【課題】ヒト患者への投与に適した組成物であって、薬学的に許容される担体と、組成物を投与すべきヒト患者のｋｇ体重当り少なくとも１．６３×１０６のＣＤ３４＋造血細胞とを備え、少なくとも０．５２×１０６のかかるＣＤ３４＋造血細胞に抗ＨＩＶ因子を発現するウイルス構築物が形質導入されている組成物を提供する。
【解決手段】遺伝子治療、特に造血前駆（ＨＰ）細胞に適用される遺伝子治療、形質導入細胞及びそれらを得る方法、並びにヒト患者中で改変造血細胞の長期の生着を与えるためにそれらを使用する方法に関する組成物及び方法。とりわけ、ＨＩＶ感染を治療又は予防するためのＨＰ細胞のエキソビボ遺伝子治療。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的に許容される担体と、組成物を投与すべきヒト患者のｋｇ体重当り少なくとも１．６３×１０^６のＣＤ３４^＋造血細胞とを備え、少なくとも０．５２×１０^６のかかるＣＤ３４^＋造血細胞に抗ＨＩＶ因子を発現するウイルス構築物が形質導入されている組成物。
【請求項２】
ヒト患者のｋｇ体重当り少なくとも９．３７×１０^６のＣＤ３４^＋造血細胞を備え、少なくとも５×１０^６のかかるＣＤ３４^＋造血細胞が形質導入されている、請求項１の組成物。
【請求項３】
前記抗ＨＩＶ因子がＲＮＡである、請求項１の組成物。
【請求項４】
前記抗ＨＩＶ因子がＲＮＡｉ分子である、請求項１の組成物。
【請求項５】
前記抗ＨＩＶ因子がアンチセンス分子である、請求項１の組成物。
【請求項６】
前記抗ＨＩＶ因子がリボザイムである、請求項１の組成物。
【請求項７】
前記抗ＨＩＶ因子が、配列５’ＵＵＡ ＧＧＡ ＵＣＣ ＵＧＡ ＵＧＡ ＧＵＣ ＣＧＵ ＧＡＧ ＧＡＣ ＧＡＡ ＡＣＵ ＧＧＣ ＵＣＣ−３’を有するヌクレオチドを備えるリボザイムである、請求項１の組成物。
【請求項８】
前記ウイルス構築物がレトロウイルス構築物である、請求項１の組成物。
【請求項９】
前記組成物にサイトカインが実質的に存在しない、請求項１の組成物。
【請求項１０】
前記組成物にウイルスが実質的に存在しない、請求項１の組成物。
【請求項１１】
前記患者中で前記形質導入されたＣＤ３４^＋細胞が生着することができ、且つ子孫細胞を少なくとも１２ヶ月間生み出すことができる、請求項１の組成物。
【請求項１２】
薬学的に許容される担体と、組成物を投与すべき患者のｋｇ体重当り少なくとも１．６３×１０^６のＣＤ３４^＋造血細胞とを備え、少なくとも０．５２×１０^６のかかるＣＤ３４^＋造血細胞に抗ＨＩＶ因子を発現するウイルス構築物が形質導入されている組成物であって、
（ａ）前記患者からＣＤ３４^＋造血細胞を単離する工程と、
（ｂ）少なくとも１つのサイトカインとともに前記ＣＤ３４^＋造血細胞を培養する工程と、
（ｃ）前記細胞と前記ウイルス構築物の同所局在を増大させる因子の存在下で、前記ＣＤ３４^＋造血細胞に前記抗ＨＩＶ因子を発現するウイルス構築物を形質導入する工程と、
（ｄ）前記ＣＤ３４^＋造血細胞を洗浄する工程と、
（ｅ）前記ＣＤ３４^＋造血細胞を薬学的に許容される担体と混合することによって、前記組成物を取得する工程と、を備えた方法によって製造される組成物。
【請求項１３】
工程（ｂ）の培養が少なくとも２つのサイトカインの存在下で行われる、請求項１２の組成物。
【請求項１４】
工程（ｂ）の培養が２つのサイトカインの存在下で行われる、請求項１２の組成物。
【請求項１５】
工程（ｃ）における前記細胞の形質導入が組換えフィブロネクチン断片の存在下で行われる、請求項１２の組成物。
【請求項１６】
