癒着防止用組成物
本発明は、生体適合性を有するヒアルロン酸と高分子化合物とからなる組織癒着防止用組成物に関するもので、特に、化学的架橋剤または化学的修飾剤により改質されていないヒアルロン酸を含む組成物及びその製造方法に関するもので、優れた効能を持つ癒着防止用組成物に関する。
この癒着防止用組成物は、その癒着防止効果において物理的障壁の役割を果たす高分子物質間の単純混合とは違い、物理的障壁の機能を果たす他、癒着発生の主因とされる血栓形成も抑制する新しい癒着防止機能を発揮し、従来に使われた材料に比べてより効果的な物理的障壁の役割を果たし、一定時間体内に留まってから分解、吸収、排せつされ、術後に傷が治ることを妨害せず、手術部位への適用が便利な優れた効果を奏する。
この癒着防止用組成物は、その癒着防止効果において物理的障壁の役割を果たす高分子物質間の単純混合とは違い、物理的障壁の機能を果たす他、癒着発生の主因とされる血栓形成も抑制する新しい癒着防止機能を発揮し、従来に使われた材料に比べてより効果的な物理的障壁の役割を果たし、一定時間体内に留まってから分解、吸収、排せつされ、術後に傷が治ることを妨害せず、手術部位への適用が便利な優れた効果を奏する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体適合性を有するヒアルロン酸と高分子化合物とからなる組織癒着防止用組成物に関するもので、特に、化学的架橋剤または化学的修飾剤により改質されていないヒアルロン酸を含む組成物及びその製造方法に関するもので、優れた効能を持つ癒着防止用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
癒着（ａｄｈｅｓｉｏｎ）とは、炎症、創傷、摩擦、手術などによる創傷などの傷の治癒過程で線維組織（ｆｉｂｒｏｕｓ ｔｉｓｓｕｅ）が過度に生成されたり、血液が流出して凝固したりすることから、互いに離れているべき周辺の臓器または組織がくっつき合う現象のことをいうもので、いかなる種類の手術後にも発生する可能性がある。このような現象により、手術後の回復過程において手術部位周辺の臓器または組織が付着しあい、深刻な臨床的後遺症につながることがある。
【０００３】
一般に、術後の臓器癒着発生率は５５％〜９３％に達すると報告されている（Ａｎｎ．Ｒｏｙａｌ Ｃｏｌｌ．Ｓｕｒｇ．Ｅｎｇｌ．，７５，１４７−１５３，１９９３）。特に、開腹手術後の癒着発生頻度が非常に多く、その一部は自発的に分解されることもあるが、大部分の場合は傷の治癒後も癒着が存在し、各種の後遺症を招くこともある。後遺症の種類は非常に多岐にわたっており、米国の統計資料によると、術後癒着によって発生する主な症状として、小腸閉塞が４９％〜７４％、不妊が１５％〜２０％、慢性骨盤症が２０％〜５０％、後続手術時の腸穿孔が１９％程度に至ることが知られている（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．，Ｓｕｐｐｌ ５７７，３２−３９，１９９７）。
【０００４】
腹腔内癒着の発生メカニズムについては、Ｇｒａｎｇｅｒにより発表された論文（Ｉｎｆｅｒｔ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｍｅｄ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．，５：３，３９１−４０４，１９９４）に詳細に説明されているが、これによると、癒着は、手術後に発生した滲出液中の血液の凝固過程で形成されるフィブリンに起因する。炎症性滲出液にはフィブリンが豊富で、傷の表面に血餠を形成する。フィブリンが分解されながら中皮が再生されることで正常に傷が治癒する。フィブリンの分解は、プラスミノーゲン（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）のフィブリン分解酵素であるプラスミン（ｐｌａｓｍｉｎ）への変換に依存し、この反応は、中皮と下部の基質に共に存在するティッシュプラスミノーゲンアクチベーター（ｔｉｓｓｕｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ；ｔＰＡ）により促されるが、もし、フィブリンの分解が起きないとフィブリン母体に炎症細胞及び線維母細胞が侵入して癒着が組織化する。このように一連のフィブリン形成メカニズムとフィブリン分解機作により癒着が発生するが、これらの関係は単純とはいえず、傷の治癒過程と密接な関連がある。
【０００５】
様々な癒着防止方法のうちの一つとして、防壁（ｂａｒｒｉｅｒ）を用いるものがあり、組織の損傷が治癒される間に界面活性剤と同様に物理的な障壁を形成することで、隣り合う組織同士が癒着することを防止する癒着防止剤に関する研究が活発に行われている。このような防壁として使用可能な癒着防止剤は、その形態から、大きく２種類に分類することができ、一つは、フィルム、不織布、スポンジの形態を含む膜状の防壁であり、他の一つは、ゲル状を含む溶液状の防壁である。
【０００６】
膜状の癒着防止材料には、酸化再生セルロース（Ｏｘｉｄｉｚｅｄ−ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ｅＰＴＦＥ（Ｅｘｐａｎｄｅｄ ｐｏｌｙｔｅｒａｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌｅｎｅ）、改質されたヒアルロン酸、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び化学的架橋剤などで構成されたフィルムなどがある。
【０００７】
溶液状癒着防止材料には、ラクテートリンゲル溶液、デキストラン−７０溶液、ヘパリン溶液、カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）溶液、ヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）溶液、コンドロイチン硫酸（Ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ ｓｕｌｆａｔｅ）溶液、ポリエチレングリコール（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）溶液、ポロキサマ（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）溶液などがある。このような溶液状癒着防止材料のうち、ラクテートリンゲル溶液、デキストラン−７０溶液、ヘパリン溶液などは、腹膜の治癒が起きる間にフィブリンで覆われた表面が互いに浮くように浮遊させることを主な機転とし、組織を互いに分離させて癒着を抑制させる目的で使用した製剤であるが、腹腔内で吸収が速いため癒着防止の効果を十分に得ることができなかった（Ａｍ．ｓｕｒｇ．，６３，７７５−７７７，１９８３）。一方、ポリエチレングリコールなどは、生体内で分解されないことから、吸収後に代謝経路を経て排出されうる分子量が小さい材料のみ使用できるが、吸収が速すぎるため、癒着を防止する防壁としての役割を十分に長く持続することができない。
【０００８】
一方、米国特許第４，１４１，９７３号に開示されたヒアルロン酸は、β−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミン及びβ−Ｄ−グルクロン酸が交互に結合してなる直鎖状の高分子多糖で、生体に移植または注入した場合にも優れた生体適合性を示すものと知られているが、これも同様、生体内で比較的短時間で分解及び吸収され、癒着防止剤としての性能には制限がある。
【０００９】
これを改善するために、米国特許第６，３８７，４１３Ｂ１号では、ヒアルロン酸ゲル自体の物性側面の性質を補完すべくカルボキシメチルセルロースなどの高分子化合物を添加し、ヒアルロン酸ゲル組成物を製造した。
【００１０】
このようにヒアルロン酸ゲル自体の物性側面の性質を補完するために様々な検討がなされているが、特に、ヒアルロン酸の生体への適用時に、水に解けやすく、生体内の滞留時間が比較的短い点を改良するために、種々のヒアルロン酸の化学的架橋剤または化学的修飾剤により改質された様々な修飾物が提案されてきた。
【００１１】
このように今まで開発された材料は、癒着防止への可能性を見せてはいるが、化学的な架橋方法を主に用いているから、架橋剤または添加剤を除去しなければならない不便さ、複雑な工程の問題、及び毒性及び安全性の問題を抱えている。
【００１２】
そこで、本発明者らは上記のような問題点、すなわち、癒着防止機能の低い効率、化学的架橋剤または添加剤の合成、そして残留毒性の可能性といった問題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、化学的架橋剤を全く使用することなく生体適合性の特徴を最大限に生かした高分子ヒアルロン酸を含有する組成物を提供することによって上記の問題点を解決できるということを確認し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
