非天然アミノ酸フェニルセレノシステインを含有するタンパク質の遺伝的にプログラムされた発現
本発明は、非天然アミノ酸フェニルセレノシステインを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）などの真正細菌宿主細胞内で生成されたタンパク質に組み込める、ｔＲＮＡおよびアミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼの直交対に関する。本発明は、例えば新規な直交性アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼ、新規なシンセターゼ分子をコードするポリヌクレオチド、新規なシンセターゼを同定して作成する方法、非天然アミノ酸フェニルセレノシステインおよび翻訳系を含有するタンパク質を生成する方法を提供するがこれに限定されるものではない。本発明は、タンパク質中のフェニルセレノシステイン残基を標的とした変性を通じて変性タンパク質（例えば脂質付加タンパク質）を生成する方法をさらに提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）フェニルセレノシステインである第１の非天然アミノ酸、
（ｂ）第１の直交性アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼ（Ｏ−ＲＳ）、および
（ｃ）第１の直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）
を含んでなり、前記第１のＯ−ＲＳが、前記第１のＯ−ｔＲＮＡを前記フェニルセレノシステインで優先的にアミノアシル化する、翻訳系。
【請求項２】
前記第１のＯ−ＲＳが、前記Ｏ−ｔＲＮＡと、前記フェニルセレノシステインと、配列番号４、６または８のアミノ酸配列を含んでなるアミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼとを含んでなる翻訳系について観察される効率の少なくとも５０％の効率で、前記第１のＯ−ｔＲＮＡを前記フェニルセレノシステインで優先的にアミノアシル化する、請求項１に記載の翻訳系。
【請求項３】
前記第１のＯ−ＲＳが、配列番号４、６、８で記載されるアミノ酸配列とその保存的変異型とからなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項１に記載の翻訳系。
【請求項４】
前記第１のＯ−ｔＲＮＡがアンバー抑圧遺伝子ｔＲＮＡである、請求項１に記載の翻訳系。
【請求項５】
前記第１のＯ−ｔＲＮＡが、配列番号１で記載されるポリヌクレオチド配列を含んでなり、またはそれによってコードされる、請求項１に記載の翻訳系。
【請求項６】
対象とするタンパク質をコードする核酸をさらに含んでなり、前記核酸が少なくとも１つのセレクターコドンを含んでなり、前記セレクターコドンが前記第１のＯ−ｔＲＮＡによって認識される、請求項１に記載の翻訳系。
【請求項７】
第２のＯ−ＲＳおよび第２のＯ−ｔＲＮＡをさらに含んでなり、第２のＯ−ＲＳが第２のＯ−ｔＲＮＡを第１の非天然アミノ酸とは異なる第２の非天然アミノ酸で優先的にアミノアシル化し、第２のＯ−ｔＲＮＡが第１のＯ−ｔＲＮＡによって認識されるセレクターコドンとは異なるセレクターコドンを認識する、請求項６に記載の翻訳系。
【請求項８】
前記第１の非天然アミノ酸、前記第１のＯ−ＲＳ、および前記第１のＯ−ｔＲＮＡを含んでなる宿主細胞を含んでなる、請求項１に記載の翻訳系。
【請求項９】
前記宿主細胞が真正細菌細胞である、請求項８に記載の翻訳系。
【請求項１０】
前記真正細菌細胞が大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞である、請求項９に記載の翻訳系。
【請求項１１】
前記宿主細胞が前記第１のＯ−ＲＳをコードするポリヌクレオチドを含んでなる、請求項８に記載の翻訳系。
【請求項１２】
前記ポリヌクレオチドが配列番号５、７または９で記載されるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１１に記載の翻訳系。
【請求項１３】
前記宿主細胞が前記第１のＯ−ｔＲＮＡをコードするポリヌクレオチドを含んでなる、請求項８に記載の翻訳系。
【請求項１４】
（ａ）（ｉ）フェニルセレノシステインである第１の非天然アミノ酸、
（ｉｉ）第１の直交性アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼ（Ｏ−ＲＳ）、
（ｉｉｉ）第１の直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）、および
（ｉｖ）タンパク質をコードする核酸
を含んでなり、前記第１のＯ−ＲＳが前記第１のＯ−ｔＲＮＡを前記フェニルセレノシステインで優先的にアミノアシル化し、前記核酸が前記第１のＯ−ｔＲＮＡによって認識される少なくとも１つのセレクターコドンを含んでなる、翻訳系を提供するステップと、
（ｂ）前記セレクターコドンに応答して、前記タンパク質の翻訳中に、前記非天然アミノ酸を前記タンパク質中の前記選択された位置に組み込み、それによって前記非天然アミノ酸を選択された位置に含んでなるタンパク質を生成するステップと
を含んでなる、選択された位置に非天然アミノ酸を含んでなるタンパク質を翻訳系中で生成する方法。
【請求項１５】
前記第１のＯ−ＲＳが、前記Ｏ−ｔＲＮＡと、前記フェニルセレノシステインと、配列番号４、６または８のアミノ酸配列を含んでなるアミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼとを含んでなる翻訳系について観察される効率の少なくとも５０％の効率で、前記第１のＯ−ｔＲＮＡを前記フェニルセレノシステインで優先的にアミノアシル化する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記翻訳系が前記Ｏ−ＲＳをコードするポリヌクレオチドを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
