アミロイド関連疾患を処置するための組成物及びその使用方法
一つ以上のフェノール部分を有する化合物、その新規な誘導体、それを含有する組成物、およびアミロイド関連疾患の処置のためのそれらの使用が提供される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミロイド原繊維形成を予防するための化合物、それを含有する組成物、及びそれを使用する方法に関する。特に、本発明は、アミロイド関連疾患の処置のためのフェノールレッドの如き高分子芳香族化合物及びその新規な誘導体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミロイド物質沈着（これはまたアミロイド斑形成とも呼ばれる）は、アルツハイマー病、プリオンに関連した脳障害、ＩＩ型糖尿病、家族性アミロイドーシスおよび軽鎖アミロイドーシスを含む、関連性のない様々な病理学的状態の中心的な特徴である。
【０００３】
アミロイド物質は、直径が約８０Å〜１００Åである一定しない長さの堅い非分岐タンパク質性原繊維の密な網状構造から構成される。アミロイド原繊維は、その長軸が原繊維の長軸に直交する逆平行β−プリーツシートに配置されたポリペプチド鎖のコア構造を含有する［Ｂｏｔｈ他（１９９７）、Ｎａｔｕｒｅ、３８５：７８７〜９３；Ｇｌｅｎｎｅｒ（１９８０）、Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３０２：１２８３〜９２］。
【０００４】
約２０個のアミロイド原繊維タンパク質がこれまでにインビボで同定され、特異的な疾患と相関づけられている。これらのタンパク質は互いにアミノ酸配列相同性を全く有さないか又はほとんど有していないが、アミロイド原繊維のコア構造は本質的には同じである。アミロイド原繊維のこの共通するコア構造、およびアミロイド沈着物における共通物質の存在は、アミロイド物質の特定の形態を特徴づけるデータが、アミロイド物質の他の形態にもまた関係することがあり、従って、ＩＩ型糖尿病、アルツハイマー痴呆、またはプリオンに関連した脳障害などのアミロイド関連疾患に対する薬物を開発するための鋳型設計において具体化され得ることを示唆している。
【０００５】
さらに、アミロイド沈着物は、インビボでは不活性ではないようであり、むしろ、代謝回転の動的状態にあり、そして、原繊維の形成が停止される場合、退行することさえもあり得る［Ｇｉｌｌｍｏｒｅ他（１９９７）、Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．、９９：２４５〜５６］。
【０００６】
従って、アミロイドポリペプチド産生を阻害するか、またはアミロイドーシスを阻害するために設計された治療は、アミロイド関連疾患を処置するために有用であり得る。
【０００７】
アミロイドポリペプチド産生の阻害−アミロイドポリペプチドの産生の直接的な阻害が、例えば、ヒト小島アミロイドポリペプチドのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用によって達成され得る。インビトロでは、小島アミロイドポリペプチドのｍＲＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの添加またはアンチセンス相補的ＤＮＡの発現は、細胞のインスリンのｍＲＮＡ含有量およびタンパク質含有量を増大させており、これにより、この方法の潜在的な有効性が明らかにされている［Ｋｕｌｋａｒｎｉ他（１９９６）、Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．、１５１：３４１〜８；Ｎｏｖｉａｌｓ他（１９９８）、Ｐａｎｃｒｅａｓ、１７：１８２〜６］。しかしながら、そのようなアンチセンス分子のインビボ有効性を明らかにする実験結果は何ら明らかにされていない。
【０００８】
アミロイド原繊維の形成の阻害−小島アミロイドを含むアミロイドは、血清アミロイドＰ成分、アポリポタンパク質Ｅおよびパールカンなどの潜在的な安定化物質または保護物質を含有する。発達中のアミロイド原繊維に対するそれらの結合を阻止することにより、アミロイド形成タンパク質の特定部分に対して特異的な抗体による処置［Ｓｏｌｏｍｏｎ他（１９９７）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４：４１０９〜１２］が可能であるように、アミロイド形成を阻害することができる［Ｋａｈｎ他（１９９９）、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、４８：２４１〜５３］。
【０００９】
下記には、アミロイド構造を脱安定化する能力を有する薬物を操作するための現在の試みがまとめられている。
【００１０】
脱安定化化合物−ヘパリン硫酸がすべてのアミロイドの成分として同定されており、ヘパリン硫酸はまた、炎症に関連するアミロイド誘導のごく初期段階においても関係している。Ｋｉｓｉｌｅｖｓｋｙおよび共同研究者（Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．、１：１４３〜１４８、１９９５）は、ヘパリン硫酸が炎症関連のアミロイド前駆体およびアルツハイマー病（ＡＤ）のβ−ペプチドと相互作用することを妨害する低分子量のアニオン性のスルホネート化合物またはスルフェート化合物の使用を記載した。ヘパリン硫酸は、アミロイドタンパク質の折りたたみパターンに特徴的な増大したβ−シート構造を受け入れるために可溶性アミロイド前駆体（ＳＡＡ２）に特異的な影響を及ぼす。これらのアニオン性のスルホネート化合物またはスルフェート化合物は、電子顕微鏡写真によってモニターされたとき、ヘパリンにより加速されるＡβ原繊維形成を阻害することが示され、また、事前に形成された原繊維をインビトロで分解することができた。さらに、これらの化合物は、急性モデルおよび慢性モデルにおいてインビボで、マウスの脾臓での炎症関連のアミロイドの進行を実質的に停止させた。しかしながら、最も強力な化合物［すなわち、ポリ（ビニルスルホネート）］は急性毒性を示した。類似する毒性が、免疫グロブリン軽鎖アミロイドーシス（ＡＬ）患者においてアミロイド再吸収を誘導することが認められている別の化合物ＩＤＯＸ（アントラサイクリン ４’−ヨード−４’−デオキシドキソルビシン）に関して観測されている［Ｍｅｒｌｉｎｉ他（１９９５）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ］。
【００１１】
脱安定化抗体−抗β−アミロイドモノクローナル抗体が、インビトロでβ−アミロイド斑を脱凝集し、β−アミロイド斑の形成を予防することにおいて効果的であることが示されている（米国特許第５６８８５６１号）。しかしながら、そのような抗体のインビボでの有効性を明らかにする実験結果は何ら明らかにされていない。
【００１２】
小分子−アミロイドポリペプチドと結合し、かつタンパク質の本来の折りたたみを安定化させる小分子の使用の可能性が、トランスチレチン（ＴＴＲ）タンパク質の場合に試みられている［Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（１９９８）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９５：１２９６５〜１２９６０；Ｏｚａ（１９９９）、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、９：１〜６］。これまでに、チロキシンおよびフルフェナム酸などの分子が、アミロイド形成をもたらす立体配座変化を妨げることができることが明らかにされている。しかしながら、動物モデルにおけるこれらの化合物の使用は、未だ立証されておらず、また、これらのリガンドと結合することができる、ＴＴＲ以外のタンパク質が血液中に存在するために損なわれ得る。
【００１３】
抗酸化剤−別の提案された治療は、酸化ストレスを回避し、アミロイドタンパク質をその還元状態（すなわち、モノマーおよびダイマー）で維持するために抗酸化剤を摂取することであった。亜硫酸塩の使用は、ＴＴＲのより安定なモノマーをインビトロおよびインビボの両方でもたらすことが示されていた［Ａｌｔｌａｎｄ（１９９９）、Ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｔｉｃｓ、２：１８３〜１８８］。しかしながら、抗酸化作用の完全な特徴づけは依然として得られておらず、可能な治療法に関する結果の解釈は困難なままである。
【００１４】
脱安定化ペプチド−β−プリーツシートを破壊する合成ペプチド（「β−シート破壊剤」）を加えることにより、原繊維が解離し、アミロイドーシスが妨げられたという発見［Ｓｏｔｏ他（１９９８）、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、４：８２２〜８２６］は、臨床的観点から特に有望である。簡単に記載すると、５残基のペプチドにより、アミロイドβ−タンパク質の原繊維形成が阻害され、事前に形成された原繊維がインビトロで分解され、そして、細胞培養において原繊維により誘導されるニューロンの死が妨げられた。さらに、このβ−シート破壊剤ペプチドは、アミロイドβ−タンパク質の沈着をインビボで著しく減少させ、そしてアミロイドーシスのラット脳モデルにおいてアミロイド原繊維の形成を完全に阻止した。
【００１５】
緑茶抽出物−公開Ｎｏ．２００２００８６０６７及び２００２０１５１５０６を有する米国特許出願は、アミロイド疾患を処置するための緑茶抽出物の様々な成分の使用を教示する。これらの特許出願は、これらの成分がアミロイド原繊維形成を阻害することを教示するが、それらはこれらの緑茶成分にかかる活性を与える機構も共通の構造的特徴も教示できていない。
【００１６】
本発明者は、芳香族相互作用が、分子認識及び自己会合を指示する構造的かつ機能的要素として作用することによってアミロイド原繊維形成において重要な役割を果すことを以前に示した。
【００１７】
それゆえ、本発明を考えながら、かかる芳香族相互作用に関与しうる複数（例えば二つ以上）の芳香族部分を有する化合物がアミロイド原繊維形成の阻害剤として有効に作用しうることを想像した。
【００１８】
本発明を実施に移しているとき、本発明者は、アミロイド形成がフェノールレッド（ＰＲ）の如き高分子芳香族化合物によって強く阻害されうることを実際に明らかにし、それはアミロイド関連疾患の処置におけるこれらの化合物の使用を示唆する。
【発明の開示】
【００１９】
本発明の一つの側面によれば、アミロイド関連疾患の処置のために特定される薬剤の製造のための、下記一般式Ｉを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩またはそのプロドラッグの使用が提供される：
式中、Ｘ，Ｙ及びＺは各々独立して、炭素、酸素、硫黄、ＣＲ１１Ｒ１２またはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６からなる群から選択されるが、Ｘ，Ｙ及びＺの少なくとも一つは酸素または硫黄であり；
Ｒ１−Ｒ１６は各々独立して、水素、孤立電子対、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、フェニル、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール、ジヒドロキシフェノール、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、チオカルボキシ、カルボニル、オキソ、チオカルボニル、スルフィニル及びスルホニルからなる群から選択されるか、または不存在であるか、またはＲ１−Ｒ４の少なくとも二つ及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも二つは少なくとも一つの五員または六員芳香族、ヘテロ芳香族、脂環式またはヘテロ脂環式環を形成し；
