芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤を組み合わせた遺伝子組み換え種子
農業的に有効量の少なくとも１つの芽胞形成細菌および少なくとも１つの任意の昆虫防除剤を遺伝子組み換え植物、植物部位または種子と組み合わせることによって、植物生長力および収量を全体的に向上させる製品を提供する。この製品は、植物寄生線虫および真菌種の存在下で特に有効である。本製品の使用は、植物寄生線虫または真菌による作物損失を全体的に低減することができ、遺伝子組み換え種子を昆虫防除剤だけと使用する場合よりもはるかに大きく低減する。いくつかの実施形態によると、本製品の使用により、ダイズのブッシェル収量が約２％−１０％増加し、ワタの収量が３％−６．５％増加し、トウモロコシのブッシェル収量が３％−８％増加した。この組合せの利用方法および製造方法もまた提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は一般的に、植物寄生線虫および真菌による、植物の健康、生長力および収量の損害および損失全体を低減させる製品および方法に関する。より具体的には、本発明は、任意の昆虫防除剤と組み合わせた遺伝子組み換え種子および少なくとも１つの農業的に有益な芽胞形成細菌を含む製品、および遺伝子組み換え種子、植物および植物部位を処理するためにこの組合せを利用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（関連技術の記述）
線虫は、実質的にあらゆる種類の環境（陸地、淡水、海）に存在することが知られている微小線形動物である。８０，０００を超える既知の種のうち、その多く、特に有害生物に分類されるものは農業的に重要である。そのような種の１つがネコブセンチュウ（ｒｏｏｔ ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ）であり、様々な植物、低木および作物を攻撃する。このような土壌介在性線虫は、新しく形成された根を攻撃し、発育不全、突起（ｓｗｅｌｌｉｎｇ）または虫瘤の形成を引き起こす。次に根に亀裂が入る場合があり、根が細菌および真菌などの他の微生物にさらされる。低耕起栽培または不耕起栽培などの環境に優しい手法がとられ、様々な線虫種がトランスジェニック種子に対する抵抗性を獲得することより、線虫が関与する作物損失が増加すると考えられる。
【０００３】
土壌燻蒸剤または非燻蒸剤などの化学殺線虫剤は、線虫寄生を防ぐために長年使用されてきた。このような殺線虫剤は、植え付け前に地面に合成化学物質を繰り返し適用する必要がある場合がある。化学殺線虫剤は毒性があるため、米国環境保護庁（ＥＰＡ）により監視されており、それらの使用はＥＰＡによって制限または規制されている場合がある。臭化メチルおよび有機リン酸エステルなどの従来の化学殺線虫剤の使用が徐々に廃止されるにつれて、代替の処理選択肢の開発が必要とされている。米国特許第６，５９３，２７３号は、線虫寄生を処置するための殺有害生物剤によるトランスジェニックトウモロコシ種子の処理を開示している。
【０００４】
米国特許第６，８４４，３３９号は、線虫を防除するためのネオニコチノイドの使用を開示している。米国特許第６，８４４，３３９号における好ましい化合物は、ニトロイミノ化合物またはニトログアニジノ化合物である。ネオニコチノイドは、線虫の周囲または植物体自体のいずれにも適用することができる。ＷＯ／２００７／１４９８１７は、害虫および病原体からの植物保護を強化するための、アベルメクチンなどの殺線虫剤と生物学的防除剤の組合せを開示している。しかし、この組合せは、特定の化学殺線虫剤の使用における毒性に対処がなされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第６，５９３，２７３号明細書
【特許文献２】米国特許第６，８４４，３３９号明細書
【特許文献３】国際公開第２００７／１４９８１７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
（発明の要旨）
より毒性の高い従来の化学殺線虫剤を使用することなく、環境に優しい生物学的成分および低毒性の化学殺線虫剤を使用するが、それらを植物の生長力および収量を向上するように利用する、有効的な組成物および方法が依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、線虫による損害または寄生を抑制するための改善された製品および方法を提供する。本製品は、少なくとも１つの芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤を、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位と組み合わせて使用する。
【０００８】
種子、植物および／または植物部位を処理する方法もまた提供される。この方法は、（ａ）少なくとも１つの芽胞形成細菌を有効量含む組成物を提供し、（ｂ）任意の昆虫防除剤と芽胞形成細菌を組み合わせ、（ｃ）遺伝子組み換え種子、植物、および／または植物部位に組成物を適用することを含む。適用は、種子コーティング、土壌灌注の形態、および／または直接畝間に、および／または葉面散布などの任意の所望の方法によって行われ、出芽前、出芽後またはその両方のいずれかによって適用される。任意に、昆虫防除剤は、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位に別々に適用されることができる。さらに、少なくとも１つの殺真菌剤はまた、芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤と組み合わせてもよく、遺伝子組み換え植物、種子または植物部位に別々に適用されてもよい。つまり、個々の成分または組成物が、種子、植物、植物の葉面、植物の果実、もしくは植物が生育している土壌または植物が生育するのに望ましい土壌に適用されることができる。
【０００９】
本発明の１つの態様によると、芽胞形成細菌を、任意の昆虫防除剤および遺伝子組み換え種子と組み合わせて含む製品が提供される。
【００１０】
本発明の別の態様では、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位を処理する方法が提供され、この方法は、種子、植物または植物部位に、少なくとも１つの芽胞形成細菌および任意に少なくとも１つの昆虫防除剤を適用することを含む。
【００１１】
本発明のさらなる態様では、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位を線虫から保護する方法が提供され、この方法は、０．０００１重量％から２０重量％の少なくとも１つの芽胞形成細菌および０．００１重量％から２０重量％の少なくとも１つの昆虫防除剤を含む少なくとも１つの組成物を提供し、この組成物を種子、植物または植物部位に適用することを含む。
【００１２】
本発明のさらに別の態様では、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位を線虫から保護する組成物が提供され、この組成物は、（ｉ）約２重量から８０重量％の量の少なくとも１つの芽胞形成細菌、（ｉｉ）約１重量％から約８０重量％の量の少なくとも１つの昆虫防除剤および（ｉｉｉ）溶媒を含む。
【００１３】
本発明のよりさらなる態様では、少なくとも１つの芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤によって処理した遺伝子組み換え種子を製造する方法が提供され、この方法は、（ｉ）前記芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤を前記遺伝子組み換え種子に適用し、（ｉｉ）実質的に均一に処理するために前記遺伝子組み換え種子を混ぜることを含む。
【００１４】
本組成物による別の製品および方法が、以下の詳細な記述および請求の範囲に提供される。さらなる目的、特徴および利点は以下の記述に記載され、一部は記述から明らかでありまたは本発明の実施によって理解され得る。目的、特徴および利点は、添付の請求の範囲で特に指摘された手段および組合せによって実現され、得られることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
（発明の詳細な記述）
本明細書に開示される製品は、線虫寄生環境における植物生長力および収量を、遺伝子組み換え種子、植物および植物部位への殺虫剤の適用から期待されるものよりも高めることが分かっている。任意の昆虫防除剤の少なくとも一部は、昆虫圧力（ｉｎｓｅｃｔ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）がなくても根量を増加させることが示されており、根量の増加は、根圏内での有益な細菌の定着を向上させ、次に植物寄生線虫または真菌のいずれかによる作物生長力および収量の損失を全体的に減少させる。植物および植物部位を処理する際にこれらの成分を物理的に組み合わせると共に、芽胞形成、根部コロニー形成（ｒｏｏｔ−ｃｏｌｏｎｉｚｉｎｇ）細菌などの生きた芽胞形成細菌に安定した環境をもたらすように組成物を製剤化することもできる。殺真菌剤、殺虫剤、安定剤、乳化剤などの様々な添加剤が、所望の特性に応じて、芽胞形成細菌および／または遺伝子組み換え種子、植物または植物部位に添加されてもよい。
【００１６】
遺伝子組み換え種子、植物または植物部位は、昆虫防除および除草剤耐性のために典型的に開発されている。したがって、任意の昆虫防除剤と共に芽胞形成細菌の使用を加えることによって、悪条件下で生存する種子の能力が完成する。少なくとも１つの芽胞形成細菌は一般的に、植物の根系にコロニーを形成することが農業的に有益であると証明されている。任意の昆虫防除剤は、証明された直接的な殺線虫活性または殺真菌活性を有するかどうかに関わらず、適用された植物の根系の量を増加することが証明された能力を有する少なくとも１つの化学殺虫剤であることができる。遺伝子組み換え種子は、昆虫毒素または除草剤抵抗性を発現する遺伝子組み換え植物または植物部位を生じるいずれかの種子であることができる。さらに、遺伝子組み換え種子は、細菌および真菌に毒素または抵抗性を発現する遺伝子組み換え植物または植物部位を生じるいずれかの種子であることができる。さらに、遺伝子組み換え種子は、水ストレスおよび窒素生産などの環境要因に耐性を発現する遺伝子組み換え植物または植物部位を生じるいずれかの種子であってもよい。
【００１７】
昆虫毒素に関して、米国特許第５，８７７，０１２号は、その全体が参照により本明細書に組み込まれ、タマナヤガ（ｂｌａｃｋ ｃｕｔｗｏｒｍ）、アワヨトウ（ａｒｍｙｗｏｒｍ）および穿孔性害虫（ｂｏｒｅｒ）などの害虫に抵抗性のあるトランスジェニック植物を得るために、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、プセウドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、クラウィバクテル（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ）およびリゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）などの生物由来のタンパク質の植物へのクローニングおよび発現を開示している。さらに、米国特許第５，６２５，１３６号および米国特許第５，８５９，３３６号は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれ、デルタ内毒素をコードするＢ．チューリンゲンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来の遺伝子を用いたトウモロコシ植物の形質転換を開示し、トランスジェニックトウモロコシのアワノメイガ（Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｃｏｒｎ ｂｏｒｅｒ）に対する抵抗性が改良されたことを証明している。Ｂ．チューリンゲンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来の殺虫性タンパク質を発現するトランスジェニックトウモロコシの圃場試験についての総括的な報告が、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ｃｒｏｐ Ｓｃｉｅｎｃｅ、３５（２）：５５０−５５７（１９９５）により提供されており、その全体が参照により組み込まれている。Ｂ．チューリンゲンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）遺伝子をコードするトウモロコシを開示している文献としてさらに、全体が参照により組み込まれる米国特許第４，７６６，２０３号、米国特許第４，７９７，２７９号および米国特許第４，９１０，０１６号ならびに全体が参照により組み込まれるＷＯ９９／３１２２４８が挙げられる。除草剤抵抗性に関して、米国特許第４，９７１，９０８号は、その全体が参照により本明細書に組み込まれ、グリホサート抵抗性である遺伝子組み換え植物を開示している。グリホサート抵抗性は、植物または種子を遺伝子組み換えし、触媒活性を維持しながらグリホサートに低い親和性を示す変異ＥＰＳＰ合成酵素を生産することによって達成される。グリホサート抵抗性植物および種子を開示する文献としてさらに、米国特許第５，４６３，１７５号、米国特許第５，７７６，７６０号、米国特許第５，８０４，４２５号、米国特許第６，６８９，８８０号、米国特許第６，８０３，５０１号、米国特許第７，２１４，５３５号および米国特許第７，３３５，８１６号が挙げられ、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００１８】
ある芽胞形成細菌は農業的に有益であることが示されている。好ましくは、少なくとも１つの芽胞形成細菌は根部コロニー形成細菌（例えば、根圏細菌（ｒｈｉｚｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ））である。農業的有益性とは、植物病原性真菌または細菌および／または線虫類（Ｎｅｍａｔｏｄａ）または袋形動物門（Ａｓｃｈｅｌｍｉｎｔｈｅｓ）に属する動物などの土壌介在性動物の悪影響から保護する細菌の能力をいう。植物寄生線虫および植物寄生微生物からの保護は、これらの土壌介在性動物に有害でありおよび／または微生物集団に有害であるキチン分解活性、タンパク質分解活性、コラーゲン分解活性などの活性を介して行われることができる。これらの殺線虫特性、殺真菌特性および殺菌特性を示す細菌として、バチルス・アルグリ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｒｇｒｉ）、バチルス・アイザワイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｉｚａｗａｉ）、バチルス・アルボラクティス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｂｏｌａｃｔｉｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・ケレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・エンドパラシティカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｅｎｄｏｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓ）、バチルス・エンドリズモス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｅｎｄｏｒｈｙｔｈｍｏｓ）、バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）、バチルス・クルスターキ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｋｕｒｓｔａｋｉ）、バチルス・ラクティコラ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｃｏｌａ）、バチルス・ラクティモルブス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｍｏｒｂｕｓ）、バチルス・ラクティス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、バチルス・ラテロスポルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）、バチルス・レンチモルブス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｉｍｏｒｂｕｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・メドゥサ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｄｕｓａ）、バチルス・メチエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｔｉｅｎｓ）、バチルス・ナットウ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｎａｔｔｏ）、バチルス・ニグリフィカンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｎｉｇｒｉｆｉｃａｎｓ）、バチルス・ポピラエ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｐｉｌｌａｅ）、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・シアメンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｉａｍｅｎｓｉｓ）、バチルス・スフィアリカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈｅａｒｉｃｕｓ）、バチルス属種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、バチルス・サブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・チュルンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｎｇｉｅｎｓｉｓ）、バチルス・ユニファゲラタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｕｎｉｆａｇｅｌｌａｔｕｓ）、および全体が参照により組み込まれる「Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ」第１版、（１９８６）のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属のカテゴリーに記載されたものを挙げることができるが、これらに限定されない。
【００１９】
好ましくは、芽胞形成細菌は、全体が参照により組み込まれる米国特許第６，４０６，６９０号に開示される少なくとも１つのＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）ＣＮＣＭ Ｉ−１５８２芽胞および／またはＢ．ケレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）ＣＮＣＭ Ｉ−１５６２株芽胞である。最も好ましくは、芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）ＣＮＣＭ Ｉ−１５８２である。あるいは、芽胞形成細菌は少なくとも１つのＢ．アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＩＮ９３７ａ、少なくとも１つの バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）のＧＢ０３株または少なくとも１つのＢ．プムリス（Ｂ．ｐｕｍｕｌｉｓ）のＧＢ３４株であることができる。さらに、芽胞形成細菌は、上記のいずれかの種だけでなく農業的に有益な特性を示すことが知られている他の芽胞形成、根部コロニー形成細菌の混合物であることができる。
【００２０】
好ましい実施形態において、芽胞形成細菌は、粉末、水溶液または非水溶液のいずれかとして種子、植物または植物部位に適用可能である。粉末は乾燥粉末、水和剤または顆粒水和剤のいずれかであることができる。好ましくは、芽胞形成細菌は、溶液、乳剤、水和剤、懸濁剤（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ）、水溶剤（ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｏｗｄｅｒ）、粒剤、懸濁乳剤（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ−ｅｍｕｌｓｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ）、活性化合物が含浸された天然および合成物質、ならびに徐放性カプセル（ｆｉｎｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒｅｌｅａｓｅ ｃａｐｓｕｌｅ）である。液体および乾燥の形態の芽胞形成細菌は、植え付け前、植え付け時または植え付け後に土壌と混合され得る。最も好ましくは、製剤は、植え付け前または植え付け時に土壌に混合される液体状である。
【００２１】
組成物に使用される少なくとも１つの芽胞形成細菌の量は、最終製剤だけでなく使用する植物、植物部位または種子のサイズまたは種類によって変えることができる。好ましくは、組成物中の少なくとも１つの芽胞形成細菌は、製剤全重量の約２重量％から製剤全重量の約８０重量％で存在する。より好ましくは、製剤全重量の約５重量％から製剤全重量の約６５重量％、最も好ましくは、製剤全重量の約１０重量％から製剤全重量の約６０重量％である。
【００２２】
