血液凝固を軽減するためのフコイダン
フコイダンのような硫酸化ポリサッカライドを用いて血栓性の疾患を処置するための方法が開示される。本発明は、とりわけ深部静脈血栓、肺塞栓症、心筋梗塞、発作の予防ならびに血液凝固の処置および予防を含む血栓性障害の処置に関する。本発明は、哺乳動物被験体において種々の血栓障害を処置するための方法および組成物を提供する。そして治療上有効な量の１つ以上のフコイダンを含む組成物をこのような被験体に投与する工程を包含する。好ましくは、１つ以上のフコイダンは、経口的に投与される。フコイダン組成物の特徴としては以下が挙げられる。１実施形態では、この組成物のフコイダン成分は、５〜２５重量％のイオウを有する。さらに別の実施形態では、フコイダンは藻類由来のものである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、とりわけ深部静脈血栓、肺塞栓症、心筋梗塞、発作の予防ならびに血液凝固の処置および予防を含む血栓性障害の処置に関する。詳細には、本発明は、凝固を予防するためのフコイダンのような硫酸化ポリサッカライドの使用に関する。
【０００２】
（略語）
以下の略語が本明細書において用いられる：
ａＰＴＴ：活性化部分トロンボプラスチン時間
ｄＰＴ：希釈プロトロンビン時間
ＰＴ：プロトロンビン時間
ＤＶＴ：深部静脈血栓症
ＴＦ：組織因子
ＦＶＩＩａ：第ＶＩＩａ因子
ＦＸ：第Ｘ因子
ＦＸａ：第Ｘａ因子
ＦＶａ：第Ｖａ因子
ＮＳＡＩＤ：非ステロイド抗炎症薬
ＴＦＰＩ：組織因子経路インヒビター
ＮＡＰｃ２：線虫抗凝固タンパク質ｃ２
ＨＩＴ：ヘパリン−起因性血小板減少症
ＨＩＴＴＳ：ペハリン起因性血小板減少症血栓症候群
ＴＣＴ：トロンビン凝固時間
ＡＣＴ：活性化凝固時間
ＩＮＲ：国際標準化比率（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｒａｔｉｏ）
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
正常な血液凝固は、いくつかのレベルで調節される複雑な生理学的および生化学的プロセスである。血液凝固のプロセスは、局所の血管収縮を伴うフィブリン形成および血小板凝固をもたらす凝固因子カスケードの活性化に関与する（非特許文献１によって概説される）。この凝固カスケードは、正常な凝固開始の初期手段であると考えられる「外因性（ｅｘｔｒｉｎｓｉｃ）」経路および広範な凝固応答に寄与する「内因性（ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ）」経路からなる。出血性の侵襲に対する正常な応答は、外因性経路の活性化に関与する。外因性経路の活性化は、血液が、侵襲後の組織上で曝されるかまたは発現される第ＶＩＩ因子の補因子である組織因子（ＴＦ）と接触する場合に開始される。ＴＦは、ＦＶＩＩａの産生を容易にするＦＶＩＩとの複合体を形成する。次いで、ＦＶＩＩａは、ＴＦと会合して、ＦＸを、プロトロンビナーゼ複合体の重要な成分である、セリンプロテアーゼＦＸａへ変換する。ＦＸａ／ＦＶａ／カルシウム／リン脂質複合体によるプロトロンビンからトロンビンへの変換は、その全てが正常な血液凝固に必須である、フィブリンの形成および血小板の活性化を刺激する。正常なうっ血はさらに、内因性経路の第ＩＸａおよびＶＩＩＩａ因子によって増強され、これもＦＸをＦＸａに変換する。また、非特許文献２も参照のこと。
【０００４】
治療剤の１つの重要なクラスは、抗凝固剤（血液凝固の形成を妨げる因子）である。抗凝固剤を用いて、とりわけ、動脈および静脈の血栓、肺塞栓、心筋梗塞および発作の予防のような血栓性障害を処置する。抗凝固剤はまた、心房細動を有する患者または機械的人工心臓弁を有する患者における心臓塞栓の事象を妨げるためにも用いられる。
【０００５】
動脈および静脈の血栓は、疾病率および死亡率の主要な原因である。動脈血栓症は、心筋梗塞、発作および四肢の壊疽の最も一般的な原因であるが、静脈血栓は、胚塞栓（致死的であり得る）および静脈炎後症候群をもたらす。
【０００６】
動脈の血栓は、少量のフィブリンによって一緒に保持される血小板凝集からなるので、動脈の血栓形成を阻害するストラテジーは代表的には、血小板機能をブロックする薬物に関しているが、しばしば、フィブリン沈着を妨げる抗凝固剤も含む。静脈血栓は、主にフィブリンから構成され、従って、抗凝固剤は、それらの予防および処置のための選択薬である。
【０００７】
既存の経口および非経口の抗凝固剤は、不利な点によって悩まされる。ワルファリン（クマディン）は、臨床的な実施で用いられる主な経口の抗凝固剤であり、そしてクマリンはビタミン−Ｋアンタゴニストである。ワルファリンは依然として、静脈の血栓塞栓症の長期予防および処置に利用可能な唯一の経口投与される抗凝固剤である。不幸にも、ワルファリンが有する治療係数は狭く、そして頻繁な実験モニタリングおよび用量調節を要する（非特許文献３）。さらに、ワルファリンの重篤な有害な副作用は、過度の出血の可能性がある（例えば、切り傷、鼻血または月経による）。さらに、ワルファリンは、重篤な薬物相互作用を、例えば、特定の抗生物質、アセトアミノフェン、アスピリンおよびＮＳＡＩＤとともに例えば同時投与される場合、生じ得る（非特許文献４）。
【０００８】
ワルファリンの限界の結果として、いくつかの新規な薬剤が、可能性のある抗凝固剤として開発されている。しかし、ＴＦＰＩ（組織因子経路インヒビター）またはＮＡＰｃ２（線虫の抗凝固タンパク質ｃ２）のような検討によれば多くの可能性のある抗凝固剤は生物製剤であり、従って、既存の抗凝固治療剤よりもかなり費用が嵩む可能性が高い。さらに、各々が、ほとんどの患者集団に所望されない経路によって投与される−ＴＦＰＩは、静脈内投与されるが、ＮＡＰｃ２は皮下に投与される。
【０００９】
硫酸化ポリサッカライドは、生物学的活性の多血症によって特徴付けられるあるクラスの分子であり、動物およびヒトにおいてしばしば好ましい耐容性プロフィールを有する。これらのポリアニオン性分子はしばしば、植物および動物の組織由来であり、そしてヘパリン、グリコサミノグリカン、フコイダン、カラギナン、ペントサンポリ硫酸およびデルマタンまたはデキストラン硫酸塩を含む広範なサブクラスを包含する。ヘパリン様の硫酸化ポリサッカライドは、抗トロンビンＩＩＩおよび／またはヘパリン補因子ＩＩ相互作用を通じて媒介される種々の抗凝固活性を示す（非特許文献５）。
【００１０】
このような硫酸化ポリサッカライドの１つである経口ヘパリンは、抗凝固剤としての開発が考慮されているが（非特許文献６）、ヘパリンは、その重篤な合併症のせいで不十分であり、この合併症としては、術中および術後の出血、骨粗鬆症、脱毛症、ヘパリン耐性、ヘパリンのリバウンド、ヘパリン起因性血小板減少症（ＨＩＴ）、ペハリン起因性血小板減少症血栓症候群（ＨＩＴＴＳ）、および薬物中止後抗凝固剤が弱まるために何日もかかることを含む他の不利な点が挙げられる（非特許文献７；非特許文献８）。ヘパリンは、慣習的に非経口投与され、そしてわずか約１％という経口取り込みレベルを有する（非特許文献９）。
【００１１】
ヘパリンと対照的に、別の硫酸化ポリサッカライドであるフコイダンは、海草から単離された硫酸化ポリサッカライドであり、凝血を調節する（すなわち、促進する）ことが示されている（特許文献１）。詳細には、フコイダンは、インビトロにおいて低濃度で、またはインビボで低い皮下用量で投与された場合、外因性の経路の活性化を通じて出血性の状況での凝固の改善（加速）をもたらす（非特許文献１０）。
【００１２】
凝固促進剤としてのその機能および非抗凝固硫酸化ポリサッカライド（ＮＡＳＰ）としての以前の分類と対照的に、本出願人らは、高用量で投与された場合、フコイダンは凝固特性を、驚くべきことに経口投与された場合でさえ有することを発見した。
【００１３】
現在の抗凝固剤に関連する問題の観点から、新規な抗凝固剤、そして好ましくは、現在利用可能な抗凝血治療に伴う上記の問題のうちの１つ以上を克服し得る薬剤の必要性が明らかに残っている。従って、安全、完全、有効および好ましくは費用効果的な抗凝固剤である薬剤の必要性が存在する。本発明は、この必要性を満たすと考えられる。
【特許文献１】米国特許出願公開第２００５／０２８２７７１号明細書
【非特許文献１】Ｄａｖｉｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１０３６３，１９９１
【非特許文献２】Ｗｅｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．，ら、Ｃｈｅｓｔ，１２６（３），Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２００４（Ｓｕｐｐｌ），２６５Ｓ
【非特許文献３】Ｊ Ａｎｓｅｌｌ，Ｓｅｍｉｎ Ｖａｓｃ Ｓｕｒｇ １８：１３４，２００５
【非特許文献４】Ａｍｅｎｔ，Ｐ．Ｗ．ら、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｆａｍｉｌｙ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ，６１（６），Ｍａｒｃｈ １５，２０００
【非特許文献５】Ｔｏｉｄａ ＴＣ、Ｌｉｎｈａｒｄｔ，ＲＪ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００３：１５：２９〜４６
【非特許文献６】Ａ Ｄｕｎｎ，Ｉｄｒｕｇｓ，３：８１７〜８２４，２０００
【非特許文献７】Ｉｑｂａｌ Ｏ，ら、Ｆａｒｅｅｄ Ｊ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｅｍｅｒｇ Ｄｒｕｇｓ ６：１１１〜１３５，２００１
【非特許文献８】Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｈ Ｒ，Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ １００：７２２〜７３０，２００４
【非特許文献９】Ｆｉｔｔｏｎ，Ｊ．Ｈ．，Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔｈｅ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｓｉｔｅ，ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｊａｎ．０１，２００５
【非特許文献１０】Ｌｉｕ，Ｔ．，ら、およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｋ．Ｗ．，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，９５：６８〜７６，２００６
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
（発明の要旨）
本発明は、哺乳動物被験体において種々の血栓障害を処置するための方法および組成物を提供する。詳細には、本発明は、血液凝固の軽減の必要な被験体を処置するための方法に関しており、そして治療上有効な量の１つ以上のフコイダンを含む組成物をこのような被験体に投与する工程を包含する。好ましくは、１つ以上のフコイダンは、経口的に投与される。
【００１５】
フコイダン組成物の特徴としては以下が挙げられる。
【００１６】
１実施形態では、この組成物のフコイダン成分は、５〜２５重量％のイオウを有する。
【００１７】
さらに別の実施形態では、フコイダンは藻類由来のものである。
【００１８】
好ましい実施形態では、このフコイダンは、Ｆｕｃｕｓ属またはＬａｍｉｎａｒｉａ属由来のフコイダンである。例示的なフコイダンは、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｉｓ由来またはＬａｍｉｎａｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ由来のフコイダンである。
【００１９】
１実施形態では、この投与方法は、代表的にはａＰＴＴアッセイのような適切な凝固ベースのアッセイを用いて凝固時間の延長として測定される、血液凝固時間での５０％より大きい延長を生じるために有効である。
【００２０】
本発明のフコイダン組成物は、静脈血栓塞栓症、深部静脈血栓、肺塞栓症、冠動脈疾患（冠状動脈血栓症、冠動脈再建術）、不安定狭心症または急性心筋梗塞、冠動脈血栓溶解、心房細動、発作、播種性血管内凝固症候群、、および第ＶＩＩａ処理によって誘発される凝固促進または血栓症を含む状態を処置または予防するのに有用である。
【００２１】
本発明の組成物はまた、一般的な手術を受けている患者、大きい整形外科的処置を受けているか、股関節骨折を受けているか、または脳神経外科を受けている患者における血栓を予防するために投与され得る。本発明の組成物はまた、例えば、下肢での凝固防止のために、圧迫ストッキングの使用と同時に投与されてもよい。
【００２２】
また本明細書で提供されるのは、被験体における凝固促進の使用の影響を逆転するための方法であり、この方法は、この被験体に対して本明細書に記載されるようなフコダイン組成物の治療上有効な量を投与する工程を包含する。
【００２３】
本発明のこれらおよび他の実施形態は、本開示を考慮すれば当業者に容易に明白になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
（発明の詳細な説明）
本発明の実施は、他に示さない限り、当該分野の範囲内である、薬学、化学、生化学、凝固、組み換えＤＮＡ技術および免疫学の従来の方法を使用する。このような技術は文献に詳細に例示される。例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第Ｉ〜ＩＶ巻（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）；Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，ｃｕｒｒｅｎｔ ａｄｄｉｔｉｏｎ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版，１９８９）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．ＣｏｌｏｗｉｃｋおよびＮ． Ｋａｐｌａｎ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）。
【００２５】
（定義）
本発明の記載では、以下の用語が使用され、そして下に示されるように定義されるものとする。
【００２６】
本明細書および添付の特許請求の範囲において用いられる場合、単数形「１つの（ａ）、（ａｎ）」および「この、その（ｔｈｅ）」は、この内容が明確に他を示すのでない限り、複数の言及を含むことに注意のこと。従って、例えば、「フコイダン」に対する言及は、２つ以上の特定のフコイダンの混合物などを包含する。
【００２７】
本明細書において用いる場合「抗凝固剤」とは、凝固形成を予防または遅らせ得る任意の薬剤をいう。
【００２８】
本明細書において用いる場合、「ポリサッカライド（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）」という用語は、複数の（すなわち、２以上）の共有結合したサッカライド残基を含むポリマーをいう。結合は、天然であっても天然でなくてもよい。天然の結合としては、例えば、グリコシド結合が挙げられるが、天然でない結合としては、例えば、エステル、アミドまたはオキシム結合部分を挙げることができる。ポリサッカライドは、任意の広範な平均分子量（ＭＷ）値を有してもよいが、一般には、少なくとも約１００ダルトンのものである。例えば、ポリサッカライドは、少なくとも約５００、１０００、２０００、４０００、６０００、８０００、１０，０００、２０，０００、３０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００ダルトンの分子量またはさらにそれ以上の分子量を有してもよい。ポリサッカライドは、直鎖または分枝鎖の構造を有してもよい。ポリサッカライドは、より大きいポリサッカライドの分解（例えば、加水分解）によって生成されるポリサッカライドのフラグメントであってもよい。分解は、分解されたポリサッカライドを生じるための酸、塩基、熱または酵素でのポリサッカライドの処理を含む、当業者に公知の任意の種々の手段によって達成され得る。ポリサッカライドは、化学的に変化されてもよく、そして限定はしないが硫酸化、ポリ硫酸化、エステル化およびメチル化を含む修飾を有してもよい。
【００２９】
「ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ（由来する）」という用語は本明細書において、分子のもとの供給源を特定するために用いるが、この分子が作成される方法を限定することは意味せず、この方法は例えば、化学合成によっても組み換え手段によってもよい。
【００３０】
「誘導体（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）」とは、親分子の所望の生物学的活性（例えば、抗血液凝固活性）が、少なくとも有意な程度（例えば、この親分子の所望の生物学的活性の少なくとも２０％が保持されるような程度）保持される限り、目的の親の分子またはそのアナログの任意の適切な改変、例えば、硫酸化、アセチル化、グリコシル化、リン酸化、ポリマー結合体化（例えば、ポリエチレングリコールとの）、または他の外来部分の添加を意図する。例えば、ポリサッカライドは、１つ以上の有機または無機の基と誘導体化されてもよい。例としては、少なくとも１つのヒドロキシル基において別の基（例えば、硫酸塩、カルボキシル、リン酸塩、アミノ、ニトリル、ハロ、シリル、アミド、アシル、脂肪族、芳香族または糖基）で置換されるか、環の酸素がイオウ、窒素、メチル基などで置換されているポリサッカライドが挙げられる。ポリサッカライドは、例えば、抗凝血機能を改善するために、化学的に変更されてもよい。このような改変としては、限定はしないが、硫酸化、ポリ硫酸化、エステル化およびメチル化が挙げられる。アナログおよび誘導体を作成するための方法は一般に当該分野で利用可能である。例えば、「Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ」、編集、Ｇ．Ｅ．Ｚａｉｋｏｖ，２００５，ＶＳＰ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ；「Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ」、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｆ ｔｈｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ」、第１９３回 ＡＣＳ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｄｅｎｖｅｒ Ｃｏｌｏ．，ＵＳＡ，Ａｐｒ．５〜１０，１９８７，編集Ｍ．Ｙａｌｐａｎｉ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒを参照のこと。
【００３１】
「フラグメント（ｆｒａｇｍｅｎｔ）」とはインタクトな全長配列および構造の一部のみからなる分子を意図する。ポリサッカライドのフラグメントは、大型のポリサッカライドの分解（例えば、加水分解）によって生成され得る。ポリサッカライドの活性なフラグメントは一般に、少なくとも約２〜２０の糖単位の全長ポリサッカライド、好ましくは少なくとも約５〜１０糖単位の全長分子、または２糖単位と全長分子との間の任意の整数を含み、ただし該当のフラグメントは、抗凝血活性のような生物学的活性を保持するものである。
【００３２】
「精製された（ｐｕｒｉｆｉｅｄ）」とは一般に、ある物質（例えば、硫酸化フカン）が全体的なサンプルのほとんどの重量％を含むような、この物質の単離をいう。代表的には、このようなサンプルでは精製された成分は、サンプルのうち５０重量％より多く、好ましくは８０％〜８５％、そしてさらに好ましくは９０〜９５％を含む。ポリサッカライドを精製するための技術は、当該分野で周知であり、そしてこの技術としては、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーおよび密度による沈降が挙げられる。
【００３３】
「単離された（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」とは、ポリサッカライドまたはポリペプチドに対して言及する場合、この示される分子は、この分子が自然に見出される生物体丸ごとから分けられて離されているか、または同じタイプの他の生物学的高分子が実質的に存在せずに存在するということを意味する。
