ろ紙を不要とした転写装置
【課題】ろ紙を不要とした転写装置を実現する。
【解決手段】本発明の転写装置１００は、試料を含むゲル１０２に電解液を介して電圧を印加して、該試料をゲル１０２に接して配置された転写膜１０３へと転写する転写装置であって、一対の電極であるアノード電極１０４およびカソード電極１０１のうち、アノード電極１０４は鉄を含んでいる。転写時、アノード電極１０４の含む鉄は犠牲酸化剤として働くため、電解液の電気分解による気泡の発生を抑制することができる。
【解決手段】本発明の転写装置１００は、試料を含むゲル１０２に電解液を介して電圧を印加して、該試料をゲル１０２に接して配置された転写膜１０３へと転写する転写装置であって、一対の電極であるアノード電極１０４およびカソード電極１０１のうち、アノード電極１０４は鉄を含んでいる。転写時、アノード電極１０４の含む鉄は犠牲酸化剤として働くため、電解液の電気分解による気泡の発生を抑制することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、ろ紙を不要とした転写装置に関するものであり、詳しくは、分離媒体に緩衝液を介して電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物質を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質、核酸等の生体分子の解析または検査を行うため、ウェスタンブロッティング等のブロッティングと称される技術が用いられることがある。ブロッティングを行うためには、まず、生体分子を電気泳動によってゲル等の分離媒体中において分離し、分離した生体分子を上記分離媒体から転写膜上へ転写することが行われる。これにより、解析対象の生体分子を、分離した状態で転写膜上に配置することができるため、さらなる解析を首尾よく行うことができる。
【０００３】
このとき、上記分離媒体から上記転写膜への生体分子の転写のために、転写装置が用いられる。転写装置が行う転写の方法としては、毛細管現象を利用した方法、電圧を印加する方法、真空引きする方法が知られている（非特許文献１参照）。
【０００４】
上記のうち電圧を印加する方法は、転写効率がよいことが知られている。電圧を印加する方法を実施する転写装置としては、タンク式およびセミドライ式の二種類がある（非特許文献２参照）。タンク式の転写装置では、緩衝液によって満たされたタンク内に、分離媒体および転写膜を保持し、タンクに備えられた電極を用いて分離媒体および転写膜に電圧を印加する。セミドライ式の転写装置では、緩衝液に浸漬させておいたろ紙を用い、電極、ろ紙、分離媒体、転写膜、ろ紙および電極をこの順に重ねて、両電極間に電圧を印加する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００８−２９８６４４（平成２０年１２月１１日公開）
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Sambrook et al., Molecular Cloning, A laboratory manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory(2001), 6.33-6.38
【非特許文献２】大藤道衛「電気泳動なるほどＱ＆Ａ」１６１〜１６３頁、羊土社、２００５年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述した転写方法は、いずれも電極と分離媒体または転写膜との間にろ紙を挟むものである（非特許文献１のＦｉｇｕｒｅ６−１、６−２および６−３、非特許文献２の図１および図２等参照）。タンク式の転写装置においても、分離媒体および転写膜をろ紙で挟んだ状態でタンク内に保持する（非特許文献２の図１参照）。このろ紙は、伝統的に用いられているものであり、一般的なプロトコル集には必ず記載されている。それゆえか、ろ紙を不要とした転写装置について検討した報告はない。
【０００８】
ところが、本発明者らは、自らが以前発明した電気泳動および転写の両方を実施するための装置（特許文献１参照）について検討を進めていく過程において、独自の観点に基づき、ろ紙を不要とした転写装置が有用であることに想到した。
【０００９】
すなわち、特許文献１に記載の装置は、分離媒体を搬送せずに、同じ位置で、電気泳動および転写の両方を行うものであるが、本発明者らが検討したところ、上記転写のために分離媒体をろ紙で挟んだ場合、当該ろ紙によって上記電気泳動が阻害されることが見出された。この知見に基づき、本発明者らは、特許文献１に記載の装置の場合、ろ紙を不要とした転写装置を組み込むことが好ましいことに想到し、さらに検討を重ね、ろ紙を不要とした転写装置は、特許文献１に記載の装置に組み込む場合のみに限らず、装置を構成する際にろ紙を挟む工程が不要となり、ろ紙のコストも省くことができる点において、従来の転写装置に対して有利であることに想到した。
【００１０】
本発明は、上記課題に鑑みてなされたものであり、これまで検討されていなかった、ろ紙を不要とした転写装置を提供することを主たる目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記の課題を解決するために、本発明に係る転写装置は、分離媒体および転写膜を格納し、上記分離媒体に緩衝液を介して電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物質を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置であって、上記電流を流すための一対の電極であるアノード電極およびカソード電極を備えており、上記アノード電極は、少なくとも一部が鉄を含有していることを特徴としている。
【００１２】
上記構成によれば、アノード電極は、少なくとも一部が鉄から構成されている。鉄は、電解液に溶解せず、酸化反応に伴い気体をしない物質であり、酸化反応に伴い不動態を形成しない。さらに鉄は、標準電位が０よりも低く、アノード反応（酸化反応）の起こる電位が水の電気分解時のアノード電位よりも低い物質である。物質であるよって、電圧印加時、アノード電極を構成する鉄は犠牲酸化剤として電子を放出することで、アノード電極側における緩衝液（水）の電気分解を抑制する。これによって、転写時、アノード電極から気泡が発生することが抑制される。
【００１３】
また、本発明に係る転写装置では、カソード電極とアノード電極との間に分離媒体および転写膜が格納されて転写が行われる。ここで、分離媒体はカソード電極側に配置され、転写膜はアノード電極側に配置される。よって、気泡の発生が抑制されるのは転写膜が存在する側のアノード電極であるため、転写膜付近に発生する気泡が抑制される。
【００１４】
したがって、本発明に係る転写装置によれば、ろ紙等の気泡を吸収する手段を用いずとも、気泡に転写を阻害されることなく、良好な転写結果を簡便に得ることができる。
【００１５】
また、本発明に係る転写装置は、上記アノード電極における上記転写膜に接する面が、鉄から構成されていることが好ましい。
【００１６】
上記構成によれば、転写時、アノード電極から気泡が発生することを効果的に抑制することができる。
