本発明は、ＭＵＣ１^＊に対するモノクローナル抗体を説明する。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＭＵＣ１^＊に対するモノクローナル抗体及びその使用に関する。
【０００２】
［関連出願の相互参照］
本願は、２００８年１０月６日付けで出願された米国仮特許出願第６１／１０３，２０４号（その内容全体が参照により援用される）の利益を主張するものである。
【背景技術】
【０００３】
ＭＵＣ１受容体は、多くのヒト癌に関与するとされているムチンファミリーのＩ型膜貫通糖タンパク質である。全ての固形腫瘍のおよそ７５％がＭＵＣ１受容体を異常に発現すると推定されている。ＭＵＣ１^＋癌のグループには、９０％超の乳癌、４７％の前立腺腫瘍、並びに高い割合の卵巣癌、結腸直腸癌、肺癌及び膵臓癌が含まれる。ＭＵＣ１受容体の正常機能には、細胞接着、受精及び免疫応答における役割があるという証拠が幾つかある。癌におけるＭＵＣ１受容体の役割は、未だ文献上で立証されていない。しかしながら、癌における細胞表面発現及び受容体パターン形成の大きな相違は、十分に実証されている。正常細胞上でのＭＵＣ１の発現と癌細胞における発現との間の最も著しい相違は、正常細胞上では受容体は頂端部境界（apical border）に集まっているが、癌細胞上では受容体は細胞の表面全体に均一に分散しているということである。さらに、腫瘍細胞上では異常なパターン形成に加えて、受容体が過剰発現されているという証拠が幾つかある。
【０００４】
ＭＵＣ１の正常機能及びその癌との関連性は未だ明確にはなっていない。ＭＵＣ１の細胞外ドメインの一部が脱落又は切断されており、乳癌患者の血清において検出され得ることが知られている。乳癌患者では、脱落したＭＵＣ１の血清レベルを測定して、治療に対する患者の応答をモニタリングする場合がある。ＭＵＣ１の細胞質尾部は、様々なシグナル伝達タンパク質のモチーフに富んでいる。共通のシグナルタンパク質であるＧｒｂ２及びＳＯＳが、ＭＵＣ１の細胞質尾部と会合していることが文献上で報告されている。癌細胞では、細胞外ドメインのグリコシル化が不十分である（underglycosylated）ことが科学文献上で述べられている。
【０００５】
膜結合型ＭＵＣ１の切断産物であるＭＵＣ１^＊は、培養癌細胞及び癌組織上のタンパク質の主要な形態である。ＭＵＣ１^＊は細胞質尾部、膜貫通ドメイン及び約４５アミノ酸の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）からなる。しかし、切断の正確な部位（複数可）は依然としていくらか不確かである。
【０００６】
ＭＵＣ１^＊はリガンド誘導性二量化によって活性化されると、細胞成長を刺激する。或る特定の細胞の成長を促進することが望ましい場合があるが、この目的で、そのようにするのに好都合な方法は、二量体リガンドを模擬する二価抗ＭＵＣ１^＊抗体を添加することである。ＭＵＣ１^＊陽性細胞の成長を阻害するのが望ましい場合もある。例えば、多くの癌細胞がＭＵＣ１^＊を発現する。ＭＵＣ１陽性癌細胞の成長は、一価の作用物質がＭＵＣ１^＊に結合し、二量化を防ぐことで阻害される。ＭＵＣ１^＊媒介性細胞成長を遮断するのに好都合な一価の作用物質は一価抗体である。一価抗体は、酵素消化産物である抗体フラグメントであってもよく、又は抗原結合部位を１つしか有しないように操作してもよい。ＭＵＣ１^＊に一価的に（monovalently）結合する抗体としては、同じくＭＵＣ１^＊の細胞外ドメインの二量化を阻害するという理由で二重特異性抗体も挙げられる。ＭＵＣ１^＊媒介性細胞成長の刺激（二価）及び阻害（一価）には、ＭＵＣ１成長因子受容体の一次配列（ＰＳＭＧＦＲ）の配列（配列番号１）を認識するポリクローナル抗体及びその変異体を用いる。本明細書では、ＰＳＭＧＦＲ配列を認識するモノクローナル抗体及び変異体の生成を開示する。
【０００７】
モノクローナル抗体を同定することには多くの理由がある。例えば、単一の抗体種を産生するハイブリドーマは、様々な親和性、特異性を有し、その生成が完全には再現可能でない抗体の集合ではなく、単一の抗体（モノクローナル）の再現可能な供給をもたらすものである。抗体の各々のバッチは、異なる動物及び異なる免疫化に由来する。対照的に、所望の特性を有する抗体を産生するハイブリドーマが同定されると、そのハイブリドーマを維持することによって、再現可能な単一の抗体種の無制限の供給が得られる。さらに、モノクローナル又は単一の抗体種が同定されると、抗体又はその可変領域の配列を決定することができる。これにより、例えば抗体誘導体（一本鎖抗体、二重特異性抗体、ダイアボディ、及び抗体−化学物質融合体（antibody-chemical fusions）又は抗体−タンパク質融合体が挙げられるが、これらに限定されない）を作製するために使用することのできる、多くの形態のタンパク質工学及び組み換えＤＮＡ技術が可能となる。例えば、抗体の配列を知ることで、リンカー配列によって結合した軽鎖可変領域及び重鎖可変領域からなる一価の一本鎖抗体を生成することが可能となる。標的によっては、各々の可変領域（重鎖及び軽鎖）が異なる標的を認識する二重特異性抗体を生成するのが望ましい場合もある。
【発明の概要】
【０００８】
本発明はＭＵＣ１^＊抗体及び抗体誘導体を使用することを含む。本発明はさらに、ＭＭＰ−１４若しくはＴＡＣＥ等といった他のＭＵＣ１^＊を刺激する種、又はＭＵＣ１^＊に対する天然リガンドであるＮＭ２３等といった他のＭＵＣ１切断酵素等の遺伝子と組み合わせて使用することのできる、ＭＵＣ１^＊抗体をコードする遺伝子を使用することを含む。これらの遺伝子は、細胞において、又は宿主動物若しくはヒトにおいてＭＵＣ１^＊成長因子受容体活性を刺激するために使用される。
【０００９】
一実施の形態では、ＭＵＣ１^＊抗体をコードする核酸を、組織特異的プロモーターの下流に挿入し、卵子と精子との完全な融合の直前に前核又は類似物（similar）中に注入して、トランスジェニック動物を生成する。これによって、腫瘍を自然に形成するか、又はより腫瘍を形成しやすいマウス又は他のトランスジェニック動物が生成される。同様に、抗ＭＵＣ１^＊抗体をコードする遺伝子は、腫瘍形成を促進する別の腫瘍促進遺伝子もコードしているプラスミド中に同時に注入又は挿入される。
【００１０】
ＭＵＣ１、ＭＵＣ１^＊又はＭＵＣ１^＊刺激物質（stimulating agents）の遺伝子を導入することによって幹様細胞成長の刺激を増大させる方法が、レシピエント動物又はヒトにおいて、及びｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞培養物において使用される。一実施の形態では、ＭＵＣ１^＊の刺激により細胞成長速度を増大させ、細胞を細胞死に対して抵抗性にすることによって抗体産生を増大させるために、ＭＵＣ１^＊抗体をコードするプラスミドを外部から添加するか、又は抗体産生ハイブリドーマにトランスフェクトする。本発明のこの態様では、抗体産生細胞の成長は、所望の抗体である産物を汚染することなく促進される。血清成分自体が多くの抗体を含有するため、抗体産生細胞は典型的には、血清を減少させた培地中で培養される。細胞培養培地中の血清量を減少させることで、持ち越し汚染（carry over contamination）が最小限に抑えられるが、同時に細胞成長及び所望の抗体の全収率も減少する。外因性抗ＭＵＣ１^＊の添加又は抗ＭＵＣ１^＊をコードするプラスミドのトランスフェクションによって、細胞の成長及び生存が増大され、一方で単一の既知の抗体を所望の抗体である産物から選択的に取り除くことができる。ＮＭ２３等のＭＵＣ１^＊を二量化するリガンドの添加で代替してもよい。
【００１１】
一実施の形態では、ＭＵＣ１^＊刺激抗体を敗血症の治療のために患者に投与する。多くの細胞型ではストレスに応答してＭＵＣ１^＊の発現が増大する。患者は広範な細胞死のために急速に敗血症で死ぬ。患者にＭＵＣ１^＊二量化剤（ＭＵＣ１^＊の天然リガンドであるＮＭ２３又はその同種抗体等）を投与することによって、感染因子を死滅させる薬剤で患者を処置する間の細胞生存を増大させ、患者生存を増大させる。
【００１２】
別の実施の形態では、ＭＵＣ１^＊刺激抗体を、細胞死の量を低減するのが望ましい感染症を患っている患者に投与する。例えば、或る特定の病原体は組織に局所的に作用して、急速に組織を破壊する。病原体誘導性細胞死を低減するか、又は防ぐために、ＭＵＣ１^＊刺激抗体を全身に又は局所的に投与する。
【００１３】
別の実施の形態では、ＭＵＣ１^＊刺激抗体をコードする遺伝子を受精したばかりの卵子に挿入して、幹細胞等の原始細胞を作製することができる。ここで得られた細胞は多分化能及び他の幹細胞様特徴を強化又は誘導する、自身のＭＵＣ１^＊刺激リガンドを産生する。
【００１４】
本発明の一態様では、本発明はＭＵＣ１^＊に対する単離モノクローナル抗体に関する。該抗体はＭＵＣ１^＊に対して二価であっても、又は一価であってもよい。該抗体は、配列番号１のアミノ酸配列に特異的に結合し得る。該モノクローナル抗体は、重鎖可変領域において、ＣＤＲ１領域にNYGMN（配列番号３３０）、GYAMS（配列番号３３１）若しくはR/GYA/GMS（配列番号３３２）と少なくとも９０％同一であるか、又は配列番号１７２〜配列番号１８４から選択される配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２領域にWINTYTGEPTYA/VG/DDFKG（配列番号３３３）若しくはTISSGGTYIYYPDSVKG（配列番号３３４）と少なくとも９０％同一であるか、又は配列番号１９８〜配列番号２１０から選択される配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３領域にS/TGT/DT/AXXY/FYA（配列番号３３５）、TGTTAILNG（配列番号３３６）、SGDGYWYYA（配列番号３３７）若しくはDNYGXXYDYG/A（配列番号３３８）と少なくとも９０％同一であるか、又は配列番号２２４〜配列番号２３６から選択される配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有し得る。
【００１５】
別の態様では、本発明は、重鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、NYGMN（配列番号３３０）、GYAMS（配列番号３３１）又はR/GYA/GMS（配列番号３３２）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉ）ＣＤＲ２領域に、WINTYTGEPTYA/VG/DDFKG（配列番号３３３）又はTISSGGTYIYYPDSVKG（配列番号３３４）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体に関する。該モノクローナル抗体は、重鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、NYGMN（配列番号３３０）、GYAMS（配列番号３３１）又はR/GYA/GMS（配列番号３３２）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉ）ＣＤＲ３領域に、S/TGT/DT/AXXY/FYA（配列番号３３５）、TGTTAILNG（配列番号３３６）、SGDGYWYYA（配列番号３３７）又はDNYGXXYDYG/A（配列番号３３８）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有し得る。該モノクローナル抗体は、重鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ２領域に、WINTYTGEPTYA/VG/DDFKG（配列番号３３３）又はTISSGGTYIYYPDSVKG（配列番号３３４）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉ）ＣＤＲ３領域に、S/TGT/DT/AXXY/FYA（配列番号３３５）、TGTTAILNG（配列番号３３６）、SGDGYWYYA（配列番号３３７）又はDNYGXXYDYG/A（配列番号３３８）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有し得る。該モノクローナル抗体は、重鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、NYGMN（配列番号３３０）、GYAMS（配列番号３３１）又はR/GYA/GMS（配列番号３３２）と少なくとも９０％同一な配列、（ｉｉ）ＣＤＲ２領域に、WINTYTGEPTYA/VG/DDFKG（配列番号３３３）又はTISSGGTYIYYPDSVKG（配列番号３３４）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉｉ）ＣＤＲ３領域に、S/TGT/DT/AXXY/FYA（配列番号３３５）、TGTTAILNG（配列番号３３６）、SGDGYWYYA（配列番号３３７）又はDNYGXXYDYG/A（配列番号３３８）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有し得る。
【００１６】
別の態様では、本発明は、κ鎖可変領域においてＣＤＲ１領域に、SASSSV/ISYM/IH/Y（配列番号３３９）又はRASKSVSTSGYSYMH（配列番号３４０）と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体に関する。該モノクローナル抗体は、κ鎖可変領域においてＣＤＲ１領域に、配列番号１０８〜配列番号１１０及び配列番号１１２〜配列番号１１８から選択されるアミノ酸配列を有し得る。該モノクローナル抗体は、κ鎖可変領域において、ＣＤＲ２領域にS/GTSNLAS（配列番号３４１）若しくはLASNLES（配列番号３４２）と少なくとも９０％同一であるか、又は配列番号１２９〜配列番号１３８から選択される領域と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、ＣＤＲ３領域にQQRSS/NYPS/FT（配列番号３４３）若しくはQHSRELPFT（配列番号３４４）と少なくとも９０％同一であるか、又は配列番号１４９〜配列番号１５８から選択される配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有し得る。
【００１７】
別の態様では、本発明は、κ鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、SASSSV/ISYM/IH/Y（配列番号３３９）又はRASKSVSTSGYSYMH（配列番号３４０）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉ）ＣＤＲ２領域に、S/GTSNLAS（配列番号３４１）又はLASNLES（配列番号３４２）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体に関する。該モノクローナル抗体は、κ鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、SASSSV/ISYM/IH/Y（配列番号３３９）又はRASKSVSTSGYSYMH（配列番号３４０）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉ）ＣＤＲ３領域に、QQRSS/NYPS/FT（配列番号３４３）又はQHSRELPFT（配列番号３４４）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有し得る。該モノクローナル抗体は、κ鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ２領域に、S/GTSNLAS（配列番号３４１）又はLASNLES（配列番号３４２）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉ）ＣＤＲ３領域に、QQRSS/NYPS/FT（配列番号３４３）又はQHSRELPFT（配列番号３４４）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有し得る。請求項１に記載のモノクローナル抗体は、κ鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、SASSSV/ISYM/IH/Y（配列番号３３９）又はRASKSVSTSGYSYMH（配列番号３４０）と少なくとも９０％同一な配列、（ｉｉ）ＣＤＲ２領域に、ＣＤＲ２領域に、S/GTSNLAS（配列番号３４１）又はLASNLES（配列番号３４２）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉｉ）ＣＤＲ３領域に、QQRSS/NYPS/FT（配列番号３４３）又はQHSRELPFT（配列番号３４４）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有し得る。
【００１８】
別の態様では、本発明は、重鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、NYGMN（配列番号３３０）、GYAMS（配列番号３３１）又はR/GYA/GMS（配列番号３３２）と少なくとも９０％同一な配列、（ｉｉ）ＣＤＲ２領域に、WINTYTGEPTYA/VG/DDFKG（配列番号３３３）又はTISSGGTYIYYPDSVKG（配列番号３３４）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉｉ）ＣＤＲ３領域に、S/TGT/DT/AXXY/FYA（配列番号３３５）、TGTTAILNG（配列番号３３６）、SGDGYWYYA（配列番号３３７）又はDNYGXXYDYG/A（配列番号３３８）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有し、κ鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、SASSSV/ISYM/IH/Y（配列番号３３９）又はRASKSVSTSGYSYMH（配列番号３４０）と少なくとも９０％同一な配列、（ｉｉ）ＣＤＲ２領域に、ＣＤＲ２領域に、S/GTSNLAS（配列番号３４１）又はLASNLES（配列番号３４２）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉｉ）ＣＤＲ３領域に、QQRSS/NYPS/FT（配列番号３４３）又はQHSRELPFT（配列番号３４４）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体に関する。
【００１９】
さらに別の態様では、本発明は、重鎖可変領域において、ＣＤＲ１領域に配列番号３３１と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、ＣＤＲ２領域に配列番号３３４と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、及びＣＤＲ３領域に配列番号３７４と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域において、ＣＤＲ１領域に配列番号３４０と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、ＣＤＲ２領域に配列番号３４２と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、及びＣＤＲ３領域に配列番号３４４と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体に関する。
【００２０】
別の態様では、モノクローナル抗体は、重鎖可変領域において、ＣＤＲ１領域に配列番号３３２と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、ＣＤＲ２領域に配列番号３３４と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、及びＣＤＲ３領域に配列番号３３８と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域において、ＣＤＲ１領域に配列番号３３９と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、ＣＤＲ２領域に配列番号３４１と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、及びＣＤＲ３領域に配列番号３４３と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有し得る。
【００２１】
さらに別の態様では、本発明は、ヒト重鎖において、配列番号３５３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３５５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、配列番号３５７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列、又は配列番号３５９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ４配列を含み、ヒト軽鎖において、配列番号３４５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３４７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、配列番号３４９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列、又は配列番号３５１と少なくとも９０％同一なＦＷＲ４配列を含むヒトＦＷＲ配列を含むモノクローナル抗体に関する。
【００２２】
さらに別の態様では、本発明は、ヒト重鎖において、配列番号３６２と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３６３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３６４と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含み、ヒト軽鎖において、配列番号３６５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３６６と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３６７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含むヒトＦＷＲ配列を含むモノクローナル抗体に関する。
【００２３】
別の態様では、本発明は、ヒト重鎖において、配列番号３５３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３５５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、配列番号３５７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列、又は配列番号３５９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ４配列を含み、ヒト軽鎖において、配列番号３４５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３４７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、配列番号３４９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列、又は配列番号３５１と少なくとも９０％同一なＦＷＲ４配列を含むヒトＦＷＲ配列をさらに含む抗体に関する。
【００２４】
別の態様では、本発明は、ヒト重鎖において、配列番号３６８と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３６９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３７０と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含み、ヒト軽鎖において、配列番号３７１と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３７２と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３７３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含むヒトＦＷＲ配列を含む抗体に関する。
【００２５】
別の態様では、本発明は、好ましくはフレームワーク領域が既知のヒトフレームワーク配列であるヒト化モノクローナル抗体に関する。
【００２６】
別の態様では、本発明は、上記のモノクローナル抗体をコードする単離核酸に関する。
【００２７】
本発明は、上記のモノクローナル抗体を発現する単離ハイブリドーマにさらに関する。該抗体はＦａｂであっても、又は一本鎖一価抗体であってもよい。該抗体は、一方の認識部位（aspect）が配列番号１のペプチドに結合し、他方が別のエピトープを認識する二重特異性であってもよい。他のエピトープはＨＥＲ２又はＤＬＬ４であり得る。
【００２８】
本発明は、免疫グロブリン様ＶＨドメインが免疫グロブリン様ＶＬドメインに結合し、上記ＶＨ鎖及び上記ＶＬ鎖がペプチドリンカーを介して結合している、ＭＵＣ１^＊に特異的なｓｃＦｖ融合タンパク質にも関する。
【００２９】
別の態様では、本発明は、細胞増殖を阻害する方法であって、ＭＵＣ１^＊を発現する細胞を上記の一価モノクローナル抗体と接触させることを含む、方法に関する。該細胞は癌細胞であり得る。
【００３０】
さらに別の態様では、本発明は、細胞増殖を増大させる方法であって、ＭＵＣ１^＊を発現する細胞を上記の二価モノクローナル抗体と接触させることを含む、方法に関する。該細胞は多能性細胞又は前駆細胞であり得る。
【００３１】
本発明のこれら及び他の目的は、以下の本発明の説明、添付の参考図面及び添付の特許請求の範囲から、より完全に理解される。
【００３２】
本発明は、本明細書中で下記に与えられる詳細な説明、及び例示目的のみで与えられ、したがって本発明を限定するものでない添付の図面からより完全に理解される。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】選択されたハイブリドーマクローンの上清が免疫ペプチド（GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA（配列番号１））に特異的に結合することを、標準ＥＬＩＳＡによって示す図である。図中英語は、表題：ハイブリドーマクローンからの上清を用いたペプチドＥＬＩＳＡ下段部 免疫前血清 ハイブリドーマ を意味する。
【図２】細胞表面上のＭＵＣ１^＊に対するＭＩＮ−Ｃ２抗体の特異的結合を示す図である。ＭＩＮ−Ｃ２ハイブリドーマクローンからの精製抗体を１００倍に希釈した後、生細胞の表面への結合について試験した。蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）によって、ＭＩＮ−Ｃ２がＭＵＣ１陰性細胞（いずれかの空のベクターをトランスフェクトしたＨＣＴ−１１６細胞（ＨＣＴ−ＶＥＣ８））とは結合しないが、ＭＵＣ１^＊をトランスフェクトしたＨＣＴ−１１６細胞（ＨＣＴ−ＭＵＣ１^＊−１０：細胞外ドメインはGTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA（配列番号１）のみからなる）とは結合することが示される。ＭＩＮ−Ｃ２は同様にＭＵＣ１陽性乳癌細胞ＺＲ−７５−１にも結合した。図中英語は、% of Max:最大％Red-anti-mouse-PE alone:赤色−抗マウスＰＥ単独Blue-MIN-C2 Antibody:青色−ＭＩＮ−Ｃ２抗体
【図３】細胞表面上のＭＵＣ１^＊に対するＭＩＮ−Ｅ６抗体の特異的結合を示す図である。ＭＩＮ−Ｅ６ハイブリドーマクローンからの上清を、生細胞の表面への結合について試験した。蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）によって、ＭＩＮ−Ｅ６がＭＵＣ１陰性細胞（いずれかの空のベクターをトランスフェクトしたＨＣＴ−１１６細胞（ＨＣＴ−ＶＥＣ８））とは結合しないが、ＭＵＣ１^＊をトランスフェクトしたＨＣＴ−１１６細胞（ＨＣＴ−ＭＵＣ１^＊−１０：細胞外ドメインはGTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA（配列番号１）のみからなる）とは結合することが示される。ＭＩＮ−Ｅ６は同様にＭＵＣ１陽性乳癌細胞ＺＲ−７５−１にも結合した。図中英語は、% of Max:最大％Red-anti-mouse-PE alone:赤色−抗マウスＰＥ単独Blue-MIN-E6 Antibody:青色−ＭＩＮ−Ｅ６抗体
【図４】ＭＩＮ−Ｃ２モノクローナル抗体による細胞増殖の刺激を示す図である。セルベースアッセイにおいて、モノクローナル抗体ＭＩＮ−Ｃ２が、配列番号１又は配列番号２の免疫ペプチドを用いて生成したポリクローナル抗体と本質的に同じように機能することが示された。ＭＵＣ１陽性乳癌細胞株Ｔ４７Ｄの成長は、精製ＭＩＮ−Ｃ２を細胞培養物にアッセイの開始時、次いで４８時間後に再度添加した場合、濃度依存的に刺激された。この釣鐘曲線は、受容体のリガンド誘導性二量化に特徴的なものである。抗体は過剰になると、１つの抗体が各々２つの受容体を二量化するのではなく、各々の受容体に結合する。図中英語は、表題：ＭＩＮ−Ｃ２抗体によるＴ４７Ｄの成長全９６時間、３％血清、０時間及び４８時間で添加グラフ縦軸：正規化成長率（％）グラフ横軸：抗体濃度（ｕｇ／ｍｌ）Optimal antibody concentration：最適抗体濃度
【図５】ＭＩＮ−Ｅ６モノクローナル抗体による細胞増殖の刺激を示す図である。セルベースアッセイにおいて、モノクローナル抗ＭＵＣ１^＊抗体ＭＩＮ−Ｅ６が、配列番号１又は配列番号２の免疫ペプチドを用いて生成したポリクローナル抗体と本質的に同じように機能することが示された。ＭＵＣ１陽性乳癌細胞株Ｔ４７Ｄの成長は、精製ＭＩＮ−Ｅ６を細胞培養物にアッセイの開始時、次いで４８時間後に再度添加した場合、濃度依存的に刺激された。この釣鐘曲線は、受容体のリガンド誘導性二量化に特徴的なものである。抗体は過剰になると、１つの抗体が各々２つの受容体を二量化するのではなく、各々の受容体に結合する。図中英語は、表題：ＭＩＮ−Ｅ６抗体によるＴ４７Ｄの成長全９６時間、３％血清、０時間及び４８時間で添加グラフ縦軸：正規化成長率（％）グラフ横軸：抗体濃度（ｕｇ／ｍｌ）Optimal antibody concentration：最適抗体濃度
【図６】パパイン消化によるＭＩＮＣ−２抗体及びＭＩＮ−Ｅ６抗体からのＦａｂフラグメントの調製を示す図である。消化した抗体を、４％から２０％の非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥで泳動した。消化によって、ＭＩＮ−Ｃ２及びＭＩＮ−Ｅ６の両方から期待サイズ（約５０ｋＤ）のＦａｂが生成された（レーン２及びレーン４）。
【図７】図７Ａ：ＭＩＮ−Ｃ２モノクローナル抗体のＦａｂフラグメントが、標的ペプチドとの結合について全抗体と競合することを示す図である。ＥＬＩＳＡ競合アッセイにおいて、ＭＵＣ１^＊の細胞外ドメインの配列（配列番号１）に対応する合成ペプチドを、プレートに吸着させた後、無傷の親モノクローナル抗体を結合させた。パパイン消化によって産生されたＦａｂの、ＭＵＣ１^＊ペプチドとの結合について親抗体と競合する能力を試験するために、様々な濃度のＦａｂを添加した。洗浄工程の後、標準方法によってＥＬＩＳＡを処理した。グラフから、Ｆａｂが同種ペプチドとの結合について親抗体と競合することが示される。表題：ＭＩＮ−Ｃ２ ｍＡｂ対ＭＩＮ−Ｃ２ Ｆａｂグラフ横軸：ＭＩＮ−Ｃ２ ｍＡｂ濃度（ｎＭ） 図７Ｂ：ＭＩＮ−Ｅ６モノクローナル抗体のＦａｂフラグメントが、標的ペプチドとの結合について全抗体と競合することを示す図である。ＥＬＩＳＡ競合アッセイにおいて、ＭＵＣ１^＊の細胞外ドメインの配列（配列番号１）に対応する合成ペプチドを、プレートに吸着させた後、無傷の親モノクローナル抗体を結合させた。パパイン消化によって産生されたＦａｂの、ＭＵＣ１^＊ペプチドとの結合について親抗体と競合する能力を試験するために、様々な濃度のＦａｂを添加した。洗浄工程の後、標準方法によってＥＬＩＳＡを処理した。グラフから、Ｆａｂが同種ペプチドとの結合について親抗体と競合することが示される。表題：ＭＩＮ−Ｅ６ ｍＡｂ対ＭＩＮ−Ｅ６ Ｆａｂグラフ横軸：ＭＩＮ−Ｅ６ ｍＡｂ濃度（ｎＭ）
