癌の処置のための併用療法
【課題】癌を処置するための方法を提供すること。
【解決手段】本発明は、癌の処置が必要な患者において、癌を処置するための方法に関する。この方法は、必要な患者に、第１の処置手順において第１量のヒストンデアセチラーゼインヒビター、ならびに第２の処置手順において第２量のヒストンデアセチラーゼインヒビターを投与する工程を包含を包含する。第１量および第２量が、一緒に、治療的有効量を含有する。ＨＤＡＣインヒビターおよび放射線療法の組合せが、治療的相乗的である。１つの実施形態において、癌の処置のための併用療法に関する。
【解決手段】本発明は、癌の処置が必要な患者において、癌を処置するための方法に関する。この方法は、必要な患者に、第１の処置手順において第１量のヒストンデアセチラーゼインヒビター、ならびに第２の処置手順において第２量のヒストンデアセチラーゼインヒビターを投与する工程を包含を包含する。第１量および第２量が、一緒に、治療的有効量を含有する。ＨＤＡＣインヒビターおよび放射線療法の組合せが、治療的相乗的である。１つの実施形態において、癌の処置のための併用療法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本願は、米国仮出願第６０／３７３，０３３号（２００２年４月１５日出願）の優先権を主張する。上記出願の教示全体は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（政府支援）
本発明は、全体または一部において、国立癌センターからのＣｏｒｅ支援（支援番号０８７４８）およびＮＩＨからのＣＡ０５８２６によって支援された。政府は、本発明において特定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
正常な組織のホメオスタシスは、細胞増殖の速度と細胞死の速度との間の複雑なバランスによって達成される。細胞増殖の速度を増加させるか、または細胞死の速度を減少させるかのいずれかによるこのバランスの崩壊は、細胞の異常な増殖を引き起こし得、そして癌の発生における主要な現象であると考えられている。癌の処置のための従来の戦略としては、化学療法、放射線療法、手術、生物学的療法またはそれらの組み合わせが挙げられる；しかし、これらの戦略は、特異性の欠落および正常な組織に対する過剰な毒性によって制限されている。さらに、特定の癌は、化学療法のような処置に対して耐性であり、そして手術のようなこれらの戦略のいくつかは、常に実行可能な代替であるわけではない。
【０００４】
癌細胞は、特定の種類の放射線を用いる攻撃によって、弱められ、最終的には殺傷され得、したがって、放射線療法は、癌について重要な処置である。例えば、前立腺癌の場合、癌の放射線療法の遡及的分析により、原発性腫瘍の局所コントロールを達成できないことは、疾患の最終的な転移性拡散と大きく関連していることが証明されている（Ｙｏｒｋｅ，Ｅ．Ｄ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：２９８７−９３（１９９３）；Ｆｕｋｓ，Ｚ．ら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．２１：５３７−４７（１９９１））。また、再発の早期マーカー（例えば、ＰＳＡ）のアベイラビリティにより、前立腺癌の放射線療法において使用される標準的な投薬レジメンが、不適切であることも示唆されている（Ｐｏｌｌａｃｋ，Ａ．ら、Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ．５３：１０９７−１１０５（２００２））。これらの２つの観察は、３Ｄ立体処置および強度調節放射線療法（ＩＭＲＴ）のような、正常な器官の曝露を最小限にしか増加させずに治療用放射線の線量を増加させることを可能にする技術の研究のための機動力を提供した（Ｚｅｌｅｆｓｋｙ，Ｍ．Ｊ．ら，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒ．Ｏｎｃｏｌ．５５：２４１−９（２０００））。用量送達を増加させることなく治療効率を増加させるためのアプローチとしての放射線増感剤の使用もまた、研究されている（Ｌａｗｔｏｎ，Ｃ．Ａ．ら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．３６：６７３−８０（１９９６））。
【０００５】
癌の処置はまた、化学療法剤の使用を包含し得る。例えば、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）は、ヒドロキサム酸ベースの混成極性化合物であり、この化合物は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）活性を阻害し、そして末端分化、細胞増殖の停止および／または腫瘍細胞のアポトーシスをインビトロで誘導する（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）。ＳＡＨＡは、末端分化、細胞増殖の停止および／または腫瘍細胞のアポトーシスを誘導し得るヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターのクラスに属する。この化合物は、検出可能な毒性を最小限か全く伴うことなく、ヌードマウスにおける前立腺癌異種移植片の阻害を示した（Ｂｕｔｌｅｒ，Ｌ．Ｍ．ら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０：５１６５−７０（２０００）。固形腫瘍および血液腫瘍（前立腺癌を含む）の処置のためのＩ期試験は完了している（Ｋｅｌｌｙ，Ｗ．Ｋ．ら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ １１：１６９５−７１３（２００２）；Ｋｅｌｌｙ，Ｗ．Ｋ．ら，ＡＳＣＯ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ，Ｏｒｌａｎｄｏ，ＦＬ，２００２，ｐｐ．１８３１）。
【０００６】
代表的に、ＨＤＡＣインヒビターは、以下の５つの一般的なクラスに入る：Ａ）ヒドロキサム酸誘導体；Ｂ）環状テトラペプチド；Ｃ）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）；Ｄ）ベンズアミド誘導体；およびＥ）求電子性ケトン誘導体。
【０００７】
併用療法は、しばしば、癌の処置において用いられる。例えば、２つ以上の許容された治療（例えば、化学療法および放射線療法）が用いられている。特定の併用療法から誘導される治療効果は、ＳｔｅｅｌおよびＰｅｃｋｈａｍ（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．５：８５−９１（１９７９））によって、４つの一般的なカテゴリーの下で分類されている。これらのカテゴリーは、以下である：１）空間的協働−化学療法および放射線療法は、異なる解剖学的部位における疾患を撲滅する；２）毒性非依存性−化学療法に起因する殺傷が、非オーバーラップ正常器官毒性に起因して放射線療法から誘導される殺傷に加えられる；３）正常組織の保護−多くの線量の放射線を標的に送達することを可能にする薬剤；４）腫瘍応答の増強−１つの薬剤（化学療法または放射線）は、腫瘍細胞を他の薬剤に対して優勢に「感作」し、その結果、これら２つの効果が、各個の効果を加えることによって予測される効果よりも大きくなる。
【０００８】
初めの２つのカテゴリーは、２つの薬剤の間の相互作用を必要としない。組合わせた放射線療法／化学療法に起因する治療効果の臨床例は、一般に、カテゴリー１および２に入り、ここでカテゴリー１は、組み合わせ様式療法のための優勢な臨床原理である。カテゴリー３および４に対応する治療効果は、研究室で観察されているが、臨床への移行は遅れている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．（１９９８）９５：３００３−７
【非特許文献２】Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（２００１）１３：４７７−８３
【非特許文献３】Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａら，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ （２００１）１：１９４−２０２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
上記の観点から、癌は、多くの潜在的に有効な処置が利用可能である疾患である。しかし、種々のタイプの癌の罹患率およびそれが有し得る重大な影響に起因して、より効果的な処置、特に、現在利用可能な形態の処置よりも小さい有害な副作用を伴う処置が、必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
（発明の要旨）
本発明は、以下を提供する。
（項目１）
癌の処置が必要な患者において、癌を処置するための方法であって、該患者に、第１の処置手順において第１量のヒストンデアセチラーゼインヒビター、および第２の処置手順において第２量の放射線を投与する工程を包含し、ここで、該第１量および第２量が、一緒になって治療的有効量を構成する、方法。
（項目２）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ヒドロキサム酸誘導体、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）、環式テトラペプチド、ベンズアミド誘導体、または求電子性ケトン誘導体である、方法。
（項目３）
項目２に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＳＡＨＡ、ピロキサミド、ＣＢＨＡ、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、トリコスタチンＣ、サリチルヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）、アゼライックビスヒドロキサム酸（ＡＢＨＡ）、アゼライック−１−ヒドロキサメート−９−アニリド（ＡＡＨＡ）、６−（３−クロロフェニルウレイド）カプロン酸ヒドロキサム酸（３Ｃｌ−ＵＣＨＡ）、オキサムフラチン、Ａ−１６１９０６、スクリプタイド、ＰＸＤ−１０１、ＬＡＱ−８２４、ＣＨＡＰ、ＭＷ２７９６、およびＭＷ２９９６からなる群より選択されるヒドロキサム酸誘導体である、方法。
（項目４）
項目２に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、トラポキシンＡ、ＦＲ９０１２２８（ＦＫ２２８またはデプシペプチド）、ＦＲ２２５４９７、アピシジン、ＣＨＡＰ、ＨＣ−毒素、ＷＦ２７０８２、およびクラミドシンからなる群より選択される環式テトラペプチドである、方法。
（項目５）
項目２に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、酪酸ナトリウム、イソバレレート、バレレート、４ フェニルブチレート（４−ＰＢＡ）、フェニルブチレート（ＰＢ）、プロピオネート、ブチルアミド、イソブチルアミド、フェニルアセテート、３−ブロモプロピオネート、トリブチリン、バルプロ酸およびバルプロエートからなる群より選択される、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）である、方法。
（項目６）
項目２に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＣＩ−９９４、ＭＳ−２７−２７５（ＭＳ−２７５）およびＭＳ−２７−２７５の３’−アミノ誘導体からなる群より選択されるベンズアミド誘導体である、方法。
（項目７）
項目２に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、トリフルオロメチルケトンおよびα−ケトアミドからなる群より選択される求電子性ケトン誘導体である、方法。
（項目８）
項目２に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、デプデシンである、方法。
（項目９）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化１】
またはその薬学的に受容可能な塩によって表される、方法。
（項目１０）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化２】
またはその薬学的に受容可能な塩によって表されるピロキサミドである、方法。
（項目１１）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化３】
またはその薬学的に受容可能な塩によって表される、方法。
（項目１２）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化４】
またはその薬学的に受容可能な塩、溶媒和物もしくは水和物によって表され、ここで：
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく；
Ｒ１およびＲ２が、同じである場合、各々は、置換または非置換のアリールアミノシクロアルキルアミノ基またはピペリジノ基であり；
Ｒ１およびＲ２が、異なるＲ１＝Ｒ３−Ｎ−Ｒ４である場合、Ｒ３およびＲ４の各々は、独立して、互いに同じであるか、または異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の分枝または非分枝のアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリール基、アルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基であるか、またはＲ３およびＲ４は、一緒に結合して、ピペリジン基を形成し；
Ｒ２は、ヒドロキシアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはアルキルオキシ基であり；そして
ｎは、約４〜約８の整数である、方法。
（項目１３）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化５】
またはその薬学的に受容可能な塩、溶媒和物もしくは水和物によって表され、ここで：
Ｒが、置換または非置換のフェニル基、ピペリジノ基、チアゾリル基、２−ピリジル基、３−ピリジル基または４−ピリジル基であり；そして
ｎが、約４〜約８の整数である、
方法。
（項目１４）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化６】
またはその薬学的に受容可能な塩、溶媒和物もしくは水和物によって表され、ここで：
Ａは、アミド部分であり；
Ｒ１およびＲ２が、各々、置換または非置換のアリール基、アリールアミノ基、アリールアルキルアミノ基、アリールアルキル基、アリールオキシ基またはアリールアルキルオキシ基から選択され；
Ｒ４が、水素、ハロゲン基、フェニル基またはシクロアルキル基であり；そして
ｎが、約３〜約１０の整数である、方法。
（項目１５）
項目１に記載の方法であって、前記第２の処置手順の放射線が、外部ビーム放射線である、方法。
（項目１６）
項目１に記載の方法であって、前記第２の処置手順の放射線が、放射性医薬品である、方法。
（項目１７）
項目１６に記載の方法であって、前記放射性医薬品が、放射性結合体である、方法。
（項目１８）
項目１７に記載の方法であって、前記放射性結合体が、放射標識抗体である、方法。
（項目１９）
項目１に記載の方法であって、前記放射線が、電磁放射線および粒子状放射線からなる群より選択される、方法。
（項目２０）
項目１９に記載の方法であって、前記電磁放射線が、Ｘ線、γ線およびそれらの任意の組合せからなる群より選択される、方法。
（項目２１）
項目１９に記載の方法であって、前記粒子状放射線が、電子ビーム（β粒子）、陽子線、中性子線、α粒子および負性π中間子からなる群より選択される、方法。
（項目２２）
項目２１に記載の方法であって、前記粒子状放射線が、α粒子である、方法。
（項目２３）
項目１に記載の方法であって、合計少なくとも約１Ｇｙの放射線が前記患者に投与される、方法。
（項目２４）
項目１に記載の方法であって、合計少なくとも約１０Ｇｙの放射線が前記患者に投与される、方法。
（項目２５）
項目１に記載の方法であって、合計少なくとも約２０Ｇｙの放射線が前記患者に投与される、方法。
（項目２６）
項目１に記載の方法であって、合計少なくとも約４０Ｇｙの放射線が前記患者に投与される、方法。
（項目２７）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターおよび前記放射線の治療効果が、相乗的である、方法。
（項目２８）
項目２６に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、放射線に対して、前記患者の癌細胞を感作させる、方法。
（項目２９）
項目１に記載の方法であって、放射線が、前記ＨＤＡＣインヒビターに対して、前記患者の癌細胞を感作させる、方法。
（項目３０）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターおよび放射線が、同時に投与される、方法。
（項目３１）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターおよび前記放射線が、連続的に投与される、方法。
（項目３２）
項目３１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記放射線の投与の前に投与される、方法。
（項目３３）
項目３１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記放射線の投与の後に投与される、方法。
（項目３４）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、経口的、非経口的、腹腔内的、静脈内的、動脈内的、経皮的、舌下的、筋肉内的、直腸的、経頬的、経鼻的、吸入によって、膣的、眼内的、局所的、皮下的、脂肪内的、関節内的、髄腔内的に投与される、方法。
（項目３５）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、遅延放出投薬形態である、方法。
（項目３６）
項目１６に記載の方法であって、前記放射性医薬品が、経口的、非経口的、腹腔内的、静脈内的、動脈内的、経皮的、舌下的、筋肉内的、直腸的、経頬的、経鼻的、吸入によって、膣的、眼内的、局所的、皮下的、脂肪内的、関節内的、または髄腔内的に投与される、方法。
（項目３７）
項目１６に記載の方法であって、前記放射性医薬品が、遅延放出投薬形態である、方法。
（項目３８）
ＨＤＡＣインヒビターおよび放射線の併用療法に対する癌細胞の感受性を決定する方法であって、該方法が、該癌細胞に、第１の処置手順で第１量のヒストンデアセチラーゼインヒビター、および第２の処置手順で第２量の放射線を接触させる工程であって、ここで、該第１の処置および第２の処置が一緒に、治療的有効量を含む工程、ならびに処置に対する該細胞の感受性を評価する工程、を包含する、方法。
（項目３９）
癌の処置のためのＨＤＡＣインヒビターおよび放射線の組合せの治療的有効量を決定する方法であって、癌細胞に、第１の処置手順で第１量のヒストンデアセチラーゼインヒビター、および第２の処置手順で第２量の放射線に曝露する工程であって、該第１の処置および第２の処置が一緒に、治療的有効量を含む工程、ならびに抗癌効果を評価する工程、を包含する、方法。
（項目４０）
第１量のヒストンデアセチラーゼインヒビターおよび第２量の放射線を含む、薬学的組成物であって、該第１量および第２量が、一緒に、治療的有効量を含む、薬学的組成物。
（項目４１）
項目４０に記載の組成物であって、前記放射線が、放射性医薬品である、組成物。
（項目４２）
癌を処置するための医薬の製造のための、第１量のＨＤＡＣインヒビターおよび第２量の放射線の使用。
（項目４３）
項目４２に記載の使用であって、前記放射線が、放射性医薬品である、使用。
【００１２】
本発明は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビター（例えば、ＳＡＨＡ）を、放射線源（例えば、外部ビーム放射線）または放射性同位体（例えば、放射性医薬）と組合わせて使用して、治療的に有効な抗癌効果を提供し得るという発見に基づく。さらに、ＨＤＡＣインヒビターと放射線源との間の予想外の相乗的相互作用は、増強されたかまたは相乗的な治療効果を生じ、ここでこの合わされた効果は、ある治療用量における２つの処置剤の各々を投与することから得られる相加的効果よりも大きい。これらの観察は、ＨＤＡＣインヒビター（例えば、ＳＡＨＡ）が、癌の処置のための放射線療法と組合わせて使用され得る放射線増感剤として働き得ることを示唆する。ＨＤＡＣインヒビター（例えば、ＳＡＨＡ）が放射線増感剤として働く能力は、以前には記載されていない。
【００１３】
第１の処置手順（これは、本明細書中に記載されるように、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターの投与を包含する）と、第２の処置手順（これは、本明細書中に記載されるように、その必要のある患者に放射線処置を使用する）との組み合わせは、治療的に有効な抗癌効果を提供し得ることが、予想外にも発見された。これらの処置（ＨＤＡＣインヒビターの投与および放射線療法の投与）のそれぞれが、他方と組み合わされた場合に治療的に有効な処置を提供する量または線量で使用される。
【００１４】
このように、本発明は、その必要のある患者における、癌の処置のための方法に関する。本明細書中で使用される場合、癌の処置とは、癌転移を含む癌の進行を部分的または全体的に、阻害、遅延または予防すること；癌転移を含む癌の再発を阻害、遅延または予防すること；あるいは哺乳動物（例えば、ヒト）における癌の発症または発生を予防すること（化学予防法）をいう。
【００１５】
本発明の方法は、以下を含むがそれらに限定されない種々の癌の処置において有用である：固形腫瘍（例えば、肺、乳房、結腸、前立腺、膀胱、直腸、脳または子宮内膜の腫瘍）、血液悪性腫瘍（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫）、腺癌（例えば、膀胱癌、直腸がん、乳癌、結腸直腸癌）、神経芽細胞腫または黒色腫。
【００１６】
この方法は、その必要のある患者に、第１の処置手順において、第１の量のヒストンデアセチラーゼインヒビターを、第２の処置手順において、第２の量または線量の放射線を投与する工程を包含する。これらの第１の量および第２の量が一緒になって、治療的有効量を構成する。
【００１７】
本発明はさらに、癌の処置に有用な薬学的組成物に関する。この薬学的組成物は、第１の量のヒストンデアセチラーゼインヒビターおよび第２の量の放射線（例えば、放射性医薬）を含む。この第１の量および第２の量は、一緒になって、治療的有効量を構成する。
【００１８】
本発明はさらに、癌を処置するための医薬の製造のための、第１の量のＨＤＡＣインヒビターおよび第２の量の放射線（例えば、放射性医薬）の使用に関する。
【００１９】
本発明の特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターと放射線療法との組み合わせは、この併用療法レジメンが、ある治療用量で単独で投与された場合の各々の成分の相加的効果よりも、有意に良好な抗癌結果（例えば、増殖の阻害）を生じる場合に、治療的に相乗的であるとみなされる。標準的な統計分析は、この結果が有意に良好である場合を決定するために用いられ得る。例えば、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ試験またはいくつかの他の一般的に許容されている統計分析が用いられ得る。
【００２０】
放射線治療において使用される放射線源は、電磁放射線（例えば、Ｘ線またはγ線）、または粒子放射線（例えば、電子ビーム（β粒子）、プロトンビーム、ニュートロンビーム、α粒子、またはネガティブπ中間子）であり得る。
【００２１】
放射線処置は、外部ビーム放射線であり得るか、または放射性同位体の使用を含み得る（例えば、本明細書中に記載されるような、放射性医薬の投与による）。放射線処置はまた、外部ビーム放射線と放射性同位体（例えば、放射性医薬）との組み合わせであり得る。
【００２２】
１つの特定の実施形態において、放射線は、標的化送達によって、または標的化放射性結合体（例えば、放射性標識された抗体）の全身送達によって提供される。
【００２３】
放射線の線量は、患者、および処置される癌のタイプに依存して決定され得る。特定の実施形態において、患者は、少なくとも約１Ｇｙの放射線（例えば、約５、６、７、８、９、１０Ｇｙ、２０Ｇｙまたは４０Ｇｙなどの放射線のような約５〜４０Ｇｙの放射線）を受け得る。
【００２４】
処置手順は、任意の順序で連続的に、同時にまたはそれらの組み合わせで行われ得る。例えば、第１の処置手順（ヒストンデアセチラーゼインヒビターの投与）は、第２の処置手順（放射線）の前、放射線処置の後、放射線と同時、またはこれらの組み合わせで行われ得る。例えば、全処置期間は、ヒストンデアセチラーゼインヒビターについて決定され得る。放射線は、インヒビターでの処置の開始の前、またはインヒビターでの処置に続いて投与され得る。さらに、放射線処置は、インヒビター投与の期間の間に投与され得るが、インヒビター処置期間の全体にわたって行われる必要はない。
【００２５】
本発明における使用に適切なＨＤＡＣインヒビターとしては、本明細書中に規定されるような、ヒドロキサム酸誘導体、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）、環式テトラペプチド、ベンズアミド誘導体、または求電子性ケトン誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
本発明の方法における使用に適切なＨＤＡＣインヒビターの特定の非制限的な例は、以下である：
Ａ）ヒドロキサム酸誘導体（ＳＡＨＡ、ピロキサミド、ＣＢＨＡ、トリコスタチン（Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ）Ａ（ＴＳＡ）、トリコスタチンＣ、サリチルヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）、アゼライックビスヒドロキサム酸（Ａｚｅｌａｉｃ Ｂｉｓｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ Ａｃｉｄ）（ＡＢＨＡ）、アゼライック−１−ヒドロキサメート−９−アニリド（ＡＡＨＡ）、６−（３−クロロフェニルウレイド）カプロン酸ヒドロキサム酸（３Ｃｌ−ＵＣＨＡ）、オキサムフラチン（Ｏｘａｍｆｌａｔｉｎ）、Ａ−１６１９０６、スクリプタイド、ＰＸＤ−１０１、ＬＡＱ−８２４、ＣＨＡＰ、ＭＷ２７９６、およびＭＷ２９９６から選択される）；
Ｂ）環式テトラペプチド（トラポキシン（Ｔｒａｐｏｘｉｎ）Ａ、ＦＲ９０１２２８（ＦＫ２２８またはデプシペプチド）、ＦＲ２２５４９７、アピシジン、ＣＨＡＰ、ＨＣ−毒素、ＷＦ２７０８２、およびクラミドシン（Ｃｈｌａｍｙｄｏｃｉｎ）から選択される）；
Ｃ）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）（酪酸ナトリウム、イソバレレート、バレレート、４ フェニルブチレート（４−ＰＢＡ）、フェニルブチレート（ＰＢ）、プロピオネート、ブチルアミド、イソブチルアミド、フェニルアセテート、３−ブロモプロピオネート、トリブチリン、バルプロ酸およびバルプロエートから選択される）；
Ｄ）ベンズアミド誘導体（ＣＩ−９９４、ＭＳ−２７−２７５（ＭＳ−２７５）およびＭＳ−２７−２７５の３’−アミノ誘導体から選択される）；
Ｅ）求電子性ケトン誘導体（トリフルオロメチルケトン、およびＮ−メチル−α−ケトアミドのようなα−ケトアミドから選択される）；および
Ｆ）デプデシン（ＤＥＰＵＤＥＣＩＮ）
特定のＨＤＡＣインヒビターとしては、以下が挙げられる：
スベロイルアニロドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）。これは、以下の構造式：
【００２７】
【化７】
によって表される。
【００２８】
ピロキサミド。これは、以下の構造式：
【００２９】
【化８】
によって表される。
【００３０】
ｍ−カルボキシシンナム酸ビスヒドロキサメート（ＣＢＨＡ）。これは、以下の構造式：
【００３１】
【化９】
によって表される。
【００３２】
本発明の方法における使用のために適切なＨＤＡＣインヒビターの他の非制限定な例は、以下である：
以下の構造：
【００３３】
【化１０】
によって表される化合物。ここで、Ｒ１およびＲ２は、同じまたは異なり得る；Ｒ１およびＲ２が、同じである場合、各々は、置換されたまたは非置換のアリールアミノ基（例えば、フェニルアミノ、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、シクロアルキルアミノ基またはピペリジノ基であり；Ｒ１およびＲ２が、異なるＲ１＝Ｒ３−Ｎ−Ｒ４である場合、Ｒ３およびＲ４の各々は、独立して、互いに同じであるか、または異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の分枝または非分枝のアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリール（例えば、フェニルまたはピリジル）基、アルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基またはピリジン基であるか、またはＲ３およびＲ４は、一緒に結合して、ピペリジン基を形成し；Ｒ２は、ヒドロキシアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはアルキルオキシ基であり；そしてｎは、約４〜約８の整数である；
以下の構造：
【００３４】
【化１１】
によって表される化合物。ここで、Ｒが、置換または非置換のフェニル基、ピペリジン基、チアゾール基、２−ピリジン基、３−ピリジン基または４−ピリジン基であり；そしてｎが、約４〜約８の整数である；ならびに
以下の構造：
【００３５】
【化１２】
によって表される化合物。ここで、Ａは、アミド部分であり；Ｒ１およびＲ２が、各々、置換または非置換のアリール基、アリールアミノ基（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミンまたはチアゾールアミノ）、アリールアルキル基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基から選択され；Ｒ４が、水素、ハロゲン基、フェニル基またはシクロアルキル基であり；そしてｎが、約３〜約１０の整数である。
【００３６】
併用療法は、２つの処置様式と関連する異なる毒性の観点で治療的に利点を提供し得る。より詳細には、ＨＤＡＣインヒビターでの処置は、血液学的毒性を導き得るが、放射線療法は、腫瘍部位に隣接する組織に対して毒性であり得る。このように、この差示的毒性によって、各処置は、患者の病的状態を増加することなく、治療的用量で投与され得る。しかし、驚くべきことに、併用処置の結果として達成される治療的効果は、増強されるかまたは相乗的であり、例えば、相加的効果よりも有意に良い。
【００３７】
本発明の前記および他の目的、特徴および利点は、添付の図面に示されるように、本発明の好ましい実施形態の以下のより詳細な説明から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１−１】図１Ａ〜Ｄは、連続的および１２０時間の処置時間の両方の（Ａ）未処置；（Ｂ）１μＭ ＳＡＨＡで処置；（Ｃ）２．５μＭ ＳＡＨＡでの処置；ならびに５μＭ ＳＡＨＡでの処置を行ったＬＮＣａＰ細胞についてのスフェロイド容積のプロットである。太い実線は、各個人の実験についての中央値プロットに対応する。
【図１−２】図１Ａ〜Ｄは、連続的および１２０時間の処置時間の両方の（Ａ）未処置；（Ｂ）１μＭ ＳＡＨＡで処置；（Ｃ）２．５μＭ ＳＡＨＡでの処置；ならびに５μＭ ＳＡＨＡでの処置を行ったＬＮＣａＰ細胞についてのスフェロイド容積のプロットである。太い実線は、各個人の実験についての中央値プロットに対応する。
【図２】図２Ａ〜Ｂは、（Ａ）５μＭ ＳＡＨＡおよび（Ｂ）２．５μＭ ＳＡＨＡ（上記プロットの１Ｄおよび１Ｃ）での連続的インキュベーションの開始後の異なる時点で行なわれたＬＮＣａＰ細胞のスフェロイドの光学顕微鏡画像の走査である。各パネルの下の左の数字は、インキュベーション後の時間（日数）に対応する。
【図３−１】図３Ａ〜Ｄは、以下のレジメンに従って処置されたＬＮＣａＰ細胞の中央値（太線）および個々（細線）のスフェロイド容積のプロットである：Ａ）未処置；Ｂ）５μＭ ＳＡＨＡでの９６時間インキュベート；Ｃ）６ＧｙのＣｓ−１３７放射線（ＬＥＴ ０．２ｋｅＶ／μｍ）を使用する外部ビーム放射線の急性線量で照射；ならびにＤ）ＳＡＨＡ処置の中点（４８時間後）に続く、９６時間の５μＭ ＳＡＨＡ処置および６ＧｙのＣｓ−１３７放射線（ＬＥＴ ０．２ｋｅＶ／μｍ）を使用する急性線量の放射線。
【図３−２】図３Ａ〜Ｄは、以下のレジメンに従って処置されたＬＮＣａＰ細胞の中央値（太線）および個々（細線）のスフェロイド容積のプロットである：Ａ）未処置；Ｂ）５μＭ ＳＡＨＡでの９６時間インキュベート；Ｃ）６ＧｙのＣｓ−１３７放射線（ＬＥＴ ０．２ｋｅＶ／μｍ）を使用する外部ビーム放射線の急性線量で照射；ならびにＤ）ＳＡＨＡ処置の中点（４８時間後）に続く、９６時間の５μＭ ＳＡＨＡ処置および６ＧｙのＣｓ−１３７放射線（ＬＥＴ ０．２ｋｅＶ／μｍ）を使用する急性線量の放射線。
【図４】図４は、図３Ｄに記載されるＳＡＨＡおよび６Ｇｙ放射線の併用で処置されたスフェロイドの光学顕微鏡画像の走査である。各パネルの下の左の数字は、ＳＡＨＡでのインキュベーションの開始からの時間に対応する。
【図５−１】図５Ａ〜Ｃは、処置されたＬＮＣａＰスフェロイドのＴＵＮＥＬ染色切片の走査である。パネル（Ａ〜Ｃ）は、ＳＡＨＡ単独（５μＭ、９６時間）で処置された。パネル（Ａ）は、インキュベーションの終了の直後に処置されたスフェロイドを示す；パネル（Ｂ）は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの終了の２４時間後のスフェロイドを示す；パネル（Ｃ）は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの終了の４８時間後スフェロイドを示す；パネル（Ｄ〜Ｆ）は、ＳＡＨＡ＋６Ｇｙ放射線の組み合わせで処置されたＬＮＣａＰスフェロイドについてのＴＵＮＥＬ染色を示す：パネル（Ｄ）は、インキュベーションの終了直後である；パネル（Ｅ）は、インキュベーションの終了の２４時間後である；およびパネル（Ｆ）は、インキュベーションの終了の４８時間後である。以下についてのＴＵＮＥＬ染色：パネル（Ｇ）陽性ＤＮａｓｅ処置コントロール；パネル（Ｈ）未処置スフェロイド；およびパネル（Ｉ）６ＧＹ放射線で処置されたスフェロイドがまた示される。全ての切片を、ヘマトキシリンで対比染色した。
【図５−２】図５Ａ〜Ｃは、処置されたＬＮＣａＰスフェロイドのＴＵＮＥＬ染色切片の走査である。パネル（Ａ〜Ｃ）は、ＳＡＨＡ単独（５μＭ、９６時間）で処置された。パネル（Ａ）は、インキュベーションの終了の直後に処置されたスフェロイドを示す；パネル（Ｂ）は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの終了の２４時間後のスフェロイドを示す；パネル（Ｃ）は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの終了の４８時間後スフェロイドを示す；パネル（Ｄ〜Ｆ）は、ＳＡＨＡ＋６Ｇｙ放射線の組み合わせで処置されたＬＮＣａＰスフェロイドについてのＴＵＮＥＬ染色を示す：パネル（Ｄ）は、インキュベーションの終了直後である；パネル（Ｅ）は、インキュベーションの終了の２４時間後である；およびパネル（Ｆ）は、インキュベーションの終了の４８時間後である。以下についてのＴＵＮＥＬ染色：パネル（Ｇ）陽性ＤＮａｓｅ処置コントロール；パネル（Ｈ）未処置スフェロイド；およびパネル（Ｉ）６ＧＹ放射線で処置されたスフェロイドがまた示される。全ての切片を、ヘマトキシリンで対比染色した。
【図５−３】図５Ａ〜Ｃは、処置されたＬＮＣａＰスフェロイドのＴＵＮＥＬ染色切片の走査である。パネル（Ａ〜Ｃ）は、ＳＡＨＡ単独（５μＭ、９６時間）で処置された。パネル（Ａ）は、インキュベーションの終了の直後に処置されたスフェロイドを示す；パネル（Ｂ）は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの終了の２４時間後のスフェロイドを示す；パネル（Ｃ）は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの終了の４８時間後スフェロイドを示す；パネル（Ｄ〜Ｆ）は、ＳＡＨＡ＋６Ｇｙ放射線の組み合わせで処置されたＬＮＣａＰスフェロイドについてのＴＵＮＥＬ染色を示す：パネル（Ｄ）は、インキュベーションの終了直後である；パネル（Ｅ）は、インキュベーションの終了の２４時間後である；およびパネル（Ｆ）は、インキュベーションの終了の４８時間後である。以下についてのＴＵＮＥＬ染色：パネル（Ｇ）陽性ＤＮａｓｅ処置コントロール；パネル（Ｈ）未処置スフェロイド；およびパネル（Ｉ）６ＧＹ放射線で処置されたスフェロイドがまた示される。全ての切片を、ヘマトキシリンで対比染色した。
【図６−１】図６Ａ〜Ｃは、処置ＬＮＣａＰスフェロイドのＫｉ６７染色切片の走査である。パネル（Ａ〜Ｃ）は、ＳＡＨＡのみ（５μＭ、９６時間）で処置された。パネル（Ａ）は、ＳＡＨＡでのインキュベーションの終了直後のスフェロイドを示す；パネル（Ｂ）は、インキュベーションの終了の２４時間後のスフェロイドを示す；パネル（Ｃ）は、インキュベーションの終了の４８時間後のスフェロイドを示す。パネルＤ〜Ｆは、ＳＡＨＡ＋６Ｇｙ放射線の組み合わせで処置されたスフェロイドについてのＫｉ６７染色を示す：インキュベーションの終了後の（Ｄ）直後；（Ｅ）２４時間、および（Ｆ）４８時間。未処置スフェロイド（Ｇ）および６Ｇｙ放射線で処置されたスフェロイド（Ｈ）についてのＫｉ６７染色もまた示される。全ての切片を、ヘマトキシリンで対染色した。
【図６−２】図６Ａ〜Ｃは、処置ＬＮＣａＰスフェロイドのＫｉ６７染色切片の走査である。パネル（Ａ〜Ｃ）は、ＳＡＨＡのみ（５μＭ、９６時間）で処置された。パネル（Ａ）は、ＳＡＨＡでのインキュベーションの終了直後のスフェロイドを示す；パネル（Ｂ）は、インキュベーションの終了の２４時間後のスフェロイドを示す；パネル（Ｃ）は、インキュベーションの終了の４８時間後のスフェロイドを示す。パネルＤ〜Ｆは、ＳＡＨＡ＋６Ｇｙ放射線の組み合わせで処置されたスフェロイドについてのＫｉ６７染色を示す：インキュベーションの終了後の（Ｄ）直後；（Ｅ）２４時間、および（Ｆ）４８時間。未処置スフェロイド（Ｇ）および６Ｇｙ放射線で処置されたスフェロイド（Ｈ）についてのＫｉ６７染色もまた示される。全ての切片を、ヘマトキシリンで対染色した。
【図６−３】図６Ａ〜Ｃは、処置ＬＮＣａＰスフェロイドのＫｉ６７染色切片の走査である。パネル（Ａ〜Ｃ）は、ＳＡＨＡのみ（５μＭ、９６時間）で処置された。パネル（Ａ）は、ＳＡＨＡでのインキュベーションの終了直後のスフェロイドを示す；パネル（Ｂ）は、インキュベーションの終了の２４時間後のスフェロイドを示す；パネル（Ｃ）は、インキュベーションの終了の４８時間後のスフェロイドを示す。パネルＤ〜Ｆは、ＳＡＨＡ＋６Ｇｙ放射線の組み合わせで処置されたスフェロイドについてのＫｉ６７染色を示す：インキュベーションの終了後の（Ｄ）直後；（Ｅ）２４時間、および（Ｆ）４８時間。未処置スフェロイド（Ｇ）および６Ｇｙ放射線で処置されたスフェロイド（Ｈ）についてのＫｉ６７染色もまた示される。全ての切片を、ヘマトキシリンで対染色した。
【図７−１】図７Ａ〜Ｂは、（Ａ）ＴＵＮＥＬおよび（Ｂ）Ｋｉ６７染色についての陽性染色された細胞の％の平均および標準偏差を示すグラフである。実験当たり、３〜５個の異なる切片が、得点付けられた。ＳＡＨＡのみの切片対ＳＡＨＡ＋放射線での陽性染色された細胞の割合は、４８時間でのＫｉ６７染色について有意に異なった（ｐ＜０．０１）。
【図７−２】図７Ａ〜Ｂは、（Ａ）ＴＵＮＥＬおよび（Ｂ）Ｋｉ６７染色についての陽性染色された細胞の％の平均および標準偏差を示すグラフである。実験当たり、３〜５個の異なる切片が、得点付けられた。ＳＡＨＡのみの切片対ＳＡＨＡ＋放射線での陽性染色された細胞の割合は、４８時間でのＫｉ６７染色について有意に異なった（ｐ＜０．０１）。
【図８】図８は、以下のレジメンに従って処置されたＬＮＣａＰ細胞のスフェロイド容積を示すグラフである：未処置コントール；黒四角 Ａｃ２２５−ＨｕＭ１９５での処置；５μＭ ＳＡＨＡでの９６時間の処置；Ｘ Ａｃ２２５−ＨｕＭ１９５および５μＭ ＳＡＨＡでの処置。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
