粘膜ワクチン接種のための組成物および方法
本発明は、粘膜投与のために調合されたＩＲＭ化合物と粘膜投与のために調合された抗原とを含む医薬品の組み合わせを提供する。さらに本発明は、対象を免疫化する方法を提供する。概して本方法は、抗原をＩＲＭ化合物との組み合わせで対象の粘膜表面に有効量で投与して抗原に対する免疫応答を発生させるステップと、ＩＲＭ化合物を抗原との組み合わせで対象の粘膜表面に有効量で投与して抗原に対する免疫応答を発生させるステップとを含む。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
例えば皮下、筋肉内、および静脈内などの古典的な注射ワクチン接種経路は、主として全身性免疫（血液血清抗体およびＴ細胞）の誘導に関わる。このアプローチは、刺されたまたは損傷した皮膚を通じて身体への全身的アクセスを得る感染性因子（例えば破傷風）によって引き起こされる疾患に対して適切であるかもしれないが、ほとんどの病原体は、例えば口腔、鼻、または泌尿生殖器粘膜などの粘膜経路を通じて宿主に自然に感染する。
【０００２】
注射可能なワクチンは、概して典型的にＩｇＡと、様々な腺組織の分泌物と共に腸管、気道、および尿道腔内に分泌されることが多い分泌ＩｇＡ（ｓ−ＩｇＡ）との産生および分泌を通じて媒介される免疫を粘膜表面に誘発するのには、無効である。これらの分泌においてｓ−ＩｇＡは病原体と結合でき、それによって病原体が宿主の細胞に感染し始める前に、免疫細胞が病原体を排除するのを可能にする。したがって粘膜ワクチン接種は、病原体が宿主細胞に感染する（すなわち細胞感染）可能性を実質的に低下でき、場合によっては、病原体が宿主細胞に感染するのを防止することさえできる。対照的に注射されたワクチンは、病原体による宿主細胞感染の結果（例えば感染細胞の溶解）として放出された抗原に反応することが多い。したがって粘膜ワクチン接種と注射ワクチン接種との１つの重要な相違は、粘膜ワクチン接種が宿主の防御を刺激して細胞感染を制限または防止すらできるのに対し、注射されたワクチン接種は、願わくは感染症が発生する前に細胞感染の結果に反応する。
【０００３】
粘膜ワクチンは、ｓ−ＩｇＡ応答を誘発するそれらの能力のために、粘膜感染を防止または制限するのにより効果的である可能性が高い。さらに粘膜ワクチンは注射可能なワクチンと比較して、その他のいくつかの利点を提供する。これらの利点としては、より容易な投与、副作用の低下、投与が非侵襲性であること（例えば注射針を要さない）、および訓練された人材を必要としないほとんど無制限の頻度の追加免疫の可能性が挙げられる。これらの利点は経費を低下させ、ワクチン接種の安全性を増大し、発展途上世界において特に重要な課題であるコンプライアンスを改善できる。さらに新しい粘膜ワクチン接種システムのデザインにおける改善は、現在、制御が不十分である疾患に対するワクチンの開発を可能にするかもしれない。
【０００４】
さらに１つの粘膜部位における粘膜免疫応答の誘導は、離れた粘膜部位における免疫応答をもたらすかもしれない。例えば鼻または口腔粘膜ワクチン接種は、膣粘膜からのｓ−ＩｇＡおよびＩｇＧの分泌を発生させることができる。
【０００５】
粘膜経路を通じた免疫化の重要な利点にもかかわらず、粘膜免疫化の成功は、例えば抗原の分解、粘膜部位における限定的吸着および非特異的宿主因子との相互作用、安全かつ効果的なアジュバントの欠如、および不適切な送達システムの使用をはじめとする多くの要因のために限定されている。粘膜ワクチンの有用性および有効性を拡大するかなりの継続的必要性がある。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
粘膜送達に適した組み合わせ医薬品の構成要素として、特定の小型分子免疫応答調節物質（ＩＲＭ）が有用でありえることが分かった。
【０００７】
したがって本発明は、粘膜投与のために製剤されたＩＲＭ化合物と粘膜投与のために製剤された抗原とを含む組み合わせ医薬品を提供する。いくつかの実施形態ではＩＲＭ化合物および抗原が単一製剤中で提供されてもよく、他方、その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物および抗原が別々の製剤中で提供されてもよい。
【０００８】
別の態様では、本発明はまた、対象を免疫化する方法も提供する。概してこの方法は、抗原をＩＲＭ化合物と組み合わせて対象の粘膜表面に有効量で投与して抗原に対する免疫応答を発生させるステップと、ＩＲＭ化合物を抗原と組み合わせて対象の粘膜表面に有効量で投与して抗原に対する免疫応答を発生させるステップを含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、方法は１つ以上の初回抗原刺激用量の抗原、１つ以上の追加免疫用量の抗原またはＩＲＭ化合物、または双方をさらに含んでもよい。
【００１０】
本発明の様々なその他の特徴および利点は、以下の詳細な説明、実施例、特許請求の範囲、および添付の図面を参照すれば容易に明らかになるであろう。本願明細書全体を通じて数カ所で、実施例を通じて指針が与えられる。各例で、列記された一覧は代表的な群としてのみ役立ち、排他的一覧として解釈すべきではないものとする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
免疫応答調節物質（ＩＲＭ）は、強力な免疫調節活性を有することができる化合物である。ＩＲＭはＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）として知られている基礎免疫系機序を通じて作用し、選択的にサイトカイン生合成を調節するようである。例えば特定のＩＲＭ化合物は、例えばタイプＩインターフェロン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、および／またはＭＣＰ−１などの特定のサイトカインの産生および分泌を誘発する。別の例としては、特定のＩＲＭ化合物は、ＩＬ−４およびＩＬ−５などの特定のＴH２サイトカインの産生および分泌を阻害できる。さらにいくつかのＩＲＭ化合物は、ＩＬ−１およびＴＮＦを抑制するとされる（米国特許第６，５１８，２６５号明細書）。特定のＩＲＭは、例えば特定のウィルス性疾患（例えばヒト乳頭腫ウィルス、肝炎、ヘルペス）、特定の新生物形成（例えば基底細胞ガン、扁平細胞ガン、光線性角化症、メラノーマ）、および特定のＴH２−媒介疾患（例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎）などの多種多様な疾患および病状を処置するのに有用かもしれない。
【００１２】
本発明は、粘膜ワクチンとして使用するのに効果的であることができる組み合わせ医薬品、およびこのような組み合わせを粘膜表面に投与するステップを含む方法に関する。概して本発明に従った医薬組成物は、それぞれ粘膜送達に適した様式で製剤されて、それぞれ他方との組み合わせで抗原に対する免疫応答を産生させることができる量でＩＲＭ化合物および抗原を含む。粘膜ワクチン接種の利点は多数ある。本発明の組成物および方法は、以下の１つ以上を提供してもよい。
１）組成物は注射針の必要なしに容易に投与されてもよく、
２）注射されたワクチンが概して全身性応答のみを誘発するのに対し、粘膜ワクチン接種は粘膜および全身性免疫応答の双方を発生できる。ほとんどの病原体は粘膜表面で宿主に感染するので、粘膜ワクチン接種は病原体侵入部位で免疫応答を誘発し、
３）粘膜ワクチン接種は、ワクチン接種部位以外の粘膜部位で免疫応答を誘発できる。
【００１３】
このような組み合わせ医薬品の構成要素は、構成要素が、少なくとも別の構成要素が細胞に接触するまで、１つの構成要素が細胞に接触する生物学的効果を保持するのを可能にするあらゆる様式で提供される場合、互いに「組み合わせて」送達されると言ってもよい。したがって構成要素は、それらが別々の製剤中で提供され、異なる投与経路を通じて送達され、および／または異なる時間に投与されても、互いに組み合わせて送達される。
【００１４】
例えばＩＲＭ化合物および抗原は、構成要素が単一製剤中で提供されるか、または抗原が１つの製剤中で投与されてＩＲＭ化合物が第２の製剤中で投与されるがどうかにかかわらず、組み合わせ医薬品と見なされてもよい。異なる製剤中で投与される場合、構成要素は、所望ならば異なる時間に投与されてもよいが、発生する免疫応答が、抗原またはＩＲＭ化合物のどちらかが単独で投与される場合に発生する免疫応答を超えるように投与される。
【００１５】
いくつかの実施形態では、組み合わせ医薬品は、その中で少なくとも１つのＩＲＭ部分が抗原に共有結合的に付着するＩＲＭ／抗原抱合体を含んでもよい。かかるＩＲＭ／抗原抱合体を調製する方法は、例えば米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号明細書で述べられる。
【００１６】
粘膜ワクチンによって誘発される免疫応答を測定する一方法は、抗原によるチャレンジに答えた抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞の増大を測定することである。これは実施例１に示される。抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞を蛍光標識して、同質遺伝子マウスに養子導入した。マウスをＩＲＭ−抗原抱合体でチャレンジした。４日後、様々な部位（鼻関連リンパ組織（ＮＡＬＴ）、頸部リンパ節（ＣＬ）、および脾臓）からのリンパ様組織を摘出して、抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞の増大を測定した。各部位からの組織において、ＣＤ８+Ｔ細胞の増大は、ＩＲＭ−抗原抱合体での静脈内免疫化、または抗原またはＩＲＭ（図２Ａ−２Ｃ）のいずれかでの鼻腔内免疫化の結果としてよりも、鼻腔内免疫化の結果としての方が大きかった。同様にＩＲＭ−抗原抱合体での鼻腔内免疫化の７日後に、鼻粘膜中に、ＩＲＭ−抗原抱合体での静脈内免疫化、または抗原またはＩＲＭいずれかでの鼻腔内免疫化のいずれかに続いて観察されたのよりも大きな抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞の百分率が観察された（図２Ｄ）。同様の結果が、非抱合体ＩＲＭおよび抗原を使用して見られた（図３Ａ）。
【００１７】
粘膜ワクチン接種によって誘発された免疫応答を測定する別の方法は、例えば鼻関連リンパ様組織などのリンパ様組織中の抗原特異的ＣＤ４+Ｔ細胞の増大を測定することである。活性化された抗原特異的ＣＤ４+Ｔ細胞は、次にＢ細胞を刺激して抗原に対する抗体（例えばｓ−ＩｇＡ）誘導を生じる。実施例２では、抗原特異的Ｔ細胞を宿主マウスに養子導入した。マウスをＩＲＭ化合物および免疫原性抗原ペプチドの組み合わせでチャレンジした。３日後、リンパ様組織をマウスから摘出して、抗原特異的ＣＤ４+Ｔ細胞の増大を分析した。結果を図３Ｂに示す。ＣＤ４+Ｔ細胞の増大は、抗原単独で免疫化されたマウスよりもＩＲＭおよび抗原で免疫化されたマウスでより大きかった。
【００１８】
したがってワクチン接種（例えば鼻腔内）の粘膜経路は、該当組織部位（鼻関連リンパ様組織（ＮＡＬＴ）および鼻粘膜）において、非粘膜経路送達（静脈内）、または抗原単独またはＩＲＭ単独いずれかの粘膜送達のどちらと比較してもより多数の抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞および／またはＣＤ４+Ｔ細胞を提供できる。粘膜部位における抗原特異的Ｔ細胞集団の増大は、これらの位置における免疫細胞の活性化、および感染防止ができる免疫応答の発生を示唆する。抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞および抗原特異的ＣＤ４+Ｔ細胞の双方が活性化される場合、抗原特異的細胞媒介免疫応答および抗原特異的抗体免疫応答の双方が発生してもよい。
【００１９】
抗原は、粘膜免疫応答を生じさせるあらゆる材料を含むことができる。適切な抗原性材料としては、タンパク質と、ペプチドと、ポリペプチドと、脂質と、糖脂質と、多糖類と、炭水化物と、ポリヌクレオチドと、プリオンと、生または不活性化細菌と、ウィルスまたは真菌と、細菌性、ウィルス性、真菌性、原生動物性、腫瘍由来、または生物体由来の免疫原、毒素または類毒素とが挙げられるが、これに限定されるものではない。さらにここでの用法では、抗原はそれ自体が粘膜免疫応答を必ずしも生じないが、宿主細胞中で発現して抗原性タンパク質、ペプチド、またはポリペプチドを産生できるオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。かかるオリゴヌクレオチドは、例えばＤＮＡワクチンで有用である。いくつかの実施形態では、抗原は２つ以上の抗原性材料の組み合わせを含んでもよい。
【００２０】
それぞれ粘膜投与のために製剤されたＩＲＭおよび抗原を含む組成物が有用かもしれない病状としては、以下が挙げられるが、これに限定されるものではない。
（ａ）例えばアデノウィルス、ヘルペスウィルス（例えばＨＳＶ−Ｉ、ＨＳＶ−ＩＩ、ＣＭＶ、またはＶＺＶ）、ポックスウィルス（例えば痘瘡またはワクシニア、または伝染性軟属腫などのオルトポックスウィルス）、ピコルナウィルス（例えばライノウィルスまたはエンテロウィルス）、オルトミクソウィルス（例えばインフルエンザウィルス）、パラミクソウイルス（例えばパラインフルエンザウィルス、おたふく風邪ウィルス、はしかウィルス、および呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ））、コロナウィルス（例えばＳＡＲＳ）、パポバウィルス（例えば生殖器疣、尋常性肬贅、または足底疣贅を引き起こすものなどの乳頭腫ウィルス）、ヘパドナウィルス（例えば肝炎Ｂウィルス）、フラビウイルス（例えば肝炎Ｃウィルスまたはデングウィルス）、またはレトロウィルス（例えばＨＩＶなどのレンチウイルス）の感染によって生ずる疾患などのウィルス性疾患、
（ｂ）例えばエシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、アエロバクター（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、クラミジア（ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）、肺炎球菌（Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ）、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、マイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、プロビデンシア（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ）、クロモバクテリウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、またはボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）属などの細菌の感染によって生ずる疾患などの細菌性疾患、
（ｃ）クラミジア、カンジダ症、アスペルギルス症、ヒストプラスマ症、クリプトコックス髄膜炎を含むが、これらに限定されるものではない真菌疾患、またはマラリア、ニューモシスティスカリニ肺炎、レーシュマニア症、クリプトスポリジウム症、トキソプラズマ症、およびトリパノソーマ感染を含むが、これらに限定されるものではない寄生虫性疾患などのその他の感染症、および
（ｄ）アトピー性皮膚炎または湿疹などのＴH２−媒介アトピー性疾患、好酸球増加症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、およびオーメン症候群。
【００２１】
例えば粘膜性に投与される組成物は、例えばＢＣＧ、コレラ、ペスト、腸チフス、肝炎Ａ、肝炎Ｂ、肝炎Ｃ、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、パラインフルエンザ、ポリオ、狂犬病、はしか、おたふく風邪、風疹、黄熱病、破傷風、ジフテリア、ヘモフィルスインフルエンザｂ、結核、髄膜炎菌性および肺炎球菌ワクチン、アデノウィルス、ＨＩＶ、水痘、サイトメガロウィルス、デング、ネコ白血病、家禽ペスト、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２、豚コレラ、日本脳炎、呼吸器合胞体ウイルス、ロタウイルス、乳頭腫ウィルス、およびアルツハイマー疾患に対する予防的なまたは治療的な保護のために使用してもよい。
【００２２】
場合によっては、粘膜ワクチン接種は、粘膜表面を越える感染の可能性を低下させるのに、またはさらに防止するのに有用かもしれない。その他の場合では、粘膜ワクチンは血清抗体応答を刺激するのに有用かもしれない。場合によっては、粘膜ワクチンは粘膜感染に対する保護と血清抗体応答の双方を提供するかもしれない。したがって粘膜ワクチン接種は、典型的に粘膜表面を越えて感染するのではない病原体に対するワクチン接種のために有用かもしれない。
【００２３】
いくつかの実施形態では、抗原−ＩＲＭ組み合わせの投与に先だって、抗原が１つ以上の別々の「初回抗原刺激」用量で投与されてもよい。このようなやり方での初回抗原刺激は、抗原−ＩＲＭ組み合わせの投与時に増大する免疫応答を提供するかもしれない。
【００２４】
その他の実施形態では、抗原−ＩＲＭ組み合わせの投与後、抗原が１つ以上の別々の「追加免疫」用量で投与されてもよい。このようなやり方での追加免疫は、ＣＤ８+メモリＴ細胞、ＣＤ４+メモリＴ細胞、または双方を活性化することで、少なくとも部分的に消散した免疫応答を再活性化するかもしれない。
【００２５】