翻訳系を提供する前記ステップが、配列番号４、６、８で記載されるアミノ酸配列とその保存的変異型とからなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるＯ−ＲＳを提供するステップを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
第１の直交性アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼを提供する前記ステップが、部位特異的変異誘発によって野生型アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼのアミノ酸結合ポケットを変異させるステップと、前記Ｏ−ｔＲＮＡを前記非天然アミノ酸で優先的にアミノアシル化する得られたＯ−ＲＳを選択し、それによって前記第１の直交性アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼを提供するステップを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記選択するステップが、前記部位特異的変異誘発に続いて生成した複数の突然変異アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼ分子を含んでなるプールから、前記Ｏ−ＲＳをポジティブに選択し、およびネガティブに選択するステップを含んでなる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
翻訳系を提供する前記ステップが、前記Ｏ−ｔＲＮＡをコードするポリヌクレオチドを提供するステップを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
翻訳系を提供する前記ステップが、アンバー抑圧遺伝子ｔＲＮＡであるＯ−ｔＲＮＡを提供するステップを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
翻訳系を提供する前記ステップが、前記Ｏ−ｔＲＮＡをコードするかまたはそれを含んでなる核酸を提供するステップを含んでなり、前記核酸が配列番号１で記載されるポリヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２３】
翻訳系を提供する前記ステップが、前記Ｏ−ＲＳをコードする核酸を提供するステップを含んでなり、前記核酸が配列番号５、７または９で記載されるポリヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２４】
翻訳系を提供する前記ステップが、アンバーセレクターコドンを含んでなる核酸を提供するステップを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２５】
さらに前記タンパク質が前記第１の非天然アミノ酸とは異なる第２の非天然アミノ酸を含んでなり、前記翻訳系が第２のＯ−ＲＳおよび第２のＯ−ｔＲＮＡをさらに含んでなり、第２のＯ−ＲＳが第２のＯ−ｔＲＮＡを第１の非天然アミノ酸とは異なる第２の非天然アミノ酸で優先的にアミノアシル化し、第２のＯ−ｔＲＮＡが第１のＯ−ｔＲＮＡによって認識されるセレクターコドンとは異なる核酸中のセレクターコドンを認識する、請求項１４に記載の方法。
【請求項２６】
翻訳系を提供する前記ステップが、宿主細胞を提供するステップを含んでなり、前記宿主細胞が前記第１の非天然アミノ酸、前記第１のＯ−ＲＳ、前記第１のＯ−ｔＲＮＡ、および前記核酸を含んでなり、前記組み込むステップが前記宿主細胞を培養するステップを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２７】
前記宿主細胞が真正細菌宿主細胞である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記真正細菌宿主細胞が大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）宿主細胞である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記宿主細胞が前記Ｏ−ＲＳをコードする核酸を含んでなる、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記Ｏ−ＲＳをコードする前記核酸が、配列番号５、７または９で記載されるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
（ｃ）前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の前記選択された位置で反応させ、前記選択された位置にデヒドロアラニンを含んでなるタンパク質を生成するステップをさらに含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項３２】
前記反応させるステップが酸化的脱離による、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記反応させるステップが前記フェニルセレノシステインを過酸化水素に曝露するステップを含んでなる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
（ａ）（ｉ）フェニルセレノシステイン非天然アミノ酸、
（ｉｉ）直交性アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼ（Ｏ−ＲＳ）、
（ｉｉｉ）直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）、および
（ｉｖ）タンパク質をコードする核酸
を含んでなり、前記Ｏ−ＲＳが前記Ｏ−ｔＲＮＡを前記フェニルセレノシステインで優先的にアミノアシル化し、前記核酸が前記Ｏ−ｔＲＮＡによって認識される前記選択された位置にセレクターコドンを含んでなる、翻訳系を提供するステップと、