また、本発明におけるヒアルロン酸及びヒドロキシエチルスターチの使用は、癒着防止の効果において、物理的障壁の役割を果たす高分子物質間の混合とは違って、物理的障壁の役割を果たさせるだけでなく、癒着発生の主因とされる血栓の形成を抑えるという新しい癒着防止への機能的な接近であって、既存の製品と差別化を図ることができ、癒着防止の効果及び安全性の面においても格別であることが確認された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】米国特許第４，１４１，９７３号
【特許文献２】米国特許第６，３８７，４１３Ｂ１号
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ａｎｎ．Ｒｏｙａｌ Ｃｏｌｌ．Ｓｕｒｇ．Ｅｎｇｌ．，７５，１４７−１５３，１９９３
【非特許文献２】Ｅｕｒ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．，Ｓｕｐｐｌ ５７７，３２−３９，１９９７
【非特許文献３】Ｉｎｆｅｒｔ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｍｅｄ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．，５：３，３９１−４０４，１９９４
【非特許文献４】Ａｍ．ｓｕｒｇ．，６３，７７５−７７７，１９８３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明の目的は、ヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチ（Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ ｓｔａｒｃｈ）またはキトオリゴ糖（Ｃｈｉｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）を含む癒着防止用組成物、好ましくは、ゲル状組成物を提供することにある。
【００１７】
本発明の目的は、癒着防止用医療剤を製造するためのヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチまたはキトオリゴ糖を含む組成物の用途を提供することにある。
【００１８】
本発明の目的は、ヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチまたはキトオリゴ糖を含む組成物を、ヒトを含む哺乳類に投与して術後癒着を防止する方法を提供することにある。
【００１９】
本発明はまた、ヒアルロン酸及びヒドロキシエチルスターチを含む組成物を提供することによって、物理的障壁を形成する他、癒着発生の主因とされる血栓の形成を抑制するという新しい癒着防止への機能的な接近を果たし、従来の製品との差別化が可能であり、癒着防止の効果及び安全性の面においても格別な効果を提供する。
【００２０】
なお、本発明は、ヒアルロン酸及びキトオリゴ糖を含む組成物を提供することによって、ヒアルロン酸の単独使用時に発生する生体内での速い分解及び吸収を遅延させ、それによる癒着発生の度合を軽減する。
【００２１】
本発明の他の目的は、術後癒着の発生を減少させる他、一次手術後の癒着の形成を防止し、傷の治癒が完了すると体内で分解され、吸収及び排出が可能な組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明の組成物は、ヒアルロン酸に高分子物質を添加して得られるもので、この高分子物質としては、好ましくは、ヒドロキシエチルスターチまたは水溶性キトオリゴ糖を挙げることができるが、ヒアルロン酸ゲル単独では満たし難い医薬用材料の要求物性に対してヒアルロン酸ゲルが本来持つ性質を補完できるものであれば、ＰＬＧＡ（ｐｏｌｙ（ＤＬ−ｌａｃｔｉｄｅ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ））、ＰＬＬ（ｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ）、ＰＥＧ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）、ＨＥＣ（ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ＣＭＣ（Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）などを含めて、いかなる高分子物質も使用することができる。
【００２３】
したがって、本発明は、ヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチまたは水溶性キトオリゴ糖を含む癒着防止用組成物、好ましくは、ゲル状組成物を提供する。
また、本発明は、癒着防止用医薬製剤を製造するためのヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチ（Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ ｓｔａｒｃｈ）またはキトオリゴ糖（Ｃｈｉｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）を含む組成物の用途を提供する。
【００２４】
また、本発明は、ヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチまたはキトオリゴ糖を含む組成物を、ヒトを含む哺乳類に投与して手術後の周辺臓器または組織が互いに癒着することを防止する方法を提供する。
【００２５】
本発明の癒着防止用組成物についてより詳細に説明すると、下記の通りである。
【００２６】
１．ヒアルロン酸（以下、‘ＨＡ’という。）
【００２７】
本発明のヒアルロン酸は動物組織から抽出したものとするが、発酵法で製造したものなど、いずれのものもその起源を問わず使用することができる。該ヒアルロン酸は、ヒアルロン酸分解酵素（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ）により分解された後に吸収され、代謝経路を経て除去される。
【００２８】
また、本発明のヒアルロン酸は、化学的架橋がなされない生体由来材料で、既存の架橋がなされたヒアルロン酸の問題点である長時間体内滞留による人体への毒性などの蓄積が解消されるため、既存の製剤に比べて安全性に優れている。
【００２９】
本発明のヒアルロン酸の分子量は、約５．０×１０５〜約５．０×１０６ダルトンの範囲、好ましくは、約０．８×１０６〜約３×１０６ダルトンの範囲とすることができ、この範囲の分子量を持つヒアルロン酸は適切な体内半減期を有するため、物理的な障壁の役割を果たすことができる。これに対し、既存の低分子量のヒアルロン酸（５．０×１０５未満）は、傷が治るまで物理的障壁としての役割を維持し難く、３×１０６ダルトンを超える高分子量を持つヒアルロン酸は粘度が非常に高くなり、流体の移送、ろ過などを含む製造工程において問題が生じることがあり、好ましくない。
【００３０】
本発明のヒアルロン酸は、本発明の組成物の総重量対比約０．３〜約７．０重量％、好ましくは、約０．５〜約５．０重量％含まれる。ヒアルロン酸が０．３重量％未満であると、癒着防止の効果に限界があり、７．０重量％を超えると、粘度によって製造上問題が生じることができる。
【００３１】
２．ヒドロキシエチルスターチ（Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ ｓｔａｒｃｈ：以下‘ＨＥＳ’という。）
【００３２】
本発明による組成物においてＨＥＳは、癒着発生の原因となる血液凝固機転において凝固発生を低下させる薬剤学的成分として用いられる。
【００３３】
現在、種々のヒドロキシエチルスターチがコロイド血量代用液として用いられており、それらのヒドロキシエチルスターチは、主にそれらの分子量及び／またはヒドロキシエチル基に対するそのエーテル化及びその他パラメータで区別されるが、代表の例に、ヘタスターチ（Ｈｅｔａｓｔａｔｃｈ）（ＨＥＳ ４５０／０．７）及びペンタスターチ（Ｐｅｎｔａｓｔａｒｃｈ）（ＰＥＳ ２００／０．５）などがある。
【００３４】
ＨＥＳは、重量平均に基づいて総じてキロダルトンに短縮して使用される分子量、ヒドロキシエチル基に対するエーテル化またはモル置換度ＭＳ（例：ＨＥＳ ２００／０．５において０．５；ＭＳ＝ヒドロキシエチル基対無水グルコース単位の平均モル比）、または置換度（例：ＤＳ＝モノまたはポリヒドロキシエチル化グルコース対総無水グルコース単位の比）で特定される。臨床使用しているＨＥＳは、その分子量によって、高分子量（４５０ｋＤ）、中間分子量（２００ｋＤ〜２５０ｋＤ）及び低分子量（７０ｋＤ〜１３０ｋＤ）の製剤に分類することができる。