さらに別の実施形態では、抗原−ＩＲＭ組み合わせの投与後、ＩＲＭ化合物が１つ以上の別々の追加免疫用量で投与されてもよい。追加免疫用量で提供されるＩＲＭ化合物は、抗原−ＩＲＭ組み合わせ中で提供されるＩＲＭ化合物と同一または異なってもよく、あらゆるその他の追加免疫用量で提供されるＩＲＭ化合物と同一または異なってもよい。さらに抗原−ＩＲＭ組み合わせのＩＲＭ構成要素として、または追加免疫としてであるかに関わらず、ＩＲＭ化合物のあらゆる組み合わせを使用してもよい。
【００２６】
ＩＲＭ化合物の多くは小型の有機分子イミダゾキノリンアミン誘導体（例えば米国特許第４，６８９，３３８号明細書を参照されたい）であるが、いくつかのその他の化合物クラスもまた知られており（例えば米国特許第５，４４６，１５３号明細書、米国特許第６，１９４，４２５号明細書、および米国特許第６，１１０，９２９号明細書を参照されたい）、さらに多くが発見されている。ＣｐＧを含むオリゴヌクレオチドなどのその他のＩＲＭは、より高い分子量を有する（例えば米国特許第６，１９４，３８８号明細書を参照されたい）。
【００２７】
特定のＩＲＭは、例えば以下で開示されるものなどの小型の有機分子（タンパク質、ペプチドなどの大型生体分子とは対照的に、例えば分子量約１０００ダルトン未満、好ましくは約５００ダルトン未満）である。米国特許第４，６８９，３３８号明細書、米国特許第４，９２９，６２４号明細書、米国特許第５，２６６，５７５号明細書、米国特許第５，２６８，３７６号明細書、米国特許第５，３４６，９０５号明細書、米国特許第５，３５２，７８４号明細書、米国特許第５，３８９，６４０号明細書、米国特許第５，４４６，１５３号明細書、米国特許第５，４８２，９３６号明細書、米国特許第５，７５６，７４７号明細書、米国特許第６，１１０，９２９号明細書、米国特許第６，１９４，４２５号明細書、米国特許第６，３３１，５３９号明細書、米国特許第６，３７６，６６９号明細書、米国特許第６，４５１，８１０号明細書、米国特許第６，５２５，０６４号明細書、米国特許第６，５４１，４８５号明細書、米国特許第６，５４５，０１６号明細書、米国特許第６，５４５，０１７号明細書、米国特許第６，５７３，２７３号明細書、米国特許第６，６５６，９３８号明細書、米国特許第６，６６０，７３５号明細書、米国特許第６，６６０，７４７号明細書、米国特許第６，６６４，２６０号明細書、米国特許第６，６６４，２６４号明細書、米国特許第６，６６４，２６５号明細書、米国特許第６，６６７，３１２号明細書、米国特許第６，６７０，３７２号明細書、米国特許第６，６７７，３４７号明細書、米国特許第６，６７７，３４８号明細書、米国特許第６，６７７，３４９号明細書、米国特許第６，６８３，０８８号明細書、米国特許第６，７５６，３８２号明細書、米国特許第６，７９７，７１８号明細書、および米国特許第６，８１８，６５０明細書、米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号明細書、米国特許出願公開第２００４／０１４７５４３号明細書、および米国特許出願公開第２００４／０１７６３６７号明細書、および国際公開第２００５／１８５５１号パンフレット、国際公開第２００５／１８５５６号パンフレット、および国際公開第２００５／２０９９９号パンフレット。
【００２８】
小型分子ＩＲＭの追加的な例としては、特定のプリン誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号明細書、および米国特許第６，０２８，０７６号明細書で述べられるものなど）、特定のイミダゾキノリンアミド誘導体（米国特許第６，０６９，１４９号明細書で述べられるものなど）、特定のイミダゾピリジン誘導体（米国特許第６，５１８，２６５号明細書で述べられるものなど）、特定のベンゾイミダゾール誘導体（米国特許第６，３８７，９３８号明細書で述べられるものなど）、五員環窒素含有複素環に縮合した４−アミノピリミジンの特定の誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号明細書、米国特許第６，０２８，０７６号明細書、および米国特許第６，３２９，３８１号明細書、および国際公開第０２／０８９０５号パンフレットで述べられるアデニン誘導体など）、および特定の３−β−Ｄ−リボフラノシルチアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン誘導体（米国特許出願公開第２００３／０１９９４６１号明細書で述べられるものなど）が挙げられる。
【００２９】
その他のＩＲＭとしては、オリゴヌクレオチド配列などの大型生体分子が挙げられる。いくつかのＩＲＭオリゴヌクレオチド配列はシトシン−グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）を含有し、例えば米国特許第６，１９４，３８８号明細書、米国特許第６，２０７，６４６号明細書、米国特許第６，２３９，１１６号明細書、米国特許第６，３３９，０６８号明細書、および米国特許第６，４０６，７０５号明細書で述べられる。いくつかのＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、例えば米国特許第６，４２６，３３４号明細書および米国特許第６，４７６，０００号明細書で述べられるものなどの合成免疫調節構造モチーフを含むことができる。その他のＩＲＭヌクレオチド配列はＣｐＧ配列を欠いており、例えば国際公開第００／７５３０４号パンフレットで述べられる。
【００３０】
その他のＩＲＭとしては、アミノアルキルグルコサミニドリン酸塩（ＡＧＰ）などの生体分子が挙げられ、例えば米国特許第６，１１３，９１８号明細書、米国特許第６，３０３，３４７号明細書、米国特許第６，５２５，０２８号明細書、および米国特許第６，６４９，１７２号明細書で述べられる。
【００３１】
本発明での使用に適したＩＲＭ化合物としては、五員環窒素含有複素環に縮合した２−アミノピリジンを有する化合物が挙げられる。このような化合物としては、例えば以下が挙げられる。例えばアミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、複素環式エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換イミダゾキノリンアミン、オキシム置換イミダゾキノリンアミン、６−、７−、８−、または９−アリール、ヘテロアリール、アリールオキシまたはアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリンアミン、およびイミダゾキノリンジアミンなどの置換イミダゾキノリンアミンを含むが、これらに限定されるものではないイミダゾキノリンアミンと、アミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、複素環式エーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、オキシム置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、およびテトラヒドロイミダゾキノリンジアミンを含むが、これらに限定されるものではないテトラヒドロイミダゾキノリンアミンと、アミド置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミド置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンアミン、アリールエーテル置換イミダゾピリジンアミン、複素環式エーテル置換イミダゾピリジンアミン、アミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンエーテル、およびチオエーテル置換イミダゾピリジンアミンを含むが、これらに限定されるものではないイミダゾピリジンアミンと、１，２−架橋イミダゾキノリンアミンと、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミンと、イミダゾナフチリジンアミンと、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミンと、オキサゾロキノリンアミンと、チアゾロキノリンアミンと、オキサゾロピリジンアミンと、チアゾロピリジンアミンと、オキサゾロナフチリジンアミンと、チアゾロナフチリジンアミンと、ピラゾロピリジンアミンと、ピラゾロキノリンアミンと、テトラヒドロピラゾロキノリンアミンと、ピラゾロナフチリジンアミンと、テトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンと、ピリジンアミン、キノリンアミン、テトラヒドロキノリンアミン、ナフチリジンアミン、またはテトラヒドロナフチリジンアミンに縮合した１Ｈ−イミダゾ二量体。
【００３２】
特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、チアゾロナフチリジンアミン、ピラゾロピリジンアミン、ピラゾロキノリンアミン、テトラヒドロピラゾロキノリンアミン、ピラゾロナフチリジンアミン、またはテトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンであってもよい。
【００３３】
特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、置換イミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、チアゾロナフチリジンアミン、ピラゾロピリジンアミン、ピラゾロキノリンアミン、テトラヒドロピラゾロキノリンアミン、ピラゾロナフチリジンアミン、またはテトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンであってもよい。
【００３４】
ここでの用法では、置換イミダゾキノリンアミンとは、アミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、複素環式エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換イミダゾキノリンアミン、オキシム置換イミダゾキノリンアミン、６−、７−、８−、または９−アリール、ヘテロアリール、アリールオキシまたはアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリンアミン、またはイミダゾキノリンジアミンを指す。ここでの用法では、置換イミダゾキノリンアミンは、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンおよび４−アミノ−α，α−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノールを具体的かつ明示的に除外する。
【００３５】
適切なＩＲＭ化合物としてはまた、上述のプリン誘導体、イミダゾキノリンアミド誘導体、ベンゾイミダゾール誘導体、アデニン誘導体、アミノアルキルグルコサミニドリン酸塩、およびオリゴヌクレオチド配列も挙げられる。
【００３６】
特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば１−（２−アミノ−２−メチルプロピル）−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンまたはＮ−［６−（｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝アミノ）−６−オキソヘキシル］−４−アジド−２−ヒドロキシベンズアミドなどのアミド置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００３７】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば２−ブチルチアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンなどのチアゾロキノリンアミンであってもよい。
【００３８】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば４−アミノ−α，α−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノールなどのイミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００３９】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えばＮ−｛３−［４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−７−イルオキシ］プロピル｝ニコチンアミドなどのアミド置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００４０】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば３−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−Ｎ，２，２−トリメチルプロパン−１−スルホンアミドなどのスルホンアミド置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００４１】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば２−ブチル−１−｛２−メチル−２−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］プロピル｝−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンなどのチオエーテル置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００４２】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば２−ブチル−１−［２−（プロピルスルホニル）エチル］−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］キノリン−４−アミンなどのピラゾロキノリンアミンであってもよい。
【００４３】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば１−｛４−アミノ−２−エトキシメチル−７−［３−（ピリジン−３−イル）プロポキシ］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル｝−２−メチルプロパン−２−オールなどのアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００４４】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えばＮ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−６，７−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−Ｎ’−シクロヘキシル尿素などの尿素置換イミダゾピリジンアミンであってもよい。
【００４５】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えばＮ−［２−（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−１，１−ジメチルエチル］メタンスルホンアミドなどのスルホンアミド置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００４６】
さらに別の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えばＮ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝シクロヘキサンカルボキサミドなどのアミド置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００４７】
特に断りのない限り、化合物への言及は、あらゆる異性体（例えばジアステレオマーまたは鏡像異性体）、塩、溶媒和化合物、多形体などをはじめとするあらゆる薬剤的に許容可能な形態の化合物を含むことができる。特に化合物が光学活性の場合、化合物への言及は、化合物の各鏡像異性体、ならびに鏡像異性体のラセミ混合物を含むことができる。
【００４８】
本発明のいくつかの実施形態では、ＩＲＭ化合物は、少なくとも１つのＴＬＲの作動体、好ましくはＴＬＲ６、ＴＬＲ７、またはＴＬＲ８の作動体であってもよい。特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、ＴＬＲ８−選択的作動体であってもよい。その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物はＴＬＲ７−選択的作動体であってもよい。ここでの用法では、「ＴＬＲ８−選択的作動体」という用語は、ＴＬＲ８の作動体として作用するが、ＴＬＲ７の作動体として作用しないあらゆる化合物を指す。「ＴＬＲ７−選択的作動体」という用語は、ＴＬＲ７の作動体として作用するが、ＴＬＲ８の作動体として作用しない化合物を指す。「ＴＬＲ７／８作動体」とは、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８双方の作動体として作用する化合物を指す。
【００４９】