【００３４】
「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」または「本質的に（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」とは、ほぼ全部または完全、例えば、ある所定の量の９５％またはそれより多くを意味する。
【００３５】
「任意の（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」または「任意に、必要に応じて（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」とは、その後ろに記載される状況が存在しても、またはしなくてもよいことを意味し、その結果この説明は、この状況が存在する場合、および存在しない場合を包含する。
【００３６】
「血液凝固の低下（ｒｅｄｕｃｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ）」の必要な被験体とは、血栓形成のリスクがあると特定されている（例えば、人工心臓弁を有する、心臓の麻痺または発作を有するか有した、深部静脈血栓のリスクを有するか有したかそのリスクにあるか、心房細動を有する、明白な理由なしに血液凝固を発症するか、整形外科手術を受けているか、狭心症を有する）など、第ＶＩＩａ処理を受けている、または例えば、ＰＰＴもしくはｄＰＴなどのような臨床血液凝固試験の結果として、正常よりも容易に凝固する血液を有すると評価されている、被験体である。
【００３７】
分子量は、本発明のフコイダンの状況では、平均分子量の数値または平均分子重量のいずれかで表され得る。他に示さない限り、本明細書の分子量についての全言及は、平均分子重量を指す。分子量決定、平均数値および平均重量はどれも、ゲル浸透クロマトグラフィーまたは他の液体クロマトグラフィー技術を用いて測定され得る。
【００３８】
フコイダンのような組成物または因子の「薬理学的に有効な量（ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」または「治療上有効な量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」という用語は、所望の応答、例えば血液凝固時間の延長（または血液凝固の軽減）を得るための組成物または因子の毒性ではないが十分な量をいう。必要な正確な量は、被験体の種、年齢および全身の状態、処置されている状態の重篤度、使用される特定の薬物の形態または薬物の組み合わせ、投与方式などに依存して被験体間で変化する。任意の個々の場合の適切な「有効な（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ）」量は、本明細書に提供される情報に基づいて、慣用的な実験を用いて当業者に決定され得る。
【００３９】
「被験体（ｓｕｂｊｅｃｔ）」、「個体（ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ）」または「患者（ｐａｔｉｅｎｔ）」という用語は、本明細書において交換可能に用いられて、脊椎動物、好ましくは哺乳動物をいう。哺乳動物としては、限定はしないが、マウス、げっ歯類、サル、ヒト、家畜、スポーツ動物、およびペットが挙げられる。
【００４０】
「脊椎動物被験体（ｖｅｔｅｂｒａｔｅ ｓｕｂｊｅｃｔ）」とは、多数の脊索動物亜門を意味し、これには限定はしないが、ヒトおよび他の霊長類が挙げられ、これには、非ヒト霊長類、例えば、チンパンジーおよび他の類人猿およびサル種；家畜、例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギおよびウマ；家畜、例えば、イヌおよびネコ；マウス、ラットおよびモルモットのようなげっ歯類を含む実験動物；家禽、野生および狩猟の鳥、例えば、ニワトリ、シチメンチョウおよび他の家禽、アヒル、ガチョウを含む鳥類などが挙げられる。この用語は、特定の年齢を意味しない。従って、成体および新生児の個体の両方とも含まれるものとする。本明細書に記載される本発明は、上記の任意の脊椎動物種における使用を考慮される。
【００４１】
「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、特に所定の量について言及して、５％のプラスマイナスという逸脱を含むことを意味する。
【００４２】
所定の治療剤について推奨される投薬量は、ｍｇ／ｋｇで表わされる場合、被験体の体重の１ｋｇあたりの治療剤のｍｇを指す。
【００４３】
（発明の詳細）
本発明を詳細に記載する前に、本発明は、特定の処方物または処理パラメーターに限定されず、従って当然ながら変化してもよいことが理解されるべきである。本明細書で用いられる用語は、本発明の特定の実施形態を記載する目的だけであり、限定するとは解釈されないことも理解されるべきである。
【００４４】
本明細書に記載される方法および材料に対して類似または等価な多数の方法および材料が、本発明の実施で用いられ得るが、好ましい材料および方法が本明細書で記載される。
【００４５】
（全般的な概説）
現在、経口の抗凝血治療剤の選択肢は極めて少ない。ワルファリンが最も一般的であり、これは効果的であるが、その狭い治療係数のせいで安全に調節するのは困難である。さらに、抗凝血作用の期間は極めて長期（数日間程度）であり、これによってその安全な使用がさらに面倒になり得る（ＨＲ Ｒｏｂｅｒｔｓ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ １００：７２２〜７３０，２００４）。結果として、ワルファリンは、臨床家には十分に活用されておらず（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｙ，Ａ．Ｋ．，Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍａｎａｇｅｄ Ｃａｒｅ，２００４年１０月，補遺，Ｓ２９７〜３０６）、これによって新規な経口抗凝血剤の必要性が理解される。
【００４６】
フコイダンが、大型の異種硫酸化ポリサッカライドから構成されても、一般には経口的に生体利用可能とは考えられず、比較的低用量のフコイダンを経口的に投与すれば、検出可能な抗凝血応答が生じるということが出願人らによって実証されている。詳細には、有用な有効な抗凝血剤としての経口フコイダンの使用の検討において、出願人は、経口フコイダンが、抗凝血有効性を保持しており、以下の提唱された機構に基づいて、ワルファリンよりも安全であるはずということを実証している：ｉ）ＡＴＩＩＩおよび／またはＨＣＩＩ阻害を介するより高濃度での抗凝血（Ｔｏｉｄａ ＴＣ，Ｌｉｎｈａｒｄｔ，ＲＪ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００３；１５：２９〜４６）、ｉｉ）外因性経路活性化の低濃度増強（Ｌｉｕ，Ｔ．，ら、およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｋ．Ｗ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，９５：６８〜７６，２００６）、ｉｉｉ）ワルファリンについて時間数（本明細書における実施例を参照のこと）対日数である作用期間、ｉｖ）ワルファリンに対する改善された安全域、ならびにｖ）抗凝血のさらに急速な初回発現（すなわち、ワルファリンよりも速く「発現し（ｏｎ）」、速く「切れる（ｏｆｆ）」。
【００４７】
（経口の抗凝血剤としてのフコイダン）
本発明は、とりわけＦｕｃｕｓ属またはＬａｍｉｎａｒｉａ属由来のフコイダンのようなフコイダンが、血液凝固の軽減の必要な患者の処置において、経口投与され、そして抗凝血剤として有効であるという発見に基づく。
【００４８】
本明細書におけるアプローチは、血液凝固の傾向を軽減するかまたは血液凝固を妨げるための、硫酸化ポリサッカライド、例えば、ヘパリン様硫酸化ポリサッカライドの使用に基づく。本明細書に記載される選択された硫酸化ポリサッカライドは、それらが抗凝促進活性を示す濃度よりも有意に高い濃度で経口的に投与された場合、抗凝血活性を保有することが見出されている。さらに、作用の発現は、かなり急速であり、例えば、ビーグル犬に対して経口的に投与された場合、代表的には約１時間程度であり、抗凝固活性の期間は数時間（例えば、８時間程度）である。これは、ワルファリン（その作用期間は数日程度であり、過剰な出血の傾向による問題および頻繁な患者モニタリングの必要性がある）のような他の経口剤よりも著しい進歩である。
【００４９】
実施例１に示され得るように、健康なビーグル犬に投与されたフコイダンは、血液凝固の最も一般的に利用される臨床的指標であるａＰＴＴにおける有意な（＞５０％）増大によって示されるとおり、処置された３頭のイヌの各々において用量依存の抗凝血活性を示した。特に、３頭の健康なビーグル犬の各々に対する例示的なフコイダン組成物の単回の２０ｍｇ／ｋｇの用量の経口投与は、投与後約１〜７時間にまたがる数時間内にこの３頭のイヌの各々において投与前値を約５〜９倍を超えて血漿凝血時間を増大するのに有効であった。１番のイヌおよび２番のイヌについて、血症凝血時間の有意な増大（すなわち、最初の投与前値の約６倍〜９倍を超える）が、投与後約０．５時間〜１時間内に観察された。さらに、１番のイヌおよび２番のイヌについて、血漿凝血時間は、投与後数時間内に本質的に投与前値に戻り、このことは、ワルファリンのような薬物に比較した場合出血性の影響の低下の可能性を示している。
【００５０】
従って、本発明は、血液凝固の軽減の必要な被験体であって、とりわけ深部静脈血栓、肺塞栓症、心筋梗塞、播種性血管内凝固症候群、不安定狭心症、および第ＶＩＩａ処置によって誘発される凝固促進または血栓症から選択される状態に罹患している被験体を含む被験体におけるフコイダンの使用に関している。
【００５１】
（フコイダン）
フコイダンは、特定の食用の海草および棘皮動物の天然に存在する成分である。さらに詳細には、それらは、主に硫酸化Ｌフコースから構成される複雑な硫酸化ポリサッカライドであり、ケルプ（海洋の褐藻）ならびにウニおよびナマコのような棘皮動物由来である（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−ｂａｓｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｖｏｌ．１，Ｗｏｎｇ，Ｃｈｉ−Ｈｕｅｙ（編），第１５章，４０７〜４３３頁，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００３）。「フコイダン（ｆｕｃｏｉｄａｎ）という用語は代表的には、単独の化学物質ではなく低分子硫酸塩ポリマーの部分の多様な群をいう。フコイダンは主に、分枝または第二のスルホ基を３位置に有するα（１−３）結合単位の４−スルホ−Ｌ−フコースから構成される（Ｗｏｎｇ，同書）。渇藻および棘皮動物の種々の種由来のフコイダンは、その骨格におけるフコースの量、硫酸化の程度およびパターン、構造（直鎖および分枝）、および個々の糖類およびウロン酸の割合が異なる。本発明における使用に好ましいフコイダンは褐藻由来のものである。
【００５２】
本発明における使用のためのフコイダンは、抽出されても、さらに精製されても、そして／または天然の供給源（例えば、褐藻類）から改変されても、または新規に合成されてもよい。フコイダンは、熱水によって（ＰｅｒｃｉｖａｌおよびＲｏｓｓ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９５０，７１７〜７２０）、酸もしくはエタノール抽出によって、または酵素消化によって、続いて沈殿による水溶液からの単離（例えば、有機溶媒の添加による）または超遠心（例えば，Ｂｌａｃｋ，ＷＡＰら、ＩＶ Ｊ Ｓｃｉ Ｆｏｏｄ Ａｇｒｉｃ．１９５２；３：１２２〜１２９を参照のこと）によって、藻類から単離されてもよい。フコイダンはまた、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）、ＮａｔｕｒｏＤｏｃ ＬＬＣ（Ｋｉｎｇｍａｎ，ＡＺ）、Ｍａｒｉｎｏｖａ（Ｔａｚｍａｎｉａ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）およびＮａｔｕｒｅｚａ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，（Ｋａｗａｇｕｃｈｉ，Ｊ Ｐ）のような種々の供給業者から購入可能である。本発明における使用のために好ましいフコイダンは、Ｆｕｃｕｓ属由来またはＬａｍｉｎａｒｉａ属由来のフコイダンであるが、他の属由来のフコイダンも適切である。このようなフコイダンは、本明細書において、ＦｕｃｕｓフコイダンまたはＬａｍｉｎａｒｉａフコイダンと呼ばれる。本発明における使用のためのさらなるフコイダンとしては、とりわけ、Ｃｌａｄｏｓｉｐｈｏｎ、Ｎａｍａｃｙｓｔｕｓ、Ｕｎｄａｒｉａ、Ｃｈｏｒｄａｒｉａ、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ、Ｌｅａｔｈｅｓｉａ、Ｄｅｓｍａｒｅｓｔｉａ、Ｄｉｃｔｙｏｓｉｐｈｏｎ、Ｄｉｃｔｙｏｔａ、Ｐａｄｉｎａ、Ｓｐａｔｏｇｌｏｓｓｕｍ、Ａｄｅｎｏｃｙｓｔｉｓ、Ｐｙｌａｙｅｌｌａ、Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ、Ｂｉｆｕｒｃａｒｉａ、Ｈｉｍａｎｔｈａｌｉａ、Ｈｉｚｉｋｉａ、Ｐｅｌｖｅｔｉａ、Ａｌａｒｉａ、Ａｒｔｈｒｏｔｈａｍｎｕｓ、Ｃｈｏｒｄａ、Ｅｃｋｌｏｎｉａ、Ｅｉｓｅｎｉａ、Ｍａｃｒｏｃｙｓｔｉｓ、Ｎｅｒｅｏｃｙｓｔｉｓ、Ｐｅｔａｌｏｎｉａ、ＳｃｙｔｏｓｉｐｈｏｎおよびＳａｕｎｄｅｒｓｅｌｌａ由来のフコイダンが挙げられる。特に好ましいフコイダンは、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｉｓ由来、またはＬａｍｉｎａｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ由来である。
【００５３】
本明細書の方法および組成物における使用のためのフコイダンは代表的には、ただし必須ではないが、分子量、フコース含量、ウロン酸含量および硫酸塩含量において異なるフコイダンの異種混合物である。
【００５４】
フコイダンは、約２００ダルトン〜約５００，０００ダルトン、好ましくは約１，０００ダルトン〜約３００，０００ダルトンの平均分子量におよんでもよい。本発明における使用のためのフコイダンとしては、低分子重量フコイダン（約５００〜８，０００ダルトンの範囲の平均分子量を有する）、中分子重量フコイダン（約８，０００ダルトンより大きく〜１５，０００ダルトンの範囲の平均分子重量を有する）、および高分子重量フコイダン（１５，０００ダルトンより大きく〜約３００，０００ダルトンの平均分子重量を有する）が挙げられる。フコイダンの分子量は、例えば、ゲル浸透クロマトグラフィーまたは高速立体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｓｔｅｒｉｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）（ＨＰＳＥＣ）を用いて決定され得る。
【００５５】
フコイダンの種々の分子量画分は、キャピラリー電気泳動によって分離してもよい。あるいは、異なる分子量画分は、高分子量フコイダンの酸加水分解またはラジカル脱重合によって調製してもよい。得られた生成物の分子量範囲は、使用される加水分解または脱重合条件のストリンジェンシーに基づいて調節され得る。次いで、画分をイオン交換クロマトグラフィーを用いてさらに精製してもよい。例えば、フコイダンの中分子重量および低分子重量の画分を得るために、高分子重量のフコイダンを、ＨＣｌのような酸（または任意の他の適切な酸）を、０．０２〜１．５Ｍにおよぶ濃度で、２５℃〜８０℃におよぶ温度で用いて加水分解する。加水分解反応時間は代表的には、１５分〜数時間にまたがる。次いで、得られた加水分解された反応混合物を、塩基、例えば、水酸化ナトリウムの添加によって中和する。次いで、塩を、例えば、電気透析法によって除去し、そしてその加水分解産物を分析して、炭水化物分析のための従来の分析技術を用いて、平均分子重量、フコース含量、ウロン酸含量、および硫酸塩含量を決定する。あるいは、酵素方法を使用して、例えば、フカン・サルフェート・ヒドロラーゼ（ｆｕｃａｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｈｙｄｒｏｌａｓｅ）（フコシダーゼＥＣ３．２．１．４４）およびα−Ｌ−フコシダーゼＥＣ３．２．１．５１のようなグリコシダーゼを用いてフコイダンを分解してもよい。本発明における使用のためのフコイダンは、、使用される分離の程度に依存して、異種であっても同種であってもよい。例えば、Ｎａｒｄｅｌｌａ，Ａ．，ら、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓ １９９６；２８９：２０１〜２０８；Ｄｅｕｘ，Ｊ．Ｆ．ら、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ．２００２；２２：１６０４；Ｚｅｍａｎｉ，Ｆ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２００５；７０（８）：１１６７〜１１７５を参照のこと。
【００５６】
本発明における使用のためのフコイダンは代表的には、約５〜２５重量％のイオウ、好ましくは８〜２５重量％のイオウを有する。約５重量％を超えるイオウ重量、または１０重量％を超えさえするイオウ重量を有するフコイダンが特に好ましい。
【００５７】
フコースポリサッカライドの単糖成分上の任意の遊離ヒドロキシル基が、本発明の実施における使用のための硫酸化された高次の糖類（ジ−、トリ、オリゴ−またはポリ−）を生成するために硫酸化によって改変されてもよい。硫酸化は代表的には、ピリジンもしくはトリエチルアミンとの三酸化イオウ複合体を用いて、または第一スズ複合体で行われる（Ｃａｌｖｏ−Ａｓｉｎ，Ｊ．Ａ．，ら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ １，１９９７，１０７９）。例えば、フコイダンに関する１つ以上の二糖類を、フコシルドナーとして、例えば、３，４−ジ−Ｏ−アセチル化トリクロロアセトイミデートを用いて、２つの適切な単糖類前駆体の間でのαフコース結合の形成によって立体選択的に合成してもよい（例えば、Ｚｌｏｔｉｎａ，Ｎ．Ｓ．，ら、Ｌ．Ｈｉｒｓｚｆｅｌｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｐｏｌｉｓｈ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１回 Ｂａｌｔｉｃ Ｍｅｅｔｉｎｇ ｏｎ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ，２００４年１０月６〜９，Ｗｒｏｃｌａｗ，Ｐｏｌａｎｄ）。
【００５８】
（凝血アッセイ）
フコイダンが凝血を妨げる能力は、凝血（血餅、ｃｌｏｔ）ベースの試験、色素生産性または着色アッセイ、直接化学測定およびＥＬＩＳＡを含む、種々の十分確立された凝血アッセイを用いて容易に決定されるが、凝血ベースの試験が最も一般的である。これらとしては、ＰＴ（プロトロンビン時間）、ａＰＴＴ（活性化部分トロンボプラスチン時間）、ＡＣＴ（活性化凝血時間）、およびＴＣＴ（トロンビン凝血時間）が挙げられる。例えば、Ｂａｔｅｓ，Ｓ．Ｍ．ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００５；１１２：ｅ５３〜６０；ＰＤＲ Ｓｔａｆｆ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ．２００４，Ａｎｄｅｒｓｏｎら（１９７６）Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．９：５７５〜５８０；Ｎｏｒｄｆａｎｇら（１９９１）Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ．６６：４６４〜４６７；Ｗｅｌｓｃｈら（１９９１）Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６４：２１３〜２２２；Ｂｒｏｚｅら（２００１）Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ８５：７４７〜７４８；Ｓｃａｌｌａｎら（２００３）Ｂｌｏｏｄ．１０２：２０３１〜２０３７；Ｐｉｊｎａｐｐｅｌｓら（１９８６）Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．５５：７０〜７３；およびＧｉｌｅｓら（１９８２）Ｂｌｏｏｄ ６０：７２７〜７３０を参照のこと。
