ＨＣＶ変異体
【課題】複製することが可能である非天然のHCVをコードしているDNAを提供する。
【解決手段】非天然のHCV配列を含むポリヌクレオチド並びに野生型ポリタンパク質コード領域を有するHCVよりも大きいトランスフェクション効率及び生存継代能を有するHCV変異体を含む。前記ポリヌクレオチド及びHCV変異体を含む発現ベクター、発現ベクターを含む細胞及び宿主細胞からなる。更にHCVによる感染を許容する細胞株を同定する方法、医薬として許容できる担体中に前記ポリヌクレオチドを含むワクチンが得られる。加えて、霊長類においてHCVに対する免疫防御を誘導する方法、HCV複製を阻害する化合物を試験する方法。
【解決手段】非天然のHCV配列を含むポリヌクレオチド並びに野生型ポリタンパク質コード領域を有するHCVよりも大きいトランスフェクション効率及び生存継代能を有するHCV変異体を含む。前記ポリヌクレオチド及びHCV変異体を含む発現ベクター、発現ベクターを含む細胞及び宿主細胞からなる。更にHCVによる感染を許容する細胞株を同定する方法、医薬として許容できる担体中に前記ポリヌクレオチドを含むワクチンが得られる。加えて、霊長類においてHCVに対する免疫防御を誘導する方法、HCV複製を阻害する化合物を試験する方法。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＣＶの複製に対してより許容性である細胞株を製造する方法であって、以下の（ａ）〜（ｄ）の工程を含む製造方法、
（ａ）複製するＨＣＶ ＲＮＡを含む細胞株を準備し、
（ｂ）工程（ａ）で得られた細胞株を抗ウィルス剤で処理し、
（ｃ）工程（ｂ）で得られた、ＨＣＶ ＲＮＡが存在しなくなった細胞株を選択し、及び
（ｄ）工程（ｃ）で選択された細胞株を増やし、ＨＣＶの複製に対してより許容性である細胞株を製造する工程。
【請求項２】
複製するＨＣＶ ＲＮＡが、ＨＣＶレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡからなる請求項１記載の方法。
【請求項３】
抗ウィルス剤が、インターフェロンである請求項１に記載の方法。
【請求項４】
インターフェロンが、インターフェロン−αである請求項３に記載の方法。
【請求項５】
工程（ｄ）で選択された細胞株が約１％〜約３０％の形質導入効率でＨＣＶ ＲＮＡの複製を支持する、請求項１記載の方法。
【請求項６】
工程（ｄ）で選択された細胞株が約５％〜約３０％の形質導入効率でＨＣＶ ＲＮＡの複製を支持する、請求項１記載の方法。
【請求項７】
工程（ｄ）で選択された細胞株が少なくとも３０％の形質導入効率でＨＣＶ ＲＮＡの複製を支持する、請求項１記載の方法。
【請求項８】
該細胞株がヒト細胞株である、請求項１記載の方法。
【請求項９】
該ヒト細胞株が肝細胞株である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）における複製するＨＣＶ ＲＮＡを含む細胞株が、細胞株にＨＣＶレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡをトランスフェクトすることによって準備されたものである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ＨＣＶ ＲＮＡの複製をより許容する細胞株に、ＨＣＶレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡをトランスフェクトする工程（ｅ）をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
工程（ｅ）でトランスフェクトされたＨＣＶ ＲＮＡレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡが適応変異を含むものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ＨＣＶ ＲＮＡレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡにおける適応変異が、図７におけるＮＳ５Ａの１１７９位のセリンからイソロイシンへの置換をコードする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＨＣＶ ＲＮＡレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡにおける適応変異が、図７におけるＮＳ５Ａの１１８２位のセリンから１２２９位のアスパラギン酸が欠失し、チロシンに置換された４７アミノ酸の欠失をコードする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１の方法により製造された、ＨＣＶ ＲＮＡ複製に対し、より許容である細胞株。
【請求項１６】
さらに、ＨＣＶレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡを含む請求項１５に記載の細胞株。
【請求項１７】
ＨＣＶレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡが適応変異を含む請求項１６に記載の細胞株。
【請求項１８】
ＨＣＶ ＲＮＡレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡにおける適応変異が、図７におけるＮＳ５Ａの１１７９位のセリンからイソロイシンへの置換をコードする請求項１７に記載された細胞株。
【請求項１９】
ＨＣＶ ＲＮＡレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡにおける適応変異が、図７におけるＮＳ５Ａの１１８２位のセリンから１２２９位のアスパラギン酸が欠失し、チロシンに置換された４７アミノ酸の欠失をコードする、請求項１７に記載の細胞株。