【００３５】
ＨＥＳは血液凝固に対する非特異的効果を有するが、これは、ＨＥＳが循環系に注入される間に発生する血液の希釈に起因する。このような血液希釈への影響は、凝固因子の希釈による凝固低下を招くことができる。初期の研究過程では、ＨＥＳの分子量が血液凝固に影響を及ぼすと報告されたが、Ｆｒａｎｚ等は、血液凝固障害において高分子と低分子間に大差はないと報告し（Ａｎｅｓｔｈ．Ａｎａｌｇ．，９２，１４０２−１４０７，２００１）、ヨーロッパ特許第２００５−０５０８７７号では、ＨＥＳ溶液の止血系統抑制は平均分子量よりはモル置換度に大きく影響を受けることが開示されている点などに照らしてみると、ＨＥＳの平均分子量ではなく他の要素が血小板の機能に大きい影響を及ぼすものと考えられる。
【００３６】
現在、血量代用液としてＦＤＡ承認を受けて海外で市販されているＨＥＳ溶液には、Ｈｅｘｔｅｎｄ（ＨＥＳ ６７０／０．７５、Ｂｉｏｔｉｍｅ）、Ｈｅｓｐａｎ（ＨＥＳ１３０／０．４、ＢＢｒａｕｎ）、Ｖｏｌｕｖｅｎ（ＨＥＳ １３０／０．４、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ ｋａｂｉ）などがある。
【００３７】
本発明のヒドロキシエチルスターチの分子量は、約２．０×１０５〜約１．０×１０６ダルトン、好ましくは、約２．５×１０５〜約６．７×１０５ダルトンとし、ヒドロキシエチルスターチの分子量を２．０×１０５ダルトン未満にすると、癒着防止に効果的でないという問題があり、１．０×１０６を超えると、体内半減期が長くなるという問題につながる。ヒドロキシエチルスターチのモル置換度は、約０．２〜約０．８、好ましくは、約０．７５〜約０．４にすることができ、モル置換度を０．２未満にすると癒着防止に効果的でなく、０．８超にすると、物質自体の安全性に問題が発生することがある。
【００３８】
また、本発明のヒドロキシエチルスターチは、本発明の組成物の総重量対比約０．０５〜約３．０重量％、好ましくは、約０．１重量％〜約２．０重量％にする。０．０５重量％未満にすると癒着防止に効果的でなく、３．０重量％超にすると、癒着防止の効果がむしろ低下し、体内に長く留まるという問題がある。
【００３９】
３．キトオリゴ糖（Ｃｈｉｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：以下、‘ＣＯＳ’という。）
【００４０】
キチン（Ｃｈｉｔｉｎ）とキトサン（Ｃｈｉｔｏｓａｎ）は天然に存在する多糖類で、最近特に注目されている素材である。キトサンは天然（カニ、エビなどの甲殻類）に存在するキチンを脱アセチル化した物質で、グルコサミンがβ−１，４で結合した天然高分子多糖類であるが、分子量が大きすぎるため体内吸収率や溶解度が低いことから、優れた生理活性を持っていることにもかかわらず、その応用には制限がある。
【００４１】
反面、キトオリゴ糖（Ｃｈｉｔｏｏｌｉｇｏ−ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）は、キチンとキトサンの部分分解物で、キトサンの生理的特性を有しながらも、溶解度が高く、反応性の高い１級アミノ基が存在するから、様々な化学修飾が可能であり、生体吸収度が高く、坑菌活性を有し、医用材料として癒着防止効果に寄与できることが確認された。
【００４２】
本発明のキトオリゴ糖の分子量は、約０．５×１０３〜約１．０×１０４ダルトンの範囲、好ましくは、約１×１０３〜約５×１０３ダルトンの範囲内にすることができ、分子量が０．５×１０３ダルトン未満である場合は、癒着防止効果に問題があり、１．０×１０４を超える場合は、体内使用に制限がある。
【００４３】
本発明のキトオリゴ糖は、本発明の組成物の総重量対比約０．０５重量％〜約１５重量％、好ましくは、約０．１重量％〜約１０重量％を含むことができ、０．０５重量％未満にすると癒着防止効果に問題があり、１５重量％超にすると、溶解度によって製造上に問題が生じることがある。
【００４４】
本発明の組成物は、種々の製剤形態とすることができ、液剤、ゲル（ｇｅｌ）剤などが好ましく、液剤、またはゲル剤を製造するために、薬学的に許容される賦形剤、添加剤などを添加でき、例えば、生理食塩水または蒸溜水などを使用することができる。
【００４５】
本発明の組成物を含む製品は、手術後の組織または器官同士の癒着防止のために、下記のような一般的な方法で使用することができる。
１）傷あるいは手術部位が止血されたことを確認した後に、
２）必ず滅菌した場所で当該製品の包装を剥がし、注射器の栓を除去した後、カテーテルを回して嵌めこみ、
３）適用部位に十分に塗布されるように投与する。必要時には、溶液の効果的な塗布のためにスプレーのような補助機構を使用しても良い。
４）投与して残った溶液は廃棄する。
【００４６】
本発明の組成物の有効量は、単位面積（１ｃｍ２）当たり約０．０１〜１０ｍｌとすることができ、約０．１〜５ｍｌとすることがより好ましいが、この有効量は、傷あるいは手術部位の深さ、大きさ、位置、損傷した部位の組織及び器官特異性、本発明の組成物の濃度及び施術者の個人的な見解によって変わることがある。
【発明の効果】
【００４７】
以上説明したように、本発明による癒着防止用組成物は、化学的架橋のない生体由来物質を使用することによって異物反応を最小化し、一定時間体内で留まり、窮極としては分解及び吸収され、手術後の傷の治癒に妨げとならず、手術部位に容易に適用でき、癒着を防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】本発明の実施例による組成物を動物に注射する写真である。
【図２】本発明の対照群に対する動物実験の結果を代表する写真である。
【図３】本発明の比較例による動物実験の結果を代表する写真である。
【図４】本発明による組成物の動物実験に対する癒着面積減少率を比較して示すグラフである。
【図５】本発明の実施例による動物実験の結果を代表する写真である。
【図６】本発明の実施例による動物実験の結果を代表する写真である。
【図７】本発明による組成物の動物実験に対する癒着の程度を比較して示すグラフである。
【図８】本発明による組成物の動物実験に対する癒着の強度を比較して示すグラフである。
【図９】本発明による組成物の動物実験に対する癒着の面積を比較して示すグラフである。
【図１０】本発明による組成物の動物実験に対する癒着面積減少率を比較して示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本発明の利点及び特徴、並びにそれらを達成する方法は、詳述される下記の実施例から明らかになるであろう。ただし、本発明は、以下に開示される実施例に限定されず、様々な形態に具現可能である。したがって、それらの実施例は本発明の開示を完全にし、本発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者に発明の範ちゅうを完全に教示するために提供されるもので、本発明は、それらの実施例によって定義されてはならず、請求項の範ちゅうによって定義されなければならない。
【００５０】
比較例１〜４．対照群及びヒアルロン酸単独の癒着防止用組成物の製造
【００５１】
［比較例１］−Ｇｕａｒｄｉｘ−ｓｏｌ
ＨＡ及びカルボキシメチルセルロースで構成された癒着防止剤として市販されている製品（Ｇｕａｒｄｉｘ−ｓｏｌ、Ｂｉｏｒａｎｅ社製）を使用した。
【００５２】
分子量２．５×１０６〜３×１０６ダルトン、粘度３０ｄｌ／ｇ〜３５ｄｌ／ｇ範囲のＨＡを、生理食塩水に０．５重量％になるように溶解させた。この水溶液を４℃に設定された低温室で約２日間溶解させ、ヒアルロン酸を含むゲル組成物を得た。
【００５３】
［比較例３］
ＨＡを生理食塩水に１重量％になるように溶解させた以外は、実施例１と同様の方法でＨＡ含有ゲル組成物を得た。
【００５４】
［比較例４］
ＨＥＳ（６７０／０．７５）を生理食塩水に８．０重量％になるように溶解したＨＥＳ単独の組成物を得た。
【００５５】
実施例１〜５．ヒアルロン酸及びヘタスターチ４５０／０．７を含む癒着防止用組成物の製造
【００５６】
［実施例１］
６％ＨＥＳ（４５０／０．７）溶液を生理食塩水に０．０３重量％になるように溶解させ、分子量２．５×１０６〜３×１０６ダルトン、粘度３０ｄｌ／ｇ〜３５ｄｌ／ｇ範囲のＨＡを、得られた生理食塩水溶液に１重量％になるように溶解させた。この水溶液を、４℃に設定された低温室で約２日間溶解させ、ＨＡ及びＨＥＳを含むゲル組成物を得た。
【００５７】
［実施例２］
ＨＥＳを生理食塩水に０．０６重量％になるように溶解させた以外は、実施例3と同様の方法でＨＡ及びＨＥＳを含有するゲル組成物を得た。
【００５８】
［実施例３］