【図８】ＭＩＮ−Ｃ２ ＦａｂによるＭＵＣ１陽性癌細胞増殖の阻害を示す図である。ＭＩＮ−Ｃ２の一価形態、すなわちＭＩＮ−Ｃ２ Ｆａｂの、ＭＵＣ１陽性乳癌細胞株Ｔ４７Ｄの増殖を阻害する能力を試験した。実験は、３％血清含有培地で培養した細胞を用い、９６時間にわたって行った。Ｆａｂを実験の開始時に添加し、４８時間後に再度添加した。細胞を血球計算盤で計数した。表題：ＭＩＮ−Ｃ２ ＦａｂによるＴ４７Ｄの成長の阻害グラフ縦軸：成長率（％）
【図９】ＭＩＮ−Ｅ６ ＦａｂによるＭＵＣ１陽性癌細胞増殖の阻害を示す図である。ＭＩＮ−Ｅ６の一価形態、すなわちＭＩＮ−Ｅ６ Ｆａｂの、ＭＵＣ１陽性乳癌細胞株Ｔ４７Ｄの増殖を阻害する能力を試験した。実験は、３％血清含有培地で培養した細胞を用い、９６時間にわたって行った。Ｆａｂを実験の開始時に添加し、４８時間後に再度添加した。細胞を血球計算盤で計数した。Ｆａｂのペグ化形態（ＭＩＮ−Ｅ６ ＰＥＧ）及び非ペグ化形態を試験した。ＭＩＮ−Ｅ６ ＰＥＧは、おそらくは半減期の増大のために増大した活性を示した。表題：ＭＩＮ−Ｅ６ Ｆａｂ及びＭＩＮ−Ｅ６ ＰＥＧ ＦａｂによるＴ４７Ｄの成長の阻害グラフ縦軸：成長率（％）
【図１０】図１０Ａ：組み換え抗体変異体の略画（cartoons）を示す図である。リンカーによって結合した重鎖及び軽鎖の可変領域を含む一本鎖可変領域（ｓｃＦｖ）抗体フラグメントを示す。表題：抗ＭＵＣ１^＊ ｓｃＦｖ一本鎖フラグメント可変領域N-ter:Ｎ末端C-ter:Ｃ末端Linker:リンカー説明：ＭＵＣ１^＊陽性癌細胞と結合；ペプチドＥＬＩＳＡアッセイ（ペグ化あり／なし）において完全ｍＡｂと競合。薬物に必要とされる親和性をやや下回る親和性。 図１０Ｂ：組み換え抗体変異体の略画を示す図である。可変ドメインに加えて、重鎖及び軽鎖の定常領域の少なくとも一部を含有する一本鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）を示す。重鎖及び軽鎖はリンカーによって結合している。表題：抗ＭＵＣ１^＊ ｓｃＦａｂ一本鎖抗体フラグメントN-ter:Ｎ末端C-ter:Ｃ末端Linker:リンカー説明：ｓｃＦｖよりも高い親和性及び安定性。組み換え形態での大規模製造がより容易である（Hust et al 2007）。キャンパスはｓｃＦａｂ薬物の一例である。 図１０Ｃ：組み換え抗体変異体の略画を示す図である。重鎖及び軽鎖がリンカーによって結合していない一本鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）を示す。重鎖及び軽鎖は通常は同じ細胞内で別個に発現される。重鎖及び軽鎖は自然に会合するか、又はシステインを導入して会合を促進することができる。表題：２部構成の抗ＭＵＣ１^＊ Ｆａｂフラグメント可変領域N-ter:Ｎ末端C-ter:Ｃ末端Linker:リンカー説明：軽鎖及び重鎖の可変領域及び定常領域も別個にベクターにクローン化され、同じ細胞内で別個に発現された。これらの鎖は自然に会合して、安定な抗ＭＵＣ１^＊抗体変異体を形成した。 図１０Ｄ：組み換え抗体変異体の略画を示す図である。可変ドメインを含む二重特異性一本鎖抗体変異体（ｂｓｃＦｖ）を示す。図示したｂｓｃＦｖはＭＵＣ１^＊及びＨＥＲ２受容体を認識する。表題：抗ＭＵＣ１^＊／抗ＨＥＲ２ ｂｓｃＡｂ二重特異性一本鎖抗体フラグメントN-ter:Ｎ末端C-ter:Ｃ末端Linker:リンカー説明：ダイアボディは癌細胞に対する特異性を増大させ、乳癌において作用している２つの成長因子受容体をノックアウトする。協同的結合によって結合活性が増大する。
【図１１】抗ＭＵＣ１^＊ ＩｇＧモノクローナル抗体の軽鎖可変領域の配列を示す図である。表題：抗ＭＵＣ１^＊ ＩｇＧモノクローナル抗体の軽鎖可変領域の配列
【図１２】抗ＭＵＣ１^＊ ＩｇＧモノクローナル抗体の重鎖可変領域の配列を示す図である。表題：抗ＭＵＣ１^＊ ＩｇＧモノクローナル抗体の重鎖可変領域の配列
【図１３】抗ＭＵＣ１^＊ ＩｇＭモノクローナル抗体の軽鎖可変領域の配列を示す図である。表題：抗ＭＵＣ１^＊ ＩｇＭモノクローナル抗体の軽鎖可変領域の配列
【図１４】抗ＭＵＣ１^＊ ＩｇＭモノクローナル抗体の重鎖可変領域の配列を示す図である。表題：抗ＭＵＣ１^＊ ＩｇＭモノクローナル抗体の重鎖可変領域の配列
【図１５】ＭＩＮ−Ｃ２（一本鎖可変フラグメント）設計（重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域）のアミノ酸配列を示す図である。このｓｃＦｖ構築物を細菌において発現させ、Ｃ末端ポリヒスチジン（HHHHHH）タグを用いて精製した。
【図１６】ＭＩＮ−Ｅ６ ｓｃＦｖ（一本鎖可変フラグメント）設計（重鎖可変領域（ＭＩＮ−Ｅ６ ＶＨ７）−リンカー−軽鎖可変領域）のアミノ酸配列を示す図である。このｓｃＦｖ構築物を細菌において発現させ、Ｃ末端ポリヒスチジン（HHHHHH）タグを用いて精製した。
【図１７】細菌において発現させた後、ＮＴＡ−Ｎｉ＋＋アフィニティクロマトグラフィーによって精製したＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖの精製を確認する、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す図である。図中英語：溶解物、通過画分、精製ｓｃＦｖを各意味する。
【図１８】Ａ:アフィニティー精製した、リフォールディングされたＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖで特異的結合が１０倍超向上したことを示す図である。リフォールディングされたＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖを、非変性条件下で、ＭＵＣ１^＊細胞外ドメインペプチド（配列番号１）を担持するカラムを通過させることによってアフィニティー精製した。ＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖを、リフォールディングされたこのタンパク質の抗原アフィニティクロマトグラフィーによる精製の前及び後の両方に、ＥＬＩＳＡプレートに吸着させた配列番号１のペプチドと結合する能力についてＥＬＩＳＡによって試験した。アフィニティー精製したタンパク質は、およそ１０倍高い特異的活性を有する。表題：ＭＵＣ１^＊ペプチドに対するＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖの結合（ＥＬＩＳＡ） Ｂ:アフィニティー精製した、リフォールディングされたＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖで特異的結合が１０倍超向上したことを示す図である。リフォールディングされたＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖを、非変性条件下で、ＭＵＣ１^＊細胞外ドメインペプチド（配列番号１）を担持するカラムを通過させることによってアフィニティー精製した。ＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖを、リフォールディングされたこのタンパク質の抗原アフィニティクロマトグラフィーによる精製の前及び後の両方に、ＥＬＩＳＡプレートに吸着させた配列番号１のペプチドと結合する能力についてＥＬＩＳＡによって試験した。アフィニティー精製したタンパク質は、およそ１０倍高い特異的活性を有する。表題：ＭＵＣ１^＊ペプチドに対するアフィニティー精製したＭｉｎ−Ｃ２ ｓｃＦｖの結合（ＥＬＩＳＡ）英語は上から、アフィニティー精製したＭＩＮ−Ｃ２、対照（プレート上にペプチドを有しない）、バックグラウンドを引いた値を各意味する。
【図１９】ＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖが生細胞上のＭＵＣ１^＊を認識することを示す図である（ＦＡＣＳ）。ＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖを、Ａｌｅｘａ ４８８と結合させた二次抗体Ａｎｔｉ−Ｐｅｎｔａ−Ｈｉｓ（Qiagen）を加えて、ＭＵＣ１陽性乳癌細胞（ＺＲ−７５−１／１５００）と共にインキュベートし、ＦＡＣＳによって分析した。ＭＵＣ１陰性対照細胞（ＨＣＴ−１１６−ＶＥＣ８細胞）はＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖによって染色されない。図中英語：Green-scFv 1:10 of 1.5mg/ml:緑色 − １．５ｍｇ／ｍｌのｓｃＦｖ（１０倍）Blue-scFv 1:2 of 1.5mg/ml:青色 − １．５ｍｇ／ｍｌのｓｃＦｖ（２倍）Green-scFv 1:10 of 1.5mg/ml:緑色 − １．５ｍｇ／ｍｌのｓｃＦｖ（１０倍）−
【図２０】標的ペプチドアフィニティー精製したＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖによる癌細胞成長の阻害を示す図である。ＭＵＣ１陽性乳癌細胞株ＺＲ−７５−１（別称１５００）及びＭＵＣ１陰性ＨＣＴ−１１６結腸癌細胞株を、ＭＵＣ１^＊の細胞外ドメインに対応するペプチドを担持するカラムを通してアフィニティー精製した様々な濃度のＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖで処理した。実験は、３％血清含有培地で９６時間にわたって行った。ｓｃＦｖは２回添加した。表題：標的ペプチドアフィニティー精製したＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖはＭＵＣ１陽性癌細胞成長を阻害するグラフ縦軸：正規化細胞成長率（％）
【図２１】Ａ：ＭＩＮ−Ｃ２ Ｆａｂ構築物の２つの断片及び発現タンパク質を示す図である。ＭＩＮ−Ｃ２の重鎖領域及び軽鎖領域を別個に細菌発現ベクターにクローン化した。細胞ＲＮＡに由来するＭＩＮ−Ｃ２の重鎖及びκ鎖のＰＣＲ産物を示す。 Ｂ：ＭＩＮ−Ｃ２ Ｆａｂ構築物の２つの断片及び発現タンパク質を示す図である。ＭＩＮ−Ｃ２の重鎖領域及び軽鎖領域を別個に細菌発現ベクターにクローン化した。ＭＩＮ−Ｃ２ Ｆａｂ重鎖の細菌タンパク質発現を示す。
【図２２】上記ＭＩＮ−Ｃ２ ＦａｂポリペプチドのＮ末端を、効率的な分泌のためにＩｇ κ鎖リーダー配列（METDTLLLWVLLLWVPGSTGD（配列番号３２８））と融合させたことを示す図である。Ｃ末端は、精製を容易にするためにｍｙｃタグ（EQKLISEEDL（配列番号３２９））及びポリヒスチジン（HHHHHH）タグと融合させた。このようにして組み立てられたＭＩＮ−Ｃ２ Ｆａｂを、哺乳動物細胞において、高コピーエピソーム複製を可能にするベクターｐＣＥＰ４（Invitrogen，Carlsbad，CA）を用いて発現させた。表題：ＭＩＮ−Ｃ２ Ｆａｂの設計（軽鎖−リンカー−重鎖）
【図２３】正確なＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦａｂ（一本鎖Ｆａｂ）ＤＮＡ集合体に対応する分子量のバンドを有するＤＮＡゲルを示す図である。
【図２４】ヒト胚性幹細胞の多分化成長（pluripotent growth）の刺激についての、抗ＭＵＣ１^＊ウサギポリクローナル抗体とマウスモノクローナルＭＩＮ−Ｃ２との比較を示す図である。蛍光によって細胞の多分化能が示される。実験から、モノクローナルＭＩＮ−Ｃ２は、ポリクローナル抗体と、両方が多能性幹細胞の成長を刺激するという点で同様に機能することが示される。英語：各段上からら；最小培地のみｂＦＧＦ及びフィーダー細胞馴化培地を添加した最小培地二価ウサギ（rannit）ポリクローナル抗ＭＵＣ１^＊を添加した最小培地二価マウスモノクローナル抗ＭＵＣ１^＊（ＭＩＮ−Ｃ２）を添加した最小培地
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本願において、「a」及び「an」は、単一及び複数の対象の両方を指すように使用される。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、「ＭＵＣ１成長因子受容体」（ＭＧＦＲ）は、成長因子等の活性化リガンド、又は切断酵素等の修飾酵素と相互作用するＭＵＣ１受容体の部分を意味する機能定義である。ＭＵＣ１のＭＧＦＲ領域は、細胞表面に最も近い細胞外部分であり、下記に定義されるように、ＰＳＭＧＦＲの大部分又は全てによって規定される。ＭＧＦＲは、未修飾ペプチド、及び例えばリン酸化、グリコシル化等の酵素修飾を受けたペプチドの両方を含む。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、「ＭＵＣ１成長因子受容体の一次配列」（ＰＳＭＧＦＲ）とは、場合によってはＭＧＦＲの大部分又は全て、並びにそのペプチド配列の機能的変異体及び断片を規定するペプチド配列を指す。ＰＳＭＧＦＲは、配列番号１、並びに２０個までの任意の整数値（すなわち１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個又は２０個）のアミノ酸置換、及び／又は２０個までの任意の整数値のアミノ酸付加若しくは欠失を、そのＮ末端及び／又はＣ末端に有する、その全ての機能的変異体及び断片として定義される。上記の文脈における「機能的変異体又は断片」とは、配列番号（SEQ D NO:）１のペプチドと特異的に結合するか、又は別の形で特異的に相互作用するリガンドと特異的に結合するか、又は別の形で（otherways）特異的に相互作用する能力を有するが、ペプチド分子が他の同一なペプチド分子と会合する（すなわち自己会合する）能力を有するほど、それら自身と同一な他のペプチド分子の同一な領域とは強く結合しない変異体又は断片を指す。配列番号（SEQ NO:）１のＰＳＭＧＦＲペプチドの機能的変異体であるＰＳＭＧＦＲの一例は配列番号２であり、-SRY-の代わりに-SPY-配列を含むことによって配列番号１とは異なる。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、「ＭＵＣ１^＊」とは、細胞外ドメインが本質的にＰＳＭＧＦＲ（配列番号１）を含むようにＮ末端が切断されたＭＵＣ１タンパク質を指す。
【配列表フリーテキスト】
【００３８】
ａ、ｇ、ｃ、ｔ以外のヌクレオチド記号の使用については、ＷＩＰＯ標準ＳＴ．２５（付録２、表１）に記載される規則に従うが、ここでは、ｋはｔ又はｇを表し、ｎはａ、ｃ、ｔ又はｇを表し、ｍはａ又はｃを表し、ｒはａ又はｇを表し、ｓはｃ又はｇを表し、ｗはａ又はｔを表し、ｙはｃ又はｔを表す。
【００３９】
GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA（配列番号１）は、ＭＵＣ１の膜近位の（membrane proximal）細胞外領域をアミノ酸１１１０からアミノ酸１１５５まで表す。
【００４０】
GTINVHDVETQFNQYKTEAASPYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA（配列番号２）は、ＭＵＣ１の膜近位の細胞外領域の変異体をアミノ酸１１１０からアミノ酸１１５５まで表す。
【００４１】
5'-ggaaagcttatagacagatgggggtgtcgttttggc-3'（配列番号３）は、ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマーである、ＩｇＧ１定常領域リバースプライマーを表す。
【００４２】
5'-ggaaagcttcttgaccaggcatcctagagtca-3'（配列番号４）は、ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマーである、ＩｇＧ２Ａ定常領域リバースプライマーを表す。
【００４３】
5'-ggaaagcttaggggccagtggatagactgatgg-3'（配列番号５）は、ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマーである、ＩｇＧ２Ｂ定常領域リバースプライマーを表す。
【００４４】
5'-cttccggaattcsargtnmagctgsagsagtc-3'（配列番号６）は、ＥｃｏＲＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマーである、重鎖ＦＲ１領域フォワードプライマー１を表す。
【００４５】
5'-cttccggaattcsargtnmagctgsagsagtcwgg-3'（配列番号７）は、ＥｃｏＲＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマーである、重鎖ＦＲ１領域フォワードプライマー２を表す。
【００４６】
5'-ggtgtcgacggatacagttggtgcagcatc-3'（配列番号８）は、Ｓａｌ1制限部位を含有するＰＣＲプライマーである、κ鎖定常領域リバースプライマーを表す。
【００４７】
5'-gggagctcgayattgtgmtsacmcarwctmca-3'（配列番号９）は、Ｓａｃ1制限部位を含有するＰＣＲプライマーである、κ鎖ＦＲ１領域ユニバーサル縮重フォワードプライマーを表す。
【００４８】
gaggtccagctggaggagtcagggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtggctatgccatgtcttgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtagtggtggtacttatatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaggtctgaggacacggccatgtattactgtgcaagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcgcagggaccacggtcaccgtctcctccgccaaaacgacacccccatctgtctat（配列番号１０）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖可変領域を表す。
【００４９】
EVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARLGGDNYYEYFDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSVY（配列番号１１）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖可変領域を表す。
【００５０】
gacattgtgatcacacagtctacagcttccttaggtgtatctctggggcagagggccaccatctcatgcagggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggtaccaacagagaccaggacagccacccaaactcctcatctatcttgcatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacagtagggagcttccgttcacgttcggaggggggaccaagctggagataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatcc（配列番号１２）は、ＭＩＮ−Ｃ２ κ鎖可変領域を表す。
【００５１】
DIVITQSTASLGVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEED AATYYCQHSRELPFTFGGGTKLEIKRAD AAPT VS（配列番号１３）は、ＭＩＮ−Ｃ２ κ鎖可変領域を表す。
【００５２】
ggtggaggcggatcaggtggaggcggatcaggtggaggcggatca（配列番号１４）は、リンカーを表す。
【００５３】
gaggtccagctggaggagtcagggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtggctatgccatgtcttgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtagtggtggtacttatatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaggtctgaggacacggccatgtattactgtgcaagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcgcagggaccacggtcaccgtctcctccgccaaaacgacacccccatctgtctatggtggaggcggatcaggtggaggcggatcaggtggaggcggatcagacattgtgatcacacagtctacagcttccttaggtgtatctctggggcagagggccaccatctcatgcagggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggtaccaacagagaccaggacagccacccaaactcctcatctatcttgcatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacagtagggagcttccgttcacgttcggaggggggaccaagctggagataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatcc（配列番号１５）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖−リンカー−軽鎖を表す。
【００５４】
gaggtccagctggaggagtcagggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtggctatgccatgtcttgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtagtggtggtacttatatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaggtctgaggacacggccatgtattactgtgcaagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcgcagggaccacggtcaccgtctcctccgccaaaacgacacccccatctgtctatggtggaggcggatcaggtggaggcggatcaggtggaggcggatcagacattgtgatcacacagtctacagcttccttaggtgtatctctggggcagagggccaccatctcatgcagggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggtaccaacagagaccaggacagccacccaaactcctcatctatcttgcatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacagtagggagcttccgttcacgttcggaggggggaccaagctggagataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatcctgt（配列番号１６）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖−リンカー−軽鎖−Ｃｙｓを表す。
【００５５】
EVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSG GTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARLGGDNYYEYFDVWGAG TTVTVSSAKTTPPSVYGGGGSGGGGSGGGGSDIVITQSTASLGVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEED AATYYCQHSRELPFTFGGGTKLEIKRADAAPTVSVD（配列番号１７）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖−リンカー−軽鎖を表す。
【００５６】
EVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSG GTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARLGGDNYYEYFDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSVYGGGGSGGGGSGGGGSDΓVITQSTASLGVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPFTFGGGTKLEIKRADAAPTVSC（配列番号１８）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖−リンカー−軽鎖−Ｃｙｓを表す。
【００５７】
gaggttaagctggaggagtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtagatatggcatgtcttgggttcgccagactccagacaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtagtggtggtacttacatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccatgtattactgtgcaagggataactacggtagtagctacgactatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcagccaaaacaacagccccatcggtctat（配列番号１９）は、ＭＩＮ−Ｅ６重鎖−７可変領域を表す。
【００５８】
EVKLEESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSRYGMSWVRQTPDKRLEWVATISSG GTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCARDNYGSSYDYAMD YWG QGTSVTVSSAKTTAPSVY（配列番号２０）は、ＭＩＮ−Ｅ６重鎖−７可変領域を表す。
【００５９】
gaggtaaagctggaggagtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgtagtctctggattcactttcagtagatatggcatgtcttgggttcgccagactccaggcaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtggtggcggtacttacatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccatgtatcactgtacaagggataactacggtaggaactacgactacggtatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcagccaaaacaacagccccatcggtctatccactggcccctgtgtgtggagatacaactggctcctcggtgactctaggatgcctggtcaag（配列番号２１）は、ＭＩＮ−Ｅ６重鎖−８可変領域を表す。
【００６０】
EVKLEESGGDLVKPGGSLKLSCVVSGFTFSRYGMSWVRQTPGKRLEWVATISGG GTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYHCTRDNYGRNYDYGMD YWG QGTSVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVK（配列番号２２）は、ＭＩＮ−Ｅ６重鎖−８可変領域を表す。
【００６１】
gatattgtgatcacccagactacagcaatcatgtctgcatctccaggggaggaggtcaccctaacctgcagtgccacctcaagtgtaagttacatacactggttccagcagaggccaggcacttctcccaaactctggatttatagcacatccaacctggcttctggagtccctgttcgcttcagtggcagtggatatgggacctcttactctctcacaatcagccgaatggaggctgaagatgctgccacttattactgccagcaaaggagtagttccccattcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatcc（配列番号２３）は、ＭＩＮ−Ｅ６ κ鎖可変領域を表す。
【００６２】
DIVITQTTAIMSASPGEEVTLTCSATSSVSYIHWFQQRPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSSPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVS（配列番号２４）は、ＭＩＮ−Ｅ６ κ鎖可変領域を表す。
【００６３】
gaggttaagctggaggagtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtagatatggcatgtcttgggttcgccagactccagacaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtagtggtggtacttacatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccatgtattactgtgcaagggataactacggtagtagctacgactatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcagccaaaacaacagccccatcggtctatccactggcccctgtgtgtggagatacaactggctcctcggtgactctaggatgcctggtcaagggtggaggcggatcaggtggaggcggatcaggtggaggcggatcagatattgtgatcacccagactacagcaatcatgtctgcatctccaggggaggaggtcaccctaacctgcagtgccacctcaagtgtaagttacatacactggttccagcagaggccaggcacttctcccaaactctggatttatagcacatccaacctggcttctggagtccctgttcgcttcagtggcagtggatatgggacctcttactctctcacaatcagccgaatggaggctgaagatgctgccacttattactgccagcaaaggagtagttccccattcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatcc（配列番号２５）は、ＭＩＮ−Ｅ６ ｓｃＦｖ：重鎖７−リンカー−軽鎖（ＶＨ＋リンカー＋ＶＬ）を表す。
【００６４】
gaggttaagctggaggagtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtagatatggcatgtcttgggttcgccagactccagacaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtagtggtggtacttacatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccatgtattactgtgcaagggataactacggtagtagctacgactatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcagccaaaacaacagccccatcggtctatccactggcccctgtgtgtggagatacaactggctcctcggtgactctaggatgcctggtcaagggtggaggcggatcaggtggaggcggatcaggtggaggcggatcagatattgtgatcacccagactacagcaatcatgtctgcatctccaggggaggaggtcaccctaacctgcagtgccacctcaagtgtaagttacatacactggttccagcagaggccaggcacttctcccaaactctggatttatagcacatccaacctggcttctggagtccctgttcgcttcagtggcagtggatatgggacctcttactctctcacaatcagccgaatggaggctgaagatgctgccacttattactgccagcaaaggagtagttccccattcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatcctgt（配列番号２６）は、ＭＩＮ−Ｅ６ ｓｃＦｖ−Ｃｙｓ：重鎖７−リンカー−軽鎖−Ｃｙｓ（ＶＨ＋リンカー＋ＶＬ＋Ｃｙｓ）を表す。
【００６５】
EVKLEESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSRYGMSWVRQTPDKRLEWVATISSGGTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCARDNYGSSYDYAMDYWGQGTSVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGGGGSGGGGSGGGGSDIVITQTTAIMSASPGEEVTLTCSATSSVSYIHWFQQRPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSSPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVS（配列番号２７）は、ＭＩＮ−Ｅ６ ｓｃＦｖ重鎖７−リンカー−軽鎖（ＶＨ＋リンカー＋ＶＬ）を表す。
【００６６】
EVKLEESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSRYGMSWVRQTPDKRLEWVATISSGGTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCARDNYGSSYDYAMD YWGQGTSVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGGGGSGGGGSGGGGSDIVITQTTAIMSASPGEEVTLTCSATSSVSYfflWFQQRPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSSPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVSC（配列番号２８）は、ＭＩＮ−Ｅ６ ｓｃＦｖ−Ｃｙｓ重鎖７−リンカー−軽鎖−Ｃｙｓ（ＶＨ＋リンカー＋ＶＬ＋Ｃｙｓ）を表す。
【００６７】
gaggtaaagctggaggagtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgtagtctctggattcactttcagtagatatggcatgtcttgggttcgccagactccaggcaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtggtggcggtacttacatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccatgtatcactgtacaagggataactacggtaggaactacgactacggtatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcagccaaaacaacagccccatcggtctatccactggcccctgtgtgtggagatacaactggctcctcggtgactctaggatgcctggtcaagggtggaggcggatcaggtggaggcggatcaggtggaggcggatcagatattgtgatcacccagactacagcaatcatgtctgcatctccaggggaggaggtcaccctaacctgcagtgccacctcaagtgtaagttacatacactggttccagcagaggccaggcacttctcccaaactctggatttatagcacatccaacctggcttctggagtccctgttcgcttcagtggcagtggatatgggacctcttactctctcacaatcagccgaatggaggctgaagatgctgccacttattactgccagcaaaggagtagttccccattcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatcc（配列番号２９）は、ＭＩＮ−Ｅ６重鎖８−リンカー−軽鎖を表す。
【００６８】
gaggtaaagctggaggagtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgtagtctctggattcactttcagtagatatggcatgtcttgggttcgccagactccaggcaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtggtggcggtacttacatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccatgtatcactgtacaagggataactacggtaggaactacgactacggtatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcagccaaaacaacagccccatcggtctatccactggcccctgtgtgtggagatacaactggctcctcggtgactctaggatgcctggtcaagggtggaggcggatcaggtggaggcggatcaggtggaggcggatcagatattgtgatcacccagactacagcaatcatgtctgcatctccaggggaggaggtcaccctaacctgcagtgccacctcaagtgtaagttacatacactggttccagcagaggccaggcacttctcccaaactctggatttatagcacatccaacctggcttctggagtccctgttcgcttcagtggcagtggatatgggacctcttactctctcacaatcagccgaatggaggctgaagatgctgccacttattactgccagcaaaggagtagttccccattcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatcctgt（配列番号３０）は、ＭＩＮ−Ｅ６重鎖８−リンカー−軽鎖−Ｃｙｓを表す。
【００６９】
EVKLEESGGDLVKPGGSLKLSCVVSGFTFSRYGMSWVRQTPGKRLEWVATISGGGTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYHCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTSVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGGGGSGGGGSGGGGSDIVITQTTAIMSASPGEEVTLTCSATSSVSYIHWFQQRPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSSPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVS（配列番号３１）は、ＭＩＮ−Ｅ６重鎖８−リンカー−軽鎖を表す。
【００７０】
EVKLEESGGDLVKPGGSLKLSCVVSGFTFSRYGMSWVRQTPGKRLEWVATISGGGTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYHCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTSVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGGGGSGGGGSGGGGSDIVITQTTAIMSASPGEEVTLTCSATSSVSYIHWFQQRPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSSPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVSC（配列番号３２）は、ＭＩＮ−Ｅ６重鎖８−リンカー−軽鎖−Ｃｙｓを表す。
【００７１】
5'-gggaattccaccatggratgsagctgkgtmatsctctt-3'（配列番号３３）は、ＥｃｏＲＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマー（γフォワード−１）を表す。
【００７２】
5'-gggaattccaccatgracttcgggytgagctkggtttt-3'（配列番号３４）は、ＥｃｏＲＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマー（γフォワード−２）を表す。
【００７３】
5'-gggaattccaccatggctgtcttggggctgctcttct-3'（配列番号３５）は、ＥｃｏＲＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマー（γフォワード−３）を表す。
【００７４】
5'-gggaattccaccatggrcagrcttacwtyy-3'（配列番号３６）は、ＥｃｏＲＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマー（γフォワード−４）を表す。
【００７５】
5'-ctacctc_gagckyggtsytgctggcygggtg-3'（配列番号３７）は、ＸｈｏＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマー（γリバース）を表す。
【００７６】
5'-gggaattccaccatggagacagacacactcctgctat-3'（配列番号３８）は、ＥｃｏＲＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマー（κフォワード−１）を表す。
【００７７】
5'-gggaattccaccatggattttcaggtgcagattttcag-3'（配列番号３９）は、ＥｃｏＲＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマー（κフォワード−２）を表す。
【００７８】
5'-gggaattccaccatgragtcacakacycaggtcttyrta-3'（配列番号４０）は、ＥｃｏＲＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマー（κフォワード−３）を表す。
【００７９】
5'-gggaattccaccatgaggkccccwgctcagytyctkggr-3'（配列番号４１）は、ＥｃｏＲＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマー（κフォワード−４）を表す。
【００８０】
5'-gggaattccaccatgaagttgcctgttaggctgttg-3'（配列番号４２）は、ＥｃｏＲＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマー（κフォワード−５）を表す。
【００８１】
5'-gggaattccaccatgatgagtcctgcccagttcc-3'（配列番号４３）は、ＥｃｏＲＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマー（κフォワード−６）を表す。
【００８２】
5'-ctacctc gagttaacactcattcctgttgaagc-3'（配列番号４４）は、ＸｈｏＩ制限部位を含有するＰＣＲプライマー（κリバース）を表す。
【００８３】
gaggtccagctggaggagtctgggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtggctatgccatgtcttgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtagtggtggtacttatatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaggtctgaggacacggccatgtattactgtgcaagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcgcagggaccacggtcaccgtctcctccgccaaaacgacacccccatctgtctatccactggcccctggatctgctgcccaaactaactccatggtgaccctgggatgcctggtcaagggctatttccctgagccagtgacagtgacctggaactctggatccctgtccagcggtgtgcacaccttcccagctgtcctgcagtctgacctctacactctgagcagctcagtgactgtcccctccagcacctggcccagcgagaccgtcacctgcaacgttgcccacccagccagcaggaccgcg（配列番号４５）は、ＭＩＮ−Ｃ２ Ｆａｂ重鎖を表す。
【００８４】
gacattgtgatcacacagtctacagcttccttaggtgtatctctggggcagagggccaccatctcatgcagggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggtaccaacagagaccaggacagccacccaaactcctcatctatcttgcatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacagtagggagcttccgttcacgttcggaggggggaccaagctggagataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcagtcgtgtgcttcttgaacaacttctaccccaaagacatcaatgtcaagtggaagattgatggcagtgaacgacaaaatggcgtcctgaacagttggactgatcaggacagcaaagacagcacctacagcatgagcagcaccctcacgttgaccaaggacgagtatgaacgacataacagctatacctgtgaggccactcacaagacatcaacttcacccattgtcaagagcttcaacaggaatgagtgt（配列番号４６）は、ＭＩＮ−Ｃ２ Ｆａｂ κ鎖を表す。
【００８５】
EVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARLGGDNYYEYFDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAＶＬQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASRTA（配列番号４７）は、ＭＩＮ−Ｃ２ Ｆａｂ重鎖を表す。
【００８６】
DIVITQSTASLGVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPFTFGGGTKLEIKRAD AAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC（配列番号４８）は、ＭＩＮ−Ｃ２ Ｆａｂ κ鎖を表す。
【００８７】
RADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC（配列番号４９）は、ＭＩＮ−Ｃ２軽鎖ＣＬ領域のアミノ酸配列を表す。
【００８８】
FDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASRTA（配列番号５０）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖ＣＨ１領域のアミノ酸配列を表す。
【００８９】
DIVLTQSTEIMSASPGEKVTITCSASSSISYIHWFQQKPGTSPKLWIFGTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTVSRMEAEDTATYYCQQRSNYPFTFGSGTKLQIKRADAAPTVS（配列番号５１）は、ＭＩＮ−Ａ２−１軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００９０】
DIVMTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGAPARFSGSGSGTSYSLTVSRMESEDAATYYCQQRSSYPSTFGGGTKLEIKRADAAPTVS（配列番号５２）は、ＭＩＮ−Ａ２−２軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００９１】
DIVLTQTTAIMSASPGEKVTITCSASSSVSYMYWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPSTFGGGTKLEIKRAD AAPTVS（配列番号５３）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００９２】
DIVITQSTAIMSASPGEKVTITCSASSSVSYTYWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPSTFGGGTKLEIKRAD AAPTVS（配列番号５４）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００９３】
DIVITQTPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTVSRMESEDAATYYCQQRSSYPSTFGGGTKLEIKRADAAPTVS（配列番号５５）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００９４】
DIVLTQSTAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTVSRMESEDAATYYCQQRSSYPSTFGGGTKLEIKRADAAPTVS（配列番号５６）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００９５】
DIVMTQSPEIMSASPGEKVTITCSASSSISYIHWFQQKPGTSPKLWIFGTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTVSRMEAEDTATYYCQQRSNYPFTFGSGTKLQIKRADAAPTVS（配列番号５７）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００９６】
DIVITQSTEIMSASPGEKVTITCSASSSISYIHWFQQKPGTSPKLWIFGTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTVSRMEAEDTATYYCQQRSNYPFTFGSGTKLQIKRADAAPTVS（配列番号５８）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００９７】
EVKLQESGPELKKPGETVEISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYAGDFKGRFAFSLETSASTAYLQINTLKNEDTATYFCARSGDGYWYYAMD YWGQGTSVTVSSAKTTPPSVY（配列番号５９）は、ＭＩＮ−Ａ２−１重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００９８】
EVQLQQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYAGDFKGRFAFSLETSASTAYLQINTLKNEDTATYFCARSGDGYWYYAMD YWGQGTSVTVSSAKTTPPSVY（配列番号６０）は、ＭＩＮ−Ａ２−２重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００９９】
QVQLQESGPELKQPGETVKISCKASGYTFTNNGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYADDFKGRFAFSLDTSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARTGTARAFYAMD YWGQGTSVTVSSTKTTAPSVY（配列番号６１）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１００】
QVQLQQSGPELKQPGETVKISCKASGYTFTNNGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYADDFKGRFAFSLGTSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARTGTARAFYAMD YWG QGTSVTVSSTKTTAPSVY（配列番号６２）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１０１】
EVQLEQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFINYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYVDDFKGRFAFSLETSARTA YLQINNLKNEDMATYFCARTGTTAILNGMD YWGQGTSVTVSSAKTTPPSVY（配列番号６３）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１０２】
EVQLQQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYAGDFKGRFAFSLETSASTAYLQINTLKNEDTATYFCARSGDGYWYYAMD YWGQGTSVTVSSAKTTPPSVY（配列番号６４）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１０３】
EVKLEESGPELKKPGETVKISCKASGYTFINYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYVDDFKGRFAFSLETSARTA YLQINNLKNEDMATYFCARTGTTAILNGMD YWGQGTSVTVSSAKTTPPSVY（配列番号６５）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１０４】
EVQLEQSGAELVRPGASVKLSCKALGYTFTDYEMHWVKQTPVHGLEWIGAIHPGSGGTAYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCTNYGSFAYWGQGTLVTVSAAKTTPPSVY（配列番号６６）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１０５】
RCRLQQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFINYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYVDDFKGRFAFSLETSARTA YLQINNLKNEDMATYFCARTGTTAILNGMD YWGQGTSVTVSSAKTTPPSCL（配列番号６７）は、ＭＩＮ−Ｆ２−３重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１０６】
EVQLEQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFINYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYVDDFKGRFAFSLETSARTA YLQINNLKNEDMATYFCARTGTTAILNGMD YWGQGTSVTVSSAKTTPPSVY（配列番号６８）は、ＭＩＮ−Ｆ２−４重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１０７】
DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGSSLNWLQQEPDGTIKRLIYATSSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCLQYASSPHVRCWDQAGAETGCCTNC（配列番号６９）は、ＭＩＮ−１４軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１０８】
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISYRASKSVSTSGYSYMHWNQQKPGQPPRLLIYLVSNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHIRELTRSEGGPSW（配列番号７０）は、ＭＩＮ−１７−１軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１０９】
DIQMTQSPASQSASLGESVTITCLASQTIGTWLAWYQQKPGKSPQLLIYAATSLADGVPSRFSGSGSGTKFSFKISSLQAEDFVSYYCQQLYSTPWTFGGGTKLEIKRAD AAPTV（配列番号７１）は、ＭＩＮ−１７−２軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１１０】
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISYRASKSVSTSGYSYMHWNQQKPGQPPRLLIYLVSNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHIRELTRSEGGPSW（配列番号７２）は、ＭＩＮ−２９軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１１１】
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISYRASKSVSTSGYSYMHWNQQKPGQPPRLLIYLVSNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHIRELTRSEGGPSW（配列番号７３）は、ＭＩＮ−３４軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１１２】
DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVGWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYNNYPYTFGGGTKLEIKRADAAPTV（配列番号７４）は、ＭＩＮ−４２軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１１３】
DIQMTQPPASLSASVGETVTITCRASGNIHNFLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHFWSTPWTFGGGTKLEIKRADAAPTV（配列番号７５）は、ＭＩＮ−４５軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１１４】
QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGEINPSNGRTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCATYGNYWYF（配列番号７６）は、ＭＩＮ−１４重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１１５】
QITLKESGPGIVQPSQPFRLTCTFSGFSLSTSGIGVTWIRQPSGKGLEWLATIWWDDDNRYNPSLKSRLTVSKDTSNNQAFLNΠTVETADTAIYYCAQSTMVTA（配列番号７７）は、ＭＩＮ−１７−２重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１１６】
QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGEINPSNGRTNYNEK-FKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCATYGNYWYF（配列番号７８）は、ＭＩＮ−１７−１重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１１７】
DVKLVESGGDLXKLTEGEDIWEGLTLCRDSDQSPLAPVSKPGRVVRPQRSCTVIQGCVLRLQTAHLQVQGVLGIVSGDGESALHSVWIVGATTITINGCDQLQPLLWSLANPRHVIATESESRGCTG（配列番号７９）は、ＭＩＮ−２９重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１１８】
QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTSYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWGGGSTDYNAAFISRLSISKDNSKSQVFFKMNSLQANDTAIYYCARNDYPAWF（配列番号８０）は、ＭＩＮ−３４重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１１９】
EVQLVESGGDLVKPGRSLKLSCAASGFTFSSFGMSWVRQTPDKRLEWVATISSG GTYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCSRRFYYDYD（配列番号８１）は、ＭＩＮ−４２重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１２０】
cgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcagtcgtgtgcttcttgaacaacttctaccccaaagacatcaatgtcaagtggaagattgatggcagtgaacgacaaaatggcgtcctgaacagttggactgatcaggacagcaaagacagcacctacagcatgagcagcaccctcacgttgaccaaggacgagtatgaacgacataacagctatacctgtgaggccactcacaagacatcaacttcacccattgtcaagagcttcaacaggaatgagtgt（配列番号８２）は、ＭＩＮ−Ｃ２軽鎖ＣＬのヌクレオチド配列を表す。
【０１２１】