組成物は、少なくとも１つの任意の昆虫防除剤をさらに含む。好ましくは、昆虫防除剤は、直接的な殺線虫活性および使用した芽胞形成細菌に対して有害な活性がない、任意の殺虫性化学物質または殺虫活性を有する組成物でもよく、適用によって根量を増加させる能力もさらに有することが好ましい。あるいは、この組合せは、殺線虫特性または殺真菌特性を示す少なくとも１つの追加の化学物質を含むこともできる。このような組成物は、線虫寄生の密度が極めて高い地理的領域に有用であり、または高い真菌病圧力に対してさらなる殺真菌活性を与えるのに有用であり得る。植物、種子または植物体は、追加の昆虫防除剤または殺真菌防除剤と別々にまたは同時に処理することができる。最も好ましくは、昆虫防除剤は、式（Ｉ）の非殺線虫ネオニコチノイド系殺虫剤化合物である。
【００２３】
別の好ましい実施形態では、任意の昆虫防除剤は、式（Ｉ）の少なくとも１つの浸透性の非殺線虫ネオニコチノイド系殺虫剤化合物である。
【００２４】
【化１】
式中、
Ａは、２−クロロピリド−５−イル、２−メチルピリド−５−イル、１−オキシド−３−ピリジニオ、２−クロロ−１−オキシド−５−ピリジニオ、２，３−ジクロロ−１−オキシド−５−ピリジニオ、テトラヒドロフラン−３−イル、５−メチル−テトラヒドロフラン−３−イルまたは２−クロロチアゾール−５−イル基であり、
Ｒは、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、フェニル−Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルまたはＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｙは、−−Ｎ（Ｒ）（Ｒ２）またはＳＲ２であり、
Ｒ１およびＲ２は、互いに独立してＣ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルケニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキニル（ａｌｋｉｎｙｌ）、−−Ｃ（＝Ｏ）−−ＣＨ３もしくはベンジル、または一緒になって−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−、−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−、−−ＣＨ２−−Ｏ−−ＣＨ２−−、−−ＣＨ２−−Ｓ−−ＣＨ２−−、−−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−−もしくはＣＨ２−−Ｎ（ＣＨ３）−−ＣＨ２−−基であり、
Ｘは、Ｎ−−ＮＯ２またはＮ−−ＣＮもしくはＣＨ−−ＮＯ２である。
特に好ましい非殺線虫ネオニコチノイド系殺虫剤として、１−（６−クロロ−３−ピリジルメチル）−Ｎ−ニトロイミダゾリジン−２−イリデンアミン（イミダクロプリド）、３−（６−クロロ−３−ピリジルメチル）−１，３−チアゾリジン−２−イリデンシアナミド（チアクロプリド）、１−（２−クロロ−１，３−チアゾール−５−イルメチル）−３−メチル−２−ニトログアニジン（クロチアニジン）、ニテムピラン（ｎｉｔｅｍｐｙｒａｎ）、Ｎ１−［（６−クロロ−３−ピリジル）メチル］−Ｎ２−シアノ−Ｎ１−メチルアセトアミジン（アセタミプリド）、３−（２−クロロ−１，３−チアゾール−５−イルメチル）−５−メチル−１，３，５−オキサジアジナン−４−イリデン（ニトロ）アミン（チアメトキサム）および１−メチル−２−ニトロ−３−（テトラヒドロ−３−フリルメチル）グアニジン（ジノテフラン）が挙げられる。
【００２５】
別の実施形態において、芽胞形成細菌−昆虫防除剤の組合せは、直接的な殺線虫活性を有する追加の化学物質を任意に含むことができる。適切な殺線虫昆虫防除剤として、アバメクチンなどの抗生物質殺線虫剤（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｎｅｍａｔｉｃｉｄｅ）；ベノミル、カルボフラン、カルボスルファンおよびクレオソカード（ｃｌｅｏｔｈｏｃａｒｄ）などのカーバメート系殺線虫剤；アラニカルブ、アルジカルブ、アルドキシカルブ、オキサミルなどのオキシムカーバメート系殺線虫剤；ジアミダホス、フェナミホス、ホスチエタン、ホスファミドン、カズサホス、クロルピリホス、ジクロフェンチオン（ｄｉｃｌｏｆｅｎｔｈｉｏｎ）、ジメトエート、エトプロホス、フェンスルホチオン、ホスチアゼート、ヘテロホス、イサミドホス、イサゾホス、メソミル、ホレート、ホスホカルブ、テルブホス、チオジカルブ、チオナジン、トリアゾホス、イミシアホスおよびメカルホンなどの有機リン系殺線虫剤が挙げられる。他の適切な殺線虫昆虫防除剤として、アセトプロール、ベンクロチアズ、クロロピクリン、ダゾメット、ＤＢＣＰ、ＤＣＩＰ、１，２−ジクロロプロパン、１，３−ジクロロプロペン、フルフラール、ヨードメタン、メタム、臭化メチル、メチルイソチオシアネートおよびキシレノールが挙げられる。あるいは、芽胞形成細菌は、ミロテシウム・ベルカリア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕｃａｒｉａ）、バーホルデリア・セパシア（Ｂｕｒｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、バチルス・チトノスポルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｈｉｔｏｎｏｓｐｏｒｕｓ）およびパエシロミセス・リラシナス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｌｉｌａｃｉｎｕｓ）などの生物学的殺線虫剤、もしくはハーピンタンパク質、アミノ酸配列などの植物または動物由来の殺線虫剤、もしくはウイルス、ウイロイド粒子と組み合わせることもできる。
【００２６】
芽胞形成細菌に添加される少なくとも１つの任意の昆虫防除剤の量は、最終製剤だけでなく処理する植物および種子のサイズによって変えることができる。好ましくは、少なくとも１つの昆虫防除剤は、製剤全重量の約１重量％から製剤全重量の約８０重量％である。より好ましくは、昆虫防除剤は、製剤全重量の約５重量％から製剤全重量の約６０重量％の量で存在する。最も好ましくは、昆虫防除剤は、製剤全重量の約１０重量％から製剤全重量の約５０重量％の量で存在する。
【００２７】
さらなる実施形態において、単独または昆虫防除剤と組み合わせの芽胞形成細菌は、有効量の少なくとも１つの殺真菌剤をさらに含むことができる。好ましくは、殺真菌剤として、アルジモルフ（ａｌｄｉｍｏｒｐｈ）、アンプロピルホス（ａｍｐｒｏｐｙｌｆｏｓ）、アンプロピルホスカリウム（ａｍｐｒｏｐｙｌｆｏｓ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ）、アンドプリム（ａｎｄｏｐｒｉｍ）、アニラジン（ａｎｉｌａｚｉｎｅ）、アザコナゾール（ａｚａｃｏｎａｚｏｌｅ）、アゾキシストロビン（ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ）、ベナラキシル（ｂｅｎａｌａｘｙｌ）、ベノダニル（ｂｅｎｏｄａｎｉｌ）、ベノミル（ｂｅｎｏｍｙｌ）、ベンザマクリル（ｂｅｎｚａｍａｃｒｉｌ）、ベンザマクリル−イソブチル（ｂｅｎｚａｍａｃｒｙｌ−ｉｓｏｂｕｔｙｌ）、ビアラフォス（ｂｉａｌａｐｈｏｓ）、ビナパクリル（ｂｉｎａｐａｃｒｙｌ）、ビフェニル（ｂｉｐｈｅｎｙｌ）、ビテルタノール（ｂｉｔｅｒｔａｎｏｌ）、ブラスチシジン−Ｓ（ｂｌａｓｔｉｃｉｄｉｎ−Ｓ）、ボスカリド（ｂｏｓｃａｌｉｄ）、ブロムコナゾール（ｂｒｏｍｕｃｏｎａｚｏｌｅ）、ブピリメート（ｂｕｐｉｒｉｍａｔｅ）、ブチオベート（ｂｕｔｈｉｏｂａｔｅ）、多硫化カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ ｐｏｌｙｓｕｌｐｈｉｄｅ）、カプシマイシン（ｃａｐｓｉｍｙｃｉｎ）、カプタホール（ｃａｐｔａｆｏｌ）、キャプタン（ｃａｐｔａｎ）、カルベンダジム（ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ）、カルボキシン（ｃａｒｂｏｘｉｎ）、カルボン（ｃａｒｖｏｎ）、キノメチオネート（ｑｕｉｎｏｍｅｔｈｉｏｎａｔｅ）、クロベンチアゾン（ｃｈｌｏｂｅｎｔｈｉａｚｏｎｅ）、クロルフェナゾール（ｃｈｌｏｒｆｅｎａｚｏｌｅ）、クロロネブ（ｃｈｌｏｒｏｎｅｂ）、クロロピクリン（ｃｈｌｏｒｏｐｉｃｒｉｎ）、クロロタロニル（ｃｈｌｏｒｏｔｈａｌｏｎｉｌ）、クロゾリネート（ｃｈｌｏｚｏｌｉｎａｔｅ）、クロジラコン（ｃｌｏｚｙｌａｃｏｎ）、クフラネブ（ｃｕｆｒａｎｅｂ）、シモキサニル（ｃｙｍｏｘａｎｉｌ）、シプロコナゾール（ｃｙｐｒｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、シプロジニル（ｃｙｐｒｏｄｉｎｉｌ）、シプロフラム（ｃｙｐｒｏｆｕｒａｍ）、デバカルブ（ｄｅｂａｃａｒｂ）、ジクロロフェン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎ）、ジクロブトラゾール（ｄｉｃｌｏｂｕｔｒａｚｏｌｅ）、ジクロフルアニド（ｄｉｃｌｏｆｌｕａｎｉｄ）、ジクロメジン（ｄｉｃｌｏｍｅｚｉｎｅ）、ジクロラン（ｄｉｃｌｏｒａｎ）、ジエトフェンカルブ（ｄｉｅｔｈｏｆｅｎｃａｒｂ）、ジフェノコナゾール（ｄｉｆｅｎｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、ジメチリモール（ｄｉｍｅｔｈｉｒｉｍｏｌ）、ジメトモルフ（ｄｉｍｅｔｈｏｍｏｒｐｈ）、ジモキシストロビン（ｄｉｍｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ）、ジニコナゾール（ｄｉｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、ジニコナゾール−Ｍ（ｄｉｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ−Ｍ）、ジノキャップ（ｄｉｎｏｃａｐ）、ジフェニルアミン（ｄｉｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｅ）、ジピリチオン（ｄｉｐｙｒｉｔｈｉｏｎｅ）、ジタリムホス（ｄｉｔａｌｉｍｆｏｓ）、ジチアノン（ｄｉｔｈｉａｎｏｎ）、ドデモルフ（ｄｏｄｅｍｏｒｐｈ）、ドジン（ｄｏｄｉｎｅ）、ドラゾキソロン（ｄｒａｚｏｘｏｌｏｎ）、エジフェンホス（ｅｄｉｆｅｎｐｈｏｓ）、エポキシコナゾール（ｅｐｏｘｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、エタコナゾール（ｅｔａｃｏｎａｚｏｌｅ）、エチリモル（ｅｔｈｉｒｉｍｏｌ）、エトリジアゾール（ｅｔｒｉｄｉａｚｏｌｅ）、ファモキサドン（ｆａｍｏｘａｄｏｎ）、フェナパニル（ｆｅｎａｐａｎｉｌ）、フェナリモル（ｆｅｎａｒｉｍｏｌ）、フェンブコナゾール（ｆｅｎｂｕｃｏｎａｚｏｌｅ）、フェンフラム（ｆｅｎｆｕｒａｍ）、フェニトロパン（ｆｅｎｉｔｒｏｐａｎ）、フェンピクロニル（ｆｅｎｐｉｃｌｏｎｉｌ）、フェンプロピジン（ｆｅｎｐｒｏｐｉｄｉｎ）、フェンプロピモルフ（ｆｅｎｐｒｏｐｉｍｏｒｐｈ）、フェンチンアセテート（ｆｅｎｔｉｎ ａｃｅｔａｔｅ）、フェンチンヒドロキシド（ｆｅｎｔｉｎ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ）、フェルバム（ｆｅｒｂａｍ）、フェリムゾン（ｆｅｒｉｍｚｏｎｅ）、フルアジナム（ｆｌｕａｚｉｎａｍ）、フルジオキソニル（ｆｌｕｄｉｏｘｏｎｉｌ）、フルメトベル（ｆｌｕｍｅｔｏｖｅｒ）、フルオロミド（ｆｌｕｏｒｏｍｉｄｅ）、フルキンコナゾール（ｆｌｕｑｕｉｎｃｏｎａｚｏｌｅ）、フルルプリミドール（ｆｌｕｒｐｒｉｍｉｄｏｌ）、フルシラゾール（ｆｌｕｓｉｌａｚｏｌｅ）、フルスルファミド（ｆｌｕｓｕｌｆａｍｉｄｅ）、フルトラニル（ｆｌｕｔｏｌａｎｉｌ）、フルトリアホール（ｆｌｕｔｒｉａｆｏｌ）、ホルペット（ｆｏｌｐｅｔ）、ホセチル−アルミニウム（ｆｏｓｅｔｙｌ−ａｌｕｍｉｎｉｕｍ）、ホセチル−ナトリウム（ｆｏｓｅｔｙｌ−ｓｏｄｉｕｍ）、フタリド（ｆｔｈａｌｉｄｅ）、フベリダゾール（ｆｕｂｅｒｉｄａｚｏｌｅ）、フララキシル（ｆｕｒａｌａｘｙｌ）、フラメトピル（ｆｕｒａｍｅｔｐｙｒ）、フルカルボニル（ｆｕｒｃａｒｂｏｎｉｌ）、フルコナゾール（ｆｕｒｃｏｎａｚｏｌｅ）、フルコナゾール−シス（ｆｕｒｃｏｎａｚｏｌｅ−ｃｉｓ）、フルメシクロックス（ｆｕｒｍｅｃｙｃｌｏｘ）、グアザチン（ｇｕａｚａｔｉｎｅ）、ヘキサクロロベンゼン（ｈｅｘａｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ）、ヘキサコナゾール（ｈｅｘａｃｏｎａｚｏｌｅ）、ヒメキサゾール（ｈｙｍｅｘａｚｏｌｅ）、イマザリル（ｉｍａｚａｌｉｌ）、イミベンコナゾール（ｉｍｉｂｅｎｃｏｎａｚｏｌｅ）、イミノクタジン（ｉｍｉｎｏｃｔａｄｉｎｅ）、イミノクタジンアルベシレート（ｉｍｉｎｏｃｔａｄｉｎｅ ａｌｂｅｓｉｌａｔｅ）、イミノオクタジントリアセテート（ｉｍｉｎｏｃｔａｄｉｎｅ ｔｒｉａｃｅｔａｔｅ）、ヨードカルブ（ｉｏｄｏｃａｒｂ）、イプコナゾール（ｉｐｃｏｎａｚｏｌｅ）、イプロベンホス（ｉｐｒｏｂｅｎｆｏｓ（ＩＢＰ））、イプロジオン（ｉｐｒｏｄｉｏｎｅ）、イルママイシン（ｉｒｕｍａｍｙｃｉｎ）、イソプロチオラン（ｉｓｏｐｒｏｔｈｉｏｌａｎｅ）、イソバレジオン（ｉｓｏｖａｌｅｄｉｏｎｅ）、カスガマイシン（ｋａｓｕｇａｍｙｃｉｎ）、クレソキシム−メチル（ｋｒｅｓｏｘｉｍ−ｍｅｔｈｙｌ）、銅調製物（例えば、水酸化銅、ナフテン酸銅、オキシ塩化銅、硫酸銅、酸化銅、オキシン銅およびボルドー液（Ｂｏｒｄｅａｕｘ ｍｉｘｔｕｒｅ））、マンカッパー（ｍａｎｃｏｐｐｅｒ）、マンコゼブ（ｍａｎｃｏｚｅｂ）、マネブ（ｍａｎｅｂ）、メフェリムゾン（ｍｅｆｅｒｉｍｚｏｎｅ）、メパニピリム（ｍｅｐａｎｉｐｙｒｉｍ）、メプロニル（ｍｅｐｒｏｎｉｌ）、メタラキシル（ｍｅｔａｌａｘｙｌ）、メトコナゾール（ｍｅｔｃｏｎａｚｏｌｅ）、メタスルホカルブ（ｍｅｔｈａｓｕｌｆｏｃａｒｂ）、メトフロキサム（ｍｅｔｈｆｕｒｏｘａｍ）、メチラム（ｍｅｔｉｒａｍ）、メトメクラム（ｍｅｔｏｍｅｃｌａｍ）、メトスルホバックス（ｍｅｔｓｕｌｆｏｖａｘ）、ミルジオマイシン（ｍｉｌｄｉｏｍｙｃｉｎ）、ミクロブタニル（ｍｙｃｌｏｂｕｔａｎｉｌ）、ミクロゾリン（ｍｙｃｌｏｚｏｌｉｎ）、ニッケルジメチルジチオカーバメート（ｎｉｃｋｅｌ ｄｉｍｅｔｈｙｌｄｉｔｈｉｏｃａｒｂａｍａｔｅ）、ニトロタル−イソプロピル（ｎｉｔｒｏｔｈａｌ−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ）、ヌアリモール（ｎｕａｒｉｍｏｌ）、オフレース（ｏｆｕｒａｃｅ）、オキサジキシル（ｏｘａｄｉｘｙｌ）、オキサモカルブ（ｏｘａｍｏｃａｒｂ）、オキソリン酸（ｏｘｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、オキシカルボキシム（ｏｘｙｃａｒｂｏｘｉｍ）、オキシフェンチイン（ｏｘｙｆｅｎｔｈｉｉｎ）、パクロブトラゾール（ｐａｃｌｏｂｕｔｒａｚｏｌｅ）、ペフラゾエート（ｐｅｆｕｒａｚｏａｔｅ）、ペンコナゾール（ｐｅｎｃｏｎａｚｏｌｅ）、ペンシクロン（ｐｅｎｃｙｃｕｒｏｎ）、ホスジフェン（ｐｈｏｓｄｉｐｈｅｎ）、ピマリシン（ｐｉｍａｒｉｃｉｎ）、ピペラリン（ｐｉｐｅｒａｌｉｎ）、ポリオキシン（ｐｏｌｙｏｘｉｎ）、ポリオキソリム（ｐｏｌｙｏｘｏｒｉｍ）、プロベナゾール（ｐｒｏｂｅｎａｚｏｌｅ）、プロクロラズ（ｐｒｏｃｈｌｏｒａｚ）、プロシミドン（ｐｒｏｃｙｍｉｄｏｎｅ）、プロパモカルブ（ｐｒｏｐａｍｏｃａｒｂ）、プロパノシン−ナトリウム（ｐｒｏｐａｎｏｓｉｎｅ−ｓｏｄｉｕｍ）、プロピコナゾール（ｐｒｏｐｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、プロピネブ（ｐｒｏｐｉｎｅｂ）、プロチオシナゾール（ｐｒｏｔｈｉｏｃｉｎａｚｏｌｅ）、ピラクロストロビン（ｐｙｒａｃｌｏｓｔｒｏｂｉｎ）、ピラゾホス（ｐｙｒａｚｏｐｈｏｓ）、ピリフェノックス（ｐｙｒｉｆｅｎｏｘ）、ピリメタニル（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｉｌ）、ピロキロン（ｐｙｒｏｑｕｉｌｏｎ）、ピロキシフル（ｐｙｒｏｘｙｆｕｒ）、キンコナゾール（ｑｕｉｎｃｏｎａｚｏｌｅ）、キントゼン（ｑｕｉｎｔｏｚｅｎｅ（ＰＣＮＢ））、硫黄および硫黄調製物、テブコナゾール（ｔｅｂｕｃｏｎａｚｏｌｅ）、テクロフタラム（ｔｅｃｌｏｆｔａｌａｍ）、テクナゼン（ｔｅｃｎａｚｅｎｅ）、テトシクラシス（ｔｅｔｃｙｃｌａｓｉｓ）、テトラコナゾール（ｔｅｔｒａｃｏｎａｚｏｌｅ）、チアベンダゾール（ｔｈｉａｂｅｎｄａｚｏｌｅ）、チシオフェン（ｔｈｉｃｙｏｆｅｎ）、チフルザミド（ｔｈｉｆｌｕｚａｍｉｄｅ）、チオファネート−メチル（ｔｈｉｏｐｈａｎａｔｅ−ｍｅｔｈｙｌ）、チラム（ｔｈｉｒａｍ）、チオキシミド（ｔｉｏｘｙｍｉｄ）、トルクロホス−メチル（ｔｏｌｃｌｏｆｏｓ−ｍｅｔｈｙｌ）、トリルフルアニド（ｔｏｌｙｌｆｌｕａｎｉｄ）、トリアジメホン（ｔｒｉａｄｉｍｅｆｏｎ）、トリアジメノール（ｔｒｉａｄｉｍｅｎｏｌ）、トリアズブチル（ｔｒｉａｚｂｕｔｉｌ）、トリアゾキシド（ｔｒｉａｚｏｘｉｄｅ）、トリクラミド（ｔｒｉｃｈｌａｍｉｄｅ）、トリシクラゾール（ｔｒｉｃｙｃｌａｚｏｌｅ）、トリデモルフ（ｔｒｉｄｅｍｏｒｐｈ）、トリフロキシストロビン（ｔｒｉｆｌｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ）、トリフルミゾール（ｔｒｉｆｌｕｍｉｚｏｌｅ）、トリホリン（ｔｒｉｆｏｒｉｎｅ）、トリチコナゾール（ｔｒｉｔｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、ユニコナゾール（ｕｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、バリダマイシンＡ（ｖａｌｉｄａｍｙｃｉｎ Ａ）、ビンクロゾリン（ｖｉｎｃｌｏｚｏｌｉｎ）、ビニコナゾール（ｖｉｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、ザリラミド（ｚａｒｉｌａｍｉｄｅ）、ジネブ（ｚｉｎｅｂ）、ジラム（ｚｉｒａｍ）およびまたダガーＧ（Ｄａｇｇｅｒ Ｇ）、ＯＫ−８７０５、ＯＫ−８８０１、α−（１，１−ジメチルエチル）−β−（２−フェノキシエチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−エタノール、α−（２，４−ジクロロフェニル）−β−フルオロ−β−プロピル−１Ｈ−−１，２，４−トリアゾール−１−エタノール、α−（２，４−ジクロロフェニル）−β−メトキシ−α−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−エタノール、α−（５−メチル−１，３−ジオキサン−５−イル）−β−［［４−（トリフルオロメチル）−フェニル］−メチレン］−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−エタノール、（５ＲＳ，６ＲＳ）−６−ヒドロキシ−２，２，７，７−テトラメチル−５−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−３−オクタノン、（Ｅ）−α−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチル−２−フェノキシ−フェニルアセトアミド、１−イソプロピル｛２−メチル−１−［［［１−（４−メチルフェニル）−エチル］−アミノ］−カルボニル］−プロピル｝カルバメート、１−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−エタノン−Ｏ−（フェニルメチル）−オキシム、１−（２−メチル−１−ナフタレニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，５−ジクロロフェニル）−３−（２−プロペニル）−２，５−ピロリジンジオン、１−［（ジヨードメチル）−スルホニル］−４−メチル−ベンゼン、１−［［２−（２，４−ジクロロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］−メチル］−１Ｈ−イミダゾール、１−［［２−（４−クロロフェニル）−３−フェニルオキシラニル］−メチル］−１Ｈ−