ＨＥＳを生理食塩水に０．１２重量％になるように溶解させた以外は、実施例3と同様の方法でＨＡ及びＨＥＳを含有するゲル組成物を得た。
【００５９】
［実施例４］
ＨＥＳを生理食塩水に０．２４重量％になるように溶解させた以外は、実施例3と同様の方法でＨＡ及びＨＥＳを含有するゲル組成物を得た。
【００６０】
［実施例５］
ＨＥＳを生理食塩水に０．５重量％になるように溶解させた以外は、実施例3と同様の方法でＨＡ及びＨＥＳを含有するゲル組成物を得た。
【００６１】
実施例６．ヒアルロン酸及びヘタスターチ６７０／０．７５を含む癒着防止用組成物の製造
異なる分子量及びモル置換度を有する６％ＨＥＳ（６７０／０．７５）溶液を生理食塩水に０．５重量％になるように溶解させた以外は、実施例１と同様の方法でＨＡ及びＨＥＳを含有するゲル組成物を得た。
【００６２】
実施例７．ヒアルロン酸及びヘタスターチ２６４／０．４５を含む癒着防止用組成物の製造
異なる分子量及びモル置換度を有する１０％ＨＥＳ（２６４／０．４５）溶液を生理食塩水に０．５重量％になるように溶解させた以外は、実施例１と同様の方法でＨＡ及びＨＥＳを含有するゲル組成物を得た。
【００６３】
実施例８．ヒアルロン酸及びキトオリゴ糖を含む癒着防止用組成物の製造
分子量１×１０３〜５×１０３ダルトンのキトオリゴ糖（以下、ＣＯＳという。）（キトライフ）を生理食塩水に０．５重量％になるように溶解させ、ＨＡを溶液の１重量％になるように溶解させた。この水溶液を、４℃に設定された低温室で約２日間溶解させ、ＨＡ及びＣＯＳを含有するゲル組成物を得た。
【００６４】
実験例１．ラットの盲腸／腹壁擦過傷モデルにおける癒着防止試験
比較例１〜４及び実施例１〜８で製造された試料の組織癒着防止性能を評価するために、ラットの盲腸／腹壁擦過傷モデルを利用した。実験動物は、７週齢雄Ｓｐａｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔ（ＳＬＣ、Ｊａｐａｎ）を群当たり５匹使用した。癒着を誘発させるために、実験動物にＫｅｔａｍｉｎ・ＨＣｌを腹腔に注射（０．１ｍｌ／１００ｇ）して麻酔した後、腹部を除毛して７０％エタンオールで消毒した後、４〜５ｃｍ程度を中央線に沿って開腹した。次に、盲腸を取り出して１．２ｃｍ×１．２ｃｍ大きさの滅菌ガーゼを用いて出血がおきる程度に漿膜に損傷を与え、向かい合う腹腔膜に同一の大きさで試薬用スプーンを用いて損傷を加えた。両損傷面を当接するようにして摩擦損傷部位から１ｃｍ離れた２ヶ所を５−０ナイロン縫合糸で固定することで、癒着の形成を促進した。
【００６５】
陰性対照群に対しては生理食塩水を、実験群に対しては癒着防止溶液を５ｍｌずつ損傷部位に注入し（図１参照）、腹腔膜と皮膚を縫合した。手術後の動物は水と餌を十分に与えながら１週間育てた後、犠牲死させ、癒着評価システムを用いてその成績を合算して平均値を得た（Ａｍ．Ｊ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．，１４６，８８−９２，１９８３）。その結果をそれぞれ表１乃至表４に示す。
【００６６】
癒着の程度に対する評価は、基準によって０〜５に分類した（０：癒着がない場合、１：１つの薄いフィルム状の癒着、２：２つ以上の薄いフィルム状の癒着、３：点状の集中化した厚い癒着、４：板状の集中化した癒着、５：血管が形成された非常に厚い癒着あるいは１つ以上の板状の厚い癒着）。
【００６７】
癒着の強度に対する評価は、基準によって１〜４に分類した（１：フィルム状であり、非常に弱い力によっても離れる癒着、２：中間程度の力が要求される癒着、３:相当な圧力によって離れる癒着、４:癒着が非常に強いため、離れにくいまたは極めて大きい圧力が要求される癒着）。
【００６８】
【表１】
【００６９】
上記の表１に示すように、対照群に比べて比較例２、３の組織癒着が減少し、比較例２に比べて比較例３の癒着防止効果が向上した。したがって、ＨＡ単独組成物が、市販されている既存の組成物に比べて優れた癒着防止効果を有することがわかる。
【００７０】
比較例４の組成物は、癒着防止効果が非常に低く、よって、ＨＥＳ単独では防壁としての役割を充分に果たすことができないということがわかる。
【００７１】
対照群の動物実験結果の代表写真は図２に示し、比較例１の動物実験結果の代表写真は図３に示す。また、比較例１乃至４の動物実験による組織癒着面積の減少率は図４にグラフとして示す。
【００７２】
【表２】
【００７３】
上記の表２に示すように、実施例１乃至実施例５を投与した群において対照群に比べて組織癒着が顕著に減少し、本発明の実施例の組成物中のＨＥＳの重量％が増加するにつれて癒着の面積は減少し、より優れた組織癒着抑制性能を示すことが確認できた。
実施例５の動物実験結果は図５に示し、癒着が発生しなかった結果（実施例５の投与群のうちの１例）に対する代表写真は図６に示した。また、この動物実験に対する組織癒着の程度、癒着の強度、癒着の面積、及び癒着面積の減少率をそれぞれ図７〜１０に示した。
【００７４】
【表３】
【００７５】
上記の表３に示すように、対照群に比べて実施例６、７の組織癒着が減少したことが確認したが、ゲル組成物に６％ＨＥＳ（２６４／０．４５）溶液が０．５重量％添加された実施例７に比べて、１０％ＨＥＳ（６７０／０．７５）溶液が０．５重量％添加された実施例６の癒着面積がより減少し、癒着が全く発生しなかった個体数も２匹であって、より優れた癒着抑制力を示した。
【００７６】
【表４】
【００７７】
上記の表４に示すように、対照群に比べてＣＯＳの添加された実施例８の組織癒着が減少したことが確認された。
実験群１乃至８の投与時、いずれも対照群に比べて塗布された材料による特異な炎症反応は観察されず、塗布された材料が優れた生体適合性を有することも確認できた。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体適合性を有するヒアルロン酸と高分子化合物とからなる組織癒着防止用組成物に関するもので、特に、化学的架橋剤または化学的修飾剤により改質されていないヒアルロン酸を含む組成物及びその製造方法に関するもので、優れた効能を持つ癒着防止用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
癒着（ａｄｈｅｓｉｏｎ）とは、炎症、創傷、摩擦、手術などによる創傷などの傷の治癒過程で線維組織（ｆｉｂｒｏｕｓ ｔｉｓｓｕｅ）が過度に生成されたり、血液が流出して凝固したりすることから、互いに離れているべき周辺の臓器または組織がくっつき合う現象のことをいうもので、いかなる種類の手術後にも発生する可能性がある。このような現象により、手術後の回復過程において手術部位周辺の臓器または組織が付着しあい、深刻な臨床的後遺症につながることがある。
【０００３】
一般に、術後の臓器癒着発生率は５５％〜９３％に達すると報告されている（Ａｎｎ．Ｒｏｙａｌ Ｃｏｌｌ．Ｓｕｒｇ．Ｅｎｇｌ．，７５，１４７−１５３，１９９３）。特に、開腹手術後の癒着発生頻度が非常に多く、その一部は自発的に分解されることもあるが、大部分の場合は傷の治癒後も癒着が存在し、各種の後遺症を招くこともある。後遺症の種類は非常に多岐にわたっており、米国の統計資料によると、術後癒着によって発生する主な症状として、小腸閉塞が４９％〜７４％、不妊が１５％〜２０％、慢性骨盤症が２０％〜５０％、後続手術時の腸穿孔が１９％程度に至ることが知られている（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．，Ｓｕｐｐｌ ５７７，３２−３９，１９９７）。
【０００４】
腹腔内癒着の発生メカニズムについては、Ｇｒａｎｇｅｒにより発表された論文（Ｉｎｆｅｒｔ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｍｅｄ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．，５：３，３９１−４０４，１９９４）に詳細に説明されているが、これによると、癒着は、手術後に発生した滲出液中の血液の凝固過程で形成されるフィブリンに起因する。炎症性滲出液にはフィブリンが豊富で、傷の表面に血餠を形成する。フィブリンが分解されながら中皮が再生されることで正常に傷が治癒する。フィブリンの分解は、プラスミノーゲン（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）のフィブリン分解酵素であるプラスミン（ｐｌａｓｍｉｎ）への変換に依存し、この反応は、中皮と下部の基質に共に存在するティッシュプラスミノーゲンアクチベーター（ｔｉｓｓｕｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ；ｔＰＡ）により促されるが、もし、フィブリンの分解が起きないとフィブリン母体に炎症細胞及び線維母細胞が侵入して癒着が組織化する。このように一連のフィブリン形成メカニズムとフィブリン分解機作により癒着が発生するが、これらの関係は単純とはいえず、傷の治癒過程と密接な関連がある。
