血液試料の平均赤血球容積を測定するための血液試料希釈用試薬
【課題】自動血液分析装置による血液試料の平均赤血球容積の測定において、測定温度による測定結果の誤差が少ない血液試料の平均赤血球容積を測定するための血液試料希釈用試薬を提供する。
【解決手段】本発明における血液試料の平均赤血球容積を測定するための血液試料希釈用試薬は、水と、水酸基価が５３〜５８のポリオキシエチレンアルキルエーテルと、浸透圧調整剤と、を含み、ポリオキシエチレンアルキルエーテルの濃度が、０．００５〜０．０５重量％であり、浸透圧が１５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇであることを特徴とする。
【解決手段】本発明における血液試料の平均赤血球容積を測定するための血液試料希釈用試薬は、水と、水酸基価が５３〜５８のポリオキシエチレンアルキルエーテルと、浸透圧調整剤と、を含み、ポリオキシエチレンアルキルエーテルの濃度が、０．００５〜０．０５重量％であり、浸透圧が１５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇであることを特徴とする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液試料の平均赤血球容積（以下、ＭＣＶという場合がある）を測定するための血液試料希釈用試薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
自動血液分析装置は、血液試料の分析を自動化した装置である。この自動血液分析装置により測定される項目として、血液試料のＭＣＶがある。ＭＣＶは、ヘマトクリット値を赤血球（以下、ＲＢＣという場合がある）数で割った値として得られる。ヘマトクリット値は全血の単位容積中の赤血球のパーセンテージである。したがって、ＭＣＶは、赤血球の平均容積を示す値である。ＭＣＶは、フェムトリットル（ｆＬ）または１０−１５Ｌの単位を用いて示される。
【０００３】
ここで、自動血液分析装置により、ＲＢＣ数及びヘマトクリット値を求める方法として、シースフローＤＣ検出法が知られている。シースフローＤＣ検出法では、血球が、フローセルに設けられている細孔を通過する際に生じる、インピーダンスの変化を検出することで、血球の数及び大きさを測定する。この自動血液分析装置で血液試料を分析する場合、血液試料を生理学的に等張な希釈液で希釈する必要がある。全血を希釈するための希釈液としては、一般的に、「生理食塩水」、「Ｒｉｎｇｅｒ液」、「Ｒｏｃｋｅ液」および「Ｔｙｒｏｄｅ液」などが存在する。
【０００４】
また、血液試料の時間経過に伴うＭＣＶの変化を抑制するための血液試料希釈用試薬として、特許文献１に記載の血液試料希釈用試薬が知られている。特許文献１に記載の血液試料希釈用試薬は、少なくとも１つのノニオン界面活性剤と、試薬の浸透圧を約１５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇに調整するための物質とを含む。
【０００５】
しかしながら、特許文献１に記載の血液試料希釈用試薬を用いて血液試料のＭＣＶを測定した場合、測定温度によりＭＣＶの値が変化する。より具体的には、ＭＣＶの値が、低温から温度が上がるにつれて著しく低下し、ある温度で変曲点をもち、変曲点の温度を超えると温度が上がるにつれて徐々に高くなる。
【０００６】
一般的に、自動血液分析装置による血液試料のＭＣＶの測定において、測定温度は２０℃以上の場合が多い。しかし、自動血液分析装置が設置されている場所や、自動血液分析装置のヒーターの性能により、測定温度が２０℃未満になる場合がある。そのため、上記の変曲点が２０℃以上の場合、自動血液分析装置の測定結果を測定温度で補正する際に、複雑な補正が必要となる。
【特許文献１】特開２０００−３５６６３６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、自動血液分析装置による血液試料のＭＣＶの測定において、測定温度による測定結果の誤差が少ない、血液試料希釈用試薬を提供することを目的とする。より具体的には、測定温度によるＭＣＶの値の変化における、変曲点の温度が、２０℃以下となる、血液試料希釈用試薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
すなわち、本発明は、
（１）水と、水酸基価が５３〜５８のポリオキシエチレンアルキルエーテルと、浸透圧調整剤と、を含み、ポリオキシエチレンアルキルエーテルの濃度が、０．００５〜０．０５重量％であり、浸透圧が１５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇである、血液試料の平均赤血球容積を測定するための血液試料希釈用試薬；
（２）ポリオキシエチレンアルキルエーテルが、ポリオキシエチレンオレイルエーテルである、（１）に記載の血液試料希釈用試薬；
（３）ポリオキシエチレンアルキルエーテルが、オキシエチレン鎖の平均値が異なる少なくとも２つのポリオキシエチレンアルキルエーテルを混合したものである、（１）又は（２）に記載の血液試料希釈用試薬。
（４）浸透圧が２３０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇである、（１）〜（３）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
（５）浸透圧調整剤が、塩化ナトリウムである、（１）〜（４）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
（６）ｐＨが６〜８．５である（１）〜（５）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
（７）緩衝剤をさらに含有する、（１）〜（６）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
（８）ｐＨ調節剤をさらに含有する、（１）〜（７）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
（９）酸化防止剤をさらに含有する、（１）〜（８）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
（１０）防腐剤をさらに含有する、（１）〜（９）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
を提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の血液試料希釈用試薬を用いた血液試料のＭＣＶの測定方法によれば、測定温度による測定結果の補正する場合、複雑な補正を行なう必要がない。そのため、測定温度によって生じる誤差が少ない、ＭＣＶの測定結果を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本実施形態の血液試料希釈用試薬は、水と、水酸基価が５２〜６０のポリオキシエチレンアルキルエーテルと、浸透圧調整剤と、を含み、浸透圧が１５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇである。
【００１１】
本実施形態において、水酸基価とは、エステル化物中に含まれる水酸基数の大小の指標となる数値である。より具体的には、１ｇのエステル化物に含まれる遊離のヒドロキシル基をアセチル化するために必要な酢酸を中和するのに要する水酸化カリウムのミリグラム数を示す。
【００１２】
本実施形態の血液試料希釈用試薬は、水酸基価が５２〜６０のポリオキシエチレンアルキルエーテルを含む。好ましくは、水酸基価が５３〜５８のポリオキシエチレンアルキルエーテルを含む。これにより、測定温度によるＭＣＶの値の変化における変曲点の温度を、２０℃以下にすることができる。
【００１３】
