関節変性の治療のための注射用製剤の製造のための天然ポリサッカライドゲルの使用
本発明は、他の天然ポリサッカライドの有無に関わらずヒアルロン酸（又はその塩の一種）及び一種以上のポリオールで構成されているゲル形態における殺菌された注射用水性製剤に関する。滑液のレオロジーと似ているレオロジーを持ち、及び、ヒアルロン酸とポリオール間の相乗作用のおかげで高められた耐分解性を常に有している症例によっては、前記製剤は関節変性の治療において関節腔に適用される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然由来の他のポリサッカライドの有無に関わらずヒアルロン酸（又はその塩の一種）及び一種以上のポリオールからなるゲル形態の、殺菌された注射用水性製剤に関する。この注射用製剤は、関節変性の治療において関節腔に使用される。
【背景技術】
【０００２】
関節は、二つの骨を結合し、お互いに対して可動性が得られるようにする接合である。
【０００３】
滑膜関節は特に手足において最も数の多い関節である。これら関節において、骨は、粘性及び弾性であり、並びに滑液と呼ばれる体液で満たされた腔を経て、結合される。
【０００４】
滑液は関節の良好な作動及び保護に関与する。それは、制約はあるものの、関節の潤滑又は衝撃の吸収を可能にする、滑液粘弾性の特性が与えられている、ポリサッカライドであるヒアルロン酸からなる。
【０００５】
膝の変形性関節症（特に肥満、遺伝、外傷、・・・のような原因による変性）のような関節変性の場合、滑液は変性し（ヒアルロン酸の濃度及び分子量の減少）、及びこの変性は関節の潤滑及び衝撃の吸収のための滑液の容量を減少させる。
【０００６】
関節内補充療法（ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ）による治療は、不足した滑液を置き換えるために関節へゲルを注射することからなる。この関節内補充療法は痛みを緩和又は抑制することができ、そして関節の可動性を復元するために寄与することができる。
【０００７】
現在市販されている関節内補充療法用製品はヒアルロン酸を含むゲルである。これらゲルは動物性又は非動物性由来のヒアルロン酸に基づき得、及び架橋（例として、シンビスク（Ｓｙｎｖｉｓｃ）：登録商標、デュロラン（Ｄｕｒｏｌａｎ）：登録商標）、又は非架橋（例として、シノクロム（Ｓｙｎｏｃｒｏｍ）：登録商標、アルトラム（Ａｒｔｈｒｕｍ）：登録商標、ルブラビスク（Ｌｕｂｒａｖｉｓｃ）：登録商標、ストラクトバイアル（Ｓｔｒｕｃｔｏｖｉａｌ）：登録商標）であり得る。
【０００８】
ヒアルロン酸ベースのゲルの残留は関節において低い（数時間から数日）ことは、当業者によく知られている。ローランの、「ヒアルロナン及びその誘導体の化学的、生物学的、及び医学的適用」、ヴェナ−グレン インターナショナル シリーズ（Ｗｅｎｎｅｒ−Ｇｒｅｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｅｒｉｅｓ）、７２巻によると、ウサギ関節における半減期は、１％ヒアルロナン溶液では１２時間であり、及び０．５％ヒランビー（Ｈｙｌａｎ Ｂ）では９日間であった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
この低い残留（関節内のゲルの急速な吸収の動態）はヒアルロン酸の（解重合による）分解によって明らかにされる。関節内のヒアルロン酸の分解の主要因はラジカル分解、３７℃での熱分解、及び機械的な分解（酵素分解は関節内の分解の重要な要因ではない）である。関節内補充療法の治療有効性は関節内におけるヒアルロン酸の滞留時間よりも長く持続するけれども、関節内のヒアルロン酸に基づくゲルの残留は製品の有効性の影響を与える顕著なパラメーターである。斯様に、関節内のヒアルロン酸ベースのゲルの滞留時間
が長ければ長いほど、関節内補充療法（痛みの減少、可動性を得る）はより効果的である。よって、関節内のゲルの滞留時間（残留）の増加はヒアルロン酸ベースのゲルを使用した関節内補充療法による治療の有効性を増加させるための重要な点である。
【００１０】
ヒアルロン酸の濃度の増加、高分子量のヒアルロン酸の使用及びヒアルロン酸の架橋／グラフト技術がヒアルロン酸ベースのゲルの残留を高めることを可能にすることは、当業者によく知られている。しかしながら、上述した種々のパラメーターの最適化はヒアルロン酸ベースのゲルの残留が関節腔において有意に増加することを可能にするほど充分であるように見えない（市場で入手できる現在の関節内補充療法用ゲルの関節内における半減期は最大でも数日のみである）。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
全く予期しえず及び驚くべきである開発において、以下のことが明らかにされた：
− ヒアルロン酸を基にした殺菌された水性製剤中のポリオールの存在は、このゲルの耐分解性を著しく高めることを可能にする
− 殺菌されたゲル内におけるヒアルロン酸とポリオールの強い親和性は、ゲルの外側へのポリオールの放出のためにゆったりとした動態を包含している：ヒアルロン酸とポリオール間のこの親和性は、ポリオールによるゲルの長期間にわたる効果的な保護を相乗作用によりともなう。
− ヒアルロン酸とポリオールの水性製剤の特定の組成物にとって、殺菌することは、汚染されていない滑液の粘弾性特性を実質的に再生する全く驚くべきである粘弾性をこのゲルに与える−ゲルのこれら特有のレオロジー特性は“ヒアルロン酸／ポリオール”相乗効果によって引き起こされる分解への耐性というに特性により長期間維持される。
【発明の効果】
【００１２】
それゆえ、本発明は、天然由来の他のポリサッカライドの有無に関わらずヒアルロン酸（又はその塩の一種）及び一種以上のポリオールからなるゲル形態の、殺菌された注射用水性製剤からなる。症例（実施例１及び３参照）において、関節変性の治療に使用されるこの製剤は、滑液に近いレオロジー、及び増加された耐分解性を常に示す。
【００１３】
実施例４は、後に示すラジカル、耐熱及び機械的試験を受けた際の、ヒアルロン酸ベースのゲル及びポリオールの最も良い耐性を示している。分解に対するこのゲルの最もよい耐性は関節腔へ注射されたゲルの長期残留を可能にする。
【００１４】
実施例５はヒアルロン酸ベースのゲル及びポリオールの熱分解への最もよい耐性を示す。このゲルの熱分解への最もよい耐性は関節腔へ注射されたゲルの長期残留及び使用前の製品の保管期間中における製剤の良好な安定化（製品の期限切れに関して重要なポイント）を可能にする。
【００１５】
