美容用ＵＶスクリーン組成物及びそのためのアミノブタジエンをもとにしたＵＶ吸収複合体
本発明は、美容上及び皮膚科的に許容できる担体、並びにフラボノイドではなく、担体分子に共有結合しているＵＶ吸収化合物を含む、紫外線放射及びその有害な影響から防御するための美容用組成物に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紫外線放射（UV radiation）及びその有害な影響から防御するための新規な美容用組成物に関する。さらに、本発明は、サンスクリーン組成物等において特に有用なＵＶ吸収複合体に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＵＶ光に皮膚を曝すことによる有害な影響は、多種多様であり、先行技術に詳しく記載されている。２９０〜３１５ｎｍの波長を有するＵＶ−Ｂ放射線が紅斑や日焼けを引き起こすことは、長い間認識されてきた。３１５〜４００ｎｍの波長を有するＵＶ−Ａが、光毒性及び光化学の反応を引き起こすことは１９８０年頃まで発見されていなかった。
【０００３】
約７０％のＵＶ−Ｂ放射線は外皮や角質層によって遮蔽されるが、ＵＶ−Ａ放射線の場合は異なり、のちに皮膚の奥深くまで透過する。よく知られているＵＶ−Ａの有害な影響は、酸化ストレスである。ＵＶ−Ａ放射線によって形成されるスーパーオキシドは、皮膚の線維芽細胞中に存在する鉄蓄積タンパク質であるフェリチンから鉄を放出する（Pourzand et al, Proc. Natl, Acad, Sci.USA, June 1999, Vol 96, p.6751-56）。極めて有害なヒドロキシル・ラジカルや過酸化水素の生成をもたらすフェントン反応やハーバー・ウェイス反応における鉄の役割はよく知られている。また、銅イオンのような他の金属イオンは、酸素ラジカルを形成する触媒になると報告されている。ＤＮＡを損傷するこれらの有害な生成物の役割は、例えばSestili et al により述べられているようによく知られている（Free Radical Bioligy & Medicine [US], July 15 1998, 25, [2] p.196-200）。
【０００４】
スーパーオキシドジスムターゼのような酵素による典型的な生化学的防御は、ＵＶ−Ａ放射線により引き起こされる反応を効果的に阻止するには充分ではない。従って、これらの有害な影響から皮膚を防御する必要性はいまだに欠かすことはできない。他の酸化ストレス現象は、例えば皮膚の老化や白斑の促進をもたらすコラーゲンの損傷であり、脂質過酸化反応による細胞壁の損傷である。
【０００５】
サンスクリーン用の有機ＵＶ吸収剤の使用は広く知られている。
【０００６】
有機ＵＶ吸収化合物の不利な点は、その水溶性が低いことである。よって、ヒドロゲルのような水性の化粧品における使用には不適当であり、一般的に好ましくない副作用を発現する有機溶媒の使用が必要となる。脂溶性のＵＶ吸収化合物は、有機溶媒と組み合わせて使用する使用しないに拘わらず、血中に入る危険性を伴って、いわゆる角質層を通り抜けることが可能である。
【０００７】
ＵＶ吸収化合物のさらに不利な点は、ＵＶ光の下で不安定なことである。ＵＶ照射は、光化学反応を引き起こしてＵＶ吸収化合物を破壊し、その結果、紫外線放射に対する防御を低減させる。
【０００８】
特許文献ＵＳ４８３９１６０ には、Ｃ４〜Ｃ１２のアルコキシ鎖を有するベンジリデンボルナノンユニット（benzylidenbornanone units）のポリマーからなる、紫外線放射から皮膚を防御するための化粧品の処方が開示されている。この方法では、複合体の親水性を高めることにはならない。皮膚を通り抜けた浸透の影響が記載されているが、疎水性を高めることは、その逆ではなく、角質層の脂質成分を介して流動性を高めることになるであろう。
【０００９】
不溶性粒子を実質的に形成し、酸素原子や窒素原子を介してＵＶ−Ａ及びＵＶ−Ｂ吸収化合物をポリアクリル酸にカップリングすることは、特許文献ＷＯ０１０８６４７に記載されており、a−極性化合物（a-polar compounds）を取り込んで屈折率を望ましい傾向に適合するように特異的に設計された分子複合体をもたらす。しかしながら、油性の化合物との混合では、不要な免疫原性反応を引き起こす可能性がある、より小さな分子量（ＭＷ）の複合体の場合に、皮膚浸透の危険性を伴う。
【００１０】
生体ポリマーにカップリングする少なくとも１つのフラボノイドを含むＵＶ吸収複合体の使用は、特許文献ＷＯ０３００４０６１に記載されている。しかしながら、これらの複合材料にはいくつかの不利な点がある。この特許文献に記載されたカップリング方法では、試薬として極めて有毒な物質であるホルムアルデヒドを使用しており、激しい皮膚炎症が引き起こされる。さらに、このホルムアルデヒドのカップリング法では、回避困難なポリペプチドの架橋がもたらされる。また、ホルムアルデヒドを介したフラボノイドのカップリングから得られる複合体の安定性については、キセノンの輻射条件の下での安定性実験により明らかになったように、改善の余地が残されている（実施例５参照）。最後に、フラボノイドＵＶ吸収化合物は可視光線を吸収し、この吸収作用により、美容用に使用するサンスクリーンの材料にとっては好ましくない黄色に染まる。
【００１１】
特許文献ＥＰ１１７２３９９ には、有機化合物を少なくとも１つの活性アミノ基を有するポリマーにカップリングする方法が開示されている。この特許では、サンスクリーン用の合成材料の使用については言及していない。
【００１２】
特許文献ＵＳ５４０３９４４には、ＵＶ吸収基を有する有機ポリシロキサンポリマーが開示されている。
【００１３】
特許文献ＪＰ３１６１７４２ には、ゼラチンと結合したＵＶ吸収剤が、写真感光材料で使用するために開示されている。美容用の使用には言及していない。
【００１４】
上記のような試みにもかかわらず、アレルギー性や免疫原性の危険性を示さず、皮膚からの浸透も示さず、可視光放射線に対して充分に透明であるとはいうものの、放射線を遮蔽することにより日光に対し直接的で充分な防御を提供するＵＶフィルターの必要性はなおも存在する。
【特許文献１】ＷＯ０１０８６４７
【特許文献２】ＷＯ０３００４０６１
【特許文献３】ＥＰ１１７２３９９
【特許文献４】ＵＳ５４０３９４４
【特許文献５】ＪＰ３１６１７４２
【非特許文献１】Pourzand et al, Proc. Natl, Acad, Sci.USA, June 1999, Vol 96, p.6751-56
【非特許文献２】Free Radical Bioligy & Medicine [US], July 15 1998, 25, [2] p.196-200
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、新規なＵＶ吸収美容用組成物を提供することにある。
【００１６】
さらに、本発明の目的は、ＵＶ光の下で破壊に対しての安定性が高く、高濃度で使用可能な、ＵＶ吸収高分子化合物を含む美容用組成物を提供することにある。
【００１７】
また、本発明の目的は、新規で、極めて効果的なＵＶ吸収高分子化合物を提供することにある。
【００１８】
さらに、本発明の目的は、粘着性及び／又は安定性の問題が生じることなく、簡単にサンスクリーン組成物に製剤化可能なＵＶ吸収高分子化合物を提供することにある。
【００１９】
他に、本発明の目的は、可視光の領域において透明であるＵＶ吸収高分子化合物を含む新規の美容用組成物を提供することにある。
【００２０】
他に、本発明の目的は、皮膚からの浸透を防御し、少なくとも充分に防御し、その後に免疫原性又はアレルギー性副作用の危険性を低減するＵＶ吸収高分子化合物を含む美容用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明は、美容上及び皮膚科的に許容できる担体及びＵＶ吸収化合物を含む、フラボノイドではなく、担体分子としてポリペプチドに共有結合している、紫外線放射から防御するための美容用組成物によって、これらのすべての目的に到達し得るという驚くべき見識に基づくものである。
【００２２】
ＵＶ吸収化合物は、好ましくは広帯域のＵＶ吸収分子又はＵＶ−Ａ吸収分子であり、さらに好ましくは、ＵＶ吸収化合物が、ケイ皮酸、ヒドロキシベンゾフェノン、ヒドロキシフェニルベンゾトリアゾール若しくはアミノブタジエン、又はこれらの組合せである。
【００２３】
ＵＶ吸収複合体、すなわち担体分子に結合したＵＶ吸収化合物のＵＶ吸収作用は、例えば、その化合物の粘着性や（エマルジョンの）安定性に関連したサンスクリーン組成物の製剤に有害な影響を与えずに、ＵＶ−Ａ放射線に対して充分な防御を提供するために、できるだけ高度にすべきであると理解されている。
【００２４】
意外にも、化学式Ａのアミノブタジエンを適当な担体にカップリングすることにより、予想外に高度で効果的なＵＶ吸収作用有するＵＶ吸収複合体が、得られるということを見い出した。
【００２５】
よって、本発明はＵＶ吸収複合体にも関連し、該複合体は、担体分子が一般式（Ａ）で表されるアミノブタジエンに共有結合している。
【化１】
式中、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なっていてもよく、各々水素原子、１〜２０個の炭素原子を有するアルキル基、又は６〜２０個の炭素原子を有するアリール基を表す。但し、Ｒ１及びＲ２は同時に水素原子ではなく、Ｒ１及びＲ２は一緒になって、環状アミノ基を形成してもよい。
Ｒ１及びＲ２は各々、１又は複数のカルボン酸部分で置換されていてもよく、
Ｒ３は、カルボキシル基、−ＣＯＯＲ５、−ＣＯＲ５又はＳＯ２Ｒ５を表し、Ｒ４は、カルボキシル基、−ＣＯＯＲ６又は−ＣＯＲ６を表す。式中、Ｒ５及びＲ６は、同一又は異なっていてもよく、各々１〜２０個の炭素原子を有するアルキル基、又は６〜２０個の炭素原子を有するアリール基を表す。Ｒ５及びＲ６は一緒になって、１，３−ジオキソシクロヘキサン核、バルビツール酸核、又は２, ４−ジアゾ−１−アルコキシ−３，５−ジオキソシクロヘキセン核を形成してもよい。
【００２６】
さらに、本発明は、本発明によるＵＶ吸収複合物の製造方法に関連し、その方法は、化学式Ａのアミノブタジエンをイソニペコチン酸、又はその等価体に接触させ、得られた生成物を担体分子とカップリングさせることを含む。
【００２７】
また、本発明は、そのような美容用組成物を含有する容器、及び紫外線放射に対し防御するための美容用組成物を調製するためのフラボノイドではなく、ポリペプチドに共有結合している、ＵＶ吸収化合物の使用に関連する。
【発明の効果】
【００２８】
この新規のＵＶ吸収ポリマーは、血流中に流れ出るという深刻な危険性を伴うことなく使用され、免疫反応の危険性や有害な影響を妨げる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
本発明で使用する「ＵＶ吸収化合物」とは、紫外線放射の吸収が可能な分子に関連する。そのようなＵＶ吸収化合物が担体分子に結合する場合は、「ＵＶ吸収複合体」又は「ＵＶ吸収高分子化合物」として言及する。
【００３０】
本発明は、日光に曝されることによる有害な影響からヒトの皮膚や毛髪を防御するために使用できるＵＶ放射線吸収組成物を対象とする。特に、本発明は、皮膚から血流中には侵入しない担体分子に結合した安定的なＵＶ吸収化合物を含む美容用組成物を対象とする。前記ＵＶ吸収複合体の血流中への流出を妨げることで、免疫反応や有害な影響の危険性を低減させる。
【００３１】
少なくとも１つのＵＶ吸収化合物を含み、フラボノイドではなく、担体分子としてポリペプチドに結合しているＵＶ放射線吸収複合体を含有する新規の美容用組成物が意外にも発見され、望ましい特性をすべて発現している。
【００３２】
本発明で使用されているフラボノイド（flavonoid）という用語は、フラバン（flavanes）、フラバノン（flavanones）、及びフラボン（flavones）、並びにそれらの誘導体を含んで理解されることを意味する。
【００３３】
本発明の内容において、ポリペプチドとは、ペプチド結合により結合した少なくとも１５のアミノ酸、好ましくは少なくとも２０のアミノ酸を有する分子を含むと理解され、天然タンパク質、変性タンパク質、合成及び組換えによるタンパク質、ペプチド、糖タンパク、プロテオグリカン、リポタンパク、並びに側鎖として又は鎖中において、生体オリゴマー基やポリペプチド基などの他の基を含むこともある分子を含有する。その最大長は、通常、２０００のアミノ酸を有する。ある実施態様においては、ポリペプチドは、１５〜１０００のアミノ酸、好ましくは３０〜１０００又は１５〜５００のアミノ酸を有する。ポリペプチドは、特にゼラチンタイプにおいては、３０〜５００のアミノ酸を有しており、なるべくなら５０〜５００のアミノ酸又は３０〜３００のアミノ酸を有することが好ましい。
【００３４】
ある実施態様においては、有機ＵＶ吸収化合物には４００ｎｍを超える波長の吸収作用がない。これは有機ＵＶ吸収化合物が可視光では透明であることを意味している。
【００３５】
他の実施態様においては、有機ＵＶ吸収化合物は、３１５〜４００ｎｍのＵＶ−Ａ領域での吸収作用を有する。
【００３６】
別の実施態様においては、ＵＶ吸収複合体の４００ｎｍを超える吸収作用は全吸収作用の１０％未満である。これは、ＵＶ吸収複合体は可視光では実質的に透明であることを意味している。好ましい実施態様においては、ＵＶ吸収複合体の３１５〜４００ｎｍのＵＶ−Ａ領域での吸収作用は全吸収作用の７５％以上である。よって、本発明は、ＵＶ吸収複合体の４００ｎｍを超える吸収作用は２５０〜６００ｎｍの全吸収作用の１０％未満であることを特徴とする美容用組成物に関する。また、本発明は、ＵＶ吸収複合体の３１５〜４００ｎｍの吸収作用は２５０〜６００ｎｍの全吸収作用の少なくとも７５％であることを特徴とする美容用組成物に関する。
【００３７】