ここで、ポリオキシエチレンアルキルエーテルの水酸基価は、オキシエチレン鎖の平均値が長いほど小さくなる。逆に、オキシエチレン鎖の平均値が短いほど大きくなる。例えば、オキシエチレン鎖の平均値が２０である、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテルの水酸基価は、約５０である。オキシエチレン鎖の平均値が１９である、ポリオキシエチレン（１９）オレイルエーテルの水酸基価は、約５５である。オキシエチレン鎖の平均値が１８である、ポリオキシエチレン（１８）オレイルエーテルの水酸基価は、約５７である。オキシエチレン鎖の平均値が１６である、ポリオキシエチレン（１６）オレイルエーテルの水酸基価は、約６０である。
【００１４】
ポリオキシエチレンアルキルエーテルの水酸基価は、オキシエチレン鎖の平均値が異なる複数のポリオキシエチレンアルキルエーテルを混合することで、調整することも可能である。例えば、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテルとポリオキシエチレン（１６）オレイルエーテルを、１：３で混合することで、水酸基価を約５４に調整することができる。すなわち、本実施形態の血液試料希釈用試薬には、オキシエチレン鎖の平均値が異なる少なくとも２つのポリオキシエチレンアルキルエーテルが含まれていても良い。
【００１５】
なお、血液試料希釈用試薬に含まれるポリオキシエチレンアルキルエーテルの水酸基価は、公知の方法を用いて測定することができる。例えば、血液試料希釈用試薬に含まれるポリオキシエチレンアルキルエーテルを、ピリジン中で無水酢酸と反応させ、酢酸を生成させる。そして、生成した酢酸を、フェノールフタレインを指示薬に用いて水酸化カリウムで滴定することにより定量することができる。また、水酸基価を測定するための自動水酸基価測定装置も市販されている。この装置を使用して、血液試料希釈用試薬に含まれるポリオキシエチレンアルキルエーテルの水酸基価を測定することもできる。ここで、本実施形態で用いられるポリオキシエチレンアルキルエーテルのオキシエチレン鎖の平均値は、１６以上が好ましい。
【００１６】
また、血液試料希釈用試薬に含まれる、ポリオキシエチレンアルキルエーテルの濃度は、０．０００５〜０．５重量％、好ましくは０．００１〜０．１重量％、特に好ましくは０．００５〜０．０５重量％である。
【００１７】
本実施形態において、血液試料希釈用試薬の浸透圧は、１５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、好ましくは２３０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇに調整される。この範囲に血液試料希釈用試薬の浸透圧を調製することで、血液試料の時間経過に伴うＭＣＶの変化を抑制することができる。なお、血液試料希釈用試薬の浸透圧を、上記の浸透圧に調整するための浸透圧調整剤としては、例えば、塩化ナトリウムや塩化カリウムなどが挙げられる。
【００１８】
本実施形態において、血液試料希釈用試薬は、緩衝剤を含むことができる。緩衝剤としてはリン酸塩緩衝剤、ホウ酸塩緩衝剤、トリス緩衝剤、及びイミダゾール緩衝剤が挙げられる。特に、ホウ酸塩緩衝剤が好ましい。
【００１９】
本実施形態において、血液試料希釈用試薬のｐＨは、６〜８．５に調整される。血液試料希釈用試薬のｐＨを、上記のｐＨに調整するためのｐＨ調整剤としては、例えば塩酸や水酸化ナトリウムなどが挙げられる。
【００２０】
本実施形態において、血液試料希釈用試薬は、酸化防止剤を含むことができる。酸化防止剤としては、ＥＤＴＡ及びブチルメチルフェノールなどが挙げられる。特に、ＥＤＴＡが好ましい。
【００２１】
本実施形態において、血液試料希釈用試薬は、防腐剤を含むことができる。防腐剤としては、２−ピリジルチオ−１−オキシドナトリウム及びβ−フェネチルアルコールなどが挙げられる。特に、２−ピリジルチオ−１−オキシドナトリウムが好ましい。
【００２２】
図１は、本発明の血液試料希釈用試薬を用いてＭＣＶを測定するための自動血液分析装置１の概略構成を示す正面図である。本実施形態による自動血液分析装置１は、図１に示すように、測定ユニット２と、データ処理ユニット３によって構成されている。そして、測定ユニット２とデータ処理ユニット３とは、互いにデータ通信可能なように、データ伝送ケーブル３ａにより接続されている。また、データ処理ユニット３は、入力部３６と、ディスプレイ装置３７と、データ処理装置３８によって構成されている。自動血液分析装置１では、測定ユニット２により血液試料中に含まれる成分について所定の測定が行われる。データ処理ユニット３は、測定ユニット２で得られた測定データの分析処理を行っている。なお、測定ユニット２とデータ処理ユニット３とは、データ伝送ケーブル３ａにより直接接続される構成であってもよいし、たとえば、電話回線を使用した専用回線、無線ＬＡＮ、ＬＡＮまたはインターネットなどの通信ネットワークを介して接続されていてもよい。
【００２３】
図２は、自動血液分析装置１の概略構成を示すブロック図である。図２に示すように、測定ユニット２は、希釈液容器４と、ヒーター５と、試料供給部６と、ＤＣ測定部７と、廃液チャンバ８と、流路９と、温度センサ１０と、温度センサ１１と、制御部１２と、通信部１３とを含んでいる。ここで、血液試料希釈用試薬（以下、単に希釈液という場合がある）は、希釈液容器４に収容されている。また、試料供給部６は、例えば、混合チャンバ６ａと、サンプリングバルブ６ｂと、ピペット６ｃと、シリンジ６ｄと、モーター６ｅとを含んでいる。
【００２４】
図２に示すように、希釈液容器４と、サンプリングバルブ６ｂと、ピペット６ｃと、シリンジ６ｄと、混合チャンバ６ａと、ＤＣ測定部７と、廃液チャンバ８は、流路９で接続されている。流路９における、液体の動きは、モーター６ｅによるシリンジ６ｄの動作、及びサンプリングバルブ６ｂによって制御されている。より具体的には、（１）採血管から血液試料が、ピペット６ｃによって、サンプリングバルブへと吸引される。（２）サンプリングバルブ６ｂで定量された血液試料が、希釈液で５００倍に希釈され、混合チャンバ６ａに運ばれる。（３）混合チャンバ６ａ中の希釈試料が、ＤＣ測定部７に送られる。（４）ＤＣ測定部７を通過した希釈試料が、廃液チャンバ８へ排出される。
【００２５】
ここで、測定ユニット２は、希釈液容器４とサンプリングバルブ６ｂとを接続する流路９に、ヒーター５を有している。このヒーター５により、希釈液が加温され、ＤＣ測定部７における希釈試料の温度が、２０℃以上になるように構成されている。なお、測測定ユニット２のヒーター５は、希釈液容器４とサンプリングバルブ６ｂとを接続する流路９に配置されているが、これに限られない。すなわち、ＤＣ測定部７における希釈試料の温度が、２０℃以上になるようにヒーター５を配置すればよい。例えば、流路９の他の場所に配置しても良いし、希釈液容器４や混合チャンバ６ａを直接加温するように配置しても良い。
【００２６】
温度センサ１１は、ＤＣ測定部７における希釈試料の温度を測定するためのものである。温度センサ１１は、ＤＣ測定部７に近い場所に配置されることが好ましい。ＤＣ測定部７における希釈試料の温度を、より正確に測定するためである。例えば、本実施形態の測定ユニット２の温度センサ１１は、ＤＣ測定部７を通過した後の希釈試料の温度を測定するように配置されている。また、温度センサ１１は、ＤＣ測定部７に入る前の希釈試料の温度を測定するように配置されても良い。さらに、温度センサ１１は、後述するＤＣ測定部７のフローセル７１中の希釈試料の温度を測定するように配置されても良い。
【００２７】
温度センサ１０は、自動血液分析装置１の周辺温度を測定するためのものである。そのため、温度センサ１０は、ヒーター５やモーター６ｅなどから発生する熱の影響を受けにくい場所に配置することが好ましい。なお、測定ユニット２の温度センサ１０は、測定ユニット２の内部に配置されている。しかし、温度センサ１０は、測定ユニット２の外部に配置しても良い。