１，２，４−トリアゾール、１−［１−［２−［（２，４−ジクロロフェニル）−メトキシ］−フェニル］−エテニル］−１Ｈ−イミダゾール、１−メチル−５−ノニル−２−（フェニルメチル）−３−ピロリジノール、２’，６’−ジブロモ−２−メチル−４’−トリフルオロメトキシ−４’−トリフルオロ−メチル−１，３−チアゾール−５−カルボキサニリド、２，２−ジクロロ−Ｎ−［１−（４−クロロフェニル）−エチル］−１−エチル−３−メチル−シクロプロパンカルボキサミド、２，６−ジクロロ−５−（メチルチオ）−４−ピリミジニル−チオシアネート、２，６−ジクロロ−Ｎ−（４−トリフルオロメチルベンジル）−ベンズアミド、２，６−ジクロロ−Ｎ−［［４−（トリフルオロメチル）−フェニル］−メチル］−ベンズアミド、２−（２，３，３−トリヨード−２−プロペニル）−２Ｈ−テトラゾール、２−［（１−メチルエチル）−スルホニル］−５−（トリクロロメチル）−１，３，４−チアジアゾール、２−［［６−デオキシ−４−Ｏ−（４−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グリコピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシル］−アミノ］−４−メトキシ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボニトリル、２−アミノブタン、２−ブロモ−２−（ブロモメチル）−ペンタンジニトリル、２−クロロ−Ｎ−（２，３−ジヒドロ−１，１，３−トリメチル−１Ｈ−インデン−４−イル）−３−ピリジンカルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）−Ｎ−（イソチオシアナトメチル）−アセトアミド、２−フェニルフェノール（ＯＰＰ）、３，４−ジクロロ−１−［４−（ジフルオロメトキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、３，５−ジクロロ−Ｎ−［シアノ［（１−メチル−２−プロピニル）−オキシ］−メチル］−ベンズアミド、３−（１，１−ジメチルプロピル−１−オキソ−１Ｈ−インデン−２−カルボニトリル、３−［２−（４−クロロフェニル）−５−エトキシ−３−イソオキサゾリジニル］−ピリジン、４−クロロ−２−シアノ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−（４−メチルフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−１−スルホンアミド、４−メチル−テトラゾロ［１，５−ａ］キナゾリン−５（４Ｈ）−オン、８−（１，１−ジメチルエチル）−Ｎ−エチル−Ｎ−プロピル−１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカン−２−メタンアミン、８−ヒドロキシキノリン硫酸塩、９Ｈ−キサンテン−２−［（フェニルアミノ）−カルボニル］−９−カルボン酸ヒドラシド、ビス−（１−メチルエチル）−３−メチル−４−［（３−メチルベンゾイル）−オキシ］−２，５−チオフェンジカルボキシレート、ｃｉｓ−１−（４−クロロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−シクロヘプタノール、ｃｉｓ−４−［３−［４−（１，１−ジメチルプロピル）−フェニル−２−メチルプロピル］−２，６−ジメチル−モルホリンヒドロクロリド、エチル［（４−クロロフェニル）−アゾ］−シアノアセテート、重炭酸カリウム、メタンテトラチオール−ナトリウム塩、メチル１−（２，３−ジヒドロ−２，２−ジメチル−１Ｈ−インデン−１−イル）−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート、メチルＮ−（２，６−ジメチルフェニル）−Ｎ−（５−イソオキサゾリルカルボニル）−ＤＬ−アラニネート、メチルＮ−（クロロアセチル）−Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）−ＤＬ−アラニネート、Ｎ−（２，３−ジクロロ−４−ヒドロキシフェニル）−１−メチル−シクロヘキサンカルボキサミド、Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−（テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）−アセトアミド、Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−（テトラヒドロ−２−オキソ−３−チエニル）−アセトアミド、Ｎ−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）−４−メチル−３−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−（４−シクロヘキシルフェニル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−２−ピリミジンアミン、Ｎ−（４−ヘキシルフェニル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−２−ピリミジンアミン、Ｎ−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）−アセトアミド、Ｎ−（６−メトキシ）−３−ピリジニル）−シクロプロパンカルボキサミド、Ｎ−［２，２，２−トリクロロ−１−［（クロロアセチル）−アミノ］−エチル］−ベンズアミド、Ｎ−［３−クロロ−４，５−ビス（２−プロピニルオキシ）−フェニル］−Ｎ’−メトキシ−メタンイミドアミド、Ｎ−ホルミル−Ｎ−ヒドロキシ−ＤＬ−アラニン−ナトリウム塩、Ｏ，Ｏ−ジエチル［２−（ジプロピルアミノ）−２−オキソエチル］−エチルホスホルアミドチオエート、Ｏ−メチルＳ−フェニルフェニルプロピルホスホルアミドチオアート、Ｓ−メチル１，２，３−ベンゾチアジアゾール−７−カルボチオエート、およびスピロ［２Ｈ］−１−ベンゾピラン−２，１’（３’Ｈ）−イソベンゾフラン］−３’−オン、単独または組合せ、が挙げられる。
【００２８】
本明細書に開示される方法は、線虫寄生環境における植物生長力および収量を、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位への殺虫剤単独の適用から期待されるものよりも高めることが分かっている。殺真菌剤、殺虫剤、安定剤、乳化剤などの様々な添加剤が、所望の特性に応じて遺伝子組み換え種子または植物に適用されてもよい。
【００２９】
方法は、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤と組み合わせた少なくとも１つの芽胞形成細菌を遺伝子組み換え種子、植物または植物部位に適用することを含む。好ましくは、芽胞形成細菌は、溶液の形態、乳剤、水和剤、懸濁剤、水溶剤、粒剤、懸濁乳剤、活性化合物が含浸された天然および合成物質、ならびにポリマー物質の徐放性カプセルである。好ましくは、昆虫防除剤は、存在する場合、芽胞形成細菌と混合され、芽胞形成細菌と同時に適用される。任意に、昆虫防除剤は、種子、植物または植物部位に別々に適用されることができる。さらに、殺真菌防除剤が存在する場合には、芽胞形成細菌／昆虫防除剤と組み合わされてもよいし、別々に適用されてもよい。芽胞形成細菌および昆虫防除剤が粉末の形態である場合、土壌、種子または葉面に別々に直接適用されてもよいし、使用時に混合されてもよい。液体の形態である場合、芽胞形成細菌および昆虫防除剤は、別々にまたは処理時に混合され、植え付け時に葉面または畝間に散布または噴霧散布（ａｔｏｍｉｚｅ）されてもよい。あるいは、液体の組合せは、点滴灌漑、スプリンクラー、土壌注入または土壌灌注を含むがこれらに限定されない様々な技術を用いて、種子が発芽する前に土壌に導入されるまたは根部に接触するように直接土壌に導入されることができる。好ましくは、液体は、植え付け前に種子に適用される。
【００３０】
最終製剤および適用方法に応じて、１つ以上の適切な添加剤もまた、芽胞形成細菌およびその組合せに導入されることができる。カルボキシメチルセルロースなどの添加剤、アラビアゴム、キチン、ポリビニルアルコールおよびポリ酢酸ビニルなどの粉末、粒剤またはラテックスの形態の天然ならびに合成ポリマー、ならびにセファリンおよびレシチンなどの天然リン脂質、および合成リン脂質が、本組成物に添加されることができる。
【００３１】
好ましい実施形態において、芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤は、１つの安定な溶液または乳濁液もしくは懸濁液として製剤化される。溶液について、活性化学物質（昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤）は、芽胞形成細菌を添加する前に溶媒に溶解される。適切な液体の溶媒として、キシレン、トルエンまたはアルキルナフタレンなどの石油系芳香族、シクロヘキサンまたはパラフィンなどの脂肪族炭化水素、例えば石油留分、鉱油および植物油、ブタノールまたはグリコールなどのアルコールならびにそれらのエーテルおよびエステル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンまたはシクロヘキサノンなどのケトン、ジメチルホルムアミドおよびジメチルスルホキシドなどの高極性溶媒が挙げられる。乳濁液および懸濁液について、液体の媒質または溶媒は水である。芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤は、別々の液体に懸濁され、適用時に混合されてもよい。好ましくは、芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤は、有効期限が好ましくは２年であるすぐに使用できる製剤（ｒｅａｄｙ ｔｏ ｕｓｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）で組み合わせられる。使用時には、液体は、作物の植え付け時に葉面または畝間に散布または噴霧散布されることができる。液体組成物は、点滴灌漑、スプリンクラー、土壌注入または土壌灌注を含むがこれらに限定されない様々な技術を用いて、種子が発芽する前に土壌に導入されるまたは根部に接触するように土壌に直接導入されることができる。
【００３２】
任意に、安定剤および緩衝液が添加されることができ、これらにはアルカリ塩およびアルカリ土類金属塩、ならびにクエン酸およびアスコルビン酸などの有機酸、塩酸または硫酸（ｓｕｌｆｕｒｉｎｇ ａｃｉｄ）などの無機酸が含まれる。殺生物剤も添加されることができ、これらはホルムアルデヒドまたはホルムアルデヒド放出剤（ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ａｇｅｎｔ）ならびにｐ−ヒドロキシ安息香酸などの安息香酸誘導体を含むことができる。さらに、添加剤として、活性炭、栄養素（肥料）などの選択性除草剤の悪影響から種子を保護することができる機能性薬剤ならびに発芽および製品の質を向上させることができる他の薬剤またはその組合せが挙げられる。
【００３３】
好ましくは、芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤は、液体の種子処理剤として製剤化される。この種子処理剤は、少なくとも１つの芽胞形成細菌および少なくとも１つの任意の昆虫防除剤を含む。任意に、殺真菌防除剤は、芽胞形成細菌および昆虫防除剤と混合されることができる。種子は、混合、散布またはその組合せの従来の方法を用いて、芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤の１つまたは複数の層により実質的に均一にコーティングされる。正確に、安全に、効率的に種子処理製品を種子に適用する特別に設計および製造された装置を用いて適用が行われる。このような装置は、回転式塗工機（ｒｏｔａｒｙ ｃｏａｔｅｒ）、ドラム式塗工機（ｄｒｕｍ ｃｏａｔｅｒ）、流動層技術（ｆｌｕｉｄｉｚｅｄ ｂｅｄ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）、噴流層（ｓｐｏｕｔｅｄ ｂｅｄ）、回転噴霧（ｒｏｔａｒｙ ｍｉｓｔ）またはそれらの組合せなどの様々な種類のコーティング技術を使用する。好ましくは、散布パターンを動くように、種子に種子処理を均一に行う回転「噴霧」円盤（ｓｐｉｎｎｉｎｇ “ａｔｏｍｉｚｅｒ” ｄｉｓｋ）または散布ノズルのいずれかによって適用が行われる。好ましくは、次に種子はさらに一定の時間混合されまたは回転され、さらに処理散布および乾燥を行う。種子は、発芽および出芽の均一性を向上させるために、本発明の組成物によってコーティングする前に刺激されるまたは刺激されなくてもよい。別の実施形態では、乾燥粉末組成物が、動いている種子に計量投入されることができる。
【００３４】
種子は、連続コーティングプロセスまたはバッチコーティングプロセスによってコーティングされてもよい。連続コーティングプロセスでは、連続流装置（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｆｌｏｗ ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ）は、種子の流れおよび種子処理製品の両方を同時に計測する。スライドゲート、コーンおよびオリフィス（ｏｒｉｆｉｃｅ）、種子輪（ｓｅｅｄ ｗｈｅｅｌ）または秤量装置（ｗｅｉｇｈｔ ｄｅｖｉｃｅ）（ベルトまたはダイバーター（ｄｉｖｅｒｔｅｒ））が種子の流れを制御する。処理装置を通る種子の流速が決定されると、種子処理装置を流れる種子に所望の用量を送達するために、種子処理の流速が種子流速に対して較正される。さらに、コンピューターシステムはコーティング機への種子の流入を監視してもよく、これによって適当量の種子の流れを一定に保つ。
【００３５】
バッチコーティングプロセスでは、バッチ処理装置が、所定量の種子を量り分け、次に種子処理がそれぞれ行われる密閉処理チャンバーまたはボウル内に種子を配置する。種子および種子処理は次に混合され、各種子に実質的に均一にコーティングされる。このバッチはその後、次のバッチの処理に備えて処理チャンバーから取り除かれる。コンピューター制御システムによって、このバッチプロセスが自動化され、バッチ処理プロセスを連続的に繰り返すことができる。
【００３６】
いずれのコーティングプロセスにおいても、種子コーティング機械は、任意に、プログラム化された論理制御装置によって操作されることができ、様々な装置が従業員の介入なしに開始および停止されることが可能になる。このシステムの部品は、Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｈａｋｏｐｅｅ、ＭＮなどのいくつかの製造業者から市販されている。
【００３７】
様々な添加剤が種子処理に添加されることができる。結合剤が添加されることができ、コーティングされるべき種子に対する植物毒性を有しない天然または合成の接着性ポリマーから好ましくは構成される結合剤を含む。様々な着色剤が使用されてもよく、ニトロソ、ニトロ、アゾ（モノアゾ、ビスアゾおよびポリアゾなど）、ジフェニルメタン、トリアリールメタン、キサンテン、メタン、アクリジン、チアゾール、チアジン、インダミン、インドフェノール、アジン、オキサジン、アントラキノンおよびフタロシアニンに分類される有機発色団が含まれる。添加されることができる他の添加剤として、鉄、マンガン、ホウ素、銅、コバルト、モリブデンおよび亜鉛の塩などの微量栄養素が含まれる。ポリマーまたは他の粉塵抑制剤が、種子表面の処理を保持するために適用されることができる。
【００３８】
他の従来の種子処理添加剤として、コーティング剤、湿潤剤、緩衝剤および多糖類が挙げられるが、これらに限定されない。少なくとも１つの農業的に許容できる担体が、水、固体または乾燥粉末などの種子処理製剤に添加されることができる。乾燥粉末は、樹皮、炭酸カルシウム、石膏、バーミキュライト、タルク、腐植、活性炭および種々のリン化合物などの様々な材料から得られることができる。
【００３９】
一実施形態では、種子コーティングは、少なくとも１つの充填剤を含むことができ、この充填剤は、種子への適用を容易にするために活性成分と組み合わせられた有機または無機成分、天然または合成成分である。好ましくは、充填剤は、粘土、天然または合成ケイ酸塩、シリカ、樹脂、ワックス、固体肥料（例えば、アンモニウム塩）などの不活性固体、カオリン、粘土、タルク、石灰、石英、アタパルジャイト、モンモリロナイト、ベントナイトもしくは珪藻土などの天然土壌鉱物、またはシリカ、アルミナもしくはケイ酸塩（特に、ケイ酸アルミニウムまたはケイ酸マグネシウム）などの合成鉱物である。
【００４０】
芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤は、線虫よび／もしくは病原性真菌または細菌による攻撃に感受性である植物または植物部位を形成するように発芽することができるいずれかの遺伝子組み換え植物種子と組み合わせることができる。遺伝子組み換え種子は、昆虫毒素または除草剤抵抗性を発現する遺伝子組み換え植物または植物部位を生じるいずれかの種子であることができる。さらに、遺伝子組み換え種子は、細菌および真菌に対する毒素または抵抗性を発現する遺伝子組み換え植物または植物部位を生じるいずれかの種子であることができる。さらに、遺伝子組み換え種子は、水ストレスおよび窒素生産などの環境要因に耐性を発現する遺伝子組み換え植物または植物部位を生じるいずれかの種子であってもよい。適切な遺伝子組み換え種子として、アブラナ科作物、野菜、果物、樹木、繊維作物、油科作物、塊茎作物、コーヒー、花、マメ科植物、穀類の種子だけでなく、単子葉植物種および双子葉植物種の他の植物の種子も挙げられる。好ましくは、遺伝子組み換え種子として、ピーナッツ、タバコ、イネ科草本、コムギ、オオムギ、ライムギ、ソルグフム（Ｓｏｒｇｈｕｍ）、イネ、ナタネ（ｒａｐｅｓｅｅｄ）、サトウダイコン、ヒマワリ、トマト、コショウ、マメ、レタス、ジャガイモおよびニンジンが挙げられる。最も好ましくは、遺伝子組み換え種子として、ワタ、ダイズおよびトウモロコシ（スイートコーン、飼料用トウモロコシ、種トウモロコシまたはポップコーン）が挙げられる。特に好ましい遺伝子組み換え種子として、Ｍｏｎｓａｎｔｏ製のグリホサート耐性および昆虫耐性ワタ種子ＤＥＬＴＡ ＡＮＤ ＰＩＮＥ ＬＡＮＤ（登録商標）、Ｂａｙｅｒ ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ製のグリホサート耐性および昆虫耐性ワタ種子ＳＴＯＮＥＶＩＬＬＥ（商標）、Ｂａｙｅｒ ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ製のグリホサート耐性および昆虫耐性ワタ種子ＦＩＢＥＲＭＡＸ（登録商標）、Ｓｔｉｎｅ Ｓｅｅｄ Ｃｏｍｐａｎｙ製のグリホサート耐性ダイズ、Ｍｏｎｓａｎｔｏ製のグリホサート耐性ダイズ種子ＡＳＧＲＯＷ（登録商標）、ＤｕＰｏｎｔ製のグリホサート耐性および昆虫耐性トウモロコシ種子ＰＩＯＮＥＥＲ（登録商標）、Ｓｙｎｇｅｎｔａ製のグリホサート耐性ダイズ種子ＮＯＲＴＨＲＵＰ ＫＩＮＧ（商標）、Ｂｕｒｒｕｓ Ｃｏｍｐａｎｙ製のグリホサート耐性および昆虫耐性トウモロコシ種子およびＳｙｎｇｅｎｔａ製のグリホサート耐性および昆虫耐性トウモロコシ種子Ｇａｒｓｔ Ｃｏｍｐａｎｙ（ＡＧＲＩＥＤＧＥ（商標））が挙げられる。
【００４１】
芽胞形成細菌および遺伝子組み換え種子の新規の組合せの利点は、以下の非限定的な例から明白である。以下の例は、芽胞形成細菌を昆虫防除剤と組み合わせ、遺伝子組み換え種子に組合せを適用することによる、植物作物収量の全体的な予期しない向上を説明する。
【００４２】
（実施例）
【実施例１】
【００４３】
実施例１では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｍｏｎｓａｎｔｏから入手可能なＤＥＬＴＡ ＡＮＤ ＰＩＮＥ ＬＡＮＤ（登録商標）から得られ、グリホサート耐性（Ｒｏｕｎｄ−ｕｐ Ｒｅａｄｙ（登録商標）形質）および昆虫耐性（Ｂｔ遺伝子）の両方の遺伝子発現を含むワタ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（Ｇａｕｃｈｏ Ｇｒａｎｄｅ）またはイミダクロプリド＆チオジカルブ（ＡＥＲＩＳ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類は、なし、ネコブセンチュウ（ｒｏｏｔ ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ）、ニセフクロセンチュウ（ｒｅｉｎｉｆｏｒｍ ｎｅｍａｔｏｄｅ）およびヤリセンチュウ（ｌａｎｃｅ ｎｅｍａｔｏｄｅ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。昆虫防除剤の散布量は５００−１０００ｇ（活性成分）／１００ｋｇであった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）は、ワタ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり１３６９−２６０８ｍｌであった。ワタ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのワタのポンド数として測定した。以下の表では、様々な線虫の種類における、１エーカー当たりのワタのポンド数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００４４】
【表１】
【００４５】
いくつかのマイナスの収量値は、制御不可能な環境的問題および植え付けの問題によるものである。実験番号３に関して、マイナスの値は、栽培者が誤って植え付ける数を少なくしたことによる可能性があり、作物収量に全体的に影響を与えている。実験番号６は、植え付けた区画の損傷により反復を行わなかった。
【実施例２】
【００４６】
実施例２では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｂａｙｅｒ ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅから入手可能なＳＴＯＮＥＶＩＬＬＥ（商標）から得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）および昆虫耐性（Ｂｔ遺伝子）の両方の遺伝子発現を含むワタ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（ＧＡＵＣＨＯ ＧＲＡＮＤＥ（登録商標））またはイミダクロプリド＆チオジカルブ（ＡＥＲＩＳ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類は、なし、ネコブセンチュウ（ｒｏｏｔ ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ）およびニセフクロセンチュウ（ｒｅｎｉｆｏｒｍ ｎｅｍａｔｏｄｅ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。昆虫防除剤の散布量は５００−１０００ｇ（活性成分）／１００ｋｇであった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はワタ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり１３６９−２６０８ｍｌであった。ワタ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのワタのポンド数として測定した。以下の表では、様々な線虫の種類における、１エーカー当たりのワタのポンド数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００４７】
【表２】
【実施例３】
【００４８】
実施例３では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｂａｙｅｒ ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅから入手可能なＦＩＢＥＲＭＡＸ（登録商標）から得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）および昆虫耐性（Ｂｔ遺伝子）の両方の遺伝子発現を含むワタ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（ＧＡＵＣＨＯ ＧＲＡＮＤＥ（登録商標））またはイミダクロプリド＆チオジカルブ（ＡＥＲＩＳ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類は、ネコブセンチュウ（ｒｏｏｔ ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ）およびニセフクロセンチュウ（ｒｅｎｉｆｏｒｍ ｎｅｍａｔｏｄｅ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はワタ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり１３６９−２６０８ｍｌであった。ワタ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのワタのポンド数を測定した。以下の表では、様々な線虫の種類における、１エーカー当たりのワタのポンド数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００４９】