好ましい実施態様においては、ＵＶ吸収化合物を、ケイ皮酸（Ｉ）、ヒドロキシベンゾフェノン（II）、ヒドロキシフェニルベンゾトリアゾール（III）、又はアミノブタジエン（IV）のファミリーから選択する。
【化２】
【００３８】
これらの構造には、ＵＶ吸収剤を、ゼラチンのリジンアミノ酸の１級アミン基、又はグルタミン酸及びアスパラギン酸のカルボキシ基に、各々結合するために、少なくとも１つの１級アミン又はカルボン酸のアンカー基が含まれる。カップリング方法の例としては、特に、カルボン酸活性剤を使用してゼラチンのアミン基をカルボン酸で修飾する方法は、特許文献ＥＰ０５７６９１１に記載されている。
【００３９】
さらに好ましい実施態様では、ＵＶ吸収化合物は、以下の１又は複数から選択される。
【化３】
【００４０】
ＵＶ吸収化合物のカップリングは、ポリペプチド架橋の危険性を伴わない方法で行われ、制御されずにＵＶ吸収複合体の分子量（ＭＷ）が増加することが好ましい。特に、ＵＶ吸収化合物のカルボキシ基をカルボジイミド活性剤と反応し、その反応中間体を、担体分子、特に生体ポリマーやポリペプチドにおいてアミノ基と反応するＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルに変換し、その目的とする仕様のＵＶ吸収複合体を得る。
【００４１】
ＵＶ吸収化合物をポリペプチドにカップリングさせる方法として、カルボジイミド活性剤の使用は、その反応中間体をＵＶ吸収剤のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルに変換し、極めて便利である。この方法は、前記ＷＯ０３／００４０６１に記載されているワンポット反応であり、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを簡単に単離及び精製することができ、ゼラチン架橋の危険性が回避できるため、好ましい方法である。下記の反応スキームを参照。
【化４】
【００４２】
ある実施態様においては、担体分子にカップリングしたＵＶ吸収化合物の量は３〜３０重量％である。
【００４３】
他の実施態様においては、ポリペプチドはゼラチン様物質であり、ポリマーのゲル化機能が好ましくない場合には、このゼラチン様物質はアイシングラス（fish gelatin）のこともあり、より大きなポリペプチドが望まれる。
【００４４】
別の実施態様においては、ポリペプチドは加水分解したゼラチンであり、５０ｋＤ未満及び１．５ｋＤを超えるＭＷを有しており、ＵＶ吸収ポリペプチド複合体の皮膚浸透を妨げるのに適切であり、極めて限られたゲル化特性を示すか、又はその特性が全く存在しないこともある。ポリペプチドは３〜３０ｋＤの分子量であることが望ましい。
【００４５】
ポリペプチドに結合するＵＶ吸収分子の数は、いくつかの要因により決定され、その負荷は、１００アミノ酸あたり０．１５〜１５個のＵＶ吸収分子となる。低負荷の場合には、ポリペプチドの量は、必要なＵＶ防御を行なうために皮膚に塗るクリームや（ヒドロ）ゲルなどの形態で、組成物において処方され、過剰に大きな量となる。ポリマーから利用可能なアミン基やカルボキシル基などの遊離型の反応基の数は、主にその上限を決定する。例えば、好ましいポリペプチドであるゼラチンは、１００アミノ酸あたり約５個のＵＶ吸収分子の負荷を負うことができる。ゼラチンを修飾して、利用できる遊離型の反応基の数を増加することも可能である。過剰な負荷は、製剤化の問題を引き起こすこともある。ある実施態様においては、負荷として１００アミノ酸あたり約１〜１０個のＵＶ吸収分子を負うこともできる。
【００４６】
アミノブタジエンＡを適当な担体分子にカップリングすることで、アミノブタジエンＡの吸収作用は予想外に高くなることを見い出した。この担体分子は、３７５ｎｍの波長において、少なくとも５．６ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ（＝１リットルあたり１グラムのＵＶ吸収複合体を含む水溶液の吸収単位）のＵＶ吸収複合体のＵＶ吸収作用を得るために、充分な量を負荷できることが発見されている。この最小限のＵＶ吸収作用は、サンスクリーン製剤の安定性と粘着性におけるあらゆる有害な影響を回避するので、サンスクリーン組成物においてＵＶ吸収複合体が適切に機能するためには好ましい。よって、ある実施態様においては、本発明のＵＶ吸収複合体は、３７５ｎｍで少なくとも５．６ａ．ｕ．／ｇ．ＬのＵＶ吸収作用を有する。本発明のＵＶ吸収複合体は、少なくとも２０ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ、さらに好ましくは、少なくとも２５ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ、さらにより好ましくは、少なくとも３０ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ、最も好ましくは、少なくとも４０ａ．ｕ．／ｇ．ＬのＵＶ吸収作用を有することが好ましい。
【００４７】
本発明のＵＶ吸収複合体におけるアミノブタジエンの一般構造（Ａ）は、修飾されるか又は置換されることもあるが、実質的に同じ基本構造を有し、適当な担体分子にカップリングする場合に高い吸収作用を保持する特性をなおも有する、化学式Ａで表わされる分子に言及するアミノブタジエン（Ａ）のあらゆる等価体を含むと考えられる。そのような等価体は、当業者にとっては簡単に想像することが可能である。アミノブタジエン（Ａ）の等価体の例は米国特許４１９５９９９号から得ることができるが、そこに述べられている等価体には限定されない。
【００４８】
化学式Ａの化合物の内、以下の一般式（Ｂ）により表される化合物は特に好ましい。
【化５】
式中のＲ１、Ｒ２、Ｒ４及びＲ５は一般式（Ａ）と同じ意味を有する。
【００４９】
ある実施態様においては、アミノブタジエンの構造は、以下の構造式を有する。
【化６】
式中のＲ６は一般式（Ａ）と同じ意味を有する。好ましい実施態様においては、Ｒ６はエチルを表わす。以下、Ｒ６がエチルである化合物ＣはＵＶ−Ｃ１と言及する。
【００５０】
構造式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、又は（ＵＶ−Ｃ１）により、上記で表されたアミノブタジエンは、通常の技術を有する者にとって周知の方法を使用して、アミノブタジエンのカルボン酸基を介して適当な担体分子にカップリングすることもできる。アミノブタジエンがカルボン酸基を含まない場合には、そのような基は熟練した当業者にとって周知の方法により導入できる。ある具体的な実施態様においては、アミノブタジエン（Ａ）は、付加的なカルボン酸の機能性を導入するアミノ基（ＮＲ１Ｒ２）の修飾を介してカップリングしている。特にアミノ基は、イソニペコチン酸により置換される。この置換は、担体分子に付加的で効果的なカップリングをし、予想外の高い吸収作用を得るように思われる。よって、アミノブタジエンＡ、Ｂ、Ｃを、アミノブタジエンＵＶ−Ｃ1の好ましい実施態様においては、塩基で処置し、及び得られる生成物をイソニペコチン酸（４−ピペリジンカルボン酸又はヘキサヒドロイソニコチン酸としても知られている）に接触させると、付加的なカルボン酸の機能性が導入され、この機能性は、それ自体周知のカルボン酸機能性を介した適当な担体へのカップリングを含む方法を介して、カップリングされることもある。カップリングの好ましい方法は、活性化エステル、好ましくはＮＨＳエステルを介して、担体のアミン機能性にカップリングする方法である。
【００５１】
付加的なカルボン酸基をアミノブタジエン分子に導入する限り、イソニペコチン酸の代わりに、その等価体が使用されることもある。そのような等価体は一般式（Ｄ）により例示される。
【化７】
式中、Ｒ７及びＲ８は、同一又は異なっていてもよく、各々１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基を表わす。Ｒ８はまた、水素原子を表わすことができる。Ｒ７及びＲ８は一緒になって、環状アミノ基を形成してもよい。アミノブタジエン（Ａ）のアミノ基の３級アミノの特性（tertiary amino character）を損なわずに保持している等価体は、好ましい等価体である。
【００５２】
アミノブタジエン（Ａ）に結合するために使用される担体分子はどのような担体分子でもよく、特に、アミノブタジエン（Ａ）又はその等価体にカップリング可能ならばどのようなポリマーでもよい。カップリングしているアミノブタジエン（Ａ）又はその等価体の量は、少なくとも５．６ａ．ｕ．／ｇ．ＬのＵＶ吸収作用を有する複合体となることが好ましい。美容用組成物、特にサンスクリーン組成物に適当であり、その中に含むことができる担体分子を使用することは好ましい。そのような担体分子は当業者には周知である。
【００５３】
ある実施態様においては、担体分子は高分子化合物、好ましくはアミノブタジエンＡにカップリングするための遊離型のアミン基を有する高分子化合物である。
【００５４】
他の実施態様においては、担体分子はポリペプチドである。
【００５５】
ある好ましい実施態様においては、アミノブタジエンＡは、担体１００グラムあたり少なくとも７．６ｍｍｏｌの量で、好ましくは、担体１００グラムあたり少なくとも１５ｍｍｏｌの量で、前記担体分子にカップリングしている。
【００５６】
他の好ましい実施態様においては、ポリペプチドにカップリングしているアミノブタジエンＡの量は、３〜５０重量％である。
【００５７】
水溶性のポリペプチドとして使用することができるゼラチンは、酸若しくは石灰で処理した哺乳類又は冷血動物の皮あるいは骨ゼラチンである。そのようなゼラチンは先行技術においては一般的であり、文献に詳しく記載されている。
【００５８】
また、化学的に修飾された多くのゼラチンは先行技術から周知であり、例えば、トリメリト化（trimellitated）、スクシニル化、アシル化、アルキル化、及びフタル化されたゼナチンなどが挙げられる。修飾されたゼラチンは、皮膚に適用された場合に免疫反応のような有害な反応を引き起こさない限り、有利に使用することができる。スクシニル化されたゼラチンは、例えば、血漿増量剤として適用され、医学的及び免疫学的に許容できるゼラチンである。アルキル化されたゼラチンは、例えばアルキルスクシニル化されたゼラチンについては特許文献ＤＥ１９７２１２３８を参照し、皮膚とポリペプチドの相互作用を変更するために使用することができる。従って、ＵＶ吸収ポリマーの耐水性に影響を及ぼす。よって、本発明のＵＶ吸収複合体と皮膚の相互作用を改善するために、例えばスクシニル基などのアルキル基をＵＶ吸収複合体の担体に追加的にカップリングすることもできる。スクシニル基の代替基は、当業者に容易に知られているか、改善した耐水性を有するという観点においては簡単に同定することができる。よって、ある実施態様においては、上記で述べたように、本発明はＵＶ吸収複合体に関連し、耐水性を改善するために、担体分子はアルキル基を、好ましくはスクシニル基をさらに含む。
【００５９】
遊離型のアミン基の量が増加している修飾したゼラチンを、ゼラチンのＵＶ吸収化合物の負荷を増やすために使用することができる。特許文献ＥＰ０４８７６８６には、カルボキシル基をアミンに変換する方法が記載されている。スペーサーは、ゼラチンのようなポリペプチドの遊離型反応基の量を増加させるために使用することができる。スペーサーは、カルボキシル基やゼラチンのアミン基などのポリペプチドの反応基に共有結合することができる分子であり、前記スペーサー分子はアミン基又はカルボキシル基などの反応基を少なくとも２個含んでおり、よって、利用可能な活性基の量を増加させる。スペーサー分子は、リジン、グルタミン酸又はアスパラギン酸などのアミノ酸により例示されるが、このような構造に限定されない。例えば、よく知られているように、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の活性化エステルは、カルボキシル基や１級アミンなどの官能基のペプチド結合を形成するために使用できる（Anderson et al., 1964, J. Am. Chez. Soc. 86: 1839-1842, US 5,366, 958）。ＮＨＳは、ゼラチンのそれらに付加するＮＨＳと官能基（例、ジヒドロキシ安息香酸又はその類似体）でエステル結合を形成することにより、活性化される。活性化したＮＨＳエステルをゼラチンのアミノ基にカップリングすることは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドが遊離する一方で、化学的に修飾されたゼラチンを生成する。他の実施態様としては、官能基はリジンにカップリングすることができ、修飾したリジンのカルボキシル基はその後ＮＨＳにより活性化し、ゼラチンにカップリングすることができる。あるいは、リジンは側鎖としてゼラチンに結合し、その２個のアミノ基は、フラボノイド分子ではないＵＶ吸収分子を結合するために使用できる。
【００６０】
その抗原性及び免疫原性が低いという理由により、ゼラチン又はコラーゲンが好ましいが、カゼイン、セリシン、可溶性コラーゲンなどの遊離型のアミノ基を有する他のポリペプチドも使用することができる。免疫反応をさらに避けたいならば、例えば、（自己）免疫疾患に苦しむ患者の場合、ヘリックス形成を不可能とするゼラチンは有利に使用できる。これは、ヘリックス形成を減少させるためには、化学的にゼラチンを修飾することにより、又は、好ましくは、特許文献ＥＰ１０６３６６５に記載されている組換え技術で生成されたゼラチンを使用することにより、達成が可能となる。そのような組換えゼラチンは、ペプチドバックボーンにおいてプロリンを欠失することもあり、又はヒドロキシプロリンの水酸化を低減するか、妨げるか、若しくは避けることができる。そのような組換えゼラチンは、免疫反応を誘発する可能性がほとんどないため修飾されたゼラチンとして好ましい。
【００６１】