【００２８】
ＤＣ測定部７は、フローセル７１を有しており、このフローセル７１に混合チャンバ６ａから希釈試料が移送されるようになっている。図３は、ＤＣ測定部７のフローセル７１の概略構成を示す図面である。フローセル７１は、希釈試料をフローセルに供給するための試料ノズル７２と、細孔を有するアパーチャ７３と、アパーチャ７３を通過した希釈試料を回収する回収管７４と、マイナス電極７７と、プラス電極７８とを有している。フローセル７１では、試料ノズル７２がアパーチャ７３の前に配置され、センターが合わされている。希釈試料が試料ノズル７３から押し出されると、希釈試料はフロントシース液７５に包まれアパーチャ７３の中央部を通過する。希釈試料は、アパーチャ７３を通過後、バックシース液７６に包まれ回収管７４へと送り込まれる。ここで、マイナス電極７７とプラス電極７８との間には、直流電流が流れている。希釈試料に含まれる血球がアパーチャ７３を通過することで生じる電気抵抗の変化により、直流電流のパルス信号が変化する。すなわち、ＤＣ測定部７は、パルス信号の変化として、希釈試料に含まれる血球を測定することができる。このＤＣ測定部７で得られたパルス信号に基づいて、データ処理装置が、シースフローＤＣ検出法及び赤血球パルス波高値検出法により、赤血球数（ＲＢＣ）とヘマトクリット値（ＨＣＴ）とを算出する。より具体的には、パルス信号のパルス数に基づいてＲＢＣが算出され、パルス信号のパルスの高さに基づいて、ＨＣＴが算出される。
【００２９】
通信部１３は、たとえば、ＲＳ−２３２Ｃインタフェース、ＵＳＢインタフェース、Ｅｔｈｅｒｎｅｔ（登録商標）インタフェースであり、データ処理ユニット３との間でデータの送受信を行うことが可能なように構成されている。また、通信部１３は、制御部１２と回路で接続されており、制御部１２とデータの送受信が可能なように構成されている。
【００３０】
制御部１２は、ＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭなどから構成されている。そして、制御部１２は、測定ユニット２の各部と回路１４で接続されており、それらの動作制御やデータの送受信を行うように構成されている。例えば、制御部１２は、試料供給部６のモーター６ｅの動作制御を行なうことで、流路９における液体の動きを制御している。また、制御部１２は、温度センサ１１、温度センサ１０、及びＤＣ測定部７などから受信したデータの、通信部１３への送信を行っている。また、制御部１２は、通信部１３が受信したデータ処理ユニット３からの情報の、測定ユニット２の各部への送信も行なっている。
【００３１】
データ処理ユニット３は、図２に示すように、キーボードおよびマウスなどの入力部３６、ディスプレイ装置３７、およびデータ処理装置３８を備えるコンピュータによって構成されている。データ処理装置３８は、ＣＰＵ３１、ＲＯＭ３２、ＲＡＭ３３、ハードディスク３４、および通信インタフェース３５により構成されている。データ処理ユニット３のハードディスク３４には、オペレーティングシステムと、測定ユニット２から受信した測定データを分析処理するためのアプリケーションプログラムがインストールされている。
【００３２】
ここで、本実施形態では、データ処理ユニット３のＣＰＵ３１は、このアプリケーションプログラムを実行することにより、測定データを分析処理し、赤血球数（ＲＢＣ）、ヘマトクリット値（ＨＣＴ）及び平均赤血球容積（ＭＣＶ）を算出するように構成されている。
【００３３】
通信インタフェース３５は、たとえば、ＲＳ−２３２Ｃインタフェース、ＵＳＢインタフェース、Ｅｔｈｅｒｎｅｔ（登録商標）インタフェースであり、測定ユニット２との間でデータの送受信を行うことが可能に構成されている。
【００３４】
図４は、図１及び図２に示した自動血液分析装置１における試料分析処理を示すフローチャートである。以下、図４を参照して、自動血液分析装置１における試料分析処理について説明する。
【００３５】
まず、自動血液分析装置１が起動されると、アプリケーションプログラムなどの初期化が行われた後、ステップＳ１において、データ処理ユニット３のＣＰＵ３１により、ユーザからの測定開始指示があったか否かが判断される。なお、測定開始指示があるまでこの判断が繰り返される。そして、測定開始指示があった場合には、ステップＳ２において、データ処理ユニット３から測定ユニット２に測定開始指示信号が送信される。
【００３６】
そして、ステップＳ２１において、測定ユニット２の制御部８により、測定開始指示信号が受信されたか否かが判断される。なお、この判断は、測定開始指示信号を受信するまで繰り返される。測定ユニット２が測定開始指示信号を受信すると、ステップＳ２２において、ピペット６ｃにより、採血管から血液試料が吸引される。
【００３７】
そして、ステップＳ２３において、試料供給部６により、希釈試料が調製される。具体的には、希釈液容器４から所定量（たとえば、２．０ｍＬ）の希釈液、および、ピペット６ｃにより採血管２０から吸引された所定量（たとえば、４μＬ）の血液試料が混合チャンバ６ａに供給され、攪拌される。なお、希釈液は、希釈液容器４から混合チャンバ６ａへの流路９においてヒーター５により加温される。これにより、所定量（たとえば、２．０ｍＬ）の加温された希釈試料が調製される。その後、ステップＳ２４において、混合チャンバ６ａ内の希釈試料の一部（たとえば、１ｍＬ）が、シース液（希釈液）とともにＤＣ測定部７に移送されるとともに、希釈試料に含まれる血球が、ＤＣ測定部７のフローセル７１におけるアパーチャ７３を通過することで生じる、マイナス電極７７とプラス電極７８との間に流れる直流電流の電気抵抗の変化を示すパルス信号の測定が行われる。
【００３８】
そして、ステップＳ２５において、温度センサ１１により、ＤＣ測定部７を通過した希釈試料の温度（測定温度）が測定される。なお、測定温度が２３℃以上となるように、希釈試料の調製に用いられる希釈液が加温されるように、ヒーター５は設定されている。
【００３９】
そして、ステップＳ２６において、各検出部において測定された、パルス信号及び測定温度を含む測定データが、測定ユニット２からデータ処理ユニット３に送信される。
【００４０】
データ処理ユニット３では、ステップＳ３において、測定ユニット２が送信した測定データが受信されたか否かが判断され、受信するまでこの判断が繰り返される。そして、測定データを受信すると、ステップＳ４において、ＣＰＵ３１により、ステップＳ２４で測定されたパルス信号に基づいて、赤血球数（ＲＢＣ）およびヘマトクリット値（ＨＣＴ）が算出される。
【００４１】
その後、ステップＳ５において、赤血球数（ＲＢＣ）およびヘマトクリット値（ＨＣＴ）から、ＣＰＵ３１により、平均赤血球容積（ＭＣＶ）が以下の式（１）から算出される。
【００４２】
ＭＣＶ＝（ＨＣＴ／ＲＢＣ）×１０００ ・・・（１）
上記の式（１）において、ＭＣＶは平均赤血球容積（ｆＬ）、ＨＣＴはヘマトクリット値（％）、ＲＢＣは赤血球数（×１０４／μＬ）をそれぞれ表す。
【００４３】
さらに、ステップＳ６により、平均赤血球容積（ＭＣＶ）および測定温度から、ＣＰＵ３１により、ＭＣＶの補正値が以下の式（２）から算出される。
【００４４】
補正ＭＣＶ＝ＭＣＶ×（１＋０．０４８×（２３−測定温度）） ・・・式（２）
上記の式（２）で得られた補正ＭＣＶは、測定温度による誤差が少ないＭＣＶとなる。
【００４５】
そして、ステップＳ７において、上記のように算出された、赤血球数（ＲＢＣ）、ヘマトクリット値（ＨＣＴ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）および補正されたＭＣＶの算出結果がディスプレイ装置３７に出力される。
【００４６】