Ttcgatgtctggggcgcagggaccacggtcaccgtctcctccgccaaaacgacacccccatctgtctatccactggcccctggatctgctgcccaaactaactccatggtgaccctgggatgcctggtcaagggctatttccctgagccagtgacagtgacctggaactctggatccctgtccagcggtgtgcacaccttcccagctgtcctgcagtctgacctctacactctgagcagctcagtgactgtcccctccagcacctggcccagcgagaccgtcacctgcaacgttgcccacccagccagcaggaccgcg_（配列番号８３）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖ＣＨ１のヌクレオチド配列を表す。
【０１２２】
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTGYFMSWVMQSHGKSLEWIGRINPYNGDTFYNQKFKGKATLTVDKSSTTAHIELRSLASEDSAVYYCARKGLYG（配列番号８４）は、ＭＩＮ−４５重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１２３】
gacatccagatgacccagtctccatcctccttatctgcctctctgggagaaagagtcagtctcacttgtcgagcaagtcaggacattggtagtagcttaaactggcttcagcaggaaccagatggaactattaaacgcctgatctacgccacatccagtttagattctggtgtccccaaaaggttcagtggcagtaggtctgggtcagattattctctcaccatcagcagccttgagtctgaagattttgtagactattactgtctacaatatgctagttctcctcacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaacgggc（配列番号８５）は、ＭＩＮ−１４軽鎖可変領域のヌクレオチド配列を表す。
【０１２４】
gacattgtgctgacacagtctcctgcttccttagctgtatctctggggcagagggccaccatctcatacagggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggaaccaacagaaaccaggacagccacccagactcctcatctatcttgtatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacattagggagcttacacgttcggaggggggaccaagctggaa（配列番号８６）は、ＭＩＮ−１７−１軽鎖可変領域のヌクレオチド配列を表す。
【０１２５】
gacattcagatgacccagtctcctgcctcccagtctgcatctctgggagaaagtgtcaccatcacatgcctggcaagtcagaccattggtacatggttagcatggtatcagcagaaaccagggaaatctcctcagctcctgatttatgctgcaaccagcttggcagatggggtcccatcaaggttcagtggtagtggatctggcacaaaattttctttcaagatcagcagcctacaggctgaagattttgtaagttattactgtcaacaactttacagtactccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgggctgatgctgcaccaactgta（配列番号８７）は、ＭＩＮ−１７−２軽鎖可変領域のヌクレオチド配列を表す。
【０１２６】
gtgacattgtgctgacacagtctcctgcttccttagctgtatctctggggcagagggccaccatctcatacagggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggaaccaacagaaaccaggacagccacccagactcctcatctatcttgtatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacattagggagcttacacgttcggaggggggaccaagctgg（配列番号８８）は、ＭＩＮ−２９軽鎖可変領域のヌクレオチド配列を表す。
【０１２７】
gacattgtgctgacacagtctcctgcttccttagctgtatctctggggcagagggccaccatctcatacagggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggaaccaacagaaaccaggacagccacccagactcctcatctatcttgtatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacattagggagcttacacgttcggaggggggaccaagctgg（配列番号８９）は、ＭＩＮ−３４軽鎖可変領域のヌクレオチド配列を表す。
【０１２８】
gacattgtgatgacccagtctcaaaaattcatgtccacatcagtaggagacagggtcagcgtcacctgcaaggccagtcagaatgtgggtactaatgtaggttggtatcaacagaaaccagggcaatctcctaaagcactgatttactcggcatcctaccggtacagtggagtccctgatcgcttcacaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcaatgtgcagtctgaagacttggcagagtatttctgtcagcaatataacaactatccgtacacgttcggaggggggaccaagctggaaataaaacgggctgatgctgcaccaactgta（配列番号９０）は、ＭＩＮ−４２軽鎖可変領域のヌクレオチド配列を表す。
【０１２９】
gacatccagatgactcagcctccagcctccctatctgcatctgtgggagaaactgtcaccatcacatgtcgagcaagtgggaatattcacaattttttagcatggtatcagcagaaacagggaaaatctcctcagctcctggtctataatgcaaaaaccttagcagatggtgtgccatcaaggttcagtggcagtggatcaggaacacaatattctctcaagatcaacagcctgcagcctgaagattttgggagttattactgtcaacatttttggagtactccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgggctgatgctgcaccaactgta（配列番号９１）は、ＭＩＮ−４５軽鎖可変領域のヌクレオチド配列を表す。
【０１３０】
caggtccaactgcagcagcctggggctgaactggtgaagcctggggcttcagtgaagctgtcctgcaaggcttctggctacaccttcaccagctactggatgcactgggtgaagcagaggcctggacaaggccttgagtggattggagagattaatcctagcaacggtcgtactaactacaatgagaagttcaagagcaaggccacactgactgtagacaaatcctccagcacagcctacatgcaactcagcagcctgacatctgaggactctgcggtctattactgtgcaacctatggtaactactggtacttc（配列番号９２）は、ＭＩＮ−１４重鎖可変領域のヌクレオチド配列を表す。
【０１３１】
caggtccaactgcagcagcctggggctgaactggtgaagcctggggcttcagtgaagctgtcctgcaaggcttctggctacaccttcaccagctactggatgcactgggtgaagcagaggcctggacaaggccttgagtggattggagagattaatcctagcaacggtcgtactaactacaatgagaagttcaagagcaaggccacactgactgtagacaaatcctccagcacagcctacatgcaactcagcagcctgacatctgaggactctgcggtctattactgtgcaacctatggtaactactggtacttc（配列番号９３）は、ＭＩＮ−１７−１重鎖可変領域のヌクレオチド配列を表す。
【０１３２】
cagattactctgaaagagtctggccctgggatagttcagccatcccagcccttcagacttacttgcactttctctgggttttcactgagcacttctggtataggtgtaacctggattcgtcagccctcagggaaaggtctggagtggctggcaacgatttggtgggatgatgataaccgctacaacccatctctaaagagcaggctcacagtctccaaagacacctccaacaaccaagcattcctgaatatcatcactgtggaaactgcagatactgccatatactactgtgctcagtctactatggttacggcggga（配列番号９４）は、ＭＩＮ−１７−２重鎖可変領域のヌクレオチド配列を表す。
【０１３３】
ccaggtgcagctgaagcagtcaggacctggcctagtgcagccctcacagagcctgtccatcacctgcacagtctctggtttctcattaactagctatggtgtacactgggttcgccagtctccaggaaagggtctggagtggctgggagtgatatggggtggtggaagcacagactataatgcagctttcatatccagactgagcatcagcaaggacaattccaagagccaagttttctttaaaatgaacagtctgcaagctaatgacacagccatatattactgtgccagaaatgactatccggcctggttt（配列番号９５）は、ＭＩＮ−３４重鎖可変領域のヌクレオチド配列を表す。
【０１３４】
gtgaggtgcaactggtggagtctgggggagacttagtgaagcctggaaggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtagctttggcatgtcttgggttcgccagactccagacaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtagtggtggtacttacacctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccatgtattactgttcaagaaggttctactatgattacgac（配列番号９６）は、ＭＩＮ−４２重鎖可変領域のヌクレオチド配列を表す。
【０１３５】
gaggttcagctgcagcagtctggacctgagctggtgaagcctggggcttcagtgaagatatcctgcaaggcttctggttactcatttactggctactttatgagctgggtgatgcagagccatggaaagagccttgagtggattggacgtattaatccttacaatggtgatactttctacaaccagaagttcaagggcaaggccacattgactgtagacaaatcctctaccacagcccacatagagctccggagcctggcatctgaggactctgcagtctattattgtgcaagaaagggcctctatggg（配列番号９７）は、ＭＩＮ−４５重鎖可変領域のヌクレオチド配列を表す。
【０１３６】
DIVITQSTASLGVSLGQRATISC（配列番号９８）は、ＭＩＮ−Ｃ２軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１３７】
DIVITQTTAIMSASPGEEVTLTC（配列番号９９）は、ＭＩＮ−Ｅ６軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１３８】
DIVLTQSTEIMSASPGEKVTITC（配列番号１００）は、ＭＩＮ−Ａ２−１軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１３９】
DIVMTQSPAIMSASPGEKVTMTC（配列番号１０１）は、ＭＩＮ−Ａ２−２軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１４０】
DIVLTQTTAIMSASPGEKVTITC（配列番号１０２）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１４１】
DIVITQSTAIMSASPGEKVTITC（配列番号１０３）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１４２】
DIVITQTPAIMSASPGEKVTMTC（配列番号１０４）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１４３】
DIVLTQSTAIMSASPGEKVTMTC（配列番号１０５）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１４４】
DIVMTQSPEIMSASPGEKVTITC（配列番号１０６）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１４５】
DIVITQSTEIMSASPGEKVTITC（配列番号１０７）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１４６】
RASKSVSTSGYSYMH（配列番号１０８）は、ＭＩＮ−Ｃ２軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１４７】
SATSSVSYIH（配列番号１０９）は、ＭＩＮ−Ｅ６軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１４８】
SASSSISYIH（配列番号１１０）は、ＭＩＮ−Ａ２−１軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１４９】
SASSSVSYMH（配列番号１１２）は、ＭＩＮ−Ａ２−２軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１５０】
SASSSVSYMY（配列番号１１３）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１５１】
SASSSVSYTY（配列番号１１４）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１５２】
SASSSVSYMH（配列番号１１５）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１５３】
SASSSVSYMH（配列番号１１６）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１５４】
SASSSISYIH（配列番号１１７）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１５５】
SASSSISYIH（配列番号１１８）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１５６】
WYQQRPGQPPKLLIY（配列番号１１９）は、ＭＩＮ−Ｃ２軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１５７】
WFQQRPGTSPKLWIY（配列番号１２０）は、ＭＩＮ−Ｅ６軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１５８】
WFQQKPGTSPKLWIF（配列番号１２１）は、ＭＩＮ−Ａ２−１軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１５９】
WFQQKPGTSPKLWIY（配列番号１２２）は、ＭＩＮ−Ａ２−２軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１６０】
WFQQKPGTSPKLWIY（配列番号１２３）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１６１】
WFQQKPGTSPKLWIY（配列番号１２４）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１６２】
WFQQKPGTSPKLWIY（配列番号１２５）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１６３】
WFQQKPGTSPKLWIY（配列番号１２６）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１６４】
WFQQKPGTSPKLWIF（配列番号１２７）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１６５】
WFQQKPGTSPKLWIF（配列番号１２８）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１６６】
LASNLES（配列番号１２９）は、ＭＩＮ−Ｃ２軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１６７】
STSNLAS（配列番号１３０）は、ＭＩＮ−Ｅ６軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１６８】
GTSNLAS（配列番号１３１）は、ＭＩＮ−Ａ２−１軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１６９】
STSNLAS（配列番号１３２）は、ＭＩＮ−Ａ２−２軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１７０】
STSNLAS（配列番号１３３）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１７１】
STSNLAS（配列番号１３４）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１７２】
STSNLAS（配列番号１３５）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１７３】
STSNLAS（配列番号１３６）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１７４】
GTSNLAS（配列番号１３７）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１７５】
GTSNLAS（配列番号１３８）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１７６】
GVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYC（配列番号１３９）は、ＭＩＮ−Ｃ２軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１７７】
GVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAEDAATYYC（配列番号１４０）は、ＭＩＮ−Ｅ６軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１７８】
GVPARFSGSGSGTSYSLTVSRMEAEDTATYYC（配列番号１４１）は、ＭＩＮ−Ａ２−１軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１７９】
GAPARFSGSGSGTSYSLTVSRMESEDAATYYC（配列番号１４２）は、ＭＩＮ−Ａ２−２軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１８０】
GVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYC（配列番号１４３）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１８１】
GVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYC（配列番号１４４）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１８２】
GVPARFSGSGSGTSYSLTVSRMESEDAATYYC（配列番号１４５）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１８３】
GVPARFSGSGSGTSYSLTVSRMESEDAATYYC（配列番号１４６）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１８４】
GVPARFSGSGSGTSYSLTVSRMEAEDTATYYC（配列番号１４７）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１８５】
GVPARFSGSGSGTSYSLTVSRMEAEDTATYYC（配列番号１４８）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１８６】
QHSRELPFT（配列番号１４９）は、ＭＩＮ−Ｃ２軽鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１８７】
QQRSSSPFT（配列番号１５０）は、ＭＩＮ−Ｅ６軽鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１８８】
QQRSNYPFT（配列番号１５１）は、ＭＩＮ−Ａ２−１軽鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１８９】
QQRSSYPST（配列番号１５２）は、ＭＩＮ−Ａ２−２軽鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１９０】
QQRSSYPST（配列番号１５３）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１軽鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１９１】
QQRSSYPST（配列番号１５４）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２軽鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１９２】
QQRSSYPST（配列番号１５５）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１軽鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１９３】
QQRSSYPST（配列番号１５６）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２軽鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１９４】
QQRSNYPFT（配列番号１５７）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１軽鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１９５】
QQRSNYPFT（配列番号１５８）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２軽鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１９６】
EVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFS（配列番号１５９）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１９７】
EVKLEESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFS（配列番号１６０）は、ＭＩＮ−Ｅ６−７重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１９８】
EVKLEESGGDLVKPGGSLKLSCVVSGFTFS（配列番号１６１）は、ＭＩＮ−Ｅ６−８重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１９９】
EVKLQESGPELKKPGETVEISCKASGYTFT（配列番号１６２）は、ＭＩＮ−Ａ２−１重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２００】
EVQLQQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFT（配列番号１６３）は、ＭＩＮ−Ａ２−２重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２０１】
QVQLQESGPELKQPGETVKISCKASGYTFT（配列番号１６４）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２０２】
QVQLQQSGPELKQPGETVKISCKASGYTFT（配列番号１６５）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２０３】
EVQLEQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFI（配列番号１６６）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２０４】
EVQLQQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFT（配列番号１６７）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２０５】
EVKLEESGPELKKPGETVKISCKASGYTFI（配列番号１６８）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２０６】
EVQLEQSGAELVRPGASVKLSCKALGYTFT（配列番号１６９）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２０７】
RCRLQQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFI（配列番号１７０）は、ＭＩＮ−Ｆ２−３重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２０８】
EVQLEQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFI（配列番号１７１）は、ＭＩＮ−Ｆ２−４重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２０９】
GYAMS（配列番号１７２）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２１０】
RYGMS（配列番号１７３）は、ＭＩＮ−Ｅ６−７重鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２１１】
RYGMS（配列番号１７４）は、ＭＩＮ−Ｅ６−８重鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２１２】
NYGMN（配列番号１７５）は、ＭＩＮ−Ａ２−１重鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２１３】
NYGMN（配列番号１７６）は、ＭＩＮ−Ａ２−２重鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２１４】
NNGMN（配列番号１７７）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１重鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２１５】
NNGMN（配列番号１７８）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２重鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２１６】
NYGMN（配列番号１７９）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１重鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２１７】
NYGMN（配列番号１８０）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２重鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２１８】
NYGMN（配列番号１８１）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１重鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２１９】
DYEMH（配列番号１８２）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２重鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２２０】
NYGMN（配列番号１８３）は、ＭＩＮ−Ｆ２−３重鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２２１】
NYGMN（配列番号１８４）は、ＭＩＮ−Ｆ２−４重鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２２２】
WVRQTPEKRLEWVA（配列番号１８５）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２２３】
WVRQTPDKRLEWVA（配列番号１８６）は、ＭＩＮ−Ｅ６−７重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２２４】
WVRQTPGKRLEWVA（配列番号１８７）は、ＭＩＮ−Ｅ６−８重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２２５】
WVKQAPGKGLKWMG（配列番号１８８）は、ＭＩＮ−Ａ２−１重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２２６】
WVKQAPGKGLKWMG（配列番号１８９）は、ＭＩＮ−Ａ２−２重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２２７】
WVKQAPGKGLKWMG（配列番号１９０）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２２８】
WVKQAPGKGLKWMG（配列番号１９１）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２２９】
WVKQAPGKGLKWMG（配列番号１９２）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２３０】
WVKQAPGKGLKWMG（配列番号１９３）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２３１】
WVKQAPGKGLKWMG（配列番号１９４）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２３２】
WVKQTPVHGLEWIG（配列番号１９５）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２３３】