【０００５】
様々な癒着防止方法のうちの一つとして、防壁（ｂａｒｒｉｅｒ）を用いるものがあり、組織の損傷が治癒される間に界面活性剤と同様に物理的な障壁を形成することで、隣り合う組織同士が癒着することを防止する癒着防止剤に関する研究が活発に行われている。このような防壁として使用可能な癒着防止剤は、その形態から、大きく２種類に分類することができ、一つは、フィルム、不織布、スポンジの形態を含む膜状の防壁であり、他の一つは、ゲル状を含む溶液状の防壁である。
【０００６】
膜状の癒着防止材料には、酸化再生セルロース（Ｏｘｉｄｉｚｅｄ−ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ｅＰＴＦＥ（Ｅｘｐａｎｄｅｄ ｐｏｌｙｔｅｒａｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌｅｎｅ）、改質されたヒアルロン酸、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び化学的架橋剤などで構成されたフィルムなどがある。
【０００７】
溶液状癒着防止材料には、ラクテートリンゲル溶液、デキストラン−７０溶液、ヘパリン溶液、カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）溶液、ヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）溶液、コンドロイチン硫酸（Ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ ｓｕｌｆａｔｅ）溶液、ポリエチレングリコール（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）溶液、ポロキサマ（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）溶液などがある。このような溶液状癒着防止材料のうち、ラクテートリンゲル溶液、デキストラン−７０溶液、ヘパリン溶液などは、腹膜の治癒が起きる間にフィブリンで覆われた表面が互いに浮くように浮遊させることを主な機転とし、組織を互いに分離させて癒着を抑制させる目的で使用した製剤であるが、腹腔内で吸収が速いため癒着防止の効果を十分に得ることができなかった（Ａｍ．ｓｕｒｇ．，６３，７７５−７７７，１９８３）。一方、ポリエチレングリコールなどは、生体内で分解されないことから、吸収後に代謝経路を経て排出されうる分子量が小さい材料のみ使用できるが、吸収が速すぎるため、癒着を防止する防壁としての役割を十分に長く持続することができない。
【０００８】
一方、米国特許第４，１４１，９７３号に開示されたヒアルロン酸は、β−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミン及びβ−Ｄ−グルクロン酸が交互に結合してなる直鎖状の高分子多糖で、生体に移植または注入した場合にも優れた生体適合性を示すものと知られているが、これも同様、生体内で比較的短時間で分解及び吸収され、癒着防止剤としての性能には制限がある。
【０００９】
これを改善するために、米国特許第６，３８７，４１３Ｂ１号では、ヒアルロン酸ゲル自体の物性側面の性質を補完すべくカルボキシメチルセルロースなどの高分子化合物を添加し、ヒアルロン酸ゲル組成物を製造した。
【００１０】
このようにヒアルロン酸ゲル自体の物性側面の性質を補完するために様々な検討がなされているが、特に、ヒアルロン酸の生体への適用時に、水に解けやすく、生体内の滞留時間が比較的短い点を改良するために、種々のヒアルロン酸の化学的架橋剤または化学的修飾剤により改質された様々な修飾物が提案されてきた。
【００１１】
このように今まで開発された材料は、癒着防止への可能性を見せてはいるが、化学的な架橋方法を主に用いているから、架橋剤または添加剤を除去しなければならない不便さ、複雑な工程の問題、及び毒性及び安全性の問題を抱えている。
【００１２】
そこで、本発明者らは上記のような問題点、すなわち、癒着防止機能の低い効率、化学的架橋剤または添加剤の合成、そして残留毒性の可能性といった問題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、化学的架橋剤を全く使用することなく生体適合性の特徴を最大限に生かした高分子ヒアルロン酸を含有する組成物を提供することによって上記の問題点を解決できるということを確認し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
また、本発明におけるヒアルロン酸及びヒドロキシエチルスターチの使用は、癒着防止の効果において、物理的障壁の役割を果たす高分子物質間の混合とは違って、物理的障壁の役割を果たさせるだけでなく、癒着発生の主因とされる血栓の形成を抑えるという新しい癒着防止への機能的な接近であって、既存の製品と差別化を図ることができ、癒着防止の効果及び安全性の面においても格別であることが確認された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】米国特許第４，１４１，９７３号
【特許文献２】米国特許第６，３８７，４１３Ｂ１号
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ａｎｎ．Ｒｏｙａｌ Ｃｏｌｌ．Ｓｕｒｇ．Ｅｎｇｌ．，７５，１４７−１５３，１９９３
【非特許文献２】Ｅｕｒ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．，Ｓｕｐｐｌ ５７７，３２−３９，１９９７
【非特許文献３】Ｉｎｆｅｒｔ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｍｅｄ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．，５：３，３９１−４０４，１９９４
【非特許文献４】Ａｍ．ｓｕｒｇ．，６３，７７５−７７７，１９８３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明の目的は、ヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチ（Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ ｓｔａｒｃｈ）またはキトオリゴ糖（Ｃｈｉｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）を含む癒着防止用組成物、好ましくは、ゲル状組成物を提供することにある。
【００１７】
本発明の目的は、癒着防止用医療剤を製造するためのヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチまたはキトオリゴ糖を含む組成物の用途を提供することにある。
【００１８】
本発明の目的は、ヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチまたはキトオリゴ糖を含む組成物を、ヒトを含む哺乳類に投与して術後癒着を防止する方法を提供することにある。
【００１９】
本発明はまた、ヒアルロン酸及びヒドロキシエチルスターチを含む組成物を提供することによって、物理的障壁を形成する他、癒着発生の主因とされる血栓の形成を抑制するという新しい癒着防止への機能的な接近を果たし、従来の製品との差別化が可能であり、癒着防止の効果及び安全性の面においても格別な効果を提供する。
【００２０】
なお、本発明は、ヒアルロン酸及びキトオリゴ糖を含む組成物を提供することによって、ヒアルロン酸の単独使用時に発生する生体内での速い分解及び吸収を遅延させ、それによる癒着発生の度合を軽減する。
【００２１】
本発明の他の目的は、術後癒着の発生を減少させる他、一次手術後の癒着の形成を防止し、傷の治癒が完了すると体内で分解され、吸収及び排出が可能な組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明の組成物は、ヒアルロン酸に高分子物質を添加して得られるもので、この高分子物質としては、好ましくは、ヒドロキシエチルスターチまたは水溶性キトオリゴ糖を挙げることができるが、ヒアルロン酸ゲル単独では満たし難い医薬用材料の要求物性に対してヒアルロン酸ゲルが本来持つ性質を補完できるものであれば、ＰＬＧＡ（ｐｏｌｙ（ＤＬ−ｌａｃｔｉｄｅ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ））、ＰＬＬ（ｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ）、ＰＥＧ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）、ＨＥＣ（ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ＣＭＣ（Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）などを含めて、いかなる高分子物質も使用することができる。