薬学的に許容される担体と、組成物を投与すべきヒト患者のｋｇ体重当り少なくとも１．６３×１０^６のＣＤ３４^＋造血細胞とを備え、少なくとも０．５２×１０^６のかかるＣＤ３４^＋造血細胞が形質転換前にＣＤ３４^＋細胞中に存在しない目的の遺伝子で形質転換されている組成物。
【請求項１７】
ヒト患者のｋｇ体重当り少なくとも９×１０^６のＣＤ３４^＋造血細胞を備え、少なくとも５×１０^６のＣＤ３４^＋造血細胞が形質導入されている、請求項１６の組成物。
【請求項１８】
前記目的の遺伝子がＲＮＡ因子を発現する、請求項１６の組成物。
【請求項１９】
前記患者が成人である、請求項１６の組成物。
【請求項２０】
薬学的に許容される担体と、組成物を投与すべきヒト患者のｋｇ体重当り少なくとも１．６３×１０^６のＣＤ３４^＋造血細胞とを備え、少なくとも０．５２×１０^６のかかるＣＤ３４^＋造血細胞が形質転換前にＣＤ３４^＋細胞中に存在しない目的の遺伝子で形質転換されている組成物であって、
（ａ）前記患者からＣＤ３４^＋造血細胞を単離する工程と、
（ｂ）少なくとも１つのサイトカインとともに前記ＣＤ３４^＋造血細胞を培養する工程と、
（ｃ）前記細胞とベクターの同所局在を増大させる因子の存在下で、目的の遺伝子をコードするベクターによって前記ＣＤ３４^＋造血細胞を形質転換する工程と、
（ｄ）前記ＣＤ３４^＋造血細胞を洗浄する工程と、
（ｅ）前記ＣＤ３４^＋造血細胞を薬学的に許容される担体と混合することによって、前記組成物を取得する工程と、を備えた方法によって製造される組成物。
【請求項２１】
ヒト患者の造血細胞中に目的の遺伝子を挿入する方法であって、
ａ）前記ヒト患者の血液中にＣＤ３４^＋造血前駆細胞を動員することと、
ｂ）血漿交換によって前記患者の血液から白血球を単離することと、
ｃ）免疫選択的な方法によって前記単離された白血球からＣＤ３４^＋造血細胞を単離することと、
ｄ）前記細胞を形質導入ベクターと同所局在させる因子の存在下で、工程ｃ）の前記ＣＤ３４^＋造血細胞を目的の遺伝子による形質転換工程に供することと、
ｅ）工程ｄ）後のＣＤ３４^＋造血細胞の総数を測定することと、総数がヒト患者のｋｇ体重当り少なくとも１．６３×１０^６細胞であれば、次いで、工程ｆ）に進み、工程ｄ）後のＣＤ３４^＋造血細胞の総数がヒト患者のｋｇ体重当り１．６３×１０^６細胞未満であれば、少なくとも工程ｂ）−ｄ）を実施し、ＣＤ３４^＋造血細胞を合流させることと、
ｆ）前記ＣＤ３４^＋造血細胞を前記患者に送達することによって、前記ヒト患者の前記造血細胞中に目的の遺伝子を挿入することと、
を備えた方法。
【請求項２２】
前記細胞を形質転換ベクターと同所存在させる前記因子がフィブロネクチンの断片である、請求項２１の方法。
【請求項２３】
骨髄切除せずに工程ｆ）を行う、請求項２１の方法。
【請求項２４】
前記患者中に造血前駆細胞を動員する工程が、前記造血前駆細胞を動員するのに十分な量のサイトカインを前記患者に投与することによって行われる、請求項２１の方法。
【請求項２５】
前記患者の血液から白血球を単離する工程で、血漿交換が少なくとも２回行われる、請求項２１の方法。
【請求項２６】
目的の遺伝子による形質導入工程に前記ＣＤ３４^＋造血細胞を供する工程が、組換えフィブロネクチン断片の存在下で行われる、請求項２１の方法。
【請求項２７】
少なくとも２つのサイトカインの存在下で、工程ｃ）の単離されたＣＤ３４^＋造血細胞を培養する工程をさらに備える、請求項２１の方法。
【請求項２８】
前記ヒト患者が成人のヒト患者である、請求項２１の方法。