実施例８はヒアルロン酸及びポリオール間の強い親和性を実証する。関節に注射された、ヒアルロン酸及びポリオールの強い親和性は相乗作用によって分解に対してゲルのよりよい長期間耐性を可能にする。実際に、関節にポリオール溶液を注射した場合、自然な浄化は関節から分子（＝ポリオール）をすばやく排出することになる。ポリオールをともなったヒアルロン酸ベースのゲルの場合、ヒアルロン酸とポリオール間の強い親和性により、ゲルの外側へのポリオールの素早い放出（すなわち、関節の外への素早い排出）が抑えられ、及びこうして分解に対するポリオールによるゲルの効果的な長期間の保護が可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は組成物Ａのゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図２】図２は組成物Ｂのゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図３】図３は組成物Ｃのゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図４】図４は組成物Ｄのゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図５】図５は組成物Ｅのゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図６】図６は製品Ｐ１のゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図７】図７は製品Ｐ２のゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図８】図８は製品Ｐ３のゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図９】図９は商用製品Ｐ４のゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図１０】図１０はゲルのフリーラジカルによる分解の動力学を示すグラフである。
【図１１】図１１はヒアルロン酸／ポリオールの親和性を実証するグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
実施例１及び３に、滑液のレオロジーに近いヒアルロン酸ベースのゲル及びポリオールのレオロジーを示す。
【００１８】
マズッコ ディー（ＭＡＺＺＵＣＣＯ，Ｄ）らの出版物、「あらゆる膝関節形成患者の関節液のレオロジー」；ジャーナルオブオルソペディックリサーチ（Journal of Orthopedic Research）、１１５７−１１６３頁、２００２年では、弾性率Ｇ’及び粘性率Ｇ’’間の交差周波数は、汚染されていない（非変形性関節症）膝の滑液に対する０．４１±０．１２Ｈｚと等しいことを示している。この交差周波数の値は、ファム（Ｆａｍ）らの出版物、「滑液のレオロジー特性」、バイオレオロジー、４４巻、５９−７４頁、２００７年によって裏付けられる。この出版物において、ある図は若年者又は高齢者に属する滑液、あるいは変形性関節症の滑液に関して、その率Ｇ’及びＧ’’間の交差周波数が０乃至１０Ｈｚであることが示されている。
− ０．４１Ｈｚより小さい：Ｇ’’＞Ｇ’、滑液は主に粘性作用を有し、このことは患者が休息している際に関節が強く潤滑にされることを意味する、粘性作用を有する。
− ０．４１Ｈｚより大きい：Ｇ’＞Ｇ’’、滑液は主に弾性作用を有し、このことは患者が走る又は跳ねる際に衝撃が強く吸収されることを意味する。
【００１９】
本発明の一態様によると、天然由来の他のポリサッカライドの有無にかかわらずヒアルロン酸（又はその塩の一種）及び一種以上のポリオールからなるゲルは、殺菌した後、０．４１Ｈｚに近い弾性率Ｇ’及び粘度率Ｇ’’の交差周波数ｆｃを有する。このように、該ゲルは滑液の粘弾性に近い粘弾性を有している。
【００２０】
結果として、本発明の一態様によると、
− ｆｃより小さい：Ｇ’’＞Ｇ’、ゲルは主に粘性作用を有し、このことは休息時に関節が効果的に潤滑されることを意味する。
− ｆｃより大きい：Ｇ’＞Ｇ’’、ゲルは主に弾性作用を有し、このことは患者が走る又は跳ねる際に、衝撃を効果的に吸収すること（関節の保護）を意味する。
【００２１】
本発明の一態様によると、交差周波数は０乃至１０Ｈｚ、好ましくは０．４１±０．４１Ｈｚである。それ故に、この種のレオロジーは関節、特に膝、腰又は小関節、の機械的な制約に適している。従って、それは、膝又は他の関節の関節内補充療法による変形性関節症の治療において非常に有利である。
【００２２】
それ故、本発明は、天然由来の他のポリサッカライドの有無に係わらず、１−１００ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸（又はその塩の一種）及び０．０００１−１００ｍｇ／ｍＬの一種以上のポリールからなる、滅菌された、ゲル形態の注射用水性製剤の使用に関する。この注射用製剤は、関節変性の治療において関節腔に使用される。
【００２３】
ヒアルロン酸は、好ましくはバイオ発酵によって得られ、同時に動物由来から得る事も可能である。その分子量は、０．１乃至１０×１０6ダルトン及び好ましくは２乃至３×
１０6ダルトンである。
【００２４】
ヒアルロン酸の濃度は１乃至１００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１０乃至２５ｍｇ／ｍＬである。
【００２５】
ヒアルロン酸と組み合わせて使用することができる天然由来のポリサッカライドは、例えば、コンドロイチン硫酸塩、ケラチン、ケラチン硫酸塩、ヘパリン、ヘパリン硫酸塩、セルロース及びそれらの誘導体、キトサン、キサンタン、アルギン酸塩、及びそれら個々の塩総てから選択される。
【００２６】
天然由来のポリサッカライドと同様に、ヒアルロン酸は先行技術に記載された、架橋／グラフト技術によって、架橋又は非架橋、グラフト又は非グラフト化され得る。
【００２７】
ポリオールは、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、ラクチトール、マルチトール又はグルコースの様なその他の環状物から選択される。
【００２８】
ポリオール濃度は０．０００１乃至１００ｍｇ／ｍＬ及び好ましくは１５乃至４５ｍｇ／ｍＬである。
【００２９】
使用される水溶液は、好ましくは緩衝液である。この緩衝液の組成物は、要求される物理化学的特性（ｐＨ、オスモル濃度）及びレオロジー的特性を有するように選択される。
【００３０】
選択された緩衝液は、好ましくはリン酸緩衝液である。
【００３１】
本発明によると、製剤は当業者に公知の、及び好ましくはオートクレーブを用いた技術によって殺菌される。
【００３２】
本発明による製剤は関節内へ注射することによって使用され、その容量は、治療される関節の性質に基づいて、０．１乃至２０ｍＬであり得る。
【００３３】
例として、本発明により製造することができる２種の粘弾性ゲル製剤は以下のようにして供給される。
− ヒアルロン酸及びグリセロールに基づいた粘弾性ゲル
リン酸緩衝液中に２０ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸（分子量２．５×１０6ダルトン）及
び２０ｍｇ／ｍＬのグリセロールを含む殺菌された溶液。
− ヒアルロン酸及びソルビトールに基づいた粘弾性ゲル
リン酸緩衝液中に２０ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸（分子量２．５×１０6ダルトン）及