ヒドロキシプロリンを全く又はほとんど有していないゼラチンの更なる有利な点は、そのようなゼラチンはゲル化温度が低いか、又は全くゲル化しないということである。ゲル化がほとんどないか又は全くない場合には、その担体分子が美容用の使用におけるゼラチンポリマーであるＵＶ吸収複合体を広い濃度領域で使用することができる。その観点から、また、冷水に生息する生物由来のゼラチンは、天然に低含有量のヒドロキシプロリンを有しているためゲル化温度、及び免疫原性又は抗原性が低く、有利に使用することができる。
【００６２】
皮膚への浸透の深さは、血中へ入ることを妨げるゼラチンの分子量をコントロールすることにより、有利に調節することができる。先行技術としてのＵＶ吸収化合物の使用では、皮膚浸透を調節する方法が含まれず、皮膚浸透は自由に行なわれる。本発明では、皮膚への浸透は妨げられる。
【００６３】
２００ｋＤを超える高分子量のゼラチンはあまり好ましくない。従来の天然又は修飾されたゼラチンの分子量は、例えば、加水分解又はゼラチンの酵素による分解で調節することができる。目的とする平均分子量は充分に調節可能であるが、分子量分布の広さについては難しい。ゼラチンの分解後、過小なポリペプチド（＜＝３ｋＤ）又は過大なタンパク鎖は、限外濾過、透析、ヌードル洗浄（noodle washing）などの周知の技術により、取り除くことができる。組換え型のゼラチンには、分子量及び分布を正確に調節できるという更なる有利な点がある。皮膚浸透を調節する別の方法は、親水基又は疎水基をタンパク質又はポリペプチドに共有結合させ、そのタンパク質又はポリペプチドを化学的に修飾することにより、そのタンパク質又はポリペプチドの疎水性を調整することである。よって、本発明のある実施態様においては、ポリペプチドは、ＤＮＡ組換え技術により生成されたコラーゲン又はゼラチンである。
【００６４】
有利なことには、担体分子にカップリングした場合に、ＵＶ吸収化合物はさらに安定的であることが発見された。光に曝された場合、ＵＶ吸収化合物の劣化や分解の割合は減少する。
【００６５】
ＵＶ吸収複合体は、紫外線放射から皮膚や毛髪を防御するための美容用組成物又はサンスクリーン組成物を調製するために有利に使用することができる。
【００６６】
ＵＶ吸収化合物を含む皮膚防御のための美容用組成物は、ローション、エマルジョン、クリーム、乳液、ジェルなどの多様な形態で市販されている。これらには、オイル及び／又はアルコールが含まれることもある。また、エアロゾル又はスティックの使用も知られている。美容用組成物のそのようなあらゆる形態は、本発明のＵＶ吸収複合体を使用するための手段として機能する。
【００６７】
当業者は、本発明のサンスクリーン組成物で使用することができる、特にＵＶ吸収化合物とポリペプチドとの組合せで、さらに特別にはアミノブタジエンＡが結合している適当な美容上及び皮膚科的な担体を選択することができる。
【００６８】
サンスクリーン組成物は、第二の従来型ＵＶ吸収化合物を含むこともある。これは、例えば特許文献ＥＰ１０５５４１２に記載されているように、ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ、又は広帯域のＵＶ吸収化合物のことでもある。技術的に使用されるような他の添加剤もまた、使用することができる。
【００６９】
担体分子、特に、ゼラチンのようなペプチドに結合する化合物の有利な点は、ＵＶ吸収化合物に限定されないということが、当業者には明らかである。例えば、ビタミンＣ及びビタミンＥのようなビタミンは、酸化防止剤として、美容用の調製品中に通常添加される。それらは、人体に危険を及ぼすことはないが、そのようなビタミンが皮膚を通して拡散する場合にその機能は減少する。また、そのような化合物は、例えばゼラチンに有利に結合する。
【００７０】
本発明の美容用組成物には、ＵＶ吸収ポリペプチドに加えて、通常、このタイプの美容用組成物に含まれる、例えば、水和剤（hydrating agents）、皮膚軟化剤又は増粘剤、界面活性剤、保存料、香料、染料などの多様なアジュバントを含むことができる。
【００７１】
ある実施態様においては、担体分子は、ポリペプチドであることが好ましく、水溶性である。水溶性のＵＶ吸収高分子化合物を使用することにより、有機溶媒の使用は避けることができるか又は最小限に抑えることができる。そのような溶媒は、皮膚過敏症のような免疫反応を誘発する他に、角質層の層状の細胞間脂質バリアを通して有害物質の運搬を促進することにより、皮膚浸透を増加させることもある。ＵＶ吸収ポリペプチド複合体を含む独創的な美容用組成物の使用は、オイル又はアルコールの使用を廃れさせ、そのような物質に対する又は低下した皮膚のバリア機能に対する免疫反応などの不要な影響を妨げるのに役立つことさえある。よって、ＵＶ吸収ポリペプチド複合体を含む独創的な美容用組成物は、これに限定されることはないが、ヒドロゲルなどの脂分のない組成物として、使用されることが好ましい。
【００７２】
ある態様においては、本発明は、１８重量％未満、好ましくは１３重量％未満、さらに好ましくは１０重量％未満の本発明のＵＶ吸収複合体を含むサンスクリーン組成物に関する。
【実施例１】
【００７３】
ゼラチンに対するＵＶ−３のカップリング。
【００７４】
まず、ＵＶ−３のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルを、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１２０ｍｌ中の４．０７ｇのＵＶ−３に、１．３８ｇのＮＨＳ及び２．４５ｇのジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を混合することにより調製する。２４時間後、形成されたＤＣＵを濾過しＴＨＦを蒸発する。得られた未精製のＮＨＳエステルを、シクロヘキサン／トルエンから晶析により精製し、濾過し、乾燥する。最終収率は８８％である。
【００７５】
ゼラチンに対するカップリングは、ＤＭＳＯ中で行なわれる。２ｇの石灰骨ゼラチン（limed bone gelatin）を、５０℃で４０ｍｌのＤＭＳＯ中に溶解する。ＵＶ−３のＮＨＳエステルを０．２６ｇ添加する。その混合液を１０時間撹拌し、冷却した酢酸エチル中で沈殿させる。濾過後、酢酸エチルおよびアセトンで洗浄し、ＵＶ−ゼラチンを乾燥する。ゼラチン架橋及び非カップリングＵＶ−３が存在しないことを、ゲル透過クロマトグラフィーで確認する。ゼラチンにカップリングしたＵＶ−３の負荷は、紫外可視分光光度法（ＵＶ−vis spectrophotometry）で測定したように、０．２６ｍｍｏｌ／ｇゼラチンである。
【実施例２】
【００７６】
ゼラチンに対するＵＶ−１０のカップリング。
【００７７】
ＵＶ−１０のＮＨＳエステルは、ＴＨＦ１２０ｍｌ中の２．２６ｇのＵＶ−１０、１．３８ｇのＮＨＳ及び２．４５ｇのＤＣＣを混合することより調製した。ＤＣＵの濾過及びＴＨＦの蒸発後、未精製のＵＶ−３のＮＨＳエステルを得る。生成物を、温tert-ブチルメチルエーテルで洗浄することによりさらに精製する。最終収率は９５％である。
【００７８】
ゼラチンに対するカップリング： ９ｇの石灰骨ゼラチンを、５５℃で８１ｇの水に溶解する。１Ｍの水酸化ナトリウムでｐＨを７に調整する。その後、ＴＨＦ１０ｍｌ中に０．５ｇのＵＶ−１０のＮＨＳエステルを溶解した水溶液を添加し、１Ｍの水酸化ナトリウムでｐＨを７に維持しながら、反応混合物を４時間撹拌する。濾過後、１０ｋＤ透析膜を使用してＵＶゼラチンを水に対して４０℃で４８時間透析する。ゼラチン架橋及び非カップリングＵＶ−１０が存在しないことを、ゲル透過クロマトグラフィーで確認する。ＵＶ−１０の負荷は、紫外可視分光光度法で測定したように、０．０８ｍｍｏｌ／ｇゼラチンである。
【実施例３】
【００７９】
ゼラチンに対するＵＶ−２１のカップリング。
【００８０】
ＵＶ−２１のＮＨＳエステルは、ＴＨＦ１２０ｍｌ中に３．７１ｇのＵＶ−２１、１．３８ｇのＮＨＳ及び２．４５ｇのＤＣＣを混合することより調製する。ＤＣＵの濾過及びＴＨＦの蒸発後、未精製のＵＶ−２１のＮＨＳエステルを得る。生成物を、トルエン／シクロヘキサン中で晶析により更に精製する。最終収率は７６％である。
【００８１】
ゼラチンに対するカップリング： ９ｇの石灰骨ゼラチンを、５５℃で８１ｇの水に溶解する。１Ｍの水酸化ナトリウムでｐＨを７に調整する。その後、ＴＨＦ１０ｍｌ中に０．７３ｇのＵＶ−２１のＮＨＳエステルを添加し、１Ｍの水酸化ナトリウムでｐＨを７に維持しながら、反応混合物を４時間撹拌する。濾過後、１０ｋＤ透析膜を使用してＵＶゼラチンを水に対して４０℃で４８時間透析する。ゼラチン架橋及び非カップリングＵＶ−２１が存在しないことを、ゲル透過クロマトグラフィーで確認する。カップリングしたＵＶ−２１の負荷は、紫外可視分光光度法で測定したように、０．１０ｍｍｏｌ／ｇゼラチンである。
【実施例４】
【００８２】
ゼラチン１ｇあたり０．１ミリｍｏｌのＵＶ−２１の負荷を有するＵＶ−２１ゼラチン複合物によるＵＶ−Ａの防御。
【００８３】
正常な皮膚III型（中程度の日焼け、徐々なる日焼け）又はIV型（最小の日焼け、上手な日焼け）を有するボランティアの被験者に対して実験を行う。被験者は、光過敏症（photo-sensitivity）の病歴がなく、計画的な薬物療法を受けておらず、実験の前の６週間は直射日光に曝されていない。
【００８４】
５×１０ｃｍの２カ所の被験部位において、各被験部位を６つのサブ部位に分割し、被験者の背中のウエストライン及び肩甲骨の間に印を付ける。被験部位の１カ所では処理を行なわず、無防御の状態にする。別の１カ所の被験部位においては、１００ｍｇのサンスクリーン製品を皮膚に均一に塗布し、ＵＶ吸収化合物の量が１ｍ２あたり約１ｍｇになるように使用する。ＵＶ−２１ゼラチン化合物の場合、その使用量は、この場合も１ｍｇ／ｍ２の結合したＵＶ−２１が使用されている。塗布したサンスクリーンを１５分間乾燥する。
【００８５】
６線量のＵＶ−Ａ放射線を、エネルギーを増大させながらUV-A Sellas Sun 2000を用いて各被験部位に照射する（照射量は、３０ｃｍで、約５０ミリワット／ｃｍ２）。使用する線量は、３３〜８ジュール／ｃｍ２であり、各々の照射線量を２５％ずつ減少させながら、ランダムに６つのサブ部位に照射した。
【００８６】
各被験部位のＭＰＤ（最少色素量：minimal pigmenting dose）を、照射３時間後に視覚的に測定する。ＭＰＤは、最初の明白な色素反応を引き起こすのに必要な照射エネルギー量として定義する。
【００８７】
ＳＰＦ（日焼け防止指数）は、防御していない皮膚のＭＰＤ及び防御した皮膚のＭＰＤの指数として算出する。
【００８８】
結果を、下記の表にまとめた。
【００８９】
【表１】
【００９０】
上記結果により、本発明のＵＶ−２１ゼラチン複合体は、ＵＶ−Ａ放射線に対する優れた防御性を提供することを示している。ゼラチンに結合したＵＶ−２１のＵＶ照射下での安定性が高いために、遊離型のＵＶ−２１よりも良い結果を示している。
【実施例５】
【００９１】
キセノン実験状況下での色素安定性； キセノン照射後のＵＶ吸収。
【００９２】
測定は、アトラス・ウエザオメータＣｉ４０００（Atlas Electric Devices Company製のCi 4000 Xenon Weather-Ometer）で行う。吸光波長スペクトルは太陽光スペクトルを表わす。実験は、ＴＡＣ基材に被膜したＵＶ吸収複合体の薄層からなるサンプルで行なわれ、キセノン放射を行う前に空気中で乾燥する。
【００９３】
ＴＡＣシート材に被膜する液剤は、適当な溶媒（水とエタノール比率が５０：５０）中において、４０℃で３０分間ＵＶ−ゼラチンの５％ゼラチン溶液を作製することにより調製する。
【００９４】
ＵＶ吸収複合体の固定濃度を、５＊１０−３Ｍｏｌ／Ｌとした。
【００９５】
サンプルのＵＶ吸収は、標準ＵＶ分光光度計システムで測定する。ＵＶ吸収は、キセノン処理後のサンプルにおける機能分子の数に直接的に相互関連する。その結果を以下の表２に記載する。
【００９６】
キセノン放射後のＵＶ吸収（放射時間）。
【００９７】
【表２】
【実施例６】
【００９８】
ＵＶ−２１の皮膚への浸透の深さ。
【００９９】
Ａ／呈色反応
必須条件は特異的検出法を用いることであり、特定のサンスクリーン成分の存在を視覚化するために使用することができる。ＵＶ−２１の場合には、波長３５０ｎｍの放射線下でその分子の蛍光機能の存在を有利に利用できる。
【０１００】
Ｂ／皮膚浸透
皮膚浸透の調査を、以下に記載する調製物を使用して行った。
１．クレモラセトマクロゴールＦＮＡ（cremor cetomacrogolis ＦＮＡ） （ＣＭＣ）中、ＵＶ−２１（１％）
２．ＣＭＣ中、ＵＶ２１ゼラチン（低分子量画分、＜５ｋＤ）（１０〜２０％）
３．ＣＭＣ中、ＵＶ２１ゼラチン（高分子量画分、＞５ｋＤ）（１０〜２０％）
４．ＣＭＣ中、カテコール（１％）（浸透マーカーとして）
調製物を、３人のボランティア被験者の皮膚（臀部）に塗布した。浸透時間は、３０分、１時間、３時間であった。各浸透時間の後、局部麻酔後に生検（４ｍｍ）を行った。生検材料は、液体窒素内で凍結し、更なる分析のために保存した。
【０１０１】
顕微鏡観察
生検材料を、連続した８μｍの厚さに切断した。スライスは、標準の方法に適合するように切断した。浸透の深さは、蛍光光学顕微鏡下で視覚的に測定し、下記の表３に記載の通り、浸透した表皮の割合で示した。
【０１０２】
【表３】
【実施例７】
【０１０３】
ジエチルアミノ基で修飾したカルボン酸を介した、ゼラチンに対するＵＶ−Ｃ１のカップリング。
【０１０４】
ＵＶ−Ｃ１のＮＨＳエステルを、次に記載の方法により調製する。
【０１０５】
水１００ｍｌ及びアセトニトリル３００ｍｌ中における２０ｇのＵＶ−Ｃ１に、１０．２ｇの水酸化ナトリウムを添加した。７０℃に加熱後、反応混合物を２時間撹拌した。溶媒を真空蒸発後、水３００ｍｌを添加し、続いて１５．４ｇのイソニペコチン酸を添加した。反応混合物は８０℃で６時間加熱した。室温に冷却後、１ＭのＨＣｌをｐＨ２になるまで添加した。その後、混合物を酢酸エチルで２回抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。この中間体は、溶媒の蒸発及びそれに続くヘプタンによる共蒸発で単離した。
