで示されているようないかなる種類の既知の常用技術によっても、発現系に挿入することができる。小胞体の内腔、ペリプラスム間隙又は細胞外の環境への翻訳されたタンパク質の分泌を可能にするために、適当な分泌シグナルをＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに組み込むことができる。これらのシグナルはＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに対して内因性であっても、又は異種シグナルであってもよい。
【００９６】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドが細胞ベースのスクリーニングアッセイのために発現させられるならば、ポリペプチドは細胞表面に産生されることが好ましい。この場合、細胞はスクリーニングアッセイで使うより前に収集することができる。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドが培地に分泌されるならば、培地は前記ポリペプチドを単離するために回収することができる。細胞内産生の場合は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを回収する前に細胞を先ず溶解しなければならない。
【００９７】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、組換え細胞培養から又は他の生物源から、硫安又はエタノール沈殿、酸抽出、アニオン又はカチオンイオン交換クロマトグラフィー、リン酸セルロースクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、分子篩クロマトグラフィー、遠心分離法、電気泳動法及びレクチンクロマトグラフィーなどの既知の方法により回収及び精製することができる。一実施形態では、これらの方法の組合せが使用される。他の実施形態では、高速液体クロマトグラフィーが使用される。他の実施形態では、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを含んでいる試料から前記ポリペプチドを除去するために、又は前記ポリペプチドを精製するためにＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと特異的に結合する抗体を用いることができる。単離又は精製の間にポリペプチドが変性したときは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの未変性又は活性な高次構造を再生させるリフォールディングのために、当技術分野で既知の技術を使用することができる。本発明との関連で、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドはいかなる供与源からの生体試料からでも、例えばそれには限定されないが、血液試料又は組織試料、例えば卵巣又は肺の組織試料などから得ることができる。
【００９８】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは「成熟」タンパク質の形でもよく、又は融合タンパク質などのより大きなタンパク質の一部でもよい。分泌配列又はリーダー配列を含む更なるアミノ酸配列、プレタンパク、プロタンパク若しくはプレプロタンパク配列、又は精製で役立つ配列、例えばそれには限定されないが複ヒスチジン残基、ＦＬＡＧ標識、ＨＡ標識若しくはｍｙｃ標識などの親和性標識を含むことはしばしば有利である。組換えを生成する間の安定性を提供することができる更なる配列も、使用することができる。そのような配列は、更なる配列又はその一部として切断可能な配列を組み込むことによって、必要に応じて任意選択に除去することができる。このように、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、他のポリペプチドを含む他の部分と融合することができる。このような追加の配列及び親和性標識は、当技術分野において周知である。
【００９９】
当技術分野で既知であるように、アミノ酸置換は保存的又は半保存的であることができ、ポリペプチドの所望の活性に有意な影響を及ぼさないことが好ましい。置換は自然発生でよく、又は例えば突然変異誘発を用いて導入することができる（例えばＨｕｔｃｈｉｎｓｏｎら、１９７８、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：６５５１）。従って、アミノ酸グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシンは、しばしばお互いに置換することができる（脂肪族側鎖を有するアミノ酸）。これらの可能な置換の中で、グリシン及びアラニンを互いに置換するために使用すること（それらは比較的短い側鎖を有することから）、また、バリン、ロイシン及びイソロイシンを互いに置換するために使用すること（それらは疎水性のより大きな脂肪族側鎖を有することから）が好ましい。しばしばお互いに置換される他のアミノ酸としては、それには限定されないが以下がある：
−フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン（芳香族側鎖を有するアミノ酸）；
−リジン、アルギニン及びヒスチジン（塩基側鎖を有するアミノ酸）；
−アスパラギン酸及びグルタミン酸（酸性側鎖を有するアミノ酸）；
−アスパラギン及びグルタミン（アミド側鎖を有するアミノ酸）；
−システイン及びメチオニン（硫黄含有側鎖を有するアミノ酸）；並びに
−アスパラギン酸及びグルタミン酸は、それぞれホスホセリン及びホスホトレオニンを置換することができる（酸性側鎖を有するアミノ酸）。
【０１００】
特定の一実施形態では、置換されたアミノ酸は実際にＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性にかなりの影響を及ぼし、ペプチドに対して特異的にドミナントネガティブな活性を与えるために選択することができる。他の実施形態では、置換されたアミノ酸は、ポリペプチドを特異的に構成的に活性にするために選択することができる。
【０１０１】
一実施形態では、ワクチンの効力を改善するために、通常エピトープ強化と称されるＦＬＪ２０５８４ポリペプチドのエピトープのアミノ酸配列の修飾が使用される。
【０１０２】
修飾には、それには限定されないが、翻訳後修飾などの自然に生じる修飾、更には突然変異誘発によって導入することができるような非自然発生の修飾が含まれる。
【０１０３】
好ましくは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの誘導体は図１で示されるアミノ酸配列（配列番号１）と少なくとも７０％の同一性、より好ましくは少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９８％の同一性を有する。同一性割合は当技術分野で既知の概念であって、それには限定されないが例えばＮＣＢＩから入手可能なＢＬＡＳＴ（商標）ソフトウェアを使用して計算することができる（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０頁；Ｇｉｓｈ，Ｗ．＆Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．、１９９３、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．３：２６６〜２７２頁；Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ら、１９９６、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１〜１４１頁；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９７、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９〜３４０２頁；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．＆Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．、１９９７、Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．７：６４９〜６５６頁）。
【０１０４】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの断片も本発明の方法で役に立つこともでき、例としては配列番号１のアミノ酸配列を有するポリペプチドの断片が含まれ、それは断片全体で少なくとも７０％の相同性を有する。好ましくは、前記断片は長さが少なくとも１０アミノ酸であり、好ましくは長さが少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも５０又は少なくとも１００アミノ酸である。断片は図１で示されるアミノ酸配列（配列番号１）と全体で少なくとも７０％の同一性を有し、より好ましくは少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９８％の同一性を有する。そのような断片は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの活性を保持する。そのような活性には、抗体結合能力が含まれる。
【０１０５】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドが癌の治療及び／又は予防に用いられる医薬組成物の活性物質である場合は、好ましくは組換えＦＬＪ２０５８４ポリペプチドが使用される。特定の実施形態では、細胞へ融合タンパク質が入るのを助長するＨＩＶ／Ｔａｔタンパク質のタンパク質形質導入ドメインなど他のポリペプチド（Ａｓｏｈ，Ｓ．ら、２００２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９９：１７１０７〜１７１１２頁）と融合されたＦＬＪ２０５８４ポリペプチドが、癌の治療及び／又は予防のための医薬品の製造のために提供される。
