食品用乳酸培養培地及びそれを用いた食品用乳酸菌の培養方法
【課題】 各種食品に使用される食品用乳酸菌を安全にかつ効率よく培養することができる食品用乳酸菌培養培地の提供等。
【解決手段】 ＧＹＰ培地において、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏに代えてマンガン含有食用酵母を含有することを特徴とする食用乳酸菌培養培地である。合計１００ｍＬ当り、グルコース １．０ｇ、酵母エキス １．０ｇ、ペプトン ０．５ｇ、酢酸ナトリウム・３Ｈ２Ｏ ０．２ｇ、金属塩溶液 ０．５ｍＬ、及び２．５ｍｇ／ｍＬのツイーン８０溶液 １．０ｍＬを含有してなり、前記金属塩溶液が、１ｍＬ当り、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ４０ｍｇ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ２ｍｇ、ＮａＣｌ ２ｍｇを含み、マンガン含有食用酵母をＭｎ濃度が２．４６ｐｐｍとなる量含む食用乳酸菌培養培地が好ましい。
【解決手段】 ＧＹＰ培地において、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏに代えてマンガン含有食用酵母を含有することを特徴とする食用乳酸菌培養培地である。合計１００ｍＬ当り、グルコース １．０ｇ、酵母エキス １．０ｇ、ペプトン ０．５ｇ、酢酸ナトリウム・３Ｈ２Ｏ ０．２ｇ、金属塩溶液 ０．５ｍＬ、及び２．５ｍｇ／ｍＬのツイーン８０溶液 １．０ｍＬを含有してなり、前記金属塩溶液が、１ｍＬ当り、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ４０ｍｇ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ２ｍｇ、ＮａＣｌ ２ｍｇを含み、マンガン含有食用酵母をＭｎ濃度が２．４６ｐｐｍとなる量含む食用乳酸菌培養培地が好ましい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、各種食品に使用される食品用乳酸菌を安全にかつ効率よく培養することができる食品用乳酸菌培養培地、及び、該食品用乳酸菌培養培地を用いて、各種食品に使用される乳酸菌を安全にかつ効率よく培養することができる食品用乳酸菌の培養方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、乳酸菌は、ヨーグルトをはじめとして各種乳製品等の食品に使用されてきている。近時、健康に対する意識が高まってきており、乳酸菌を使用した健康食品の開発が盛んに行われてきている。一方、野菜等に使用される農薬による健康被害に対する問題が注目を集めてきており、食に対する安全性の要求が従来に比べて格段に高まっている。
乳酸菌の培養には、ＧＹＰ培地が基本培地として従来より使用されてきている（非特許文献１参照）。しかし、前記ＧＹＰ培地は、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏを含有しているが、Ｍｎは、わが国においては食品添加物としての使用が認められていない。このため、食の安全性の確保の観点からは、食用乳酸菌を培養するための培地にＭｎを使用しないことが、近時、求められてきている。
ところが、Ｍｎは、乳酸菌の培養には極めて重要な成長因子であり、前記ＧＹＰ培地で使用しなければよいものではなく、Ｍｎを含有しないＧＹＰ培地では、乳酸菌の良好な増殖が得られないという問題がある。
【０００３】
【非特許文献１】小崎道雄監修、「乳酸菌実験マニュアル−分離から同定まで−」、３０、朝倉書店、１９９２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、従来における前記諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、各種食品に使用される食品用乳酸菌を安全にかつ効率よく培養することができる食品用乳酸菌培養培地、及び、該食品用乳酸菌培養培地を用いて、各種食品に使用される乳酸菌を安全にかつ効率よく培養することができる食品用乳酸菌の培養方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
前記課題を解決するための本発明者らが鋭意検討した結果、以下の知見を得た。即ち、乳酸菌培養培地としての基本培地であるＧＹＰ培地において、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏを使用する代わりに、マンガン含有食用酵母を使用し、オートクレーブ滅菌処理して使用すると、食品用乳酸菌を良好に増殖させることができ、食品用乳酸菌を安全にかつ効率よく得ることができる。そして、このとき、マンガン含有食用酵母は、水でオートクレーブ滅菌処理してもその菌体中のＭｎが食品用乳酸菌の増殖に十分に利用可能にならないにもかかわらず、ＧＹＰ倍地中でオートクレーブ滅菌処理するとその菌体中のＭｎが食品用乳酸菌の増殖に十分に利用可能となり、今後、この培地が食品用乳酸菌の培養の基本培地となるという知見である。本願発明は、本願発明者らによるかかる知見に基づき初めてなし得たものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。
【０００６】
＜１＞ ＧＹＰ培地において、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏに代えてマンガン含有食用酵母を含有することを特徴とする食品用乳酸菌培養培地である。
＜２＞ 合計１００ｍＬ当り、グルコース １．０ｇ、酵母エキス １．０ｇ、ペプトン ０．５ｇ、酢酸ナトリウム・３Ｈ２Ｏ ０．２ｇ、金属塩溶液 ０．５ｍＬ、及び２．５ｍｇ／ｍＬのツイーン８０溶液 １．０ｍＬを含有してなり、
前記金属塩溶液が、１ｍＬ当り、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ４０ｍｇ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ２ｍｇ、ＮａＣｌ ２ｍｇを含み、
マンガン含有食用酵母をＭｎ濃度が２．４６ｐｐｍとなる量含む前記＜１＞に記載の食品用乳酸菌培養培地である。
＜３＞ オートクレーブ滅菌処理して使用される前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の食品用乳酸菌培養培地である。