【０１０６】
以下のように、ＮＨＳエステルを中間体から調製した。ＴＨＦ１２０ｍｌ中に溶解した１２ｇの中間体に、３．５１ｇのＮ−ヒドロキシサクシンイミドを添加した。この混合液に、ＴＨＦ５０ｍｌ中に６．２８ｇのジシクロヘキシルカルボジイミドが溶解した溶液を滴下により添加した。２時間後、生成した沈殿物を濾過し、母液を蒸発させた。粗生成物を酢酸エチルに溶解し、水及びブラインで洗浄した。溶媒を蒸発後、乾燥したＮＨＳエステルを単離した。状況に応じて、温エタノール中で撹拌することにより生成物をさらに精製できる。
【０１０７】
ゼラチンに対するカップリング
その後、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中、単離したＮＨＳエステルを加水分解した石灰骨ゼラチン（ゲル透過クロマトグラフィーで測定した平均分子量は２１ｋＤ）に添加する。５５℃で１２時間撹拌後、それに続く酢酸エチル中の沈殿物によりゼラチンを単離し、濾過し、アセトンで洗浄し、乾燥する。得られたゼラチンは、３７ｍｍｏｌ／１００ｇの負荷を有し、３７５ｎｍで２８ａ．ｕ．／ｇＬのＵＶ吸収作用を有する。
【実施例８】
【０１０８】
ジエチルアミノ基で修飾したカルボン酸を介したＵＶ−Ｃ１のゼラチンに対するカップリング。
【０１０９】
ＵＶ−Ｃ１で修飾したゼラチンを、最終の負荷が４ｍｍｏｌ／１００ｇのゼラチン及び３７５ｎｍで３ａ．ｕ．／ｇＬのＵＶ吸収作用を有するように実施例７に記載した方法で調製する。
【実施例９】
【０１１０】
ジエチルアミノ基で修飾したカルボン酸を介したＵＶ−Ｃ１のリジンスペーサを介したゼラチンに対するカップリング。
【０１１１】
ＵＶ−Ｃ１のＮＨＳエステルを実施例７に記載した方法により調製する。以後、２つのＵＶ−Ｃ１のＮＨＳエステルを、以下の反応により、リジンにカップリングする。
【０１１２】
ＤＭＳＯ７０ｍｌ中の１．１７ｇのリジン・Ｈ２Ｏに、ＤＭＳＯ２０ｍｌ中の７ｇのＵＶ−Ｃ１のＮＨＳエステルを添加した。混合液を周辺温度で１０時間、続いて５０℃で２時間撹拌し、ジクロロメタン２００ｍｌを添加し、混合液を水で３回洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発後、リジンに対する６．５ｇの二重付加物を得た。得られた生成物の遊離型のカルボン酸基を、以下の反応を用いて、ＮＨＳエステルに変換した。
【０１１３】
ジクロロメタン１２０ｍｌ中のリジンに対する６．５ｇの二重ＵＶ−Ｃ１付加物を、１．２ｇのＮ−ヒドロキシサクシンイミド及びゼラチンにカップリングした２．１ｇのＥＤＣＩに添加した。反応混合液を室温で４時間撹拌した。その生成物を精製し、その後続いて水で洗浄し、乾燥し、溶媒蒸発により単離した。
【０１１４】
リジンに対する二重ＵＶ−Ｃ１付加物のＮＨＳエステルをゼラチンにカップリングすることは、実施例７に記載した方法と同じ方法で起こる。
【０１１５】
得られたＵＶ吸収ゼラチンは、実施例７で得られたサンプルよりもさらに高い吸収作用さえ示す（５８ｍｍｏｌ／１００ｇ、３７５ｎｍで４４ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ）。
【実施例１０】
【０１１６】
アミノブタジエンゼラチンの皮膚への浸透の深さ。
【０１１７】
Ａ／呈色反応
必須条件は特異的検出法を用いることであり、特定のサンスクリーン成分の存在を視覚化するために使用することができる。アミノブタジエンＵＶ−Ｃ１の場合には、波長３５０ｎｍの放射線下でその分子の蛍光機能の存在を有利に利用できる。
【０１１８】
Ｂ／皮膚浸透
皮膚浸透の調査を、以下に記載する調製物を使用して行った。
１．クレモラセトマクロゴールＦＮＡ（cremor cetomacrogolis ＦＮＡ） （ＣＭＣ）中、アミノブタジエンＵＶ−Ｃ１（１％）
２．ＣＭＣ中、アミノブタジエン（ＵＶ−Ｃ１）ゼラチン（低分子量画分）（１０〜２０％）
３．ＣＭＣ中、アミノブタジエン（ＵＶ−Ｃ１）ゼラチン（高分子量画分）（１０〜２０％）
４．ＣＭＣ中、カテコール（１％）（浸透マーカーとして）
調製物を、３人のボランティア被験者の皮膚（臀部）に塗布した。浸透時間は１０時間であった。１０時間後、局部麻酔後に生検（４ｍｍ）を行った。生検材料は、液体窒素内で凍結し、更なる分析のために保存した。
【０１１９】
顕微鏡観察
生検材料は、連続した８μｍの厚さに切断した。スライスは、標準の方法に適合するように切断した。浸透の深さは、蛍光光学顕微鏡下で視覚的に測定し、下記の通り示した。
【０１２０】
【表４】
【０１２１】
５ｋＤｗを超えるＭＷを有するゼラチンにカップリングしたアミノブタジエンは、表皮に浸透しないが、一方５ｋＤｗ未満の分子量を有するゼラチンにカップリングしたアミノブタジエンは、限られた範囲内で浸透する、ということはこれらのデータから明らかである。非カップリングのアミノブタジエンは、最強度の表皮浸透を示した。
【実施例１１】
【０１２２】
サンスクリーン製剤（formulation）に使用するＵＶゼラチンの安定性及び粘着性。
【０１２３】
実施例７〜９で得られたアミノブタジエンゼラチンを、３７５ｎｍでの吸収作用が各サンスクリーン製剤と同じ値になる濃度で、許容できるサンスクリーン製剤に使用した。
各サンプルの安定性を観察し、粘着性を測定した。サンプルの安定性及び粘着性を、コントロールサンスクリーン製剤と比較した。
【０１２４】
【表５】
【０１２５】
本実施例では、本発明のＵＶ吸収複合体は、充分なＵＶ吸収作用を提供し、そのエマルジョンの粘着性に有害な影響がない安定的なサンスクリーン製剤を提供するということを明瞭に示した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紫外線放射（UV radiation）及びその有害な影響から防御するための新規な美容用組成物に関する。さらに、本発明は、サンスクリーン組成物等において特に有用なＵＶ吸収複合体に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＵＶ光に皮膚を曝すことによる有害な影響は、多種多様であり、先行技術に詳しく記載されている。２９０〜３１５ｎｍの波長を有するＵＶ−Ｂ放射線が紅斑や日焼けを引き起こすことは、長い間認識されてきた。３１５〜４００ｎｍの波長を有するＵＶ−Ａが、光毒性及び光化学の反応を引き起こすことは１９８０年頃まで発見されていなかった。
【０００３】
約７０％のＵＶ−Ｂ放射線は外皮や角質層によって遮蔽されるが、ＵＶ−Ａ放射線の場合は異なり、のちに皮膚の奥深くまで透過する。よく知られているＵＶ−Ａの有害な影響は、酸化ストレスである。ＵＶ−Ａ放射線によって形成されるスーパーオキシドは、皮膚の線維芽細胞中に存在する鉄蓄積タンパク質であるフェリチンから鉄を放出する（Pourzand et al, Proc. Natl, Acad, Sci.USA, June 1999, Vol 96, p.6751-56）。極めて有害なヒドロキシル・ラジカルや過酸化水素の生成をもたらすフェントン反応やハーバー・ウェイス反応における鉄の役割はよく知られている。また、銅イオンのような他の金属イオンは、酸素ラジカルを形成する触媒になると報告されている。ＤＮＡを損傷するこれらの有害な生成物の役割は、例えばSestili et al により述べられているようによく知られている（Free Radical Bioligy & Medicine [US], July 15 1998, 25, [2] p.196-200）。
【０００４】
スーパーオキシドジスムターゼのような酵素による典型的な生化学的防御は、ＵＶ−Ａ放射線により引き起こされる反応を効果的に阻止するには充分ではない。従って、これらの有害な影響から皮膚を防御する必要性はいまだに欠かすことはできない。他の酸化ストレス現象は、例えば皮膚の老化や白斑の促進をもたらすコラーゲンの損傷であり、脂質過酸化反応による細胞壁の損傷である。
【０００５】
サンスクリーン用の有機ＵＶ吸収剤の使用は広く知られている。
【０００６】
有機ＵＶ吸収化合物の不利な点は、その水溶性が低いことである。よって、ヒドロゲルのような水性の化粧品における使用には不適当であり、一般的に好ましくない副作用を発現する有機溶媒の使用が必要となる。脂溶性のＵＶ吸収化合物は、有機溶媒と組み合わせて使用する使用しないに拘わらず、血中に入る危険性を伴って、いわゆる角質層を通り抜けることが可能である。
【０００７】
ＵＶ吸収化合物のさらに不利な点は、ＵＶ光の下で不安定なことである。ＵＶ照射は、光化学反応を引き起こしてＵＶ吸収化合物を破壊し、その結果、紫外線放射に対する防御を低減させる。
【０００８】
特許文献ＵＳ４８３９１６０ には、Ｃ４〜Ｃ１２のアルコキシ鎖を有するベンジリデンボルナノンユニット（benzylidenbornanone units）のポリマーからなる、紫外線放射から皮膚を防御するための化粧品の処方が開示されている。この方法では、複合体の親水性を高めることにはならない。皮膚を通り抜けた浸透の影響が記載されているが、疎水性を高めることは、その逆ではなく、角質層の脂質成分を介して流動性を高めることになるであろう。
【０００９】
不溶性粒子を実質的に形成し、酸素原子や窒素原子を介してＵＶ−Ａ及びＵＶ−Ｂ吸収化合物をポリアクリル酸にカップリングすることは、特許文献ＷＯ０１０８６４７に記載されており、a−極性化合物（a-polar compounds）を取り込んで屈折率を望ましい傾向に適合するように特異的に設計された分子複合体をもたらす。しかしながら、油性の化合物との混合では、不要な免疫原性反応を引き起こす可能性がある、より小さな分子量（ＭＷ）の複合体の場合に、皮膚浸透の危険性を伴う。
【００１０】
生体ポリマーにカップリングする少なくとも１つのフラボノイドを含むＵＶ吸収複合体の使用は、特許文献ＷＯ０３００４０６１に記載されている。しかしながら、これらの複合材料にはいくつかの不利な点がある。この特許文献に記載されたカップリング方法では、試薬として極めて有毒な物質であるホルムアルデヒドを使用しており、激しい皮膚炎症が引き起こされる。さらに、このホルムアルデヒドのカップリング法では、回避困難なポリペプチドの架橋がもたらされる。また、ホルムアルデヒドを介したフラボノイドのカップリングから得られる複合体の安定性については、キセノンの輻射条件の下での安定性実験により明らかになったように、改善の余地が残されている（実施例５参照）。最後に、フラボノイドＵＶ吸収化合物は可視光線を吸収し、この吸収作用により、美容用に使用するサンスクリーンの材料にとっては好ましくない黄色に染まる。
【００１１】
特許文献ＥＰ１１７２３９９ には、有機化合物を少なくとも１つの活性アミノ基を有するポリマーにカップリングする方法が開示されている。この特許では、サンスクリーン用の合成材料の使用については言及していない。
【００１２】
特許文献ＵＳ５４０３９４４には、ＵＶ吸収基を有する有機ポリシロキサンポリマーが開示されている。
【００１３】
特許文献ＪＰ３１６１７４２ には、ゼラチンと結合したＵＶ吸収剤が、写真感光材料で使用するために開示されている。美容用の使用には言及していない。
【００１４】
上記のような試みにもかかわらず、アレルギー性や免疫原性の危険性を示さず、皮膚からの浸透も示さず、可視光放射線に対して充分に透明であるとはいうものの、放射線を遮蔽することにより日光に対し直接的で充分な防御を提供するＵＶフィルターの必要性はなおも存在する。
【特許文献１】ＷＯ０１０８６４７
【特許文献２】ＷＯ０３００４０６１
【特許文献３】ＥＰ１１７２３９９
【特許文献４】ＵＳ５４０３９４４
【特許文献５】ＪＰ３１６１７４２
【非特許文献１】Pourzand et al, Proc. Natl, Acad, Sci.USA, June 1999, Vol 96, p.6751-56
【非特許文献２】Free Radical Bioligy & Medicine [US], July 15 1998, 25, [2] p.196-200
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、新規なＵＶ吸収美容用組成物を提供することにある。
【００１６】
さらに、本発明の目的は、ＵＶ光の下で破壊に対しての安定性が高く、高濃度で使用可能な、ＵＶ吸収高分子化合物を含む美容用組成物を提供することにある。
【００１７】
また、本発明の目的は、新規で、極めて効果的なＵＶ吸収高分子化合物を提供することにある。
【００１８】
さらに、本発明の目的は、粘着性及び／又は安定性の問題が生じることなく、簡単にサンスクリーン組成物に製剤化可能なＵＶ吸収高分子化合物を提供することにある。
【００１９】
他に、本発明の目的は、可視光の領域において透明であるＵＶ吸収高分子化合物を含む新規の美容用組成物を提供することにある。
【００２０】
他に、本発明の目的は、皮膚からの浸透を防御し、少なくとも充分に防御し、その後に免疫原性又はアレルギー性副作用の危険性を低減するＵＶ吸収高分子化合物を含む美容用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明は、美容上及び皮膚科的に許容できる担体及びＵＶ吸収化合物を含む、フラボノイドではなく、担体分子としてポリペプチドに共有結合している、紫外線放射から防御するための美容用組成物によって、これらのすべての目的に到達し得るという驚くべき見識に基づくものである。
【００２２】
ＵＶ吸収化合物は、好ましくは広帯域のＵＶ吸収分子又はＵＶ−Ａ吸収分子であり、さらに好ましくは、ＵＶ吸収化合物が、ケイ皮酸、ヒドロキシベンゾフェノン、ヒドロキシフェニルベンゾトリアゾール若しくはアミノブタジエン、又はこれらの組合せである。
【００２３】