【表３】
【実施例４】
【００５０】
実施例４では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｓｔｉｎｅ Ｓｅｅｄ Ｃｏｍｐａｎｙ製であり、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）遺伝子発現を含むダイズ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（ＧＡＵＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類は、なし、ネコブセンチュウ（ｒｏｏｔ ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ）およびダイズシストセンチュウ（ｓｏｙｂｅａｎ ｃｙｓｔ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）は、ダイズ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり２６１−６５２ｍｌであった。ダイズ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのダイズのブッシェル数として測定した。以下の表では、様々な線虫の種類における、１エーカー当たりのダイズのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００５１】
【表４】
【実施例５】
【００５２】
実施例５では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｍｏｎｓａｎｔｏ製のＡＳＧＲＯＷ（登録商標）であり、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）遺伝子発現を含むダイズ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（ＧＡＵＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類は、ネコブセンチュウ（ｒｏｏｔ ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ）およびダイズシストセンチュウ（ｓｏｙｂｅａｎ ｃｙｓｔ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）は、ダイズ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり２６１−６５２ｍｌであった。ダイズ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのダイズのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのダイズのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００５３】
【表５】
【実施例６】
【００５４】
実施例６では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、ＤｕＰｏｎｔ製のＰＩＯＮＥＥＲ（登録商標）から得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）遺伝子発現を含むダイズ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（ＧＡＵＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類は、なしおよびダイズシストセンチュウ（ｓｏｙｂｅａｎ ｃｙｓｔ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はダイズ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり２６１−６５２ｍｌであった。ダイズ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのダイズのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのダイズのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００５５】
【表６】
【実施例７】
【００５６】
実施例７では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｓｙｎｇｅｎｔａ ＳｅｅｄｓのＮＯＲＴＨＲＵＰ ＫＩＮＧ（商標）から得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）遺伝子発現を含むダイズ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（ＧＡＵＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類はダイズシストセンチュウ（ｓｏｙｂｅａｎ ｃｙｓｔ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はダイズ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合種子被覆の量は、種子１００ｋｇ当たり２６１−６５２ｍｌであった。ダイズ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのダイズのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのダイズのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００５７】
【表７】
【実施例８】
【００５８】
実施例８では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、ＤｕＰｏｎｔ製のＰＩＯＮＥＥＲ（登録商標）から得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）および昆虫耐性（Ｂｔ遺伝子）の両方の遺伝子発現を含むトウモロコシ種子である。殺虫剤はクロチアニジン（ＰＯＮＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。多種の線虫が存在した。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はトウモロコシ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり５２２−１０４４ｍｌであった。トウモロコシ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００５９】
【表８】
【実施例９】
【００６０】
実施例９では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｂｕｒｒｕｓ Ｃｏｍｐａｎｙから得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）および昆虫耐性（種々（ｖａｒｉｅｓ））の両方の遺伝子発現を含むトウモロコシ種子である。殺虫剤はクロチアイニジン（ｃｌｏｔｈｉａｉｎｉｄｉｎ）（ＰＯＮＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。多種の線虫が存在した。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はトウモロコシ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり５２２−１０４４ｍｌであった。トウモロコシ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００６１】
【表９】
【実施例１０】
【００６２】
実施例１０では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｓｙｎｇｅｎｔａ ＳｅｅｄｓのＧａｒｓｔ Ｃｏｍｐａｎｙ（ＡＧＲＩＥＤＧＥ（商標））から得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）および昆虫耐性（ネキリムシ（ｃｏｒｎ ｒｏｏｔ ｗｏｒｍ））の両方の遺伝子発現を含むトウモロコシ種子である。殺虫剤はクロチアニジン（ＰＯＮＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。多種の線虫が存在した。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はトウモロコシ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり５２２−１０４４ｍｌであった。トウモロコシ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００６３】
【表１０】
【００６４】
各実験のマイナスの収量差分値は、植え付けたプロットの損傷による可能性が高く、反復実験を行わなかった。実験番号１と実験番号２の平均をとると、対照が１４２．６、対照＋Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）が１４６．１であり、収量の差は３．５である。しがたって、芽胞形成細菌の使用は、最終的に肯定的な結果を示す。
【実施例１１】
【００６５】
実施例１１では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、製造会社から購入した未知のトウモロコシ種子であり、除草剤抵抗性および昆虫抵抗性の両方の様々な遺伝子発現を含む。殺虫剤はクロチアニジン（ＰＯＮＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。多種の線虫が存在した。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はトウモロコシ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり５２２−１０４４ｍｌであった。トウモロコシ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００６６】
【表１１】
【００６７】
上記の結果は驚くべきものである。上述するように、ほとんどの種子の品種が、昆虫防除剤だけに対して、芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せで改善した。
【００６８】
いくつかの実施形態によると、以下の割合（パーセント）で作物収量が増加した。ダイズ種子に関して、ＮＯＲＴＨＵＰ ＫＩＮＧ（商標）ダイズ種子、ＰＩＯＮＥＥＲ（登録商標）ダイズ種子およびＳｔｉｎｅ Ｓｅｅｄ Ｃｏｍｐａｎｙ製のダイズ種子に芽胞形成細菌を添加すると、ダイズのブッシェル収量がそれぞれ約２％増加、５％−１０％増加および４．３％増加を示した。この改善が数百エーカーにわたり広がると、作物収量が著しく向上する。ワタ種子に関して、ＤＥＬＴＡ ＡＮＤ ＰＩＮＥ ＬＡＮＤ（登録商標）ワタ種子およびＦＩＢＥＲＭＡＸ（登録商標）ワタ種子に芽胞形成細菌を添加すると、１エーカー当たりのワタのポンド数がそれぞれ約３％の増加および６．５％の増加を示した。また、数百エーカーのワタ植物にこの改善を広めると、収量が著しく向上される。トウモロコシ種子に関して、Ｂｕｒｒｕｓ Ｓｅｅｄ Ｃｏｍｐａｎｙ製のトウモロコシ種子および未知の市販のトウモロコシ種子に芽胞形成細菌を添加すると、１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数がそれぞれ約３．２％の増加および８％の増加を示した。さらにまた、これが数百エーカーにわたり広まると、作物収量が全体的に著しく向上する。総合的に、遺伝子組み換え種子と芽胞形成細菌および昆虫防除剤を組み合わせて使用した場合、作物収量に驚くべき利点がある。
【００６９】
さらなる利点、特徴および変更は当業者が容易に思い付く。したがって、広範な態様の本発明は、本明細書で示され記載された特定の詳細および代表的な装置に限定されない。ゆえに、添付の特許請求の範囲およびそれらの均等物により定義される一般的な発明概念の精神または範囲を逸脱せずに、様々な変更が行われてもよい。
【００７０】
本明細書に引用された全ての文献は、それらの全体が参照により本明細書に明確に組み込まれる。
【００７１】
本明細書および次の特許請求の範囲に使用される、「ｔｈｅ」、「ａ」および「ａｎ」などの冠詞は、単数または複数を含むことができる。
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は一般的に、植物寄生線虫および真菌による、植物の健康、生長力および収量の損害および損失全体を低減させる製品および方法に関する。より具体的には、本発明は、任意の昆虫防除剤と組み合わせた遺伝子組み換え種子および少なくとも１つの農業的に有益な芽胞形成細菌を含む製品、および遺伝子組み換え種子、植物および植物部位を処理するためにこの組合せを利用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（関連技術の記述）
線虫は、実質的にあらゆる種類の環境（陸地、淡水、海）に存在することが知られている微小線形動物である。８０，０００を超える既知の種のうち、その多く、特に有害生物に分類されるものは農業的に重要である。そのような種の１つがネコブセンチュウ（ｒｏｏｔ ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ）であり、様々な植物、低木および作物を攻撃する。このような土壌介在性線虫は、新しく形成された根を攻撃し、発育不全、突起（ｓｗｅｌｌｉｎｇ）または虫瘤の形成を引き起こす。次に根に亀裂が入る場合があり、根が細菌および真菌などの他の微生物にさらされる。低耕起栽培または不耕起栽培などの環境に優しい手法がとられ、様々な線虫種がトランスジェニック種子に対する抵抗性を獲得することより、線虫が関与する作物損失が増加すると考えられる。
【０００３】
土壌燻蒸剤または非燻蒸剤などの化学殺線虫剤は、線虫寄生を防ぐために長年使用されてきた。このような殺線虫剤は、植え付け前に地面に合成化学物質を繰り返し適用する必要がある場合がある。化学殺線虫剤は毒性があるため、米国環境保護庁（ＥＰＡ）により監視されており、それらの使用はＥＰＡによって制限または規制されている場合がある。臭化メチルおよび有機リン酸エステルなどの従来の化学殺線虫剤の使用が徐々に廃止されるにつれて、代替の処理選択肢の開発が必要とされている。米国特許第６，５９３，２７３号は、線虫寄生を処置するための殺有害生物剤によるトランスジェニックトウモロコシ種子の処理を開示している。
【０００４】
米国特許第６，８４４，３３９号は、線虫を防除するためのネオニコチノイドの使用を開示している。米国特許第６，８４４，３３９号における好ましい化合物は、ニトロイミノ化合物またはニトログアニジノ化合物である。ネオニコチノイドは、線虫の周囲または植物体自体のいずれにも適用することができる。ＷＯ／２００７／１４９８１７は、害虫および病原体からの植物保護を強化するための、アベルメクチンなどの殺線虫剤と生物学的防除剤の組合せを開示している。しかし、この組合せは、特定の化学殺線虫剤の使用における毒性に対処がなされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第６，５９３，２７３号明細書
【特許文献２】米国特許第６，８４４，３３９号明細書
【特許文献３】国際公開第２００７／１４９８１７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
（発明の要旨）
より毒性の高い従来の化学殺線虫剤を使用することなく、環境に優しい生物学的成分および低毒性の化学殺線虫剤を使用するが、それらを植物の生長力および収量を向上するように利用する、有効的な組成物および方法が依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、線虫による損害または寄生を抑制するための改善された製品および方法を提供する。本製品は、少なくとも１つの芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤を、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位と組み合わせて使用する。
【０００８】
種子、植物および／または植物部位を処理する方法もまた提供される。この方法は、（ａ）少なくとも１つの芽胞形成細菌を有効量含む組成物を提供し、（ｂ）任意の昆虫防除剤と芽胞形成細菌を組み合わせ、（ｃ）遺伝子組み換え種子、植物、および／または植物部位に組成物を適用することを含む。適用は、種子コーティング、土壌灌注の形態、および／または直接畝間に、および／または葉面散布などの任意の所望の方法によって行われ、出芽前、出芽後またはその両方のいずれかによって適用される。任意に、昆虫防除剤は、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位に別々に適用されることができる。さらに、少なくとも１つの殺真菌剤はまた、芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤と組み合わせてもよく、遺伝子組み換え植物、種子または植物部位に別々に適用されてもよい。つまり、個々の成分または組成物が、種子、植物、植物の葉面、植物の果実、もしくは植物が生育している土壌または植物が生育するのに望ましい土壌に適用されることができる。
【０００９】
本発明の１つの態様によると、芽胞形成細菌を、任意の昆虫防除剤および遺伝子組み換え種子と組み合わせて含む製品が提供される。
【００１０】
本発明の別の態様では、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位を処理する方法が提供され、この方法は、種子、植物または植物部位に、少なくとも１つの芽胞形成細菌および任意に少なくとも１つの昆虫防除剤を適用することを含む。
【００１１】
本発明のさらなる態様では、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位を線虫から保護する方法が提供され、この方法は、０．０００１重量％から２０重量％の少なくとも１つの芽胞形成細菌および０．００１重量％から２０重量％の少なくとも１つの昆虫防除剤を含む少なくとも１つの組成物を提供し、この組成物を種子、植物または植物部位に適用することを含む。
【００１２】
本発明のさらに別の態様では、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位を線虫から保護する組成物が提供され、この組成物は、（ｉ）約２重量から８０重量％の量の少なくとも１つの芽胞形成細菌、（ｉｉ）約１重量％から約８０重量％の量の少なくとも１つの昆虫防除剤および（ｉｉｉ）溶媒を含む。
【００１３】
本発明のよりさらなる態様では、少なくとも１つの芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤によって処理した遺伝子組み換え種子を製造する方法が提供され、この方法は、（ｉ）前記芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤を前記遺伝子組み換え種子に適用し、（ｉｉ）実質的に均一に処理するために前記遺伝子組み換え種子を混ぜることを含む。
【００１４】
本組成物による別の製品および方法が、以下の詳細な記述および請求の範囲に提供される。さらなる目的、特徴および利点は以下の記述に記載され、一部は記述から明らかでありまたは本発明の実施によって理解され得る。目的、特徴および利点は、添付の請求の範囲で特に指摘された手段および組合せによって実現され、得られることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
（発明の詳細な記述）
本明細書に開示される製品は、線虫寄生環境における植物生長力および収量を、遺伝子組み換え種子、植物および植物部位への殺虫剤の適用から期待されるものよりも高めることが分かっている。任意の昆虫防除剤の少なくとも一部は、昆虫圧力（ｉｎｓｅｃｔ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）がなくても根量を増加させることが示されており、根量の増加は、根圏内での有益な細菌の定着を向上させ、次に植物寄生線虫または真菌のいずれかによる作物生長力および収量の損失を全体的に減少させる。植物および植物部位を処理する際にこれらの成分を物理的に組み合わせると共に、芽胞形成、根部コロニー形成（ｒｏｏｔ−ｃｏｌｏｎｉｚｉｎｇ）細菌などの生きた芽胞形成細菌に安定した環境をもたらすように組成物を製剤化することもできる。殺真菌剤、殺虫剤、安定剤、乳化剤などの様々な添加剤が、所望の特性に応じて、芽胞形成細菌および／または遺伝子組み換え種子、植物または植物部位に添加されてもよい。
【００１６】