WVKQAPGKGLKWMG（配列番号１９６）は、ＭＩＮ−Ｆ２−３重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２３４】
WVKQAPGKGLKWMG（配列番号１９７）は、ＭＩＮ−Ｆ２−４重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２３５】
TISSGGTYIYYPDSVKG（配列番号１９８）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２３６】
TISSGGTYIYYPDSVKG（配列番号１９９）は、ＭＩＮ−Ｅ６−７重鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２３７】
TISGGGTYIYYPDSVKG（配列番号２００）は、ＭＩＮ−Ｅ６−８重鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２３８】
WINTYTGEPTYAGDFKG（配列番号２０１）は、ＭＩＮ−Ａ２−１重鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２３９】
WINTYTGEPTYAGDFKG（配列番号２０２）は、ＭＩＮ−Ａ２−２重鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２４０】
WINTYTGEPTYADDFKG（配列番号２０３）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１重鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２４１】
WINTYTGEPTYADDFKG（配列番号２０４）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２重鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２４２】
WINTYTGEPTYVDDFKG（配列番号２０５）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１重鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２４３】
WINTYTGEPTYAGDFKG（配列番号２０６）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２重鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２４４】
WINTYTGEPTYVDDFKG（配列番号２０７）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１重鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２４５】
AIHPGSGGTAYNQKFKG（配列番号２０８）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２重鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２４６】
WINTYTGEPTYVDDFKG（配列番号２０９）は、ＭＩＮ−Ｆ２−３重鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２４７】
WINTYTGEPTYVDDFKG（配列番号２１０）は、ＭＩＮ−Ｆ２−４重鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２４８】
RFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCAR（配列番号２１１）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２４９】
RFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCAR（配列番号２１２）は、ＭＩＮ−Ｅ６−７重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２５０】
RFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYHCTR（配列番号２１３）は、ＭＩＮ−Ｅ６−８重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２５１】
RFAFSLETSASTAYLQINTLKNEDTATYFCAR（配列番号２１４）は、ＭＩＮ−Ａ２−１重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２５２】
RFAFSLETSASTAYLQINTLKNEDTATYFCAR（配列番号２１５）は、ＭＩＮ−Ａ２−２重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２５３】
RFAFSLDTSASTAYLQINNLKNEDMATYFCAR（配列番号２１６）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２５４】
RFAFSLGTSASTAYLQINNLKNEDMATYFCAR（配列番号２１７）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２５５】
RFAFSLETSARTAYLQINNLKNEDMATYFCAR（配列番号２１８）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２５６】
RFAFSLETSASTAYLQINTLKNEDTATYFCAR（配列番号２１９）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２５７】
RFAFSLETSARTAYLQINNLKNEDMATYFCAR（配列番号２２０）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２５８】
KATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCTN（配列番号２２１）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２５９】
RFAFSLETSARTAYLQINNLKNEDMATYFCAR（配列番号２２２）は、ＭＩＮ−Ｆ２−３重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２６０】
RFAFSLETSARTAYLQINNLKNEDMATYFCAR（配列番号２２３）は、ＭＩＮ−Ｆ２−４重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２６１】
LGGDNYYEY（配列番号２２４）は、ＭＩＮ−Ｃ２重鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２６２】
DNYGSSYDYA（配列番号２２５）は、ＭＩＮ−Ｅ６−７重鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２６３】
DNYGRNYDYG（配列番号２２６）は、ＭＩＮ−Ｅ６−８重鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２６４】
SGDGYWYYA（配列番号２２７）は、ＭＩＮ−Ａ２−１重鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２６５】
SGDGYWYYA（配列番号２２８）は、ＭＩＮ−Ａ２−２重鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２６６】
TGTARAFYA（配列番号２２９）は、ＭＩＮ−Ｃ９−１重鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２６７】
TGTARAFYA（配列番号２３０）は、ＭＩＮ−Ｃ９−２重鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２６８】
TGTTAILNG（配列番号２３１）は、ＭＩＮ−Ｄ７−１重鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２６９】
SGDGYWYYA（配列番号２３２）は、ＭＩＮ−Ｄ７−２重鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２７０】
TGTTAILNG（配列番号２３３）は、ＭＩＮ−Ｆ２−１重鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２７１】
YGSFA（配列番号２３４）は、ＭＩＮ−Ｆ２−２重鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２７２】
TGTTAILNG（配列番号２３５）は、ＭＩＮ−Ｆ２−３重鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２７３】
TGTTAILNG（配列番号２３６）は、ＭＩＮ−Ｆ２−４重鎖可変相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０２７４】
DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTC（配列番号２３７）は、ＭＩＮ−１４軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２７５】
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISY（配列番号２３８）は、ＭＩＮ−１７−１軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２７６】
DIQMTQSPASQSASLGESVTITC（配列番号２３９）は、ＭＩＮ−１７−２軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２７７】
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISY（配列番号２４０）は、ＭＩＮ−２９軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２７８】
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISY（配列番号２４１）は、ＭＩＮ−３４軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２７９】
DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTC（配列番号２４２）は、ＭＩＮ−４２軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２８０】
DIQMTQPPASLSASVGETVTITC（配列番号２４３）は、ＭＩＮ−４５軽鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２８１】
RASQDIGSSLN（配列番号２４４）は、ＭＩＮ−１４軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２８２】
RASKSVSTSGYSYMH（配列番号２４５）は、ＭＩＮ−１７−１軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２８３】
LASQTIGTWLA（配列番号２４６）は、ＭＩＮ−１７−２軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２８４】
RASKSVSTSGYSYMH（配列番号２４７）は、ＭＩＮ−２９軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２８５】
RASKSVSTSGYSYMH（配列番号２４８）は、ＭＩＮ−３４軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２８６】
KASQNVGTNVG（配列番号２４９）は、ＭＩＮ−４２軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２８７】
RASGNIHNFLA（配列番号２５０）は、ＭＩＮ−４５軽鎖可変相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０２８８】
WLQQEPDGTIKRLIY（配列番号２５１）は、ＭＩＮ−１４軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２８９】
WNQQKPGQPPRLLIY（配列番号２５２）は、ＭＩＮ−１７−１軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２９０】
WYQQKPGKSPQLLIY（配列番号２５３）は、ＭＩＮ−１７−２軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２９１】
WNQQKPGQPPRLLIY（配列番号２５４）は、ＭＩＮ−２９軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２９２】
WNQQKPGQPPRLLIY（配列番号２５５）は、ＭＩＮ−３４軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２９３】
WYQQKPGQSPKALIY（配列番号２６６）は、ＭＩＮ−４２軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２９４】
WYQQKQGKSPQLLVY（配列番号２６７）は、ＭＩＮ−４５軽鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２９５】
ATSSLDS（配列番号２６８）は、ＭＩＮ−１４軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２９６】
LVSNLES（配列番号２６９）は、ＭＩＮ−１７−１軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２９７】
AATSLAD（配列番号２７０）は、ＭＩＮ−１７−２軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２９８】
LVSNLES（配列番号２７１）は、ＭＩＮ−２９軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０２９９】
LVSNLES（配列番号２７２）は、ＭＩＮ−３４軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３００】
SASYRYS（配列番号２７３）は、ＭＩＮ−４２軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３０１】
NAKTLAD（配列番号２７４）は、ＭＩＮ−４５軽鎖可変相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３０２】
GVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYC（配列番号２７５）は、ＭＩＮ−１４軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３０３】
GVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYC（配列番号２７６）は、ＭＩＮ−１７−１軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３０４】
GVPSRFSGSGSGTKFSFKISSLQAEDFVSYYC（配列番号２７７）は、ＭＩＮ−１７−２軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３０５】
GVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYC（配列番号２８８）は、ＭＩＮ−２９軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３０６】
GVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYC（配列番号２８９）は、ＭＩＮ−３４軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３０７】
GVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFC（配列番号２９０）は、ＭＩＮ−４２軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３０８】
GVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGSYYC（配列番号２９１）は、ＭＩＮ−４５軽鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３０９】
QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFT（配列番号２９２）は、ＭＩＮ−１４重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３１０】
QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFT（配列番号２９３）は、ＭＩＮ−１７−１重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３１１】
QITLKESGPGIVQPSQPFRLTCTFSGFSLSTS（配列番号２９４）は、ＭＩＮ−１７−２重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３１２】
DVKLVESGGDLXKLTEGEDIWEGLTLCRDSDQSPLAPVSKPGRVVRPQRSCTVIQGCVL（配列番号２９５）は、ＭＩＮ−２９重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３１３】
QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLT（配列番号２９６）は、ＭＩＮ−３４重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３１４】
EVQLVESGGDLVKPGRSLKLSCAASGFTFS（配列番号２９８）は、ＭＩＮ−４２重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３１５】
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFT（配列番号２９９）は、ＭＩＮ−４５重鎖可変フレームワーク領域１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３１６】
SYWMH（配列番号３００）は、ＭＩＮ−１４重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３１７】
SYWMH（配列番号３０１）は、ＭＩＮ−１７−１重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３１８】
GIGVT（配列番号３０２）は、ＭＩＮ−１７−２重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３１９】
SYGVH（配列番号３０３）は、ＭＩＮ−３４重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３２０】
SFGMS（配列番号３０４）は、ＭＩＮ−４２重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３２１】
GYFMS（配列番号３０５）は、ＭＩＮ−４５重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３２２】
WVKQRPGQGLEWIG（配列番号３０６）は、ＭＩＮ−１４重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３２３】
WVKQRPGQGLEWIG（配列番号３０７）は、ＭＩＮ−１７−１重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３２４】
WIRQPSGKGLEWLA（配列番号３０８）は、ＭＩＮ−１７−２重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３２５】
RLQTAHLQVQGVL（配列番号３０９）は、ＭＩＮ−２９重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３２６】
WVRQSPGKGLEWLG（配列番号３１０）は、ＭＩＮ−３４重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３２７】
WVRQTPDKRLEWVA（配列番号３１１）は、ＭＩＮ−４２重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３２８】
WVMQSHGKSLEWIG（配列番号３１２）は、ＭＩＮ−４５重鎖可変フレームワーク領域２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３２９】
EINPSNGRTNYNEKFKS（配列番号３１３）は、ＭＩＮ−１４重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３３０】
EINPSNGRTNYNEKFKS（配列番号３１４）は、ＭＩＮ−１７−１重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３３１】
TIWWDDDNRYNPSLKS（配列番号３１５）は、ＭＩＮ−１７−２重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３３２】
GIVSGDGESALHSVWIVG（配列番号３１６）は、ＭＩＮ−２９重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３３３】
VIWGGGSTDYNAAFIS（配列番号３１７）は、ＭＩＮ−３４重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３３４】
TISSGGTYTYYPDSVKG（配列番号３１８）は、ＭＩＮ−４２重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３３５】
RINPYNGDTFYNQKFKG（配列番号３１９）は、ＭＩＮ−４５重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を表す。
【０３３６】
KATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAT（配列番号３２０）は、ＭＩＮ−１４重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３３７】
KATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAT（配列番号３２１）は、ＭＩＮ−１７−１重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３３８】
RLTVSKDTSNNQAFLNIITVETADTAIYYCAQ（配列番号３２２）は、ＭＩＮ−１７−２重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３３９】
ATTITINGCDQLQPLLWSLANPRHVIATES（配列番号３２３）は、ＭＩＮ−２９重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３４０】
RLSISKDNSKSQVFFKMNSLQANDTAIYYCAR（配列番号３２４）は、ＭＩＮ−３４重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３４１】
RFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCSR（配列番号３２５）は、ＭＩＮ−４２重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３４２】
KATLTVDKSSTTAHIELRSLASEDSAVYYCAR（配列番号３２６）は、ＭＩＮ−４５重鎖可変フレームワーク領域３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列を表す。
【０３４３】
DIVITQSTASLGVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPFTFGGGTKLEIKRAD AAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNECSGGGSGGGSEGGGSEGGGSEGGGSEGGGSGGGSGEVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARLGGDNYYEYFDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASRTA（配列番号３２７）は、ＭＩＮ−Ｃ２一本鎖Ｆａｂ（軽鎖−リンカー−重鎖;ＶＬ＋ＣＬ＋リンカー＋ＶＨ＋ＣＨ１）のアミノ酸配列を表す。
【０３４４】
METDTLLLWVLLLWVPGSTGD（配列番号３２８）は、Ｉｇκ鎖のリーダー配列を表す。
【０３４５】
EQKLISEEDL（配列番号３２９）は、Ｍｙｃタグを表す。
【０３４６】
NYGMN（配列番号３３０）は、ＶＨ−ＣＳ−ＣＤＲ１．１：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変重鎖のＣＤＲ１共通配列を表す。
【０３４７】
GYAMS（配列番号３３１）は、ＶＨ−ＣＳ−ＣＤＲ１．２：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変重鎖のＣＤＲ１共通配列を表す。
【０３４８】
R/GYA/GMS（配列番号３３２）は、ＶＨ−ＣＳ−ＣＤＲ１．３：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変重鎖のＣＤＲ１共通配列を表す。
【０３４９】
WINTYTGEPTYA/VG/DDFKG（配列番号３３３）は、ＶＨ−ＣＳ−ＣＤＲ２．１：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変重鎖のＣＤＲ２共通配列を表す。
【０３５０】
TISSGGTYIYYPDSVKG（配列番号３３４）は、ＶＨ−ＣＳ−ＣＤＲ２．２：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変重鎖のＣＤＲ２共通配列を表す。
【０３５１】
S/TGT/DT/A-Y/FYA（配列番号３３５）は、ＶＨ−ＣＳ−ＣＤＲ３．１：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変重鎖に対するＣＤＲ３共通配列を表す。
【０３５２】
TGTTAILNG（配列番号３３６）は、ＶＨ−ＣＳ−ＣＤＲ３．２：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変重鎖に対するＣＤＲ３共通配列を表す。
【０３５３】
SGDGYWYYA（配列番号３３７）は、ＶＨ−ＣＳ−ＣＤＲ３．３：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変重鎖に対するＣＤＲ３共通配列を表す。
【０３５４】
DNYG- YDYG/A（配列番号３３８）は、ＶＨ−ＣＳ−ＣＤＲ３．４：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変重鎖に対するＣＤＲ３共通配列を表す。
【０３５５】
SASSSV/ISYM/IH/Y（配列番号３３９）は、ＶＬ−ＣＳ−ＣＤＲ１．１：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変軽鎖に対するＣＤＲ１共通配列を表す。
【０３５６】
RASKSVSTSGYSYMH（配列番号３４０）は、ＶＬ−ＣＳ−ＣＤＲ１．２：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変軽鎖に対するＣＤＲ１共通配列を表す。
【０３５７】
S/GTSNLAS（配列番号３４１）は、ＶＬ−ＣＳ−ＣＤＲ２．１：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変軽鎖に対するＣＤＲ２共通配列を表す。
【０３５８】
LASNLES（配列番号３４２）は、ＶＬ−ＣＳ−ＣＤＲ２．２：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変軽鎖に対するＣＤＲ２共通配列を表す。
【０３５９】
QQRSS/NYPS/FT（配列番号３４３）は、ＶＬ−ＣＳ−ＣＤＲ３．１：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変軽鎖に対するＣＤＲ３共通配列を表す。
【０３６０】
QHSRELPFT（配列番号３４４）は、ＶＬ−ＣＳ−ＣＤＲ３．２：ＩｇＧ抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変軽鎖に対するＣＤＲ３共通配列を表す。
【０３６１】
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC（配列番号３４５）は、フレームワーク領域１ヒトＩｇＧ１軽鎖アミノ酸配列を表す。
【０３６２】
5' gat ate cag atg ace cag tec ccg age tec ctg tec gee tct gtg ggcgat agg gtc ace ate ace tgc cgt gee 3'（配列番号３４６）は、フレームワーク領域１ヒトＩｇＧ１軽鎖ＤＮＡ配列を表す。
【０３６３】
WYQQKPGKAPKLLIY（配列番号３４７）は、フレームワーク領域２ヒトＩｇＧ１軽鎖アミノ酸配列を表す。
【０３６４】
5' tgg tat caa cag aaa cca gga aaa get ccg aaa eta ctg att tac 3'（配列番号３４８）は、フレームワーク領域２ヒトＩｇＧ１軽鎖ＤＮＡ配列を表す。
【０３６５】
GVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC（配列番号３４９）はフレームワーク領域３ヒトＩｇＧ１軽鎖アミノ酸配列を表す。
【０３６６】
5' gga gtc cct tct cgc ttc tct gga tec aga tct ggg acg gat ttc actctg ace ate age agt ctg cag ccg gaa gac ttc gca ate tat tac 3'（配列番号３５０）は、フレームワーク領域３ヒトＩｇＧ１軽鎖ＤＮＡ配列を表す。
【０３６７】
FGQGTKVEIK（配列番号３５１）は、フレームワーク領域４ヒトＩｇＧ１軽鎖アミノ酸配列を表す。
【０３６８】
5' ttc gga cag ggt ace aag gtg gag ate aaa 3'（配列番号３５２）は、フレームワーク領域４ヒトＩｇＧ１軽鎖ＤＮＡ配列を表す。
【０３６９】
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS（配列番号３５３）は、フレームワーク領域１ヒトＩｇＧ１重鎖アミノ酸配列を表す。
【０３７０】
