アディポネクチン受容体発現増加剤
【課題】アディポネクチンの感受性を高めて、アディポネクチン受容体の発現を増加させるアディポネクチン受容体発現増加剤を得ること。
【解決手段】９−シス−β−カロテン含有組成物を含むアディポネクチン受容体発現増加剤にすることで得られる。
【解決手段】９−シス−β−カロテン含有組成物を含むアディポネクチン受容体発現増加剤にすることで得られる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、９−シス−β−カロテン含有組成物（９−ｃｉｓ−β−ｃａｒｏｔｅｎｅ−ｒｉｃｈ）の作用によって、アディポネクチンの感受性を高めるために、アディポネクチン受容体の発現を増加させることを目的とするアディポネクチン受容体発現増加剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
血中β−カロテン濃度と２型糖尿病、空腹時高血糖、空腹時インスリン濃度、耐糖能異常、インスリン抵抗性ならびにメタボリックシンドロームなどとの逆相関（すなわち、血清β−カロテン濃度が低いとき、これらの頻度が高くなる）が、最近の疫学調査により明らかにされている（Ｆｏｒｄ ＥＳ ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ． Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ ｎａｔｉｏｎａｌ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｓｕｒｖｅｙ． Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ５２：２３４６−２３５２， ２００３； Ｃｏｙｎｅ Ｔ ｅｔ ａｌ． Ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｓ： ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｏｆ ａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ ｓｔｕｄｙ ｉｎ Ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄ， Ａｕｓｔｒａｌｉａ． Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ， ８２：６８５−６９３， ２００５； Ｓｕｇｉｕｒａ Ｍ ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ｍｏｄｅｌ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ−ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎｄｅｘ ｉｓ ｉｎｖｅｒｓｅｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｅｒｕｍ ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｓ ｉｎ ｎｏｎ−ｄｉａｂｅｔｉｃ ｓｕｂｊｅｃｔｓ． Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ， １６：７１−７８， ２００６）。
【０００３】
また、β−カロテンを用いた臨床試験においては、最近、Ｈａｒａｔｓらのグループは、高脂血症の患者に９−ｃｉｓ−β−ｃａｒｏｔｅｎｅ−ｒｉｃｈの抽出物を脂質代謝改善薬であるｆｉｂｒａｔｅ（ＰＰＡＲアゴニスト）と併用すると、ｆｉｂｒａｔｅ単独よりも血中ＨＤＬコレステロール濃度が有意に高くなることを報告した（Ｓｈａｉｓｈ Ａ ｅｔ ａｌ． ９−ｃｉｓ ｂ−ｃａｒｏｔｅｎｅ−ｒｉｃｈ ｐｏｗｄｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｇａ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｂａｒｄａｗｉｌ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ Ｐｌａｓｍａ ＨＤＬ−ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｎ ｆｉｂｒａｔｅ−ｔｒｅａｔｅｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ． Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ， １８９：２１５−２２， ２００６）。
【０００４】
ところで、メタボリックシンドロームとは、「肥満」を基盤として「高血糖」、「高血圧」、「高脂血症」の３つの症状のうち、少なくともいずれか２つを併存させている状態をいうものである。
【０００５】
肥満の状態になると、脂肪組織の増大及び脂肪細胞の巨大化により、脂肪細胞からのアディポネクチンの分泌が減少し、筋肉や肝臓に対するアディポネクチンの作用が低下するようになる。
【０００６】
その結果、肝臓や筋肉はインスリンに対する感受性を低下させ、いわゆる「インスリン抵抗性」の状態になる。
【０００７】
その結果、高血糖状態が誘導されると共に、肝臓における脂質代謝が滞り、高脂血症や脂肪肝をもたらすと考えられている（山内敏和・門脇孝、抗糖尿病シグナル：アディポネクチンとアディポネクチン受容体．実験医学、２４巻（１０月号），２４５１−２４５７，２００６）。
【０００８】
肝臓に発現しているアディポネクチン受容体は、アディポネクチンが肝臓に対して糖質代謝や脂質代謝を改善する際に、そのシグナルを細胞内に伝える因子である。
【０００９】
したがって、アディポネクチンの肝臓への作用の改善をもたらすアディポネクチン受容体発現の増加は、「アディポネクチン抵抗性→インスリン抵抗性→アディポネクチン受容体低下→アディポネクチン抵抗性」の悪循環（＝メタボリックシンドローム）を断ち切る重要なステップとなるものである。