その後、ステップＳ８において、ユーザからのシャットダウン指示の有無が判断され、指示がない場合には、ステップＳ１に移行される。シャットダウン指示があった場合には、自動血液分析装置１における試料分析処理のデータ処理ユニット３の動作が終了される。また、測定ユニット２では、ステップＳ２６で測定データをデータ処理ユニット３に送信した後、ステップＳ２７において、ユーザからのシャットダウン指示があったか否かが判断され、指示がない場合には、ステップＳ２１に移行される。シャットダウン指示があった場合には、自動血液分析装置１における試料分析処理の測定ユニット２の動作が終了される。
【００４７】
なお、本実施形態では、温度センサ１１により測定された希釈液の温度（測定温度）を用いて、ＭＣＶの補正値を算出している。しかし、本発明はこれに限られず、温度センサ１０により測定された自動血液分析装置１の周辺温度（環境温度）を用いて、ＭＣＶの補正値を算出することもできる。さらに、測定温度及び環境温度の両方を用いて、ＭＣＶの補正値を算出することもできる。
【００４８】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００４９】
＜実施例１＞
（血液試料希釈用試薬の調製）
血液試料希釈用試薬であるシスメックス社製のセルパック １Ｌに、塩化ナトリウムを２．２０ｇ添加した。次に、塩化ナトリウムを添加したセルパックに、０．０１５重量％となるように、水酸基価の異なるポリオキシエチレンオレイルエーテルを添加し、試薬Ａ〜Ｅを調製した。
【００５０】
試薬Ａ〜Ｅの調製に用いられた、ポリオキシエチレンオレイルエーテルの水酸基価を以下に示す。
試薬Ａ：水酸基価が４９．０のポリオキシエチレンオレイルエーテル
試薬Ｂ：水酸基価が５１．０のポリオキシエチレンオレイルエーテル
試薬Ｃ：水酸基価が５３．６のポリオキシエチレンオレイルエーテル
試薬Ｄ：水酸基価が５４．８のポリオキシエチレンオレイルエーテル
試薬Ｅ：水酸基価が５７．１のポリオキシエチレンオレイルエーテル
【００５１】
（ＭＣＶの測定）
正常新鮮血３検体を、それぞれ試薬Ａ〜Ｅで５００倍に希釈し、測定用試料を調製した。調製した測定用試料を用いて、自動血液分析装置ＸＥ−２１００（シスメックス社製）により、測定温度を変えてＭＣＶを測定した。なお、自動血液分析装置ＸＥ−２１００は、測定用試料の温度を制御するヒーターを有していない。従って、装置周辺の温度（環境温度）を変化させることで、測定温度を調整した。正常新鮮血３検体のＭＣＶの測定値を平均した値を、測定値とした。試薬Ａ〜Ｅの各試薬を血液試料希釈用試薬として用いた場合の、測定温度と、ＭＣＶの測定値との関係を、図５に示す。
【００５２】
図５から明らかなように、試薬Ａと試薬Ｂを血液試料希釈用試薬として用いた場合、変曲点の温度が２０℃より大きくなる。それに対し、試薬Ｃ、試薬Ｄ及び試薬Ｅを血液試料希釈用試薬として用いた場合、変曲点の温度が２０℃以下になる。
【００５３】
このことから、水酸基価が少なくとも５３．６以上のポリオキシエチレンオレイルエーテルを含有する血液試料希釈用試薬を用いた場合、測定温度が２０℃以上であれば、複雑な補正を行なうことなく、血液試料のＭＣＶを自動血液分析装置で測定可能であることが示された。
【００５４】
＜実施例２＞
（血液試料希釈用試薬の調製）
血液試料希釈用試薬であるシスメックス社製のセルパック（ＩＩ）に、０．０１５重量％となるように、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテルとポリオキシエチレン（１６）オレイルエーテルを、１：３の割合で混合した混合物を添加し、水酸基価５４の血液試料希釈用試薬を調製した。
【００５５】
（ＭＣＶの測定及び測定値の補正）
正常新鮮血３検体を、それぞれ水酸基価５４の血液試料希釈用試薬で５００倍に希釈し、測定用試料を調製した。調製した測定用試料を用いて、自動血液分析装置ＸＥ−２１００（シスメックス社製）により、環境温度でＭＣＶを測定した結果を、図６の黒四角で示す。
【００５６】
また、自動血液分析装置ＸＥ−２１００Ｃ（シスメックス社製）により、測定温度を２３℃以上に制御してＭＣＶを測定した結果を、図６の黒丸で示す。なお、自動血液分析装置ＸＥ−２１００Ｃは、自動血液分析装置ＸＥ−２１００に血液試料希釈用試薬を加温するヒーターを備えた装置である。より具体的には、自動血液分析装置ＸＥ−２１００Ｃは、図２で示される自動血液分析装置１と同様に、血液試料希釈用試薬を収容する希釈液容器とサンプリングバルブを接続する流路にヒーターが配置されている。
【００５７】
さらに、上記のヒーターによって血液試料希釈用試薬を加温することで、測定用試料の測定温度を２３℃以上に制御し、且つ測定温度でＭＣＶの測定結果を上記の式（２）で補正した補正ＭＣＶを、図６の白丸で示す。
【００５８】
なお、正常新鮮血３検体のＭＣＶの測定値を平均した値を、測定値とした。
【００５９】
図６から明らかなように、水酸基価５４の血液試料希釈用試薬を用い、測定温度を２３℃以上に制御することで、ＭＣＶの測定値を単調増加させることができる。そのため、式（２）に示される簡単な一次式を利用して、正確にＭＣＶの測定値を補正できることが明らかとなった。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】自動血液分析装置１の概略構成を示す正面図である。
【図２】自動血液分析装置１の概略構成を示すブロック図である。
【図３】ＤＣ測定部７におけるフローセル７１の概略構成を示す図面である。
【図４】自動血液分析装置１における試料分析処理を示すフローチャートである。
【図５】試薬Ａ〜Ｅの各試薬を血液試料希釈用試薬として用いた場合の、測定温度と、ＭＣＶの測定値との関係を示した図である。
【図６】本発明の血液試料希釈用試薬を用いて、環境温度で測定したＭＣＶの測定結果と、測定温度を２３℃以上に制御して測定したＭＣＶの測定結果と、測定温度を２３℃以上に制御し、且つ測定温度で補正した補正値とを示した図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液試料の平均赤血球容積（以下、ＭＣＶという場合がある）を測定するための血液試料希釈用試薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
自動血液分析装置は、血液試料の分析を自動化した装置である。この自動血液分析装置により測定される項目として、血液試料のＭＣＶがある。ＭＣＶは、ヘマトクリット値を赤血球（以下、ＲＢＣという場合がある）数で割った値として得られる。ヘマトクリット値は全血の単位容積中の赤血球のパーセンテージである。したがって、ＭＣＶは、赤血球の平均容積を示す値である。ＭＣＶは、フェムトリットル（ｆＬ）または１０−１５Ｌの単位を用いて示される。
【０００３】
ここで、自動血液分析装置により、ＲＢＣ数及びヘマトクリット値を求める方法として、シースフローＤＣ検出法が知られている。シースフローＤＣ検出法では、血球が、フローセルに設けられている細孔を通過する際に生じる、インピーダンスの変化を検出することで、血球の数及び大きさを測定する。この自動血液分析装置で血液試料を分析する場合、血液試料を生理学的に等張な希釈液で希釈する必要がある。全血を希釈するための希釈液としては、一般的に、「生理食塩水」、「Ｒｉｎｇｅｒ液」、「Ｒｏｃｋｅ液」および「Ｔｙｒｏｄｅ液」などが存在する。
【０００４】
また、血液試料の時間経過に伴うＭＣＶの変化を抑制するための血液試料希釈用試薬として、特許文献１に記載の血液試料希釈用試薬が知られている。特許文献１に記載の血液試料希釈用試薬は、少なくとも１つのノニオン界面活性剤と、試薬の浸透圧を約１５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇに調整するための物質とを含む。
【０００５】
しかしながら、特許文献１に記載の血液試料希釈用試薬を用いて血液試料のＭＣＶを測定した場合、測定温度によりＭＣＶの値が変化する。より具体的には、ＭＣＶの値が、低温から温度が上がるにつれて著しく低下し、ある温度で変曲点をもち、変曲点の温度を超えると温度が上がるにつれて徐々に高くなる。
【０００６】