び４０ｍｇ／ｍＬのソルビトールを含む殺菌された溶液。
【実施例】
【００３４】
実施例は本発明を説明するためにあるが、しかし上述の発明を制限するためのものではない。下記実施例において製造される製剤は、ポリオールと共に非架橋の又は架橋したヒアルロン酸ナトリウム（ＮａＨＡ）に基づいたゲルである。
【００３５】
非架橋の又は架橋したゲルの製造は当業者によって公知の技術に従って実施した。これらゲルの製造に使用されるヒアルロン酸ナトリウムは２．５×１０6ダルトンに相当する
分子量を有している。架橋したゲルの場合、使用される架橋剤はＢＤＤＥであり、使用さ
れる架橋度の定義は：質量（ＢＤＤＥ）／質量（乾燥ＮａＨＡ）である。
【００３６】
ゲルにおけるポリオールの取り込みは、非架橋又は架橋したゲル中にポリオールの必要な量を添加し、そしてそれをスパチュラで１０分間（最終ゲルの１００ｇに対して）混合することによって実施した。
【００３７】
製造したゲルをガラスシリンジに満たし、続いて湿式加熱（Ｔ＝１２１℃）で殺菌した。
【００３８】
レオロジー測定をするために使用した粘弾性測定装置（ｒｈｅｏｍｅｔｅｒ）は、４０ｍｍのフラットジオメトリー、１０００ミクロンの間隔、及び３７℃の分析温度を備えたＡＲ１０００（ティーエイ インスツルメント社製）である。
【００３９】
ポリオールの計測はＨＰＬＣウルティメイト３０００（ダイオネクス社製）及びイオン交換カラムによって実施した。
【００４０】
実施例１：本発明による殺菌された注射用製剤の製造
製剤Ａ：グリセロールをともなった非架橋のＮａＨＡに基づいたゲル
− ２．５×１０6ダルトンのＮａＨＡ１５ｍｇ
− グリセロール２０ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
製剤Ｂ：グリセロールをともなった非架橋のＮａＨＡに基づいたゲル
− ２．５×１０6ダルトンのＮａＨＡ２０ｍｇ
− グリセロール２０ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
製剤Ｃ：プロピレングリコールをともなった非架橋のＮａＨＡに基づいたゲル
− ２．５×１０6ダルトンのＮａＨＡ２０ｍｇ
− プロピレングリコール１５ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
製剤Ｄ：マンニトールをともなった非架橋のＮａＨＡに基づいたゲル
− ２．５×１０6ダルトンのＮａＨＡ２０ｍｇ
− マンニトール１５ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
製剤Ｅ：ソルビトールをともなった非架橋のＮａＨＡに基づいたゲル
− ２．５×１０6ダルトンのＮａＨＡ２０ｍｇ
− ソルビトール４０ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
製剤Ｆ：ソルビトールをともなった架橋したＮａＨＡに基づいたゲル
− ２．５×１０6ダルトン、架橋度６％のＮａＨＡ１８ｍｇ
− ソルビトール５０ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
【００４１】
実施例２：実施例１の製剤の物理化学的特性
【表１】
【表２】
【００４２】
製剤Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ及びＦは等浸透圧であり、及び中性ｐＨを有している。
【００４３】
実施例３：実施例１の組成物のレオロジー的特性
製剤Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥの粘弾性は、周波数（図１乃至図５参照）に基づいて粘度率（Ｇ’’）及び弾性率（Ｇ’）の斬新的変化を測定することよって特徴付けられる。
これら５種の製剤にとって、率Ｇ’及び率Ｇ’’の交差周波数は、汚染されていない滑液のそれに近いことに注目する。
下記の表は、個々の製剤及び汚染されていない滑液の交差周波数ｆｃを提供する。
【表３】
【００４４】
本発明に説明されているように
− ｆｃより小さい：Ｇ’’＞Ｇ’、ゲルは主に粘性作用を有し、このことは休息時に関節が効果的に潤滑されることを意味する。
− ｆｃよりおおきい：Ｇ’＞Ｇ’’、ゲルは主に弾性作用を有し、患者が走る又は跳ねた際に衝撃を効果的に吸収することを意味する。
【００４５】
実施例４：実施例１の製剤の耐分解性
ＮａＨＡ−ベースのゲルにおけるポリオールの存在がラジカルによるゲルの分解を減少させ得るということを示すために、熱的作用及び機械的な作用、ポリオールをともなったＮａＨＡ−ベースのゲル（実施例１の組成物）の分解に対する耐性、及びポリオールをともなわないＮａＨＡ−ベースのゲル（比較ゲル）の分解に対する耐性を比較した。
【００４６】
実施例１の製剤Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥに対して、ポリオールを含まないＮａＨＡベースの比較ゲルは、ＮａＨＡ（リン酸緩衝液中、分子量２．５×１０6ダルトン）２０ｍｇ／ｍＬ
を含む非架橋のＮａＨＡベースのゲルである−組成物Ｇ。
【００４７】
実施例１の組成物Ｆに対して、ポリオールを含まないＮａＨＡベースの参考ゲルは、ＮａＨＡ（リン酸緩衝液中、架橋する前には分子量２．５×１０6ダルトン）１８ｍｇ／ｍ
Ｌを含む架橋したＮａＨＡベースのゲルである−組成物Ｈ。
【００４８】
変性試験は、試験のために酸化剤を試験されるゲルに添加し、一分間、スパチュラで混合を攪拌して均質化し、３７℃までにし、さらに０．３％変形させて実施した。
【００４９】
このパラメーターがゲルの段階的な分解と同じ意味で、時間と共に増加する点に注目する。製剤Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ及びＨに対してｔ＝０及びｔ＝１５分で測定されたこの値を、下記表に提示する。
【表４】
【００５０】
本発明に記載されているように、個々の製剤Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥはポリオールを含まないゲル（製剤Ｇ）の分解耐性よりも有意に高い分解耐性をもっている。同様に、製剤Ｆは、対応するポリオールを含まないゲル（組成物Ｈ）の分解耐性よりも有意に高い分解耐性をもっている。。
【００５１】
従って、ポリオールはゲルを分解から有効に保護している。
【００５２】
実施例５：ポリオールの有無にかかわらない製剤の促進老化研究
２つの製剤に４０℃の熱促進老化試験を行った。
− 実施例１の製剤Ｂ：グリセロールをともなったヒアルロン酸に基づいた溶液
− アルコールの添加なしの製剤Ｇ（実施例４に記載）
− ２．５×１０6ダルトンのヒアルロン酸２０ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
【００５３】
ゼロ粘度（ゼロせん断時粘度）の測定及び弾性率Ｇ’及び粘性率Ｇ’’間の交差周波数ｆｃの測定を、３回（ｔ＝０、７日後、２６日後）実施した。
得られた結果を、下記表に示す。
【表５】
*ＮＤ＝測定値なし
【００５４】