（発明の詳細な説明）
本発明は、癌の処置の必要な患者における、癌の処置のための方法に関する。この方法は、第１の量のヒストンデアセチラーゼインヒビターおよび第２の処置手順における第２の量または線量の放射線を、必要な患者に投与する工程を包含する。第１の量および第２の量は、ともに、治療的有効量を含む。
【００４０】
１つの実施形態において、この方法は、相乗的である抗癌効果を提供する。
【００４１】
癌の処置（本明細書中で使用される）とは、部分的または全体的に、癌の転移を含む癌の進行を阻害、遅延または予防すること；癌の転移を含む癌の再発を阻害、遅延または予防すること；あるいは、哺乳動物（例えば、ヒト）における癌の発症または進展の予防（化学的防御）をいう。
【００４２】
１つの実施形態では、このＨＤＡＣインヒビターは、患者中の癌細胞を放射線に対して感受性にする。従って、このＨＤＡＣインヒビターは、放射線感作剤として作用し得る。例えば、任意の特定の機構または理論に拘束されることを望まずに、ＨＤＡＣインヒビターと放射線処置との組み合わせ投与の治療効果は、放射線感作剤として作用するＨＤＡＣインヒビターの能力に起因し得、それによって、放射線処置に対する患者中の癌細胞の感受性を増加する。従って、このＨＤＡＣインヒビターは、放射線感作量で投与され得る。この感作は、細胞周期における不可逆的停止に起因し得る。
【００４３】
別の実施形態では、放射線は、患者中の癌細胞をＨＤＡＣインヒビターの作用に対して感受性にする。
【００４４】
本発明はまた、本発明の併用療法に対する特定の癌の感受性を決定する方法に関する。この方法は、癌細胞を、第１の処置手順において第１の量のヒストンデアセチラーゼインヒビターに、および第２の処置手順において第２の量または用量の放射線に曝すか、または接触させる工程、ならびに抗癌効果を評価する工程を包含する。この第１の量および第２の量は、ともに、治療的に有効な量を含む。抗癌効果は、任意の適切なアッセイを用いて評価され得る。
【００４５】
さらなる実施形態では、本発明は、特定の癌のタイプのためのＨＤＡＣインヒビターおよび放射線治療の最適組み合わせを決定するためのスクリーニング方法に関する。このスクリーニングの方法は、癌細胞を、第１の処置手順において第１の量のヒストンデアセチラーゼインヒビターに、および第２の処置手順において第２の量または用量の放射線に曝す工程を包含する。この第１の治療および第２の治療は、ともに、治療的に有効な量を含む。細胞は、培養中であるか、または処置の必要な患者の身体中に存在し得る。この処置の抗癌効果は、適切な方法を用いて評価され得る。
【００４６】
本明細書で用いる用語「治療的に有効な量」は、上記併用療法における第１の処置および第２の処置の組合せた量を表すことが意図される。この組み合わせた量は、所望の生物学的応答を達成する。本発明では、所望の生物学的応答は、癌転移を含む癌の部分的阻害または全体阻害、遅延または予防；癌の進行（哺乳動物、例えば、ヒトにおける癌転移；または癌の発症または進行の予防（化学防御）を含む）の阻害、遅延または予防である。
【００４７】
本発明の併用療法は、広範な種類の癌の処置における使用に適切である。本明細書で用いられるとき、癌は、腫瘍、新生物、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫などをいう。例えば、癌は、制限されずに、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、非皮膚末梢Ｔ細胞リンパ腫、ヒトＴ細胞リンパ栄養ウイルス（ＨＴＬＶ）と関連するリンパ腫（例えば、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、急性リンパ性白血病、急性非リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキン病リンパ腫、および多発性骨髄腫）、小児固形腫瘍（例えば、脳腫瘍、神経芽腫、網膜芽腫、ウィルムス腫瘍、骨腫瘍、および軟組織肉腫など）、成人の一般固形腫瘍（頭部癌および頸部癌（例えば、口腔、咽頭および食道））、尿生殖器癌（例えば、前立腺、膀胱、腎、子宮、卵巣、精巣、直腸および結腸）、肺癌、乳癌、膵臓癌、黒色腫およびその他の皮膚癌、胃癌、脳癌、肝臓癌および甲状腺癌）を包含する。
【００４８】
（ヒストンデアセチラーゼおよびヒストンデアセチラーゼインヒビター）
本明細書で用いられる用語としてのヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）は、ヌクレオソームのコアヒストンのアミノ末端テール中のリジン残基からのアセチル基の除去を触媒する酵素である。従って、ＨＤＡＣは、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）とともに、ヒストンのアセチル化状態を調節する。ヒストンのアセチル化は、遺伝子発現に影響し、そしてヒドロキサム酸を基礎にするハイブリッド極性化合物スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）のようなＨＤＡＣのインヒビターは、インビトロで形質転換細胞の成長停止、分化および／またはアポトーシスを誘導し、そしてインビボで腫瘍成長を阻害する。ＨＤＡＣは、構造的相同性を基に３つのクラスに分割され得る。酵母ＲＰＤ３タンパク質に類似するクラスＩのＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ１、２、３および８）は、核中に位置し、そして転写コリプレッサーと会合する複合体中に見出される。クラスＩＩのＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ４、５、６、７および９）は、酵母ＨＤＡ１タンパク質に類似し、そして核および細胞質の両方の細胞下局在性を有する。クラスＩおよびＩＩの両方のＨＤＡＣは、ＳＡＨＡのような、ヒドロキサム酸を基礎にしたＨＤＡＣインヒビターによって阻害される。クラスＩＩＩのＨＤＡＣは、酵母ＳＩＲ２タンパク質に関連するＮＡＤ依存性酵素の構造的に遠いクラスを形成し、そしてヒドロキサム酸を基礎にしたＨＤＡＣインヒビターによっては阻害されない。
【００４９】
本明細書で用いられる用語として、ヒストンデアセチラーゼインヒビターまたはＨＤＡＣインヒビターは、インビボ、インビトロまたはその両方でヒストンの脱アシル化を阻害し得る化合物である。従って、ＨＤＡＣインヒビターは、少なくとも１つのヒストンデアセチラーゼの活性を阻害する。少なくとも１つのヒストンの脱アセチル化を阻害する結果として、アセチル化ヒストンの増加が起こり、そしてアセチル化ヒストンの蓄積は、ＨＤＡＣインヒビターの活性を評価するための適切な生物学的マーカーである。従って、アセチル化ヒストンの蓄積をアッセイし得る手順は、目的の化合物のＨＤＡＣ阻害活性を決定するために用いられ得る。ヒストンデアセチラーゼ活性を阻害し得る化合物はまた、その他の物質に結合し得、そしてその結果、酵素のようなその他の生物学的に活性な分子を阻害し得ることが理解される。
【００５０】
例えば、ＨＤＡＣインヒビターを受ける患者において、ＨＤＡＣインヒビターで処理された末梢単核細胞中および組織中のアセチル化ヒストンの蓄積は、適切なコントロールに対して決定され得る。
【００５１】
特定化合物のＨＤＡＣ阻害活性は、例えば、少なくとも１つのヒストンデアセチラーゼの阻害を示す酵素アッセイを用いてインビトロで決定され得る。さらに、特定の組成物で処理された細胞におけるアセチル化ヒストンの蓄積の測定は、化合物のＨＤＡＣ阻害活性の決定詞であり得る。
【００５２】
アセチル化ヒストンの蓄積のためのアッセイは、文献にあり周知である。例えば、Ｍａｒｋｓ、Ｐ．Ａ．ら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、９２：１２１０〜１２１５、２０００、Ｂｕｔｌｅｒ、Ｌ．Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０：５１６５〜５１７０（２０００）、Ｒｉｃｈｏｎ、Ｖ．Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９５：３００３〜３００７、１９９８、およびＹｏｓｈｉｄａ、Ｍら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６５：１７１７４〜１７１７９、１９９０を参照のこと。
【００５３】
例えば、ヒストンデアセチラーゼインヒビター化合物の活性を測定するための酵素アッセイは、以下のように実施され得る。簡単に述べれば、アフィニィティー精製されたヒトエピトープタグ化（Ｆｌａｇ）ＨＤＡＣ１に対するＨＤＡＣインヒビター化合物の効果は、示された量のインヒビター化合物との約２０分間の適切な温度下に関し、基質の非存在下で酵素調製物をインキュベートすることによりアッセイされ得る。基質（［３Ｈ］アセチル−標識されたマウス赤白血病細胞由来ヒストン）が添加され得、そしてこのサンプルは、３０μＬの総容量中約３７℃で２０分間インキュベートされ得る。次いで、反応は停止され得、そして放出された酢酸塩が抽出され得、そして放出された放射活性の量がシンチレーション計測により決定される。ヒストンデアセチラーゼインヒビター化合物の活性を測定するために有用な代替のアッセイは、ＢＩＯＭＯＬ（登録商標）Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ、ＰＡから入手可能な「ＨＤＡＣ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ａｓｓａｙ；Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｋｉｔ−ＡＫ−５００」である。
【００５４】
インビボ研究は、以下のように実施され得る。動物（例えばマウス）は、ＨＤＡＣインヒビター化合物で腹腔内注射され得る。選択された組織、例えば、脳、膵臓、肝臓などが、投与後、所定の時点で単離され得る。ヒストンは、本質的にＹｏｓｈｉｄａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１７１７４〜１７１７９、１９９０に記載のように組織から単離され得る。等量のヒストン（約１μｇ）は、１５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動され得、そしてＨｙｂｏｎｄ−Ｐフィルター（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）に移され得る。フィルターは３％ミルクでブロックされ得、そしてウサギの精製されたポリクローナル抗アセチル化ヒストンＨ４抗体（αＡｃ−Ｈ４）および抗アセチル化ヒストンＨ３抗体（αＡｃ−Ｈ３）（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．）でプローブされ得る。アセチル化ヒストンのレベルは、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギ抗体（１：５０００）およびＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ化学発光基質（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて可視化され得る。ヒストンタンパク質のための装填コントロールとして平行ゲルが泳動され得、そしてＣｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｌｕｅ（ＣＢ）で染色される。
【００５５】
さらに、ＳＡＨＡのようなヒドロキサム酸を基礎にしたＨＤＡＣインヒビターは、細胞周期のＧ１相における一時的停止に寄与するサイクリン依存性キナーゼの阻害の原因である、ｐ２１ＷＡＦ１遺伝子の発現を上方制御することが示されている（Ｒｉｃｈｏｎ、Ｖ．Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９７：１００１４〜９．、２０００）。このｐ２１ＷＡＦ１タンパク質は、標準的な方法を用い、種々の形質転換細胞において、ＨＤＡＣインヒビターで培養の２時間以内に誘導される。このｐ２１ＷＡＦ１遺伝子の誘導には、この遺伝子のクロマチン領域中のアセチル化ヒストンの蓄積がともなう。ｐ２１ＷＡＦ１の誘導は、それ故、形質転換細胞中のＨＤＡＣインヒビターによって引き起こされるＧ１細胞周期停止に関与するとして認識され得る。
【００５６】
最近、ＳＡＨＡのようなＨＤＡＣインヒビターは、チオレドキシン結合性プロテイン２を上方制御することが示された（Ｂｕｔｌｅｒ、Ｌ．Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９９：１１７００〜５．、２００２）。ＴＢＰ−２は、チオレドキシンの調節に関与している（Ｎｉｓｈｉｙａｍａ、Ａ．ら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７４：２１６４５〜５０、１９９９）。それは、チオール還元活性を阻害し、そしてチオレドキシンのレベルを減少する。チオレドキシンは、主要な細胞タンパク質ジスルフィドレダクターゼである（Ａｍｅｒ、Ｅ．Ｓ．ら、Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７：６１０２〜９．、２０００）。多くのその他の機能（Ｇａｓｄａｓｋａ、Ｊ．Ｒ．ら、Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．６：１６４３〜５０．、１９９５；Ｂｅｒｇｇｒｅｎ、Ｍ．ら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１６：３４５９〜６６、１９９６；Ｇａｌｌｅｇｏｓ、Ａ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６：５７６５〜７０、１９９６；Ｇｒｏｇａｎ、Ｔ．Ｍ．ら、Ｈｕｍ Ｐａｔｈｏｌ．３１：４７５〜８１．、２０００；Ｂａｋｅｒ、Ａ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：５１６２〜７．、１９９７）に加え、チオレドキシンは、ＤＮＡ複製および修復に必要なヌクレオシド三リン酸からデオキシヌクレオシド三リン酸への還元に関係あるリボヌクレオチドレダクターゼ反応における電子ドナーとして供される（Ａｒｎｅｒ、Ｅ．Ｓ．ら、Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７：６１０２〜９．、２０００）。グルタチオンのように、チオレドキシンもまた、解毒反応に、および放射線で誘導された反応性酸素種およびその他のフリーラジカルの脱離に関与している還元剤である（Ｄｉｄｉｅｒ、Ｃ．ら、Ｐ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ．３０：５３７〜４６．、２００１）。
【００５７】
従って、ＳＡＨＡのようなヒドロキサム酸誘導体は、炎症性疾患、アレルギー疾患、自己免疫疾患、酸化的ストレスにともなう疾患または細胞過剰増殖によって特徴付けられる疾患のような、広範な種々のチオレドキシン（ＴＲＸ）媒介疾患および症状を処置または予防する際の使用に適切である（Ｒｉｃｈｏｎらによる「ヒストンデアセチラーゼインヒビターを用いるＴＲＸ媒介疾患を処置する方法」と題し、その全体の内容が参考として本明細書によって援用される、２００３年２月１５日に出願された米国出願第１０／３６９，０９４号）。
【００５８】
さらに、ＳＡＨＡのようなヒドロキサム酸誘導体は、最近、神経変性疾患のような中枢神経系（ＣＮＳ）の疾患を処置するため、および脳腫瘍を処置するために有用であることが示されている（Ｒｉｃｈｏｎらによる「ヒストンデアセチラーゼインヒビターを用いる神経変性疾患および脳の癌の処置」と題し、その全体の内容が本明細書によって参考として援用される、２００２年１０月１６日に出願された米国出願第１０／２７３，４０１号）。
【００５９】
代表的には、ＨＤＡＣインヒビターは、５つの一般的クラスに入る：１）ヒドロキサム酸誘導体；２）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）；３）環状テトラペプチド；４）ベンズアミド；および５）求電子ケトンである。
【００６０】
従って、ＨＤＡＣインヒビター化合物は、本発明における使用に適切である。例えば、適切なＨＤＡＣインヒビターは、１）ヒドロキサム酸誘導体；２）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）；３）環状テトラペプチド；４）ベンズアミド；５）求電子ケトン；および／またはヒストンデアセチラーゼを阻害し得る任意のその他のクラスの化合物を含む。
【００６１】
このようなＨＤＡＣインヒビターの例は、制限されないで：
Ａ）スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）（Ｒｉｃｈｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５、３００３〜３００７（１９９８））；Ｍ−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキシアミド（ＣＢＨＡ）（Ｒｉｃｈｏｎら、前述）；ピロキシアミド；ＣＢＨＡ；トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）およびトリコスタチンＣのようなトリコスタチンアナログ（Ｋｏｇｈｅら、１９９８．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒａｍａｃｏｌ．５６：１３５９〜１３６４）；サリチリヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）（Ａｎｄｒｅｗｓら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ ３０、７６１〜７６８（２０００））；アゼライックビスヒドロキサム酸（ＡＢＨＡ）（Ａｎｄｒｅｗｓら、前述）；アゼライック−１−ヒドロキサメート−９−アニリド（ＡＡＨＡ）（Ｑｉｕら、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ １１、２０６９〜２０８３（２０００））；６−（３−クロロフェニルウレイド）カルポイックヒドロキサム酸（３Ｃｌ−ＵＣＨＡ）、オキサムフラチン［（２Ｅ）−５−［３−［（フェニルスイブニル）アミノフェニル］−ペント−２−エン−４−イオノヒドロキサム酸（Ｋｉｍら、Ｏｎｇｃｏｇｅｎｅ、１８：２４６１ ２４７０（１９９９））；Ａ−１６１９０６、Ｓｃｒｉｐｔａｉｄ（Ｓｕら、２０００ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、６０：３１３７〜３１４２）；ＰＸＤ−１０１（Ｐｒｏｌｉｆｉｘ）；ＬＡＱ−８２４；ＣＨＡＰ；ＭＷ２７９６（Ａｎｄｒｅｗｓら、前述）；およびＭＷ２９９６（Ａｎｄｒｅｗｓら、前述）のようなヒドロキサム酸誘導体。
【００６２】
Ｂ）トラポキシンＡ（ＴＰＸ）−環状テトラペプチド（シクロ−（Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−ピペコリニル−Ｌ−２−アミノ−８−オキソ−９，１０−エポキシデカノイル））（Ｋｉｊｉｍａら、Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８、２２４２９〜２２４３５（１９９３））；ＦＲ９０１２２８（ＦＫ２２８、デプシペプチド）（Ｎａｋａｊｉｍａら、Ｅｘ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．２４１、１２６〜１３３（１９９８））；ＦＲ２２５４９７環状テトラペプチド（Ｈ．Ｍｏｒｉら、ＰＣＴ出願ＷＯ００／０８０４８（２０００年２月１７日））；アピシジン環状テトラペプチド［シクロ（Ｎ Ｏ−メチル−Ｌ−トリプトファニル−Ｌ−イソロイシニル−Ｄ−ピペコリニル−Ｌ−２−アミノ ｏ−８オキソデカノイル）］（Ｄａｒｋｉｎ−Ｒａｔｔｒａｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３、１３１４３１３１４７（１９９６））；アピシジンＩａ、アピシジンＩｂ、アピシジンＩｃ、アピシジンＩＩａ、およびアピシジンＩＩｂ（Ｐ．Ｄｕｌｓｋｉら、ＰＣＴ出願ＷＯ９７／１１３６６）；ＣＨＡＰ、ＨＣ−トキシン環状テトラペプチド（Ｂｏｓｃｈら、Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ ７、１９４１〜１９５０（１９９５））；ＷＦ２７０８２環状テトラペプチド（ＰＣＴ出願ＷＯ９８／４８８２５）；およびクラミドシン（Ｂｏｓｃｈら、前述）のような環状テトラペプチド。
【００６３】
Ｃ）酪酸ナトリウム（Ｃｏｕｓｅｎｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５４、１７１６〜１７２３（１９７９））；イソ吉草酸（ＭｃＢａｉｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．５３：１３５７〜１３６８（１９９７））；吉草酸（ＭｃＢａｉｎら、前述）；４フェニル酪酸（４−ＰＢＡ）（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１５、８７９〜８７３（１９９５））；フェニル酪酸（ＰＢ）（Ｗａｎｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５９、２７６６〜２７９９（１９９９））；プロピオン酸（ＭｃＢａｉｎら、前述）；ブチルアミド（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ、前述）；イソブチルアミド（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ、前述）；フェニルアセテート（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ、前述）；３−ブロモプロピオン酸（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ、前述）；トリブチリン（Ｇｕａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、６０、７４９〜７５５（２０００））；バルプロ酸およびバルプロ酸塩のような短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）誘導体。
【００６４】
Ｄ）ＣＩ−９９４；ＭＳ−２７−２７５［Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−［Ｎ−（ピリジン−３−イルメトキシカルボニル）アミノメチル］ベンズアミド］（Ｓａｉｔｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６、４５９２〜４５９７（１９９９））；およびＭＳ−２７−２７５の３’−アミノ誘導体（Ｓａｉｔｏら、前述）のようなベンズアミド誘導体。
【００６５】
Ｅ）トリフルオロメチルケトン（Ｆｒｅｙら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．（２００２）、１２、３４４３〜３４４７；Ｕ．Ｓ．６，５１１，９９０）、およびＮ−メチル−α−ケトアミドのようなα−ケトアミドのような求電子ケトン誘導体。
【００６６】
Ｆ）デプデシン（Ｋｗｏｎら、１９９８．ＰＮＡＳ ９５：３３５６〜３３６１）のようなその他のＨＤＡＣインヒビター。
【００６７】
好適なヒドロキサム酸を基礎にしたＨＤＡＣインヒビターは、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、ｍ−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサメート（ＣＢＨＡ）およびピリドキシアミドである。ＳＡＨＡは、ヒストンデアシラーゼ酵素の触媒ポケット中に直接結合することが示された。ＳＡＨＡは、培養中の形質転換細胞の細胞周期停止、分化および／またはアポトーシスを誘導し、そしてげっ歯類における腫瘍増殖を阻害する。
ＳＡＨＡは、固形腫瘍および血液学的癌の両方においてこれらの効果を誘導する際に有効である。ＳＡＨＡは、動物に毒性なしで動物中の腫瘍増殖を阻害する際に有効であることが示された。腫瘍増殖のこのＳＡＨＡで誘導された阻害は、腫瘍におけるアセチル化ヒストンの蓄積をともなう。ＳＡＨＡは、ラットにおける発癌物質（Ｎ−メチルニトロソウレア）で誘導された乳腫瘍の発症および継続する成長を阻害する際に有効である。ＳＡＨＡは、研究の１３０日間に亘ってそれらの食餌中でラットに投与された。従って、ＳＡＨＡは、その作用の機構が、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害を含む、非毒性の経口的に活性な抗腫瘍剤である。
【００６８】
ＳＡＨＡは、以下の構造式によって表され得る：
【００６９】
【化１３】
ピロキシアミドは、以下の構造式によって表され得る：
【００７０】
【化１４】
ＣＢＨＡは、以下の構造式によって表され得る：
【００７１】
【化１５】
１つの実施形態では、このＨＤＡＣインヒビターは、式Ｉによって表され得る：
【００７２】
【化１６】
ここで、Ｒ１およびＲ２は同じかまたは異なり得；Ｒ１およびＲ２が同じであるとき、各々は、置換または置換されていないアリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、シクロアルキルアミノまたはピペリジノ基であり；Ｒ１およびＲ２が異なるとき、Ｒ１＝Ｒ３−Ｎ−Ｒ４であり、ここで、Ｒ３およびＲ４の各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の分岐または非分岐アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、アルキルオキシ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ基、またはＲ３およびＲ４はともに結合してピペリジン基を形成し、Ｒ２はヒドロキシアミノ、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノまたはアルキルオキシ基であり、そしてｎは約４〜約８の整数である。
【００７３】
従って、別の実施形態では、本発明の方法で用いられるＨＤＡＣインヒビターは、式ＩＩによって表され得る：
【００７４】
【化１７】
ここで、Ｒ３およびＲ４の各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の分岐または非分岐アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、アルキルオキシ、アリールオキシまたはアリールアルキルオキシ基、またはＲ３およびＲ４はともに結合してピペリジン基を形成し、Ｒ２はヒドロキシルアミノ、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノまたはアルキルオキシ基であり、そしてｎは約４〜約８の整数である。
【００７５】
式ＩＩの特定の実施形態では、Ｒ２はヒドロキシアミノ、ヒドロキシル、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノまたはメチルオキシ基であり、そしてｎは６である。なお別の式ＩＩの実施形態では、Ｒ４は水素原子であり、Ｒ３は置換または非置換フェニルであり、そしてｎは６である。式ＩＩのさらなる実施形態では、Ｒ４は水素であり、そしてＲ３はα−、β−、またはγ−ピリジンである。
【００７６】
その他の特定の式ＩＩの実施形態では、Ｒ４は水素原子であり、そしてＲ３はシクロヘキシル基であり；Ｒ４は水素原子であり、そしてＲ３はメトキシ基であり；Ｒ３およびＲ４の各々は、一緒に結合してピペリジン基を形成し；Ｒ４は水素原子であり、そしてＲ３はヒドロキシル基であり；Ｒ３およびＲ４は両方メチル基であり、そしてＲ３はフェニルであり、そそしてＲ４はメチルである。
【００７７】
本発明における使用のために適切なさらなるＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＩＩＩによって表され得る：
【００７８】
【化１８】
ここで、ＸおよびＹの各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノアリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノ、またはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒは、水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル、アリールアルキルオキシ、またはアリールオキシ基であり；そしてｍおよびｎの各々は、独立して同じか、または互いに異なり、そして各々が約０〜約８の整数である。
【００７９】
特定の実施形態では、ＨＤＡＣインヒビターは、式ＩＩＩの化合物であり、ここで、Ｘ、ＹおよびＲは、各々ヒドロキシルであり、そしてｍとｎの両方は５である。
【００８０】
なお別の実施形態では、本発明の方法における使用に適切なＨＤＡＣインヒビター化合物は、構造式ＩＶによって表され得：
【００８１】
【化１９】
ここで、ＸおよびＹの各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して同じであるか、または互いに異なり、水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル、アリール、アルキルオキシ、またはアリールオキシ基であり；そしてｍ、ｎおよびｏの各々は、独立して同じか、または互いに異なり、そして各々が約０〜約８の整数である。
【００８２】
本発明における使用に適切なその他のＨＤＡＣインヒビターは、構造式Ｖを有する化合物を含む：
【００８３】
【化２０】
ここで、ＸおよびＹの各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して同じであるか、または互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル、アリール、アルキルオキシ、またはアリールオキシ基であり；そしてｍおよびｎの各々は、独立して同じか、または互いに異なり、そして各々が約０〜約８の整数である。
【００８４】
さらなる実施形態では、本発明の方法における使用に適切なＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＶＩを有し得：
【００８５】
【化２１】
ここで、ＸおよびＹの各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基であり；そしてｍおよびｎの各々は、独立して同じか、または互いに異なり、そして各々が約０〜約８の整数である。
【００８６】
なお別の実施形態では、本発明の方法において有用なＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＶＩＩを有し得：
【００８７】
【化２２】
ここで、ＸおよびＹの各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシＮアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒ１およびＲ２は、独立して同じであるか、または互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル、アリールアルキルオキシ、またはアリールオキシ基であり；そしてｍおよびｎの各々は、独立して同じか、または互いに異なり、そして各々が約０〜約８の整数である。
【００８８】
なおさらなる実施形態では、本発明における使用のために適切なＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＶＩＩＩを有し得：
【００８９】
【化２３】
ここで、ＸおよびＹの各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、またはアリールオキシアルキルアミノ基であり；そしてｎは約０〜約８の整数である。
【００９０】
本発明の方法における使用のために適切なさらなる化合物は、式ＩＸにより表されるものを含む：
【００９１】
【化２４】
ここで各々のＸおよびＹは、独立して同じであるか、または互いに異なり、これらは、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシルアミノ基、置換または非置換の、アルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒ１およびＲ２の各々が、独立して同じであり、または互いに異なり、これらは、水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル、アリール、アルキルオキシ、アリールオキシ、カルボニルヒドロキシアミノまたはフッ素基であり；そしてｍおよびｎの各々は、独立して同じであり、または互いに異なり、そして各々約０〜約８の整数である。
【００９２】
さらなる実施形態において、本発明での使用のために適切なＨＤＡＣインヒビターは、以下の構造式Ｘを有する化合物を含み：
【００９３】
【化２５】
ここでＲ１およびＲ２の各々が、独立して同じであり、または互いに異なり、これらは、ヒドロキシル、アルキルオキシ、アミノ、ヒドロキシルアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基である。特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは、構造式Ｘの化合物であり、ここでＲ１およびＲ２は、両方ヒドロキシルアミノである。さらなる実施形態において、本発明の使用のために適切なＨＤＡＣインヒビターは、以下の構造式ＸＩを有する：
【００９４】
【化２６】
ここでＲ１およびＲ２の各々が、独立して同じであり、または互いに異なり、これらは、ヒドロキシル、アルキルオキシ、アミノ、ヒドロキシルアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基である。特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＸＩの化合物であり、ここでＲ１およびＲ２は、両方ヒドロキシルアミノである。
【００９５】
さらなる実施形態において、本発明の使用のために適切なＨＤＡＣインヒビターは、以下の構造式ＸＩＩによって表される化合物を含む：
【００９６】
【化２７】
ここでＲ１およびＲ２の各々が、独立して同じであり、または互いに異なり、これらは、ヒドロキシル、アルキルオキシ、アミノ、ヒドロキシルアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基である。特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＸＩＩの化合物であり、ここでＲ１およびＲ２は、両方ヒドロキシルアミノである。
【００９７】
本発明の方法での使用に適切なさらなる化合物は、構造式ＸＩＩＩにより表される化合物を含む：
【００９８】
【化２８】
ここでＲは、置換または非置換の、フェニル、ピペリジン、チアゾール、２−ピリジン、３−ピリジンまたは４−ピリジンであり、ｎは、約４〜約８の整数である。
【００９９】
なお別の実施形態において、本発明での使用のために適切なＨＤＡＣインヒビターは、構造式（ＸＩＶ）により表され得るかまたはその薬学的に受容可能な塩である：
【０１００】
【化２９】
ここでＲは、置換または非置換の、フェニル、ピリジン、ピペリジン、またはチアゾール基であり、ｎは、約４〜約８の整数である。
【０１０１】
特定の実施形態において、Ｒは、フェニルであり、またはｎは５である。別の実施形態において、ｎは５であり、そしてＲは３−クロロフェニルである。
【０１０２】
本発明の使用のための別のＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＸＶにより表され得る：
【０１０３】
【化３０】
ここで各々のＲ１およびＲ２は、直接またはリンカーを介して結合され、これは、ヒドロキシル、置換または非置換の、アリール（例えば、ナフチル、フェニル、キノリニル、イソキノリニルまたはピリジル）、シクロアルキル、シクロアルキルアミノ、ピペリジノ、分枝したまたは分枝していない、アルキル、アルケニル、アリールアミノ（ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、アリールアルキルアミノ、アリールアルキル、アルキルオキシ、アリールオキシ、またはアリールアルコキシ基である；ｎは、約３〜約１０の整数であり、Ｒ３は、ヒドロキサム酸、ヒドロキシルアミノ、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、またはアルキルオキシ基である。
【０１０４】
リンカーは、アミド部分、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、または−ＣＨ２−であり得る。
【０１０５】
特定の実施形態において、Ｒ１は、−ＮＨ−Ｒ４であり、ここでＲ４は、ヒドロキシル、置換または非置換の、アリール（例えば、ナフチル、フェニル、キノリニル、イソキノリニルまたはピリジル）、シクロアルキル、シクロアルキルアミノ、ピペリジノ、分枝したまたは分枝していない、アルキル、アルケニル、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、アリールアルキルアミノ、アルキルオキシ、アリールアルキル、アリールオキシまたはアリールアルキシオキシ基である。
【０１０６】
式ＸＶのさらなるかつより特定のＨＤＡＣインヒビターは、式ＸＶＩにより表され得るインヒビターを含む：
【０１０７】
【化３１】
ここで各々のＲ１およびＲ２は、ヒドロキシル、置換または非置換のアリール（例えば、フェニル、ナフチル、キノリニル、イソキノリニルまたはピリジル）、シクロアルキル、シクロアルキルアミノ、ピペリジノ、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、アリールアルキルアミノ、分枝したまたは分枝していない、アルキル、アルケニル、アルキルオキシ、アリールアルキル、アリールオキシ、またはアリールアルキルオキシ基である；Ｒ３は、ヒドロキサム酸、ヒドロキシルアミノ、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノまたはアルキルオキシ基である；Ｒ４は、水素、ハロゲン、フェニルまたはシクロアルキル部分である；そしてＡは、同じでも異なっていても良く、これは、アミド部分、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５−、または−ＣＨ２−を表し、Ｒ５は、置換または非置換のＣ１−Ｃ５アルキルであり、そしてｎは、約３〜約１０の整数である。
【０１０８】
例えば、式ＸＶＩ中のより特定の構造を有するさらなる化合物は、構造式ＸＶＩＩにより表され得る：
【０１０９】
【化３２】
ここでＡは、アミド部分であり、Ｒ１およびＲ２は、置換または非置換のアリール（例えば、フェニル、ナフチル、キノリニル、イソキノリニルまたはピリジル）、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、アリールアルキルアミノ、アリールアルキル、アリールオキシ、またはアリールアルキルオキシ基から各々選択され、そしてｎは、約３〜約１０の整数である。
【０１１０】
例えば、Ａにてアミド部分を有する化合物が、以下の式により表され得る：
【０１１１】
【化３３】
別の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターが、以下の式ＸＶＩＩＩを有し得るかまたはその薬学的に受容可能な塩である：
【０１１２】
【化３４】
ここでＲ７は、置換または非置換のアリール（例えば、フェニル、ナフチル、キノリニル、イソキノリニルまたはピリジル）、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミンまたはチアゾールアミノ）、アリールアルキルアミノ（ａｒｙｌａｋｙｌａｍｉｎｏ）、アリールアルキル、アリールオキシまたはアリールアルキルオキシから選択され、そしてｎは、約３〜約１０の整数であり、そしてＹは、以下から選択される：
【０１１３】
【化３５】
。
【０１１４】
さらなる実施形態において、ＨＤＡＣインヒビター化合物は、式ＸＩＸまたはその薬学的に受容可能な塩を有し得る：