Ｒ１−Ｒ４の少なくとも一つはヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｏ−カルボキシ及びＯ−チオカルボキシからなる群から選択され、及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも一つはフェノール、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールを含む。
【００２０】
以下に記載される本発明の好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｘは炭素であり、ＹはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６であり、Ｚは酸素である。
【００２１】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｒ９はオキソであり、Ｒ１０は不存在である。
【００２２】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｒ１３−Ｒ１６の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される。
【００２３】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｒ１及びＲ３の各々はヒドロキシである。
【００２４】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｒ１３−Ｒ１６の少なくとも一つはアルキルである。
【００２５】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｘは炭素であり、Ｙは酸素であり、Ｚは炭素または硫黄であり、Ｒ５及びＲ６の少なくとも一つはオキソである。
【００２６】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｒ９及びＲ１０の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される。
【００２７】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、上記化合物はフェノールレッド、ジメトキシフェノールレッド、メトキシフェノールレッド、ジアセトキシフェノールレッド、アセトキシフェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、カテキン、エピガロカテキンガラート、エピカテキンガラート、エピカテキン、エピガロカテキン、エリオジクチオール（ｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）、ケルセチン、プロシアニジン、ヒドロキシフェニル、トコフェロール及びブロモフェノールレッドからなる群から選択される。
【００２８】
本発明の別の側面によれば、包装材料と包装材料内に含有されるアミロイド関連疾患を処置するために特定される薬学的組成物を含む製品であって、薬学的組成物が有効成分としての上記化合物、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む製品が提供される。
【００２９】
本発明のさらに別の側面によれば、対象のアミロイド関連疾患を処置する方法であって、その必要性のある対象に治療的に有効な量の上記化合物を投与し、それによって対象のアミロイド関連疾患を処置することを含む方法が提供される。
【００３０】
以下に記載される本発明の好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、投与は４ｍｇ／ｋｇ体重／時を越えない化合物の濃度で実施される。
【００３１】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、投与は経口的に実施される。
【００３２】
本発明のさらに別の側面によれば、治療有効量の上記化合物及び薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物が提供される。
【００３３】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、薬学的組成物は抗アミロイド薬をさらに含む。
【００３４】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、抗アミロイド薬はアミロイド脱安定化抗体、アミロイド脱安定化ペプチド及び抗アミロイド小分子からなる群から選択される。
【００３５】
本発明のさらに別の側面によれば、下記一般式ＩＩを有する新規化合物、その薬学的に受容可能な塩又はそのプロドラッグが提供される：
式中、Ｑ１及びＱ２は各々独立して、酸素及び硫黄からなる群から選択され、
Ａ１及びＡ２は各々独立して、水素、アルキル、アリール、シクロアルキル及びカルボニルからなる群から選択され、
Ｑ１及びＱ２が各々水素であるとき、Ａ１及びＡ２の一方は水素であり、他方はアルキル、シクロアルキル、アリール及びカルボニルからなる群から選択され、好ましくはメチル又はアセチルである。
【００３６】
本発明は、アミロイド原繊維形成を予防するための組成物及びそれを使用する方法を提供することによって現在知られている構成の欠点を首尾よく対処する。
【００３７】
本明細書で使用される技術用語と科学用語はすべて、特に断らない限り、本発明の属する技術分野の当業者が共通して理解しているのと同じ意味を持っている。本明細書に記載されているのと類似の又は均等の方法と材料は本発明を実施又は試験するのに使用できるが、適切な方法と材料は以下に述べる。争いが生じた場合、定義を含めて本特許明細書が基準である。さらに、本明細書の材料、方法及び実施例は例示することだけを目的とし本発明を限定することを意図しない。
【００３８】
図面の説明
本明細書では本発明を単に例示し図面を参照して説明する。特に詳細に図面を参照して、示されている詳細が例示として本発明の好ましい実施態様を例示考察することだけを目的としており、本発明の原理や概念の側面の最も有用でかつ容易に理解される説明であると考えられるものを提供するために提示していることを強調するものである。この点について、本発明を基本的に理解するのに必要である以上に詳細に本発明の構造の詳細を示す試みはされていないが、図面について行う説明によって本発明のいくつもの形態を実際に具体化する方法は当業者には明らかになるであろう。
図１ａ−ｂはフェノールレッドの存在下でのｈＩＡＰＰコアアミロイド形成ペプチド（ｈＩＡＰＰ２２−２９及びｈＩＡＰＰ２０−２９）凝集の阻害を示すグラフである。１ｍＭペプチドはＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．２）及び４％ＤＭＳＯに溶解された。フェノールレッド阻害剤は同じ緩衝条件で１０ｍＭの最終濃度に溶解された。各試料について濁度は５６０ｎｍで連続的に測定された。図１ａ−ｈＩＡＰＰ２２−２９（ＮＦＧＡＩＬＳＳ）凝集。図１ｂ−コントロールとしてフェノールフタレインを用いたｈＩＡＰＰ２０−２９（ＳＮＮＦＧＡＩＬＳＳ）凝集。緩衝液及びフェノールレッドのバックグラウンド値は関連測定から引かれた。
図２ａ−ｂは円偏光二色性を使用して測定された、フェノールレッドの不存在（図２ａ）又は存在（図２ｂ）下のｈＩＡＰＰ１−３７ペプチドの二次構造変移を示すグラフである。ヒトｈＩＡＰＰ１−３７はＨＦＩＰに溶解され、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈され、４０μＭフェノールレッドのあり又はなしで４μＭの最終濃度及び１％ＨＦＩＰにされた。不溶解性ペプチドは遠心分離を使用して除去された。阻害剤の不存在（図２ａ）下では、ｈＩＡＰＰ１−３７は６時間内で無秩序なコイル立体構造からの変移を示し、この変移は２６時間内に最大値に達することに注意されたい。しかしながら、４０μＭフェノールレッド阻害剤の存在（図２ｂ）下では、βシート立体構造への変移の明らかな阻害がある（２１８ｎｍピーク）。
図３ａ−ｃはチオフラビンＴ蛍光アッセイによって測定された、ヒトＩＡＰＰ１−３７原繊維形成のフェノールレッドの効果を示すグラフである。図３ａ−ヒトＩＡＰＰ１−３７はＨＦＩＰに溶解され、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈され、４０μＭフェノールレッドのあり又はなしで４μＭの最終濃度及び１％ＨＦＩＰにされた。不溶解性ペプチドは遠心分離を使用して分離された。蛍光値は各試料に３μＭ Ｔｈｔを添加した後に測定された。約２０時間の遅延段階後、蛍光値はフェノールレッド阻害剤の存在下での一定の低いレベルとは対照的に阻害剤なしで有意に増大したことを注意されたい。図３ｂ−図３ａのようにフェノールレッドの段階的な濃度のみをより敏感な蛍光計とともに使用し、それは測定された試料における最大フェノールレッド量が４μＭを越えないように試料の希釈度を１０倍にすることを可能にした。示されるように用量依存阻害は２．５μＭの〜ＩＣ５０で明らかであった。図３ｃ−５日間のインキュベーション後の図３ｂの試料の終点蛍光を示す。
図４ａ−ｃはフェノールレッド及びフェノールフタレイン阻害剤の不存在又は存在下のｈＩＡＰＰ２２−２９，ｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチド、及びｈＩＡＰＰ１−３７の形態を示す顕微鏡写真である。ｈＩＡＰＰ２２−２９及びｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチドは図１ａ−ｃに記載されるように作られ、ｈＩＡＰＰ１−３７は図３ａ−ｃに記載されるように作られた。試料は酢酸ウラニルで１０μｌ試料を染色することに生成され、次いで８０ｋＶで操作するＪＥＯＬ １２００ＥＸ電子顕微鏡で観察された。全てのペプチドに対して明確な形態上の差異は明白であり、それはフェノールレッドによる原繊維形成の速動性阻害効果を示した。逆に、フェノールフタレイン分子による阻害効果は明白でなかった（図４ｂ）。
図５ａ−ｂはＴｈＴ蛍光アッセイによって測定された、緑茶ポリフェノールによるｈＩＡＰＰ原繊維形成の阻害を示すヒストグラムである。図５ａについての色コード：青色−４８時間、赤色３日間、黄色８日間、緑色１２日間。緑茶ポリフェノールの存在下での３日間のインキュベーション後の阻害効果の詳細な観察（図５ｂ）はガラート群について高い効力を示した。
図６はＴｈＴ蛍光アッセイによって測定された、ピロカテコールバイオレットによるｈＩＡＰＰ１−３７原繊維形成の阻害を明らかにする比較プロットを与える（四角は阻害剤の添加なしを示し、三角は４μＭピロカテコールの添加を示し、円は４０μＭピロカテコールバイオレットの添加を示す）。
図７は阻害剤フェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、ジアセトキシフェノールレッド（ＰＦ３）及びジメトキシフェノールレッド（ＰＦ４）の化学構造（２Ｄ）を与える。
図８ａ−ｂはチオフラビンＴ蛍光アッセイによって測定された、ＰＦ３及びＰＦ４によるｈＩＡＰＰ１−３７原繊維形成の阻害を示すヒストグラムである。試料はｈＩＡＰＰストック溶液の希釈直後に遠心分離されるか（図８ａ）又は遠心分離されないままであった（図８ｂ）。
図９はｈＩＡＰＰ１−３７の存在下でインキュベートされたＰＣ１２細胞についてフェノールレッドの用量依存救助的効果を示す棒グラフである。値は平均±ＳＤ（ｎ＝４）である。
