精製緑茶抽出物の製造方法
【課題】緑茶風味に優れ飲みやすく継続摂取可能なカテキン類含有飲料の原料として有用な精製緑茶抽出物の製造方法を提供すること。
【解決手段】緑茶抽出物の有機溶媒水溶液を、該緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対して０．１〜１質量倍の活性炭と１２時間〜５日間接触させる、精製緑茶抽出物の製造方法。
【解決手段】緑茶抽出物の有機溶媒水溶液を、該緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対して０．１〜１質量倍の活性炭と１２時間〜５日間接触させる、精製緑茶抽出物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、精製緑茶抽出物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
緑茶抽出物の濃縮物などの茶抽出物を利用して、カテキン類を飲料などの飲食品に添加する方法が知られている。しかしながら、緑茶抽出物の濃縮物を液体に溶かしてカテキン類を高濃度で摂取しようとすると、カテキン類が苦味及び渋味を呈するだけでなく、緑茶抽出物の濃縮物に含まれるカフェイン等の夾雑物により苦味、渋味、収斂味、エグ味、雑味が増強され、緑茶本来の風味が損なわれてしまう。
【０００３】
このような不快な苦渋味や雑味等の低減には、緑茶抽出物からカフェイン等の夾雑物を取り除くことが有効である。その方法として、例えば、カフェインを含む茶類から得た抽出液に、茶類に対して１０〜３０質量％の活性炭を添加し、カフェインを除去する方法（特許文献１）、紅茶葉から得られた紅茶抽出液をｐＨ７〜１０にアルカリ処理し中和した後、活性炭処理を行う方法（特許文献２）、緑茶抽出液に１５℃以下で活性炭を添加し１時間攪拌後、セライト濾過を行う方法（特許文献３）等が提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平８−７０７７２号公報
【特許文献２】特開２００９−１５９８３３号公報
【特許文献３】特開２００７−１６７００４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
近年、消費者の嗜好の多様化や健康志向の高揚により茶飲料の需要が増大し、緑茶風味に優れ、かつ飲みやすいカテキン類含有飲料が求められている。
したがって、本発明の課題は、緑茶風味に優れ、かつ飲みやすいカテキン類含有飲料の原料として有用な精製緑茶抽出物の製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで、本発明者らは、緑茶風味について種々検討したところ、緑茶風味の悪化の要因が緑茶抽出物中に含まれるポリフェノールの１種であるフラボノール類にあるとの知見を得た。本発明者らは、緑茶抽出物中のフラボノール類を除去すべく、緑茶抽出物に対し多量の活性炭を接触させたところ、カテキン類がフラボノール類と近似した化学構造を有することに起因して、フラボノール類だけでなくカテキン類も吸着除去され、カテキン類の回収率が著しく低下するばかりか、緑茶風味が希薄になることを見出した。更に、本発明者らは、詳細に検討を進めたところ、緑茶抽出物を特定量の活性炭と通常行われる処理時間よりも長く接触させることで、カテキン類の回収率を大きく損なうことなくフラボノール類を低減して、緑茶風味に優れ、かつ飲みやすいカテキン類含有飲料の原料として有用な精製緑茶抽出物が得られることを見出した。
【０００７】
すなわち、本発明は、緑茶抽出物の有機溶媒水溶液を、該緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対して０．１〜１質量倍の活性炭と１２時間〜５日間接触させる、精製緑茶抽出物の製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、カテキン類の回収率を大きく損なうことなく、フラボノール類を低減して緑茶風味に優れ、かつ飲みやすいカテキン含有飲料の原料として有用な精製緑茶抽出物を提供することが可能となる。したがって、本発明の精製緑茶抽出物は、飲料として長期に亘って継続摂取することが可能になるから、カテキン類による生理効果を十分に期待することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
先ず、本明細書で使用する用語の定義について説明する。
本明細書において「カテキン類」とは、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート及びガロカテキンガレート等の非エピ体カテキン類と、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート及びエピガロカテキンガレート等のエピ体カテキン類を合わせての総称であり、カテキン類の含有量は、上記８種の合計量に基づいて定義される。
本明細書において「フラボノール類」とは、ルチン、ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールを合わせての総称であり、フラボノール類の含有量は、上記４種の合計量に基づいて定義される。ルチンはケルセチンの３位の酸素原子にβ−ルチノース（６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノシル−Ｄ−β−グルコース）が結合した配糖体である。
本明細書において「固形分」とは、試料を１０５℃の電気恒温乾燥機で３時間乾燥して揮発物質を除いた残分の質量をいう。
【００１０】
次に、本発明の精製緑茶抽出物の製造方法について説明する。
本発明の精製緑茶抽出物の製造方法は、緑茶抽出物の有機溶媒水溶液を、該緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対して０．１〜１質量倍の活性炭と１２時間〜５日間接触させることを特徴とするものである。
【００１１】
本発明で使用する緑茶抽出物としては、例えば、緑茶葉から得られた緑茶抽出物が例示される。使用する緑茶葉としては、Camellia属、例えばC.sinensis、C.assamica、やぶきた種又はそれらの雑種等から得られる茶葉から製茶されたものが挙げられ、具体的には、煎茶、番茶、玉露、てん茶、釜炒り茶等が例示される。
抽出方法としては、攪拌抽出、ドリップ抽出等の従来の方法を採用することができる。また、抽出時の水にあらかじめアスコルビン酸又はそのナトリウム塩等の有機酸又はその塩を添加してもよい。更に、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法を併用してもよい。
このようにして得られた緑茶抽出物は、そのまま本発明に使用することができる。緑茶抽出物の形態としては、例えば、液体、スラリー、半固体、固体が例示される。
【００１２】
また、緑茶抽出物として、緑茶葉から得た緑茶抽出物を使用する代わりに、緑茶抽出物の濃縮物を用いても、緑茶抽出物と緑茶抽出物の濃縮物とを併用してもよい。ここで、緑茶抽出物の濃縮物とは、緑茶葉から熱水又は有機溶媒水溶液により抽出された抽出物を濃縮したものをいい、例えば、特開昭５９−２１９３８４号公報、特開平４−２０５８９号公報、特開平５−２６０９０７号公報、特開平５−３０６２７９号公報等に記載の方法により調製することができる。また、緑茶抽出物の濃縮物として市販品を使用してもよく、例えば、三井農林（株）「ポリフェノン」、伊藤園（株）「テアフラン」、太陽化学（株）「サンフェノン」等が例示される。