ＴＬＲ８−選択的作動体またはＴＬＲ７−選択的作動体は、指示されたＴＬＲ、およびＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ９、またはＴＬＲ１０の１つ以上の作動体として作用してもよい。したがって「ＴＬＲ８−選択的作動体」とは、ＴＬＲ８だけで他のＴＬＲの作動体としては作用しない化合物を指してもよい一方で、それは代案としてはＴＬＲ８、および例えばＴＬＲ６の作動体として作用する化合物を指してもよい。同様に「ＴＬＲ７−選択的作動体」とは、ＴＬＲ７だけで他のＴＬＲの作動体としては作用しない化合物を指してもよいが、それは代案としてはＴＬＲ７、および例えばＴＬＲ６の作動体として作用する化合物を指してもよい。
【００５０】
特定の化合物に対するＴＬＲ作動性は、あらゆる適切な様式で評価してもよい。例えば試験化合物のＴＬＲ作動性を検出するためのアッセイについては、例えば米国特許出願公開第２００４／０１３２０７９号明細書で述べられ、そのようなアッセイでの使用に適したリコンビナント細胞系については、例えば国際公開第０４／０５３０５７号パンフレットで述べられる。
【００５１】
用いられる特定のアッセイにかかわらず、化合物でアッセイを実施することが、特定のＴＬＲによって媒介されるいくつかの生物学的活性増大の少なくとも閾値をもたらせば、化合物は特定のＴＬＲの作動体として同定できる。反対に化合物を使用して、生物学的活性を検出するために策定されたアッセイを実施することが、特定のＴＬＲによって媒介される生物学的活性増大の閾値を惹起できなければ、化合物は特定ＴＬＲの作動体として作用しないと同定されてもよい。特に断りのない限り生物学的活性の増大は、適切な対照中で観察されたものと比べた同一生物学的活性の増大を指す。アッセイは、適切な対照との組み合わせで実施されてもされなくてもよい。経験を積むことで当業者は、特定のアッセイ（例えば特定のアッセイ条件下、適切な対照で観察された値の範囲）を十分に熟知するようになるかもしれず、特定のアッセイにおける化合物のＴＬＲ作動性を判定するために対照を実施することは、必ずしも必要でないかもしれない。
【００５２】
特定のアッセイにおいて、特定の化合物が特定のＴＬＲの作動体であるか否かを判定するためのＴＬＲ−媒介生物学的活性増大の閾値は、アッセイ終点として観察される生物学的活性、アッセイ終点を測定または検出するのに使用される方法、アッセイの信号対雑音比、アッセイ精度、および双方のＴＬＲに対する化合物の作動性を判定するのに同一アッセイが使用されるかどうかを含むが、これらに限定されるものではない、技術分野で知られている因子に従って変動する。したがって全ての可能なアッセイについて、化合物が特定のＴＬＲの作動体または非作動体であるかを同定するのに必要なＴＬＲ−媒介生物学的活性増大の閾値を普遍的に記述するのは実用的でない。しかし当業者はこのような因子を正当に考慮の上、適切な閾値を容易に判定できる。
【００５３】
発現性ＴＬＲ構造遺伝子で形質移入されたＨＥＫ２９３細胞を用いるアッセイは、細胞に形質移入されたＴＬＲの作動体として化合物を同定するために、例えば約１μＭ〜約１０μＭの濃度で化合物が提供される場合、例えばＴＬＲ−媒介生物学的活性（例えばＮＦκＢ活性化）における少なくとも３倍の増大の閾値を使用してもよい。しかし特定の状況では、異なる閾値および／または異なる濃度範囲が適切かもしれない。また異なる閾値は、異なるアッセイに適するかもしれない。
【００５４】
抗原−ＩＲＭ組み合わせの構成要素、ならびに初回抗原刺激用量または追加免疫用量で提供される抗原またはＩＲＭは、対象への粘膜投与に適したあらゆる製剤中で提供されてもよい。適切なタイプの製剤については、例えば米国特許第５，９３９，０９０号明細書、米国特許第６，３６５，１６６号明細書、米国特許第６，２４５，７７６号明細書、および米国特許第６，４８６，１６８号明細書で述べられる。化合物は、抗原またはＩＲＭ化合物であるかにかかわらず、溶液、懸濁液、エマルジョンを含むが、これらに限定されるものではないあらゆる適切な形態、またはあらゆる形態の混合物中で提供されてもよい。化合物は、あらゆる薬剤的に許容可能な賦形剤、キャリア、またはビヒクルとの製剤中で送達されてもよい。さらに抗原−ＩＲＭ組み合わせのＩＲＭ構成要素および抗原構成要素は、単一製剤中で共に提供されてもよく、または別々の製剤中で提供されてもよい。製剤は、例えばクリーム、軟膏、煙霧剤調合物、非煙霧剤スプレー、ゲル、ローションなどのあらゆる適切な剤形で送達されてもよい。製剤は、アジュバント、浸透促進剤、着色剤、香料、香味料、保湿剤、増粘剤などを含むが、これらに限定されるものではない、１つ以上の添加剤をさらに含んでもよい。
【００５５】
製剤は、例えば口腔、鼻、または泌尿生殖器粘膜などの対象のあらゆる適切な粘膜表面に投与されてもよい。
【００５６】
粘膜ワクチン接種に適した製剤の組成物は、構成要素（すなわちＩＲＭ化合物および／または抗原）の物理的および化学的性質、キャリアの性質、意図される投与計画、対象の免疫系の状態（例えば抑制された、損なわれた、刺激された）、構成要素を投与する方法、および製剤が投与される生物種を含むが、これらに限定されるものではない技術分野で知られている因子に従って変動する。したがって全ての可能な用途について、粘膜ワクチン接種に効果的な製剤の組成物を普遍的に記述するのは実用的でない。しかし当業者はこのような因子を正当に考慮の上、適切な製剤を容易に判定できる。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、例えば約０．０００１％〜約１０％（特に断りのない限り、本願明細書中で提供される全ての百分率は、全製剤に対する重量／重量である）の製剤中で、ＩＲＭを対象に投与するステップを含むが、いくつかの実施形態ではこの範囲外の濃度でＩＲＭ化合物を提供する製剤を使用して、ＩＲＭ化合物を投与してもよい。特定の実施形態では、本方法は、少なくとも約０．０１％のＩＲＭ化合物、少なくとも約０．０３％のＩＲＭ化合物、または少なくとも約０．１％のＩＲＭ化合物を含む製剤を対象に投与するステップを含む。その他の実施形態では、本方法は、約５％までのＩＲＭ化合物、約１％までのＩＲＭ化合物、または約０．５％までのＩＲＭ化合物を含む製剤を対象に投与するステップを含む。特定の一実施形態では、本方法は、少なくとも約０．１％のＩＲＭ化合物から約５％までのＩＲＭ化合物を含む製剤中でＩＲＭ化合物を投与するステップを含む。
【００５８】
いくつかの実施形態では、特定の病原体による感染の典型的なまたは予期される部位である粘膜表面に、製剤を投与してもよい。例えば呼吸病原体（例えばインフルエンザウィルス）に対して予防接種するために、粘膜ワクチン、または粘膜ワクチン構成要素を鼻粘膜に投与してもよい。代案としては、離れた粘膜部位で免疫応答を誘発するために、製剤を１つの粘膜表面に投与してもよい。例えば膣粘膜（例えばヘルペスウィルス）を通じて感染できる病原体に対して予防接種するために、製剤を鼻粘膜または口腔粘膜に投与してもよい。
【００５９】
粘膜ワクチン接種に有効なＩＲＭ化合物の量は、ＩＲＭ化合物なしで抗原を投与することで生じる免疫応答と比べて、組み合わせ中の抗原に対する免疫応答を増大させるのに十分な量である。粘膜ワクチン中で投与されるＩＲＭ化合物の正確な量は、ＩＲＭ化合物の物理的および化学的性質、キャリアの性質、意図される投与計画、対象の免疫系の状態（例えば抑制された、損なわれた、刺激された）、ＩＲＭ化合物を投与する方法、および粘膜ワクチンが投与される生物種を含むが、これらに限定されるものではない技術分野で知られている因子に従って変動する。したがって全ての可能な用途について、粘膜ワクチン接種に有効なＩＲＭ化合物の量を成す量を普遍的に記述するのは実用的でない。しかし当業者はこのような因子を正当に考慮の上、適切な量を容易に判定できる。
【００６０】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、十分なＩＲＭ化合物を投与して、例えば約１００ｎｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供するステップを含むが、いくつかの実施形態では、本方法は、ＩＲＭ化合物をこの範囲外の用量で投与して実施されてもよい。これらの実施形態のいくつかでは、本方法は十分なＩＲＭ化合物を投与して、例えば約３．７５ｍｇ／ｋｇの用量である、約１０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供するステップを含む。
【００６１】
投与計画は、ＩＲＭ化合物の物理的および化学的性質、キャリアの性質、投与されるＩＲＭの量、意図される投与計画、対象の免疫系の状態（例えば抑制された、損なわれた、刺激された）、ＩＲＭ化合物を投与する方法、および粘膜ワクチンが投与される生物種を含むが、これらに限定されるものではない技術分野で知られている多くの因子に少なくともある程度左右される。したがって全ての可能な用途について、粘膜ワクチン接種に有効な投与計画を普遍的に記述するのは実用的でない。しかし当業者はこのような因子を正当に考慮の上、適切な投与計画を容易に判定できる。
【００６２】
いくつかの実施形態では、ＩＲＭ化合物を例えば一定期間内（例えば毎日、毎週など）で単回から複数回投与で投与してもよい。特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物を単一回投与してもよい。その他の実施形態では、ＩＲＭを１０年毎に約１回から、毎日複数回投与してもよい。例えばＩＲＭ化合物を少なくとも１０年に１回、少なくとも５年に１回、または少なくとも２年に１回投与してもよい。その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物を例えば少なくとも毎年１回、少なくとも６ヶ月に１回、少なくとも毎月１回、少なくとも毎週１回、または少なくとも毎日１回投与してもよい。特定の一実施形態では、ＩＲＭ化合物を毎月約１回から毎年約１回投与する。
【００６３】
本発明の方法はあらゆる適切な対象において実施されてもよい。適切な対象としては、これに限定されるものではない、ヒト、非ヒト霊長類、齧歯類、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、またはウシなどの動物が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【実施例】
【００６４】
以下の実施例は、特徴、利点、およびその他の本発明の詳細をさらに詳しく例示するためにのみ選択されている。しかし実施例はこの目的を果たしながら、特定の材料および使用量ならびにその他の条件および詳細は、本発明の範囲を不当に制限しないものと明示的に理解される。
【００６５】
実施例で使用したＩＲＭ化合物を表１に示す。
【００６６】
【表１】
【００６７】
実施例１
卵白アルブミン−ＩＲＭ１抱合体を次のようにして調製した。ＩＲＭ１をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に１０ｍｇ／ｍｌに懸濁した。卵白アルブミンをリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に１０ｍｇ／ｍｌに懸濁して、ＮａＯＨの添加によってｐＨを＞１０．０に調節した。１２−ウェル組織培養プレートの単一ウェル内で、５００μＬの卵白アルブミン溶液（５ｍｇ卵白アルブミン）と１００μＬのＩＲＭ１溶液（１ｍｇ ＩＲＭ１）とを混合した。プレートを氷の上にのせ、ＩＲＭ１／卵白アルブミン混合物を含有するウェルにできるだけ近くなるように、長波長ＵＶ光源をプレートの上に直接にのせた。混合物を１５分間照射した。得られた抱合体をウェルから取り出して、５ｍｇ／ｍＬの卵白アルブミン、０．５ｍｇ／ｍＬのＩＲＭ１の最終濃度でＰＢＳに再懸濁し、ＰＢＳ中で透析してあらゆる非抱合ＩＲＭを除去した。
【００６８】
オレゴン州ユージーンのモレキュラー・プローブズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ））からの細胞を安定様式で染色する蛍光性染料、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で、メイン州バー・ハーバーのジャクソン・ラボラトリーズ（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ））からの鶏卵白アルブミン特異的ＣＤ８+Ｔ細胞（ＯＴ−Ｉ）を標識し、次にマサチューセッツ州ウィルミントンのチャ−ルス・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ））からの同質遺伝子Ｃ５７ＢＬ／６マウス中に養子導入した。次に０日目に、受容体マウスを鼻腔内（ＩＮ）または静脈内（ＩＶ）のいずれかで１００μｇの卵白アルブミン−ＩＲＭ１抱合体で免疫化した。４日目にマウスを屠殺し、鼻関連リンパ様組織（ＮＡＬＴ）、鼠径リンパ節（ＩＬＮ）、頸部リンパ節（ＣＬＮ）、および脾臓（Ｓｐｌ）を摘出した。マウスから採取した各組織をマサチューセッツ州ベッドフォードのＢＤバイオサイエンシズ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ））からの１００μｍナイロンスクリーンに通過させ、遠心分離してメインランド州ロックビルのバイオソース・インターナショナル（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ））からのフローサイトメトリー染色緩衝液に再懸濁した。次に細胞をカリフォルニア州サンディエゴのＢＤファーミンジェン（ＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））からのＣＤ８−サイクロ（登録商標）ーム（ｃｙｃｈｒｏｍｅ）およびカリフォルニア州フラートンのベックマン・コールター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．（Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）からのＳＩＩＮＦＥＫＬ／Ｋb四量体−フィコエリセリン抗体で標識した。次に細胞をカリフォルニア州サンノゼのベクトン・ディッキンソン社（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ａｎｄ Ｃｏ．（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ））からのファックスキャリバー（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ）に通過させ、ＣＤ８+ＳＩＩＮＦＥＫＬ／Ｋb四量体+Ｔ細胞をＣＦＳＥ発現について分析した。
【００６９】
結果を次のように図１に示す。図１ＡにＮＡＬＴ、図１ＢにＩＬＮ、図１ＣにＣＬＮ、および図１Ｄに脾臓。ＩＲＭと一緒の抗原の鼻腔内送達は、ＣＦＳＥの進行性損失によって示されるように、全位置で細胞傷害性Ｔリンパ球の効果的な活性化をもたらす。
【００７０】
７日目に、ＯＴ−Ｉ細胞総数を鼻関連リンパ様組織（ＮＡＬＴ）、頸部リンパ節（ＣＬＮ）、および脾臓（Ｓｐｌ）で別々に計測した。ＯＴ−Ｉ細胞数は、全リンパ球（トリパンブルー排除）を計測し、ＯＴ−Ｉ+ＣＤ８+（フローサイトメトリー分析）の百分率を掛けて求めた。さらに７日目に、鼻粘膜中のＯＴ−Ｉ細胞の百分率を求めた。結果を次のように図２に示す。図２ＡにＮＡＬＴ、図２ＢにＣＬＮ、図２Ｃに脾臓、および図２Ｄに鼻粘膜。
【００７１】
抗原にＩＲＭ１を加えた鼻腔内送達は、調べた全リンパ様組織において７日目に、静脈内送達よりも多くのＯＴ−Ｉ細胞総数を発生させた。ＩＲＭ１に抗原を加えた鼻腔内送達はまた、７日目に抗原単独よりも多くのＯＴ−Ｉ細胞総数も発生させ、この経路を通じた抗原特異的Ｔ細胞活性化増強におけるＩＲＭの劇的効果が示唆された。さらにワクチン接種の鼻腔内経路は、該当組織部位（鼻関連リンパ様組織（ＮＡＬＴ）および鼻粘膜）により多数のＯＴ−Ｉ細胞をもたらす。
【００７２】
実施例２
メイン州バー・ハーバーのジャクソン・ラボラトリーズ（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ））からのＯＴ−ＩマウスからのＣＤ８+Ｔ細胞をマサチューセッツ州ウィルミントンのチャ−ルス・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ））からのＣ５７ＢＬ／６マウスに養子導入した。メイン州バー・ハーバーのジャクソン・ラボラトリーズ（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ））からのＤＯ．１１ＴＣＲマウスからのＣＤ４+Ｔ細胞をマサチューセッツ州ウィルミントンのチャ−ルス・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ））からのＢａｌｂ／ｃマウスに養子導入した。次に０日目にマウスを次のように経鼻腔的に免疫化した。ＩＲＭ２あり（ＩＲＭ２＋Ａｇ、７５μｇのＩＲＭ２／マウス）、またはＩＲＭ２なし（Ａｇ単独）のいずれかで、１匹あたり１００μｇの全鶏卵白アルブミンでＯＴ−Ｉ−導入Ｃ５７ＢＬ／６マウスを免疫化した。ＩＲＭ２あり（ＩＲＭ２＋Ａｇ、７５μｇＩＲＭ２／マウス）またはＩＲＭ２なし（Ａｇ単独）のいずれかで、１匹あたり１００μｇのＯＶＡペプチド（ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ）でＤＯ．１１−導入Ｂａｌｂ／ｃマウスを免疫化した。
【００７３】