【請求項２９】
前記目的の遺伝子が抗ＨＩＶ因子をコードする、請求項２１の方法。
【請求項３０】
前記抗ＨＩＶ因子がＲＮＡである、請求項２９の方法。
【請求項３１】
前記抗ＨＩＶ因子がアンチセンス分子である、請求項２９の方法。
【請求項３２】
前記抗ＨＩＶ因子がリボザイムである、請求項２９の方法。
【請求項３３】
前記抗ＨＩＶ因子が、配列５’−ＵＵＡ ＧＧＡ ＵＣＣ ＵＧＡ ＵＧＡ ＧＵＣ ＣＧＵ ＧＡＧ ＧＡＣ ＧＡＡ ＡＣＵ ＧＧＣ ＵＣＣ−３’を有するヌクレオチドを備えるリボザイムである、請求項３２の方法。
【請求項３４】
工程ｅ）において、工程ｄ）後のＣＤ３４^＋造血細胞の総数がヒト患者のｋｇ体重当り１．６３×１０^６細胞未満であれば、工程ｄ）で得たＣＤ３４^＋造血細胞を低温で保存し、工程ａ）−ｄ）を繰り返し、低温で保存した任意の細胞と工程ｄ）で得た前記細胞とを合流させる工程をさらに包含する、請求項２１の方法。
【請求項３５】
ヒト患者の造血細胞中に目的の遺伝子を挿入する方法であって、
ａ）前記患者の血液中にＣＤ３４^＋造血前駆細胞を動員することと、
ｂ）血漿交換によって前記患者の血液から白血球を単離することと、
ｃ）免疫選択的な方法によって前記単離された白血球からＣＤ３４^＋造血細胞を単離することと、
ｄ）工程ｃ）後のＣＤ３４^＋造血細胞の総数を測定することと、総数がヒト患者のｋｇ体重当り少なくとも１．６３×１０^６細胞であれば、次いで、工程ｅ）に進み、工程ｃ）後のＣＤ３４^＋造血細胞の総数がヒト患者のｋｇ体重当り１．６３×１０^６細胞未満であれば、工程ｂ）−ｃ）を実施して、前記ＣＤ３４^＋造血細胞と合流させることと、
ｅ）前記細胞を形質導入ベクターと同所に局在させる因子の存在下で、工程ｃ）の前記ＣＤ３４^＋造血細胞を目的の遺伝子による形質転換工程に供することと、
ｆ）前記ＣＤ３４^＋造血細胞を前記患者に送達することによって、前記ヒト患者の造血細胞中に目的の遺伝子を挿入することと、
を備えた方法。
【請求項３６】
前記細胞を形質転換ベクターと同所に局在させる前記因子がフィブロネクチンの断片である、請求項３５の方法。
【請求項３７】
配列５’−ＵＵＡ ＧＧＡ ＵＣＣ ＵＧＡ ＵＧＡ ＧＵＣ ＣＧＵ ＧＡＧ ＧＡＣ ＧＡＡ ＡＣＵ ＧＧＣ ＵＣＣ−３’を有するヌクレオチドを備えたリボザイムを発現する遺伝子をヒト患者の造血細胞中に挿入する方法であって、
ａ）前記造血前駆細胞を動員するのに十分な量のサイトカインを前記患者に投与することによって、前記患者の血液中にＣＤ３４^＋造血前駆細胞を動員することと、
ｂ）血漿交換を少なくとも２回行うことによって前記患者の血液から白血球を単離することと、
ｃ）免疫選択的な方法によって前記単離された白血球からＣＤ３４^＋造血細胞を単離することと、
ｄ）サイトカインの存在下において、培地中で、工程ｃ）の単離されたＣＤ３４^＋造血細胞を約１日間培養することと、
ｅ）組換えフィブロネクチン断片の存在下で、前記細胞中に配列５’−ＵＵＡ ＧＧＡ ＵＣＣ ＵＧＡ ＵＧＡ ＧＵＣ ＣＧＵ ＧＡＧ ＧＡＣ ＧＡＡ ＡＣＵ ＧＧＣ ＵＣＣ−３’を有するヌクレオチドを備えるリボザイムを生じさせるベクターを備えたレトロウイルスによる形質導入工程に、工程ｄ）のＣＤ３４^＋造血前駆細胞を供することと、
ｆ）工程ｅ）後のＣＤ３４^＋造血細胞の総数を測定することと、総数がヒト患者のｋｇ体重当り少なくとも１．６３×１０^６細胞であれば、次いで、工程ｇ）に進み、工程ｅ）後のＣＤ３４^＋造血細胞の総数がヒト患者のｋｇ体重当り１．６３×１０^６細胞未満であれば、工程ｂ）−ｅ）を実施して、ＣＤ３４^＋造血細胞を合流させることと、