5' gag gtt cag ctg gtg gag tct ggc ggt ggc ctg gtg cag cca ggg ggctea etc cgt ttg tec tgt gca get tct 3'（配列番号３５４）は、フレームワーク領域１ヒトＩｇＧ１重鎖ＤＮＡ配列を表す。
【０３７１】
WVRQAPGKGLEWVA（配列番号３５５）は、フレームワーク領域２ヒトＩｇＧ１重鎖アミノ酸配列を表す。
【０３７２】
5' tgg gtg cgt cag gcc ccg ggt aag ggc ctg gaa tgg gtt gca 3'（配列番号３５６）はフレームワーク領域２ヒトＩｇＧ１重鎖ＤＮＡ配列を表す。
【０３７３】
RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSR（配列番号３５７）はフレームワーク領域３ヒトＩｇＧ１重鎖アミノ酸配列を表す。
【０３７４】
5' cgt ttc act ata age gca gac aca tec aaa aac aca gcc tac ctg cagatg aac age ctg cgt get gag gac act gcc gtc tat tat tgt tct aga 3'（配列番号３５８）は、フレームワーク領域３ヒトＩｇＧ１重鎖ＤＮＡ配列を表す。
【０３７５】
WGQGTLVTVSS（配列番号３５９）は、フレームワーク領域４ヒトＩｇＧ１重鎖アミノ酸配列を表す。
【０３７６】
5' tgg ggt caa gga ace ctg gtc ace gtc tec teg 3'（配列番号３６０）は、フレームワーク領域４ヒトＩｇＧ１重鎖ＤＮＡ配列を表す。
【０３７７】
SGGGSGGGSEGGGSEGGGSEGGGSEGGGSGGGSG（配列番号３６１）はリンカー配列アミノ酸を表す。
【０３７８】
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCA ASGFTFS（配列番号３６２）は、ＩＧＨＶ３（名前はＩｇｂｌａｓｔに由来する）：ＦＷＲ１：ＭＩＮ−Ｃ２の可変重鎖領域に対して８４．７％の相同性（２４９／２９４）を有するヒトＩｇＧ抗体のフレームワーク領域の配列を表す。
【０３７９】
WVRQAPGKGLEWVS（配列番号３６３）は、ＩＧＨＶ３（名前はＩｇｂｌａｓｔに由来する）：ＦＷＲ２：ＭＩＮ−Ｃ２の可変重鎖領域に対して８４．７％の相同性（２４９／２９４）を有するヒトＩｇＧ抗体のフレームワーク領域の配列を表す。
【０３８０】
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAV（配列番号３６４）は、ＩＧＨＶ３（名前はＩｇｂｌａｓｔに由来する）：ＦＷＲ３：ＭＩＮ−Ｃ２の可変重鎖領域に対して８４．７％の相同性（２４９／２９４）を有するヒトＩｇＧ抗体のフレームワーク領域の配列を表す。
【０３８１】
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITC（配列番号３６５）は、ＩＧｋＶ７（名前はＩｇｂｌａｓｔに由来する）：ＦＷＲ１：ＭＩＮ−Ｃ２の可変軽鎖領域に対して７６．４％の相同性（２２６／２９６）を有するヒトＩｇＧ抗体のフレームワーク領域の配列を表す。
【０３８２】
WYQQKPGQPPKLLIY（配列番号３６６）は、ＩＧｋＶ７（名前はＩｇｂｌａｓｔに由来する）：ＦＷＲ２：ＭＩＮ−Ｃ２の可変軽鎖領域に対して７６．４％の相同性（２２６／２９６）を有するヒトＩｇＧ抗体のフレームワーク領域の配列を表す。
【０３８３】
GVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYY（配列番号３６７）は、ＩＧｋＶ７（名前はＩｇｂｌａｓｔに由来する）：ＦＷＲ３：ＭＩＮ−Ｃ２の可変軽鎖領域に対して７６．４％の相同性（２２６／２９６）を有するヒトＩｇＧ抗体のフレームワーク領域の配列を表す。
【０３８４】
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS（配列番号３６８）は、ＩＧＨＶ３（名前はＩｇｂｌａｓｔに由来する）：ＦＷＲ１：ＭＩＮ−Ｅ６の可変重鎖領域に対して８４．１％の相同性（２４９／２９６）を有するヒトＩｇＧ抗体のフレームワーク領域の配列を表す。
【０３８５】
WVRQAPGKGLEWVS（配列番号３６９）は、ＩＧＨＶ３（名前はＩｇｂｌａｓｔに由来する）：ＦＷＲ２：ＭＩＮ−Ｅ６の可変重鎖領域に対して８４．１％の相同性（２４９／２９６）を有するヒトＩｇＧ抗体のフレームワーク領域の配列を表す。
【０３８６】
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR（配列番号３７０）はＩＧＨＶ３（名前はＩｇｂｌａｓｔに由来する）：ＦＷＲ３：ＭＩＮ−Ｅ６の可変重鎖領域に対して８４．１％の相同性（２４９／２９６）を有するヒトＩｇＧ抗体のフレームワーク領域の配列を表す。
【０３８７】
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC（配列番号３７１）は、ＩＧｋＶ３（名前はＩｇｂｌａｓｔに由来する）：ＦＷＲ１：ＭＩＮ−Ｅ６の可変軽鎖領域に対して６９．５％の相同性（１８７／２６９）を有するヒトＩｇＧ抗体のフレームワーク領域の配列を表す。
【０３８８】
WFQQRPGTSPK LLIY（配列番号３７２）は、ＩＧｋＶ３（名前はＩｇｂｌａｓｔに由来する）：ＦＷＲ２：ＭＩＮ−Ｅ６の可変軽鎖領域に対して６９．５％の相同性（１８７／２６９）を有するヒトＩｇＧ抗体のフレームワーク領域の配列を表す。
【０３８９】
GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC（配列番号３７３）は、ＩＧｋＶ３（名前はＩｇｂｌａｓｔに由来する）：ＦＷＲ３：ＭＩＮ−Ｅ６の可変軽鎖領域に対して６９．５％の相同性（１８７／２６９）を有するヒトＩｇＧ抗体のフレームワーク領域の配列を示す。
【０３９０】
モノクローナル抗体
モノクローナル抗体のクローン化は、様々な理由から有用である。単一の抗体を産生するハイブリドーマ細胞によって、同一であり、同一な効果を発揮する多数の抗体を生成する方法が提供される。これは、治療的使用の対象とされる抗体に有用である。モノクローナル抗体、とりわけ軽鎖及び重鎖の可変領域の配列を決定することは、それによって、例えば一本鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）又は組み換え一価抗体（例えばＦａｂ）のような抗体変異体の生成を可能とする多くの形態のタンパク質工学が可能となるため、特に有用である。モノクローナル抗体（monoclonals）、特に可変領域の配列を決定することは、重要なことには、ヒト様に見えることによってより良く宿主免疫系を回避することができるためにヒトに対する療法に好ましい場合がある、「ヒト化されている」又は部分的にヒト化されている（キメラ）抗体の生成を可能とする。
【０３９１】
モノクローナル抗体を生成する方法、並びに例えば一本鎖抗体、二重特異性抗体、組み換えＦａｂ、ヒト化されている及び部分的に（pariticularly）ヒト化されている抗体等の本明細書中で開示される抗体変異体を生成する方法は多くある。本明細書中に記載される方法は例示を意図され、本発明はモノクローナル抗体に関するが、他の方法によって生成されたこれらの抗体の誘導体（derivations）は、本明細書中に記載される方法によって産生されたものと同じ効果を有する。
【０３９２】
モノクローナル抗ＭＵＣ１^＊抗体を産生させ、下記に記載されるようにスクリーニングした。マウスを、ＭＵＣ１^＊の細胞外ドメイン（GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA（配列番号１））に対応する合成ペプチド、又は単一のアミノ酸置換を含有するペプチド変異体（GTINVHDVETQFNQYKTEAASPYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA（配列番号２））によって免疫化した。当該技術分野の標準的技法に従ってハイブリドーマを生成した。抗ＭＵＣ１^＊抗体を産生する個々のハイブリドーマを、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ＭＵＣ１^＊ペプチドに結合するそれらの能力に基づいて同定した。次いで、先の選択段階で同定したハイブリドーマからの上清を、ＭＵＣ１^＊陽性細胞及びＭＵＣ１陰性細胞に添加し、ＦＡＣＳを用いて、生細胞上のＭＵＣ１^＊を認識することが可能な抗体を分泌するハイブリドーマを同定した。次いで、マウスにハイブリドーマを注射する（腹水）か、又は標準方法に従う大規模培養によって産生させることによって、同定したＭＵＣ１^＊同種抗体を大量に得た。得られた抗体を以前に記載されるようにアッセイした。加えて、抗体クローンを、ＭＵＣ１^＊の細胞外ドメインに結合し、二量化することによってＭＵＣ１^＊陽性細胞の成長を刺激するその能力について試験した。次いで、ＭＵＣ１^＊陽性細胞（多能性幹細胞、癌細胞及びトランスフェクト細胞）の成長を効果的に刺激した抗体を生化学的に切断して、ＭＵＣ１^＊二量化を遮断し、それによりＭＵＣ１^＊発現細胞の成長を阻害するはずである一価抗体を生成した。一部の例では、抗体をパパイン消化して、一価Ｆａｂを生成し、これをＭＵＣ１^＊陽性細胞の成長を阻害するその能力についてアッセイした。一部の例では、Ｆａｂを公表済みの方法に従ってペグ化したが、ペグ化によって抗体フラグメントの安定性が増大することが観察された。選択された抗体の重鎖及び軽鎖の配列を標準方法によって得て、二価及び一価ＭＵＣ１^＊抗体及び抗体誘導体を作製するための様々な構築物を作製した。
【０３９３】
リンカーによって結合した重鎖及び軽鎖の両方の可変領域を含有する一本鎖構築物は一価であり、したがってＭＵＣ１^＊媒介性細胞成長の阻害に有用である。補体の動員（ＡＤＣＣ）を促進するために、定常領域の一部が同様に組み込まれていてもよく、かかる構築物を操作する方法は当業者に既知である。二価抗体誘導体を生じることとなる定常領域の二量化を妨げるために、システイン置換等の突然変異を組み込んでもよい。ペグ化は、一価抗体フラグメントの半減期を延長するために一般に用いられる方法であり、これを用いて本明細書中に記載されるＦａｂ及び一本鎖抗体の安定性を増大させた。
【０３９４】
本発明の抗ＭＵＣ１^＊抗体は、一本鎖可変フラグメント抗体（ｓｃＦｖ）であってもよい。組み換え手法によって、一本鎖可変フラグメント抗体（ｓｃＦｖ）が開発された。単量体ｓｃＦｖの分子量はわずか約３０ｋＤａであるが、これを様々な系において、高Ｇｌｙ／Ｓｅｒ合成リンカーによって結合した単一のＶＬ−ＶＨ対として発現させる（Berezov A. et al., 2001, J Med Chem 44:2565）。細菌又は真核細胞において発現させた場合、ｓｃＦｖは親抗体の対応する領域と同様の立体配座に折り畳まれる。これはＦａｂと同程度の親和性を保持することが示されている（Kortt et al., 1994, Eur J Biochem 221:151）。ｓｃＦｖは、治療薬としてのその可能性を高めるための、ヒト化等の様々な遺伝子修飾及び融合タンパク質の産生が可能である。
【０３９５】
ファージ提示法を用いて、抗ＭＵＣ１^＊ ｓｃＦｖを産生させることができる。この方法では、幅広いレパートリーの抗体可変領域ｃＤＮＡをＢ細胞から回収し、ＶＨとＶＬとの組み合わせをｓｃＦｖの形態で、糸状バクテリオファージの表面上で発現させる。ｓｃＦｖを発現するファージを、抗原をコーティングしたプレートからパンニングする。抗ＭＵＣ１^＊ ｓｃＦｖの親和性は、構築物のＣＤＲを突然変異させた後、パンニング手順を繰り返すことによって向上させることができる。
【０３９６】
本発明の抗ＭＵＣ１^＊抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ２二重特異性抗体、Ｆａｂ３三重特異性抗体、二価ミニボディ（minibody）、三価トリアボディ（triabody）又は四価テトラボディ（tetrabodies）であり得る。
【０３９７】
一価抗ＭＵＣ１^＊抗体の用途の１つは、ＭＵＣ１^＊を過剰発現することが多い癌細胞の治療に対するものである。同様にＭＵＣ１^＊を示す非癌性細胞の阻害を回避するために、二重特異性抗体を作製してもよい（このハイブリッド抗体の一方の部分はＭＵＣ１^＊に結合してそれを遮断し、他方の部分が別の腫瘍特異的な、又は同様の抗原に結合する）。例えば、一方の部分がＭＵＣ１^＊を認識し、一方で他方の部分がＨＥＲ２、ＣＥＡ、トランスフェリン、ＥＧＦＲ、ＴＦ（組織因子）、ＤＬＬ（Ｄｅｌｔａ様リガンド）、ＤＬＬ−４、Ｊａｇｇｅｄ、Ｎｏｔｃｈ受容体リガンド、Ｎｏｔｃｈ受容体の一部等に結合し得る。単量体結合に対して増大した協同的結合の結合活性によって、抗体が標的の腫瘍細胞上に優先的に保持される。
【０３９８】
本発明の抗ＭＵＣ１^＊抗体は二重特異性抗体であってもよい。二重特異性抗体は、二重標的化特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくはヒト抗体又はヒト化抗体である。二重特異性抗体は、異なる特異性を有する２つの抗体の可変ドメインの組み換えによって誘導される。したがって、二重特異性抗体はその親抗体の抗原の両方に結合することが可能である。抗ＭＵＣ１^＊の場合、結合特異性の一方はＭＵＣ１^＊に対するものであってもよく、他方が別のタンパク質、例えば任意の他の細胞表面タンパク質に対するものであってもよい。これらの二重特異性抗ＭＵＣ１^＊抗体は、アンタゴニスト抗体又はアゴニスト抗体として機能し得る。
【０３９９】
二重特異性抗体を作製する方法は既知である（Traunecker et al., EMBO J, 1991, 10:3655、国際公開第９３／０８８２９号、Suresh et al., Methods in Enzmology, 1986, 121:210、Milstein and Cuello, 1983, Nature, 305:537）。簡潔に述べると、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメインを、免疫グロブリンの定常ドメインと融合させる。この融合体は、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン（ヒンジ部（part of the hinge）、ＣＨ２領域及びＣＨ３領域）を含有し、好ましくは第１重鎖定常領域（ＣＨ１）を含有する。免疫グロブリン重鎖融合体をコードするＤＮＡ及び免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡを別個の発現ベクターに挿入し、共トランスフェクトする（cotransfected）。
【０４００】
ＭＵＣ１^＊の場合、二重特異性抗体は、ＭＵＣ１^＊リガンド結合部位の二量化を遮断することによって細胞成長阻害物質として作用し得る。一方の可変領域がＭＵＣ１^＊を認識し、他方が別の腫瘍特異的抗原を認識した場合、ＭＵＣ１^＊媒介性成長の阻害の望ましくない副作用が回避される可能性がある。二重特異性抗体は、両方の抗原を提示した腫瘍細胞に優先的に結合し得る。かかる手法は、増強された特異性及び抗腫瘍効果を有するＨＥＲ２−ＨＥＲ３二重特異性抗体（Robinson, et al. 2008）、並びに両方の受容体からのシグナル伝達を遮断するＥＧＦＲ−ＩＧＦＲ二重特異性抗体（Lu, et al. 2004）について成功している。さらに、二重特異性抗体の第２の「腕」は、Ｔ細胞を動員するためのＣＤ３（Baeuerle and Reinhardt, 2009、Bortoletto, etal 2002）、又は好中球、ナチュラルキラー細胞若しくは他の単球を動員するためのＣＤ１６といった免疫系の細胞を標的化、動員及び結合する（engage）ことができる（Bruenke, et al. 2005、McCall, et al. 1999）。治療抗体の両方の腕は、一本鎖として一列に（intandem）、タンデム（tandem）ｓｃＦｖ分子及び同様のタンデムダイアボディといった複数のフォーマットでクローン化することができる（Chames and Baty 2009、Holliger P, 1993）。異なる抗体に由来するＦａｂフラグメントを化学的に結合させて二重特異性Ｆａｂを形成することもできる（Chames and Baty 2009）。
【０４０１】
一方で、ＭＵＣ１^＊陽性細胞の成長を促進するのが望ましい場合も多い。例えば、多能性幹細胞及び一部の前駆細胞はＭＵＣ１^＊を発現する。二価ＭＵＣ１^＊抗体は、原始細胞上のＭＵＣ１^＊受容体を二量化し、細胞を多能性状態に維持したまま細胞成長を促進する。二価抗ＭＵＣ１^＊抗体は、細胞に外部から添加しても、又は遺伝的に付加させてもよい。例えば、二価抗ＭＵＣ１^＊抗体をコードする遺伝子は、卵子と精子との融合が完了する前であっても原始細胞に付加される。このようにして、得られた幹細胞及びその子孫は、その無制限の増殖を刺激するリガンドを産生して、分泌する。代替的には、この抗体をコードするプラスミドを原始細胞にトランスフェクトして、ＭＵＣ１^＊受容体を活性化するか、又は分化過程に入った幹細胞をレスキューする（rescue）ことによって、その多分化能を維持させる。
【０４０２】
同様に、ＭＵＣ１^＊をコードする遺伝子を導入することによって細胞において多分化能を誘導させる。この遺伝子は単独で、又はＭＭＰ−１４及びＴＡＣＥのようなＭＵＣ１切断酵素をコードする遺伝子、若しくはＭＵＣ１^＊の天然リガンドであるＮＭ２３をコードする遺伝子といった、ＭＵＣ１^＊を介したシグナル伝達を促進する遺伝子を含む他の遺伝子と組み合わせて導入することができる。
【０４０３】
二価ＭＵＣ１^＊抗体及び抗体誘導体を、造血幹細胞及び前駆細胞の増殖を促進することが望ましい化学療法及び他の状況の影響を受けている患者に投与する。これらの場合では、患者に全身投与を行っても、又は局所注入を介して投与を行ってもよい。様々な形態の幹細胞移植療法において、分化の開始前に移植した細胞集団の活力を確立するために、ＭＵＣ１^＊刺激抗体のｉｎ ｓｉｔｕ注入が有効であり得る。
【０４０４】
本発明のさらに別の態様では、ＭＵＣ１^＊発現及び成長を刺激するシグナル伝達の抗アポトーシス性を支配すること（command）が望ましい場合も多い。かかる例の１つは、細胞生存を支持する薬剤がその病態の壊滅的な影響を食い止める可能性がある敗血症の場合である。二価ＭＵＣ１^＊抗体又は抗体誘導体による一時的な全身治療によって、細胞生存が向上する場合があり、そうすることで好適な抗生物質又は他の治療的処置が投与されるか、又は効果が出るまで命にかかわる症状が抑えられる。同様に、細菌の毒性株は、毒性効果によって筋肉組織（flesh）領域を破壊し、広範な細胞死を誘導する。ここでも、ＭＵＣ１^＊刺激抗体を投与することによって、細胞が細胞死に対してより抵抗性となり、看護人が感染を抑制する時間がより多く得られる場合がある。このように、ＭＵＣ１^＊刺激抗体は局所的に又は全身に投与することができる。
【０４０５】
他の状況が、ＭＵＣ１^＊媒介性成長の刺激に適する。例えば、腫瘍を自然に生じるか、又はより速く成長する腫瘍を生じる動物は、トランスジェニック動物を作製する方法によって生成することができ、これらの場合には、動物をその細胞がＭＵＣ１^＊刺激抗体を作り出し、分泌するように生成してもよい。この場合、ＭＵＣ１^＊刺激抗体の遺伝子は組織特異的プロモーターの下流に位置する。例えば、乳房腫瘍を自然に生じたマウスを生成するには、ＭＵＣ１^＊抗体リガンドの遺伝子を乳房特異的タンパク質に対するプロモーターの下流に位置させればよい。組織特異的プロモーターの下流に挿入したＭＵＣ１^＊抗体の遺伝子を、卵子と精子との完全な融合の直前に前核又は類似物中に注入して、腫瘍を自然に形成するか、又は腫瘍形成を促進するトランスジェニック動物、例えばマウスモデルを生成する。抗体遺伝子は別個に、又はＭＵＣ１^＊切断若しくはシグナル伝達を促進する他の遺伝子（ＭＭＰ−１４、ＴＡＣＥ、ＮＭ２３等が挙げられるが、これらに限定されない）と組み合わせて注入してもよい。
【０４０６】
別の態様では、ＭＵＣ１^＊の刺激により細胞成長速度を増大させ、細胞を細胞死に対して抵抗性にすることによって抗体産生を増大させるために、ＭＵＣ１^＊抗体をコードするプラスミドを外部から添加するか、又は抗体産生ハイブリドーマにトランスフェクトする。本発明のこの態様では、抗体産生細胞の成長は、所望の抗体である産物を汚染することなく促進される。血清成分自体が多くの抗体を含有するため、抗体産生細胞は典型的には、血清を減少させた培地中で培養される。細胞培養培地中の血清量を減少させることで、持ち越し汚染が最小限に抑えられるが、同時に細胞成長及び所望の抗体の全収率も減少する。外因性抗ＭＵＣ１^＊の添加又は抗ＭＵＣ１^＊をコードするプラスミドのトランスフェクションによって、細胞の成長及び生存が増大され、一方で単一の既知の抗体を所望の抗体である産物から選択的に取り除くことができる。
【０４０７】
モノクローナル抗体の配列を有することによって、一方の部分が抗体から誘導され、他方の部分が標識として働くことのできる別のタンパク質（毒素、ＩＬ−２等のようなサイトカイン、又はＧＦＰ（緑色蛍光タンパク質）のようなタンパク質）から誘導され得る融合タンパク質を作製することも可能となる。本発明の抗体及び抗体変異体は、標識、タグ、毒素、放射性物質、標的モチーフ、リーダー配列ペプチド、毒性物質、タンパク質若しくはペプチドと生化学的に融合させるか、又はそれらと融合するよう遺伝的に操作することができる。同様に、非天然アミノ酸を組み換え抗体又は抗体誘導体に組み込むことができ、そこで非天然アミノ酸は、例えばカップリングを促進し、シグナル伝達能を有し、組み換えタンパク質プロテアーゼを感受性又は非感受性にし得る。
【０４０８】
また、本発明は、本明細書中に記載される抗ＭＵＣ１^＊抗体及び抗体変異体の一部又は全てのヒト化又は部分的なヒト化をもたらす。モノクローナル抗体のクローン化、並びにとりわけ軽鎖及び重鎖の可変領域のそれらの配列を決定することによって、ヒト化されている抗体及び部分的にヒト化されている（キメラ）抗体の生成が可能となる。当該技術分野で知られているように、ヒト化抗体はヒト免疫系による検出をより良く回避することができるため、ヒト化抗体及びキメラ抗体は副作用がより少なく、効力がより高いことを特徴とする（Lonberg 2005）。
【０４０９】
当業者によく知られているように、ヒト化抗体を生成する一般的方法には、フレームワーク領域（ＦＷＲ）等の非認識領域中の非ヒト配列を、Muzard, et al. 2009に記載されるようにヒト配列と交換することが含まれる。同様に、非ヒトモノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）のような認識領域が、ヒト抗体のＣＤＲと交換される（Carter P, et al. Humanization of an anti-pl85^HER2antibody for human cancer therapy Proc. Natl Acad. Sci 89:4285-4289）。配列番号３４５〜配列番号３６０に挙げたようなヒトフレームワーク領域は、本明細書中で開示されるモノクローナル配列においてマウスＦＷＲと交換することができるヒトフレームワーク領域である。ヒト抗体配列についてのデータベースの検索も、非ヒト供給源に由来する望ましいモノクローナル抗体と相同なヒト抗体を同定するために用いられる。例えば、配列番号３６２〜配列番号３６７のアミノ酸配列は、ＭＩＮ−Ｃ２と高度に相同なヒト抗体に由来するフレームワーク領域（ＦＷＲ）である。これらの配列（Thesesequences or the sequences）は、ＭＩＮ−Ｃ２のＣＤＲ（配列番号３３１、配列番号３３４、配列番号３７４、配列番号３４０、配列番号３４２及び配列番号３４４）と併用することができる。
【０４１０】
別の例では、配列番号３６８〜配列番号３７３として示したアミノ酸配列は、ＭＩＮ−Ｅ６と高度に相同なヒト抗体に由来するフレームワーク領域（ＦＷＲ）である。これらの配列は、ＭＩＮ−Ｅ６のＣＤＲ（配列番号３３２、配列番号３３４、配列番号３３８、配列番号３３９、配列番号３４１及び配列番号３４３）と併用することができる。これらのアミノ酸配列をコードする核酸を使用して、かかるキメラ（部分的にヒト化されている）抗体及び抗体変異体を遺伝的に操作することができる。
【０４１１】
キメラ抗体構築物を作製するために、マウスフレームワーク領域を選択されたヒトフレームワーク領域と置き換えるには、合成ＤＮＡと、オーバーラップＰＣＲによって生成したＤＮＡとの組み合わせが使用される。ヒト化ＭＩＮ−Ｃ２を構築するためには、配列番号３６２、配列番号３６３及び配列番号３６４のアミノ酸配列をコードするヒトフレームワーク領域のヌクレオチド配列を用いて、それぞれ配列番号１５９、配列番号１８５及び配列番号２１１を保有するマウス重鎖フレームワーク領域を置き換える。さらに、配列番号３６５、配列番号３６６及び配列番号３６７のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を用いて、それぞれ配列番号９８、配列番号１１９及び配列番号１３９を保有するＭＩＮ−Ｃ２軽鎖フレームワーク領域を置き換える。ヒト化ＭＩＮ−Ｅ６を構築するためには、配列番号３６８、配列番号３６９及び配列番号３７０のアミノ酸配列をコードするヒトフレームワーク領域のヌクレオチド配列を用いて、それぞれ配列番号１６０、配列番号１８６及び配列番号２１２を保有する重鎖フレームワーク領域を置き換える。さらに、配列番号３７１、配列番号３７２及び配列番号３７３のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を用いて、それぞれ配列番号９９、配列番号１２０及び配列番号１４０を保有するＭＩＮ−Ｅ６軽鎖フレームワーク領域を置き換える。ｓｃＦａｂ、組み換えＦａｂ、二重特異性組み換え抗体及びｓｃＦｖを含む（これらに限定されない）多くの設計の構築物がこれらの方法を用いて生成される。
【０４１２】
本明細書中で開示される抗ＭＵＣ１^＊抗体及び抗体変異体は、このようにしてヒト化することができる。ヒト化プロセスに続き、ファージ提示方法を用いるもののような多数の方法によって抗体親和性を向上させることができる。抗体及び抗体変異体のヒト化の後、その一部は親和性を失い、「親和性成熟」プロセスを必要とする。一方法には、突然変異誘発によって達成される分子進化の後に、その同種抗原に対して増強された親和性を示すものを選択することが含まれる（Razai, et al. 2005）。代替的には、ヒト化抗体又は抗体フラグメントは、組み換えライブラリから単離することができる（Nahary and Benhar, 2009, Rothe C, et al.）。完全にヒト化された抗体を得る別の方法は、ヒト抗体を産生するように操作したトランスジェニックマウスを免疫化することである（Jakobovitz, et al. 2007、Lonberg 2005）。本発明では、ＭＵＣ１^＊を認識する抗体領域（ＣＤＲ）の配列に加えて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでの治療的使用のためのＰＳＭＧＦＲ配列（配列番号１）に結合する抗体を生成するためのこれらの方法の一部又は全ての使用が期待される。
【０４１３】
Razai, et alは、親和性成熟（分子進化としても知られる）の後、合計して６０個のＣＤＲ残基のうち５個が突然変異した（これはＣＤＲ突然変異誘発の約８％という比率に相当する）ことを報告している。このことは、親和性成熟の後、ＣＤＲ領域の約９２％が変化しないままであることを意味する。他の者も同様の親和性成熟後の変化率を報告している（Juarez-Gonzalez, et al 2005及びFinlay, et al (2009)）。
【０４１４】
本明細書中で開示される新規の抗体及び抗体変異体のいずれの産生も、細菌ベクターを用いて大腸菌等の細菌（Zheng, et al. 2009）、酵母ベクターを用いてピキア・パストリス（Pichiapastoris）等の酵母細胞（Schoonooghe, et al. 2009）、昆虫ベクターを用いてＳ２細胞等の昆虫細胞（Johannson, et al.）、哺乳動物ベクターを用いてチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）等の哺乳動物細胞（Majors, et al. 2009）等（これらに限定されない）のように種々の生物に由来する多様な細胞において行うことができる。抗体合成に利用可能なベクター及び細胞は多数あり、当業者に既知である。
【０４１５】
別の実施形態では、本発明の抗体及び抗体変異体は宿主動物によって産生される。例えば、所定の抗体を作製し、その母乳（Zhang, et al. 2009）又は他の体液中にそれを分泌するトランスジェニック動物を作製することができる。新規の有用な抗体及び抗体誘導体を開発するようにタンパク質工学の方法を操作する他のシナリオも、本明細書中で開示されるモノクローナル抗体の配列を用いて可能である。
【０４１６】
本発明は、本明細書中に記載される具体的な実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際、本明細書中に記載される実施形態に加えて、本発明の様々な変更形態が、以上の記載及び添付の図面から当業者に明らかとなる。かかる変更形態は、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図される。以下の実施例は限定としてではなく、本発明の例示として与えられる。
【実施例】
【０４１７】
実施例１−抗ＭＵＣ１^＊モノクローナル抗体の生成
当業者によく知られている標準的なハイブリドーマ生成及びその後のスクリーニングを用いて、ＭＵＣ１^＊ペプチドに対するモノクローナル抗体を生成した。ＭＵＣ１^＊ペプチド（GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA、配列番号１）、又は単一のアミノ酸置換を保有するペプチド変異体（GTINVHDVETQFNQYKTEAASPYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA、配列番号２）を、ＫＬＨへの結合を可能にするためにカルボキシ末端にシステイン残基を追加して合成した。この結合ペプチドを使用して、マウスを免疫化した。融合細胞を含有するウェルからの上清を、ＭＵＣ１^＊ペプチドの認識についてＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。これらのうち幾つかのクローンが、ＥＬＩＳＡ結合アッセイにおいてＭＵＣ１^＊ペプチドを認識する能力に対するその高い力価に基づいて選択された。６つのハイブリドーマクローンからの上清のかかる結合の結果を図１に示す。次いで、クローンを無傷細胞上のＭＵＣ１^＊と結合するその能力について、ＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞分類）によって試験した（図２及び図３）。これらうちで最良のものをハイブリドーマとして維持して、シークエンシングした。ＭＩＮ−Ｃ２及びＭＩＮ−Ｅ６という２つのクローンが、ＭＵＣ１を発現する乳癌細胞株（ＺＲ−７５−１）、及びＭＵＣ１^＊をコードするプラスミドをトランスフェクトしたＨＣＴ−１１６結腸癌細胞の細胞表面上のＭＵＣ１^＊に対するそれらの結合に基づくと、とりわけ好ましかった（図２及び図３）。このハイブリドーマ生成プロセスを複数回繰り返し、ＭＵＣ１^＊の細胞外ドメイン（本質的にＰＳＭＧＦＲ配列（GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA、配列番号１）からなるＭＧＦＲとも呼ばれる）に選択的に結合する、幾つかのモノクローナル抗体、ＩｇＧ及びＩｇＭを産生した。選択されるモノクローナル抗ＭＵＣ１^＊抗体の可変領域の配列を図１１〜図１４に示す。
【０４１８】
実施例２−細胞表面上のＭＵＣ１^＊に対する抗ＭＵＣ１^＊モノクローナル抗体の結合の分析
細胞表面上のＭＵＣ１^＊の認識を、ＦＡＣＳを用いた細胞の表面染色によって分析した。ＭＩＮ−Ｃ２抗体については、精製抗体の１０μｇ／ｍｌ溶液５０μｌを、空のベクターをトランスフェクトしたＭＵＣ１陰性ＨＣＴ１１６細胞（ＨＣＴ１１６−ＶＥＣ８）、又はＭＵＣ１^＊発現ベクターをトランスフェクトしたＨＣＴ１１６細胞（ＨＣＴ−ＭＵＣ１^＊−１０）及びＭＵＣ１陽性ＺＲ−７５−１細胞の個々に対して４℃で３０分間結合させた。細胞を２回洗浄し、１０μｇ／ｍｌの抗マウスＰＥで４℃で３０分間処理した。細胞を２回洗浄し、ＰＢＳ中２％ホルムアルデヒドで固定し、BDのＦＡＣＳ ＣａｎｔｏＩＩフローサイトメーターを用いて分析した（図２）。ＭＩＮ−Ｅ６抗体についても、精製抗体の代わりにＭＩＮ−Ｅ６ハイブリドーマからの不希釈の上清５０μｌを使用したことのみを変えて、同様の手順に従った（図３）。