【００１７】
また、本発明に係る転写装置は、上記アノード電極は、鉄から構成されていることが好ましい。
【００１８】
上記構成によれば、より簡便にアノード電極を構成することができる。
【００１９】
また、本発明に係る転写装置は、上記アノード電極および上記カソード電極の少なくともいずれか一方が、板状に形成されていてもよい。
【００２０】
上記構成によれば、上記電極間に分離媒体および転写膜を挟んで好適に転写を行うことができる。
【００２１】
また、本発明に係る転写装置は、上記アノード電極および上記カソード電極の少なくともいずれか一方が、互いに平行な複数の帯状に形成されていることが好ましい。
【００２２】
上記構成によれば、分離媒体を搬送せずに同じ位置で電気泳動および転写の両方を行う装置に本発明に係る転写装置を適用した際、ろ紙に電気泳動を阻害されることなく、電気泳動および転写の両方を好適に行うことができる。
【００２３】
また、本発明に係る転写方法は、分離媒体および転写膜を格納し、上記分離媒体に緩衝液を介して電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物質を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写方法であって、上記電流を流すための一対の電極のうち、一方の電極であるアノード電極は、少なくとも一部が鉄から構成されていることを特徴としている。
【００２４】
上記方法によれば、本発明に係る転写装置と同様の効果を得ることができる。
【発明の効果】
【００２５】
本発明に係る転写装置は、電圧を印加する一対の電極であるアノード電極およびカソード電極を備えており、上記アノード電極は鉄を含有しているので、当該アノード電極において気泡が発生することを抑制することができ、ろ紙等の気泡を吸収する手段を用いずとも、良好な転写結果を簡便に得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】本発明の一実施形態である転写装置を示す模式図である。
【図２】本発明の一実施形態である転写装置を示す模式図である。
【図３】実施例１に係る転写装置を示す模式図である。
【図４】比較例１に係る転写装置を示す模式図である。
【図５】比較例２に係る転写装置を示す模式図である。
【図６】実施例１に係る転写装置による転写結果を示す図である。
【図７】比較例１に係る転写装置による転写結果を示す図である。
【図８】比較例２に係る転写装置による転写結果を示す図である。
【図９】実施例２に係る転写装置を示す模式図である。
【図１０】比較例３に係る転写装置を示す模式図である。
【図１１】比較例４に係る転写装置を示す模式図である。
【図１２】実施例２に係る転写装置による転写結果を示す図である。
【図１３】比較例３に係る転写装置による転写結果を示す図である。
【図１４】比較例４に係る転写装置による転写結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
以下、本発明の実施の形態について、詳細に説明する。
【００２８】
本発明は、試料を含む分離媒体に電解液を介して電圧を印加して、該試料を分離媒体に接して配置された転写膜へと転写する転写装置であって、上記電圧を印加する一対の電極のうち、アノード電極は鉄を含有している転写装置を提供する。
【００２９】
なお、本明細書において、用語「転写」は、特定の媒体に含まれる試料を、該媒体から他の媒体へと移動させることが意図される。
【００３０】
図１は、本発明の一実施形態に係る転写装置１００の概略を示す模式図である。図１に示すように、本発明に係る転写装置１００は、カソード電極１０１と、アノード電極１０４とを備えており、転写装置１００による転写時には、カソード電極１０１とアノード電極１０４との間にゲル（分離媒体）１０２と転写膜１０３とが重ねて配置される。
【００３１】
ゲル１０２は、試料を含んでいる媒体であれば特に限られないが、例えば、アガロースゲル、ポリアクリルアミドゲル等、一般に電気泳動に用いられるゲルであって、試料を含み得るものを好適に用いることができる。
【００３２】
試料としては、特に限られないが、生物材料（例えば、生物個体、体液、細胞株、組織培養物、または組織断片）からの調製物等を用いることができ、さらに好ましくはポリペプチドまたポリヌクレオチドを用いることができる。
【００３３】
転写膜１０３としては、上記試料を固定し得る物質からなるものであればよく、形状も特に限られないが、薄膜状のものがよい。具体的には、転写膜１０３としては、周知のウェスタンブロッティング法等の生体高分子解析技術に用いる、ニトロセルロースメンブレン、ＰＶＤＦメンブレン、ナイロンメンブレン等を好適に用いることができる。そして、転写膜１０３は、ゲル１０２に接するように保持されている。
【００３４】
また、カソード電極１０１とアノード電極１０４との間には、緩衝液が供給される。これにより、カソード電極１０１とアノード電極１０４との間に電流を流し、ゲル１０２中の試料を電気泳動して転写膜１０３へと転写することができる。緩衝液の供給の方法としては、転写装置１００全体または一部を緩衝液中に浸してもよいし、ゲル１０２および転写膜１０３を緩衝液に予め浸しておくことにより、これらに緩衝液を含ませていてもよい。
【００３５】
上記緩衝液は、用途に応じて適宜選択すればよいが、例えば、トリス、ＣＡＰＳ、炭酸塩等の伝導性の強い緩衝効果のある試薬が含まれていることが好ましい。上記電解液にはまた、ｐＨ調整剤、変性剤、界面活性剤、アルコール等が含まれていてもよい。例えば、ポリペプチドの転写を行う場合、ポリペプチドと被転写媒体との結合を促進するためにアルコールが含まれていることが好ましく、ポリペプチドを変性させるためにＳＤＳが含まれていることが好ましい。また、ポリヌクレオチドの転写を行う場合、変性剤としてはＮａＯＨ等のアルカリ塩を用いることができる。具体的には、これに限定されるものではないが、例えば、Ｔｒｉｓ／グリシン系緩衝液、酢酸緩衝溶液、炭酸ナトリウム系緩衝液、ＣＡＰＳ緩衝液、Ｔｒｉｓ／ホウ酸／ＥＤＴＡ緩衝液、Ｔｒｉｓ／酢酸／ＥＤＴＡ緩衝液、ＭＯＰＳ、リン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ／トリシン系緩衝液等の緩衝液を用いることができる。
【００３６】
カソード電極１０１は、導電性を有する素材で形成されていればよく、用いられる電解液に接触させても劣化しない素材が好ましく、具体的には、これらに限られるものではないが、白金、銅、亜鉛等から形成することができる。
【００３７】
一方、アノード電極１０４は、鉄から形成されている。なお、アノード電極１０４の全部が鉄であってもよいが、これに限られず、少なくとも鉄が緩衝液と接触するように当該鉄を含んで形成されればよい。例えばアノード電極１０４は、その表面部分のみが鉄であってもよいし、鉄が絶縁体上にストライプ状を形成するように構成されてもよい。また例えばアノード電極１０４の材質は、鉄を含む合金であってもよい。
【００３８】
鉄は、緩衝液に溶解せず、酸化反応に伴い気体を生成することがない物質であり、酸化反応に伴い不動体を形成することはなく、水の電気分解時のアノード電位よりも低い電位でアノード反応が起こるものである。