【００５９】
プロトロンビン時間（ＰＴ）。この試験は、組織因子（これは組み換え由来であっても、または脳、肺もしくは胎盤の抽出物由来であってもよい）およびカルシウムを含むトロンボプラスチン試薬を血漿に添加すること、ならびに凝血時間を測定することによって行われる。プロトロンビン時間（ＰＴ）は、試薬および凝血試験因子で異なるが、代表的には１０〜１４秒におよぶ（Ｗｈｉｔｅ，Ｇ Ｃ ＩＩ，ら、Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｈｅ Ｂｌｅｅｄｉｎｇ Ｐａｔｉｅｎｔ．ＩｎＬ Ｃｏｌｍａｎ，Ｒ Ｗ，ら編集、Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ：Ｂａｓｉｃ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ．第３版．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ：Ｊ Ｂ Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．，１９９４：１１３４〜１１４７）。このＰＴは、第ＶＩＩ、ＸおよびＶ因子、プロトロンビン、またはフィブリノーゲンの欠損、およびこれらの因子に対する抗体によって長くなる。この試験はまた、高用量のヘパリンおよびフィブリン分解産物の存在を含む、フィブリノーゲンからフィブリンへの変換反応のインヒビターを有する患者では異常である。代表的には、ＰＴ試薬は、過剰のリン脂質を含み、その結果陰イオン性リン脂質と反応する非特異的なインヒビター（すなわち、ループス性抗凝固因子）は、凝血時間を長引かせない。
【００６０】
活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＰＴ）。ａＰＰＴは、最初に表面活性剤（ｓｕｒｆａｃｅ ａｃｔｉｖａｔｏｒ）（例えば、カオリン、セライト、エラグ酸、またはシリカ）および希釈リン脂質（例えば、セファリン）をクエン酸加血漿に添加することによって行う。このアッセイにおけるリン脂質は、組織因子が存在しないので部分的トロンボプラスチンと呼ばれる。補因子（第ＸＩＩ因子、第ＸＩ因子、プレカリクレイン、および高分子重量キニノーゲン）の任意の活性化を可能にするインキュベーション後、次にカルシウムを添加し、そして凝血時間を測定する。凝血時間は、用いられる試薬および凝固測定因子に応じて変化するが、ａＰＰＴは代表的には、２２〜４０秒の間におよぶ（Ｂａｔｅｓ，ら、同書）。ａＰＰＴは、接触因子；第ＩＸ因子、第ＶＩＩＩ因子、第Ｘ因子または第Ｖ因子；プロトロンビン；またはフィブリノーゲンの欠損によって延長され得る。特異的な因子インヒビター、および非特異的なインヒビターも、ａＰＴＴを延長し得る。フィブリン分解産物および抗凝血剤もａＰＴＴを延長する。
【００６１】
トロンビン凝血時間（ＴＣＴ）。ＴＣＴは血漿へ過剰のトロンビンを添加することによって行う。このＴＣＴは、低フィブリノーゲンレベルまたは異常フィブリノーゲン血症を有する患者で、およびフィブリン分解産物レベルが上昇した患者で延長される。これらの異常は、播種性血管内凝固症候群で共通してみられる。
【００６２】
活性化凝血時間（ＡＣＴ）。このＡＣＴは、高用量ヘパリン療法またはビバリルジンでの処置をモニターするために代表的に用いられる、治療時点での全血凝固試験である。代表的には、全血を、凝血活性化因子（例えば、セライト、カオリン、またはガラス粒子）、および磁気攪拌バーを含む試験管またはカートリッジ中に収集し、次いで血液が凝固するのにかかる時間を測定する。ＡＣＴの参照値は、７０〜１８０秒におよぶ。抗凝血の所望の範囲は、用いられる指標および試験方法に依存する。
【００６３】
このような凝血アッセイ、または上記で簡略に記載された他の適切なアッセイは、１つ以上のフコイダン、および要に応じて１つ以上の血液因子、抗凝固剤、または他の試薬の存在において行い、そしてその値を、処置前後と比較して、血液凝固時間の延長の程度を決定してもよい。
【００６４】
本発明の方法および組成物において用いられるフコイダンは、抗凝血活性を示す濃度より有意に低い濃度でのみ示され得るなんらかの凝固促進活性が出現する。このような凝固促進活性はさらに、代表的には、本発明における場合と同様、単回用量後ではなく数日間の投与後に示される。所望の抗凝固活性が生じる濃度に対する、所望されない凝固促進特性が生じる濃度の割合は、被験体の治療フコイダンについての治療係数と呼ばれる。
【００６５】
本発明のフコイダン組成物は代表的には、治療範囲と呼ばれる、約１．５〜２．５の規定の範囲内で平均コントロールａＰＴＴに対する患者のａＰＴＴの割合を維持するのに十分な量で被験体に投与される。
【００６６】
（薬学的組成物および剤形）
必要に応じて、本発明のフコイダン組成物はさらに、薬学的組成物を得るために１つ以上の薬学的に受容可能な賦形剤を含んでもよい。好ましくは、このフコイダン含有組成物は、フコイダン自体を除く藻類成分を本質的に含まない。例示的な賦形剤としては、限定はしないが、炭水化物、無機塩、抗菌剤、抗酸化剤、サーファクタント、緩衝液、酸、塩基およびそれらの組み合わせが挙げられる。注射組成物に適切な賦形剤としては、水、アルコール、ポリオール、グリセリン、植物油、リン脂質およびサーファクタントが挙げられる。炭水化物、例えば、糖、誘導体化糖、例えば、アルジトール、アルドン酸、エステル化された糖、および／または糖ポリマーが賦形剤として存在し得る。特定の炭水化物賦形剤としては、例えば以下が挙げられる：単糖類、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなど；二糖類、例えば、ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなど；ポリサッカライド、例えば、ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなど；ならびにアルジトール、例えば、マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ピラノシルソルビトール、ミオイノシトールなど。賦形剤としてはまた、無機の塩または緩衝液、例えば、クエン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硝酸カリウム、リン酸ナトリウム、一塩基、二塩基のリン酸ナトリウム、およびそれらの組み合わせを挙ることができる。
【００６７】
本発明の組成物としてはまた、微生物の増殖を予防または妨げるための抗菌剤を挙ることができる。本発明に適切な抗菌剤の非限定的な例としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、チメロサールおよびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００６８】
抗酸化剤も同様にこの組成物中に存在してもよい。抗酸化剤は、酸化を妨げて、それによってフコイダンまたは調製物の他の成分の悪化を予防するために用いられる。本発明における使用のための適切な抗酸化剤としては、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化合物ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、亜硫酸水素ナトリウム、ホルムアルデヒド・スルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウムおよびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００６９】
サーファクタントは、賦形剤として存在してもよい。例示的なサーファクタントとしては、以下が挙げられる：ポリソルベート、例えば「「Ｔｗｅｅｎ ２０」および「Ｔｗｅｅｎ ８０」、ならびにプルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）、例えば、Ｆ６８およびＦ８８（ＢＡＳＦ，Ｍｏｕｎｔ Ｏｌｉｖｅ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）；ソルビタンエステル；脂質、例えば、リン脂質、例えば、レシチンおよび他のホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン（ただし、好ましくはリポソーム形態ではない）、脂肪酸および脂肪酸エステル；ステロイド、例えば、コレステロール；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；ならびに亜鉛および他のこのような適切な陽イオン。
【００７０】
酸および塩基は、組成物における賦形剤として存在してもよい。用いられ得る酸の非限定的な例としては、塩酸、酢酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、硝酸、過塩素酸、リン酸、硫酸、フマル酸、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される酸が挙げられる。適切な塩基の例としては、限定はしないが、水酸化ナトリウム、酢酸ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、酢酸アンモニウム、酢酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、フマル酸カリウム、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される塩基が挙げられる。
【００７１】
組成物中のフコイダンの量は、多数の要因に依存して変化するが、この組成物が単位剤形（例えば、錠剤、カプセルなど）または容器（例えば、バイアル）中にある場合、最適には治療上有効な用量である。治療上有効な用量は、臨床的に所望されるエンドポイント（この場合、血液凝固時間の延長によって測定した、血液凝固の予防）を得るのに有効な最適量を決定するために、この組成物の漸増量の反復投与によって経験的に決定され得る。
【００７２】
この組成物における任意の個々の賦形剤の量は、この賦形剤の性質および機能、ならびにこの組成物の特定の必要性に依存して変化する。代表的には、任意の個々の賦形剤の最適の量は、慣用的な実験を通じて、すなわち、種々の量の賦形剤（低から高におよぶ）を含有する組成物を調製すること、この組成物の安定性および他のパラメーターを検討すること、次いで重大な有害な影響なしに最適能力が得られる範囲を決定することによって決定される。しかし、一般には、この賦形剤は、約１％〜約９９重量％、好ましくは約５％〜約９８重量％、さらに好ましくは約１５〜約９５重量％の賦形剤という量で、最も好ましくは３０重量％未満の濃度で組成物中に存在する。これらの前述の薬学的賦形剤は、他の賦形剤とともに、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」、第１９版，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５），ｔｈｅ「Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」、第５２版，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．（１９９８），ａｎｄ Ｋｉｂｂｅ，Ａ．Ｈ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，第３版，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，２０００に記載される。
【００７３】
この組成物は、全てのタイプの処方物を包含し、これは経口投与に適切な処方物、および非経口処方物を包含する。１つの特に好ましい処方物は、経口投与に適切な処方物である。経口投与形態としては、粉末、錠剤、トローチ剤（ｌｏｚｅｎｇｅｓ）、カプセル、シロップ、溶液（液体）、経口懸濁液、エマルジョン、顆粒およびペレットが挙げられる。別の処方物としては、エアロゾル、経皮パッチ、ゲル、クリーム、軟膏、スプレー、坐剤、粉末または再構成され得る凍結乾燥剤、および液体が挙げられる。例えば、注射前に、固体組成物を再構成するための適切な希釈剤の例としては、注射用静菌性水、デキストロース５％を含有する水、リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル溶液、生理食塩水、滅菌水、脱イオン水およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００７４】
局所的な処方物は、皮膚または他の罹患領域を通じた成分の吸収または浸透を増強する化合物、例えば、いくつか例を挙げれば、ジメチルスルホキシデン・ビサボロール（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅｍ ｂｉｓａｂｏｌｏｌ）、オレイン酸、イソプロピル・ミリステートおよびＤ−リモネンをさらに含んでもよい。
【００７５】
非経口投与に適切な処方物としては、注射に適切な水性および非水性の等張性滅菌水溶液、ならびに水性および非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。非経口処方物は必要に応じて、単位用量または複数用量の密閉された容器、例えば、アンプルおよびバイアル中に含まれ、そして使用の直前に滅菌の液体キャリア、例えば、注射用水の添加しか要さない凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））状態で保管されてもよい。即時用の注射用液および懸濁液は、前に記載されたタイプの滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製されてもよい。
【００７６】
本発明のフコイダン処方物はまた、フコイダンおよび必要に応じて他の薬物成分が、非徐放性の処方物に比較した場合、経時的に緩徐に放出されるかまたは吸収されるように、徐放性の処方物の形態であってもよい。徐放性処方物は、活性薬剤のプロドラッグ形態、遅延型薬物送達システム、例えば、リポソームまたはポリマーマトリックス、ヒドロゲル、またはポリエチレングリコールのようなポリマーの共有結合を使用してもよい。
【００７７】
特に上述される成分に加えて、本発明の処方物は、必要に応じて、薬学の分野で慣習的な他の薬剤、および例えば、経口投与形態のために使用されている特定のタイプの処方物を含んでもよく、経口投与のための組成物はまた、甘味料、増粘剤または香味料のようなさらなる薬剤を含んでもよい。
【００７８】
本発明の方法はまた、獣医の適用において有用である。
【００７９】
本発明はさらに、例えば、血液凝固の軽減の必要性のある哺乳動物被験体の処置のためのキットを包含する。このキットは、フコイダンを、パッケージされた形態で、好ましくは経口投与のために、使用の説明書とともに含む。例えば、このキットは、血液凝固の軽減の必要な患者に対してフコイダンの推奨投薬量を投与するため（すなわち、血栓形成を妨げるため）の説明書を備える。この説明書は好ましくは、血液凝固の軽減を果たすため、毎日この組成物のフコイダン成分として１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇを経口投与することを推奨する。フコイダンは、パッケージングが、投与のための説明書とともに考慮される場合、薬物（すなわち、フコイダン）成分が投与されるべき方法を明らかに示している限り、投与に適切ないずれの方式でパッケージされてもよい。例えば、フコイダンがカプセルの形態であるならば、このキットは、カプセルの密閉容器、カプセルを含むブリスターストリップ、などを備えてもよい。パッケージングは、医薬品のパッケージングに通常使用されるいずれの形態であってもよく、そして異なる色、ラッピング、不正開封防止パッケージング、ブリスターパックまたはストリップ、デシカント（ｄｅｓｓｉｃａｎｔｓ）などのような任意の多数の形状を利用してもよい。
【００８０】
（投与）
本明細書に提供されるようなフコイダン組成物での処置の少なくとも１つの治療上有効なサイクルが、この被験体に投与される。「処置の治療上有効なサイクル（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｙｃｌｅ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、投与された場合、血栓性の障害について個体の処置に関する正の治療応答をもたらす、処置のサイクルを意味する。特に目的とするのは、血液が凝固する傾向を減弱する（すなわち、血液凝固の形成を予防する）フコイダン組成物での処置のサイクルである。このような正の治療応答は、所望の応答を得るために上記の凝固アッセイのうちの１つ以上によって測定され得る。「正の治療応答（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」とは、本発明に従う処置を受けている個体が、被験体の血栓性の状態または障害の１つ以上の症状の改善であって、血液凝固時間の延長および出血の改善のような改善を含む改善を示すということである。
【００８１】
例えば、市販のトロンボプラスチンは、その組織因子供給源および調製方法が変化するので、報告されるＰＴ時間は、使用される試薬に依存して変化し得る。ＩＮＲと呼ばれるパラメーターは、ＰＴの結果における相違を補正するためにＷｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（ＷＨＯ）によって開発された。ＩＮＲは、平均の正常なＰＴ値で割った患者のＰＴとして規定され、これは、標準に対して比較した各々のトロンボプラスチン試薬の応答性を記載する国際感度指数（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ）を用いて算出され得る（Ｂａｔｅｓ，Ｓ．Ｍ．，ら、同書）。種々の指標におけるＩＮＲについての最適の治療範囲は、以下のとおりであり、そして本発明のフコイダン組成物を投与する場合処置の経過をモニターするために用いられ得る：静脈血栓塞栓症、予防および処置（２．０−３．０）、心房細動（２．０−３．０）、心臓弁膜症（２．０−３．０）、心臓弁（ｈｅａｒｔ ｖａｌｖｅｓ）−生体弁（ｔｉｓｓｕｅ ｖａｌｖｅｓ）、機械弁、二葉大動脈位置（ｂｉｌｅａｆｌｅｔ ａｏｒｔｉｃ ｐｏｓｉｔｉｏｎ）（２．０−３．０）、心臓弁、機械的（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ），高リスク弁（ｈｉｇｈ ｒｉｓｋ ｖａｌｖｅ）（２．５−３．５）、急性心筋梗塞−塞栓症の予防（２．０−３．０）、急性心筋梗塞−再梗塞の予防（３．５−４．５）。本発明の１つの特定の実施形態では、本発明のフコイダン組成物は、被験体のａＰＴＴにおいて５０％より大きい改善を生じるのに有効な量で投与される。好ましくは、本発明の方法および組成物は、被験体のａＰＴＴにおいて少なくとも２倍以上の延長を生じるのに有効である。本発明の方法および組成物は、約１〜１０というＩＮＲ範囲を得るのに理想的に有効である。
【００８２】
特定の実施形態では、本発明のフコイダン組成物の複数の治療上有効な用量であって、必要に応じて、１つ以上の他の治療剤、例えば、第ＶＩＩａ因子、ワルファリン、トロンビンインヒビター、低分子量ヘパリンおよびヘパリン、または他の医薬を含む用量が投与される。本発明の組成物は代表的には、ただし必須ではないが、経口投与され、しかし、注射（皮下、静脈内、または筋肉内）、インフュージョンおよび局所投与も考慮される。投与のさらなる形態、例えば、肺、直腸、経皮、経粘膜、クモ膜下腔内、心臓周囲、動脈内、脳内、眼内、腹腔内なども考慮される。
【００８３】
特定の実施形態では、本発明のフコイダン組成物は、局所送達のために、例えば、血餅の直接処置のために用いられる。例えば、フコイダンは、凝血（血餅）の部位で注射によって投与され得る。投与の特定の調製物および適切な方法は、この被験体の特定の状態に基づいて選択される。
【００８４】
別の実施形態では、本発明の薬学的組成物は、予防的に、例えば、計画的な手術の前後に投与される。このような予防的な使用は、公知の既存の血液凝固障害を有する被験体に特に有益である。