【０１０６】
他の態様において、有癌対象におけるＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの検出は、特に本発明の方法による治療に適当な患者集団を同定するために用いることができる。
【０１０７】
したがって、本発明は対象の癌のスクリーニング及び／又は診断若しくは予後診断のための、且つ／或いは癌療法の効果をモニターするための、前記対象から得られる生体試料においてＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを検出及び／又は定量するステップを含む方法を提供する。好ましくは前記スクリーニング及び／又は診断の方法に用いられるＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかそれからなるか、
（ｂ）ＦＬＪ２０５８４活性を保持する配列番号１のアミノ酸配列と比較して１つ又は複数のアミノ酸置換、修飾、欠失又は挿入を有する誘導体であるか、或いは
（ｃ）配列番号１のアミノ酸配列を有するポリペプチドの断片であり、長さが少なくとも１０アミノ酸であって、断片全体で少なくとも７０％の相同性を有する。
【０１０８】
一態様では、発現は前に測定された基準範囲と比較される。
【０１０９】
好ましくは、検出するステップは、
（ａ）試料を上の（ａ）から（ｃ）で定義されているポリペプチドに特異的な捕捉試薬と接触させること、及び
（ｂ）前記試料中の前記捕捉試薬及び前記ポリペプチドの間で結合が起こったかどうかを検出することを含む。
【０１１０】
他の態様において、捕捉されたポリペプチドは、固相上に固定されてもよい直接又は間接標識された検出試薬を用いて検出される。
【０１１１】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを検出／定量するための便利な手段は、抗体の使用を含む。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、先に述べた当技術分野で既知の方法を用いて、前記ポリペプチドと相互作用する（結合又は認識する）抗体を作製するためのイムノゲンとして用いることができる。このように他の態様では、本発明は、対象の癌のスクリーニング及び／又は診断のための或いは抗癌療法の効力をモニターするための、少なくとも１つのＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと特異的に結合する抗体の使用を提供する。特定の実施形態において、抗ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド抗体を用いる診断方法は、本発明の方法による治療に適当な患者集団を同定するために用いることができる。
【０１１２】
ＦＬＪ２０５８４抗体は、とりわけヒト組織及び／又はその亜分画、例えばそれには限定されないが、膜、サイトゾル若しくは核の亜分画の生体試料中のＦＬＪ２０５８４発現を検出することによる癌の診断のために用いることもできる。
【０１１３】
他の態様では、生体試料中のＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを検出する方法は、直接又は間接標識された検出試薬を用いて前記試料中のＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの量を検出及び／又は定量することを含む。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは当技術分野で既知のいかなるイムノアッセイによっても検出することができ、例えばそれには限定されないものの、免疫沈降反応とそれに続くドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法、２次元ゲル電気泳動法、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降反応アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集反応アッセイ、補体結合反応アッセイ、免疫放射測定アッセイ、蛍光免疫法及びプロテインＡイムノアッセイなどの技術を用いる競合的及び非競合的なアッセイ系で検出することができる。
【０１１４】
抗体と抗原との相互作用の検出は、抗体を検出可能な物質、例えばそれに限定されないが、酵素（例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ）、補欠分子族（例えばストレプトアビジン、アビジン、ビオチン）、蛍光物質（例えばウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、フィコエリトリン）、発光物質（例えばルミノール）、生物発光材料（例えばルシフェラーゼ、ルシフェリン、エクオリン）、放射性核種（例えば１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９９Ｔｃ）、陽電子放射金属又は非放射性常磁性金属イオンなどと結合することにより、容易にすることができる（米国特許第４７４１９００号を参照）。
【０１１５】
本発明は、上で定義されたＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに対する捕捉試薬（例えば抗体）を含む診断キットも提供する。更に、そのようなキットは任意選択に以下の１つ又は複数を含む：
（１）スクリーニング、診断、予後診断、治療モニタリング又はこれらの用途のいかなる組合せのための捕捉試薬の使用説明書、
（２）捕捉試薬に対する標識された結合パートナー、
（３）捕捉試薬が固定される固相（例えば試薬細片）、及び
（４）スクリーニング、診断、予後診断又は治療又はそのいかなる組合せのための使用の規制上の承認を示している表示又は挿入紙。
【０１１６】
捕捉試薬に対する標識された結合パートナーが提供されないならば、抗ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド捕捉試薬自体を検出可能なマーカー、例えば化学発光、酵素、蛍光又は放射性の部分（上記参照）で標識することができる。
【０１１７】
ＦＬＪ２０５８４核酸の検出及び／又は定量は、対象の癌のスクリーニング及び／又は診断若しくは予後診断の方法で、且つ／或いは癌療法の効果をモニターする方法で用いることができることも、当業者にとって明らかになる。
【０１１８】
別のものを示していない限り、ＦＬＪ２０５８４核酸は以下の特性の１つ又は複数を有することができる核酸分子を含み、したがって、
ｄ）配列番号２のＤＮＡ配列又はそのＲＮＡ同等物を含むかそれからなり、
ｅ）ｄ）の配列に相補性である配列を有し、
ｆ）ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードする配列を有し、
ｇ）ｄ）、ｅ）及びｆ）の配列のいずれかと実質的な同一性を示す配列を有し、或いは
ｈ）長さが少なくとも１５ヌクレオチドであるｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）の断片であり、
また、以下の特性の１つ又は複数を有することができる：
１）それらはＤＮＡでもＲＮＡでもよい；
２）それらは、一本鎖でも二本鎖でもよい；
３）それらは、実質的に純粋な形態であってもよい。したがって、それらは混在するタンパク質及び／又は他の核酸を実質的に含まない形態で提供することができる；
４）それらは、イントロンと一緒でもイントロンが無くてもよい（例えばｃＤＮＡとして）。
【０１１９】
ＦＬＪ２０５８４核酸の断片は、長さが好ましくは少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも５０、少なくとも１００又は少なくとも２５０ヌクレオチドである。
【０１２０】
本発明は、上の（ｄ）から（ｈ）で記載されているＦＬＪ２０５８４核酸に相補性であり、前記ＦＬＪ２０５８４核酸にハイブリダイズすることができる核酸の使用も提供する。そのような核酸分子は、「ハイブリッド形成」核酸分子と称される。例えば、しかしそれには限定されないが、ハイブリッド形成核酸分子は、プローブ又はプライマーとして役に立つことができる。ハイブリッド形成核酸分子は、その全長にわたって上の（ｄ）から（ｈ）の適用範囲内の核酸分子と高い配列同一性を有することができる（例えば少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９８％の配列同一性）。上で議論した核酸分子のいずれかとハイブリダイズすることができるハイブリッド形成核酸分子の、例えばハイブリッド形成アッセイにおける使用も、本発明の範囲内である。
【０１２１】
ハイブリッド形成アッセイは、対象の癌の療法のスクリーニング、予後診断、診断又はモニターのために用いることができる。したがって、そのようなハイブリッド形成アッセイは、
ｉ）対象から得た核酸を含む生体試料を、ハイブリダイゼーションが起こる条件下でＦＬＪ２０５８４核酸分子とハイブリダイズすることができる核酸プローブと接触させること、及び
ｉｉ）結果として生じるいかなるハイブリダイゼーションをも検出又は測定することを含む。
【０１２２】
好ましくは、そのようなハイブリッド形成分子は長さが少なくとも１０ヌクレオチドであり、好ましくは長さが少なくとも２５又は少なくとも５０ヌクレオチドである。より好ましくは、前記ハイブリッド形成核酸は、上の（ｄ）から（ｈ）のいずれかの適用範囲内の核酸と特異的にハイブリダイズする。最も好ましくは、ハイブリダイゼーションはストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で起こる。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の１例は、企図するハイブリダイゼーションが約０．９Ｍの塩溶液を用いて約３５℃から約６５℃の温度で実施される場合である。しかし、当業者は、プローブ長、塩基組成、存在するイオンの型、その他の変数を考慮するために適宜、そのような条件を変更することができる。