促進老化試験の間、ゼロ粘度の低下及び交差周波数のｆｃの減少は、製剤Ｂ（本発明に従う製剤）の場合の方が、ポリオールを含まない製剤（製剤Ｇ）の場合よりも少ない。
【００５５】
実施例６：４種の市販されている関節内補充療法用製品及び本発明に従って得られた製剤のレオロジー比較
試験した製品は以下の通りである。
【表６】
【００５６】
５種のゲルの試験において、図６乃至図９は、周波数に基づいた粘性率（Ｇ’’）及び弾性率（Ｇ’）を与える。
【００５７】
実施例１によるゲルのみが、汚染されていない滑液の交差周波数（０．４１Ｈｚ）に近い交差周波数（０．５０Ｈｚ）を有していることに注目する。
【００５８】
下記表は、製品Ｐ１乃至Ｐ４及び実施例１の組成物Ａに関する交差周波数ｆｃの値を組み合せて示したものである。
【表７】
【００５９】
（前述の）マズッコ、ディらの出版物によれば、汚染されていない滑液の交差周波数（０．４１Ｈｚ）は、歩行（０．７Ｈｚ）及び走行（３Ｈｚ）中の、膝で観測される周波数より低いことが知られている。
【００６０】
製品Ｐ１乃至Ｐ３に関して、交差周波数は３Ｈｚよりも高く、従って、製品は膝が動い
ているとき、衝撃の吸収を可能にする強い弾性を有さない。
【００６１】
製品Ｐ４はとても低い交差周波数を有し、弾性率は、０．１−１０Ｈｚの全周波数幅にわたる粘性率よりも高い。従って、膝が動いているときの弾性は高いが、しかし患者が休息している際の関節の潤滑性はあまり効果的ではない。
【００６２】
実施例７：３種の商用の関節内補充療法用製品及び本発明によって得られた製剤の耐分解性比較
試験した製品は次の通りである。
【表８】
【００６３】
分解試験は実施例４に記載されている方法に従って実施した。
０．７ＨｚのパラメーターＧ’の値を徐々に追跡した。
上記のようにして得られたレオロジー曲線は図１０である。
本発明によるゲルは、試験された３種の商用の製品よりも有意にゆっくりと分解されるようになったことに注目する。
【００６４】
実施例８：強いヒアルロン酸／ポリオール親和性の実証
ヒアルロン酸及びポリオール間の強い親和性、及びそれゆえのポリオールによるゲルの長期間の保護を実証するために、透析によるポリオールの放出の追跡研究を実施した。
【００６５】
製剤Ｅ（非架橋のＮａＨＡ２０ｍｇ／ｍＬ及びソルビトール４０ｍｇ／ｍＬに基づいたゲル−実施例１）５ｇを透析膜（Ｎｏ．１）（スペクトラ／ポア（商標登録）、ＭＷＣＯ：１２−１４０００）中に注入した。
【００６６】
ソルビトール４０ｍｇ／ｍＬを含むリン酸緩衝液５ｇを２番目の透過膜（Ｎｏ．２）（スペクトラ／ポア（商標登録）、ＭＷＣＯ：１２−１４０００）−Ｎｏ．１の透析膜と同じ程度、中に注入した。
【００６７】
これらの膜は、磁気で攪拌しながら精製水（＝透過浴）５０ｇを含む個々のボトルに置いた。ゲル又は緩衝液を含む膜の外側へのソルビトールの放出に関する動態を追跡するために異なる時間で透過浴において、ＨＰＬＣによってソルビトール濃度の測定を実施した。
【００６８】
時間を追った、ソルビトール濃度の追跡曲線が図１１である。
【００６９】
ゲル中のソルビトールの放出のための動態は有意に緩衝液中のそれよりゆっくりである。
【００７０】
この研究は、ゲル中に存在するヒアルロン酸及びポリオール間の相乗作用を促進する：強いヒアルロン酸／ポリオール親和性は、ポリオールが長期にわたってゲル中に存在することを可能にし、及びゲルに関するポリオールの保護容量は変性に対するゲルの強い長期間の耐性を有することを可能にする。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００７１】
【非特許文献１】「ヒアルロナン及びその誘導体の化学的、生物学的、及び医学的適用」、ヴェナ−グレン インターナショナル シリーズ、７２巻
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然由来の他のポリサッカライドの有無に関わらずヒアルロン酸（又はその塩の一種）及び一種以上のポリオールからなるゲル形態の、殺菌された注射用水性製剤に関する。この注射用製剤は、関節変性の治療において関節腔に使用される。
【背景技術】
【０００２】
関節は、二つの骨を結合し、お互いに対して可動性が得られるようにする接合である。
【０００３】
滑膜関節は特に手足において最も数の多い関節である。これら関節において、骨は、粘性及び弾性であり、並びに滑液と呼ばれる体液で満たされた腔を経て、結合される。
【０００４】
滑液は関節の良好な作動及び保護に関与する。それは、制約はあるものの、関節の潤滑又は衝撃の吸収を可能にする、滑液粘弾性の特性が与えられている、ポリサッカライドであるヒアルロン酸からなる。
【０００５】
膝の変形性関節症（特に肥満、遺伝、外傷、・・・のような原因による変性）のような関節変性の場合、滑液は変性し（ヒアルロン酸の濃度及び分子量の減少）、及びこの変性は関節の潤滑及び衝撃の吸収のための滑液の容量を減少させる。
【０００６】
関節内補充療法（ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ）による治療は、不足した滑液を置き換えるために関節へゲルを注射することからなる。この関節内補充療法は痛みを緩和又は抑制することができ、そして関節の可動性を復元するために寄与することができる。
【０００７】
現在市販されている関節内補充療法用製品はヒアルロン酸を含むゲルである。これらゲルは動物性又は非動物性由来のヒアルロン酸に基づき得、及び架橋（例として、シンビスク（Ｓｙｎｖｉｓｃ）：登録商標、デュロラン（Ｄｕｒｏｌａｎ）：登録商標）、又は非架橋（例として、シノクロム（Ｓｙｎｏｃｒｏｍ）：登録商標、アルトラム（Ａｒｔｈｒｕｍ）：登録商標、ルブラビスク（Ｌｕｂｒａｖｉｓｃ）：登録商標、ストラクトバイアル（Ｓｔｒｕｃｔｏｖｉａｌ）：登録商標）であり得る。
【０００８】
ヒアルロン酸ベースのゲルの残留は関節において低い（数時間から数日）ことは、当業者によく知られている。ローランの、「ヒアルロナン及びその誘導体の化学的、生物学的、及び医学的適用」、ヴェナ−グレン インターナショナル シリーズ（Ｗｅｎｎｅｒ−Ｇｒｅｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｅｒｉｅｓ）、７２巻によると、ウサギ関節における半減期は、１％ヒアルロナン溶液では１２時間であり、及び０．５％ヒランビー（Ｈｙｌａｎ Ｂ）では９日間であった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
この低い残留（関節内のゲルの急速な吸収の動態）はヒアルロン酸の（解重合による）分解によって明らかにされる。関節内のヒアルロン酸の分解の主要因はラジカル分解、３７℃での熱分解、及び機械的な分解（酵素分解は関節内の分解の重要な要因ではない）である。関節内補充療法の治療有効性は関節内におけるヒアルロン酸の滞留時間よりも長く持続するけれども、関節内のヒアルロン酸に基づくゲルの残留は製品の有効性の影響を与える顕著なパラメーターである。斯様に、関節内のヒアルロン酸ベースのゲルの滞留時間