＜４＞ 前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の食品用乳酸菌培養培地を用いて食用乳酸菌を培養することを特徴とする食品用乳酸菌の培養方法である。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によると、従来における前記諸問題を解決することができ、各種食品に使用される食品用乳酸菌を安全にかつ効率よく培養することができる食品用乳酸菌培養培地、及び、該食品用乳酸菌培養培地を用いて、各種食品に使用される乳酸菌を安全にかつ効率よく培養することができる食品用乳酸菌の培養方法を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
（食品用乳酸菌の培養培地及びそれを用いた食品用乳酸菌の培養方法）
本発明の食品用乳酸菌培養培地は、ＧＹＰ培地において、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏに代えてマンガン含有食用酵母を含有する。
本発明の食品用乳酸菌の培養方法は、本発明の前記食品用乳酸菌培養培地を用いて食品用乳酸菌を培養することを含む。
【０００９】
−ＧＹＰ培地−
前記ＧＹＰ培地は、乳酸菌培養の基本培地として慣用されており、以下の表１に示す組成を有する。
【表１】
【００１０】
−マンガン含有食用酵母−
本発明の食品用乳酸菌培養培地においては、前記ＧＹＰ培地に含まれる、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏに代えて、マンガン含有食用酵母を含有する。
前記マンガン含有食用酵母としては、例えば、特開２００３−１５３６８６号公報に記載のものが好適に挙げられる。該マンガン含有食用酵母としては、適宜培養して得たものであってもよいし、市販品を使用してもよい。前記市販品としては、オリエンタル酵母工業株式会社製の「ミネラル酵母Ｍｎ−Ｆ」などが特に好適に挙げられる。
前記マンガン含有食用酵母は、例えば、マンガンを高濃度に含有する培養液に食用酵母を添加・懸濁させて、これを非増殖的に好気培養することにより、即ち、マンガンが存在する環境のもと、食用酵母の増殖に必要な栄養物質を実質的に存在しない条件で、食用酵母を培養処理することにより得ることができる。
【００１１】
前記マンガンとしては、食用酵母が利用可能であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、無機化合物、有機化合物などの化合物が挙げられる。前記無機化合物としては、例えば、硫酸マンガン、塩化マンガン、酢酸マンガン、硫酸アンモニウムマンガン、炭酸マンガン、などが挙げられる。これらの化合物は、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。前記マンガンの化合物は、培養液に化合物として好適に添加される。
【００１２】
前記培養液に添加するマンガン濃度としては、培養液に対し、５０質量ｐｐｍ程度の薄い濃度から極めて濃い濃度の広い範囲で選択することができるが、前記食用酵母の菌体内を簡便かつ効率的にマンガンを取り込ませる観点からは、２５０〜５，０００質量ｐｐｍが好ましく、１，０００〜３，０００質量ｐｐｍがより好ましい。なお、前記培養液に添加するマンガン濃度は、公知の方法、例えば、原子吸光法により測定することができる。
【００１３】
前記食用酵母としては、ヒトの飲食、動物の飼料、魚類の飼料に多用される酵母であれば特に制限はなく、Saccaromyces cerevisiae、同uvarum、同rouxii、Saccharomycopsis fibligera、その他に属するパン酵母、ビール酵母、ワイン酵母、清酒酵母、アルコール酵母、味噌・醤油酵母、飼料酵母、などが好適に挙げられるが、これらの中でも、パン酵母が特に好ましい。前記食用酵母は、１種単独で培養してもよいし、２種以上を混合して培養してもよい。
【００１４】
前記食用酵母の前記培養液への接種量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、通常、湿菌体として１０〜３０％（Ｗ／Ｖ）程度が菌体の特性、培養操作性、生産効率の諸面から好ましい。
前記食用酵母の培養は、少量であれば坂口フラスコ等を用いて振とう培養により行うことができ、このときの振とう条件としては、特に制限はないが振幅１２ｃｍ程度では１００〜２００ｒｐｍ程度が好ましい。大量であればジャーファーメンターを用いて好適に行うことができる。このときのジャーファーメンターにおける培養条件としては、特に制限はなく適宜決定することができる。
前記培養の温度としては、２８〜３３℃程度であり、時間としては、１〜４０時間程度であり、通気量としては、０〜５ｖｖｍ程度であり、攪拌速度としては、１００〜７００ｒｐｍ程度が好ましい。前記培養液のｐＨとしては、無調製であってもよく、調製する場合は４．０〜８．０程度であるが、培養初期を７．０以上とするのが好ましく、７．０〜８．０に調整するのが、マンガンの菌体内への取り込みが早く、より短い培養時間で高含有量が得られる点で、より好ましい。
【００１５】
こうして得られるマンガン含有食用酵母の菌体内におけるマンガン含有量としては、乾燥菌体当たり、５，０００質量ｐｐｍ以上が好ましく、１０，０００〜５０，０００質量ｐｐｍがより好ましい。
ここで、前記乾燥菌体当たりとは、前記マンガン含有酵母を食品成分試験法に準ずる常圧加熱乾燥法により加熱処理するもので、例えば、１０％濃度の酵母縣濁液を１０５℃で５時間加熱処理して水分を除去した菌体をいう。
前記菌体内におけるマンガン含有量とは、培養終了後の食用酵母を遠心分離等の方法で集菌し、該食用酵母を２５℃のイオン交換水で洗浄して該洗浄液中のマンガン濃度が１質量ｐｐｍ以下となるまで洗浄処理した場合の該食用酵母に含有するマンガン含有量を意味する。即ち、培養終了後の該食用酵母の表面に付着しているだけで該菌体内に取り込まれていないマンガンを完全に近い状態まで食用酵母の表面を洗浄した酵母における乾燥菌体当たりの質量ｐｐｍをいう。更には、前記洗浄済みマンガン含有食用酵母を物理的又は化学的に破砕し、これを２５℃のイオン交換水で再洗浄して洗浄液中のマンガン濃度が１質量ｐｐｍ以下となるまで洗浄した場合の乾燥菌体当たりのマンガン含有量が、破砕を行う前の酵母菌体における乾燥菌体当たりのマンガン含有量の７０質量％以上を保持していることをいう。なお、前記の洗浄水として水道水や蒸留水等を用いることもできるが、マンガンが該酵母の菌体内で安定して含有されていることを確認するためには、該酵母を２５℃のイオン交換水で洗浄することが好ましい。また、前記洗浄液のマンガン濃度及び該酵母菌体内のマンガン含有量は、公知の方法で測定することができ、例えば、原子吸光法により測定することができる。