【００１０】
そのため、山内らの総説において、「アディポネクチン受容体発現増加剤、および高分子量アディポネクチン増加剤の同定は、新規の抗糖尿病薬、抗動脈硬化薬の開発の道を切り開くものと期待される。」と結ばれているものである。
【００１１】
このようなアディポネクチン受容体の発現を増加させる因子として、最近、絶食やダイエット、運動など多数報告されている。
【００１２】
筋肉や脳、脂肪細胞には主としてアディポネクチン受容体１（ＡｄｉｐｏＲ１）が発現し、肝臓にはアディポネクチン受容体１とアディポネクチン受容体２（ＡｄｉｐｏＲ２）が発現している。
【００１３】
これら２つの受容体は、一部異なった調節を受けることが知られているが、絶食や、運動では主としてアディポネクチン受容体２が発現増加することが解っている（Ｔｓｕｃｈｉｄａ Ａ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｓｕｌｉｎ／Ｆｏｘｏ１ ｐａｔｈｗａｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９：３０８１７−３０８２２， ２００４； Ｋｉｍ ＭＪ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｉｍｐａｉｒｅｄ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｔｏｌｅｒａｎｔ ｏｂｅｓｅ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ｄｕｒｉｎｇ ｗｅｉｇｈｔ ｌｏｓｓ． Ｅｕｒ Ｊ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １５５：１６１−１６５， ２００６； Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ ＭＳ ｅｔ ａｌ． Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ： ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｏｂｅｓｉｔｙ， ｗｅｉｇｈｔ ｌｏｓｓ， ａｎｄ ｆａｔ ｄｅｐｏｔｓ． Ｏｂｅｓｉｔｙ， １４：２８−３５， ２００６； Ｂｌｕｈｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ： ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ａｎｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｐｈｙｓｉｃａｌ ｔｒａｉｎｉｎｇ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ． ９１：２３１０−２３１６， ２００６）。
【００１４】
しかしながら、これらは被験者に持続的な努力や過度のストレスを課すものであり、また、これらを実施したとしても必ずしも全ての人に実現容易なものであるとは言い難いものである。
【００１５】
特定の化学物質で、アディポネクチン受容体の発現増加剤として報告されているものとしては、例えば、ＰＰＡＲγ作動薬であるトログリタゾン（ＡｄｉｐｏＲ１の発現増加剤）やロシグリタゾン（ＡｄｉｐｏＲ２の発現増加剤）がある。
【００１６】
これらの発現増加剤は、経口抗糖尿病薬として開発された薬剤であるが、一部に肝毒性が報告されており、メタボリックシンドロームのような前病状態の人に長期間予防的に用いるのにはリスクが大きすぎる（Ｎｅｕｍｅｉｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ． Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｂｙ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ． Ｂｉｏｃｈｅｍ ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ． ３３４：９２４−９２９， ２００５； Ｓｕｎ Ｘ ｅｔ ａｌ． Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｂｙ ｔｈｅ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−γ ａｇｏｎｉｓｔ ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ． Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ， ４９：１３０３−１３１０， ２００６）。
【００１７】
２００５年にＰＰＡＲα作動薬が肥満で低下したＡｄｉｐｏＲ１、ＡｄｉｐｏＲ２の発現量を回復させるという報告もあったが、その後ＰＰＡＲα作動薬のＡｄｉｐｏＲ発現増加作用は確認されず、ＰＰＡＲα作動薬の１つであるフェノフィブレートでは逆に抑制されるという報告もある。ＰＰＡＲα作動薬は脂質代謝の改善を介してＡｄｉｐｏＲ発現に間接的に作用している可能性がある。
【００１８】
これらＡｄｉｐｏＲの発現増加に関する技術以外の技術について、従来、この種のアディポネクチンの増加を目的とする技術としては、例えば、ドコサヘキサエン酸又はその誘導体を有効成分として含むアディポネクチン上昇剤（特許文献１参照）や、緑茶カテキンを有効成分として含有することを特徴とし、血漿中アディポネクチンを上昇させるアディポネクチン分泌促進組成物がある（特許文献２参照）。
【００１９】
このように、高血糖や２型糖尿病、高脂血症、メタボリックシンドロームに対して抑止的に作用することが期待されるものであって、アディポネクチン受容体遺伝子の発現を増加させる物質で、なおかつ長期間の摂取においても安全性が確保されているような物質の開発が要求されている。
【００２０】
