【課題】本発明は、遊離システインを有する不溶性または凝集性タンパク質を製造またはリフォールディングする新規な方法を提供する。
【解決手段】本発明は、遊離システインを有する不溶性または凝集性タンパク質を製造またはリフォールディングする方法は、タンパク質を発現する宿主細胞をシステイン・ブロッキング剤に暴露する方法に関する。そのような新規な方法により製造される可溶性でリフォールディングされたタンパク質は、修飾し、それらの有効性を高めることができる。そのような修飾には、ＰＥＧ部分を結合してＰＥＧ化タンパク質を作成することが含まれる。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離モノＰＥＧ化ヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）システインムテインであって、
ポリエチレングリコールが、Ｇ−ＣＳＦ成熟タンパク質のＴ１（１番目の位置のスレオニン：以下同様に、アルファベットはアミノ酸の一文字記号を指し、数字は成熟タンパク質内の置換されるアミノ酸の位置を指す）、Ｐ２、Ｌ３、Ａ６、Ｓ７、Ｗ５８、Ａ６８、Ｅ９３、Ａ１２９、Ｔ１３３、Ａ１３６、Ａ１３９、Ａ１４１およびＱ１７３から選択されたアミノ酸と置換されたシステイン残基に取り付けられるか、または
ポリエチレングリコールが、Ｇ−ＣＳＦ成熟タンパク質の最初のアミノ酸の前かまたは最後のアミノ酸の後に付加されたシステインに取り付けられており、
前記ムテインはヒトＧ−ＣＳＦに応答して増殖する細胞系統を用いたインビトロ増殖バイオアッセイで１００ｐｇ／ｍＬ以下のＥＣ₅₀を有する、単離モノＰＥＧ化ヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）システインムテイン。
【請求項２】
単離ヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）システインムテインであって、
システインが、Ｇ−ＣＳＦ成熟タンパク質のＰ２（２番目の位置のプロリン：以下同様に、アルファベットはアミノ酸の一文字記号を指し、数字は成熟タンパク質内の置換されるアミノ酸の位置を指す）、Ａ６、Ｓ７、Ｗ５８、Ａ６８、Ｅ９３、Ａ１２９、Ｔ１３３、Ａ１３６、Ａ１３９、Ａ１４１およびＱ１７３から選択されたアミノ酸と置換されているか、または
システインが、Ｇ−ＣＳＦ成熟タンパク質の最初のアミノ酸の前かまたは最後のアミノ酸の後に付加されており、
前記ムテインはヒトＧ−ＣＳＦに応答して増殖する細胞系統を用いたインビトロ増殖バイオアッセイで１００ｐｇ／ｍＬ以下のＥＣ₅₀を有する、単離ヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）システインムテイン。

【公開番号】特開２０１１−１７３９１１（Ｐ２０１１−１７３９１１Ａ）
【公開日】平成２３年９月８日（２０１１．９．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−９８７１１（Ｐ２０１１−９８７１１）
【出願日】平成２３年４月２６日（２０１１．４．２６）
【分割の表示】特願２００１−５８５１４４（Ｐ２００１−５８５１４４）の分割
【原出願日】平成１３年５月１６日（２００１．５．１６）
【出願人】（５０００２４８７２）ボルダー　バイオテクノロジー，　インコーポレイテッド (3)
【Ｆターム（参考）】