【００１３】
本発明においては、緑茶抽出物を有機溶媒水溶液に溶解又は分散して使用するが、有機溶媒水溶液中の有機溶媒としては、例えば、エタノール、メタノール等のアルコール、アセトン等のケトン、酢酸エチル等のエステルが例示される。中でも、アルコール、ケトン等の親水性有機溶媒が好ましく、食品への使用を考慮すると、アルコール、とりわけエタノールが好ましい。水としては、イオン交換水、水道水、天然水等が例示される。
【００１４】
有機溶媒と水の質量比（有機溶媒／水）は、カテキン類の回収及びフラボノール類の除去の観点から、２０／８０〜７０／３０、更に４０／６０〜７０／３０、更に４５／５５〜６５／３５、特に５０／５０〜６０／４０であることが好ましい。
【００１５】
緑茶抽出物の使用量は、精製効率の観点から、有機溶媒水溶液１００質量部に対して、固形分換算で５〜２５質量部、更に８〜２０質量部、特に１０〜２０質量部であることが好ましい。
【００１６】
本発明においては、緑茶抽出物の有機溶媒水溶液を、該緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対して０．１〜１質量倍の活性炭と接触させる。カテキン類の回収及びフラボノール類の除去の観点から、活性炭の使用量は緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対して０．２〜０．９質量倍、特に０．３〜０．８質量倍であることが好ましい。
【００１７】
本発明で使用する活性炭としては、一般に工業レベルで使用されているものであれば特に制限されず、例えば、ＺＮ−５０（北越炭素社製）、クラレコールＧＬＣ、クラレコールＰＫ−Ｄ、クラレコールＰＷ−Ｄ（クラレケミカル社製）、白鷲ＡＷ５０、白鷲Ａ、白鷲Ｍ、白鷲Ｃ（武田薬品工業社製）等の市販品を用いることができる。
活性炭の平均細孔径は、０．５〜１０ｎｍ、更に０．７〜９ｎｍ、特に１〜８ｎｍが好ましい。また、細孔容積は、０．０１〜３．０ｍＬ／ｇ、更に０．１〜２．５ｍＬ／ｇ、特に０．８〜２．０ｍＬ／ｇが好ましい。更に、比表面積は、８００〜３０００ｍ2／ｇ、更に９００〜２８００ｍ2／ｇ、特に１０００〜２６００ｍ2／ｇが好ましい。なお、これらの物性値は窒素吸着法に基づく値である。
【００１８】
活性炭との接触時間は１２時間〜５日間であるが、カテキン類の回収率及びフラボノール類の除去効率の観点から、１２〜８０時間、更に１５〜７０時間、特に１８〜５０時間であることが好ましい。
【００１９】
活性炭と接触させるときの温度は、１０〜４０℃、特に１５〜３０℃であることが好ましい。
【００２０】
活性炭と接触させるときのｐＨは、３〜６．５が好ましく、３．５〜６がより好ましく、４〜５．８が更に好ましい。
【００２１】
活性炭と接触させる手段としては、例えば、緑茶抽出物の有機溶媒水溶液に活性炭を添加、撹拌し吸着後、ろ過操作により活性炭を回収するバッチ方法、又は活性炭を充填したカラムを用いて連続処理により接触させるカラム方法を採用することができる。
【００２２】
バッチ方式は、長時間の接触を容易に実現できるという点において有利であり、さらに、カテキン類とフラボノール類の吸着選択性が高いという利点がある。これは、長時間の接触において、各成分の細孔内における拡散速度の差により更なる除去選択性が発現するものと推測される。
バッチ方式におけるろ過操作にはメンブランフィルターを使用することが可能であり、例えば、孔径が０．０１〜１０μｍ、更に０．１〜０．５μｍであるものが好ましく、またその材質はニトロセルロース、ポリ塩化ビニル、ポリテトラフルオロエチレン等であることが好ましい。
【００２３】
得られた精製緑茶抽出物は、そのまま使用しても、濃縮又は乾燥により高濃度化してもよい。高濃度化方法としては、例えば、減圧濃縮、逆浸透膜濃縮、噴霧乾燥、凍結乾燥が例示される。これにより、精製緑茶抽出物を粉末、造粒物等の形態とすることができる。
【００２４】
また、本発明においては、活性炭との接触前に、夾雑物の除去及び風味の観点から、緑茶抽出物を、有機溶媒と水の質量比（有機溶媒／水）が９０／１０〜９７／３、更に９１／９〜９７／３、特に９１／９〜９５／５、殊更に９２／８〜９５／５である有機溶媒水溶液と混合し、生成した沈殿を除去してもよい。
緑茶抽出物の有機溶媒水溶液の調製方法は特に限定されず、沈殿を除去する際の上記有機溶媒水溶液中の有機溶媒と水の質量比が上記範囲内となっていればよい。例えば、緑茶抽出物を水に溶解した後に有機溶媒を添加して有機溶媒と水の質量比を上記範囲内としてもよく、また緑茶抽出物を有機溶媒に懸濁させた後、徐々に水を添加して上記範囲内としてもよい。
【００２５】
更に、本発明においては、風味の観点から、緑茶抽出物を有機溶媒水溶液と混合する際に、酸性白土又は活性白土と接触させることが好ましい。
酸性白土又は活性白土は、ともに一般的な化学成分として、ＳｉＯ2、Ａｌ2Ｏ3、Ｆｅ2Ｏ3、ＣａＯ、ＭｇＯ等を含有するものであるが、ＳｉＯ2／Ａｌ2Ｏ3比が３〜１２、特に４〜９であるものが好ましい。また、Ｆｅ2Ｏ3を２〜５質量％、ＣａＯを０〜１．５質量％、ＭｇＯを１〜７質量％含有する組成のものが好ましい。活性白土は天然に産出する酸性白土（モンモリロナイト系粘土）を硫酸等の鉱酸で処理したものであり、大きい比表面積と吸着能を有する多孔質構造をもった化合物である。
【００２６】
酸性白土又は活性白土の比表面積は、酸処理の程度等により異なるが、５０〜３５０ｍ2／ｇが好ましく、ｐＨ（５質量％サスペンジョン）は２．５〜８、特に３．６〜７が好ましい。酸性白土としては、例えば、ミズカエース＃６００（水澤化学社製）等の市販品を用いることができる。
【００２７】
酸性白土又は活性白土は、有機溶媒水溶液１００質量部に対して０．５〜２０質量部、更に１．５〜１８質量部、特に３〜１５質量部添加することが好ましい。
【００２８】
緑茶抽出物を、有機溶媒水溶液と、酸性白土又は活性白土とに接触させる順序は特に限定されず、例えば、各成分を任意の順序で投入するか、あるいは全てを同時に投入して接触させることができるが、有機溶媒水溶液に酸性白土又は活性白土を添加し、これに緑茶抽出物を添加する方法が好ましい。
【００２９】
また、緑茶抽出物の有機溶媒水溶液を、酸性白土又は活性白土と接触させる場合、溶液の温度は１０〜４０℃、更に２０〜３０℃であることが好ましい。また、接触時間は、０．５〜５時間、更に１〜４時間であることが好ましい。
【００３０】
酸性白土又は活性白土と接触させる手段としては、活性炭処理と同様に、バッチ方法、カラム方法を採用することができる。
【００３１】
酸性白土又は活性白土との接触処理後においては、生成している沈殿とともに酸性白土又は活性白土を除去し、清澄液を得ることが好ましい。除去方法は特に制限されず、例えば、遠心分離、膜ろ過等の公知の固液分離手段を採用することができる。
更に、本発明においては、得られた清澄液に加水して、濁り成分を更に析出させてもよい。濁り成分を析出させる際には、熟成時間を設けることが好ましく、例えば、好ましくは２分〜３０時間、更に好ましくは２分〜２４時間、特に好ましくは５分〜６時間である。また、濁り成分の析出温度は、０〜３０℃、特に５〜２０℃であることが好ましい。
濁り成分を析出させた後、溶液から濁り成分を分離するときの温度は、０〜３０℃、特に５〜２０℃であることが好ましい。濁り成分を分離する方法は、上記と同様に、遠心分離、膜ろ過等が挙げられる。