また、９−シス−β−カロテン含有組成物に関する技術としては、例えば、デュナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）属藻類の乾燥粉末をエタノールにより洗浄した後に、ヘキサンを添加して撹拌し、濾過して濾液を濃縮する第１工程と、得られた半固体状濃縮物に更にヘキサンを添加して撹拌し、濾過して濾液を濃縮する第２工程と、得られた油状濃縮物をヘキサンに溶解させ、静置して固体を析出させ、該析出物を濾取し、エタノールにて洗浄し、次いで乾燥させる第３工程とを備えていることを特徴とする、高純度９−シス−β−カロテン含有組成物の製法がある（特許文献３参照）。
【００２１】
【特許文献１】特開２００６−３０６８６６号公報
【特許文献２】特開２００６−１３１５１２号公報
【特許文献３】特開平１１−１８７８９４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
しかしながら、前記特許文献１及び特許文献２の技術においては、リガンドであるアディポネクチンそのものを増加させることを目的とする技術であって、アディポネクチンの受容体の発現増加を目的とする技術ではないものである。そのため、いくら血漿中のアディポネクチンを上昇させたとしても、標的臓器のＡｄｉｐｏＲ遺伝子の発現が低下したままであるため、アディポネクチン抵抗性の改善が十分にはなされないものである。
【００２３】
本発明においては、アディポネクチンの感受性を高めることを目的として、アディポネクチン受容体の発現を増加させるアディポネクチン受容体発現増加剤を得るということに解決しなければならない課題を有している。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
本発明者らは上記した課題を解決するために、従来の疫学的研究や臨床試験の研究報告からヒントを得て、９−シス−β−カロテン含有組成物に富むデュナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）属藻類から抽出した抽出物に、肝細胞におけるアディポネクチン受容体発現増加剤としての特異的な効果があることを見出し、本発明に至った。
【００２５】
要するに、上記した従来例の課題を解決する具体的手段として本発明に係るアディポネクチン受容体発現増加剤は、９−シス−β−カロテン含有組成物を含むことを最も主要な特徴とするものである。
【００２６】
また、この発明においては、前記９−シス−β−カロテン含有組成物は、デュナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）属藻類の抽出物から得られることを付加的な要件として含むものである。
【発明の効果】
【００２７】
本発明に係るアディポネクチン受容体発現増加剤は、９−シス−β−カロテン含有組成物を含むものであるため、アディポネクチンの感受性を高めることができ、アディポネクチン受容体の発現を増加させることができるという優れた効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
本発明に係るアディポネクチン受容体発現増加剤は、デュナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）属藻類の抽出物から得られる９−シス−β−カロテン含有組成物（９−ｃｉｓ−β−ｃａｒｏｔｅｎｅ−ｒｉｃｈ）を含むものである。このデュナリエラ属藻類（以下、単にデュナリエラという）としては、例えば、デュナリエラサリーナまたはデュナリエラバーダウィル等の藻類を用いることができる。
【実施例】
【００２９】
［実験１］
次に、本発明を具体的な実施例に基づいて説明する。この実験１においては、ヒト肝細胞由来細胞株として、理研細胞バンク（茨城県つくば市）より入手したＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞を、５％牛胎仔血清を含んだＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ培地（ＤＭＥ， Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＩ）にて、３７℃で５％炭酸ガス存在下に培養した。
【００３０】
デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物をテトラヒドロフランに溶解し、ＤＭＥ培地中に分散させた。各遺伝子の発現解析は、培養後、総ＲＮＡをＲＮＡ抽出キット（Ａｊｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， ＤＬ）を用いて精製し、ＲＴ−ＰＣＲ（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）法により２段階で半定量的に行った。
【００３１】
その結果を下記に示す。
１）ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞は、ＡｄｉｐｏＲ１，ＡｄｉｐｏＲ２のいずれのｍＲＮＡも 発現していたが、アディポネクチンｍＲＮＡの発現は検出されなかった。
２）図１に示したように、ＡｄｉｐｏＲ１ ｍＲＮＡの発現は、デュナリエラから抽出し た９−シス−β−カロテン含有組成物を添加後４８時間目に観察すると、デュナリエラ から抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物の濃度（５−４０μＭ β−ｃａｒｏ ｔｅｎｅ相当）依存的におよそ１５０％まで上昇した。
３）一方、１０μＭ β− ｃａｒｏｔｅｎｅ相当の濃度のデュナリエラから抽出した９ −シス−β−カロテン含有組成物をＤＭＥ培地に添加すると、図２に示したように、Ａ ｄｉｐｏＲ１ ｍＲＮＡの発現は時間（１２−７２時間）依存的におよそ１７２％まで 上昇した。
４）ＡｄｉｐｏＲ２ ｍＲＮＡの発現も、デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロ テン含有組成物の濃度（５−４０μＭ β−ｃａｒｏｔｅｎｅ相当）及び時間（１２− ７２時間）依存的に同程度上昇した。