一般的に、自動血液分析装置による血液試料のＭＣＶの測定において、測定温度は２０℃以上の場合が多い。しかし、自動血液分析装置が設置されている場所や、自動血液分析装置のヒーターの性能により、測定温度が２０℃未満になる場合がある。そのため、上記の変曲点が２０℃以上の場合、自動血液分析装置の測定結果を測定温度で補正する際に、複雑な補正が必要となる。
【特許文献１】特開２０００−３５６６３６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、自動血液分析装置による血液試料のＭＣＶの測定において、測定温度による測定結果の誤差が少ない、血液試料希釈用試薬を提供することを目的とする。より具体的には、測定温度によるＭＣＶの値の変化における、変曲点の温度が、２０℃以下となる、血液試料希釈用試薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
すなわち、本発明は、
（１）水と、水酸基価が５３〜５８のポリオキシエチレンアルキルエーテルと、浸透圧調整剤と、を含み、ポリオキシエチレンアルキルエーテルの濃度が、０．００５〜０．０５重量％であり、浸透圧が１５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇである、血液試料の平均赤血球容積を測定するための血液試料希釈用試薬；
（２）ポリオキシエチレンアルキルエーテルが、ポリオキシエチレンオレイルエーテルである、（１）に記載の血液試料希釈用試薬；
（３）ポリオキシエチレンアルキルエーテルが、オキシエチレン鎖の平均値が異なる少なくとも２つのポリオキシエチレンアルキルエーテルを混合したものである、（１）又は（２）に記載の血液試料希釈用試薬。
（４）浸透圧が２３０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇである、（１）〜（３）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
（５）浸透圧調整剤が、塩化ナトリウムである、（１）〜（４）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
（６）ｐＨが６〜８．５である（１）〜（５）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
（７）緩衝剤をさらに含有する、（１）〜（６）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
（８）ｐＨ調節剤をさらに含有する、（１）〜（７）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
（９）酸化防止剤をさらに含有する、（１）〜（８）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
（１０）防腐剤をさらに含有する、（１）〜（９）のいずれか１に記載の血液試料希釈用試薬；
を提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の血液試料希釈用試薬を用いた血液試料のＭＣＶの測定方法によれば、測定温度による測定結果の補正する場合、複雑な補正を行なう必要がない。そのため、測定温度によって生じる誤差が少ない、ＭＣＶの測定結果を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本実施形態の血液試料希釈用試薬は、水と、水酸基価が５２〜６０のポリオキシエチレンアルキルエーテルと、浸透圧調整剤と、を含み、浸透圧が１５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇである。
【００１１】
本実施形態において、水酸基価とは、エステル化物中に含まれる水酸基数の大小の指標となる数値である。より具体的には、１ｇのエステル化物に含まれる遊離のヒドロキシル基をアセチル化するために必要な酢酸を中和するのに要する水酸化カリウムのミリグラム数を示す。
【００１２】
本実施形態の血液試料希釈用試薬は、水酸基価が５２〜６０のポリオキシエチレンアルキルエーテルを含む。好ましくは、水酸基価が５３〜５８のポリオキシエチレンアルキルエーテルを含む。これにより、測定温度によるＭＣＶの値の変化における変曲点の温度を、２０℃以下にすることができる。
【００１３】
ここで、ポリオキシエチレンアルキルエーテルの水酸基価は、オキシエチレン鎖の平均値が長いほど小さくなる。逆に、オキシエチレン鎖の平均値が短いほど大きくなる。例えば、オキシエチレン鎖の平均値が２０である、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテルの水酸基価は、約５０である。オキシエチレン鎖の平均値が１９である、ポリオキシエチレン（１９）オレイルエーテルの水酸基価は、約５５である。オキシエチレン鎖の平均値が１８である、ポリオキシエチレン（１８）オレイルエーテルの水酸基価は、約５７である。オキシエチレン鎖の平均値が１６である、ポリオキシエチレン（１６）オレイルエーテルの水酸基価は、約６０である。
【００１４】
ポリオキシエチレンアルキルエーテルの水酸基価は、オキシエチレン鎖の平均値が異なる複数のポリオキシエチレンアルキルエーテルを混合することで、調整することも可能である。例えば、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテルとポリオキシエチレン（１６）オレイルエーテルを、１：３で混合することで、水酸基価を約５４に調整することができる。すなわち、本実施形態の血液試料希釈用試薬には、オキシエチレン鎖の平均値が異なる少なくとも２つのポリオキシエチレンアルキルエーテルが含まれていても良い。
【００１５】
なお、血液試料希釈用試薬に含まれるポリオキシエチレンアルキルエーテルの水酸基価は、公知の方法を用いて測定することができる。例えば、血液試料希釈用試薬に含まれるポリオキシエチレンアルキルエーテルを、ピリジン中で無水酢酸と反応させ、酢酸を生成させる。そして、生成した酢酸を、フェノールフタレインを指示薬に用いて水酸化カリウムで滴定することにより定量することができる。また、水酸基価を測定するための自動水酸基価測定装置も市販されている。この装置を使用して、血液試料希釈用試薬に含まれるポリオキシエチレンアルキルエーテルの水酸基価を測定することもできる。ここで、本実施形態で用いられるポリオキシエチレンアルキルエーテルのオキシエチレン鎖の平均値は、１６以上が好ましい。
【００１６】
また、血液試料希釈用試薬に含まれる、ポリオキシエチレンアルキルエーテルの濃度は、０．０００５〜０．５重量％、好ましくは０．００１〜０．１重量％、特に好ましくは０．００５〜０．０５重量％である。
【００１７】
本実施形態において、血液試料希釈用試薬の浸透圧は、１５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、好ましくは２３０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇに調整される。この範囲に血液試料希釈用試薬の浸透圧を調製することで、血液試料の時間経過に伴うＭＣＶの変化を抑制することができる。なお、血液試料希釈用試薬の浸透圧を、上記の浸透圧に調整するための浸透圧調整剤としては、例えば、塩化ナトリウムや塩化カリウムなどが挙げられる。
【００１８】
本実施形態において、血液試料希釈用試薬は、緩衝剤を含むことができる。緩衝剤としてはリン酸塩緩衝剤、ホウ酸塩緩衝剤、トリス緩衝剤、及びイミダゾール緩衝剤が挙げられる。特に、ホウ酸塩緩衝剤が好ましい。
【００１９】
本実施形態において、血液試料希釈用試薬のｐＨは、６〜８．５に調整される。血液試料希釈用試薬のｐＨを、上記のｐＨに調整するためのｐＨ調整剤としては、例えば塩酸や水酸化ナトリウムなどが挙げられる。