【００３２】
有機溶媒水溶液等と酸性白土又は活性白土とを接触した後の緑茶抽出物の水溶液は、活性炭処理に先立ち、濃縮により有機溶媒を除去するか、又は加水して有機溶媒水溶液中の有機溶媒と水との質量比が２０／８０〜７０／３０となるように調整される。なお、濃縮する場合には、例えば、減圧蒸留等の方法で有機溶媒を留去する方法を採用することができる。また、加水する場合は、例えば、イオン交換水、水道水、天然水等の水を加えることにより行われる。
【００３３】
このようにして、緑茶風味に優れ、飲みやすいカテキン類含有飲料の原料として有用な精製緑茶抽出物を製造することができる。
【００３４】
得られた精製緑茶抽出物は、下記の特性（１）〜（３）を具備することができる。
（１）精製緑茶抽出物のカテキン類の回収率は、生理効果及び緑茶風味の観点から、好ましくは８０％以上、より好ましくは８２％以上、更に好ましくは８３％以上、特に好ましくは８５％以上である。ここで、本明細書において「カテキン類の回収率」とは、原料として使用した緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対する、精製緑茶抽出物の固形分中のカテキン類量を百分率で示したものをいう。なお、カテキン類の回収率の上限は、特に限定されるものではなく、１００質量％であってもよい。
（２）精製緑茶抽出物のフラボノール類の除去率は、緑茶風味の観点から、好ましくは７１．５以上、より好ましくは７２％以上、更に好ましくは７５％以上、殊更好ましくは８０％以上であり、特に好ましくは８３％以上である。ここで、本明細書において「フラボノール類の除去率」とは、原料として使用した緑茶抽出物の固形分中のフラボノール類の含有量Ｗ0、精製緑茶抽出物の固形分中のフラボノール類の含有量Ｗ1としたときに、下記式（ｉ）で表されるものである。
【００３５】
フラボノール類の除去率（％）＝［（Ｗ0−Ｗ1）／Ｗ0］×１００ ・・・（ｉ）
【００３６】
なお、フラボノール類の除去率の上限は特に限定されず、１００質量％であってもよい。
【００３７】
（３）精製緑茶抽出物中のフラボノール類とカテキン類との質量比（フラボノール類／カテキン類）は、緑茶風味のバランスの観点から、０．００２〜０．０２が好ましく、０．００３〜０．０１がより好ましく、０．００４〜０．００８が更に好ましく、０．００５〜０．００８が特に好ましい。
【００３８】
本発明の精製緑茶抽出物は、緑茶風味に優れ、かつ飲みやすいため幅広い用途展開が可能であるが、例えば、飲食品、とりわけ飲料の原料として使用することが好ましい。
【００３９】
飲食品中の精製緑茶抽出物の含有量は、その種類により適宜選択することが可能であるが、例えば、カテキン類として０．１〜２０質量％、特に０．１〜１０質量％含有することが好ましい。
【００４０】
本発明のカテキン類含有飲料は、茶飲料でも、非茶系飲料であってもよい。茶飲料としては、例えば、緑茶飲料、烏龍茶飲料、紅茶飲料が例示される。また、非茶系飲料としては、例えば、果汁ジュース、野菜ジュース、スポーツ飲料、アイソトニック飲料、エンハンスドウォーター、ボトルドウォーター、ニアウォーター、コーヒー飲料、栄養ドリンク剤、美容ドリンク剤等の非アルコール飲料、ビール、ワイン、清酒、梅酒、発泡酒、ウィスキー、ブランデー、焼酎、ラム、ジン、リキュール類等のアルコール飲料が例示される。
【００４１】
また、本発明のカテキン類含有飲料には、酸化防止剤、香料、有機酸類、有機酸塩類、無機酸類、無機酸塩類、無機塩類、色素類、乳化剤、保存料、調味料、甘味料、酸味料、ガム、油、ビタミン、アミノ酸、果汁エキス類、野菜エキス類、花蜜エキス類、ｐＨ調整剤、品質安定剤等の添加剤を単独で又は併用して配合してもよい。
【００４２】
本発明のカテキン類含有飲料のｐＨ（２５℃）は、２〜７、好ましくは２〜６．５とすることが、呈味及び非重合体カテキン類の安定性の点で好ましい。
【００４３】
また、本発明のカテキン類含有飲料は、ポリエチレンテレフタレートを主成分とする成形容器（いわゆるＰＥＴボトル）、金属缶、金属箔やプラスチックフィルムと複合された紙容器、瓶等の通常の包装容器に充填した容器詰飲料として提供することができる。
また、容器詰飲料は、例えば、金属缶のような容器に充填後、加熱殺菌できる場合にあっては適用されるべき法規（日本にあっては食品衛生法）に定められた殺菌条件で製造できる。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ上記と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器等で高温短時間殺菌後、一定の温度迄冷却して容器に充填する等の方法が採用できる。また無菌下で、充填された容器に別の成分を配合して充填してもよい。
【実施例】
【００４４】
１．非重合体カテキン類の測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式ＳＣＬ−１０ＡＶＰ、島津製作所製）を用い、オクタデシル基導入液体クロマトグラフ用パックドカラム（Ｌ−カラムＴＭ ＯＤＳ、４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ：財団法人 化学物質評価研究機構製）を装着し、カラム温度３５℃でグラディエント法により分析した。移動相Ａ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有する蒸留水溶液、Ｂ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有するアセトニトリル溶液とし、試料注入量は２０μＬ、ＵＶ検出器波長は２８０ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００４５】
時間（分） Ａ液濃度（体積％） Ｂ液濃度（体積％）
０．０ ９７ ３
５．０ ９７ ３
３７．０ ８０ ２０
４３．０ ８０ ２０
４３．５ ０ １００
４８．５ ０ １００
４９．０ ９７ ３
６０．０ ９７ ３
【００４６】
２．フラボノールの測定
下記の分析により定量された、ルチン量、ミリセチン量、ケルセチン量及びケンフェロール量の総和として求めた。
【００４７】
２−１）ルチンの測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式Ｗａｔｅｒｓ２６９５、ＷＡＴＥＲＳ製）を用い、カラム（Ｓｈｉｍｐａｃｈ ＶＰ ＯＤＳ、１５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．）を装着し、カラム温度４０℃でグラディエント法により分析した。移動相Ｃ液はリン酸を０．０５質量％含有する蒸留水溶液、Ｄ液はメタノール溶液とし、流速は１ｍＬ／分、試料注入量は１０μＬ、ＵＶ検出器波長は３６８ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００４８】
時間（分） Ｃ液濃度（体積％） Ｄ液濃度（体積％）
０．０ ９５ ５
２０．０ ８０ ２０
４０．０ ３０ ７０
４１．０ ０ １００
４６．０ ０ １００
４７．０ ９５ ５
６０．０ ９５ ５
【００４９】
２−２）ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールの測定
（１）試料の加水分解