【００２３】
したがって、本発明は、ヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチまたは水溶性キトオリゴ糖を含む癒着防止用組成物、好ましくは、ゲル状組成物を提供する。
また、本発明は、癒着防止用医薬製剤を製造するためのヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチ（Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ ｓｔａｒｃｈ）またはキトオリゴ糖（Ｃｈｉｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）を含む組成物の用途を提供する。
【００２４】
また、本発明は、ヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチまたはキトオリゴ糖を含む組成物を、ヒトを含む哺乳類に投与して手術後の周辺臓器または組織が互いに癒着することを防止する方法を提供する。
【００２５】
本発明の癒着防止用組成物についてより詳細に説明すると、下記の通りである。
【００２６】
１．ヒアルロン酸（以下、‘ＨＡ’という。）
【００２７】
本発明のヒアルロン酸は動物組織から抽出したものとするが、発酵法で製造したものなど、いずれのものもその起源を問わず使用することができる。該ヒアルロン酸は、ヒアルロン酸分解酵素（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ）により分解された後に吸収され、代謝経路を経て除去される。
【００２８】
また、本発明のヒアルロン酸は、化学的架橋がなされない生体由来材料で、既存の架橋がなされたヒアルロン酸の問題点である長時間体内滞留による人体への毒性などの蓄積が解消されるため、既存の製剤に比べて安全性に優れている。
【００２９】
本発明のヒアルロン酸の分子量は、約５．０×１０５〜約５．０×１０６ダルトンの範囲、好ましくは、約０．８×１０６〜約３×１０６ダルトンの範囲とすることができ、この範囲の分子量を持つヒアルロン酸は適切な体内半減期を有するため、物理的な障壁の役割を果たすことができる。これに対し、既存の低分子量のヒアルロン酸（５．０×１０５未満）は、傷が治るまで物理的障壁としての役割を維持し難く、３×１０６ダルトンを超える高分子量を持つヒアルロン酸は粘度が非常に高くなり、流体の移送、ろ過などを含む製造工程において問題が生じることがあり、好ましくない。
【００３０】
本発明のヒアルロン酸は、本発明の組成物の総重量対比約０．３〜約７．０重量％、好ましくは、約０．５〜約５．０重量％含まれる。ヒアルロン酸が０．３重量％未満であると、癒着防止の効果に限界があり、７．０重量％を超えると、粘度によって製造上問題が生じることができる。
【００３１】
２．ヒドロキシエチルスターチ（Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ ｓｔａｒｃｈ：以下‘ＨＥＳ’という。）
【００３２】
本発明による組成物においてＨＥＳは、癒着発生の原因となる血液凝固機転において凝固発生を低下させる薬剤学的成分として用いられる。
【００３３】
現在、種々のヒドロキシエチルスターチがコロイド血量代用液として用いられており、それらのヒドロキシエチルスターチは、主にそれらの分子量及び／またはヒドロキシエチル基に対するそのエーテル化及びその他パラメータで区別されるが、代表の例に、ヘタスターチ（Ｈｅｔａｓｔａｔｃｈ）（ＨＥＳ ４５０／０．７）及びペンタスターチ（Ｐｅｎｔａｓｔａｒｃｈ）（ＰＥＳ ２００／０．５）などがある。
【００３４】
ＨＥＳは、重量平均に基づいて総じてキロダルトンに短縮して使用される分子量、ヒドロキシエチル基に対するエーテル化またはモル置換度ＭＳ（例：ＨＥＳ ２００／０．５において０．５；ＭＳ＝ヒドロキシエチル基対無水グルコース単位の平均モル比）、または置換度（例：ＤＳ＝モノまたはポリヒドロキシエチル化グルコース対総無水グルコース単位の比）で特定される。臨床使用しているＨＥＳは、その分子量によって、高分子量（４５０ｋＤ）、中間分子量（２００ｋＤ〜２５０ｋＤ）及び低分子量（７０ｋＤ〜１３０ｋＤ）の製剤に分類することができる。
【００３５】
ＨＥＳは血液凝固に対する非特異的効果を有するが、これは、ＨＥＳが循環系に注入される間に発生する血液の希釈に起因する。このような血液希釈への影響は、凝固因子の希釈による凝固低下を招くことができる。初期の研究過程では、ＨＥＳの分子量が血液凝固に影響を及ぼすと報告されたが、Ｆｒａｎｚ等は、血液凝固障害において高分子と低分子間に大差はないと報告し（Ａｎｅｓｔｈ．Ａｎａｌｇ．，９２，１４０２−１４０７，２００１）、ヨーロッパ特許第２００５−０５０８７７号では、ＨＥＳ溶液の止血系統抑制は平均分子量よりはモル置換度に大きく影響を受けることが開示されている点などに照らしてみると、ＨＥＳの平均分子量ではなく他の要素が血小板の機能に大きい影響を及ぼすものと考えられる。
【００３６】
現在、血量代用液としてＦＤＡ承認を受けて海外で市販されているＨＥＳ溶液には、Ｈｅｘｔｅｎｄ（ＨＥＳ ６７０／０．７５、Ｂｉｏｔｉｍｅ）、Ｈｅｓｐａｎ（ＨＥＳ１３０／０．４、ＢＢｒａｕｎ）、Ｖｏｌｕｖｅｎ（ＨＥＳ １３０／０．４、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ ｋａｂｉ）などがある。
【００３７】
本発明のヒドロキシエチルスターチの分子量は、約２．０×１０５〜約１．０×１０６ダルトン、好ましくは、約２．５×１０５〜約６．７×１０５ダルトンとし、ヒドロキシエチルスターチの分子量を２．０×１０５ダルトン未満にすると、癒着防止に効果的でないという問題があり、１．０×１０６を超えると、体内半減期が長くなるという問題につながる。ヒドロキシエチルスターチのモル置換度は、約０．２〜約０．８、好ましくは、約０．７５〜約０．４にすることができ、モル置換度を０．２未満にすると癒着防止に効果的でなく、０．８超にすると、物質自体の安全性に問題が発生することがある。
【００３８】
また、本発明のヒドロキシエチルスターチは、本発明の組成物の総重量対比約０．０５〜約３．０重量％、好ましくは、約０．１重量％〜約２．０重量％にする。０．０５重量％未満にすると癒着防止に効果的でなく、３．０重量％超にすると、癒着防止の効果がむしろ低下し、体内に長く留まるという問題がある。
【００３９】
３．キトオリゴ糖（Ｃｈｉｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：以下、‘ＣＯＳ’という。）
【００４０】
キチン（Ｃｈｉｔｉｎ）とキトサン（Ｃｈｉｔｏｓａｎ）は天然に存在する多糖類で、最近特に注目されている素材である。キトサンは天然（カニ、エビなどの甲殻類）に存在するキチンを脱アセチル化した物質で、グルコサミンがβ−１，４で結合した天然高分子多糖類であるが、分子量が大きすぎるため体内吸収率や溶解度が低いことから、優れた生理活性を持っていることにもかかわらず、その応用には制限がある。
【００４１】
反面、キトオリゴ糖（Ｃｈｉｔｏｏｌｉｇｏ−ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）は、キチンとキトサンの部分分解物で、キトサンの生理的特性を有しながらも、溶解度が高く、反応性の高い１級アミノ基が存在するから、様々な化学修飾が可能であり、生体吸収度が高く、坑菌活性を有し、医用材料として癒着防止効果に寄与できることが確認された。
【００４２】
本発明のキトオリゴ糖の分子量は、約０．５×１０３〜約１．０×１０４ダルトンの範囲、好ましくは、約１×１０３〜約５×１０３ダルトンの範囲内にすることができ、分子量が０．５×１０３ダルトン未満である場合は、癒着防止効果に問題があり、１．０×１０４を超える場合は、体内使用に制限がある。
【００４３】
本発明のキトオリゴ糖は、本発明の組成物の総重量対比約０．０５重量％〜約１５重量％、好ましくは、約０．１重量％〜約１０重量％を含むことができ、０．０５重量％未満にすると癒着防止効果に問題があり、１５重量％超にすると、溶解度によって製造上に問題が生じることがある。
【００４４】
本発明の組成物は、種々の製剤形態とすることができ、液剤、ゲル（ｇｅｌ）剤などが好ましく、液剤、またはゲル剤を製造するために、薬学的に許容される賦形剤、添加剤などを添加でき、例えば、生理食塩水または蒸溜水などを使用することができる。