【００１６】
−食品用乳酸菌−
前記食品用乳酸菌としては、食品用途で使用されているものであれば、特に制限は無く、目的に応じて適宜選択することができ、各種乳酸菌が挙げられる。その具体例としては、Lactobacillus属、Leuconostoc属、Pediococcus属、などが挙げられ、これらの属に含まれる任意の種・株が好適に挙げられる。
【００１７】
−食品用乳酸菌の培養−
前記食品用乳酸菌を本発明の食品用乳酸菌培養培地を用いて培養する場合、培養の前に前記食品用乳酸菌培養培地を調製し、オートクレーブ滅菌処理する必要がある。
前記食品用乳酸菌培養培地の調製は、常法に従って上記表１の組成の溶液を調製すればよい。ただし、本発明の前記食品用乳酸菌培養培地においては、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏを使用せず、その代わりに前記マンガン含有食用酵母を使用する。
このとき、該マンガン含有食用酵母の前記食品用乳酸菌培養培地における含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、マンガン（Ｍｎ）の含有量（Ｍｎ換算含有量）が、一般の前記ＧＹＰ培地と略同じ含有量となる量であるのが好ましく、該ＧＹＰ培地よりも高濃度となる量であってもよい。なお、前記ＧＹＰ液体培地とＭｎ濃度が同一となるように前記マンガン含有酵母を前記食品用乳酸菌培養培地に添加する場合の具体例として、前記ＧＹＰ液体培地中のＭｎＳＯ４由来のＭｎ濃度は２．４６ｐｐｍであるので、オリエンタル酵母工業株式会社製のマンガン含有食用酵母（製品名；ミネラル酵母Ｍｎ−Ｆ、Ｌｏｔ．０７０６１９、Ｍｎ含量１．０５２重量％）を２３．４ｍｇ／１００ｍＬとなるよう添加することができる。
前記オートクレーブ滅菌条件としては、常法に従って行うことができ、特に制限はなく、目的に応じて適宜条件を選択することができる。
【００１８】
前記食品用乳酸菌の前記食品用乳酸菌培養培地への接種量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、通常、湿菌体として１０〜３０％（Ｗ／Ｖ）程度が菌体の特性、培養操作性、生産効率の諸面から好ましい。
前記食品用乳酸菌の培養は、少量であれば坂口フラスコ等を用いて振とう培養により行うことができ、このときの振とう条件としては、特に制限はないが振幅１２ｃｍ程度では１００〜２００ｒｐｍ程度が好ましい。大量であればジャーファーメンターを用いて好適に行うことができる。このときのジャーファーメンターにおける培養条件としては、特に制限はなく適宜決定することができる。
前記培養の条件としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、温度としては、例えば、２８〜３３℃程度であり、時間としては、例えば、１〜４０時間程度であり、通気量としては、例えば、０〜５ｖｖｍ程度であり、攪拌速度としては、例えば、１００〜７００ｒｐｍ程度が好ましい。前記培養液のｐＨとしては、無調製であってもよく、調製する場合は４．０〜８．０程度であるが、培養初期を７．０以上とするのが好ましく、７．０〜８．０に調整するのがより好ましい。
【００１９】
以上の本発明の前記食品用乳酸菌培養培地を用い、本発明の前記食品用乳酸菌の培養方法により、培養して得られた前記食品用乳酸菌は、培養後に、そのまま使用してもよいが、分離、洗浄等されて、各種の食品に好適に使用される。
前記食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ヨーグルト等の乳製品、パン類、菓子類、麺類、惣菜類、飲料などが挙げられる。
【実施例】
【００２０】
以下に本発明の実施例について説明するが、本発明は以下の実施例に何ら限定されるものではない。
後述の５種類の食品用乳酸菌を、以下の３種類の培地を用いて培養を行った。即ち、使用した培地としては、（１）ＧＹＰ培地、（２）Ｍｎ非含有ＧＹＰ培地（前記ＧＹＰ培地においてＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏを含まない以外は該ＧＹＰ培地と同一組成のもの）、（３）Ｍｎ含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地（前記ＧＹＰ培地においてＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏに代えてマンガン含有食用酵母（オリエンタル酵母工業株式会社製、ミネラル酵母Ｍｎ−Ｆ）を含む以外は該ＧＹＰ培地と同一組成のもの）の３種類である。なお、前記（３）Ｍｎ含有食用酵母を含有するＧＹＰ液体培地においては、前記ＧＹＰ培地中のＭｎＳＯ４由来のＭｎ濃度は２．４６ｐｐｍであるので、前記Ｍｎ含有食用酵母（オリエンタル酵母工業株式会社製、製品名ミネラル酵母Ｍｎ−Ｆ、Ｌｏｔ．０７０６１９、Ｍｎ含量１．０５２重量％）が２３．４ｍｇ／１００ｍＬとなるように添加された。よって、該（３）Ｍｎ含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地におけるＭｎ含有量は、前記（１）ＧＹＰ培地におけるＭｎ含有量と、実質的に同一となっている。
これら３種の培地に対し、食品用乳酸菌を接種する前に、それぞれｐＨを６．８に調整した後、オートクレーブ処理（１２１℃、１５分）を行った。
＜食品用乳酸菌＞
培養に使用した菌株は、下記の５種類とした。いずれも東京農業大学応用生物科学部菌株保存室（ＮＲＩＣ）より入手したタイプストレインである。
Ａ）Lactobacillus casei subsp. casei（ＮＲＩＣ１０４２）
Ｂ）Lactobacillus brevis（ＮＲＩＣ１６８４）
Ｃ）Lactobacillus plantarum（ＮＲＩＣ１０６７）
Ｄ）Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides（ＮＲＩＣ１５４１）
Ｅ）Pediococcus pentosaceus（ＮＲＩＣ００９９）
【００２１】
