血液凝固抑制剤
【課題】 カバノアナタケが有する薬理作用の解明に基づく、その新規な医薬用途を提供すること。
【解決手段】 カバノアナタケまたはそのエキスを有効成分としてなることを特徴とする血液凝固抑制剤である。
【解決手段】 カバノアナタケまたはそのエキスを有効成分としてなることを特徴とする血液凝固抑制剤である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カバノアナタケの新規な医薬用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
カバノアナタケ（Ｆｕｓｃｏｐｏｒｉａ ｏｂｌｉｑｕａ）は、中部ヨーロッパ、シベリア、中国、日本の北部地方などの寒冷地に広く分布している耐寒性のきのこで、シラカバやダケカンバなどのカバノキ類に多く寄生し、それらの樹木の樹液を養分にして生育すること、その黒く硬い菌核はチャーガと呼ばれ、ロシアでは古くからお茶代わりに飲用されていることなどが知られている。また、カバノアナタケは、抗腫瘍作用や血糖降下作用などの生理活性を有することが知られており（必要であれば例えば特許文献１を参照のこと）、近年、その注目が高まっている。しかしながら、カバノアナタケが有する薬理作用の全容はいまだ明らかにされていない。
【特許文献１】特開２００４−１６１７４８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
そこで本発明は、カバノアナタケが有する薬理作用の解明に基づく、その新規な医薬用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、上記の点に鑑みて鋭意検討を重ねた結果、カバノアナタケが優れた血液凝固抑制作用を有することを見出した。
【０００５】
上記の知見に基づいてなされた本発明の血液凝固抑制剤は、請求項１記載の通り、カバノアナタケまたはそのエキスを有効成分としてなることを特徴とする。
また、請求項２記載の血液凝固抑制剤は、請求項１記載の血液凝固抑制剤において、限外ろ過によりチャーガのエキスを分子量分画することで得られる分子量が５万を超える画分を有効成分としてなることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、カバノアナタケが有する薬理作用の解明に基づく、その新規な医薬用途としての血液凝固抑制剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の血液凝固抑制剤は、カバノアナタケまたはそのエキスを有効成分としてなることを特徴とするものである。本発明において、血液凝固抑制剤の有効成分とするカバノアナタケは、子実体や菌糸体や菌核のいずれの形態であってもよい。また、これらは、天然物であっても栽培物または培養物であってもよい。さらに、カバノアナタケは、子実体や菌糸体や菌核を、アミラーゼやヘミセルラーゼなどの酵素を用いて消化した酵素処理物であってもよい。カバノアナタケをそのまま血液凝固抑制剤の有効成分として用いる場合、例えば、子実体や菌糸体や菌核を乾燥してから粉砕して用いればよい。カバノアナタケの酵素処理物は、用いる酵素をその至適条件下で作用させることで調製することができる。カバノアナタケのエキスは、例えば、水や熱水、メタノールやエタノールやブタノールをはじめとするアルコールなどの抽出溶媒を用いて室温放置や加熱還流することで成分抽出を行い、抽出溶媒を凍結乾燥、噴霧乾燥、減圧留去などの方法で除去することで調製することができる。中でも、限外ろ過により菌核（チャーガ）のエキスを分子量分画することで得られる分子量が５万を超える画分を有効成分とすることが望ましい。なお、抽出対象は、子実体や菌糸体や菌核のいずれであってもよい。菌核を抽出対象とする場合、成分抽出の効率を高めるためには、菌核は粉砕して用いることが望ましい。菌核を粉砕する方法は特に限定されず、通常の粉砕装置を用いて粒径が数十μｍ〜数千μｍになるように粉砕してもよいし、同体気流摩擦装置（トルネードミル）を用いて粒径が数μｍ〜数十μｍになるように微粉砕してもよい。
【０００８】
カバノアナタケの粉砕物や酵素処理物やエキスは、自体公知の方法によって顆粒剤や錠剤やカプセル剤などに製剤化し、服用することで、優れた血液凝固抑制作用に基づく血栓や塞栓の予防薬や治療薬などとして機能する。その服用量は、服用者の年齢、性別、体重、体調などによって適宜決定することができる。また、カバノアナタケの粉砕物や酵素処理物やエキスは、種々の形態の食品（サプリメントを含む）に、血液凝固抑制作用を発揮するに足る有効量を添加することで、血栓や塞栓に対する予防効果や治療効果をもたらす機能性食品として食してもよい。