３日目に鼻関連リンパ様組織を摘出し、ＰＢＳ単独と比べた各細胞数の増加倍数を判定した。ＳＩＩＮＦＥＫＬ／Ｋb四量体を使用してＣＤ８+ＯＴ−Ｉ細胞を検出し、カリフォルニア州バーリンゲームのカルタグ・ラボラトリーズ（Ｃａｌｔａｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ））からのクロノタイプ抗体を使用してＣＤ４+ＤＯ．１１細胞を検出し、カリフォルニア州サンノゼのベクトン・ディッキンソン社（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ａｎｄ Ｃｏ．（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ））からのファックスキャリバー（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ）を使用して分析した。
【００７４】
結果を次のように図３に示す。図３ＡにＣＤ８+ＯＴ−Ｉ増大、図３ＢにＣＤ４+ＤＯ．１１増大を示す。ＩＲＭ／抗原組み合わせの鼻腔内免疫化は、抗原単独での鼻腔内免疫化よりも大きなＣＤ８+Ｔ細胞およびＣＤ４+Ｔ細胞双方の増大を誘発する。
【００７５】
実施例３
マサチューセッツ州ウィルミントンのチャ−ルス・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ））からのＢａｌｂ／ｃマウスをミズーリ州セントルイスのシグマ・アルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））からの５０μｇの全鶏卵白アルブミン（ＯＶＡ）タンパク質と５０μｇのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のＩＲＭ４によって、様々な経路で処置した。カリフォルニア州ハーキュリーズのバイオラッド・ラボラトリーズ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ））からのバイオ−ビーズ（Ｂｉｏ−Ｂｅａｄｓ）（カタログ番号１５２−３９２０）でＯＶＡを洗浄し、内毒素を除去して、次にリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁し、清浄な卵白アルブミンタンパク質を調製した。皮下（ＳＣ）注射、静脈内（ＩＶ）注射、筋肉内（ＩＭ）注射、皮内（ＩＤ）注射、鼻腔内点滴注入（ＩＮ）、皮内ＯＶＡ注射と、ＯＶＡ注射部位直上の１０μＬのＩＲＭ４クリームの局所的投与（ＩＤ＋Ｔｏｐ．）とによって、マウスをＯＶＡおよびＩＲＭ４で処置し、または未処置のままにした（なし）。
【００７６】
２１日目にマウスを屠殺し、１ｍＬ ＰＢＳの気管投与によって肺および鼻洗浄を実施し、心臓穿刺と細胞を除去する遠心分離によって血清を得た。血清を分析のために採取した。洗浄サンプルをＯＶＡ特異的ＩｇＡについてＥＬＩＳＡで測定した。血清サンプルをＯＶＡ特異的ＩｇＧ２ａについてＥＬＩＳＡで測定した。
【００７７】
ニューヨーク州コーニングのコーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ．（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ））からのコスター（Ｃｏｓｔａｒ）ＥＩＲ／ＲＩＡ９６ウェルプレート（カタログ番号３５９０）をＰＢＳ中２０μｇ／ｍＬの卵白アルブミン溶液によって１００μＬ／ウェルでコーティングし、３７℃で１〜２時間、または４℃で一晩インキュベートして、ＯＶＡ特異的抗体ＥＬＩＳＡを実施した。次にプレートをＰＢＳ溶液（洗浄緩衝液）中０．５％のトウィーン２０で１回洗浄した。ＰＢＳ溶液中１％のＢＳＡを２００μＬ／ウェルでウェルに入れて、３７℃で１〜２時間、または４℃で一晩インキュベートした。次にプレートを洗浄緩衝液で２回洗浄した。ＰＢＳ（希釈緩衝液）中０．２％のＢＳＡ、０．０５％のトウィーン２０中で、プレートを横切って未希釈洗浄サンプルから開始した３倍連続希釈、または１：１０希釈血清サンプルから開始した２０倍連続希釈を作成し、一晩４℃でインキュベートした。次にプレートを洗浄緩衝液で４回洗浄した。希釈緩衝液中１：２０００希釈のアラバマ州バーミングハムのサザン・バイオテクノロジー・アソシエーツ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ））からのヤギ抗−マウスＩｇＧ２ａまたはサザン・バイオテクノロジー・アソシエーツ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．）からのヤギ抗−マウスＩｇＡを１００μＬ／ウェルでウェルに入れ、室温で１時間インキュベートした。次にプレートを洗浄緩衝液で４回洗浄し、カリフォルニア州カマリロのバイオソース・インターナショナル（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ））からの安定化クロマジェン（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）（カタログ番号ＳＢ０２）を１００μＬ／ウェルで充填して５分未満インキュベートし、次にバイオソース・インターナショナル（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）からの停止液（カタログ番号ＳＳ０２）を５０μＬ／ウェルで添加した。プレートをＯＤ４９０で分光光度計によって読み取る。
【００７８】
結果を図４に示す。ＩＲＭ／抗原組み合わせの鼻腔内投与のみが、肺粘膜（図４Ａ）および鼻粘膜（図４Ｂ）において強力なＩｇＡ応答を生じさせた。鼻腔内をはじめとする全ての投与経路は、血液中に強力な強力なＩｇＧ２ａ応答を生じさせた（図４Ｃ）。
【００７９】
実施例４
０日目および７日目に、３５μｇのＯＶＡ単独で、またはＰＢＳ中の１４μｇのＩＲＭ３、ＩＲＭ４、ＩＲＭ５、ＩＲＭ６、ＩＲＭ７、ＩＲＭ８、ＩＲＭ９、ＩＲＭ１０、ＩＲＭ１１、またはＩＲＭ１２との組み合わせで、チャ−ルス・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）からのＢａｌｂ／ｃマウスを鼻腔内免疫化した。１４日目にマウスを屠殺し、実施例３で述べられるようにして肺洗浄および血清採取を実施した。実施例３で述べられるようにして、サザン・バイオテクノロジー・アソシエーツ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．）からのＯＶＡ特異的ＩｇＡおよびＩｇＧ２ｂについて、肺洗浄および血清サンプルをそれぞれ分析した。
【００８０】
結果を図５に示す。試験された全てのＩＲＭ化合物のＩＲＭ／抗原組み合わせは、抗原単独よりも大きなＩｇＡ（図５Ａ）およびＩｇＧ２ｂ（図５Ｂ）応答を提供した。
【００８１】
実施例５
ＧＦＰ＋／ＯＴ−Ｉ＋Ｃ５７ＢＬ６マウスのリンパ節からのリンパ球をＣ５７ＢＬ６マウスに養子導入した。養子導入の１日後、３５μｇの卵白アルブミン単独、またはクエン酸緩衝食塩水（ＣＢＳ）中１４μｇのＩＲＭ３、ＩＲＭ４、ＩＲＭ５、ＩＲＭ６、ＩＲＭ７、ＩＲＭ８、ＩＲＭ９、ＩＲＭ１０、ＩＲＭ１１、またはＩＲＭ１２との組み合わせで、マウスを経鼻的に免疫化した。４日後マウスを屠殺し、流入領域リンパ節（ＤＬＮ）および脾臓を摘出した。カリフォルニア州ヘイワードのグァバ・テクノロジー（Ｇｕａｖａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ））からのグアヴァ（Ｇｕａｖａ）ＰＣＡ９６を使用して、ＤＬＮリンパ球および脾細胞の総数を求めた。ＤＬＮリンパ球および脾細胞をプロピジウムヨウ素（ＰＩ）およびカリフォルニア州サンディエゴのＢＤファーミンジェン（ＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））からのマウス抗−ＣＤ８抗体で染色し、ＯＴ−Ｉ+／ＧＦＰ+リンパ球の百分率をＰＩ-ＣＤ８+／ＧＦＰ+リンパ球でゲーティングしたフローサイトメトリーによって求めた。脾細胞総数をＰＩ-ＯＴ−Ｉ+／ＧＦＰ+リンパ球百分率で乗じて、ＯＴ−Ｉ+／ＧＦＰ+リンパ球総数を求めた。
【００８２】
結果を図６に示す。多くの異なるＩＲＭ化合物を用いるＩＲＭ／抗原組み合わせの鼻腔内投与は、ＤＬＮ（図６Ａ）および脾臓中に、抗原単独投与よりも多数の抗原特異的Ｔ細胞を提供した（図６Ｂ）。
【００８３】
実施例６
メイン州バー・ハーバーのジャクソン・ラボラトリーズ（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ））からのＯＴ−Ｉマウスからのリンパ球をマサチューセッツ州ウィルミントンのチャ−ルス・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ））からのＣ５７ＢＬ／６マウスに養子導入した。実施例３で述べられるようにして、卵白アルブミンを洗浄した。養子導入の１日後、ＰＢＳ単独の鼻腔内、または５０μｇの卵白アルブミンと５０μｇのＰＢＳ中ＩＲＭ４の鼻腔内（ＩＮ）、静脈内（ＩＶ）、または皮下（ＳＣ）で、マウスを免疫化した。５ヶ月後、マウスを以前免疫化したのと同一様式で再度免疫化し、または再度免疫化しなかった。５ヶ月の免疫化の４日後にマウスを屠殺し、流入領域リンパ節（ＤＬＮ）および鼻関連リンパ様組織（ＮＡＬＴ）を採取した。
【００８４】
カリフォルニア州ヘイワードのグァバ・テクノロジー（Ｇｕａｖａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ））からのグアヴァ（Ｇｕａｖａ）ＰＣＡ９６を使用して、ＤＬＮリンパ球およびＮＡＬＴリンパ球の総数を求めた。ＤＬＮリンパ球およびＮＡＬＴリンパ球をプロピジウムヨウ素（ＰＩ）およびカリフォルニア州サンディエゴのＢＤファーミンジェン（ＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））からのマウス抗−ＣＤ８抗体で染色し、ＯＴ−Ｉ+／ＧＦＰ+リンパ球の百分率をＰＩ-ＣＤ８+／ＧＦＰ+リンパ球でゲーティングしたフローサイトメトリーによって求めた。ＤＬＮリンパ球またはＮＡＬＴリンパ球をＤＬＮまたはＮＡＬＴ ＰＩ-ＯＴ−Ｉ+／ＧＦＰ+リンパ球百分率で乗じて、ＯＴ−Ｉ+／ＧＦＰ+リンパ球総数を求めた。
【００８５】
結果を次のように図７に示す。図７ＡにＤＬＮ。図７ＢにＮＡＬＴ。鼻腔内をはじめとする免疫化の全経路は、再免疫化時にＤＬＮ中にＯＴ−Ｉ細胞数増大を引き起こした。さらに鼻腔内免疫化は再免疫化時にＮＡＬＴ中にＯＴ−Ｉ細胞数増大を引き起こした。
【００８６】
特許、その中で引用される特許文献および公報の完全な開示は、参照によってその内容全体を個々に本願明細書に引用したものとする。矛盾がある場合、定義を含めて本願明細書が優先するものとする。
【００８７】
本発明の範囲と精神を逸脱することなく本発明の様々な修正と変更ができることは、当業者には明らかである。例示的な実施形態および実施例は例としてのみ提供され、本発明の範囲を限定することは意図されない。本発明の範囲は、以下に記述される特許請求の範囲によってのみ限定される。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１Ａ】ワクチン接種後のリンパ組織（ＮＡＬＴ）中の抗原特異的Ｔ細胞の増殖を示すフローサイトメトリーデータである。
【図１Ｂ】ワクチン接種後のリンパ組織（ＩＬＮ）中の抗原特異的Ｔ細胞の増殖を示すフローサイトメトリーデータである。
【図１Ｃ】ワクチン接種後のリンパ組織（ＣＬＮ）中の抗原特異的Ｔ細胞の増殖を示すフローサイトメトリーデータである。
【図１Ｄ】ワクチン接種後のリンパ組織（脾臓）中の抗原特異的Ｔ細胞の増殖を示すフローサイトメトリーデータである。
【図２Ａ】ワクチン接種後のリンパ様組織中の抗原特異的Ｔ細胞総数を示すデータである。
【図２Ｂ】ワクチン接種後のリンパ様組織中の抗原特異的Ｔ細胞総数を示すデータである。
【図２Ｃ】ワクチン接種後のリンパ様組織中の抗原特異的Ｔ細胞総数を示すデータである。
【図２Ｄ】ワクチン接種後の鼻粘膜中の抗原特異的Ｔ細胞百分率を示すデータである。
【図３Ａ】ワクチン接種後の抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞の増大を実証するフローサイトメトリーデータである。
【図３Ｂ】ワクチン接種後の抗原特異的ＣＤ４+Ｔ細胞の増大を実証するフローサイトメトリーデータである。
【図４Ａ】ＩＲＭおよび抗原の組み合わせによる様々な経路を通じた免疫化に応答する、肺洗浄ＩｇＡ抗体を示すデータである。
【図４Ｂ】ＩＲＭおよび抗原の組み合わせによる様々な経路を通じた免疫化に応答する、鼻洗浄ＩｇＡ抗体を示すデータである。
【図４Ｃ】ＩＲＭおよび抗原の組み合わせによる様々な経路を通じた免疫化に応答する、血清ＩｇＧ抗体を示すデータである。
【図５Ａ】抗原単独でのまたは様々なＩＲＭ化合物との鼻腔内投与に対する、肺洗浄ＩｇＡ抗体応答を示すデータである。
【図５Ｂ】抗原単独でのまたは様々なＩＲＭ化合物との鼻腔内投与に対する、血清ＩｇＧ２ｂ抗体応答を示すデータである。
【図６Ａ】抗原および様々なＩＲＭ化合物の１つによる免疫化後のＤＬＮ中の抗原特異的Ｔ細胞を示すデータである。
【図６Ｂ】抗原および様々なＩＲＭ化合物の１つによる免疫化後の脾臓中の抗原特異的Ｔ細胞を示すデータである。
【図７Ａ】抗原およびＩＲＭ化合物により様々な経路を通じて、５ヶ月間隔で２回免疫化されたＤＬＮ中の抗原特異的Ｔ細胞を示すデータである。
【図７Ｂ】抗原およびＩＲＭ化合物により様々な経路を通じて、５ヶ月間隔で２回免疫化されたＮＡＬＴ中の抗原特異的Ｔ細胞を示すデータである。
【背景技術】
【０００１】
例えば皮下、筋肉内、および静脈内などの古典的な注射ワクチン接種経路は、主として全身性免疫（血液血清抗体およびＴ細胞）の誘導に関わる。このアプローチは、刺されたまたは損傷した皮膚を通じて身体への全身的アクセスを得る感染性因子（例えば破傷風）によって引き起こされる疾患に対して適切であるかもしれないが、ほとんどの病原体は、例えば口腔、鼻、または泌尿生殖器粘膜などの粘膜経路を通じて宿主に自然に感染する。
【０００２】
注射可能なワクチンは、概して典型的にＩｇＡと、様々な腺組織の分泌物と共に腸管、気道、および尿道腔内に分泌されることが多い分泌ＩｇＡ（ｓ−ＩｇＡ）との産生および分泌を通じて媒介される免疫を粘膜表面に誘発するのには、無効である。これらの分泌においてｓ−ＩｇＡは病原体と結合でき、それによって病原体が宿主の細胞に感染し始める前に、免疫細胞が病原体を排除するのを可能にする。したがって粘膜ワクチン接種は、病原体が宿主細胞に感染する（すなわち細胞感染）可能性を実質的に低下でき、場合によっては、病原体が宿主細胞に感染するのを防止することさえできる。対照的に注射されたワクチンは、病原体による宿主細胞感染の結果（例えば感染細胞の溶解）として放出された抗原に反応することが多い。したがって粘膜ワクチン接種と注射ワクチン接種との１つの重要な相違は、粘膜ワクチン接種が宿主の防御を刺激して細胞感染を制限または防止すらできるのに対し、注射されたワクチン接種は、願わくは感染症が発生する前に細胞感染の結果に反応する。
【０００３】
粘膜ワクチンは、ｓ−ＩｇＡ応答を誘発するそれらの能力のために、粘膜感染を防止または制限するのにより効果的である可能性が高い。さらに粘膜ワクチンは注射可能なワクチンと比較して、その他のいくつかの利点を提供する。これらの利点としては、より容易な投与、副作用の低下、投与が非侵襲性であること（例えば注射針を要さない）、および訓練された人材を必要としないほとんど無制限の頻度の追加免疫の可能性が挙げられる。これらの利点は経費を低下させ、ワクチン接種の安全性を増大し、発展途上世界において特に重要な課題であるコンプライアンスを改善できる。さらに新しい粘膜ワクチン接種システムのデザインにおける改善は、現在、制御が不十分である疾患に対するワクチンの開発を可能にするかもしれない。
【０００４】
さらに１つの粘膜部位における粘膜免疫応答の誘導は、離れた粘膜部位における免疫応答をもたらすかもしれない。例えば鼻または口腔粘膜ワクチン接種は、膣粘膜からのｓ−ＩｇＡおよびＩｇＧの分泌を発生させることができる。
【０００５】
粘膜経路を通じた免疫化の重要な利点にもかかわらず、粘膜免疫化の成功は、例えば抗原の分解、粘膜部位における限定的吸着および非特異的宿主因子との相互作用、安全かつ効果的なアジュバントの欠如、および不適切な送達システムの使用をはじめとする多くの要因のために限定されている。粘膜ワクチンの有用性および有効性を拡大するかなりの継続的必要性がある。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
粘膜送達に適した組み合わせ医薬品の構成要素として、特定の小型分子免疫応答調節物質（ＩＲＭ）が有用でありえることが分かった。
【０００７】
したがって本発明は、粘膜投与のために製剤されたＩＲＭ化合物と粘膜投与のために製剤された抗原とを含む組み合わせ医薬品を提供する。いくつかの実施形態ではＩＲＭ化合物および抗原が単一製剤中で提供されてもよく、他方、その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物および抗原が別々の製剤中で提供されてもよい。
【０００８】
別の態様では、本発明はまた、対象を免疫化する方法も提供する。概してこの方法は、抗原をＩＲＭ化合物と組み合わせて対象の粘膜表面に有効量で投与して抗原に対する免疫応答を発生させるステップと、ＩＲＭ化合物を抗原と組み合わせて対象の粘膜表面に有効量で投与して抗原に対する免疫応答を発生させるステップを含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、方法は１つ以上の初回抗原刺激用量の抗原、１つ以上の追加免疫用量の抗原またはＩＲＭ化合物、または双方をさらに含んでもよい。
【００１０】