上記５種の食品用乳酸菌を、５ｍＬのＧＹＰ培地５つにそれぞれ１白金耳ずつ接種し、３０℃で２日間静置培養（前培養）した。得られた５種の培養液全量を、２００ｍＬのＧＹＰ培地に添加（接種）し、３０℃で２日間静置培養した。その後、生理食塩水を用いて洗浄を行い、培地成分を除去して得られた５種の菌体懸濁液を、前記（１）ＧＹＰ培地、前記（２）Ｍｎ非含有ＧＹＰ培地、前記（３）Ｍｎ含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地の３種に接種して本培養を行った。このときの接種量は、Ｏ．Ｄ．６６０ｎｍ＝０．０５となる量とした。本培養は、温度が３０℃で、静置培養とした。なお、培養中に経時的にサンプリングを行ない、培養液のＯ．Ｄ．６６０ｎｍの濁度とｐＨ値とを測定した。なお、培養液のＯ．Ｄ．６６０ｎｍの濁度は、分光光度計（ＨＩＴＡＣＨＩ社製 Ｕ−１０００）を用い、ｐＨ値は、ｐＨメータ（ＭＥＴＴＬＥＲ ＴＯＬＥＤＯ社製 ＭＰ２３０）を用いて測定した。
【００２２】
全１５種の培養液のＯ．Ｄ．６６０ｎｍの濁度及びｐＨ値の測定結果・推移を図１に示した。図１において、「●」は、前記（１）ＧＹＰ培地を使用した場合を意味し、「▲」は、前記（２）マンガン非含有ＧＹＰ培地を使用した場合を意味し、「×」は、前記（３）マンガン含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地を使用した場合を意味する。そして、図１の左図（グラフ）は、増殖曲線を表し、右図（グラフ）は、左図の増殖曲線に対応したｐＨ推移曲線を表す。図１におけるＡ（上から１番目）は、前記Ａ）Lactobacillus casei subsp. casei（ＮＲＩＣ１０４２）を増殖させた場合の増殖曲線とｐＨ推移曲線を表し、Ｂ（上から２番目）は、前記Ｂ）Lactobacillus brevis（ＮＲＩＣ１６８４）を増殖させた場合の増殖曲線とｐＨ推移曲線を表し、Ｃ（上から３番目）は、前記Ｃ）Lactobacillus plantarum （ＮＲＩＣ１０６７）を増殖させた場合の増殖曲線とｐＨ推移曲線を表し、Ｄ（上から４番目）は、Ｄ）Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides（ＮＲＩＣ１５４１）を増殖させた場合の増殖曲線とｐＨ推移曲線を表し、Ｅ（上から５番目）は、Ｅ）Pediococcus pentosaceus（ＮＲＩＣ００９９）を増殖させた場合の増殖曲線とｐＨ推移曲線を表す。
【００２３】
図１の結果から、明らかなように、いずれの菌種においても、前記（２）Ｍｎ非含有ＧＹＰ培地では、増殖が悪化する傾向が観察された。一方、前記（３）マンガン含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地では、前記（１）ＧＹＰ培地と比較しても遜色のない良好な増殖が確認された。そして、前記（３）マンガン含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地では、食品添加物として認可されていないマンガンを使用していないので、培養の結果として得られた食品用乳酸菌の安全性が高く、好適に各種食品等に使用することができる。
【００２４】
次に、前記マンガン含有食用酵母が、単に、前記オートクレーブ滅菌処理を行った結果、その菌体中に含まれるマンガンが遊離し、これを前記食品用乳酸菌が利用可能になったものであるかどうかを検証した。
前記（３）マンガン含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地と、該ＧＹＰ培地と同量の該マンガン含有食用酵母を含有し、かつ該ＧＹＰ培地と同量の液量の水（ｍｉｌｌｉＱ水）（以下、これを「水懸濁液」という。）とにおける、前記オートクレーブ滅菌処理の前後での遊離マンガン（Ｍｎ）重量を測定した。
なお、遊離マンガン（Ｍｎ）重量は、前記培地又は前記水懸濁液を０．４５μｍフィルター（Ｗｈａｔｍａｎ社製 ＰｕｒａｄｉｓｃＴＭ２５ＡＳ）で菌体を濾過除去した濾液のマンガン濃度（遊離マンガン濃度）、及び、前記培地又は前記水懸濁液にＨＣｌを添加してｐＨを１以下に調整することで全てのＭｎを抽出し、０．４５μｍフィルターで菌体を濾過除去した濾液のマンガン濃度（全抽出したマンガン濃度）を、ＩＣＰ発光分析装置（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社製 Ｏｐｔｉｍａ２１００ＤＶ）を用いて測定し、「遊離マンガン濃度」を「全抽出したマンガン濃度」で除した商として算出した。結果を表２に示した。
【００２５】
表２の結果より、前記オートクレーブ滅菌処理前における遊離マンガン重量は、前記（３）マンガン含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地、前記水懸濁液ともに約３０重量％であった。しかし、前記オートクレーブ滅菌処理後における遊離マンガン重量は、前記（３）マンガン含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地では、９６重量％であったのに対し、前記水懸濁液では、５６重量％であるにとどまり、前記水懸濁液では、前記オートクレーブ滅菌処理を行っても、菌体中のマンガンが酵母細胞片と結合し遊離せず、培養する前記食品用乳酸菌の増殖に利用できなかったことが推測された。前記マンガン含有食用酵母の菌体内に含有されているマンガンが、前記ＧＹＰ培地中に含まれた状態で前記オートクレーブ滅菌処理された場合にのみ、菌体から遊離し、前記食品用乳酸菌の増殖に利用可能になり、その結果、安全にかつ効率よく前記食品用乳酸菌が得られることは、本発明者らが初めて見出したものである。
【００２６】
【表２】
【産業上の利用可能性】
【００２７】
本発明の食品用乳酸菌培養培地及び食品用乳酸菌の培養方法は、乳酸菌培養の基本培地としてのＧＹＰ培地に代りに、食品用乳酸菌を培養する際の基本培地として利用することができ、各種食品に使用される各種乳酸菌を培養するのに好適に利用される。そして、ここで得られた乳酸菌は、各種食品、飲料等に安全にかつ好適に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１は、食品用乳酸菌の増殖曲線（左図）と、それに対応した培地中のｐＨ推移曲線（右図）である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、各種食品に使用される食品用乳酸菌を安全にかつ効率よく培養することができる食品用乳酸菌培養培地、及び、該食品用乳酸菌培養培地を用いて、各種食品に使用される乳酸菌を安全にかつ効率よく培養することができる食品用乳酸菌の培養方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、乳酸菌は、ヨーグルトをはじめとして各種乳製品等の食品に使用されてきている。近時、健康に対する意識が高まってきており、乳酸菌を使用した健康食品の開発が盛んに行われてきている。一方、野菜等に使用される農薬による健康被害に対する問題が注目を集めてきており、食に対する安全性の要求が従来に比べて格段に高まっている。