ＵＶ吸収複合体、すなわち担体分子に結合したＵＶ吸収化合物のＵＶ吸収作用は、例えば、その化合物の粘着性や（エマルジョンの）安定性に関連したサンスクリーン組成物の製剤に有害な影響を与えずに、ＵＶ−Ａ放射線に対して充分な防御を提供するために、できるだけ高度にすべきであると理解されている。
【００２４】
意外にも、化学式Ａのアミノブタジエンを適当な担体にカップリングすることにより、予想外に高度で効果的なＵＶ吸収作用有するＵＶ吸収複合体が、得られるということを見い出した。
【００２５】
よって、本発明はＵＶ吸収複合体にも関連し、該複合体は、担体分子が一般式（Ａ）で表されるアミノブタジエンに共有結合している。
【化１】
式中、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なっていてもよく、各々水素原子、１〜２０個の炭素原子を有するアルキル基、又は６〜２０個の炭素原子を有するアリール基を表す。但し、Ｒ１及びＲ２は同時に水素原子ではなく、Ｒ１及びＲ２は一緒になって、環状アミノ基を形成してもよい。
Ｒ１及びＲ２は各々、１又は複数のカルボン酸部分で置換されていてもよく、
Ｒ３は、カルボキシル基、−ＣＯＯＲ５、−ＣＯＲ５又はＳＯ２Ｒ５を表し、Ｒ４は、カルボキシル基、−ＣＯＯＲ６又は−ＣＯＲ６を表す。式中、Ｒ５及びＲ６は、同一又は異なっていてもよく、各々１〜２０個の炭素原子を有するアルキル基、又は６〜２０個の炭素原子を有するアリール基を表す。Ｒ５及びＲ６は一緒になって、１，３−ジオキソシクロヘキサン核、バルビツール酸核、又は２, ４−ジアゾ−１−アルコキシ−３，５−ジオキソシクロヘキセン核を形成してもよい。
【００２６】
さらに、本発明は、本発明によるＵＶ吸収複合物の製造方法に関連し、その方法は、化学式Ａのアミノブタジエンをイソニペコチン酸、又はその等価体に接触させ、得られた生成物を担体分子とカップリングさせることを含む。
【００２７】
また、本発明は、そのような美容用組成物を含有する容器、及び紫外線放射に対し防御するための美容用組成物を調製するためのフラボノイドではなく、ポリペプチドに共有結合している、ＵＶ吸収化合物の使用に関連する。
【発明の効果】
【００２８】
この新規のＵＶ吸収ポリマーは、血流中に流れ出るという深刻な危険性を伴うことなく使用され、免疫反応の危険性や有害な影響を妨げる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
本発明で使用する「ＵＶ吸収化合物」とは、紫外線放射の吸収が可能な分子に関連する。そのようなＵＶ吸収化合物が担体分子に結合する場合は、「ＵＶ吸収複合体」又は「ＵＶ吸収高分子化合物」として言及する。
【００３０】
本発明は、日光に曝されることによる有害な影響からヒトの皮膚や毛髪を防御するために使用できるＵＶ放射線吸収組成物を対象とする。特に、本発明は、皮膚から血流中には侵入しない担体分子に結合した安定的なＵＶ吸収化合物を含む美容用組成物を対象とする。前記ＵＶ吸収複合体の血流中への流出を妨げることで、免疫反応や有害な影響の危険性を低減させる。
【００３１】
少なくとも１つのＵＶ吸収化合物を含み、フラボノイドではなく、担体分子としてポリペプチドに結合しているＵＶ放射線吸収複合体を含有する新規の美容用組成物が意外にも発見され、望ましい特性をすべて発現している。
【００３２】
本発明で使用されているフラボノイド（flavonoid）という用語は、フラバン（flavanes）、フラバノン（flavanones）、及びフラボン（flavones）、並びにそれらの誘導体を含んで理解されることを意味する。
【００３３】
本発明の内容において、ポリペプチドとは、ペプチド結合により結合した少なくとも１５のアミノ酸、好ましくは少なくとも２０のアミノ酸を有する分子を含むと理解され、天然タンパク質、変性タンパク質、合成及び組換えによるタンパク質、ペプチド、糖タンパク、プロテオグリカン、リポタンパク、並びに側鎖として又は鎖中において、生体オリゴマー基やポリペプチド基などの他の基を含むこともある分子を含有する。その最大長は、通常、２０００のアミノ酸を有する。ある実施態様においては、ポリペプチドは、１５〜１０００のアミノ酸、好ましくは３０〜１０００又は１５〜５００のアミノ酸を有する。ポリペプチドは、特にゼラチンタイプにおいては、３０〜５００のアミノ酸を有しており、なるべくなら５０〜５００のアミノ酸又は３０〜３００のアミノ酸を有することが好ましい。
【００３４】
ある実施態様においては、有機ＵＶ吸収化合物には４００ｎｍを超える波長の吸収作用がない。これは有機ＵＶ吸収化合物が可視光では透明であることを意味している。
【００３５】
他の実施態様においては、有機ＵＶ吸収化合物は、３１５〜４００ｎｍのＵＶ−Ａ領域での吸収作用を有する。
【００３６】
別の実施態様においては、ＵＶ吸収複合体の４００ｎｍを超える吸収作用は全吸収作用の１０％未満である。これは、ＵＶ吸収複合体は可視光では実質的に透明であることを意味している。好ましい実施態様においては、ＵＶ吸収複合体の３１５〜４００ｎｍのＵＶ−Ａ領域での吸収作用は全吸収作用の７５％以上である。よって、本発明は、ＵＶ吸収複合体の４００ｎｍを超える吸収作用は２５０〜６００ｎｍの全吸収作用の１０％未満であることを特徴とする美容用組成物に関する。また、本発明は、ＵＶ吸収複合体の３１５〜４００ｎｍの吸収作用は２５０〜６００ｎｍの全吸収作用の少なくとも７５％であることを特徴とする美容用組成物に関する。
【００３７】
好ましい実施態様においては、ＵＶ吸収化合物を、ケイ皮酸（Ｉ）、ヒドロキシベンゾフェノン（II）、ヒドロキシフェニルベンゾトリアゾール（III）、又はアミノブタジエン（IV）のファミリーから選択する。
【化２】
【００３８】
これらの構造には、ＵＶ吸収剤を、ゼラチンのリジンアミノ酸の１級アミン基、又はグルタミン酸及びアスパラギン酸のカルボキシ基に、各々結合するために、少なくとも１つの１級アミン又はカルボン酸のアンカー基が含まれる。カップリング方法の例としては、特に、カルボン酸活性剤を使用してゼラチンのアミン基をカルボン酸で修飾する方法は、特許文献ＥＰ０５７６９１１に記載されている。
【００３９】
さらに好ましい実施態様では、ＵＶ吸収化合物は、以下の１又は複数から選択される。
【化３】
【００４０】
ＵＶ吸収化合物のカップリングは、ポリペプチド架橋の危険性を伴わない方法で行われ、制御されずにＵＶ吸収複合体の分子量（ＭＷ）が増加することが好ましい。特に、ＵＶ吸収化合物のカルボキシ基をカルボジイミド活性剤と反応し、その反応中間体を、担体分子、特に生体ポリマーやポリペプチドにおいてアミノ基と反応するＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルに変換し、その目的とする仕様のＵＶ吸収複合体を得る。
【００４１】
ＵＶ吸収化合物をポリペプチドにカップリングさせる方法として、カルボジイミド活性剤の使用は、その反応中間体をＵＶ吸収剤のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルに変換し、極めて便利である。この方法は、前記ＷＯ０３／００４０６１に記載されているワンポット反応であり、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを簡単に単離及び精製することができ、ゼラチン架橋の危険性が回避できるため、好ましい方法である。下記の反応スキームを参照。
【化４】
【００４２】
ある実施態様においては、担体分子にカップリングしたＵＶ吸収化合物の量は３〜３０重量％である。
【００４３】
他の実施態様においては、ポリペプチドはゼラチン様物質であり、ポリマーのゲル化機能が好ましくない場合には、このゼラチン様物質はアイシングラス（fish gelatin）のこともあり、より大きなポリペプチドが望まれる。
【００４４】
別の実施態様においては、ポリペプチドは加水分解したゼラチンであり、５０ｋＤ未満及び１．５ｋＤを超えるＭＷを有しており、ＵＶ吸収ポリペプチド複合体の皮膚浸透を妨げるのに適切であり、極めて限られたゲル化特性を示すか、又はその特性が全く存在しないこともある。ポリペプチドは３〜３０ｋＤの分子量であることが望ましい。
【００４５】
ポリペプチドに結合するＵＶ吸収分子の数は、いくつかの要因により決定され、その負荷は、１００アミノ酸あたり０．１５〜１５個のＵＶ吸収分子となる。低負荷の場合には、ポリペプチドの量は、必要なＵＶ防御を行なうために皮膚に塗るクリームや（ヒドロ）ゲルなどの形態で、組成物において処方され、過剰に大きな量となる。ポリマーから利用可能なアミン基やカルボキシル基などの遊離型の反応基の数は、主にその上限を決定する。例えば、好ましいポリペプチドであるゼラチンは、１００アミノ酸あたり約５個のＵＶ吸収分子の負荷を負うことができる。ゼラチンを修飾して、利用できる遊離型の反応基の数を増加することも可能である。過剰な負荷は、製剤化の問題を引き起こすこともある。ある実施態様においては、負荷として１００アミノ酸あたり約１〜１０個のＵＶ吸収分子を負うこともできる。
【００４６】
アミノブタジエンＡを適当な担体分子にカップリングすることで、アミノブタジエンＡの吸収作用は予想外に高くなることを見い出した。この担体分子は、３７５ｎｍの波長において、少なくとも５．６ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ（＝１リットルあたり１グラムのＵＶ吸収複合体を含む水溶液の吸収単位）のＵＶ吸収複合体のＵＶ吸収作用を得るために、充分な量を負荷できることが発見されている。この最小限のＵＶ吸収作用は、サンスクリーン製剤の安定性と粘着性におけるあらゆる有害な影響を回避するので、サンスクリーン組成物においてＵＶ吸収複合体が適切に機能するためには好ましい。よって、ある実施態様においては、本発明のＵＶ吸収複合体は、３７５ｎｍで少なくとも５．６ａ．ｕ．／ｇ．ＬのＵＶ吸収作用を有する。本発明のＵＶ吸収複合体は、少なくとも２０ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ、さらに好ましくは、少なくとも２５ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ、さらにより好ましくは、少なくとも３０ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ、最も好ましくは、少なくとも４０ａ．ｕ．／ｇ．ＬのＵＶ吸収作用を有することが好ましい。
【００４７】
本発明のＵＶ吸収複合体におけるアミノブタジエンの一般構造（Ａ）は、修飾されるか又は置換されることもあるが、実質的に同じ基本構造を有し、適当な担体分子にカップリングする場合に高い吸収作用を保持する特性をなおも有する、化学式Ａで表わされる分子に言及するアミノブタジエン（Ａ）のあらゆる等価体を含むと考えられる。そのような等価体は、当業者にとっては簡単に想像することが可能である。アミノブタジエン（Ａ）の等価体の例は米国特許４１９５９９９号から得ることができるが、そこに述べられている等価体には限定されない。
【００４８】
化学式Ａの化合物の内、以下の一般式（Ｂ）により表される化合物は特に好ましい。
【化５】
式中のＲ１、Ｒ２、Ｒ４及びＲ５は一般式（Ａ）と同じ意味を有する。
【００４９】
ある実施態様においては、アミノブタジエンの構造は、以下の構造式を有する。
【化６】
式中のＲ６は一般式（Ａ）と同じ意味を有する。好ましい実施態様においては、Ｒ６はエチルを表わす。以下、Ｒ６がエチルである化合物ＣはＵＶ−Ｃ１と言及する。
【００５０】
構造式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、又は（ＵＶ−Ｃ１）により、上記で表されたアミノブタジエンは、通常の技術を有する者にとって周知の方法を使用して、アミノブタジエンのカルボン酸基を介して適当な担体分子にカップリングすることもできる。アミノブタジエンがカルボン酸基を含まない場合には、そのような基は熟練した当業者にとって周知の方法により導入できる。ある具体的な実施態様においては、アミノブタジエン（Ａ）は、付加的なカルボン酸の機能性を導入するアミノ基（ＮＲ１Ｒ２）の修飾を介してカップリングしている。特にアミノ基は、イソニペコチン酸により置換される。この置換は、担体分子に付加的で効果的なカップリングをし、予想外の高い吸収作用を得るように思われる。よって、アミノブタジエンＡ、Ｂ、Ｃを、アミノブタジエンＵＶ−Ｃ1の好ましい実施態様においては、塩基で処置し、及び得られる生成物をイソニペコチン酸（４−ピペリジンカルボン酸又はヘキサヒドロイソニコチン酸としても知られている）に接触させると、付加的なカルボン酸の機能性が導入され、この機能性は、それ自体周知のカルボン酸機能性を介した適当な担体へのカップリングを含む方法を介して、カップリングされることもある。カップリングの好ましい方法は、活性化エステル、好ましくはＮＨＳエステルを介して、担体のアミン機能性にカップリングする方法である。
【００５１】
付加的なカルボン酸基をアミノブタジエン分子に導入する限り、イソニペコチン酸の代わりに、その等価体が使用されることもある。そのような等価体は一般式（Ｄ）により例示される。
【化７】
式中、Ｒ７及びＲ８は、同一又は異なっていてもよく、各々１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基を表わす。Ｒ８はまた、水素原子を表わすことができる。Ｒ７及びＲ８は一緒になって、環状アミノ基を形成してもよい。アミノブタジエン（Ａ）のアミノ基の３級アミノの特性（tertiary amino character）を損なわずに保持している等価体は、好ましい等価体である。
【００５２】