【００２０】
本実施形態において、血液試料希釈用試薬は、酸化防止剤を含むことができる。酸化防止剤としては、ＥＤＴＡ及びブチルメチルフェノールなどが挙げられる。特に、ＥＤＴＡが好ましい。
【００２１】
本実施形態において、血液試料希釈用試薬は、防腐剤を含むことができる。防腐剤としては、２−ピリジルチオ−１−オキシドナトリウム及びβ−フェネチルアルコールなどが挙げられる。特に、２−ピリジルチオ−１−オキシドナトリウムが好ましい。
【００２２】
図１は、本発明の血液試料希釈用試薬を用いてＭＣＶを測定するための自動血液分析装置１の概略構成を示す正面図である。本実施形態による自動血液分析装置１は、図１に示すように、測定ユニット２と、データ処理ユニット３によって構成されている。そして、測定ユニット２とデータ処理ユニット３とは、互いにデータ通信可能なように、データ伝送ケーブル３ａにより接続されている。また、データ処理ユニット３は、入力部３６と、ディスプレイ装置３７と、データ処理装置３８によって構成されている。自動血液分析装置１では、測定ユニット２により血液試料中に含まれる成分について所定の測定が行われる。データ処理ユニット３は、測定ユニット２で得られた測定データの分析処理を行っている。なお、測定ユニット２とデータ処理ユニット３とは、データ伝送ケーブル３ａにより直接接続される構成であってもよいし、たとえば、電話回線を使用した専用回線、無線ＬＡＮ、ＬＡＮまたはインターネットなどの通信ネットワークを介して接続されていてもよい。
【００２３】
図２は、自動血液分析装置１の概略構成を示すブロック図である。図２に示すように、測定ユニット２は、希釈液容器４と、ヒーター５と、試料供給部６と、ＤＣ測定部７と、廃液チャンバ８と、流路９と、温度センサ１０と、温度センサ１１と、制御部１２と、通信部１３とを含んでいる。ここで、血液試料希釈用試薬（以下、単に希釈液という場合がある）は、希釈液容器４に収容されている。また、試料供給部６は、例えば、混合チャンバ６ａと、サンプリングバルブ６ｂと、ピペット６ｃと、シリンジ６ｄと、モーター６ｅとを含んでいる。
【００２４】
図２に示すように、希釈液容器４と、サンプリングバルブ６ｂと、ピペット６ｃと、シリンジ６ｄと、混合チャンバ６ａと、ＤＣ測定部７と、廃液チャンバ８は、流路９で接続されている。流路９における、液体の動きは、モーター６ｅによるシリンジ６ｄの動作、及びサンプリングバルブ６ｂによって制御されている。より具体的には、（１）採血管から血液試料が、ピペット６ｃによって、サンプリングバルブへと吸引される。（２）サンプリングバルブ６ｂで定量された血液試料が、希釈液で５００倍に希釈され、混合チャンバ６ａに運ばれる。（３）混合チャンバ６ａ中の希釈試料が、ＤＣ測定部７に送られる。（４）ＤＣ測定部７を通過した希釈試料が、廃液チャンバ８へ排出される。
【００２５】
ここで、測定ユニット２は、希釈液容器４とサンプリングバルブ６ｂとを接続する流路９に、ヒーター５を有している。このヒーター５により、希釈液が加温され、ＤＣ測定部７における希釈試料の温度が、２０℃以上になるように構成されている。なお、測測定ユニット２のヒーター５は、希釈液容器４とサンプリングバルブ６ｂとを接続する流路９に配置されているが、これに限られない。すなわち、ＤＣ測定部７における希釈試料の温度が、２０℃以上になるようにヒーター５を配置すればよい。例えば、流路９の他の場所に配置しても良いし、希釈液容器４や混合チャンバ６ａを直接加温するように配置しても良い。
【００２６】
温度センサ１１は、ＤＣ測定部７における希釈試料の温度を測定するためのものである。温度センサ１１は、ＤＣ測定部７に近い場所に配置されることが好ましい。ＤＣ測定部７における希釈試料の温度を、より正確に測定するためである。例えば、本実施形態の測定ユニット２の温度センサ１１は、ＤＣ測定部７を通過した後の希釈試料の温度を測定するように配置されている。また、温度センサ１１は、ＤＣ測定部７に入る前の希釈試料の温度を測定するように配置されても良い。さらに、温度センサ１１は、後述するＤＣ測定部７のフローセル７１中の希釈試料の温度を測定するように配置されても良い。
【００２７】
温度センサ１０は、自動血液分析装置１の周辺温度を測定するためのものである。そのため、温度センサ１０は、ヒーター５やモーター６ｅなどから発生する熱の影響を受けにくい場所に配置することが好ましい。なお、測定ユニット２の温度センサ１０は、測定ユニット２の内部に配置されている。しかし、温度センサ１０は、測定ユニット２の外部に配置しても良い。
【００２８】
ＤＣ測定部７は、フローセル７１を有しており、このフローセル７１に混合チャンバ６ａから希釈試料が移送されるようになっている。図３は、ＤＣ測定部７のフローセル７１の概略構成を示す図面である。フローセル７１は、希釈試料をフローセルに供給するための試料ノズル７２と、細孔を有するアパーチャ７３と、アパーチャ７３を通過した希釈試料を回収する回収管７４と、マイナス電極７７と、プラス電極７８とを有している。フローセル７１では、試料ノズル７２がアパーチャ７３の前に配置され、センターが合わされている。希釈試料が試料ノズル７３から押し出されると、希釈試料はフロントシース液７５に包まれアパーチャ７３の中央部を通過する。希釈試料は、アパーチャ７３を通過後、バックシース液７６に包まれ回収管７４へと送り込まれる。ここで、マイナス電極７７とプラス電極７８との間には、直流電流が流れている。希釈試料に含まれる血球がアパーチャ７３を通過することで生じる電気抵抗の変化により、直流電流のパルス信号が変化する。すなわち、ＤＣ測定部７は、パルス信号の変化として、希釈試料に含まれる血球を測定することができる。このＤＣ測定部７で得られたパルス信号に基づいて、データ処理装置が、シースフローＤＣ検出法及び赤血球パルス波高値検出法により、赤血球数（ＲＢＣ）とヘマトクリット値（ＨＣＴ）とを算出する。より具体的には、パルス信号のパルス数に基づいてＲＢＣが算出され、パルス信号のパルスの高さに基づいて、ＨＣＴが算出される。
【００２９】
通信部１３は、たとえば、ＲＳ−２３２Ｃインタフェース、ＵＳＢインタフェース、Ｅｔｈｅｒｎｅｔ（登録商標）インタフェースであり、データ処理ユニット３との間でデータの送受信を行うことが可能なように構成されている。また、通信部１３は、制御部１２と回路で接続されており、制御部１２とデータの送受信が可能なように構成されている。
【００３０】
制御部１２は、ＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭなどから構成されている。そして、制御部１２は、測定ユニット２の各部と回路１４で接続されており、それらの動作制御やデータの送受信を行うように構成されている。例えば、制御部１２は、試料供給部６のモーター６ｅの動作制御を行なうことで、流路９における液体の動きを制御している。また、制御部１２は、温度センサ１１、温度センサ１０、及びＤＣ測定部７などから受信したデータの、通信部１３への送信を行っている。また、制御部１２は、通信部１３が受信したデータ処理ユニット３からの情報の、測定ユニット２の各部への送信も行なっている。
【００３１】
データ処理ユニット３は、図２に示すように、キーボードおよびマウスなどの入力部３６、ディスプレイ装置３７、およびデータ処理装置３８を備えるコンピュータによって構成されている。データ処理装置３８は、ＣＰＵ３１、ＲＯＭ３２、ＲＡＭ３３、ハードディスク３４、および通信インタフェース３５により構成されている。データ処理ユニット３のハードディスク３４には、オペレーティングシステムと、測定ユニット２から受信した測定データを分析処理するためのアプリケーションプログラムがインストールされている。
【００３２】
ここで、本実施形態では、データ処理ユニット３のＣＰＵ３１は、このアプリケーションプログラムを実行することにより、測定データを分析処理し、赤血球数（ＲＢＣ）、ヘマトクリット値（ＨＣＴ）及び平均赤血球容積（ＭＣＶ）を算出するように構成されている。