【実施例】
【０００９】
以下、本発明の血液凝固抑制剤について実施例によって更に詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
【００１０】
実施例１：
チャーガ（ウクライナ産）の乾燥粉末（ハンマーミルを用いて粒径を約２０μｍ〜約２００μｍとしたもの）３０ｇを蒸留水３００ｍＬに懸濁し、湯煎中において９０℃で２時間の熱水抽出を行った。その後、遠心分離を５０００ｒｐｍで３０分行い、上清をＡＤＶＡＮＴＥＣ ＧＡ１００を用いて吸引ろ過し、得られたろ液を凍結乾燥して、チャーガのエキスを得た（抽出率１０．８％）。このチャーガのエキスの血液凝固抑制作用を、以下の２種類の試験法によって評価した。
【００１１】
（１）ＰＴ（プロトロンビン時間測定：外因系凝固反応時間の測定）
人の血漿（乏血小板血漿：Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｐｏｏｒ Ｐｌａｓｍａ，ＰＰＰ）１５０μＬと生理食塩水１５０μＬをキュベットに入れ、そこに、５０ｍｇ／ｍＬの評価サンプル（チャーガのエキスを生理食塩水に懸濁して調製したもの）を３μＬ添加し、攪拌しながら３７℃で５分間インキュベートした。
インキュベート終了後、血液凝集能測定装置（ＫＯＷＡ社製、ＰＡ−１００型）のスイッチを入れて吸光度の測定を開始し、３０秒後にＰＴ試薬を１５０μＬ添加し、吸光度の変化により、フィブリンが析出するまでの経過時間（秒）を測定した。
【００１２】
（２）ＡＰＴＴ（活性部位トロンボプラスチン時間測定：外因系凝固反応時間の測定）
人の血漿（乏血小板血漿：Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｐｏｏｒ Ｐｌａｓｍａ，ＰＰＰ）１５０μＬとＡＰＴＴ試薬１５０μＬをキュベットに入れ、そこに、５０ｍｇ／ｍＬの評価サンプル（チャーガのエキスを生理食塩水に懸濁して調製したもの）を３μＬ添加し、攪拌しながら３７℃で５分間インキュベートした。
インキュベート終了後、血液凝集能測定装置（ＫＯＷＡ社製、ＰＡ−１００型）のスイッチを入れて吸光度の測定を開始し、３０秒後に０．２５ｍＭの塩化カルシウム水溶液を１５０μＬ添加し、吸光度の変化により、フィブリンが析出するまでの経過時間（秒）を測定した。
【００１３】
評価の結果を表１に示す。また、チャーガのエキスの調製方法と同様の調製方法によって調製した、アガリクス、ハナビラタケ、鹿角霊芝、ミリタリス、ヤマブシタケの各エキスの血液凝固抑制作用の評価の結果を表１にあわせて示す。なお、表１において、ＰＴ時間は、評価サンプルについてＰＴ試薬を添加した時点を開始時間としてフィブリンが析出するまでの経過時間を測定する一方、対照サンプルとした生理食塩水のフィブリン析出時間を同様にして測定し、生理食塩水の測定値を１００％とした場合の評価サンプルの測定値の割合（％）で表示したものである。また、ＡＰＴＴ時間は、評価サンプルについて塩化カルシウム水溶液を添加した時点を開始時間としてフィブリンが析出するまでの経過時間を測定する一方、対照サンプルとした生理食塩水のフィブリン析出時間を同様にして測定し、生理食塩水の測定値を１００％とした場合の評価サンプルの測定値の割合（％）で表示したものである。生理食塩水のフィブリン析出時間の測定値に対する評価サンプルのフィブリン析出時間の測定値の割合は、その都度、生理食塩水について測定を行って求めた。
【００１４】
【表１】
【００１５】
表１から明らかなように、チャーガのエキスは、ＰＴ試薬または塩化カルシウム水溶液を添加してから３００秒経過した後も血液凝固が起こらず、フィブリンが析出しなかったので、ＰＴ時間とＡＰＴＴ時間のいずれも測定することができなかったことから、その優れた血液凝固抑制作用が明らかになり、血液凝固抑制剤として有用であることがわかった。
【００１６】
実施例２：
実施例１で調製した、チャーガのエキスを生理食塩水に懸濁して５０ｍｇ／ｍＬの濃度にしたものを、限外ろ過膜（Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−ＭＣ：ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社）を用いて、分子量が１万未満の画分、１万〜５万の画分、５万を超える画分の３つの画分に分画した。それぞれの画分について、実施例１に記載の方法にてＰＴ時間とＡＰＴＴ時間を測定し（但し評価サンプルは濃度未調整のものを４．５μＬ添加）、血液凝固抑制作用を評価した。評価の結果を表２と図１に示す。