【００８５】
本発明の別の実施形態では、フコイダンおよび／または他の薬剤を含む薬学的組成物は、徐放性処方物中であるか、または徐放性システムを用いて投与される処方物である。このようなデバイスは当該分野で周知であり、これには、例えば、経皮パッチ、および連続して、定常方式で種々の用量を経時的な薬物送達を提供して徐放性でない薬物組成物で徐放性の効果を得ることができる超小型の移植可能なポンプが挙げられる。
【００８６】
投与の方法を用いて、抗凝血治療の必要性を伴う任意の状態を処置する。このような状態としては、血栓性状態、たとえば、深部静脈血栓、肺塞栓症、心筋梗塞、播種性血管内凝固症候群、不安定狭心症、および第ＶＩＩａ処理によって誘発される凝固促進または血栓症が挙げられる。
【００８７】
当業者は、上記のような状態を、本発明の特異的なフコイダン組成物が効率的に処置し得るということを理解する。投与されるべき正確な用量は、被験体の年齢、体重および全身状態、ならびに処置されている状態の重篤度、保健医療の専門家の判定、および投与されている特定のフコイダンに依存して変化する。治療上有効な量は、当業者によって決定され得、そして各々の特定の場合の特定の要件について調節される。
【００８８】
一般には、治療上有効な量は、毎日約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇのフコイダイン、より好ましくは毎日約２ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは毎日約５ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲である。好ましくは、このような用量は、１日４回（ＱＩＤ）０．２５〜１２ｍｇ／ｋｇ、０．５〜１０ｍｇ／ｋｇのＱＩＤ、１．２５〜７．５ｍｇ／ｋｇのＱＩＤ、０．３〜１７ｍｇ／ｋｇの１日３回（ＴＩＤ）、０．６〜１３ｍｇ／ｋｇのＴＩＤ、１．５〜１０ｍｇ／ｋｇのＴＩＤ、０．０５〜２５ｍｇ／ｋｇの１日２回（ＢＩＤ）、１〜２０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ、または２．５〜１５ｍｇ／ｋｇのＢＩＤという範囲である。一日投薬総量は一般に、被験体の体重、被験体の年齢、処置されている状態、組成物に含まれる特定のフコイダンの力価、所望される抗凝血効果の大きさおよび投与の特定の経路のようないくつかの要因に依存して、約５０ｍｇのフコイダン〜約４５００ｍｇのフコイダンにおよぶ。
【００８９】
本明細書に記載されるフコイダン組成物は、単独でもしくは組み合わせて、または他の治療剤とともに投与して、臨床家の判定、患者の要件などに依存する種々の投薬スケジュールに従って特定の状態または疾患を処置してもよい。特定の投薬スケジュールは当業者によって容易に決定されるか、または慣用的な方法を用いて実験的に決定されてもよい。例示的な投与スケジュールとしては、限定はしないが、１日５回、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、毎週３回、毎週２回、毎週１回、毎月２回、毎月１回、そしてそれらの任意の組み合わせの被験フコイダン組成物の投与が挙げられる。最も好ましいのは、１日１回以下の投薬を要する組成物である。
【００９０】
（適用）
１局面では、本発明のフコイダン組成物は、血栓性障害を処置するために用いられる。本発明の組成物は、血液凝固の軽減の必要な被験体に投与される。処置または予防されるべき状態としては、静脈血栓塞栓症、深部静脈血栓、肺塞栓症、冠動脈疾患（冠状動脈血栓症、冠動脈再建術）、不安定狭心症または急性心筋梗塞、冠動脈血栓溶解、心房細動、(心)発作、播種性血管内凝固症候群、および第ＶＩＩａ因子処置によって誘発される凝固促進または血栓症が挙げられる。本発明の組成物また、一般外科手術を受けている患者、大きい整形外科手術を受けている、股関節（腰部）骨折を被っている、または神経外科手術を受けている患者における血栓を予防するために投与されてもよい。本発明の組成物はまた、例えば、下肢での血餅予防のための圧迫ストッキングの使用と同時に投与されてもよい。
【００９１】
本発明はまた、被験体での凝血促進剤の使用の影響を逆転させるための方法であって、被験体に対して治療上有効な量のフコイダン組成物を投与する工程を包含する。
【００９２】
特定の実施形態では、この被験体は、限定はしないが、トロンビン；第Ｘａ因子、第ＩＸａ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子および第ＶＩＩａ因子を含む内因性凝固経路の活性化因子、プレカリクレイン、ならびに高分子量キニノーゲン；または組織因子、第ＶＩＩａ因子、第Ｖａ因子および第Ｘａ因子を含む外因性凝固経路の活性化因子を含む、凝固促進因子で以前に処置されていてもよい。
【００９３】
さらに、本発明のフコイダン組成物は、ステントおよび他の血液接触医学デバイス、例えば、血液装置の相互作用から局所凝血を軽減するための、人工心肺のための膜型人工肺または機械的心臓弁のためのコーティングとして用いられてもよい。本発明のフコイダン組成物は、血液接触デバイスに対するコーティングとして、１層または多層で、直接適用されてもよい。このようなデバイスは、「フコイダン化された（ｆｕｃｏｉｄａｎｉｚｅｄ）」と言われる。あるいは、このフコイダン組成物は、１つ以上のさらなる血液適合性のポリマー、例えば、ヒト血清アルブミン、ホスホリルコリン、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、ポリエチレングリコール、ポリプロピレン−オキシド−ポリエチレングリコールブロックコポリマー（ＰＰＯ−ＰＥＧ）、ホスファゼンポリマーなどと組み合わせて適用されてもよい。フコイダンはまた、カップリング剤、例えば、グルタルアルデヒド、１，１−カルボニルジイミダゾール、または任意の他の適切なカップリング剤を用いるポリマーコーティングに対する共有結合によってデバイスの表面に遊離可能に固定されてもよい。このようなカップリング剤は当該分野で周知である。例えば、Ｗｏｎｇ，Ｓ．Ｓ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９１を参照のこと。
【００９４】
本発明は、好ましい特異的な実施形態と組み合わせて記載されているが、前述の記載および以下の実施例は、本発明の範囲を例示するものであり限定はしないものであることが理解されるべきである。本発明の範囲内の他の局面、利点および改変は、本発明が属する当該分野の当業者には明白になる。
【実施例】
【００９５】
本発明の実施は、他に示さない限り、当該分野の技術の範囲内である、薬学的処方物、分離、薬理学などの従来の技術を使用する。このような技術は、文献中で詳細に説明される。例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｓ．Ｋ．Ｎｉａｚｉ（編），ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，２００４；Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第９版、Ｈａｒｄｍａｎ，Ｊ．Ｇ．，Ｇｉｌｍａｎ，Ａ．Ｇ．，Ｌｉｍｂｉｒｄ，Ｌ．Ｅ．（編）、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９５；Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、第１８版、Ｋａｔｚｕｎｇ，Ｂ．Ｇ．（編）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＮ，２００１を参照のこと。
【００９６】
以下の実施例では、用いられる数値（例えば、量、温度など）に関して正確性を保障するために労力が払われているが、ある程度の実験誤差および偏差があり得る。以下の実施例の各々は、本明細書に記載される実施形態の１つ以上を行うために当業者に有益であるとみなされる。
【００９７】
材料および方法
試薬
フコイダンは、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。
【００９８】
動物
健康なビーグル犬を、Ｃｏｖａｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓコロニーから入手した。全ての動物手順は、「Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ」（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ．Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｒｅ ａｎｄ ｕｓｅ ｏｆ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｉｍａｌｓ．Ｗａｓｈｉｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ；１９９６）に従って行い、そして全ての手順は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって再検討され、承認された。
【００９９】
凝固（凝血）アッセイ
活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイ
このａＰＴＴアッセイは、Ｌｉｕ，Ｔら、およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｋ．Ｗ．、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，９５：６８〜７６，２００６に記載のとおり行った。
【０１００】
希釈プロトロンビン時間（ｄＰＴ）アッセイ
ｄＰＴアッセイは、Ｌｉｕ，ＴらおよびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｋ．Ｗ．、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，９５：６８〜７６，２００６に記載のとおり行った。
【０１０１】
実施例１
健常なビーグル犬に対する投与の際のフコイダンの抗凝血活性のインビボ評価
以下の研究を行なって、臨床に基づく凝固アッセイを用いてビーグル犬における例示的なフコイダン組成物の経口の抗凝固活性を試験する。ａＰＴＴおよびｄＰＴアッセイの両方とも、本研究の間に複数の時点でとった血漿サンプルで行った。
【０１０２】
３頭の正常なビーグル犬をこの研究に用いた。各々の動物は、ゼラチンカプセル（サイズ「０」）中の粉末として送達される１回の単独フコイダン経口投与（２０ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇ）を投与され、ここで投与の間には１週のウオッシュアウト期間があった。
【０１０３】
臨床的な観察は、フコイダン投与の７時間後まで行った。血漿サンプルは、フコイダン投与の前、１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、４時間後および７時間後に収集した（滴定した全血、血漿単離）。血漿サンプルを試験の前−２０℃で保管した。
【０１０４】
アッセイ結果（二連）は、下の犬の１〜３番の各々について得る。
【０１０５】
表１
２０ｍｇ／ｋｇの経口投薬量についてのａＰＴＴアッセイ結果
【０１０６】
【表１】
表２
５ｍｇ／ｋｇの経口投薬量についてのａＰＴＴアッセイ結果
【０１０７】
【表２】
表３
２０ｍｇ／ｋｇの経口投薬量についてのｄＰＴアッセイ結果
【０１０８】
【表３】
表４
５ｍｇ／ｋｇの経口投薬量についてのｄＰＴアッセイ結果
【０１０９】
【表４】
２０ｍｇ／ｋｇのフコイダンの経口用量での３頭の正常なイヌの各々についてのａＰＰＴ分析の結果を図１に示す。
【０１１０】
血漿凝血アッセイの結果によって、経口投与されたフコイダンが、動物およびヒトの使用のための安全かつ有効な経口抗凝血剤である能力を有することが明らかになった。詳細には、正常なビーグル犬に対して経口的に投与されたフコイダンは、血漿抗凝血の最も一般に利用される臨床測定値であるＡＰＴＴにおける実質的な（＞５０％）増大によって検出されるとおり３頭のイヌの各々で用量依存性の抗凝血活性を示した。表１における結果を参照すれば、２０ｍｇ／ｋｇという例示的なフコイダン組成物の経口投与が、３頭のイヌの各々における血漿凝血時間を、投与後約１時間〜７時間におよぶ時間内で投与前値を約５〜９倍を超えて延長するのに有効であったことが理解され得る。１番および２番のイヌについては、血漿凝血時間の有意な増大（すなわち、最初の投与前値の約６倍〜９倍を超える）が、投与後約０．５時間から１時間内で観察された。さらに、１番および２番のイヌについては、血漿凝血時間は、投与後数時間内に本質的に投与前値に戻り、このことは、ワルファリンのような薬物に比較した場合、数日間におよぶ作用期間の延長を有する出血の傾向の低下を示している。出願人らはまた、５ｍｇ／ｋｇのｐ．ｏ．（経口）で延長の傾向を観察した。
【０１１１】
経口のフコイダンは、試験された用量では、希釈プロトロンビン時間（ｄｉｌｕｔｅ ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ ｔｉｍｅ）（ｄＰＴ）凝固を実質的に（＞５０％）延長しなかった。理論によって束縛されることはないが、このような結果は、外因性経路による凝血開始のための「スパーク（ｓｐａｒｋ）」に対する限られた影響を反映すると解釈され得る。
【０１１２】
上で言及されるように、正常なビーグル犬における経口フコイダンの抗凝血作用の期間は数時間であり、従って、ワルファリンのような抗凝血剤に比較した場合のその安全能の増大を反映している。
【０１１３】
本発明の好ましい実施形態は、図示および記載されているが、種々の変化が、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなくここで行なわれ得ることが理解される。
【図面の簡単な説明】
【０１１４】
【図１】図１は、実施例１に記載のような２０ｍｇ／ｋｇのフコダインの経口投与後の正常なビーグル犬において７時間の経過にわたる血漿凝固時間（秒）を実証するプロットである。血漿凝固時間は、ａＰＰＴアッセイを用いて決定した。
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、とりわけ深部静脈血栓、肺塞栓症、心筋梗塞、発作の予防ならびに血液凝固の処置および予防を含む血栓性障害の処置に関する。詳細には、本発明は、凝固を予防するためのフコイダンのような硫酸化ポリサッカライドの使用に関する。
【０００２】
（略語）
以下の略語が本明細書において用いられる：
ａＰＴＴ：活性化部分トロンボプラスチン時間
ｄＰＴ：希釈プロトロンビン時間
ＰＴ：プロトロンビン時間
ＤＶＴ：深部静脈血栓症
ＴＦ：組織因子
ＦＶＩＩａ：第ＶＩＩａ因子
ＦＸ：第Ｘ因子
ＦＸａ：第Ｘａ因子
ＦＶａ：第Ｖａ因子
ＮＳＡＩＤ：非ステロイド抗炎症薬
ＴＦＰＩ：組織因子経路インヒビター
ＮＡＰｃ２：線虫抗凝固タンパク質ｃ２
ＨＩＴ：ヘパリン−起因性血小板減少症
ＨＩＴＴＳ：ペハリン起因性血小板減少症血栓症候群
ＴＣＴ：トロンビン凝固時間
ＡＣＴ：活性化凝固時間
ＩＮＲ：国際標準化比率（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｒａｔｉｏ）
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
正常な血液凝固は、いくつかのレベルで調節される複雑な生理学的および生化学的プロセスである。血液凝固のプロセスは、局所の血管収縮を伴うフィブリン形成および血小板凝固をもたらす凝固因子カスケードの活性化に関与する（非特許文献１によって概説される）。この凝固カスケードは、正常な凝固開始の初期手段であると考えられる「外因性（ｅｘｔｒｉｎｓｉｃ）」経路および広範な凝固応答に寄与する「内因性（ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ）」経路からなる。出血性の侵襲に対する正常な応答は、外因性経路の活性化に関与する。外因性経路の活性化は、血液が、侵襲後の組織上で曝されるかまたは発現される第ＶＩＩ因子の補因子である組織因子（ＴＦ）と接触する場合に開始される。ＴＦは、ＦＶＩＩａの産生を容易にするＦＶＩＩとの複合体を形成する。次いで、ＦＶＩＩａは、ＴＦと会合して、ＦＸを、プロトロンビナーゼ複合体の重要な成分である、セリンプロテアーゼＦＸａへ変換する。ＦＸａ／ＦＶａ／カルシウム／リン脂質複合体によるプロトロンビンからトロンビンへの変換は、その全てが正常な血液凝固に必須である、フィブリンの形成および血小板の活性化を刺激する。正常なうっ血はさらに、内因性経路の第ＩＸａおよびＶＩＩＩａ因子によって増強され、これもＦＸをＦＸａに変換する。また、非特許文献２も参照のこと。
【０００４】
治療剤の１つの重要なクラスは、抗凝固剤（血液凝固の形成を妨げる因子）である。抗凝固剤を用いて、とりわけ、動脈および静脈の血栓、肺塞栓、心筋梗塞および発作の予防のような血栓性障害を処置する。抗凝固剤はまた、心房細動を有する患者または機械的人工心臓弁を有する患者における心臓塞栓の事象を妨げるためにも用いられる。
【０００５】
動脈および静脈の血栓は、疾病率および死亡率の主要な原因である。動脈血栓症は、心筋梗塞、発作および四肢の壊疽の最も一般的な原因であるが、静脈血栓は、胚塞栓（致死的であり得る）および静脈炎後症候群をもたらす。
【０００６】
動脈の血栓は、少量のフィブリンによって一緒に保持される血小板凝集からなるので、動脈の血栓形成を阻害するストラテジーは代表的には、血小板機能をブロックする薬物に関しているが、しばしば、フィブリン沈着を妨げる抗凝固剤も含む。静脈血栓は、主にフィブリンから構成され、従って、抗凝固剤は、それらの予防および処置のための選択薬である。
【０００７】
既存の経口および非経口の抗凝固剤は、不利な点によって悩まされる。ワルファリン（クマディン）は、臨床的な実施で用いられる主な経口の抗凝固剤であり、そしてクマリンはビタミン−Ｋアンタゴニストである。ワルファリンは依然として、静脈の血栓塞栓症の長期予防および処置に利用可能な唯一の経口投与される抗凝固剤である。不幸にも、ワルファリンが有する治療係数は狭く、そして頻繁な実験モニタリングおよび用量調節を要する（非特許文献３）。さらに、ワルファリンの重篤な有害な副作用は、過度の出血の可能性がある（例えば、切り傷、鼻血または月経による）。さらに、ワルファリンは、重篤な薬物相互作用を、例えば、特定の抗生物質、アセトアミノフェン、アスピリンおよびＮＳＡＩＤとともに例えば同時投与される場合、生じ得る（非特許文献４）。
【０００８】
ワルファリンの限界の結果として、いくつかの新規な薬剤が、可能性のある抗凝固剤として開発されている。しかし、ＴＦＰＩ（組織因子経路インヒビター）またはＮＡＰｃ２（線虫の抗凝固タンパク質ｃ２）のような検討によれば多くの可能性のある抗凝固剤は生物製剤であり、従って、既存の抗凝固治療剤よりもかなり費用が嵩む可能性が高い。さらに、各々が、ほとんどの患者集団に所望されない経路によって投与される−ＴＦＰＩは、静脈内投与されるが、ＮＡＰｃ２は皮下に投与される。
【０００９】
硫酸化ポリサッカライドは、生物学的活性の多血症によって特徴付けられるあるクラスの分子であり、動物およびヒトにおいてしばしば好ましい耐容性プロフィールを有する。これらのポリアニオン性分子はしばしば、植物および動物の組織由来であり、そしてヘパリン、グリコサミノグリカン、フコイダン、カラギナン、ペントサンポリ硫酸およびデルマタンまたはデキストラン硫酸塩を含む広範なサブクラスを包含する。ヘパリン様の硫酸化ポリサッカライドは、抗トロンビンＩＩＩおよび／またはヘパリン補因子ＩＩ相互作用を通じて媒介される種々の抗凝固活性を示す（非特許文献５）。
【００１０】
このような硫酸化ポリサッカライドの１つである経口ヘパリンは、抗凝固剤としての開発が考慮されているが（非特許文献６）、ヘパリンは、その重篤な合併症のせいで不十分であり、この合併症としては、術中および術後の出血、骨粗鬆症、脱毛症、ヘパリン耐性、ヘパリンのリバウンド、ヘパリン起因性血小板減少症（ＨＩＴ）、ペハリン起因性血小板減少症血栓症候群（ＨＩＴＴＳ）、および薬物中止後抗凝固剤が弱まるために何日もかかることを含む他の不利な点が挙げられる（非特許文献７；非特許文献８）。ヘパリンは、慣習的に非経口投与され、そしてわずか約１％という経口取り込みレベルを有する（非特許文献９）。
【００１１】