本発明の様々なその他の特徴および利点は、以下の詳細な説明、実施例、特許請求の範囲、および添付の図面を参照すれば容易に明らかになるであろう。本願明細書全体を通じて数カ所で、実施例を通じて指針が与えられる。各例で、列記された一覧は代表的な群としてのみ役立ち、排他的一覧として解釈すべきではないものとする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
免疫応答調節物質（ＩＲＭ）は、強力な免疫調節活性を有することができる化合物である。ＩＲＭはＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）として知られている基礎免疫系機序を通じて作用し、選択的にサイトカイン生合成を調節するようである。例えば特定のＩＲＭ化合物は、例えばタイプＩインターフェロン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、および／またはＭＣＰ−１などの特定のサイトカインの産生および分泌を誘発する。別の例としては、特定のＩＲＭ化合物は、ＩＬ−４およびＩＬ−５などの特定のＴH２サイトカインの産生および分泌を阻害できる。さらにいくつかのＩＲＭ化合物は、ＩＬ−１およびＴＮＦを抑制するとされる（米国特許第６，５１８，２６５号明細書）。特定のＩＲＭは、例えば特定のウィルス性疾患（例えばヒト乳頭腫ウィルス、肝炎、ヘルペス）、特定の新生物形成（例えば基底細胞ガン、扁平細胞ガン、光線性角化症、メラノーマ）、および特定のＴH２−媒介疾患（例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎）などの多種多様な疾患および病状を処置するのに有用かもしれない。
【００１２】
本発明は、粘膜ワクチンとして使用するのに効果的であることができる組み合わせ医薬品、およびこのような組み合わせを粘膜表面に投与するステップを含む方法に関する。概して本発明に従った医薬組成物は、それぞれ粘膜送達に適した様式で製剤されて、それぞれ他方との組み合わせで抗原に対する免疫応答を産生させることができる量でＩＲＭ化合物および抗原を含む。粘膜ワクチン接種の利点は多数ある。本発明の組成物および方法は、以下の１つ以上を提供してもよい。
１）組成物は注射針の必要なしに容易に投与されてもよく、
２）注射されたワクチンが概して全身性応答のみを誘発するのに対し、粘膜ワクチン接種は粘膜および全身性免疫応答の双方を発生できる。ほとんどの病原体は粘膜表面で宿主に感染するので、粘膜ワクチン接種は病原体侵入部位で免疫応答を誘発し、
３）粘膜ワクチン接種は、ワクチン接種部位以外の粘膜部位で免疫応答を誘発できる。
【００１３】
このような組み合わせ医薬品の構成要素は、構成要素が、少なくとも別の構成要素が細胞に接触するまで、１つの構成要素が細胞に接触する生物学的効果を保持するのを可能にするあらゆる様式で提供される場合、互いに「組み合わせて」送達されると言ってもよい。したがって構成要素は、それらが別々の製剤中で提供され、異なる投与経路を通じて送達され、および／または異なる時間に投与されても、互いに組み合わせて送達される。
【００１４】
例えばＩＲＭ化合物および抗原は、構成要素が単一製剤中で提供されるか、または抗原が１つの製剤中で投与されてＩＲＭ化合物が第２の製剤中で投与されるがどうかにかかわらず、組み合わせ医薬品と見なされてもよい。異なる製剤中で投与される場合、構成要素は、所望ならば異なる時間に投与されてもよいが、発生する免疫応答が、抗原またはＩＲＭ化合物のどちらかが単独で投与される場合に発生する免疫応答を超えるように投与される。
【００１５】
いくつかの実施形態では、組み合わせ医薬品は、その中で少なくとも１つのＩＲＭ部分が抗原に共有結合的に付着するＩＲＭ／抗原抱合体を含んでもよい。かかるＩＲＭ／抗原抱合体を調製する方法は、例えば米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号明細書で述べられる。
【００１６】
粘膜ワクチンによって誘発される免疫応答を測定する一方法は、抗原によるチャレンジに答えた抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞の増大を測定することである。これは実施例１に示される。抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞を蛍光標識して、同質遺伝子マウスに養子導入した。マウスをＩＲＭ−抗原抱合体でチャレンジした。４日後、様々な部位（鼻関連リンパ組織（ＮＡＬＴ）、頸部リンパ節（ＣＬ）、および脾臓）からのリンパ様組織を摘出して、抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞の増大を測定した。各部位からの組織において、ＣＤ８+Ｔ細胞の増大は、ＩＲＭ−抗原抱合体での静脈内免疫化、または抗原またはＩＲＭ（図２Ａ−２Ｃ）のいずれかでの鼻腔内免疫化の結果としてよりも、鼻腔内免疫化の結果としての方が大きかった。同様にＩＲＭ−抗原抱合体での鼻腔内免疫化の７日後に、鼻粘膜中に、ＩＲＭ−抗原抱合体での静脈内免疫化、または抗原またはＩＲＭいずれかでの鼻腔内免疫化のいずれかに続いて観察されたのよりも大きな抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞の百分率が観察された（図２Ｄ）。同様の結果が、非抱合体ＩＲＭおよび抗原を使用して見られた（図３Ａ）。
【００１７】
粘膜ワクチン接種によって誘発された免疫応答を測定する別の方法は、例えば鼻関連リンパ様組織などのリンパ様組織中の抗原特異的ＣＤ４+Ｔ細胞の増大を測定することである。活性化された抗原特異的ＣＤ４+Ｔ細胞は、次にＢ細胞を刺激して抗原に対する抗体（例えばｓ−ＩｇＡ）誘導を生じる。実施例２では、抗原特異的Ｔ細胞を宿主マウスに養子導入した。マウスをＩＲＭ化合物および免疫原性抗原ペプチドの組み合わせでチャレンジした。３日後、リンパ様組織をマウスから摘出して、抗原特異的ＣＤ４+Ｔ細胞の増大を分析した。結果を図３Ｂに示す。ＣＤ４+Ｔ細胞の増大は、抗原単独で免疫化されたマウスよりもＩＲＭおよび抗原で免疫化されたマウスでより大きかった。
【００１８】
したがってワクチン接種（例えば鼻腔内）の粘膜経路は、該当組織部位（鼻関連リンパ様組織（ＮＡＬＴ）および鼻粘膜）において、非粘膜経路送達（静脈内）、または抗原単独またはＩＲＭ単独いずれかの粘膜送達のどちらと比較してもより多数の抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞および／またはＣＤ４+Ｔ細胞を提供できる。粘膜部位における抗原特異的Ｔ細胞集団の増大は、これらの位置における免疫細胞の活性化、および感染防止ができる免疫応答の発生を示唆する。抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞および抗原特異的ＣＤ４+Ｔ細胞の双方が活性化される場合、抗原特異的細胞媒介免疫応答および抗原特異的抗体免疫応答の双方が発生してもよい。
【００１９】
抗原は、粘膜免疫応答を生じさせるあらゆる材料を含むことができる。適切な抗原性材料としては、タンパク質と、ペプチドと、ポリペプチドと、脂質と、糖脂質と、多糖類と、炭水化物と、ポリヌクレオチドと、プリオンと、生または不活性化細菌と、ウィルスまたは真菌と、細菌性、ウィルス性、真菌性、原生動物性、腫瘍由来、または生物体由来の免疫原、毒素または類毒素とが挙げられるが、これに限定されるものではない。さらにここでの用法では、抗原はそれ自体が粘膜免疫応答を必ずしも生じないが、宿主細胞中で発現して抗原性タンパク質、ペプチド、またはポリペプチドを産生できるオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。かかるオリゴヌクレオチドは、例えばＤＮＡワクチンで有用である。いくつかの実施形態では、抗原は２つ以上の抗原性材料の組み合わせを含んでもよい。
【００２０】
それぞれ粘膜投与のために製剤されたＩＲＭおよび抗原を含む組成物が有用かもしれない病状としては、以下が挙げられるが、これに限定されるものではない。
（ａ）例えばアデノウィルス、ヘルペスウィルス（例えばＨＳＶ−Ｉ、ＨＳＶ−ＩＩ、ＣＭＶ、またはＶＺＶ）、ポックスウィルス（例えば痘瘡またはワクシニア、または伝染性軟属腫などのオルトポックスウィルス）、ピコルナウィルス（例えばライノウィルスまたはエンテロウィルス）、オルトミクソウィルス（例えばインフルエンザウィルス）、パラミクソウイルス（例えばパラインフルエンザウィルス、おたふく風邪ウィルス、はしかウィルス、および呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ））、コロナウィルス（例えばＳＡＲＳ）、パポバウィルス（例えば生殖器疣、尋常性肬贅、または足底疣贅を引き起こすものなどの乳頭腫ウィルス）、ヘパドナウィルス（例えば肝炎Ｂウィルス）、フラビウイルス（例えば肝炎Ｃウィルスまたはデングウィルス）、またはレトロウィルス（例えばＨＩＶなどのレンチウイルス）の感染によって生ずる疾患などのウィルス性疾患、
（ｂ）例えばエシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、アエロバクター（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、クラミジア（ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）、肺炎球菌（Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ）、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、マイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、プロビデンシア（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ）、クロモバクテリウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、またはボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）属などの細菌の感染によって生ずる疾患などの細菌性疾患、
（ｃ）クラミジア、カンジダ症、アスペルギルス症、ヒストプラスマ症、クリプトコックス髄膜炎を含むが、これらに限定されるものではない真菌疾患、またはマラリア、ニューモシスティスカリニ肺炎、レーシュマニア症、クリプトスポリジウム症、トキソプラズマ症、およびトリパノソーマ感染を含むが、これらに限定されるものではない寄生虫性疾患などのその他の感染症、および
（ｄ）アトピー性皮膚炎または湿疹などのＴH２−媒介アトピー性疾患、好酸球増加症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、およびオーメン症候群。
【００２１】
例えば粘膜性に投与される組成物は、例えばＢＣＧ、コレラ、ペスト、腸チフス、肝炎Ａ、肝炎Ｂ、肝炎Ｃ、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、パラインフルエンザ、ポリオ、狂犬病、はしか、おたふく風邪、風疹、黄熱病、破傷風、ジフテリア、ヘモフィルスインフルエンザｂ、結核、髄膜炎菌性および肺炎球菌ワクチン、アデノウィルス、ＨＩＶ、水痘、サイトメガロウィルス、デング、ネコ白血病、家禽ペスト、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２、豚コレラ、日本脳炎、呼吸器合胞体ウイルス、ロタウイルス、乳頭腫ウィルス、およびアルツハイマー疾患に対する予防的なまたは治療的な保護のために使用してもよい。
【００２２】
場合によっては、粘膜ワクチン接種は、粘膜表面を越える感染の可能性を低下させるのに、またはさらに防止するのに有用かもしれない。その他の場合では、粘膜ワクチンは血清抗体応答を刺激するのに有用かもしれない。場合によっては、粘膜ワクチンは粘膜感染に対する保護と血清抗体応答の双方を提供するかもしれない。したがって粘膜ワクチン接種は、典型的に粘膜表面を越えて感染するのではない病原体に対するワクチン接種のために有用かもしれない。
【００２３】
いくつかの実施形態では、抗原−ＩＲＭ組み合わせの投与に先だって、抗原が１つ以上の別々の「初回抗原刺激」用量で投与されてもよい。このようなやり方での初回抗原刺激は、抗原−ＩＲＭ組み合わせの投与時に増大する免疫応答を提供するかもしれない。
【００２４】
その他の実施形態では、抗原−ＩＲＭ組み合わせの投与後、抗原が１つ以上の別々の「追加免疫」用量で投与されてもよい。このようなやり方での追加免疫は、ＣＤ８+メモリＴ細胞、ＣＤ４+メモリＴ細胞、または双方を活性化することで、少なくとも部分的に消散した免疫応答を再活性化するかもしれない。
【００２５】
さらに別の実施形態では、抗原−ＩＲＭ組み合わせの投与後、ＩＲＭ化合物が１つ以上の別々の追加免疫用量で投与されてもよい。追加免疫用量で提供されるＩＲＭ化合物は、抗原−ＩＲＭ組み合わせ中で提供されるＩＲＭ化合物と同一または異なってもよく、あらゆるその他の追加免疫用量で提供されるＩＲＭ化合物と同一または異なってもよい。さらに抗原−ＩＲＭ組み合わせのＩＲＭ構成要素として、または追加免疫としてであるかに関わらず、ＩＲＭ化合物のあらゆる組み合わせを使用してもよい。
【００２６】
ＩＲＭ化合物の多くは小型の有機分子イミダゾキノリンアミン誘導体（例えば米国特許第４，６８９，３３８号明細書を参照されたい）であるが、いくつかのその他の化合物クラスもまた知られており（例えば米国特許第５，４４６，１５３号明細書、米国特許第６，１９４，４２５号明細書、および米国特許第６，１１０，９２９号明細書を参照されたい）、さらに多くが発見されている。ＣｐＧを含むオリゴヌクレオチドなどのその他のＩＲＭは、より高い分子量を有する（例えば米国特許第６，１９４，３８８号明細書を参照されたい）。
【００２７】
特定のＩＲＭは、例えば以下で開示されるものなどの小型の有機分子（タンパク質、ペプチドなどの大型生体分子とは対照的に、例えば分子量約１０００ダルトン未満、好ましくは約５００ダルトン未満）である。米国特許第４，６８９，３３８号明細書、米国特許第４，９２９，６２４号明細書、米国特許第５，２６６，５７５号明細書、米国特許第５，２６８，３７６号明細書、米国特許第５，３４６，９０５号明細書、米国特許第５，３５２，７８４号明細書、米国特許第５，３８９，６４０号明細書、米国特許第５，４４６，１５３号明細書、米国特許第５，４８２，９３６号明細書、米国特許第５，７５６，７４７号明細書、米国特許第６，１１０，９２９号明細書、米国特許第６，１９４，４２５号明細書、米国特許第６，３３１，５３９号明細書、米国特許第６，３７６，６６９号明細書、米国特許第６，４５１，８１０号明細書、米国特許第６，５２５，０６４号明細書、米国特許第６，５４１，４８５号明細書、米国特許第６，５４５，０１６号明細書、米国特許第６，５４５，０１７号明細書、米国特許第６，５７３，２７３号明細書、米国特許第６，６５６，９３８号明細書、米国特許第６，６６０，７３５号明細書、米国特許第６，６６０，７４７号明細書、米国特許第６，６６４，２６０号明細書、米国特許第６，６６４，２６４号明細書、米国特許第６，６６４，２６５号明細書、米国特許第６，６６７，３１２号明細書、米国特許第６，６７０，３７２号明細書、米国特許第６，６７７，３４７号明細書、米国特許第６，６７７，３４８号明細書、米国特許第６，６７７，３４９号明細書、米国特許第６，６８３，０８８号明細書、米国特許第６，７５６，３８２号明細書、米国特許第６，７９７，７１８号明細書、および米国特許第６，８１８，６５０明細書、米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号明細書、米国特許出願公開第２００４／０１４７５４３号明細書、および米国特許出願公開第２００４／０１７６３６７号明細書、および国際公開第２００５／１８５５１号パンフレット、国際公開第２００５／１８５５６号パンフレット、および国際公開第２００５／２０９９９号パンフレット。
【００２８】
小型分子ＩＲＭの追加的な例としては、特定のプリン誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号明細書、および米国特許第６，０２８，０７６号明細書で述べられるものなど）、特定のイミダゾキノリンアミド誘導体（米国特許第６，０６９，１４９号明細書で述べられるものなど）、特定のイミダゾピリジン誘導体（米国特許第６，５１８，２６５号明細書で述べられるものなど）、特定のベンゾイミダゾール誘導体（米国特許第６，３８７，９３８号明細書で述べられるものなど）、五員環窒素含有複素環に縮合した４−アミノピリミジンの特定の誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号明細書、米国特許第６，０２８，０７６号明細書、および米国特許第６，３２９，３８１号明細書、および国際公開第０２／０８９０５号パンフレットで述べられるアデニン誘導体など）、および特定の３−β−Ｄ−リボフラノシルチアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン誘導体（米国特許出願公開第２００３／０１９９４６１号明細書で述べられるものなど）が挙げられる。
【００２９】
その他のＩＲＭとしては、オリゴヌクレオチド配列などの大型生体分子が挙げられる。いくつかのＩＲＭオリゴヌクレオチド配列はシトシン−グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）を含有し、例えば米国特許第６，１９４，３８８号明細書、米国特許第６，２０７，６４６号明細書、米国特許第６，２３９，１１６号明細書、米国特許第６，３３９，０６８号明細書、および米国特許第６，４０６，７０５号明細書で述べられる。いくつかのＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、例えば米国特許第６，４２６，３３４号明細書および米国特許第６，４７６，０００号明細書で述べられるものなどの合成免疫調節構造モチーフを含むことができる。その他のＩＲＭヌクレオチド配列はＣｐＧ配列を欠いており、例えば国際公開第００／７５３０４号パンフレットで述べられる。