【００３９】
アノード電極１０４およびカソード電極の形状は例えば板状に形成されていればよい。
【００４０】
転写装置１００を用いて転写を行う際には、カソード電極１０１とアノード電極１０４との間に、試料を含んだゲル１０２と転写膜１０３とを重ねて配置する。この際、ゲル１０２をカソード電極１０１側に配置し、転写膜１０３をアノード電極１０４側に配置することが好ましい。次いで、カソード電極１０１とアノード電極１０４との間に緩衝液を供給して、上記電極間に電圧を印加する。印加する電圧は、転写すべき試料に応じて適宜設定すればよい。電極間に電圧が印加されると、ゲル１０２中の試料は電気泳動されて、転写膜１０３へと移動し、転写が行われる。
【００４１】
転写時、アノード電極１０４は犠牲酸化剤として働き、アノード電極１０４において緩衝液が電気分解されることを抑制する。これによって、アノード電極１０４において、緩衝液の電気分解に起因する酸素の発生を抑制することができる。ひいては、アノード電極１０４と転写膜との間に存在する気泡が絶縁体の役割を果たして電位分布が乱れることを抑制することができる。
【００４２】
なお、従来技術による転写装置では、カソード電極とゲルとの間およびアノード電極と転写膜との間にろ紙を挟んでおり、ろ紙によって電極に発生する気泡を吸収している。
【００４３】
これに対して、本発明に係る転写装置１００では、ろ紙等の気泡を吸収する手段を用いずとも、十分に転写効率を向上させることが可能である。よって、転写装置１００によれば、ろ紙を転写装置に配置するという手間が省略されるため、良好な転写結果を簡便に得ることができる。
【００４４】
また、電極間にゲルや転写膜を重ね合わせて転写のための配置を組み立てる際、ろ紙を挟む場合に比べて、上記組み立てによって電極間に含まれてしまう気泡の量を減少させることができる。
【００４５】
転写後、アノード電極１０４は酸化された状態となるため、次回分の転写時には、転写装置１００におけるアノード電極１０４のみを交換してもよい。
【００４６】
（電気泳動兼転写装置）
一実施形態において、本発明に係る転写装置１００は、電気泳動兼転写装置に用いることができる。
【００４７】
図２は、本実施形態に係る転写装置１２０の概略構成を示す図である。転写装置１２０は、分離媒体を搬送せずに、同じ位置で、電気泳動および転写の両方を行うものである。
【００４８】
図２に示すように、転写装置１２０は、本発明に係る転写装置１００の構成、すなわちカソード電極１０１およびアノード電極１０４を備えている。また、転写装置１２０は、電極１０６を備えた緩衝液槽１０８、および電極１０７を備えた緩衝液槽１０９を備えている。
【００４９】
ここで、電極１０６および１０７は第１電圧印加手段を構成しており、カソード電極１０１およびアノード電極１０４は第２電圧印加手段を構成している。図２に示すように、第１電圧印加手段の電圧を印加する方向（第１方向）は、第２電圧印加手段の電圧を印加する方向（第２方向）と直交している。
【００５０】
また、カソード電極１０１およびアノード電極１０４は、分離部１１１と、結線部１１２との領域に分割されている。分離部１１１では、カソード電極１０１およびアノード電極１０４が、ゲル１０２および転写膜１０３を保持している。また、結線部１１２では、結線器具１１０が、カソード電極１０１およびアノード電極１０４の電源へ接続および非接続を切り替えている。
【００５１】
転写装置１２０では、第１電圧手段および第２電圧手段のそれぞれの電源への接続を制御し、まず、第１電圧印加手段のみを用いてゲル１０２中の試料を第１方向へ分離した後、第２電圧印加手段のみを用いてゲル１０２中の分離された試料を転写膜１０３へと転写することができる。
【００５２】
転写装置１２０において、カソード電極１０１およびアノード電極１０４は、互いに絶縁され、第１方向に沿って平行に並べられた複数の帯状に形成されること、すなわちストライプ状に形成されることが好ましい。これによって、第１電圧印加手段が電極１０６および１０７の間に電圧を印加した場合であっても、上記複数の電極領域は、互いに絶縁されているので、それぞれ異なる電位を有することができ、第１方向に沿って並べられているので、第１方向へ電位勾配を形成することができる。このように、電極１０６および１０７は、第２方向への電気泳動を妨害しない。
【００５３】
また、転写の際には、上記複数の電極領域が適当な結線器具１１０によって接続されることによって、第２電圧印加手段がカソード電極１０１およびアノード電極１０４の間に電圧を印加することができる。
【００５４】
本実施形態に係る転写装置１２０では、転写のためにゲル１０２および転写膜１０３をろ紙で挟む必要がないため、当該ろ紙によって第１電圧手段による電気泳動が阻害されることながない。したがって、転写装置１２０によれば、電気泳動および転写の両方を好適に行うことができる。
【００５５】
本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【００５６】
また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【実施例】
【００５７】
以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００５８】
〔実施例１〕
実施例１として、カソード電極１０１にはＰＭＭＡ板を基盤としたＰｔスパッタ電極（Ｐｔスパッタ電極）を用い、アノード電極１０４には０．５ｍｍ厚の鉄板電極を用いて、転写装置１００を製造した。実施例１の構造を図２に示している。
【００５９】
比較例１として、カソード電極２０１およびアノード電極２０４にＰｔスパッタ電極を用いて転写装置２００を製造した。比較例１の構造を図３に示している。比較例１では、ゲル２０２とカソード電極２０１との間、および転写膜２０３とアノード電極２０４との間にろ紙２０６を配置した。ろ紙２０６はゲル２０２と同じサイズであり、１×ＴＧＳに浸したものを用いた。
【００６０】
比較例２として、カソード電極３０１およびアノード電極３０４にＰｔスパッタ電極を用いて転写装置３００を製造した。比較例１の構造を図３に示している。比較例２は、転写装置３００にろ紙を配置しない以外は、比較例１と同様の構成である。
【００６１】
上述の実施例１、比較例１、および比較例２の転写装置をそれぞれ用いて、以下に説明する転写を行った。
【００６２】
（試料）
転写のための試料としてＳｅｅＢｌｕｅ（登録商標）Ｐｒｅ−Ｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いた。
【００６３】
（電気泳動：転写前のゲルの調整）
超音波圧溶着機で溶着した全自動二次元電気泳動装置用溶着チップに、調整した分離ゲル溶液（１３％アクリルアミドミックス（アクリルアミド：ビスアクリルアミド＝２９．２：０．８）、３７５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．８）、０．０５％ＡＰＳ、０．１％ＴＥＭＥＤ）を添加し、７ウェルコームで蓋をした。
【００６４】