乳酸菌の培養には、ＧＹＰ培地が基本培地として従来より使用されてきている（非特許文献１参照）。しかし、前記ＧＹＰ培地は、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏを含有しているが、Ｍｎは、わが国においては食品添加物としての使用が認められていない。このため、食の安全性の確保の観点からは、食用乳酸菌を培養するための培地にＭｎを使用しないことが、近時、求められてきている。
ところが、Ｍｎは、乳酸菌の培養には極めて重要な成長因子であり、前記ＧＹＰ培地で使用しなければよいものではなく、Ｍｎを含有しないＧＹＰ培地では、乳酸菌の良好な増殖が得られないという問題がある。
【０００３】
【非特許文献１】小崎道雄監修、「乳酸菌実験マニュアル−分離から同定まで−」、３０、朝倉書店、１９９２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、従来における前記諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、各種食品に使用される食品用乳酸菌を安全にかつ効率よく培養することができる食品用乳酸菌培養培地、及び、該食品用乳酸菌培養培地を用いて、各種食品に使用される乳酸菌を安全にかつ効率よく培養することができる食品用乳酸菌の培養方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
前記課題を解決するための本発明者らが鋭意検討した結果、以下の知見を得た。即ち、乳酸菌培養培地としての基本培地であるＧＹＰ培地において、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏを使用する代わりに、マンガン含有食用酵母を使用し、オートクレーブ滅菌処理して使用すると、食品用乳酸菌を良好に増殖させることができ、食品用乳酸菌を安全にかつ効率よく得ることができる。そして、このとき、マンガン含有食用酵母は、水でオートクレーブ滅菌処理してもその菌体中のＭｎが食品用乳酸菌の増殖に十分に利用可能にならないにもかかわらず、ＧＹＰ倍地中でオートクレーブ滅菌処理するとその菌体中のＭｎが食品用乳酸菌の増殖に十分に利用可能となり、今後、この培地が食品用乳酸菌の培養の基本培地となるという知見である。本願発明は、本願発明者らによるかかる知見に基づき初めてなし得たものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。
【０００６】
＜１＞ ＧＹＰ培地において、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏに代えてマンガン含有食用酵母を含有することを特徴とする食品用乳酸菌培養培地である。
＜２＞ 合計１００ｍＬ当り、グルコース １．０ｇ、酵母エキス １．０ｇ、ペプトン ０．５ｇ、酢酸ナトリウム・３Ｈ２Ｏ ０．２ｇ、金属塩溶液 ０．５ｍＬ、及び２．５ｍｇ／ｍＬのツイーン８０溶液 １．０ｍＬを含有してなり、
前記金属塩溶液が、１ｍＬ当り、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ４０ｍｇ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ２ｍｇ、ＮａＣｌ ２ｍｇを含み、
マンガン含有食用酵母をＭｎ濃度が２．４６ｐｐｍとなる量含む前記＜１＞に記載の食品用乳酸菌培養培地である。
＜３＞ オートクレーブ滅菌処理して使用される前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の食品用乳酸菌培養培地である。
＜４＞ 前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の食品用乳酸菌培養培地を用いて食用乳酸菌を培養することを特徴とする食品用乳酸菌の培養方法である。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によると、従来における前記諸問題を解決することができ、各種食品に使用される食品用乳酸菌を安全にかつ効率よく培養することができる食品用乳酸菌培養培地、及び、該食品用乳酸菌培養培地を用いて、各種食品に使用される乳酸菌を安全にかつ効率よく培養することができる食品用乳酸菌の培養方法を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
（食品用乳酸菌の培養培地及びそれを用いた食品用乳酸菌の培養方法）
本発明の食品用乳酸菌培養培地は、ＧＹＰ培地において、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏに代えてマンガン含有食用酵母を含有する。
本発明の食品用乳酸菌の培養方法は、本発明の前記食品用乳酸菌培養培地を用いて食品用乳酸菌を培養することを含む。
【０００９】
−ＧＹＰ培地−
前記ＧＹＰ培地は、乳酸菌培養の基本培地として慣用されており、以下の表１に示す組成を有する。
【表１】
【００１０】
−マンガン含有食用酵母−
本発明の食品用乳酸菌培養培地においては、前記ＧＹＰ培地に含まれる、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏに代えて、マンガン含有食用酵母を含有する。
前記マンガン含有食用酵母としては、例えば、特開２００３−１５３６８６号公報に記載のものが好適に挙げられる。該マンガン含有食用酵母としては、適宜培養して得たものであってもよいし、市販品を使用してもよい。前記市販品としては、オリエンタル酵母工業株式会社製の「ミネラル酵母Ｍｎ−Ｆ」などが特に好適に挙げられる。
前記マンガン含有食用酵母は、例えば、マンガンを高濃度に含有する培養液に食用酵母を添加・懸濁させて、これを非増殖的に好気培養することにより、即ち、マンガンが存在する環境のもと、食用酵母の増殖に必要な栄養物質を実質的に存在しない条件で、食用酵母を培養処理することにより得ることができる。
【００１１】
前記マンガンとしては、食用酵母が利用可能であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、無機化合物、有機化合物などの化合物が挙げられる。前記無機化合物としては、例えば、硫酸マンガン、塩化マンガン、酢酸マンガン、硫酸アンモニウムマンガン、炭酸マンガン、などが挙げられる。これらの化合物は、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。前記マンガンの化合物は、培養液に化合物として好適に添加される。
【００１２】
前記培養液に添加するマンガン濃度としては、培養液に対し、５０質量ｐｐｍ程度の薄い濃度から極めて濃い濃度の広い範囲で選択することができるが、前記食用酵母の菌体内を簡便かつ効率的にマンガンを取り込ませる観点からは、２５０〜５，０００質量ｐｐｍが好ましく、１，０００〜３，０００質量ｐｐｍがより好ましい。なお、前記培養液に添加するマンガン濃度は、公知の方法、例えば、原子吸光法により測定することができる。
【００１３】
前記食用酵母としては、ヒトの飲食、動物の飼料、魚類の飼料に多用される酵母であれば特に制限はなく、Saccaromyces cerevisiae、同uvarum、同rouxii、Saccharomycopsis fibligera、その他に属するパン酵母、ビール酵母、ワイン酵母、清酒酵母、アルコール酵母、味噌・醤油酵母、飼料酵母、などが好適に挙げられるが、これらの中でも、パン酵母が特に好ましい。前記食用酵母は、１種単独で培養してもよいし、２種以上を混合して培養してもよい。
【００１４】
前記食用酵母の前記培養液への接種量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、通常、湿菌体として１０〜３０％（Ｗ／Ｖ）程度が菌体の特性、培養操作性、生産効率の諸面から好ましい。
前記食用酵母の培養は、少量であれば坂口フラスコ等を用いて振とう培養により行うことができ、このときの振とう条件としては、特に制限はないが振幅１２ｃｍ程度では１００〜２００ｒｐｍ程度が好ましい。大量であればジャーファーメンターを用いて好適に行うことができる。このときのジャーファーメンターにおける培養条件としては、特に制限はなく適宜決定することができる。
前記培養の温度としては、２８〜３３℃程度であり、時間としては、１〜４０時間程度であり、通気量としては、０〜５ｖｖｍ程度であり、攪拌速度としては、１００〜７００ｒｐｍ程度が好ましい。前記培養液のｐＨとしては、無調製であってもよく、調製する場合は４．０〜８．０程度であるが、培養初期を７．０以上とするのが好ましく、７．０〜８．０に調整するのが、マンガンの菌体内への取り込みが早く、より短い培養時間で高含有量が得られる点で、より好ましい。
【００１５】
こうして得られるマンガン含有食用酵母の菌体内におけるマンガン含有量としては、乾燥菌体当たり、５，０００質量ｐｐｍ以上が好ましく、１０，０００〜５０，０００質量ｐｐｍがより好ましい。
ここで、前記乾燥菌体当たりとは、前記マンガン含有酵母を食品成分試験法に準ずる常圧加熱乾燥法により加熱処理するもので、例えば、１０％濃度の酵母縣濁液を１０５℃で５時間加熱処理して水分を除去した菌体をいう。
前記菌体内におけるマンガン含有量とは、培養終了後の食用酵母を遠心分離等の方法で集菌し、該食用酵母を２５℃のイオン交換水で洗浄して該洗浄液中のマンガン濃度が１質量ｐｐｍ以下となるまで洗浄処理した場合の該食用酵母に含有するマンガン含有量を意味する。即ち、培養終了後の該食用酵母の表面に付着しているだけで該菌体内に取り込まれていないマンガンを完全に近い状態まで食用酵母の表面を洗浄した酵母における乾燥菌体当たりの質量ｐｐｍをいう。更には、前記洗浄済みマンガン含有食用酵母を物理的又は化学的に破砕し、これを２５℃のイオン交換水で再洗浄して洗浄液中のマンガン濃度が１質量ｐｐｍ以下となるまで洗浄した場合の乾燥菌体当たりのマンガン含有量が、破砕を行う前の酵母菌体における乾燥菌体当たりのマンガン含有量の７０質量％以上を保持していることをいう。なお、前記の洗浄水として水道水や蒸留水等を用いることもできるが、マンガンが該酵母の菌体内で安定して含有されていることを確認するためには、該酵母を２５℃のイオン交換水で洗浄することが好ましい。また、前記洗浄液のマンガン濃度及び該酵母菌体内のマンガン含有量は、公知の方法で測定することができ、例えば、原子吸光法により測定することができる。
【００１６】
−食品用乳酸菌−
前記食品用乳酸菌としては、食品用途で使用されているものであれば、特に制限は無く、目的に応じて適宜選択することができ、各種乳酸菌が挙げられる。その具体例としては、Lactobacillus属、Leuconostoc属、Pediococcus属、などが挙げられ、これらの属に含まれる任意の種・株が好適に挙げられる。
【００１７】
−食品用乳酸菌の培養−
前記食品用乳酸菌を本発明の食品用乳酸菌培養培地を用いて培養する場合、培養の前に前記食品用乳酸菌培養培地を調製し、オートクレーブ滅菌処理する必要がある。
前記食品用乳酸菌培養培地の調製は、常法に従って上記表１の組成の溶液を調製すればよい。ただし、本発明の前記食品用乳酸菌培養培地においては、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏを使用せず、その代わりに前記マンガン含有食用酵母を使用する。
このとき、該マンガン含有食用酵母の前記食品用乳酸菌培養培地における含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、マンガン（Ｍｎ）の含有量（Ｍｎ換算含有量）が、一般の前記ＧＹＰ培地と略同じ含有量となる量であるのが好ましく、該ＧＹＰ培地よりも高濃度となる量であってもよい。なお、前記ＧＹＰ液体培地とＭｎ濃度が同一となるように前記マンガン含有酵母を前記食品用乳酸菌培養培地に添加する場合の具体例として、前記ＧＹＰ液体培地中のＭｎＳＯ４由来のＭｎ濃度は２．４６ｐｐｍであるので、オリエンタル酵母工業株式会社製のマンガン含有食用酵母（製品名；ミネラル酵母Ｍｎ−Ｆ、Ｌｏｔ．０７０６１９、Ｍｎ含量１．０５２重量％）を２３．４ｍｇ／１００ｍＬとなるよう添加することができる。
前記オートクレーブ滅菌条件としては、常法に従って行うことができ、特に制限はなく、目的に応じて適宜条件を選択することができる。
【００１８】
前記食品用乳酸菌の前記食品用乳酸菌培養培地への接種量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、通常、湿菌体として１０〜３０％（Ｗ／Ｖ）程度が菌体の特性、培養操作性、生産効率の諸面から好ましい。
前記食品用乳酸菌の培養は、少量であれば坂口フラスコ等を用いて振とう培養により行うことができ、このときの振とう条件としては、特に制限はないが振幅１２ｃｍ程度では１００〜２００ｒｐｍ程度が好ましい。大量であればジャーファーメンターを用いて好適に行うことができる。このときのジャーファーメンターにおける培養条件としては、特に制限はなく適宜決定することができる。