【００３０】
その他のＩＲＭとしては、アミノアルキルグルコサミニドリン酸塩（ＡＧＰ）などの生体分子が挙げられ、例えば米国特許第６，１１３，９１８号明細書、米国特許第６，３０３，３４７号明細書、米国特許第６，５２５，０２８号明細書、および米国特許第６，６４９，１７２号明細書で述べられる。
【００３１】
本発明での使用に適したＩＲＭ化合物としては、五員環窒素含有複素環に縮合した２−アミノピリジンを有する化合物が挙げられる。このような化合物としては、例えば以下が挙げられる。例えばアミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、複素環式エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換イミダゾキノリンアミン、オキシム置換イミダゾキノリンアミン、６−、７−、８−、または９−アリール、ヘテロアリール、アリールオキシまたはアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリンアミン、およびイミダゾキノリンジアミンなどの置換イミダゾキノリンアミンを含むが、これらに限定されるものではないイミダゾキノリンアミンと、アミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、複素環式エーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、オキシム置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、およびテトラヒドロイミダゾキノリンジアミンを含むが、これらに限定されるものではないテトラヒドロイミダゾキノリンアミンと、アミド置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミド置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンアミン、アリールエーテル置換イミダゾピリジンアミン、複素環式エーテル置換イミダゾピリジンアミン、アミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンエーテル、およびチオエーテル置換イミダゾピリジンアミンを含むが、これらに限定されるものではないイミダゾピリジンアミンと、１，２−架橋イミダゾキノリンアミンと、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミンと、イミダゾナフチリジンアミンと、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミンと、オキサゾロキノリンアミンと、チアゾロキノリンアミンと、オキサゾロピリジンアミンと、チアゾロピリジンアミンと、オキサゾロナフチリジンアミンと、チアゾロナフチリジンアミンと、ピラゾロピリジンアミンと、ピラゾロキノリンアミンと、テトラヒドロピラゾロキノリンアミンと、ピラゾロナフチリジンアミンと、テトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンと、ピリジンアミン、キノリンアミン、テトラヒドロキノリンアミン、ナフチリジンアミン、またはテトラヒドロナフチリジンアミンに縮合した１Ｈ−イミダゾ二量体。
【００３２】
特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、チアゾロナフチリジンアミン、ピラゾロピリジンアミン、ピラゾロキノリンアミン、テトラヒドロピラゾロキノリンアミン、ピラゾロナフチリジンアミン、またはテトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンであってもよい。
【００３３】
特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、置換イミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、チアゾロナフチリジンアミン、ピラゾロピリジンアミン、ピラゾロキノリンアミン、テトラヒドロピラゾロキノリンアミン、ピラゾロナフチリジンアミン、またはテトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンであってもよい。
【００３４】
ここでの用法では、置換イミダゾキノリンアミンとは、アミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、複素環式エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換イミダゾキノリンアミン、オキシム置換イミダゾキノリンアミン、６−、７−、８−、または９−アリール、ヘテロアリール、アリールオキシまたはアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリンアミン、またはイミダゾキノリンジアミンを指す。ここでの用法では、置換イミダゾキノリンアミンは、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンおよび４−アミノ−α，α−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノールを具体的かつ明示的に除外する。
【００３５】
適切なＩＲＭ化合物としてはまた、上述のプリン誘導体、イミダゾキノリンアミド誘導体、ベンゾイミダゾール誘導体、アデニン誘導体、アミノアルキルグルコサミニドリン酸塩、およびオリゴヌクレオチド配列も挙げられる。
【００３６】
特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば１−（２−アミノ−２−メチルプロピル）−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンまたはＮ−［６−（｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝アミノ）−６−オキソヘキシル］−４−アジド−２−ヒドロキシベンズアミドなどのアミド置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００３７】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば２−ブチルチアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンなどのチアゾロキノリンアミンであってもよい。
【００３８】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば４−アミノ−α，α−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノールなどのイミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００３９】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えばＮ−｛３−［４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−７−イルオキシ］プロピル｝ニコチンアミドなどのアミド置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００４０】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば３−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−Ｎ，２，２−トリメチルプロパン−１−スルホンアミドなどのスルホンアミド置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００４１】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば２−ブチル−１−｛２−メチル−２−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］プロピル｝−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンなどのチオエーテル置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００４２】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば２−ブチル−１−［２−（プロピルスルホニル）エチル］−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］キノリン−４−アミンなどのピラゾロキノリンアミンであってもよい。
【００４３】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば１−｛４−アミノ−２−エトキシメチル−７−［３−（ピリジン−３−イル）プロポキシ］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル｝−２−メチルプロパン−２−オールなどのアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００４４】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えばＮ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−６，７−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−Ｎ’−シクロヘキシル尿素などの尿素置換イミダゾピリジンアミンであってもよい。
【００４５】
その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えばＮ−［２−（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−１，１−ジメチルエチル］メタンスルホンアミドなどのスルホンアミド置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００４６】
さらに別の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えばＮ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝シクロヘキサンカルボキサミドなどのアミド置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。
【００４７】
特に断りのない限り、化合物への言及は、あらゆる異性体（例えばジアステレオマーまたは鏡像異性体）、塩、溶媒和化合物、多形体などをはじめとするあらゆる薬剤的に許容可能な形態の化合物を含むことができる。特に化合物が光学活性の場合、化合物への言及は、化合物の各鏡像異性体、ならびに鏡像異性体のラセミ混合物を含むことができる。
【００４８】
本発明のいくつかの実施形態では、ＩＲＭ化合物は、少なくとも１つのＴＬＲの作動体、好ましくはＴＬＲ６、ＴＬＲ７、またはＴＬＲ８の作動体であってもよい。特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、ＴＬＲ８−選択的作動体であってもよい。その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物はＴＬＲ７−選択的作動体であってもよい。ここでの用法では、「ＴＬＲ８−選択的作動体」という用語は、ＴＬＲ８の作動体として作用するが、ＴＬＲ７の作動体として作用しないあらゆる化合物を指す。「ＴＬＲ７−選択的作動体」という用語は、ＴＬＲ７の作動体として作用するが、ＴＬＲ８の作動体として作用しない化合物を指す。「ＴＬＲ７／８作動体」とは、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８双方の作動体として作用する化合物を指す。
【００４９】
ＴＬＲ８−選択的作動体またはＴＬＲ７−選択的作動体は、指示されたＴＬＲ、およびＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ９、またはＴＬＲ１０の１つ以上の作動体として作用してもよい。したがって「ＴＬＲ８−選択的作動体」とは、ＴＬＲ８だけで他のＴＬＲの作動体としては作用しない化合物を指してもよい一方で、それは代案としてはＴＬＲ８、および例えばＴＬＲ６の作動体として作用する化合物を指してもよい。同様に「ＴＬＲ７−選択的作動体」とは、ＴＬＲ７だけで他のＴＬＲの作動体としては作用しない化合物を指してもよいが、それは代案としてはＴＬＲ７、および例えばＴＬＲ６の作動体として作用する化合物を指してもよい。
【００５０】
特定の化合物に対するＴＬＲ作動性は、あらゆる適切な様式で評価してもよい。例えば試験化合物のＴＬＲ作動性を検出するためのアッセイについては、例えば米国特許出願公開第２００４／０１３２０７９号明細書で述べられ、そのようなアッセイでの使用に適したリコンビナント細胞系については、例えば国際公開第０４／０５３０５７号パンフレットで述べられる。
【００５１】
用いられる特定のアッセイにかかわらず、化合物でアッセイを実施することが、特定のＴＬＲによって媒介されるいくつかの生物学的活性増大の少なくとも閾値をもたらせば、化合物は特定のＴＬＲの作動体として同定できる。反対に化合物を使用して、生物学的活性を検出するために策定されたアッセイを実施することが、特定のＴＬＲによって媒介される生物学的活性増大の閾値を惹起できなければ、化合物は特定ＴＬＲの作動体として作用しないと同定されてもよい。特に断りのない限り生物学的活性の増大は、適切な対照中で観察されたものと比べた同一生物学的活性の増大を指す。アッセイは、適切な対照との組み合わせで実施されてもされなくてもよい。経験を積むことで当業者は、特定のアッセイ（例えば特定のアッセイ条件下、適切な対照で観察された値の範囲）を十分に熟知するようになるかもしれず、特定のアッセイにおける化合物のＴＬＲ作動性を判定するために対照を実施することは、必ずしも必要でないかもしれない。
【００５２】
特定のアッセイにおいて、特定の化合物が特定のＴＬＲの作動体であるか否かを判定するためのＴＬＲ−媒介生物学的活性増大の閾値は、アッセイ終点として観察される生物学的活性、アッセイ終点を測定または検出するのに使用される方法、アッセイの信号対雑音比、アッセイ精度、および双方のＴＬＲに対する化合物の作動性を判定するのに同一アッセイが使用されるかどうかを含むが、これらに限定されるものではない、技術分野で知られている因子に従って変動する。したがって全ての可能なアッセイについて、化合物が特定のＴＬＲの作動体または非作動体であるかを同定するのに必要なＴＬＲ−媒介生物学的活性増大の閾値を普遍的に記述するのは実用的でない。しかし当業者はこのような因子を正当に考慮の上、適切な閾値を容易に判定できる。
【００５３】
発現性ＴＬＲ構造遺伝子で形質移入されたＨＥＫ２９３細胞を用いるアッセイは、細胞に形質移入されたＴＬＲの作動体として化合物を同定するために、例えば約１μＭ〜約１０μＭの濃度で化合物が提供される場合、例えばＴＬＲ−媒介生物学的活性（例えばＮＦκＢ活性化）における少なくとも３倍の増大の閾値を使用してもよい。しかし特定の状況では、異なる閾値および／または異なる濃度範囲が適切かもしれない。また異なる閾値は、異なるアッセイに適するかもしれない。
【００５４】
抗原−ＩＲＭ組み合わせの構成要素、ならびに初回抗原刺激用量または追加免疫用量で提供される抗原またはＩＲＭは、対象への粘膜投与に適したあらゆる製剤中で提供されてもよい。適切なタイプの製剤については、例えば米国特許第５，９３９，０９０号明細書、米国特許第６，３６５，１６６号明細書、米国特許第６，２４５，７７６号明細書、および米国特許第６，４８６，１６８号明細書で述べられる。化合物は、抗原またはＩＲＭ化合物であるかにかかわらず、溶液、懸濁液、エマルジョンを含むが、これらに限定されるものではないあらゆる適切な形態、またはあらゆる形態の混合物中で提供されてもよい。化合物は、あらゆる薬剤的に許容可能な賦形剤、キャリア、またはビヒクルとの製剤中で送達されてもよい。さらに抗原−ＩＲＭ組み合わせのＩＲＭ構成要素および抗原構成要素は、単一製剤中で共に提供されてもよく、または別々の製剤中で提供されてもよい。製剤は、例えばクリーム、軟膏、煙霧剤調合物、非煙霧剤スプレー、ゲル、ローションなどのあらゆる適切な剤形で送達されてもよい。製剤は、アジュバント、浸透促進剤、着色剤、香料、香味料、保湿剤、増粘剤などを含むが、これらに限定されるものではない、１つ以上の添加剤をさらに含んでもよい。
【００５５】
製剤は、例えば口腔、鼻、または泌尿生殖器粘膜などの対象のあらゆる適切な粘膜表面に投与されてもよい。
【００５６】