ゲルが重合した後、試料と０．２５％アガロース（ＲｅａｄｙＰｒｅｐ Ｏｖｅｒｌａｙ Ａｇａｒｏｓｅ、ＢＩＯ−ＲＡＤ）を１：１で混合し、１ウェルあたり１５μｌを添加して垂直状態のまま約１５分間４℃で冷した。試料がゲル化した後、ＰＯＷＥＲ ＰＡＣ ３０００（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を電源として、定電流２０ｍＡ設定で約３０分間泳動した。
【００６５】
また、電気泳動緩衝液組成には２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、１９２ｍＭ グリシンおよび０．１％ＳＤＳを用いた。
【００６６】
（転写）
電気泳動が終了した全自動二次元電気泳動装置用溶着チップからゲルを取り出し、４８ｍｍ×４８ｍｍに切り出した。同サイズの１×ＴＧＳに浸した孔径０．４５μｍセルロースメンブレン（Ｍｅｍｂｒａｎｆｉｌｔｅｒ ｐｏｒａｆｉｌ（商標登録） ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒｓ、ＭＡＣＨＥＲＥＹ−ＮＡＧＥＬ）と重ね、ゲルが潰れないように１ｍｍのスペーサーを左右に置き、両面を電極で挟みさらにガラス板で挟み大型クリップで固定した。
【００６７】
電源には、ＫＸ−１００Ｌ（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ＤＣ Ｐｏｗｅｒ Ｓｕｐｐｌｙ、ＴＡＫＡＳＡＧＯ）を用いて、Ｓｔｅｐ１：１Ｖ、６００ｓｅｃ、Ｓｔｅｐ２：２Ｖ、６００ｓｅｃ、およびＳｔｅｐ３：５Ｖ、２４００ｓｅｃを設定した。電流電圧値をＫＥＩＴＨＬＥＹ ２０００ ＭＵＬＴＩＭＥＴＥＲでモニタリングしながら転写を行なった。
【００６８】
（検出）
転写終了後のゲルを撮影した。実施例１、比較例１、および比較例２の転写装置による転写結果をそれぞれ図５〜図７に示す。
【００６９】
図５は、実施例１による転写結果を示す図である。図６は、比較例１による転写結果を示す図である。比較例２による転写結果を示す図である。
【００７０】
図５〜図７を比較すると、実施例１によれば、ろ紙を用いずとも良好に転写が行われていることが分かった。なお、図５に示すように、実施例１の結果では、アノード電極の鉄に起因するさびが外周部分の狭い領域に付着していたが、中央部には、さびは付着していない。
【００７１】
〔実施例２〕
次に、電極としてストライプ電極（互いに平行な複数の帯状導電体を備えた電極）を用いた場合について実施した。ストライプ電極は、以下の手順および条件で作製した。
【００７２】
（ストライプ電極の作製）
スパッタ装置（ＣＦＳ−４ＥＰ−ＬＬ、芝浦メカトロニクス）を用いて、４８ｍｍ×６６ｍｍのＰＭＭＡ板（厚さ３ｍｍ）上に電極を成膜した。続いて、ＣＯ２レーザー彫刻機（Ｔｒｏｔｅｃ ８０１０ Ｓｐｅｅｄｙ １００ Ｃ２５、Ｔｒｏｔｅｃ Ｃｏ．）を用いて、成膜した上記電極を加工して、導電体の幅が約３００μｍ、導電体同士の間隔が約１００μｍである互いに平行な複数の帯状の導電体を形成することにより、ストライプ電極を作製した。切断（加工）条件は、レーザーパワーを５．５％、加工スピードを２０．０％、１０００ＰＰＩとした。
【００７３】
実施例２として、カソード電極４０１にはＰＭＭＡ板上に互いに平行な複数の白金の帯状導電体を形成した電極（Ｐｔストライプ電極）を用い、アノード電極１０４にはＰＭＭＡ板上に互いに平行な複数の鉄の帯状導電体を形成した電極（Ｆｅストライプ電極）を用いて、転写装置４００を製造した。実施例２の構造を図９に示している。
【００７４】
比較例３として、カソード電極５０１およびアノード電極５０４にＰｔストライプ電極を用いて転写装置５００を製造した。比較例３の構造を図１０に示している。比較例３では、ゲル５０２とカソード電極５０１との間、および転写膜５０３とアノード電極５０４との間にろ紙５０６を配置した。ろ紙５０６はゲル５０２と同じサイズであり、１×ＴＧＳに浸したものを用いた。
【００７５】
比較例４として、カソード電極６０１およびアノード電極６０４にＰｔスパッタ電極を用いて転写装置６００を製造した。比較例４の構造を図１１に示している。比較例４は、転写装置６００にろ紙を配置しない以外は、比較例３と同様の構成である。
【００７６】
上述の実施例２、比較例３、および比較例４の転写装置をそれぞれ用いて、実施例１、比較例１、および比較例２と同様の手順および条件で転写を行った。ただし、電圧の設定は、Ｓｔｅｐ１：２Ｖ、６００ｓｅｃ、Ｓｔｅｐ２：４Ｖ、６００ｓｅｃ、およびＳｔｅｐ３：１０Ｖ、２４００ｓｅｃとした。
【００７７】
図１２は、実施例２による転写結果を示す図である。図１３は、比較例３による転写結果を示す図である。図１４は、比較例４による転写結果を示す図である。
【００７８】
図１２〜図１４を比較すると、実施例２における試料の転写量は、比較例３ほどではないにしても、比較例４に比べれば、特に、低分子タンパク質（ゲル下部）において、転写量が多くなっていた。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明は、例えば、生命科学の研究のための器具等の製造分野において利用可能である。
【符号の説明】
【００８０】
１００ 転写装置
１０１ カソード電極
１０２ ゲル
１０３ 転写膜
１０４ アノード電極
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、ろ紙を不要とした転写装置に関するものであり、詳しくは、分離媒体に緩衝液を介して電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物質を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質、核酸等の生体分子の解析または検査を行うため、ウェスタンブロッティング等のブロッティングと称される技術が用いられることがある。ブロッティングを行うためには、まず、生体分子を電気泳動によってゲル等の分離媒体中において分離し、分離した生体分子を上記分離媒体から転写膜上へ転写することが行われる。これにより、解析対象の生体分子を、分離した状態で転写膜上に配置することができるため、さらなる解析を首尾よく行うことができる。
【０００３】
このとき、上記分離媒体から上記転写膜への生体分子の転写のために、転写装置が用いられる。転写装置が行う転写の方法としては、毛細管現象を利用した方法、電圧を印加する方法、真空引きする方法が知られている（非特許文献１参照）。
【０００４】
上記のうち電圧を印加する方法は、転写効率がよいことが知られている。電圧を印加する方法を実施する転写装置としては、タンク式およびセミドライ式の二種類がある（非特許文献２参照）。タンク式の転写装置では、緩衝液によって満たされたタンク内に、分離媒体および転写膜を保持し、タンクに備えられた電極を用いて分離媒体および転写膜に電圧を印加する。セミドライ式の転写装置では、緩衝液に浸漬させておいたろ紙を用い、電極、ろ紙、分離媒体、転写膜、ろ紙および電極をこの順に重ねて、両電極間に電圧を印加する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００８−２９８６４４（平成２０年１２月１１日公開）