が長ければ長いほど、関節内補充療法（痛みの減少、可動性を得る）はより効果的である。よって、関節内のゲルの滞留時間（残留）の増加はヒアルロン酸ベースのゲルを使用した関節内補充療法による治療の有効性を増加させるための重要な点である。
【００１０】
ヒアルロン酸の濃度の増加、高分子量のヒアルロン酸の使用及びヒアルロン酸の架橋／グラフト技術がヒアルロン酸ベースのゲルの残留を高めることを可能にすることは、当業者によく知られている。しかしながら、上述した種々のパラメーターの最適化はヒアルロン酸ベースのゲルの残留が関節腔において有意に増加することを可能にするほど充分であるように見えない（市場で入手できる現在の関節内補充療法用ゲルの関節内における半減期は最大でも数日のみである）。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
全く予期しえず及び驚くべきである開発において、以下のことが明らかにされた：
− ヒアルロン酸を基にした殺菌された水性製剤中のポリオールの存在は、このゲルの耐分解性を著しく高めることを可能にする
− 殺菌されたゲル内におけるヒアルロン酸とポリオールの強い親和性は、ゲルの外側へのポリオールの放出のためにゆったりとした動態を包含している：ヒアルロン酸とポリオール間のこの親和性は、ポリオールによるゲルの長期間にわたる効果的な保護を相乗作用によりともなう。
− ヒアルロン酸とポリオールの水性製剤の特定の組成物にとって、殺菌することは、汚染されていない滑液の粘弾性特性を実質的に再生する全く驚くべきである粘弾性をこのゲルに与える−ゲルのこれら特有のレオロジー特性は“ヒアルロン酸／ポリオール”相乗効果によって引き起こされる分解への耐性というに特性により長期間維持される。
【発明の効果】
【００１２】
それゆえ、本発明は、天然由来の他のポリサッカライドの有無に関わらずヒアルロン酸（又はその塩の一種）及び一種以上のポリオールからなるゲル形態の、殺菌された注射用水性製剤からなる。症例（実施例１及び３参照）において、関節変性の治療に使用されるこの製剤は、滑液に近いレオロジー、及び増加された耐分解性を常に示す。
【００１３】
実施例４は、後に示すラジカル、耐熱及び機械的試験を受けた際の、ヒアルロン酸ベースのゲル及びポリオールの最も良い耐性を示している。分解に対するこのゲルの最もよい耐性は関節腔へ注射されたゲルの長期残留を可能にする。
【００１４】
実施例５はヒアルロン酸ベースのゲル及びポリオールの熱分解への最もよい耐性を示す。このゲルの熱分解への最もよい耐性は関節腔へ注射されたゲルの長期残留及び使用前の製品の保管期間中における製剤の良好な安定化（製品の期限切れに関して重要なポイント）を可能にする。
【００１５】
実施例８はヒアルロン酸及びポリオール間の強い親和性を実証する。関節に注射された、ヒアルロン酸及びポリオールの強い親和性は相乗作用によって分解に対してゲルのよりよい長期間耐性を可能にする。実際に、関節にポリオール溶液を注射した場合、自然な浄化は関節から分子（＝ポリオール）をすばやく排出することになる。ポリオールをともなったヒアルロン酸ベースのゲルの場合、ヒアルロン酸とポリオール間の強い親和性により、ゲルの外側へのポリオールの素早い放出（すなわち、関節の外への素早い排出）が抑えられ、及びこうして分解に対するポリオールによるゲルの効果的な長期間の保護が可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は組成物Ａのゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図２】図２は組成物Ｂのゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図３】図３は組成物Ｃのゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図４】図４は組成物Ｄのゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図５】図５は組成物Ｅのゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図６】図６は製品Ｐ１のゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図７】図７は製品Ｐ２のゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図８】図８は製品Ｐ３のゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図９】図９は商用製品Ｐ４のゲルの粘性率及び弾性率を示すグラフである。
【図１０】図１０はゲルのフリーラジカルによる分解の動力学を示すグラフである。
【図１１】図１１はヒアルロン酸／ポリオールの親和性を実証するグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
実施例１及び３に、滑液のレオロジーに近いヒアルロン酸ベースのゲル及びポリオールのレオロジーを示す。
【００１８】
マズッコ ディー（ＭＡＺＺＵＣＣＯ，Ｄ）らの出版物、「あらゆる膝関節形成患者の関節液のレオロジー」；ジャーナルオブオルソペディックリサーチ（Journal of Orthopedic Research）、１１５７−１１６３頁、２００２年では、弾性率Ｇ’及び粘性率Ｇ’’間の交差周波数は、汚染されていない（非変形性関節症）膝の滑液に対する０．４１±０．１２Ｈｚと等しいことを示している。この交差周波数の値は、ファム（Ｆａｍ）らの出版物、「滑液のレオロジー特性」、バイオレオロジー、４４巻、５９−７４頁、２００７年によって裏付けられる。この出版物において、ある図は若年者又は高齢者に属する滑液、あるいは変形性関節症の滑液に関して、その率Ｇ’及びＧ’’間の交差周波数が０乃至１０Ｈｚであることが示されている。
− ０．４１Ｈｚより小さい：Ｇ’’＞Ｇ’、滑液は主に粘性作用を有し、このことは患者が休息している際に関節が強く潤滑にされることを意味する、粘性作用を有する。
− ０．４１Ｈｚより大きい：Ｇ’＞Ｇ’’、滑液は主に弾性作用を有し、このことは患者が走る又は跳ねる際に衝撃が強く吸収されることを意味する。
【００１９】
本発明の一態様によると、天然由来の他のポリサッカライドの有無にかかわらずヒアルロン酸（又はその塩の一種）及び一種以上のポリオールからなるゲルは、殺菌した後、０．４１Ｈｚに近い弾性率Ｇ’及び粘度率Ｇ’’の交差周波数ｆｃを有する。このように、該ゲルは滑液の粘弾性に近い粘弾性を有している。
【００２０】
結果として、本発明の一態様によると、
− ｆｃより小さい：Ｇ’’＞Ｇ’、ゲルは主に粘性作用を有し、このことは休息時に関節が効果的に潤滑されることを意味する。
− ｆｃより大きい：Ｇ’＞Ｇ’’、ゲルは主に弾性作用を有し、このことは患者が走る又は跳ねる際に、衝撃を効果的に吸収すること（関節の保護）を意味する。
【００２１】
本発明の一態様によると、交差周波数は０乃至１０Ｈｚ、好ましくは０．４１±０．４１Ｈｚである。それ故に、この種のレオロジーは関節、特に膝、腰又は小関節、の機械的な制約に適している。従って、それは、膝又は他の関節の関節内補充療法による変形性関節症の治療において非常に有利である。