【００１７】
【表２】
【００１８】
表２と図１から明らかなように、限外ろ過によりチャーガのエキスを分子量分画することで得られる分子量が５万を超える画分は、優れた血液凝固抑制作用を有することが明らかになり、血液凝固抑制剤として有用であることがわかった。
【００１９】
製剤例１：錠剤
チャーガの蒸留水抽出エキス５ｇ、乳糖７５ｇ、ステアリン酸マグネシウム２０ｇ、合計１００ｇを均一に混合し、常法に従って錠剤とした。
【００２０】
製剤例２：顆粒剤
チャーガのエタノール抽出エキス１５ｇ、澱粉３０ｇ、乳糖５５ｇ、合計１００ｇを均一に混合し、常法に従って顆粒剤とした。
【００２１】
製剤例３：ビスケット
薄力粉３２ｇ、全卵１８ｇ、バター１４ｇ、砂糖２４ｇ、水１０ｇ、ベーキングパウダー１ｇ、カバノアナタケ子実体の微粉砕物１ｇ、合計１００ｇを用い、常法に従ってビスケットとした。
【産業上の利用可能性】
【００２２】
本発明は、カバノアナタケが有する薬理作用の解明に基づく、その新規な医薬用途としての血液凝固抑制剤を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】実施例における、限外ろ過によりチャーガのエキスを分子量分画することで得られる３つの画分の血液凝固抑制作用を示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カバノアナタケの新規な医薬用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
カバノアナタケ（Ｆｕｓｃｏｐｏｒｉａ ｏｂｌｉｑｕａ）は、中部ヨーロッパ、シベリア、中国、日本の北部地方などの寒冷地に広く分布している耐寒性のきのこで、シラカバやダケカンバなどのカバノキ類に多く寄生し、それらの樹木の樹液を養分にして生育すること、その黒く硬い菌核はチャーガと呼ばれ、ロシアでは古くからお茶代わりに飲用されていることなどが知られている。また、カバノアナタケは、抗腫瘍作用や血糖降下作用などの生理活性を有することが知られており（必要であれば例えば特許文献１を参照のこと）、近年、その注目が高まっている。しかしながら、カバノアナタケが有する薬理作用の全容はいまだ明らかにされていない。
【特許文献１】特開２００４−１６１７４８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
そこで本発明は、カバノアナタケが有する薬理作用の解明に基づく、その新規な医薬用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、上記の点に鑑みて鋭意検討を重ねた結果、カバノアナタケが優れた血液凝固抑制作用を有することを見出した。
【０００５】
上記の知見に基づいてなされた本発明の血液凝固抑制剤は、請求項１記載の通り、カバノアナタケまたはそのエキスを有効成分としてなることを特徴とする。
また、請求項２記載の血液凝固抑制剤は、請求項１記載の血液凝固抑制剤において、限外ろ過によりチャーガのエキスを分子量分画することで得られる分子量が５万を超える画分を有効成分としてなることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、カバノアナタケが有する薬理作用の解明に基づく、その新規な医薬用途としての血液凝固抑制剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の血液凝固抑制剤は、カバノアナタケまたはそのエキスを有効成分としてなることを特徴とするものである。本発明において、血液凝固抑制剤の有効成分とするカバノアナタケは、子実体や菌糸体や菌核のいずれの形態であってもよい。また、これらは、天然物であっても栽培物または培養物であってもよい。さらに、カバノアナタケは、子実体や菌糸体や菌核を、アミラーゼやヘミセルラーゼなどの酵素を用いて消化した酵素処理物であってもよい。カバノアナタケをそのまま血液凝固抑制剤の有効成分として用いる場合、例えば、子実体や菌糸体や菌核を乾燥してから粉砕して用いればよい。カバノアナタケの酵素処理物は、用いる酵素をその至適条件下で作用させることで調製することができる。