【０１２３】
本発明は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードするＲＮＡとハイブリダイズすることができる核酸プローブ、適当な試薬及び取扱説明書を含む診断キットも提供する。
【０１２４】
他の実施形態では、適当な反応条件下でＦＬＪ２０５８４核酸分子の少なくとも一部の増幅を、例えばポリメラーゼ連鎖反応（例えばＩｎｎｉｓら、１９９０、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州サンディエゴを参照）、リガーゼ連鎖反応（欧州特許第３２０３０８号を参照）、Ｑβレプリカーゼの使用、環式プローブ反応又は当技術分野で既知の他の方法により刺激することができる一対のプライマーを、１つ又は複数の容器に含んでいる診断キットが提供される。一般的に、プライマーは長さが少なくとも８ヌクレオチドであり、好ましくは長さは少なくとも１０から２５ヌクレオチド、より好ましくは１５から２５ヌクレオチドとなる。場合によっては、長さが少なくとも３０又は少なくとも３５のヌクレオチドのプライマーを用いることができる。
【０１２５】
他の態様では、本発明は、癌の治療及び／又は予防に用いられる医薬品の製造における少なくとも１つのＦＬＪ２０５８４核酸の使用を提供する。
【０１２６】
特定の実施形態において、ハイブリッド形成ＦＬＪ２０５８４核酸分子は、相補性のＦＬＪ２０５８４核酸との結合によりＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現を変化させるためのアンチセンス分子として用いられ、癌の治療及び／又は予防若しくは阻止で用いることができる。アンチセンス核酸は、多少の配列相補性のためにＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードするＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）の一部とハイブリダイズすることができるＦＬＪ２０５８４核酸を含む。アンチセンス核酸は、そのようなポリペプチドをコードするｍＲＮＡのコード領域及び／又は非コード領域と相補性であることができる。最も好ましくは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現は、アンチセンス核酸の使用によって阻止される。このように、本発明は、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードする遺伝子又はｃＤＮＡにアンチセンスである少なくとも８のヌクレオチドを含む核酸の、治療的又は予防的使用を提供する。
【０１２７】
他の実施形態では、ポリペプチドの遺伝子発現を減少させるために本明細書で定義されているポリペプチドをコードする遺伝子配列を既知の遺伝子「ノックアウト」、リボザイム又は三重らせんの方法と共に用いることによってＦＬＪ２０５８４ポリペプチドのレベル又は活性を減少させることにより、癌の症状を改善することができる。この方法では、リボザイム又は三重らせん分子は、遺伝子の活性、発現又は合成を調整することにより、癌の症状を改善するために用いられる。そのような分子は、突然変異又は非突然変異の標的遺伝子の発現を低減させるか阻止するように設計することができる。そのような分子の産生及び使用のための技術は、当業者に既知である。
【０１２８】
内因性のＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現は、標的相同組換えを利用してポリペプチドをコードする遺伝子又はそのような遺伝子のプロモーターを不活性化又は「ノックアウト」することによって減少させることもできる（例えばＳｍｉｔｈｉｅｓら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ ３１７：２３０〜２３４頁；Ｔｈｏｍａｓ＆Ｃａｐｅｃｃｈｉ、１９８７、Ｃｅｌｌ ５１：５０３〜５１２頁；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、１９８９、Ｃｅｌｌ ５：３１３〜３２１頁；及びＺｉｊｌｓｔｒａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５〜４３８頁を参照）。例えば、内因性のＦＬＪ２０５８４遺伝子（ポリペプチドをコードする遺伝子のコード領域又は調節領域）と相同なＤＮＡが隣接する非機能性ポリペプチド（又は完全に無関係なＤＮＡ配列）をコードする突然変異遺伝子は、ｉｎ ｖｉｖｏで標的遺伝子を発現する細胞にトランスフェクトするために、選択可能なマーカー及び／又は負の選択可能なマーカーと一緒に又はそれ無しに用いることができる。標的相同組換えを通してのＤＮＡ構築物の挿入は、標的遺伝子の不活化をもたらす。
【０１２９】
他の実施形態では、核酸は遺伝子治療により投与される（例えばＨｏｓｈｉｄａ，Ｔ．ら、２００２、Ｐａｎｃｒｅａｓ、２５：１１１〜１２１頁；Ｉｋｕｎｏ，Ｙ．２００２、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２００２ ４３：２４０６〜２４１１頁；Ｂｏｌｌａｒｄ，Ｃ．、２００２、Ｂｌｏｏｄ ９９：３１７９〜３１８７頁；Ｌｅｅ Ｅ．、２００１、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７：７７３〜７８２頁を参照）。遺伝子治療は、発現された又は発現可能なＦＬＪ２０５８４核酸の対象への投与を指す。当技術分野で利用できる遺伝子治療法のいずれも、本発明に従い利用できる。
【０１３０】
患者への治療的ＦＬＪ２０５８４核酸の送達は、直接的ｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子治療（すなわち、患者は核酸又は核酸を含んでいるベクターに直接曝される）でも間接的ｅｘ ｖｉｖｏ遺伝子治療（すなわち、細胞は先ずｉｎ ｖｉｔｒｏで核酸により形質転換され、次に患者に移植される）でもよい。
【０１３１】
例えばｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子治療のためには、ＦＬＪ２０５８４核酸を含んでいる発現ベクターはそれが細胞内に入るように、すなわち例えば米国特許第４９８０２８６号又はＲｏｂｂｉｎｓら、１９９８、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．８０：３５〜４７頁に記載されている欠損若しくは弱毒化レトロウイルス又は他のウイルスベクターを用いた感染により投与される。
【０１３２】
当技術分野で既知の様々なレトロウイルスベクターは、Ｍｉｌｌｅｒら（１９９３、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１〜５９９頁）が記載している、ウイルスゲノムのパッケージング及び以降の宿主細胞ＤＮＡへの組込みのために必要とされないレトロウイルス配列を削除するように修飾されているものなどである。また、その非分裂細胞に感染する能力のために有利であるアデノウイルスベクターを用いることができ、そのような高容量アデノウイルスベクターはＫｏｃｈａｎｅｋ（１９９９、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、１０：２４５１〜２４５９頁）で記載されている。利用することができるキメラウイルスのベクターは、Ｒｅｙｎｏｌｄｓら（１９９９、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｔｏｄａｙ、１：２５〜３１頁）によって記載されているものである。ハイブリッドベクターも用いることができ、それらはＪａｃｏｂｙら（１９９７、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、４：１２８２〜１２８３頁）によって記載されている。
【０１３３】
裸のＤＮＡの直接注入、又は微小粒子ボンバードメント（例えばＧｅｎｅ Ｇｕｎ（登録商標）；微粒子銃、デュポン）の使用によるもの、又はそれを脂質でコーティングすることによるものも、遺伝子治療において用いることができる。細胞表面受容体／トランスフェクション化合物又はリポソーム、微小粒子若しくはマイクロカプセル内へのカプセル化によるもの、又は核に入ることが既知のペプチドと結合させて核酸を投与することによるもの、又は受容体依存性エンドサイトーシスの傾向があるリガンドと結合させてそれを投与することによるもの（Ｗｕ＆Ｗｕ、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６２：４４２９〜４４３２頁を参照）は、対象の受容体を特異的に発現する細胞型を標的にするために用いることができる。
【０１３４】
他の実施形態では、エンドソームを崩壊させるように設計された融合誘導ウイルスのペプチドを含むことにより、ＦＬＪ２０５８４核酸が以降のリソソーム分解を避けることを可能にするＦＬＪ２０５８４核酸を含む核酸リガンド化合物を産生することができる。ＦＬＪ２０５８４核酸は、国際公開９２／０６１８０、国際公開９３／１４１８８及び国際公開９３／２０２２１で記載されているような特定の受容体を標的にすることによって、ｉｎ ｖｉｖｏで細胞特異的なエンドサイトーシス及び発現のための標的にすることができる。或いは、核酸を細胞内に導入して、相同組換えによる発現のために宿主細胞ゲノム内に組み込むことができる（Ｚｉｊｌｓｔｒａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：４３５〜４２８頁を参照）。
【０１３５】