【００２２】
それ故、本発明は、天然由来の他のポリサッカライドの有無に係わらず、１−１００ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸（又はその塩の一種）及び０．０００１−１００ｍｇ／ｍＬの一種以上のポリールからなる、滅菌された、ゲル形態の注射用水性製剤の使用に関する。この注射用製剤は、関節変性の治療において関節腔に使用される。
【００２３】
ヒアルロン酸は、好ましくはバイオ発酵によって得られ、同時に動物由来から得る事も可能である。その分子量は、０．１乃至１０×１０6ダルトン及び好ましくは２乃至３×
１０6ダルトンである。
【００２４】
ヒアルロン酸の濃度は１乃至１００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１０乃至２５ｍｇ／ｍＬである。
【００２５】
ヒアルロン酸と組み合わせて使用することができる天然由来のポリサッカライドは、例えば、コンドロイチン硫酸塩、ケラチン、ケラチン硫酸塩、ヘパリン、ヘパリン硫酸塩、セルロース及びそれらの誘導体、キトサン、キサンタン、アルギン酸塩、及びそれら個々の塩総てから選択される。
【００２６】
天然由来のポリサッカライドと同様に、ヒアルロン酸は先行技術に記載された、架橋／グラフト技術によって、架橋又は非架橋、グラフト又は非グラフト化され得る。
【００２７】
ポリオールは、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、ラクチトール、マルチトール又はグルコースの様なその他の環状物から選択される。
【００２８】
ポリオール濃度は０．０００１乃至１００ｍｇ／ｍＬ及び好ましくは１５乃至４５ｍｇ／ｍＬである。
【００２９】
使用される水溶液は、好ましくは緩衝液である。この緩衝液の組成物は、要求される物理化学的特性（ｐＨ、オスモル濃度）及びレオロジー的特性を有するように選択される。
【００３０】
選択された緩衝液は、好ましくはリン酸緩衝液である。
【００３１】
本発明によると、製剤は当業者に公知の、及び好ましくはオートクレーブを用いた技術によって殺菌される。
【００３２】
本発明による製剤は関節内へ注射することによって使用され、その容量は、治療される関節の性質に基づいて、０．１乃至２０ｍＬであり得る。
【００３３】
例として、本発明により製造することができる２種の粘弾性ゲル製剤は以下のようにして供給される。
− ヒアルロン酸及びグリセロールに基づいた粘弾性ゲル
リン酸緩衝液中に２０ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸（分子量２．５×１０6ダルトン）及
び２０ｍｇ／ｍＬのグリセロールを含む殺菌された溶液。
− ヒアルロン酸及びソルビトールに基づいた粘弾性ゲル
リン酸緩衝液中に２０ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸（分子量２．５×１０6ダルトン）及
び４０ｍｇ／ｍＬのソルビトールを含む殺菌された溶液。
【実施例】
【００３４】
実施例は本発明を説明するためにあるが、しかし上述の発明を制限するためのものではない。下記実施例において製造される製剤は、ポリオールと共に非架橋の又は架橋したヒアルロン酸ナトリウム（ＮａＨＡ）に基づいたゲルである。
【００３５】
非架橋の又は架橋したゲルの製造は当業者によって公知の技術に従って実施した。これらゲルの製造に使用されるヒアルロン酸ナトリウムは２．５×１０6ダルトンに相当する
分子量を有している。架橋したゲルの場合、使用される架橋剤はＢＤＤＥであり、使用さ
れる架橋度の定義は：質量（ＢＤＤＥ）／質量（乾燥ＮａＨＡ）である。
【００３６】
ゲルにおけるポリオールの取り込みは、非架橋又は架橋したゲル中にポリオールの必要な量を添加し、そしてそれをスパチュラで１０分間（最終ゲルの１００ｇに対して）混合することによって実施した。
【００３７】
製造したゲルをガラスシリンジに満たし、続いて湿式加熱（Ｔ＝１２１℃）で殺菌した。
【００３８】
レオロジー測定をするために使用した粘弾性測定装置（ｒｈｅｏｍｅｔｅｒ）は、４０ｍｍのフラットジオメトリー、１０００ミクロンの間隔、及び３７℃の分析温度を備えたＡＲ１０００（ティーエイ インスツルメント社製）である。
【００３９】
ポリオールの計測はＨＰＬＣウルティメイト３０００（ダイオネクス社製）及びイオン交換カラムによって実施した。
【００４０】
実施例１：本発明による殺菌された注射用製剤の製造
製剤Ａ：グリセロールをともなった非架橋のＮａＨＡに基づいたゲル
− ２．５×１０6ダルトンのＮａＨＡ１５ｍｇ
− グリセロール２０ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
製剤Ｂ：グリセロールをともなった非架橋のＮａＨＡに基づいたゲル
− ２．５×１０6ダルトンのＮａＨＡ２０ｍｇ
− グリセロール２０ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
製剤Ｃ：プロピレングリコールをともなった非架橋のＮａＨＡに基づいたゲル
− ２．５×１０6ダルトンのＮａＨＡ２０ｍｇ
− プロピレングリコール１５ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
製剤Ｄ：マンニトールをともなった非架橋のＮａＨＡに基づいたゲル
− ２．５×１０6ダルトンのＮａＨＡ２０ｍｇ
− マンニトール１５ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
製剤Ｅ：ソルビトールをともなった非架橋のＮａＨＡに基づいたゲル
− ２．５×１０6ダルトンのＮａＨＡ２０ｍｇ
− ソルビトール４０ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
製剤Ｆ：ソルビトールをともなった架橋したＮａＨＡに基づいたゲル
− ２．５×１０6ダルトン、架橋度６％のＮａＨＡ１８ｍｇ
− ソルビトール５０ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
【００４１】
実施例２：実施例１の製剤の物理化学的特性
【表１】
【表２】
【００４２】
製剤Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ及びＦは等浸透圧であり、及び中性ｐＨを有している。
【００４３】
実施例３：実施例１の組成物のレオロジー的特性
製剤Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥの粘弾性は、周波数（図１乃至図５参照）に基づいて粘度率（Ｇ’’）及び弾性率（Ｇ’）の斬新的変化を測定することよって特徴付けられる。
これら５種の製剤にとって、率Ｇ’及び率Ｇ’’の交差周波数は、汚染されていない滑液のそれに近いことに注目する。
下記の表は、個々の製剤及び汚染されていない滑液の交差周波数ｆｃを提供する。