固形分濃度０．２質量％に調整した試料溶液５ｍＬにメルカプトエタノール２００μＬ、２Ｎ塩酸５００μＬを添加した。その後、ドライブロックバス（アズワン株式会社製）にて設定温度１２０℃で４０分間加熱し試料中のフラボノール配糖体を加水分解してフラボノールアグリコン（ミリセチン、ケルセチン、ケンフェロール）を生成させた後に、冷却した。
【００５０】
（２）分析
加水分解後の試料溶液中に存在しているミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールを、高速液体クロマトグラフィーにより定量した。なお、定量はグラディエント法により行ったが、その分析方法は上記「ルチンの測定」と同じである。
【００５１】
３．官能評価
各実施例で得られた精製緑茶抽出物を、非重合体カテキン類濃度０．２質量％となるようにイオン交換水で希釈した後、評価パネラー４名による官能試験を行った。官能試験は、下記の基準で飲用後の風味について評価し、その後協議により最終スコアを決定した。
【００５２】
［緑茶の風味］
Ａ：緑茶風味が十分感じられる。
Ｂ：緑茶風味が感じられる。
Ｃ：緑茶風味が弱い。
Ｄ：緑茶風味よりも、苦渋味及び雑味が強く感じられる。
［エグ味］
Ａ：エグ味を感じない
Ｂ：エグ味は若干あるが気にならない
Ｃ：エグ味が感じられる
Ｄ：エグ味が強く感じられる
【００５３】
実施例１〜５及び比較例１〜３
酸性白土（ミズカエース＃６００、水澤化学工業（株）製）１００ｇを２５℃、２５０ｒｐｍ攪拌条件下の９２質量％エタノール水溶液８００ｇ中に分散させ、約１０分間攪拌を行った。次いで、緑茶抽出物（固形分量１００質量％、固形分中のカテキン類の含有量３３質量％、ポリフェノンＨＧ、三井農林社製）２００ｇを投入し、２５℃のまま約３時間攪拌を続けた（ｐＨ４．０）。その後、生成している沈殿及び酸性白土を２号ろ紙でろ過した。得られたろ液にイオン交換水４１７ｇを添加し、１５℃、１００ｒｐｍの攪拌条件下で約５分間攪拌を行った。その混合溶液を、小型冷却遠心分離機（高速冷却遠心機ＣＲ２２Ｇ、日立工機社製）を用いて、操作温度１５℃、６０００ｒｐｍにて５分間遠心分離し、析出した濁り成分を除去した。
次いで、遠心分離後の溶液に加水し、溶液中のエタノール濃度が６０質量％になるように調整した緑茶抽出物のエタノール水溶液８９４ｇ（カテキン類濃度４．５質量％、カテキン類４０．２ｇを含む、フラボノール類／カテキン類＝０．０２６、ｐＨ４．０）と、活性炭（クラレコールＧＬＣ、クラレケミカル社製、平均細孔径２．７ｎｍ、細孔容積１．３２ｍＬ／ｇ、比表面積１９０３ｍ2／ｇ，よう素吸着量１４００ｍｇ／ｇ、メチレンブルー吸着量２４０ｍｇ／ｇ）２０ｇ（活性炭／カテキン類の質量比０．５）とを用意し、これらをガラス製４つ口フラスコ内で均一接触できるように密閉系で攪拌した。２５℃で接触を続け、表１に示す一定時間経過毎に一部を抜液してサンプリングを行い、濾過上清液をカテキン類、フラボノール類の分析に供した。その後、０．２μｍメンブランフィルターでろ過しイオン交換水２００gを添加した後、４０℃、２．７ｋｐａでエタノールを留去した。その後、水分量を調整して精製緑茶抽出物を得た。各精製緑茶抽出物の分析結果を表１に示す。
【００５４】
【表１】
【００５５】
表１から、緑茶抽出物を活性炭と１〜５０時間程度接触させてもカテキン類量に大きな変動は見られないが、フラボノール類は１２〜５０時間接触させたときに活性炭への吸着が高まることが分かった。この結果から、活性炭との接触時間を１２〜５日間とすることの意義が確認された。
【００５６】
実施例６〜７及び比較例４〜５
緑茶抽出物のエタノール水溶液と活性炭との接触時間を２４時間と固定し、活性炭／カテキンの質量比を表２に示す割合に変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。各精製緑茶抽出物の分析結果を、実施例５の分析結果とともに表２に示す。
【００５７】
【表２】
【００５８】
表２から、活性炭／カテキン類の質量比が０．２以上であると、フラボノール類が十分に低減し、他方４倍を超えるとカテキン類の吸着も促進されることが分かった。この結果から、活性炭／カテキン類の質量比を０．１〜４にとする意義が確認された。
【００５９】
実施例８〜１２及び比較例６〜８
６０質量％エタノール水溶液１０００ｇに緑茶抽出物（固形分量１００質量％、固形分中のカテキン類の含有量３３質量％、ポリフェノンＨＧ、三井農林社製）１４５ｇを投入し、２５℃のまま約６時間攪拌を続けた（ｐＨ４．０）。その後、生成している沈殿を２号ろ紙でろ過した。得られた液９１０ｇ（カテキン類濃度４．２５質量％、カテキン類４０．７ｇを含む、フラボノール類／カテキン類＝０．０４８８）に活性炭（クラレコールＧＬＣ、クラレケミカル社製、平均細孔径２．７ｎｍ、細孔容積１．３２ｍＬ／ｇ、比表面積１９０３ｍ2／ｇ，よう素吸着量１４００ｍｇ／ｇ、メチレンブルー吸着量２４０ｍｇ／ｇ）２０ｇ（活性炭／カテキン類の質量比０．５）を用意し、これらをガラス製４つ口フラスコ内で均一接触できるように密閉系で攪拌した。２５℃で接触を続け、表３に示す一定時間経過毎に一部を抜液してサンプリングを行い、濾過上清液をカテキン類、フラボノール類の分析に供した。その後、０．２μｍメンブランフィルターでろ過しイオン交換水２００gを添加した後、４０℃、２．７ｋｐａでエタノールを留去した。その後、水分量を調整して精製緑茶抽出物を得た。各精製緑茶抽出物の分析結果を表３に示す。
【００６０】
【表３】
【００６１】
比較例９〜１０
緑茶抽出物のエタノール水溶液と活性炭との接触時間を２４時間と固定し、活性炭／カテキンの質量比を表４に示す割合に変更したこと以外は、実施例８と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。各精製緑茶抽出物の分析結果を表４に示す。
【００６２】
【表４】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、精製緑茶抽出物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
緑茶抽出物の濃縮物などの茶抽出物を利用して、カテキン類を飲料などの飲食品に添加する方法が知られている。しかしながら、緑茶抽出物の濃縮物を液体に溶かしてカテキン類を高濃度で摂取しようとすると、カテキン類が苦味及び渋味を呈するだけでなく、緑茶抽出物の濃縮物に含まれるカフェイン等の夾雑物により苦味、渋味、収斂味、エグ味、雑味が増強され、緑茶本来の風味が損なわれてしまう。
【０００３】
このような不快な苦渋味や雑味等の低減には、緑茶抽出物からカフェイン等の夾雑物を取り除くことが有効である。その方法として、例えば、カフェインを含む茶類から得た抽出液に、茶類に対して１０〜３０質量％の活性炭を添加し、カフェインを除去する方法（特許文献１）、紅茶葉から得られた紅茶抽出液をｐＨ７〜１０にアルカリ処理し中和した後、活性炭処理を行う方法（特許文献２）、緑茶抽出液に１５℃以下で活性炭を添加し１時間攪拌後、セライト濾過を行う方法（特許文献３）等が提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平８−７０７７２号公報
【特許文献２】特開２００９−１５９８３３号公報
【特許文献３】特開２００７−１６７００４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