【０１１５】
【化３６】
ここでｎは、約３〜約１０の整数であり、Ｙは、以下から選択され：
【０１１６】
【化３７】
そして、Ｒ７’は、以下：
【０１１７】
【化３８】
から選択される。
【０１１８】
本発明における使用のためのさらなる化合物が、構造式ＸＸにより表され得る：
【０１１９】
【化３９】
ここでＲ２は、置換または非置換のアリール、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、アリールアミノ、アリールアルキル、またはアリールオキシ、アリールアルキルオキシから選択され、そしてｎは、３〜１０であり、そしてＲ７’は、以下から選択される：
【０１２０】
【化４０】
。
【０１２１】
本発明において有用なさらなるＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造式ＸＸＩまたはその薬学的に受容可能な塩により表され得る：
【０１２２】
【化４１】
ここで、Ａは、アミド部分であり、Ｒ１およびＲ２は、置換または非置換のアリール、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミンまたはチアゾールアミノ）アリールアルキルアミノ、アリールアルキル、アリールオキシまたはアリールアルキルオキシ基から各々選択され、Ｒ４は、水素、ハロゲン、フェニルまたはシクロアルキル部分であり、そしてｎは、約３〜１０の整数である。
【０１２３】
例えば、式ＸＸＩの化合物は、以下の構造：
【０１２４】
【化４２】
または以下の構造：
【０１２５】
【化４３】
により表され得、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ４およびｎは、式ＸＸＩの意味を有する。
さらに、ＨＤＡＣインヒビターは、以下の構造式ＸＸＩＩ：
【０１２６】
【化４４】
を有し、ここでＬは、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ＝ＣＨ）ｍ、フェニル、−シクロアルキル−、またはこれらの組み合わせからなる群から選択されるリンカーであり；そしてＲ７およびＲ８の各々が、独立して、置換されたまたは置換されていない、アリール、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノもしくはチアゾールアミノ）、アリールアルキルアミノ、アリールアルキル、アリールオキシまたはアリールアルキルオキシ基であり、ｎは、約３〜約１０の整数であり、そしてｍは、０〜１０の整数である。
【０１２７】
例えば、式ＸＸＩＩの化合物は、以下：
【０１２８】
【化４５】
であり得る。
【０１２９】
本発明での使用のために適切な他のＨＤＡＣインヒビターは、以下のより特定の式で示されるインヒビター：
【０１３０】
【化４６】
（ｎは、３〜１０の整数）またはエナンチオマー、あるいは
【０１３１】
【化４７】
（ｎは、３〜１０の整数）またはエナンチオマー、あるいは
【０１３２】
【化４８】
（ｎは、３〜１０の整数）またはエナンチオマー、あるいは
【０１３３】
【化４９】
（ｎは、３〜１０の整数）またはエナンチオマー、あるいは
【０１３４】
【化５０】
（ｎは、３〜１０の整数）またはエネンチオマーを含む。
【０１３５】
本発明の使用のために適切なさらに特定のＨＤＡＣインヒビターは、以下：
【０１３６】
【化５１】
【０１３７】
【化５２】
（ｎは、３〜１０の整数）、および以下の化合物：
【０１３８】
【化５３】
を含む。
【０１３９】
さらに特定のＨＤＡＣインヒビターは、以下の式ＸＸＩＩＩ：
【０１４０】
【化５４】
により表され得るものを含み、ここでＲ１は、置換または非置換の、アリール基、アリールアルキル基、アリールアミノ基、アリールアルキルアミノ基、アリールオキシ基またはアリールアルコキシ基であり、ｎは、３〜１０の整数である。特定の実施形態において、ｎは、構造式ＸＸＩＩＩの化合物について５である。
【０１４１】
特定の実施形態において、式ＸＸＩＩＩの化合物は、以下の構造：
【０１４２】
【化５５】
により表される。
【０１４３】
別の特定の実施形態において、式ＸＸＩＩＩの化合物は、以下の式：
【０１４４】
【化５６】
により表される。
【０１４５】
なお別の特定の実施形態において、式ＸＸＩＩＩの化合物が、以下の構造により表される：
【０１４６】
【化５７】
なお別の特定の実施形態において、式ＸＸＩＩＩの化合物は、以下の構造により表される：
【０１４７】
【化５８】
さらに特定のＨＤＡＣインヒビターは、以下の式ＸＸＩＶにより表され得：
【０１４８】
【化５９】
ここでＱ１は、置換または非置換のキノリニルまたはイソキノリニル基であり、そしてｎは、３〜１０の整数である。特定の好ましい実施形態において、ｎは、構造式ＸＸＩＶの化合物について５である。
【０１４９】
特定の実施形態において、式ＸＸＩＶの化合物は、以下の構造：
【０１５０】
【化６０】
により表される。
【０１５１】
さらに特定のＨＤＡＣインヒビターは、式ＸＸＶにより表され得るものを含み：
【０１５２】
【化６１】
ここでＱ１およびＱ２は、置換または非置換の、キノリニルまたはイソキノリニルであり、そしてｎは、約３〜約１０の整数である。特定の実施形態において、ｎは、構造式ＸＸＶの化合物について５である。
【０１５３】
特定の実施形態において、式ＸＸＶの化合物は、以下の構造により表される：
【０１５４】
【化６２】
。
【０１５５】
さらに特定のＨＤＡＣインヒビターは、以下の式ＸＸＶＩにより表されるものを含み：
【０１５６】
【化６３】
、ここでＲ１は、アリールアルキルであり、Ｒ２は、置換または非置換の、アリール基、アリールアルキル基、アリールアミノ基、アリールアルキルアミノ基、アリールオキシ基またはアリールアルコキシ基であり、Ａは、アミドであり、ｎは、３〜１０の整数である。特定の実施形態において、ｎは、構造式ＸＸＶＩの化合物について５である。
【０１５７】
特定の実施形態において、式ＸＸＶＩの化合物は、以下の構造により表される：
【０１５８】
【化６４】
。 特定の実施形態において、式ＸＸＶＩの化合物は、以下の構造により表される：
【０１５９】
【化６５】
。
【０１６０】
特定の実施形態において、式ＸＸＶＩの化合物は、以下の構造により表される：
【０１６１】
【化６６】
。
【０１６２】
このような化合物および他のＨＤＡＣインヒビターの別の例は、以下において見出され得る：米国特許第５，３６９，１０８号（１９９４年１１月２９日発行）、同第５，７００，８１１号（１９９７年１２月２３日発行）、同第５，７７３，４７４号（１９９８年６月３０日発行）、同第５，９３２，６１６号（１９９９年８月３日発行）、同第６，５１１，９９０号（２００３年１月２８日発行）（全てがＢｒｅｓｌｏｗに対するものである）；米国特許第５，０５５，６０８号（１９９１年１０月８日発行）、同第５，１７５，１９１号（１９９２年１２月２９日発行）、および同第５，６０８，１０８号（１９９７年３月４日発行）（全てがＭａｒｋらに対するものである）；米国仮特許出願番号６０／４５９，８２６（Ｂｒｅｓｌｏｗの名で２００３年３月４日出願）；ならびにＹｏｓｈｉｄａ，Ｍ．ら、Ｂｉｏａｓｓａｙｓ １７，４２３−４３０（１９９５）；Ｓａｉｔｏ，Ａ．ら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９６，４５９２−４５９７，（１９９９）；Ｆｕｒａｍａｉ Ｒ．ら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９８（１），８７−９２（２００１）；Ｋｏｍａｔｓｕ，Ｙ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（１１），４４５９−４４６６（２００１）；Ｓｕ，Ｇ．Ｈ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０，３１３７−３１４２（２０００）；Ｌｅｅ，Ｂ．Ｉ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（３），９３１−９３４；Ｓｕｚｕｋｉ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２（１５），３００１−３００３（１９９９）；ＰＣＴ公開出願ＷＯ０１／１８１７１（２００１年３月１５日公開）（Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒＣａｎｃｅｒ ＲｅｓｅａｒｃｈおよびＴｈｅ
Ｔｒｕｓｔｅｅｓ ｏｆ Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙに対する）；Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅに対するＰＣＴ出願公開ＷＯ０２／２４６１４４；Ｎｏｖａｒｔｉｓに対するＰＣＴ出願公開ＷＯＷＯ０２／２２５７７；Ｐｒｏｌｉｆｉｘに対するＰＣＴ出願公開ＷＯ０２／３０８７９；ＰＣＴ出願公開ＷＯ０１／３８３２２（２００１年５月３１日公開）、ＷＯ０１／７０６７５（２００１年９月２７日公開）およびＷＯ００／７１７０３（２０００年１１月３０日）（全てがＭｅｔｈｙｌｇｅｎｅ，Ｉｎｃ．に対する）；Ｆｕｊｉｓａｗａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄに対する１９９９年１０月８日に公開されたＰＣＴ公開出願ＷＯ００／２１９７９；Ｂｅａｃｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｌ．Ｌ．Ｃ．に対する１９９８年３月１１日に公開されたＰＣＴ出願公開ＷＯ９８／４００８０；ならびにＣｕｒｔｉｎ Ｍ．（ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ（２００２）１２（９）：１３７５−１３８４の現在の特許状態そして本明細書中で参考として引用される）。
【０１６３】
ＨＤＡＣインヒビターの特定の非限定的例は、以下の表で提供される。本発明が、以下に表した化合物に構造的に類似する任意の化合物を包含し、そしてこれらの化合物が、ヒストンデアセチラーゼを阻害し得ることに留意のこと。
【０１６４】
【化６７】
【０１６５】
【化６８】
【０１６６】
【化６９】
（定義）
「脂肪族基」は、非芳香族であり、炭素および水素のみからなり、必要に応じて１つ以上の不飽和単位（例えば、二重結合および／または三重結合）を含み得る。脂肪族基は、直鎖でも分枝鎖でも環状でもよい。直鎖または分枝鎖の場合、脂肪族基は、代表的に、約１〜約１２の炭素原子、より代表的には約１〜約６の炭素原子を含む。環状の場合、脂肪族基は、代表的に、約３〜約１０の炭素原子、より代表的には約３〜約７の炭素原子を含む。脂肪族基は、好ましくは、Ｃ１−Ｃ１２の直鎖または分枝鎖アルキル基（すなわち、完全に飽和した脂肪族基）、より好ましくは、Ｃ１−Ｃ６の直鎖または分枝鎖アルキル基である。例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルが挙げられる。
【０１６７】
本明細書中で使用される場合、「芳香族基」（「アリール基」とも呼ばれる）としては、本明細書中で定義されるような、炭素環式芳香族基、複素環式芳香族基（「ヘテロアリールとも呼ばれる」）および縮合多環式芳香環系が挙げられる。
【０１６８】
「炭素環式芳香族基」は、５〜１４の炭素原子の芳香族環であり、インダンのような５員環シクロアルキル基または六員環シクロアルキル基と縮合される炭素環式芳香族基を含む。炭素環式芳香環の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：フェニル、ナフチル（例えば、１−ナフチルおよび２−ナフチル）；アントラセニル（例えば、１−アントラセニル、２−アントラセニル）；フェナントレニル；フルオレノニル（例えば、９−フルオレノニル）、インダニルなど。炭素環式芳香環は、必要に応じて、以下に記載される指定された数の置換基で置換される。
【０１６９】
「複素環芳香族基」（または「ヘテロアリール」）は、５〜１４個の炭素の環原子およびＯ、Ｎ、またはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子の単環式、二環式または三環式芳香環である。ヘテロアリールの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ピリジル（例えば、２−ピリジル（α−ピリジルともいわれる）、３−ピリジル（β−ピリジルともいわれる）、および４−ピリジル（γ−ピリジルともいわれる））；チエニル（例えば、２−チエニルおよび３−チエニル）；フラニル（例えば、２−フラニルおよび３−フラニル）；ピリミジル（例えば、２−ピリミジルおよび４−ピリミジル）；イミダゾリル（例えば、２−イミダゾリル）；ピラニル（例えば、２−ピラニルおよび３−ピラニル）；ピラゾリル（例えば、４−ピラゾリルおよび５−ピラゾリル）；チアゾリル（例えば、２−チアゾリル、４−チアゾリルおよび５−チアゾリル）；チアジアゾリル；イソチアゾリル；オキサゾリル（例えば、２−オキサゾリル、４−オキサゾリルおよび５−オキサゾリル）；イソキサゾリル；ピロリル；ピリダジニル；ピラジニルなど。上記に定義される複素環芳香族（またはヘテロアリール）は、必要に応じて、芳香族について以下に記載されるように、指定の数の置換基で置換され得る。
【０１７０】
「縮合多環式芳香族」環構造は、１つ以上の他のヘテロアリールまたは非芳香族複素環式環を縮合している炭素環芳香族またはヘテロアリールである。例としては、以下が挙げられる：キノリニルおよびイソキノリニル（例えば、２−キノリニル、３−キノリニル、４−キノリニル、５−キノリニル、６−キノリニル、７−キノリニルおよび８−キノリニル、１−イソキノリニル、３−キノリニル、４−イソキノリニル、５−イソキノリニル、６−イソキノリニル、７−イソキノリニルおよび８−イソキノリニル）；ベンゾフラニル（例えば、２−ベンゾフラニルおよび３−ベンゾフラニル）；ジベンゾフラニル（例えば、２，３−ジヒドロベンゾフラニル）；ジベンゾチオフェニル；ベンゾチエニル（例えば、２−ベンゾチエニルおよび３−ベンゾチエニル）；インドリル（例えば、２−インドリルおよび３−インドリル）；ベンゾチアゾリル（例えば、２−ベンゾチアゾリル）；ベンゾオキサゾリル（例えば、２−ベンゾオキサゾリル）；ベンゾイミダゾリル（例えば、２−ベンゾイミダゾリル）；イソインドリル（例えば、１−イソインドリルおよび３−イソインドリル）；ベンゾトリアゾリル；プリニル；チアナフテニルなど。縮合多環式芳香族環構造は、必要に応じて、本明細書中で記載されるように、指定された数の置換基で置換され得る。
【０１７１】
「アラルキル基」（アリールアルキル）は、芳香族基、好ましくは、フェニル基で置換されたアルキル基である。好ましいアラルキル基は、ベンジル基である。適切な芳香族基は、本明細書中に記載され、適切なアルキル基は、本明細書中に記載される。アラルキル基に対する適切な置換基は、本明細書中に記載される。
【０１７２】
「アリールオキシ基」は、酸素を介して化合物に結合されたアリール基（例えば、フェノキシ）である。
【０１７３】
「アルコキシ基」（アルキルオキシ）は、本明細書中で使用される場合、酸素原子を介して化合物に連結された直鎖または分枝鎖のＣ１〜Ｃ１２または環式Ｃ３〜Ｃ１２アルキル基である。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシおよびプロポキシが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７４】
「アリールアルコキシ基」（アリールアルキルオキシ）は、アリールアルキルのアルキル部分上の酸素を介して化合物に結合されたアリールアルキル基（例えば、フェニルメトキシ）である。
【０１７５】
「アリールアミノ基」は、本明細書中で使用される場合、窒素を介して化合物に結合されたアリール基である。
【０１７６】
本明細書中で使用される場合、「アリールアルキルアミノ基」は、アリールアルキルのアルキル部分上の窒素を介して化合物に結合されたアリールアルキル基である。
【０１７７】
本明細書中で使用される場合、多くの部分または基は、「置換」または「非置換」のいずれかであるとして言及される。部分が置換されているとして言及される場合、置換について利用可能であることが当業者に公知の部分の任意の一部が、置換され得ることに留意すること。例えば、置換可能な基は、水素以外の基（すなわち置換基）で置換される水素原子であり得る。複数の置換基が存在し得る。複数の置換基が存在する場合、これらの置換基は、同じでも異なっていてもよく、置換基は、任意の置換可能な部位において置換され得る。置換についてのこのような意味は、当該分野で周知である。例示の目的として、本発明の範囲を限定するように解釈されるべきではないが、置換基である基の例は、以下である：アルキル基（これは、１つ以上の置換基（例えば、ＣＦ３）で置換され得る）、アルコキシ基（これはまた、例えば、ＯＣＦ３で置換され得る）、ハロゲンまたはハロ基（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ヒドロキシ、ニトロオキソ、−ＣＮ、−ＣＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、アジド、Ｎ−アルキルアミノまたはＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ（ここで、これらのアルキル基はまた、置換され得る）、エステル（−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、例えば、アルキル、アリールなどのような基で置換され得、これは、置換され得る）、アリール（最も好ましくは、フェニルであり、これは、置換され得る）、アリールアルキル（これは置換され得る）およびアリールオキシ。
【０１７８】
（立体化学）
多くの有機化合物は、平面分極光の平面を回転させる能力を有する、光学的に活性な形態で存在する。光学的に活性な化合物を記載する際に、接頭語ＤおよびＬまたはＲおよびＳは、そのキラル中心の周りでの分子の完全な立体配置を記載するのに使用される。接頭語ｄおよびｌまたは（＋）および（−）は、化合物による平面分極光の回転の記号を指定するために使用され、（−）またはｌは、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭語のついた化合物は、右旋性である。所定の化学構造について、これらの化合物は、立体異性体と呼ばれ、互いに重ねることができない鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体はまた、エナンチオマーとも呼ばれ、このような異性体の混合物は、しばしば、鏡像異性体混合物と呼ばれる。エナンチオマーの５０：５０混合物は、ラセミ混合物とも呼ばれる。本明細書中で記載される化合物の多くは、１つ以上のキラル中心を有し、それゆえに、異なる鏡像異性形態で存在し得る。所望であれば、キラル炭素は、アスタリスク（＊）を用いて指定され得る。キラル炭素への結合が本発明の式において直線として示される場合、キラル炭素の（Ｒ）および（Ｓ）立体配置の両方、つまり、エナンチオマーおよびその混合物の両方は、式中に含まれることが理解される。当該分野で使用されるように、キラル炭素についての完全な立体配置を特定することが望まれる場合、キラル炭素への結合の一方は、楔（平面より上にある原子への結合）として示され得、そして他方は、一連の短い平行線または短い平行線の楔（平面より下にある原子への結合）として示され得る。Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｌｏｄ−Ｐｒｅｌｏｇ系を使用して、キラル炭素に（Ｒ）または（Ｓ）立体配置を割り当て得る。
【０１７９】
本発明のＨＤＡＣインヒビターが、１つのキラル中心を含む場合、これらの化合物は、２つの鏡像異性形態で存在し、本発明は、エナンチオマーおよびエナンチオマーの混合物（例えば、ラセミ混合物ともいわれる特異的な５０：５０混合物）の両方を含む。これらのエナンチオマーは、以下の当該分野で公知の方法によって分離され得る：例えば、結晶化によって分離され得るジアステレオ異性体塩の形成（Ｄａｖｉｄ ＫｏｚｍａによるＣＲＣ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｏｐｔｉｃａｌ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｖｉａ Ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｉｃ Ｓａｌｔ Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，２００１）を参照のこと）；例えば、結晶化、ガス−液体クロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィーによって分離され得るジアステレオ異性誘導体または錯体の形成；一方のエナンチオマーとエナンチオマー特異的試薬との選択的反応（例えば、酵素的エステル化）；あるいは、キラルな環境（例えば、キラル支持体（例えば、キラルなリガンドが結合したシリカ）上、またはキラル溶媒の存在下）でのガス−液体クロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィー。所望のエナンチオマーが、上記の分離手順の１つによって別の化学実体に変換される場合、所望の鏡像異性形態を遊離させるのに、さらなる工程が必要とされることが理解される。あるいは、特定のエナンチオマーは、光学的に活性な試薬、基質、触媒または溶媒を使用する非対称合成によって、または非対称変換による一方のエナンチオマーの他方のエナンチオマーへの変換によって合成され得る。
【０１８０】
本発明の化合物のキラル炭素における特定の完全な立体配置の指定は、化合物の指定された鏡像異性形態が、エナンチオマー過剰（ｅｅ）であるか、または言い換えると、他方のエナンチオマーを実質的に含まないことを意味することが理解される。例えば、化合物の「Ｒ」形態は、化合物の「Ｓ」形態を実質的に含まず、従って、「Ｓ」形態のエナンチオマー過剰である。逆に、化合物の「Ｓ」形態は、化合物の「Ｒ」形態を実質的に含まず、従って、「Ｒ」形態のエナンチオマー過剰である。エナンチオマー過剰は、本明細書中で使用される場合、特定のエナンチオマーが５０％より多く存在する。例えば、エナンチオマー過剰は、約６０％以上、例えば、約７０％以上、例えば、約８０％以上、例えば、約９０％以上であり得る。特定の実施形態において、特定の完全な立体配置が指定される場合、示される化合物のエナンチオマー過剰は、少なくとも約９０％である。より特定の実施形態において、化合物のエナンチオマー過剰は、少なくとも約９５％、例えば、少なくとも約９７．５％、例えば、少なくとも約９９％エナンチオマー過剰である。
【０１８１】
本発明の化合物が、２つ以上のキラル炭素を有する場合、それは、２つより多い光学異性体を有し得、ジアステレオ異性形態で存在し得る。例えば、２つのキラル中心が存在する場合、この化合物は、４個までの光学異性体および２対のエナンチオマー（（Ｓ，Ｓ）／（Ｒ，Ｒ）および（Ｒ，Ｓ）／（Ｓ，Ｒ））を有し得る。これらのエナンチオマーの対（（Ｓ，Ｓ）／（Ｒ，Ｒ））は、互いに鏡像立体異性体である。鏡像ではない立体異性体（例えば、（Ｓ，Ｓ）および（Ｒ、Ｓ））は、ジアステレオマーである。ジアステレオマーの対は、当該分野で公知の方法（例えば、クロマトグラフィーまたは結晶化）によって分離され得、各々の対内の個々のエナンチオマーは、上記のように分離され得る。本発明は、このような化合物の各々の立体異性体およびそれらの混合物を含む。
【０１８２】
本明細書中で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に記載しない限り、単数および複数への言及を含む。従って、例えば、「活性因子」または「薬学的に活性な因子」との言及は、単一の活性因子および２つ以上の異なる活性因子の組み合わせを含み、「キャリア」との言及は、２つ以上のキャリアの混合物および単一のキャリアを含む、などである。
【０１８３】
開示される活性な化合物は、上記のように、それらの薬学的に受容可能な塩の形態で調製され得る。薬学的に受容可能な塩は、親化合物の所望の生物学的活性を有し、所望でない毒物学的な効果を与えない塩である。このような塩の例は、以下である：無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）と形成される酸付加塩；および有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギニン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸など）と形成される塩；（ｂ）アニオン原子（例えば、塩素、臭素、およびヨウ素）から形成される塩；ならびに（ｃ）塩基（例えば、アンモニウム塩）から誘導される塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムおよびカリウムの塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウムおよびマグネシウムの塩）、ならびに有機塩基（例えば、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン）との塩など。
【０１８４】
開示される活性化合物は、上記のように、その水和物（例えば、半水和物（ｈｅｍｉｈｙｄｒａｔｅ）、単水和物、二水和物、三水和物、四水和物など）の形態において調製され得る。
【０１８５】
本発明はまた、本明細書において開示されるＨＤＡＣインヒビターのプロドラッグを包含することが意図される。任意の化合物のプロドラッグは、周知の薬理学的技術を用いて作製し得る。
【０１８６】
上記に列挙した化合物に加えて、本発明は、そのような化合物のホモログおよびアナログの使用を包含することが意図される。この文脈において、ホモログは、上記に記載の化合物と実質的に構造類似性を有する分子であり、アナログとは、構造の類似性に関わりなく、実質的な生物学的類似性を有する分子である。
【０１８７】
（放射線治療）
本明細書に記載の処置との組み合わせにおける使用のために適切な放射線治療としては、（ａ）外部ビーム照射；および（ｂ）放射線放射放射性同位元素を含む放射性薬剤の使用が挙げられる。
【０１８８】
（外部ビーム照射）
癌の処置のための外部ビーム照射治療は、患者に対して外部の放射線供給源（代表的には、放射性同位元素（例えば、６０Ｃｏ、１３７Ｃｓ）、または高エネルギーＸ線供給源（例えば、線形加速器））を用いる。外部供給源は、腫瘍部位で患者の内部へ向けられた平行ビームを生じる。外部供給源放射線治療は、内部照射放射線治療のいくつかの問題を避けるが、望まれることなく、そして必然的に、腫瘍組織に沿った照射ビーム経路において、かなりの容量の非腫瘍組織または健常組織を照射する。
【０１８９】
患者中への外部照射ビームを、腫瘍部位に集中させながら、多様な「ガントリー（ｇａｎｔｒｙ）」角度で照射することによって、腫瘍組織における照射の所定用量を維持しながら、健常組織の照射の副作用を減少させ得る。健常組織の特定の容量要素は、放射ビームの経路に沿って、変化し、全体としての処置の間に、健常な組織のそのような要素の各々に対する全体としての容量を減少する。
【０１９０】
健常組織の照射はまた、照射ビームの軸に対して垂直とした場合の、腫瘍の断面全体に対して、照射ビームを厳密に平行にすることによって、減少し得る。そのような円周の平行化を生じるために、多数のシステムが存在し、そのいくつかは、複数のスライディングシャッターを使用し、そのスライディングシャッターは、それぞれの部分に関して、任意の輪郭の照射に対して放射線不透過なマスクを生じ得る。
【０１９１】
（放射性薬剤）
本明細書において定義する場合、「放射性薬剤」とは、少なくとも１つの放射線を照射する放射性同位元素を含む薬剤をいう。放射性薬剤は、種々の疾患の診断および／または治療のための核医療において慣用的に使用される。放射性同位元素標識薬剤（例えば、放射性同位元素標識抗体）は、放射線供給源として作用する、放射性同位元素（ＲＩ）を含む。本明細書において検討される場合、用語「放射性同位元素」は、金属および非金属放射性同位元素を含む。放射性同位元素は、放射性標識した薬剤の医療適用に基づいて選択される。放射性同位元素が金属製放射性同位元素である場合、金属製放射性同位元素をその他の分子と結合するために、キレート剤が、代表的には用いられる。放射性同位元素が非金属放射性同位元素である場合、非金属放射性同位元素が、代表的には、直接またはリンカーを解して、その他の分子に結合する。
【０１９２】
本明細書において使用する場合、「金属製放射性同位元素」は、インビボまたはインビトロにおける、治療的手順または診断的手順において有用である、任意の適切な金属製放射性同位元素である。適切な金属製放射性同位元素としては、限定されることはないが、アクチニウム−２２５、アンチモン−１２４、アンチモン−１２５、ヒ素−７４、バリウム−１０３、バリウム−１４０、ベリリウム−７、ビスマス−２０６、ビスマス−２０７、ビスマス−２１２、ビスマス−２１３、カドミウム−１０９、カドミウム−１１５ｍ、カルシウム−４５、セリウム−１３９、セリウム−１４１、セリウム−１４４、セシウム−１３７、クロミウム−５１、コバルト−５５、コバルト−５６、コバルト−５７、コバルト−５８、コバルト−６０、コバルト−６４、銅−６０、銅−６２、銅−６４、銅−６７、エルビウム−１６９、ユーロピウム−１５２、ガリウム−６４、ガリウム−６７、ガリウム−６８、ガドリニウム−ｌ５３、ガドリニウム−１５７、金−１９５、金−１９９、ハフニウム−１７５、ハフニウム−１７５〜１８１、ホルミウム−１６６、インジウム−１１０、インジウム−１１１、イリジウム−１９２、鉄−５５、鉄−５９、クリプトン−８５、鉛−２０３、鉛−２１０、ルテチウム−１７７、マンガン−５４、水銀−１９７、水銀−２０３、モリブデン−９９、ネオジム−１４７、ネプツニウム−２３７、ニッケル−６３、ニオブ−９５、オスミウム−１８５＋１９１、パラジウム−１０３、パラジウム−１０９、白金−１９５ｍ、プラセオジム−１４３、プロメチウム−１４７、プロメチウム−１４９、プロトアクチニウム−２３３、ラジウム−２２６、レニウム−１８６、レニウム−１８８、ルビジウム−８６、ルテニウム−９７、ルテニウム−１０３、ルテニウム−１０５、ルテニウム−１０６、サマリウム−１５３、スカンジウム−４４、スカンジウム−４６、スカンジウム−４７、セレン−７５、銀−１１０ｍ、銀−１１１、ナトリウム−２２、ストロンチウム−８５、ストロンチウム−８９、ストロンチウム−９０、硫黄−３５、タンタル−１８２、テクネチウム−９９ｍ、テルル−１２５、テルル−１３２、タリウム−２０４、トリウム−２２８、トリウム−２３２、タリウム−１７０、スズ−１１３、スズ−１１４、スズ−１１７ｍ、チタン−４４、タングステン−１８５、バナジウム−４８、バナジウム−４９、イッテルビウム−１６９、イットリウム−８６、イットリウム−８８、イットリウム−９０、イットリウム−９１、亜鉛−６５、ジルコニウム−８９、およびジルコニウム−９５が挙げられる。
【０１９３】
本明細書において使用する場合、「非金属製放射性同位元素」は、インビボまたはインビトロにおける、治療手順または診断手順において有用な、適切な非金属製放射性同位元素（非金属放射性同位元素）である。適切な非金属放射性同位元素としては、ヨウ素−１３１、ヨウ素−１２５、ヨウ素−１２３、リン−３２、アスタチン−２１１、フッ素−１８、炭素−１１、酸素−１５、臭素−７６、および窒素−１３が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９４】
放射線治療のために最も適切な同位体を同定することは、種々の因子に重み付けをすることが必要とされる。これら因子としては、腫瘍の取り込み、および保持、血中クリアランス、放射線送達の速度、放射性同位元素の半減期および比活性、ならびに経済的な様式における、大規模スケールの放射性同位元素製造の実現可能性が挙げられる。治療用放射性薬剤の要点は、必要量の放射線用量を、腫瘍細胞に送達し、そして収拾不可能な副作用を生じることなく、細胞障害性または殺腫瘍効果を達成する。
【０１９５】
治療用放射性同位元素の物理的な半減期は、腫瘍部位における放射性薬剤の生物学的半減期と類似であることが好ましい。例えば、放射性同位元素の半減期があまりに短いと、放射性薬剤が最大の標的／バックグラウンド比に到達する前に、多くの崩壊が生じる。一方、あまりに長い半減期は、正常組織に対して、不要な照射用量を生じ得る。理想的には、放射性同位元素は、最小の用量比を達成し、そして細胞周期の照射に感受性の相のほとんどの間に、全ての細胞を照射するのに十分長い半減期を有するできである。さらに、放射性同位元素の半減期は、製造、搬出、および輸送にための適切な時間を許容するように、十分長くなければならない。
【０１９６】
腫瘍治療における所定の適用のために放射性同位元素を選択することにおける他の実際の考慮は、アベイラビリティーおよび質である。純度は、十分でありかつ再現可能でなければならない、なぜなら微量の不純物は、放射性薬剤の放射性標識および放射性化合物純度に影響し得るからである。
【０１９７】
腫瘍中の標的レセプター部位は、代表的には、数が限られている。従って、放射性同位元素は、高い比活性を有することが好ましい。比活性は、主に、生産方法に依存する。微量金属混入物は、最小でなければならない。なぜなら、それらは、しばしば、キレート剤に対して放射性同位元素と競合し、そしてその金属の錯体は、放射性標識されたキレート剤と、レセプター結合について、しばしば競合するからである。
【０１９８】
本発明の方法における使用のために適切な放射のタイプは、変化し得る。例えば、照射は、その性質において、電磁気的または微粒子的であり得る。本発明の実施において有用な電磁気的照射としては、Ｘ線およびガンマ線が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の実施において有用な微粒子照射としては、電子ビーム（β粒子）、プロトンビーム、ニュートロンビーム、アルファ粒子、および負のπ中間子が挙げられるが、これらに限定されない。照射は、従来の放射線医学処置装置および方法を用いて、および、手術内の方法および定位方法によって、送達され得る。本発明の実施における使用のために適切な照射処置に関するさらなる考察は、Ｓｔｅｖｅｎ Ａ．Ｌｅｉｂｅｌら、、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（１９９８）（出版社Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ）の全体、そして特に第１３章および第１４章において見出され得る。照射はまた、標的送達のような他の方法によって送達され得る（例えば、放射活性「シード」によるか、または標的化された放射活性結合体の全身送達による）。Ｊ．Ｐａｄａｗｅｒら、Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ Ｒａｄｉｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｌｕｃａｎｔｈｏｎｅ ｉｎ Ｍｏｕｓｅ Ｃ３ＨＢＡ Ｍａｍｍａｒｙ Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｗｉｔｈ Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｌｕｃａｎｔｈｏｎｅ ｉｎ ａｎ Ｅｓｔｒｏｇｅｎ Ｂｉｏａｓｓａｙ、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．７：３４７−３５７（１９８１）。他の照射送達法を、本発明の実施において使用し得る。
【０１９９】
腫瘍治療のために、α粒子放射体およびβ粒子放射体が研究されている。α粒子は、特に良好な細胞毒である。なぜなら、これらは、１つまたは２つの細胞の直径内において、多量のエネルギーを散逸するからである。β粒子放射体は、エネルギーレベルに依存して、比較的長い侵入範囲（組織内で２〜１２ｍｍ）を有する。長い範囲の侵入は、不均一な血流および／またはレセプター発現を有する固形腫瘍について特に重要である。β粒子放射体は、それらが標的組織内において、不均一に分布する場合であっても、より均一な用量の分布を生じる。
【０２００】
（投与の様式および用量）
本発明の方法は、その投与が必要な患者に対して、第１の処置手順におけるヒストン脱アセチラーゼインヒビターの第１の量または用量、および第２の処置手順における第２の量または用量を、投与することを包含する。第１の量および第２の量はともに、治療的有効量を含む。
【０２０１】
本明細書において使用される用語としての「患者」とは、処置の受容者をいう。哺乳動物および非哺乳動物患者が、含まれる。特定の実施形態において、患者は動物（例えば、ヒト、イヌ、マウス、ネコ、ウシ、ヒツジ、ブタまたはヤギ）である。特定の実施形態において、患者はヒトである。
【０２０２】
（ＨＤＡＣインヒビターの投与）
本発明のＨＤＡＣインヒビターは、錠剤、カプセル剤（この各々は、徐放性処方、および時限式処方を含む）、ピル、粉末剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁剤、シロップ、およびエマルジョンのような経口形態において投与され得る。同様に、ＨＤＡＣインヒビターは、静脈内（ボーラスまたは注入）、腹腔内、皮下、または筋肉内の形態において投与され得る（全ては、薬学分野の当業者にとって周知の形態を使用する）。
【０２０３】
ＨＤＡＣインヒビターは、活性成分の徐放性放出を許容するような様式において、処方され得る、蓄積注射の形態または移植調製物の形態において投与され得る。活性成分は、ペレット内または小さな円柱内に圧縮され、そして、皮下に、または筋肉内に、蓄積注射または移植物として移植され得る。移植物は、不活性な物質（例えば、生分解性ポリマーまたは合成シリコーン（例えば、シラスチック、シリコーンゴム、またはＤｏｗ−Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって製造される他のポリマー）を利用し得る。
【０２０４】
ＨＤＡＣインヒビターはまた、リポソーム送達システム（例えば、小さい単層ベシクル、大きな単層ベシクル、および多層ベシクル）の形態において投与され得る。リポソームは、種々のリン脂質（例えば、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリン）から形成され得る。
【０２０５】
ＨＤＡＣインヒビターはまた、化合物分子がカップルした個別のキャリアとしてのモノクローナル抗体の使用によって、送達され得る。
【０２０６】
ＨＤＡＣインヒビターはまた、標的化することが可能な薬物キャリアとしての可溶性ポリマーを用いて調製され得る。そのようなポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシ−プロピル−メタクリルアミド−フェノール（ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙ−ｐｒｏｐｙｌ−ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｍｉｄｅ−ｐｈｅｎｏｌ）、ポリヒドロキシエチル−アスパルタミド−フェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド−ポリリジンが挙げられ得る。さらに、ＨＤＡＣインヒビターを、薬物の制御放出を達成するにおいて有用な生分解性ポリマー（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸のコポリマー、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、および架橋されたかまたは両親媒性のヒドロゲルのブロックコポリマー）を用いて調製し得る。
【０２０７】
ＨＤＡＣインヒビターを用いる投薬養生法は、以下を含む種々の因子に従って選択され得る：タイプ、種、年齢、体重、性別、および処置される癌の種類；処置される癌の重篤度（すなわち、段階）；投与の経路；患者の腎機能および肝機能；ならびに使用される特定の化合物またはその塩。通常の知識を有する医師または獣医は、疾患を処置（例えば、予防、阻害（完全または部分的）または進行の停止）するために必要とされる薬物の有効量を容易に決定および処方し得る。
【０２０８】
所望の癌を処置するために使用されるＨＤＡＣインヒビターの経口投薬量は、一日あたり約２ｍｇから約２０００ｍｇの間の範囲（例えば、一日あたり約２０ｍｇ〜約２０００ｍｇ、例えば、一日あたり約２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ）であり得る。例えば、経口投与量は、一日あたり、約２、約２０、約２００、約４００、約８００、約１２００、約１６００、または約２０００であり得る。一日あたりの総量は、単回用量において投与され得るか、または複数回の投薬（例えば、一日あたり２回、３回または４回）において投与され得る。