（ｂ）前記セレクターコドンに応答して、前記タンパク質の翻訳中に、フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の前記選択された位置に組み込むステップと、
（ｃ）前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の選択された位置で反応させて、選択された位置にデヒドロアラニンを含んでなるタンパク質を生成するステップと、
（ｄ）前記デヒドロアラニンを前記タンパク質中の選択された位置で脂質部分と反応させて、タンパク質中の選択された位置に脂質およびアミノ酸部分を含んでなるタンパク質を生成するステップと
を含んでなる、選択された位置に脂質部分を含んでなるタンパク質を翻訳系中で生成する方法。
【請求項３５】
前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の選択された位置で反応させる前記ステップが、酸化的脱離による、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の選択された位置で反応させる前記ステップが、前記フェニルセレノシステインを過酸化水素に曝露するステップを含んでなる、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記脂質部分が、チオパルミチン酸、ファルネシルメルカプタン、および１−ヘキサデカンチオールからなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記脂質付加アミノ酸部分が、パルミトイルシステイン、ファルネシルシステイン、およびＳ−ヘキサデシルシステインからなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
前記デヒドロアラニンを前記タンパク質中の選択された位置で反応させる前記ステップが、マイケル付加反応による、請求項３４に記載の方法。
【請求項４０】
（ａ）（ｉ）フェニルセレノシステイン非天然アミノ酸、
（ｉｉ）直交性アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼ（Ｏ−ＲＳ）、
（ｉｉｉ）直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）、および
（ｉｖ）タンパク質をコードする核酸
を含んでなり、前記Ｏ−ＲＳが前記フェニルセレノシステインで前記Ｏ−ｔＲＮＡを優先的にアミノアシル化し、前記核酸が前記Ｏ−ｔＲＮＡによって認識される前記選択された位置にセレクターコドンを含んでなる、翻訳系を提供するステップと、
（ｂ）前記セレクターコドンに応答して、前記タンパク質の翻訳中に、前記フェニルセレノシステイン非天然アミノ酸を前記タンパク質中の前記選択された位置に組み込むステップと、
（ｃ）前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の選択された位置で反応させ、それによって前記デヒドロアラニン非天然アミノ酸を選択された位置に含んでなる前記タンパク質を生成するステップ
を含んでなる、デヒドロアラニン非天然アミノ酸を選択された位置に含んでなるタンパク質を翻訳系中で生成する方法。
【請求項４１】
前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の選択された位置で反応させる前記ステップが、酸化的脱離による、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の選択された位置で反応させる前記ステップが、前記フェニルセレノシステインを過酸化水素に曝露するステップを含んでなる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
配列番号４、６、８で記載されるアミノ酸配列とその保存的変異型とからなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる、ポリペプチドを含んでなる組成物。
【請求項４４】
前記保存的変異型ポリペプチドが、前記Ｏ−ｔＲＮＡと、前記非天然アミノ酸と、配列番号４、６または８のアミノ酸配列を含んでなるアミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼとを含んでなる翻訳系について観察される効率の少なくとも５０％の効率で、同族直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）を非天然アミノ酸でアミノアシル化する、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
前記組成物がポリペプチドを含んでなる細胞を含んでなる、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４６】
請求項４３に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項４７】
前記ポリヌクレオチドが配列番号５、７または９のヌクレオチド配列を含んでなる、請求項４６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４８】
請求項４６に記載のポリヌクレオチドを含んでなるベクター。
【請求項４９】
請求項４６に記載のポリヌクレオチドを含んでなる発現ベクター。
【請求項５０】
請求項４６に記載のポリヌクレオチドを含んでなるベクターを含んでなる細胞。
【請求項５１】
配列番号５、７または９で記載されるヌクレオチド配列を含んでなる、ポリヌクレオチドを含んでなる組成物。
【請求項１】
（ａ）フェニルセレノシステインである第１の非天然アミノ酸、
（ｂ）第１の直交性アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼ（Ｏ−ＲＳ）、および
（ｃ）第１の直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）