遺伝子組み換え種子、植物または植物部位は、昆虫防除および除草剤耐性のために典型的に開発されている。したがって、任意の昆虫防除剤と共に芽胞形成細菌の使用を加えることによって、悪条件下で生存する種子の能力が完成する。少なくとも１つの芽胞形成細菌は一般的に、植物の根系にコロニーを形成することが農業的に有益であると証明されている。任意の昆虫防除剤は、証明された直接的な殺線虫活性または殺真菌活性を有するかどうかに関わらず、適用された植物の根系の量を増加することが証明された能力を有する少なくとも１つの化学殺虫剤であることができる。遺伝子組み換え種子は、昆虫毒素または除草剤抵抗性を発現する遺伝子組み換え植物または植物部位を生じるいずれかの種子であることができる。さらに、遺伝子組み換え種子は、細菌および真菌に毒素または抵抗性を発現する遺伝子組み換え植物または植物部位を生じるいずれかの種子であることができる。さらに、遺伝子組み換え種子は、水ストレスおよび窒素生産などの環境要因に耐性を発現する遺伝子組み換え植物または植物部位を生じるいずれかの種子であってもよい。
【００１７】
昆虫毒素に関して、米国特許第５，８７７，０１２号は、その全体が参照により本明細書に組み込まれ、タマナヤガ（ｂｌａｃｋ ｃｕｔｗｏｒｍ）、アワヨトウ（ａｒｍｙｗｏｒｍ）および穿孔性害虫（ｂｏｒｅｒ）などの害虫に抵抗性のあるトランスジェニック植物を得るために、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、プセウドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、クラウィバクテル（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ）およびリゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）などの生物由来のタンパク質の植物へのクローニングおよび発現を開示している。さらに、米国特許第５，６２５，１３６号および米国特許第５，８５９，３３６号は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれ、デルタ内毒素をコードするＢ．チューリンゲンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来の遺伝子を用いたトウモロコシ植物の形質転換を開示し、トランスジェニックトウモロコシのアワノメイガ（Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｃｏｒｎ ｂｏｒｅｒ）に対する抵抗性が改良されたことを証明している。Ｂ．チューリンゲンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来の殺虫性タンパク質を発現するトランスジェニックトウモロコシの圃場試験についての総括的な報告が、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ｃｒｏｐ Ｓｃｉｅｎｃｅ、３５（２）：５５０−５５７（１９９５）により提供されており、その全体が参照により組み込まれている。Ｂ．チューリンゲンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）遺伝子をコードするトウモロコシを開示している文献としてさらに、全体が参照により組み込まれる米国特許第４，７６６，２０３号、米国特許第４，７９７，２７９号および米国特許第４，９１０，０１６号ならびに全体が参照により組み込まれるＷＯ９９／３１２２４８が挙げられる。除草剤抵抗性に関して、米国特許第４，９７１，９０８号は、その全体が参照により本明細書に組み込まれ、グリホサート抵抗性である遺伝子組み換え植物を開示している。グリホサート抵抗性は、植物または種子を遺伝子組み換えし、触媒活性を維持しながらグリホサートに低い親和性を示す変異ＥＰＳＰ合成酵素を生産することによって達成される。グリホサート抵抗性植物および種子を開示する文献としてさらに、米国特許第５，４６３，１７５号、米国特許第５，７７６，７６０号、米国特許第５，８０４，４２５号、米国特許第６，６８９，８８０号、米国特許第６，８０３，５０１号、米国特許第７，２１４，５３５号および米国特許第７，３３５，８１６号が挙げられ、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００１８】
ある芽胞形成細菌は農業的に有益であることが示されている。好ましくは、少なくとも１つの芽胞形成細菌は根部コロニー形成細菌（例えば、根圏細菌（ｒｈｉｚｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ））である。農業的有益性とは、植物病原性真菌または細菌および／または線虫類（Ｎｅｍａｔｏｄａ）または袋形動物門（Ａｓｃｈｅｌｍｉｎｔｈｅｓ）に属する動物などの土壌介在性動物の悪影響から保護する細菌の能力をいう。植物寄生線虫および植物寄生微生物からの保護は、これらの土壌介在性動物に有害でありおよび／または微生物集団に有害であるキチン分解活性、タンパク質分解活性、コラーゲン分解活性などの活性を介して行われることができる。これらの殺線虫特性、殺真菌特性および殺菌特性を示す細菌として、バチルス・アルグリ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｒｇｒｉ）、バチルス・アイザワイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｉｚａｗａｉ）、バチルス・アルボラクティス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｂｏｌａｃｔｉｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・ケレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・エンドパラシティカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｅｎｄｏｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓ）、バチルス・エンドリズモス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｅｎｄｏｒｈｙｔｈｍｏｓ）、バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）、バチルス・クルスターキ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｋｕｒｓｔａｋｉ）、バチルス・ラクティコラ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｃｏｌａ）、バチルス・ラクティモルブス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｍｏｒｂｕｓ）、バチルス・ラクティス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、バチルス・ラテロスポルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）、バチルス・レンチモルブス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｉｍｏｒｂｕｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・メドゥサ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｄｕｓａ）、バチルス・メチエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｔｉｅｎｓ）、バチルス・ナットウ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｎａｔｔｏ）、バチルス・ニグリフィカンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｎｉｇｒｉｆｉｃａｎｓ）、バチルス・ポピラエ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｐｉｌｌａｅ）、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・シアメンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｉａｍｅｎｓｉｓ）、バチルス・スフィアリカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈｅａｒｉｃｕｓ）、バチルス属種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、バチルス・サブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・チュルンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｎｇｉｅｎｓｉｓ）、バチルス・ユニファゲラタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｕｎｉｆａｇｅｌｌａｔｕｓ）、および全体が参照により組み込まれる「Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ」第１版、（１９８６）のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属のカテゴリーに記載されたものを挙げることができるが、これらに限定されない。
【００１９】
好ましくは、芽胞形成細菌は、全体が参照により組み込まれる米国特許第６，４０６，６９０号に開示される少なくとも１つのＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）ＣＮＣＭ Ｉ−１５８２芽胞および／またはＢ．ケレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）ＣＮＣＭ Ｉ−１５６２株芽胞である。最も好ましくは、芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）ＣＮＣＭ Ｉ−１５８２である。あるいは、芽胞形成細菌は少なくとも１つのＢ．アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＩＮ９３７ａ、少なくとも１つの バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）のＧＢ０３株または少なくとも１つのＢ．プムリス（Ｂ．ｐｕｍｕｌｉｓ）のＧＢ３４株であることができる。さらに、芽胞形成細菌は、上記のいずれかの種だけでなく農業的に有益な特性を示すことが知られている他の芽胞形成、根部コロニー形成細菌の混合物であることができる。
【００２０】
好ましい実施形態において、芽胞形成細菌は、粉末、水溶液または非水溶液のいずれかとして種子、植物または植物部位に適用可能である。粉末は乾燥粉末、水和剤または顆粒水和剤のいずれかであることができる。好ましくは、芽胞形成細菌は、溶液、乳剤、水和剤、懸濁剤（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ）、水溶剤（ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｏｗｄｅｒ）、粒剤、懸濁乳剤（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ−ｅｍｕｌｓｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ）、活性化合物が含浸された天然および合成物質、ならびに徐放性カプセル（ｆｉｎｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒｅｌｅａｓｅ ｃａｐｓｕｌｅ）である。液体および乾燥の形態の芽胞形成細菌は、植え付け前、植え付け時または植え付け後に土壌と混合され得る。最も好ましくは、製剤は、植え付け前または植え付け時に土壌に混合される液体状である。
【００２１】
組成物に使用される少なくとも１つの芽胞形成細菌の量は、最終製剤だけでなく使用する植物、植物部位または種子のサイズまたは種類によって変えることができる。好ましくは、組成物中の少なくとも１つの芽胞形成細菌は、製剤全重量の約２重量％から製剤全重量の約８０重量％で存在する。より好ましくは、製剤全重量の約５重量％から製剤全重量の約６５重量％、最も好ましくは、製剤全重量の約１０重量％から製剤全重量の約６０重量％である。
【００２２】
組成物は、少なくとも１つの任意の昆虫防除剤をさらに含む。好ましくは、昆虫防除剤は、直接的な殺線虫活性および使用した芽胞形成細菌に対して有害な活性がない、任意の殺虫性化学物質または殺虫活性を有する組成物でもよく、適用によって根量を増加させる能力もさらに有することが好ましい。あるいは、この組合せは、殺線虫特性または殺真菌特性を示す少なくとも１つの追加の化学物質を含むこともできる。このような組成物は、線虫寄生の密度が極めて高い地理的領域に有用であり、または高い真菌病圧力に対してさらなる殺真菌活性を与えるのに有用であり得る。植物、種子または植物体は、追加の昆虫防除剤または殺真菌防除剤と別々にまたは同時に処理することができる。最も好ましくは、昆虫防除剤は、式（Ｉ）の非殺線虫ネオニコチノイド系殺虫剤化合物である。
【００２３】
別の好ましい実施形態では、任意の昆虫防除剤は、式（Ｉ）の少なくとも１つの浸透性の非殺線虫ネオニコチノイド系殺虫剤化合物である。
【００２４】
【化１】
式中、
Ａは、２−クロロピリド−５−イル、２−メチルピリド−５−イル、１−オキシド−３−ピリジニオ、２−クロロ−１−オキシド−５−ピリジニオ、２，３−ジクロロ−１−オキシド−５−ピリジニオ、テトラヒドロフラン−３−イル、５−メチル−テトラヒドロフラン−３−イルまたは２−クロロチアゾール−５−イル基であり、
Ｒは、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、フェニル−Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルまたはＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｙは、−−Ｎ（Ｒ）（Ｒ２）またはＳＲ２であり、
Ｒ１およびＲ２は、互いに独立してＣ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルケニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキニル（ａｌｋｉｎｙｌ）、−−Ｃ（＝Ｏ）−−ＣＨ３もしくはベンジル、または一緒になって−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−、−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−、−−ＣＨ２−−Ｏ−−ＣＨ２−−、−−ＣＨ２−−Ｓ−−ＣＨ２−−、−−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−−もしくはＣＨ２−−Ｎ（ＣＨ３）−−ＣＨ２−−基であり、
Ｘは、Ｎ−−ＮＯ２またはＮ−−ＣＮもしくはＣＨ−−ＮＯ２である。
特に好ましい非殺線虫ネオニコチノイド系殺虫剤として、１−（６−クロロ−３−ピリジルメチル）−Ｎ−ニトロイミダゾリジン−２−イリデンアミン（イミダクロプリド）、３−（６−クロロ−３−ピリジルメチル）−１，３−チアゾリジン−２−イリデンシアナミド（チアクロプリド）、１−（２−クロロ−１，３−チアゾール−５−イルメチル）−３−メチル−２−ニトログアニジン（クロチアニジン）、ニテムピラン（ｎｉｔｅｍｐｙｒａｎ）、Ｎ１−［（６−クロロ−３−ピリジル）メチル］−Ｎ２−シアノ−Ｎ１−メチルアセトアミジン（アセタミプリド）、３−（２−クロロ−１，３−チアゾール−５−イルメチル）−５−メチル−１，３，５−オキサジアジナン−４−イリデン（ニトロ）アミン（チアメトキサム）および１−メチル−２−ニトロ−３−（テトラヒドロ−３−フリルメチル）グアニジン（ジノテフラン）が挙げられる。
【００２５】
別の実施形態において、芽胞形成細菌−昆虫防除剤の組合せは、直接的な殺線虫活性を有する追加の化学物質を任意に含むことができる。適切な殺線虫昆虫防除剤として、アバメクチンなどの抗生物質殺線虫剤（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｎｅｍａｔｉｃｉｄｅ）；ベノミル、カルボフラン、カルボスルファンおよびクレオソカード（ｃｌｅｏｔｈｏｃａｒｄ）などのカーバメート系殺線虫剤；アラニカルブ、アルジカルブ、アルドキシカルブ、オキサミルなどのオキシムカーバメート系殺線虫剤；ジアミダホス、フェナミホス、ホスチエタン、ホスファミドン、カズサホス、クロルピリホス、ジクロフェンチオン（ｄｉｃｌｏｆｅｎｔｈｉｏｎ）、ジメトエート、エトプロホス、フェンスルホチオン、ホスチアゼート、ヘテロホス、イサミドホス、イサゾホス、メソミル、ホレート、ホスホカルブ、テルブホス、チオジカルブ、チオナジン、トリアゾホス、イミシアホスおよびメカルホンなどの有機リン系殺線虫剤が挙げられる。他の適切な殺線虫昆虫防除剤として、アセトプロール、ベンクロチアズ、クロロピクリン、ダゾメット、ＤＢＣＰ、ＤＣＩＰ、１，２−ジクロロプロパン、１，３−ジクロロプロペン、フルフラール、ヨードメタン、メタム、臭化メチル、メチルイソチオシアネートおよびキシレノールが挙げられる。あるいは、芽胞形成細菌は、ミロテシウム・ベルカリア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕｃａｒｉａ）、バーホルデリア・セパシア（Ｂｕｒｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、バチルス・チトノスポルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｈｉｔｏｎｏｓｐｏｒｕｓ）およびパエシロミセス・リラシナス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｌｉｌａｃｉｎｕｓ）などの生物学的殺線虫剤、もしくはハーピンタンパク質、アミノ酸配列などの植物または動物由来の殺線虫剤、もしくはウイルス、ウイロイド粒子と組み合わせることもできる。
【００２６】
芽胞形成細菌に添加される少なくとも１つの任意の昆虫防除剤の量は、最終製剤だけでなく処理する植物および種子のサイズによって変えることができる。好ましくは、少なくとも１つの昆虫防除剤は、製剤全重量の約１重量％から製剤全重量の約８０重量％である。より好ましくは、昆虫防除剤は、製剤全重量の約５重量％から製剤全重量の約６０重量％の量で存在する。最も好ましくは、昆虫防除剤は、製剤全重量の約１０重量％から製剤全重量の約５０重量％の量で存在する。
【００２７】
さらなる実施形態において、単独または昆虫防除剤と組み合わせの芽胞形成細菌は、有効量の少なくとも１つの殺真菌剤をさらに含むことができる。好ましくは、殺真菌剤として、アルジモルフ（ａｌｄｉｍｏｒｐｈ）、アンプロピルホス（ａｍｐｒｏｐｙｌｆｏｓ）、アンプロピルホスカリウム（ａｍｐｒｏｐｙｌｆｏｓ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ）、アンドプリム（ａｎｄｏｐｒｉｍ）、アニラジン（ａｎｉｌａｚｉｎｅ）、アザコナゾール（ａｚａｃｏｎａｚｏｌｅ）、アゾキシストロビン（ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ）、ベナラキシル（ｂｅｎａｌａｘｙｌ）、ベノダニル（ｂｅｎｏｄａｎｉｌ）、ベノミル（ｂｅｎｏｍｙｌ）、ベンザマクリル（ｂｅｎｚａｍａｃｒｉｌ）、ベンザマクリル−イソブチル（ｂｅｎｚａｍａｃｒｙｌ−ｉｓｏｂｕｔｙｌ）、ビアラフォス（ｂｉａｌａｐｈｏｓ）、ビナパクリル（ｂｉｎａｐａｃｒｙｌ）、ビフェニル（ｂｉｐｈｅｎｙｌ）、ビテルタノール（ｂｉｔｅｒｔａｎｏｌ）、ブラスチシジン−Ｓ（ｂｌａｓｔｉｃｉｄｉｎ−Ｓ）、ボスカリド（ｂｏｓｃａｌｉｄ）、ブロムコナゾール（ｂｒｏｍｕｃｏｎａｚｏｌｅ）、ブピリメート（ｂｕｐｉｒｉｍａｔｅ）、ブチオベート（ｂｕｔｈｉｏｂａｔｅ）、多硫化カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ ｐｏｌｙｓｕｌｐｈｉｄｅ）、カプシマイシン（ｃａｐｓｉｍｙｃｉｎ）、カプタホール（ｃａｐｔａｆｏｌ）、キャプタン（ｃａｐｔａｎ）、カルベンダジム（ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ）、カルボキシン（ｃａｒｂｏｘｉｎ）、カルボン（ｃａｒｖｏｎ）、キノメチオネート（ｑｕｉｎｏｍｅｔｈｉｏｎａｔｅ）、クロベンチアゾン（ｃｈｌｏｂｅｎｔｈｉａｚｏｎｅ）、クロルフェナゾール（ｃｈｌｏｒｆｅｎａｚｏｌｅ）、クロロネブ（ｃｈｌｏｒｏｎｅｂ）、クロロピクリン（ｃｈｌｏｒｏｐｉｃｒｉｎ）、クロロタロニル（ｃｈｌｏｒｏｔｈａｌｏｎｉｌ）、クロゾリネート（ｃｈｌｏｚｏｌｉｎａｔｅ）、クロジラコン（ｃｌｏｚｙｌａｃｏｎ）、クフラネブ（ｃｕｆｒａｎｅｂ）、シモキサニル（ｃｙｍｏｘａｎｉｌ）、シプロコナゾール（ｃｙｐｒｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、シプロジニル（ｃｙｐｒｏｄｉｎｉｌ）、シプロフラム（ｃｙｐｒｏｆｕｒａｍ）、デバカルブ（ｄｅｂａｃａｒｂ）、ジクロロフェン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎ）、ジクロブトラゾール（ｄｉｃｌｏｂｕｔｒａｚｏｌｅ）、ジクロフルアニド（ｄｉｃｌｏｆｌｕａｎｉｄ）、ジクロメジン（ｄｉｃｌｏｍｅｚｉｎｅ）、ジクロラン（ｄｉｃｌｏｒａｎ）、ジエトフェンカルブ（ｄｉｅｔｈｏｆｅｎｃａｒｂ）、ジフェノコナゾール（ｄｉｆｅｎｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、ジメチリモール（ｄｉｍｅｔｈｉｒｉｍｏｌ）、ジメトモルフ（ｄｉｍｅｔｈｏｍｏｒｐｈ）、ジモキシストロビン（ｄｉｍｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ）、ジニコナゾール（ｄｉｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、ジニコナゾール−Ｍ（ｄｉｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ−Ｍ）、ジノキャップ（ｄｉｎｏｃａｐ）、ジフェニルアミン（ｄｉｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｅ）、ジピリチオン（ｄｉｐｙｒｉｔｈｉｏｎｅ）、ジタリムホス（ｄｉｔａｌｉｍｆｏｓ）、ジチアノン（ｄｉｔｈｉａｎｏｎ）、ドデモルフ（ｄｏｄｅｍｏｒｐｈ）、ドジン（ｄｏｄｉｎｅ）、ドラゾキソロン（ｄｒａｚｏｘｏｌｏｎ）、エジフェンホス（ｅｄｉｆｅｎｐｈｏｓ）、エポキシコナゾール（ｅｐｏｘｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、エタコナゾール（ｅｔａｃｏｎａｚｏｌｅ）、エチリモル（ｅｔｈｉｒｉｍｏｌ）、エトリジアゾール（ｅｔｒｉｄｉａｚｏｌｅ）、ファモキサドン（ｆａｍｏｘａｄｏｎ）、フェナパニル（ｆｅｎａｐａｎｉｌ）、フェナリモル（ｆｅｎａｒｉｍｏｌ）、フェンブコナゾール（ｆｅｎｂｕｃｏｎａｚｏｌｅ）、フェンフラム（ｆｅｎｆｕｒａｍ）、フェニトロパン（ｆｅｎｉｔｒｏｐａｎ）、フェンピクロニル（ｆｅｎｐｉｃｌｏｎｉｌ）、フェンプロピジン（ｆｅｎｐｒｏｐｉｄｉｎ）、フェンプロピモルフ（ｆｅｎｐｒｏｐｉｍｏｒｐｈ）、フェンチンアセテート（ｆｅｎｔｉｎ ａｃｅｔａｔｅ）、フェンチンヒドロキシド（ｆｅｎｔｉｎ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ）、フェルバム（ｆｅｒｂａｍ）、フェリムゾン（ｆｅｒｉｍｚｏｎｅ）、フルアジナム（ｆｌｕａｚｉｎａｍ）、フルジオキソニル（ｆｌｕｄｉｏｘｏｎｉｌ）、フルメトベル（ｆｌｕｍｅｔｏｖｅｒ）、フルオロミド（ｆｌｕｏｒｏｍｉｄｅ）、フルキンコナゾール（ｆｌｕｑｕｉｎｃｏｎａｚｏｌｅ）、フルルプリミドール（ｆｌｕｒｐｒｉｍｉｄｏｌ）、フルシラゾール（ｆｌｕｓｉｌａｚｏｌｅ）、フルスルファミド（ｆｌｕｓｕｌｆａｍｉｄｅ）、フルトラニル（ｆｌｕｔｏｌａｎｉｌ）、フルトリアホール（ｆｌｕｔｒｉａｆｏｌ）、ホルペット（ｆｏｌｐｅｔ）、ホセチル−アルミニウム（ｆｏｓｅｔｙｌ−ａｌｕｍｉｎｉｕｍ）、ホセチル−ナトリウム（ｆｏｓｅｔｙｌ−ｓｏｄｉｕｍ）、フタリド（ｆｔｈａｌｉｄｅ）、フベリダゾール（ｆｕｂｅｒｉｄａｚｏｌｅ）、フララキシル（ｆｕｒａｌａｘｙｌ）、フラメトピル（ｆｕｒａｍｅｔｐｙｒ）、フルカルボニル（ｆｕｒｃａｒｂｏｎｉｌ）、フルコナゾール（ｆｕｒｃｏｎａｚｏｌｅ）、フルコナゾール−シス（ｆｕｒｃｏｎａｚｏｌｅ−ｃｉｓ）、フルメシクロックス（ｆｕｒｍｅｃｙｃｌｏｘ）、グアザチン（ｇｕａｚａｔｉｎｅ）、ヘキサクロロベンゼン（ｈｅｘａｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ）、ヘキサコナゾール（ｈｅｘａｃｏｎａｚｏｌｅ）、ヒメキサゾール（ｈｙｍｅｘａｚｏｌｅ）、イマザリル（ｉｍａｚａｌｉｌ）、イミベンコナゾール（ｉｍｉｂｅｎｃｏｎａｚｏｌｅ）、イミノクタジン（ｉｍｉｎｏｃｔａｄｉｎｅ）、イミノクタジンアルベシレート（ｉｍｉｎｏｃｔａｄｉｎｅ ａｌｂｅｓｉｌａｔｅ）、イミノオクタジントリアセテート（ｉｍｉｎｏｃｔａｄｉｎｅ ｔｒｉａｃｅｔａｔｅ）、ヨードカルブ（ｉｏｄｏｃａｒｂ）、イプコナゾール（ｉｐｃｏｎａｚｏｌｅ）、イプロベンホス（ｉｐｒｏｂｅｎｆｏｓ（ＩＢＰ））、イプロジオン（ｉｐｒｏｄｉｏｎｅ）、イルママイシン（ｉｒｕｍａｍｙｃｉｎ）、イソプロチオラン（ｉｓｏｐｒｏｔｈｉｏｌａｎｅ）、イソバレジオン（ｉｓｏｖａｌｅｄｉｏｎｅ）、カスガマイシン（ｋａｓｕｇａｍｙｃｉｎ）、クレソキシム−メチル（ｋｒｅｓｏｘｉｍ−ｍｅｔｈｙｌ）、銅調製物（例えば、水酸化銅、ナフテン酸銅、オキシ塩化銅、硫酸銅、酸化銅、オキシン銅およびボルドー液（Ｂｏｒｄｅａｕｘ ｍｉｘｔｕｒｅ））、マンカッパー（ｍａｎｃｏｐｐｅｒ）、マンコゼブ（ｍａｎｃｏｚｅｂ）、マネブ（ｍａｎｅｂ）、メフェリムゾン（ｍｅｆｅｒｉｍｚｏｎｅ）、メパニピリム（ｍｅｐａｎｉｐｙｒｉｍ）、メプロニル（ｍｅｐｒｏｎｉｌ）、メタラキシル（ｍｅｔａｌａｘｙｌ）、メトコナゾール（ｍｅｔｃｏｎａｚｏｌｅ）、メタスルホカルブ（ｍｅｔｈａｓｕｌｆｏｃａｒｂ）、メトフロキサム（ｍｅｔｈｆｕｒｏｘａｍ）、メチラム（ｍｅｔｉｒａｍ）、メトメクラム（ｍｅｔｏｍｅｃｌａｍ）、メトスルホバックス（ｍｅｔｓｕｌｆｏｖａｘ）、ミルジオマイシン（ｍｉｌｄｉｏｍｙｃｉｎ）、ミクロブタニル（ｍｙｃｌｏｂｕｔａｎｉｌ）、ミクロゾリン（ｍｙｃｌｏｚｏｌｉｎ）、ニッケルジメチルジチオカーバメート（ｎｉｃｋｅｌ ｄｉｍｅｔｈｙｌｄｉｔｈｉｏｃａｒｂａｍａｔｅ）、ニトロタル−イソプロピル（ｎｉｔｒｏｔｈａｌ−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ）、ヌアリモール（ｎｕａｒｉｍｏｌ）、オフレース（ｏｆｕｒａｃｅ）、オキサジキシル（ｏｘａｄｉｘｙｌ）、オキサモカルブ（ｏｘａｍｏｃａｒｂ）、オキソリン酸（ｏｘｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、オキシカルボキシム（ｏｘｙｃａｒｂｏｘｉｍ）、オキシフェンチイン（ｏｘｙｆｅｎｔｈｉｉｎ）、パクロブトラゾール（ｐａｃｌｏｂｕｔｒａｚｏｌｅ）、ペフラゾエート（ｐｅｆｕｒａｚｏａｔｅ）、ペンコナゾール（ｐｅｎｃｏｎａｚｏｌｅ）、ペンシクロン（ｐｅｎｃｙｃｕｒｏｎ）、ホスジフェン（ｐｈｏｓｄｉｐｈｅｎ）、ピマリシン（ｐｉｍａｒｉｃｉｎ）、ピペラリン（ｐｉｐｅｒａｌｉｎ）、ポリオキシン（ｐｏｌｙｏｘｉｎ）、ポリオキソリム（ｐｏｌｙｏｘｏｒｉｍ）、プロベナゾール（ｐｒｏｂｅｎａｚｏｌｅ）、プロクロラズ（ｐｒｏｃｈｌｏｒａｚ）、プロシミドン（ｐｒｏｃｙｍｉｄｏｎｅ）、プロパモカルブ（ｐｒｏｐａｍｏｃａｒｂ）、プロパノシン−ナトリウム（ｐｒｏｐａｎｏｓｉｎｅ−ｓｏｄｉｕｍ）、プロピコナゾール（ｐｒｏｐｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、プロピネブ（ｐｒｏｐｉｎｅｂ）、プロチオシナゾール（ｐｒｏｔｈｉｏｃｉｎａｚｏｌｅ）、ピラクロストロビン（ｐｙｒａｃｌｏｓｔｒｏｂｉｎ）、ピラゾホス（ｐｙｒａｚｏｐｈｏｓ）、ピリフェノックス（ｐｙｒｉｆｅｎｏｘ）、ピリメタニル（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｉｌ）、ピロキロン（ｐｙｒｏｑｕｉｌｏｎ）、ピロキシフル（ｐｙｒｏｘｙｆｕｒ）、キンコナゾール（ｑｕｉｎｃｏｎａｚｏｌｅ）、キントゼン（ｑｕｉｎｔｏｚｅｎｅ（ＰＣＮＢ））、硫黄および硫黄調製物、テブコナゾール（ｔｅｂｕｃｏｎａｚｏｌｅ）、テクロフタラム（ｔｅｃｌｏｆｔａｌａｍ）、テクナゼン（ｔｅｃｎａｚｅｎｅ）、テトシクラシス（ｔｅｔｃｙｃｌａｓｉｓ）、テトラコナゾール（ｔｅｔｒａｃｏｎａｚｏｌｅ）、チアベンダゾール（ｔｈｉａｂｅｎｄａｚｏｌｅ）、チシオフェン（ｔｈｉｃｙｏｆｅｎ）、チフルザミド（ｔｈｉｆｌｕｚａｍｉｄｅ）、チオファネート−メチル（ｔｈｉｏｐｈａｎａｔｅ−ｍｅｔｈｙｌ）、チラム（ｔｈｉｒａｍ）、チオキシミド（ｔｉｏｘｙｍｉｄ）、トルクロホス−メチル（ｔｏｌｃｌｏｆｏｓ−ｍｅｔｈｙｌ）、トリルフルアニド（ｔｏｌｙｌｆｌｕａｎｉｄ）、トリアジメホン（ｔｒｉａｄｉｍｅｆｏｎ）、トリアジメノール（ｔｒｉａｄｉｍｅｎｏｌ）、トリアズブチル（ｔｒｉａｚｂｕｔｉｌ）、トリアゾキシド（ｔｒｉａｚｏｘｉｄｅ）、トリクラミド（ｔｒｉｃｈｌａｍｉｄｅ）、トリシクラゾール（ｔｒｉｃｙｃｌａｚｏｌｅ）、トリデモルフ（ｔｒｉｄｅｍｏｒｐｈ）、トリフロキシストロビン（ｔｒｉｆｌｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ）、トリフルミゾール（ｔｒｉｆｌｕｍｉｚｏｌｅ）、トリホリン（ｔｒｉｆｏｒｉｎｅ）、トリチコナゾール（ｔｒｉｔｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、ユニコナゾール（ｕｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、バリダマイシンＡ（ｖａｌｉｄａｍｙｃｉｎ Ａ）、ビンクロゾリン（ｖｉｎｃｌｏｚｏｌｉｎ）、ビニコナゾール（ｖｉｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、ザリラミド（ｚａｒｉｌａｍｉｄｅ）、ジネブ（ｚｉｎｅｂ）、ジラム（ｚｉｒａｍ）およびまたダガーＧ（Ｄａｇｇｅｒ Ｇ）、ＯＫ−８７０５、ＯＫ−８８０１、α−（１，１−ジメチルエチル）−β−（２−フェノキシエチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−エタノール、α−（２，４−ジクロロフェニル）−β−フルオロ−β−プロピル−１Ｈ−−１，２，４−トリアゾール−１−エタノール、α−（２，４−ジクロロフェニル）−β−メトキシ−α−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−エタノール、α−（５−メチル−１，３−ジオキサン−５−イル）−β−［［４−（トリフルオロメチル）−フェニル］−メチレン］−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−エタノール、（５ＲＳ，６ＲＳ）−６−ヒドロキシ−２，２，７，７−テトラメチル−５−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−３−オクタノン、（Ｅ）−α−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチル−２−フェノキシ−フェニルアセトアミド、１−イソプロピル｛２−メチル−１−［［［１−（４−メチルフェニル）−エチル］−アミノ］−カルボニル］−プロピル｝カルバメート、１−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−エタノン−Ｏ−（フェニルメチル）−オキシム、１−（２−メチル−１−ナフタレニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，５−ジクロロフェニル）−３−（２−プロペニル）−２，５−ピロリジンジオン、１−［（ジヨードメチル）−スルホニル］−４−メチル−ベンゼン、１−［［２−（２，４−ジクロロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］−メチル］−１Ｈ−イミダゾール、１−［［２−（４−クロロフェニル）−３−フェニルオキシラニル］−メチル］−１Ｈ−
１，２，４−トリアゾール、１−［１−［２−［（２，４−ジクロロフェニル）−メトキシ］−フェニル］−エテニル］−１Ｈ−イミダゾール、１−メチル−５−ノニル−２−（フェニルメチル）−３−ピロリジノール、２’，６’−ジブロモ−２−メチル−４’−トリフルオロメトキシ−４’−トリフルオロ−メチル−１，３−チアゾール−５−カルボキサニリド、２，２−ジクロロ−Ｎ−［１−（４−クロロフェニル）−エチル］−１−エチル−３−メチル−シクロプロパンカルボキサミド、２，６−ジクロロ−５−（メチルチオ）−４−ピリミジニル−チオシアネート、２，６−ジクロロ−Ｎ−（４−トリフルオロメチルベンジル）−ベンズアミド、２，６−ジクロロ−Ｎ−［［４−（トリフルオロメチル）−フェニル］−メチル］−ベンズアミド、２−（２，３，３−トリヨード−２−プロペニル）−２Ｈ−テトラゾール、２−［（１−メチルエチル）−スルホニル］−５−（トリクロロメチル）−１，３，４−チアジアゾール、２−［［６−デオキシ−４−Ｏ−（４−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グリコピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシル］−アミノ］−４−メトキシ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボニトリル、２−アミノブタン、２−ブロモ−２−（ブロモメチル）−ペンタンジニトリル、２−クロロ−Ｎ−（２，３−ジヒドロ−１，１，３−トリメチル−１Ｈ−インデン−４−イル）−３−ピリジンカルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）−Ｎ−（イソチオシアナトメチル）−アセトアミド、２−フェニルフェノール（ＯＰＰ）、３，４−ジクロロ−１−［４−（ジフルオロメトキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、３，５−ジクロロ−Ｎ−［シアノ［（１−メチル−２−プロピニル）−オキシ］−メチル］−ベンズアミド、３−（１，１−ジメチルプロピル−１−オキソ−１Ｈ−インデン−２−カルボニトリル、３−［２−（４−クロロフェニル）−５−エトキシ−３−イソオキサゾリジニル］−ピリジン、４−クロロ−２−シアノ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−（４−メチルフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−１−スルホンアミド、４−メチル−テトラゾロ［１，５−ａ］キナゾリン−５（４Ｈ）−オン、８−（１，１−ジメチルエチル）−Ｎ−エチル−Ｎ−プロピル−１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカン−２−メタンアミン、８−ヒドロキシキノリン硫酸塩、９Ｈ−キサンテン−２−［（フェニルアミノ）−カルボニル］−９−カルボン酸ヒドラシド、ビス−（１−メチルエチル）−３−メチル−４−［（３−メチルベンゾイル）−オキシ］−２，５−チオフェンジカルボキシレート、ｃｉｓ−１−（４−クロロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−シクロヘプタノール、ｃｉｓ−４−［３−［４−（１，１−ジメチルプロピル）−フェニル−２−メチルプロピル］−２，６−ジメチル−モルホリンヒドロクロリド、エチル［（４−クロロフェニル）−アゾ］−シアノアセテート、重炭酸カリウム、メタンテトラチオール−ナトリウム塩、メチル１−（２，３−ジヒドロ−２，２−ジメチル−１Ｈ−インデン−１−イル）−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート、メチルＮ−（２，６−ジメチルフェニル）−Ｎ−（５−イソオキサゾリルカルボニル）−ＤＬ−アラニネート、メチルＮ−（クロロアセチル）−Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）−ＤＬ−アラニネート、Ｎ−（２，３−ジクロロ−４−ヒドロキシフェニル）−１−メチル−シクロヘキサンカルボキサミド、Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−（テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）−アセトアミド、Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−（テトラヒドロ−２−オキソ−３−チエニル）−アセトアミド、Ｎ−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）−４−メチル−３−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−（４−シクロヘキシルフェニル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−２−ピリミジンアミン、Ｎ−（４−ヘキシルフェニル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−２−ピリミジンアミン、Ｎ−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）−アセトアミド、Ｎ−（６−メトキシ）−３−ピリジニル）−シクロプロパンカルボキサミド、Ｎ−［２，２，２−トリクロロ−１−［（クロロアセチル）−アミノ］−エチル］−ベンズアミド、Ｎ−［３−クロロ−４，５−ビス（２−プロピニルオキシ）−フェニル］−Ｎ’−メトキシ−メタンイミドアミド、Ｎ−ホルミル−Ｎ−ヒドロキシ−ＤＬ−アラニン−ナトリウム塩、Ｏ，Ｏ−ジエチル［２−（ジプロピルアミノ）−２−オキソエチル］−エチルホスホルアミドチオエート、Ｏ−メチルＳ−フェニルフェニルプロピルホスホルアミドチオアート、Ｓ−メチル１，２，３−ベンゾチアジアゾール−７−カルボチオエート、およびスピロ［２Ｈ］−１−ベンゾピラン−２，１’（３’Ｈ）−イソベンゾフラン］−３’−オン、単独または組合せ、が挙げられる。
【００２８】
本明細書に開示される方法は、線虫寄生環境における植物生長力および収量を、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位への殺虫剤単独の適用から期待されるものよりも高めることが分かっている。殺真菌剤、殺虫剤、安定剤、乳化剤などの様々な添加剤が、所望の特性に応じて遺伝子組み換え種子または植物に適用されてもよい。
【００２９】
方法は、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤と組み合わせた少なくとも１つの芽胞形成細菌を遺伝子組み換え種子、植物または植物部位に適用することを含む。好ましくは、芽胞形成細菌は、溶液の形態、乳剤、水和剤、懸濁剤、水溶剤、粒剤、懸濁乳剤、活性化合物が含浸された天然および合成物質、ならびにポリマー物質の徐放性カプセルである。好ましくは、昆虫防除剤は、存在する場合、芽胞形成細菌と混合され、芽胞形成細菌と同時に適用される。任意に、昆虫防除剤は、種子、植物または植物部位に別々に適用されることができる。さらに、殺真菌防除剤が存在する場合には、芽胞形成細菌／昆虫防除剤と組み合わされてもよいし、別々に適用されてもよい。芽胞形成細菌および昆虫防除剤が粉末の形態である場合、土壌、種子または葉面に別々に直接適用されてもよいし、使用時に混合されてもよい。液体の形態である場合、芽胞形成細菌および昆虫防除剤は、別々にまたは処理時に混合され、植え付け時に葉面または畝間に散布または噴霧散布（ａｔｏｍｉｚｅ）されてもよい。あるいは、液体の組合せは、点滴灌漑、スプリンクラー、土壌注入または土壌灌注を含むがこれらに限定されない様々な技術を用いて、種子が発芽する前に土壌に導入されるまたは根部に接触するように直接土壌に導入されることができる。好ましくは、液体は、植え付け前に種子に適用される。
【００３０】
最終製剤および適用方法に応じて、１つ以上の適切な添加剤もまた、芽胞形成細菌およびその組合せに導入されることができる。カルボキシメチルセルロースなどの添加剤、アラビアゴム、キチン、ポリビニルアルコールおよびポリ酢酸ビニルなどの粉末、粒剤またはラテックスの形態の天然ならびに合成ポリマー、ならびにセファリンおよびレシチンなどの天然リン脂質、および合成リン脂質が、本組成物に添加されることができる。
【００３１】
好ましい実施形態において、芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤は、１つの安定な溶液または乳濁液もしくは懸濁液として製剤化される。溶液について、活性化学物質（昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤）は、芽胞形成細菌を添加する前に溶媒に溶解される。適切な液体の溶媒として、キシレン、トルエンまたはアルキルナフタレンなどの石油系芳香族、シクロヘキサンまたはパラフィンなどの脂肪族炭化水素、例えば石油留分、鉱油および植物油、ブタノールまたはグリコールなどのアルコールならびにそれらのエーテルおよびエステル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンまたはシクロヘキサノンなどのケトン、ジメチルホルムアミドおよびジメチルスルホキシドなどの高極性溶媒が挙げられる。乳濁液および懸濁液について、液体の媒質または溶媒は水である。芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤は、別々の液体に懸濁され、適用時に混合されてもよい。好ましくは、芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤は、有効期限が好ましくは２年であるすぐに使用できる製剤（ｒｅａｄｙ ｔｏ ｕｓｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）で組み合わせられる。使用時には、液体は、作物の植え付け時に葉面または畝間に散布または噴霧散布されることができる。液体組成物は、点滴灌漑、スプリンクラー、土壌注入または土壌灌注を含むがこれらに限定されない様々な技術を用いて、種子が発芽する前に土壌に導入されるまたは根部に接触するように土壌に直接導入されることができる。
【００３２】
任意に、安定剤および緩衝液が添加されることができ、これらにはアルカリ塩およびアルカリ土類金属塩、ならびにクエン酸およびアスコルビン酸などの有機酸、塩酸または硫酸（ｓｕｌｆｕｒｉｎｇ ａｃｉｄ）などの無機酸が含まれる。殺生物剤も添加されることができ、これらはホルムアルデヒドまたはホルムアルデヒド放出剤（ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ａｇｅｎｔ）ならびにｐ−ヒドロキシ安息香酸などの安息香酸誘導体を含むことができる。さらに、添加剤として、活性炭、栄養素（肥料）などの選択性除草剤の悪影響から種子を保護することができる機能性薬剤ならびに発芽および製品の質を向上させることができる他の薬剤またはその組合せが挙げられる。
【００３３】
好ましくは、芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤は、液体の種子処理剤として製剤化される。この種子処理剤は、少なくとも１つの芽胞形成細菌および少なくとも１つの任意の昆虫防除剤を含む。任意に、殺真菌防除剤は、芽胞形成細菌および昆虫防除剤と混合されることができる。種子は、混合、散布またはその組合せの従来の方法を用いて、芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤の１つまたは複数の層により実質的に均一にコーティングされる。正確に、安全に、効率的に種子処理製品を種子に適用する特別に設計および製造された装置を用いて適用が行われる。このような装置は、回転式塗工機（ｒｏｔａｒｙ ｃｏａｔｅｒ）、ドラム式塗工機（ｄｒｕｍ ｃｏａｔｅｒ）、流動層技術（ｆｌｕｉｄｉｚｅｄ ｂｅｄ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）、噴流層（ｓｐｏｕｔｅｄ ｂｅｄ）、回転噴霧（ｒｏｔａｒｙ ｍｉｓｔ）またはそれらの組合せなどの様々な種類のコーティング技術を使用する。好ましくは、散布パターンを動くように、種子に種子処理を均一に行う回転「噴霧」円盤（ｓｐｉｎｎｉｎｇ “ａｔｏｍｉｚｅｒ” ｄｉｓｋ）または散布ノズルのいずれかによって適用が行われる。好ましくは、次に種子はさらに一定の時間混合されまたは回転され、さらに処理散布および乾燥を行う。種子は、発芽および出芽の均一性を向上させるために、本発明の組成物によってコーティングする前に刺激されるまたは刺激されなくてもよい。別の実施形態では、乾燥粉末組成物が、動いている種子に計量投入されることができる。