前記培養の条件としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、温度としては、例えば、２８〜３３℃程度であり、時間としては、例えば、１〜４０時間程度であり、通気量としては、例えば、０〜５ｖｖｍ程度であり、攪拌速度としては、例えば、１００〜７００ｒｐｍ程度が好ましい。前記培養液のｐＨとしては、無調製であってもよく、調製する場合は４．０〜８．０程度であるが、培養初期を７．０以上とするのが好ましく、７．０〜８．０に調整するのがより好ましい。
【００１９】
以上の本発明の前記食品用乳酸菌培養培地を用い、本発明の前記食品用乳酸菌の培養方法により、培養して得られた前記食品用乳酸菌は、培養後に、そのまま使用してもよいが、分離、洗浄等されて、各種の食品に好適に使用される。
前記食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ヨーグルト等の乳製品、パン類、菓子類、麺類、惣菜類、飲料などが挙げられる。
【実施例】
【００２０】
以下に本発明の実施例について説明するが、本発明は以下の実施例に何ら限定されるものではない。
後述の５種類の食品用乳酸菌を、以下の３種類の培地を用いて培養を行った。即ち、使用した培地としては、（１）ＧＹＰ培地、（２）Ｍｎ非含有ＧＹＰ培地（前記ＧＹＰ培地においてＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏを含まない以外は該ＧＹＰ培地と同一組成のもの）、（３）Ｍｎ含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地（前記ＧＹＰ培地においてＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏに代えてマンガン含有食用酵母（オリエンタル酵母工業株式会社製、ミネラル酵母Ｍｎ−Ｆ）を含む以外は該ＧＹＰ培地と同一組成のもの）の３種類である。なお、前記（３）Ｍｎ含有食用酵母を含有するＧＹＰ液体培地においては、前記ＧＹＰ培地中のＭｎＳＯ４由来のＭｎ濃度は２．４６ｐｐｍであるので、前記Ｍｎ含有食用酵母（オリエンタル酵母工業株式会社製、製品名ミネラル酵母Ｍｎ−Ｆ、Ｌｏｔ．０７０６１９、Ｍｎ含量１．０５２重量％）が２３．４ｍｇ／１００ｍＬとなるように添加された。よって、該（３）Ｍｎ含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地におけるＭｎ含有量は、前記（１）ＧＹＰ培地におけるＭｎ含有量と、実質的に同一となっている。
これら３種の培地に対し、食品用乳酸菌を接種する前に、それぞれｐＨを６．８に調整した後、オートクレーブ処理（１２１℃、１５分）を行った。
＜食品用乳酸菌＞
培養に使用した菌株は、下記の５種類とした。いずれも東京農業大学応用生物科学部菌株保存室（ＮＲＩＣ）より入手したタイプストレインである。
Ａ）Lactobacillus casei subsp. casei（ＮＲＩＣ１０４２）
Ｂ）Lactobacillus brevis（ＮＲＩＣ１６８４）
Ｃ）Lactobacillus plantarum（ＮＲＩＣ１０６７）
Ｄ）Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides（ＮＲＩＣ１５４１）
Ｅ）Pediococcus pentosaceus（ＮＲＩＣ００９９）
【００２１】
上記５種の食品用乳酸菌を、５ｍＬのＧＹＰ培地５つにそれぞれ１白金耳ずつ接種し、３０℃で２日間静置培養（前培養）した。得られた５種の培養液全量を、２００ｍＬのＧＹＰ培地に添加（接種）し、３０℃で２日間静置培養した。その後、生理食塩水を用いて洗浄を行い、培地成分を除去して得られた５種の菌体懸濁液を、前記（１）ＧＹＰ培地、前記（２）Ｍｎ非含有ＧＹＰ培地、前記（３）Ｍｎ含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地の３種に接種して本培養を行った。このときの接種量は、Ｏ．Ｄ．６６０ｎｍ＝０．０５となる量とした。本培養は、温度が３０℃で、静置培養とした。なお、培養中に経時的にサンプリングを行ない、培養液のＯ．Ｄ．６６０ｎｍの濁度とｐＨ値とを測定した。なお、培養液のＯ．Ｄ．６６０ｎｍの濁度は、分光光度計（ＨＩＴＡＣＨＩ社製 Ｕ−１０００）を用い、ｐＨ値は、ｐＨメータ（ＭＥＴＴＬＥＲ ＴＯＬＥＤＯ社製 ＭＰ２３０）を用いて測定した。
【００２２】
全１５種の培養液のＯ．Ｄ．６６０ｎｍの濁度及びｐＨ値の測定結果・推移を図１に示した。図１において、「●」は、前記（１）ＧＹＰ培地を使用した場合を意味し、「▲」は、前記（２）マンガン非含有ＧＹＰ培地を使用した場合を意味し、「×」は、前記（３）マンガン含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地を使用した場合を意味する。そして、図１の左図（グラフ）は、増殖曲線を表し、右図（グラフ）は、左図の増殖曲線に対応したｐＨ推移曲線を表す。図１におけるＡ（上から１番目）は、前記Ａ）Lactobacillus casei subsp. casei（ＮＲＩＣ１０４２）を増殖させた場合の増殖曲線とｐＨ推移曲線を表し、Ｂ（上から２番目）は、前記Ｂ）Lactobacillus brevis（ＮＲＩＣ１６８４）を増殖させた場合の増殖曲線とｐＨ推移曲線を表し、Ｃ（上から３番目）は、前記Ｃ）Lactobacillus plantarum （ＮＲＩＣ１０６７）を増殖させた場合の増殖曲線とｐＨ推移曲線を表し、Ｄ（上から４番目）は、Ｄ）Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides（ＮＲＩＣ１５４１）を増殖させた場合の増殖曲線とｐＨ推移曲線を表し、Ｅ（上から５番目）は、Ｅ）Pediococcus pentosaceus（ＮＲＩＣ００９９）を増殖させた場合の増殖曲線とｐＨ推移曲線を表す。
【００２３】
図１の結果から、明らかなように、いずれの菌種においても、前記（２）Ｍｎ非含有ＧＹＰ培地では、増殖が悪化する傾向が観察された。一方、前記（３）マンガン含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地では、前記（１）ＧＹＰ培地と比較しても遜色のない良好な増殖が確認された。そして、前記（３）マンガン含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地では、食品添加物として認可されていないマンガンを使用していないので、培養の結果として得られた食品用乳酸菌の安全性が高く、好適に各種食品等に使用することができる。