ヘパリンと対照的に、別の硫酸化ポリサッカライドであるフコイダンは、海草から単離された硫酸化ポリサッカライドであり、凝血を調節する（すなわち、促進する）ことが示されている（特許文献１）。詳細には、フコイダンは、インビトロにおいて低濃度で、またはインビボで低い皮下用量で投与された場合、外因性の経路の活性化を通じて出血性の状況での凝固の改善（加速）をもたらす（非特許文献１０）。
【００１２】
凝固促進剤としてのその機能および非抗凝固硫酸化ポリサッカライド（ＮＡＳＰ）としての以前の分類と対照的に、本出願人らは、高用量で投与された場合、フコイダンは凝固特性を、驚くべきことに経口投与された場合でさえ有することを発見した。
【００１３】
現在の抗凝固剤に関連する問題の観点から、新規な抗凝固剤、そして好ましくは、現在利用可能な抗凝血治療に伴う上記の問題のうちの１つ以上を克服し得る薬剤の必要性が明らかに残っている。従って、安全、完全、有効および好ましくは費用効果的な抗凝固剤である薬剤の必要性が存在する。本発明は、この必要性を満たすと考えられる。
【特許文献１】米国特許出願公開第２００５／０２８２７７１号明細書
【非特許文献１】Ｄａｖｉｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１０３６３，１９９１
【非特許文献２】Ｗｅｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．，ら、Ｃｈｅｓｔ，１２６（３），Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２００４（Ｓｕｐｐｌ），２６５Ｓ
【非特許文献３】Ｊ Ａｎｓｅｌｌ，Ｓｅｍｉｎ Ｖａｓｃ Ｓｕｒｇ １８：１３４，２００５
【非特許文献４】Ａｍｅｎｔ，Ｐ．Ｗ．ら、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｆａｍｉｌｙ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ，６１（６），Ｍａｒｃｈ １５，２０００
【非特許文献５】Ｔｏｉｄａ ＴＣ、Ｌｉｎｈａｒｄｔ，ＲＪ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００３：１５：２９〜４６
【非特許文献６】Ａ Ｄｕｎｎ，Ｉｄｒｕｇｓ，３：８１７〜８２４，２０００
【非特許文献７】Ｉｑｂａｌ Ｏ，ら、Ｆａｒｅｅｄ Ｊ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｅｍｅｒｇ Ｄｒｕｇｓ ６：１１１〜１３５，２００１
【非特許文献８】Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｈ Ｒ，Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ １００：７２２〜７３０，２００４
【非特許文献９】Ｆｉｔｔｏｎ，Ｊ．Ｈ．，Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔｈｅ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｓｉｔｅ，ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｊａｎ．０１，２００５
【非特許文献１０】Ｌｉｕ，Ｔ．，ら、およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｋ．Ｗ．，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，９５：６８〜７６，２００６
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
（発明の要旨）
本発明は、哺乳動物被験体において種々の血栓障害を処置するための方法および組成物を提供する。詳細には、本発明は、血液凝固の軽減の必要な被験体を処置するための方法に関しており、そして治療上有効な量の１つ以上のフコイダンを含む組成物をこのような被験体に投与する工程を包含する。好ましくは、１つ以上のフコイダンは、経口的に投与される。
【００１５】
フコイダン組成物の特徴としては以下が挙げられる。
【００１６】
１実施形態では、この組成物のフコイダン成分は、５〜２５重量％のイオウを有する。
【００１７】
さらに別の実施形態では、フコイダンは藻類由来のものである。
【００１８】
好ましい実施形態では、このフコイダンは、Ｆｕｃｕｓ属またはＬａｍｉｎａｒｉａ属由来のフコイダンである。例示的なフコイダンは、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｉｓ由来またはＬａｍｉｎａｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ由来のフコイダンである。
【００１９】
１実施形態では、この投与方法は、代表的にはａＰＴＴアッセイのような適切な凝固ベースのアッセイを用いて凝固時間の延長として測定される、血液凝固時間での５０％より大きい延長を生じるために有効である。
【００２０】
本発明のフコイダン組成物は、静脈血栓塞栓症、深部静脈血栓、肺塞栓症、冠動脈疾患（冠状動脈血栓症、冠動脈再建術）、不安定狭心症または急性心筋梗塞、冠動脈血栓溶解、心房細動、発作、播種性血管内凝固症候群、、および第ＶＩＩａ処理によって誘発される凝固促進または血栓症を含む状態を処置または予防するのに有用である。
【００２１】
本発明の組成物はまた、一般的な手術を受けている患者、大きい整形外科的処置を受けているか、股関節骨折を受けているか、または脳神経外科を受けている患者における血栓を予防するために投与され得る。本発明の組成物はまた、例えば、下肢での凝固防止のために、圧迫ストッキングの使用と同時に投与されてもよい。
【００２２】
また本明細書で提供されるのは、被験体における凝固促進の使用の影響を逆転するための方法であり、この方法は、この被験体に対して本明細書に記載されるようなフコダイン組成物の治療上有効な量を投与する工程を包含する。
【００２３】
本発明のこれらおよび他の実施形態は、本開示を考慮すれば当業者に容易に明白になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
（発明の詳細な説明）
本発明の実施は、他に示さない限り、当該分野の範囲内である、薬学、化学、生化学、凝固、組み換えＤＮＡ技術および免疫学の従来の方法を使用する。このような技術は文献に詳細に例示される。例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第Ｉ〜ＩＶ巻（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）；Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，ｃｕｒｒｅｎｔ ａｄｄｉｔｉｏｎ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版，１９８９）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．ＣｏｌｏｗｉｃｋおよびＮ． Ｋａｐｌａｎ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）。
【００２５】
（定義）
本発明の記載では、以下の用語が使用され、そして下に示されるように定義されるものとする。
【００２６】
本明細書および添付の特許請求の範囲において用いられる場合、単数形「１つの（ａ）、（ａｎ）」および「この、その（ｔｈｅ）」は、この内容が明確に他を示すのでない限り、複数の言及を含むことに注意のこと。従って、例えば、「フコイダン」に対する言及は、２つ以上の特定のフコイダンの混合物などを包含する。
【００２７】
本明細書において用いる場合「抗凝固剤」とは、凝固形成を予防または遅らせ得る任意の薬剤をいう。
【００２８】
本明細書において用いる場合、「ポリサッカライド（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）」という用語は、複数の（すなわち、２以上）の共有結合したサッカライド残基を含むポリマーをいう。結合は、天然であっても天然でなくてもよい。天然の結合としては、例えば、グリコシド結合が挙げられるが、天然でない結合としては、例えば、エステル、アミドまたはオキシム結合部分を挙げることができる。ポリサッカライドは、任意の広範な平均分子量（ＭＷ）値を有してもよいが、一般には、少なくとも約１００ダルトンのものである。例えば、ポリサッカライドは、少なくとも約５００、１０００、２０００、４０００、６０００、８０００、１０，０００、２０，０００、３０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００ダルトンの分子量またはさらにそれ以上の分子量を有してもよい。ポリサッカライドは、直鎖または分枝鎖の構造を有してもよい。ポリサッカライドは、より大きいポリサッカライドの分解（例えば、加水分解）によって生成されるポリサッカライドのフラグメントであってもよい。分解は、分解されたポリサッカライドを生じるための酸、塩基、熱または酵素でのポリサッカライドの処理を含む、当業者に公知の任意の種々の手段によって達成され得る。ポリサッカライドは、化学的に変化されてもよく、そして限定はしないが硫酸化、ポリ硫酸化、エステル化およびメチル化を含む修飾を有してもよい。
【００２９】
「ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ（由来する）」という用語は本明細書において、分子のもとの供給源を特定するために用いるが、この分子が作成される方法を限定することは意味せず、この方法は例えば、化学合成によっても組み換え手段によってもよい。
【００３０】
「誘導体（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）」とは、親分子の所望の生物学的活性（例えば、抗血液凝固活性）が、少なくとも有意な程度（例えば、この親分子の所望の生物学的活性の少なくとも２０％が保持されるような程度）保持される限り、目的の親の分子またはそのアナログの任意の適切な改変、例えば、硫酸化、アセチル化、グリコシル化、リン酸化、ポリマー結合体化（例えば、ポリエチレングリコールとの）、または他の外来部分の添加を意図する。例えば、ポリサッカライドは、１つ以上の有機または無機の基と誘導体化されてもよい。例としては、少なくとも１つのヒドロキシル基において別の基（例えば、硫酸塩、カルボキシル、リン酸塩、アミノ、ニトリル、ハロ、シリル、アミド、アシル、脂肪族、芳香族または糖基）で置換されるか、環の酸素がイオウ、窒素、メチル基などで置換されているポリサッカライドが挙げられる。ポリサッカライドは、例えば、抗凝血機能を改善するために、化学的に変更されてもよい。このような改変としては、限定はしないが、硫酸化、ポリ硫酸化、エステル化およびメチル化が挙げられる。アナログおよび誘導体を作成するための方法は一般に当該分野で利用可能である。例えば、「Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ」、編集、Ｇ．Ｅ．Ｚａｉｋｏｖ，２００５，ＶＳＰ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ；「Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ」、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｆ ｔｈｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ」、第１９３回 ＡＣＳ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｄｅｎｖｅｒ Ｃｏｌｏ．，ＵＳＡ，Ａｐｒ．５〜１０，１９８７，編集Ｍ．Ｙａｌｐａｎｉ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒを参照のこと。
【００３１】
「フラグメント（ｆｒａｇｍｅｎｔ）」とはインタクトな全長配列および構造の一部のみからなる分子を意図する。ポリサッカライドのフラグメントは、大型のポリサッカライドの分解（例えば、加水分解）によって生成され得る。ポリサッカライドの活性なフラグメントは一般に、少なくとも約２〜２０の糖単位の全長ポリサッカライド、好ましくは少なくとも約５〜１０糖単位の全長分子、または２糖単位と全長分子との間の任意の整数を含み、ただし該当のフラグメントは、抗凝血活性のような生物学的活性を保持するものである。
【００３２】
「精製された（ｐｕｒｉｆｉｅｄ）」とは一般に、ある物質（例えば、硫酸化フカン）が全体的なサンプルのほとんどの重量％を含むような、この物質の単離をいう。代表的には、このようなサンプルでは精製された成分は、サンプルのうち５０重量％より多く、好ましくは８０％〜８５％、そしてさらに好ましくは９０〜９５％を含む。ポリサッカライドを精製するための技術は、当該分野で周知であり、そしてこの技術としては、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーおよび密度による沈降が挙げられる。
【００３３】
「単離された（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」とは、ポリサッカライドまたはポリペプチドに対して言及する場合、この示される分子は、この分子が自然に見出される生物体丸ごとから分けられて離されているか、または同じタイプの他の生物学的高分子が実質的に存在せずに存在するということを意味する。
【００３４】
「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」または「本質的に（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」とは、ほぼ全部または完全、例えば、ある所定の量の９５％またはそれより多くを意味する。
【００３５】
「任意の（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」または「任意に、必要に応じて（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」とは、その後ろに記載される状況が存在しても、またはしなくてもよいことを意味し、その結果この説明は、この状況が存在する場合、および存在しない場合を包含する。
【００３６】
「血液凝固の低下（ｒｅｄｕｃｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ）」の必要な被験体とは、血栓形成のリスクがあると特定されている（例えば、人工心臓弁を有する、心臓の麻痺または発作を有するか有した、深部静脈血栓のリスクを有するか有したかそのリスクにあるか、心房細動を有する、明白な理由なしに血液凝固を発症するか、整形外科手術を受けているか、狭心症を有する）など、第ＶＩＩａ処理を受けている、または例えば、ＰＰＴもしくはｄＰＴなどのような臨床血液凝固試験の結果として、正常よりも容易に凝固する血液を有すると評価されている、被験体である。
【００３７】
分子量は、本発明のフコイダンの状況では、平均分子量の数値または平均分子重量のいずれかで表され得る。他に示さない限り、本明細書の分子量についての全言及は、平均分子重量を指す。分子量決定、平均数値および平均重量はどれも、ゲル浸透クロマトグラフィーまたは他の液体クロマトグラフィー技術を用いて測定され得る。
【００３８】
フコイダンのような組成物または因子の「薬理学的に有効な量（ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」または「治療上有効な量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」という用語は、所望の応答、例えば血液凝固時間の延長（または血液凝固の軽減）を得るための組成物または因子の毒性ではないが十分な量をいう。必要な正確な量は、被験体の種、年齢および全身の状態、処置されている状態の重篤度、使用される特定の薬物の形態または薬物の組み合わせ、投与方式などに依存して被験体間で変化する。任意の個々の場合の適切な「有効な（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ）」量は、本明細書に提供される情報に基づいて、慣用的な実験を用いて当業者に決定され得る。
【００３９】
「被験体（ｓｕｂｊｅｃｔ）」、「個体（ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ）」または「患者（ｐａｔｉｅｎｔ）」という用語は、本明細書において交換可能に用いられて、脊椎動物、好ましくは哺乳動物をいう。哺乳動物としては、限定はしないが、マウス、げっ歯類、サル、ヒト、家畜、スポーツ動物、およびペットが挙げられる。
【００４０】
「脊椎動物被験体（ｖｅｔｅｂｒａｔｅ ｓｕｂｊｅｃｔ）」とは、多数の脊索動物亜門を意味し、これには限定はしないが、ヒトおよび他の霊長類が挙げられ、これには、非ヒト霊長類、例えば、チンパンジーおよび他の類人猿およびサル種；家畜、例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギおよびウマ；家畜、例えば、イヌおよびネコ；マウス、ラットおよびモルモットのようなげっ歯類を含む実験動物；家禽、野生および狩猟の鳥、例えば、ニワトリ、シチメンチョウおよび他の家禽、アヒル、ガチョウを含む鳥類などが挙げられる。この用語は、特定の年齢を意味しない。従って、成体および新生児の個体の両方とも含まれるものとする。本明細書に記載される本発明は、上記の任意の脊椎動物種における使用を考慮される。
【００４１】
「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、特に所定の量について言及して、５％のプラスマイナスという逸脱を含むことを意味する。
【００４２】
所定の治療剤について推奨される投薬量は、ｍｇ／ｋｇで表わされる場合、被験体の体重の１ｋｇあたりの治療剤のｍｇを指す。
【００４３】
（発明の詳細）
本発明を詳細に記載する前に、本発明は、特定の処方物または処理パラメーターに限定されず、従って当然ながら変化してもよいことが理解されるべきである。本明細書で用いられる用語は、本発明の特定の実施形態を記載する目的だけであり、限定するとは解釈されないことも理解されるべきである。
【００４４】
本明細書に記載される方法および材料に対して類似または等価な多数の方法および材料が、本発明の実施で用いられ得るが、好ましい材料および方法が本明細書で記載される。
【００４５】
（全般的な概説）
現在、経口の抗凝血治療剤の選択肢は極めて少ない。ワルファリンが最も一般的であり、これは効果的であるが、その狭い治療係数のせいで安全に調節するのは困難である。さらに、抗凝血作用の期間は極めて長期（数日間程度）であり、これによってその安全な使用がさらに面倒になり得る（ＨＲ Ｒｏｂｅｒｔｓ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ １００：７２２〜７３０，２００４）。結果として、ワルファリンは、臨床家には十分に活用されておらず（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｙ，Ａ．Ｋ．，Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍａｎａｇｅｄ Ｃａｒｅ，２００４年１０月，補遺，Ｓ２９７〜３０６）、これによって新規な経口抗凝血剤の必要性が理解される。
【００４６】
フコイダンが、大型の異種硫酸化ポリサッカライドから構成されても、一般には経口的に生体利用可能とは考えられず、比較的低用量のフコイダンを経口的に投与すれば、検出可能な抗凝血応答が生じるということが出願人らによって実証されている。詳細には、有用な有効な抗凝血剤としての経口フコイダンの使用の検討において、出願人は、経口フコイダンが、抗凝血有効性を保持しており、以下の提唱された機構に基づいて、ワルファリンよりも安全であるはずということを実証している：ｉ）ＡＴＩＩＩおよび／またはＨＣＩＩ阻害を介するより高濃度での抗凝血（Ｔｏｉｄａ ＴＣ，Ｌｉｎｈａｒｄｔ，ＲＪ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００３；１５：２９〜４６）、ｉｉ）外因性経路活性化の低濃度増強（Ｌｉｕ，Ｔ．，ら、およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｋ．Ｗ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，９５：６８〜７６，２００６）、ｉｉｉ）ワルファリンについて時間数（本明細書における実施例を参照のこと）対日数である作用期間、ｉｖ）ワルファリンに対する改善された安全域、ならびにｖ）抗凝血のさらに急速な初回発現（すなわち、ワルファリンよりも速く「発現し（ｏｎ）」、速く「切れる（ｏｆｆ）」。