【００４５】
本発明の組成物を含む製品は、手術後の組織または器官同士の癒着防止のために、下記のような一般的な方法で使用することができる。
１）傷あるいは手術部位が止血されたことを確認した後に、
２）必ず滅菌した場所で当該製品の包装を剥がし、注射器の栓を除去した後、カテーテルを回して嵌めこみ、
３）適用部位に十分に塗布されるように投与する。必要時には、溶液の効果的な塗布のためにスプレーのような補助機構を使用しても良い。
４）投与して残った溶液は廃棄する。
【００４６】
本発明の組成物の有効量は、単位面積（１ｃｍ２）当たり約０．０１〜１０ｍｌとすることができ、約０．１〜５ｍｌとすることがより好ましいが、この有効量は、傷あるいは手術部位の深さ、大きさ、位置、損傷した部位の組織及び器官特異性、本発明の組成物の濃度及び施術者の個人的な見解によって変わることがある。
【発明の効果】
【００４７】
以上説明したように、本発明による癒着防止用組成物は、化学的架橋のない生体由来物質を使用することによって異物反応を最小化し、一定時間体内で留まり、窮極としては分解及び吸収され、手術後の傷の治癒に妨げとならず、手術部位に容易に適用でき、癒着を防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】本発明の実施例による組成物を動物に注射する写真である。
【図２】本発明の対照群に対する動物実験の結果を代表する写真である。
【図３】本発明の比較例による動物実験の結果を代表する写真である。
【図４】本発明による組成物の動物実験に対する癒着面積減少率を比較して示すグラフである。
【図５】本発明の実施例による動物実験の結果を代表する写真である。
【図６】本発明の実施例による動物実験の結果を代表する写真である。
【図７】本発明による組成物の動物実験に対する癒着の程度を比較して示すグラフである。
【図８】本発明による組成物の動物実験に対する癒着の強度を比較して示すグラフである。
【図９】本発明による組成物の動物実験に対する癒着の面積を比較して示すグラフである。
【図１０】本発明による組成物の動物実験に対する癒着面積減少率を比較して示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本発明の利点及び特徴、並びにそれらを達成する方法は、詳述される下記の実施例から明らかになるであろう。ただし、本発明は、以下に開示される実施例に限定されず、様々な形態に具現可能である。したがって、それらの実施例は本発明の開示を完全にし、本発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者に発明の範ちゅうを完全に教示するために提供されるもので、本発明は、それらの実施例によって定義されてはならず、請求項の範ちゅうによって定義されなければならない。
【００５０】
比較例１〜４．対照群及びヒアルロン酸単独の癒着防止用組成物の製造
【００５１】
［比較例１］−Ｇｕａｒｄｉｘ−ｓｏｌ
ＨＡ及びカルボキシメチルセルロースで構成された癒着防止剤として市販されている製品（Ｇｕａｒｄｉｘ−ｓｏｌ、Ｂｉｏｒａｎｅ社製）を使用した。
【００５２】
分子量２．５×１０６〜３×１０６ダルトン、粘度３０ｄｌ／ｇ〜３５ｄｌ／ｇ範囲のＨＡを、生理食塩水に０．５重量％になるように溶解させた。この水溶液を４℃に設定された低温室で約２日間溶解させ、ヒアルロン酸を含むゲル組成物を得た。
【００５３】
［比較例３］
ＨＡを生理食塩水に１重量％になるように溶解させた以外は、実施例１と同様の方法でＨＡ含有ゲル組成物を得た。
【００５４】
［比較例４］
ＨＥＳ（６７０／０．７５）を生理食塩水に８．０重量％になるように溶解したＨＥＳ単独の組成物を得た。
【００５５】
実施例１〜５．ヒアルロン酸及びヘタスターチ４５０／０．７を含む癒着防止用組成物の製造
【００５６】
［実施例１］
６％ＨＥＳ（４５０／０．７）溶液を生理食塩水に０．０３重量％になるように溶解させ、分子量２．５×１０６〜３×１０６ダルトン、粘度３０ｄｌ／ｇ〜３５ｄｌ／ｇ範囲のＨＡを、得られた生理食塩水溶液に１重量％になるように溶解させた。この水溶液を、４℃に設定された低温室で約２日間溶解させ、ＨＡ及びＨＥＳを含むゲル組成物を得た。
【００５７】
［実施例２］
ＨＥＳを生理食塩水に０．０６重量％になるように溶解させた以外は、実施例3と同様の方法でＨＡ及びＨＥＳを含有するゲル組成物を得た。
【００５８】
［実施例３］
ＨＥＳを生理食塩水に０．１２重量％になるように溶解させた以外は、実施例3と同様の方法でＨＡ及びＨＥＳを含有するゲル組成物を得た。
【００５９】
［実施例４］
ＨＥＳを生理食塩水に０．２４重量％になるように溶解させた以外は、実施例3と同様の方法でＨＡ及びＨＥＳを含有するゲル組成物を得た。
【００６０】
［実施例５］
ＨＥＳを生理食塩水に０．５重量％になるように溶解させた以外は、実施例3と同様の方法でＨＡ及びＨＥＳを含有するゲル組成物を得た。
【００６１】
実施例６．ヒアルロン酸及びヘタスターチ６７０／０．７５を含む癒着防止用組成物の製造
異なる分子量及びモル置換度を有する６％ＨＥＳ（６７０／０．７５）溶液を生理食塩水に０．５重量％になるように溶解させた以外は、実施例１と同様の方法でＨＡ及びＨＥＳを含有するゲル組成物を得た。
【００６２】
実施例７．ヒアルロン酸及びヘタスターチ２６４／０．４５を含む癒着防止用組成物の製造
異なる分子量及びモル置換度を有する１０％ＨＥＳ（２６４／０．４５）溶液を生理食塩水に０．５重量％になるように溶解させた以外は、実施例１と同様の方法でＨＡ及びＨＥＳを含有するゲル組成物を得た。
【００６３】
実施例８．ヒアルロン酸及びキトオリゴ糖を含む癒着防止用組成物の製造
分子量１×１０３〜５×１０３ダルトンのキトオリゴ糖（以下、ＣＯＳという。）（キトライフ）を生理食塩水に０．５重量％になるように溶解させ、ＨＡを溶液の１重量％になるように溶解させた。この水溶液を、４℃に設定された低温室で約２日間溶解させ、ＨＡ及びＣＯＳを含有するゲル組成物を得た。
【００６４】
実験例１．ラットの盲腸／腹壁擦過傷モデルにおける癒着防止試験
比較例１〜４及び実施例１〜８で製造された試料の組織癒着防止性能を評価するために、ラットの盲腸／腹壁擦過傷モデルを利用した。実験動物は、７週齢雄Ｓｐａｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔ（ＳＬＣ、Ｊａｐａｎ）を群当たり５匹使用した。癒着を誘発させるために、実験動物にＫｅｔａｍｉｎ・ＨＣｌを腹腔に注射（０．１ｍｌ／１００ｇ）して麻酔した後、腹部を除毛して７０％エタンオールで消毒した後、４〜５ｃｍ程度を中央線に沿って開腹した。次に、盲腸を取り出して１．２ｃｍ×１．２ｃｍ大きさの滅菌ガーゼを用いて出血がおきる程度に漿膜に損傷を与え、向かい合う腹腔膜に同一の大きさで試薬用スプーンを用いて損傷を加えた。両損傷面を当接するようにして摩擦損傷部位から１ｃｍ離れた２ヶ所を５−０ナイロン縫合糸で固定することで、癒着の形成を促進した。
【００６５】
陰性対照群に対しては生理食塩水を、実験群に対しては癒着防止溶液を５ｍｌずつ損傷部位に注入し（図１参照）、腹腔膜と皮膚を縫合した。手術後の動物は水と餌を十分に与えながら１週間育てた後、犠牲死させ、癒着評価システムを用いてその成績を合算して平均値を得た（Ａｍ．Ｊ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．，１４６，８８−９２，１９８３）。その結果をそれぞれ表１乃至表４に示す。
【００６６】
癒着の程度に対する評価は、基準によって０〜５に分類した（０：癒着がない場合、１：１つの薄いフィルム状の癒着、２：２つ以上の薄いフィルム状の癒着、３：点状の集中化した厚い癒着、４：板状の集中化した癒着、５：血管が形成された非常に厚い癒着あるいは１つ以上の板状の厚い癒着）。
【００６７】
癒着の強度に対する評価は、基準によって１〜４に分類した（１：フィルム状であり、非常に弱い力によっても離れる癒着、２：中間程度の力が要求される癒着、３:相当な圧力によって離れる癒着、４:癒着が非常に強いため、離れにくいまたは極めて大きい圧力が要求される癒着）。
【００６８】
【表１】
【００６９】
上記の表１に示すように、対照群に比べて比較例２、３の組織癒着が減少し、比較例２に比べて比較例３の癒着防止効果が向上した。したがって、ＨＡ単独組成物が、市販されている既存の組成物に比べて優れた癒着防止効果を有することがわかる。
【００７０】
比較例４の組成物は、癒着防止効果が非常に低く、よって、ＨＥＳ単独では防壁としての役割を充分に果たすことができないということがわかる。
【００７１】
対照群の動物実験結果の代表写真は図２に示し、比較例１の動物実験結果の代表写真は図３に示す。また、比較例１乃至４の動物実験による組織癒着面積の減少率は図４にグラフとして示す。
【００７２】
【表２】
【００７３】