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Sambrook et al., Molecular Cloning, A laboratory manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory(2001), 6.33-6.38
【非特許文献２】大藤道衛「電気泳動なるほどＱ＆Ａ」１６１〜１６３頁、羊土社、２００５年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述した転写方法は、いずれも電極と分離媒体または転写膜との間にろ紙を挟むものである（非特許文献１のＦｉｇｕｒｅ６−１、６−２および６−３、非特許文献２の図１および図２等参照）。タンク式の転写装置においても、分離媒体および転写膜をろ紙で挟んだ状態でタンク内に保持する（非特許文献２の図１参照）。このろ紙は、伝統的に用いられているものであり、一般的なプロトコル集には必ず記載されている。それゆえか、ろ紙を不要とした転写装置について検討した報告はない。
【０００８】
ところが、本発明者らは、自らが以前発明した電気泳動および転写の両方を実施するための装置（特許文献１参照）について検討を進めていく過程において、独自の観点に基づき、ろ紙を不要とした転写装置が有用であることに想到した。
【０００９】
すなわち、特許文献１に記載の装置は、分離媒体を搬送せずに、同じ位置で、電気泳動および転写の両方を行うものであるが、本発明者らが検討したところ、上記転写のために分離媒体をろ紙で挟んだ場合、当該ろ紙によって上記電気泳動が阻害されることが見出された。この知見に基づき、本発明者らは、特許文献１に記載の装置の場合、ろ紙を不要とした転写装置を組み込むことが好ましいことに想到し、さらに検討を重ね、ろ紙を不要とした転写装置は、特許文献１に記載の装置に組み込む場合のみに限らず、装置を構成する際にろ紙を挟む工程が不要となり、ろ紙のコストも省くことができる点において、従来の転写装置に対して有利であることに想到した。
【００１０】
本発明は、上記課題に鑑みてなされたものであり、これまで検討されていなかった、ろ紙を不要とした転写装置を提供することを主たる目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記の課題を解決するために、本発明に係る転写装置は、分離媒体および転写膜を格納し、上記分離媒体に緩衝液を介して電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物質を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置であって、上記電流を流すための一対の電極であるアノード電極およびカソード電極を備えており、上記アノード電極は、少なくとも一部が鉄を含有していることを特徴としている。
【００１２】
上記構成によれば、アノード電極は、少なくとも一部が鉄から構成されている。鉄は、電解液に溶解せず、酸化反応に伴い気体をしない物質であり、酸化反応に伴い不動態を形成しない。さらに鉄は、標準電位が０よりも低く、アノード反応（酸化反応）の起こる電位が水の電気分解時のアノード電位よりも低い物質である。物質であるよって、電圧印加時、アノード電極を構成する鉄は犠牲酸化剤として電子を放出することで、アノード電極側における緩衝液（水）の電気分解を抑制する。これによって、転写時、アノード電極から気泡が発生することが抑制される。
【００１３】
また、本発明に係る転写装置では、カソード電極とアノード電極との間に分離媒体および転写膜が格納されて転写が行われる。ここで、分離媒体はカソード電極側に配置され、転写膜はアノード電極側に配置される。よって、気泡の発生が抑制されるのは転写膜が存在する側のアノード電極であるため、転写膜付近に発生する気泡が抑制される。
【００１４】
したがって、本発明に係る転写装置によれば、ろ紙等の気泡を吸収する手段を用いずとも、気泡に転写を阻害されることなく、良好な転写結果を簡便に得ることができる。
【００１５】
また、本発明に係る転写装置は、上記アノード電極における上記転写膜に接する面が、鉄から構成されていることが好ましい。
【００１６】
上記構成によれば、転写時、アノード電極から気泡が発生することを効果的に抑制することができる。
【００１７】
また、本発明に係る転写装置は、上記アノード電極は、鉄から構成されていることが好ましい。
【００１８】
上記構成によれば、より簡便にアノード電極を構成することができる。
【００１９】
また、本発明に係る転写装置は、上記アノード電極および上記カソード電極の少なくともいずれか一方が、板状に形成されていてもよい。
【００２０】
上記構成によれば、上記電極間に分離媒体および転写膜を挟んで好適に転写を行うことができる。
【００２１】
また、本発明に係る転写装置は、上記アノード電極および上記カソード電極の少なくともいずれか一方が、互いに平行な複数の帯状に形成されていることが好ましい。
【００２２】
上記構成によれば、分離媒体を搬送せずに同じ位置で電気泳動および転写の両方を行う装置に本発明に係る転写装置を適用した際、ろ紙に電気泳動を阻害されることなく、電気泳動および転写の両方を好適に行うことができる。
【００２３】
また、本発明に係る転写方法は、分離媒体および転写膜を格納し、上記分離媒体に緩衝液を介して電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物質を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写方法であって、上記電流を流すための一対の電極のうち、一方の電極であるアノード電極は、少なくとも一部が鉄から構成されていることを特徴としている。
【００２４】
上記方法によれば、本発明に係る転写装置と同様の効果を得ることができる。
【発明の効果】
【００２５】
本発明に係る転写装置は、電圧を印加する一対の電極であるアノード電極およびカソード電極を備えており、上記アノード電極は鉄を含有しているので、当該アノード電極において気泡が発生することを抑制することができ、ろ紙等の気泡を吸収する手段を用いずとも、良好な転写結果を簡便に得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】本発明の一実施形態である転写装置を示す模式図である。
【図２】本発明の一実施形態である転写装置を示す模式図である。
【図３】実施例１に係る転写装置を示す模式図である。
【図４】比較例１に係る転写装置を示す模式図である。
【図５】比較例２に係る転写装置を示す模式図である。
【図６】実施例１に係る転写装置による転写結果を示す図である。
【図７】比較例１に係る転写装置による転写結果を示す図である。
【図８】比較例２に係る転写装置による転写結果を示す図である。
【図９】実施例２に係る転写装置を示す模式図である。
【図１０】比較例３に係る転写装置を示す模式図である。
【図１１】比較例４に係る転写装置を示す模式図である。
【図１２】実施例２に係る転写装置による転写結果を示す図である。
【図１３】比較例３に係る転写装置による転写結果を示す図である。