【００４７】
（経口の抗凝血剤としてのフコイダン）
本発明は、とりわけＦｕｃｕｓ属またはＬａｍｉｎａｒｉａ属由来のフコイダンのようなフコイダンが、血液凝固の軽減の必要な患者の処置において、経口投与され、そして抗凝血剤として有効であるという発見に基づく。
【００４８】
本明細書におけるアプローチは、血液凝固の傾向を軽減するかまたは血液凝固を妨げるための、硫酸化ポリサッカライド、例えば、ヘパリン様硫酸化ポリサッカライドの使用に基づく。本明細書に記載される選択された硫酸化ポリサッカライドは、それらが抗凝促進活性を示す濃度よりも有意に高い濃度で経口的に投与された場合、抗凝血活性を保有することが見出されている。さらに、作用の発現は、かなり急速であり、例えば、ビーグル犬に対して経口的に投与された場合、代表的には約１時間程度であり、抗凝固活性の期間は数時間（例えば、８時間程度）である。これは、ワルファリン（その作用期間は数日程度であり、過剰な出血の傾向による問題および頻繁な患者モニタリングの必要性がある）のような他の経口剤よりも著しい進歩である。
【００４９】
実施例１に示され得るように、健康なビーグル犬に投与されたフコイダンは、血液凝固の最も一般的に利用される臨床的指標であるａＰＴＴにおける有意な（＞５０％）増大によって示されるとおり、処置された３頭のイヌの各々において用量依存の抗凝血活性を示した。特に、３頭の健康なビーグル犬の各々に対する例示的なフコイダン組成物の単回の２０ｍｇ／ｋｇの用量の経口投与は、投与後約１〜７時間にまたがる数時間内にこの３頭のイヌの各々において投与前値を約５〜９倍を超えて血漿凝血時間を増大するのに有効であった。１番のイヌおよび２番のイヌについて、血症凝血時間の有意な増大（すなわち、最初の投与前値の約６倍〜９倍を超える）が、投与後約０．５時間〜１時間内に観察された。さらに、１番のイヌおよび２番のイヌについて、血漿凝血時間は、投与後数時間内に本質的に投与前値に戻り、このことは、ワルファリンのような薬物に比較した場合出血性の影響の低下の可能性を示している。
【００５０】
従って、本発明は、血液凝固の軽減の必要な被験体であって、とりわけ深部静脈血栓、肺塞栓症、心筋梗塞、播種性血管内凝固症候群、不安定狭心症、および第ＶＩＩａ処置によって誘発される凝固促進または血栓症から選択される状態に罹患している被験体を含む被験体におけるフコイダンの使用に関している。
【００５１】
（フコイダン）
フコイダンは、特定の食用の海草および棘皮動物の天然に存在する成分である。さらに詳細には、それらは、主に硫酸化Ｌフコースから構成される複雑な硫酸化ポリサッカライドであり、ケルプ（海洋の褐藻）ならびにウニおよびナマコのような棘皮動物由来である（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−ｂａｓｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｖｏｌ．１，Ｗｏｎｇ，Ｃｈｉ−Ｈｕｅｙ（編），第１５章，４０７〜４３３頁，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００３）。「フコイダン（ｆｕｃｏｉｄａｎ）という用語は代表的には、単独の化学物質ではなく低分子硫酸塩ポリマーの部分の多様な群をいう。フコイダンは主に、分枝または第二のスルホ基を３位置に有するα（１−３）結合単位の４−スルホ−Ｌ−フコースから構成される（Ｗｏｎｇ，同書）。渇藻および棘皮動物の種々の種由来のフコイダンは、その骨格におけるフコースの量、硫酸化の程度およびパターン、構造（直鎖および分枝）、および個々の糖類およびウロン酸の割合が異なる。本発明における使用に好ましいフコイダンは褐藻由来のものである。
【００５２】
本発明における使用のためのフコイダンは、抽出されても、さらに精製されても、そして／または天然の供給源（例えば、褐藻類）から改変されても、または新規に合成されてもよい。フコイダンは、熱水によって（ＰｅｒｃｉｖａｌおよびＲｏｓｓ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９５０，７１７〜７２０）、酸もしくはエタノール抽出によって、または酵素消化によって、続いて沈殿による水溶液からの単離（例えば、有機溶媒の添加による）または超遠心（例えば，Ｂｌａｃｋ，ＷＡＰら、ＩＶ Ｊ Ｓｃｉ Ｆｏｏｄ Ａｇｒｉｃ．１９５２；３：１２２〜１２９を参照のこと）によって、藻類から単離されてもよい。フコイダンはまた、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）、ＮａｔｕｒｏＤｏｃ ＬＬＣ（Ｋｉｎｇｍａｎ，ＡＺ）、Ｍａｒｉｎｏｖａ（Ｔａｚｍａｎｉａ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）およびＮａｔｕｒｅｚａ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，（Ｋａｗａｇｕｃｈｉ，Ｊ Ｐ）のような種々の供給業者から購入可能である。本発明における使用のために好ましいフコイダンは、Ｆｕｃｕｓ属由来またはＬａｍｉｎａｒｉａ属由来のフコイダンであるが、他の属由来のフコイダンも適切である。このようなフコイダンは、本明細書において、ＦｕｃｕｓフコイダンまたはＬａｍｉｎａｒｉａフコイダンと呼ばれる。本発明における使用のためのさらなるフコイダンとしては、とりわけ、Ｃｌａｄｏｓｉｐｈｏｎ、Ｎａｍａｃｙｓｔｕｓ、Ｕｎｄａｒｉａ、Ｃｈｏｒｄａｒｉａ、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ、Ｌｅａｔｈｅｓｉａ、Ｄｅｓｍａｒｅｓｔｉａ、Ｄｉｃｔｙｏｓｉｐｈｏｎ、Ｄｉｃｔｙｏｔａ、Ｐａｄｉｎａ、Ｓｐａｔｏｇｌｏｓｓｕｍ、Ａｄｅｎｏｃｙｓｔｉｓ、Ｐｙｌａｙｅｌｌａ、Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ、Ｂｉｆｕｒｃａｒｉａ、Ｈｉｍａｎｔｈａｌｉａ、Ｈｉｚｉｋｉａ、Ｐｅｌｖｅｔｉａ、Ａｌａｒｉａ、Ａｒｔｈｒｏｔｈａｍｎｕｓ、Ｃｈｏｒｄａ、Ｅｃｋｌｏｎｉａ、Ｅｉｓｅｎｉａ、Ｍａｃｒｏｃｙｓｔｉｓ、Ｎｅｒｅｏｃｙｓｔｉｓ、Ｐｅｔａｌｏｎｉａ、ＳｃｙｔｏｓｉｐｈｏｎおよびＳａｕｎｄｅｒｓｅｌｌａ由来のフコイダンが挙げられる。特に好ましいフコイダンは、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｉｓ由来、またはＬａｍｉｎａｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ由来である。
【００５３】
本明細書の方法および組成物における使用のためのフコイダンは代表的には、ただし必須ではないが、分子量、フコース含量、ウロン酸含量および硫酸塩含量において異なるフコイダンの異種混合物である。
【００５４】
フコイダンは、約２００ダルトン〜約５００，０００ダルトン、好ましくは約１，０００ダルトン〜約３００，０００ダルトンの平均分子量におよんでもよい。本発明における使用のためのフコイダンとしては、低分子重量フコイダン（約５００〜８，０００ダルトンの範囲の平均分子量を有する）、中分子重量フコイダン（約８，０００ダルトンより大きく〜１５，０００ダルトンの範囲の平均分子重量を有する）、および高分子重量フコイダン（１５，０００ダルトンより大きく〜約３００，０００ダルトンの平均分子重量を有する）が挙げられる。フコイダンの分子量は、例えば、ゲル浸透クロマトグラフィーまたは高速立体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｓｔｅｒｉｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）（ＨＰＳＥＣ）を用いて決定され得る。
【００５５】
フコイダンの種々の分子量画分は、キャピラリー電気泳動によって分離してもよい。あるいは、異なる分子量画分は、高分子量フコイダンの酸加水分解またはラジカル脱重合によって調製してもよい。得られた生成物の分子量範囲は、使用される加水分解または脱重合条件のストリンジェンシーに基づいて調節され得る。次いで、画分をイオン交換クロマトグラフィーを用いてさらに精製してもよい。例えば、フコイダンの中分子重量および低分子重量の画分を得るために、高分子重量のフコイダンを、ＨＣｌのような酸（または任意の他の適切な酸）を、０．０２〜１．５Ｍにおよぶ濃度で、２５℃〜８０℃におよぶ温度で用いて加水分解する。加水分解反応時間は代表的には、１５分〜数時間にまたがる。次いで、得られた加水分解された反応混合物を、塩基、例えば、水酸化ナトリウムの添加によって中和する。次いで、塩を、例えば、電気透析法によって除去し、そしてその加水分解産物を分析して、炭水化物分析のための従来の分析技術を用いて、平均分子重量、フコース含量、ウロン酸含量、および硫酸塩含量を決定する。あるいは、酵素方法を使用して、例えば、フカン・サルフェート・ヒドロラーゼ（ｆｕｃａｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｈｙｄｒｏｌａｓｅ）（フコシダーゼＥＣ３．２．１．４４）およびα−Ｌ−フコシダーゼＥＣ３．２．１．５１のようなグリコシダーゼを用いてフコイダンを分解してもよい。本発明における使用のためのフコイダンは、、使用される分離の程度に依存して、異種であっても同種であってもよい。例えば、Ｎａｒｄｅｌｌａ，Ａ．，ら、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓ １９９６；２８９：２０１〜２０８；Ｄｅｕｘ，Ｊ．Ｆ．ら、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ．２００２；２２：１６０４；Ｚｅｍａｎｉ，Ｆ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２００５；７０（８）：１１６７〜１１７５を参照のこと。
【００５６】
本発明における使用のためのフコイダンは代表的には、約５〜２５重量％のイオウ、好ましくは８〜２５重量％のイオウを有する。約５重量％を超えるイオウ重量、または１０重量％を超えさえするイオウ重量を有するフコイダンが特に好ましい。
【００５７】
フコースポリサッカライドの単糖成分上の任意の遊離ヒドロキシル基が、本発明の実施における使用のための硫酸化された高次の糖類（ジ−、トリ、オリゴ−またはポリ−）を生成するために硫酸化によって改変されてもよい。硫酸化は代表的には、ピリジンもしくはトリエチルアミンとの三酸化イオウ複合体を用いて、または第一スズ複合体で行われる（Ｃａｌｖｏ−Ａｓｉｎ，Ｊ．Ａ．，ら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ １，１９９７，１０７９）。例えば、フコイダンに関する１つ以上の二糖類を、フコシルドナーとして、例えば、３，４−ジ−Ｏ−アセチル化トリクロロアセトイミデートを用いて、２つの適切な単糖類前駆体の間でのαフコース結合の形成によって立体選択的に合成してもよい（例えば、Ｚｌｏｔｉｎａ，Ｎ．Ｓ．，ら、Ｌ．Ｈｉｒｓｚｆｅｌｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｐｏｌｉｓｈ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１回 Ｂａｌｔｉｃ Ｍｅｅｔｉｎｇ ｏｎ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ，２００４年１０月６〜９，Ｗｒｏｃｌａｗ，Ｐｏｌａｎｄ）。
【００５８】
（凝血アッセイ）
フコイダンが凝血を妨げる能力は、凝血（血餅、ｃｌｏｔ）ベースの試験、色素生産性または着色アッセイ、直接化学測定およびＥＬＩＳＡを含む、種々の十分確立された凝血アッセイを用いて容易に決定されるが、凝血ベースの試験が最も一般的である。これらとしては、ＰＴ（プロトロンビン時間）、ａＰＴＴ（活性化部分トロンボプラスチン時間）、ＡＣＴ（活性化凝血時間）、およびＴＣＴ（トロンビン凝血時間）が挙げられる。例えば、Ｂａｔｅｓ，Ｓ．Ｍ．ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００５；１１２：ｅ５３〜６０；ＰＤＲ Ｓｔａｆｆ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ．２００４，Ａｎｄｅｒｓｏｎら（１９７６）Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．９：５７５〜５８０；Ｎｏｒｄｆａｎｇら（１９９１）Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ．６６：４６４〜４６７；Ｗｅｌｓｃｈら（１９９１）Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６４：２１３〜２２２；Ｂｒｏｚｅら（２００１）Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ８５：７４７〜７４８；Ｓｃａｌｌａｎら（２００３）Ｂｌｏｏｄ．１０２：２０３１〜２０３７；Ｐｉｊｎａｐｐｅｌｓら（１９８６）Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．５５：７０〜７３；およびＧｉｌｅｓら（１９８２）Ｂｌｏｏｄ ６０：７２７〜７３０を参照のこと。
【００５９】
プロトロンビン時間（ＰＴ）。この試験は、組織因子（これは組み換え由来であっても、または脳、肺もしくは胎盤の抽出物由来であってもよい）およびカルシウムを含むトロンボプラスチン試薬を血漿に添加すること、ならびに凝血時間を測定することによって行われる。プロトロンビン時間（ＰＴ）は、試薬および凝血試験因子で異なるが、代表的には１０〜１４秒におよぶ（Ｗｈｉｔｅ，Ｇ Ｃ ＩＩ，ら、Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｈｅ Ｂｌｅｅｄｉｎｇ Ｐａｔｉｅｎｔ．ＩｎＬ Ｃｏｌｍａｎ，Ｒ Ｗ，ら編集、Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ：Ｂａｓｉｃ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ．第３版．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ：Ｊ Ｂ Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．，１９９４：１１３４〜１１４７）。このＰＴは、第ＶＩＩ、ＸおよびＶ因子、プロトロンビン、またはフィブリノーゲンの欠損、およびこれらの因子に対する抗体によって長くなる。この試験はまた、高用量のヘパリンおよびフィブリン分解産物の存在を含む、フィブリノーゲンからフィブリンへの変換反応のインヒビターを有する患者では異常である。代表的には、ＰＴ試薬は、過剰のリン脂質を含み、その結果陰イオン性リン脂質と反応する非特異的なインヒビター（すなわち、ループス性抗凝固因子）は、凝血時間を長引かせない。
【００６０】
活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＰＴ）。ａＰＰＴは、最初に表面活性剤（ｓｕｒｆａｃｅ ａｃｔｉｖａｔｏｒ）（例えば、カオリン、セライト、エラグ酸、またはシリカ）および希釈リン脂質（例えば、セファリン）をクエン酸加血漿に添加することによって行う。このアッセイにおけるリン脂質は、組織因子が存在しないので部分的トロンボプラスチンと呼ばれる。補因子（第ＸＩＩ因子、第ＸＩ因子、プレカリクレイン、および高分子重量キニノーゲン）の任意の活性化を可能にするインキュベーション後、次にカルシウムを添加し、そして凝血時間を測定する。凝血時間は、用いられる試薬および凝固測定因子に応じて変化するが、ａＰＰＴは代表的には、２２〜４０秒の間におよぶ（Ｂａｔｅｓ，ら、同書）。ａＰＰＴは、接触因子；第ＩＸ因子、第ＶＩＩＩ因子、第Ｘ因子または第Ｖ因子；プロトロンビン；またはフィブリノーゲンの欠損によって延長され得る。特異的な因子インヒビター、および非特異的なインヒビターも、ａＰＴＴを延長し得る。フィブリン分解産物および抗凝血剤もａＰＴＴを延長する。
【００６１】
トロンビン凝血時間（ＴＣＴ）。ＴＣＴは血漿へ過剰のトロンビンを添加することによって行う。このＴＣＴは、低フィブリノーゲンレベルまたは異常フィブリノーゲン血症を有する患者で、およびフィブリン分解産物レベルが上昇した患者で延長される。これらの異常は、播種性血管内凝固症候群で共通してみられる。
【００６２】
活性化凝血時間（ＡＣＴ）。このＡＣＴは、高用量ヘパリン療法またはビバリルジンでの処置をモニターするために代表的に用いられる、治療時点での全血凝固試験である。代表的には、全血を、凝血活性化因子（例えば、セライト、カオリン、またはガラス粒子）、および磁気攪拌バーを含む試験管またはカートリッジ中に収集し、次いで血液が凝固するのにかかる時間を測定する。ＡＣＴの参照値は、７０〜１８０秒におよぶ。抗凝血の所望の範囲は、用いられる指標および試験方法に依存する。
【００６３】
このような凝血アッセイ、または上記で簡略に記載された他の適切なアッセイは、１つ以上のフコイダン、および要に応じて１つ以上の血液因子、抗凝固剤、または他の試薬の存在において行い、そしてその値を、処置前後と比較して、血液凝固時間の延長の程度を決定してもよい。
【００６４】
本発明の方法および組成物において用いられるフコイダンは、抗凝血活性を示す濃度より有意に低い濃度でのみ示され得るなんらかの凝固促進活性が出現する。このような凝固促進活性はさらに、代表的には、本発明における場合と同様、単回用量後ではなく数日間の投与後に示される。所望の抗凝固活性が生じる濃度に対する、所望されない凝固促進特性が生じる濃度の割合は、被験体の治療フコイダンについての治療係数と呼ばれる。
【００６５】
本発明のフコイダン組成物は代表的には、治療範囲と呼ばれる、約１．５〜２．５の規定の範囲内で平均コントロールａＰＴＴに対する患者のａＰＴＴの割合を維持するのに十分な量で被験体に投与される。
【００６６】
（薬学的組成物および剤形）
必要に応じて、本発明のフコイダン組成物はさらに、薬学的組成物を得るために１つ以上の薬学的に受容可能な賦形剤を含んでもよい。好ましくは、このフコイダン含有組成物は、フコイダン自体を除く藻類成分を本質的に含まない。例示的な賦形剤としては、限定はしないが、炭水化物、無機塩、抗菌剤、抗酸化剤、サーファクタント、緩衝液、酸、塩基およびそれらの組み合わせが挙げられる。注射組成物に適切な賦形剤としては、水、アルコール、ポリオール、グリセリン、植物油、リン脂質およびサーファクタントが挙げられる。炭水化物、例えば、糖、誘導体化糖、例えば、アルジトール、アルドン酸、エステル化された糖、および／または糖ポリマーが賦形剤として存在し得る。特定の炭水化物賦形剤としては、例えば以下が挙げられる：単糖類、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなど；二糖類、例えば、ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなど；ポリサッカライド、例えば、ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなど；ならびにアルジトール、例えば、マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ピラノシルソルビトール、ミオイノシトールなど。賦形剤としてはまた、無機の塩または緩衝液、例えば、クエン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硝酸カリウム、リン酸ナトリウム、一塩基、二塩基のリン酸ナトリウム、およびそれらの組み合わせを挙ることができる。
【００６７】
本発明の組成物としてはまた、微生物の増殖を予防または妨げるための抗菌剤を挙ることができる。本発明に適切な抗菌剤の非限定的な例としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、チメロサールおよびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００６８】