【００３４】
種子は、連続コーティングプロセスまたはバッチコーティングプロセスによってコーティングされてもよい。連続コーティングプロセスでは、連続流装置（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｆｌｏｗ ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ）は、種子の流れおよび種子処理製品の両方を同時に計測する。スライドゲート、コーンおよびオリフィス（ｏｒｉｆｉｃｅ）、種子輪（ｓｅｅｄ ｗｈｅｅｌ）または秤量装置（ｗｅｉｇｈｔ ｄｅｖｉｃｅ）（ベルトまたはダイバーター（ｄｉｖｅｒｔｅｒ））が種子の流れを制御する。処理装置を通る種子の流速が決定されると、種子処理装置を流れる種子に所望の用量を送達するために、種子処理の流速が種子流速に対して較正される。さらに、コンピューターシステムはコーティング機への種子の流入を監視してもよく、これによって適当量の種子の流れを一定に保つ。
【００３５】
バッチコーティングプロセスでは、バッチ処理装置が、所定量の種子を量り分け、次に種子処理がそれぞれ行われる密閉処理チャンバーまたはボウル内に種子を配置する。種子および種子処理は次に混合され、各種子に実質的に均一にコーティングされる。このバッチはその後、次のバッチの処理に備えて処理チャンバーから取り除かれる。コンピューター制御システムによって、このバッチプロセスが自動化され、バッチ処理プロセスを連続的に繰り返すことができる。
【００３６】
いずれのコーティングプロセスにおいても、種子コーティング機械は、任意に、プログラム化された論理制御装置によって操作されることができ、様々な装置が従業員の介入なしに開始および停止されることが可能になる。このシステムの部品は、Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｈａｋｏｐｅｅ、ＭＮなどのいくつかの製造業者から市販されている。
【００３７】
様々な添加剤が種子処理に添加されることができる。結合剤が添加されることができ、コーティングされるべき種子に対する植物毒性を有しない天然または合成の接着性ポリマーから好ましくは構成される結合剤を含む。様々な着色剤が使用されてもよく、ニトロソ、ニトロ、アゾ（モノアゾ、ビスアゾおよびポリアゾなど）、ジフェニルメタン、トリアリールメタン、キサンテン、メタン、アクリジン、チアゾール、チアジン、インダミン、インドフェノール、アジン、オキサジン、アントラキノンおよびフタロシアニンに分類される有機発色団が含まれる。添加されることができる他の添加剤として、鉄、マンガン、ホウ素、銅、コバルト、モリブデンおよび亜鉛の塩などの微量栄養素が含まれる。ポリマーまたは他の粉塵抑制剤が、種子表面の処理を保持するために適用されることができる。
【００３８】
他の従来の種子処理添加剤として、コーティング剤、湿潤剤、緩衝剤および多糖類が挙げられるが、これらに限定されない。少なくとも１つの農業的に許容できる担体が、水、固体または乾燥粉末などの種子処理製剤に添加されることができる。乾燥粉末は、樹皮、炭酸カルシウム、石膏、バーミキュライト、タルク、腐植、活性炭および種々のリン化合物などの様々な材料から得られることができる。
【００３９】
一実施形態では、種子コーティングは、少なくとも１つの充填剤を含むことができ、この充填剤は、種子への適用を容易にするために活性成分と組み合わせられた有機または無機成分、天然または合成成分である。好ましくは、充填剤は、粘土、天然または合成ケイ酸塩、シリカ、樹脂、ワックス、固体肥料（例えば、アンモニウム塩）などの不活性固体、カオリン、粘土、タルク、石灰、石英、アタパルジャイト、モンモリロナイト、ベントナイトもしくは珪藻土などの天然土壌鉱物、またはシリカ、アルミナもしくはケイ酸塩（特に、ケイ酸アルミニウムまたはケイ酸マグネシウム）などの合成鉱物である。
【００４０】
芽胞形成細菌、任意の昆虫防除剤および任意の殺真菌防除剤は、線虫よび／もしくは病原性真菌または細菌による攻撃に感受性である植物または植物部位を形成するように発芽することができるいずれかの遺伝子組み換え植物種子と組み合わせることができる。遺伝子組み換え種子は、昆虫毒素または除草剤抵抗性を発現する遺伝子組み換え植物または植物部位を生じるいずれかの種子であることができる。さらに、遺伝子組み換え種子は、細菌および真菌に対する毒素または抵抗性を発現する遺伝子組み換え植物または植物部位を生じるいずれかの種子であることができる。さらに、遺伝子組み換え種子は、水ストレスおよび窒素生産などの環境要因に耐性を発現する遺伝子組み換え植物または植物部位を生じるいずれかの種子であってもよい。適切な遺伝子組み換え種子として、アブラナ科作物、野菜、果物、樹木、繊維作物、油科作物、塊茎作物、コーヒー、花、マメ科植物、穀類の種子だけでなく、単子葉植物種および双子葉植物種の他の植物の種子も挙げられる。好ましくは、遺伝子組み換え種子として、ピーナッツ、タバコ、イネ科草本、コムギ、オオムギ、ライムギ、ソルグフム（Ｓｏｒｇｈｕｍ）、イネ、ナタネ（ｒａｐｅｓｅｅｄ）、サトウダイコン、ヒマワリ、トマト、コショウ、マメ、レタス、ジャガイモおよびニンジンが挙げられる。最も好ましくは、遺伝子組み換え種子として、ワタ、ダイズおよびトウモロコシ（スイートコーン、飼料用トウモロコシ、種トウモロコシまたはポップコーン）が挙げられる。特に好ましい遺伝子組み換え種子として、Ｍｏｎｓａｎｔｏ製のグリホサート耐性および昆虫耐性ワタ種子ＤＥＬＴＡ ＡＮＤ ＰＩＮＥ ＬＡＮＤ（登録商標）、Ｂａｙｅｒ ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ製のグリホサート耐性および昆虫耐性ワタ種子ＳＴＯＮＥＶＩＬＬＥ（商標）、Ｂａｙｅｒ ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ製のグリホサート耐性および昆虫耐性ワタ種子ＦＩＢＥＲＭＡＸ（登録商標）、Ｓｔｉｎｅ Ｓｅｅｄ Ｃｏｍｐａｎｙ製のグリホサート耐性ダイズ、Ｍｏｎｓａｎｔｏ製のグリホサート耐性ダイズ種子ＡＳＧＲＯＷ（登録商標）、ＤｕＰｏｎｔ製のグリホサート耐性および昆虫耐性トウモロコシ種子ＰＩＯＮＥＥＲ（登録商標）、Ｓｙｎｇｅｎｔａ製のグリホサート耐性ダイズ種子ＮＯＲＴＨＲＵＰ ＫＩＮＧ（商標）、Ｂｕｒｒｕｓ Ｃｏｍｐａｎｙ製のグリホサート耐性および昆虫耐性トウモロコシ種子およびＳｙｎｇｅｎｔａ製のグリホサート耐性および昆虫耐性トウモロコシ種子Ｇａｒｓｔ Ｃｏｍｐａｎｙ（ＡＧＲＩＥＤＧＥ（商標））が挙げられる。
【００４１】
芽胞形成細菌および遺伝子組み換え種子の新規の組合せの利点は、以下の非限定的な例から明白である。以下の例は、芽胞形成細菌を昆虫防除剤と組み合わせ、遺伝子組み換え種子に組合せを適用することによる、植物作物収量の全体的な予期しない向上を説明する。
【００４２】
（実施例）
【実施例１】
【００４３】
実施例１では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｍｏｎｓａｎｔｏから入手可能なＤＥＬＴＡ ＡＮＤ ＰＩＮＥ ＬＡＮＤ（登録商標）から得られ、グリホサート耐性（Ｒｏｕｎｄ−ｕｐ Ｒｅａｄｙ（登録商標）形質）および昆虫耐性（Ｂｔ遺伝子）の両方の遺伝子発現を含むワタ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（Ｇａｕｃｈｏ Ｇｒａｎｄｅ）またはイミダクロプリド＆チオジカルブ（ＡＥＲＩＳ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類は、なし、ネコブセンチュウ（ｒｏｏｔ ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ）、ニセフクロセンチュウ（ｒｅｉｎｉｆｏｒｍ ｎｅｍａｔｏｄｅ）およびヤリセンチュウ（ｌａｎｃｅ ｎｅｍａｔｏｄｅ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。昆虫防除剤の散布量は５００−１０００ｇ（活性成分）／１００ｋｇであった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）は、ワタ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり１３６９−２６０８ｍｌであった。ワタ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのワタのポンド数として測定した。以下の表では、様々な線虫の種類における、１エーカー当たりのワタのポンド数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００４４】
【表１】
【００４５】
いくつかのマイナスの収量値は、制御不可能な環境的問題および植え付けの問題によるものである。実験番号３に関して、マイナスの値は、栽培者が誤って植え付ける数を少なくしたことによる可能性があり、作物収量に全体的に影響を与えている。実験番号６は、植え付けた区画の損傷により反復を行わなかった。
【実施例２】
【００４６】
実施例２では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｂａｙｅｒ ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅから入手可能なＳＴＯＮＥＶＩＬＬＥ（商標）から得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）および昆虫耐性（Ｂｔ遺伝子）の両方の遺伝子発現を含むワタ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（ＧＡＵＣＨＯ ＧＲＡＮＤＥ（登録商標））またはイミダクロプリド＆チオジカルブ（ＡＥＲＩＳ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類は、なし、ネコブセンチュウ（ｒｏｏｔ ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ）およびニセフクロセンチュウ（ｒｅｎｉｆｏｒｍ ｎｅｍａｔｏｄｅ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。昆虫防除剤の散布量は５００−１０００ｇ（活性成分）／１００ｋｇであった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はワタ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり１３６９−２６０８ｍｌであった。ワタ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのワタのポンド数として測定した。以下の表では、様々な線虫の種類における、１エーカー当たりのワタのポンド数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００４７】
【表２】
【実施例３】
【００４８】
実施例３では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｂａｙｅｒ ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅから入手可能なＦＩＢＥＲＭＡＸ（登録商標）から得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）および昆虫耐性（Ｂｔ遺伝子）の両方の遺伝子発現を含むワタ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（ＧＡＵＣＨＯ ＧＲＡＮＤＥ（登録商標））またはイミダクロプリド＆チオジカルブ（ＡＥＲＩＳ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類は、ネコブセンチュウ（ｒｏｏｔ ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ）およびニセフクロセンチュウ（ｒｅｎｉｆｏｒｍ ｎｅｍａｔｏｄｅ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はワタ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり１３６９−２６０８ｍｌであった。ワタ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのワタのポンド数を測定した。以下の表では、様々な線虫の種類における、１エーカー当たりのワタのポンド数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００４９】
【表３】
【実施例４】
【００５０】
実施例４では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｓｔｉｎｅ Ｓｅｅｄ Ｃｏｍｐａｎｙ製であり、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）遺伝子発現を含むダイズ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（ＧＡＵＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類は、なし、ネコブセンチュウ（ｒｏｏｔ ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ）およびダイズシストセンチュウ（ｓｏｙｂｅａｎ ｃｙｓｔ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）は、ダイズ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり２６１−６５２ｍｌであった。ダイズ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのダイズのブッシェル数として測定した。以下の表では、様々な線虫の種類における、１エーカー当たりのダイズのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００５１】
【表４】
【実施例５】
【００５２】
実施例５では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｍｏｎｓａｎｔｏ製のＡＳＧＲＯＷ（登録商標）であり、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）遺伝子発現を含むダイズ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（ＧＡＵＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類は、ネコブセンチュウ（ｒｏｏｔ ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ）およびダイズシストセンチュウ（ｓｏｙｂｅａｎ ｃｙｓｔ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）は、ダイズ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり２６１−６５２ｍｌであった。ダイズ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのダイズのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのダイズのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００５３】
【表５】
【実施例６】
【００５４】
実施例６では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、ＤｕＰｏｎｔ製のＰＩＯＮＥＥＲ（登録商標）から得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）遺伝子発現を含むダイズ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（ＧＡＵＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類は、なしおよびダイズシストセンチュウ（ｓｏｙｂｅａｎ ｃｙｓｔ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はダイズ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり２６１−６５２ｍｌであった。ダイズ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのダイズのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのダイズのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００５５】
【表６】
【実施例７】
【００５６】
実施例７では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｓｙｎｇｅｎｔａ ＳｅｅｄｓのＮＯＲＴＨＲＵＰ ＫＩＮＧ（商標）から得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）遺伝子発現を含むダイズ種子である。殺虫剤はイミダクロプリド（ＧＡＵＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。線虫の種類はダイズシストセンチュウ（ｓｏｙｂｅａｎ ｃｙｓｔ）であった。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はダイズ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合種子被覆の量は、種子１００ｋｇ当たり２６１−６５２ｍｌであった。ダイズ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのダイズのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのダイズのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００５７】
【表７】
【実施例８】
【００５８】
実施例８では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、ＤｕＰｏｎｔ製のＰＩＯＮＥＥＲ（登録商標）から得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）および昆虫耐性（Ｂｔ遺伝子）の両方の遺伝子発現を含むトウモロコシ種子である。殺虫剤はクロチアニジン（ＰＯＮＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。多種の線虫が存在した。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はトウモロコシ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり５２２−１０４４ｍｌであった。トウモロコシ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００５９】
【表８】
【実施例９】
【００６０】
実施例９では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｂｕｒｒｕｓ Ｃｏｍｐａｎｙから得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）および昆虫耐性（種々（ｖａｒｉｅｓ））の両方の遺伝子発現を含むトウモロコシ種子である。殺虫剤はクロチアイニジン（ｃｌｏｔｈｉａｉｎｉｄｉｎ）（ＰＯＮＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。多種の線虫が存在した。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はトウモロコシ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり５２２−１０４４ｍｌであった。トウモロコシ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００６１】
【表９】
【実施例１０】
【００６２】
実施例１０では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、Ｓｙｎｇｅｎｔａ ＳｅｅｄｓのＧａｒｓｔ Ｃｏｍｐａｎｙ（ＡＧＲＩＥＤＧＥ（商標））から得られ、グリホサート耐性（ＲＯＵＮＤ−ＵＰ ＲＥＡＤＹ（登録商標）形質）および昆虫耐性（ネキリムシ（ｃｏｒｎ ｒｏｏｔ ｗｏｒｍ））の両方の遺伝子発現を含むトウモロコシ種子である。殺虫剤はクロチアニジン（ＰＯＮＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。多種の線虫が存在した。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はトウモロコシ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり５２２−１０４４ｍｌであった。トウモロコシ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００６３】