図１０ａ−ｈはｈＩＡＰＰ凝集の存在下でインキュベートされた膵β細胞についてのＰＲの救助的効果を示す。βＴＣ−ｔｅｔ齧歯類β細胞はフェノールレッドあり又はなしの血清不含ＤＭＥＭにおいて４μＭ ｈＩＡＰＰ１−３７で２４時間インキュベートされた。ＭＴＴ還元は一晩インキュベーションした後に測定された。図１０ａはフェノールレッドあり又はなしのそれぞれの培地においてｈＩＡＰＰの不存在下でインキュベートされた細胞と比較した細胞生存性を示す。値は平均±ＳＤ（ｎ＝４），＊ｐ＝０．０３，＊＊ｐ＜０．００５。図１０ｂ−ｈは同じ条件下で顕微鏡カバースリップ上で増殖されたβ細胞のＳＥＭ分析を示す顕微鏡写真である。図１０ｂ−ｄはｈＩＡＰＰ単独の添加後の細胞を示す。これらの細胞は膜ブレブ形成及び崩壊を示す。図１０ｅ−ｆは増殖培地において４０μＭフェノールレッドの存在下でｈＩＡＰＰで処理された細胞を示す。図１０ｇ−ｈはｈＩＡＰＰで処理されていないコントロール細胞を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３９】
本発明は、例えば糖尿病の如きアミロイド関連疾患の処置に使用されることができる芳香族化合物に関する。
【００４０】
本発明の原理および操作は、図面および付随する説明を参照してより良く理解することができる。
【００４１】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳しく説明する前に、本発明は、その適用において、下記の説明に示すかまたは実施例に例証される細部に限定されないことを理解しなければならない。本発明は、他の実施形態が可能であり、または様々な方法で実践もしくは実施される。また、本明細書中で用いられる表現および用語は説明のためであり、限定的であると見なすべきでないことを理解しなければならない。
【００４２】
アミロイド原繊維形成を妨げるか、またはアミロイド物質を分解するための数多くの治療方法が従来技術に記載されている。しかしながら、現在の治療方法は、細胞毒性、非特異性および送達といった壁によって制限されている。
【００４３】
本発明者は、芳香族相互作用が分子認識及び自己会合を指示する構造的かつ機能的要素として作用することによってアミロイド原繊維形成において重要な役割を果すことを以前に示した［Ａｚｒｉｅｌ及びＧａｚｉｔ（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２７６：３４１５６−３４１６１；Ｇａｚｉｔ（２００２）ＦＡＳＥＢ Ｊ．１６：７７−８３］。結果として、芳香族ペプチドはアミロイド原繊維形成を阻害することが示された。
【００４４】
本発明を実施に移しているとき、本発明者は、アミロイド形成がフェノールレッド（ＰＲ）の如き芳香族化合物によって強く阻害されうることを明らかにし、それはアミロイド関連疾患の処置におけるこれらの化合物の使用を示唆する。
【００４５】
後述する実施例の節で示されるように、フェノールレッド及びその誘導体（例えばジアセトキシフェノールレッド及びジメトキシフェノールレッド）、緑茶ポリフェノール、及びピロカテコールバイオレットの如き本発明の芳香族化合物は多数の生化学的かつ微細構造形態分析によって測定されるようにアミロイドペプチド（ｈＩＡＰＰ２２−２９）の凝集を効果的に阻害した。これと一致して、膵β細胞に対するｈＩＡＰＰ１−３７原繊維細胞毒性における顕著な阻害はフェノールレッドの存在下で明らかであり（後述する実施例の節の実施例８−９参照）、本発明の芳香族化合物をＩＩ型糖尿病の如きアミロイド関連疾患を処置するための有望なツールにさせる。
【００４６】
従って、本発明は、対象のアミロイド関連疾患を処置する方法を提供する。
【００４７】
本発明による好ましい個体対象は、イヌ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、及びウシの如き哺乳類である。好ましくは本発明による個体対象はヒトである。
【００４８】
用語「処置する」は、アミロイド斑形成を減少させるか、もしくは予防すること、または、罹患組織における斑の出現を実質的に減少させることを示す。表現「アミロイド斑」は、原繊維アミロイド、ならびに、凝集したが、原繊維ではないアミロイド（以降、「プロト原繊維アミロイド」、これもまた病原性であり得る）を示す［Ａｎａｇｕｉａｎｏ他（２００２）、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、４１：１１３３８〜４３参照］。
【００４９】
本発明に従って処置されるアミロイド関連疾患には、ＩＩ型糖尿病、アルツハイマー病（ＡＤ）、早発型アルツハイマー病、遅発型アルツハイマー病、前徴アルツハイマー病、パーキンソン病、ＳＡＡアミロイドーシス、遺伝性アイスランド症候群、多発性骨髄腫、髄様ガン、大動脈の医学的ガン腫、インスリン注射アミロイドーシス、プリオン全身性アミロイドーシス、慢性炎症アミロイドーシス、ハンチントン病、老年性全身性アミロイドーシス、下垂体アミロイドーシス、遺伝性腎アミロイドーシス、家族性英国痴呆、フィンランド遺伝性アミロイドーシス、家族性非神経障害性アミロイドーシス［Ｇａｚｉｔ（２００２）、Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、９：１６６７〜１６７５］、そして、プリオン病（ヒツジおよびヤギのスクレイピー、ならびに、ウシ類のウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）を含む）［ＷｉｌｅｓｍｉｔｈおよびＷｅｌｌｓ（１９９１）、Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７２：２１〜３８］、そして、ヒトのプリオン病（これには、（ｉ）クールー、（ｉｉ）クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、（ｉｉｉ）ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病（ＧＳＳ）および（ｉｖ）致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）が含まれる）［Ｇａｊｄｕｓｅｋ（１９７７）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９７：９４３〜９６０；Ｍｅｄｏｒｉ、Ｔｒｉｔｓｃｈｌｅｒ他（１９９２）、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ、３２６：４４４〜４４９］が含まれるが、これらに限定されない。
【００５０】
本発明による方法は、その必要性のある対象に、治療的有効量の下記一般式Ｉを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩又はそのプロドラッグを投与することによって実施される：
式中、Ｘ，Ｙ及びＺは各々独立して、炭素、酸素、硫黄、ＣＲ１１Ｒ１２またはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６からなる群から選択されるが、Ｘ，Ｙ及びＺの少なくとも一つは酸素または硫黄であり；
Ｒ１−Ｒ１６は各々独立して、水素、孤立電子対、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、フェニル、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール、ジヒドロキシフェノール、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、チオカルボキシ、カルボニル、オキソ、チオカルボニル、スルフィニル及びスルホニルからなる群から選択されるか、または不存在であるか、またはＲ１−Ｒ４の少なくとも二つ及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも二つは少なくとも一つの五員または六員芳香族、ヘテロ芳香族、脂環式またはへテロ脂環式環を形成し；
Ｒ１−Ｒ４の少なくとも一つはヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｏ−カルボキシ及びＯ−チオカルボキシからなる群から選択され、及び／又は
Ｒ５−Ｒ１６の少なくとも一つはフェノール、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールを含む。
【００５１】
それゆえ本発明の化合物は少なくとも一つのフェノール部分（好ましくは少なくとも二つのフェノール部分）を含む。以下にさらに定義されるように、フェノール部分の各々は、好ましくは一つ以上のヒドロキシ基（従ってヒドロキシフェノール又はジヒドロキシフェノール）によって置換又は非置換されてもよい。フェノール部分の各々は以下に表わされるように、それ自体、即ちヒドロキシフェニル部分として、又はアルコキシル化又はカルボキシル化フェノール部分として、即ちアルコキシフェニル又はカルボキシフェニル部分として本発明の化合物内で存在させることができる。
【００５２】
本明細書中で使用される用語「アルキル」は、直鎖基および分枝鎖基を含む飽和した脂肪族炭化水素を示す。好ましくは、アルキル基は１個〜２０個の炭素原子を有する。数値範囲、例えば「１個〜２０個」が本明細書で述べられる場合は常に、それは基（この場合はアルキル基）が１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子などの２０個までの炭素原子を含むということを意味する。さらに好ましくは、アルキル基は、１個〜１０個の炭素原子を有する中程度のサイズのアルキルである。最も好ましくは、他に示さない限り、アルキル基は、１個〜４個の炭素原子を有する低級アルキルである。アルキル基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は以下で定義される）。
【００５３】
「シクロアルキル」基は、環の１つまたは複数が完全共役のπ電子系を有しない、すべて炭素からなる単環基または縮合環（すなわち、隣接炭素原子対を共有する環）基を示す。シクロアルキル基の非限定な例には、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキサジエン、シクロヘプタン、シクロヘプタトリエンおよびアダマンタンがある。シクロアルキル基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は以下で定義される）。
【００５４】
「ヒドロキシ」基は、−ＯＨ基を示す。
【００５５】
「アルケニル」基は、少なくとも２つの炭素原子と少なくとも１つの炭素−炭素二重結合からなる上で定義されたようなアルキル基を示す。
【００５６】
「アルキニル」基は、少なくとも２つの炭素原子と少なくとも１つの炭素−炭素三重結合からなる上で定義されたようなアルキル基を示す。
【００５７】
「アリール」基は、完全共役のπ電子系を有する、すべて炭素からなる単環基または縮合多環（すなわち、隣接炭素原子対を共有する環）基を示す。アリール基の非限定的な例には、フェニル、ナフタレニルおよびアントラセニルがある。アリール基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００５８】
本発明による置換されたアリールの好ましい例はフェノールである。
【００５９】
本明細書中で使用される用語「フェノール」は、ヒドロキシ基によって置換されたフェニルを示す。フェノール基は置換または非置換でありうる。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００６０】
本発明による置換されたフェノールの好ましい例はヒドロキシフェノールである。
【００６１】