【００３３】
通信インタフェース３５は、たとえば、ＲＳ−２３２Ｃインタフェース、ＵＳＢインタフェース、Ｅｔｈｅｒｎｅｔ（登録商標）インタフェースであり、測定ユニット２との間でデータの送受信を行うことが可能に構成されている。
【００３４】
図４は、図１及び図２に示した自動血液分析装置１における試料分析処理を示すフローチャートである。以下、図４を参照して、自動血液分析装置１における試料分析処理について説明する。
【００３５】
まず、自動血液分析装置１が起動されると、アプリケーションプログラムなどの初期化が行われた後、ステップＳ１において、データ処理ユニット３のＣＰＵ３１により、ユーザからの測定開始指示があったか否かが判断される。なお、測定開始指示があるまでこの判断が繰り返される。そして、測定開始指示があった場合には、ステップＳ２において、データ処理ユニット３から測定ユニット２に測定開始指示信号が送信される。
【００３６】
そして、ステップＳ２１において、測定ユニット２の制御部８により、測定開始指示信号が受信されたか否かが判断される。なお、この判断は、測定開始指示信号を受信するまで繰り返される。測定ユニット２が測定開始指示信号を受信すると、ステップＳ２２において、ピペット６ｃにより、採血管から血液試料が吸引される。
【００３７】
そして、ステップＳ２３において、試料供給部６により、希釈試料が調製される。具体的には、希釈液容器４から所定量（たとえば、２．０ｍＬ）の希釈液、および、ピペット６ｃにより採血管２０から吸引された所定量（たとえば、４μＬ）の血液試料が混合チャンバ６ａに供給され、攪拌される。なお、希釈液は、希釈液容器４から混合チャンバ６ａへの流路９においてヒーター５により加温される。これにより、所定量（たとえば、２．０ｍＬ）の加温された希釈試料が調製される。その後、ステップＳ２４において、混合チャンバ６ａ内の希釈試料の一部（たとえば、１ｍＬ）が、シース液（希釈液）とともにＤＣ測定部７に移送されるとともに、希釈試料に含まれる血球が、ＤＣ測定部７のフローセル７１におけるアパーチャ７３を通過することで生じる、マイナス電極７７とプラス電極７８との間に流れる直流電流の電気抵抗の変化を示すパルス信号の測定が行われる。
【００３８】
そして、ステップＳ２５において、温度センサ１１により、ＤＣ測定部７を通過した希釈試料の温度（測定温度）が測定される。なお、測定温度が２３℃以上となるように、希釈試料の調製に用いられる希釈液が加温されるように、ヒーター５は設定されている。
【００３９】
そして、ステップＳ２６において、各検出部において測定された、パルス信号及び測定温度を含む測定データが、測定ユニット２からデータ処理ユニット３に送信される。
【００４０】
データ処理ユニット３では、ステップＳ３において、測定ユニット２が送信した測定データが受信されたか否かが判断され、受信するまでこの判断が繰り返される。そして、測定データを受信すると、ステップＳ４において、ＣＰＵ３１により、ステップＳ２４で測定されたパルス信号に基づいて、赤血球数（ＲＢＣ）およびヘマトクリット値（ＨＣＴ）が算出される。
【００４１】
その後、ステップＳ５において、赤血球数（ＲＢＣ）およびヘマトクリット値（ＨＣＴ）から、ＣＰＵ３１により、平均赤血球容積（ＭＣＶ）が以下の式（１）から算出される。
【００４２】
ＭＣＶ＝（ＨＣＴ／ＲＢＣ）×１０００ ・・・（１）
上記の式（１）において、ＭＣＶは平均赤血球容積（ｆＬ）、ＨＣＴはヘマトクリット値（％）、ＲＢＣは赤血球数（×１０４／μＬ）をそれぞれ表す。
【００４３】
さらに、ステップＳ６により、平均赤血球容積（ＭＣＶ）および測定温度から、ＣＰＵ３１により、ＭＣＶの補正値が以下の式（２）から算出される。
【００４４】
補正ＭＣＶ＝ＭＣＶ×（１＋０．０４８×（２３−測定温度）） ・・・式（２）
上記の式（２）で得られた補正ＭＣＶは、測定温度による誤差が少ないＭＣＶとなる。
【００４５】
そして、ステップＳ７において、上記のように算出された、赤血球数（ＲＢＣ）、ヘマトクリット値（ＨＣＴ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）および補正されたＭＣＶの算出結果がディスプレイ装置３７に出力される。
【００４６】
その後、ステップＳ８において、ユーザからのシャットダウン指示の有無が判断され、指示がない場合には、ステップＳ１に移行される。シャットダウン指示があった場合には、自動血液分析装置１における試料分析処理のデータ処理ユニット３の動作が終了される。また、測定ユニット２では、ステップＳ２６で測定データをデータ処理ユニット３に送信した後、ステップＳ２７において、ユーザからのシャットダウン指示があったか否かが判断され、指示がない場合には、ステップＳ２１に移行される。シャットダウン指示があった場合には、自動血液分析装置１における試料分析処理の測定ユニット２の動作が終了される。
【００４７】
なお、本実施形態では、温度センサ１１により測定された希釈液の温度（測定温度）を用いて、ＭＣＶの補正値を算出している。しかし、本発明はこれに限られず、温度センサ１０により測定された自動血液分析装置１の周辺温度（環境温度）を用いて、ＭＣＶの補正値を算出することもできる。さらに、測定温度及び環境温度の両方を用いて、ＭＣＶの補正値を算出することもできる。
【００４８】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００４９】
＜実施例１＞
（血液試料希釈用試薬の調製）
血液試料希釈用試薬であるシスメックス社製のセルパック １Ｌに、塩化ナトリウムを２．２０ｇ添加した。次に、塩化ナトリウムを添加したセルパックに、０．０１５重量％となるように、水酸基価の異なるポリオキシエチレンオレイルエーテルを添加し、試薬Ａ〜Ｅを調製した。
【００５０】
試薬Ａ〜Ｅの調製に用いられた、ポリオキシエチレンオレイルエーテルの水酸基価を以下に示す。
試薬Ａ：水酸基価が４９．０のポリオキシエチレンオレイルエーテル
試薬Ｂ：水酸基価が５１．０のポリオキシエチレンオレイルエーテル
試薬Ｃ：水酸基価が５３．６のポリオキシエチレンオレイルエーテル
試薬Ｄ：水酸基価が５４．８のポリオキシエチレンオレイルエーテル
試薬Ｅ：水酸基価が５７．１のポリオキシエチレンオレイルエーテル
【００５１】
（ＭＣＶの測定）
正常新鮮血３検体を、それぞれ試薬Ａ〜Ｅで５００倍に希釈し、測定用試料を調製した。調製した測定用試料を用いて、自動血液分析装置ＸＥ−２１００（シスメックス社製）により、測定温度を変えてＭＣＶを測定した。なお、自動血液分析装置ＸＥ−２１００は、測定用試料の温度を制御するヒーターを有していない。従って、装置周辺の温度（環境温度）を変化させることで、測定温度を調整した。正常新鮮血３検体のＭＣＶの測定値を平均した値を、測定値とした。試薬Ａ〜Ｅの各試薬を血液試料希釈用試薬として用いた場合の、測定温度と、ＭＣＶの測定値との関係を、図５に示す。
【００５２】
図５から明らかなように、試薬Ａと試薬Ｂを血液試料希釈用試薬として用いた場合、変曲点の温度が２０℃より大きくなる。それに対し、試薬Ｃ、試薬Ｄ及び試薬Ｅを血液試料希釈用試薬として用いた場合、変曲点の温度が２０℃以下になる。
【００５３】
このことから、水酸基価が少なくとも５３．６以上のポリオキシエチレンオレイルエーテルを含有する血液試料希釈用試薬を用いた場合、測定温度が２０℃以上であれば、複雑な補正を行なうことなく、血液試料のＭＣＶを自動血液分析装置で測定可能であることが示された。
【００５４】
＜実施例２＞
（血液試料希釈用試薬の調製）
血液試料希釈用試薬であるシスメックス社製のセルパック（ＩＩ）に、０．０１５重量％となるように、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテルとポリオキシエチレン（１６）オレイルエーテルを、１：３の割合で混合した混合物を添加し、水酸基価５４の血液試料希釈用試薬を調製した。
【００５５】