【表３】
【００４４】
本発明に説明されているように
− ｆｃより小さい：Ｇ’’＞Ｇ’、ゲルは主に粘性作用を有し、このことは休息時に関節が効果的に潤滑されることを意味する。
− ｆｃよりおおきい：Ｇ’＞Ｇ’’、ゲルは主に弾性作用を有し、患者が走る又は跳ねた際に衝撃を効果的に吸収することを意味する。
【００４５】
実施例４：実施例１の製剤の耐分解性
ＮａＨＡ−ベースのゲルにおけるポリオールの存在がラジカルによるゲルの分解を減少させ得るということを示すために、熱的作用及び機械的な作用、ポリオールをともなったＮａＨＡ−ベースのゲル（実施例１の組成物）の分解に対する耐性、及びポリオールをともなわないＮａＨＡ−ベースのゲル（比較ゲル）の分解に対する耐性を比較した。
【００４６】
実施例１の製剤Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥに対して、ポリオールを含まないＮａＨＡベースの比較ゲルは、ＮａＨＡ（リン酸緩衝液中、分子量２．５×１０6ダルトン）２０ｍｇ／ｍＬ
を含む非架橋のＮａＨＡベースのゲルである−組成物Ｇ。
【００４７】
実施例１の組成物Ｆに対して、ポリオールを含まないＮａＨＡベースの参考ゲルは、ＮａＨＡ（リン酸緩衝液中、架橋する前には分子量２．５×１０6ダルトン）１８ｍｇ／ｍ
Ｌを含む架橋したＮａＨＡベースのゲルである−組成物Ｈ。
【００４８】
変性試験は、試験のために酸化剤を試験されるゲルに添加し、一分間、スパチュラで混合を攪拌して均質化し、３７℃までにし、さらに０．３％変形させて実施した。
【００４９】
このパラメーターがゲルの段階的な分解と同じ意味で、時間と共に増加する点に注目する。製剤Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ及びＨに対してｔ＝０及びｔ＝１５分で測定されたこの値を、下記表に提示する。
【表４】
【００５０】
本発明に記載されているように、個々の製剤Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥはポリオールを含まないゲル（製剤Ｇ）の分解耐性よりも有意に高い分解耐性をもっている。同様に、製剤Ｆは、対応するポリオールを含まないゲル（組成物Ｈ）の分解耐性よりも有意に高い分解耐性をもっている。。
【００５１】
従って、ポリオールはゲルを分解から有効に保護している。
【００５２】
実施例５：ポリオールの有無にかかわらない製剤の促進老化研究
２つの製剤に４０℃の熱促進老化試験を行った。
− 実施例１の製剤Ｂ：グリセロールをともなったヒアルロン酸に基づいた溶液
− アルコールの添加なしの製剤Ｇ（実施例４に記載）
− ２．５×１０6ダルトンのヒアルロン酸２０ｍｇ
− リン酸緩衝液１ｍＬにとって充分な量
【００５３】
ゼロ粘度（ゼロせん断時粘度）の測定及び弾性率Ｇ’及び粘性率Ｇ’’間の交差周波数ｆｃの測定を、３回（ｔ＝０、７日後、２６日後）実施した。
得られた結果を、下記表に示す。
【表５】
*ＮＤ＝測定値なし
【００５４】
促進老化試験の間、ゼロ粘度の低下及び交差周波数のｆｃの減少は、製剤Ｂ（本発明に従う製剤）の場合の方が、ポリオールを含まない製剤（製剤Ｇ）の場合よりも少ない。
【００５５】
実施例６：４種の市販されている関節内補充療法用製品及び本発明に従って得られた製剤のレオロジー比較
試験した製品は以下の通りである。
【表６】
【００５６】
５種のゲルの試験において、図６乃至図９は、周波数に基づいた粘性率（Ｇ’’）及び弾性率（Ｇ’）を与える。
【００５７】
実施例１によるゲルのみが、汚染されていない滑液の交差周波数（０．４１Ｈｚ）に近い交差周波数（０．５０Ｈｚ）を有していることに注目する。
【００５８】
下記表は、製品Ｐ１乃至Ｐ４及び実施例１の組成物Ａに関する交差周波数ｆｃの値を組み合せて示したものである。
【表７】
【００５９】
（前述の）マズッコ、ディらの出版物によれば、汚染されていない滑液の交差周波数（０．４１Ｈｚ）は、歩行（０．７Ｈｚ）及び走行（３Ｈｚ）中の、膝で観測される周波数より低いことが知られている。
【００６０】
製品Ｐ１乃至Ｐ３に関して、交差周波数は３Ｈｚよりも高く、従って、製品は膝が動い
ているとき、衝撃の吸収を可能にする強い弾性を有さない。
【００６１】
製品Ｐ４はとても低い交差周波数を有し、弾性率は、０．１−１０Ｈｚの全周波数幅にわたる粘性率よりも高い。従って、膝が動いているときの弾性は高いが、しかし患者が休息している際の関節の潤滑性はあまり効果的ではない。
【００６２】
実施例７：３種の商用の関節内補充療法用製品及び本発明によって得られた製剤の耐分解性比較
試験した製品は次の通りである。
【表８】
【００６３】
分解試験は実施例４に記載されている方法に従って実施した。
０．７ＨｚのパラメーターＧ’の値を徐々に追跡した。
上記のようにして得られたレオロジー曲線は図１０である。
本発明によるゲルは、試験された３種の商用の製品よりも有意にゆっくりと分解されるようになったことに注目する。
【００６４】
実施例８：強いヒアルロン酸／ポリオール親和性の実証
ヒアルロン酸及びポリオール間の強い親和性、及びそれゆえのポリオールによるゲルの長期間の保護を実証するために、透析によるポリオールの放出の追跡研究を実施した。
【００６５】
製剤Ｅ（非架橋のＮａＨＡ２０ｍｇ／ｍＬ及びソルビトール４０ｍｇ／ｍＬに基づいたゲル−実施例１）５ｇを透析膜（Ｎｏ．１）（スペクトラ／ポア（商標登録）、ＭＷＣＯ：１２−１４０００）中に注入した。
【００６６】
ソルビトール４０ｍｇ／ｍＬを含むリン酸緩衝液５ｇを２番目の透過膜（Ｎｏ．２）（スペクトラ／ポア（商標登録）、ＭＷＣＯ：１２−１４０００）−Ｎｏ．１の透析膜と同じ程度、中に注入した。
【００６７】
これらの膜は、磁気で攪拌しながら精製水（＝透過浴）５０ｇを含む個々のボトルに置いた。ゲル又は緩衝液を含む膜の外側へのソルビトールの放出に関する動態を追跡するために異なる時間で透過浴において、ＨＰＬＣによってソルビトール濃度の測定を実施した。
【００６８】
時間を追った、ソルビトール濃度の追跡曲線が図１１である。
【００６９】
ゲル中のソルビトールの放出のための動態は有意に緩衝液中のそれよりゆっくりである。
【００７０】
この研究は、ゲル中に存在するヒアルロン酸及びポリオール間の相乗作用を促進する：強いヒアルロン酸／ポリオール親和性は、ポリオールが長期にわたってゲル中に存在することを可能にし、及びゲルに関するポリオールの保護容量は変性に対するゲルの強い長期間の耐性を有することを可能にする。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００７１】
【非特許文献１】「ヒアルロナン及びその誘導体の化学的、生物学的、及び医学的適用」、ヴェナ−グレン インターナショナル シリーズ、７２巻
【特許請求の範囲】
【請求項１】
関節腔で使用され、ヒアルロン酸又はその塩の一種及び所望により一種以上の天然由来の他のポリサッカライド、及び一種以上のポリオールを含むゲル形態の殺菌された注射用水性製剤であって、ヒアルロン酸又はその塩の一種、所望により一種以上の天然由来の他のポリサッカライド、及び一種以上のポリオールを含む水性組成物を調製することによって、そして次いで該組成物を殺菌することによって得られる、殺菌された注射用水性製剤。