【図１４】比較例４に係る転写装置による転写結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
以下、本発明の実施の形態について、詳細に説明する。
【００２８】
本発明は、試料を含む分離媒体に電解液を介して電圧を印加して、該試料を分離媒体に接して配置された転写膜へと転写する転写装置であって、上記電圧を印加する一対の電極のうち、アノード電極は鉄を含有している転写装置を提供する。
【００２９】
なお、本明細書において、用語「転写」は、特定の媒体に含まれる試料を、該媒体から他の媒体へと移動させることが意図される。
【００３０】
図１は、本発明の一実施形態に係る転写装置１００の概略を示す模式図である。図１に示すように、本発明に係る転写装置１００は、カソード電極１０１と、アノード電極１０４とを備えており、転写装置１００による転写時には、カソード電極１０１とアノード電極１０４との間にゲル（分離媒体）１０２と転写膜１０３とが重ねて配置される。
【００３１】
ゲル１０２は、試料を含んでいる媒体であれば特に限られないが、例えば、アガロースゲル、ポリアクリルアミドゲル等、一般に電気泳動に用いられるゲルであって、試料を含み得るものを好適に用いることができる。
【００３２】
試料としては、特に限られないが、生物材料（例えば、生物個体、体液、細胞株、組織培養物、または組織断片）からの調製物等を用いることができ、さらに好ましくはポリペプチドまたポリヌクレオチドを用いることができる。
【００３３】
転写膜１０３としては、上記試料を固定し得る物質からなるものであればよく、形状も特に限られないが、薄膜状のものがよい。具体的には、転写膜１０３としては、周知のウェスタンブロッティング法等の生体高分子解析技術に用いる、ニトロセルロースメンブレン、ＰＶＤＦメンブレン、ナイロンメンブレン等を好適に用いることができる。そして、転写膜１０３は、ゲル１０２に接するように保持されている。
【００３４】
また、カソード電極１０１とアノード電極１０４との間には、緩衝液が供給される。これにより、カソード電極１０１とアノード電極１０４との間に電流を流し、ゲル１０２中の試料を電気泳動して転写膜１０３へと転写することができる。緩衝液の供給の方法としては、転写装置１００全体または一部を緩衝液中に浸してもよいし、ゲル１０２および転写膜１０３を緩衝液に予め浸しておくことにより、これらに緩衝液を含ませていてもよい。
【００３５】
上記緩衝液は、用途に応じて適宜選択すればよいが、例えば、トリス、ＣＡＰＳ、炭酸塩等の伝導性の強い緩衝効果のある試薬が含まれていることが好ましい。上記電解液にはまた、ｐＨ調整剤、変性剤、界面活性剤、アルコール等が含まれていてもよい。例えば、ポリペプチドの転写を行う場合、ポリペプチドと被転写媒体との結合を促進するためにアルコールが含まれていることが好ましく、ポリペプチドを変性させるためにＳＤＳが含まれていることが好ましい。また、ポリヌクレオチドの転写を行う場合、変性剤としてはＮａＯＨ等のアルカリ塩を用いることができる。具体的には、これに限定されるものではないが、例えば、Ｔｒｉｓ／グリシン系緩衝液、酢酸緩衝溶液、炭酸ナトリウム系緩衝液、ＣＡＰＳ緩衝液、Ｔｒｉｓ／ホウ酸／ＥＤＴＡ緩衝液、Ｔｒｉｓ／酢酸／ＥＤＴＡ緩衝液、ＭＯＰＳ、リン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ／トリシン系緩衝液等の緩衝液を用いることができる。
【００３６】
カソード電極１０１は、導電性を有する素材で形成されていればよく、用いられる電解液に接触させても劣化しない素材が好ましく、具体的には、これらに限られるものではないが、白金、銅、亜鉛等から形成することができる。
【００３７】
一方、アノード電極１０４は、鉄から形成されている。なお、アノード電極１０４の全部が鉄であってもよいが、これに限られず、少なくとも鉄が緩衝液と接触するように当該鉄を含んで形成されればよい。例えばアノード電極１０４は、その表面部分のみが鉄であってもよいし、鉄が絶縁体上にストライプ状を形成するように構成されてもよい。また例えばアノード電極１０４の材質は、鉄を含む合金であってもよい。
【００３８】
鉄は、緩衝液に溶解せず、酸化反応に伴い気体を生成することがない物質であり、酸化反応に伴い不動体を形成することはなく、水の電気分解時のアノード電位よりも低い電位でアノード反応が起こるものである。
【００３９】
アノード電極１０４およびカソード電極の形状は例えば板状に形成されていればよい。
【００４０】
転写装置１００を用いて転写を行う際には、カソード電極１０１とアノード電極１０４との間に、試料を含んだゲル１０２と転写膜１０３とを重ねて配置する。この際、ゲル１０２をカソード電極１０１側に配置し、転写膜１０３をアノード電極１０４側に配置することが好ましい。次いで、カソード電極１０１とアノード電極１０４との間に緩衝液を供給して、上記電極間に電圧を印加する。印加する電圧は、転写すべき試料に応じて適宜設定すればよい。電極間に電圧が印加されると、ゲル１０２中の試料は電気泳動されて、転写膜１０３へと移動し、転写が行われる。
【００４１】
転写時、アノード電極１０４は犠牲酸化剤として働き、アノード電極１０４において緩衝液が電気分解されることを抑制する。これによって、アノード電極１０４において、緩衝液の電気分解に起因する酸素の発生を抑制することができる。ひいては、アノード電極１０４と転写膜との間に存在する気泡が絶縁体の役割を果たして電位分布が乱れることを抑制することができる。
【００４２】
なお、従来技術による転写装置では、カソード電極とゲルとの間およびアノード電極と転写膜との間にろ紙を挟んでおり、ろ紙によって電極に発生する気泡を吸収している。
【００４３】
これに対して、本発明に係る転写装置１００では、ろ紙等の気泡を吸収する手段を用いずとも、十分に転写効率を向上させることが可能である。よって、転写装置１００によれば、ろ紙を転写装置に配置するという手間が省略されるため、良好な転写結果を簡便に得ることができる。
【００４４】
また、電極間にゲルや転写膜を重ね合わせて転写のための配置を組み立てる際、ろ紙を挟む場合に比べて、上記組み立てによって電極間に含まれてしまう気泡の量を減少させることができる。
【００４５】
転写後、アノード電極１０４は酸化された状態となるため、次回分の転写時には、転写装置１００におけるアノード電極１０４のみを交換してもよい。
【００４６】
（電気泳動兼転写装置）
一実施形態において、本発明に係る転写装置１００は、電気泳動兼転写装置に用いることができる。
【００４７】
図２は、本実施形態に係る転写装置１２０の概略構成を示す図である。転写装置１２０は、分離媒体を搬送せずに、同じ位置で、電気泳動および転写の両方を行うものである。
【００４８】
図２に示すように、転写装置１２０は、本発明に係る転写装置１００の構成、すなわちカソード電極１０１およびアノード電極１０４を備えている。また、転写装置１２０は、電極１０６を備えた緩衝液槽１０８、および電極１０７を備えた緩衝液槽１０９を備えている。
【００４９】
ここで、電極１０６および１０７は第１電圧印加手段を構成しており、カソード電極１０１およびアノード電極１０４は第２電圧印加手段を構成している。図２に示すように、第１電圧印加手段の電圧を印加する方向（第１方向）は、第２電圧印加手段の電圧を印加する方向（第２方向）と直交している。