ｅｘ ｖｉｖｏ遺伝子治療では、遺伝子は組織培養を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞へ移され、これらの細胞は様々な方法、例えば皮下注入、植皮片への細胞の適用及び造血幹細胞若しくは前駆細胞などの組換え血球の静脈注射などによって患者に送達される。
【０１３６】
遺伝子治療の目的のためにＦＬＪ２０５８４核酸を導入することができる細胞としては、例えば、上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋細胞、肝細胞及び血球がある。利用することができる血球としては、例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球、造血性細胞又は前駆細胞などがある。
【０１３７】
一態様では、前記医薬組成物は、適当な宿主でＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又はそのキメラタンパク質を発現する発現ベクターの一部である、ＦＬＪ２０５８４核酸を含む。詳細には、そのような核酸は作動可能的にポリペプチドコード領域に結合されたプロモーターを有し、前記プロモーターは誘導可能であるか構成的である（また、任意選択に組織特異的である）。他の特定の実施形態では、コード配列及び他のいかなる所望の配列であれそこにゲノム中の所望の部位で相同組換えを促進する領域が隣接する核酸分子が利用され、このように前記核酸の染色体内の発現が可能になる（Ｋｏｌｌｅｒ＆Ｓｍｉｔｈｉｅｓ、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２〜８９３５頁；Ｚｉｊｌｓｔｒａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５〜４３８頁）。
【０１３８】
ＦＬＪ２０５８４核酸は標準的なクローニング及びスクリーニング技術を用い、発現配列標識（ＥＳＴ）の分析を利用してヒト細胞のｍＲＮＡに由来するｃＤＮＡライブラリから得ることができる（Ａｄａｍｓ，Ｍ．ら、１９９１、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５２：１６５１〜１６５６頁；Ａｄａｍｓ，Ｍ．ら、１９９２、Ｎａｔｕｒｅ ３５５：６３２〜６３４頁；Ａｄａｍｓ，Ｍ．ら、１９９５、Ｎａｔｕｒｅ、３７７：付録：３〜１７４頁）。ＦＬＪ２０５８４核酸はゲノムＤＮＡライブラリなどの天然供給源から得ることもでき、又は市販の既知技術を利用して合成することもできる。上述のＦＬＪ２０５８４ポリペプチドのコード配列を含んでいるＦＬＪ２０５８４核酸は、前記ポリペプチドの組換え産生のために用いることができる。ＦＬＪ２０５８４核酸は、成熟ポリペプチドのコード配列を単独で、又は成熟ポリペプチドのコード配列を他のコード配列、例えばリーダー配列若しくは分泌配列をコードするもの、プレタンパク、プロタンパク若しくはプレプロタンパクの配列、切断可能な配列又は親和性標識若しくはポリペプチド産生の間の安定性を付与する更なる配列などの他の融合ペプチド部分と読み枠内で含むことができる。好ましい親和性標識としては、複ヒスチジン残基（例えば、Ｇｅｎｔｚら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１〜８２４頁を参照）、ＦＬＡＧ標識、ＨＡ標識又はｍｙｃ標識がある。ＦＬＪ２０５８４核酸は、５’及び３’の非コード配列、例えば転写され、翻訳されない配列、スプライシング及びポリアデニル化シグナル、リボソーム結合部位並びにｍＲＮＡを安定させる配列を含むこともできる。
【０１３９】
上のＦＬＪ２０５８４ポリペプチド誘導体は、１つ又は複数のアミノ酸置換、付加又は欠失がコードされたタンパク質に導入されるように、１つ又は複数のヌクレオチド置換、付加又は欠失をＦＬＪ２０５８４核酸のヌクレオチド配列に導入することによって生成することができる。例えば部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲ媒介による突然変異誘発を含む変異を導入するために、当業者に既知の標準的な技術を用いることができる。好ましくは、保存的なアミノ酸置換は、１つ又は複数の予測される非必須アミノ酸残基で形成される。
【０１４０】
ヒト以外の種からの相同体及び相同分子種を含むＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードするＦＬＪ２０５８４核酸は、上の（ｄ）から（ｈ）で記載されているＦＬＪ２０５８４核酸の配列を有する標識プローブを用いてストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で適当なライブラリをスクリーニングするステップと、前記核酸配列を含む完全長ｃＤＮＡ及びゲノムクローンを単離するステップとを含む方法によって得ることができる。このようなハイブリダイゼーション技術は当技術分野において既知である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の１例は、企図するハイブリダイゼーションが約０．９Ｍの塩溶液を用いて約３５℃から約６５℃の温度で実施される場合である。しかし、当業者は、プローブ長、塩基組成、存在するイオンの型、その他の変数を考慮するために適宜、そのような条件を変更することができる。高度選択性のためには、低塩又は高温条件のような比較的ストリンジェントな条件を用いて二重鎖を形成する。非常にストリンジェントな条件としては、６５℃での０．５Ｍ ＮａＨＰＯ４、７％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、１ｍＭ ＥＤＴＡ中でのフィルター結合ＤＮＡへのハイブリダイゼーション、及び６８℃での０．１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中での洗浄が挙げられる（Ａｕｓｕｂｅｌ Ｆ．Ｍ．ら編、１９８９、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．Ｉ、Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．、及びＪｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ｐ．２．１０．３）。一部の適用では、二本鎖形成のためにより低いストリンジェント条件が要求される。適度にストリンジェントな条件としては、４２℃での０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中での洗浄が挙げられる（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９８９、前掲）。ハイブリッド二重鎖を不安定にするために、ホルムアミドの添加量を増加させることによってハイブリダイゼーション条件をより強くストリンジェントにすることもできる。このように、個々のハイブリダイゼーション条件は容易に操作することができ、通常、適宜選択される。一般に、５０％ホルムアミドの存在下での都合の良いハイブリダイゼーション温度は、本明細書で定義されているポリペプチドをコードする遺伝子断片と９５〜１００％同一であるプローブでは４２℃、９０〜９５％の同一性では３７℃、７０〜９０％の同一性では３２℃である。
【０１４１】
多くの場合、ポリペプチドをコードする領域はｃＤＮＡの５’末端で短く切断される点で、単離されたｃＤＮＡ配列は不完全なものとなることは当業者ならば理解しよう。これは、進行性（重合反応の間テンプレートと結合し続ける酵素の能力の測度）が本質的に低い酵素である逆転写酵素が、最初の鎖ｃＤＮＡ合成の間のｍＲＮＡテンプレートのＤＮＡコピーを完成できない結果である。
【０１４２】
完全長ｃＤＮＡを得る方法又は短いｃＤＮＡを伸長する方法は、例えばＲＡＣＥ（Ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ；例えばＦｒｏｈｍａｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：８９９８〜９００２頁）など当技術分野で既知である。この技術の最近の修正、例えばＭａｒａｔｈｏｎ（商標）技術（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．）は、より長いｃＤＮＡの探索をかなり単純化した。この技術では、選択された組織から抽出されるｍＲＮＡから調製されるｃＤＮＡを用い、その後各末端へアダプター配列をライゲーションする。次に、遺伝子特異的及びアダプター特異的オリゴヌクレオチドプライマーの組合せを用いて、ｃＤＮＡの欠落している５’末端を増幅するためにＰＣＲが実行される。次に、増幅生成物とアニールするように設計されているネステッドプライマー、一般的にアダプター配列の３’を更にアニールするアダプター特異的プライマー及び既知の遺伝子配列の５’を更にアニールする遺伝子特異的プライマーを用いてＰＣＲ反応を繰り返す。この反応の生成物は次にＤＮＡ塩基配列決定で分析することができ、完全長ｃＤＮＡは、生成物を既存のｃＤＮＡに直接結合させて完全な配列を得るか、又は５’プライマーの設計のための新しい配列情報を用いて別個の完全長ＰＣＲを実施することにより構築することができる。
【０１４３】