【００３２】
［実験２］
この実験２においては、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞を、５％牛胎仔血清を含んだＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ培地（ＤＭＥ， Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＩ）にて、３７℃で５％炭酸ガス存在下に培養した。
【００３３】
デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物をテトラヒドロフランに溶解し、ＤＭＥ培地中に分散させた。各遺伝子の発現解析は、培養後、全細胞溶解液を、ＲＩＰＡ緩衝液を用いて作製し、抗アディポネクチン受容体１抗体（Ａｂｃａｍ，ＭＡ）を用いたＷｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ法により定量した。
【００３４】
その結果を下記に示す。
１）ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞は、デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有 組成物処理以前において、ＡｄｉｐｏＲ１蛋白を発現していた（図３）。
２）図３から明らかなように、デュナリエラ抽出物添加後４８時間目に観察すると、Ａｄ ｉｐｏＲ１蛋白の発現量は、デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有組 成物の濃度（２０−４０μＭ β−ｃａｒｏｔｅｎｅ相当）依存的におよそ２００％ま で上昇した。
【００３５】
これら実験１及び実験２の結果は、イスラエルのグループの臨床試験における「高脂血症治療薬とデュナリエラ等から抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物の併用により、脂質代謝が改善する（ＨＤＬコレステロールが増加する）」という観察のメカニズムをよく説明するものである。
【００３６】
カロテノイドの生体内における生理作用の中には、抗酸化物質としての作用と、レチノイドへの代謝的変換の後、遺伝子発現系の調節による生物作用が考えられている。今回の２つの実験例では、デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物の代謝産物が作用したか否かを確認することはできなかったが、細胞内ＡｄｉｐｏＲ１ ｍＲＮＡレベルを上昇させ、ＡｄｉｐｏＲ１蛋白量が増加したことから、デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物の添加がＡｄｉｐｏＲ１遺伝子の発現を促進したことは事実である。
【００３７】
アディポネクチンの作用を媒介するアディポネクチン受容体（ＡｄｉｐｏＲ１，ＡｄｉｐｏＲ２）の発現を観察すると、デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物の濃度に依存して、ＡｄｉｐｏＲ１の発現が処理時間と共に増加した。つまり、アディポネクチンが上昇しなくても、アディポネクチンの感受性が高まる可能性を示すことができたのである。
【００３８】
これらの実験結果は、デュナリエラ等から抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物がアディポネクチン受容体発現増加剤、すなわちアディポネクチンの感受性を高める物質（アディポネクチン抵抗性改善剤）として作用することを明示している。
【００３９】
したがって、デュナリエラ等から抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物は、「アディポネクチン抵抗性→インスリン抵抗性→アディポネクチン受容体低下→アディポネクチン抵抗性」の悪循環（＝メタボリックシンドローム）を断ち切る物質として、メタボリックシンドロームの発症・進展に対して予防・抑制的に作用することを意味している。
【００４０】
以上の結果から、９−シス−β−カロテン含有組成物は、肝細胞のＡｄｉｐｏＲ１の発現を増加させることによって、脂質代謝の改善を促進する可能性が考えられた。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞における９−シス−β−カロテン含有組成物に富むデュナリエラ抽出物によるアディポネクチン受容体１（ＡｄｉｐｏＲ１）遺伝子発現の濃度依存的増加作用（ｍＲＮＡレベル）
【図２】ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞における９−シス−β−カロテン含有組成物に富むデュナリエラ抽出物によるアディポネクチン受容体１（ＡｄｉｐｏＲ１）遺伝子発現の時間依存的増加作用（ｍＲＮＡレベル）
【図３】ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞における９−シス−β−カロテン含有組成物に富むデュナリエラ抽出物によるアディポネクチン受容体１（ＡｄｉｐｏＲ１）遺伝子発現の濃度依存的増加作用（蛋白レベル）
【技術分野】
【０００１】
本発明は、９−シス−β−カロテン含有組成物（９−ｃｉｓ−β−ｃａｒｏｔｅｎｅ−ｒｉｃｈ）の作用によって、アディポネクチンの感受性を高めるために、アディポネクチン受容体の発現を増加させることを目的とするアディポネクチン受容体発現増加剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