アミノブタジエン（Ａ）に結合するために使用される担体分子はどのような担体分子でもよく、特に、アミノブタジエン（Ａ）又はその等価体にカップリング可能ならばどのようなポリマーでもよい。カップリングしているアミノブタジエン（Ａ）又はその等価体の量は、少なくとも５．６ａ．ｕ．／ｇ．ＬのＵＶ吸収作用を有する複合体となることが好ましい。美容用組成物、特にサンスクリーン組成物に適当であり、その中に含むことができる担体分子を使用することは好ましい。そのような担体分子は当業者には周知である。
【００５３】
ある実施態様においては、担体分子は高分子化合物、好ましくはアミノブタジエンＡにカップリングするための遊離型のアミン基を有する高分子化合物である。
【００５４】
他の実施態様においては、担体分子はポリペプチドである。
【００５５】
ある好ましい実施態様においては、アミノブタジエンＡは、担体１００グラムあたり少なくとも７．６ｍｍｏｌの量で、好ましくは、担体１００グラムあたり少なくとも１５ｍｍｏｌの量で、前記担体分子にカップリングしている。
【００５６】
他の好ましい実施態様においては、ポリペプチドにカップリングしているアミノブタジエンＡの量は、３〜５０重量％である。
【００５７】
水溶性のポリペプチドとして使用することができるゼラチンは、酸若しくは石灰で処理した哺乳類又は冷血動物の皮あるいは骨ゼラチンである。そのようなゼラチンは先行技術においては一般的であり、文献に詳しく記載されている。
【００５８】
また、化学的に修飾された多くのゼラチンは先行技術から周知であり、例えば、トリメリト化（trimellitated）、スクシニル化、アシル化、アルキル化、及びフタル化されたゼナチンなどが挙げられる。修飾されたゼラチンは、皮膚に適用された場合に免疫反応のような有害な反応を引き起こさない限り、有利に使用することができる。スクシニル化されたゼラチンは、例えば、血漿増量剤として適用され、医学的及び免疫学的に許容できるゼラチンである。アルキル化されたゼラチンは、例えばアルキルスクシニル化されたゼラチンについては特許文献ＤＥ１９７２１２３８を参照し、皮膚とポリペプチドの相互作用を変更するために使用することができる。従って、ＵＶ吸収ポリマーの耐水性に影響を及ぼす。よって、本発明のＵＶ吸収複合体と皮膚の相互作用を改善するために、例えばスクシニル基などのアルキル基をＵＶ吸収複合体の担体に追加的にカップリングすることもできる。スクシニル基の代替基は、当業者に容易に知られているか、改善した耐水性を有するという観点においては簡単に同定することができる。よって、ある実施態様においては、上記で述べたように、本発明はＵＶ吸収複合体に関連し、耐水性を改善するために、担体分子はアルキル基を、好ましくはスクシニル基をさらに含む。
【００５９】
遊離型のアミン基の量が増加している修飾したゼラチンを、ゼラチンのＵＶ吸収化合物の負荷を増やすために使用することができる。特許文献ＥＰ０４８７６８６には、カルボキシル基をアミンに変換する方法が記載されている。スペーサーは、ゼラチンのようなポリペプチドの遊離型反応基の量を増加させるために使用することができる。スペーサーは、カルボキシル基やゼラチンのアミン基などのポリペプチドの反応基に共有結合することができる分子であり、前記スペーサー分子はアミン基又はカルボキシル基などの反応基を少なくとも２個含んでおり、よって、利用可能な活性基の量を増加させる。スペーサー分子は、リジン、グルタミン酸又はアスパラギン酸などのアミノ酸により例示されるが、このような構造に限定されない。例えば、よく知られているように、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の活性化エステルは、カルボキシル基や１級アミンなどの官能基のペプチド結合を形成するために使用できる（Anderson et al., 1964, J. Am. Chez. Soc. 86: 1839-1842, US 5,366, 958）。ＮＨＳは、ゼラチンのそれらに付加するＮＨＳと官能基（例、ジヒドロキシ安息香酸又はその類似体）でエステル結合を形成することにより、活性化される。活性化したＮＨＳエステルをゼラチンのアミノ基にカップリングすることは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドが遊離する一方で、化学的に修飾されたゼラチンを生成する。他の実施態様としては、官能基はリジンにカップリングすることができ、修飾したリジンのカルボキシル基はその後ＮＨＳにより活性化し、ゼラチンにカップリングすることができる。あるいは、リジンは側鎖としてゼラチンに結合し、その２個のアミノ基は、フラボノイド分子ではないＵＶ吸収分子を結合するために使用できる。
【００６０】
その抗原性及び免疫原性が低いという理由により、ゼラチン又はコラーゲンが好ましいが、カゼイン、セリシン、可溶性コラーゲンなどの遊離型のアミノ基を有する他のポリペプチドも使用することができる。免疫反応をさらに避けたいならば、例えば、（自己）免疫疾患に苦しむ患者の場合、ヘリックス形成を不可能とするゼラチンは有利に使用できる。これは、ヘリックス形成を減少させるためには、化学的にゼラチンを修飾することにより、又は、好ましくは、特許文献ＥＰ１０６３６６５に記載されている組換え技術で生成されたゼラチンを使用することにより、達成が可能となる。そのような組換えゼラチンは、ペプチドバックボーンにおいてプロリンを欠失することもあり、又はヒドロキシプロリンの水酸化を低減するか、妨げるか、若しくは避けることができる。そのような組換えゼラチンは、免疫反応を誘発する可能性がほとんどないため修飾されたゼラチンとして好ましい。
【００６１】
ヒドロキシプロリンを全く又はほとんど有していないゼラチンの更なる有利な点は、そのようなゼラチンはゲル化温度が低いか、又は全くゲル化しないということである。ゲル化がほとんどないか又は全くない場合には、その担体分子が美容用の使用におけるゼラチンポリマーであるＵＶ吸収複合体を広い濃度領域で使用することができる。その観点から、また、冷水に生息する生物由来のゼラチンは、天然に低含有量のヒドロキシプロリンを有しているためゲル化温度、及び免疫原性又は抗原性が低く、有利に使用することができる。
【００６２】
皮膚への浸透の深さは、血中へ入ることを妨げるゼラチンの分子量をコントロールすることにより、有利に調節することができる。先行技術としてのＵＶ吸収化合物の使用では、皮膚浸透を調節する方法が含まれず、皮膚浸透は自由に行なわれる。本発明では、皮膚への浸透は妨げられる。
【００６３】
２００ｋＤを超える高分子量のゼラチンはあまり好ましくない。従来の天然又は修飾されたゼラチンの分子量は、例えば、加水分解又はゼラチンの酵素による分解で調節することができる。目的とする平均分子量は充分に調節可能であるが、分子量分布の広さについては難しい。ゼラチンの分解後、過小なポリペプチド（＜＝３ｋＤ）又は過大なタンパク鎖は、限外濾過、透析、ヌードル洗浄（noodle washing）などの周知の技術により、取り除くことができる。組換え型のゼラチンには、分子量及び分布を正確に調節できるという更なる有利な点がある。皮膚浸透を調節する別の方法は、親水基又は疎水基をタンパク質又はポリペプチドに共有結合させ、そのタンパク質又はポリペプチドを化学的に修飾することにより、そのタンパク質又はポリペプチドの疎水性を調整することである。よって、本発明のある実施態様においては、ポリペプチドは、ＤＮＡ組換え技術により生成されたコラーゲン又はゼラチンである。
【００６４】
有利なことには、担体分子にカップリングした場合に、ＵＶ吸収化合物はさらに安定的であることが発見された。光に曝された場合、ＵＶ吸収化合物の劣化や分解の割合は減少する。
【００６５】
ＵＶ吸収複合体は、紫外線放射から皮膚や毛髪を防御するための美容用組成物又はサンスクリーン組成物を調製するために有利に使用することができる。
【００６６】
ＵＶ吸収化合物を含む皮膚防御のための美容用組成物は、ローション、エマルジョン、クリーム、乳液、ジェルなどの多様な形態で市販されている。これらには、オイル及び／又はアルコールが含まれることもある。また、エアロゾル又はスティックの使用も知られている。美容用組成物のそのようなあらゆる形態は、本発明のＵＶ吸収複合体を使用するための手段として機能する。
【００６７】
当業者は、本発明のサンスクリーン組成物で使用することができる、特にＵＶ吸収化合物とポリペプチドとの組合せで、さらに特別にはアミノブタジエンＡが結合している適当な美容上及び皮膚科的な担体を選択することができる。
【００６８】
サンスクリーン組成物は、第二の従来型ＵＶ吸収化合物を含むこともある。これは、例えば特許文献ＥＰ１０５５４１２に記載されているように、ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ、又は広帯域のＵＶ吸収化合物のことでもある。技術的に使用されるような他の添加剤もまた、使用することができる。
【００６９】
担体分子、特に、ゼラチンのようなペプチドに結合する化合物の有利な点は、ＵＶ吸収化合物に限定されないということが、当業者には明らかである。例えば、ビタミンＣ及びビタミンＥのようなビタミンは、酸化防止剤として、美容用の調製品中に通常添加される。それらは、人体に危険を及ぼすことはないが、そのようなビタミンが皮膚を通して拡散する場合にその機能は減少する。また、そのような化合物は、例えばゼラチンに有利に結合する。
【００７０】
本発明の美容用組成物には、ＵＶ吸収ポリペプチドに加えて、通常、このタイプの美容用組成物に含まれる、例えば、水和剤（hydrating agents）、皮膚軟化剤又は増粘剤、界面活性剤、保存料、香料、染料などの多様なアジュバントを含むことができる。
【００７１】
ある実施態様においては、担体分子は、ポリペプチドであることが好ましく、水溶性である。水溶性のＵＶ吸収高分子化合物を使用することにより、有機溶媒の使用は避けることができるか又は最小限に抑えることができる。そのような溶媒は、皮膚過敏症のような免疫反応を誘発する他に、角質層の層状の細胞間脂質バリアを通して有害物質の運搬を促進することにより、皮膚浸透を増加させることもある。ＵＶ吸収ポリペプチド複合体を含む独創的な美容用組成物の使用は、オイル又はアルコールの使用を廃れさせ、そのような物質に対する又は低下した皮膚のバリア機能に対する免疫反応などの不要な影響を妨げるのに役立つことさえある。よって、ＵＶ吸収ポリペプチド複合体を含む独創的な美容用組成物は、これに限定されることはないが、ヒドロゲルなどの脂分のない組成物として、使用されることが好ましい。
【００７２】
ある態様においては、本発明は、１８重量％未満、好ましくは１３重量％未満、さらに好ましくは１０重量％未満の本発明のＵＶ吸収複合体を含むサンスクリーン組成物に関する。
【実施例１】
【００７３】
ゼラチンに対するＵＶ−３のカップリング。
【００７４】
まず、ＵＶ−３のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルを、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１２０ｍｌ中の４．０７ｇのＵＶ−３に、１．３８ｇのＮＨＳ及び２．４５ｇのジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を混合することにより調製する。２４時間後、形成されたＤＣＵを濾過しＴＨＦを蒸発する。得られた未精製のＮＨＳエステルを、シクロヘキサン／トルエンから晶析により精製し、濾過し、乾燥する。最終収率は８８％である。
【００７５】
ゼラチンに対するカップリングは、ＤＭＳＯ中で行なわれる。２ｇの石灰骨ゼラチン（limed bone gelatin）を、５０℃で４０ｍｌのＤＭＳＯ中に溶解する。ＵＶ−３のＮＨＳエステルを０．２６ｇ添加する。その混合液を１０時間撹拌し、冷却した酢酸エチル中で沈殿させる。濾過後、酢酸エチルおよびアセトンで洗浄し、ＵＶ−ゼラチンを乾燥する。ゼラチン架橋及び非カップリングＵＶ−３が存在しないことを、ゲル透過クロマトグラフィーで確認する。ゼラチンにカップリングしたＵＶ−３の負荷は、紫外可視分光光度法（ＵＶ−vis spectrophotometry）で測定したように、０．２６ｍｍｏｌ／ｇゼラチンである。
【実施例２】
【００７６】
ゼラチンに対するＵＶ−１０のカップリング。
【００７７】
ＵＶ−１０のＮＨＳエステルは、ＴＨＦ１２０ｍｌ中の２．２６ｇのＵＶ−１０、１．３８ｇのＮＨＳ及び２．４５ｇのＤＣＣを混合することより調製した。ＤＣＵの濾過及びＴＨＦの蒸発後、未精製のＵＶ−３のＮＨＳエステルを得る。生成物を、温tert-ブチルメチルエーテルで洗浄することによりさらに精製する。最終収率は９５％である。
【００７８】
ゼラチンに対するカップリング： ９ｇの石灰骨ゼラチンを、５５℃で８１ｇの水に溶解する。１Ｍの水酸化ナトリウムでｐＨを７に調整する。その後、ＴＨＦ１０ｍｌ中に０．５ｇのＵＶ−１０のＮＨＳエステルを溶解した水溶液を添加し、１Ｍの水酸化ナトリウムでｐＨを７に維持しながら、反応混合物を４時間撹拌する。濾過後、１０ｋＤ透析膜を使用してＵＶゼラチンを水に対して４０℃で４８時間透析する。ゼラチン架橋及び非カップリングＵＶ−１０が存在しないことを、ゲル透過クロマトグラフィーで確認する。ＵＶ−１０の負荷は、紫外可視分光光度法で測定したように、０．０８ｍｍｏｌ／ｇゼラチンである。
【実施例３】
【００７９】
ゼラチンに対するＵＶ−２１のカップリング。
【００８０】
ＵＶ−２１のＮＨＳエステルは、ＴＨＦ１２０ｍｌ中に３．７１ｇのＵＶ−２１、１．３８ｇのＮＨＳ及び２．４５ｇのＤＣＣを混合することより調製する。ＤＣＵの濾過及びＴＨＦの蒸発後、未精製のＵＶ−２１のＮＨＳエステルを得る。生成物を、トルエン／シクロヘキサン中で晶析により更に精製する。最終収率は７６％である。
【００８１】
ゼラチンに対するカップリング： ９ｇの石灰骨ゼラチンを、５５℃で８１ｇの水に溶解する。１Ｍの水酸化ナトリウムでｐＨを７に調整する。その後、ＴＨＦ１０ｍｌ中に０．７３ｇのＵＶ−２１のＮＨＳエステルを添加し、１Ｍの水酸化ナトリウムでｐＨを７に維持しながら、反応混合物を４時間撹拌する。濾過後、１０ｋＤ透析膜を使用してＵＶゼラチンを水に対して４０℃で４８時間透析する。ゼラチン架橋及び非カップリングＵＶ−２１が存在しないことを、ゲル透過クロマトグラフィーで確認する。カップリングしたＵＶ−２１の負荷は、紫外可視分光光度法で測定したように、０．１０ｍｍｏｌ／ｇゼラチンである。