近年、消費者の嗜好の多様化や健康志向の高揚により茶飲料の需要が増大し、緑茶風味に優れ、かつ飲みやすいカテキン類含有飲料が求められている。
したがって、本発明の課題は、緑茶風味に優れ、かつ飲みやすいカテキン類含有飲料の原料として有用な精製緑茶抽出物の製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで、本発明者らは、緑茶風味について種々検討したところ、緑茶風味の悪化の要因が緑茶抽出物中に含まれるポリフェノールの１種であるフラボノール類にあるとの知見を得た。本発明者らは、緑茶抽出物中のフラボノール類を除去すべく、緑茶抽出物に対し多量の活性炭を接触させたところ、カテキン類がフラボノール類と近似した化学構造を有することに起因して、フラボノール類だけでなくカテキン類も吸着除去され、カテキン類の回収率が著しく低下するばかりか、緑茶風味が希薄になることを見出した。更に、本発明者らは、詳細に検討を進めたところ、緑茶抽出物を特定量の活性炭と通常行われる処理時間よりも長く接触させることで、カテキン類の回収率を大きく損なうことなくフラボノール類を低減して、緑茶風味に優れ、かつ飲みやすいカテキン類含有飲料の原料として有用な精製緑茶抽出物が得られることを見出した。
【０００７】
すなわち、本発明は、緑茶抽出物の有機溶媒水溶液を、該緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対して０．１〜１質量倍の活性炭と１２時間〜５日間接触させる、精製緑茶抽出物の製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、カテキン類の回収率を大きく損なうことなく、フラボノール類を低減して緑茶風味に優れ、かつ飲みやすいカテキン含有飲料の原料として有用な精製緑茶抽出物を提供することが可能となる。したがって、本発明の精製緑茶抽出物は、飲料として長期に亘って継続摂取することが可能になるから、カテキン類による生理効果を十分に期待することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
先ず、本明細書で使用する用語の定義について説明する。
本明細書において「カテキン類」とは、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート及びガロカテキンガレート等の非エピ体カテキン類と、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート及びエピガロカテキンガレート等のエピ体カテキン類を合わせての総称であり、カテキン類の含有量は、上記８種の合計量に基づいて定義される。
本明細書において「フラボノール類」とは、ルチン、ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールを合わせての総称であり、フラボノール類の含有量は、上記４種の合計量に基づいて定義される。ルチンはケルセチンの３位の酸素原子にβ−ルチノース（６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノシル−Ｄ−β−グルコース）が結合した配糖体である。
本明細書において「固形分」とは、試料を１０５℃の電気恒温乾燥機で３時間乾燥して揮発物質を除いた残分の質量をいう。
【００１０】
次に、本発明の精製緑茶抽出物の製造方法について説明する。
本発明の精製緑茶抽出物の製造方法は、緑茶抽出物の有機溶媒水溶液を、該緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対して０．１〜１質量倍の活性炭と１２時間〜５日間接触させることを特徴とするものである。
【００１１】
本発明で使用する緑茶抽出物としては、例えば、緑茶葉から得られた緑茶抽出物が例示される。使用する緑茶葉としては、Camellia属、例えばC.sinensis、C.assamica、やぶきた種又はそれらの雑種等から得られる茶葉から製茶されたものが挙げられ、具体的には、煎茶、番茶、玉露、てん茶、釜炒り茶等が例示される。
抽出方法としては、攪拌抽出、ドリップ抽出等の従来の方法を採用することができる。また、抽出時の水にあらかじめアスコルビン酸又はそのナトリウム塩等の有機酸又はその塩を添加してもよい。更に、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法を併用してもよい。
このようにして得られた緑茶抽出物は、そのまま本発明に使用することができる。緑茶抽出物の形態としては、例えば、液体、スラリー、半固体、固体が例示される。
【００１２】
また、緑茶抽出物として、緑茶葉から得た緑茶抽出物を使用する代わりに、緑茶抽出物の濃縮物を用いても、緑茶抽出物と緑茶抽出物の濃縮物とを併用してもよい。ここで、緑茶抽出物の濃縮物とは、緑茶葉から熱水又は有機溶媒水溶液により抽出された抽出物を濃縮したものをいい、例えば、特開昭５９−２１９３８４号公報、特開平４−２０５８９号公報、特開平５−２６０９０７号公報、特開平５−３０６２７９号公報等に記載の方法により調製することができる。また、緑茶抽出物の濃縮物として市販品を使用してもよく、例えば、三井農林（株）「ポリフェノン」、伊藤園（株）「テアフラン」、太陽化学（株）「サンフェノン」等が例示される。
【００１３】
本発明においては、緑茶抽出物を有機溶媒水溶液に溶解又は分散して使用するが、有機溶媒水溶液中の有機溶媒としては、例えば、エタノール、メタノール等のアルコール、アセトン等のケトン、酢酸エチル等のエステルが例示される。中でも、アルコール、ケトン等の親水性有機溶媒が好ましく、食品への使用を考慮すると、アルコール、とりわけエタノールが好ましい。水としては、イオン交換水、水道水、天然水等が例示される。
【００１４】
有機溶媒と水の質量比（有機溶媒／水）は、カテキン類の回収及びフラボノール類の除去の観点から、２０／８０〜７０／３０、更に４０／６０〜７０／３０、更に４５／５５〜６５／３５、特に５０／５０〜６０／４０であることが好ましい。
【００１５】
緑茶抽出物の使用量は、精製効率の観点から、有機溶媒水溶液１００質量部に対して、固形分換算で５〜２５質量部、更に８〜２０質量部、特に１０〜２０質量部であることが好ましい。
【００１６】
本発明においては、緑茶抽出物の有機溶媒水溶液を、該緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対して０．１〜１質量倍の活性炭と接触させる。カテキン類の回収及びフラボノール類の除去の観点から、活性炭の使用量は緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対して０．２〜０．９質量倍、特に０．３〜０．８質量倍であることが好ましい。
【００１７】
本発明で使用する活性炭としては、一般に工業レベルで使用されているものであれば特に制限されず、例えば、ＺＮ−５０（北越炭素社製）、クラレコールＧＬＣ、クラレコールＰＫ−Ｄ、クラレコールＰＷ−Ｄ（クラレケミカル社製）、白鷲ＡＷ５０、白鷲Ａ、白鷲Ｍ、白鷲Ｃ（武田薬品工業社製）等の市販品を用いることができる。
活性炭の平均細孔径は、０．５〜１０ｎｍ、更に０．７〜９ｎｍ、特に１〜８ｎｍが好ましい。また、細孔容積は、０．０１〜３．０ｍＬ／ｇ、更に０．１〜２．５ｍＬ／ｇ、特に０．８〜２．０ｍＬ／ｇが好ましい。更に、比表面積は、８００〜３０００ｍ2／ｇ、更に９００〜２８００ｍ2／ｇ、特に１０００〜２６００ｍ2／ｇが好ましい。なお、これらの物性値は窒素吸着法に基づく値である。