を含んでなり、前記第１のＯ−ＲＳが、前記第１のＯ−ｔＲＮＡを前記フェニルセレノシステインで優先的にアミノアシル化する、翻訳系。
【請求項２】
前記第１のＯ−ＲＳが、前記Ｏ−ｔＲＮＡと、前記フェニルセレノシステインと、配列番号４、６または８のアミノ酸配列を含んでなるアミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼとを含んでなる翻訳系について観察される効率の少なくとも５０％の効率で、前記第１のＯ−ｔＲＮＡを前記フェニルセレノシステインで優先的にアミノアシル化する、請求項１に記載の翻訳系。
【請求項３】
前記第１のＯ−ＲＳが、配列番号４、６、８で記載されるアミノ酸配列とその保存的変異型とからなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項１に記載の翻訳系。
【請求項４】
前記第１のＯ−ｔＲＮＡがアンバー抑圧遺伝子ｔＲＮＡである、請求項１に記載の翻訳系。
【請求項５】
前記第１のＯ−ｔＲＮＡが、配列番号１で記載されるポリヌクレオチド配列を含んでなり、またはそれによってコードされる、請求項１に記載の翻訳系。
【請求項６】
対象とするタンパク質をコードする核酸をさらに含んでなり、前記核酸が少なくとも１つのセレクターコドンを含んでなり、前記セレクターコドンが前記第１のＯ−ｔＲＮＡによって認識される、請求項１に記載の翻訳系。
【請求項７】
第２のＯ−ＲＳおよび第２のＯ−ｔＲＮＡをさらに含んでなり、第２のＯ−ＲＳが第２のＯ−ｔＲＮＡを第１の非天然アミノ酸とは異なる第２の非天然アミノ酸で優先的にアミノアシル化し、第２のＯ−ｔＲＮＡが第１のＯ−ｔＲＮＡによって認識されるセレクターコドンとは異なるセレクターコドンを認識する、請求項６に記載の翻訳系。
【請求項８】
前記第１の非天然アミノ酸、前記第１のＯ−ＲＳ、および前記第１のＯ−ｔＲＮＡを含んでなる宿主細胞を含んでなる、請求項１に記載の翻訳系。
【請求項９】
前記宿主細胞が真正細菌細胞である、請求項８に記載の翻訳系。
【請求項１０】
前記真正細菌細胞が大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞である、請求項９に記載の翻訳系。
【請求項１１】
前記宿主細胞が前記第１のＯ−ＲＳをコードするポリヌクレオチドを含んでなる、請求項８に記載の翻訳系。
【請求項１２】
前記ポリヌクレオチドが配列番号５、７または９で記載されるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１１に記載の翻訳系。
【請求項１３】
前記宿主細胞が前記第１のＯ−ｔＲＮＡをコードするポリヌクレオチドを含んでなる、請求項８に記載の翻訳系。
【請求項１４】
（ａ）（ｉ）フェニルセレノシステインである第１の非天然アミノ酸、
（ｉｉ）第１の直交性アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼ（Ｏ−ＲＳ）、
（ｉｉｉ）第１の直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）、および
（ｉｖ）タンパク質をコードする核酸
を含んでなり、前記第１のＯ−ＲＳが前記第１のＯ−ｔＲＮＡを前記フェニルセレノシステインで優先的にアミノアシル化し、前記核酸が前記第１のＯ−ｔＲＮＡによって認識される少なくとも１つのセレクターコドンを含んでなる、翻訳系を提供するステップと、
（ｂ）前記セレクターコドンに応答して、前記タンパク質の翻訳中に、前記非天然アミノ酸を前記タンパク質中の前記選択された位置に組み込み、それによって前記非天然アミノ酸を選択された位置に含んでなるタンパク質を生成するステップと
を含んでなる、選択された位置に非天然アミノ酸を含んでなるタンパク質を翻訳系中で生成する方法。
【請求項１５】
前記第１のＯ−ＲＳが、前記Ｏ−ｔＲＮＡと、前記フェニルセレノシステインと、配列番号４、６または８のアミノ酸配列を含んでなるアミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼとを含んでなる翻訳系について観察される効率の少なくとも５０％の効率で、前記第１のＯ−ｔＲＮＡを前記フェニルセレノシステインで優先的にアミノアシル化する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記翻訳系が前記Ｏ−ＲＳをコードするポリヌクレオチドを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
翻訳系を提供する前記ステップが、配列番号４、６、８で記載されるアミノ酸配列とその保存的変異型とからなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるＯ−ＲＳを提供するステップを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
第１の直交性アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼを提供する前記ステップが、部位特異的変異誘発によって野生型アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼのアミノ酸結合ポケットを変異させるステップと、前記Ｏ−ｔＲＮＡを前記非天然アミノ酸で優先的にアミノアシル化する得られたＯ−ＲＳを選択し、それによって前記第１の直交性アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼを提供するステップを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記選択するステップが、前記部位特異的変異誘発に続いて生成した複数の突然変異アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼ分子を含んでなるプールから、前記Ｏ−ＲＳをポジティブに選択し、およびネガティブに選択するステップを含んでなる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