【実施例４】
【００８２】
ゼラチン１ｇあたり０．１ミリｍｏｌのＵＶ−２１の負荷を有するＵＶ−２１ゼラチン複合物によるＵＶ−Ａの防御。
【００８３】
正常な皮膚III型（中程度の日焼け、徐々なる日焼け）又はIV型（最小の日焼け、上手な日焼け）を有するボランティアの被験者に対して実験を行う。被験者は、光過敏症（photo-sensitivity）の病歴がなく、計画的な薬物療法を受けておらず、実験の前の６週間は直射日光に曝されていない。
【００８４】
５×１０ｃｍの２カ所の被験部位において、各被験部位を６つのサブ部位に分割し、被験者の背中のウエストライン及び肩甲骨の間に印を付ける。被験部位の１カ所では処理を行なわず、無防御の状態にする。別の１カ所の被験部位においては、１００ｍｇのサンスクリーン製品を皮膚に均一に塗布し、ＵＶ吸収化合物の量が１ｍ２あたり約１ｍｇになるように使用する。ＵＶ−２１ゼラチン化合物の場合、その使用量は、この場合も１ｍｇ／ｍ２の結合したＵＶ−２１が使用されている。塗布したサンスクリーンを１５分間乾燥する。
【００８５】
６線量のＵＶ−Ａ放射線を、エネルギーを増大させながらUV-A Sellas Sun 2000を用いて各被験部位に照射する（照射量は、３０ｃｍで、約５０ミリワット／ｃｍ２）。使用する線量は、３３〜８ジュール／ｃｍ２であり、各々の照射線量を２５％ずつ減少させながら、ランダムに６つのサブ部位に照射した。
【００８６】
各被験部位のＭＰＤ（最少色素量：minimal pigmenting dose）を、照射３時間後に視覚的に測定する。ＭＰＤは、最初の明白な色素反応を引き起こすのに必要な照射エネルギー量として定義する。
【００８７】
ＳＰＦ（日焼け防止指数）は、防御していない皮膚のＭＰＤ及び防御した皮膚のＭＰＤの指数として算出する。
【００８８】
結果を、下記の表にまとめた。
【００８９】
【表１】
【００９０】
上記結果により、本発明のＵＶ−２１ゼラチン複合体は、ＵＶ−Ａ放射線に対する優れた防御性を提供することを示している。ゼラチンに結合したＵＶ−２１のＵＶ照射下での安定性が高いために、遊離型のＵＶ−２１よりも良い結果を示している。
【実施例５】
【００９１】
キセノン実験状況下での色素安定性； キセノン照射後のＵＶ吸収。
【００９２】
測定は、アトラス・ウエザオメータＣｉ４０００（Atlas Electric Devices Company製のCi 4000 Xenon Weather-Ometer）で行う。吸光波長スペクトルは太陽光スペクトルを表わす。実験は、ＴＡＣ基材に被膜したＵＶ吸収複合体の薄層からなるサンプルで行なわれ、キセノン放射を行う前に空気中で乾燥する。
【００９３】
ＴＡＣシート材に被膜する液剤は、適当な溶媒（水とエタノール比率が５０：５０）中において、４０℃で３０分間ＵＶ−ゼラチンの５％ゼラチン溶液を作製することにより調製する。
【００９４】
ＵＶ吸収複合体の固定濃度を、５＊１０−３Ｍｏｌ／Ｌとした。
【００９５】
サンプルのＵＶ吸収は、標準ＵＶ分光光度計システムで測定する。ＵＶ吸収は、キセノン処理後のサンプルにおける機能分子の数に直接的に相互関連する。その結果を以下の表２に記載する。
【００９６】
キセノン放射後のＵＶ吸収（放射時間）。
【００９７】
【表２】
【実施例６】
【００９８】
ＵＶ−２１の皮膚への浸透の深さ。
【００９９】
Ａ／呈色反応
必須条件は特異的検出法を用いることであり、特定のサンスクリーン成分の存在を視覚化するために使用することができる。ＵＶ−２１の場合には、波長３５０ｎｍの放射線下でその分子の蛍光機能の存在を有利に利用できる。
【０１００】
Ｂ／皮膚浸透
皮膚浸透の調査を、以下に記載する調製物を使用して行った。
１．クレモラセトマクロゴールＦＮＡ（cremor cetomacrogolis ＦＮＡ） （ＣＭＣ）中、ＵＶ−２１（１％）
２．ＣＭＣ中、ＵＶ２１ゼラチン（低分子量画分、＜５ｋＤ）（１０〜２０％）
３．ＣＭＣ中、ＵＶ２１ゼラチン（高分子量画分、＞５ｋＤ）（１０〜２０％）
４．ＣＭＣ中、カテコール（１％）（浸透マーカーとして）
調製物を、３人のボランティア被験者の皮膚（臀部）に塗布した。浸透時間は、３０分、１時間、３時間であった。各浸透時間の後、局部麻酔後に生検（４ｍｍ）を行った。生検材料は、液体窒素内で凍結し、更なる分析のために保存した。
【０１０１】
顕微鏡観察
生検材料を、連続した８μｍの厚さに切断した。スライスは、標準の方法に適合するように切断した。浸透の深さは、蛍光光学顕微鏡下で視覚的に測定し、下記の表３に記載の通り、浸透した表皮の割合で示した。
【０１０２】
【表３】
【実施例７】
【０１０３】
ジエチルアミノ基で修飾したカルボン酸を介した、ゼラチンに対するＵＶ−Ｃ１のカップリング。
【０１０４】
ＵＶ−Ｃ１のＮＨＳエステルを、次に記載の方法により調製する。
【０１０５】
水１００ｍｌ及びアセトニトリル３００ｍｌ中における２０ｇのＵＶ−Ｃ１に、１０．２ｇの水酸化ナトリウムを添加した。７０℃に加熱後、反応混合物を２時間撹拌した。溶媒を真空蒸発後、水３００ｍｌを添加し、続いて１５．４ｇのイソニペコチン酸を添加した。反応混合物は８０℃で６時間加熱した。室温に冷却後、１ＭのＨＣｌをｐＨ２になるまで添加した。その後、混合物を酢酸エチルで２回抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。この中間体は、溶媒の蒸発及びそれに続くヘプタンによる共蒸発で単離した。
【０１０６】
以下のように、ＮＨＳエステルを中間体から調製した。ＴＨＦ１２０ｍｌ中に溶解した１２ｇの中間体に、３．５１ｇのＮ−ヒドロキシサクシンイミドを添加した。この混合液に、ＴＨＦ５０ｍｌ中に６．２８ｇのジシクロヘキシルカルボジイミドが溶解した溶液を滴下により添加した。２時間後、生成した沈殿物を濾過し、母液を蒸発させた。粗生成物を酢酸エチルに溶解し、水及びブラインで洗浄した。溶媒を蒸発後、乾燥したＮＨＳエステルを単離した。状況に応じて、温エタノール中で撹拌することにより生成物をさらに精製できる。
【０１０７】
ゼラチンに対するカップリング
その後、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中、単離したＮＨＳエステルを加水分解した石灰骨ゼラチン（ゲル透過クロマトグラフィーで測定した平均分子量は２１ｋＤ）に添加する。５５℃で１２時間撹拌後、それに続く酢酸エチル中の沈殿物によりゼラチンを単離し、濾過し、アセトンで洗浄し、乾燥する。得られたゼラチンは、３７ｍｍｏｌ／１００ｇの負荷を有し、３７５ｎｍで２８ａ．ｕ．／ｇＬのＵＶ吸収作用を有する。
【実施例８】
【０１０８】
ジエチルアミノ基で修飾したカルボン酸を介したＵＶ−Ｃ１のゼラチンに対するカップリング。
【０１０９】
ＵＶ−Ｃ１で修飾したゼラチンを、最終の負荷が４ｍｍｏｌ／１００ｇのゼラチン及び３７５ｎｍで３ａ．ｕ．／ｇＬのＵＶ吸収作用を有するように実施例７に記載した方法で調製する。
【実施例９】
【０１１０】
ジエチルアミノ基で修飾したカルボン酸を介したＵＶ−Ｃ１のリジンスペーサを介したゼラチンに対するカップリング。
【０１１１】
ＵＶ−Ｃ１のＮＨＳエステルを実施例７に記載した方法により調製する。以後、２つのＵＶ−Ｃ１のＮＨＳエステルを、以下の反応により、リジンにカップリングする。
【０１１２】
ＤＭＳＯ７０ｍｌ中の１．１７ｇのリジン・Ｈ２Ｏに、ＤＭＳＯ２０ｍｌ中の７ｇのＵＶ−Ｃ１のＮＨＳエステルを添加した。混合液を周辺温度で１０時間、続いて５０℃で２時間撹拌し、ジクロロメタン２００ｍｌを添加し、混合液を水で３回洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発後、リジンに対する６．５ｇの二重付加物を得た。得られた生成物の遊離型のカルボン酸基を、以下の反応を用いて、ＮＨＳエステルに変換した。
【０１１３】
ジクロロメタン１２０ｍｌ中のリジンに対する６．５ｇの二重ＵＶ−Ｃ１付加物を、１．２ｇのＮ−ヒドロキシサクシンイミド及びゼラチンにカップリングした２．１ｇのＥＤＣＩに添加した。反応混合液を室温で４時間撹拌した。その生成物を精製し、その後続いて水で洗浄し、乾燥し、溶媒蒸発により単離した。
【０１１４】
リジンに対する二重ＵＶ−Ｃ１付加物のＮＨＳエステルをゼラチンにカップリングすることは、実施例７に記載した方法と同じ方法で起こる。
【０１１５】
得られたＵＶ吸収ゼラチンは、実施例７で得られたサンプルよりもさらに高い吸収作用さえ示す（５８ｍｍｏｌ／１００ｇ、３７５ｎｍで４４ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ）。
【実施例１０】
【０１１６】
アミノブタジエンゼラチンの皮膚への浸透の深さ。
【０１１７】
Ａ／呈色反応
必須条件は特異的検出法を用いることであり、特定のサンスクリーン成分の存在を視覚化するために使用することができる。アミノブタジエンＵＶ−Ｃ１の場合には、波長３５０ｎｍの放射線下でその分子の蛍光機能の存在を有利に利用できる。
【０１１８】
Ｂ／皮膚浸透
皮膚浸透の調査を、以下に記載する調製物を使用して行った。
１．クレモラセトマクロゴールＦＮＡ（cremor cetomacrogolis ＦＮＡ） （ＣＭＣ）中、アミノブタジエンＵＶ−Ｃ１（１％）
２．ＣＭＣ中、アミノブタジエン（ＵＶ−Ｃ１）ゼラチン（低分子量画分）（１０〜２０％）
３．ＣＭＣ中、アミノブタジエン（ＵＶ−Ｃ１）ゼラチン（高分子量画分）（１０〜２０％）
４．ＣＭＣ中、カテコール（１％）（浸透マーカーとして）
調製物を、３人のボランティア被験者の皮膚（臀部）に塗布した。浸透時間は１０時間であった。１０時間後、局部麻酔後に生検（４ｍｍ）を行った。生検材料は、液体窒素内で凍結し、更なる分析のために保存した。
【０１１９】
顕微鏡観察
生検材料は、連続した８μｍの厚さに切断した。スライスは、標準の方法に適合するように切断した。浸透の深さは、蛍光光学顕微鏡下で視覚的に測定し、下記の通り示した。
【０１２０】
【表４】
【０１２１】
５ｋＤｗを超えるＭＷを有するゼラチンにカップリングしたアミノブタジエンは、表皮に浸透しないが、一方５ｋＤｗ未満の分子量を有するゼラチンにカップリングしたアミノブタジエンは、限られた範囲内で浸透する、ということはこれらのデータから明らかである。非カップリングのアミノブタジエンは、最強度の表皮浸透を示した。
【実施例１１】
【０１２２】
サンスクリーン製剤（formulation）に使用するＵＶゼラチンの安定性及び粘着性。
【０１２３】
実施例７〜９で得られたアミノブタジエンゼラチンを、３７５ｎｍでの吸収作用が各サンスクリーン製剤と同じ値になる濃度で、許容できるサンスクリーン製剤に使用した。
各サンプルの安定性を観察し、粘着性を測定した。サンプルの安定性及び粘着性を、コントロールサンスクリーン製剤と比較した。
【０１２４】
【表５】
【０１２５】
本実施例では、本発明のＵＶ吸収複合体は、充分なＵＶ吸収作用を提供し、そのエマルジョンの粘着性に有害な影響がない安定的なサンスクリーン製剤を提供するということを明瞭に示した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
美容上及び皮膚科的に許容できる担体、並びにフラボノイドではなく、担体分子としてのポリペプチドに共有結合しているＵＶ吸収化合物を含む、紫外線放射から防御するための美容用組成物。
【請求項２】
担体分子に結合した前記ＵＶ吸収化合物の内、該ＵＶ吸収化合物の２５０ｎｍ〜６００ｎｍにおける全吸収作用の１０％未満が、４００ｎｍを超えることを特徴とする請求項１記載の美容用組成物。
【請求項３】
担体分子に結合した前記ＵＶ吸収化合物の内、２５０ｎｍ〜６００ｎｍにおける全吸収作用の少なくとも７５％が、３１５ｎｍ〜４００ｎｍであることを特徴とする請求項１又は２記載の美容用組成物。
【請求項４】
前記ＵＶ吸収化合物が、ケイ皮酸（Ｉ）、ヒドロキシベンゾフェノン（II）、ヒドロキシフェニルベンゾトリアゾール（III）及びアミノ−ブタジエン（IV）のファミリー、又はこれらの組合せから選択されることを特徴とする請求項１〜３のいずれか記載の美容用組成物。
【化１】
【請求項５】
前記ＵＶ吸収化合物が、ＵＶ−１、ＵＶ−２、ＵＶ−３、ＵＶ−４、ＵＶ−５、ＵＶ−６、ＵＶ−７、ＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、ＵＶ−１１、ＵＶ−１２、ＵＶ−１３、ＵＶ−１４、ＵＶ−１５、ＵＶ−１６、ＵＶ−１７、ＵＶ−１８、ＵＶ−１９、ＵＶ−２０、ＵＶ−２１、ＵＶ−２２、ＵＶ−２３、ＵＶ−２４、ＵＶ−２５及びＵＶ−２６の１又は複数から選択されることを特徴とする請求項１〜４のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項６】
前記ＵＶ吸収化合物の量が、前記担体分子の３〜５０重量％であることを特徴とする請求項１〜５のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項７】
担体分子に結合した前記ＵＶ吸収化合物分子の数が、１００アミノ酸あたり０．１５〜１５ＵＶ吸収化合物分子、好ましくは、１００アミノ酸あたり１〜１０吸収化合物分子であることを特徴とする請求項１〜６のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項８】
前記ＵＶ吸収化合物が、一般式（Ａ）で表されるアミノブタジエンであることを特徴とする請求項１〜７のいずれか記載の美容用組成物。
【化２】