本発明の他の態様は、癌の治療及び／又は予防で役に立つワクチン組成物に関する。先に述べたＦＬＪ２０５８４ポリペプチド又は核酸は、癌の治療及び／又は予防のためのワクチンの産生で用いることができる。そのような物質は抗原性且つ／又は免疫原性であってよい。抗原性物質としては、抗体を生成するために用いることができるか、対象で実際に抗体反応を誘導することができるタンパク質又は核酸がある。免疫原性物質としては、対象で免疫反応を導き出すことができるタンパク質又は核酸がある。このように、後者の場合、前記タンパク質又は核酸は抗体反応を起こすだけではなく、非抗体ベースの免疫反応、すなわち細胞性又は液性の反応をも起こすことができる。前記ポリペプチドの抗原性又は免疫原性を担う抗原性又は免疫原性のポリペプチドの領域、すなわち１つ又は複数のエピトープを同定することが可能なことは、当技術分野で既知である。ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの抗原性指数（領域が抗原性である確率の測度）を予測するために、当業者に既知のアミノ酸及びペプチドの特性を利用することができる。例えば、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ、Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｔｚ分析、又は「Ｐｅｐｔｉｄｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ」プログラム（Ｊａｍｅｓｏｎ ａｎｄ Ｗｏｌｆ、１９８８、ＣＡＢＩＯＳ、４（１）：１８１）、及び「Ｔｈｒｅａｄｉｎｇ」（Ａｌｔｕｖｉａ Ｙ．ら、１９９５、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４９：２４４）と称される技術を用いることができる。このように、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは１つ又は複数のそのようなエピトープを含んでもよいし、又は、それらの抗原性／免疫原性を保持するようにそのような領域と十分に類似していてもよい。
【０１４４】
特定の実施形態では、ワクチンに用いられる医薬組成物の活性物質としてのＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは短いペプチドであり、好ましくは長さが５〜２０アミノ酸、より好ましくは７〜１５アミノ酸、最も好ましくは８〜１０アミノ酸である。そのようなペプチドは、ワクチンの効力を強化するために修飾されたエピトープを含むことができる。そのような修飾は、（ａ）ペプチドの主要組織適合遺伝子複合体分子との親和性を増加させ、（ｂ）Ｔ細胞受容体の誘発を増加させ、又は（ｃ）血清ペプチダーゼによるペプチドのタンパク質分解を阻止する役目を果たすことができる。
【０１４５】
ポリペプチド又は核酸は胃内で破壊される可能性があるので、前記ワクチン組成物は好ましくは非経口的に（例えば皮下、筋肉内、静脈内又は皮内の注射により）投与されるか、或いは、ＦＬＪ２０５８４核酸配列を含んでいる細菌又はウイルスのベクター、例えばアデノウイルスベクターを用いて細胞のトランスフェクション又は感染により投与される。
【０１４６】
したがって、他の実施形態において、本発明は、
ａ）対象で免疫反応を誘導するためのそのようなワクチンの使用、及び
ｂ）対象の癌の治療及び／若しくは予防のための、又は癌に対して対象にワクチン接種をするための、対象にＦＬＪ２０５８４のポリペプチド又は核酸の有効量を好ましくはワクチンとして投与するステップを含む方法を提供する。
【０１４７】
本発明の各実施形態の好ましい特性は、他の実施形態のそれぞれに準用される。それには限定されないが本明細書で引用されている特許及び特許出願を含む全ての刊行物は、個々の刊行物が完全に示されているかのように本明細書で参照により組み込まれていることを特に、また個々に示されるように、本明細書で参照により組み込まれている。
【０１４８】
本発明は次に以下の実施例に関して記載されるが、それらは例示だけが目的であり、いかなる形であれ本発明の範囲を限定するものとして解釈されてはならない。
【実施例】
【０１４９】
（実施例１）
腫瘍由来の細胞系からのＦＬＪ２０５８４タンパク質の単離
結腸直腸腫瘍由来の細胞系の膜のヘパリン結合分画内及び胃腫瘍由来の細胞系の膜内のタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離して分析した。
【０１５０】
１ａ−細胞培養
結直腸癌系の膜のプールを、以下のヒト結腸腺癌細胞系から調製した：ＨＣＴ−１５細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−２２５）；ＨＴ−２９細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ−３８）；ＬｏＶｏ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＣＬ−２２９）；ＬＳ１７４Ｔ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＬ−１８８）；ＳＷ６２０（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＣＬ−２２７）；及びＳＷ９４８（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＣＬ−２３７）。
【０１５１】
ＨＴ２９細胞は、ＭｃＣｏｙ’ｓ＋２ｍＭ Ｇｌｕｔ＋１０％ＦＢＳで培養した。ＬＳ１７４Ｔ細胞は、ＭＥＭ＋２ｍＭグルタミン＋１０％ＦＢＳ＋１％ＮＥＡＡで培養した。ＨＣＴ−１５細胞は、ＲＰＭＩ＋２０％ＦＢＳで培養した。ＬｏＶｏ細胞は、Ｈａｍｓ Ｆ１２＋１０％ＦＢＳで培養した。ＳＷ６２０及びＳＷ９４８細胞は、Ｌ−１５＋１０％ＦＢＳで培養した。
【０１５２】
胃癌系の膜のプールは、以下のヒト細胞系から調製した：ＡＧＳ胃腺癌細胞（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＲＬ−１７３９）；ＫＡＴＯ−ＩＩＩ胃癌細胞（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＨＴＢ−１０３）；ＮＣＩ−Ｎ８７胃腺癌細胞（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＲＬ−５８２２）；及びＮＣＩ−ＳＮＵ−１胃癌細胞（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＲＬ−５９７１）。ＡＧＳ細胞は、Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２＋２ｍＭ Ｇｌｕｔ＋１０％ＦＢＳで培養した。ＮＣＩ−Ｎ８７細胞は、ＲＰＭＩ＋２ｍＭ Ｇｌｕｔ＋１０％ＦＢＳで培養した。ＮＣＩ−ＳＮＵ−１細胞は、ＲＰＭＩ＋２ｍＭ Ｇｌｕｔ＋１０％ＦＢＳで培養した。ＫＡＴＯ−ＩＩＩ細胞は、ＲＰＭＩ＋２ｍＭ Ｇｌｕｔ＋２０％ＦＢＳで培養した。
【０１５３】
全ての細胞は、空気９５％及び二酸化炭素５％の加湿環境で、３７℃で増殖させた。
【０１５４】
１ｂ−細胞分画及び原形質膜生成
精製された膜標品を細胞系から単離した。付着細胞（２×１０８）をＰＢＳで３回洗浄して、プラスチック細胞リフターを用いて削り取った。細胞は４℃で５分間、１０００×ｇで遠心分離して、細胞ペレットはホモジナイゼーション緩衝液（２５０ｍＭショ糖、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭバナジン酸塩及び０．０２％アジ化物、プロテアーゼ阻害剤）で再懸濁させた。約９５％の細胞が破壊されるまで、ボールベアリングホモジナイザー（８．００２ｍｍボール、ＨＧＭ Ｌａｂ装置）を用いて細胞を分画した。膜は、Ｐａｓｑｕａｌｉら（Ｐａｓｑｕａｌｉ Ｃ．ら、１９９９ Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ７２２：８９〜１０２頁）が記載している方法を用いて分画した。分画された細胞は４℃で１０分間、３０００×ｇで遠心分離し、ポスト核の上清は６０％ショ糖クッション上へ重層して、１０００００×ｇで４５分間遠心分離した。膜はパスツールピペットを用いて収集し、予め形成させた１５〜６０％ショ糖勾配上へ重層して、１０００００×ｇで１７時間遠心分離した。分画されたショ糖勾配からのタンパク質を４〜２０％の１Ｄゲル（Ｎｏｖｅｘ）にかけ、ウェスタンブロット法で分析した。アルカリホスファターゼ及びトランスフェリン免疫反応性を含んでいるが酸化還元酵素ＩＩ及びカルネキシン免疫反応性を含まない分画をプールして、原形質膜分画とした。
【０１５５】
１ｃ−１Ｄ−ゲル分析のための原形質膜分画の調製
トランスフェリン免疫反応性を有していたが酸化還元酵素ＩＩ又はカルネキシン免疫反応性を有していなかった原形質膜分画を特定してプールした。原形質膜分画を表すこのプールは少なくとも４回、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭバナジン酸塩、０．０２％アジ化物で希釈し、ＳＷ４０又はＳＷ６０チューブに加えて１０００００×ｇで４５分間、遅い加減速により遠心分離した。上清は結果として生じる膜ペレットから除去し、ペレットはＰＢＳ−ＣＭで３回洗浄した。
【０１５６】
結腸癌腫細胞系からの再懸濁された膜ペレット（２５ｍＭトリス−ＨＣｌ ｐＨ７．５）をプールして、ＦＰＬＣ系を用いて５ｍｌヘパリンセファロースＨｉ−Ｔｒａｐカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）上を通過させた。ロードされたカラムは１０カラム容の洗浄緩衝液（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭトリス−ＨＣｌ ｐＨ７．５）で洗浄し、次に２５ｍＭトリス−ＨＣｌ ｐＨ７．５中の５ｍｌの１．０Ｍ ＮａＣｌで溶出した。溶出したタンパク質を濃縮し、緩衝液は３０ｋＤａカットオフフィルター（Ｖｉｖａｓｃｉｅｎｃｅ）を通した遠心分離により交換した。濃縮したタンパク質は、２％ＳＤＳ、６３ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ７．４にした。タンパク質アッセイを実施し、その後メルカプトエタノール（最終２％）、グリセリン（１０％）及びブロムフェノールブルー（最終０．００２５％）を加えた。１Ｄ−ゲルロードのために、１マイクログラム／マイクロリットルの最終タンパク質濃度を用いた。
【０１５７】