【００２４】
次に、前記マンガン含有食用酵母が、単に、前記オートクレーブ滅菌処理を行った結果、その菌体中に含まれるマンガンが遊離し、これを前記食品用乳酸菌が利用可能になったものであるかどうかを検証した。
前記（３）マンガン含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地と、該ＧＹＰ培地と同量の該マンガン含有食用酵母を含有し、かつ該ＧＹＰ培地と同量の液量の水（ｍｉｌｌｉＱ水）（以下、これを「水懸濁液」という。）とにおける、前記オートクレーブ滅菌処理の前後での遊離マンガン（Ｍｎ）重量を測定した。
なお、遊離マンガン（Ｍｎ）重量は、前記培地又は前記水懸濁液を０．４５μｍフィルター（Ｗｈａｔｍａｎ社製 ＰｕｒａｄｉｓｃＴＭ２５ＡＳ）で菌体を濾過除去した濾液のマンガン濃度（遊離マンガン濃度）、及び、前記培地又は前記水懸濁液にＨＣｌを添加してｐＨを１以下に調整することで全てのＭｎを抽出し、０．４５μｍフィルターで菌体を濾過除去した濾液のマンガン濃度（全抽出したマンガン濃度）を、ＩＣＰ発光分析装置（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社製 Ｏｐｔｉｍａ２１００ＤＶ）を用いて測定し、「遊離マンガン濃度」を「全抽出したマンガン濃度」で除した商として算出した。結果を表２に示した。
【００２５】
表２の結果より、前記オートクレーブ滅菌処理前における遊離マンガン重量は、前記（３）マンガン含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地、前記水懸濁液ともに約３０重量％であった。しかし、前記オートクレーブ滅菌処理後における遊離マンガン重量は、前記（３）マンガン含有食用酵母を含有するＧＹＰ培地では、９６重量％であったのに対し、前記水懸濁液では、５６重量％であるにとどまり、前記水懸濁液では、前記オートクレーブ滅菌処理を行っても、菌体中のマンガンが酵母細胞片と結合し遊離せず、培養する前記食品用乳酸菌の増殖に利用できなかったことが推測された。前記マンガン含有食用酵母の菌体内に含有されているマンガンが、前記ＧＹＰ培地中に含まれた状態で前記オートクレーブ滅菌処理された場合にのみ、菌体から遊離し、前記食品用乳酸菌の増殖に利用可能になり、その結果、安全にかつ効率よく前記食品用乳酸菌が得られることは、本発明者らが初めて見出したものである。
【００２６】
【表２】
【産業上の利用可能性】
【００２７】
本発明の食品用乳酸菌培養培地及び食品用乳酸菌の培養方法は、乳酸菌培養の基本培地としてのＧＹＰ培地に代りに、食品用乳酸菌を培養する際の基本培地として利用することができ、各種食品に使用される各種乳酸菌を培養するのに好適に利用される。そして、ここで得られた乳酸菌は、各種食品、飲料等に安全にかつ好適に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１は、食品用乳酸菌の増殖曲線（左図）と、それに対応した培地中のｐＨ推移曲線（右図）である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＹＰ培地において、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏに代えてマンガン含有食用酵母を含有することを特徴とする食品用乳酸菌培養培地。
【請求項２】
合計１００ｍＬ当り、グルコース １．０ｇ、酵母エキス １．０ｇ、ペプトン ０．５ｇ、酢酸ナトリウム・３Ｈ２Ｏ ０．２ｇ、金属塩溶液 ０．５ｍＬ、及び２．５ｍｇ／ｍＬのツイーン８０溶液 １．０ｍＬを含有してなり、
前記金属塩溶液が、１ｍＬ当り、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ４０ｍｇ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ２ｍｇ、ＮａＣｌ ２ｍｇを含み、
マンガン含有食用酵母をＭｎ濃度が２．４６ｐｐｍとなる量含む請求項１に記載の食品用乳酸菌培養培地。
【請求項３】
オートクレーブ滅菌処理して使用される請求項１から２のいずれかに記載の食品用乳酸菌培養培地。
【請求項４】
請求項１から３のいずれかに記載の食用乳酸菌培養培地を用いて食用乳酸菌を培養することを特徴とする食品用乳酸菌の培養方法。
【請求項１】
ＧＹＰ培地において、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏに代えてマンガン含有食用酵母を含有することを特徴とする食品用乳酸菌培養培地。
【請求項２】
合計１００ｍＬ当り、グルコース １．０ｇ、酵母エキス １．０ｇ、ペプトン ０．５ｇ、酢酸ナトリウム・３Ｈ２Ｏ ０．２ｇ、金属塩溶液 ０．５ｍＬ、及び２．５ｍｇ／ｍＬのツイーン８０溶液 １．０ｍＬを含有してなり、
前記金属塩溶液が、１ｍＬ当り、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ４０ｍｇ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ２ｍｇ、ＮａＣｌ ２ｍｇを含み、
マンガン含有食用酵母をＭｎ濃度が２．４６ｐｐｍとなる量含む請求項１に記載の食品用乳酸菌培養培地。
【請求項３】
オートクレーブ滅菌処理して使用される請求項１から２のいずれかに記載の食品用乳酸菌培養培地。
【請求項４】
請求項１から３のいずれかに記載の食用乳酸菌培養培地を用いて食用乳酸菌を培養することを特徴とする食品用乳酸菌の培養方法。
【図１】
【公開番号】特開２００９−２２５７２２（Ｐ２００９−２２５７２２Ａ）
【公開日】平成２１年１０月８日（２００９．１０．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−７５２３６（Ｐ２００８−７５２３６）
【出願日】平成２０年３月２４日（２００８．３．２４）
【出願人】（０００１０３８４０）オリエンタル酵母工業株式会社 (60)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１０月８日（２００９．１０．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月２４日（２００８．３．２４）
【出願人】（０００１０３８４０）オリエンタル酵母工業株式会社 (60)
【Ｆターム（参考）】
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