【０２０９】
例えば、患者は、約２ｍｇ／日から約２０００ｍｇ／日の間、例えば、約２０ｍｇ／日から約２０００ｍｇ／日の間、例えば、約２００ｍｇ／日から約２０００ｍｇ／日の間、例えば、約４００ｍｇ／日から約１２００ｍｇ／日の間を受領し得る。従って、一日あたり一回投与のために適切に調製された医薬は、約２ｍｇから約２０００ｍｇの間、例えば、約２０ｍｇから約２０００ｍｇの間、例えば、約２００ｍｇから約１２００ｍｇの間、例えば、約４００ｍｇ／日から約１２００ｍｇ／日の間を含み得る。ＨＤＡＣインヒビターは、単回用量において、または毎日２回、３回、または４回の用量に分けて投与され得る。従って、一日あたり２回の投与のために、適切に調製された医薬は、必要とされる毎日の用量の半分を含む。
【０２１０】
静脈内または皮下に、患者は、一日あたり約３〜１５００ｍｇ／ｍ２の間の送達に十分な量のＨＤＡＣインヒビターを受ける（例えば、一日あたり約３、３０、６０、９０、１８０、３００、６００、９００、１２００または１５００ｍｇ／ｍ２）。そのような量は、多数の適切な方法において投与され得る（例えば、一回の伸長された時間の間、または一日数回、大容量の低濃度のＨＤＡＣインヒビター）。その量は、一日以上の連続する日、断続的な日、または一週間（７日間）あたりのその組み合わせについて投与され得る。あるいは、短時間に、少量の高濃度のＨＤＡＣインヒビター（例えば、一日一回を一日以上、連続的にか、断続的にか、または一週間（７日間）あたりのその組み合わせ）。例えば、一日あたり３００ｍｇ／ｍ２の用量を、５連続日、処置あたり総量１５００ｍｇ／ｍ２について投与し得る。別の投薬養生法において、連続日数はまた、５であり得、処置は、３０００ｍｇ／ｍ２および４５００ｍｇ／ｍ２の総処置の総量について、連続する２週間または３週間の間続く。
【０２１１】
代表的には、静脈内の処方は、約１．０ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬの間、例えば、約２．０ｍｇ／ｍＬ、約３．０ｍｇ／ｍＬ、約４．０ｍｇ／ｍＬ、約５．０ｍｇ／ｍＬ、約６．０ｍｇ／ｍＬ、約７．０ｍｇ／ｍＬ、約８．０ｍｇ／ｍＬ、約９．０ｍｇ／ｍＬ、および約１０ｍｇ／ｍＬであり、上記の用量を達成する量において投与される。一例において、静脈内処方の十分な用量が、一日あたり患者に投与され得、その結果、一日の総用量は、約３００と約１５００ｍｇ／ｍ２の間である。
【０２１２】
グルクロン酸、Ｌ−乳酸、酢酸、クエン酸またはＨＤＡＣインヒビターの静脈内投与のために受容可能なｐＨ範囲において合理的な緩衝能を有する任意の薬学的に受容可能な酸／共役塩基を、緩衝液として用い得る。酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）を用いてｐＨが所望の範囲に調整された塩化ナトリウム溶液もまた、使用され得る。代表的には、静脈内処方のためのｐＨ範囲は、約５〜約１２の範囲であり得る。ＨＤＡＣインヒビターがヒドロキサム酸部分を有する場合の静脈内処方のための好ましいｐＨ範囲は、約９から約１２であり得る。適切な賦形剤の選択において、ＨＤＡＣインヒビターの可溶性および化学的適合性について、考慮すべきである。
【０２１３】
好ましくは、約５と約１２の間の範囲のｐＨにて、当該分野において周知の手順によって調製される皮下処方物は、適切な緩衝液および等張剤を含む。これらは、１つ以上の毎日の皮下投与において、ＨＤＡＣインヒビターの毎日の用量を送達するために、処方され得る（例えば、毎日１回、２回、または３回）。処方物の適切な緩衝液およびｐＨの選択は、投与されるＨＤＡＣインヒビターの可溶性に依存し、当業者によって容易に作製される。酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）を用いてｐＨが所望の範囲に調整された塩化ナトリウム溶液はまた、皮下処方物において使用され得る。代表的には、皮下処方物のｐＨ範囲は、約５から約１２の範囲内であり得る。ＨＤＡＣインヒビターがヒドロキサム酸部分を有する場合の皮下処方のための好ましいｐＨ範囲は、約９から約１２であり得る。適切な賦形剤の選択において、ＨＤＡＣインヒビターの可溶性および化学的適合性について、考慮すべきである。
【０２１４】
ＨＤＡＣインヒビターはまた、適切な鼻腔内ビヒクルの局所的使用を介して鼻腔内形態において、または当業者に周知の経皮皮膚パッチの形態を用いて経皮経路を介して、投与され得る。経皮送達システムの形態において投与するために、投薬量の投与は、当然に、投薬養生法を通じて、断続的よりもむしろ連続的である。
【０２１５】
ＨＤＡＣインヒビターは、意図された投与形態（すなわち、経口錠剤、カプセル、エリキシル剤、およびシロップなど）に関して適切に選択されそして従来の薬学的慣行と一致した、適切な薬学的希釈剤、賦形剤またはキャリア（これらをまとめて、本明細書において「キャリア」物質という）と混合された活性成分として投与され得る。
【０２１６】
例えば、錠剤またはカプセルの形態における経口投与のために、ＨＤＡＣインヒビターは、経口、非経口、薬学的に受容可能な、不活性なキャリア（例えば、ラクトース、スターチ、スクロース、グルコース、メチルセルロース、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｃｒｏｓｃａｒｍｅｌｌｏｓｅ）、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトールなど、またはこれらの組み合わせ）と組み合わせられ得る；液体形態における経口投与のために、経口薬物成分は、任意の経口、非毒性、薬学的に受容可能な不活性なキャリア（例えば、エタノール、グリセロール、水など）と組み合わせられ得る。さらに、所望される場合、または必要な場合、適切な結合剤、潤滑剤、崩壊剤、および着色剤もまた、混合物中に取り込まれ得る。適切な結合剤としては、スターチ、ゼラチン、天然の糖（例えば、グルコース、またはβラクトース、穀物甘味料、天然および合成のガム（例えば、アラビアゴム、トラガカントゴム、またはアルギン酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｃｒｏｓｃａｒｍｅｌｌｏｓｅ）、ポリエチレングリコール、ワックスなど）が挙げられる。これらの投薬形態において使用される潤滑剤としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤としては、限定されることはないが、スターチ、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられる。
【０２１７】
本明細書に記載され、そして本発明の方法における使用のために適切なヒストンデアセチラーゼインヒビター化合物の適切な薬学的に受容可能な塩は、従来の非毒性の塩であり、そして塩基または酸添加塩（例えば、無機塩基を有する酸（例えば、アルカリ金属塩（例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩など）、アンモニウム塩）；有機塩基を有する塩（例えば、有機アミン塩（例えば、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩など）など）；無機塩添加塩（例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩など）；有機カルボン酸またはスルホン酸添加塩（例えば、ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩など）；塩基性または酸性アミノ酸を有する塩（例えば、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸など）など）を含み得る。
【０２１８】
ヒストンデアセチラーゼインヒビターおよび照射はまた、以下の工程を包含する細胞中の癌を処置する方法において使用され得る：細胞を、ヒストンデアセチラーゼを阻害し得る化合物またはその塩の第１の量と接触させる工程、および、細胞を、放射線治療の第２の量と接触させて、癌を予防、阻害（完全に、または部分的に）あるいはその進行を停止る工程。細胞は、トランスジェニック細胞であり得る。別の実施形態において、細胞は、患者（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）中であり得る。
【０２１９】
特定の実施形態において、細胞中で癌を処置する第１の量は、ＨＤＡＣインヒビターの接触濃度であって、約１ｐＭから約５０μＭ、例えば、約１ｐＭから約５μＭ、例えば、約１ｐＭから約５００ｎＭ、例えば、約１ｐＭから約５０ｍＭ、例えば、約１ｐＭから約５００ｐＭである。特定の実施形態において、濃度は、約５．０μＭ未満である。別の実施形態において、濃度は、約５００ｎＭである。
【０２２０】
（外部ビーム照射の投与）
外部ビーム照射の投与のために、処置容量に対して、量は、少なくとも約１グレイ（Ｇｙ）画分で、少なくとも２日に一回である。特定の実施形態において、照射は、処置容量に対して、少なくとも約２グレイ（Ｇｙ）画分で、少なくとも１日一回投与される。別の特定の実施形態において照射は、処置容量に対して、１週間につき連続する５日間、少なくとも約２グレイ（Ｇｙ）画分で、少なくとも１日一回である。別の特定の実施形態において、処置容量に対して、１週間に３回、２日に一回、１０グレイ画分で、投与される。別の特定の実施形態において、少なくとも約２０Ｇｙの総量が、必要とする患者に投与される。別の特定の実施形態において、少なくとも約３０Ｇｙが、必要とする患者に投与される。別の特定の実施形態において、少なくとも約４０Ｇｙが、必要とする患者に投与される。
【０２２１】
代表的には、患者は、外部ビーム治療を、１週間に４回から５回受ける。全体の処置の経過は、癌の種類および処置の目的に依存して、通常、１〜７週間続く。例えば、患者は、３０日にわたって、２Ｇｙ／日の用量を受け得る。
【０２２２】
（放射性薬剤の投与）
多数の、放射性薬剤の投与方法が存在する。例えば、放射性薬剤は、標的化放射性結合体（例えば、放射性抗体、放射性ペプチドおよびリポソーム送達系）の標的化送達によってか、または全身送達によって、投与され得る。
【０２２３】
標的化送達の１つの特定の実施形態において、放射性標識化薬剤は、放射性標識した抗体であり得る。例えば、Ｂａｌｌａｎｇｒｕｄ Ａ．Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、２００１；６１：２００８−２０１４、およびＧｏｌｄｅｎｂｅｒ，Ｄ．Ｍ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２００２；４３（５）：６９３−７１３を参照のこと（これらの内容は、本明細書中において参考として援用される）。
【０２２４】
標的化送達の別の特定の実施形態において、放射性薬剤は、リポソーム送達システム（例えば、小さい単層ベシクル、大きな単層ベシクルおよび多層ベシクル）の形態において投与され得る。リポソームは、種々のリン脂質（例えば、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリン）から形成され得る。例えば、Ｅｍｆｉｅｔｚｏｇｌｏｕ Ｄ，Ｋｏｓｔａｒｅｌｏｓ Ｋ，Ｓｇｏｕｒｏｓ Ｇ．Ａｎ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｄｏｓｉｍｅｔｒｙ ｓｔｕｄｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｒａｄｉｏｎｕｃｌｉｄｅ−ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｉｎ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ ２００１；４２：４９９−５０４を参照のこと（この内容は、本明細書において参考として援用される）。
【０２２５】
標的化送達のなお別の特定の実施形態において、放射性標識された薬剤は、放射性標識ペプチドである、例えば、Ｗｅｉｎｅｒ ＲＥ、Ｔｈａｋｕｒ ＭＬ．、Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ａｐｐｌ Ｒａｄｉａｔ Ｉｓｏｔ ２００２ Ｎｏｖ；５７（５）：７４９−６３を参照のこと（この内容は、本明細書において参考として援用される）。
【０２２６】
標的化送達に加えて、近接照射療法を用いて、放射性薬剤を標的部位に送達し得る。近接照射療法は、放射線供給源を、腫瘍部位に可能な限り近くに配置する技術である。しばしば、供給源は、直接腫瘍内に挿入される。放射能供給原は、ワイヤ、シード、またはロッドの形態であり得る。一般に、セシウム、イリジウム、またヨウ素が使用される。
【０２２７】
２種類の近接照射療法が存在する：腔内処置および間隙処置。腔内処置において、放射線供給源を保持する容器が、腫瘍内または腫瘍近傍に配置される。供給源は、身体の腔内に配置される。
【０２２８】
間隙処置において、放射線供給源は、単独で、腫瘍内に配置される。これらの放射線供給源は、患者内に永久に留まり得る。もっともしばしば、放射線供給源は、数日後に患者から除去される。放射線供給源は、容器内にある。
【０２２９】
さらに、放射性薬剤は、ＨＤＡＣインヒビターについての上記に詳細に記載される投与の様式のいずれか１つを用いて、患者に投与され得る。
【０２３０】
必要な放射の量は、癌の特定の型について公知の用量に基づいて、当業者によって決定され得る。例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第５版、Ｒ．Ｃ．Ｂａｓｔら編集、Ｊｕｌｙ ２０００、ＢＣ Ｄｅｃｋｅｒを参照のこと（この内容は、本明細書において参考として援用される）。
【０２３１】
特定の実施形態において、照射がＨＤＡＣインヒビターとともに投与される場合、照射は、癌の停止を生じるか、または癌の退行を生じるのに有効な量で、投与され得る。
【０２３２】
（組み合わせ投与）
第１の処置手順であるヒストンデアセチラーゼインヒビターの投与は、第２の処置手順である放射線の前に、放射線処置の後に、放射線と同時に、またはこれらの組み合わせで行われうる。第１および第２の量は、投与前に組み合わせられ得るか、または異なる部位であるが、同時に投与され得る。例えば、総処置期間は、ヒストンデアセチラーゼインヒビターについて決定されうる。放射線は、インヒビターでの処置を行う前に施されうるか、またはインヒビターでの処置の後に施されうる。さらに、放射線処置は、インヒビター投与の期間の間に施されうるが、インヒビター処置期間全体にわたって行う必要はない。
【０２３３】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態をより完全に例示する。しかし、これらは、本発明の広い範囲を限定するとしては、如何様にも解釈されるべきではない。
【実施例】
【０２３４】
（実験法）
（材料および方法）
細胞培養：ヒト前立腺癌腫細胞株ＬＮＣａＰ（ＣＲＬ １７４０）を、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入した。ストックＴ−フラスコ培養物を、３７℃、９５％ 相対湿度、および５％ ＣＯ２にて、１０％ ウシ胎仔血清（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、１００ユニット／ｍＬ ペニシリン、および１００ｍｇ／ｍＬ ストレプトマイシン（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｗｏｏｄｌａｎｄ，ＣＡ）を補充したＲＰＭＩ １６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中で増殖させた。細胞濃度を、トリプシン処理した細胞を血球計算板で計数することにより決定した。
【０２３５】
スフェロイドイニシエーション：腫瘍細胞クラスタまたはスフェロイド（Ｓｐｈｅｒｏｉｄ）を、Ｙｕｈａｓらの液体重層技術に従って開始した。Ｙｕｈａｓ Ｊ．Ｍ．ら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，３７，３６３９−３６４３，１９７７を参照のこと。ＬＮＣａＰスフェロイド形成についての詳細および特徴付けは、Ｂａｌｌａｎｇｒｕｄ Ａ．Ｍ．ら．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５．３１７１ｓ−３１７６ｓ，１９９９に記載される。上記参考文献の内容全体は、参考として援用される。
【０２３６】
簡潔には、１％ 寒天（Ｄｉｆｃｏ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）で固化したＲＰＭＩ １６４０培地の薄層を含む液体重層プレートを、１００ｍｍまたは３５ｍｍのペトリ皿（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）から調製した。この培地に、トリプシン処理ストック培養物からの６．７×１０４細胞／ｍＬを接種した。得られた懸濁液を、１００ｍｍプレートに約１０６細胞を播種するために使用した。５〜７日間インキュベートした後、約２００μｍ直径のスフェロイドを、エッペンドルフピペットを使用して、目盛りを備えた倒立型位相差顕微鏡（Ａｘｉｏｐｈｏｔ ２；Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ Ｌｔｄ．，Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）下で選択した。
【０２３７】
処置プロトコル：各処置の後に、スフェロイドを、新たな培地中で懸濁することによって３回洗浄した。完全な処置は、ＳＡＨＡでのインキュベーション、放射線、またはＳＡＨＡおよび放射線両方への曝露のいずれかからなった。最低１２個のスフェロイドを、二連の実験において各条件に使用した。
【０２３８】
ＳＡＨＡインキュベーションについて、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭのストック溶液を培地で連続希釈して１〜５μＭ ＳＡＨＡを生成し、０．０１％未満の最終ＤＭＳＯ濃度にした。１２〜２４個の洗浄したスフェロイドを、上記のように寒天調製３５ｍｍペトリ皿に入れ、寒天表面全体が覆われるように、十分なＳＡＨＡを含む培地で覆った。
【０２３９】
外部ビーム照射のために、スフェロイドを、２．３Ｇｙ／分（Ｃｓ−１３７ Ｍｏｄｅｌ ６８；ＪＬ Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｇｌｅｎｄａｌｅ，ＣＡ）の線量速度で、セシウム照射器を使用して、６Ｇｙ外部ビーム光子放射線の強い線量に曝した。
【０２４０】
α放射線について、スフェロイドを、Ａｃ２２５−ＨｕＭ １９５ α放射線の放射活性（１００ ｎＣｉ／ｍＬ）濃度に２４時間曝した。Ａｃ２２５−ＨｕＭ １９５は、アクチニウム２２５で放射性標識された組換えヒト化抗ＣＤ３３モノクローナル抗体である。この抗体を、Ｄａｖｉｄ Ｓｃｈｅｉｎｂｅｒｇ，Ｍ．Ｄ．，Ｐｈ．Ｄ．（Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）の研究室から得た。
【０２４１】
完全な処置の後に、洗浄したスフェロイドを、２４ウェルプレートの別個の寒天調製ウェルに入れた。未処理スフェロイドを洗浄し、最初の選択の直後に分離した。各ウェル中の培地を置換し、１週間に２回容量測定を行った。倒立型顕微鏡および上記の目盛りを使用して、大きい方の直径と小さい方の直径（それぞれ、ｄｍａｘおよびｄｍｉｎ）を、Ｖ＝（１／６）・πｄｍａｘｄｍｉｎ２として計算した。一旦スフェロイドが顕微鏡の視野を超えたか、または個々の細胞もしくは複数の小さな細胞クラスタに断片化したら、容量モニタリングを停止した。各実験の最後に、再増殖しなかったスフェロイドを、成長アッセイ（ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ ａｓｓａｙ）を使用して生存度をスコア付けした。再増殖しなかったスフェロイドを含むウェルからの細胞またはスフェロイド断片を収集し、別個の寒天非含有（接着）２４ウェルプレートの個々のウェル中に入れ、２週間インキュベートし、次いで、コロニーについてスコア付けした。
【０２４２】
免疫組織化学：スフェロイド内の腫瘍細胞の増殖またはアポトーシスを、それぞれ、Ｋｉ６７媒介性またはＴｄＴ媒介性のｄＵＴＰ−ビオチンニックエンド標識（ＴＵＮＥＬ）染色によって評価した。処理の０、６、２４、または４８時間後に、スフェロイドを冷培地で洗浄し、４％ パラホルムアルデヒド中で４時間固定し、パラフィンブロック中に置いた。そのブロックの連続する５μｍ切片を、ミクロトームを用いて切断し、ポリ−Ｌ−リジンコーティングしたスライド硝子にマウントし、氷冷アセトン中で１０分間固定した。
【０２４３】
Ｋｉ６７染色を、Ｋｉ６７に対するモノクローナル抗体およびＭＯＭキット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を用いて行った。
【０２４４】
アポトーシス細胞を、Ｇａｖｒｉｅｌｉら（Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１１９：４９３−５０１，１９９２）から改変したＴＵＮＥＬを用いて染色した。ヘマトキシリン中での最終的な２分のインキュベーションを使用して、切片を対比染色した。未処理スフェロイドを、コントロールとして使用した；陽性コントロールを、ＤＮａｓｅ Ｉ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ，Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用した作製した。画像を、結合型Ｐｉｘｅｒａ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ Ｃａｍｅｒａおよび関連づけられたソフトウェア（Ｐｉｘｅｒａ Ｖｉｓｕａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ Ｓｕｉｔｅ，Ｐｉｘｅｒａ，Ｌｏｓ Ｇａｔｏｓ，ＣＡ）を用いて、倒立型位相差顕微鏡からデジタルで獲得した。画像を、スフェロイド切片内の反応性細胞の割合として、陽性染色についてスコア付けした。
【０２４５】
（統計学的分析）ＳＡＨＡと放射線との間の相乗効果を評価するために、腫瘍体積曲線の下の面積（ＡＵＣ）を、各スフェロイドについて測定した。腫瘍増殖の相乗的阻害は、平均して、各処置群を別個に含む相加的モデルによって予想されるより小さいｌｏｇ ＡＵＣを生じる、組み合わせ処置群として定義される。本発明者らは、この関係を、以下の不等式によって記載する：
ａｖｇ（Ｖ｜Ｓ＝５Ｍ，Ｒ＝６ Ｇｙ）＜Ｃ＋｛ａｖｇ（Ｖ｜Ｓ＝５μＭ，Ｒ＝０）−Ｃ｝＋｛ａｖｇ（Ｖ｜Ｓ＝０，Ｒ＝６ Ｇｙ）−Ｃ｝
ここで、Ｖは、ｌｏｇ ＡＵＣであり、Ｓ＝５μＭおよびＲ＝６Ｇｙは、実験において使用されるＳＡＨＡおよび放射線の線量を表し、そしてＣは、コントロール群における平均ｌｏｇ ＡＵＣである［Ｃ＝ａｖｇ（Ｖ｜Ｓ＝０，Ｒ＝０）］。相乗効果を試験するために、本発明者らは、平均ｌｏｇ ＡＵＣの２０００のブートストラップ反復を、４つの群の各々について計算し、そしてこの不等式が得られない反復の割合を計算した。この割合は、達成された有意性レベル（ｐ値）と呼ばれる。小さい達成された有意性レベルは、腫瘍増殖の相乗的阻害が組み合わせ処置に起因して起こったことの指標である。
【０２４６】
両側Ｔ検定を使用して、陽性に染色された細胞の百分率の有意な差異を試験した。
【０２４７】
（結果）
（実施例１）
（スフェロイド増殖に対するＳＡＨＡの影響）
化学療法および放射線に対する応答が、インビボで腫瘍において見られる応答をよく近似するスフェロイドにおいて、研究を行った（Ｓｔｕｓｃｈｋｅ，Ｍ．ら、Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ．２４：１１９−２６，１９９２；Ｓａｎｔｉｎｉ，Ｍ．Ｔ．ら、Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｂｉｏｌ．７５：７８７−９９、１９９９；Ｄｅｒｔｉｎｇｅｒ，Ｈ．ら、Ｒａｄｉａｔ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｂｉｏｐｈｙｓ．１９：１０１−７，１９８１）。
【０２４８】
スフェロイド増殖に対するＳＡＨＡの効果を、スフェロイドを、０μＭ、１．２５μＭ、２．５μＭ、および５μＭ、のＳＡＨＡと一緒に、１２０時間かまたは連続的にかのいずれかでインキュベートすることによって、試験した（図１Ａ〜Ｄ）。スフェロイド増殖を、１２０時間のＳＡＨＡとのインキュベーション後少なくとも４０日間、または４０日間の連続処理にわたって、モニタリングした。１．２５μＭのＳＡＨＡの濃度において、１２０時間と連続的との両方の曝露条件について、スフェロイド増殖は遅くなったが、停止しなかった。２．５μＭにおいて、完全な増殖停止が、１２０時間のインキュベーション期間にわたって観察された。増殖の阻害は、薬物曝露の終了後さらに４〜５日間、次いで、回復におけるこの遅延の後に、指数関数的増殖が続き、その後、プラトーが続いた（すなわち、ゴンペルツ成長（Ｂａｓｓｕｋａｓ，Ｉ．Ｄ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５４：４３８５−９２，１９９４９））。これは、未処理のスフェロイドを用いて得られるものと類似である。５μＭのＳＡＨＡとの１２０時間のインキュベーションの５日後、２．４倍の中央体積減少が見られ、この後、スフェロイド増殖は、ゴンペルツ速度論に戻った。スフェロイドが、０μＭ（ＳＡＨＡ曝露なし）、１．２５μＭ、２．５μＭおよび５μＭ、のＳＡＨＡ（５日間のインキュベーション）の後の開始体積より１０００倍大きい体積（体積が２倍になる時間の約１０倍）に達するために必要とされる時間は、それぞれ１６日間、２０日間、２３日間、および２９日間であり、それぞれ、ＳＡＨＡ処理されたスフェロイドについて、４日間、７日間、および１３日間の増殖の遅れを生じた。
【０２４９】
２．５μＭでのスフェロイドの連続的な曝露は、完全な増殖抑制を生じた；５μＭにおいて、スフェロイド体積の急激な損失が観察され、大部分のスフェロイドが、２０日目までに解離した。停止されたかまたは解離されたスフェロイドの代表的な形態学は、図２Ａ（５μＭ）および図２Ｂ（２．５μＭ）に示されている。
【０２５０】
ＳＡＨＡの、抗腫瘍細胞剤としての活性を評価するために、スフェロイドを使用して得られる結果を、単層培養実験と比較することが、有益である。ＬＮＣａＰ単層細胞培養において、２．５μＭのＳＡＨＡは、完全な増殖抑制を引き起こし、４日間にわたって細胞の殺傷が最小〜なしであり、そして５μＭのＳＡＨＡは、ＳＡＨＡインキュベーションの４８時間後に開始する、進行性の細胞殺傷を引き起こす（Ｂｕｔｌｅｒ，Ｌ．Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０：５１６５−７０．２０００）。
【０２５１】
これらの実験において、ＬＮＣａＰスフェロイドの、これらの濃度に対する体積応答性は、一般に、単層培養での結果と一致した（図１Ａ〜Ｄ）。しかし映像（図２Ａ〜Ｂ）は、これらの効果に対する時間スケールおよび病因学が、単層培養において見られるものとは異なることを明らかにした。５μＭにおいて、完全なスフェロイドの破壊は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの１３〜１６日後まで起こらなかった；そして２．５μＭにおける見かけの増殖阻害は、主として、スフェロイド表面上の細胞の連続的な損失に起因して生じるようであった。ＴＵＮＥＬ染色によって示されるように（以下および図５Ａ〜Ｃを参照のこと）、そしてスフェロイドにおける細胞の形態学および迅速な排除によって示唆されるように（図２Ａ）、ＳＡＨＡへの曝露後の細胞死は、主として、アポトーシスによる。
【０２５２】
（実施例２）
（スフェロイド増殖に対するＳＡＨＡおよび外部ビーム放射の影響）
外部ビーム（低ＬＥＴの高線量率照射）に対するＬＮＣａＰの用量−応答が、以前に報告された（Ｂａｌｌａｎｇｒｕｄ，Ａ．Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：２００８−１４，２００１；Ｅｎｍｏｎ，Ｒ．Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，提出された）。これらのデータに基づいて、３Ｇｙおよび６Ｇｙの吸収された線量を、組み合わせ研究において選択した。なぜなら、これらの放射線の用量は、単独で、形状が未処理曲線に一致するが、最初のスフェロイド体積の１０００倍に達するために、４〜１０日の遅れを有する、増殖曲線を与えたからである。ＳＡＨＡ用量−応答データ（図１Ａ〜Ｄ）に基づいて、５μＭのＳＡＨＡとの９６時間のインキュベーションを、組み合わせ研究のために選択した。組み合わせ処理を、スフェロイドをＳＡＨＡに４８時間曝露し、照射し、次いでさらに４８〜７２時間インキュベートすることによって実施し、その後、洗浄し、そして増殖をモニタリングした。
【０２５３】
スフェロイドとして増殖したＬＮＣａＰを、この研究において使用した。以下の処理レジメンを使用した：
Ａ：処理なし。
Ｂ：５μＭ ＳＡＨＡでの９６時間の処理。
Ｃ：２．３Ｇｙ／分の線量率でのＣｓ−１３７照射を使用する、６Ｇｙの急激な照射での処理（Ｃｓ−１３７モデル６８：ＪＬ Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ，Ｇｌｅｎｄａｌｅ，ＣＡ）。処理は、スフェロイドにわたって均一であり、そして０．２ｋｅＶ／μｍの低ＬＥＴを使用した。
Ｄ：合計９６時間の、５μＭ ＳＡＨＡでの処理であって、４８回の合計９６時間のＳＡＨＡ曝露に引き続いて、Ｃｓ−１３７照射基を使用する６Ｇｙの急激な照射（上記のような）による処理。
【０２５４】
３Ｇｙ（および１２０時間ＳＡＨＡ）を用いる組み合わせ研究は、スフェロイドの増殖における、ＳＡＨＡ用量に依存する適度な遅延を生じた；５μＭの濃度で、７日間の遅延が観察された（データは示さない）。
【０２５５】
６Ｇｙおよび５μＭのＳＡＨＡとの９６時間のインキュベーションを用いる組み合わせ研究は、完全な増殖阻害を引き起こし、１２のスフェロイドのいずれも、増殖アッセイにおいてコロニーを形成しなかった（図３Ｄ）。対照的に、６Ｇｙの放射線単独（図３Ｃ）または５μＭ ＳＡＨＡへの９６時間の曝露単独（図３Ｂ）は、最初の体積の１０００倍の増加について、それぞれ５日間および１５日間の遅延を生じた。これらの結果の統計学的分析は、併用療法から生じる腫瘍増殖の相乗的な阻害を示した（ｐ＜０．０１）。組み合わせて医療後の異なる時点での代表的なスフェロイドの形態学は、図４に示される。処理の終了の直後（４日目および９日目）、スフェロイドは、ＳＡＨＡのみの処理を用いて見られたものと類似の外観を有する。より後の時点で、スフェロイドの形態は、かなり変化する；これらのスフェロイドは、少数の膨張した、おそらく壊死性の細胞から構成されるようである。
【０２５６】
（実施例３）
（アポトーシスに対するＳＡＨＡおよび外部ビーム放射の影響）
ＳＡＨＡが放射線誘導アポトーシスを増加させるか否かを試験するために、単一治療または併用療法の終了後の種々の時点において、スフェロイドセクションのＴＵＮＥＬ染色を実施した。９６時間のＳＡＨＡインキュベーションの直後、スフェロイド表面上の細胞の大部分がアポトーシスを起こし、そしてスフェロイドの内部でのアポトーシスの証拠はほとんどない（図５Ａ）。この知見はまた、３日目および６日目の、ＳＡＨＡで処理したスフェロイドの形態学的外観と一致する（図２Ａ）。ＳＡＨＡインキュベーションの終了後４８時間目までに、スフェロイド表面でのアポトーシス性細胞は検出されず（これはおそらく、剥離（ｓｈｅｄｄｉｎｇ）に起因する）、そしてアポトーシス性細胞は、スフェロイド全体にわたって見出される。細胞細片のポケットもまた、内部において明らかである。これらは、ＳＡＨＡインキュベーションの終了直後に明らかであるが、６時間後および２４時間後に、より顕著になる。ＳＡＨＡおよび放射線で処理されたスフェロイドのＴＵＮＥＬ染色は、ほとんど同じパターンを生じ、このことは、ＳＡＨＡがかなりのアポトーシスを誘導するが、組み合わせを用いて見られる相乗的なスフェロイドの応答は、増強されたアポトーシスによっては説明され得ないことを示唆する（図７Ａ）。
【０２５７】
（実施例４）
（増殖に対するＳＡＨＡおよび外部ビーム放射線の影響）
実施例３に示されるＴＵＮＥＬ染色結果とは対照的に、Ｋｉ６７染色によって増殖活性を試験する、対応する免疫組織学的研究は、組み合わせに対して、各処理単独についての細胞増殖におけるかなりの差異を示した（図６Ａ〜Ｃおよび７Ｂ）。ＳＡＨＡとの９６時間のインキュベーションの終了時に、スフェロイドを構成する事実上全ての細胞が、周期を停止した。このことは、ＳＡＨＡの公知の細胞周期阻害性と一致する。阻害効果は短寿命であり、そして６〜２４時間のかすかな陽性Ｋｉ６７染色が見られ得る。４８時間目までに、多くの細胞が、セクション全体にわたって、ＳＡＨＡのみで処理されたスフェロイドにおけるＫｉ６７染色の増加を示す。このような染色のいずれも、組み合わせを用いて処理されたスフェロイドにおいては、見られない（ｐ＜０．０１）。
【０２５８】
（実施例５）
（スフェロイド増殖に対するＳＡＨＡおよびα放射線の影響）
ＳＡＨＡとα粒子放出放射性同位体との組み合わせの影響を試験するために、スフェロイドを２４時間、１００ｎＣｉ／ｍＬのＡｃ−２２５に曝露し、次いでＳＡＨＡに９６時間曝露することによって、組み合わせ処理を実施した。
【０２５９】
ＬＮＣａＰ細胞は、上記のようにスフェロイドとして増殖した。以下の処理レジメンを使用した：
Ａ：処理なし。
Ｂ：５μＭ ＳＡＨＡでの９６時間の処理。
Ｃ：１００ｎＣｉ／ｍＬのＡｃ２２５−ＨｕＭ１９５での２４時間の処理。
Ｄ：ＳＡＨＡ処理の前の、１００ｎＣｉ／ｍＬのＡｃ２２５−ＨｕＭ１９５での２４時間の処理と組み合わせた、合計９６時間の、５μＭ ＳＡＨＡでの処理。
【０２６０】
Ａｃ２２５−ＨｕＭ１９５への２４時間の曝露、引き続く５μＭ ＳＡＨＡとの９６時間のインキュベーションを用いる組み合わせ研究は、完全な増殖阻害を引き起こし、これは、５０日間の期間にわたって維持された（図８）。対照的に、Ａｃ２２５−ＨｕＭ１９５処理単独では、スフェロイドの増殖阻害を引き起こさず、そして５μＭ ＳＡＨＡへの９６時間の曝露単独では、最初の１０日間の遅延を生じ、引き続いて、スフェロイド増殖は、３０日後に、ほぼ、コントロールである未処理のスフェロイド体積のレベルになった。抗ＣＤ３３抗体を、これらの実験において選択した。なぜなら、この抗体は、前立腺癌細胞にもスフェロイドにも結合しないことが既知であり、従って、インキュベーション期間、およびＡｃ２２５放射性核種によって送達されるα粒子の線量の制御を可能にすることが公知であるからである。「無関係の」抗体の使用は、スフェロイドに送達された吸収された線量を計算することを、より容易にする。なぜなら、インキュベーション期間を超える放射能の保持がないからである。このことは、用量応答関係を確立する際、および観察される相乗効果が、抗体によって媒介される効果よりむしろ、主としてＳＡＨＡと放射線との組み合わせに起因することを確実にする際に、重要である。実際に、腫瘍細胞上の抗原部位を認識する特異的抗体が、放射性核種を送達するために使用され得る。
【０２６１】
（知見の要旨）
放射線とＳＡＨＡとの組み合わせは、増殖抑制を生じ、これは、各様式単独と比較して、スフェロイド体積の１万倍〜１０万倍の差異を導いた（図３Ａ〜Ｄ。組み合わせ処理されたスフェロイドに対するＳＡＨＡ単独についてのＴＵＮＥＬ染色の結果は、効力の相乗的増加が、増強されたアポトーシスの結果として生じるのではないようであることを示唆する（図５Ｂおよび図７Ａに対して図５Ａ））。この観察は、併用療法の直後および数週間から１ヶ月を超えての後の、スフェロイドの形態学的特徴と一致する。６Ｇｙで照射（図４、４日間）されたスフェロイドのＳＡＨＡ曝露の終了時に、これらのスフェロイドの形態学的外観は、ＳＡＨＡ単独で処理されたスフェロイドについて観察されるものと類似しており、そしてこのことは、ＳＡＨＡにより誘導されるアポトーシスと一致する。対照的に、１４〜４２日目の形態は、細胞の膨張および溶解を示し、これは、壊死による死と一致する。
【０２６２】
ＳＡＨＡ単独と組み合わせ処理との間のスフェロイドの発生運命の分岐の最初の証拠が、Ｋｉ６７染色において観察された（図６Ａ〜Ｃおよび７Ｂ）。５μＭ ＳＡＨＡ単独とのインキュベーションの終了の４８時間後、増殖する細胞が観察され、一方で、このような回復は、ＳＡＨＡおよび放射線で処理されたスフェロイドにおいて見出されなかった；使用される投薬量において、放射線単独では、Ｋｉ６７染色によって証拠付けられるように、細胞増殖を変化させなかった（図６Ｃ、パネルＨ）。一緒にすると、増殖およびアポトーシスのデータは、放射線によって増強されたＳＡＨＡの効果は、放射線によって誘導される増加したアポトーシスよりむしろ、主として、ＳＡＨＡとのインキュベーション後の、細胞の引き続く増殖の減少に起因することを示唆する。
【０２６３】
細胞が、組み合わせたＳＡＨＡと放射線との処理に曝露された後に周期を再開し得ないことは、放射線により誘導される損傷の修復の破壊、または他の修復可能なＤＮＡ損傷の増強を示し得る。
【０２６４】
本発明は、その好ましい実施形態を参照して、特に図示および記載されたが、形式および細部における種々の変化が、添付の特許請求の範囲によって包含される本発明の範囲から逸脱することなくなされ得ることが、当業者によって理解される。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本願は、米国仮出願第６０／３７３，０３３号（２００２年４月１５日出願）の優先権を主張する。上記出願の教示全体は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（政府支援）
本発明は、全体または一部において、国立癌センターからのＣｏｒｅ支援（支援番号０８７４８）およびＮＩＨからのＣＡ０５８２６によって支援された。政府は、本発明において特定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
正常な組織のホメオスタシスは、細胞増殖の速度と細胞死の速度との間の複雑なバランスによって達成される。細胞増殖の速度を増加させるか、または細胞死の速度を減少させるかのいずれかによるこのバランスの崩壊は、細胞の異常な増殖を引き起こし得、そして癌の発生における主要な現象であると考えられている。癌の処置のための従来の戦略としては、化学療法、放射線療法、手術、生物学的療法またはそれらの組み合わせが挙げられる；しかし、これらの戦略は、特異性の欠落および正常な組織に対する過剰な毒性によって制限されている。さらに、特定の癌は、化学療法のような処置に対して耐性であり、そして手術のようなこれらの戦略のいくつかは、常に実行可能な代替であるわけではない。
【０００４】
癌細胞は、特定の種類の放射線を用いる攻撃によって、弱められ、最終的には殺傷され得、したがって、放射線療法は、癌について重要な処置である。例えば、前立腺癌の場合、癌の放射線療法の遡及的分析により、原発性腫瘍の局所コントロールを達成できないことは、疾患の最終的な転移性拡散と大きく関連していることが証明されている（Ｙｏｒｋｅ，Ｅ．Ｄ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：２９８７−９３（１９９３）；Ｆｕｋｓ，Ｚ．ら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．２１：５３７−４７（１９９１））。また、再発の早期マーカー（例えば、ＰＳＡ）のアベイラビリティにより、前立腺癌の放射線療法において使用される標準的な投薬レジメンが、不適切であることも示唆されている（Ｐｏｌｌａｃｋ，Ａ．ら、Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ．５３：１０９７−１１０５（２００２））。これらの２つの観察は、３Ｄ立体処置および強度調節放射線療法（ＩＭＲＴ）のような、正常な器官の曝露を最小限にしか増加させずに治療用放射線の線量を増加させることを可能にする技術の研究のための機動力を提供した（Ｚｅｌｅｆｓｋｙ，Ｍ．Ｊ．ら，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒ．Ｏｎｃｏｌ．５５：２４１−９（２０００））。用量送達を増加させることなく治療効率を増加させるためのアプローチとしての放射線増感剤の使用もまた、研究されている（Ｌａｗｔｏｎ，Ｃ．Ａ．ら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．３６：６７３−８０（１９９６））。
【０００５】