抗酸化剤も同様にこの組成物中に存在してもよい。抗酸化剤は、酸化を妨げて、それによってフコイダンまたは調製物の他の成分の悪化を予防するために用いられる。本発明における使用のための適切な抗酸化剤としては、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化合物ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、亜硫酸水素ナトリウム、ホルムアルデヒド・スルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウムおよびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００６９】
サーファクタントは、賦形剤として存在してもよい。例示的なサーファクタントとしては、以下が挙げられる：ポリソルベート、例えば「「Ｔｗｅｅｎ ２０」および「Ｔｗｅｅｎ ８０」、ならびにプルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）、例えば、Ｆ６８およびＦ８８（ＢＡＳＦ，Ｍｏｕｎｔ Ｏｌｉｖｅ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）；ソルビタンエステル；脂質、例えば、リン脂質、例えば、レシチンおよび他のホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン（ただし、好ましくはリポソーム形態ではない）、脂肪酸および脂肪酸エステル；ステロイド、例えば、コレステロール；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；ならびに亜鉛および他のこのような適切な陽イオン。
【００７０】
酸および塩基は、組成物における賦形剤として存在してもよい。用いられ得る酸の非限定的な例としては、塩酸、酢酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、硝酸、過塩素酸、リン酸、硫酸、フマル酸、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される酸が挙げられる。適切な塩基の例としては、限定はしないが、水酸化ナトリウム、酢酸ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、酢酸アンモニウム、酢酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、フマル酸カリウム、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される塩基が挙げられる。
【００７１】
組成物中のフコイダンの量は、多数の要因に依存して変化するが、この組成物が単位剤形（例えば、錠剤、カプセルなど）または容器（例えば、バイアル）中にある場合、最適には治療上有効な用量である。治療上有効な用量は、臨床的に所望されるエンドポイント（この場合、血液凝固時間の延長によって測定した、血液凝固の予防）を得るのに有効な最適量を決定するために、この組成物の漸増量の反復投与によって経験的に決定され得る。
【００７２】
この組成物における任意の個々の賦形剤の量は、この賦形剤の性質および機能、ならびにこの組成物の特定の必要性に依存して変化する。代表的には、任意の個々の賦形剤の最適の量は、慣用的な実験を通じて、すなわち、種々の量の賦形剤（低から高におよぶ）を含有する組成物を調製すること、この組成物の安定性および他のパラメーターを検討すること、次いで重大な有害な影響なしに最適能力が得られる範囲を決定することによって決定される。しかし、一般には、この賦形剤は、約１％〜約９９重量％、好ましくは約５％〜約９８重量％、さらに好ましくは約１５〜約９５重量％の賦形剤という量で、最も好ましくは３０重量％未満の濃度で組成物中に存在する。これらの前述の薬学的賦形剤は、他の賦形剤とともに、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」、第１９版，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５），ｔｈｅ「Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」、第５２版，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．（１９９８），ａｎｄ Ｋｉｂｂｅ，Ａ．Ｈ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，第３版，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，２０００に記載される。
【００７３】
この組成物は、全てのタイプの処方物を包含し、これは経口投与に適切な処方物、および非経口処方物を包含する。１つの特に好ましい処方物は、経口投与に適切な処方物である。経口投与形態としては、粉末、錠剤、トローチ剤（ｌｏｚｅｎｇｅｓ）、カプセル、シロップ、溶液（液体）、経口懸濁液、エマルジョン、顆粒およびペレットが挙げられる。別の処方物としては、エアロゾル、経皮パッチ、ゲル、クリーム、軟膏、スプレー、坐剤、粉末または再構成され得る凍結乾燥剤、および液体が挙げられる。例えば、注射前に、固体組成物を再構成するための適切な希釈剤の例としては、注射用静菌性水、デキストロース５％を含有する水、リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル溶液、生理食塩水、滅菌水、脱イオン水およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００７４】
局所的な処方物は、皮膚または他の罹患領域を通じた成分の吸収または浸透を増強する化合物、例えば、いくつか例を挙げれば、ジメチルスルホキシデン・ビサボロール（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅｍ ｂｉｓａｂｏｌｏｌ）、オレイン酸、イソプロピル・ミリステートおよびＤ−リモネンをさらに含んでもよい。
【００７５】
非経口投与に適切な処方物としては、注射に適切な水性および非水性の等張性滅菌水溶液、ならびに水性および非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。非経口処方物は必要に応じて、単位用量または複数用量の密閉された容器、例えば、アンプルおよびバイアル中に含まれ、そして使用の直前に滅菌の液体キャリア、例えば、注射用水の添加しか要さない凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））状態で保管されてもよい。即時用の注射用液および懸濁液は、前に記載されたタイプの滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製されてもよい。
【００７６】
本発明のフコイダン処方物はまた、フコイダンおよび必要に応じて他の薬物成分が、非徐放性の処方物に比較した場合、経時的に緩徐に放出されるかまたは吸収されるように、徐放性の処方物の形態であってもよい。徐放性処方物は、活性薬剤のプロドラッグ形態、遅延型薬物送達システム、例えば、リポソームまたはポリマーマトリックス、ヒドロゲル、またはポリエチレングリコールのようなポリマーの共有結合を使用してもよい。
【００７７】
特に上述される成分に加えて、本発明の処方物は、必要に応じて、薬学の分野で慣習的な他の薬剤、および例えば、経口投与形態のために使用されている特定のタイプの処方物を含んでもよく、経口投与のための組成物はまた、甘味料、増粘剤または香味料のようなさらなる薬剤を含んでもよい。
【００７８】
本発明の方法はまた、獣医の適用において有用である。
【００７９】
本発明はさらに、例えば、血液凝固の軽減の必要性のある哺乳動物被験体の処置のためのキットを包含する。このキットは、フコイダンを、パッケージされた形態で、好ましくは経口投与のために、使用の説明書とともに含む。例えば、このキットは、血液凝固の軽減の必要な患者に対してフコイダンの推奨投薬量を投与するため（すなわち、血栓形成を妨げるため）の説明書を備える。この説明書は好ましくは、血液凝固の軽減を果たすため、毎日この組成物のフコイダン成分として１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇを経口投与することを推奨する。フコイダンは、パッケージングが、投与のための説明書とともに考慮される場合、薬物（すなわち、フコイダン）成分が投与されるべき方法を明らかに示している限り、投与に適切ないずれの方式でパッケージされてもよい。例えば、フコイダンがカプセルの形態であるならば、このキットは、カプセルの密閉容器、カプセルを含むブリスターストリップ、などを備えてもよい。パッケージングは、医薬品のパッケージングに通常使用されるいずれの形態であってもよく、そして異なる色、ラッピング、不正開封防止パッケージング、ブリスターパックまたはストリップ、デシカント（ｄｅｓｓｉｃａｎｔｓ）などのような任意の多数の形状を利用してもよい。
【００８０】
（投与）
本明細書に提供されるようなフコイダン組成物での処置の少なくとも１つの治療上有効なサイクルが、この被験体に投与される。「処置の治療上有効なサイクル（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｙｃｌｅ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、投与された場合、血栓性の障害について個体の処置に関する正の治療応答をもたらす、処置のサイクルを意味する。特に目的とするのは、血液が凝固する傾向を減弱する（すなわち、血液凝固の形成を予防する）フコイダン組成物での処置のサイクルである。このような正の治療応答は、所望の応答を得るために上記の凝固アッセイのうちの１つ以上によって測定され得る。「正の治療応答（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」とは、本発明に従う処置を受けている個体が、被験体の血栓性の状態または障害の１つ以上の症状の改善であって、血液凝固時間の延長および出血の改善のような改善を含む改善を示すということである。
【００８１】
例えば、市販のトロンボプラスチンは、その組織因子供給源および調製方法が変化するので、報告されるＰＴ時間は、使用される試薬に依存して変化し得る。ＩＮＲと呼ばれるパラメーターは、ＰＴの結果における相違を補正するためにＷｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（ＷＨＯ）によって開発された。ＩＮＲは、平均の正常なＰＴ値で割った患者のＰＴとして規定され、これは、標準に対して比較した各々のトロンボプラスチン試薬の応答性を記載する国際感度指数（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ）を用いて算出され得る（Ｂａｔｅｓ，Ｓ．Ｍ．，ら、同書）。種々の指標におけるＩＮＲについての最適の治療範囲は、以下のとおりであり、そして本発明のフコイダン組成物を投与する場合処置の経過をモニターするために用いられ得る：静脈血栓塞栓症、予防および処置（２．０−３．０）、心房細動（２．０−３．０）、心臓弁膜症（２．０−３．０）、心臓弁（ｈｅａｒｔ ｖａｌｖｅｓ）−生体弁（ｔｉｓｓｕｅ ｖａｌｖｅｓ）、機械弁、二葉大動脈位置（ｂｉｌｅａｆｌｅｔ ａｏｒｔｉｃ ｐｏｓｉｔｉｏｎ）（２．０−３．０）、心臓弁、機械的（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ），高リスク弁（ｈｉｇｈ ｒｉｓｋ ｖａｌｖｅ）（２．５−３．５）、急性心筋梗塞−塞栓症の予防（２．０−３．０）、急性心筋梗塞−再梗塞の予防（３．５−４．５）。本発明の１つの特定の実施形態では、本発明のフコイダン組成物は、被験体のａＰＴＴにおいて５０％より大きい改善を生じるのに有効な量で投与される。好ましくは、本発明の方法および組成物は、被験体のａＰＴＴにおいて少なくとも２倍以上の延長を生じるのに有効である。本発明の方法および組成物は、約１〜１０というＩＮＲ範囲を得るのに理想的に有効である。
【００８２】
特定の実施形態では、本発明のフコイダン組成物の複数の治療上有効な用量であって、必要に応じて、１つ以上の他の治療剤、例えば、第ＶＩＩａ因子、ワルファリン、トロンビンインヒビター、低分子量ヘパリンおよびヘパリン、または他の医薬を含む用量が投与される。本発明の組成物は代表的には、ただし必須ではないが、経口投与され、しかし、注射（皮下、静脈内、または筋肉内）、インフュージョンおよび局所投与も考慮される。投与のさらなる形態、例えば、肺、直腸、経皮、経粘膜、クモ膜下腔内、心臓周囲、動脈内、脳内、眼内、腹腔内なども考慮される。
【００８３】
特定の実施形態では、本発明のフコイダン組成物は、局所送達のために、例えば、血餅の直接処置のために用いられる。例えば、フコイダンは、凝血（血餅）の部位で注射によって投与され得る。投与の特定の調製物および適切な方法は、この被験体の特定の状態に基づいて選択される。
【００８４】
別の実施形態では、本発明の薬学的組成物は、予防的に、例えば、計画的な手術の前後に投与される。このような予防的な使用は、公知の既存の血液凝固障害を有する被験体に特に有益である。
【００８５】
本発明の別の実施形態では、フコイダンおよび／または他の薬剤を含む薬学的組成物は、徐放性処方物中であるか、または徐放性システムを用いて投与される処方物である。このようなデバイスは当該分野で周知であり、これには、例えば、経皮パッチ、および連続して、定常方式で種々の用量を経時的な薬物送達を提供して徐放性でない薬物組成物で徐放性の効果を得ることができる超小型の移植可能なポンプが挙げられる。
【００８６】
投与の方法を用いて、抗凝血治療の必要性を伴う任意の状態を処置する。このような状態としては、血栓性状態、たとえば、深部静脈血栓、肺塞栓症、心筋梗塞、播種性血管内凝固症候群、不安定狭心症、および第ＶＩＩａ処理によって誘発される凝固促進または血栓症が挙げられる。
【００８７】
当業者は、上記のような状態を、本発明の特異的なフコイダン組成物が効率的に処置し得るということを理解する。投与されるべき正確な用量は、被験体の年齢、体重および全身状態、ならびに処置されている状態の重篤度、保健医療の専門家の判定、および投与されている特定のフコイダンに依存して変化する。治療上有効な量は、当業者によって決定され得、そして各々の特定の場合の特定の要件について調節される。
【００８８】
一般には、治療上有効な量は、毎日約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇのフコイダイン、より好ましくは毎日約２ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは毎日約５ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲である。好ましくは、このような用量は、１日４回（ＱＩＤ）０．２５〜１２ｍｇ／ｋｇ、０．５〜１０ｍｇ／ｋｇのＱＩＤ、１．２５〜７．５ｍｇ／ｋｇのＱＩＤ、０．３〜１７ｍｇ／ｋｇの１日３回（ＴＩＤ）、０．６〜１３ｍｇ／ｋｇのＴＩＤ、１．５〜１０ｍｇ／ｋｇのＴＩＤ、０．０５〜２５ｍｇ／ｋｇの１日２回（ＢＩＤ）、１〜２０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ、または２．５〜１５ｍｇ／ｋｇのＢＩＤという範囲である。一日投薬総量は一般に、被験体の体重、被験体の年齢、処置されている状態、組成物に含まれる特定のフコイダンの力価、所望される抗凝血効果の大きさおよび投与の特定の経路のようないくつかの要因に依存して、約５０ｍｇのフコイダン〜約４５００ｍｇのフコイダンにおよぶ。
【００８９】
本明細書に記載されるフコイダン組成物は、単独でもしくは組み合わせて、または他の治療剤とともに投与して、臨床家の判定、患者の要件などに依存する種々の投薬スケジュールに従って特定の状態または疾患を処置してもよい。特定の投薬スケジュールは当業者によって容易に決定されるか、または慣用的な方法を用いて実験的に決定されてもよい。例示的な投与スケジュールとしては、限定はしないが、１日５回、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、毎週３回、毎週２回、毎週１回、毎月２回、毎月１回、そしてそれらの任意の組み合わせの被験フコイダン組成物の投与が挙げられる。最も好ましいのは、１日１回以下の投薬を要する組成物である。
【００９０】
（適用）
１局面では、本発明のフコイダン組成物は、血栓性障害を処置するために用いられる。本発明の組成物は、血液凝固の軽減の必要な被験体に投与される。処置または予防されるべき状態としては、静脈血栓塞栓症、深部静脈血栓、肺塞栓症、冠動脈疾患（冠状動脈血栓症、冠動脈再建術）、不安定狭心症または急性心筋梗塞、冠動脈血栓溶解、心房細動、(心)発作、播種性血管内凝固症候群、および第ＶＩＩａ因子処置によって誘発される凝固促進または血栓症が挙げられる。本発明の組成物また、一般外科手術を受けている患者、大きい整形外科手術を受けている、股関節（腰部）骨折を被っている、または神経外科手術を受けている患者における血栓を予防するために投与されてもよい。本発明の組成物はまた、例えば、下肢での血餅予防のための圧迫ストッキングの使用と同時に投与されてもよい。
【００９１】
本発明はまた、被験体での凝血促進剤の使用の影響を逆転させるための方法であって、被験体に対して治療上有効な量のフコイダン組成物を投与する工程を包含する。
【００９２】
特定の実施形態では、この被験体は、限定はしないが、トロンビン；第Ｘａ因子、第ＩＸａ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子および第ＶＩＩａ因子を含む内因性凝固経路の活性化因子、プレカリクレイン、ならびに高分子量キニノーゲン；または組織因子、第ＶＩＩａ因子、第Ｖａ因子および第Ｘａ因子を含む外因性凝固経路の活性化因子を含む、凝固促進因子で以前に処置されていてもよい。
【００９３】
さらに、本発明のフコイダン組成物は、ステントおよび他の血液接触医学デバイス、例えば、血液装置の相互作用から局所凝血を軽減するための、人工心肺のための膜型人工肺または機械的心臓弁のためのコーティングとして用いられてもよい。本発明のフコイダン組成物は、血液接触デバイスに対するコーティングとして、１層または多層で、直接適用されてもよい。このようなデバイスは、「フコイダン化された（ｆｕｃｏｉｄａｎｉｚｅｄ）」と言われる。あるいは、このフコイダン組成物は、１つ以上のさらなる血液適合性のポリマー、例えば、ヒト血清アルブミン、ホスホリルコリン、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、ポリエチレングリコール、ポリプロピレン−オキシド−ポリエチレングリコールブロックコポリマー（ＰＰＯ−ＰＥＧ）、ホスファゼンポリマーなどと組み合わせて適用されてもよい。フコイダンはまた、カップリング剤、例えば、グルタルアルデヒド、１，１−カルボニルジイミダゾール、または任意の他の適切なカップリング剤を用いるポリマーコーティングに対する共有結合によってデバイスの表面に遊離可能に固定されてもよい。このようなカップリング剤は当該分野で周知である。例えば、Ｗｏｎｇ，Ｓ．Ｓ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９１を参照のこと。
【００９４】
本発明は、好ましい特異的な実施形態と組み合わせて記載されているが、前述の記載および以下の実施例は、本発明の範囲を例示するものであり限定はしないものであることが理解されるべきである。本発明の範囲内の他の局面、利点および改変は、本発明が属する当該分野の当業者には明白になる。
【実施例】
【００９５】