胃癌細胞系膜ペレットを、６３ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ７．４中の２％ＳＤＳで可溶化した。タンパク質アッセイを実施し、その後メルカプトエタノール（最終２％）、グリセリン（１０％）及びブロムフェノールブルー（最終０．００２５％）を加えた。１Ｄ−ゲルロードのために、１マイクログラム／マイクロリットルの最終タンパク質濃度を用いた。
【０１５８】
１ｄ−１Ｄ−ゲル技術
タンパク質又は膜のペレットを１Ｄ−試料緩衝液（約１ｍｇ／ｍｌ）で可溶化し、混合物は９５℃まで５分間加熱した。
【０１５９】
試料は、Ｂｉｏ−Ｒａｄ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｈｅｍｅｌ Ｈｅｍｐｓｔｅａｄ、英国）から購入したプレキャスト８〜１６％勾配ゲルによる１Ｄ−ゲル電気泳動法を用いて分離した。デタージェント抽出物から得られたタンパク質混合物の３０〜５０マイクログラムを含んでいる試料を、マイクロピペットを用いて濃縮用ゲルウェルに加えた。イメージングの後の分離ゲルの内挿による校正のために、分子量マーカー（１０、１５、２５、３７、５０、７５、１００、１５０及び２５０ｋＤａ）を含んでいるウェルを含めた。３０ｍＡの電流を約５時間、又はブロムフェノールブルーマーカー色素がゲルの底に届くまでゲルへ流すことにより、タンパク質の分離を実施した。
【０１６０】
電気泳動の後、ゲルプレートをこじ開け、ゲルを定着液（１０％酢酸、４０％エタノール、５０％水）のトレイに入れて一晩振盪した。ゲルは、次にプライマー溶液（逆浸透水中の７．５％酢酸、０．０５％ＳＤＳ）中で振盪し、その後振盪しながら蛍光染料（７．５％酢酸中の０．０６％ＯＧＳ色素）と３時間インキュベーションすることによって、３０分間プライミングした。好ましい蛍光染料は、米国特許第６３３５４４６号で開示されている。Ｓｙｐｒｏ Ｒｅｄ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．、オレゴン州、ユージン）は、この目的に適当な代替色素である。
【０１６１】
染色されたゲルのデジタル画像は、Ｓｔｏｒｍ Ｓｃａｎｎｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ Ｉｎｃ．、米国）を使用して青色蛍光モードでスキャンすることによって得た。取得した画像は、ゲル内タンパク質分解のために切り取るゲルの領域を決定するために用いた。
【０１６２】
１ｅ−選択されたタンパク質の回収及び分析
ゲルの各垂直レーンを、ステンレス鋼メスの刃を用いて切り取った。タンパク質は、トリプシン分解ペプチドを生成するためにトリプシン（修飾トリプシン、Ｐｒｏｍｅｇａ、米国ウィスコンシン州）によるゲル内消化を用いて処理した。回収した試料は、２つに分けた。ＭＡＬＤＩ分析の前に、Ｃ１８ Ｚｉｐ Ｔｉｐｓ（商標）（ミリポア、マサチューセッツ州ベッドフォード）を用いて試料を脱塩して濃縮した。タンデム型質量分析のための試料は、Ｃ１８ ＳＰＥ材料を取り込むナノＬＣ系（ＬＣ Ｐａｃｋｉｎｇｓ、オランダ、アムステルダム）を用いて精製した。回収したペプチドプールは、脱離のための３３７ｎｍ波長レーザー及びリフレクトロン分析モードを用いて、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析（Ｖｏｙａｇｅｒ ＳＴＲ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、マサチューセッツ州、フレイミンガム）によって分析した。プールは、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ（Ｑ−ＴＯＦ）質量分析計（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ、Ａｌｔｒｉｎｃｈａｍ、英国）を用いてナノ−ＬＣタンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）によっても分析した。部分アミノ酸配列決定及び胃及び結腸の癌細胞膜タンパクの識別のために、トリプシンペプチドの未解釈のタンデム質量スペクトルを、ＳＥＱＵＥＳＴサーチプログラム（Ｅｎｇら、１９９４、Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．５：９７６〜９８９頁）バージョンｖ．Ｃ．１を用いてｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／でアクセス可能なＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）によって維持されている非冗長データベース内のタンパク質エントリーで構築されるパブリックドメインタンパク質データベースから検索した。データベース識別のための基準には以下が含まれた：トリプシンの切断特異性、データベースから返されたペプチド内のａ、ｂ及びｙイオンのセット、並びにカルバミドメチル化を説明する全てのＣｙｓ残基の質量増加の検出。ＳＥＱＵＥＳＴプログラムを用いたスペクトル−スペクトル相関を通してのタンパク質の識別に続いて、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルで検出された質量を、同定されたタンパク質内のトリプシン分解ペプチドに割り当てた。ＳＥＱＵＥＳＴプログラムを用いたトリプシン分解ペプチドの未解釈のＭＳ／ＭＳスペクトルでの検索を通してアミノ酸配列が全く同定されなかった場合は、当技術分野で既知の方法を用いてペプチドのタンデム質量スペクトルを手動で解釈した。（ペプチドイオンの低エネルギーフラグメンテーション質量スペクトルの解釈の場合、Ｇａｓｋｅｌｌら、１９９２、Ｒａｐｉｄ Ｃｏｍｍｕｎ．Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．６：６５８〜６６２頁を参照）。国際公開０２／２１１３９で記載されている方法も、質量スペクトルを解釈するために用いた。
【０１６３】
タンデムスペクトル（図１で太字体及び下線付きで示す）は、両細胞系プールでＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＡＡ９１２７６．１と一致することがわかった。
【０１６４】
（実施例２）
定量的ＲＴ−ＰＣＲ（Ｔａｑｍａｎ）分析を用いた正常組織分布及びＦＬＪ２０５８４の疾患組織アップレギュレーション
組織試料は、Ａｒｄａｉｓ Ｃｏｒｐ．（マサチューセッツ州レキシントン）から得た。腫瘍組織及びマッチさせた対照におけるＦＬＪ２０５８４発現を量的に測定するために、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを用いた。ＰＣＲのために使われたプライマーは以下の通りである。
センス、５’−ｃａｔｔｃｃｃｃａｔｇａａｃａｇａａｇｃｔｃ−３’、（配列番号３）
アンチセンス、５’−ａｃｔｇｇａｇｃｇｃｔｔｇａｇｇｔａｇａａｇ−３’（配列番号４）
【０１６５】
５ｎｇのｃＤＮＡ、ＳＹＢＲグリーン配列検出試薬（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びセンス及びアンチセンスプライマーを含んでいる反応液を、ＡＢＩ７７００配列検出システム（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で分析した。ＰＣＲ条件は、５０℃で２分間を１サイクル、９５℃で１０分間を１サイクル、及び９５℃で１５秒、６５℃で１分間を４０サイクルであった。ＰＣＲ生成物の蓄積をＳＹＢＲグリーン蛍光の増加としてリアルタイムで測定し、データはＳｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒプログラムｖ１．６．３（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて分析した。最初のテンプレートコピー数を蛍光及び増幅サイクルと関連づける標準曲線は、増幅されたＰＣＲ生成物をテンプレートとして用いて生成され、それらは各試料でのＦＬＪ２０５８４コピー数を計算するために用いられた。
【０１６６】
ＦＬＪ２０５８４の比較的低い発現量は正常組織（図３）で見られ、最高レベルは脳及び精巣で見られた。対照的に、ＦＬＪ２０５８４発現量は正常卵巣と比較して卵巣癌試料で大きく増加し、また、発現量増加は全ての癌試料で見られた（図４）。ＦＬＪ２０５８４発現は、正常肺組織と比較して肺腫瘍試料でも増加した（図５）。これらのデータは、ＦＬＪ２０５８４が癌の診断マーカーであり、また、癌の治療的介入のための標的であることを示す。
【０１６７】
（実施例３）
ＦＬＪ２０５８４のクローニング
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８及びＤＭＳ１１４ｃＤＮＡの混合（これらの細胞系から単離されたＲＮＡから調製した）から増幅した。これらの配列を増幅するために用いたプライマーは以下である：センス５’ａｇａｃｃａｃｇｔｃａａｃｃａｃａｇａｇ３’（配列番号５）及びアンチセンス５’ａｇａｇｃａｔｇｇａａｇａｇｃｃａｇｇ３’（配列番号６）。増幅反応は、下記熱サイクルパラメータでＰｆｕポリメラーゼ（ストラタジーン）を用いて実施した：９４℃で２分間を１サイクル、９４℃で３０秒間、５０℃で３０秒間、７２℃で３０秒間を４０サイクル、及び７２℃で７分間を１サイクル。適当な大きさのＰＣＲ生成物をゲル精製して平滑末端のクローニングベクター（ｐＣＲ４Ｂｌｕｎｔ−ＴＯＰＯ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、ＤＮＡ配列を検査した。
【０１６８】
（実施例４）
ＦＬＪ２０５８４の細胞表面局在化