癌の処置はまた、化学療法剤の使用を包含し得る。例えば、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）は、ヒドロキサム酸ベースの混成極性化合物であり、この化合物は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）活性を阻害し、そして末端分化、細胞増殖の停止および／または腫瘍細胞のアポトーシスをインビトロで誘導する（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）。ＳＡＨＡは、末端分化、細胞増殖の停止および／または腫瘍細胞のアポトーシスを誘導し得るヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターのクラスに属する。この化合物は、検出可能な毒性を最小限か全く伴うことなく、ヌードマウスにおける前立腺癌異種移植片の阻害を示した（Ｂｕｔｌｅｒ，Ｌ．Ｍ．ら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０：５１６５−７０（２０００）。固形腫瘍および血液腫瘍（前立腺癌を含む）の処置のためのＩ期試験は完了している（Ｋｅｌｌｙ，Ｗ．Ｋ．ら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ １１：１６９５−７１３（２００２）；Ｋｅｌｌｙ，Ｗ．Ｋ．ら，ＡＳＣＯ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ，Ｏｒｌａｎｄｏ，ＦＬ，２００２，ｐｐ．１８３１）。
【０００６】
代表的に、ＨＤＡＣインヒビターは、以下の５つの一般的なクラスに入る：Ａ）ヒドロキサム酸誘導体；Ｂ）環状テトラペプチド；Ｃ）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）；Ｄ）ベンズアミド誘導体；およびＥ）求電子性ケトン誘導体。
【０００７】
併用療法は、しばしば、癌の処置において用いられる。例えば、２つ以上の許容された治療（例えば、化学療法および放射線療法）が用いられている。特定の併用療法から誘導される治療効果は、ＳｔｅｅｌおよびＰｅｃｋｈａｍ（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．５：８５−９１（１９７９））によって、４つの一般的なカテゴリーの下で分類されている。これらのカテゴリーは、以下である：１）空間的協働−化学療法および放射線療法は、異なる解剖学的部位における疾患を撲滅する；２）毒性非依存性−化学療法に起因する殺傷が、非オーバーラップ正常器官毒性に起因して放射線療法から誘導される殺傷に加えられる；３）正常組織の保護−多くの線量の放射線を標的に送達することを可能にする薬剤；４）腫瘍応答の増強−１つの薬剤（化学療法または放射線）は、腫瘍細胞を他の薬剤に対して優勢に「感作」し、その結果、これら２つの効果が、各個の効果を加えることによって予測される効果よりも大きくなる。
【０００８】
初めの２つのカテゴリーは、２つの薬剤の間の相互作用を必要としない。組合わせた放射線療法／化学療法に起因する治療効果の臨床例は、一般に、カテゴリー１および２に入り、ここでカテゴリー１は、組み合わせ様式療法のための優勢な臨床原理である。カテゴリー３および４に対応する治療効果は、研究室で観察されているが、臨床への移行は遅れている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．（１９９８）９５：３００３−７
【非特許文献２】Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（２００１）１３：４７７−８３
【非特許文献３】Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａら，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ （２００１）１：１９４−２０２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
上記の観点から、癌は、多くの潜在的に有効な処置が利用可能である疾患である。しかし、種々のタイプの癌の罹患率およびそれが有し得る重大な影響に起因して、より効果的な処置、特に、現在利用可能な形態の処置よりも小さい有害な副作用を伴う処置が、必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
（発明の要旨）
本発明は、以下を提供する。
（項目１）
癌の処置が必要な患者において、癌を処置するための方法であって、該患者に、第１の処置手順において第１量のヒストンデアセチラーゼインヒビター、および第２の処置手順において第２量の放射線を投与する工程を包含し、ここで、該第１量および第２量が、一緒になって治療的有効量を構成する、方法。
（項目２）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ヒドロキサム酸誘導体、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）、環式テトラペプチド、ベンズアミド誘導体、または求電子性ケトン誘導体である、方法。
（項目３）
項目２に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＳＡＨＡ、ピロキサミド、ＣＢＨＡ、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、トリコスタチンＣ、サリチルヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）、アゼライックビスヒドロキサム酸（ＡＢＨＡ）、アゼライック−１−ヒドロキサメート−９−アニリド（ＡＡＨＡ）、６−（３−クロロフェニルウレイド）カプロン酸ヒドロキサム酸（３Ｃｌ−ＵＣＨＡ）、オキサムフラチン、Ａ−１６１９０６、スクリプタイド、ＰＸＤ−１０１、ＬＡＱ−８２４、ＣＨＡＰ、ＭＷ２７９６、およびＭＷ２９９６からなる群より選択されるヒドロキサム酸誘導体である、方法。
（項目４）
項目２に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、トラポキシンＡ、ＦＲ９０１２２８（ＦＫ２２８またはデプシペプチド）、ＦＲ２２５４９７、アピシジン、ＣＨＡＰ、ＨＣ−毒素、ＷＦ２７０８２、およびクラミドシンからなる群より選択される環式テトラペプチドである、方法。
（項目５）
項目２に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、酪酸ナトリウム、イソバレレート、バレレート、４ フェニルブチレート（４−ＰＢＡ）、フェニルブチレート（ＰＢ）、プロピオネート、ブチルアミド、イソブチルアミド、フェニルアセテート、３−ブロモプロピオネート、トリブチリン、バルプロ酸およびバルプロエートからなる群より選択される、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）である、方法。
（項目６）
項目２に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＣＩ−９９４、ＭＳ−２７−２７５（ＭＳ−２７５）およびＭＳ−２７−２７５の３’−アミノ誘導体からなる群より選択されるベンズアミド誘導体である、方法。
（項目７）
項目２に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、トリフルオロメチルケトンおよびα−ケトアミドからなる群より選択される求電子性ケトン誘導体である、方法。
（項目８）
項目２に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、デプデシンである、方法。
（項目９）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化１】
またはその薬学的に受容可能な塩によって表される、方法。
（項目１０）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化２】
またはその薬学的に受容可能な塩によって表されるピロキサミドである、方法。
（項目１１）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化３】
またはその薬学的に受容可能な塩によって表される、方法。
（項目１２）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化４】
またはその薬学的に受容可能な塩、溶媒和物もしくは水和物によって表され、ここで：
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく；
Ｒ１およびＲ２が、同じである場合、各々は、置換または非置換のアリールアミノシクロアルキルアミノ基またはピペリジノ基であり；
Ｒ１およびＲ２が、異なるＲ１＝Ｒ３−Ｎ−Ｒ４である場合、Ｒ３およびＲ４の各々は、独立して、互いに同じであるか、または異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の分枝または非分枝のアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリール基、アルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基であるか、またはＲ３およびＲ４は、一緒に結合して、ピペリジン基を形成し；
Ｒ２は、ヒドロキシアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはアルキルオキシ基であり；そして
ｎは、約４〜約８の整数である、方法。
（項目１３）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化５】
またはその薬学的に受容可能な塩、溶媒和物もしくは水和物によって表され、ここで：
Ｒが、置換または非置換のフェニル基、ピペリジノ基、チアゾリル基、２−ピリジル基、３−ピリジル基または４−ピリジル基であり；そして
ｎが、約４〜約８の整数である、
方法。
（項目１４）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化６】
またはその薬学的に受容可能な塩、溶媒和物もしくは水和物によって表され、ここで：
Ａは、アミド部分であり；
Ｒ１およびＲ２が、各々、置換または非置換のアリール基、アリールアミノ基、アリールアルキルアミノ基、アリールアルキル基、アリールオキシ基またはアリールアルキルオキシ基から選択され；
Ｒ４が、水素、ハロゲン基、フェニル基またはシクロアルキル基であり；そして
ｎが、約３〜約１０の整数である、方法。
（項目１５）
項目１に記載の方法であって、前記第２の処置手順の放射線が、外部ビーム放射線である、方法。
（項目１６）
項目１に記載の方法であって、前記第２の処置手順の放射線が、放射性医薬品である、方法。
（項目１７）
項目１６に記載の方法であって、前記放射性医薬品が、放射性結合体である、方法。
（項目１８）
項目１７に記載の方法であって、前記放射性結合体が、放射標識抗体である、方法。
（項目１９）
項目１に記載の方法であって、前記放射線が、電磁放射線および粒子状放射線からなる群より選択される、方法。
（項目２０）
項目１９に記載の方法であって、前記電磁放射線が、Ｘ線、γ線およびそれらの任意の組合せからなる群より選択される、方法。
（項目２１）
項目１９に記載の方法であって、前記粒子状放射線が、電子ビーム（β粒子）、陽子線、中性子線、α粒子および負性π中間子からなる群より選択される、方法。
（項目２２）
項目２１に記載の方法であって、前記粒子状放射線が、α粒子である、方法。
（項目２３）
項目１に記載の方法であって、合計少なくとも約１Ｇｙの放射線が前記患者に投与される、方法。
（項目２４）
項目１に記載の方法であって、合計少なくとも約１０Ｇｙの放射線が前記患者に投与される、方法。
（項目２５）
項目１に記載の方法であって、合計少なくとも約２０Ｇｙの放射線が前記患者に投与される、方法。
（項目２６）
項目１に記載の方法であって、合計少なくとも約４０Ｇｙの放射線が前記患者に投与される、方法。
（項目２７）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターおよび前記放射線の治療効果が、相乗的である、方法。
（項目２８）
項目２６に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、放射線に対して、前記患者の癌細胞を感作させる、方法。
（項目２９）
項目１に記載の方法であって、放射線が、前記ＨＤＡＣインヒビターに対して、前記患者の癌細胞を感作させる、方法。
（項目３０）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターおよび放射線が、同時に投与される、方法。
（項目３１）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターおよび前記放射線が、連続的に投与される、方法。
（項目３２）
項目３１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記放射線の投与の前に投与される、方法。
（項目３３）
項目３１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記放射線の投与の後に投与される、方法。
（項目３４）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、経口的、非経口的、腹腔内的、静脈内的、動脈内的、経皮的、舌下的、筋肉内的、直腸的、経頬的、経鼻的、吸入によって、膣的、眼内的、局所的、皮下的、脂肪内的、関節内的、髄腔内的に投与される、方法。
（項目３５）
項目１に記載の方法であって、前記ＨＤＡＣインヒビターが、遅延放出投薬形態である、方法。
（項目３６）
項目１６に記載の方法であって、前記放射性医薬品が、経口的、非経口的、腹腔内的、静脈内的、動脈内的、経皮的、舌下的、筋肉内的、直腸的、経頬的、経鼻的、吸入によって、膣的、眼内的、局所的、皮下的、脂肪内的、関節内的、または髄腔内的に投与される、方法。
（項目３７）
項目１６に記載の方法であって、前記放射性医薬品が、遅延放出投薬形態である、方法。
（項目３８）
ＨＤＡＣインヒビターおよび放射線の併用療法に対する癌細胞の感受性を決定する方法であって、該方法が、該癌細胞に、第１の処置手順で第１量のヒストンデアセチラーゼインヒビター、および第２の処置手順で第２量の放射線を接触させる工程であって、ここで、該第１の処置および第２の処置が一緒に、治療的有効量を含む工程、ならびに処置に対する該細胞の感受性を評価する工程、を包含する、方法。
（項目３９）
癌の処置のためのＨＤＡＣインヒビターおよび放射線の組合せの治療的有効量を決定する方法であって、癌細胞に、第１の処置手順で第１量のヒストンデアセチラーゼインヒビター、および第２の処置手順で第２量の放射線に曝露する工程であって、該第１の処置および第２の処置が一緒に、治療的有効量を含む工程、ならびに抗癌効果を評価する工程、を包含する、方法。
（項目４０）
第１量のヒストンデアセチラーゼインヒビターおよび第２量の放射線を含む、薬学的組成物であって、該第１量および第２量が、一緒に、治療的有効量を含む、薬学的組成物。
（項目４１）
項目４０に記載の組成物であって、前記放射線が、放射性医薬品である、組成物。
（項目４２）
癌を処置するための医薬の製造のための、第１量のＨＤＡＣインヒビターおよび第２量の放射線の使用。
（項目４３）
項目４２に記載の使用であって、前記放射線が、放射性医薬品である、使用。
【００１２】
本発明は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビター（例えば、ＳＡＨＡ）を、放射線源（例えば、外部ビーム放射線）または放射性同位体（例えば、放射性医薬）と組合わせて使用して、治療的に有効な抗癌効果を提供し得るという発見に基づく。さらに、ＨＤＡＣインヒビターと放射線源との間の予想外の相乗的相互作用は、増強されたかまたは相乗的な治療効果を生じ、ここでこの合わされた効果は、ある治療用量における２つの処置剤の各々を投与することから得られる相加的効果よりも大きい。これらの観察は、ＨＤＡＣインヒビター（例えば、ＳＡＨＡ）が、癌の処置のための放射線療法と組合わせて使用され得る放射線増感剤として働き得ることを示唆する。ＨＤＡＣインヒビター（例えば、ＳＡＨＡ）が放射線増感剤として働く能力は、以前には記載されていない。
【００１３】
第１の処置手順（これは、本明細書中に記載されるように、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターの投与を包含する）と、第２の処置手順（これは、本明細書中に記載されるように、その必要のある患者に放射線処置を使用する）との組み合わせは、治療的に有効な抗癌効果を提供し得ることが、予想外にも発見された。これらの処置（ＨＤＡＣインヒビターの投与および放射線療法の投与）のそれぞれが、他方と組み合わされた場合に治療的に有効な処置を提供する量または線量で使用される。
【００１４】
このように、本発明は、その必要のある患者における、癌の処置のための方法に関する。本明細書中で使用される場合、癌の処置とは、癌転移を含む癌の進行を部分的または全体的に、阻害、遅延または予防すること；癌転移を含む癌の再発を阻害、遅延または予防すること；あるいは哺乳動物（例えば、ヒト）における癌の発症または発生を予防すること（化学予防法）をいう。
【００１５】
本発明の方法は、以下を含むがそれらに限定されない種々の癌の処置において有用である：固形腫瘍（例えば、肺、乳房、結腸、前立腺、膀胱、直腸、脳または子宮内膜の腫瘍）、血液悪性腫瘍（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫）、腺癌（例えば、膀胱癌、直腸がん、乳癌、結腸直腸癌）、神経芽細胞腫または黒色腫。
【００１６】
この方法は、その必要のある患者に、第１の処置手順において、第１の量のヒストンデアセチラーゼインヒビターを、第２の処置手順において、第２の量または線量の放射線を投与する工程を包含する。これらの第１の量および第２の量が一緒になって、治療的有効量を構成する。
【００１７】
本発明はさらに、癌の処置に有用な薬学的組成物に関する。この薬学的組成物は、第１の量のヒストンデアセチラーゼインヒビターおよび第２の量の放射線（例えば、放射性医薬）を含む。この第１の量および第２の量は、一緒になって、治療的有効量を構成する。
【００１８】
本発明はさらに、癌を処置するための医薬の製造のための、第１の量のＨＤＡＣインヒビターおよび第２の量の放射線（例えば、放射性医薬）の使用に関する。
【００１９】
本発明の特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターと放射線療法との組み合わせは、この併用療法レジメンが、ある治療用量で単独で投与された場合の各々の成分の相加的効果よりも、有意に良好な抗癌結果（例えば、増殖の阻害）を生じる場合に、治療的に相乗的であるとみなされる。標準的な統計分析は、この結果が有意に良好である場合を決定するために用いられ得る。例えば、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ試験またはいくつかの他の一般的に許容されている統計分析が用いられ得る。
【００２０】
放射線治療において使用される放射線源は、電磁放射線（例えば、Ｘ線またはγ線）、または粒子放射線（例えば、電子ビーム（β粒子）、プロトンビーム、ニュートロンビーム、α粒子、またはネガティブπ中間子）であり得る。
【００２１】
放射線処置は、外部ビーム放射線であり得るか、または放射性同位体の使用を含み得る（例えば、本明細書中に記載されるような、放射性医薬の投与による）。放射線処置はまた、外部ビーム放射線と放射性同位体（例えば、放射性医薬）との組み合わせであり得る。
【００２２】
１つの特定の実施形態において、放射線は、標的化送達によって、または標的化放射性結合体（例えば、放射性標識された抗体）の全身送達によって提供される。
【００２３】
放射線の線量は、患者、および処置される癌のタイプに依存して決定され得る。特定の実施形態において、患者は、少なくとも約１Ｇｙの放射線（例えば、約５、６、７、８、９、１０Ｇｙ、２０Ｇｙまたは４０Ｇｙなどの放射線のような約５〜４０Ｇｙの放射線）を受け得る。
【００２４】
処置手順は、任意の順序で連続的に、同時にまたはそれらの組み合わせで行われ得る。例えば、第１の処置手順（ヒストンデアセチラーゼインヒビターの投与）は、第２の処置手順（放射線）の前、放射線処置の後、放射線と同時、またはこれらの組み合わせで行われ得る。例えば、全処置期間は、ヒストンデアセチラーゼインヒビターについて決定され得る。放射線は、インヒビターでの処置の開始の前、またはインヒビターでの処置に続いて投与され得る。さらに、放射線処置は、インヒビター投与の期間の間に投与され得るが、インヒビター処置期間の全体にわたって行われる必要はない。
【００２５】
本発明における使用に適切なＨＤＡＣインヒビターとしては、本明細書中に規定されるような、ヒドロキサム酸誘導体、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）、環式テトラペプチド、ベンズアミド誘導体、または求電子性ケトン誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
本発明の方法における使用に適切なＨＤＡＣインヒビターの特定の非制限的な例は、以下である：
Ａ）ヒドロキサム酸誘導体（ＳＡＨＡ、ピロキサミド、ＣＢＨＡ、トリコスタチン（Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ）Ａ（ＴＳＡ）、トリコスタチンＣ、サリチルヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）、アゼライックビスヒドロキサム酸（Ａｚｅｌａｉｃ Ｂｉｓｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ Ａｃｉｄ）（ＡＢＨＡ）、アゼライック−１−ヒドロキサメート−９−アニリド（ＡＡＨＡ）、６−（３−クロロフェニルウレイド）カプロン酸ヒドロキサム酸（３Ｃｌ−ＵＣＨＡ）、オキサムフラチン（Ｏｘａｍｆｌａｔｉｎ）、Ａ−１６１９０６、スクリプタイド、ＰＸＤ−１０１、ＬＡＱ−８２４、ＣＨＡＰ、ＭＷ２７９６、およびＭＷ２９９６から選択される）；
Ｂ）環式テトラペプチド（トラポキシン（Ｔｒａｐｏｘｉｎ）Ａ、ＦＲ９０１２２８（ＦＫ２２８またはデプシペプチド）、ＦＲ２２５４９７、アピシジン、ＣＨＡＰ、ＨＣ−毒素、ＷＦ２７０８２、およびクラミドシン（Ｃｈｌａｍｙｄｏｃｉｎ）から選択される）；
Ｃ）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）（酪酸ナトリウム、イソバレレート、バレレート、４ フェニルブチレート（４−ＰＢＡ）、フェニルブチレート（ＰＢ）、プロピオネート、ブチルアミド、イソブチルアミド、フェニルアセテート、３−ブロモプロピオネート、トリブチリン、バルプロ酸およびバルプロエートから選択される）；
Ｄ）ベンズアミド誘導体（ＣＩ−９９４、ＭＳ−２７−２７５（ＭＳ−２７５）およびＭＳ−２７−２７５の３’−アミノ誘導体から選択される）；
Ｅ）求電子性ケトン誘導体（トリフルオロメチルケトン、およびＮ−メチル−α−ケトアミドのようなα−ケトアミドから選択される）；および
Ｆ）デプデシン（ＤＥＰＵＤＥＣＩＮ）
特定のＨＤＡＣインヒビターとしては、以下が挙げられる：
スベロイルアニロドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）。これは、以下の構造式：
【００２７】
【化７】
によって表される。
【００２８】
ピロキサミド。これは、以下の構造式：
【００２９】
【化８】
によって表される。
【００３０】
ｍ−カルボキシシンナム酸ビスヒドロキサメート（ＣＢＨＡ）。これは、以下の構造式：
【００３１】
【化９】
によって表される。
【００３２】
本発明の方法における使用のために適切なＨＤＡＣインヒビターの他の非制限定な例は、以下である：
以下の構造：
【００３３】
【化１０】
によって表される化合物。ここで、Ｒ１およびＲ２は、同じまたは異なり得る；Ｒ１およびＲ２が、同じである場合、各々は、置換されたまたは非置換のアリールアミノ基（例えば、フェニルアミノ、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、シクロアルキルアミノ基またはピペリジノ基であり；Ｒ１およびＲ２が、異なるＲ１＝Ｒ３−Ｎ−Ｒ４である場合、Ｒ３およびＲ４の各々は、独立して、互いに同じであるか、または異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の分枝または非分枝のアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリール（例えば、フェニルまたはピリジル）基、アルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基またはピリジン基であるか、またはＲ３およびＲ４は、一緒に結合して、ピペリジン基を形成し；Ｒ２は、ヒドロキシアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはアルキルオキシ基であり；そしてｎは、約４〜約８の整数である；
以下の構造：
【００３４】
【化１１】
によって表される化合物。ここで、Ｒが、置換または非置換のフェニル基、ピペリジン基、チアゾール基、２−ピリジン基、３−ピリジン基または４−ピリジン基であり；そしてｎが、約４〜約８の整数である；ならびに
以下の構造：
【００３５】
【化１２】
によって表される化合物。ここで、Ａは、アミド部分であり；Ｒ１およびＲ２が、各々、置換または非置換のアリール基、アリールアミノ基（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミンまたはチアゾールアミノ）、アリールアルキル基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基から選択され；Ｒ４が、水素、ハロゲン基、フェニル基またはシクロアルキル基であり；そしてｎが、約３〜約１０の整数である。
【００３６】
併用療法は、２つの処置様式と関連する異なる毒性の観点で治療的に利点を提供し得る。より詳細には、ＨＤＡＣインヒビターでの処置は、血液学的毒性を導き得るが、放射線療法は、腫瘍部位に隣接する組織に対して毒性であり得る。このように、この差示的毒性によって、各処置は、患者の病的状態を増加することなく、治療的用量で投与され得る。しかし、驚くべきことに、併用処置の結果として達成される治療的効果は、増強されるかまたは相乗的であり、例えば、相加的効果よりも有意に良い。
【００３７】
本発明の前記および他の目的、特徴および利点は、添付の図面に示されるように、本発明の好ましい実施形態の以下のより詳細な説明から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１−１】図１Ａ〜Ｄは、連続的および１２０時間の処置時間の両方の（Ａ）未処置；（Ｂ）１μＭ ＳＡＨＡで処置；（Ｃ）２．５μＭ ＳＡＨＡでの処置；ならびに５μＭ ＳＡＨＡでの処置を行ったＬＮＣａＰ細胞についてのスフェロイド容積のプロットである。太い実線は、各個人の実験についての中央値プロットに対応する。
【図１−２】図１Ａ〜Ｄは、連続的および１２０時間の処置時間の両方の（Ａ）未処置；（Ｂ）１μＭ ＳＡＨＡで処置；（Ｃ）２．５μＭ ＳＡＨＡでの処置；ならびに５μＭ ＳＡＨＡでの処置を行ったＬＮＣａＰ細胞についてのスフェロイド容積のプロットである。太い実線は、各個人の実験についての中央値プロットに対応する。
【図２】図２Ａ〜Ｂは、（Ａ）５μＭ ＳＡＨＡおよび（Ｂ）２．５μＭ ＳＡＨＡ（上記プロットの１Ｄおよび１Ｃ）での連続的インキュベーションの開始後の異なる時点で行なわれたＬＮＣａＰ細胞のスフェロイドの光学顕微鏡画像の走査である。各パネルの下の左の数字は、インキュベーション後の時間（日数）に対応する。
【図３−１】図３Ａ〜Ｄは、以下のレジメンに従って処置されたＬＮＣａＰ細胞の中央値（太線）および個々（細線）のスフェロイド容積のプロットである：Ａ）未処置；Ｂ）５μＭ ＳＡＨＡでの９６時間インキュベート；Ｃ）６ＧｙのＣｓ−１３７放射線（ＬＥＴ ０．２ｋｅＶ／μｍ）を使用する外部ビーム放射線の急性線量で照射；ならびにＤ）ＳＡＨＡ処置の中点（４８時間後）に続く、９６時間の５μＭ ＳＡＨＡ処置および６ＧｙのＣｓ−１３７放射線（ＬＥＴ ０．２ｋｅＶ／μｍ）を使用する急性線量の放射線。
【図３−２】図３Ａ〜Ｄは、以下のレジメンに従って処置されたＬＮＣａＰ細胞の中央値（太線）および個々（細線）のスフェロイド容積のプロットである：Ａ）未処置；Ｂ）５μＭ ＳＡＨＡでの９６時間インキュベート；Ｃ）６ＧｙのＣｓ−１３７放射線（ＬＥＴ ０．２ｋｅＶ／μｍ）を使用する外部ビーム放射線の急性線量で照射；ならびにＤ）ＳＡＨＡ処置の中点（４８時間後）に続く、９６時間の５μＭ ＳＡＨＡ処置および６ＧｙのＣｓ−１３７放射線（ＬＥＴ ０．２ｋｅＶ／μｍ）を使用する急性線量の放射線。
【図４】図４は、図３Ｄに記載されるＳＡＨＡおよび６Ｇｙ放射線の併用で処置されたスフェロイドの光学顕微鏡画像の走査である。各パネルの下の左の数字は、ＳＡＨＡでのインキュベーションの開始からの時間に対応する。
【図５−１】図５Ａ〜Ｃは、処置されたＬＮＣａＰスフェロイドのＴＵＮＥＬ染色切片の走査である。パネル（Ａ〜Ｃ）は、ＳＡＨＡ単独（５μＭ、９６時間）で処置された。パネル（Ａ）は、インキュベーションの終了の直後に処置されたスフェロイドを示す；パネル（Ｂ）は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの終了の２４時間後のスフェロイドを示す；パネル（Ｃ）は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの終了の４８時間後スフェロイドを示す；パネル（Ｄ〜Ｆ）は、ＳＡＨＡ＋６Ｇｙ放射線の組み合わせで処置されたＬＮＣａＰスフェロイドについてのＴＵＮＥＬ染色を示す：パネル（Ｄ）は、インキュベーションの終了直後である；パネル（Ｅ）は、インキュベーションの終了の２４時間後である；およびパネル（Ｆ）は、インキュベーションの終了の４８時間後である。以下についてのＴＵＮＥＬ染色：パネル（Ｇ）陽性ＤＮａｓｅ処置コントロール；パネル（Ｈ）未処置スフェロイド；およびパネル（Ｉ）６ＧＹ放射線で処置されたスフェロイドがまた示される。全ての切片を、ヘマトキシリンで対比染色した。
【図５−２】図５Ａ〜Ｃは、処置されたＬＮＣａＰスフェロイドのＴＵＮＥＬ染色切片の走査である。パネル（Ａ〜Ｃ）は、ＳＡＨＡ単独（５μＭ、９６時間）で処置された。パネル（Ａ）は、インキュベーションの終了の直後に処置されたスフェロイドを示す；パネル（Ｂ）は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの終了の２４時間後のスフェロイドを示す；パネル（Ｃ）は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの終了の４８時間後スフェロイドを示す；パネル（Ｄ〜Ｆ）は、ＳＡＨＡ＋６Ｇｙ放射線の組み合わせで処置されたＬＮＣａＰスフェロイドについてのＴＵＮＥＬ染色を示す：パネル（Ｄ）は、インキュベーションの終了直後である；パネル（Ｅ）は、インキュベーションの終了の２４時間後である；およびパネル（Ｆ）は、インキュベーションの終了の４８時間後である。以下についてのＴＵＮＥＬ染色：パネル（Ｇ）陽性ＤＮａｓｅ処置コントロール；パネル（Ｈ）未処置スフェロイド；およびパネル（Ｉ）６ＧＹ放射線で処置されたスフェロイドがまた示される。全ての切片を、ヘマトキシリンで対比染色した。
【図５−３】図５Ａ〜Ｃは、処置されたＬＮＣａＰスフェロイドのＴＵＮＥＬ染色切片の走査である。パネル（Ａ〜Ｃ）は、ＳＡＨＡ単独（５μＭ、９６時間）で処置された。パネル（Ａ）は、インキュベーションの終了の直後に処置されたスフェロイドを示す；パネル（Ｂ）は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの終了の２４時間後のスフェロイドを示す；パネル（Ｃ）は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの終了の４８時間後スフェロイドを示す；パネル（Ｄ〜Ｆ）は、ＳＡＨＡ＋６Ｇｙ放射線の組み合わせで処置されたＬＮＣａＰスフェロイドについてのＴＵＮＥＬ染色を示す：パネル（Ｄ）は、インキュベーションの終了直後である；パネル（Ｅ）は、インキュベーションの終了の２４時間後である；およびパネル（Ｆ）は、インキュベーションの終了の４８時間後である。以下についてのＴＵＮＥＬ染色：パネル（Ｇ）陽性ＤＮａｓｅ処置コントロール；パネル（Ｈ）未処置スフェロイド；およびパネル（Ｉ）６ＧＹ放射線で処置されたスフェロイドがまた示される。全ての切片を、ヘマトキシリンで対比染色した。
【図６−１】図６Ａ〜Ｃは、処置ＬＮＣａＰスフェロイドのＫｉ６７染色切片の走査である。パネル（Ａ〜Ｃ）は、ＳＡＨＡのみ（５μＭ、９６時間）で処置された。パネル（Ａ）は、ＳＡＨＡでのインキュベーションの終了直後のスフェロイドを示す；パネル（Ｂ）は、インキュベーションの終了の２４時間後のスフェロイドを示す；パネル（Ｃ）は、インキュベーションの終了の４８時間後のスフェロイドを示す。パネルＤ〜Ｆは、ＳＡＨＡ＋６Ｇｙ放射線の組み合わせで処置されたスフェロイドについてのＫｉ６７染色を示す：インキュベーションの終了後の（Ｄ）直後；（Ｅ）２４時間、および（Ｆ）４８時間。未処置スフェロイド（Ｇ）および６Ｇｙ放射線で処置されたスフェロイド（Ｈ）についてのＫｉ６７染色もまた示される。全ての切片を、ヘマトキシリンで対染色した。
【図６−２】図６Ａ〜Ｃは、処置ＬＮＣａＰスフェロイドのＫｉ６７染色切片の走査である。パネル（Ａ〜Ｃ）は、ＳＡＨＡのみ（５μＭ、９６時間）で処置された。パネル（Ａ）は、ＳＡＨＡでのインキュベーションの終了直後のスフェロイドを示す；パネル（Ｂ）は、インキュベーションの終了の２４時間後のスフェロイドを示す；パネル（Ｃ）は、インキュベーションの終了の４８時間後のスフェロイドを示す。パネルＤ〜Ｆは、ＳＡＨＡ＋６Ｇｙ放射線の組み合わせで処置されたスフェロイドについてのＫｉ６７染色を示す：インキュベーションの終了後の（Ｄ）直後；（Ｅ）２４時間、および（Ｆ）４８時間。未処置スフェロイド（Ｇ）および６Ｇｙ放射線で処置されたスフェロイド（Ｈ）についてのＫｉ６７染色もまた示される。全ての切片を、ヘマトキシリンで対染色した。
【図６−３】図６Ａ〜Ｃは、処置ＬＮＣａＰスフェロイドのＫｉ６７染色切片の走査である。パネル（Ａ〜Ｃ）は、ＳＡＨＡのみ（５μＭ、９６時間）で処置された。パネル（Ａ）は、ＳＡＨＡでのインキュベーションの終了直後のスフェロイドを示す；パネル（Ｂ）は、インキュベーションの終了の２４時間後のスフェロイドを示す；パネル（Ｃ）は、インキュベーションの終了の４８時間後のスフェロイドを示す。パネルＤ〜Ｆは、ＳＡＨＡ＋６Ｇｙ放射線の組み合わせで処置されたスフェロイドについてのＫｉ６７染色を示す：インキュベーションの終了後の（Ｄ）直後；（Ｅ）２４時間、および（Ｆ）４８時間。未処置スフェロイド（Ｇ）および６Ｇｙ放射線で処置されたスフェロイド（Ｈ）についてのＫｉ６７染色もまた示される。全ての切片を、ヘマトキシリンで対染色した。
【図７−１】図７Ａ〜Ｂは、（Ａ）ＴＵＮＥＬおよび（Ｂ）Ｋｉ６７染色についての陽性染色された細胞の％の平均および標準偏差を示すグラフである。実験当たり、３〜５個の異なる切片が、得点付けられた。ＳＡＨＡのみの切片対ＳＡＨＡ＋放射線での陽性染色された細胞の割合は、４８時間でのＫｉ６７染色について有意に異なった（ｐ＜０．０１）。
【図７−２】図７Ａ〜Ｂは、（Ａ）ＴＵＮＥＬおよび（Ｂ）Ｋｉ６７染色についての陽性染色された細胞の％の平均および標準偏差を示すグラフである。実験当たり、３〜５個の異なる切片が、得点付けられた。ＳＡＨＡのみの切片対ＳＡＨＡ＋放射線での陽性染色された細胞の割合は、４８時間でのＫｉ６７染色について有意に異なった（ｐ＜０．０１）。
【図８】図８は、以下のレジメンに従って処置されたＬＮＣａＰ細胞のスフェロイド容積を示すグラフである：未処置コントール；黒四角 Ａｃ２２５−ＨｕＭ１９５での処置；５μＭ ＳＡＨＡでの９６時間の処置；Ｘ Ａｃ２２５−ＨｕＭ１９５および５μＭ ＳＡＨＡでの処置。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
（発明の詳細な説明）
本発明は、癌の処置の必要な患者における、癌の処置のための方法に関する。この方法は、第１の量のヒストンデアセチラーゼインヒビターおよび第２の処置手順における第２の量または線量の放射線を、必要な患者に投与する工程を包含する。第１の量および第２の量は、ともに、治療的有効量を含む。
【００４０】
１つの実施形態において、この方法は、相乗的である抗癌効果を提供する。
【００４１】
癌の処置（本明細書中で使用される）とは、部分的または全体的に、癌の転移を含む癌の進行を阻害、遅延または予防すること；癌の転移を含む癌の再発を阻害、遅延または予防すること；あるいは、哺乳動物（例えば、ヒト）における癌の発症または進展の予防（化学的防御）をいう。
【００４２】
１つの実施形態では、このＨＤＡＣインヒビターは、患者中の癌細胞を放射線に対して感受性にする。従って、このＨＤＡＣインヒビターは、放射線感作剤として作用し得る。例えば、任意の特定の機構または理論に拘束されることを望まずに、ＨＤＡＣインヒビターと放射線処置との組み合わせ投与の治療効果は、放射線感作剤として作用するＨＤＡＣインヒビターの能力に起因し得、それによって、放射線処置に対する患者中の癌細胞の感受性を増加する。従って、このＨＤＡＣインヒビターは、放射線感作量で投与され得る。この感作は、細胞周期における不可逆的停止に起因し得る。
【００４３】
別の実施形態では、放射線は、患者中の癌細胞をＨＤＡＣインヒビターの作用に対して感受性にする。
【００４４】
本発明はまた、本発明の併用療法に対する特定の癌の感受性を決定する方法に関する。この方法は、癌細胞を、第１の処置手順において第１の量のヒストンデアセチラーゼインヒビターに、および第２の処置手順において第２の量または用量の放射線に曝すか、または接触させる工程、ならびに抗癌効果を評価する工程を包含する。この第１の量および第２の量は、ともに、治療的に有効な量を含む。抗癌効果は、任意の適切なアッセイを用いて評価され得る。
【００４５】
さらなる実施形態では、本発明は、特定の癌のタイプのためのＨＤＡＣインヒビターおよび放射線治療の最適組み合わせを決定するためのスクリーニング方法に関する。このスクリーニングの方法は、癌細胞を、第１の処置手順において第１の量のヒストンデアセチラーゼインヒビターに、および第２の処置手順において第２の量または用量の放射線に曝す工程を包含する。この第１の治療および第２の治療は、ともに、治療的に有効な量を含む。細胞は、培養中であるか、または処置の必要な患者の身体中に存在し得る。この処置の抗癌効果は、適切な方法を用いて評価され得る。
【００４６】
本明細書で用いる用語「治療的に有効な量」は、上記併用療法における第１の処置および第２の処置の組合せた量を表すことが意図される。この組み合わせた量は、所望の生物学的応答を達成する。本発明では、所望の生物学的応答は、癌転移を含む癌の部分的阻害または全体阻害、遅延または予防；癌の進行（哺乳動物、例えば、ヒトにおける癌転移；または癌の発症または進行の予防（化学防御）を含む）の阻害、遅延または予防である。
【００４７】
本発明の併用療法は、広範な種類の癌の処置における使用に適切である。本明細書で用いられるとき、癌は、腫瘍、新生物、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫などをいう。例えば、癌は、制限されずに、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、非皮膚末梢Ｔ細胞リンパ腫、ヒトＴ細胞リンパ栄養ウイルス（ＨＴＬＶ）と関連するリンパ腫（例えば、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、急性リンパ性白血病、急性非リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキン病リンパ腫、および多発性骨髄腫）、小児固形腫瘍（例えば、脳腫瘍、神経芽腫、網膜芽腫、ウィルムス腫瘍、骨腫瘍、および軟組織肉腫など）、成人の一般固形腫瘍（頭部癌および頸部癌（例えば、口腔、咽頭および食道））、尿生殖器癌（例えば、前立腺、膀胱、腎、子宮、卵巣、精巣、直腸および結腸）、肺癌、乳癌、膵臓癌、黒色腫およびその他の皮膚癌、胃癌、脳癌、肝臓癌および甲状腺癌）を包含する。
【００４８】
（ヒストンデアセチラーゼおよびヒストンデアセチラーゼインヒビター）