本明細書中で使用される用語「ヒドロキシフェノール」は、用語「ジヒドロキシフェノール」も包含するが、上で定義されたようなフェノールを示し、それは一つ以上の追加のヒドロキシ基によってさらに置換される。追加のヒドロキシ基はフェノールのヒドロキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。ヒドロキシフェノールはさらに置換又は非置換であるうる。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００６２】
本発明による置換されたアリールの別の好ましい例は、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル及びチオアリールオキシフェニルを含む。
【００６３】
本明細書中で使用される用語「アルコキシフェニル」は、本明細書中で定義されるアルコキシ基によって置換されたフェニルを示す。アルコキシ基の代表例はメトキシである。
【００６４】
用語「チオアルコキシフェニル」は、本明細書中で定義されるチオアルコキシ基によって置換されたフェニルを示す。
【００６５】
用語「アリールオキシフェニル」は、本明細書中で定義されるアリールオキシ基によって置換されたフェニルを示す。
【００６６】
用語「チオアリールオキシフェニル」は、本明細書中で定義されるチオアリールオキシ基によって置換されたフェニルを示す。
【００６７】
アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル及びチオアリールオキシフェニル基の各々は、置換又は非置換でありうる。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００６８】
アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル及びチオアリールオキシフェニル基の好ましい置換基は、アルコキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ及び／又はチオアリールオキシ基を含み、従って好ましい置換されたアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル及びチオアリールオキシフェニルの例はジアルコキシフェニル、ジチオアルコキシフェニル、ジアリールオキシフェニル及びジチオアリールオキシフェニル、及び他の組み合わせを含む。
【００６９】
本明細書中で使用される用語「ジアルコキシフェニル」は、上で定義されたアルコキシフェニルを示し、それは一つ以上の追加のアルコキシ基によってさらに置換される。追加のアルコキシ基はアルコキシフェニルのアルコキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。
【００７０】
用語「ジチオアルコキシフェニル」は、上で定義されたチオアルコキシフェニルを示し、それは一つ以上の追加のチオアルコキシ基によってさらに置換される。追加のチオアルコキシ基はチオアルコキシフェニルのチオアルコキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。
【００７１】
用語「ジアリールオキシフェニル」は、上で定義されたアリールオキシフェニルを示し、それは一つ以上の追加のアリールオキシ基によってさらに置換される。追加のアリールオキシ基はアリールオキシフェニルのアリールオキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。
【００７２】
用語「ジチオアリールオキシフェニル」は、上で定義されたチオアリールオキシフェニルを示し、それは一つ以上の追加のチオアリールオキシ基によってさらに置換される。追加のチオアリールオキシ基はチオアリールオキシフェニルのチオアリールオキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。
【００７３】
ジアルコキシフェニル、ジチオアルコキシフェニル、ジアリールオキシフェニル及びジチオアリールオキシフェニルの各々は、さらに置換又は非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００７４】
本発明による置換されたアリールの別の好ましい例はカルボキシフェニル及びチオカルボキシフェニルを含む。
【００７５】
本明細書中で使用される用語「カルボキシフェニル」は、本明細書中で定義されたＯ−カルボキシ基によって置換されたフェニルを示す。Ｏ−カルボキシ基の代表例はＯ−アセトキシである。
【００７６】
用語「チオカルボキシフェニル」は、本明細書中で定義されたチオカルボキシ基によって置換されたフェニルを示す。
【００７７】
カルボキシフェニル及びチオカルボキシフェニルは置換又は非置換でありうる。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００７８】
好ましい置換基は追加のＯ−カルボキシ又はチオカルボキシ基を含み、従って好ましい置換されたカルボキシフェニル及びチオカルボキシフェニルの例はジカルボキシフェニル及びジチオカルボキシフェニルを含む。
【００７９】
本明細書中で使用される用語「ジカルボキシフェニル」は、上で定義されたカルボキフェニル、例えばアセトキシフェニルを示し、それは一つ以上の追加のカルボキシ基によってさらに置換される。追加のカルボキシ基はカルボキシフェニルのカルボキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。
【００８０】
用語「ジチオカルボキシフェニル」は、上で定義されたチオカルボキシフェニルを示し、それは一つ以上の追加のチオカルボキシ基によってさらに置換される。追加のチオカルボキシ基はチオカルボキシフェニルのチオカルボキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。
【００８１】
ジカルボキシフェニル及びジチオカルボキシフェニルの各々はさらは置換又は非置換でありうる。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００８２】
用語「ヘテロアリール」基は、例えば、窒素、酸素および硫黄などの１個または複数個の原子を環（１つまたは複数）に有し、さらには完全共役のπ電子系を有する単環基または縮合環（すなわち、隣接原子対を共有する環）基を示す。ヘテロアリール基の非限定的な例には、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリンおよびプリンが含まれる。ヘテロアリール基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００８３】
「ヘテロ脂環」基は、例えば、窒素、酸素および硫黄などの１個または複数個の原子を環（１つまたは複数）に有する単環基または縮合環基を示す。環はまた、１つまたは複数の二重結合を有することができる。しかしながら、環は完全共役のπ電子系を有しない。ヘテロ脂環基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。代表例はピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、モルフォリノなどである。
【００８４】
「ハロ」基は、フッ素、塩素、臭素又は沃素を示す。
【００８５】
「アルコキシ」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｏ−アルキル基および−Ｏ−シクロアルキル基の両方を示す。
【００８６】
「アリールオキシ」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｏ−アリール基および−Ｏ−ヘテロアリール基の両方を示す。
【００８７】
「チオヒドロキシ」基は−ＳＨ基を示す。
【００８８】
「チオアルコキシ」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｓ−アルキル基および−Ｓ−シクロアルキル基の両方を示す。
【００８９】
「チオアリールオキシ」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｓ−アリール基および−Ｓ−ヘテロアリール基の両方を示す。
【００９０】
「オキソ」基は、＝Ｏ基を示す。
【００９１】
「カルボニル」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ′基（式中、Ｒ′は、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、（環の炭素を通して結合された）ヘテロアリール、または（環の炭素を通して結合された）ヘテロ脂環である）を示す。
【００９２】
「チオカルボニル」基は−Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ′基（式中、Ｒ′は本明細書中で定義される通りである）を示す。
【００９３】
「Ｃ−カルボキシ」基は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ′基（式中、Ｒ′は本明細書中で定義される通りである）を示す。
【００９４】
「Ｏ−カルボキシ」基はＲ′′Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−基（式中、Ｒ′′は本明細書中で定義される通りである）を示す。
【００９５】
「チオカルボキシ」基はＲ′′Ｃ（＝Ｏ）−Ｓ−基（式中、Ｒ′′は本明細書中で定義される通りである）を示す。
【００９６】
「スルフィニル」基は−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ′′基（式中、Ｒ′′は本明細書中で定義される通りである）を示す。
【００９７】
「スルホニル」基は−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ′′基（式中、Ｒ′′は本明細書中で定義される通りである）を示す。
【００９８】
「トリハロメチル」基は−ＣＸ基（式中、Ｘは本明細書中で定義されるようなハロ基である）を示す。
【００９９】
「トリハロメタンスルホニル」基はＸ３ＣＳ（＝Ｏ）２−基（式中、Ｘは本明細書中で定義されるようなハロ基である）を示す。
【０１００】
「Ｓ−スルホンアミド」基は−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲ′Ｒ′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０１】
「Ｎ−スルホンアミド」基はＲ′Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲ′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０２】
「トリハロメタンスルホンアミド」基はＸ３ＣＳ（＝Ｏ）２ＮＲ′−基（式中、Ｒ′及びＸは各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０３】
「Ｏ−カルバミル」基は−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ′Ｒ′′−基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０４】
「Ｎ−カルバミル」基はＲ′′ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ′−基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０５】
「Ｏ−チオカルバミル」基は−ＯＣ（＝Ｓ）−ＮＲ′Ｒ′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０６】