【００１８】
活性炭との接触時間は１２時間〜５日間であるが、カテキン類の回収率及びフラボノール類の除去効率の観点から、１２〜８０時間、更に１５〜７０時間、特に１８〜５０時間であることが好ましい。
【００１９】
活性炭と接触させるときの温度は、１０〜４０℃、特に１５〜３０℃であることが好ましい。
【００２０】
活性炭と接触させるときのｐＨは、３〜６．５が好ましく、３．５〜６がより好ましく、４〜５．８が更に好ましい。
【００２１】
活性炭と接触させる手段としては、例えば、緑茶抽出物の有機溶媒水溶液に活性炭を添加、撹拌し吸着後、ろ過操作により活性炭を回収するバッチ方法、又は活性炭を充填したカラムを用いて連続処理により接触させるカラム方法を採用することができる。
【００２２】
バッチ方式は、長時間の接触を容易に実現できるという点において有利であり、さらに、カテキン類とフラボノール類の吸着選択性が高いという利点がある。これは、長時間の接触において、各成分の細孔内における拡散速度の差により更なる除去選択性が発現するものと推測される。
バッチ方式におけるろ過操作にはメンブランフィルターを使用することが可能であり、例えば、孔径が０．０１〜１０μｍ、更に０．１〜０．５μｍであるものが好ましく、またその材質はニトロセルロース、ポリ塩化ビニル、ポリテトラフルオロエチレン等であることが好ましい。
【００２３】
得られた精製緑茶抽出物は、そのまま使用しても、濃縮又は乾燥により高濃度化してもよい。高濃度化方法としては、例えば、減圧濃縮、逆浸透膜濃縮、噴霧乾燥、凍結乾燥が例示される。これにより、精製緑茶抽出物を粉末、造粒物等の形態とすることができる。
【００２４】
また、本発明においては、活性炭との接触前に、夾雑物の除去及び風味の観点から、緑茶抽出物を、有機溶媒と水の質量比（有機溶媒／水）が９０／１０〜９７／３、更に９１／９〜９７／３、特に９１／９〜９５／５、殊更に９２／８〜９５／５である有機溶媒水溶液と混合し、生成した沈殿を除去してもよい。
緑茶抽出物の有機溶媒水溶液の調製方法は特に限定されず、沈殿を除去する際の上記有機溶媒水溶液中の有機溶媒と水の質量比が上記範囲内となっていればよい。例えば、緑茶抽出物を水に溶解した後に有機溶媒を添加して有機溶媒と水の質量比を上記範囲内としてもよく、また緑茶抽出物を有機溶媒に懸濁させた後、徐々に水を添加して上記範囲内としてもよい。
【００２５】
更に、本発明においては、風味の観点から、緑茶抽出物を有機溶媒水溶液と混合する際に、酸性白土又は活性白土と接触させることが好ましい。
酸性白土又は活性白土は、ともに一般的な化学成分として、ＳｉＯ2、Ａｌ2Ｏ3、Ｆｅ2Ｏ3、ＣａＯ、ＭｇＯ等を含有するものであるが、ＳｉＯ2／Ａｌ2Ｏ3比が３〜１２、特に４〜９であるものが好ましい。また、Ｆｅ2Ｏ3を２〜５質量％、ＣａＯを０〜１．５質量％、ＭｇＯを１〜７質量％含有する組成のものが好ましい。活性白土は天然に産出する酸性白土（モンモリロナイト系粘土）を硫酸等の鉱酸で処理したものであり、大きい比表面積と吸着能を有する多孔質構造をもった化合物である。
【００２６】
酸性白土又は活性白土の比表面積は、酸処理の程度等により異なるが、５０〜３５０ｍ2／ｇが好ましく、ｐＨ（５質量％サスペンジョン）は２．５〜８、特に３．６〜７が好ましい。酸性白土としては、例えば、ミズカエース＃６００（水澤化学社製）等の市販品を用いることができる。
【００２７】
酸性白土又は活性白土は、有機溶媒水溶液１００質量部に対して０．５〜２０質量部、更に１．５〜１８質量部、特に３〜１５質量部添加することが好ましい。
【００２８】
緑茶抽出物を、有機溶媒水溶液と、酸性白土又は活性白土とに接触させる順序は特に限定されず、例えば、各成分を任意の順序で投入するか、あるいは全てを同時に投入して接触させることができるが、有機溶媒水溶液に酸性白土又は活性白土を添加し、これに緑茶抽出物を添加する方法が好ましい。
【００２９】
また、緑茶抽出物の有機溶媒水溶液を、酸性白土又は活性白土と接触させる場合、溶液の温度は１０〜４０℃、更に２０〜３０℃であることが好ましい。また、接触時間は、０．５〜５時間、更に１〜４時間であることが好ましい。
【００３０】
酸性白土又は活性白土と接触させる手段としては、活性炭処理と同様に、バッチ方法、カラム方法を採用することができる。
【００３１】
酸性白土又は活性白土との接触処理後においては、生成している沈殿とともに酸性白土又は活性白土を除去し、清澄液を得ることが好ましい。除去方法は特に制限されず、例えば、遠心分離、膜ろ過等の公知の固液分離手段を採用することができる。
更に、本発明においては、得られた清澄液に加水して、濁り成分を更に析出させてもよい。濁り成分を析出させる際には、熟成時間を設けることが好ましく、例えば、好ましくは２分〜３０時間、更に好ましくは２分〜２４時間、特に好ましくは５分〜６時間である。また、濁り成分の析出温度は、０〜３０℃、特に５〜２０℃であることが好ましい。
濁り成分を析出させた後、溶液から濁り成分を分離するときの温度は、０〜３０℃、特に５〜２０℃であることが好ましい。濁り成分を分離する方法は、上記と同様に、遠心分離、膜ろ過等が挙げられる。
【００３２】
有機溶媒水溶液等と酸性白土又は活性白土とを接触した後の緑茶抽出物の水溶液は、活性炭処理に先立ち、濃縮により有機溶媒を除去するか、又は加水して有機溶媒水溶液中の有機溶媒と水との質量比が２０／８０〜７０／３０となるように調整される。なお、濃縮する場合には、例えば、減圧蒸留等の方法で有機溶媒を留去する方法を採用することができる。また、加水する場合は、例えば、イオン交換水、水道水、天然水等の水を加えることにより行われる。
【００３３】
このようにして、緑茶風味に優れ、飲みやすいカテキン類含有飲料の原料として有用な精製緑茶抽出物を製造することができる。
【００３４】
得られた精製緑茶抽出物は、下記の特性（１）〜（３）を具備することができる。
（１）精製緑茶抽出物のカテキン類の回収率は、生理効果及び緑茶風味の観点から、好ましくは８０％以上、より好ましくは８２％以上、更に好ましくは８３％以上、特に好ましくは８５％以上である。ここで、本明細書において「カテキン類の回収率」とは、原料として使用した緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対する、精製緑茶抽出物の固形分中のカテキン類量を百分率で示したものをいう。なお、カテキン類の回収率の上限は、特に限定されるものではなく、１００質量％であってもよい。
（２）精製緑茶抽出物のフラボノール類の除去率は、緑茶風味の観点から、好ましくは７１．５以上、より好ましくは７２％以上、更に好ましくは７５％以上、殊更好ましくは８０％以上であり、特に好ましくは８３％以上である。ここで、本明細書において「フラボノール類の除去率」とは、原料として使用した緑茶抽出物の固形分中のフラボノール類の含有量Ｗ0、精製緑茶抽出物の固形分中のフラボノール類の含有量Ｗ1としたときに、下記式（ｉ）で表されるものである。
【００３５】
フラボノール類の除去率（％）＝［（Ｗ0−Ｗ1）／Ｗ0］×１００ ・・・（ｉ）
【００３６】
なお、フラボノール類の除去率の上限は特に限定されず、１００質量％であってもよい。
【００３７】
（３）精製緑茶抽出物中のフラボノール類とカテキン類との質量比（フラボノール類／カテキン類）は、緑茶風味のバランスの観点から、０．００２〜０．０２が好ましく、０．００３〜０．０１がより好ましく、０．００４〜０．００８が更に好ましく、０．００５〜０．００８が特に好ましい。