本明細書で用いられる用語としてのヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）は、ヌクレオソームのコアヒストンのアミノ末端テール中のリジン残基からのアセチル基の除去を触媒する酵素である。従って、ＨＤＡＣは、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）とともに、ヒストンのアセチル化状態を調節する。ヒストンのアセチル化は、遺伝子発現に影響し、そしてヒドロキサム酸を基礎にするハイブリッド極性化合物スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）のようなＨＤＡＣのインヒビターは、インビトロで形質転換細胞の成長停止、分化および／またはアポトーシスを誘導し、そしてインビボで腫瘍成長を阻害する。ＨＤＡＣは、構造的相同性を基に３つのクラスに分割され得る。酵母ＲＰＤ３タンパク質に類似するクラスＩのＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ１、２、３および８）は、核中に位置し、そして転写コリプレッサーと会合する複合体中に見出される。クラスＩＩのＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ４、５、６、７および９）は、酵母ＨＤＡ１タンパク質に類似し、そして核および細胞質の両方の細胞下局在性を有する。クラスＩおよびＩＩの両方のＨＤＡＣは、ＳＡＨＡのような、ヒドロキサム酸を基礎にしたＨＤＡＣインヒビターによって阻害される。クラスＩＩＩのＨＤＡＣは、酵母ＳＩＲ２タンパク質に関連するＮＡＤ依存性酵素の構造的に遠いクラスを形成し、そしてヒドロキサム酸を基礎にしたＨＤＡＣインヒビターによっては阻害されない。
【００４９】
本明細書で用いられる用語として、ヒストンデアセチラーゼインヒビターまたはＨＤＡＣインヒビターは、インビボ、インビトロまたはその両方でヒストンの脱アシル化を阻害し得る化合物である。従って、ＨＤＡＣインヒビターは、少なくとも１つのヒストンデアセチラーゼの活性を阻害する。少なくとも１つのヒストンの脱アセチル化を阻害する結果として、アセチル化ヒストンの増加が起こり、そしてアセチル化ヒストンの蓄積は、ＨＤＡＣインヒビターの活性を評価するための適切な生物学的マーカーである。従って、アセチル化ヒストンの蓄積をアッセイし得る手順は、目的の化合物のＨＤＡＣ阻害活性を決定するために用いられ得る。ヒストンデアセチラーゼ活性を阻害し得る化合物はまた、その他の物質に結合し得、そしてその結果、酵素のようなその他の生物学的に活性な分子を阻害し得ることが理解される。
【００５０】
例えば、ＨＤＡＣインヒビターを受ける患者において、ＨＤＡＣインヒビターで処理された末梢単核細胞中および組織中のアセチル化ヒストンの蓄積は、適切なコントロールに対して決定され得る。
【００５１】
特定化合物のＨＤＡＣ阻害活性は、例えば、少なくとも１つのヒストンデアセチラーゼの阻害を示す酵素アッセイを用いてインビトロで決定され得る。さらに、特定の組成物で処理された細胞におけるアセチル化ヒストンの蓄積の測定は、化合物のＨＤＡＣ阻害活性の決定詞であり得る。
【００５２】
アセチル化ヒストンの蓄積のためのアッセイは、文献にあり周知である。例えば、Ｍａｒｋｓ、Ｐ．Ａ．ら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、９２：１２１０〜１２１５、２０００、Ｂｕｔｌｅｒ、Ｌ．Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０：５１６５〜５１７０（２０００）、Ｒｉｃｈｏｎ、Ｖ．Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９５：３００３〜３００７、１９９８、およびＹｏｓｈｉｄａ、Ｍら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６５：１７１７４〜１７１７９、１９９０を参照のこと。
【００５３】
例えば、ヒストンデアセチラーゼインヒビター化合物の活性を測定するための酵素アッセイは、以下のように実施され得る。簡単に述べれば、アフィニィティー精製されたヒトエピトープタグ化（Ｆｌａｇ）ＨＤＡＣ１に対するＨＤＡＣインヒビター化合物の効果は、示された量のインヒビター化合物との約２０分間の適切な温度下に関し、基質の非存在下で酵素調製物をインキュベートすることによりアッセイされ得る。基質（［３Ｈ］アセチル−標識されたマウス赤白血病細胞由来ヒストン）が添加され得、そしてこのサンプルは、３０μＬの総容量中約３７℃で２０分間インキュベートされ得る。次いで、反応は停止され得、そして放出された酢酸塩が抽出され得、そして放出された放射活性の量がシンチレーション計測により決定される。ヒストンデアセチラーゼインヒビター化合物の活性を測定するために有用な代替のアッセイは、ＢＩＯＭＯＬ（登録商標）Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ、ＰＡから入手可能な「ＨＤＡＣ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ａｓｓａｙ；Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｋｉｔ−ＡＫ−５００」である。
【００５４】
インビボ研究は、以下のように実施され得る。動物（例えばマウス）は、ＨＤＡＣインヒビター化合物で腹腔内注射され得る。選択された組織、例えば、脳、膵臓、肝臓などが、投与後、所定の時点で単離され得る。ヒストンは、本質的にＹｏｓｈｉｄａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１７１７４〜１７１７９、１９９０に記載のように組織から単離され得る。等量のヒストン（約１μｇ）は、１５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動され得、そしてＨｙｂｏｎｄ−Ｐフィルター（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）に移され得る。フィルターは３％ミルクでブロックされ得、そしてウサギの精製されたポリクローナル抗アセチル化ヒストンＨ４抗体（αＡｃ−Ｈ４）および抗アセチル化ヒストンＨ３抗体（αＡｃ−Ｈ３）（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．）でプローブされ得る。アセチル化ヒストンのレベルは、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギ抗体（１：５０００）およびＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ化学発光基質（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて可視化され得る。ヒストンタンパク質のための装填コントロールとして平行ゲルが泳動され得、そしてＣｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｌｕｅ（ＣＢ）で染色される。
【００５５】
さらに、ＳＡＨＡのようなヒドロキサム酸を基礎にしたＨＤＡＣインヒビターは、細胞周期のＧ１相における一時的停止に寄与するサイクリン依存性キナーゼの阻害の原因である、ｐ２１ＷＡＦ１遺伝子の発現を上方制御することが示されている（Ｒｉｃｈｏｎ、Ｖ．Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９７：１００１４〜９．、２０００）。このｐ２１ＷＡＦ１タンパク質は、標準的な方法を用い、種々の形質転換細胞において、ＨＤＡＣインヒビターで培養の２時間以内に誘導される。このｐ２１ＷＡＦ１遺伝子の誘導には、この遺伝子のクロマチン領域中のアセチル化ヒストンの蓄積がともなう。ｐ２１ＷＡＦ１の誘導は、それ故、形質転換細胞中のＨＤＡＣインヒビターによって引き起こされるＧ１細胞周期停止に関与するとして認識され得る。
【００５６】
最近、ＳＡＨＡのようなＨＤＡＣインヒビターは、チオレドキシン結合性プロテイン２を上方制御することが示された（Ｂｕｔｌｅｒ、Ｌ．Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９９：１１７００〜５．、２００２）。ＴＢＰ−２は、チオレドキシンの調節に関与している（Ｎｉｓｈｉｙａｍａ、Ａ．ら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７４：２１６４５〜５０、１９９９）。それは、チオール還元活性を阻害し、そしてチオレドキシンのレベルを減少する。チオレドキシンは、主要な細胞タンパク質ジスルフィドレダクターゼである（Ａｍｅｒ、Ｅ．Ｓ．ら、Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７：６１０２〜９．、２０００）。多くのその他の機能（Ｇａｓｄａｓｋａ、Ｊ．Ｒ．ら、Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．６：１６４３〜５０．、１９９５；Ｂｅｒｇｇｒｅｎ、Ｍ．ら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１６：３４５９〜６６、１９９６；Ｇａｌｌｅｇｏｓ、Ａ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６：５７６５〜７０、１９９６；Ｇｒｏｇａｎ、Ｔ．Ｍ．ら、Ｈｕｍ Ｐａｔｈｏｌ．３１：４７５〜８１．、２０００；Ｂａｋｅｒ、Ａ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：５１６２〜７．、１９９７）に加え、チオレドキシンは、ＤＮＡ複製および修復に必要なヌクレオシド三リン酸からデオキシヌクレオシド三リン酸への還元に関係あるリボヌクレオチドレダクターゼ反応における電子ドナーとして供される（Ａｒｎｅｒ、Ｅ．Ｓ．ら、Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７：６１０２〜９．、２０００）。グルタチオンのように、チオレドキシンもまた、解毒反応に、および放射線で誘導された反応性酸素種およびその他のフリーラジカルの脱離に関与している還元剤である（Ｄｉｄｉｅｒ、Ｃ．ら、Ｐ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ．３０：５３７〜４６．、２００１）。
【００５７】
従って、ＳＡＨＡのようなヒドロキサム酸誘導体は、炎症性疾患、アレルギー疾患、自己免疫疾患、酸化的ストレスにともなう疾患または細胞過剰増殖によって特徴付けられる疾患のような、広範な種々のチオレドキシン（ＴＲＸ）媒介疾患および症状を処置または予防する際の使用に適切である（Ｒｉｃｈｏｎらによる「ヒストンデアセチラーゼインヒビターを用いるＴＲＸ媒介疾患を処置する方法」と題し、その全体の内容が参考として本明細書によって援用される、２００３年２月１５日に出願された米国出願第１０／３６９，０９４号）。
【００５８】
さらに、ＳＡＨＡのようなヒドロキサム酸誘導体は、最近、神経変性疾患のような中枢神経系（ＣＮＳ）の疾患を処置するため、および脳腫瘍を処置するために有用であることが示されている（Ｒｉｃｈｏｎらによる「ヒストンデアセチラーゼインヒビターを用いる神経変性疾患および脳の癌の処置」と題し、その全体の内容が本明細書によって参考として援用される、２００２年１０月１６日に出願された米国出願第１０／２７３，４０１号）。
【００５９】
代表的には、ＨＤＡＣインヒビターは、５つの一般的クラスに入る：１）ヒドロキサム酸誘導体；２）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）；３）環状テトラペプチド；４）ベンズアミド；および５）求電子ケトンである。
【００６０】
従って、ＨＤＡＣインヒビター化合物は、本発明における使用に適切である。例えば、適切なＨＤＡＣインヒビターは、１）ヒドロキサム酸誘導体；２）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）；３）環状テトラペプチド；４）ベンズアミド；５）求電子ケトン；および／またはヒストンデアセチラーゼを阻害し得る任意のその他のクラスの化合物を含む。
【００６１】
このようなＨＤＡＣインヒビターの例は、制限されないで：
Ａ）スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）（Ｒｉｃｈｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５、３００３〜３００７（１９９８））；Ｍ−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキシアミド（ＣＢＨＡ）（Ｒｉｃｈｏｎら、前述）；ピロキシアミド；ＣＢＨＡ；トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）およびトリコスタチンＣのようなトリコスタチンアナログ（Ｋｏｇｈｅら、１９９８．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒａｍａｃｏｌ．５６：１３５９〜１３６４）；サリチリヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）（Ａｎｄｒｅｗｓら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ ３０、７６１〜７６８（２０００））；アゼライックビスヒドロキサム酸（ＡＢＨＡ）（Ａｎｄｒｅｗｓら、前述）；アゼライック−１−ヒドロキサメート−９−アニリド（ＡＡＨＡ）（Ｑｉｕら、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ １１、２０６９〜２０８３（２０００））；６−（３−クロロフェニルウレイド）カルポイックヒドロキサム酸（３Ｃｌ−ＵＣＨＡ）、オキサムフラチン［（２Ｅ）−５−［３−［（フェニルスイブニル）アミノフェニル］−ペント−２−エン−４−イオノヒドロキサム酸（Ｋｉｍら、Ｏｎｇｃｏｇｅｎｅ、１８：２４６１ ２４７０（１９９９））；Ａ−１６１９０６、Ｓｃｒｉｐｔａｉｄ（Ｓｕら、２０００ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、６０：３１３７〜３１４２）；ＰＸＤ−１０１（Ｐｒｏｌｉｆｉｘ）；ＬＡＱ−８２４；ＣＨＡＰ；ＭＷ２７９６（Ａｎｄｒｅｗｓら、前述）；およびＭＷ２９９６（Ａｎｄｒｅｗｓら、前述）のようなヒドロキサム酸誘導体。
【００６２】
Ｂ）トラポキシンＡ（ＴＰＸ）−環状テトラペプチド（シクロ−（Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−ピペコリニル−Ｌ−２−アミノ−８−オキソ−９，１０−エポキシデカノイル））（Ｋｉｊｉｍａら、Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８、２２４２９〜２２４３５（１９９３））；ＦＲ９０１２２８（ＦＫ２２８、デプシペプチド）（Ｎａｋａｊｉｍａら、Ｅｘ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．２４１、１２６〜１３３（１９９８））；ＦＲ２２５４９７環状テトラペプチド（Ｈ．Ｍｏｒｉら、ＰＣＴ出願ＷＯ００／０８０４８（２０００年２月１７日））；アピシジン環状テトラペプチド［シクロ（Ｎ Ｏ−メチル−Ｌ−トリプトファニル−Ｌ−イソロイシニル−Ｄ−ピペコリニル−Ｌ−２−アミノ ｏ−８オキソデカノイル）］（Ｄａｒｋｉｎ−Ｒａｔｔｒａｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３、１３１４３１３１４７（１９９６））；アピシジンＩａ、アピシジンＩｂ、アピシジンＩｃ、アピシジンＩＩａ、およびアピシジンＩＩｂ（Ｐ．Ｄｕｌｓｋｉら、ＰＣＴ出願ＷＯ９７／１１３６６）；ＣＨＡＰ、ＨＣ−トキシン環状テトラペプチド（Ｂｏｓｃｈら、Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ ７、１９４１〜１９５０（１９９５））；ＷＦ２７０８２環状テトラペプチド（ＰＣＴ出願ＷＯ９８／４８８２５）；およびクラミドシン（Ｂｏｓｃｈら、前述）のような環状テトラペプチド。
【００６３】
Ｃ）酪酸ナトリウム（Ｃｏｕｓｅｎｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５４、１７１６〜１７２３（１９７９））；イソ吉草酸（ＭｃＢａｉｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．５３：１３５７〜１３６８（１９９７））；吉草酸（ＭｃＢａｉｎら、前述）；４フェニル酪酸（４−ＰＢＡ）（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１５、８７９〜８７３（１９９５））；フェニル酪酸（ＰＢ）（Ｗａｎｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５９、２７６６〜２７９９（１９９９））；プロピオン酸（ＭｃＢａｉｎら、前述）；ブチルアミド（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ、前述）；イソブチルアミド（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ、前述）；フェニルアセテート（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ、前述）；３−ブロモプロピオン酸（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ、前述）；トリブチリン（Ｇｕａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、６０、７４９〜７５５（２０００））；バルプロ酸およびバルプロ酸塩のような短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）誘導体。
【００６４】
Ｄ）ＣＩ−９９４；ＭＳ−２７−２７５［Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−［Ｎ−（ピリジン−３−イルメトキシカルボニル）アミノメチル］ベンズアミド］（Ｓａｉｔｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６、４５９２〜４５９７（１９９９））；およびＭＳ−２７−２７５の３’−アミノ誘導体（Ｓａｉｔｏら、前述）のようなベンズアミド誘導体。
【００６５】
Ｅ）トリフルオロメチルケトン（Ｆｒｅｙら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．（２００２）、１２、３４４３〜３４４７；Ｕ．Ｓ．６，５１１，９９０）、およびＮ−メチル−α−ケトアミドのようなα−ケトアミドのような求電子ケトン誘導体。
【００６６】
Ｆ）デプデシン（Ｋｗｏｎら、１９９８．ＰＮＡＳ ９５：３３５６〜３３６１）のようなその他のＨＤＡＣインヒビター。
【００６７】
好適なヒドロキサム酸を基礎にしたＨＤＡＣインヒビターは、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、ｍ−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサメート（ＣＢＨＡ）およびピリドキシアミドである。ＳＡＨＡは、ヒストンデアシラーゼ酵素の触媒ポケット中に直接結合することが示された。ＳＡＨＡは、培養中の形質転換細胞の細胞周期停止、分化および／またはアポトーシスを誘導し、そしてげっ歯類における腫瘍増殖を阻害する。
ＳＡＨＡは、固形腫瘍および血液学的癌の両方においてこれらの効果を誘導する際に有効である。ＳＡＨＡは、動物に毒性なしで動物中の腫瘍増殖を阻害する際に有効であることが示された。腫瘍増殖のこのＳＡＨＡで誘導された阻害は、腫瘍におけるアセチル化ヒストンの蓄積をともなう。ＳＡＨＡは、ラットにおける発癌物質（Ｎ−メチルニトロソウレア）で誘導された乳腫瘍の発症および継続する成長を阻害する際に有効である。ＳＡＨＡは、研究の１３０日間に亘ってそれらの食餌中でラットに投与された。従って、ＳＡＨＡは、その作用の機構が、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害を含む、非毒性の経口的に活性な抗腫瘍剤である。
【００６８】
ＳＡＨＡは、以下の構造式によって表され得る：
【００６９】
【化１３】
ピロキシアミドは、以下の構造式によって表され得る：
【００７０】
【化１４】
ＣＢＨＡは、以下の構造式によって表され得る：
【００７１】
【化１５】
１つの実施形態では、このＨＤＡＣインヒビターは、式Ｉによって表され得る：
【００７２】
【化１６】
ここで、Ｒ１およびＲ２は同じかまたは異なり得；Ｒ１およびＲ２が同じであるとき、各々は、置換または置換されていないアリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、シクロアルキルアミノまたはピペリジノ基であり；Ｒ１およびＲ２が異なるとき、Ｒ１＝Ｒ３−Ｎ−Ｒ４であり、ここで、Ｒ３およびＲ４の各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の分岐または非分岐アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、アルキルオキシ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ基、またはＲ３およびＲ４はともに結合してピペリジン基を形成し、Ｒ２はヒドロキシアミノ、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノまたはアルキルオキシ基であり、そしてｎは約４〜約８の整数である。
【００７３】
従って、別の実施形態では、本発明の方法で用いられるＨＤＡＣインヒビターは、式ＩＩによって表され得る：
【００７４】
【化１７】
ここで、Ｒ３およびＲ４の各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の分岐または非分岐アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、アルキルオキシ、アリールオキシまたはアリールアルキルオキシ基、またはＲ３およびＲ４はともに結合してピペリジン基を形成し、Ｒ２はヒドロキシルアミノ、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノまたはアルキルオキシ基であり、そしてｎは約４〜約８の整数である。
【００７５】
式ＩＩの特定の実施形態では、Ｒ２はヒドロキシアミノ、ヒドロキシル、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノまたはメチルオキシ基であり、そしてｎは６である。なお別の式ＩＩの実施形態では、Ｒ４は水素原子であり、Ｒ３は置換または非置換フェニルであり、そしてｎは６である。式ＩＩのさらなる実施形態では、Ｒ４は水素であり、そしてＲ３はα−、β−、またはγ−ピリジンである。
【００７６】
その他の特定の式ＩＩの実施形態では、Ｒ４は水素原子であり、そしてＲ３はシクロヘキシル基であり；Ｒ４は水素原子であり、そしてＲ３はメトキシ基であり；Ｒ３およびＲ４の各々は、一緒に結合してピペリジン基を形成し；Ｒ４は水素原子であり、そしてＲ３はヒドロキシル基であり；Ｒ３およびＲ４は両方メチル基であり、そしてＲ３はフェニルであり、そそしてＲ４はメチルである。
【００７７】
本発明における使用のために適切なさらなるＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＩＩＩによって表され得る：
【００７８】
【化１８】
ここで、ＸおよびＹの各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノアリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノ、またはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒは、水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル、アリールアルキルオキシ、またはアリールオキシ基であり；そしてｍおよびｎの各々は、独立して同じか、または互いに異なり、そして各々が約０〜約８の整数である。
【００７９】
特定の実施形態では、ＨＤＡＣインヒビターは、式ＩＩＩの化合物であり、ここで、Ｘ、ＹおよびＲは、各々ヒドロキシルであり、そしてｍとｎの両方は５である。
【００８０】
なお別の実施形態では、本発明の方法における使用に適切なＨＤＡＣインヒビター化合物は、構造式ＩＶによって表され得：
【００８１】
【化１９】
ここで、ＸおよびＹの各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して同じであるか、または互いに異なり、水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル、アリール、アルキルオキシ、またはアリールオキシ基であり；そしてｍ、ｎおよびｏの各々は、独立して同じか、または互いに異なり、そして各々が約０〜約８の整数である。
【００８２】
本発明における使用に適切なその他のＨＤＡＣインヒビターは、構造式Ｖを有する化合物を含む：
【００８３】
【化２０】
ここで、ＸおよびＹの各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して同じであるか、または互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル、アリール、アルキルオキシ、またはアリールオキシ基であり；そしてｍおよびｎの各々は、独立して同じか、または互いに異なり、そして各々が約０〜約８の整数である。
【００８４】
さらなる実施形態では、本発明の方法における使用に適切なＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＶＩを有し得：
【００８５】
【化２１】
ここで、ＸおよびＹの各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基であり；そしてｍおよびｎの各々は、独立して同じか、または互いに異なり、そして各々が約０〜約８の整数である。
【００８６】
なお別の実施形態では、本発明の方法において有用なＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＶＩＩを有し得：
【００８７】
【化２２】
ここで、ＸおよびＹの各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシＮアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒ１およびＲ２は、独立して同じであるか、または互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル、アリールアルキルオキシ、またはアリールオキシ基であり；そしてｍおよびｎの各々は、独立して同じか、または互いに異なり、そして各々が約０〜約８の整数である。
【００８８】
なおさらなる実施形態では、本発明における使用のために適切なＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＶＩＩＩを有し得：
【００８９】
【化２３】
ここで、ＸおよびＹの各々は、独立して、同じかまたは互いに異なり、そして、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、またはアリールオキシアルキルアミノ基であり；そしてｎは約０〜約８の整数である。
【００９０】
本発明の方法における使用のために適切なさらなる化合物は、式ＩＸにより表されるものを含む：
【００９１】
【化２４】
ここで各々のＸおよびＹは、独立して同じであるか、または互いに異なり、これらは、ヒドロキシル、アミノまたはヒドロキシルアミノ基、置換または非置換の、アルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒ１およびＲ２の各々が、独立して同じであり、または互いに異なり、これらは、水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル、アリール、アルキルオキシ、アリールオキシ、カルボニルヒドロキシアミノまたはフッ素基であり；そしてｍおよびｎの各々は、独立して同じであり、または互いに異なり、そして各々約０〜約８の整数である。
【００９２】
さらなる実施形態において、本発明での使用のために適切なＨＤＡＣインヒビターは、以下の構造式Ｘを有する化合物を含み：
【００９３】
【化２５】
ここでＲ１およびＲ２の各々が、独立して同じであり、または互いに異なり、これらは、ヒドロキシル、アルキルオキシ、アミノ、ヒドロキシルアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基である。特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは、構造式Ｘの化合物であり、ここでＲ１およびＲ２は、両方ヒドロキシルアミノである。さらなる実施形態において、本発明の使用のために適切なＨＤＡＣインヒビターは、以下の構造式ＸＩを有する：
【００９４】
【化２６】
ここでＲ１およびＲ２の各々が、独立して同じであり、または互いに異なり、これらは、ヒドロキシル、アルキルオキシ、アミノ、ヒドロキシルアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基である。特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＸＩの化合物であり、ここでＲ１およびＲ２は、両方ヒドロキシルアミノである。
【００９５】
さらなる実施形態において、本発明の使用のために適切なＨＤＡＣインヒビターは、以下の構造式ＸＩＩによって表される化合物を含む：
【００９６】
【化２７】
ここでＲ１およびＲ２の各々が、独立して同じであり、または互いに異なり、これらは、ヒドロキシル、アルキルオキシ、アミノ、ヒドロキシルアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルオキシアミノ、アリールオキシアミノ、アルキルオキシアルキルアミノまたはアリールオキシアルキルアミノ基である。特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＸＩＩの化合物であり、ここでＲ１およびＲ２は、両方ヒドロキシルアミノである。
【００９７】
本発明の方法での使用に適切なさらなる化合物は、構造式ＸＩＩＩにより表される化合物を含む：
【００９８】
【化２８】
ここでＲは、置換または非置換の、フェニル、ピペリジン、チアゾール、２−ピリジン、３−ピリジンまたは４−ピリジンであり、ｎは、約４〜約８の整数である。
【００９９】
なお別の実施形態において、本発明での使用のために適切なＨＤＡＣインヒビターは、構造式（ＸＩＶ）により表され得るかまたはその薬学的に受容可能な塩である：
【０１００】
【化２９】
ここでＲは、置換または非置換の、フェニル、ピリジン、ピペリジン、またはチアゾール基であり、ｎは、約４〜約８の整数である。
【０１０１】
特定の実施形態において、Ｒは、フェニルであり、またはｎは５である。別の実施形態において、ｎは５であり、そしてＲは３−クロロフェニルである。
【０１０２】
本発明の使用のための別のＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＸＶにより表され得る：
【０１０３】
【化３０】
ここで各々のＲ１およびＲ２は、直接またはリンカーを介して結合され、これは、ヒドロキシル、置換または非置換の、アリール（例えば、ナフチル、フェニル、キノリニル、イソキノリニルまたはピリジル）、シクロアルキル、シクロアルキルアミノ、ピペリジノ、分枝したまたは分枝していない、アルキル、アルケニル、アリールアミノ（ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、アリールアルキルアミノ、アリールアルキル、アルキルオキシ、アリールオキシ、またはアリールアルコキシ基である；ｎは、約３〜約１０の整数であり、Ｒ３は、ヒドロキサム酸、ヒドロキシルアミノ、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、またはアルキルオキシ基である。
【０１０４】
リンカーは、アミド部分、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、または−ＣＨ２−であり得る。
【０１０５】
特定の実施形態において、Ｒ１は、−ＮＨ−Ｒ４であり、ここでＲ４は、ヒドロキシル、置換または非置換の、アリール（例えば、ナフチル、フェニル、キノリニル、イソキノリニルまたはピリジル）、シクロアルキル、シクロアルキルアミノ、ピペリジノ、分枝したまたは分枝していない、アルキル、アルケニル、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、アリールアルキルアミノ、アルキルオキシ、アリールアルキル、アリールオキシまたはアリールアルキシオキシ基である。
【０１０６】
式ＸＶのさらなるかつより特定のＨＤＡＣインヒビターは、式ＸＶＩにより表され得るインヒビターを含む：
【０１０７】
【化３１】
ここで各々のＲ１およびＲ２は、ヒドロキシル、置換または非置換のアリール（例えば、フェニル、ナフチル、キノリニル、イソキノリニルまたはピリジル）、シクロアルキル、シクロアルキルアミノ、ピペリジノ、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、アリールアルキルアミノ、分枝したまたは分枝していない、アルキル、アルケニル、アルキルオキシ、アリールアルキル、アリールオキシ、またはアリールアルキルオキシ基である；Ｒ３は、ヒドロキサム酸、ヒドロキシルアミノ、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノまたはアルキルオキシ基である；Ｒ４は、水素、ハロゲン、フェニルまたはシクロアルキル部分である；そしてＡは、同じでも異なっていても良く、これは、アミド部分、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５−、または−ＣＨ２−を表し、Ｒ５は、置換または非置換のＣ１−Ｃ５アルキルであり、そしてｎは、約３〜約１０の整数である。
【０１０８】
例えば、式ＸＶＩ中のより特定の構造を有するさらなる化合物は、構造式ＸＶＩＩにより表され得る：
【０１０９】
【化３２】
ここでＡは、アミド部分であり、Ｒ１およびＲ２は、置換または非置換のアリール（例えば、フェニル、ナフチル、キノリニル、イソキノリニルまたはピリジル）、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、アリールアルキルアミノ、アリールアルキル、アリールオキシ、またはアリールアルキルオキシ基から各々選択され、そしてｎは、約３〜約１０の整数である。
【０１１０】
例えば、Ａにてアミド部分を有する化合物が、以下の式により表され得る：
【０１１１】
【化３３】
別の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターが、以下の式ＸＶＩＩＩを有し得るかまたはその薬学的に受容可能な塩である：
【０１１２】
【化３４】
ここでＲ７は、置換または非置換のアリール（例えば、フェニル、ナフチル、キノリニル、イソキノリニルまたはピリジル）、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミンまたはチアゾールアミノ）、アリールアルキルアミノ（ａｒｙｌａｋｙｌａｍｉｎｏ）、アリールアルキル、アリールオキシまたはアリールアルキルオキシから選択され、そしてｎは、約３〜約１０の整数であり、そしてＹは、以下から選択される：
【０１１３】
【化３５】
。
【０１１４】
さらなる実施形態において、ＨＤＡＣインヒビター化合物は、式ＸＩＸまたはその薬学的に受容可能な塩を有し得る：
【０１１５】
【化３６】
ここでｎは、約３〜約１０の整数であり、Ｙは、以下から選択され：
【０１１６】
【化３７】
そして、Ｒ７’は、以下：
【０１１７】
【化３８】
から選択される。
【０１１８】
本発明における使用のためのさらなる化合物が、構造式ＸＸにより表され得る：
【０１１９】
【化３９】
ここでＲ２は、置換または非置換のアリール、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノまたはチアゾールアミノ）、アリールアミノ、アリールアルキル、またはアリールオキシ、アリールアルキルオキシから選択され、そしてｎは、３〜１０であり、そしてＲ７’は、以下から選択される：
【０１２０】
【化４０】
。
【０１２１】
本発明において有用なさらなるＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造式ＸＸＩまたはその薬学的に受容可能な塩により表され得る：
【０１２２】
【化４１】
ここで、Ａは、アミド部分であり、Ｒ１およびＲ２は、置換または非置換のアリール、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミンまたはチアゾールアミノ）アリールアルキルアミノ、アリールアルキル、アリールオキシまたはアリールアルキルオキシ基から各々選択され、Ｒ４は、水素、ハロゲン、フェニルまたはシクロアルキル部分であり、そしてｎは、約３〜１０の整数である。
【０１２３】
例えば、式ＸＸＩの化合物は、以下の構造：
【０１２４】
【化４２】
または以下の構造：
【０１２５】
【化４３】
により表され得、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ４およびｎは、式ＸＸＩの意味を有する。
さらに、ＨＤＡＣインヒビターは、以下の構造式ＸＸＩＩ：
【０１２６】
【化４４】
を有し、ここでＬは、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ＝ＣＨ）ｍ、フェニル、−シクロアルキル−、またはこれらの組み合わせからなる群から選択されるリンカーであり；そしてＲ７およびＲ８の各々が、独立して、置換されたまたは置換されていない、アリール、アリールアミノ（例えば、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミノもしくはチアゾールアミノ）、アリールアルキルアミノ、アリールアルキル、アリールオキシまたはアリールアルキルオキシ基であり、ｎは、約３〜約１０の整数であり、そしてｍは、０〜１０の整数である。
【０１２７】
例えば、式ＸＸＩＩの化合物は、以下：
【０１２８】
【化４５】
であり得る。
【０１２９】
本発明での使用のために適切な他のＨＤＡＣインヒビターは、以下のより特定の式で示されるインヒビター：
【０１３０】
【化４６】
（ｎは、３〜１０の整数）またはエナンチオマー、あるいは
【０１３１】
【化４７】
（ｎは、３〜１０の整数）またはエナンチオマー、あるいは
【０１３２】
【化４８】
（ｎは、３〜１０の整数）またはエナンチオマー、あるいは
【０１３３】
【化４９】
（ｎは、３〜１０の整数）またはエナンチオマー、あるいは
【０１３４】
【化５０】
（ｎは、３〜１０の整数）またはエネンチオマーを含む。
【０１３５】
本発明の使用のために適切なさらに特定のＨＤＡＣインヒビターは、以下：
【０１３６】
【化５１】
【０１３７】
【化５２】
（ｎは、３〜１０の整数）、および以下の化合物：
【０１３８】
【化５３】
を含む。
【０１３９】
さらに特定のＨＤＡＣインヒビターは、以下の式ＸＸＩＩＩ：
【０１４０】
【化５４】
により表され得るものを含み、ここでＲ１は、置換または非置換の、アリール基、アリールアルキル基、アリールアミノ基、アリールアルキルアミノ基、アリールオキシ基またはアリールアルコキシ基であり、ｎは、３〜１０の整数である。特定の実施形態において、ｎは、構造式ＸＸＩＩＩの化合物について５である。
【０１４１】
特定の実施形態において、式ＸＸＩＩＩの化合物は、以下の構造：
【０１４２】
【化５５】
により表される。
【０１４３】
別の特定の実施形態において、式ＸＸＩＩＩの化合物は、以下の式：
【０１４４】
【化５６】
により表される。
【０１４５】
なお別の特定の実施形態において、式ＸＸＩＩＩの化合物が、以下の構造により表される：
【０１４６】
【化５７】
なお別の特定の実施形態において、式ＸＸＩＩＩの化合物は、以下の構造により表される：
【０１４７】