【００５０】
また、カソード電極１０１およびアノード電極１０４は、分離部１１１と、結線部１１２との領域に分割されている。分離部１１１では、カソード電極１０１およびアノード電極１０４が、ゲル１０２および転写膜１０３を保持している。また、結線部１１２では、結線器具１１０が、カソード電極１０１およびアノード電極１０４の電源へ接続および非接続を切り替えている。
【００５１】
転写装置１２０では、第１電圧手段および第２電圧手段のそれぞれの電源への接続を制御し、まず、第１電圧印加手段のみを用いてゲル１０２中の試料を第１方向へ分離した後、第２電圧印加手段のみを用いてゲル１０２中の分離された試料を転写膜１０３へと転写することができる。
【００５２】
転写装置１２０において、カソード電極１０１およびアノード電極１０４は、互いに絶縁され、第１方向に沿って平行に並べられた複数の帯状に形成されること、すなわちストライプ状に形成されることが好ましい。これによって、第１電圧印加手段が電極１０６および１０７の間に電圧を印加した場合であっても、上記複数の電極領域は、互いに絶縁されているので、それぞれ異なる電位を有することができ、第１方向に沿って並べられているので、第１方向へ電位勾配を形成することができる。このように、電極１０６および１０７は、第２方向への電気泳動を妨害しない。
【００５３】
また、転写の際には、上記複数の電極領域が適当な結線器具１１０によって接続されることによって、第２電圧印加手段がカソード電極１０１およびアノード電極１０４の間に電圧を印加することができる。
【００５４】
本実施形態に係る転写装置１２０では、転写のためにゲル１０２および転写膜１０３をろ紙で挟む必要がないため、当該ろ紙によって第１電圧手段による電気泳動が阻害されることながない。したがって、転写装置１２０によれば、電気泳動および転写の両方を好適に行うことができる。
【００５５】
本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【００５６】
また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【実施例】
【００５７】
以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００５８】
〔実施例１〕
実施例１として、カソード電極１０１にはＰＭＭＡ板を基盤としたＰｔスパッタ電極（Ｐｔスパッタ電極）を用い、アノード電極１０４には０．５ｍｍ厚の鉄板電極を用いて、転写装置１００を製造した。実施例１の構造を図２に示している。
【００５９】
比較例１として、カソード電極２０１およびアノード電極２０４にＰｔスパッタ電極を用いて転写装置２００を製造した。比較例１の構造を図３に示している。比較例１では、ゲル２０２とカソード電極２０１との間、および転写膜２０３とアノード電極２０４との間にろ紙２０６を配置した。ろ紙２０６はゲル２０２と同じサイズであり、１×ＴＧＳに浸したものを用いた。
【００６０】
比較例２として、カソード電極３０１およびアノード電極３０４にＰｔスパッタ電極を用いて転写装置３００を製造した。比較例１の構造を図３に示している。比較例２は、転写装置３００にろ紙を配置しない以外は、比較例１と同様の構成である。
【００６１】
上述の実施例１、比較例１、および比較例２の転写装置をそれぞれ用いて、以下に説明する転写を行った。
【００６２】
（試料）
転写のための試料としてＳｅｅＢｌｕｅ（登録商標）Ｐｒｅ−Ｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いた。
【００６３】
（電気泳動：転写前のゲルの調整）
超音波圧溶着機で溶着した全自動二次元電気泳動装置用溶着チップに、調整した分離ゲル溶液（１３％アクリルアミドミックス（アクリルアミド：ビスアクリルアミド＝２９．２：０．８）、３７５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．８）、０．０５％ＡＰＳ、０．１％ＴＥＭＥＤ）を添加し、７ウェルコームで蓋をした。
【００６４】
ゲルが重合した後、試料と０．２５％アガロース（ＲｅａｄｙＰｒｅｐ Ｏｖｅｒｌａｙ Ａｇａｒｏｓｅ、ＢＩＯ−ＲＡＤ）を１：１で混合し、１ウェルあたり１５μｌを添加して垂直状態のまま約１５分間４℃で冷した。試料がゲル化した後、ＰＯＷＥＲ ＰＡＣ ３０００（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を電源として、定電流２０ｍＡ設定で約３０分間泳動した。
【００６５】
また、電気泳動緩衝液組成には２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、１９２ｍＭ グリシンおよび０．１％ＳＤＳを用いた。
【００６６】
（転写）
電気泳動が終了した全自動二次元電気泳動装置用溶着チップからゲルを取り出し、４８ｍｍ×４８ｍｍに切り出した。同サイズの１×ＴＧＳに浸した孔径０．４５μｍセルロースメンブレン（Ｍｅｍｂｒａｎｆｉｌｔｅｒ ｐｏｒａｆｉｌ（商標登録） ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒｓ、ＭＡＣＨＥＲＥＹ−ＮＡＧＥＬ）と重ね、ゲルが潰れないように１ｍｍのスペーサーを左右に置き、両面を電極で挟みさらにガラス板で挟み大型クリップで固定した。
【００６７】
電源には、ＫＸ−１００Ｌ（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ＤＣ Ｐｏｗｅｒ Ｓｕｐｐｌｙ、ＴＡＫＡＳＡＧＯ）を用いて、Ｓｔｅｐ１：１Ｖ、６００ｓｅｃ、Ｓｔｅｐ２：２Ｖ、６００ｓｅｃ、およびＳｔｅｐ３：５Ｖ、２４００ｓｅｃを設定した。電流電圧値をＫＥＩＴＨＬＥＹ ２０００ ＭＵＬＴＩＭＥＴＥＲでモニタリングしながら転写を行なった。
【００６８】
（検出）
転写終了後のゲルを撮影した。実施例１、比較例１、および比較例２の転写装置による転写結果をそれぞれ図５〜図７に示す。
【００６９】
図５は、実施例１による転写結果を示す図である。図６は、比較例１による転写結果を示す図である。比較例２による転写結果を示す図である。
【００７０】
図５〜図７を比較すると、実施例１によれば、ろ紙を用いずとも良好に転写が行われていることが分かった。なお、図５に示すように、実施例１の結果では、アノード電極の鉄に起因するさびが外周部分の狭い領域に付着していたが、中央部には、さびは付着していない。
【００７１】
〔実施例２〕
次に、電極としてストライプ電極（互いに平行な複数の帯状導電体を備えた電極）を用いた場合について実施した。ストライプ電極は、以下の手順および条件で作製した。
【００７２】
（ストライプ電極の作製）
スパッタ装置（ＣＦＳ−４ＥＰ−ＬＬ、芝浦メカトロニクス）を用いて、４８ｍｍ×６６ｍｍのＰＭＭＡ板（厚さ３ｍｍ）上に電極を成膜した。続いて、ＣＯ２レーザー彫刻機（Ｔｒｏｔｅｃ ８０１０ Ｓｐｅｅｄｙ １００ Ｃ２５、Ｔｒｏｔｅｃ Ｃｏ．）を用いて、成膜した上記電極を加工して、導電体の幅が約３００μｍ、導電体同士の間隔が約１００μｍである互いに平行な複数の帯状の導電体を形成することにより、ストライプ電極を作製した。切断（加工）条件は、レーザーパワーを５．５％、加工スピードを２０．０％、１０００ＰＰＩとした。