「Ｎ−チオカルバミル」基はＲ′′ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ′−基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０７】
「アミノ」基は−ＮＲ′Ｒ′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０８】
「Ｃ−アミド」基は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ′Ｒ′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０９】
「Ｎ−アミド」基はＲ′Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ′′−基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１１０】
「尿素」基は−ＮＲ′Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ′′Ｒ′′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りであり、Ｒ′′′はＲ′またはＲ′′のいずれかとして定義される）を示す。
【０１１１】
「グアニジノ」基は−Ｒ′ＮＣ（＝Ｎ）−ＮＲ′′Ｒ′′′基（式中、Ｒ′，Ｒ′′及びＲ′′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１１２】
「グアニル」基はＲ′Ｒ′′ＮＣ（＝Ｎ）−基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１１３】
「ニトロ」基は−ＮＯ２基を示す。
【０１１４】
「シアノ」基は−Ｃ≡Ｎ基を示す。
【０１１５】
「アゾ」基は−Ｎ＝Ｎ基を示す。
【０１１６】
用語「ホスホニル」は−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ′）（ＯＲ′′）基を示し、式中、Ｒ′及びＲ′′は各々上述の通り定義される。
【０１１７】
用語「ホスフィニル」は−ＰＲ′Ｒ′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々上述の通り定義される）を示す。
【０１１８】
それゆえ本発明による好ましい化合物は、例えばフェノールレッド及びその類似体を含み、従って上の式においてＸは炭素であり、Ｙは酸素であり、Ｚは炭素又は硫黄であり、Ｒ５及びＲ６の少なくとも一つはオキソであり、この用語は上で定義された通りである。かかる化合物は、フェノールで縮合され、かつさらに一つ以上のフェノール又はフェニル基によって置換される複素環式環を含み、従って、Ｒ５−Ｒ１０の少なくとも一つは上で定義されたようなフェノール又はヒドロキシフェノールである。Ｒ５−Ｒ１０の少なくとも一つ、好ましくは二つがヒドロキシフェノールである、かかる化合物は例えばピロカテコールバイオレット及びその類似体を含む。
【０１１９】
Ｚが硫黄である、この範ちゅうの化合物は典型的にはフェノールレッド類似体であり、Ｚが炭素である化合物は典型的にはフェノールフタレイン類似体である。フェノールレッド、ピロカテコールバイオレット及びフェノールフタレインの化学構造は図７に示されている。
【０１２０】
本発明によるさらにより好ましい化合物は、Ｘが炭素であり、ＹがＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６であり、Ｚが酸素である上の式を有する化合物を含む。かかる化合物はそれゆえフェニルに縮合されたテトラヒドロピランを含む。
【０１２１】
この範ちゅうの化合物の好ましい例は例えばエピカテキン、エピガロカテキン、エピガロカテキンガラートなどのカテキンの類似体及び誘導体を含み、全ては上の式においてＲ１及びＲ３位置に二つのヒドロキシ基を含み、Ｒ１３−Ｒ１６位置の一つ以上にテトラヒドロピラン環に直接的又は間接的に結合されたヒドロキシフェノール又はジヒドロキシフェノール基を含む。
【０１２２】
以下の実施例の節で示されるように、追加のフェノール部分を含むカテキンガラートは、極めて可能性のある阻害剤であり、従って化合物中のフェニル部分の数の重要な役割を示すことが見出された。
【０１２３】
これらの化合物の追加の好ましい例は、Ｒ９がオキソであり、Ｒ１０が不存在である、フェニル縮合された酸化テトラヒドロピラン環を含む。
【０１２４】
この範ちゅうのさらに追加の好ましい化合物はトコフェロール及びその類似体を含み、それはＲ１３−Ｒ１６位置に一つ以上のアルキル基を含み、そのアルキル基は８個より多い炭素原子を有するアルキル及び／又は低級アルキル（例えばメチル）を含むことができる。
【０１２５】
さらに本発明によれば、上記化合物の各々はさらに、二量体の形態であることができる。かかる二量体の形態は上記式を有する二つの部分を含み、それらの間にＲ１−Ｒ１６を介して直接的又は間接的に結合されている。
【０１２６】
それゆえ本発明に従って使用されうる化合物の例は、限定されないが、フェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、カテキン、エピガロカテキンガラート、エピカテキンガラート、エピカテキン、エピガロカテキン、エリロジクチオール、ケルセチン、ピロシアニジン、ヒドロキシフェニル、トコフェロール、ブロモフェノールレッド、その類似体、その誘導体及びその組み合わせを含む。
【０１２７】
本発明による現在最も好ましい化合物はフェノールレッド、ピロカテコールバイオレット及びカテキンガラートファミリーの化合物（さらなる詳細について以下の実施例の節を参照）である。
【０１２８】
しかしながら、本発明に従って使用されることができる追加の好ましい化合物は上で掲載された化合物のモノ−、ジ−、トリ−及びテトラ−アルコキシ（例えばメトキシ）又はカルボキシ（例えばアセトキシ）誘導体を含む。かかる誘導体は、フェノール又はヒドロキシフェノール部分中の一つ以上のヒドロキシ基が例えばアルキル又はアシル基によって誘導体化され、アルコキシフェニル部分、ジアルコキシフェニル部分、カルボキシフェニル部分又はジカルボキシフェニル部分を生じる化合物を含むことを意味される。
【０１２９】
アルコキシフェニル部分、ジアルコキシフェニル部分、カルボキシフェニル部分又はジカルボキシフェニル部分、並びにその類似体（例えば、上で示したようにアリールオキシフェニル、チオアルコキシフェニルなど）による一つ以上のフェノール部分の置換を生じるヒドロキシ基のかかる誘導体化は極めて有利である。なぜならば、それは化合物の親水性を低下し、従って腸におけるそれらの吸収を増大するからである。
【０１３０】
業界で良く知られているように、親水性化合物は典型的には、ヒトの腸上皮の劣った透過性による相対的に低い吸収を特徴とする。これらの低い吸収パラメータのため、親水性化合物での処置は経口投与時に高い用量の投与を必要とする。従って、上記化合物の親水性の低下は特に腸におけるその増大した吸収を与え、その効果的な経口投与を可能にする。化合物の親水性をそれらの吸収時に低下する効果は、Ｃａｃｏ−２細胞及び平行人工膜透過アッセイ（ｐａｒａｌｌｅｌ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ（ＰＡＭＰＡ））を含む幾つかのモデルで明らかに示された。これらの研究は増大した疎水性が小さな有機化合物の透過性を有意に改良することを示した［Ａｎｏ（２００４）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．１２：２５７−２６４；Ａｎｏ（２００４）１２：２４９−２５５］。
【０１３１】
かかる誘導体の代表例は、限定されないが、フェノールレッドにおける一つのフェノール部分がそれぞれメトキシフェニル又はアセトキシフェニル部分によって置換されるメトキシフェノールレッド及びアセトキシフェノールレッド、フェノールレッドにおける二つのフェノール部分がそれぞれ二つのメトキシフェニル又はアセトキシフェニル部分によって置換されるジメトキシフェノールレッド（明細書中でＰＦ４としても言及される）及びジアセトキシフェノールレッド（明細書中でＰＦ３としても言及される）を含む。ＰＦ３及びＰＦ４の化学構造は図７に与えられる。
【０１３２】
フェノールレッドのモノ誘導体、即ちメトキシフェノールレッド及びアセトキシフェノールレッド及びその類似体は特に重要である。これらのモノ誘導体は、上で詳述したように、（ｉ）ヒドロキシ基の存在による増大した阻害活性；（ｉｉ）その部分的な親水性による増大した経口生物学的利用率；及び（ｉｉｉ）その部分的な疎水性による増大した吸収率を同時に与える。
【０１３３】
化合物の阻害活性に対するヒドロキシ基の効果は、以下の実施例の節において示されている（例えば実施例５参照）。経口生物学的利用率に対する化合物の親水性の効果は、業界で良く知られており、例えばＨｉｔｅ他（２００３）Ｐａｒｔ １．Ｏｒａｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｐｏｏｒｌｙ Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｄｒｕｇｓ．ＰＭＰＳ Ｓｕｍｍｅｒ ｐｐ：３８−４０に示されている。
【０１３４】
従って、本発明のフェノールレッドモノ誘導体は、増大した阻害活性、増大した経口生物学的利用率及び増大した吸収率を組み合わせることによって極めて有利である。
【０１３５】
二つのヒドロキシ基がアルキル又はアシル基によって誘導体化される幾つかのフェノールレッド誘導体は知られているが、これらの化合物はアミロイド原繊維形成を阻害するために今まで使用されていなかった。さらに、上述のフェノールレッドのモノ誘導体の選択的合成はこれまで実施されてこなかった。
【０１３６】
従って、本発明の別の側面によれば、以下のような一般式ＩＩを有する新規なフェノールレッド誘導体が提供される：
式中、Ｑ１及びＱ２は各々独立して、酸素及び硫黄からなる群から選択され；
Ａ１及びＡ２は各々独立して、水素、アルキル、アリール、シクロアルキル及びカルボニルからなる群から選択され、
Ｑ１及びＱ２が各々酸素であるとき、Ａ１及びＡ２の一方は水素であり、他方はアルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択される。
【０１３７】
それゆえ、これらのフェノールレッド誘導体は例えば、Ｑ１及びＱ２が各々酸素であり、Ａ１及びＡ２の一方が水素であり、他方がアルキル、好ましくはメチルであるメトキシフェノールレッド、及びＱ１及びＱ２が各々酸素であり、Ａ１及びＡ２の一方が水素であり、他方がカルボニル、好ましくはアセチル（Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３基）であるアセトキシフェノールレッドを含む。
【０１３８】
上記化合物は、そのまま又はその薬学的に受容可能な塩又はプロドラッグとして投与されることができるか又は本発明のこの及び他の側面に利用されることができる。
【０１３９】
用語「プロドラッグ」は、インビボで活性化合物（活性親ドラッグ）に変換される薬剤を示す。プロドラッグは典型的には、親ドラッグの投与を容易にするために有用である。それらは例えば経口投与によって生物学的利用可能であればよく、親ドラッグはそうでなくてもよい。プロドラッグはまた、薬学的組成物において親ドラッグと比較して改良された溶解性を有してもよい。プロドラッグはまた、インビボでの活性化合物の徐放性を達成するために使用されることが多い。プロドラッグの限定されない例は一つ以上のフェノール部分を有する本発明の化合物であり、それはエステル（「プロドラッグ」）として投与される。かかるプロドラッグはインビボで加水分解され、それによって遊離化合物（親ドラッグ）を与える。選択されたエステルはプロドラッグの加水分解速度と溶解性の両方に影響を与えうる。