【００３８】
本発明の精製緑茶抽出物は、緑茶風味に優れ、かつ飲みやすいため幅広い用途展開が可能であるが、例えば、飲食品、とりわけ飲料の原料として使用することが好ましい。
【００３９】
飲食品中の精製緑茶抽出物の含有量は、その種類により適宜選択することが可能であるが、例えば、カテキン類として０．１〜２０質量％、特に０．１〜１０質量％含有することが好ましい。
【００４０】
本発明のカテキン類含有飲料は、茶飲料でも、非茶系飲料であってもよい。茶飲料としては、例えば、緑茶飲料、烏龍茶飲料、紅茶飲料が例示される。また、非茶系飲料としては、例えば、果汁ジュース、野菜ジュース、スポーツ飲料、アイソトニック飲料、エンハンスドウォーター、ボトルドウォーター、ニアウォーター、コーヒー飲料、栄養ドリンク剤、美容ドリンク剤等の非アルコール飲料、ビール、ワイン、清酒、梅酒、発泡酒、ウィスキー、ブランデー、焼酎、ラム、ジン、リキュール類等のアルコール飲料が例示される。
【００４１】
また、本発明のカテキン類含有飲料には、酸化防止剤、香料、有機酸類、有機酸塩類、無機酸類、無機酸塩類、無機塩類、色素類、乳化剤、保存料、調味料、甘味料、酸味料、ガム、油、ビタミン、アミノ酸、果汁エキス類、野菜エキス類、花蜜エキス類、ｐＨ調整剤、品質安定剤等の添加剤を単独で又は併用して配合してもよい。
【００４２】
本発明のカテキン類含有飲料のｐＨ（２５℃）は、２〜７、好ましくは２〜６．５とすることが、呈味及び非重合体カテキン類の安定性の点で好ましい。
【００４３】
また、本発明のカテキン類含有飲料は、ポリエチレンテレフタレートを主成分とする成形容器（いわゆるＰＥＴボトル）、金属缶、金属箔やプラスチックフィルムと複合された紙容器、瓶等の通常の包装容器に充填した容器詰飲料として提供することができる。
また、容器詰飲料は、例えば、金属缶のような容器に充填後、加熱殺菌できる場合にあっては適用されるべき法規（日本にあっては食品衛生法）に定められた殺菌条件で製造できる。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ上記と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器等で高温短時間殺菌後、一定の温度迄冷却して容器に充填する等の方法が採用できる。また無菌下で、充填された容器に別の成分を配合して充填してもよい。
【実施例】
【００４４】
１．非重合体カテキン類の測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式ＳＣＬ−１０ＡＶＰ、島津製作所製）を用い、オクタデシル基導入液体クロマトグラフ用パックドカラム（Ｌ−カラムＴＭ ＯＤＳ、４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ：財団法人 化学物質評価研究機構製）を装着し、カラム温度３５℃でグラディエント法により分析した。移動相Ａ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有する蒸留水溶液、Ｂ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有するアセトニトリル溶液とし、試料注入量は２０μＬ、ＵＶ検出器波長は２８０ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００４５】
時間（分） Ａ液濃度（体積％） Ｂ液濃度（体積％）
０．０ ９７ ３
５．０ ９７ ３
３７．０ ８０ ２０
４３．０ ８０ ２０
４３．５ ０ １００
４８．５ ０ １００
４９．０ ９７ ３
６０．０ ９７ ３
【００４６】
２．フラボノールの測定
下記の分析により定量された、ルチン量、ミリセチン量、ケルセチン量及びケンフェロール量の総和として求めた。
【００４７】
２−１）ルチンの測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式Ｗａｔｅｒｓ２６９５、ＷＡＴＥＲＳ製）を用い、カラム（Ｓｈｉｍｐａｃｈ ＶＰ ＯＤＳ、１５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．）を装着し、カラム温度４０℃でグラディエント法により分析した。移動相Ｃ液はリン酸を０．０５質量％含有する蒸留水溶液、Ｄ液はメタノール溶液とし、流速は１ｍＬ／分、試料注入量は１０μＬ、ＵＶ検出器波長は３６８ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００４８】
時間（分） Ｃ液濃度（体積％） Ｄ液濃度（体積％）
０．０ ９５ ５
２０．０ ８０ ２０
４０．０ ３０ ７０
４１．０ ０ １００
４６．０ ０ １００
４７．０ ９５ ５
６０．０ ９５ ５
【００４９】
２−２）ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールの測定
（１）試料の加水分解
固形分濃度０．２質量％に調整した試料溶液５ｍＬにメルカプトエタノール２００μＬ、２Ｎ塩酸５００μＬを添加した。その後、ドライブロックバス（アズワン株式会社製）にて設定温度１２０℃で４０分間加熱し試料中のフラボノール配糖体を加水分解してフラボノールアグリコン（ミリセチン、ケルセチン、ケンフェロール）を生成させた後に、冷却した。
【００５０】
（２）分析
加水分解後の試料溶液中に存在しているミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールを、高速液体クロマトグラフィーにより定量した。なお、定量はグラディエント法により行ったが、その分析方法は上記「ルチンの測定」と同じである。
【００５１】
３．官能評価
各実施例で得られた精製緑茶抽出物を、非重合体カテキン類濃度０．２質量％となるようにイオン交換水で希釈した後、評価パネラー４名による官能試験を行った。官能試験は、下記の基準で飲用後の風味について評価し、その後協議により最終スコアを決定した。
【００５２】
［緑茶の風味］
Ａ：緑茶風味が十分感じられる。
Ｂ：緑茶風味が感じられる。
Ｃ：緑茶風味が弱い。
Ｄ：緑茶風味よりも、苦渋味及び雑味が強く感じられる。
［エグ味］
Ａ：エグ味を感じない
Ｂ：エグ味は若干あるが気にならない
Ｃ：エグ味が感じられる
Ｄ：エグ味が強く感じられる
【００５３】
実施例１〜５及び比較例１〜３
酸性白土（ミズカエース＃６００、水澤化学工業（株）製）１００ｇを２５℃、２５０ｒｐｍ攪拌条件下の９２質量％エタノール水溶液８００ｇ中に分散させ、約１０分間攪拌を行った。次いで、緑茶抽出物（固形分量１００質量％、固形分中のカテキン類の含有量３３質量％、ポリフェノンＨＧ、三井農林社製）２００ｇを投入し、２５℃のまま約３時間攪拌を続けた（ｐＨ４．０）。その後、生成している沈殿及び酸性白土を２号ろ紙でろ過した。得られたろ液にイオン交換水４１７ｇを添加し、１５℃、１００ｒｐｍの攪拌条件下で約５分間攪拌を行った。その混合溶液を、小型冷却遠心分離機（高速冷却遠心機ＣＲ２２Ｇ、日立工機社製）を用いて、操作温度１５℃、６０００ｒｐｍにて５分間遠心分離し、析出した濁り成分を除去した。