翻訳系を提供する前記ステップが、前記Ｏ−ｔＲＮＡをコードするポリヌクレオチドを提供するステップを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
翻訳系を提供する前記ステップが、アンバー抑圧遺伝子ｔＲＮＡであるＯ−ｔＲＮＡを提供するステップを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
翻訳系を提供する前記ステップが、前記Ｏ−ｔＲＮＡをコードするかまたはそれを含んでなる核酸を提供するステップを含んでなり、前記核酸が配列番号１で記載されるポリヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２３】
翻訳系を提供する前記ステップが、前記Ｏ−ＲＳをコードする核酸を提供するステップを含んでなり、前記核酸が配列番号５、７または９で記載されるポリヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２４】
翻訳系を提供する前記ステップが、アンバーセレクターコドンを含んでなる核酸を提供するステップを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２５】
さらに前記タンパク質が前記第１の非天然アミノ酸とは異なる第２の非天然アミノ酸を含んでなり、前記翻訳系が第２のＯ−ＲＳおよび第２のＯ−ｔＲＮＡをさらに含んでなり、第２のＯ−ＲＳが第２のＯ−ｔＲＮＡを第１の非天然アミノ酸とは異なる第２の非天然アミノ酸で優先的にアミノアシル化し、第２のＯ−ｔＲＮＡが第１のＯ−ｔＲＮＡによって認識されるセレクターコドンとは異なる核酸中のセレクターコドンを認識する、請求項１４に記載の方法。
【請求項２６】
翻訳系を提供する前記ステップが、宿主細胞を提供するステップを含んでなり、前記宿主細胞が前記第１の非天然アミノ酸、前記第１のＯ−ＲＳ、前記第１のＯ−ｔＲＮＡ、および前記核酸を含んでなり、前記組み込むステップが前記宿主細胞を培養するステップを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２７】
前記宿主細胞が真正細菌宿主細胞である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記真正細菌宿主細胞が大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）宿主細胞である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記宿主細胞が前記Ｏ−ＲＳをコードする核酸を含んでなる、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記Ｏ−ＲＳをコードする前記核酸が、配列番号５、７または９で記載されるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
（ｃ）前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の前記選択された位置で反応させ、前記選択された位置にデヒドロアラニンを含んでなるタンパク質を生成するステップをさらに含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項３２】
前記反応させるステップが酸化的脱離による、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記反応させるステップが前記フェニルセレノシステインを過酸化水素に曝露するステップを含んでなる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
（ａ）（ｉ）フェニルセレノシステイン非天然アミノ酸、
（ｉｉ）直交性アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼ（Ｏ−ＲＳ）、
（ｉｉｉ）直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）、および
（ｉｖ）タンパク質をコードする核酸
を含んでなり、前記Ｏ−ＲＳが前記Ｏ−ｔＲＮＡを前記フェニルセレノシステインで優先的にアミノアシル化し、前記核酸が前記Ｏ−ｔＲＮＡによって認識される前記選択された位置にセレクターコドンを含んでなる、翻訳系を提供するステップと、
（ｂ）前記セレクターコドンに応答して、前記タンパク質の翻訳中に、フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の前記選択された位置に組み込むステップと、
（ｃ）前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の選択された位置で反応させて、選択された位置にデヒドロアラニンを含んでなるタンパク質を生成するステップと、
（ｄ）前記デヒドロアラニンを前記タンパク質中の選択された位置で脂質部分と反応させて、タンパク質中の選択された位置に脂質およびアミノ酸部分を含んでなるタンパク質を生成するステップと
を含んでなる、選択された位置に脂質部分を含んでなるタンパク質を翻訳系中で生成する方法。
【請求項３５】
前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の選択された位置で反応させる前記ステップが、酸化的脱離による、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の選択された位置で反応させる前記ステップが、前記フェニルセレノシステインを過酸化水素に曝露するステップを含んでなる、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記脂質部分が、チオパルミチン酸、ファルネシルメルカプタン、および１−ヘキサデカンチオールからなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記脂質付加アミノ酸部分が、パルミトイルシステイン、ファルネシルシステイン、およびＳ−ヘキサデシルシステインからなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