粘膜ワクチン接種に適した製剤の組成物は、構成要素（すなわちＩＲＭ化合物および／または抗原）の物理的および化学的性質、キャリアの性質、意図される投与計画、対象の免疫系の状態（例えば抑制された、損なわれた、刺激された）、構成要素を投与する方法、および製剤が投与される生物種を含むが、これらに限定されるものではない技術分野で知られている因子に従って変動する。したがって全ての可能な用途について、粘膜ワクチン接種に効果的な製剤の組成物を普遍的に記述するのは実用的でない。しかし当業者はこのような因子を正当に考慮の上、適切な製剤を容易に判定できる。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、例えば約０．０００１％〜約１０％（特に断りのない限り、本願明細書中で提供される全ての百分率は、全製剤に対する重量／重量である）の製剤中で、ＩＲＭを対象に投与するステップを含むが、いくつかの実施形態ではこの範囲外の濃度でＩＲＭ化合物を提供する製剤を使用して、ＩＲＭ化合物を投与してもよい。特定の実施形態では、本方法は、少なくとも約０．０１％のＩＲＭ化合物、少なくとも約０．０３％のＩＲＭ化合物、または少なくとも約０．１％のＩＲＭ化合物を含む製剤を対象に投与するステップを含む。その他の実施形態では、本方法は、約５％までのＩＲＭ化合物、約１％までのＩＲＭ化合物、または約０．５％までのＩＲＭ化合物を含む製剤を対象に投与するステップを含む。特定の一実施形態では、本方法は、少なくとも約０．１％のＩＲＭ化合物から約５％までのＩＲＭ化合物を含む製剤中でＩＲＭ化合物を投与するステップを含む。
【００５８】
いくつかの実施形態では、特定の病原体による感染の典型的なまたは予期される部位である粘膜表面に、製剤を投与してもよい。例えば呼吸病原体（例えばインフルエンザウィルス）に対して予防接種するために、粘膜ワクチン、または粘膜ワクチン構成要素を鼻粘膜に投与してもよい。代案としては、離れた粘膜部位で免疫応答を誘発するために、製剤を１つの粘膜表面に投与してもよい。例えば膣粘膜（例えばヘルペスウィルス）を通じて感染できる病原体に対して予防接種するために、製剤を鼻粘膜または口腔粘膜に投与してもよい。
【００５９】
粘膜ワクチン接種に有効なＩＲＭ化合物の量は、ＩＲＭ化合物なしで抗原を投与することで生じる免疫応答と比べて、組み合わせ中の抗原に対する免疫応答を増大させるのに十分な量である。粘膜ワクチン中で投与されるＩＲＭ化合物の正確な量は、ＩＲＭ化合物の物理的および化学的性質、キャリアの性質、意図される投与計画、対象の免疫系の状態（例えば抑制された、損なわれた、刺激された）、ＩＲＭ化合物を投与する方法、および粘膜ワクチンが投与される生物種を含むが、これらに限定されるものではない技術分野で知られている因子に従って変動する。したがって全ての可能な用途について、粘膜ワクチン接種に有効なＩＲＭ化合物の量を成す量を普遍的に記述するのは実用的でない。しかし当業者はこのような因子を正当に考慮の上、適切な量を容易に判定できる。
【００６０】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、十分なＩＲＭ化合物を投与して、例えば約１００ｎｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供するステップを含むが、いくつかの実施形態では、本方法は、ＩＲＭ化合物をこの範囲外の用量で投与して実施されてもよい。これらの実施形態のいくつかでは、本方法は十分なＩＲＭ化合物を投与して、例えば約３．７５ｍｇ／ｋｇの用量である、約１０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供するステップを含む。
【００６１】
投与計画は、ＩＲＭ化合物の物理的および化学的性質、キャリアの性質、投与されるＩＲＭの量、意図される投与計画、対象の免疫系の状態（例えば抑制された、損なわれた、刺激された）、ＩＲＭ化合物を投与する方法、および粘膜ワクチンが投与される生物種を含むが、これらに限定されるものではない技術分野で知られている多くの因子に少なくともある程度左右される。したがって全ての可能な用途について、粘膜ワクチン接種に有効な投与計画を普遍的に記述するのは実用的でない。しかし当業者はこのような因子を正当に考慮の上、適切な投与計画を容易に判定できる。
【００６２】
いくつかの実施形態では、ＩＲＭ化合物を例えば一定期間内（例えば毎日、毎週など）で単回から複数回投与で投与してもよい。特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物を単一回投与してもよい。その他の実施形態では、ＩＲＭを１０年毎に約１回から、毎日複数回投与してもよい。例えばＩＲＭ化合物を少なくとも１０年に１回、少なくとも５年に１回、または少なくとも２年に１回投与してもよい。その他の実施形態では、ＩＲＭ化合物を例えば少なくとも毎年１回、少なくとも６ヶ月に１回、少なくとも毎月１回、少なくとも毎週１回、または少なくとも毎日１回投与してもよい。特定の一実施形態では、ＩＲＭ化合物を毎月約１回から毎年約１回投与する。
【００６３】
本発明の方法はあらゆる適切な対象において実施されてもよい。適切な対象としては、これに限定されるものではない、ヒト、非ヒト霊長類、齧歯類、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、またはウシなどの動物が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【実施例】
【００６４】
以下の実施例は、特徴、利点、およびその他の本発明の詳細をさらに詳しく例示するためにのみ選択されている。しかし実施例はこの目的を果たしながら、特定の材料および使用量ならびにその他の条件および詳細は、本発明の範囲を不当に制限しないものと明示的に理解される。
【００６５】
実施例で使用したＩＲＭ化合物を表１に示す。
【００６６】
【表１】
【００６７】
実施例１
卵白アルブミン−ＩＲＭ１抱合体を次のようにして調製した。ＩＲＭ１をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に１０ｍｇ／ｍｌに懸濁した。卵白アルブミンをリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に１０ｍｇ／ｍｌに懸濁して、ＮａＯＨの添加によってｐＨを＞１０．０に調節した。１２−ウェル組織培養プレートの単一ウェル内で、５００μＬの卵白アルブミン溶液（５ｍｇ卵白アルブミン）と１００μＬのＩＲＭ１溶液（１ｍｇ ＩＲＭ１）とを混合した。プレートを氷の上にのせ、ＩＲＭ１／卵白アルブミン混合物を含有するウェルにできるだけ近くなるように、長波長ＵＶ光源をプレートの上に直接にのせた。混合物を１５分間照射した。得られた抱合体をウェルから取り出して、５ｍｇ／ｍＬの卵白アルブミン、０．５ｍｇ／ｍＬのＩＲＭ１の最終濃度でＰＢＳに再懸濁し、ＰＢＳ中で透析してあらゆる非抱合ＩＲＭを除去した。
【００６８】
オレゴン州ユージーンのモレキュラー・プローブズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ））からの細胞を安定様式で染色する蛍光性染料、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で、メイン州バー・ハーバーのジャクソン・ラボラトリーズ（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ））からの鶏卵白アルブミン特異的ＣＤ８+Ｔ細胞（ＯＴ−Ｉ）を標識し、次にマサチューセッツ州ウィルミントンのチャ−ルス・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ））からの同質遺伝子Ｃ５７ＢＬ／６マウス中に養子導入した。次に０日目に、受容体マウスを鼻腔内（ＩＮ）または静脈内（ＩＶ）のいずれかで１００μｇの卵白アルブミン−ＩＲＭ１抱合体で免疫化した。４日目にマウスを屠殺し、鼻関連リンパ様組織（ＮＡＬＴ）、鼠径リンパ節（ＩＬＮ）、頸部リンパ節（ＣＬＮ）、および脾臓（Ｓｐｌ）を摘出した。マウスから採取した各組織をマサチューセッツ州ベッドフォードのＢＤバイオサイエンシズ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ））からの１００μｍナイロンスクリーンに通過させ、遠心分離してメインランド州ロックビルのバイオソース・インターナショナル（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ））からのフローサイトメトリー染色緩衝液に再懸濁した。次に細胞をカリフォルニア州サンディエゴのＢＤファーミンジェン（ＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））からのＣＤ８−サイクロ（登録商標）ーム（ｃｙｃｈｒｏｍｅ）およびカリフォルニア州フラートンのベックマン・コールター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．（Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）からのＳＩＩＮＦＥＫＬ／Ｋb四量体−フィコエリセリン抗体で標識した。次に細胞をカリフォルニア州サンノゼのベクトン・ディッキンソン社（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ａｎｄ Ｃｏ．（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ））からのファックスキャリバー（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ）に通過させ、ＣＤ８+ＳＩＩＮＦＥＫＬ／Ｋb四量体+Ｔ細胞をＣＦＳＥ発現について分析した。
【００６９】
結果を次のように図１に示す。図１ＡにＮＡＬＴ、図１ＢにＩＬＮ、図１ＣにＣＬＮ、および図１Ｄに脾臓。ＩＲＭと一緒の抗原の鼻腔内送達は、ＣＦＳＥの進行性損失によって示されるように、全位置で細胞傷害性Ｔリンパ球の効果的な活性化をもたらす。
【００７０】
７日目に、ＯＴ−Ｉ細胞総数を鼻関連リンパ様組織（ＮＡＬＴ）、頸部リンパ節（ＣＬＮ）、および脾臓（Ｓｐｌ）で別々に計測した。ＯＴ−Ｉ細胞数は、全リンパ球（トリパンブルー排除）を計測し、ＯＴ−Ｉ+ＣＤ８+（フローサイトメトリー分析）の百分率を掛けて求めた。さらに７日目に、鼻粘膜中のＯＴ−Ｉ細胞の百分率を求めた。結果を次のように図２に示す。図２ＡにＮＡＬＴ、図２ＢにＣＬＮ、図２Ｃに脾臓、および図２Ｄに鼻粘膜。
【００７１】
抗原にＩＲＭ１を加えた鼻腔内送達は、調べた全リンパ様組織において７日目に、静脈内送達よりも多くのＯＴ−Ｉ細胞総数を発生させた。ＩＲＭ１に抗原を加えた鼻腔内送達はまた、７日目に抗原単独よりも多くのＯＴ−Ｉ細胞総数も発生させ、この経路を通じた抗原特異的Ｔ細胞活性化増強におけるＩＲＭの劇的効果が示唆された。さらにワクチン接種の鼻腔内経路は、該当組織部位（鼻関連リンパ様組織（ＮＡＬＴ）および鼻粘膜）により多数のＯＴ−Ｉ細胞をもたらす。
【００７２】
実施例２
メイン州バー・ハーバーのジャクソン・ラボラトリーズ（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ））からのＯＴ−ＩマウスからのＣＤ８+Ｔ細胞をマサチューセッツ州ウィルミントンのチャ−ルス・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ））からのＣ５７ＢＬ／６マウスに養子導入した。メイン州バー・ハーバーのジャクソン・ラボラトリーズ（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ））からのＤＯ．１１ＴＣＲマウスからのＣＤ４+Ｔ細胞をマサチューセッツ州ウィルミントンのチャ−ルス・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ））からのＢａｌｂ／ｃマウスに養子導入した。次に０日目にマウスを次のように経鼻腔的に免疫化した。ＩＲＭ２あり（ＩＲＭ２＋Ａｇ、７５μｇのＩＲＭ２／マウス）、またはＩＲＭ２なし（Ａｇ単独）のいずれかで、１匹あたり１００μｇの全鶏卵白アルブミンでＯＴ−Ｉ−導入Ｃ５７ＢＬ／６マウスを免疫化した。ＩＲＭ２あり（ＩＲＭ２＋Ａｇ、７５μｇＩＲＭ２／マウス）またはＩＲＭ２なし（Ａｇ単独）のいずれかで、１匹あたり１００μｇのＯＶＡペプチド（ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ）でＤＯ．１１−導入Ｂａｌｂ／ｃマウスを免疫化した。
【００７３】
３日目に鼻関連リンパ様組織を摘出し、ＰＢＳ単独と比べた各細胞数の増加倍数を判定した。ＳＩＩＮＦＥＫＬ／Ｋb四量体を使用してＣＤ８+ＯＴ−Ｉ細胞を検出し、カリフォルニア州バーリンゲームのカルタグ・ラボラトリーズ（Ｃａｌｔａｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ））からのクロノタイプ抗体を使用してＣＤ４+ＤＯ．１１細胞を検出し、カリフォルニア州サンノゼのベクトン・ディッキンソン社（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ａｎｄ Ｃｏ．（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ））からのファックスキャリバー（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ）を使用して分析した。
【００７４】
結果を次のように図３に示す。図３ＡにＣＤ８+ＯＴ−Ｉ増大、図３ＢにＣＤ４+ＤＯ．１１増大を示す。ＩＲＭ／抗原組み合わせの鼻腔内免疫化は、抗原単独での鼻腔内免疫化よりも大きなＣＤ８+Ｔ細胞およびＣＤ４+Ｔ細胞双方の増大を誘発する。
【００７５】
実施例３
マサチューセッツ州ウィルミントンのチャ−ルス・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ））からのＢａｌｂ／ｃマウスをミズーリ州セントルイスのシグマ・アルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））からの５０μｇの全鶏卵白アルブミン（ＯＶＡ）タンパク質と５０μｇのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のＩＲＭ４によって、様々な経路で処置した。カリフォルニア州ハーキュリーズのバイオラッド・ラボラトリーズ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ））からのバイオ−ビーズ（Ｂｉｏ−Ｂｅａｄｓ）（カタログ番号１５２−３９２０）でＯＶＡを洗浄し、内毒素を除去して、次にリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁し、清浄な卵白アルブミンタンパク質を調製した。皮下（ＳＣ）注射、静脈内（ＩＶ）注射、筋肉内（ＩＭ）注射、皮内（ＩＤ）注射、鼻腔内点滴注入（ＩＮ）、皮内ＯＶＡ注射と、ＯＶＡ注射部位直上の１０μＬのＩＲＭ４クリームの局所的投与（ＩＤ＋Ｔｏｐ．）とによって、マウスをＯＶＡおよびＩＲＭ４で処置し、または未処置のままにした（なし）。
【００７６】
２１日目にマウスを屠殺し、１ｍＬ ＰＢＳの気管投与によって肺および鼻洗浄を実施し、心臓穿刺と細胞を除去する遠心分離によって血清を得た。血清を分析のために採取した。洗浄サンプルをＯＶＡ特異的ＩｇＡについてＥＬＩＳＡで測定した。血清サンプルをＯＶＡ特異的ＩｇＧ２ａについてＥＬＩＳＡで測定した。
【００７７】
ニューヨーク州コーニングのコーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ．（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ））からのコスター（Ｃｏｓｔａｒ）ＥＩＲ／ＲＩＡ９６ウェルプレート（カタログ番号３５９０）をＰＢＳ中２０μｇ／ｍＬの卵白アルブミン溶液によって１００μＬ／ウェルでコーティングし、３７℃で１〜２時間、または４℃で一晩インキュベートして、ＯＶＡ特異的抗体ＥＬＩＳＡを実施した。次にプレートをＰＢＳ溶液（洗浄緩衝液）中０．５％のトウィーン２０で１回洗浄した。ＰＢＳ溶液中１％のＢＳＡを２００μＬ／ウェルでウェルに入れて、３７℃で１〜２時間、または４℃で一晩インキュベートした。次にプレートを洗浄緩衝液で２回洗浄した。ＰＢＳ（希釈緩衝液）中０．２％のＢＳＡ、０．０５％のトウィーン２０中で、プレートを横切って未希釈洗浄サンプルから開始した３倍連続希釈、または１：１０希釈血清サンプルから開始した２０倍連続希釈を作成し、一晩４℃でインキュベートした。次にプレートを洗浄緩衝液で４回洗浄した。希釈緩衝液中１：２０００希釈のアラバマ州バーミングハムのサザン・バイオテクノロジー・アソシエーツ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ））からのヤギ抗−マウスＩｇＧ２ａまたはサザン・バイオテクノロジー・アソシエーツ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．）からのヤギ抗−マウスＩｇＡを１００μＬ／ウェルでウェルに入れ、室温で１時間インキュベートした。次にプレートを洗浄緩衝液で４回洗浄し、カリフォルニア州カマリロのバイオソース・インターナショナル（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ））からの安定化クロマジェン（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）（カタログ番号ＳＢ０２）を１００μＬ／ウェルで充填して５分未満インキュベートし、次にバイオソース・インターナショナル（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）からの停止液（カタログ番号ＳＳ０２）を５０μＬ／ウェルで添加した。プレートをＯＤ４９０で分光光度計によって読み取る。