（式中、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なっていてもよく、各々水素原子、１〜２０個の炭素原子を有するアルキル基、又は６〜２０個の炭素原子を有するアリール基を表す。但し、Ｒ１及びＲ２は同時に水素原子ではなく、Ｒ１及びＲ２は一緒になって、環状アミノ基を形成してもよい。
Ｒ１及びＲ２は各々、１又は複数のカルボン酸部分で置換されていてもよく、
Ｒ３は、カルボキシル基、−ＣＯＯＲ５、−ＣＯＲ５又はＳＯ２Ｒ５を表し、
Ｒ４は、カルボキシル基、−ＣＯＯＲ６又は−ＣＯＲ６を表す。
Ｒ５及びＲ６は、同一又は異なっていてもよく、各々１〜２０個の炭素原子を有するアルキル基、又は６〜２０個の炭素原子を有するアリール基を表す。Ｒ５及びＲ６は一緒になって、１，３−ジオキソシクロヘキサン核、バルビツール酸核、又は２, ４−ジアゾ−１−アルコキシ−３，５−ジオキソシクロヘキセン核を形成してもよい。）
【請求項９】
前記ＵＶ吸収化合物が、以下の一般式（Ｂ）で表されることを特徴とする請求項１〜８のいずれか記載の美容用組成物。
【化３】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４及びＲ５は、請求項１で定義されたとおりである。）
【請求項１０】
前記担体分子がアミノブタジエン（Ａ）とカップリングすることができるポリマーであることを特徴とする請求項８又は９記載の美容用組成物。
【請求項１１】
担体分子に結合した前記ＵＶ吸収化合物が、３７５ｎｍで少なくとも５．６ａ．ｕ．／ｇ．ＬのＵＶ吸収作用を有することを特徴とする請求項８〜１０のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項１２】
担体分子に結合した前記ＵＶ吸収化合物が、３７５ｎｍでＵＶ吸収作用を少なくとも２０ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ、好ましくは少なくとも２５ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ、さらに好ましくは少なくとも３０ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ、最も好ましくは少なくとも４０ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ有することを特徴とする請求項８〜１０記載の美容用組成物。
【請求項１３】
前記担体分子１００グラムあたり少なくとも７．６ｍｍｏｌのアミノブタジエン（Ａ）がカップリングしている、好ましくは、該担体分子１００グラムあたり少なくとも１５ｍｍｏｌのアミノブタジエンがカップリングしていることを特徴とする請求項８〜１０記載の美容用組成物。
【請求項１４】
担体分子が、さらに、アルキル基、好ましくはスクシニル基を含むことを特徴とする請求項１〜１３のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項１５】
前記担体分子が１，５００〜５０，０００ダルトン、好ましくは３，０００〜３０，０００ドルトンの分子量を有することを特徴とする請求項１〜１４のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項１６】
前記担体分子が、カゼイン、セリシン、可溶性コラーゲン及びゼラチンから選択されることを特徴とする請求項１〜１５のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項１７】
前記担体分子が、ヘリックス構造を有さないコラーゲン又はゼラチンであることを特徴とする請求項１〜１６のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項１８】
ビタミンＣ及び／又はビタミンＥが前記担体分子に共有結合していることを特徴とする請求項１〜１７のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項１９】
前記担体分子が水溶性であることを特徴とする請求項１〜１８のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項２０】
ヒドロゲルの形態であることを特徴とする請求項１〜１９のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項２１】
請求項４〜１３のいずれかで定義した担体分子に結合したＵＶ吸収化合物。
【請求項２２】
アミノブタジエンＡをイソニペコチン酸、又はその等価体に接触させ、そして前記担体分子より得られる付加物とカップリングさせることを含むことを特徴とする請求項２１記載の担体分子に結合したＵＶ吸収化合物の製造方法。
【請求項２３】
紫外線放射に対し防御するための美容用組成物を調製するためのフラボノイドではなく、担体分子に共有結合している、ＵＶ吸収化合物の使用。
【請求項２４】
請求項１〜２０のいずれかで定義した担体分子に結合したＵＶ吸収化合物を、１８重量％未満、好ましくは１３重量％未満、さらに好ましくは１０重量％未満含むことを特徴とするサンスクリーン組成物。
【請求項１】
美容上及び皮膚科的に許容できる担体、並びにフラボノイドではなく、担体分子としてのポリペプチドに共有結合しているＵＶ吸収化合物を含む、紫外線放射から防御するための美容用組成物。
【請求項２】
担体分子に結合した前記ＵＶ吸収化合物の内、該ＵＶ吸収化合物の２５０ｎｍ〜６００ｎｍにおける全吸収作用の１０％未満が、４００ｎｍを超えることを特徴とする請求項１記載の美容用組成物。
【請求項３】
担体分子に結合した前記ＵＶ吸収化合物の内、２５０ｎｍ〜６００ｎｍにおける全吸収作用の少なくとも７５％が、３１５ｎｍ〜４００ｎｍであることを特徴とする請求項１又は２記載の美容用組成物。
【請求項４】
前記ＵＶ吸収化合物が、ケイ皮酸（Ｉ）、ヒドロキシベンゾフェノン（II）、ヒドロキシフェニルベンゾトリアゾール（III）及びアミノ−ブタジエン（IV）のファミリー、又はこれらの組合せから選択されることを特徴とする請求項１〜３のいずれか記載の美容用組成物。
【化１】
【請求項５】
前記ＵＶ吸収化合物が、ＵＶ−１、ＵＶ−２、ＵＶ−３、ＵＶ−４、ＵＶ−５、ＵＶ−６、ＵＶ−７、ＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、ＵＶ−１１、ＵＶ−１２、ＵＶ−１３、ＵＶ−１４、ＵＶ−１５、ＵＶ−１６、ＵＶ−１７、ＵＶ−１８、ＵＶ−１９、ＵＶ−２０、ＵＶ−２１、ＵＶ−２２、ＵＶ−２３、ＵＶ−２４、ＵＶ−２５及びＵＶ−２６の１又は複数から選択されることを特徴とする請求項１〜４のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項６】
前記ＵＶ吸収化合物の量が、前記担体分子の３〜５０重量％であることを特徴とする請求項１〜５のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項７】
担体分子に結合した前記ＵＶ吸収化合物分子の数が、１００アミノ酸あたり０．１５〜１５ＵＶ吸収化合物分子、好ましくは、１００アミノ酸あたり１〜１０吸収化合物分子であることを特徴とする請求項１〜６のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項８】
前記ＵＶ吸収化合物が、一般式（Ａ）で表されるアミノブタジエンであることを特徴とする請求項１〜７のいずれか記載の美容用組成物。
【化２】
（式中、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なっていてもよく、各々水素原子、１〜２０個の炭素原子を有するアルキル基、又は６〜２０個の炭素原子を有するアリール基を表す。但し、Ｒ１及びＲ２は同時に水素原子ではなく、Ｒ１及びＲ２は一緒になって、環状アミノ基を形成してもよい。
Ｒ１及びＲ２は各々、１又は複数のカルボン酸部分で置換されていてもよく、
Ｒ３は、カルボキシル基、−ＣＯＯＲ５、−ＣＯＲ５又はＳＯ２Ｒ５を表し、
Ｒ４は、カルボキシル基、−ＣＯＯＲ６又は−ＣＯＲ６を表す。
Ｒ５及びＲ６は、同一又は異なっていてもよく、各々１〜２０個の炭素原子を有するアルキル基、又は６〜２０個の炭素原子を有するアリール基を表す。Ｒ５及びＲ６は一緒になって、１，３−ジオキソシクロヘキサン核、バルビツール酸核、又は２, ４−ジアゾ−１−アルコキシ−３，５−ジオキソシクロヘキセン核を形成してもよい。）
【請求項９】
前記ＵＶ吸収化合物が、以下の一般式（Ｂ）で表されることを特徴とする請求項１〜８のいずれか記載の美容用組成物。
【化３】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４及びＲ５は、請求項１で定義されたとおりである。）
【請求項１０】
前記担体分子がアミノブタジエン（Ａ）とカップリングすることができるポリマーであることを特徴とする請求項８又は９記載の美容用組成物。
【請求項１１】
担体分子に結合した前記ＵＶ吸収化合物が、３７５ｎｍで少なくとも５．６ａ．ｕ．／ｇ．ＬのＵＶ吸収作用を有することを特徴とする請求項８〜１０のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項１２】
担体分子に結合した前記ＵＶ吸収化合物が、３７５ｎｍでＵＶ吸収作用を少なくとも２０ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ、好ましくは少なくとも２５ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ、さらに好ましくは少なくとも３０ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ、最も好ましくは少なくとも４０ａ．ｕ．／ｇ．Ｌ有することを特徴とする請求項８〜１０記載の美容用組成物。
【請求項１３】
前記担体分子１００グラムあたり少なくとも７．６ｍｍｏｌのアミノブタジエン（Ａ）がカップリングしている、好ましくは、該担体分子１００グラムあたり少なくとも１５ｍｍｏｌのアミノブタジエンがカップリングしていることを特徴とする請求項８〜１０記載の美容用組成物。
【請求項１４】
担体分子が、さらに、アルキル基、好ましくはスクシニル基を含むことを特徴とする請求項１〜１３のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項１５】
前記担体分子が１，５００〜５０，０００ダルトン、好ましくは３，０００〜３０，０００ドルトンの分子量を有することを特徴とする請求項１〜１４のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項１６】
前記担体分子が、カゼイン、セリシン、可溶性コラーゲン及びゼラチンから選択されることを特徴とする請求項１〜１５のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項１７】
前記担体分子が、ヘリックス構造を有さないコラーゲン又はゼラチンであることを特徴とする請求項１〜１６のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項１８】
ビタミンＣ及び／又はビタミンＥが前記担体分子に共有結合していることを特徴とする請求項１〜１７のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項１９】
前記担体分子が水溶性であることを特徴とする請求項１〜１８のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項２０】
ヒドロゲルの形態であることを特徴とする請求項１〜１９のいずれか記載の美容用組成物。
【請求項２１】
請求項４〜１３のいずれかで定義した担体分子に結合したＵＶ吸収化合物。
【請求項２２】
アミノブタジエンＡをイソニペコチン酸、又はその等価体に接触させ、そして前記担体分子より得られる付加物とカップリングさせることを含むことを特徴とする請求項２１記載の担体分子に結合したＵＶ吸収化合物の製造方法。
【請求項２３】
紫外線放射に対し防御するための美容用組成物を調製するためのフラボノイドではなく、担体分子に共有結合している、ＵＶ吸収化合物の使用。
【請求項２４】
請求項１〜２０のいずれかで定義した担体分子に結合したＵＶ吸収化合物を、１８重量％未満、好ましくは１３重量％未満、さらに好ましくは１０重量％未満含むことを特徴とするサンスクリーン組成物。
【公表番号】特表２００６−５１９２２７（Ｐ２００６−５１９２２７Ａ）
【公表日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０２７５４（Ｐ２００６−５０２７５４）
【出願日】平成１６年２月２５日（２００４．２．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＮＬ２００４／０００１３９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０７５８７１
【国際公開日】平成１６年９月１０日（２００４．９．１０）
【出願人】（５０５２３２７８２）フジ フォト フィルム ビー．ブイ． (50)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年２月２５日（２００４．２．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＮＬ２００４／０００１３９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０７５８７１
【国際公開日】平成１６年９月１０日（２００４．９．１０）
【出願人】（５０５２３２７８２）フジ フォト フィルム ビー．ブイ． (50)
【Ｆターム（参考）】
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