（ＭＣＶの測定及び測定値の補正）
正常新鮮血３検体を、それぞれ水酸基価５４の血液試料希釈用試薬で５００倍に希釈し、測定用試料を調製した。調製した測定用試料を用いて、自動血液分析装置ＸＥ−２１００（シスメックス社製）により、環境温度でＭＣＶを測定した結果を、図６の黒四角で示す。
【００５６】
また、自動血液分析装置ＸＥ−２１００Ｃ（シスメックス社製）により、測定温度を２３℃以上に制御してＭＣＶを測定した結果を、図６の黒丸で示す。なお、自動血液分析装置ＸＥ−２１００Ｃは、自動血液分析装置ＸＥ−２１００に血液試料希釈用試薬を加温するヒーターを備えた装置である。より具体的には、自動血液分析装置ＸＥ−２１００Ｃは、図２で示される自動血液分析装置１と同様に、血液試料希釈用試薬を収容する希釈液容器とサンプリングバルブを接続する流路にヒーターが配置されている。
【００５７】
さらに、上記のヒーターによって血液試料希釈用試薬を加温することで、測定用試料の測定温度を２３℃以上に制御し、且つ測定温度でＭＣＶの測定結果を上記の式（２）で補正した補正ＭＣＶを、図６の白丸で示す。
【００５８】
なお、正常新鮮血３検体のＭＣＶの測定値を平均した値を、測定値とした。
【００５９】
図６から明らかなように、水酸基価５４の血液試料希釈用試薬を用い、測定温度を２３℃以上に制御することで、ＭＣＶの測定値を単調増加させることができる。そのため、式（２）に示される簡単な一次式を利用して、正確にＭＣＶの測定値を補正できることが明らかとなった。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】自動血液分析装置１の概略構成を示す正面図である。
【図２】自動血液分析装置１の概略構成を示すブロック図である。
【図３】ＤＣ測定部７におけるフローセル７１の概略構成を示す図面である。
【図４】自動血液分析装置１における試料分析処理を示すフローチャートである。
【図５】試薬Ａ〜Ｅの各試薬を血液試料希釈用試薬として用いた場合の、測定温度と、ＭＣＶの測定値との関係を示した図である。
【図６】本発明の血液試料希釈用試薬を用いて、環境温度で測定したＭＣＶの測定結果と、測定温度を２３℃以上に制御して測定したＭＣＶの測定結果と、測定温度を２３℃以上に制御し、且つ測定温度で補正した補正値とを示した図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水と、
水酸基価が５３〜５８のポリオキシエチレンアルキルエーテルと、
浸透圧調整剤と、を含み、
ポリオキシエチレンアルキルエーテルの濃度が、０．００５〜０．０５重量％であり、浸透圧が１５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇである、血液試料の平均赤血球容積を測定するための血液試料希釈用試薬。
【請求項２】
ポリオキシエチレンアルキルエーテルが、ポリオキシエチレンオレイルエーテルである、請求項１に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項３】
ポリオキシエチレンアルキルエーテルが、オキシエチレン鎖の平均値が異なる少なくとも２つのポリオキシエチレンアルキルエーテルを混合したものである、請求項１又は２に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項４】
浸透圧が２３０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項５】
浸透圧調整剤が、塩化ナトリウムである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項６】
ｐＨが６〜８．５である請求項１〜５のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項７】
緩衝剤をさらに含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項８】
ｐＨ調節剤をさらに含有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項９】
酸化防止剤をさらに含有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項１０】
防腐剤をさらに含有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項１】
水と、
水酸基価が５３〜５８のポリオキシエチレンアルキルエーテルと、
浸透圧調整剤と、を含み、
ポリオキシエチレンアルキルエーテルの濃度が、０．００５〜０．０５重量％であり、浸透圧が１５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇである、血液試料の平均赤血球容積を測定するための血液試料希釈用試薬。
【請求項２】
ポリオキシエチレンアルキルエーテルが、ポリオキシエチレンオレイルエーテルである、請求項１に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項３】
ポリオキシエチレンアルキルエーテルが、オキシエチレン鎖の平均値が異なる少なくとも２つのポリオキシエチレンアルキルエーテルを混合したものである、請求項１又は２に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項４】
浸透圧が２３０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項５】
浸透圧調整剤が、塩化ナトリウムである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項６】
ｐＨが６〜８．５である請求項１〜５のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項７】
緩衝剤をさらに含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項８】
ｐＨ調節剤をさらに含有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項９】
酸化防止剤をさらに含有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【請求項１０】
防腐剤をさらに含有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の血液試料希釈用試薬。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２０１２−２３３９２７（Ｐ２０１２−２３３９２７Ａ）
【公開日】平成２４年１１月２９日（２０１２．１１．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−１９５９３３（Ｐ２０１２−１９５９３３）
【出願日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【分割の表示】特願２００８−２４７４８５（Ｐ２００８−２４７４８５）の分割
【原出願日】平成２０年９月２６日（２００８．９．２６）
【出願人】（３９００１４９６０）シスメックス株式会社 (810)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１１月２９日（２０１２．１１．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【分割の表示】特願２００８−２４７４８５（Ｐ２００８−２４７４８５）の分割
【原出願日】平成２０年９月２６日（２００８．９．２６）
【出願人】（３９００１４９６０）シスメックス株式会社 (810)
【Ｆターム（参考）】
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