【表１０】
【００６４】
各実験のマイナスの収量差分値は、植え付けたプロットの損傷による可能性が高く、反復実験を行わなかった。実験番号１と実験番号２の平均をとると、対照が１４２．６、対照＋Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）が１４６．１であり、収量の差は３．５である。しがたって、芽胞形成細菌の使用は、最終的に肯定的な結果を示す。
【実施例１１】
【００６５】
実施例１１では、線虫圧力下での作物収量の結果を、遺伝子組み換え種子に適用した芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せ（対照＋芽胞形成細菌）について、昆虫防除剤だけの遺伝子組み換え種子（対照）と比較して示している。この比較実験における遺伝子組み換え種子は、製造会社から購入した未知のトウモロコシ種子であり、除草剤抵抗性および昆虫抵抗性の両方の様々な遺伝子発現を含む。殺虫剤はクロチアニジン（ＰＯＮＣＨＯ（登録商標））であった。芽胞形成細菌はＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）であった。多種の線虫が存在した。昆虫防除剤の濃度は６００ｇ（活性成分）／Ｌで、液体の形態であった。Ｂ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）の濃度は、種子１個当たり１００，０００から１０，０００，０００コロニー形成単位であった。昆虫防除剤およびＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）はトウモロコシ種子を十分被覆する量の水性懸濁液中で混合した。混合物の量は、様々な種子サイズを確実に十分被覆するために、種子１００ｋｇ当たり５２２−１０４４ｍｌであった。トウモロコシ種子を植え付けると、完全に成熟するまで成長させ、その結果を１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数として測定した。以下の表では、１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数を、対照と対照＋芽胞形成細菌との間で比較している。収量の差数は、特に記載がない限り、いくつかの実験結果の平均を表す。
【００６６】
【表１１】
【００６７】
上記の結果は驚くべきものである。上述するように、ほとんどの種子の品種が、昆虫防除剤だけに対して、芽胞形成細菌および昆虫防除剤の組合せで改善した。
【００６８】
いくつかの実施形態によると、以下の割合（パーセント）で作物収量が増加した。ダイズ種子に関して、ＮＯＲＴＨＵＰ ＫＩＮＧ（商標）ダイズ種子、ＰＩＯＮＥＥＲ（登録商標）ダイズ種子およびＳｔｉｎｅ Ｓｅｅｄ Ｃｏｍｐａｎｙ製のダイズ種子に芽胞形成細菌を添加すると、ダイズのブッシェル収量がそれぞれ約２％増加、５％−１０％増加および４．３％増加を示した。この改善が数百エーカーにわたり広がると、作物収量が著しく向上する。ワタ種子に関して、ＤＥＬＴＡ ＡＮＤ ＰＩＮＥ ＬＡＮＤ（登録商標）ワタ種子およびＦＩＢＥＲＭＡＸ（登録商標）ワタ種子に芽胞形成細菌を添加すると、１エーカー当たりのワタのポンド数がそれぞれ約３％の増加および６．５％の増加を示した。また、数百エーカーのワタ植物にこの改善を広めると、収量が著しく向上される。トウモロコシ種子に関して、Ｂｕｒｒｕｓ Ｓｅｅｄ Ｃｏｍｐａｎｙ製のトウモロコシ種子および未知の市販のトウモロコシ種子に芽胞形成細菌を添加すると、１エーカー当たりのトウモロコシのブッシェル数がそれぞれ約３．２％の増加および８％の増加を示した。さらにまた、これが数百エーカーにわたり広まると、作物収量が全体的に著しく向上する。総合的に、遺伝子組み換え種子と芽胞形成細菌および昆虫防除剤を組み合わせて使用した場合、作物収量に驚くべき利点がある。
【００６９】
さらなる利点、特徴および変更は当業者が容易に思い付く。したがって、広範な態様の本発明は、本明細書で示され記載された特定の詳細および代表的な装置に限定されない。ゆえに、添付の特許請求の範囲およびそれらの均等物により定義される一般的な発明概念の精神または範囲を逸脱せずに、様々な変更が行われてもよい。
【００７０】
本明細書に引用された全ての文献は、それらの全体が参照により本明細書に明確に組み込まれる。
【００７１】
本明細書および次の特許請求の範囲に使用される、「ｔｈｅ」、「ａ」および「ａｎ」などの冠詞は、単数または複数を含むことができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの芽胞形成細菌、
任意に、少なくとも１つの昆虫防除剤および
少なくとも１つの遺伝子組み換え種子、植物または植物部位
を含む製品。
【請求項２】
少なくとも１つの昆虫防除剤および少なくとも１つの遺伝子組み換え種子または植物をさらに含む、請求項１の製品。
【請求項３】
昆虫防除剤が少なくとも１つの浸透性ネオニコチノイド系殺虫剤である、請求項２の製品。
【請求項４】
少なくとも１つのネオニコチノイド系殺虫剤が、１−（６−クロロ−３−ピリジルメチル）−Ｎ−ニトロイミダゾリジン−２−イリデンアミン（イミダクロプリド）、３−（６−クロロ−３−ピリジルメチル）−１，３−チアゾリジン−２−イリデンシアナミド（チアクロプリド）、１−（２−クロロ−１，３−チアゾール−５−イルメチル）−３−メチル−２−ニトログアニジン（クロチアニジン）、ニテンピラム、Ｎ１−［（６−クロロ−３−ピリジル）メチル］−Ｎ２−シアノ−Ｎ１−メチルアセトアミジン（アセタミプリド）、３−（２−クロロ−１，３−チアゾール−５−イルメチル）−５−メチル−１，３，５−オキサジアジナン−４−イリデン（ニトロ）アミン（チアメトキサム）および１−メチル−２−ニトロ−３−（テトラヒドロ−３−フリルメチル）グアニジン（ジノテフラン）からなる群から選択される、請求項３の製品。
【請求項５】
少なくとも１つの芽胞形成細菌が殺線虫活性を示す、請求項２の製品。
【請求項６】
前記遺伝子組み換え種子が昆虫耐性である、請求項２の製品。
【請求項７】
前記遺伝子組み換え種子が、Ｂ．チューリンゲンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来の遺伝子によって形質転換されている、請求項２の製品。
【請求項８】
前記遺伝子組み換え種子がグリホサート耐性である、請求項２の製品。
【請求項９】
前記遺伝子組み換え種子が昆虫耐性でありグリホサート耐性である、請求項２の製品。
【請求項１０】
前記遺伝子組み換え種子が、グリホサート耐性および昆虫耐性のワタ種子ＤＥＬＴＡ ＡＮＤ ＰＩＮＥ ＬＡＮＤ（登録商標）；グリホサート耐性および昆虫耐性のワタ種子ＳＴＯＮＥＶＩＬＬＥ（商標）；グリホサート耐性および昆虫耐性のワタ種子ＦＩＢＥＲＭＡＸ（登録商標）；グリホサート耐性のダイズ種子ＡＳＧＲＯＷ（登録商標）；グリホサート耐性および昆虫耐性のトウモロコシ種子ＰＩＯＮＥＥＲ（登録商標）；グリホサート耐性のダイズ種子ＮＯＲＴＨＲＵＰ ＫＩＮＧ（商標）；ならびにＳｙｎｇｅｎｔａ製のグリホサート耐性および昆虫耐性のトウモロコシ種子ＡＧＲＩＥＤＧＥ（商標）からなる群から選択される、請求項２の製品。
【請求項１１】
少なくとも１つの芽胞形成細菌が、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）およびバチルス・プムリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｕｌｉｓ）からなる群から選択される、請求項５の製品。
【請求項１２】
バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）がＣＮＣＭ Ｉ−１５８２株を含む、請求項１１の製品。
【請求項１３】
バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）がＩＮ３７ａ株を含む、請求項１１の製品。
【請求項１４】
バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）がＧＢ０３株を含む、請求項１１の製品。
【請求項１５】
バチルス・プムリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｕｌｉｓ）がＧＢ３４株を含む、請求項１１の製品。
【請求項１６】
少なくとも１つの追加の化学殺真菌剤をさらに含む、請求項１または２の製品。
【請求項１７】
遺伝子組み換え種子、植物または植物部位に少なくとも１つの芽胞形成細菌および任意に少なくとも１つの昆虫防除剤を適用することを含む、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位を線虫から保護する方法。
【請求項１８】
前記芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤が前記遺伝子組み換え種子、植物または植物部位に同時に適用される、請求項１７の方法。
【請求項１９】
前記遺伝子組み換え種子、植物または植物部位が昆虫耐性である、請求項１７の方法。
【請求項２０】
前記遺伝子組み換え種子、植物または植物部位がグリホサート耐性である、請求項１７の方法。
【請求項２１】
前記遺伝子組み換え種子、植物または植物部位が、Ｂ．チューリンゲンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来の遺伝子によって形質転換されている、請求項１７の方法。
【請求項２２】
前記少なくとも１つの芽胞形成細菌が、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）およびバチルス・プムリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｕｌｉｓ）からなる群から選択される、請求項１７の方法。
【請求項２３】
０．０００１重量％から２０重量％の少なくとも１つの芽胞形成細菌および０．００１重量％から２０重量％の少なくとも１つの昆虫防除剤を含む少なくとも１つの組成物を提供し、ならびに前記組成物を遺伝子組み換え種子、植物または植物部位に適用することを含む、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位を線虫から保護する方法。
【請求項２４】
組成物が、点滴灌漑、スプリンクラー、葉面散布、種子コーティング、土壌注入または土壌灌注からなる群から選択される方法によって適用される、請求項２３の方法。
【請求項２５】
（ｉ）約２重量％から８０重量％の量の少なくとも１つの芽胞形成細菌、（ｉｉ）約１重量％から約８０重量％の量の少なくとも１つの昆虫防除剤および（ｉｉｉ）溶媒を含む、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位を線虫から保護する組成物。
【請求項２６】
前記芽胞形成細菌が、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）およびバチルス・プムリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｕｌｉｓ）からなる群から選択される、請求項２９の組成物。
【請求項２７】
（ｉ）芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤を遺伝子組み換え種子に適用し、および（ｉｉ）実質的に均一に処理するために前記遺伝子組み換え種子を混ぜることを含む、少なくとも１つの芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤によって処理した遺伝子組み換え種子を製造する方法。
【請求項２８】
連続コーティング機が、前記芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤を適用するために使用される、請求項２７の方法。
【請求項２９】
コンピューターシステムが、連続コーティング機への遺伝子組み換え種子の流れを監視する、請求項２８の方法。
【請求項３０】
バッチコーティングプロセスが、前記芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤を適用するために使用される、請求項２７の方法。
【請求項３１】
前記バッチコーティングプロセスが、（ｉ）所定量の遺伝子組み換え種子を秤量し、（ｉｉ）前記種子を密閉された処理チャンバーに配置し、（ｉｉｉ）芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤を前記処理チャンバーに添加し、ならびに（ｉｖ）前記遺伝子組み換え種子、芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤を混合することを含む、請求項３０の方法。
【請求項１】
少なくとも１つの芽胞形成細菌、
任意に、少なくとも１つの昆虫防除剤および
少なくとも１つの遺伝子組み換え種子、植物または植物部位
を含む製品。
【請求項２】
少なくとも１つの昆虫防除剤および少なくとも１つの遺伝子組み換え種子または植物をさらに含む、請求項１の製品。
【請求項３】
昆虫防除剤が少なくとも１つの浸透性ネオニコチノイド系殺虫剤である、請求項２の製品。
【請求項４】
少なくとも１つのネオニコチノイド系殺虫剤が、１−（６−クロロ−３−ピリジルメチル）−Ｎ−ニトロイミダゾリジン−２−イリデンアミン（イミダクロプリド）、３−（６−クロロ−３−ピリジルメチル）−１，３−チアゾリジン−２−イリデンシアナミド（チアクロプリド）、１−（２−クロロ−１，３−チアゾール−５−イルメチル）−３−メチル−２−ニトログアニジン（クロチアニジン）、ニテンピラム、Ｎ１−［（６−クロロ−３−ピリジル）メチル］−Ｎ２−シアノ−Ｎ１−メチルアセトアミジン（アセタミプリド）、３−（２−クロロ−１，３−チアゾール−５−イルメチル）−５−メチル−１，３，５−オキサジアジナン−４−イリデン（ニトロ）アミン（チアメトキサム）および１−メチル−２−ニトロ−３−（テトラヒドロ−３−フリルメチル）グアニジン（ジノテフラン）からなる群から選択される、請求項３の製品。
【請求項５】
少なくとも１つの芽胞形成細菌が殺線虫活性を示す、請求項２の製品。
【請求項６】
前記遺伝子組み換え種子が昆虫耐性である、請求項２の製品。
【請求項７】
前記遺伝子組み換え種子が、Ｂ．チューリンゲンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来の遺伝子によって形質転換されている、請求項２の製品。
【請求項８】
前記遺伝子組み換え種子がグリホサート耐性である、請求項２の製品。
【請求項９】
前記遺伝子組み換え種子が昆虫耐性でありグリホサート耐性である、請求項２の製品。
【請求項１０】
前記遺伝子組み換え種子が、グリホサート耐性および昆虫耐性のワタ種子ＤＥＬＴＡ ＡＮＤ ＰＩＮＥ ＬＡＮＤ（登録商標）；グリホサート耐性および昆虫耐性のワタ種子ＳＴＯＮＥＶＩＬＬＥ（商標）；グリホサート耐性および昆虫耐性のワタ種子ＦＩＢＥＲＭＡＸ（登録商標）；グリホサート耐性のダイズ種子ＡＳＧＲＯＷ（登録商標）；グリホサート耐性および昆虫耐性のトウモロコシ種子ＰＩＯＮＥＥＲ（登録商標）；グリホサート耐性のダイズ種子ＮＯＲＴＨＲＵＰ ＫＩＮＧ（商標）；ならびにＳｙｎｇｅｎｔａ製のグリホサート耐性および昆虫耐性のトウモロコシ種子ＡＧＲＩＥＤＧＥ（商標）からなる群から選択される、請求項２の製品。
【請求項１１】
少なくとも１つの芽胞形成細菌が、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）およびバチルス・プムリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｕｌｉｓ）からなる群から選択される、請求項５の製品。
【請求項１２】
バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）がＣＮＣＭ Ｉ−１５８２株を含む、請求項１１の製品。
【請求項１３】
バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）がＩＮ３７ａ株を含む、請求項１１の製品。
【請求項１４】
バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）がＧＢ０３株を含む、請求項１１の製品。
【請求項１５】
バチルス・プムリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｕｌｉｓ）がＧＢ３４株を含む、請求項１１の製品。
【請求項１６】
少なくとも１つの追加の化学殺真菌剤をさらに含む、請求項１または２の製品。
【請求項１７】
遺伝子組み換え種子、植物または植物部位に少なくとも１つの芽胞形成細菌および任意に少なくとも１つの昆虫防除剤を適用することを含む、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位を線虫から保護する方法。
【請求項１８】
前記芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤が前記遺伝子組み換え種子、植物または植物部位に同時に適用される、請求項１７の方法。
【請求項１９】
前記遺伝子組み換え種子、植物または植物部位が昆虫耐性である、請求項１７の方法。
【請求項２０】
前記遺伝子組み換え種子、植物または植物部位がグリホサート耐性である、請求項１７の方法。
【請求項２１】
前記遺伝子組み換え種子、植物または植物部位が、Ｂ．チューリンゲンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来の遺伝子によって形質転換されている、請求項１７の方法。
【請求項２２】
前記少なくとも１つの芽胞形成細菌が、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）およびバチルス・プムリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｕｌｉｓ）からなる群から選択される、請求項１７の方法。
【請求項２３】
０．０００１重量％から２０重量％の少なくとも１つの芽胞形成細菌および０．００１重量％から２０重量％の少なくとも１つの昆虫防除剤を含む少なくとも１つの組成物を提供し、ならびに前記組成物を遺伝子組み換え種子、植物または植物部位に適用することを含む、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位を線虫から保護する方法。
【請求項２４】
組成物が、点滴灌漑、スプリンクラー、葉面散布、種子コーティング、土壌注入または土壌灌注からなる群から選択される方法によって適用される、請求項２３の方法。
【請求項２５】
（ｉ）約２重量％から８０重量％の量の少なくとも１つの芽胞形成細菌、（ｉｉ）約１重量％から約８０重量％の量の少なくとも１つの昆虫防除剤および（ｉｉｉ）溶媒を含む、遺伝子組み換え種子、植物または植物部位を線虫から保護する組成物。
【請求項２６】
前記芽胞形成細菌が、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）およびバチルス・プムリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｕｌｉｓ）からなる群から選択される、請求項２９の組成物。
【請求項２７】
（ｉ）芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤を遺伝子組み換え種子に適用し、および（ｉｉ）実質的に均一に処理するために前記遺伝子組み換え種子を混ぜることを含む、少なくとも１つの芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤によって処理した遺伝子組み換え種子を製造する方法。
【請求項２８】
連続コーティング機が、前記芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤を適用するために使用される、請求項２７の方法。
【請求項２９】
コンピューターシステムが、連続コーティング機への遺伝子組み換え種子の流れを監視する、請求項２８の方法。
【請求項３０】
バッチコーティングプロセスが、前記芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤を適用するために使用される、請求項２７の方法。
【請求項３１】
前記バッチコーティングプロセスが、（ｉ）所定量の遺伝子組み換え種子を秤量し、（ｉｉ）前記種子を密閉された処理チャンバーに配置し、（ｉｉｉ）芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤を前記処理チャンバーに添加し、ならびに（ｉｖ）前記遺伝子組み換え種子、芽胞形成細菌および任意の昆虫防除剤を混合することを含む、請求項３０の方法。
【公表番号】特表２０１２−５０２１００（Ｐ２０１２−５０２１００Ａ）
【公表日】平成２４年１月２６日（２０１２．１．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５２６９２０（Ｐ２０１１−５２６９２０）
【出願日】平成２１年９月３日（２００９．９．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５５８４２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０３０５５４
【国際公開日】平成２２年３月１８日（２０１０．３．１８）
【出願人】（５０６０１８２３７）バイエル・クロツプサイエンス・エル・ピー (16)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１月２６日（２０１２．１．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年９月３日（２００９．９．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５５８４２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０３０５５４
【国際公開日】平成２２年３月１８日（２０１０．３．１８）
【出願人】（５０６０１８２３７）バイエル・クロツプサイエンス・エル・ピー (16)
【Ｆターム（参考）】
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