ＦＬＪ２０５８４−ＡＦＰ融合をコードする発現プラスミドを一過性にトランスフェクトしたＭｉａＰａｃａ−２細胞の免疫細胞化学的分析を用いて、ＦＬＪ２０５８４タンパク質の膜トポロジーを測定した。発現プラスミドは、Ｐｆｕ ＤＮＡポリメラーゼ（ＰｆｕＴｕｒｂｏ Ｈｏｔｓｔａｒｔ ＤＮＡポリメラーゼ、ストラタジーン）及び以下のプライマーを用いてプラスミドテンプレート（ｐＣＲ４Ｂｌｕｎｔ−ＴＯＰＯ中のＦＬＪ２０５８４、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からＦＬＪ２０５８４ ＯＲＦを増幅することによって構築した：順方向５’ｃｃａｔｇｇｔａｃｃｇｃｃａｃｃａｔｇｇｃａａａｔｔｔｃａａｇｇｇｃｃａｃｇ３’（配列番号７）及び逆方向５’ｃｃａｔａａｇｃｔｔｇｔｔｃｃｔｃａｔｃｔｇａｇｃｃａｃｔｃａａｇ３’（配列番号８）。Ｎ末端でＦＬＪ２０５８４からなる融合タンパク質を発現しＣ末端でＡＦＰを発現するために、ＰＣＲ生成物をＢｓｔＥＩＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素で消化して、同じ制限酵素で消化したｐＱＢＩ２５／５０−ｆｎ１ベクター（Ｑｕａｎｔｕｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）にクローニングした。
【０１６９】
ＭｉａＰａＣａ−２細胞を８穴スライドに播種し、３７℃の９５％空気及び５％ＣＯ２の加湿環境で２４時間維持し、次にＧｅｎｅ Ｊｕｉｃｅトランスフェクション試薬（Ｍｅｒｃｋ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてＦＬＪ２０５８４発現プラスミドでトランスフェクトした。トランスフェクション細胞を一晩培養し、ＰＢＳで洗浄し、４％パラホルムアルデヒドで固定して５％ロバ血清／ＰＢＳでブロックした後、一次抗体として抗ＡＦＰ抗体（３Ｅ６、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて免疫細胞化学的分析を実施した。細胞内エピトープを検出するために、固定後及び一次抗体の添加の前に細胞を０．１％サポニンで可透過性にした。細胞を一次抗体とインキュベートし、又は一次抗体との室温で１時間のインキュベーションの対照としてマウスＩｇＧとインキュベートし、５％ロバ血清／ＰＢＳで洗浄し、更にビオチン標識二次抗体（Ｂｉｏｔｉｎ−ＳＰ Ａｆｆｉｎｉｐｕｒｅ Ｄｏｎｋｅｙ抗マウス、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）と室温で１時間インキュベートした。細胞を次に５％ロバ血清／ＰＢＳで洗浄し、室温で３０分間ＥｘｔｒＡｖｉｄｉｎ−Ｃｙ３（Ｓｉｇｍａ）とインキュベートして、次に蛍光顕微鏡検査のために処理した。
【０１７０】
ＦＬＪ２０５８４をコードする発現プラスミドをトランスフェクトしたＭｉａＰａＣａ−２細胞で、特異的な原形質膜染色が見られた。トランスフェクトしなかった細胞及びｐＱＢＩ２５／５０−ｆｎ１ベクターをトランスフェクトした対照細胞では、染色は観測されなかった。
【図面の簡単な説明】
【０１７１】
【図１】ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１）を示す図である。
【図２】ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号２）を示す図である。
【図３】ＦＬＪ２０５８４ｍＲＮＡの正常組織分布を示す図である。ｍＲＮＡのレベルはリアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって定量され、複製数ｎｇ−１ ｃＤＮＡとして表されている。
【図４】正常組織（オープンバー）対卵巣癌組織（黒ベタのバー）及び卵巣癌由来の細胞系（斜線入りのバー）、並びに骨肉腫組織（点入りのバー）及び骨肉腫由来の細胞系（水平線入りのバー）におけるＦＬＪ２０５８４ｍＲＮＡの分布を示す図である。
【図５】正常組織（オープンバー）対肺癌組織（黒ベタのバー）及び肺癌由来の細胞系（斜線入りのバー）におけるＦＬＪ２０５８４ｍＲＮＡの分布を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の治療及び／又は予防のための医薬品の製造のための、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用するかその発現又は活性を調整する物質の使用。
【請求項２】
前記物質は抗体、その機能的に活性な断片、誘導体又は類似体である請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記抗体が、モノクローナル、ポリクローナル、キメラ、ヒト化、又は二重特異性であるか、或いは治療的部分、検出可能な標識、第二抗体若しくはその断片、エフェクター若しくはレポーター分子、細胞傷害剤又はサイトカインとコンジュゲートされている、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
癌の治療及び／又は予防のための医薬品の製造のための、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの使用。
【請求項５】
前記医薬品はワクチンである請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかそれからなるか、
（ｂ）ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド活性を保持する、配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ又は複数のアミノ酸置換、修飾、欠失又は挿入を有する誘導体であるか、或いは
（ｃ）長さが少なくとも１０アミノ酸であり且つＦＬＪ２０５８４の活性を保持する前記（ａ）又は（ｂ）の断片である、請求項１から５までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用するかその発現又は活性を調整する物質の治療的有効量を投与することを含む癌の治療及び／又は予防方法。
【請求項８】
前記物質は、抗体、その機能的に活性な断片、誘導体又は類似体である請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体が、モノクローナル、ポリクローナル、キメラ、ヒト化、又は二重特異性であるか、或いは治療的部分、検出可能な標識、第二抗体若しくはその断片、エフェクター若しくはレポーター分子、細胞傷害剤又はサイトカインとコンジュゲートされている、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを含む組成物の治療的有効量を投与することを含む癌の治療及び／又は予防方法。
【請求項１１】
前記組成物はワクチンである請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかそれからなるか、又は
（ｂ）ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド活性を保持する、配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ又は複数のアミノ酸置換、修飾、欠失又は挿入を有する誘導体である請求項７から１１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する抗癌剤をスクリーニングする方法であって、
（ａ）前記ポリペプチドを候補物質と接触させること、及び
（ｂ）前記候補物質が前記ポリペプチドと相互作用するか否かを測定することを含む方法。
【請求項１４】
前記候補物質及びＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの間の相互作用の判定が、前記候補物質及び前記ポリペプチドの結合を定量的に検出することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現又は活性を調整する抗癌剤をスクリーニングする方法であって、
（ｉ）候補物質の存在下での前記ポリペプチドの発現又は活性を、前記候補物質の非存在下又は対照物質の存在下での前記ポリペプチドの発現又は活性と比較すること、及び
（ｉｉ）前記候補物質が前記ポリペプチドの発現又は活性の変化を起こすか否かを測定することを含む方法。
【請求項１６】
前記ポリペプチドの発現又は活性は所定の基準範囲（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｒａｎｇｅ）と比較される請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
（ｉｉ）の部分は、更なる試験のために又は抗癌剤としての治療的若しくは予防的使用のために、前記ポリペプチドと相互作用するか又はその発現又は活性を調整する物質を選択することを更に含む、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ポリペプチドと相互作用するか又はその発現又は活性の変化を引き起こす、請求項１３から１７までのいずれかの方法によって同定される物質。
【請求項１９】
対象の癌のスクリーニング及び／又は診断若しくは予後診断のための、且つ／或いは癌療法の効果をモニターするための、前記対象から得られる生体試料においてＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現を検出及び／又は定量するステップを含む方法。
【請求項２０】
前記ポリペプチドの発現は既定の基準範囲又は対照と比較される請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記検出するステップは、
（ａ）試料をＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに特異的である捕捉試薬と接触させること、及び
（ｂ）前記試料において前記捕捉試薬及び前記ポリペプチドの間で結合が起こったかどうかを検出することを含む、請求項１９又は２０に記載の方法。
【請求項２２】