カバノアナタケのエキスは、例えば、水や熱水、メタノールやエタノールやブタノールをはじめとするアルコールなどの抽出溶媒を用いて室温放置や加熱還流することで成分抽出を行い、抽出溶媒を凍結乾燥、噴霧乾燥、減圧留去などの方法で除去することで調製することができる。中でも、限外ろ過により菌核（チャーガ）のエキスを分子量分画することで得られる分子量が５万を超える画分を有効成分とすることが望ましい。なお、抽出対象は、子実体や菌糸体や菌核のいずれであってもよい。菌核を抽出対象とする場合、成分抽出の効率を高めるためには、菌核は粉砕して用いることが望ましい。菌核を粉砕する方法は特に限定されず、通常の粉砕装置を用いて粒径が数十μｍ〜数千μｍになるように粉砕してもよいし、同体気流摩擦装置（トルネードミル）を用いて粒径が数μｍ〜数十μｍになるように微粉砕してもよい。
【０００８】
カバノアナタケの粉砕物や酵素処理物やエキスは、自体公知の方法によって顆粒剤や錠剤やカプセル剤などに製剤化し、服用することで、優れた血液凝固抑制作用に基づく血栓や塞栓の予防薬や治療薬などとして機能する。その服用量は、服用者の年齢、性別、体重、体調などによって適宜決定することができる。また、カバノアナタケの粉砕物や酵素処理物やエキスは、種々の形態の食品（サプリメントを含む）に、血液凝固抑制作用を発揮するに足る有効量を添加することで、血栓や塞栓に対する予防効果や治療効果をもたらす機能性食品として食してもよい。
【実施例】
【０００９】
以下、本発明の血液凝固抑制剤について実施例によって更に詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
【００１０】
実施例１：
チャーガ（ウクライナ産）の乾燥粉末（ハンマーミルを用いて粒径を約２０μｍ〜約２００μｍとしたもの）３０ｇを蒸留水３００ｍＬに懸濁し、湯煎中において９０℃で２時間の熱水抽出を行った。その後、遠心分離を５０００ｒｐｍで３０分行い、上清をＡＤＶＡＮＴＥＣ ＧＡ１００を用いて吸引ろ過し、得られたろ液を凍結乾燥して、チャーガのエキスを得た（抽出率１０．８％）。このチャーガのエキスの血液凝固抑制作用を、以下の２種類の試験法によって評価した。
【００１１】
（１）ＰＴ（プロトロンビン時間測定：外因系凝固反応時間の測定）
人の血漿（乏血小板血漿：Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｐｏｏｒ Ｐｌａｓｍａ，ＰＰＰ）１５０μＬと生理食塩水１５０μＬをキュベットに入れ、そこに、５０ｍｇ／ｍＬの評価サンプル（チャーガのエキスを生理食塩水に懸濁して調製したもの）を３μＬ添加し、攪拌しながら３７℃で５分間インキュベートした。
インキュベート終了後、血液凝集能測定装置（ＫＯＷＡ社製、ＰＡ−１００型）のスイッチを入れて吸光度の測定を開始し、３０秒後にＰＴ試薬を１５０μＬ添加し、吸光度の変化により、フィブリンが析出するまでの経過時間（秒）を測定した。
【００１２】
（２）ＡＰＴＴ（活性部位トロンボプラスチン時間測定：外因系凝固反応時間の測定）
人の血漿（乏血小板血漿：Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｐｏｏｒ Ｐｌａｓｍａ，ＰＰＰ）１５０μＬとＡＰＴＴ試薬１５０μＬをキュベットに入れ、そこに、５０ｍｇ／ｍＬの評価サンプル（チャーガのエキスを生理食塩水に懸濁して調製したもの）を３μＬ添加し、攪拌しながら３７℃で５分間インキュベートした。
インキュベート終了後、血液凝集能測定装置（ＫＯＷＡ社製、ＰＡ−１００型）のスイッチを入れて吸光度の測定を開始し、３０秒後に０．２５ｍＭの塩化カルシウム水溶液を１５０μＬ添加し、吸光度の変化により、フィブリンが析出するまでの経過時間（秒）を測定した。
【００１３】
評価の結果を表１に示す。また、チャーガのエキスの調製方法と同様の調製方法によって調製した、アガリクス、ハナビラタケ、鹿角霊芝、ミリタリス、ヤマブシタケの各エキスの血液凝固抑制作用の評価の結果を表１にあわせて示す。なお、表１において、ＰＴ時間は、評価サンプルについてＰＴ試薬を添加した時点を開始時間としてフィブリンが析出するまでの経過時間を測定する一方、対照サンプルとした生理食塩水のフィブリン析出時間を同様にして測定し、生理食塩水の測定値を１００％とした場合の評価サンプルの測定値の割合（％）で表示したものである。また、ＡＰＴＴ時間は、評価サンプルについて塩化カルシウム水溶液を添加した時点を開始時間としてフィブリンが析出するまでの経過時間を測定する一方、対照サンプルとした生理食塩水のフィブリン析出時間を同様にして測定し、生理食塩水の測定値を１００％とした場合の評価サンプルの測定値の割合（％）で表示したものである。生理食塩水のフィブリン析出時間の測定値に対する評価サンプルのフィブリン析出時間の測定値の割合は、その都度、生理食塩水について測定を行って求めた。