【００７８】
結果を図４に示す。ＩＲＭ／抗原組み合わせの鼻腔内投与のみが、肺粘膜（図４Ａ）および鼻粘膜（図４Ｂ）において強力なＩｇＡ応答を生じさせた。鼻腔内をはじめとする全ての投与経路は、血液中に強力な強力なＩｇＧ２ａ応答を生じさせた（図４Ｃ）。
【００７９】
実施例４
０日目および７日目に、３５μｇのＯＶＡ単独で、またはＰＢＳ中の１４μｇのＩＲＭ３、ＩＲＭ４、ＩＲＭ５、ＩＲＭ６、ＩＲＭ７、ＩＲＭ８、ＩＲＭ９、ＩＲＭ１０、ＩＲＭ１１、またはＩＲＭ１２との組み合わせで、チャ−ルス・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）からのＢａｌｂ／ｃマウスを鼻腔内免疫化した。１４日目にマウスを屠殺し、実施例３で述べられるようにして肺洗浄および血清採取を実施した。実施例３で述べられるようにして、サザン・バイオテクノロジー・アソシエーツ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．）からのＯＶＡ特異的ＩｇＡおよびＩｇＧ２ｂについて、肺洗浄および血清サンプルをそれぞれ分析した。
【００８０】
結果を図５に示す。試験された全てのＩＲＭ化合物のＩＲＭ／抗原組み合わせは、抗原単独よりも大きなＩｇＡ（図５Ａ）およびＩｇＧ２ｂ（図５Ｂ）応答を提供した。
【００８１】
実施例５
ＧＦＰ＋／ＯＴ−Ｉ＋Ｃ５７ＢＬ６マウスのリンパ節からのリンパ球をＣ５７ＢＬ６マウスに養子導入した。養子導入の１日後、３５μｇの卵白アルブミン単独、またはクエン酸緩衝食塩水（ＣＢＳ）中１４μｇのＩＲＭ３、ＩＲＭ４、ＩＲＭ５、ＩＲＭ６、ＩＲＭ７、ＩＲＭ８、ＩＲＭ９、ＩＲＭ１０、ＩＲＭ１１、またはＩＲＭ１２との組み合わせで、マウスを経鼻的に免疫化した。４日後マウスを屠殺し、流入領域リンパ節（ＤＬＮ）および脾臓を摘出した。カリフォルニア州ヘイワードのグァバ・テクノロジー（Ｇｕａｖａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ））からのグアヴァ（Ｇｕａｖａ）ＰＣＡ９６を使用して、ＤＬＮリンパ球および脾細胞の総数を求めた。ＤＬＮリンパ球および脾細胞をプロピジウムヨウ素（ＰＩ）およびカリフォルニア州サンディエゴのＢＤファーミンジェン（ＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））からのマウス抗−ＣＤ８抗体で染色し、ＯＴ−Ｉ+／ＧＦＰ+リンパ球の百分率をＰＩ-ＣＤ８+／ＧＦＰ+リンパ球でゲーティングしたフローサイトメトリーによって求めた。脾細胞総数をＰＩ-ＯＴ−Ｉ+／ＧＦＰ+リンパ球百分率で乗じて、ＯＴ−Ｉ+／ＧＦＰ+リンパ球総数を求めた。
【００８２】
結果を図６に示す。多くの異なるＩＲＭ化合物を用いるＩＲＭ／抗原組み合わせの鼻腔内投与は、ＤＬＮ（図６Ａ）および脾臓中に、抗原単独投与よりも多数の抗原特異的Ｔ細胞を提供した（図６Ｂ）。
【００８３】
実施例６
メイン州バー・ハーバーのジャクソン・ラボラトリーズ（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ））からのＯＴ−Ｉマウスからのリンパ球をマサチューセッツ州ウィルミントンのチャ−ルス・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ））からのＣ５７ＢＬ／６マウスに養子導入した。実施例３で述べられるようにして、卵白アルブミンを洗浄した。養子導入の１日後、ＰＢＳ単独の鼻腔内、または５０μｇの卵白アルブミンと５０μｇのＰＢＳ中ＩＲＭ４の鼻腔内（ＩＮ）、静脈内（ＩＶ）、または皮下（ＳＣ）で、マウスを免疫化した。５ヶ月後、マウスを以前免疫化したのと同一様式で再度免疫化し、または再度免疫化しなかった。５ヶ月の免疫化の４日後にマウスを屠殺し、流入領域リンパ節（ＤＬＮ）および鼻関連リンパ様組織（ＮＡＬＴ）を採取した。
【００８４】
カリフォルニア州ヘイワードのグァバ・テクノロジー（Ｇｕａｖａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ））からのグアヴァ（Ｇｕａｖａ）ＰＣＡ９６を使用して、ＤＬＮリンパ球およびＮＡＬＴリンパ球の総数を求めた。ＤＬＮリンパ球およびＮＡＬＴリンパ球をプロピジウムヨウ素（ＰＩ）およびカリフォルニア州サンディエゴのＢＤファーミンジェン（ＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））からのマウス抗−ＣＤ８抗体で染色し、ＯＴ−Ｉ+／ＧＦＰ+リンパ球の百分率をＰＩ-ＣＤ８+／ＧＦＰ+リンパ球でゲーティングしたフローサイトメトリーによって求めた。ＤＬＮリンパ球またはＮＡＬＴリンパ球をＤＬＮまたはＮＡＬＴ ＰＩ-ＯＴ−Ｉ+／ＧＦＰ+リンパ球百分率で乗じて、ＯＴ−Ｉ+／ＧＦＰ+リンパ球総数を求めた。
【００８５】
結果を次のように図７に示す。図７ＡにＤＬＮ。図７ＢにＮＡＬＴ。鼻腔内をはじめとする免疫化の全経路は、再免疫化時にＤＬＮ中にＯＴ−Ｉ細胞数増大を引き起こした。さらに鼻腔内免疫化は再免疫化時にＮＡＬＴ中にＯＴ−Ｉ細胞数増大を引き起こした。
【００８６】
特許、その中で引用される特許文献および公報の完全な開示は、参照によってその内容全体を個々に本願明細書に引用したものとする。矛盾がある場合、定義を含めて本願明細書が優先するものとする。
【００８７】
本発明の範囲と精神を逸脱することなく本発明の様々な修正と変更ができることは、当業者には明らかである。例示的な実施形態および実施例は例としてのみ提供され、本発明の範囲を限定することは意図されない。本発明の範囲は、以下に記述される特許請求の範囲によってのみ限定される。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１Ａ】ワクチン接種後のリンパ組織（ＮＡＬＴ）中の抗原特異的Ｔ細胞の増殖を示すフローサイトメトリーデータである。
【図１Ｂ】ワクチン接種後のリンパ組織（ＩＬＮ）中の抗原特異的Ｔ細胞の増殖を示すフローサイトメトリーデータである。
【図１Ｃ】ワクチン接種後のリンパ組織（ＣＬＮ）中の抗原特異的Ｔ細胞の増殖を示すフローサイトメトリーデータである。
【図１Ｄ】ワクチン接種後のリンパ組織（脾臓）中の抗原特異的Ｔ細胞の増殖を示すフローサイトメトリーデータである。
【図２Ａ】ワクチン接種後のリンパ様組織中の抗原特異的Ｔ細胞総数を示すデータである。
【図２Ｂ】ワクチン接種後のリンパ様組織中の抗原特異的Ｔ細胞総数を示すデータである。
【図２Ｃ】ワクチン接種後のリンパ様組織中の抗原特異的Ｔ細胞総数を示すデータである。
【図２Ｄ】ワクチン接種後の鼻粘膜中の抗原特異的Ｔ細胞百分率を示すデータである。
【図３Ａ】ワクチン接種後の抗原特異的ＣＤ８+Ｔ細胞の増大を実証するフローサイトメトリーデータである。
【図３Ｂ】ワクチン接種後の抗原特異的ＣＤ４+Ｔ細胞の増大を実証するフローサイトメトリーデータである。
【図４Ａ】ＩＲＭおよび抗原の組み合わせによる様々な経路を通じた免疫化に応答する、肺洗浄ＩｇＡ抗体を示すデータである。
【図４Ｂ】ＩＲＭおよび抗原の組み合わせによる様々な経路を通じた免疫化に応答する、鼻洗浄ＩｇＡ抗体を示すデータである。
【図４Ｃ】ＩＲＭおよび抗原の組み合わせによる様々な経路を通じた免疫化に応答する、血清ＩｇＧ抗体を示すデータである。
【図５Ａ】抗原単独でのまたは様々なＩＲＭ化合物との鼻腔内投与に対する、肺洗浄ＩｇＡ抗体応答を示すデータである。
【図５Ｂ】抗原単独でのまたは様々なＩＲＭ化合物との鼻腔内投与に対する、血清ＩｇＧ２ｂ抗体応答を示すデータである。
【図６Ａ】抗原および様々なＩＲＭ化合物の１つによる免疫化後のＤＬＮ中の抗原特異的Ｔ細胞を示すデータである。
【図６Ｂ】抗原および様々なＩＲＭ化合物の１つによる免疫化後の脾臓中の抗原特異的Ｔ細胞を示すデータである。
【図７Ａ】抗原およびＩＲＭ化合物により様々な経路を通じて、５ヶ月間隔で２回免疫化されたＤＬＮ中の抗原特異的Ｔ細胞を示すデータである。
【図７Ｂ】抗原およびＩＲＭ化合物により様々な経路を通じて、５ヶ月間隔で２回免疫化されたＮＡＬＴ中の抗原特異的Ｔ細胞を示すデータである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
粘膜投与のために製剤されたＩＲＭ化合物、および
粘膜投与のために製剤された抗原
を含んでなる組み合わせ医薬品。
【請求項２】
前記ＩＲＭ化合物および前記抗原を含んでなる単一製剤を含んでなる、請求項１に記載の組み合わせ医薬品。
【請求項３】
前記ＩＲＭ化合物を含んでなる第１の製剤、および
前記抗原を含んでなる第２の製剤
を含んでなる、請求項１に記載の組み合わせ医薬品。
【請求項４】
抗原をＩＲＭ化合物と組み合わせて対象の粘膜表面に有効量で投与して前記抗原に対する免疫応答を発生させるステップと、
ＩＲＭ化合物を前記抗原と組み合わせて対象の粘膜表面に有効量で投与して抗原に対する免疫応答を発生させるステップと
を含んでなる前記対象を免疫化する方法。
【請求項５】
抗原およびＩＲＭが１つの製剤中で投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗原が第１の製剤中で投与され、前記ＩＲＭ化合物が第２の製剤中で投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記抗原および前記ＩＲＭ化合物が異なる部位に投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１つの部位が鼻粘膜を含んでなる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
少なくとも１つの部位が口腔粘膜を含んでなる、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
少なくとも１つの部位が胃腸粘膜を含んでなる、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも１つの部位が泌尿生殖器粘膜を含んでなる、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記異なる部位が異なる粘膜表面である、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＩＲＭ化合物が、前記抗原が投与される前に投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＩＲＭ化合物が、前記抗原が投与された後に投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗原がタンパク質、ペプチド、生または不活性化細菌、生または不活性化ウィルス、またはそれらのあらゆる組み合わせを含んでなる、請求項４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＩＲＭ化合物が五員環窒素含有複素環に縮合した２−アミノピリジンを含んでなる、請求項４に記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも１回の前記抗原の追加的投与をさらに含んでなる、請求項４に記載の方法。
【請求項１８】
少なくとも１回の前記ＩＲＭ化合物の追加的投与をさらに含んでなる、請求項４に記載の方法。
【請求項１９】
ＩＲＭ化合物の第１回の投与のＩＲＭ化合物が、ＩＲＭ化合物の第２回の投与のＩＲＭ化合物と異なる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗原に対する免疫応答がＩｇＡの分泌を含んでなる、請求項４に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗原に対する免疫応答が、粘膜組織中の抗原特異的Ｔ細胞の数または百分率が増大することを含んでなる、請求項４に記載の方法。
【請求項１】
粘膜投与のために製剤されたＩＲＭ化合物、および
粘膜投与のために製剤された抗原
を含んでなる組み合わせ医薬品。
【請求項２】
前記ＩＲＭ化合物および前記抗原を含んでなる単一製剤を含んでなる、請求項１に記載の組み合わせ医薬品。
【請求項３】
前記ＩＲＭ化合物を含んでなる第１の製剤、および
前記抗原を含んでなる第２の製剤
を含んでなる、請求項１に記載の組み合わせ医薬品。
【請求項４】
抗原をＩＲＭ化合物と組み合わせて対象の粘膜表面に有効量で投与して前記抗原に対する免疫応答を発生させるステップと、
ＩＲＭ化合物を前記抗原と組み合わせて対象の粘膜表面に有効量で投与して抗原に対する免疫応答を発生させるステップと
を含んでなる前記対象を免疫化する方法。
【請求項５】
抗原およびＩＲＭが１つの製剤中で投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗原が第１の製剤中で投与され、前記ＩＲＭ化合物が第２の製剤中で投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記抗原および前記ＩＲＭ化合物が異なる部位に投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１つの部位が鼻粘膜を含んでなる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
少なくとも１つの部位が口腔粘膜を含んでなる、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
少なくとも１つの部位が胃腸粘膜を含んでなる、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも１つの部位が泌尿生殖器粘膜を含んでなる、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記異なる部位が異なる粘膜表面である、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＩＲＭ化合物が、前記抗原が投与される前に投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＩＲＭ化合物が、前記抗原が投与された後に投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗原がタンパク質、ペプチド、生または不活性化細菌、生または不活性化ウィルス、またはそれらのあらゆる組み合わせを含んでなる、請求項４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＩＲＭ化合物が五員環窒素含有複素環に縮合した２−アミノピリジンを含んでなる、請求項４に記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも１回の前記抗原の追加的投与をさらに含んでなる、請求項４に記載の方法。
【請求項１８】
少なくとも１回の前記ＩＲＭ化合物の追加的投与をさらに含んでなる、請求項４に記載の方法。
【請求項１９】
ＩＲＭ化合物の第１回の投与のＩＲＭ化合物が、ＩＲＭ化合物の第２回の投与のＩＲＭ化合物と異なる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗原に対する免疫応答がＩｇＡの分泌を含んでなる、請求項４に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗原に対する免疫応答が、粘膜組織中の抗原特異的Ｔ細胞の数または百分率が増大することを含んでなる、請求項４に記載の方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図２Ｄ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図２Ｄ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【公表番号】特表２００８−５０５８５７（Ｐ２００８−５０５８５７Ａ）
【公表日】平成２０年２月２８日（２００８．２．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５１８０５３（Ｐ２００７−５１８０５３）
【出願日】平成１７年４月２８日（２００５．４．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１４７４６
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１２６９８１
【国際公開日】平成１８年１１月３０日（２００６．１１．３０）
【出願人】（５９９０５６４３７）スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー (1,802)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年２月２８日（２００８．２．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年４月２８日（２００５．４．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１４７４６
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１２６９８１
【国際公開日】平成１８年１１月３０日（２００６．１１．３０）
【出願人】（５９９０５６４３７）スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー (1,802)
【Ｆターム（参考）】
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