ステップ（ｂ）は、直接又は間接標識された検出試薬を用いて捕捉されたポリペプチドを検出することを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記捕捉試薬は固相上で固定されている請求項２１又は２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ポリペプチドは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと特異的に結合する抗体を用いて検出及び／又は定量される、請求項１３から１７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体は、検出可能な標識又は第二抗体若しくはその断片とコンジュゲートされる請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに特異的な捕捉試薬、試薬及び取扱説明書を含んでいる診断キット。
【請求項２７】
前記癌腫は卵巣癌又は肺癌である請求項１から６までのいずれか一項に記載の使用、或いは請求項７から１７まで又は１９から２５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１】
癌の治療及び／又は予防のための医薬品の製造のための、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用するかその発現又は活性を調整する物質の使用。
【請求項２】
前記物質は抗体、その機能的に活性な断片、誘導体又は類似体である請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記抗体が、モノクローナル、ポリクローナル、キメラ、ヒト化、又は二重特異性であるか、或いは治療的部分、検出可能な標識、第二抗体若しくはその断片、エフェクター若しくはレポーター分子、細胞傷害剤又はサイトカインとコンジュゲートされている、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
癌の治療及び／又は予防のための医薬品の製造のための、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの使用。
【請求項５】
前記医薬品はワクチンである請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかそれからなるか、
（ｂ）ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド活性を保持する、配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ又は複数のアミノ酸置換、修飾、欠失又は挿入を有する誘導体であるか、或いは
（ｃ）長さが少なくとも１０アミノ酸であり且つＦＬＪ２０５８４の活性を保持する前記（ａ）又は（ｂ）の断片である、請求項１から５までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用するかその発現又は活性を調整する物質の治療的有効量を投与することを含む癌の治療及び／又は予防方法。
【請求項８】
前記物質は、抗体、その機能的に活性な断片、誘導体又は類似体である請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体が、モノクローナル、ポリクローナル、キメラ、ヒト化、又は二重特異性であるか、或いは治療的部分、検出可能な標識、第二抗体若しくはその断片、エフェクター若しくはレポーター分子、細胞傷害剤又はサイトカインとコンジュゲートされている、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドを含む組成物の治療的有効量を投与することを含む癌の治療及び／又は予防方法。
【請求項１１】
前記組成物はワクチンである請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかそれからなるか、又は
（ｂ）ＦＬＪ２０５８４ポリペプチド活性を保持する、配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ又は複数のアミノ酸置換、修飾、欠失又は挿入を有する誘導体である請求項７から１１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと相互作用する抗癌剤をスクリーニングする方法であって、
（ａ）前記ポリペプチドを候補物質と接触させること、及び
（ｂ）前記候補物質が前記ポリペプチドと相互作用するか否かを測定することを含む方法。
【請求項１４】
前記候補物質及びＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの間の相互作用の判定が、前記候補物質及び前記ポリペプチドの結合を定量的に検出することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現又は活性を調整する抗癌剤をスクリーニングする方法であって、
（ｉ）候補物質の存在下での前記ポリペプチドの発現又は活性を、前記候補物質の非存在下又は対照物質の存在下での前記ポリペプチドの発現又は活性と比較すること、及び
（ｉｉ）前記候補物質が前記ポリペプチドの発現又は活性の変化を起こすか否かを測定することを含む方法。
【請求項１６】
前記ポリペプチドの発現又は活性は所定の基準範囲（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｒａｎｇｅ）と比較される請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
（ｉｉ）の部分は、更なる試験のために又は抗癌剤としての治療的若しくは予防的使用のために、前記ポリペプチドと相互作用するか又はその発現又は活性を調整する物質を選択することを更に含む、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ポリペプチドと相互作用するか又はその発現又は活性の変化を引き起こす、請求項１３から１７までのいずれかの方法によって同定される物質。
【請求項１９】
対象の癌のスクリーニング及び／又は診断若しくは予後診断のための、且つ／或いは癌療法の効果をモニターするための、前記対象から得られる生体試料においてＦＬＪ２０５８４ポリペプチドの発現を検出及び／又は定量するステップを含む方法。
【請求項２０】
前記ポリペプチドの発現は既定の基準範囲又は対照と比較される請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記検出するステップは、
（ａ）試料をＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに特異的である捕捉試薬と接触させること、及び
（ｂ）前記試料において前記捕捉試薬及び前記ポリペプチドの間で結合が起こったかどうかを検出することを含む、請求項１９又は２０に記載の方法。
【請求項２２】
ステップ（ｂ）は、直接又は間接標識された検出試薬を用いて捕捉されたポリペプチドを検出することを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記捕捉試薬は固相上で固定されている請求項２１又は２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ポリペプチドは、ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドと特異的に結合する抗体を用いて検出及び／又は定量される、請求項１３から１７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体は、検出可能な標識又は第二抗体若しくはその断片とコンジュゲートされる請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ＦＬＪ２０５８４ポリペプチドに特異的な捕捉試薬、試薬及び取扱説明書を含んでいる診断キット。
【請求項２７】
前記癌腫は卵巣癌又は肺癌である請求項１から６までのいずれか一項に記載の使用、或いは請求項７から１７まで又は１９から２５までのいずれか一項に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公表番号】特表２００８−５０９０８２（Ｐ２００８−５０９０８２Ａ）
【公表日】平成２０年３月２７日（２００８．３．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５１２３１２（Ｐ２００７−５１２３１２）
【出願日】平成１７年５月４日（２００５．５．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００５／００１６６９
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１０５８３５
【国際公開日】平成１７年１１月１０日（２００５．１１．１０）
【出願人】（５０１４６０６９３）セルテック アール アンド ディ リミテッド (29)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年３月２７日（２００８．３．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年５月４日（２００５．５．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００５／００１６６９
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１０５８３５
【国際公開日】平成１７年１１月１０日（２００５．１１．１０）
【出願人】（５０１４６０６９３）セルテック アール アンド ディ リミテッド (29)
【Ｆターム（参考）】
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