【化５８】
さらに特定のＨＤＡＣインヒビターは、以下の式ＸＸＩＶにより表され得：
【０１４８】
【化５９】
ここでＱ１は、置換または非置換のキノリニルまたはイソキノリニル基であり、そしてｎは、３〜１０の整数である。特定の好ましい実施形態において、ｎは、構造式ＸＸＩＶの化合物について５である。
【０１４９】
特定の実施形態において、式ＸＸＩＶの化合物は、以下の構造：
【０１５０】
【化６０】
により表される。
【０１５１】
さらに特定のＨＤＡＣインヒビターは、式ＸＸＶにより表され得るものを含み：
【０１５２】
【化６１】
ここでＱ１およびＱ２は、置換または非置換の、キノリニルまたはイソキノリニルであり、そしてｎは、約３〜約１０の整数である。特定の実施形態において、ｎは、構造式ＸＸＶの化合物について５である。
【０１５３】
特定の実施形態において、式ＸＸＶの化合物は、以下の構造により表される：
【０１５４】
【化６２】
。
【０１５５】
さらに特定のＨＤＡＣインヒビターは、以下の式ＸＸＶＩにより表されるものを含み：
【０１５６】
【化６３】
、ここでＲ１は、アリールアルキルであり、Ｒ２は、置換または非置換の、アリール基、アリールアルキル基、アリールアミノ基、アリールアルキルアミノ基、アリールオキシ基またはアリールアルコキシ基であり、Ａは、アミドであり、ｎは、３〜１０の整数である。特定の実施形態において、ｎは、構造式ＸＸＶＩの化合物について５である。
【０１５７】
特定の実施形態において、式ＸＸＶＩの化合物は、以下の構造により表される：
【０１５８】
【化６４】
。 特定の実施形態において、式ＸＸＶＩの化合物は、以下の構造により表される：
【０１５９】
【化６５】
。
【０１６０】
特定の実施形態において、式ＸＸＶＩの化合物は、以下の構造により表される：
【０１６１】
【化６６】
。
【０１６２】
このような化合物および他のＨＤＡＣインヒビターの別の例は、以下において見出され得る：米国特許第５，３６９，１０８号（１９９４年１１月２９日発行）、同第５，７００，８１１号（１９９７年１２月２３日発行）、同第５，７７３，４７４号（１９９８年６月３０日発行）、同第５，９３２，６１６号（１９９９年８月３日発行）、同第６，５１１，９９０号（２００３年１月２８日発行）（全てがＢｒｅｓｌｏｗに対するものである）；米国特許第５，０５５，６０８号（１９９１年１０月８日発行）、同第５，１７５，１９１号（１９９２年１２月２９日発行）、および同第５，６０８，１０８号（１９９７年３月４日発行）（全てがＭａｒｋらに対するものである）；米国仮特許出願番号６０／４５９，８２６（Ｂｒｅｓｌｏｗの名で２００３年３月４日出願）；ならびにＹｏｓｈｉｄａ，Ｍ．ら、Ｂｉｏａｓｓａｙｓ １７，４２３−４３０（１９９５）；Ｓａｉｔｏ，Ａ．ら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９６，４５９２−４５９７，（１９９９）；Ｆｕｒａｍａｉ Ｒ．ら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９８（１），８７−９２（２００１）；Ｋｏｍａｔｓｕ，Ｙ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（１１），４４５９−４４６６（２００１）；Ｓｕ，Ｇ．Ｈ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０，３１３７−３１４２（２０００）；Ｌｅｅ，Ｂ．Ｉ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（３），９３１−９３４；Ｓｕｚｕｋｉ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２（１５），３００１−３００３（１９９９）；ＰＣＴ公開出願ＷＯ０１／１８１７１（２００１年３月１５日公開）（Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒＣａｎｃｅｒ ＲｅｓｅａｒｃｈおよびＴｈｅ
Ｔｒｕｓｔｅｅｓ ｏｆ Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙに対する）；Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅに対するＰＣＴ出願公開ＷＯ０２／２４６１４４；Ｎｏｖａｒｔｉｓに対するＰＣＴ出願公開ＷＯＷＯ０２／２２５７７；Ｐｒｏｌｉｆｉｘに対するＰＣＴ出願公開ＷＯ０２／３０８７９；ＰＣＴ出願公開ＷＯ０１／３８３２２（２００１年５月３１日公開）、ＷＯ０１／７０６７５（２００１年９月２７日公開）およびＷＯ００／７１７０３（２０００年１１月３０日）（全てがＭｅｔｈｙｌｇｅｎｅ，Ｉｎｃ．に対する）；Ｆｕｊｉｓａｗａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄに対する１９９９年１０月８日に公開されたＰＣＴ公開出願ＷＯ００／２１９７９；Ｂｅａｃｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｌ．Ｌ．Ｃ．に対する１９９８年３月１１日に公開されたＰＣＴ出願公開ＷＯ９８／４００８０；ならびにＣｕｒｔｉｎ Ｍ．（ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ（２００２）１２（９）：１３７５−１３８４の現在の特許状態そして本明細書中で参考として引用される）。
【０１６３】
ＨＤＡＣインヒビターの特定の非限定的例は、以下の表で提供される。本発明が、以下に表した化合物に構造的に類似する任意の化合物を包含し、そしてこれらの化合物が、ヒストンデアセチラーゼを阻害し得ることに留意のこと。
【０１６４】
【化６７】
【０１６５】
【化６８】
【０１６６】
【化６９】
（定義）
「脂肪族基」は、非芳香族であり、炭素および水素のみからなり、必要に応じて１つ以上の不飽和単位（例えば、二重結合および／または三重結合）を含み得る。脂肪族基は、直鎖でも分枝鎖でも環状でもよい。直鎖または分枝鎖の場合、脂肪族基は、代表的に、約１〜約１２の炭素原子、より代表的には約１〜約６の炭素原子を含む。環状の場合、脂肪族基は、代表的に、約３〜約１０の炭素原子、より代表的には約３〜約７の炭素原子を含む。脂肪族基は、好ましくは、Ｃ１−Ｃ１２の直鎖または分枝鎖アルキル基（すなわち、完全に飽和した脂肪族基）、より好ましくは、Ｃ１−Ｃ６の直鎖または分枝鎖アルキル基である。例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルが挙げられる。
【０１６７】
本明細書中で使用される場合、「芳香族基」（「アリール基」とも呼ばれる）としては、本明細書中で定義されるような、炭素環式芳香族基、複素環式芳香族基（「ヘテロアリールとも呼ばれる」）および縮合多環式芳香環系が挙げられる。
【０１６８】
「炭素環式芳香族基」は、５〜１４の炭素原子の芳香族環であり、インダンのような５員環シクロアルキル基または六員環シクロアルキル基と縮合される炭素環式芳香族基を含む。炭素環式芳香環の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：フェニル、ナフチル（例えば、１−ナフチルおよび２−ナフチル）；アントラセニル（例えば、１−アントラセニル、２−アントラセニル）；フェナントレニル；フルオレノニル（例えば、９−フルオレノニル）、インダニルなど。炭素環式芳香環は、必要に応じて、以下に記載される指定された数の置換基で置換される。
【０１６９】
「複素環芳香族基」（または「ヘテロアリール」）は、５〜１４個の炭素の環原子およびＯ、Ｎ、またはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子の単環式、二環式または三環式芳香環である。ヘテロアリールの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ピリジル（例えば、２−ピリジル（α−ピリジルともいわれる）、３−ピリジル（β−ピリジルともいわれる）、および４−ピリジル（γ−ピリジルともいわれる））；チエニル（例えば、２−チエニルおよび３−チエニル）；フラニル（例えば、２−フラニルおよび３−フラニル）；ピリミジル（例えば、２−ピリミジルおよび４−ピリミジル）；イミダゾリル（例えば、２−イミダゾリル）；ピラニル（例えば、２−ピラニルおよび３−ピラニル）；ピラゾリル（例えば、４−ピラゾリルおよび５−ピラゾリル）；チアゾリル（例えば、２−チアゾリル、４−チアゾリルおよび５−チアゾリル）；チアジアゾリル；イソチアゾリル；オキサゾリル（例えば、２−オキサゾリル、４−オキサゾリルおよび５−オキサゾリル）；イソキサゾリル；ピロリル；ピリダジニル；ピラジニルなど。上記に定義される複素環芳香族（またはヘテロアリール）は、必要に応じて、芳香族について以下に記載されるように、指定の数の置換基で置換され得る。
【０１７０】
「縮合多環式芳香族」環構造は、１つ以上の他のヘテロアリールまたは非芳香族複素環式環を縮合している炭素環芳香族またはヘテロアリールである。例としては、以下が挙げられる：キノリニルおよびイソキノリニル（例えば、２−キノリニル、３−キノリニル、４−キノリニル、５−キノリニル、６−キノリニル、７−キノリニルおよび８−キノリニル、１−イソキノリニル、３−キノリニル、４−イソキノリニル、５−イソキノリニル、６−イソキノリニル、７−イソキノリニルおよび８−イソキノリニル）；ベンゾフラニル（例えば、２−ベンゾフラニルおよび３−ベンゾフラニル）；ジベンゾフラニル（例えば、２，３−ジヒドロベンゾフラニル）；ジベンゾチオフェニル；ベンゾチエニル（例えば、２−ベンゾチエニルおよび３−ベンゾチエニル）；インドリル（例えば、２−インドリルおよび３−インドリル）；ベンゾチアゾリル（例えば、２−ベンゾチアゾリル）；ベンゾオキサゾリル（例えば、２−ベンゾオキサゾリル）；ベンゾイミダゾリル（例えば、２−ベンゾイミダゾリル）；イソインドリル（例えば、１−イソインドリルおよび３−イソインドリル）；ベンゾトリアゾリル；プリニル；チアナフテニルなど。縮合多環式芳香族環構造は、必要に応じて、本明細書中で記載されるように、指定された数の置換基で置換され得る。
【０１７１】
「アラルキル基」（アリールアルキル）は、芳香族基、好ましくは、フェニル基で置換されたアルキル基である。好ましいアラルキル基は、ベンジル基である。適切な芳香族基は、本明細書中に記載され、適切なアルキル基は、本明細書中に記載される。アラルキル基に対する適切な置換基は、本明細書中に記載される。
【０１７２】
「アリールオキシ基」は、酸素を介して化合物に結合されたアリール基（例えば、フェノキシ）である。
【０１７３】
「アルコキシ基」（アルキルオキシ）は、本明細書中で使用される場合、酸素原子を介して化合物に連結された直鎖または分枝鎖のＣ１〜Ｃ１２または環式Ｃ３〜Ｃ１２アルキル基である。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシおよびプロポキシが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７４】
「アリールアルコキシ基」（アリールアルキルオキシ）は、アリールアルキルのアルキル部分上の酸素を介して化合物に結合されたアリールアルキル基（例えば、フェニルメトキシ）である。
【０１７５】
「アリールアミノ基」は、本明細書中で使用される場合、窒素を介して化合物に結合されたアリール基である。
【０１７６】
本明細書中で使用される場合、「アリールアルキルアミノ基」は、アリールアルキルのアルキル部分上の窒素を介して化合物に結合されたアリールアルキル基である。
【０１７７】
本明細書中で使用される場合、多くの部分または基は、「置換」または「非置換」のいずれかであるとして言及される。部分が置換されているとして言及される場合、置換について利用可能であることが当業者に公知の部分の任意の一部が、置換され得ることに留意すること。例えば、置換可能な基は、水素以外の基（すなわち置換基）で置換される水素原子であり得る。複数の置換基が存在し得る。複数の置換基が存在する場合、これらの置換基は、同じでも異なっていてもよく、置換基は、任意の置換可能な部位において置換され得る。置換についてのこのような意味は、当該分野で周知である。例示の目的として、本発明の範囲を限定するように解釈されるべきではないが、置換基である基の例は、以下である：アルキル基（これは、１つ以上の置換基（例えば、ＣＦ３）で置換され得る）、アルコキシ基（これはまた、例えば、ＯＣＦ３で置換され得る）、ハロゲンまたはハロ基（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ヒドロキシ、ニトロオキソ、−ＣＮ、−ＣＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、アジド、Ｎ−アルキルアミノまたはＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ（ここで、これらのアルキル基はまた、置換され得る）、エステル（−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、例えば、アルキル、アリールなどのような基で置換され得、これは、置換され得る）、アリール（最も好ましくは、フェニルであり、これは、置換され得る）、アリールアルキル（これは置換され得る）およびアリールオキシ。
【０１７８】
（立体化学）
多くの有機化合物は、平面分極光の平面を回転させる能力を有する、光学的に活性な形態で存在する。光学的に活性な化合物を記載する際に、接頭語ＤおよびＬまたはＲおよびＳは、そのキラル中心の周りでの分子の完全な立体配置を記載するのに使用される。接頭語ｄおよびｌまたは（＋）および（−）は、化合物による平面分極光の回転の記号を指定するために使用され、（−）またはｌは、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭語のついた化合物は、右旋性である。所定の化学構造について、これらの化合物は、立体異性体と呼ばれ、互いに重ねることができない鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体はまた、エナンチオマーとも呼ばれ、このような異性体の混合物は、しばしば、鏡像異性体混合物と呼ばれる。エナンチオマーの５０：５０混合物は、ラセミ混合物とも呼ばれる。本明細書中で記載される化合物の多くは、１つ以上のキラル中心を有し、それゆえに、異なる鏡像異性形態で存在し得る。所望であれば、キラル炭素は、アスタリスク（＊）を用いて指定され得る。キラル炭素への結合が本発明の式において直線として示される場合、キラル炭素の（Ｒ）および（Ｓ）立体配置の両方、つまり、エナンチオマーおよびその混合物の両方は、式中に含まれることが理解される。当該分野で使用されるように、キラル炭素についての完全な立体配置を特定することが望まれる場合、キラル炭素への結合の一方は、楔（平面より上にある原子への結合）として示され得、そして他方は、一連の短い平行線または短い平行線の楔（平面より下にある原子への結合）として示され得る。Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｌｏｄ−Ｐｒｅｌｏｇ系を使用して、キラル炭素に（Ｒ）または（Ｓ）立体配置を割り当て得る。
【０１７９】
本発明のＨＤＡＣインヒビターが、１つのキラル中心を含む場合、これらの化合物は、２つの鏡像異性形態で存在し、本発明は、エナンチオマーおよびエナンチオマーの混合物（例えば、ラセミ混合物ともいわれる特異的な５０：５０混合物）の両方を含む。これらのエナンチオマーは、以下の当該分野で公知の方法によって分離され得る：例えば、結晶化によって分離され得るジアステレオ異性体塩の形成（Ｄａｖｉｄ ＫｏｚｍａによるＣＲＣ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｏｐｔｉｃａｌ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｖｉａ Ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｉｃ Ｓａｌｔ Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，２００１）を参照のこと）；例えば、結晶化、ガス−液体クロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィーによって分離され得るジアステレオ異性誘導体または錯体の形成；一方のエナンチオマーとエナンチオマー特異的試薬との選択的反応（例えば、酵素的エステル化）；あるいは、キラルな環境（例えば、キラル支持体（例えば、キラルなリガンドが結合したシリカ）上、またはキラル溶媒の存在下）でのガス−液体クロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィー。所望のエナンチオマーが、上記の分離手順の１つによって別の化学実体に変換される場合、所望の鏡像異性形態を遊離させるのに、さらなる工程が必要とされることが理解される。あるいは、特定のエナンチオマーは、光学的に活性な試薬、基質、触媒または溶媒を使用する非対称合成によって、または非対称変換による一方のエナンチオマーの他方のエナンチオマーへの変換によって合成され得る。
【０１８０】
本発明の化合物のキラル炭素における特定の完全な立体配置の指定は、化合物の指定された鏡像異性形態が、エナンチオマー過剰（ｅｅ）であるか、または言い換えると、他方のエナンチオマーを実質的に含まないことを意味することが理解される。例えば、化合物の「Ｒ」形態は、化合物の「Ｓ」形態を実質的に含まず、従って、「Ｓ」形態のエナンチオマー過剰である。逆に、化合物の「Ｓ」形態は、化合物の「Ｒ」形態を実質的に含まず、従って、「Ｒ」形態のエナンチオマー過剰である。エナンチオマー過剰は、本明細書中で使用される場合、特定のエナンチオマーが５０％より多く存在する。例えば、エナンチオマー過剰は、約６０％以上、例えば、約７０％以上、例えば、約８０％以上、例えば、約９０％以上であり得る。特定の実施形態において、特定の完全な立体配置が指定される場合、示される化合物のエナンチオマー過剰は、少なくとも約９０％である。より特定の実施形態において、化合物のエナンチオマー過剰は、少なくとも約９５％、例えば、少なくとも約９７．５％、例えば、少なくとも約９９％エナンチオマー過剰である。
【０１８１】
本発明の化合物が、２つ以上のキラル炭素を有する場合、それは、２つより多い光学異性体を有し得、ジアステレオ異性形態で存在し得る。例えば、２つのキラル中心が存在する場合、この化合物は、４個までの光学異性体および２対のエナンチオマー（（Ｓ，Ｓ）／（Ｒ，Ｒ）および（Ｒ，Ｓ）／（Ｓ，Ｒ））を有し得る。これらのエナンチオマーの対（（Ｓ，Ｓ）／（Ｒ，Ｒ））は、互いに鏡像立体異性体である。鏡像ではない立体異性体（例えば、（Ｓ，Ｓ）および（Ｒ、Ｓ））は、ジアステレオマーである。ジアステレオマーの対は、当該分野で公知の方法（例えば、クロマトグラフィーまたは結晶化）によって分離され得、各々の対内の個々のエナンチオマーは、上記のように分離され得る。本発明は、このような化合物の各々の立体異性体およびそれらの混合物を含む。
【０１８２】
本明細書中で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に記載しない限り、単数および複数への言及を含む。従って、例えば、「活性因子」または「薬学的に活性な因子」との言及は、単一の活性因子および２つ以上の異なる活性因子の組み合わせを含み、「キャリア」との言及は、２つ以上のキャリアの混合物および単一のキャリアを含む、などである。
【０１８３】
開示される活性な化合物は、上記のように、それらの薬学的に受容可能な塩の形態で調製され得る。薬学的に受容可能な塩は、親化合物の所望の生物学的活性を有し、所望でない毒物学的な効果を与えない塩である。このような塩の例は、以下である：無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）と形成される酸付加塩；および有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギニン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸など）と形成される塩；（ｂ）アニオン原子（例えば、塩素、臭素、およびヨウ素）から形成される塩；ならびに（ｃ）塩基（例えば、アンモニウム塩）から誘導される塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムおよびカリウムの塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウムおよびマグネシウムの塩）、ならびに有機塩基（例えば、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン）との塩など。
【０１８４】
開示される活性化合物は、上記のように、その水和物（例えば、半水和物（ｈｅｍｉｈｙｄｒａｔｅ）、単水和物、二水和物、三水和物、四水和物など）の形態において調製され得る。
【０１８５】
本発明はまた、本明細書において開示されるＨＤＡＣインヒビターのプロドラッグを包含することが意図される。任意の化合物のプロドラッグは、周知の薬理学的技術を用いて作製し得る。
【０１８６】
上記に列挙した化合物に加えて、本発明は、そのような化合物のホモログおよびアナログの使用を包含することが意図される。この文脈において、ホモログは、上記に記載の化合物と実質的に構造類似性を有する分子であり、アナログとは、構造の類似性に関わりなく、実質的な生物学的類似性を有する分子である。
【０１８７】
（放射線治療）
本明細書に記載の処置との組み合わせにおける使用のために適切な放射線治療としては、（ａ）外部ビーム照射；および（ｂ）放射線放射放射性同位元素を含む放射性薬剤の使用が挙げられる。
【０１８８】
（外部ビーム照射）
癌の処置のための外部ビーム照射治療は、患者に対して外部の放射線供給源（代表的には、放射性同位元素（例えば、６０Ｃｏ、１３７Ｃｓ）、または高エネルギーＸ線供給源（例えば、線形加速器））を用いる。外部供給源は、腫瘍部位で患者の内部へ向けられた平行ビームを生じる。外部供給源放射線治療は、内部照射放射線治療のいくつかの問題を避けるが、望まれることなく、そして必然的に、腫瘍組織に沿った照射ビーム経路において、かなりの容量の非腫瘍組織または健常組織を照射する。
【０１８９】
患者中への外部照射ビームを、腫瘍部位に集中させながら、多様な「ガントリー（ｇａｎｔｒｙ）」角度で照射することによって、腫瘍組織における照射の所定用量を維持しながら、健常組織の照射の副作用を減少させ得る。健常組織の特定の容量要素は、放射ビームの経路に沿って、変化し、全体としての処置の間に、健常な組織のそのような要素の各々に対する全体としての容量を減少する。
【０１９０】
健常組織の照射はまた、照射ビームの軸に対して垂直とした場合の、腫瘍の断面全体に対して、照射ビームを厳密に平行にすることによって、減少し得る。そのような円周の平行化を生じるために、多数のシステムが存在し、そのいくつかは、複数のスライディングシャッターを使用し、そのスライディングシャッターは、それぞれの部分に関して、任意の輪郭の照射に対して放射線不透過なマスクを生じ得る。
【０１９１】
（放射性薬剤）
本明細書において定義する場合、「放射性薬剤」とは、少なくとも１つの放射線を照射する放射性同位元素を含む薬剤をいう。放射性薬剤は、種々の疾患の診断および／または治療のための核医療において慣用的に使用される。放射性同位元素標識薬剤（例えば、放射性同位元素標識抗体）は、放射線供給源として作用する、放射性同位元素（ＲＩ）を含む。本明細書において検討される場合、用語「放射性同位元素」は、金属および非金属放射性同位元素を含む。放射性同位元素は、放射性標識した薬剤の医療適用に基づいて選択される。放射性同位元素が金属製放射性同位元素である場合、金属製放射性同位元素をその他の分子と結合するために、キレート剤が、代表的には用いられる。放射性同位元素が非金属放射性同位元素である場合、非金属放射性同位元素が、代表的には、直接またはリンカーを解して、その他の分子に結合する。
【０１９２】
本明細書において使用する場合、「金属製放射性同位元素」は、インビボまたはインビトロにおける、治療的手順または診断的手順において有用である、任意の適切な金属製放射性同位元素である。適切な金属製放射性同位元素としては、限定されることはないが、アクチニウム−２２５、アンチモン−１２４、アンチモン−１２５、ヒ素−７４、バリウム−１０３、バリウム−１４０、ベリリウム−７、ビスマス−２０６、ビスマス−２０７、ビスマス−２１２、ビスマス−２１３、カドミウム−１０９、カドミウム−１１５ｍ、カルシウム−４５、セリウム−１３９、セリウム−１４１、セリウム−１４４、セシウム−１３７、クロミウム−５１、コバルト−５５、コバルト−５６、コバルト−５７、コバルト−５８、コバルト−６０、コバルト−６４、銅−６０、銅−６２、銅−６４、銅−６７、エルビウム−１６９、ユーロピウム−１５２、ガリウム−６４、ガリウム−６７、ガリウム−６８、ガドリニウム−ｌ５３、ガドリニウム−１５７、金−１９５、金−１９９、ハフニウム−１７５、ハフニウム−１７５〜１８１、ホルミウム−１６６、インジウム−１１０、インジウム−１１１、イリジウム−１９２、鉄−５５、鉄−５９、クリプトン−８５、鉛−２０３、鉛−２１０、ルテチウム−１７７、マンガン−５４、水銀−１９７、水銀−２０３、モリブデン−９９、ネオジム−１４７、ネプツニウム−２３７、ニッケル−６３、ニオブ−９５、オスミウム−１８５＋１９１、パラジウム−１０３、パラジウム−１０９、白金−１９５ｍ、プラセオジム−１４３、プロメチウム−１４７、プロメチウム−１４９、プロトアクチニウム−２３３、ラジウム−２２６、レニウム−１８６、レニウム−１８８、ルビジウム−８６、ルテニウム−９７、ルテニウム−１０３、ルテニウム−１０５、ルテニウム−１０６、サマリウム−１５３、スカンジウム−４４、スカンジウム−４６、スカンジウム−４７、セレン−７５、銀−１１０ｍ、銀−１１１、ナトリウム−２２、ストロンチウム−８５、ストロンチウム−８９、ストロンチウム−９０、硫黄−３５、タンタル−１８２、テクネチウム−９９ｍ、テルル−１２５、テルル−１３２、タリウム−２０４、トリウム−２２８、トリウム−２３２、タリウム−１７０、スズ−１１３、スズ−１１４、スズ−１１７ｍ、チタン−４４、タングステン−１８５、バナジウム−４８、バナジウム−４９、イッテルビウム−１６９、イットリウム−８６、イットリウム−８８、イットリウム−９０、イットリウム−９１、亜鉛−６５、ジルコニウム−８９、およびジルコニウム−９５が挙げられる。
【０１９３】
本明細書において使用する場合、「非金属製放射性同位元素」は、インビボまたはインビトロにおける、治療手順または診断手順において有用な、適切な非金属製放射性同位元素（非金属放射性同位元素）である。適切な非金属放射性同位元素としては、ヨウ素−１３１、ヨウ素−１２５、ヨウ素−１２３、リン−３２、アスタチン−２１１、フッ素−１８、炭素−１１、酸素−１５、臭素−７６、および窒素−１３が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９４】
放射線治療のために最も適切な同位体を同定することは、種々の因子に重み付けをすることが必要とされる。これら因子としては、腫瘍の取り込み、および保持、血中クリアランス、放射線送達の速度、放射性同位元素の半減期および比活性、ならびに経済的な様式における、大規模スケールの放射性同位元素製造の実現可能性が挙げられる。治療用放射性薬剤の要点は、必要量の放射線用量を、腫瘍細胞に送達し、そして収拾不可能な副作用を生じることなく、細胞障害性または殺腫瘍効果を達成する。
【０１９５】
治療用放射性同位元素の物理的な半減期は、腫瘍部位における放射性薬剤の生物学的半減期と類似であることが好ましい。例えば、放射性同位元素の半減期があまりに短いと、放射性薬剤が最大の標的／バックグラウンド比に到達する前に、多くの崩壊が生じる。一方、あまりに長い半減期は、正常組織に対して、不要な照射用量を生じ得る。理想的には、放射性同位元素は、最小の用量比を達成し、そして細胞周期の照射に感受性の相のほとんどの間に、全ての細胞を照射するのに十分長い半減期を有するできである。さらに、放射性同位元素の半減期は、製造、搬出、および輸送にための適切な時間を許容するように、十分長くなければならない。
【０１９６】
腫瘍治療における所定の適用のために放射性同位元素を選択することにおける他の実際の考慮は、アベイラビリティーおよび質である。純度は、十分でありかつ再現可能でなければならない、なぜなら微量の不純物は、放射性薬剤の放射性標識および放射性化合物純度に影響し得るからである。
【０１９７】
腫瘍中の標的レセプター部位は、代表的には、数が限られている。従って、放射性同位元素は、高い比活性を有することが好ましい。比活性は、主に、生産方法に依存する。微量金属混入物は、最小でなければならない。なぜなら、それらは、しばしば、キレート剤に対して放射性同位元素と競合し、そしてその金属の錯体は、放射性標識されたキレート剤と、レセプター結合について、しばしば競合するからである。
【０１９８】
本発明の方法における使用のために適切な放射のタイプは、変化し得る。例えば、照射は、その性質において、電磁気的または微粒子的であり得る。本発明の実施において有用な電磁気的照射としては、Ｘ線およびガンマ線が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の実施において有用な微粒子照射としては、電子ビーム（β粒子）、プロトンビーム、ニュートロンビーム、アルファ粒子、および負のπ中間子が挙げられるが、これらに限定されない。照射は、従来の放射線医学処置装置および方法を用いて、および、手術内の方法および定位方法によって、送達され得る。本発明の実施における使用のために適切な照射処置に関するさらなる考察は、Ｓｔｅｖｅｎ Ａ．Ｌｅｉｂｅｌら、、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（１９９８）（出版社Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ）の全体、そして特に第１３章および第１４章において見出され得る。照射はまた、標的送達のような他の方法によって送達され得る（例えば、放射活性「シード」によるか、または標的化された放射活性結合体の全身送達による）。Ｊ．Ｐａｄａｗｅｒら、Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ Ｒａｄｉｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｌｕｃａｎｔｈｏｎｅ ｉｎ Ｍｏｕｓｅ Ｃ３ＨＢＡ Ｍａｍｍａｒｙ Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｗｉｔｈ Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｌｕｃａｎｔｈｏｎｅ ｉｎ ａｎ Ｅｓｔｒｏｇｅｎ Ｂｉｏａｓｓａｙ、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．７：３４７−３５７（１９８１）。他の照射送達法を、本発明の実施において使用し得る。
【０１９９】
腫瘍治療のために、α粒子放射体およびβ粒子放射体が研究されている。α粒子は、特に良好な細胞毒である。なぜなら、これらは、１つまたは２つの細胞の直径内において、多量のエネルギーを散逸するからである。β粒子放射体は、エネルギーレベルに依存して、比較的長い侵入範囲（組織内で２〜１２ｍｍ）を有する。長い範囲の侵入は、不均一な血流および／またはレセプター発現を有する固形腫瘍について特に重要である。β粒子放射体は、それらが標的組織内において、不均一に分布する場合であっても、より均一な用量の分布を生じる。
【０２００】
（投与の様式および用量）
本発明の方法は、その投与が必要な患者に対して、第１の処置手順におけるヒストン脱アセチラーゼインヒビターの第１の量または用量、および第２の処置手順における第２の量または用量を、投与することを包含する。第１の量および第２の量はともに、治療的有効量を含む。
【０２０１】
本明細書において使用される用語としての「患者」とは、処置の受容者をいう。哺乳動物および非哺乳動物患者が、含まれる。特定の実施形態において、患者は動物（例えば、ヒト、イヌ、マウス、ネコ、ウシ、ヒツジ、ブタまたはヤギ）である。特定の実施形態において、患者はヒトである。
【０２０２】
（ＨＤＡＣインヒビターの投与）
本発明のＨＤＡＣインヒビターは、錠剤、カプセル剤（この各々は、徐放性処方、および時限式処方を含む）、ピル、粉末剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁剤、シロップ、およびエマルジョンのような経口形態において投与され得る。同様に、ＨＤＡＣインヒビターは、静脈内（ボーラスまたは注入）、腹腔内、皮下、または筋肉内の形態において投与され得る（全ては、薬学分野の当業者にとって周知の形態を使用する）。
【０２０３】
ＨＤＡＣインヒビターは、活性成分の徐放性放出を許容するような様式において、処方され得る、蓄積注射の形態または移植調製物の形態において投与され得る。活性成分は、ペレット内または小さな円柱内に圧縮され、そして、皮下に、または筋肉内に、蓄積注射または移植物として移植され得る。移植物は、不活性な物質（例えば、生分解性ポリマーまたは合成シリコーン（例えば、シラスチック、シリコーンゴム、またはＤｏｗ−Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって製造される他のポリマー）を利用し得る。
【０２０４】
ＨＤＡＣインヒビターはまた、リポソーム送達システム（例えば、小さい単層ベシクル、大きな単層ベシクル、および多層ベシクル）の形態において投与され得る。リポソームは、種々のリン脂質（例えば、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリン）から形成され得る。
【０２０５】
ＨＤＡＣインヒビターはまた、化合物分子がカップルした個別のキャリアとしてのモノクローナル抗体の使用によって、送達され得る。
【０２０６】
ＨＤＡＣインヒビターはまた、標的化することが可能な薬物キャリアとしての可溶性ポリマーを用いて調製され得る。そのようなポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシ−プロピル−メタクリルアミド−フェノール（ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙ−ｐｒｏｐｙｌ−ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｍｉｄｅ−ｐｈｅｎｏｌ）、ポリヒドロキシエチル−アスパルタミド−フェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド−ポリリジンが挙げられ得る。さらに、ＨＤＡＣインヒビターを、薬物の制御放出を達成するにおいて有用な生分解性ポリマー（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸のコポリマー、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、および架橋されたかまたは両親媒性のヒドロゲルのブロックコポリマー）を用いて調製し得る。
【０２０７】
ＨＤＡＣインヒビターを用いる投薬養生法は、以下を含む種々の因子に従って選択され得る：タイプ、種、年齢、体重、性別、および処置される癌の種類；処置される癌の重篤度（すなわち、段階）；投与の経路；患者の腎機能および肝機能；ならびに使用される特定の化合物またはその塩。通常の知識を有する医師または獣医は、疾患を処置（例えば、予防、阻害（完全または部分的）または進行の停止）するために必要とされる薬物の有効量を容易に決定および処方し得る。
【０２０８】
所望の癌を処置するために使用されるＨＤＡＣインヒビターの経口投薬量は、一日あたり約２ｍｇから約２０００ｍｇの間の範囲（例えば、一日あたり約２０ｍｇ〜約２０００ｍｇ、例えば、一日あたり約２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ）であり得る。例えば、経口投与量は、一日あたり、約２、約２０、約２００、約４００、約８００、約１２００、約１６００、または約２０００であり得る。一日あたりの総量は、単回用量において投与され得るか、または複数回の投薬（例えば、一日あたり２回、３回または４回）において投与され得る。
【０２０９】
例えば、患者は、約２ｍｇ／日から約２０００ｍｇ／日の間、例えば、約２０ｍｇ／日から約２０００ｍｇ／日の間、例えば、約２００ｍｇ／日から約２０００ｍｇ／日の間、例えば、約４００ｍｇ／日から約１２００ｍｇ／日の間を受領し得る。従って、一日あたり一回投与のために適切に調製された医薬は、約２ｍｇから約２０００ｍｇの間、例えば、約２０ｍｇから約２０００ｍｇの間、例えば、約２００ｍｇから約１２００ｍｇの間、例えば、約４００ｍｇ／日から約１２００ｍｇ／日の間を含み得る。ＨＤＡＣインヒビターは、単回用量において、または毎日２回、３回、または４回の用量に分けて投与され得る。従って、一日あたり２回の投与のために、適切に調製された医薬は、必要とされる毎日の用量の半分を含む。
【０２１０】
静脈内または皮下に、患者は、一日あたり約３〜１５００ｍｇ／ｍ２の間の送達に十分な量のＨＤＡＣインヒビターを受ける（例えば、一日あたり約３、３０、６０、９０、１８０、３００、６００、９００、１２００または１５００ｍｇ／ｍ２）。そのような量は、多数の適切な方法において投与され得る（例えば、一回の伸長された時間の間、または一日数回、大容量の低濃度のＨＤＡＣインヒビター）。その量は、一日以上の連続する日、断続的な日、または一週間（７日間）あたりのその組み合わせについて投与され得る。あるいは、短時間に、少量の高濃度のＨＤＡＣインヒビター（例えば、一日一回を一日以上、連続的にか、断続的にか、または一週間（７日間）あたりのその組み合わせ）。例えば、一日あたり３００ｍｇ／ｍ２の用量を、５連続日、処置あたり総量１５００ｍｇ／ｍ２について投与し得る。別の投薬養生法において、連続日数はまた、５であり得、処置は、３０００ｍｇ／ｍ２および４５００ｍｇ／ｍ２の総処置の総量について、連続する２週間または３週間の間続く。
【０２１１】
代表的には、静脈内の処方は、約１．０ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬの間、例えば、約２．０ｍｇ／ｍＬ、約３．０ｍｇ／ｍＬ、約４．０ｍｇ／ｍＬ、約５．０ｍｇ／ｍＬ、約６．０ｍｇ／ｍＬ、約７．０ｍｇ／ｍＬ、約８．０ｍｇ／ｍＬ、約９．０ｍｇ／ｍＬ、および約１０ｍｇ／ｍＬであり、上記の用量を達成する量において投与される。一例において、静脈内処方の十分な用量が、一日あたり患者に投与され得、その結果、一日の総用量は、約３００と約１５００ｍｇ／ｍ２の間である。
【０２１２】
グルクロン酸、Ｌ−乳酸、酢酸、クエン酸またはＨＤＡＣインヒビターの静脈内投与のために受容可能なｐＨ範囲において合理的な緩衝能を有する任意の薬学的に受容可能な酸／共役塩基を、緩衝液として用い得る。酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）を用いてｐＨが所望の範囲に調整された塩化ナトリウム溶液もまた、使用され得る。代表的には、静脈内処方のためのｐＨ範囲は、約５〜約１２の範囲であり得る。ＨＤＡＣインヒビターがヒドロキサム酸部分を有する場合の静脈内処方のための好ましいｐＨ範囲は、約９から約１２であり得る。適切な賦形剤の選択において、ＨＤＡＣインヒビターの可溶性および化学的適合性について、考慮すべきである。
【０２１３】
好ましくは、約５と約１２の間の範囲のｐＨにて、当該分野において周知の手順によって調製される皮下処方物は、適切な緩衝液および等張剤を含む。これらは、１つ以上の毎日の皮下投与において、ＨＤＡＣインヒビターの毎日の用量を送達するために、処方され得る（例えば、毎日１回、２回、または３回）。処方物の適切な緩衝液およびｐＨの選択は、投与されるＨＤＡＣインヒビターの可溶性に依存し、当業者によって容易に作製される。酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）を用いてｐＨが所望の範囲に調整された塩化ナトリウム溶液はまた、皮下処方物において使用され得る。代表的には、皮下処方物のｐＨ範囲は、約５から約１２の範囲内であり得る。ＨＤＡＣインヒビターがヒドロキサム酸部分を有する場合の皮下処方のための好ましいｐＨ範囲は、約９から約１２であり得る。適切な賦形剤の選択において、ＨＤＡＣインヒビターの可溶性および化学的適合性について、考慮すべきである。
【０２１４】
ＨＤＡＣインヒビターはまた、適切な鼻腔内ビヒクルの局所的使用を介して鼻腔内形態において、または当業者に周知の経皮皮膚パッチの形態を用いて経皮経路を介して、投与され得る。経皮送達システムの形態において投与するために、投薬量の投与は、当然に、投薬養生法を通じて、断続的よりもむしろ連続的である。