上記の表２に示すように、実施例１乃至実施例５を投与した群において対照群に比べて組織癒着が顕著に減少し、本発明の実施例の組成物中のＨＥＳの重量％が増加するにつれて癒着の面積は減少し、より優れた組織癒着抑制性能を示すことが確認できた。
実施例５の動物実験結果は図５に示し、癒着が発生しなかった結果（実施例５の投与群のうちの１例）に対する代表写真は図６に示した。また、この動物実験に対する組織癒着の程度、癒着の強度、癒着の面積、及び癒着面積の減少率をそれぞれ図７〜１０に示した。
【００７４】
【表３】
【００７５】
上記の表３に示すように、対照群に比べて実施例６、７の組織癒着が減少したことが確認したが、ゲル組成物に６％ＨＥＳ（２６４／０．４５）溶液が０．５重量％添加された実施例７に比べて、１０％ＨＥＳ（６７０／０．７５）溶液が０．５重量％添加された実施例６の癒着面積がより減少し、癒着が全く発生しなかった個体数も２匹であって、より優れた癒着抑制力を示した。
【００７６】
【表４】
【００７７】
上記の表４に示すように、対照群に比べてＣＯＳの添加された実施例８の組織癒着が減少したことが確認された。
実験群１乃至８の投与時、いずれも対照群に比べて塗布された材料による特異な炎症反応は観察されず、塗布された材料が優れた生体適合性を有することも確認できた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチ（Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ ｓｔａｒｃｈ）またはキトオリゴ糖（Ｃｈｉｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）を含む癒着防止用組成物。
【請求項２】
ヒアルロン酸の分子量が０．８×１０６〜３×１０６ダルトンであることである請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ヒアルロン酸が総重量対比０．５〜５重量％含まれる請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ヒドロキシエチルスターチは、２．０×１０５〜１．０×１０６ダルトンの分子量、及び０．７５〜０．４のモル置換度を有するものである請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ヒドロキシエチルスターチは、２．５×１０５〜６．７×１０５ダルトンの分子量、及び０．７５〜０．４のモル置換度を有するものである請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記ヒドロキシエチルスターチが総重量対比０．１重量％〜２．０重量％含まれる請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記水溶性キトオリゴ糖は、１×１０３〜５×１０３ダルトンの分子量を有するものである請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記水溶性キトオリゴ糖が総重量対比０．１重量％〜１０重量％含まれる請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記ヒアルロン酸は、動物組織から抽出されたものまたは発酵法で製造されたものである請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
癒着防止用医療剤を製造するための請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物を、ヒトを含む哺乳類に投与して手術後の周辺臓器または組織が互いに癒着することを防止する方法。
【請求項１】
ヒアルロン酸、及びヒドロキシエチルスターチ（Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ ｓｔａｒｃｈ）またはキトオリゴ糖（Ｃｈｉｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）を含む癒着防止用組成物。
【請求項２】
ヒアルロン酸の分子量が０．８×１０６〜３×１０６ダルトンであることである請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ヒアルロン酸が総重量対比０．５〜５重量％含まれる請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ヒドロキシエチルスターチは、２．０×１０５〜１．０×１０６ダルトンの分子量、及び０．７５〜０．４のモル置換度を有するものである請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ヒドロキシエチルスターチは、２．５×１０５〜６．７×１０５ダルトンの分子量、及び０．７５〜０．４のモル置換度を有するものである請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記ヒドロキシエチルスターチが総重量対比０．１重量％〜２．０重量％含まれる請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記水溶性キトオリゴ糖は、１×１０３〜５×１０３ダルトンの分子量を有するものである請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記水溶性キトオリゴ糖が総重量対比０．１重量％〜１０重量％含まれる請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記ヒアルロン酸は、動物組織から抽出されたものまたは発酵法で製造されたものである請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
癒着防止用医療剤を製造するための請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物を、ヒトを含む哺乳類に投与して手術後の周辺臓器または組織が互いに癒着することを防止する方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図１０】
【図７】
【図８】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図１０】
【図７】
【図８】
【図９】
【公表番号】特表２０１２−５０９７０６（Ｐ２０１２−５０９７０６Ａ）
【公表日】平成２４年４月２６日（２０１２．４．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３７３７３（Ｐ２０１１−５３７３７３）
【出願日】平成２１年１１月２５日（２００９．１１．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００９／００６９６２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６４８０６
【国際公開日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【出願人】（５０１１３１２１０）シン・プーン・ファーマシューティカル・カンパニー・リミテッド (2)
【氏名又は名称原語表記】ＳＨＩＮ ＰＯＯＮＧ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【出願人】（５０９２４２７９４）ポステック アカデミー‐インダストリー ファウンデーション (9)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年４月２６日（２０１２．４．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１１月２５日（２００９．１１．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００９／００６９６２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６４８０６
【国際公開日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【出願人】（５０１１３１２１０）シン・プーン・ファーマシューティカル・カンパニー・リミテッド (2)
【氏名又は名称原語表記】ＳＨＩＮ ＰＯＯＮＧ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【出願人】（５０９２４２７９４）ポステック アカデミー‐インダストリー ファウンデーション (9)
【Ｆターム（参考）】
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