【０４１９】
実施例３−抗ＭＵＣ１^＊モノクローナル抗体（二価）ＭＩＮ−Ｃ２及びＭＩＮ−Ｅ６は、ＭＵＣ１を発現する乳癌細胞株の増殖を誘導する
抗ＭＵＣ１^＊モノクローナル抗体の能力を測定するために、ＭＵＣ１を発現する乳癌細胞株Ｔ４７Ｄを使用した。９６ウェルプレートの１ウェル当たり７５００個の細胞を、１０％血清を含有する培地中にプレーティングした。翌日、３つのウェル中の細胞をトリプシン処理し、培地中に再懸濁し、血球計算盤を用いて計数して、０日目のカウント（zero day count）を得た。細胞の培地を、３％ＦＢＳを含有するものに交換し、抗ＭＵＣ１^＊抗体を様々な濃度で添加した。４８時間後、培地を交換した後、抗体の２回目の添加を行った。さらに４８時間後、細胞を計数し、細胞成長の刺激を推定した（図４及び図５）。
【０４２０】
実施例４−Ｆａｂフラグメントの生成及びペグ化
ＭＵＣ１^＊抗体の一価Ｆａｂフラグメントを調製するために、パパイン消化法（Pierce）を採用した。ＭＩＮ−Ｃ２抗体及びＭＩＮ−Ｅ６抗体はパパインによって効果的に消化され、これをプロテインＡ−アガロースアフィニティクロマトグラフィーによって精製した（図６）。
【０４２１】
これらのＦａｂフラグメントを、競合的ＥＬＩＳＡアッセイにおいてそれらの親ｍＡｂと共に試験して、Ｆａｂフラグメントがその抗原であるＭＵＣ１^＊ペプチドに結合することが可能であることを確認した。図７に示すように、生成したＦａｂフラグメントは、それらの親ｍＡｂと効果的に競合した。Ｆａｂを同様に、ＴＭＳ（ＰＥＧ）試薬を用いて製造業者のプロトコル（Pierce）に従ってペグ化した。ペグ化Ｆａｂは、セルベース成長阻害アッセイにおいて非ペグ化Ｆａｂと同程度に作用した。
【０４２２】
実施例５−ＭＵＣ１^＊を過剰発現する細胞の増殖の阻害に対する一価ＭＩＮ−Ｃ２及びＭＩＮ−Ｅ６ Ｆａｂフラグメントの効果についての試験
ＭＵＣ１^＊を発現する乳癌細胞株Ｔ４７Ｄを、９６ウェルプレートで完全培地（１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ）中にプレーティングし（５０００細胞／ウェル）、一晩付着させた。翌日、培地を、３％ＦＢＳを含有するものに交換した。３つのウェル中の細胞をトリプシン処理及び再懸濁した後、血球計算盤を用いて計数し、０日目のカウントを得た。次に、ＭＩＮ−Ｃ２又はＭＩＮ−Ｅ６ Ｆａｂタンパク質を、個々のプレートに様々な濃度で添加した。４８時間後、培地を取り替え、Ｆａｂタンパク質の２度目の添加を行った。さらに４８時間後、全てのウェル中の細胞を計数した。細胞成長の阻害を、Ｆａｂタンパク質を含有しない細胞の成長に対して算出した。ＭＩＮ−Ｅ６の場合には、タンパク質のペグ化形態も試験したが（図８、図９）、非ペグ化Ｆａｂと同等に機能することが示された。
【０４２３】
実施例６−ポリペプチドリンカーを用いたＭＵＣ１^＊結合ポリペプチドの一本鎖Ｆｖフラグメントとしての構築及び発現
ＭＩＮ−Ｃ２（アミノ酸１１１０から１１５５までのＭＵＣ１の４５アミノ酸膜近位の細胞外領域：ＰＳＭＧＦＲを認識するモノクローナル抗体）のｓｃＦｖフラグメントを設計し、構築して、大腸菌において発現させた。この構築物は、いかなる分泌シグナルも付加せずに、ベクターｐＥＴ２１ｂ（Novagen）を用いて設計したが、これにより６個のヒスチジン残基を含有するカルボキシ末端タグを有するタンパク質が得られる。ＭＩＮ−Ｃ２及びＭＩＮ−Ｅ６ ｓｃＦｖの構築物の設計を図１０Ａ及び図１５及び図１６に示す。カルボキシ末端ヒスチジンタグによって、Ｎｉ−ＮＴＡアフィニティクロマトグラフィーによるｓｃＦｖタンパク質の精製が可能となる（図１７）。
【０４２４】
モノクローナル抗体をシークエンシングするために、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を、推奨されているようにＧ４１８を含有するＲＰＭＩ培地中で培養した。次いで、全ＲＮＡをＴｒｉｚｏｌ試薬を用いて調製し、その第１鎖ｃＤＮＡをＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ第１鎖ｃＤＮＡ合成キット（Invitrogen，CA）を用いて生成した。重鎖及び軽鎖の可変領域をクローン化するために、縮重プライマーを文献（Wang et al., 2000）に従って使用した。重鎖のクローン化については、配列番号６又は配列番号７（フォワード）と共に配列番号３〜配列番号５（リバース）を用いてＰＣＲを設定した。κ鎖については、配列番号９（フォワード）と共に配列番号８（リバース）を使用した。全てのフォワードＰＣＲプライマー及びリバースＰＣＲプライマーは、下流をクローン化する目的で、重鎖に対するＥｃｏＲＩ制限酵素認識部位及びＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素認識部位、並びにκ鎖に対するＳａｃＩ部位及びＳａｌＩＩ部位を含有する。ＰＣＲ条件は以下の通りである：９４℃で１分間、４５℃で１分間、７２℃で２分間を３０サイクル、及び７２℃で１０分間。次いで、ＰＣＲ産物を１％アガロースゲル上で泳動したところ、サイズが約５００ｂｐの顕著なＰＣＲバンドが重鎖及び軽鎖について検出された。
【０４２５】
産物をアガロースゲルから精製し、対応する酵素を用いて制限酵素消化した後、シークエンシング及びその完全長発現を確認する簡単な細菌発現のために、ｐＥＴ２１ｂ細菌発現ベクターにクローン化した。
【０４２６】
プラスミドＤＮＡをシークエンシングした。好ましいモノクローナル抗体ＭＩＮ−Ｃ２についての可変領域（ＣＤＲ：相補性決定領域）に対するＤＮＡ配列及びアミノ酸配列は、可変重鎖（ＶＨ）については配列番号１０及び配列番号１１、可変軽鎖又はκ鎖（ＶＬ）については配列番号１２及び配列番号１３で与えられる。ＭＩＮ−Ｃ２の重鎖及び軽鎖の両方の定常領域のＤＮＡ配列及びアミノ酸配列も決定したが、これを配列番号４９及び配列番号５０として示す。より大きい安定性及び結合親和性を有する組み換え抗体フラグメントは、これらの定常領域を設計に含めることによって生成する。組み換えＦａｂは、重鎖の可変領域（ＶＨ）及び軽鎖の可変領域（ＶＬ）に加えて定常領域（ＣＨ１及びＣＬ）を含む。
【０４２７】
別の好ましいモノクローナル抗体ＭＩＮ−Ｅ６についてのＤＮＡ配列及びアミノ酸配列を同様に決定したが、これは重鎖については配列番号１９〜配列番号２２、軽鎖又はκ鎖については配列番号２３及び配列番号２４で与えられる。他のモノクローナル抗ＭＵＣ１^＊抗体の配列は、図１１〜図１４に示す。例えば、ＩｇＧ重鎖可変領域についてのアミノ酸配列は配列番号５９〜配列番号６８に、軽鎖可変領域については配列番号５１〜配列番号５８に示す。ＩｇＭ重鎖可変領域についてのアミノ酸配列は配列番号７６〜配列番号８１及び配列番号８４に、軽鎖可変領域については配列番号６９〜配列番号７５に示す。
【０４２８】
本質的にモノクローナル抗体の可変領域から構成される一本鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）を生成するために、１５個のアミノ酸（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_３を有するリンカー配列（配列番号１４）を、重鎖及びκ鎖の可変配列の間に、標準ＰＣＲを用いて導入した。ＭＩＮ−Ｃ２及びＭＩＮ−Ｅ６のｓｃＦｖを生成した。ＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖを生成する最終重鎖−リンカー−κ鎖構築物の配列は、配列番号１５及び１７として示す。カルボキシル末端システインを有するＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖの変異体：ＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖ−Ｃｙｓ（配列番号１６及び配列番号１８）も生成した。
【０４２９】
モノクローナル抗体ＭＩＮ−Ｅ６の一本鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）形態、及びｓｃＦｖ−Ｃｙｓ変異体も同様に生成した。得られたＭＩＮ−Ｅ６ ｓｃＦｖ及びＭＩＮ−Ｅ６ ｓｃＦｖ−ＣｙｓのＤＮＡ配列及びアミノ酸配列は、配列番号２５及び配列番号２７並びに配列番号２６及び配列番号２８（Ｃｙｓ）として示す。リンカーによって結合した重鎖及び軽鎖の可変領域配列を含有する、組み立てられたＤＮＡを制限酵素で消化し、ｐＥＴ−２１ｂ細菌発現ベクターにクローン化して、細菌培養物を形質転換するのに使用した。
【０４３０】
次に、細菌培養物を、ＩＰＴＧ（イソプロピルチオガラクトシド）を１ｍＭの濃度まで添加し、誘導を８時間継続することによって誘導した。試験によって、ｓｃＦｖタンパク質の全てが封入体内に局在することが示された。ＭＩＮ−Ｃ２、ＭＩＮ−Ｅ６−７に対するｓｃＦｖタンパク質を、大腸菌封入体画分を８Ｍ尿素で可溶化した後、Ｎｉ−ＮＴＡカラムクロマトグラフィーを標準手順に従って行うことによって精製した。溶出したタンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析から、約２８ｋＤａの期待サイズを有する単一の種（純度およそ９５％）が示された。溶出したタンパク質の濃度は、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定した。タンパク質を、結合バッファー（０．０２ＭトリスＨＣｌ（ｐＨ８．０）、０．５Ｍ ＮａＣｌ、８Ｍ尿素、５ｍＭイミダゾール）で１５０ｕｇ／ｍｌまで希釈した。このタンパク質に、ＧＳＨ及びＧＳＳＧをそれぞれ５ｍＭ及び０．５ｍＭの最終濃度まで添加し、４℃で１６時間攪拌した。次いで、溶出したタンパク質をリフォールディング手順に供した。リフォールディングは、タンパク質を透析膜中に移し、０．４Ｍ Ｌ−アルギニン含有バッファー（０．０５ＭトリスＨＣｌ（ｐＨ８．０）、０．４Ｍ Ｌ−アルギニン）に対して透析することによって行った。最後の透析は５０ｍＭトリスＨＣｌ（ｐＨ８．０）及び５％グリセロール中で行った。タンパク質を透析膜から取り除き、遠沈して沈殿を除去し、１００００ＭＷカットオフ膜（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ，Millipore）での遠心濾過を用いて濃縮した。タンパク質の一部を、アフィニティー精製カラムによってさらに精製した。ＭＩＮ−Ｃ２の組み換えｓｃＦｖを発現させ、精製し（図１７）、リフォールディングした。図１８Ａから、ＥＬＩＳＡにおいて、ＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖがＭＵＣ１^＊細胞外ドメインペプチド（ＰＳＭＧＦＲ）に特異的に結合することが示される。リフォールディングの後、一部のＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖを標的ペプチドアフィニティー精製した（ｓｃＦｖを非変性バッファー中でＰＳＭＧＦＲペプチドカラムを通過させた）。溶出したＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖは特異的活性を示した（図１８Ｂ）。
【０４３１】
実施例７−標的ＭＵＣ１^＊ペプチドへのｓｃＦｖの結合、及び親ＭＩＮ−Ｃ２抗体と競合するその能力
ＭＵＣ１^＊ペプチドを、９６ウェルＥＬＩＳＡプレートのウェルに一晩インキュベートすることによって結合させた。その後、ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Pierce）を用いて同様に一晩インキュベートすることによってブロッキングした。次に、ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋを取り除き、３％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地を用いてウェルを３０分間ブロッキングした。ｓｃＦｖタンパク質を、８回の段階希釈（最高濃度は５０ｕｇ／ｍｌ）を用いて様々な濃度で添加した。ｓｃＦｖタンパク質の非特異的結合を決定するために、タンパク質を結合したＭＵＣ１^＊ペプチドを含有しない別のウェルセットに同じ希釈率で添加した。インキュベーションを１時間継続した。次に、０．３ｍｌのＰＢＳＴ（０．０２％Ｔｗｅｅｎ ２０を含有するリン酸緩衝食塩水）でウェルを３回洗浄した。その後、ウサギ抗Ｈｉｓ抗体（AbCam）を、３％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭを１００倍に希釈することによって調製した培地で４００００倍に希釈して添加した。これを１時間インキュベートした後、０．３ｍｌのｐｆ ＰＢＳＴで３回洗浄した。次に、０．１ｍｌの基質テトラメチルベンジジンをウェルに添加し、暗所で１５分間発色させ、その後（following wihich）２Ｎ ＨＣｌを０．１ｍｌ添加した。これらの実験によって、組み換えｓｃＦｖが、ＰＳＭＧＦＲ（ＭＵＣ１^＊細胞外ドメイン）ペプチドとの結合について無傷親抗体と効果的に競合することが確認された。
【０４３２】
実施例８−ＭＵＣ１を発現する乳癌細胞へのＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖの細胞表面結合
乳癌細胞株ＺＲ−７５−１を、ＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖの細胞表面上のＭＵＣ１^＊を認識する能力を試験するために使用した。細胞を、２倍又は１０倍に希釈した１．５ｕｇ／ｍｌのｓｃＦｖ原液（stock）と共に、又は対照としていかなるｓｃＦｖタンパク質も添加せずに４℃で３０分間インキュベートした。２回の洗浄の後、細胞を、Ａｌｅｘａ ４８８（Qiagen）と結合させた二次抗体の抗ｐｅｎｔａ−Ｈｉｓと共に２００倍、５０倍又は１０倍の希釈率でインキュベートし、ｓｃＦｖ上の６×ヒスチジンタグを検出した。フローサイトメトリー分析によって、細胞サブセットの濃度依存的シフトが明らかとなり、ＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖの非存在下は見られない特異的結合が示唆された（図１９）。
【０４３３】
実施例９−ＭＵＣ１^＊を過剰発現する癌細胞の増殖に対するＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖタンパク質の効果についての試験
ＭＵＣ１^＊受容体は、その活性化リガンドによって二量化された場合に細胞成長を刺激するため、単量体抗体及び抗体フラグメントがＭＵＣ１^＊陽性細胞の成長を阻害することが期待される。ＭＵＣ１^＊を発現する乳癌細胞株ＺＲ−７５−１（別称１５００）を、９６ウェルプレートで完全培地（１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ）中にプレーティングし（１００００細胞／ウェル）、一晩付着させた。翌日、培地を、３％ＦＢＳを含有するものに交換した。対照として、別の細胞株ＨＣＴ１１６（結腸癌由来の、ＭＵＣ１^＊を発現しない）を、同様に完全培地（１０％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ）中にプレーティングし（２０００細胞／ウェル）、一晩付着させ、培地を３％ＦＢＳを含有するものに交換した。各々の細胞株について、３つのウェル中の細胞をトリプシン処理及び再懸濁した後、血球計算盤を用いて計数し、０日目のカウントを得た。次に、ＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖ抗体変異体を様々な濃度で添加した。４８時間後、培地を取り替え、ｓｃＦｖタンパク質の２度目の添加を行った。さらに４８時間後、全てのウェル中の細胞を計数する。細胞成長の阻害を、ｓｃＦｖタンパク質を含有しない細胞の成長に対して算出した。ｓｃＦｖタンパク質が、ＭＵＣ１^＊を発現するＺＲ−７５−１細胞の成長を阻害する一方で、ＭＵＣ１^＊を発現しない対照細胞株ＨＣＴ １１６に対してはこの阻害効果を有しないことが観察された（図２０）。
【０４３４】
実施例１０−組み換えＦａｂ抗体の構築及び発現
組み換えＦａｂを同様に生成した。状況によっては、ＦａｂはｓｃＦｖ設計よりも好ましい。ｓｃＦｖと比べると、組み換えＦａｂは血清中での半減期がより長く、その結合親和性は通常は完全な親抗体と同程度である。哺乳動物系における発現は、適切にフォールディングされたタンパク質の量を増大させることで活性の増強をもたらす。哺乳動物細胞から産生された抗体変異体は、大規模に生成される。哺乳動物発現のための組み換え抗体を作製するために、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞から可変領域及び定常領域をクローン化した。組み換えＦａｂは多数の抗体設計を用いて作製される。組み換えＦａｂは、本質的にＶＨ領域、ＶＬ領域、ＣＨ領域及びＣＬ領域を含む。場合によっては、重鎖と軽鎖とを結合するためにリンカーが使用される。他の場合では、重鎖及び軽鎖を別個のベクターに載せ、同じ細胞中で発現させるが、そこでそれらは自己会合して機能的Ｆａｂを形成する。両方の設計のＦａｂを作製した。
【０４３５】
モノクローナルＭＵＣ１^＊抗体を産生するハイブリドーマ細胞（ＭＩＮ−Ｃ２クローン及びＭＩＮ−Ｅ６クローン）を、Ｇ４１８を含有するＲＰＭＩ培地中で標準的技法に従って培養した。次いで、全ＲＮＡをＴｒｉｚｏｌ試薬を用いて調製し、第１鎖ｃＤＮＡをＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ第１鎖ｃＤＮＡ合成キット（Invitrogen，CA）を用いて生成した。自身の分泌シグナル配列を含有する重鎖及び軽鎖をクローン化するために、縮重ＰＣＲプライマーを文献（Morrison, 2002、Kettleborough, 1993）に従って使用した。重鎖のクローン化については、配列番号３７（リバース）と共に配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５又は配列番号３６（フォワード）を用いてＰＣＲを設定した。κ鎖については、配列番号４４（リバース）と共に配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２又は配列番号４３（フォワード）を使用した。全てのフォワードＰＣＲプライマー及びリバースＰＣＲプライマーは、下流をクローン化する目的で、それぞれＥｃｏＲＩ制限酵素認識部位及びＸｈｏＩ制限酵素認識部位を含有する。使用したＰＣＲ条件は以下の通りであった：９４℃で６０秒間、５５℃で６０秒間、７２℃で６０秒間を３０サイクル、及び７２℃で１０分間。次いで、ＰＣＲ産物を１％アガロースゲル上で泳動し、どのプライマーが所望の産物を生成したかを決定した。図２１Ａから、正確なＭＩＮ−Ｃ２重鎖（約８００ｂｐの顕著なＰＣＲバンド）が、配列番号３４及び配列番号３７のプライマーを使用した場合に産生されたことが示される。適切なＭＩＮ−Ｃ２軽鎖を、配列番号３８及び配列番号４４のプライマーを用いて生成した。
【０４３６】
産物をアガロースゲルから精製し、対応する酵素を用いて制限酵素消化した後、シークエンシング及びその完全長発現を確認する簡単な細菌発現のために、ｐＥＴ２１ｂ細菌発現ベクターにクローン化した。プラスミドＤＮＡをシークエンシングしたところ、本発明者らが生成したＭＩＮ−Ｃ２ ｓｃＦｖ変異体のものと同一であることが見出され、異なるプライマーであっても、また異なる酵素消化を行っても、得られる変異体は親モノクローナル抗体に由来する同じ可変領域を保有することが確認された。組み換えＭＩＮ−Ｃ２ Ｆａｂについての重鎖配列（配列番号４５及び配列番号４７）及び軽鎖配列（配列番号４６及び配列番号４８）が与えられる。
【０４３７】
細菌における個々のＦａｂ構築物の発現を試験した。ｐＥＴ２１ｂの重鎖又は軽鎖を有するＢＬ２１形質転換株を、カルベニシリン（carbenacillin）（１００ｕｇ／ｍｌ）を含有する５ｍｌのＬＢ培地に播種し、３７℃で一晩インキュベートした。次いで、カルベニシリン（１００ｕｇ／ｍｌ）を含有する５０ｍｌのＬＢ培地に、一晩細菌培養物（２．５ｍｌ）を播種し、そのＯＤ６００ｎｍが０．５に達するまで３０℃でさらにインキュベートした。残りの培養物を遠沈し、凍結した。ＩＰＴＧを５０ｍｌの培養物に１ｍＭの最終濃度で添加した。培養物を５時間さらにインキュベートした後、沈殿させた（pelleted down）。次いで、細菌ペレット（ＩＰＴＧ誘導の前後）を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウエスタンブロット法で分析した。重鎖又は軽鎖挿入断片に対応する顕著な約２５ＫＤａのバンドが生じ、これらの重鎖及び軽鎖が適切に発現したことが示唆された（図２１Ｂ）。
【０４３８】
上記のように生成した組み換えＦａｂは、無傷親抗体から酵素的に切断されたＦａｂと本質的に同じように機能する。
【０４３９】
哺乳動物組み換えタンパク質の発現については、これらの重鎖及び軽鎖挿入断片を、ＴＯＰＯクローン化キット（Invitrogen，CA）を用いて哺乳動物発現ベクターｐＯｐｔｉＶｅｃ及びｐｃＤＮＡ３．３にクローン化した。
【０４４０】
実施例１１−組み換え抗ＭＵＣ１^＊一本鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）の生成
リフォールディングの効率をさらに増大させ、最終的に抗体変異体の特異的活性を増大させるために、一本鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）を生成した。抗ＭＵＣ１^＊抗体であるＭＩＮ−Ｃ２及びＭＩＮ−Ｅ６に対応する組み換え一本鎖Ｆａｂ構築物を、図１０Ｂ及び図２２に示す設計を用いて生成する。ｓｃＦａｂ構築物は、Ｎ末端から始めて、軽鎖の可変領域（ＶＬ）、軽鎖の定常領域（ＣＬ）、３４アミノ酸可動性リンカー、重鎖の可変領域（ＶＨ）、及び重鎖の定常領域のＣＨ１部分から構成される。重鎖及び軽鎖は、以下の配列を有する可動性リンカーによって結合する：SGGGSGGGSEGGGSEGGGSEGGGSEGGGSGGGSG（配列番号３６１）。軽鎖（ＶＬ＋ＣＬ）及び重鎖フラグメント（ＶＨ＋ＣＨ１）は、特異的ハイブリドーマクローンから単離したｍＲＮＡを用い、特異的プライマーを用いて逆転写ＰＣＲを行うことによって得られる。
【０４４１】
軽鎖、重鎖フラグメント及びリンカーの正確な集合の後、ＤＮＡを哺乳動物発現ベクター（ｐｓｅｃＴａｇ，Invitrogen，Carlsbad CA）にインフレームでクローン化する。その結果、Ｎ末端Ｉｇ−ｋリーダー配列、並びに精製を容易にするためのＣ末端ｍｙｃタグ及びポリヒスチジンタグのインフレーム付加が起こる。この構築物からＩｇ−ｋリーダー配列及び精製タグを含むＤＮＡフラグメントを、適切な制限酵素認識部位を用いてＰＣＲによって、プラスミドＤＮＡの高コピー複製を可能にし、高発現ＣＭＶプロモーターを使用する別の発現ベクターｐＣＥＰ４にサブクローニングする。このようにして生成した構築物は、哺乳動物細胞における一時的発現に使用される。この目的で、浮遊培養での成長に適したヒト胚性腎細胞（ＨＥＫ−２９３）（Invitrogen，Carlsbad CA）を使用し、分泌されたＦａｂを、抗ｍｙｃタグアフィニティクロマトグラフィーを用いて精製する。図２３はＭＩＮ−Ｃ２配列を用いたこの構築物の完全な集合体を示す。
【０４４２】
実施例１２−ヒト化又はキメラ（フレームワーク領域はヒトであり、ＣＤＲはヒトでない）抗ＭＵＣ１^＊抗体の生成
本発明の抗ＭＵＣ１^＊モノクローナル抗体はヒト化モノクローナル抗体であっても、又はヒトモノクローナル抗体であってもよい。マウス抗体のごく一部をヒト免疫グロブリン分子に移植して、免疫グロブリン分子のＦｃ部分のみがヒトであるキメラ抗体、又は免疫グロブリンの相補性決定領域（ＣＤＲ）のみがマウスであり、分子の９０％〜９５％がヒトであるヒト化抗体を作り出すことによって、完全に抗原性のマウスｍＡｂがヒトに負担をかけない（friendly）ものとなり得る。一面では、ＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（GenPharm-Medarex）技術又はＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（Abgenix, Inc.）技術等の従来の方法を利用することによって、完全にヒトのモノクローナル抗体をトランスジェニックマウスにおいて生成することができる。ヒト化抗体には、レシピエントのＣＤＲの残基を、所望の特異性、親和性及び生物学的機能を有するマウス、ラット又はウサギ等の非ヒト種のＣＤＲの残基と置き換えたヒト免疫グロブリンが含まれる。
【０４４３】
ヒト抗体は、ファージ提示ライブラリ（Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol, 1991, 227:381、Marks et al, J. Mol. Biol. 1991, 222:581）等の技法を用いても作製することができる。非ヒト抗体をヒト化する方法は既知である。ヒト化は、Jones et al., Nature, 1986, 321:522、Riechmannet al., Nature, 1988, 332:323及びVerhoeyen et al.,Science, 1988, 239:1534に開示されるようにWinter et al.の方法に従って、齧歯動物ＣＤＲ配列又はＣＤＲを、ヒト抗体の対応する配列に置き換えることによって行うことができる。かかるヒト化抗体はキメラ抗体である（米国特許第４，８１６，５６７号）。典型的には、ヒト化抗体は、齧歯動物抗体においてＣＤＲ残基を類似の部位の残基に置き換えた抗体である。
【０４４４】
非ヒト種から誘導された治療抗体は、場合によってはヒトに注入すると免疫応答を引き起こすことがあり、それらの有用性は限定される。したがって、ヒトにおける治療的使用のための抗体のヒト化又は部分的ヒト化は好ましい。ヒト化されている又は部分的にヒト化されている抗体及び抗体変異体を生成する方法は多い。本発明は、本発明の組成物をヒト化するのに好適なこれらのプロセスのいずれかの使用に関する。一プロセスでは、ヒト抗体遺伝子座を有するマウスを用いて、完全にヒト化されている抗体を生成する（Jakobovits et al.）。別の方法では、ヒトのＢ細胞に由来するＤＮＡを、選択された標的への結合について選択した後、完全抗体のコンテキスト（context）内に再挿入する。
【０４４５】
一般的な方法では、非ヒト宿主において生成した抗体のフレームワーク領域を、元のＣＤＲ配列を保存しつつヒトフレームワーク領域と交換する。これらはキメラ抗体と呼ばれる。このプロセスでは、各々３つがマウス抗体の重鎖及び軽鎖を形成する６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）しか保持せず、フレームワーク領域の配列を密接に関連するヒト抗体の配列と置き換える（Muzard et al., 2009に記載される方法）。まず、相同性検索を蛋白質構造データバンクに登録されたヒト抗体配列レパートリーに対して行い、抗ＭＵＣ１^＊抗体（ＭＩＮ−Ｃ２又はＭＩＮ−Ｅ６）のＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を独立してアラインメントする。抗ＭＵＣ１^＊のＶＨ及びＶＬに最も適合する異なるヒト抗体から誘導される可変領域配列のうち、抗ＭＵＣ１^＊のＶＨ配列及びＶＬ配列に対して最高の複合相同性（combined homology）を有する特定の抗体配列が選択される。これは、天然抗体において起こるドメイン間接触を保存するために必要である。任意で、６５％〜７０％の範囲の配列同一性（フレームワーク領域についてのみ算出した場合）が好ましい。ＤＮＡの化学合成とＰＣＲとの組み合わせを用いてヒト化抗ＭＵＣ１^＊ ｓｃＦｖを構築するが、この場合、フレームワーク領域の配列をヒト抗体の配列と交換する。得られたＤＮＡフラグメントを発現ベクターに挿入し、発現及びリフォールディング時の結合親和性について試験する。
【０４４６】
親和性は、抗ＭＵＣ１^＊ ｓｃＦｖのヒト化ＶＬ及びＶＨ配列への、同じヒト抗体に由来する定常領域（ＣＬ及びＣＨ１）配列の付加を試験することによって向上する。得られるキメラ重鎖及び軽鎖は、３４アミノ酸の可動性リンカー（SGGGSGGGSEGGGSEGGGSEGGGSEGGGSGGGSG（配列番号３６１））によって結合し、一本鎖ヒト化抗ＭＵＣ１^＊ ｓｃＦａｂを生じる。組み立てられたＤＮＡ分子を、ＩＧ−ｋシグナル配列をＮ末端に、ｍｙｃタグ及びポリヒスチジンタグをＣ末端にインフレーム付加した後、高コピー複製かつ高発現の哺乳動物発現ベクターｐＣＥＰ４（Invitrogen，Carlsbad CA）にクローン化する。このようにして生成した構築物は、浮遊培養での成長に適したヒト胚性腎細胞（ＨＥＫ−２９３）（Invitrogen，Carlsbad CA）等の哺乳動物細胞における発現に使用される。次いで、分泌されたＦａｂを、例えば抗ｍｙｃタグアフィニティクロマトグラフィーを用いて精製する。
【０４４７】
親和性をさらに向上させるために、元の非ヒトモノクローナル抗体又はキメラ抗体変異体のコンピュータによる３Ｄ構造を、タンパク質構造データベースにおいて利用可能なヒト抗体の３Ｄ構造の多くと比較する。次いで、フレームワーク領域においてさらなる変異を組み込み、ヒト抗体とより良く似たキメラ変異体を作製する。
【０４４８】
親和性の増進は、当業者に既知のファージ提示法（Finlay et al 2009）を用いることによっても達成することができる。
【０４４９】
実施例１３−多能性幹細胞成長の刺激についての配列番号１を用いて生成したウサギポリクローナル抗体と、モノクローナルマウス抗体ＭＩＮ−Ｃ２との比較
ウサギポリクローナル抗ＭＵＣ１^＊抗体（配列番号１のペプチドによる免疫化によって生成した）を、モノクローナル抗ＭＵＣ１^＊抗体ＭＩＮ−Ｃ２と、ｂＦＧＦ又はフィーダー細胞抽出物の非存在下での幹細胞の成長を、それらの多分化能を維持した上で可能とするそれらの能力について比較した。この能力は、本質的にＰＳＭＧＦＲ配列（配列番号１）から構成されるＭＵＣ１^＊の細胞外ドメインを二量化することによって達成される。
【０４５０】
ヒト胚性幹細胞を、マトリゲル様基質上で増殖させ、最小幹細胞培地においてａ）単独で、ｂ）４ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦを添加した（plus）３０％線維芽細胞馴化培地（最新）と共に、ｃ）５０ｎｇ／ｍｌのポリクローナル抗ＭＵＣ１^＊抗体と共に、又はｄ）５０ｎｇ／ｍｌのモノクローナル抗ＭＵＣ１^＊ ＭＩＮ−Ｃ２と共に培養した。得られた細胞の多分化能を、コロニー形態及びそれらのＯＣＴ４の継続発現に基づいて評価した。多能性幹細胞コロニーは、一様かつ明白な境界を有する別個の平らな丸いコロニーで成長するのに対し、分化過程に入ったコロニーはでこぼこした境界を有し、縦に成長し始める。多能性幹細胞は、それらの核中にＯＣＴ４を発現する。ＯＣＴ４発現を欠いた細胞は、分化過程に入っている。多能性幹細胞、すなわちＯＣＴ４陽性細胞が緑色の蛍光を発し、したがって分化を開始した細胞と容易に区別されるよう、ＯＣＴ４プロモーターがＧＦＰ（緑色蛍光タンパク質）を発現するように操作した胚性幹細胞を使用した。
【０４５１】
図２４から、最小培地単独で（ａ）、又は最新のプロトコルに従って（すなわちｂＦＧＦ及びフィーダー細胞馴化培地（ｂ）において）培養した幹細胞が、縁がでこぼこした非円形パターンのコロニーへと成長したことが示される。さらに、蛍光写真（右パネル）から、幹細胞のほぼ半数が分化し、もはやＯＣＴ４又はＧＦＰを発現しないことが明らかである。パネルＣ及びパネルＤから、ポリクローナル抗ＭＵＣ１^＊ ＭＩＮ−Ｃ２又はモノクローナル抗ＭＵＣ１^＊ ＭＩＮ−Ｃ２のいずれかで処理した幹細胞が、多能性幹細胞形態の特徴である、明白な境界を有する形の良い平らな丸いコロニーへと成長したことが示される。対応する蛍光画像（右パネル）は、ＧＦＰ、ひいてはＯＣＴ４発現から明らかなように、事実上全ての幹細胞が多能性を維持することを示す。ポリクローナルＭＩＮ−Ｃ２及びモノクローナルＭＩＮ−Ｃ２の効力は本質的に同じである。
【引用文献】
【０４５２】
Aboud-Pirak, et al. Inhibition of human tumor growth in nude mice by aconjugate of doxorubicin with monoclonal antibodies to epidermal growth factorreceptor. Proc Natl Acad Sci U S A. 1989 May;86(10):3778-81.