血中β−カロテン濃度と２型糖尿病、空腹時高血糖、空腹時インスリン濃度、耐糖能異常、インスリン抵抗性ならびにメタボリックシンドロームなどとの逆相関（すなわち、血清β−カロテン濃度が低いとき、これらの頻度が高くなる）が、最近の疫学調査により明らかにされている（Ｆｏｒｄ ＥＳ ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ． Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ ｎａｔｉｏｎａｌ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｓｕｒｖｅｙ． Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ５２：２３４６−２３５２， ２００３； Ｃｏｙｎｅ Ｔ ｅｔ ａｌ． Ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｓ： ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｏｆ ａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ ｓｔｕｄｙ ｉｎ Ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄ， Ａｕｓｔｒａｌｉａ． Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ， ８２：６８５−６９３， ２００５； Ｓｕｇｉｕｒａ Ｍ ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ｍｏｄｅｌ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ−ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎｄｅｘ ｉｓ ｉｎｖｅｒｓｅｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｅｒｕｍ ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｓ ｉｎ ｎｏｎ−ｄｉａｂｅｔｉｃ ｓｕｂｊｅｃｔｓ． Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ， １６：７１−７８， ２００６）。
【０００３】
また、β−カロテンを用いた臨床試験においては、最近、Ｈａｒａｔｓらのグループは、高脂血症の患者に９−ｃｉｓ−β−ｃａｒｏｔｅｎｅ−ｒｉｃｈの抽出物を脂質代謝改善薬であるｆｉｂｒａｔｅ（ＰＰＡＲアゴニスト）と併用すると、ｆｉｂｒａｔｅ単独よりも血中ＨＤＬコレステロール濃度が有意に高くなることを報告した（Ｓｈａｉｓｈ Ａ ｅｔ ａｌ． ９−ｃｉｓ ｂ−ｃａｒｏｔｅｎｅ−ｒｉｃｈ ｐｏｗｄｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｇａ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｂａｒｄａｗｉｌ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ Ｐｌａｓｍａ ＨＤＬ−ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｎ ｆｉｂｒａｔｅ−ｔｒｅａｔｅｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ． Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ， １８９：２１５−２２， ２００６）。
【０００４】
ところで、メタボリックシンドロームとは、「肥満」を基盤として「高血糖」、「高血圧」、「高脂血症」の３つの症状のうち、少なくともいずれか２つを併存させている状態をいうものである。
【０００５】
肥満の状態になると、脂肪組織の増大及び脂肪細胞の巨大化により、脂肪細胞からのアディポネクチンの分泌が減少し、筋肉や肝臓に対するアディポネクチンの作用が低下するようになる。
【０００６】
その結果、肝臓や筋肉はインスリンに対する感受性を低下させ、いわゆる「インスリン抵抗性」の状態になる。
【０００７】
その結果、高血糖状態が誘導されると共に、肝臓における脂質代謝が滞り、高脂血症や脂肪肝をもたらすと考えられている（山内敏和・門脇孝、抗糖尿病シグナル：アディポネクチンとアディポネクチン受容体．実験医学、２４巻（１０月号），２４５１−２４５７，２００６）。
【０００８】
肝臓に発現しているアディポネクチン受容体は、アディポネクチンが肝臓に対して糖質代謝や脂質代謝を改善する際に、そのシグナルを細胞内に伝える因子である。
【０００９】
したがって、アディポネクチンの肝臓への作用の改善をもたらすアディポネクチン受容体発現の増加は、「アディポネクチン抵抗性→インスリン抵抗性→アディポネクチン受容体低下→アディポネクチン抵抗性」の悪循環（＝メタボリックシンドローム）を断ち切る重要なステップとなるものである。
【００１０】
そのため、山内らの総説において、「アディポネクチン受容体発現増加剤、および高分子量アディポネクチン増加剤の同定は、新規の抗糖尿病薬、抗動脈硬化薬の開発の道を切り開くものと期待される。」と結ばれているものである。
【００１１】
このようなアディポネクチン受容体の発現を増加させる因子として、最近、絶食やダイエット、運動など多数報告されている。
【００１２】
筋肉や脳、脂肪細胞には主としてアディポネクチン受容体１（ＡｄｉｐｏＲ１）が発現し、肝臓にはアディポネクチン受容体１とアディポネクチン受容体２（ＡｄｉｐｏＲ２）が発現している。
【００１３】