前記デヒドロアラニンを前記タンパク質中の選択された位置で反応させる前記ステップが、マイケル付加反応による、請求項３４に記載の方法。
【請求項４０】
（ａ）（ｉ）フェニルセレノシステイン非天然アミノ酸、
（ｉｉ）直交性アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼ（Ｏ−ＲＳ）、
（ｉｉｉ）直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）、および
（ｉｖ）タンパク質をコードする核酸
を含んでなり、前記Ｏ−ＲＳが前記フェニルセレノシステインで前記Ｏ−ｔＲＮＡを優先的にアミノアシル化し、前記核酸が前記Ｏ−ｔＲＮＡによって認識される前記選択された位置にセレクターコドンを含んでなる、翻訳系を提供するステップと、
（ｂ）前記セレクターコドンに応答して、前記タンパク質の翻訳中に、前記フェニルセレノシステイン非天然アミノ酸を前記タンパク質中の前記選択された位置に組み込むステップと、
（ｃ）前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の選択された位置で反応させ、それによって前記デヒドロアラニン非天然アミノ酸を選択された位置に含んでなる前記タンパク質を生成するステップ
を含んでなる、デヒドロアラニン非天然アミノ酸を選択された位置に含んでなるタンパク質を翻訳系中で生成する方法。
【請求項４１】
前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の選択された位置で反応させる前記ステップが、酸化的脱離による、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記フェニルセレノシステインを前記タンパク質中の選択された位置で反応させる前記ステップが、前記フェニルセレノシステインを過酸化水素に曝露するステップを含んでなる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
配列番号４、６、８で記載されるアミノ酸配列とその保存的変異型とからなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる、ポリペプチドを含んでなる組成物。
【請求項４４】
前記保存的変異型ポリペプチドが、前記Ｏ−ｔＲＮＡと、前記非天然アミノ酸と、配列番号４、６または８のアミノ酸配列を含んでなるアミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼとを含んでなる翻訳系について観察される効率の少なくとも５０％の効率で、同族直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）を非天然アミノ酸でアミノアシル化する、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
前記組成物がポリペプチドを含んでなる細胞を含んでなる、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４６】
請求項４３に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項４７】
前記ポリヌクレオチドが配列番号５、７または９のヌクレオチド配列を含んでなる、請求項４６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４８】
請求項４６に記載のポリヌクレオチドを含んでなるベクター。
【請求項４９】
請求項４６に記載のポリヌクレオチドを含んでなる発現ベクター。
【請求項５０】
請求項４６に記載のポリヌクレオチドを含んでなるベクターを含んでなる細胞。
【請求項５１】
配列番号５、７または９で記載されるヌクレオチド配列を含んでなる、ポリヌクレオチドを含んでなる組成物。
【図１】
【図２−１】
【図２−２】
【図２−３】
【図２−１】
【図２−２】
【図２−３】
【公表番号】特表２００９−５２９８７７（Ｐ２００９−５２９８７７Ａ）
【公表日】平成２１年８月２７日（２００９．８．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５００４４９（Ｐ２００９−５００４４９）
【出願日】平成１９年３月１３日（２００７．３．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００６３８２
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１０９０３５
【国際公開日】平成１９年９月２７日（２００７．９．２７）
【出願人】（５９３０５２７８５）ザ スクリップス リサーチ インスティテュート (91)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年８月２７日（２００９．８．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年３月１３日（２００７．３．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００６３８２
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１０９０３５
【国際公開日】平成１９年９月２７日（２００７．９．２７）
【出願人】（５９３０５２７８５）ザ スクリップス リサーチ インスティテュート (91)
【Ｆターム（参考）】
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