【０１４０】
語句「薬学的に受容可能な塩」は、親化合物の電荷を有する種及びその対イオンを示し、それは典型的には投与された化合物の生物学的活性及び特性をなくさずに、親化合物の溶解性を変更したり及び／又は親化合物による生物体に対する有意な刺激を減らすために使用される。薬学的に受容可能な塩の限定されない例は、アンモニウム、ナトリウム、カリウムなどのフェノールアニオン及びカチオンであるだろう。
【０１４１】
上記化合物はさらに、水和物として、即ち化合物と水分子の間で形成される変化可能な化学量論（例えば、ジ−、トリ−、テトラ−、ペンタ−、ヘキサ−など）の錯体として利用または投与されることができる。
【０１４２】
好ましくは、本発明の化合物は４ｍｇ／ｋｇ×ｈｒを越えない濃度で投与される。
【０１４３】
本発明の化合物は、そのものとして、または、薬学的に受容可能なキャリアと混合される薬学的組成物の一部として個体に与えることができる。
【０１４４】
本明細書で使用する「薬学的（医薬）組成物」は、本明細書に記載される活性成分の１つまたは複数と、他の化学成分（例えば生理学的に適切なキャリアおよび賦形剤）との製剤を指す。薬学的組成物の目的は処置される対象への化合物の投与を容易にすることである。
【０１４５】
本明細書において「活性成分（有効成分）」という用語は、生物学的効果を説明できる化合物を指す。
【０１４６】
以下、交互に用いられる「生理学的に受容可能なキャリア」および「薬学的に受容可能なキャリア」という用語は、対象に対して著しい刺激の原因にならず、かつ投与される化合物の生物学的活性および特性を抑止しないキャリアまたは希釈剤を指す。本発明の薬学的組成物の好ましいキャリアは、限定されないが、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、有機媒体および水性媒体の両方で広範囲の可溶性を有する生物適合ポリマーを含む［Ｍｕｔｔｅｒ他（１９７９）］。
【０１４７】
本明細書において「賦形剤」という用語は、活性成分の投与をさらに容易にするために薬学的組成物に添加される不活性物質を指す。賦形剤の例には炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖類、様々なタイプのデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコールなどがあるが、これらに限定されない。
【０１４８】
薬物の製剤および投与に関する技術は「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（ペンシルバニア州イーストン）の最新版に見いだすことができ、それは参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４９】
適当な投与経路としては、例えば経口送達、直腸送達、経粘膜送達、特に経鼻腔送達、腸管送達または腸管外送達（筋肉内注射、皮下注射、および骨髄内注射、ならびに髄腔内注射、直接脳室内注射、静脈内注射、腹腔内注射、鼻腔内注入、または眼内注射を含む）などを挙げることができる。
【０１５０】
あるいは、全身的な方法よりもむしろ、例えば患者の身体の特定の領域に直接製剤を注射する局所的な方法で製剤を投与してもよい。
【０１５１】
本発明の薬学的組成物は当技術分野で周知の方法により、例えば通常の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、研和、乳化、カプセル化、捕捉または凍結乾燥法などを利用して製造することができる。
【０１５２】
本発明に従って使用される薬学的組成物は、活性成分を薬学的に使用できる製剤に加工しやすくする賦形剤および補助剤を含む１つまたは複数の生理学的に受容可能なキャリアを使って、常法により製剤化することができる。適切な製剤は選択した投与経路に依存する。
【０１５３】
注射の場合は、水性溶液（好ましくはハンクス液、リンゲル液または生理食塩水緩衝液などの生体適合緩衝液）に、本発明の活性成分を製剤化することができる。経粘膜投与の場合は、浸透される壁に適切な浸透剤を製剤中に添加する。そのような浸透剤は当技術分野では広く知られている。
【０１５４】
経口投与の場合は、活性化合物を当技術分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアと混合することにより、化合物を容易に製剤化することができる。かかるキャリアを使用することにより、本発明の化合物を、患者による経口摂取用の錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁剤などとして製剤化することができる。経口用医薬品は固形の賦形剤を使用し、随意に、得られた混合物を粉砕し、所望により適当な補助剤を添加してから、顆粒の混合物を加工して、錠剤または糖衣錠の核錠を得ることによって、製造することができる。適切な賦形剤には、充填剤、例えば乳糖、ショ糖、マンニトールまたはソルビトールを含む糖類、セルロース調製物、例えばトウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、バレイショデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの生理的に受容可能なポリマーがある。所望により、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはその塩（例えばアルギン酸ナトリウム）などの崩壊剤を添加してもよい。
【０１５５】
糖衣錠の核錠には適当なコーティングが施される。この目的には濃厚な糖溶液を使用することができ、その糖溶液は、所望により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液、および適当な有機溶媒または溶媒混合物を含むことができる。識別のためまたは活性化合物用量の様々な組合わせを特徴づけるために、錠剤または糖衣錠剤皮に染料または顔料を加えてもよい。
【０１５６】
経口使用が可能な薬学的組成物には、ゼラチン製の押込み式カプセル剤ならびにゼラチンと可塑剤（グリセロールまたはソルビトールなど）とでできた軟密封カプセル剤が含まれる。押込み式カプセル剤は、乳糖などの充填剤、デンプンなどの結合剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、および所望により安定剤と混合した活性成分を含むことができる。軟カプセル剤の場合は、活性効成分を適当な液体（脂肪油、液体パラフィンまたは液体ポリエチレングリコールなど）に溶解または懸濁することができる。さらに安定剤を加えてもよい。経口投与用製剤は全て、選択した投与経路に適した投与量でなければならない。
【０１５７】
経口腔粘膜投与の場合、本組成物は常法によって製剤化された錠剤または口中錠の形態をとることができる。
【０１５８】
鼻腔吸入による投与の場合、本発明に従って使用するための活性成分は、適当な噴射剤（例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、または二酸化炭素）を使って、加圧容器または噴霧器から、エアロゾルスプレーの形で便利に送達される。加圧エアロゾルの場合、投与量単位は、バルブを設けて、計量した量を送達することによって、決定することができる。本化合物と適当な粉末基剤（乳糖またはデンプンなど）との粉末混合物を含む、ディスペンサーに使用するための（例えばゼラチン製）カプセルおよびカートリッジを処方することもできる。
【０１５９】
本明細書に記載の製剤は、例えばボーラス注射または持続注入などによる非経口投与用に製剤化することもできる。注射用製剤は、例えばアンプルなどに一回量型として、または多用量容器に入れて、所望により保存剤を添加して提供することができる。本組成物は油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルションであることができ、懸濁化剤、安定剤および／または分散剤などの調剤用薬剤を含んでもよい。
【０１６０】
非経口投与用の薬学的組成物として、水溶性活性製剤の水溶液が挙げられる。さらに、活性成分の懸濁液を適当な油性または水性注射懸濁液として調製することもできる。適切な親油性の溶媒またはビヒクルには、ゴマ油などの脂肪油、オレイン酸エチルなどの合成脂肪酸エステル、トリグリセリドまたはリポソームなどがある。水溶性注射懸濁剤は、懸濁液の粘度を増加させる物質、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールまたはデキストランなどを含んでもよい。所望により、懸濁剤は、高濃度溶液の調製物を得ることができるように、活性成分の溶解度を増加させる適当な安定化剤または化合物をさらに含んでもよい。
【０１６１】
あるいは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル（例えば滅菌パイロジェンフリー水に基づく溶液）で構成させる粉末の形態をとってもよい。
【０１６２】
本発明の製剤は、例えば通常の坐剤用基剤（カカオ脂または他のグリセリドなど）を使って、坐剤または停留浣腸剤などの直腸用組成物に製剤化することもできる。
【０１６３】
本発明で使用するのに好適な薬学的組成物は、活性成分が意図した目的を達成するのに有効な量で含まれる組成物を含む。より具体的には、治療有効量とは、病気の症状を予防、緩和または改善するのに有効な、あるいは処置される対象の生存を延長させるのに有効な活性成分の量を意味する。
【０１６４】
治療有効量の決定は当業者の能力の範囲内でよい。
【０１６５】
本発明の方法において使用される製剤に関して、治療有効量または用量は、まずインビトロアッセイによって推定することができる。例えば、用量を、動物モデルで策定することができ、そのような情報を使って、ヒトで有効な用量をより正確に決定することができる。
【０１６６】
本明細書に記載する活性成分の毒性および治療効力は、標準的なインビトロ薬学的手法により、細胞培養または実験動物で決定することができる。これらのインビトロ、細胞培養アッセイおよび動物実験で得られたデータは、ヒトに使用する用量範囲の策定に利用することができる。投与量は、利用する投与経路及び使用する投与形態に依存して変動しうる。個々の医師は患者の状態を考慮して正確な処方、投与経路および投与量を選択することができる（例えば「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」（１９７５）第１章、第１頁のＦｉｎｇｌ他の記事を参照されたい）。
【０１６７】
処置すべき状態の重症度および反応性に応じて、投与は単回投与または複数回投与とすることができる。この場合、処置は数日〜数週間または治癒が達成されるかもしくは疾患状態の軽減が達成されるまで持続する。
【０１６８】
投与すべき組成物の量は、当然ながら、処置対象、病気の重症度、投与方法、処方医の判断などに依存するだろう。
【０１６９】
また、適合する医薬キャリア中に調剤された本発明の製剤を含む組成物を製造し、適当な容器に入れ、表示された状態の処置に関する表示を与えることができる。
【０１７０】
本発明の組成物は、所望により、活性成分を含む１つまたは複数の単位剤形を含有するパックまたはディスペンサー装置、例えばＦＤＡ認可キットとして提供することができる。パックは、例えば、ブリスターパックのように金属箔またはプラスチック箔からなってもよい。パックまたはディスペンサー装置には、投与上の注意を添付してもよい。パックまたはディスペンサーには、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって指定された形式で容器に添付された、組成物の形状またはヒトもしくは動物への投与に関する当局の認可を示す通知を載せてもよい。そのような通知は、例えば処方薬に関して米国食品医薬品局によって許可されたラベリング、または許可された添付書類であることができる。