これら２つの受容体は、一部異なった調節を受けることが知られているが、絶食や、運動では主としてアディポネクチン受容体２が発現増加することが解っている（Ｔｓｕｃｈｉｄａ Ａ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｓｕｌｉｎ／Ｆｏｘｏ１ ｐａｔｈｗａｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９：３０８１７−３０８２２， ２００４； Ｋｉｍ ＭＪ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｉｍｐａｉｒｅｄ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｔｏｌｅｒａｎｔ ｏｂｅｓｅ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ｄｕｒｉｎｇ ｗｅｉｇｈｔ ｌｏｓｓ． Ｅｕｒ Ｊ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １５５：１６１−１６５， ２００６； Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ ＭＳ ｅｔ ａｌ． Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ： ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｏｂｅｓｉｔｙ， ｗｅｉｇｈｔ ｌｏｓｓ， ａｎｄ ｆａｔ ｄｅｐｏｔｓ． Ｏｂｅｓｉｔｙ， １４：２８−３５， ２００６； Ｂｌｕｈｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ： ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ａｎｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｐｈｙｓｉｃａｌ ｔｒａｉｎｉｎｇ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ． ９１：２３１０−２３１６， ２００６）。
【００１４】
しかしながら、これらは被験者に持続的な努力や過度のストレスを課すものであり、また、これらを実施したとしても必ずしも全ての人に実現容易なものであるとは言い難いものである。
【００１５】
特定の化学物質で、アディポネクチン受容体の発現増加剤として報告されているものとしては、例えば、ＰＰＡＲγ作動薬であるトログリタゾン（ＡｄｉｐｏＲ１の発現増加剤）やロシグリタゾン（ＡｄｉｐｏＲ２の発現増加剤）がある。
【００１６】
これらの発現増加剤は、経口抗糖尿病薬として開発された薬剤であるが、一部に肝毒性が報告されており、メタボリックシンドロームのような前病状態の人に長期間予防的に用いるのにはリスクが大きすぎる（Ｎｅｕｍｅｉｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ． Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｂｙ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ． Ｂｉｏｃｈｅｍ ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ． ３３４：９２４−９２９， ２００５； Ｓｕｎ Ｘ ｅｔ ａｌ． Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｂｙ ｔｈｅ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−γ ａｇｏｎｉｓｔ ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ． Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ， ４９：１３０３−１３１０， ２００６）。
【００１７】
２００５年にＰＰＡＲα作動薬が肥満で低下したＡｄｉｐｏＲ１、ＡｄｉｐｏＲ２の発現量を回復させるという報告もあったが、その後ＰＰＡＲα作動薬のＡｄｉｐｏＲ発現増加作用は確認されず、ＰＰＡＲα作動薬の１つであるフェノフィブレートでは逆に抑制されるという報告もある。ＰＰＡＲα作動薬は脂質代謝の改善を介してＡｄｉｐｏＲ発現に間接的に作用している可能性がある。
【００１８】
これらＡｄｉｐｏＲの発現増加に関する技術以外の技術について、従来、この種のアディポネクチンの増加を目的とする技術としては、例えば、ドコサヘキサエン酸又はその誘導体を有効成分として含むアディポネクチン上昇剤（特許文献１参照）や、緑茶カテキンを有効成分として含有することを特徴とし、血漿中アディポネクチンを上昇させるアディポネクチン分泌促進組成物がある（特許文献２参照）。
【００１９】
このように、高血糖や２型糖尿病、高脂血症、メタボリックシンドロームに対して抑止的に作用することが期待されるものであって、アディポネクチン受容体遺伝子の発現を増加させる物質で、なおかつ長期間の摂取においても安全性が確保されているような物質の開発が要求されている。
【００２０】
また、９−シス−β−カロテン含有組成物に関する技術としては、例えば、デュナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）属藻類の乾燥粉末をエタノールにより洗浄した後に、ヘキサンを添加して撹拌し、濾過して濾液を濃縮する第１工程と、得られた半固体状濃縮物に更にヘキサンを添加して撹拌し、濾過して濾液を濃縮する第２工程と、得られた油状濃縮物をヘキサンに溶解させ、静置して固体を析出させ、該析出物を濾取し、エタノールにて洗浄し、次いで乾燥させる第３工程とを備えていることを特徴とする、高純度９−シス−β−カロテン含有組成物の製法がある（特許文献３参照）。
【００２１】
【特許文献１】特開２００６−３０６８６６号公報
【特許文献２】特開２００６−１３１５１２号公報
【特許文献３】特開平１１−１８７８９４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
しかしながら、前記特許文献１及び特許文献２の技術においては、リガンドであるアディポネクチンそのものを増加させることを目的とする技術であって、アディポネクチンの受容体の発現増加を目的とする技術ではないものである。そのため、いくら血漿中のアディポネクチンを上昇させたとしても、標的臓器のＡｄｉｐｏＲ遺伝子の発現が低下したままであるため、アディポネクチン抵抗性の改善が十分にはなされないものである。
【００２３】