ｇ）骨髄切除せずに、前記ＣＤ３４^＋造血細胞を前記患者に送達することにより、前記リボザイムを発現する遺伝子を前記ヒト患者の造血細胞中に挿入することと、
を備えた方法。
【請求項３８】
請求項１の組成物を調製する方法であって、
ａ）前記患者の血液中にＣＤ３４^＋造血前駆細胞を動員することと、
ｂ）血漿交換によって前記患者の血液から白血球を単離することと、
ｃ）免疫選択的な方法によって前記単離された白血球からＣＤ３４^＋造血細胞を単離することと、
ｄ）前記細胞を形質導入ベクターと同所に局在させる因子の存在下で、工程ｃ）の前記ＣＤ３４^＋造血細胞を目的の遺伝子による形質転換工程に供することと、
ｅ）工程ｄ）後のＣＤ３４^＋造血細胞の総数を測定することと、工程ｄ）後のＣＤ３４^＋造血細胞の総数がヒト患者のｋｇ体重当り１．６３×１０^６細胞未満であれば、工程ｂ）−ｄ）を再度実施して、ＣＤ３４^＋造血細胞を合流させることと、
を備えた方法。
【請求項３９】
薬学的に許容される担体と、組成物を投与すべきヒト患者のｋｇ体重当り少なくとも１．６３×１０^６のＣＤ３４^＋造血細胞とを備え、ｋｇ当り少なくとも０．５２×１０^６のかかるＣＤ３４^＋細胞に抗ＨＩＶ因子を発現するウイルス構築物が形質導入されている組成物の使用であって、ＨＩＶに感染したヒト患者を治療するための医薬を製造するための使用。
【請求項４０】
請求項３５の方法を実施する際に使用するための要素を備えたキット。
【請求項４１】
ａ）ヒト患者中に造血前駆細胞を動員することができる量の因子と、
ｂ）ＣＤ３４^＋造血細胞を培養するのに適合した少なくとも１つのサイトカインを含む培地と、
ｃ）細胞中に配列５’−ＵＵＡ ＧＧＡ ＵＣＣ ＵＧＡ ＵＧＡ ＧＵＣ ＣＧＵ ＧＡＧ ＧＡＣ ＧＡＡ ＡＣＵ ＧＧＣ ＵＣＣ−３’を有するリボザイムを生じさせる配列を有するヌクレオチドを備えたレトロウイルスベクターと、
ｄ）内部が組換えフィブロネクチン断片で被覆された組織培養容器と、
を備えたキット。
【請求項４２】
請求項４１のキットと該キットを使用するための使用書とを備えたパッケージ。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図７Ｃ】

【図７Ｄ】

【図７Ｅ】

【図７Ｆ】

【図８】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【図９Ｃ】

【図９Ｄ】

【図９Ｅ】

【図９Ｆ】

【図９Ｇ】

【図９Ｈ】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【公開番号】特開２０１０−７７１２５（Ｐ２０１０−７７１２５Ａ）
【公開日】平成２２年４月８日（２０１０．４．８）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２００９−２１１６６２（Ｐ２００９−２１１６６２）
【出願日】平成２１年９月１４日（２００９．９．１４）
【分割の表示】特願２００３−５１２４４８（Ｐ２００３−５１２４４８）の分割
【原出願日】平成１４年７月１０日（２００２．７．１０）
【出願人】（３０１００１９０４）ジョンソン・アンド・ジョンソン・リサーチ・プロプライエタリー・リミテッド (1)
【氏名又は名称原語表記】ＪＯＨＮＳＯＮ　＆　ＪＯＨＮＳＯＮ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　ＰＴＹ　ＬＩＭＩＴＥＤ　
【Ｆターム（参考）】