次いで、遠心分離後の溶液に加水し、溶液中のエタノール濃度が６０質量％になるように調整した緑茶抽出物のエタノール水溶液８９４ｇ（カテキン類濃度４．５質量％、カテキン類４０．２ｇを含む、フラボノール類／カテキン類＝０．０２６、ｐＨ４．０）と、活性炭（クラレコールＧＬＣ、クラレケミカル社製、平均細孔径２．７ｎｍ、細孔容積１．３２ｍＬ／ｇ、比表面積１９０３ｍ2／ｇ，よう素吸着量１４００ｍｇ／ｇ、メチレンブルー吸着量２４０ｍｇ／ｇ）２０ｇ（活性炭／カテキン類の質量比０．５）とを用意し、これらをガラス製４つ口フラスコ内で均一接触できるように密閉系で攪拌した。２５℃で接触を続け、表１に示す一定時間経過毎に一部を抜液してサンプリングを行い、濾過上清液をカテキン類、フラボノール類の分析に供した。その後、０．２μｍメンブランフィルターでろ過しイオン交換水２００gを添加した後、４０℃、２．７ｋｐａでエタノールを留去した。その後、水分量を調整して精製緑茶抽出物を得た。各精製緑茶抽出物の分析結果を表１に示す。
【００５４】
【表１】
【００５５】
表１から、緑茶抽出物を活性炭と１〜５０時間程度接触させてもカテキン類量に大きな変動は見られないが、フラボノール類は１２〜５０時間接触させたときに活性炭への吸着が高まることが分かった。この結果から、活性炭との接触時間を１２〜５日間とすることの意義が確認された。
【００５６】
実施例６〜７及び比較例４〜５
緑茶抽出物のエタノール水溶液と活性炭との接触時間を２４時間と固定し、活性炭／カテキンの質量比を表２に示す割合に変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。各精製緑茶抽出物の分析結果を、実施例５の分析結果とともに表２に示す。
【００５７】
【表２】
【００５８】
表２から、活性炭／カテキン類の質量比が０．２以上であると、フラボノール類が十分に低減し、他方４倍を超えるとカテキン類の吸着も促進されることが分かった。この結果から、活性炭／カテキン類の質量比を０．１〜４にとする意義が確認された。
【００５９】
実施例８〜１２及び比較例６〜８
６０質量％エタノール水溶液１０００ｇに緑茶抽出物（固形分量１００質量％、固形分中のカテキン類の含有量３３質量％、ポリフェノンＨＧ、三井農林社製）１４５ｇを投入し、２５℃のまま約６時間攪拌を続けた（ｐＨ４．０）。その後、生成している沈殿を２号ろ紙でろ過した。得られた液９１０ｇ（カテキン類濃度４．２５質量％、カテキン類４０．７ｇを含む、フラボノール類／カテキン類＝０．０４８８）に活性炭（クラレコールＧＬＣ、クラレケミカル社製、平均細孔径２．７ｎｍ、細孔容積１．３２ｍＬ／ｇ、比表面積１９０３ｍ2／ｇ，よう素吸着量１４００ｍｇ／ｇ、メチレンブルー吸着量２４０ｍｇ／ｇ）２０ｇ（活性炭／カテキン類の質量比０．５）を用意し、これらをガラス製４つ口フラスコ内で均一接触できるように密閉系で攪拌した。２５℃で接触を続け、表３に示す一定時間経過毎に一部を抜液してサンプリングを行い、濾過上清液をカテキン類、フラボノール類の分析に供した。その後、０．２μｍメンブランフィルターでろ過しイオン交換水２００gを添加した後、４０℃、２．７ｋｐａでエタノールを留去した。その後、水分量を調整して精製緑茶抽出物を得た。各精製緑茶抽出物の分析結果を表３に示す。
【００６０】
【表３】
【００６１】
比較例９〜１０
緑茶抽出物のエタノール水溶液と活性炭との接触時間を２４時間と固定し、活性炭／カテキンの質量比を表４に示す割合に変更したこと以外は、実施例８と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。各精製緑茶抽出物の分析結果を表４に示す。
【００６２】
【表４】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
緑茶抽出物の有機溶媒水溶液を、該緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対して０．１〜１質量倍の活性炭と１２時間〜５日間接触させる、精製緑茶抽出物の製造方法。
【請求項２】
緑茶抽出物の有機溶媒水溶液中の有機溶媒と水の質量比が２０／８０〜７０／３０である、請求項２記載の精製緑茶抽出物の製造方法。
【請求項３】
活性炭との接触前に、緑茶抽出物を有機溶媒と水の質量比が９０／１０〜９７／３の有機溶媒水溶液と混合し、生成した沈殿を除去する、請求項１又は２記載の精製緑茶抽出物の製造方法。
【請求項４】
緑茶抽出物を有機溶媒水溶液と混合する際に、酸性白土又は活性白土と接触させる、請求項３記載の精製緑茶抽出物の製造方法。
【請求項５】
有機溶媒がエタノールである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の精製緑茶抽出物の製造方法。
【請求項６】
得られた精製緑茶抽出物中のフラボノール類とカテキン類との質量比（フラボノール類／カテキン類）が０．００２〜０．０２である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の精製緑茶抽出物の製造方法。
【請求項７】
カテキン類の回収率が８０％以上である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の精製緑茶抽出物の製造方法。
【請求項１】
緑茶抽出物の有機溶媒水溶液を、該緑茶抽出物の固形分中のカテキン類に対して０．１〜１質量倍の活性炭と１２時間〜５日間接触させる、精製緑茶抽出物の製造方法。
【請求項２】
緑茶抽出物の有機溶媒水溶液中の有機溶媒と水の質量比が２０／８０〜７０／３０である、請求項２記載の精製緑茶抽出物の製造方法。
【請求項３】
活性炭との接触前に、緑茶抽出物を有機溶媒と水の質量比が９０／１０〜９７／３の有機溶媒水溶液と混合し、生成した沈殿を除去する、請求項１又は２記載の精製緑茶抽出物の製造方法。
【請求項４】
緑茶抽出物を有機溶媒水溶液と混合する際に、酸性白土又は活性白土と接触させる、請求項３記載の精製緑茶抽出物の製造方法。
【請求項５】
有機溶媒がエタノールである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の精製緑茶抽出物の製造方法。
【請求項６】
得られた精製緑茶抽出物中のフラボノール類とカテキン類との質量比（フラボノール類／カテキン類）が０．００２〜０．０２である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の精製緑茶抽出物の製造方法。
【請求項７】
カテキン類の回収率が８０％以上である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の精製緑茶抽出物の製造方法。
【公開番号】特開２０１２−５５２０５（Ｐ２０１２−５５２０５Ａ）
【公開日】平成２４年３月２２日（２０１２．３．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１９９９３０（Ｐ２０１０−１９９９３０）
【出願日】平成２２年９月７日（２０１０．９．７）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年３月２２日（２０１２．３．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年９月７日（２０１０．９．７）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
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