【請求項１】
ＨＣＶの複製に対してより許容性である細胞株を製造する方法であって、以下の（ａ）〜（ｄ）の工程を含む製造方法、
（ａ）複製するＨＣＶ ＲＮＡを含む細胞株を準備し、
（ｂ）工程（ａ）で得られた細胞株を抗ウィルス剤で処理し、
（ｃ）工程（ｂ）で得られた、ＨＣＶ ＲＮＡが存在しなくなった細胞株を選択し、及び
（ｄ）工程（ｃ）で選択された細胞株を増やし、ＨＣＶの複製に対してより許容性である細胞株を製造する工程。
【請求項２】
複製するＨＣＶ ＲＮＡが、ＨＣＶレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡからなる請求項１記載の方法。
【請求項３】
抗ウィルス剤が、インターフェロンである請求項１に記載の方法。
【請求項４】
インターフェロンが、インターフェロン−αである請求項３に記載の方法。
【請求項５】
工程（ｄ）で選択された細胞株が約１％〜約３０％の形質導入効率でＨＣＶ ＲＮＡの複製を支持する、請求項１記載の方法。
【請求項６】
工程（ｄ）で選択された細胞株が約５％〜約３０％の形質導入効率でＨＣＶ ＲＮＡの複製を支持する、請求項１記載の方法。
【請求項７】
工程（ｄ）で選択された細胞株が少なくとも３０％の形質導入効率でＨＣＶ ＲＮＡの複製を支持する、請求項１記載の方法。
【請求項８】
該細胞株がヒト細胞株である、請求項１記載の方法。
【請求項９】
該ヒト細胞株が肝細胞株である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）における複製するＨＣＶ ＲＮＡを含む細胞株が、細胞株にＨＣＶレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡをトランスフェクトすることによって準備されたものである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ＨＣＶ ＲＮＡの複製をより許容する細胞株に、ＨＣＶレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡをトランスフェクトする工程（ｅ）をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
工程（ｅ）でトランスフェクトされたＨＣＶ ＲＮＡレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡが適応変異を含むものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ＨＣＶ ＲＮＡレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡにおける適応変異が、図７におけるＮＳ５Ａの１１７９位のセリンからイソロイシンへの置換をコードする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＨＣＶ ＲＮＡレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡにおける適応変異が、図７におけるＮＳ５Ａの１１８２位のセリンから１２２９位のアスパラギン酸が欠失し、チロシンに置換された４７アミノ酸の欠失をコードする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１の方法により製造された、ＨＣＶ ＲＮＡ複製に対し、より許容である細胞株。
【請求項１６】
さらに、ＨＣＶレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡを含む請求項１５に記載の細胞株。
【請求項１７】
ＨＣＶレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡが適応変異を含む請求項１６に記載の細胞株。
【請求項１８】
ＨＣＶ ＲＮＡレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡにおける適応変異が、図７におけるＮＳ５Ａの１１７９位のセリンからイソロイシンへの置換をコードする請求項１７に記載された細胞株。
【請求項１９】
ＨＣＶ ＲＮＡレプリコン又は全長ＨＣＶ ＲＮＡにおける適応変異が、図７におけるＮＳ５Ａの１１８２位のセリンから１２２９位のアスパラギン酸が欠失し、チロシンに置換された４７アミノ酸の欠失をコードする、請求項１７に記載の細胞株。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公開番号】特開２００７−１４３５５３（Ｐ２００７−１４３５５３Ａ）
【公開日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−３３９７０５（Ｐ２００６−３３９７０５）
【出願日】平成１８年１２月１８日（２００６．１２．１８）
【分割の表示】特願２００１−５８５６１２（Ｐ２００１−５８５６１２）の分割
【原出願日】平成１３年５月２３日（２００１．５．２３）
【出願人】（５９７０２５８０６）ワシントン・ユニバーシティ (26)
【氏名又は名称原語表記】Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１２月１８日（２００６．１２．１８）
【分割の表示】特願２００１−５８５６１２（Ｐ２００１−５８５６１２）の分割
【原出願日】平成１３年５月２３日（２００１．５．２３）
【出願人】（５９７０２５８０６）ワシントン・ユニバーシティ (26)
【氏名又は名称原語表記】Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
【Ｆターム（参考）】
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