【０２１５】
ＨＤＡＣインヒビターは、意図された投与形態（すなわち、経口錠剤、カプセル、エリキシル剤、およびシロップなど）に関して適切に選択されそして従来の薬学的慣行と一致した、適切な薬学的希釈剤、賦形剤またはキャリア（これらをまとめて、本明細書において「キャリア」物質という）と混合された活性成分として投与され得る。
【０２１６】
例えば、錠剤またはカプセルの形態における経口投与のために、ＨＤＡＣインヒビターは、経口、非経口、薬学的に受容可能な、不活性なキャリア（例えば、ラクトース、スターチ、スクロース、グルコース、メチルセルロース、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｃｒｏｓｃａｒｍｅｌｌｏｓｅ）、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトールなど、またはこれらの組み合わせ）と組み合わせられ得る；液体形態における経口投与のために、経口薬物成分は、任意の経口、非毒性、薬学的に受容可能な不活性なキャリア（例えば、エタノール、グリセロール、水など）と組み合わせられ得る。さらに、所望される場合、または必要な場合、適切な結合剤、潤滑剤、崩壊剤、および着色剤もまた、混合物中に取り込まれ得る。適切な結合剤としては、スターチ、ゼラチン、天然の糖（例えば、グルコース、またはβラクトース、穀物甘味料、天然および合成のガム（例えば、アラビアゴム、トラガカントゴム、またはアルギン酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｃｒｏｓｃａｒｍｅｌｌｏｓｅ）、ポリエチレングリコール、ワックスなど）が挙げられる。これらの投薬形態において使用される潤滑剤としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤としては、限定されることはないが、スターチ、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられる。
【０２１７】
本明細書に記載され、そして本発明の方法における使用のために適切なヒストンデアセチラーゼインヒビター化合物の適切な薬学的に受容可能な塩は、従来の非毒性の塩であり、そして塩基または酸添加塩（例えば、無機塩基を有する酸（例えば、アルカリ金属塩（例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩など）、アンモニウム塩）；有機塩基を有する塩（例えば、有機アミン塩（例えば、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩など）など）；無機塩添加塩（例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩など）；有機カルボン酸またはスルホン酸添加塩（例えば、ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩など）；塩基性または酸性アミノ酸を有する塩（例えば、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸など）など）を含み得る。
【０２１８】
ヒストンデアセチラーゼインヒビターおよび照射はまた、以下の工程を包含する細胞中の癌を処置する方法において使用され得る：細胞を、ヒストンデアセチラーゼを阻害し得る化合物またはその塩の第１の量と接触させる工程、および、細胞を、放射線治療の第２の量と接触させて、癌を予防、阻害（完全に、または部分的に）あるいはその進行を停止る工程。細胞は、トランスジェニック細胞であり得る。別の実施形態において、細胞は、患者（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）中であり得る。
【０２１９】
特定の実施形態において、細胞中で癌を処置する第１の量は、ＨＤＡＣインヒビターの接触濃度であって、約１ｐＭから約５０μＭ、例えば、約１ｐＭから約５μＭ、例えば、約１ｐＭから約５００ｎＭ、例えば、約１ｐＭから約５０ｍＭ、例えば、約１ｐＭから約５００ｐＭである。特定の実施形態において、濃度は、約５．０μＭ未満である。別の実施形態において、濃度は、約５００ｎＭである。
【０２２０】
（外部ビーム照射の投与）
外部ビーム照射の投与のために、処置容量に対して、量は、少なくとも約１グレイ（Ｇｙ）画分で、少なくとも２日に一回である。特定の実施形態において、照射は、処置容量に対して、少なくとも約２グレイ（Ｇｙ）画分で、少なくとも１日一回投与される。別の特定の実施形態において照射は、処置容量に対して、１週間につき連続する５日間、少なくとも約２グレイ（Ｇｙ）画分で、少なくとも１日一回である。別の特定の実施形態において、処置容量に対して、１週間に３回、２日に一回、１０グレイ画分で、投与される。別の特定の実施形態において、少なくとも約２０Ｇｙの総量が、必要とする患者に投与される。別の特定の実施形態において、少なくとも約３０Ｇｙが、必要とする患者に投与される。別の特定の実施形態において、少なくとも約４０Ｇｙが、必要とする患者に投与される。
【０２２１】
代表的には、患者は、外部ビーム治療を、１週間に４回から５回受ける。全体の処置の経過は、癌の種類および処置の目的に依存して、通常、１〜７週間続く。例えば、患者は、３０日にわたって、２Ｇｙ／日の用量を受け得る。
【０２２２】
（放射性薬剤の投与）
多数の、放射性薬剤の投与方法が存在する。例えば、放射性薬剤は、標的化放射性結合体（例えば、放射性抗体、放射性ペプチドおよびリポソーム送達系）の標的化送達によってか、または全身送達によって、投与され得る。
【０２２３】
標的化送達の１つの特定の実施形態において、放射性標識化薬剤は、放射性標識した抗体であり得る。例えば、Ｂａｌｌａｎｇｒｕｄ Ａ．Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、２００１；６１：２００８−２０１４、およびＧｏｌｄｅｎｂｅｒ，Ｄ．Ｍ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２００２；４３（５）：６９３−７１３を参照のこと（これらの内容は、本明細書中において参考として援用される）。
【０２２４】
標的化送達の別の特定の実施形態において、放射性薬剤は、リポソーム送達システム（例えば、小さい単層ベシクル、大きな単層ベシクルおよび多層ベシクル）の形態において投与され得る。リポソームは、種々のリン脂質（例えば、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリン）から形成され得る。例えば、Ｅｍｆｉｅｔｚｏｇｌｏｕ Ｄ，Ｋｏｓｔａｒｅｌｏｓ Ｋ，Ｓｇｏｕｒｏｓ Ｇ．Ａｎ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｄｏｓｉｍｅｔｒｙ ｓｔｕｄｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｒａｄｉｏｎｕｃｌｉｄｅ−ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｉｎ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ ２００１；４２：４９９−５０４を参照のこと（この内容は、本明細書において参考として援用される）。
【０２２５】
標的化送達のなお別の特定の実施形態において、放射性標識された薬剤は、放射性標識ペプチドである、例えば、Ｗｅｉｎｅｒ ＲＥ、Ｔｈａｋｕｒ ＭＬ．、Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ａｐｐｌ Ｒａｄｉａｔ Ｉｓｏｔ ２００２ Ｎｏｖ；５７（５）：７４９−６３を参照のこと（この内容は、本明細書において参考として援用される）。
【０２２６】
標的化送達に加えて、近接照射療法を用いて、放射性薬剤を標的部位に送達し得る。近接照射療法は、放射線供給源を、腫瘍部位に可能な限り近くに配置する技術である。しばしば、供給源は、直接腫瘍内に挿入される。放射能供給原は、ワイヤ、シード、またはロッドの形態であり得る。一般に、セシウム、イリジウム、またヨウ素が使用される。
【０２２７】
２種類の近接照射療法が存在する：腔内処置および間隙処置。腔内処置において、放射線供給源を保持する容器が、腫瘍内または腫瘍近傍に配置される。供給源は、身体の腔内に配置される。
【０２２８】
間隙処置において、放射線供給源は、単独で、腫瘍内に配置される。これらの放射線供給源は、患者内に永久に留まり得る。もっともしばしば、放射線供給源は、数日後に患者から除去される。放射線供給源は、容器内にある。
【０２２９】
さらに、放射性薬剤は、ＨＤＡＣインヒビターについての上記に詳細に記載される投与の様式のいずれか１つを用いて、患者に投与され得る。
【０２３０】
必要な放射の量は、癌の特定の型について公知の用量に基づいて、当業者によって決定され得る。例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第５版、Ｒ．Ｃ．Ｂａｓｔら編集、Ｊｕｌｙ ２０００、ＢＣ Ｄｅｃｋｅｒを参照のこと（この内容は、本明細書において参考として援用される）。
【０２３１】
特定の実施形態において、照射がＨＤＡＣインヒビターとともに投与される場合、照射は、癌の停止を生じるか、または癌の退行を生じるのに有効な量で、投与され得る。
【０２３２】
（組み合わせ投与）
第１の処置手順であるヒストンデアセチラーゼインヒビターの投与は、第２の処置手順である放射線の前に、放射線処置の後に、放射線と同時に、またはこれらの組み合わせで行われうる。第１および第２の量は、投与前に組み合わせられ得るか、または異なる部位であるが、同時に投与され得る。例えば、総処置期間は、ヒストンデアセチラーゼインヒビターについて決定されうる。放射線は、インヒビターでの処置を行う前に施されうるか、またはインヒビターでの処置の後に施されうる。さらに、放射線処置は、インヒビター投与の期間の間に施されうるが、インヒビター処置期間全体にわたって行う必要はない。
【０２３３】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態をより完全に例示する。しかし、これらは、本発明の広い範囲を限定するとしては、如何様にも解釈されるべきではない。
【実施例】
【０２３４】
（実験法）
（材料および方法）
細胞培養：ヒト前立腺癌腫細胞株ＬＮＣａＰ（ＣＲＬ １７４０）を、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入した。ストックＴ−フラスコ培養物を、３７℃、９５％ 相対湿度、および５％ ＣＯ２にて、１０％ ウシ胎仔血清（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、１００ユニット／ｍＬ ペニシリン、および１００ｍｇ／ｍＬ ストレプトマイシン（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｗｏｏｄｌａｎｄ，ＣＡ）を補充したＲＰＭＩ １６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中で増殖させた。細胞濃度を、トリプシン処理した細胞を血球計算板で計数することにより決定した。
【０２３５】
スフェロイドイニシエーション：腫瘍細胞クラスタまたはスフェロイド（Ｓｐｈｅｒｏｉｄ）を、Ｙｕｈａｓらの液体重層技術に従って開始した。Ｙｕｈａｓ Ｊ．Ｍ．ら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，３７，３６３９−３６４３，１９７７を参照のこと。ＬＮＣａＰスフェロイド形成についての詳細および特徴付けは、Ｂａｌｌａｎｇｒｕｄ Ａ．Ｍ．ら．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５．３１７１ｓ−３１７６ｓ，１９９９に記載される。上記参考文献の内容全体は、参考として援用される。
【０２３６】
簡潔には、１％ 寒天（Ｄｉｆｃｏ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）で固化したＲＰＭＩ １６４０培地の薄層を含む液体重層プレートを、１００ｍｍまたは３５ｍｍのペトリ皿（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）から調製した。この培地に、トリプシン処理ストック培養物からの６．７×１０４細胞／ｍＬを接種した。得られた懸濁液を、１００ｍｍプレートに約１０６細胞を播種するために使用した。５〜７日間インキュベートした後、約２００μｍ直径のスフェロイドを、エッペンドルフピペットを使用して、目盛りを備えた倒立型位相差顕微鏡（Ａｘｉｏｐｈｏｔ ２；Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ Ｌｔｄ．，Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）下で選択した。
【０２３７】
処置プロトコル：各処置の後に、スフェロイドを、新たな培地中で懸濁することによって３回洗浄した。完全な処置は、ＳＡＨＡでのインキュベーション、放射線、またはＳＡＨＡおよび放射線両方への曝露のいずれかからなった。最低１２個のスフェロイドを、二連の実験において各条件に使用した。
【０２３８】
ＳＡＨＡインキュベーションについて、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭのストック溶液を培地で連続希釈して１〜５μＭ ＳＡＨＡを生成し、０．０１％未満の最終ＤＭＳＯ濃度にした。１２〜２４個の洗浄したスフェロイドを、上記のように寒天調製３５ｍｍペトリ皿に入れ、寒天表面全体が覆われるように、十分なＳＡＨＡを含む培地で覆った。
【０２３９】
外部ビーム照射のために、スフェロイドを、２．３Ｇｙ／分（Ｃｓ−１３７ Ｍｏｄｅｌ ６８；ＪＬ Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｇｌｅｎｄａｌｅ，ＣＡ）の線量速度で、セシウム照射器を使用して、６Ｇｙ外部ビーム光子放射線の強い線量に曝した。
【０２４０】
α放射線について、スフェロイドを、Ａｃ２２５−ＨｕＭ １９５ α放射線の放射活性（１００ ｎＣｉ／ｍＬ）濃度に２４時間曝した。Ａｃ２２５−ＨｕＭ １９５は、アクチニウム２２５で放射性標識された組換えヒト化抗ＣＤ３３モノクローナル抗体である。この抗体を、Ｄａｖｉｄ Ｓｃｈｅｉｎｂｅｒｇ，Ｍ．Ｄ．，Ｐｈ．Ｄ．（Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）の研究室から得た。
【０２４１】
完全な処置の後に、洗浄したスフェロイドを、２４ウェルプレートの別個の寒天調製ウェルに入れた。未処理スフェロイドを洗浄し、最初の選択の直後に分離した。各ウェル中の培地を置換し、１週間に２回容量測定を行った。倒立型顕微鏡および上記の目盛りを使用して、大きい方の直径と小さい方の直径（それぞれ、ｄｍａｘおよびｄｍｉｎ）を、Ｖ＝（１／６）・πｄｍａｘｄｍｉｎ２として計算した。一旦スフェロイドが顕微鏡の視野を超えたか、または個々の細胞もしくは複数の小さな細胞クラスタに断片化したら、容量モニタリングを停止した。各実験の最後に、再増殖しなかったスフェロイドを、成長アッセイ（ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ ａｓｓａｙ）を使用して生存度をスコア付けした。再増殖しなかったスフェロイドを含むウェルからの細胞またはスフェロイド断片を収集し、別個の寒天非含有（接着）２４ウェルプレートの個々のウェル中に入れ、２週間インキュベートし、次いで、コロニーについてスコア付けした。
【０２４２】
免疫組織化学：スフェロイド内の腫瘍細胞の増殖またはアポトーシスを、それぞれ、Ｋｉ６７媒介性またはＴｄＴ媒介性のｄＵＴＰ−ビオチンニックエンド標識（ＴＵＮＥＬ）染色によって評価した。処理の０、６、２４、または４８時間後に、スフェロイドを冷培地で洗浄し、４％ パラホルムアルデヒド中で４時間固定し、パラフィンブロック中に置いた。そのブロックの連続する５μｍ切片を、ミクロトームを用いて切断し、ポリ−Ｌ−リジンコーティングしたスライド硝子にマウントし、氷冷アセトン中で１０分間固定した。
【０２４３】
Ｋｉ６７染色を、Ｋｉ６７に対するモノクローナル抗体およびＭＯＭキット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を用いて行った。
【０２４４】
アポトーシス細胞を、Ｇａｖｒｉｅｌｉら（Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１１９：４９３−５０１，１９９２）から改変したＴＵＮＥＬを用いて染色した。ヘマトキシリン中での最終的な２分のインキュベーションを使用して、切片を対比染色した。未処理スフェロイドを、コントロールとして使用した；陽性コントロールを、ＤＮａｓｅ Ｉ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ，Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用した作製した。画像を、結合型Ｐｉｘｅｒａ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ Ｃａｍｅｒａおよび関連づけられたソフトウェア（Ｐｉｘｅｒａ Ｖｉｓｕａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ Ｓｕｉｔｅ，Ｐｉｘｅｒａ，Ｌｏｓ Ｇａｔｏｓ，ＣＡ）を用いて、倒立型位相差顕微鏡からデジタルで獲得した。画像を、スフェロイド切片内の反応性細胞の割合として、陽性染色についてスコア付けした。
【０２４５】
（統計学的分析）ＳＡＨＡと放射線との間の相乗効果を評価するために、腫瘍体積曲線の下の面積（ＡＵＣ）を、各スフェロイドについて測定した。腫瘍増殖の相乗的阻害は、平均して、各処置群を別個に含む相加的モデルによって予想されるより小さいｌｏｇ ＡＵＣを生じる、組み合わせ処置群として定義される。本発明者らは、この関係を、以下の不等式によって記載する：
ａｖｇ（Ｖ｜Ｓ＝５Ｍ，Ｒ＝６ Ｇｙ）＜Ｃ＋｛ａｖｇ（Ｖ｜Ｓ＝５μＭ，Ｒ＝０）−Ｃ｝＋｛ａｖｇ（Ｖ｜Ｓ＝０，Ｒ＝６ Ｇｙ）−Ｃ｝
ここで、Ｖは、ｌｏｇ ＡＵＣであり、Ｓ＝５μＭおよびＲ＝６Ｇｙは、実験において使用されるＳＡＨＡおよび放射線の線量を表し、そしてＣは、コントロール群における平均ｌｏｇ ＡＵＣである［Ｃ＝ａｖｇ（Ｖ｜Ｓ＝０，Ｒ＝０）］。相乗効果を試験するために、本発明者らは、平均ｌｏｇ ＡＵＣの２０００のブートストラップ反復を、４つの群の各々について計算し、そしてこの不等式が得られない反復の割合を計算した。この割合は、達成された有意性レベル（ｐ値）と呼ばれる。小さい達成された有意性レベルは、腫瘍増殖の相乗的阻害が組み合わせ処置に起因して起こったことの指標である。
【０２４６】
両側Ｔ検定を使用して、陽性に染色された細胞の百分率の有意な差異を試験した。
【０２４７】
（結果）
（実施例１）
（スフェロイド増殖に対するＳＡＨＡの影響）
化学療法および放射線に対する応答が、インビボで腫瘍において見られる応答をよく近似するスフェロイドにおいて、研究を行った（Ｓｔｕｓｃｈｋｅ，Ｍ．ら、Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ．２４：１１９−２６，１９９２；Ｓａｎｔｉｎｉ，Ｍ．Ｔ．ら、Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｂｉｏｌ．７５：７８７−９９、１９９９；Ｄｅｒｔｉｎｇｅｒ，Ｈ．ら、Ｒａｄｉａｔ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｂｉｏｐｈｙｓ．１９：１０１−７，１９８１）。
【０２４８】
スフェロイド増殖に対するＳＡＨＡの効果を、スフェロイドを、０μＭ、１．２５μＭ、２．５μＭ、および５μＭ、のＳＡＨＡと一緒に、１２０時間かまたは連続的にかのいずれかでインキュベートすることによって、試験した（図１Ａ〜Ｄ）。スフェロイド増殖を、１２０時間のＳＡＨＡとのインキュベーション後少なくとも４０日間、または４０日間の連続処理にわたって、モニタリングした。１．２５μＭのＳＡＨＡの濃度において、１２０時間と連続的との両方の曝露条件について、スフェロイド増殖は遅くなったが、停止しなかった。２．５μＭにおいて、完全な増殖停止が、１２０時間のインキュベーション期間にわたって観察された。増殖の阻害は、薬物曝露の終了後さらに４〜５日間、次いで、回復におけるこの遅延の後に、指数関数的増殖が続き、その後、プラトーが続いた（すなわち、ゴンペルツ成長（Ｂａｓｓｕｋａｓ，Ｉ．Ｄ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５４：４３８５−９２，１９９４９））。これは、未処理のスフェロイドを用いて得られるものと類似である。５μＭのＳＡＨＡとの１２０時間のインキュベーションの５日後、２．４倍の中央体積減少が見られ、この後、スフェロイド増殖は、ゴンペルツ速度論に戻った。スフェロイドが、０μＭ（ＳＡＨＡ曝露なし）、１．２５μＭ、２．５μＭおよび５μＭ、のＳＡＨＡ（５日間のインキュベーション）の後の開始体積より１０００倍大きい体積（体積が２倍になる時間の約１０倍）に達するために必要とされる時間は、それぞれ１６日間、２０日間、２３日間、および２９日間であり、それぞれ、ＳＡＨＡ処理されたスフェロイドについて、４日間、７日間、および１３日間の増殖の遅れを生じた。
【０２４９】
２．５μＭでのスフェロイドの連続的な曝露は、完全な増殖抑制を生じた；５μＭにおいて、スフェロイド体積の急激な損失が観察され、大部分のスフェロイドが、２０日目までに解離した。停止されたかまたは解離されたスフェロイドの代表的な形態学は、図２Ａ（５μＭ）および図２Ｂ（２．５μＭ）に示されている。
【０２５０】
ＳＡＨＡの、抗腫瘍細胞剤としての活性を評価するために、スフェロイドを使用して得られる結果を、単層培養実験と比較することが、有益である。ＬＮＣａＰ単層細胞培養において、２．５μＭのＳＡＨＡは、完全な増殖抑制を引き起こし、４日間にわたって細胞の殺傷が最小〜なしであり、そして５μＭのＳＡＨＡは、ＳＡＨＡインキュベーションの４８時間後に開始する、進行性の細胞殺傷を引き起こす（Ｂｕｔｌｅｒ，Ｌ．Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０：５１６５−７０．２０００）。
【０２５１】
これらの実験において、ＬＮＣａＰスフェロイドの、これらの濃度に対する体積応答性は、一般に、単層培養での結果と一致した（図１Ａ〜Ｄ）。しかし映像（図２Ａ〜Ｂ）は、これらの効果に対する時間スケールおよび病因学が、単層培養において見られるものとは異なることを明らかにした。５μＭにおいて、完全なスフェロイドの破壊は、ＳＡＨＡとのインキュベーションの１３〜１６日後まで起こらなかった；そして２．５μＭにおける見かけの増殖阻害は、主として、スフェロイド表面上の細胞の連続的な損失に起因して生じるようであった。ＴＵＮＥＬ染色によって示されるように（以下および図５Ａ〜Ｃを参照のこと）、そしてスフェロイドにおける細胞の形態学および迅速な排除によって示唆されるように（図２Ａ）、ＳＡＨＡへの曝露後の細胞死は、主として、アポトーシスによる。
【０２５２】
（実施例２）
（スフェロイド増殖に対するＳＡＨＡおよび外部ビーム放射の影響）
外部ビーム（低ＬＥＴの高線量率照射）に対するＬＮＣａＰの用量−応答が、以前に報告された（Ｂａｌｌａｎｇｒｕｄ，Ａ．Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：２００８−１４，２００１；Ｅｎｍｏｎ，Ｒ．Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，提出された）。これらのデータに基づいて、３Ｇｙおよび６Ｇｙの吸収された線量を、組み合わせ研究において選択した。なぜなら、これらの放射線の用量は、単独で、形状が未処理曲線に一致するが、最初のスフェロイド体積の１０００倍に達するために、４〜１０日の遅れを有する、増殖曲線を与えたからである。ＳＡＨＡ用量−応答データ（図１Ａ〜Ｄ）に基づいて、５μＭのＳＡＨＡとの９６時間のインキュベーションを、組み合わせ研究のために選択した。組み合わせ処理を、スフェロイドをＳＡＨＡに４８時間曝露し、照射し、次いでさらに４８〜７２時間インキュベートすることによって実施し、その後、洗浄し、そして増殖をモニタリングした。
【０２５３】
スフェロイドとして増殖したＬＮＣａＰを、この研究において使用した。以下の処理レジメンを使用した：
Ａ：処理なし。
Ｂ：５μＭ ＳＡＨＡでの９６時間の処理。
Ｃ：２．３Ｇｙ／分の線量率でのＣｓ−１３７照射を使用する、６Ｇｙの急激な照射での処理（Ｃｓ−１３７モデル６８：ＪＬ Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ，Ｇｌｅｎｄａｌｅ，ＣＡ）。処理は、スフェロイドにわたって均一であり、そして０．２ｋｅＶ／μｍの低ＬＥＴを使用した。
Ｄ：合計９６時間の、５μＭ ＳＡＨＡでの処理であって、４８回の合計９６時間のＳＡＨＡ曝露に引き続いて、Ｃｓ−１３７照射基を使用する６Ｇｙの急激な照射（上記のような）による処理。
【０２５４】
３Ｇｙ（および１２０時間ＳＡＨＡ）を用いる組み合わせ研究は、スフェロイドの増殖における、ＳＡＨＡ用量に依存する適度な遅延を生じた；５μＭの濃度で、７日間の遅延が観察された（データは示さない）。
【０２５５】
６Ｇｙおよび５μＭのＳＡＨＡとの９６時間のインキュベーションを用いる組み合わせ研究は、完全な増殖阻害を引き起こし、１２のスフェロイドのいずれも、増殖アッセイにおいてコロニーを形成しなかった（図３Ｄ）。対照的に、６Ｇｙの放射線単独（図３Ｃ）または５μＭ ＳＡＨＡへの９６時間の曝露単独（図３Ｂ）は、最初の体積の１０００倍の増加について、それぞれ５日間および１５日間の遅延を生じた。これらの結果の統計学的分析は、併用療法から生じる腫瘍増殖の相乗的な阻害を示した（ｐ＜０．０１）。組み合わせて医療後の異なる時点での代表的なスフェロイドの形態学は、図４に示される。処理の終了の直後（４日目および９日目）、スフェロイドは、ＳＡＨＡのみの処理を用いて見られたものと類似の外観を有する。より後の時点で、スフェロイドの形態は、かなり変化する；これらのスフェロイドは、少数の膨張した、おそらく壊死性の細胞から構成されるようである。
【０２５６】
（実施例３）
（アポトーシスに対するＳＡＨＡおよび外部ビーム放射の影響）
ＳＡＨＡが放射線誘導アポトーシスを増加させるか否かを試験するために、単一治療または併用療法の終了後の種々の時点において、スフェロイドセクションのＴＵＮＥＬ染色を実施した。９６時間のＳＡＨＡインキュベーションの直後、スフェロイド表面上の細胞の大部分がアポトーシスを起こし、そしてスフェロイドの内部でのアポトーシスの証拠はほとんどない（図５Ａ）。この知見はまた、３日目および６日目の、ＳＡＨＡで処理したスフェロイドの形態学的外観と一致する（図２Ａ）。ＳＡＨＡインキュベーションの終了後４８時間目までに、スフェロイド表面でのアポトーシス性細胞は検出されず（これはおそらく、剥離（ｓｈｅｄｄｉｎｇ）に起因する）、そしてアポトーシス性細胞は、スフェロイド全体にわたって見出される。細胞細片のポケットもまた、内部において明らかである。これらは、ＳＡＨＡインキュベーションの終了直後に明らかであるが、６時間後および２４時間後に、より顕著になる。ＳＡＨＡおよび放射線で処理されたスフェロイドのＴＵＮＥＬ染色は、ほとんど同じパターンを生じ、このことは、ＳＡＨＡがかなりのアポトーシスを誘導するが、組み合わせを用いて見られる相乗的なスフェロイドの応答は、増強されたアポトーシスによっては説明され得ないことを示唆する（図７Ａ）。
【０２５７】
（実施例４）
（増殖に対するＳＡＨＡおよび外部ビーム放射線の影響）
実施例３に示されるＴＵＮＥＬ染色結果とは対照的に、Ｋｉ６７染色によって増殖活性を試験する、対応する免疫組織学的研究は、組み合わせに対して、各処理単独についての細胞増殖におけるかなりの差異を示した（図６Ａ〜Ｃおよび７Ｂ）。ＳＡＨＡとの９６時間のインキュベーションの終了時に、スフェロイドを構成する事実上全ての細胞が、周期を停止した。このことは、ＳＡＨＡの公知の細胞周期阻害性と一致する。阻害効果は短寿命であり、そして６〜２４時間のかすかな陽性Ｋｉ６７染色が見られ得る。４８時間目までに、多くの細胞が、セクション全体にわたって、ＳＡＨＡのみで処理されたスフェロイドにおけるＫｉ６７染色の増加を示す。このような染色のいずれも、組み合わせを用いて処理されたスフェロイドにおいては、見られない（ｐ＜０．０１）。
【０２５８】
（実施例５）
（スフェロイド増殖に対するＳＡＨＡおよびα放射線の影響）
ＳＡＨＡとα粒子放出放射性同位体との組み合わせの影響を試験するために、スフェロイドを２４時間、１００ｎＣｉ／ｍＬのＡｃ−２２５に曝露し、次いでＳＡＨＡに９６時間曝露することによって、組み合わせ処理を実施した。
【０２５９】
ＬＮＣａＰ細胞は、上記のようにスフェロイドとして増殖した。以下の処理レジメンを使用した：
Ａ：処理なし。
Ｂ：５μＭ ＳＡＨＡでの９６時間の処理。
Ｃ：１００ｎＣｉ／ｍＬのＡｃ２２５−ＨｕＭ１９５での２４時間の処理。
Ｄ：ＳＡＨＡ処理の前の、１００ｎＣｉ／ｍＬのＡｃ２２５−ＨｕＭ１９５での２４時間の処理と組み合わせた、合計９６時間の、５μＭ ＳＡＨＡでの処理。
【０２６０】
Ａｃ２２５−ＨｕＭ１９５への２４時間の曝露、引き続く５μＭ ＳＡＨＡとの９６時間のインキュベーションを用いる組み合わせ研究は、完全な増殖阻害を引き起こし、これは、５０日間の期間にわたって維持された（図８）。対照的に、Ａｃ２２５−ＨｕＭ１９５処理単独では、スフェロイドの増殖阻害を引き起こさず、そして５μＭ ＳＡＨＡへの９６時間の曝露単独では、最初の１０日間の遅延を生じ、引き続いて、スフェロイド増殖は、３０日後に、ほぼ、コントロールである未処理のスフェロイド体積のレベルになった。抗ＣＤ３３抗体を、これらの実験において選択した。なぜなら、この抗体は、前立腺癌細胞にもスフェロイドにも結合しないことが既知であり、従って、インキュベーション期間、およびＡｃ２２５放射性核種によって送達されるα粒子の線量の制御を可能にすることが公知であるからである。「無関係の」抗体の使用は、スフェロイドに送達された吸収された線量を計算することを、より容易にする。なぜなら、インキュベーション期間を超える放射能の保持がないからである。このことは、用量応答関係を確立する際、および観察される相乗効果が、抗体によって媒介される効果よりむしろ、主としてＳＡＨＡと放射線との組み合わせに起因することを確実にする際に、重要である。実際に、腫瘍細胞上の抗原部位を認識する特異的抗体が、放射性核種を送達するために使用され得る。
【０２６１】
（知見の要旨）
放射線とＳＡＨＡとの組み合わせは、増殖抑制を生じ、これは、各様式単独と比較して、スフェロイド体積の１万倍〜１０万倍の差異を導いた（図３Ａ〜Ｄ。組み合わせ処理されたスフェロイドに対するＳＡＨＡ単独についてのＴＵＮＥＬ染色の結果は、効力の相乗的増加が、増強されたアポトーシスの結果として生じるのではないようであることを示唆する（図５Ｂおよび図７Ａに対して図５Ａ））。この観察は、併用療法の直後および数週間から１ヶ月を超えての後の、スフェロイドの形態学的特徴と一致する。６Ｇｙで照射（図４、４日間）されたスフェロイドのＳＡＨＡ曝露の終了時に、これらのスフェロイドの形態学的外観は、ＳＡＨＡ単独で処理されたスフェロイドについて観察されるものと類似しており、そしてこのことは、ＳＡＨＡにより誘導されるアポトーシスと一致する。対照的に、１４〜４２日目の形態は、細胞の膨張および溶解を示し、これは、壊死による死と一致する。
【０２６２】
ＳＡＨＡ単独と組み合わせ処理との間のスフェロイドの発生運命の分岐の最初の証拠が、Ｋｉ６７染色において観察された（図６Ａ〜Ｃおよび７Ｂ）。５μＭ ＳＡＨＡ単独とのインキュベーションの終了の４８時間後、増殖する細胞が観察され、一方で、このような回復は、ＳＡＨＡおよび放射線で処理されたスフェロイドにおいて見出されなかった；使用される投薬量において、放射線単独では、Ｋｉ６７染色によって証拠付けられるように、細胞増殖を変化させなかった（図６Ｃ、パネルＨ）。一緒にすると、増殖およびアポトーシスのデータは、放射線によって増強されたＳＡＨＡの効果は、放射線によって誘導される増加したアポトーシスよりむしろ、主として、ＳＡＨＡとのインキュベーション後の、細胞の引き続く増殖の減少に起因することを示唆する。
【０２６３】
細胞が、組み合わせたＳＡＨＡと放射線との処理に曝露された後に周期を再開し得ないことは、放射線により誘導される損傷の修復の破壊、または他の修復可能なＤＮＡ損傷の増強を示し得る。
【０２６４】
本発明は、その好ましい実施形態を参照して、特に図示および記載されたが、形式および細部における種々の変化が、添付の特許請求の範囲によって包含される本発明の範囲から逸脱することなくなされ得ることが、当業者によって理解される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳の癌の処置が必要な被験体において、放射線療法と併用して脳の癌を処置するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物が、第１量のヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターを含み、該ヒストンデアセチラーゼインヒビターが、以下の構造式：
【化７０】
によって表されるスベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、またはその薬学的に受容可能な塩であり、該組成物が、第２量の放射線とともに使用されることが意図されており、該第１量および該第２量が一緒になって治療有効量を構成する、薬学的組成物。
【請求項２】
ＳＡＨＡが、ＨＤＡＣインヒビターとして投与される、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記放射線が、外部ビーム放射線によって提供される、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記放射線が、電磁放射線である、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記電磁放射線が、γ線である、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記第２量が、少なくとも約４０Ｇｙの放射線である、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記ＨＤＡＣインヒビターおよび放射線が、同時に投与されることが意図されている、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記放射線の前に投与されることが意図されている、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記放射線の後に投与されることが意図されている、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記ＳＡＨＡが、前記患者に一日当たり４００ｍｇで経口投与するのに適している、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記ＳＡＨＡが、一日２回の経口投与に適している、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記ＳＡＨＡが、一日１回の経口投与に適している、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記ＳＡＨＡが、一日１回、２００ｍｇで前記患者に経口投与するのに適している、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記脳の癌が、網膜芽腫または神経芽腫である、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項１】
脳の癌の処置が必要な被験体において、放射線療法と併用して脳の癌を処置するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物が、第１量のヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターを含み、該ヒストンデアセチラーゼインヒビターが、以下の構造式：
【化７０】
によって表されるスベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、またはその薬学的に受容可能な塩であり、該組成物が、第２量の放射線とともに使用されることが意図されており、該第１量および該第２量が一緒になって治療有効量を構成する、薬学的組成物。
【請求項２】
ＳＡＨＡが、ＨＤＡＣインヒビターとして投与される、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記放射線が、外部ビーム放射線によって提供される、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記放射線が、電磁放射線である、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記電磁放射線が、γ線である、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記第２量が、少なくとも約４０Ｇｙの放射線である、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記ＨＤＡＣインヒビターおよび放射線が、同時に投与されることが意図されている、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記放射線の前に投与されることが意図されている、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記放射線の後に投与されることが意図されている、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記ＳＡＨＡが、前記患者に一日当たり４００ｍｇで経口投与するのに適している、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記ＳＡＨＡが、一日２回の経口投与に適している、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記ＳＡＨＡが、一日１回の経口投与に適している、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記ＳＡＨＡが、一日１回、２００ｍｇで前記患者に経口投与するのに適している、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記脳の癌が、網膜芽腫または神経芽腫である、請求項２に記載の薬学的組成物。
【図１−１】
【図１−２】
【図２】
【図３−１】
【図３−２】
【図４】
【図５−１】
【図５−２】
【図５−３】
【図６−１】
【図６−２】
【図６−３】
【図７−１】
【図７−２】
【図８】
【図１−２】
【図２】
【図３−１】
【図３−２】
【図４】
【図５−１】
【図５−２】
【図５−３】
【図６−１】
【図６−２】
【図６−３】
【図７−１】
【図７−２】
【図８】
【公開番号】特開２００９−１１４２０７（Ｐ２００９−１１４２０７Ａ）
【公開日】平成２１年５月２８日（２００９．５．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−４３１０８（Ｐ２００９−４３１０８）
【出願日】平成２１年２月２５日（２００９．２．２５）
【分割の表示】特願２００３−５８５７０６（Ｐ２００３−５８５７０６）の分割
【原出願日】平成１５年４月１５日（２００３．４．１５）
【出願人】（５００５１６０５６）スローン − ケッタリング インスティチュート フォー キャンサー リサーチ (14)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年５月２８日（２００９．５．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年２月２５日（２００９．２．２５）
【分割の表示】特願２００３−５８５７０６（Ｐ２００３−５８５７０６）の分割
【原出願日】平成１５年４月１５日（２００３．４．１５）
【出願人】（５００５１６０５６）スローン − ケッタリング インスティチュート フォー キャンサー リサーチ (14)
【Ｆターム（参考）】
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