本発明の実施は、他に示さない限り、当該分野の技術の範囲内である、薬学的処方物、分離、薬理学などの従来の技術を使用する。このような技術は、文献中で詳細に説明される。例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｓ．Ｋ．Ｎｉａｚｉ（編），ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，２００４；Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第９版、Ｈａｒｄｍａｎ，Ｊ．Ｇ．，Ｇｉｌｍａｎ，Ａ．Ｇ．，Ｌｉｍｂｉｒｄ，Ｌ．Ｅ．（編）、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９５；Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、第１８版、Ｋａｔｚｕｎｇ，Ｂ．Ｇ．（編）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＮ，２００１を参照のこと。
【００９６】
以下の実施例では、用いられる数値（例えば、量、温度など）に関して正確性を保障するために労力が払われているが、ある程度の実験誤差および偏差があり得る。以下の実施例の各々は、本明細書に記載される実施形態の１つ以上を行うために当業者に有益であるとみなされる。
【００９７】
材料および方法
試薬
フコイダンは、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。
【００９８】
動物
健康なビーグル犬を、Ｃｏｖａｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓコロニーから入手した。全ての動物手順は、「Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ」（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ．Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｒｅ ａｎｄ ｕｓｅ ｏｆ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｉｍａｌｓ．Ｗａｓｈｉｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ；１９９６）に従って行い、そして全ての手順は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって再検討され、承認された。
【００９９】
凝固（凝血）アッセイ
活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイ
このａＰＴＴアッセイは、Ｌｉｕ，Ｔら、およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｋ．Ｗ．、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，９５：６８〜７６，２００６に記載のとおり行った。
【０１００】
希釈プロトロンビン時間（ｄＰＴ）アッセイ
ｄＰＴアッセイは、Ｌｉｕ，ＴらおよびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｋ．Ｗ．、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，９５：６８〜７６，２００６に記載のとおり行った。
【０１０１】
実施例１
健常なビーグル犬に対する投与の際のフコイダンの抗凝血活性のインビボ評価
以下の研究を行なって、臨床に基づく凝固アッセイを用いてビーグル犬における例示的なフコイダン組成物の経口の抗凝固活性を試験する。ａＰＴＴおよびｄＰＴアッセイの両方とも、本研究の間に複数の時点でとった血漿サンプルで行った。
【０１０２】
３頭の正常なビーグル犬をこの研究に用いた。各々の動物は、ゼラチンカプセル（サイズ「０」）中の粉末として送達される１回の単独フコイダン経口投与（２０ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇ）を投与され、ここで投与の間には１週のウオッシュアウト期間があった。
【０１０３】
臨床的な観察は、フコイダン投与の７時間後まで行った。血漿サンプルは、フコイダン投与の前、１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、４時間後および７時間後に収集した（滴定した全血、血漿単離）。血漿サンプルを試験の前−２０℃で保管した。
【０１０４】
アッセイ結果（二連）は、下の犬の１〜３番の各々について得る。
【０１０５】
表１
２０ｍｇ／ｋｇの経口投薬量についてのａＰＴＴアッセイ結果
【０１０６】
【表１】
表２
５ｍｇ／ｋｇの経口投薬量についてのａＰＴＴアッセイ結果
【０１０７】
【表２】
表３
２０ｍｇ／ｋｇの経口投薬量についてのｄＰＴアッセイ結果
【０１０８】
【表３】
表４
５ｍｇ／ｋｇの経口投薬量についてのｄＰＴアッセイ結果
【０１０９】
【表４】
２０ｍｇ／ｋｇのフコイダンの経口用量での３頭の正常なイヌの各々についてのａＰＰＴ分析の結果を図１に示す。
【０１１０】
血漿凝血アッセイの結果によって、経口投与されたフコイダンが、動物およびヒトの使用のための安全かつ有効な経口抗凝血剤である能力を有することが明らかになった。詳細には、正常なビーグル犬に対して経口的に投与されたフコイダンは、血漿抗凝血の最も一般に利用される臨床測定値であるＡＰＴＴにおける実質的な（＞５０％）増大によって検出されるとおり３頭のイヌの各々で用量依存性の抗凝血活性を示した。表１における結果を参照すれば、２０ｍｇ／ｋｇという例示的なフコイダン組成物の経口投与が、３頭のイヌの各々における血漿凝血時間を、投与後約１時間〜７時間におよぶ時間内で投与前値を約５〜９倍を超えて延長するのに有効であったことが理解され得る。１番および２番のイヌについては、血漿凝血時間の有意な増大（すなわち、最初の投与前値の約６倍〜９倍を超える）が、投与後約０．５時間から１時間内で観察された。さらに、１番および２番のイヌについては、血漿凝血時間は、投与後数時間内に本質的に投与前値に戻り、このことは、ワルファリンのような薬物に比較した場合、数日間におよぶ作用期間の延長を有する出血の傾向の低下を示している。出願人らはまた、５ｍｇ／ｋｇのｐ．ｏ．（経口）で延長の傾向を観察した。
【０１１１】
経口のフコイダンは、試験された用量では、希釈プロトロンビン時間（ｄｉｌｕｔｅ ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ ｔｉｍｅ）（ｄＰＴ）凝固を実質的に（＞５０％）延長しなかった。理論によって束縛されることはないが、このような結果は、外因性経路による凝血開始のための「スパーク（ｓｐａｒｋ）」に対する限られた影響を反映すると解釈され得る。
【０１１２】
上で言及されるように、正常なビーグル犬における経口フコイダンの抗凝血作用の期間は数時間であり、従って、ワルファリンのような抗凝血剤に比較した場合のその安全能の増大を反映している。
【０１１３】
本発明の好ましい実施形態は、図示および記載されているが、種々の変化が、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなくここで行なわれ得ることが理解される。
【図面の簡単な説明】
【０１１４】
【図１】図１は、実施例１に記載のような２０ｍｇ／ｋｇのフコダインの経口投与後の正常なビーグル犬において７時間の経過にわたる血漿凝固時間（秒）を実証するプロットである。血漿凝固時間は、ａＰＰＴアッセイを用いて決定した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液凝固を軽減するために哺乳動物被験体に経口的に投与されるべき医薬の調製における１つ以上のフコイダンを含む組成物の使用。
【請求項２】
前記組成物が５〜２５重量パーセントのイオウを含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記１つ以上のフコイダンが藻類のフコイダンである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記１つ以上のフコイダンがＦｕｃｕｓ属またはＬａｍｉｎａｒｉａ属由来である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
前記１つ以上のフコイダンがＦｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｉｓ由来またはＬａｍｉｎａｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ由来である、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記投与が、前記被験体の活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）において５０％を超える増大を生じるのに有効である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
前記哺乳動物被験体が動物である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
前記哺乳動物被験体がヒトである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記組成物が、体重１ｋｇあたり約１ｍｇのフコイダン〜体重１ｋｇあたり約５０ｍｇのフコイダンの範囲におよぶ１日投与量で投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記組成物が、前記１つ以上のフコイダン以外に藻類の成分を本質的に含まない、請求項３〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記投与工程が、体重１ｋｇあたり約１ｍｇのフコイダン〜体重１ｋｇあたり約５０ｍｇのフコイダンの初回投与量で前記組成物を投与する工程を包含し、該初回用量が、（ｉ）該投与の１時間以内に前記被験体のＡＰＴＴにおいて５０％より大きい増大を生じ、そして（ｉｉ）投与後少なくとも約８時間、該被験体において測定可能な抗凝固作用を生じるのに有効である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
前記組成物が、毎日、約５０ｍｇのフコイダン〜約４５００ｍｇのフコイダンの範囲におよぶ１日投与量でヒト被験体に投与される、請求項８に記載の使用。
【請求項１３】
前記組成物が粉末、錠剤、カプセル、懸濁液または液体形態である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
前記被験体が、血栓性の障害を保有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
前記被験体が、深部静脈血栓、肺塞栓症、心筋梗塞、播種性血管内凝固症候群、不安定狭心症、および第ＶＩＩａ因子処置によって誘発される凝固促進または血栓症から選択される状態を保有する、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
血液凝固を軽減する必要性の理由が、手術または別の侵襲的手順の前後である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
治療上有効な量の１つ以上のフコイダンを含む組成物を被験体に経口的に投与する工程を含む、血液凝固の軽減の必要性のある哺乳動物被験体を処置するための方法。
【請求項１８】
経口投与のための組成物であって：
１つ以上のフコイダンと、
薬学的に受容可能な賦形剤と、を含み；該組成物は、該１つ以上のフコイダン以外に藻類成分を本質的に含まず、かつ粉末、錠剤、カプセル、懸濁液または液体形態である、組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、５〜２５重量パーセントのイオウを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記１つ以上のフコイダンが藻類のフコイダンである、請求項１８または１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記１つ以上のフコイダンがＦｕｃｕｓ属またはＬａｍｉｎａｒｉａ属由来である、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記１つ以上のフコイダンがＦｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｉｓ由来またはＬａｍｉｎａｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ由来である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
キットであって：
パッケージ形態の請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の組成物と、哺乳動物被験体において血液凝固の軽減を果たすために該１つ以上のフコイダンの１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇを毎日経口投与するための説明書と、を備える、キット。
【請求項２４】
血液と接触する、１つ以上のフコイダンでコーティングされた医学デバイス。
【請求項１】
血液凝固を軽減するために哺乳動物被験体に経口的に投与されるべき医薬の調製における１つ以上のフコイダンを含む組成物の使用。
【請求項２】
前記組成物が５〜２５重量パーセントのイオウを含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記１つ以上のフコイダンが藻類のフコイダンである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記１つ以上のフコイダンがＦｕｃｕｓ属またはＬａｍｉｎａｒｉａ属由来である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
前記１つ以上のフコイダンがＦｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｉｓ由来またはＬａｍｉｎａｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ由来である、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記投与が、前記被験体の活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）において５０％を超える増大を生じるのに有効である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
前記哺乳動物被験体が動物である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
前記哺乳動物被験体がヒトである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記組成物が、体重１ｋｇあたり約１ｍｇのフコイダン〜体重１ｋｇあたり約５０ｍｇのフコイダンの範囲におよぶ１日投与量で投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記組成物が、前記１つ以上のフコイダン以外に藻類の成分を本質的に含まない、請求項３〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記投与工程が、体重１ｋｇあたり約１ｍｇのフコイダン〜体重１ｋｇあたり約５０ｍｇのフコイダンの初回投与量で前記組成物を投与する工程を包含し、該初回用量が、（ｉ）該投与の１時間以内に前記被験体のＡＰＴＴにおいて５０％より大きい増大を生じ、そして（ｉｉ）投与後少なくとも約８時間、該被験体において測定可能な抗凝固作用を生じるのに有効である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
前記組成物が、毎日、約５０ｍｇのフコイダン〜約４５００ｍｇのフコイダンの範囲におよぶ１日投与量でヒト被験体に投与される、請求項８に記載の使用。
【請求項１３】
前記組成物が粉末、錠剤、カプセル、懸濁液または液体形態である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
前記被験体が、血栓性の障害を保有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
前記被験体が、深部静脈血栓、肺塞栓症、心筋梗塞、播種性血管内凝固症候群、不安定狭心症、および第ＶＩＩａ因子処置によって誘発される凝固促進または血栓症から選択される状態を保有する、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
血液凝固を軽減する必要性の理由が、手術または別の侵襲的手順の前後である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
治療上有効な量の１つ以上のフコイダンを含む組成物を被験体に経口的に投与する工程を含む、血液凝固の軽減の必要性のある哺乳動物被験体を処置するための方法。
【請求項１８】
経口投与のための組成物であって：
１つ以上のフコイダンと、
薬学的に受容可能な賦形剤と、を含み；該組成物は、該１つ以上のフコイダン以外に藻類成分を本質的に含まず、かつ粉末、錠剤、カプセル、懸濁液または液体形態である、組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、５〜２５重量パーセントのイオウを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記１つ以上のフコイダンが藻類のフコイダンである、請求項１８または１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記１つ以上のフコイダンがＦｕｃｕｓ属またはＬａｍｉｎａｒｉａ属由来である、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記１つ以上のフコイダンがＦｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｉｓ由来またはＬａｍｉｎａｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ由来である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
キットであって：
パッケージ形態の請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の組成物と、哺乳動物被験体において血液凝固の軽減を果たすために該１つ以上のフコイダンの１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇを毎日経口投与するための説明書と、を備える、キット。
【請求項２４】
血液と接触する、１つ以上のフコイダンでコーティングされた医学デバイス。
【図１】
【公表番号】特表２００９−５３５３４１（Ｐ２００９−５３５３４１Ａ）
【公表日】平成２１年１０月１日（２００９．１０．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５０７７９８（Ｐ２００９−５０７７９８）
【出願日】平成１９年４月２４日（２００７．４．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０１０１２６
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１２７２９８
【国際公開日】平成１９年１１月８日（２００７．１１．８）
【出願人】（５００５４４２００）アビジェン， インコーポレイテッド (14)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１０月１日（２００９．１０．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年４月２４日（２００７．４．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０１０１２６
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１２７２９８
【国際公開日】平成１９年１１月８日（２００７．１１．８）
【出願人】（５００５４４２００）アビジェン， インコーポレイテッド (14)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]