【００１４】
【表１】
【００１５】
表１から明らかなように、チャーガのエキスは、ＰＴ試薬または塩化カルシウム水溶液を添加してから３００秒経過した後も血液凝固が起こらず、フィブリンが析出しなかったので、ＰＴ時間とＡＰＴＴ時間のいずれも測定することができなかったことから、その優れた血液凝固抑制作用が明らかになり、血液凝固抑制剤として有用であることがわかった。
【００１６】
実施例２：
実施例１で調製した、チャーガのエキスを生理食塩水に懸濁して５０ｍｇ／ｍＬの濃度にしたものを、限外ろ過膜（Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−ＭＣ：ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社）を用いて、分子量が１万未満の画分、１万〜５万の画分、５万を超える画分の３つの画分に分画した。それぞれの画分について、実施例１に記載の方法にてＰＴ時間とＡＰＴＴ時間を測定し（但し評価サンプルは濃度未調整のものを４．５μＬ添加）、血液凝固抑制作用を評価した。評価の結果を表２と図１に示す。
【００１７】
【表２】
【００１８】
表２と図１から明らかなように、限外ろ過によりチャーガのエキスを分子量分画することで得られる分子量が５万を超える画分は、優れた血液凝固抑制作用を有することが明らかになり、血液凝固抑制剤として有用であることがわかった。
【００１９】
製剤例１：錠剤
チャーガの蒸留水抽出エキス５ｇ、乳糖７５ｇ、ステアリン酸マグネシウム２０ｇ、合計１００ｇを均一に混合し、常法に従って錠剤とした。
【００２０】
製剤例２：顆粒剤
チャーガのエタノール抽出エキス１５ｇ、澱粉３０ｇ、乳糖５５ｇ、合計１００ｇを均一に混合し、常法に従って顆粒剤とした。
【００２１】
製剤例３：ビスケット
薄力粉３２ｇ、全卵１８ｇ、バター１４ｇ、砂糖２４ｇ、水１０ｇ、ベーキングパウダー１ｇ、カバノアナタケ子実体の微粉砕物１ｇ、合計１００ｇを用い、常法に従ってビスケットとした。
【産業上の利用可能性】
【００２２】
本発明は、カバノアナタケが有する薬理作用の解明に基づく、その新規な医薬用途としての血液凝固抑制剤を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】実施例における、限外ろ過によりチャーガのエキスを分子量分画することで得られる３つの画分の血液凝固抑制作用を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カバノアナタケまたはそのエキスを有効成分としてなることを特徴とする血液凝固抑制剤。
【請求項２】
限外ろ過によりチャーガのエキスを分子量分画することで得られる分子量が５万を超える画分を有効成分としてなることを特徴とする請求項１記載の血液凝固抑制剤。
【請求項１】
カバノアナタケまたはそのエキスを有効成分としてなることを特徴とする血液凝固抑制剤。
【請求項２】
限外ろ過によりチャーガのエキスを分子量分画することで得られる分子量が５万を超える画分を有効成分としてなることを特徴とする請求項１記載の血液凝固抑制剤。
【図１】
【公開番号】特開２００６−２４１０２７（Ｐ２００６−２４１０２７Ａ）
【公開日】平成１８年９月１４日（２００６．９．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５６６８３（Ｐ２００５−５６６８３）
【出願日】平成１７年３月１日（２００５．３．１）
【出願人】（５９５１７５３０１）株式会社応微研 (28)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年９月１４日（２００６．９．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年３月１日（２００５．３．１）
【出願人】（５９５１７５３０１）株式会社応微研 (28)
【Ｆターム（参考）】
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