【０１７１】
本発明に従ったアミロイド関連疾患の処置は業界で知られた他の処置方法と組み合わせてもよいことは認識されるだろう（即ち、組み合わせ処置）。従って、本発明の化合物は追加の抗アミロイド薬と共に（同時に又は別個に）投与されてもよい。かかる抗アミロイド薬の例は、限定されないが、アミロイド脱安定化抗体、アミロイド脱安定化ペプチド及び抗アミロイド小分子（かかる薬剤のさらなる詳細は前述の背景技術で与えられる）を含む。
【０１７２】
本発明の追加の目的、利点及び新規な特徴は、下記実施例を考察すれば、当業技術者には明らかになるであろう。なおこれら実施例は本発明を限定するものではない。さらに、先に詳述されかつ本願の特許請求の範囲の項に特許請求されている本発明の各種実施態様及び側面の各々は下記実施例の実験によって支持されている。
【実施例】
【０１７３】
上記説明とともに、以下の実施例を参照して本発明を例示する。なおこれら実施例によって本発明は限定されない。
【０１７４】
本明細書で使用される用語と本発明で利用される実験方法には、分子、生化学、微生物学及び組み換えＤＮＡの技法が広く含まれている。これらの技法は文献に詳細に説明されている［例えば以下の諸文献を参照されたい。「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」Ｓａｍｂｒｏｏｋら１９８９年；Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｒ．Ｍ．編１９９４年「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｉ〜ＩＩＩ巻；Ａｕｓｕｂｅｌら著１９８９年「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，米国メリーランド州バルチモア；Ｐｅｒｂａｌ著「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，米国ニューヨーク１９８８年；Ｗａｔｓｏｎら、「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ」Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ、米国ニューヨーク；Ｂｉｒｒｅｎら編「Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ」１〜４巻、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、米国ニューヨーク１９９８年；米国特許の４６６６８２８号、４６８３２０２号、４８０１５３１号、５１９２６５９号及び５２７２０５７号に記載される方法；Ｃｅｌｌｉｓ， Ｊ．Ｅ．編「Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」Ｉ〜ＩＩＩ巻１９９４年；Ｃｏｌｉｇａｎ， Ｊ．Ｅ．編「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」Ｉ〜ＩＩＩ巻１９９４年；Ｓｔｉｔｅｓら編「Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（第８版）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ、米国コネティカット州ノーウォーク１９９４年；ＭｉｓｈｅｌｌとＳｈｉｉｇｉ編「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．、米国ニューヨーク１９８０年；また利用可能な免疫検定法は、例えば以下の特許と科学文献に広範囲にわたって記載されている。米国特許の３７９１９３２号、３８３９１５３号、３８５０７５２号、３８５０５７８号、３８５３９８７号、３８６７５１７号、３８７９２６２号、３９０１６５４号、３９３５０７４号、３９８４５３３号、３９９６３４５号、４０３４０７４号、４０９８８７６号、４８７９２１９号、５０１１７７１号及び５２８１５２１号；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．編「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」１９８４年；Ｈａｍｅｓ， Ｂ．Ｄ．及びＨｉｇｇｉｎｓ Ｓ．Ｊ．編「Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」１９８５年；Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．及びＨｉｇｇｉｎｓ Ｓ．Ｊ．編「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」１９８４年；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ， Ｒ．Ｉ．編「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」１９８６年；「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ」ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ １９８６年；Ｐｅｒｂａｌ， Ｂ．著「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」１９８４年及び「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」１〜３１７巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；「ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、米国カリフォルニア州サンディエゴ１９９０年；Ｍａｒｓｈａｋら、「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ−Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ」、ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ、１９９６年；なおこれらの文献類は、あたかも本願に完全に記載されているように援用するものである］。その外の一般的な文献は、本明細書を通じて提供される。本明細書に記載の方法は当業技術界で周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。本明細書に含まれるすべての情報は本願に援用するものである。
【０１７５】
材料および方法
ペプチド合成：
固相法を使用するペプチド合成を、ｈＩＡＰＰ２２−２９（配列番号１）およびｈＩＡＰＰ２０−２９（配列番号２）に対してＰｅｐｔｒｏｎ，Ｉｎｃ（Ｔａｅｊｅｏｎ、韓国）によって、ｈＩＡＰＰ１−３７（配列番号３）に対してＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ（ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ ＣＡ、米国）によって行なった。ペプチドの正体はイオンスプレー質量分析法によって確認され、ペプチドの純度は逆相高圧液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によって確認された。ｈＩＡＰＰ２２−２９およびｈＩＡＰＰ２０−２９に対するストック溶液は、５０ｍＭの濃度でＭｅ２ＳＯ（ＤＭＳＯ）にペプチドの凍結乾燥形態を溶解することによって調製された。ｈＩＡＰＰ１−３７のストック溶液は、４００μＭの濃度で３，３，３，３′，３′，３′−ヘキサフルオロ−２−プロパノール（ＨＦＩＰ）にペプチドの凍結乾燥された形態を溶解することによって調製された。いかなる事前の凝集も避けるためにストック溶液は各実験前に２分間超音波処理された。
【０１７６】
材料−フェノールレッドはＳｉｇｍａ（Ｒｅｈｏｖｏｔ、イスラエル）から購入された。ピロカテコールバイオレットはＲｉｅｄｅｌ−ｄｅ Ｈａｅｅｎ（Ｓｅｅｌｚｅ、ドイツ）から購入された。ジアセトキシフェノールレッド（ＰＦ３）およびジメトキシフェノールレッド（ＰＦ４）はＴＡＭＩ ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｌｔｄ．（Ｈａｉｆａ、イスラエル）によって合成され、エピガロカテキンガラート、ガロカテキンガラート、ガロカテキン、エピガロカテキン、カテキンおよびコンゴーレッドはＳＩＧＭＡ（Ｒｅｈｏｖｏｔ、イスラエル）から購入され、エピカテキンガラートおよびエピカテキンはＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓから購入された。
【０１７７】
速動性凝集アッセイ：
ｈＩＡＰＰ２２−２９およびｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチドのストック溶液は、凍結乾燥されたペプチドを１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．２）緩衝液に希釈して１ｍＭペプチドおよび４％ＤＭＳＯの最終濃度にすることによって調製された。濁度データは室温で４０５または５６０ｎｍで収集された。試験された試料と同じ量のＤＭＳＯを含有する緩衝溶液はブランクとして使用された。濁度は使い捨てＵＶｅｔｔｅキュベット（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、ドイツ）およびＳｃｉｎｃｏ Ｓ−３１００分光光度計を使用して測定された。
【０１７８】
チオフラビンＴ蛍光アッセイ：
ｈＩＡＰＰ１−３７の原繊維化はチオフラビンＴ色素結合アッセイによってモニターされた。ｈＩＡＰＰ１−３７ストック溶液は阻害剤ありまたはなしで１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）において４μＭの最終濃度に、そして１％（ｖｏｌ）の最終ＨＦＩＰ濃度に希釈された。希釈直後、試料を４℃で２００００ｇで２０分間遠心分離し、上澄み画分を蛍光測定のために使用した。各測定ごとに、ＴｈＴを添加して３μＭの最終濃度にし、測定をＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（励起４５０ｎｍ，２．５ｎｍスリット；発光４８０ｎｍ，１０ｎｍスリット）を使用して実施した。フェノールレッド濃度依存阻害実験に対して、試料を、最大フェノールレッド濃度が４μＭを越えないように１０倍希釈し、Ｊｏｂｉｎ Ｙｖｏｎ Ｈｏｒｉｂａ Ｆｌｕｏｒｏｍａｘ ３蛍光計（励起４５０ｎｍ，２．５ｎｍスリット；発光４８２ｎｍ，５ｎｍスリット）を使用して測定した。バックグラウンドは全ての試料から差し引かれた。
【０１７９】
円偏光二色性分光分析：
二次構造形成を追及するために、ｈＩＡＰＰ１−３７（４μＭ）を、阻害剤（４０μＭ）ありまたはなしで上述のように調製した。スペクトルは、ＡＶＩＶ ２０２ ＣＤ分光計を使用して、１ｎｍ間隔および４秒平均化時間で、２００−２５０ｎｍで２５℃で記録された。最終走査値はベースラインの減算を表わし（ｈＩＡＰＰの場合の緩衝液、及び阻害アッセイについてはフェノールレッドを有する緩衝液）、ＡＶＩＶ ＣＤＳ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．７３ソフトウェアを使用して平滑化した。
【０１８０】
透過電子顕微鏡観察：