【請求項２】
前記ヒアルロン酸が１−１００ｍｇ／ｍＬで含まれ、及び前記ポリオールが０．０００１−１００ｍｇ／ｍＬで含まれること、並びに得られたゲルが０乃至１０Ｈｚ、好ましくは０．４１±０．４１Ｈｚの、弾性率Ｇ’及び粘性率Ｇ’’の交差周波数を有し、それによって高周波数でＧ’がＧ’’より大きいことを特徴とする、請求項１に記載のゲル形態の、殺菌された注射用水性製剤。
【請求項３】
前記ヒアルロン酸が非架橋であるか、又は本質的に非架橋である、請求項１又は２に記載の製剤。
【請求項４】
前記ヒアルロン酸が架橋している、請求項１又は２に記載の製剤。
【請求項５】
ヒアルロン酸又はその塩の一種の濃度が１０乃至２５ｍｇ／ｍＬであり、及びポリオールの濃度が１５乃至４５ｍｇ／ｍＬである、請求項１又は３のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６】
前記ヒアルロン酸（又はその塩の一種）は単独で又は混合されて０．１乃至１０×１０6ダルトンの分子量であり、及び前記ポリオールは単独で又は混合物で、グリセロール、
プロピレングリコール、ソルビトール、マンニトール、又はグルコースである、請求項１乃至５のいずれかに記載の製剤。
【請求項７】
前記ヒアルロン酸が２乃至３×１０6ダルトンの分子量を有している、請求項１乃至６
の何れかに記載の製剤。
【請求項８】
前記ヒアルロン酸濃度が２０ｍｇ／ｍＬであり、及びグリセロールの濃度が２０ｍｇ／ｍＬである、請求項１乃至７の何れかに記載の製剤。
【請求項９】
前記ヒアルロン酸濃度が２０ｍｇ／ｍＬであり、及びソルビトールの濃度が４０ｍｇ／ｍＬである、請求項１乃至７の何れかに記載の製剤。
【請求項１０】
前記殺菌がオートクレーブ中で行われる、請求項１乃至９の何れかに記載の製剤。
【請求項１１】
ヒアルロン酸又はその塩の一種、所望により天然由来の一種又はいくつかの他のポリサッカライド、及び一種以上のポリオールを含む水性組成物を調製すること、並びに斯様に得られた組成物を殺菌することからなる工程を含む、請求項１乃至１０の何れかに記載のゲル形態の、殺菌された注射用水性製剤の製造方法。
【請求項１２】
前記殺菌がオートクレーブ中で行われる、請求項１１に記載の製造方法。
【請求項１３】
関節変性の治療における関節内注射のための、請求項１乃至１０の何れかに記載の製剤の使用。
【請求項１４】
前記製剤が０．１乃至２０ｍＬの割合で注射される、請求項１３に記載の使用。
【請求項１】
関節腔で使用され、ヒアルロン酸又はその塩の一種及び所望により一種以上の天然由来の他のポリサッカライド、及び一種以上のポリオールを含むゲル形態の殺菌された注射用水性製剤であって、ヒアルロン酸又はその塩の一種、所望により一種以上の天然由来の他のポリサッカライド、及び一種以上のポリオールを含む水性組成物を調製することによって、そして次いで該組成物を殺菌することによって得られる、殺菌された注射用水性製剤。
【請求項２】
前記ヒアルロン酸が１−１００ｍｇ／ｍＬで含まれ、及び前記ポリオールが０．０００１−１００ｍｇ／ｍＬで含まれること、並びに得られたゲルが０乃至１０Ｈｚ、好ましくは０．４１±０．４１Ｈｚの、弾性率Ｇ’及び粘性率Ｇ’’の交差周波数を有し、それによって高周波数でＧ’がＧ’’より大きいことを特徴とする、請求項１に記載のゲル形態の、殺菌された注射用水性製剤。
【請求項３】
前記ヒアルロン酸が非架橋であるか、又は本質的に非架橋である、請求項１又は２に記載の製剤。
【請求項４】
前記ヒアルロン酸が架橋している、請求項１又は２に記載の製剤。
【請求項５】
ヒアルロン酸又はその塩の一種の濃度が１０乃至２５ｍｇ／ｍＬであり、及びポリオールの濃度が１５乃至４５ｍｇ／ｍＬである、請求項１又は３のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６】
前記ヒアルロン酸（又はその塩の一種）は単独で又は混合されて０．１乃至１０×１０6ダルトンの分子量であり、及び前記ポリオールは単独で又は混合物で、グリセロール、
プロピレングリコール、ソルビトール、マンニトール、又はグルコースである、請求項１乃至５のいずれかに記載の製剤。
【請求項７】
前記ヒアルロン酸が２乃至３×１０6ダルトンの分子量を有している、請求項１乃至６
の何れかに記載の製剤。
【請求項８】
前記ヒアルロン酸濃度が２０ｍｇ／ｍＬであり、及びグリセロールの濃度が２０ｍｇ／ｍＬである、請求項１乃至７の何れかに記載の製剤。
【請求項９】
前記ヒアルロン酸濃度が２０ｍｇ／ｍＬであり、及びソルビトールの濃度が４０ｍｇ／ｍＬである、請求項１乃至７の何れかに記載の製剤。
【請求項１０】
前記殺菌がオートクレーブ中で行われる、請求項１乃至９の何れかに記載の製剤。
【請求項１１】
ヒアルロン酸又はその塩の一種、所望により天然由来の一種又はいくつかの他のポリサッカライド、及び一種以上のポリオールを含む水性組成物を調製すること、並びに斯様に得られた組成物を殺菌することからなる工程を含む、請求項１乃至１０の何れかに記載のゲル形態の、殺菌された注射用水性製剤の製造方法。
【請求項１２】
前記殺菌がオートクレーブ中で行われる、請求項１１に記載の製造方法。
【請求項１３】
関節変性の治療における関節内注射のための、請求項１乃至１０の何れかに記載の製剤の使用。
【請求項１４】
前記製剤が０．１乃至２０ｍＬの割合で注射される、請求項１３に記載の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【公表番号】特表２０１０−５３１８６３（Ｐ２０１０−５３１８６３Ａ）
【公表日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１４０４３（Ｐ２０１０−５１４０４３）
【出願日】平成２０年７月２日（２００８．７．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００８／０００９４８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０２４６７０
【国際公開日】平成２１年２月２６日（２００９．２．２６）
【出願人】（５０６０３２３６９）アンタイス エス．エイ． (6)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月２日（２００８．７．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００８／０００９４８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０２４６７０
【国際公開日】平成２１年２月２６日（２００９．２．２６）
【出願人】（５０６０３２３６９）アンタイス エス．エイ． (6)
【Ｆターム（参考）】
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