Baeuerle PA and Reinhardt C Bispecific T Cell Engaging Antibodies forCancer Therapy Cancer Res 2009 Jun 15;69(12):4941-4.
Bortoletto, et al. Optimizing anti-CD3 affinity for effective T celltargeting against tumor cells Eur J Immunol 2002 Nov 32(l l):3102-7.
Bruenke J, et al. Br J Haematol. Effective lysis of lymphoma cells witha stabilized bispecific single-chain Fv antibody against CD 19 and FcgammaRIII(CD 16) 2005 JuI; 130(2) :218-28
Cao, et al. Construction and characterization of an enhanced GFP-taggedanti-BAFF scFv antibody. Appl Microbiol Biotechnol. 2008 Jun;79(3):423-31.
Chames P and Baty D Bispecific Antibodies for Cancer Therapy. Curr OpinDrug Discov Devel. 2009 Mar;12(2):276-83.
Finlay WJ, Cunningham O, Lambert MA, Darmanin-Sheehan A, Liu X, FennellBJ, Mahon CM, Cummins E, Wade JM, O'Sullivan CM, Tan XY, Piche N, Pittman DD,Paulsen J, Tchistiakova L, Kodangattil S, Gill D, Hufton SE. Affinitymaturation of a humanized rat antibody for anti-RAGE therapy: comprehensivemutagenesis reveals a high level of mutational plasticity both inside andoutside the complementarity-determining regions. J MoI Biol. 2009 May 8;388(3):541-58.
Holliger P et al. Diabodies: Small bivalent and bispecific antibodiesProc Natl Acad Sci 1993 JuI 15;90(14):6444-8.
Hurwitz E et al. The covalent binding of daunomycin and adriamycin toantibodies, with retention of both drug and antibody activities. Cancer Res.1975 May;35(5): 1175-81.
Jakobovits A, et al. From XenoMouse technoloby to panitumumab, the firstfully human antibody product from transgenic mice. Nat Biotechnol. 2007Oct;25(10): 1134-43.
Johansson, et al. Efficient expression of recombinant human monoclonalantibodies in Drosophila S2 cells. J Imm Methods. 2007 318(1-2): 37-46.
Juarez-Gonzalez, et al Directed Evolution, Phage Display and Combinationof Evolved Mutants: A Strategy to Recover the Neutralization Properties of thescFv Version of BCF2 a Neutralizing Monoclonal Antibody Specific to ScorpionToxin Cn2) J MoI Biol. 2005 Mar l l;346(5):1287-97.
Kettleborough C.A., Saldanha, J., Ansell, K.H. and Bendig, M.M.Optimization of primers for cloning libraries of mouse immunoglobulin genesusing the polymerase chain reaction. Eur. J. Immunol. 1993. 23:206-211.
Lonberg N Human antibodies from transgenic animals. Nat Biotechnol. 2005Sep;23(9): 1117-25.
Lu D, et al. Simultaneous Blockade of Both the Epidermal Growth FactorReceptor and the Insulin-like Growth Factor Receptor Signaling Pathways inCancer Cells with a Fully Human Recombinant Bispecific Antibody. J Biol Chem.2004 Jan 23;279(4):2856-65.
Majors BS, et al. MCl-I overexpression leads to higher viabilities andincreased production of humanized monoclonal antibody in Chinese hamster ovarycells. Biotechnol Prog. 2009 Jul-Aug;25(4): 1161-8.
McCaIl AM, et al. MoI. Immunol. Isolation and characterization of ananti-CD16 single- chain Fv fragment and construction of an anti-HER2/«e«/anti-CD16bispecific scFv that triggers CD16-dependent tumor cytolysis MoI Immunol. 1999May;36(7):433-45.
McCarron, et al. Antibody Conjugates and Therapeutic StrategiesMolecular Interventions 2005 5:368-380.
Morrison, S. L. Cloning, expression, and modification of antibody Vregions. Current Protocols in Immunology. 2002. Unit 2.12. John Wiley &Sons, Inc., New York, NY.
Muzard J et al. Design and humanization of a murine scFv that blockshuman platelet glycoprotein VI in vitro. FEBS J. 2009 Aug;276(15):4207-22. Epub2009 Jun 2.
Nahary L, and Benhar I. Methods MoI Biol Design of a human syntheticcombinatorial library of single-chain antibodies. 2009; 525:61-80, xiv.
Razai A, et al. J MoI Biol. Molecular evolution of antibody affinity forsensitive detection of botulinum neurotoxin type A. 2005 Aug 5;351(l):158-69.
Robinson MK, et al. Br J Cancer. Targeting ErbB2 and ErbB3 with abispecific single- chain Fv enhances targeting specificity and induces atherapeutic effect in vitro 2008 Nov 4;99(9):1415-25.
Wang, Z.,Raifu, M., Howard, M., Smith, L., Hansen, D., Goldsby, R., Ratner, D. UniversalPCR amplification of mouse immunoglobulin gene variable regions: The design ofdegenerate primers and an assessment of the effect of DNA polymerase 3' to 5'exonuclease activity. J. Immuno. Methods. 2000. 233:167-177.
【０４５３】
本明細書中で引用される全ての参照文献は、その全体が参照により援用される。
【０４５４】
当業者であれば、日常実験のみを用いて、本明細書中で具体的に記載される本発明の具体的な実施形態の多くの等価物を認識する、又は確認することができる。かかる等価物は特許請求の範囲内に包含されることが意図される。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＭＵＣ１^＊に対する単離モノクローナル抗体。
【請求項２】
ＭＵＣ１^＊に対して二価である、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項３】
ＭＵＣ１^＊に対して一価である、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項４】
配列番号１のアミノ酸配列に特異的に結合する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項５】
重鎖可変領域においてＣＤＲ１領域に、NYGMN（配列番号３３０）、GYAMS（配列番号３３１）又はR/GYA/GMS（配列番号３３２）と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項６】
重鎖可変領域においてＣＤＲ１領域に、配列番号１７２〜配列番号１８４から選択される配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項７】
重鎖可変領域においてＣＤＲ２領域に、WINTYTGEPTYA/VG/DDFKG（配列番号３３３）又はTISSGGTYIYYPDSVKG（配列番号３３４）と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項８】
重鎖可変領域においてＣＤＲ２領域に、配列番号１９８〜配列番号２１０から選択される配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項９】
重鎖可変領域においてＣＤＲ３領域に、S/TGT/DT/AXXY/FYA（配列番号３３５）、TGTTAILNG（配列番号３３６）、SGDGYWYYA（配列番号３３７）又はDNYGXXYDYG/A（配列番号３３８）と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１０】
重鎖可変領域においてＣＤＲ３領域に、配列番号２２４〜配列番号２３６から選択される配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１１】
重鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、NYGMN（配列番号３３０）、GYAMS（配列番号３３１）又はR/GYA/GMS（配列番号３３２）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉ）ＣＤＲ２領域に、WINTYTGEPTYA/VG/DDFKG（配列番号３３３）又はTISSGGTYIYYPDSVKG（配列番号３３４）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１２】
重鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、NYGMN（配列番号３３０）、GYAMS（配列番号３３１）又はR/GYA/GMS（配列番号３３２）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉ）ＣＤＲ３領域に、S/TGT/DT/AXXY/FYA（配列番号３３５）、TGTTAILNG（配列番号３３６）、SGDGYWYYA（配列番号３３７）又はDNYGXXYDYG/A（配列番号３３８）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１３】
重鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ２領域に、WINTYTGEPTYA/VG/DDFKG（配列番号３３３）又はTISSGGTYIYYPDSVKG（配列番号３３４）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉ）ＣＤＲ３領域に、S/TGT/DT/AXXY/FYA（配列番号３３５）、TGTTAILNG（配列番号３３６）、SGDGYWYYA（配列番号３３７）又はDNYGXXYDYG/A（配列番号３３８）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１４】
重鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、NYGMN（配列番号３３０）、GYAMS（配列番号３３１）又はR/GYA/GMS（配列番号３３２）と少なくとも９０％同一な配列、（ｉｉ）ＣＤＲ２領域に、WINTYTGEPTYA/VG/DDFKG（配列番号３３３）又はTISSGGTYIYYPDSVKG（配列番号３３４）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉｉ）ＣＤＲ３領域に、S/TGT/DT/AXXY/FYA（配列番号３３５）、TGTTAILNG（配列番号３３６）、SGDGYWYYA（配列番号３３７）又はDNYGXXYDYG/A（配列番号３３８）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１５】
κ鎖可変領域においてＣＤＲ１領域に、SASSSV/ISYM/IH/Y（配列番号３３９）又はRASKSVSTSGYSYMH（配列番号３４０）と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１６】
κ鎖可変領域においてＣＤＲ１領域に、配列番号１０８〜配列番号１１０及び配列番号１１２〜配列番号１１８から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１７】
κ鎖可変領域においてＣＤＲ２領域に、S/GTSNLAS（配列番号３４１）又はLASNLES（配列番号３４２）と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１８】
κ鎖可変領域においてＣＤＲ２領域に、配列番号１２９〜配列番号１３８から選択される配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１９】
κ鎖可変領域においてＣＤＲ３領域に、QQRSS/NYPS/FT（配列番号３４３）又はQHSRELPFT（配列番号３４４）と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項２０】
κ鎖可変領域においてＣＤＲ３領域に、配列番号１４９〜配列番号１５８から選択される配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項２１】
κ鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、SASSSV/ISYM/IH/Y（配列番号３３９）又はRASKSVSTSGYSYMH（配列番号３４０）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉ）ＣＤＲ２領域に、S/GTSNLAS（配列番号３４１）又はLASNLES（配列番号３４２）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項２２】
κ鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、SASSSV/ISYM/IH/Y（配列番号３３９）又はRASKSVSTSGYSYMH（配列番号３４０）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉ）ＣＤＲ３領域に、QQRSS/NYPS/FT（配列番号３４３）又はQHSRELPFT（配列番号３４４）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項２３】
κ鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ２領域に、S/GTSNLAS（配列番号３４１）又はLASNLES（配列番号３４２）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉ）ＣＤＲ３領域に、QQRSS/NYPS/FT（配列番号３４３）又はQHSRELPFT（配列番号３４４）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項２４】
κ鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、SASSSV/ISYM/IH/Y（配列番号３３９）又はRASKSVSTSGYSYMH（配列番号３４０）と少なくとも９０％同一な配列、（ｉｉ）ＣＤＲ２領域に、ＣＤＲ２領域に、S/GTSNLAS（配列番号３４１）又はLASNLES（配列番号３４２）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉｉ）ＣＤＲ３領域に、QQRSS/NYPS/FT（配列番号３４３）又はQHSRELPFT（配列番号３４４）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項２５】
重鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、NYGMN（配列番号３３０）、GYAMS（配列番号３３１）又はR/GYA/GMS（配列番号３３２）と少なくとも９０％同一な配列、（ｉｉ）ＣＤＲ２領域に、WINTYTGEPTYA/VG/DDFKG（配列番号３３３）又はTISSGGTYIYYPDSVKG（配列番号３３４）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉｉ）ＣＤＲ３領域に、S/TGT/DT/AXXY/FYA（配列番号３３５）、TGTTAILNG（配列番号３３６）、SGDGYWYYA（配列番号３３７）又はDNYGXXYDYG/A（配列番号３３８）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有し、
κ鎖可変領域において、（ｉ）ＣＤＲ１領域に、SASSSV/ISYM/IH/Y（配列番号３３９）又はRASKSVSTSGYSYMH（配列番号３４０）と少なくとも９０％同一な配列、（ｉｉ）ＣＤＲ２領域に、ＣＤＲ２領域に、S/GTSNLAS（配列番号３４１）又はLASNLES（配列番号３４２）と少なくとも９０％同一な配列、及び（ｉｉｉ）ＣＤＲ３領域に、QQRSS/NYPS/FT（配列番号３４３）又はQHSRELPFT（配列番号３４４）と少なくとも９０％同一な配列を含むアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項２６】
重鎖可変領域において、ＣＤＲ１領域に配列番号３３１と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、ＣＤＲ２領域に配列番号３３４と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、及びＣＤＲ３領域に配列番号３７４と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有し、
軽鎖可変領域において、ＣＤＲ１領域に配列番号３４０と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、ＣＤＲ２領域に配列番号３４２と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、及びＣＤＲ３領域に配列番号３４４と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項２７】
重鎖可変領域において、ＣＤＲ１領域に配列番号３３２と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、ＣＤＲ２領域に配列番号３３４と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、及びＣＤＲ３領域に配列番号３３８と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有し、
軽鎖可変領域において、ＣＤＲ１領域に配列番号３３９と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、ＣＤＲ２領域に配列番号３４１と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列、及びＣＤＲ３領域に配列番号３４３と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項２８】
ヒト重鎖において、配列番号３５３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３５５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、配列番号３５７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列、又は配列番号３５９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ４配列を含み、
ヒト軽鎖において、配列番号３４５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３４７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、配列番号３４９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列、又は配列番号３５１と少なくとも９０％同一なＦＷＲ４配列を含むヒトＦＷＲ配列を含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項２９】
ヒト重鎖において、配列番号３６２と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３６３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３６４と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含み、
ヒト軽鎖において、配列番号３６５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３６６と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３６７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含むヒトＦＷＲ配列を含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項３０】
ヒト重鎖において、配列番号３５３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３５５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、配列番号３５７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列、又は配列番号３５９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ４配列を含み、
ヒト軽鎖において、配列番号３４５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３４７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、配列番号３４９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列、又は配列番号３５１と少なくとも９０％同一なＦＷＲ４配列を含むヒトＦＷＲ配列をさらに含む、請求項２５に記載の抗体。
【請求項３１】
ヒト重鎖において、配列番号３６２と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３６３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３６４と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含み、
ヒト軽鎖において、配列番号３６５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３６６と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３６７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含むヒトＦＷＲ配列をさらに含む、請求項２５に記載の抗体。
【請求項３２】
ヒト重鎖において、配列番号３５３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３５５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、配列番号３５７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列、又は配列番号３５９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ４配列を含み、
ヒト軽鎖において、配列番号３４５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３４７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、配列番号３４９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列、又は配列番号３５１と少なくとも９０％同一なＦＷＲ４配列を含むヒトＦＷＲ配列をさらに含む、請求項２６に記載の抗体。
【請求項３３】
ヒト重鎖において、配列番号３５３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３５５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、配列番号３５７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列、又は配列番号３５９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ４配列を含み、
ヒト軽鎖において、配列番号３４５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３４７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、配列番号３４９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列、又は配列番号３５１と少なくとも９０％同一なＦＷＲ４配列を含むヒトＦＷＲ配列をさらに含む、請求項２６に記載の抗体。
【請求項３４】
ヒト重鎖において、配列番号３６２と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３６３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３６４と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含み、
ヒト軽鎖において、配列番号３６５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３６６と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３６７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含むヒトＦＷＲ配列をさらに含む、請求項２７に記載の抗体。
【請求項３５】
ヒト重鎖において、配列番号３６２と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３６３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３６４と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含み、
ヒト軽鎖において、配列番号３６５と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３６６と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３６７と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含むヒトＦＷＲ配列をさらに含む、請求項２７に記載の抗体。
【請求項３６】
ヒト重鎖において、配列番号３６８と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３６９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３７０と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含み、
ヒト軽鎖において、配列番号３７１と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３７２と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３７３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含むヒトＦＷＲ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３７】
ヒト重鎖において、配列番号３６８と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３６９と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３７０と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含み、
ヒト軽鎖において、配列番号３７１と少なくとも９０％同一なＦＷＲ１配列、配列番号３７２と少なくとも９０％同一なＦＷＲ２配列、又は配列番号３７３と少なくとも９０％同一なＦＷＲ３配列を含むヒトＦＷＲ配列をさらに含む、請求項２７に記載の抗体。
【請求項３８】
ヒト化されている、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項３９】
フレームワーク領域が既知のヒトフレームワーク配列である、請求項３８に記載のモノクローナル抗体。
【請求項４０】
請求項１に記載のモノクローナル抗体をコードする単離核酸。
【請求項４１】
請求項１に記載のモノクローナル抗体を発現する単離ハイブリドーマ。
【請求項４２】
Ｆａｂ又は一本鎖一価抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項４３】
二重特異性であり、一方の認識部位が配列番号１のペプチドに結合し、他方が別のエピトープを認識する、請求項１に記載の抗体。
【請求項４４】
他のエピトープがＨＥＲ２又はＤＬＬ４である、請求項４３に記載の抗体。
【請求項４５】
免疫グロブリン様ＶＨドメインが免疫グロブリン様ＶＬドメインに結合し、前記ＶＨ鎖及び前記ＶＬ鎖がペプチドリンカーを介して結合している、ＭＵＣ１^＊に特異的なｓｃＦｖ融合タンパク質。
【請求項４６】
細胞増殖を阻害する方法であって、ＭＵＣ１^＊を発現する細胞を請求項３に記載の一価モノクローナル抗体と接触させることを含む、方法。
【請求項４７】
細胞が癌細胞である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
細胞増殖を増大させる方法であって、ＭＵＣ１^＊を発現する細胞を請求項２に記載の二価モノクローナル抗体と接触させることを含む、方法。
【請求項４９】
細胞が多能性細胞である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
細胞が前駆細胞である、請求項４８に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図６】

【図７】

【図１７】

【図２３】

【図２４】

【公表番号】特表２０１２−５０４９６１（Ｐ２０１２−５０４９６１Ａ）
【公表日】平成２４年３月１日（２０１２．３．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３１１２８（Ｐ２０１１−５３１１２８）
【出願日】平成２１年１０月６日（２００９．１０．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５９７５４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０４２５６２
【国際公開日】平成２２年４月１５日（２０１０．４．１５）
【出願人】（５０７０８１０９４）ミネルバ　バイオテクノロジーズ　コーポレーション (4)
【Ｆターム（参考）】