本発明においては、アディポネクチンの感受性を高めることを目的として、アディポネクチン受容体の発現を増加させるアディポネクチン受容体発現増加剤を得るということに解決しなければならない課題を有している。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
本発明者らは上記した課題を解決するために、従来の疫学的研究や臨床試験の研究報告からヒントを得て、９−シス−β−カロテン含有組成物に富むデュナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）属藻類から抽出した抽出物に、肝細胞におけるアディポネクチン受容体発現増加剤としての特異的な効果があることを見出し、本発明に至った。
【００２５】
要するに、上記した従来例の課題を解決する具体的手段として本発明に係るアディポネクチン受容体発現増加剤は、９−シス−β−カロテン含有組成物を含むことを最も主要な特徴とするものである。
【００２６】
また、この発明においては、前記９−シス−β−カロテン含有組成物は、デュナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）属藻類の抽出物から得られることを付加的な要件として含むものである。
【発明の効果】
【００２７】
本発明に係るアディポネクチン受容体発現増加剤は、９−シス−β−カロテン含有組成物を含むものであるため、アディポネクチンの感受性を高めることができ、アディポネクチン受容体の発現を増加させることができるという優れた効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
本発明に係るアディポネクチン受容体発現増加剤は、デュナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）属藻類の抽出物から得られる９−シス−β−カロテン含有組成物（９−ｃｉｓ−β−ｃａｒｏｔｅｎｅ−ｒｉｃｈ）を含むものである。このデュナリエラ属藻類（以下、単にデュナリエラという）としては、例えば、デュナリエラサリーナまたはデュナリエラバーダウィル等の藻類を用いることができる。
【実施例】
【００２９】
［実験１］
次に、本発明を具体的な実施例に基づいて説明する。この実験１においては、ヒト肝細胞由来細胞株として、理研細胞バンク（茨城県つくば市）より入手したＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞を、５％牛胎仔血清を含んだＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ培地（ＤＭＥ， Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＩ）にて、３７℃で５％炭酸ガス存在下に培養した。
【００３０】
デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物をテトラヒドロフランに溶解し、ＤＭＥ培地中に分散させた。各遺伝子の発現解析は、培養後、総ＲＮＡをＲＮＡ抽出キット（Ａｊｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， ＤＬ）を用いて精製し、ＲＴ−ＰＣＲ（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）法により２段階で半定量的に行った。
【００３１】
その結果を下記に示す。
１）ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞は、ＡｄｉｐｏＲ１，ＡｄｉｐｏＲ２のいずれのｍＲＮＡも 発現していたが、アディポネクチンｍＲＮＡの発現は検出されなかった。
２）図１に示したように、ＡｄｉｐｏＲ１ ｍＲＮＡの発現は、デュナリエラから抽出し た９−シス−β−カロテン含有組成物を添加後４８時間目に観察すると、デュナリエラ から抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物の濃度（５−４０μＭ β−ｃａｒｏ ｔｅｎｅ相当）依存的におよそ１５０％まで上昇した。
３）一方、１０μＭ β− ｃａｒｏｔｅｎｅ相当の濃度のデュナリエラから抽出した９ −シス−β−カロテン含有組成物をＤＭＥ培地に添加すると、図２に示したように、Ａ ｄｉｐｏＲ１ ｍＲＮＡの発現は時間（１２−７２時間）依存的におよそ１７２％まで 上昇した。
４）ＡｄｉｐｏＲ２ ｍＲＮＡの発現も、デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロ テン含有組成物の濃度（５−４０μＭ β−ｃａｒｏｔｅｎｅ相当）及び時間（１２− ７２時間）依存的に同程度上昇した。
【００３２】
［実験２］
この実験２においては、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞を、５％牛胎仔血清を含んだＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ培地（ＤＭＥ， Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＩ）にて、３７℃で５％炭酸ガス存在下に培養した。
【００３３】
デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物をテトラヒドロフランに溶解し、ＤＭＥ培地中に分散させた。各遺伝子の発現解析は、培養後、全細胞溶解液を、ＲＩＰＡ緩衝液を用いて作製し、抗アディポネクチン受容体１抗体（Ａｂｃａｍ，ＭＡ）を用いたＷｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ法により定量した。
【００３４】
その結果を下記に示す。
１）ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞は、デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有 組成物処理以前において、ＡｄｉｐｏＲ１蛋白を発現していた（図３）。