【００７３】
実施例２として、カソード電極４０１にはＰＭＭＡ板上に互いに平行な複数の白金の帯状導電体を形成した電極（Ｐｔストライプ電極）を用い、アノード電極１０４にはＰＭＭＡ板上に互いに平行な複数の鉄の帯状導電体を形成した電極（Ｆｅストライプ電極）を用いて、転写装置４００を製造した。実施例２の構造を図９に示している。
【００７４】
比較例３として、カソード電極５０１およびアノード電極５０４にＰｔストライプ電極を用いて転写装置５００を製造した。比較例３の構造を図１０に示している。比較例３では、ゲル５０２とカソード電極５０１との間、および転写膜５０３とアノード電極５０４との間にろ紙５０６を配置した。ろ紙５０６はゲル５０２と同じサイズであり、１×ＴＧＳに浸したものを用いた。
【００７５】
比較例４として、カソード電極６０１およびアノード電極６０４にＰｔスパッタ電極を用いて転写装置６００を製造した。比較例４の構造を図１１に示している。比較例４は、転写装置６００にろ紙を配置しない以外は、比較例３と同様の構成である。
【００７６】
上述の実施例２、比較例３、および比較例４の転写装置をそれぞれ用いて、実施例１、比較例１、および比較例２と同様の手順および条件で転写を行った。ただし、電圧の設定は、Ｓｔｅｐ１：２Ｖ、６００ｓｅｃ、Ｓｔｅｐ２：４Ｖ、６００ｓｅｃ、およびＳｔｅｐ３：１０Ｖ、２４００ｓｅｃとした。
【００７７】
図１２は、実施例２による転写結果を示す図である。図１３は、比較例３による転写結果を示す図である。図１４は、比較例４による転写結果を示す図である。
【００７８】
図１２〜図１４を比較すると、実施例２における試料の転写量は、比較例３ほどではないにしても、比較例４に比べれば、特に、低分子タンパク質（ゲル下部）において、転写量が多くなっていた。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明は、例えば、生命科学の研究のための器具等の製造分野において利用可能である。
【符号の説明】
【００８０】
１００ 転写装置
１０１ カソード電極
１０２ ゲル
１０３ 転写膜
１０４ アノード電極
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分離媒体および転写膜を格納し、上記分離媒体に緩衝液を介して電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物質を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置であって、
上記電流を流すための一対の電極であるアノード電極およびカソード電極を備えており、
上記アノード電極は、少なくとも一部が鉄を含有していることを特徴とする転写装置。
【請求項２】
上記アノード電極における上記転写膜に接する面が、鉄から構成されていることを特徴とする請求項１に記載の転写装置。
【請求項３】
上記アノード電極は、鉄から構成されていることを特徴とする請求項１または２に記載の転写装置。
【請求項４】
上記アノード電極および上記カソード電極の少なくともいずれか一方が、板状に形成されていることを特徴とする請求項１から３のいずれか１項に記載の転写装置。
【請求項５】
上記アノード電極および上記カソード電極の少なくともいずれか一方が、互いに平行な複数の帯状に形成されていることを特徴とする請求項１から３のいずれか１項に記載の転写装置。
【請求項６】
分離媒体および転写膜を格納し、上記分離媒体に緩衝液を介して電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物質を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写方法であって、
上記電流を流すための一対の電極のうち、一方の電極であるアノード電極は、少なくとも一部が鉄から構成されていることを特徴とする転写方法。
【請求項１】
分離媒体および転写膜を格納し、上記分離媒体に緩衝液を介して電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物質を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置であって、
上記電流を流すための一対の電極であるアノード電極およびカソード電極を備えており、
上記アノード電極は、少なくとも一部が鉄を含有していることを特徴とする転写装置。
【請求項２】
上記アノード電極における上記転写膜に接する面が、鉄から構成されていることを特徴とする請求項１に記載の転写装置。
【請求項３】
上記アノード電極は、鉄から構成されていることを特徴とする請求項１または２に記載の転写装置。
【請求項４】
上記アノード電極および上記カソード電極の少なくともいずれか一方が、板状に形成されていることを特徴とする請求項１から３のいずれか１項に記載の転写装置。
【請求項５】
上記アノード電極および上記カソード電極の少なくともいずれか一方が、互いに平行な複数の帯状に形成されていることを特徴とする請求項１から３のいずれか１項に記載の転写装置。
【請求項６】
分離媒体および転写膜を格納し、上記分離媒体に緩衝液を介して電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物質を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写方法であって、
上記電流を流すための一対の電極のうち、一方の電極であるアノード電極は、少なくとも一部が鉄から構成されていることを特徴とする転写方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図６】
【図７】
【図８】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図６】
【図７】
【図８】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【公開番号】特開２０１０−２１６８６２（Ｐ２０１０−２１６８６２Ａ）
【公開日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−６１４１２（Ｐ２００９−６１４１２）
【出願日】平成２１年３月１３日（２００９．３．１３）
【出願人】（３０１０２１５３３）独立行政法人産業技術総合研究所 (6,529)
【出願人】（０００００３１９３）凸版印刷株式会社 (10,630)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年３月１３日（２００９．３．１３）
【出願人】（３０１０２１５３３）独立行政法人産業技術総合研究所 (6,529)
【出願人】（０００００３１９３）凸版印刷株式会社 (10,630)
【Ｆターム（参考）】
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