２）図３から明らかなように、デュナリエラ抽出物添加後４８時間目に観察すると、Ａｄ ｉｐｏＲ１蛋白の発現量は、デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有組 成物の濃度（２０−４０μＭ β−ｃａｒｏｔｅｎｅ相当）依存的におよそ２００％ま で上昇した。
【００３５】
これら実験１及び実験２の結果は、イスラエルのグループの臨床試験における「高脂血症治療薬とデュナリエラ等から抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物の併用により、脂質代謝が改善する（ＨＤＬコレステロールが増加する）」という観察のメカニズムをよく説明するものである。
【００３６】
カロテノイドの生体内における生理作用の中には、抗酸化物質としての作用と、レチノイドへの代謝的変換の後、遺伝子発現系の調節による生物作用が考えられている。今回の２つの実験例では、デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物の代謝産物が作用したか否かを確認することはできなかったが、細胞内ＡｄｉｐｏＲ１ ｍＲＮＡレベルを上昇させ、ＡｄｉｐｏＲ１蛋白量が増加したことから、デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物の添加がＡｄｉｐｏＲ１遺伝子の発現を促進したことは事実である。
【００３７】
アディポネクチンの作用を媒介するアディポネクチン受容体（ＡｄｉｐｏＲ１，ＡｄｉｐｏＲ２）の発現を観察すると、デュナリエラから抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物の濃度に依存して、ＡｄｉｐｏＲ１の発現が処理時間と共に増加した。つまり、アディポネクチンが上昇しなくても、アディポネクチンの感受性が高まる可能性を示すことができたのである。
【００３８】
これらの実験結果は、デュナリエラ等から抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物がアディポネクチン受容体発現増加剤、すなわちアディポネクチンの感受性を高める物質（アディポネクチン抵抗性改善剤）として作用することを明示している。
【００３９】
したがって、デュナリエラ等から抽出した９−シス−β−カロテン含有組成物は、「アディポネクチン抵抗性→インスリン抵抗性→アディポネクチン受容体低下→アディポネクチン抵抗性」の悪循環（＝メタボリックシンドローム）を断ち切る物質として、メタボリックシンドロームの発症・進展に対して予防・抑制的に作用することを意味している。
【００４０】
以上の結果から、９−シス−β−カロテン含有組成物は、肝細胞のＡｄｉｐｏＲ１の発現を増加させることによって、脂質代謝の改善を促進する可能性が考えられた。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞における９−シス−β−カロテン含有組成物に富むデュナリエラ抽出物によるアディポネクチン受容体１（ＡｄｉｐｏＲ１）遺伝子発現の濃度依存的増加作用（ｍＲＮＡレベル）
【図２】ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞における９−シス−β−カロテン含有組成物に富むデュナリエラ抽出物によるアディポネクチン受容体１（ＡｄｉｐｏＲ１）遺伝子発現の時間依存的増加作用（ｍＲＮＡレベル）
【図３】ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞における９−シス−β−カロテン含有組成物に富むデュナリエラ抽出物によるアディポネクチン受容体１（ＡｄｉｐｏＲ１）遺伝子発現の濃度依存的増加作用（蛋白レベル）
【特許請求の範囲】
【請求項１】
９−シス−β−カロテン含有組成物を含むこと
を特徴とするアディポネクチン受容体発現増加剤。
【請求項２】
前記９−シス−β−カロテン含有組成物は、
デュナリエラ属藻類の抽出物から得られること
を特徴とする請求項１に記載のアディポネクチン受容体発現増加剤。
【請求項１】
９−シス−β−カロテン含有組成物を含むこと
を特徴とするアディポネクチン受容体発現増加剤。
【請求項２】
前記９−シス−β−カロテン含有組成物は、
デュナリエラ属藻類の抽出物から得られること
を特徴とする請求項１に記載のアディポネクチン受容体発現増加剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２００８−２２２５５５（Ｐ２００８−２２２５５５Ａ）
【公開日】平成２０年９月２５日（２００８．９．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５８４９８（Ｐ２００７−５８４９８）
【出願日】平成１９年３月８日（２００７．３．８）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り ２００６年１２月６日〜８日 日本分子生物学会主催の２００６フォーラム「分子生物学の未来」において文書をもって発表
【出願人】（５０５２２５１９７）長崎県公立大学法人 (31)
【出願人】（３９９１２７６０３）株式会社日健総本社 (19)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年９月２５日（２００８．９．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年３月８日（２００７．３．８）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り ２００６年１２月６日〜８日 日本分子生物学会主催の２００６フォーラム「分子生物学の未来」において文書をもって発表
【出願人】（５０５２２５１９７）長崎県公立大学法人 (31)
【出願人】（３９９１２７６０３）株式会社日健総本社 (19)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]