凝集アッセイからのｈＩＡＰＰ２２−２９またはｈＩＡＰＰ２０−２９、および蛍光アッセイからのｈＩＡＰＰ１−３７の１０μＬ試料を、４００メッシュの銅グリッド（ＳＰＩ ｓｕｐｐｌｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｃｈｅｓｔｅｒ ＰＡ）上に置き、カーボン安定化ホルムバールフィルムによって覆った。１分後、過剰な液体を除き、グリッドを２％酢酸ウラニル水溶液でさらに２分間ネガティブ染色した。試料を８０ｋＶで操作するＪＥＯＬ １２００ＥＸ電子顕微鏡で観察した。
【０１８１】
ＭＴＴアッセイ−βＴＣ−ｔｅｔ細胞［Ｆｌｅｉｓｃｈｅｒ，Ｎ．，Ｃｈｅｎ Ｃ．，Ｓｕｒａｎａ，Ｍ．，Ｌｅｉｓｅｒ， Ｍ．，Ｒｏｓｓｅｔｔｉ，Ｌ．，Ｐｒａｌｏｎｇ， Ｗ．およびＥｆｒａｔ，Ｓ．（１９９８）Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌｌｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｂｅｔａ−ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４７，１４１９−１４２５］またはＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ＃ ＣＲＬ−１７２１）を、それぞれ２４ウェルプレート（２×１０５／ウェル）または９６ウェルプレート（１×１０４／ウェル）に置き、２４時間接着させた。合成ｈＩＡＰＰ１−３７ストック溶液を希釈してフェノールレッドありまたはなしのＤＭＥＭを含有する血清不含増殖培地［Ｆｌｅｉｓｃｈｅｒ（１９９８）Ｓｕｐｒａ］において４μＭの最終濃度にした。希釈直後、試料を２００００ｇで２０分間４℃で遠心分離し、上澄みを３０分間窒素で泡立たせて残留ＨＦＩＰを蒸発した。細胞をＰＢＳで二回洗浄し、２４時間上澄みでインキュベートした。ＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ Ｍ−２１２８）を次いで３時間添加した後、溶解緩衝液を添加して一晩インキュベートした。アッセイは製造者の指示に従って実施された。試料は５７０ｎｍで読まれた。細胞生存率はフェノールレッドありまたはなしのそれぞれの培地においてｈＩＡＰＰの不存在下でインキュベートされた細胞と比較して計算された。
【０１８２】
走査電子顕微鏡観察：細胞を、ＭＴＴアッセイと同じ条件下でガラス顕微鏡カバースリップ上で増殖した。ｈＩＡＰＰでのインキュベーション直後、細胞を２％グルタルアルデヒド（ｖ／ｖ）で固定し、４℃で２４時間貯蔵した。細胞はエタノールの濃度の増加（３０％，５０％，７０％，９０％，９５％，１００％）とともに連続的に脱水され、臨界点乾燥器で乾燥された。標本カバースリップをコロイド金で被覆し、２５ｋＶで操作するＪＯＥＬ ＪＳＭ ８４０Ａ顕微鏡を使用して観察した。
【０１８３】
実 施 例 １
ｈＩＡＰＰのコアアミロイド形成フラグメントの凝集についてのフェノールレッドの効果
ｈＩＡＰＰ（ｈＩＡＰＰ２２−２９，ｈＩＡＰＰ２０−２９）のコアアミロイド形成フラグメントは水溶液で凝集する。かかる凝集挙動はアミロイド形成のための予備アッセイとして役立った。
【０１８４】
フェノールレッドのアミロイド形成を阻害する能力を評価するために、１ｍＭ ｈＩＡＰＰ２２−２９およびｈＩＡＰＰ２０−２９（それぞれ配列番号１および配列番号２）の凝集は４０ｍＭフェノールレッドの不存在または存在下で調査された。ｈＩＡＰＰコアペプチドに対するフェノールレッド分子の特異性を同定するため、極めて小さい分子−スルホン基の不足によってのみ異なるフェノールフタレインはコントロールとして使用された（図７）。
【０１８５】
図１ａ−ｂに示されるように、ｈＩＡＰＰ２０−２９凝集速度はｈＩＡＰＰ２２−２９より低く、全ての試料においてほぼ２時間の遅延時間が明らかであった。フェノールフタレインを使用する阻害効果は全く明らかでなく、その凝集曲線は３時間後に劇的に増大したｈＩＡＰＰ２０−２９凝集と同様であった（図１ｂ）。阻害剤としてフェノールレッドを使用することは凝集を減少させ、それは３時間のインキュベーション後の凝集レベルにおいて極めて小さい上昇を示した。
【０１８６】
図１ａに示されるようにｈＩＡＰＰ２２−２９は数秒内に凝集し、その濁度は１０分のインキュベーション後に平坦域に達した。しかしながら、フェノールレッドの存在下では、ｈＩＡＰＰ２２−２９の凝集は実質的に終結され、ずっと低い速度および濁度の一定レベルを示した。
【０１８７】
実 施 例 ２
円偏光二色性（ＣＤ）を使用する二次構造評価
野生型ｈＩＡＰＰ１−３７（配列番号３）は原繊維化プロセス内で無秩序なコイル立体構造からβシートへの変移を受ける。この二次構造の変移はフェノールレッドの存在または不存在下で行なわれる。ｈＩＡＰＰ１−３７はＨＦＩＰに溶解され、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈されて１％ ＨＦＩＰおよび４μＭの最終濃度にされた。ペプチドの二次構造の変化は９６時間モニターされた。
【０１８８】
図２ａに示されるように、フェノールレッドの不存在下では、ｈＩＡＰＰ１−３７は６時間内でβシート構造への初期変移および２４時間内で最大楕円率（２１８ｎｍ、それはβシート構造に相当する）を示した。これらの構造は９６時間相対的に安定したままであった。
【０１８９】
１０モル比のフェノールレッドを添加すると、βシート立体構造への変移は有意に阻害され（図２ｂ）、２１８ｎｍの楕円率の初期の極めて低いレベルは４６時間後に測定され、極めて遅い増大が９６時間後に示された。
【０１９０】
実 施 例 ３
チオフラビンＴ蛍光によるアミロイド原繊維形成
チオフラビンＴ（ＴｈＴ）はアミロイド形成のレベルを検出するために一般に使用される。ｈＩＡＰＰ１−３７溶液は上記のように調製された。フェノールレッドの存在または不存在下でのインキュベーションおよび各試料への３μＭ ＴｈＴの添加後、蛍光を測定した。
【０１９１】
図３ａに示されるように、フェノールレッドの不存在下では、ｈＩＡＰＰ１−３７は約２０時間の遅延段階を示し、その後蛍光レベルが迅速に増大した。４０μＭのフェノールレッドの存在下では、極めて低くかつ一定のレベルの蛍光がアッセイ全体に対して検出された。ｈＩＡＰＰペプチドの凝集についてのフェノールレッドの用量依存阻害効果は図３ｂ−ｃに示される。高いフェノールレッド濃度（ｈＩＡＰＰに対して４倍より高いフェノールレッド）は２４時間後、一定の低い蛍光レベルを示した。一週間のインキュベーション後であっても、濃度依存阻害は同様であり（図３ｃ）、約９０％の阻害レベルは２０μＭ以上のフェノールレッド濃度に対して達成された。これらの結果はフェノールレッドがアミロイド原繊維形成の潜在的な阻害剤であることを実証する。
【０１９２】
実 施 例 ４
ＴＥＭによって測定されるフェノールレッドを有するｈＩＡＰＰ原繊維の形態
（実施例３に記載される）凝集アッセイからとったｈＩＡＰＰ２２−２９およびｈＩＡＰＰ２０−２９の試料を透過電子顕微鏡を使用して視覚化した。図４ａに示されるように、ｈＩＡＰＰ２２−２９ペプチドの両試料において凝集の開始後３および７２時間で明瞭で良く規定されたアミロイド繊維が観察され、７２時間後繊維密度および幅において小さな増加があった。対照的に、フェノールレッドの存在下では、３時間後に繊維は全く観察されなかったが、７２時間後に異なる形態を有するほんの少量の原繊維が観察された。同じ結果はフェノールレッド阻害剤の存在下の２４時間インキュベーション後のｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチド（図４ｂ）で得られた。同じ条件下でフェノールフタレインを使用して阻害は全く観察されず、原繊維構造はＴＥＭグリッド上で明白であった。
【０１９３】
図４ｃに示されるように、ｈＩＡＰＰ１−３７アミロイド−シスの阻害剤としてフェノールレッドを使用するとき、同じ阻害傾向が観察された。繊維形成における有意な速動性阻害は繊維形成の第一段階において存在し（約３０時間）、そこではフェノールレッドの存在下では繊維は全く存在しなかった。
【０１９４】
実 施 例 ５
緑茶ポリフェノールでのＩＡＰＰ原繊維形成の阻害
ＴｈＴはｈＩＡＰＰ１−３７原繊維形成についての緑茶ポリフェノール化合物の阻害効果を決定するために使用された（実施例３参照）。
【０１９５】
結果：
図５ａに示されるように、全てのポリフェノール化合物はｈＩＡＰＰ単独と比較してｈＩＡＰＰ１−３７原繊維形成について長期間阻害効果を有していた。この阻害はコンゴーレッドの阻害効果に類似していた。ＩＡＰＰ単独の蛍光値は４８時間後、増大したが、阻害剤の存在下のｈＩＡＰＰ１−３７蛍光の初期増加は７２時間後のみ検出可能であった。
【０１９６】
阻害効果のより詳細な観察はガラート基を有する全てのポリフェノール（即ち、追加のフェノール環を含有する）は良好な阻害剤であることを示した（図５ｂ）。これは阻害効果について追加の芳香族環に対する重要性があることを示唆しうる。この結果はβ−アミロイドについてのアポモルフィンの阻害効果およびスクレピー−関連プリオンタンパク質についての種々のポリフェノールの阻害効果を記載する二つの他のグループ［ＬａｓｈｕｅｌらＪ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．２００２ ２７７：４２８８１−９０；ＫｏｃｉｓｃｏらＪ．Ｖｉｒｏｌ．２００４ ７７：１０２８８−１０２９４］によって独立して確認された。
【０１９７】
実 施 例 ６
ピロカテコールバイオレットによるヒト小島アミロイドポリペプチド原繊維形成の用量依存阻害
実験手順
チオフラビンＴ蛍光アッセイ：ｈＩＡＰＰ１−３７の原繊維化は４０μＭまたは４μＭの阻害剤濃度を使用して、上記のように、チオフラビンＴ（ＴｈＴ）色素結合アッセイによってモニターされた。
【０１９８】
結果
図６に示されるように、ＴｈＴアッセイで得られた結果はピロカテコールバイオレットがｈＩＡＰＰ１−３７によるアミロイド形成を効果的に阻害することを明らかに示す。ピロカテコールバイオレットのないｈＩＡＰＰは蛍光レベルにおいて急速な増加を示したが、第一時間ポイント（２．６時間）で既にピーク値によって示されるように、４μＭピロカテコールバイオレットの追加はアッセイ全体にわたって有意に低いレベルの蛍光を生じ、４０μＭピロカテコールバイオレットの追加でさらに強い阻害効果が検出された。
【０１９９】
実 施 例 ７
フェノールレッド誘導体によるＩＡＰＰ原繊維形成の阻害
フェノールレッドと比較して原繊維形成を阻害するための上記のフェノールレッド誘導体ＰＦ３（ジアセトキシフェノールレッド、図７）およびＰＦ４（ジメトキシフェノールレッド、図７）の能力を評価するために、蛍光ＴｈＴ速動性アッセイを実施した。
【０２００】
結果
図８ａ−ｂから明らかなように、ＰＦ３およびＰＦ４（４０μＭ）分子の両方はフェノールレッド分子に対して低下した阻害効果を示した。ＰＦ３分子は安定していないことが見出され、数分内の可溶化で破粋する傾向を示した。ＰＦ４分子の相対的な阻害効果は、特に試料が遠心分離されないとき、より明白であった（図８ｂ）。
【０２０１】
実 施 例 ８
フェノールレッドはｈＩＡＰＰで処理されたＰＣ１２細胞についての生存効果を導き出す
ｈＩＡＰＰ１−３７凝集体によって誘導された細胞毒性についてのフェノールレッドの効果を研究するために、ＰＣ１２細胞系を使用した。細胞は、新鮮なｈＩＡＰＰ１−３７を増殖培地に加えながら、フェノールレッドの段階的濃度ありまたはなしで９６ウェルプレートで増殖された。２４時間のインキュベーション後、細胞生存率は、ＩＡＰＰ試料吸光度を、同じフェノールレッド濃度を含有する非ＩＡＰＰコントロールで置換することによって計算された。図９から明らかなように、ＭＴＴ細胞生存率アッセイはフェノールレッドによる細胞の濃度依存救助を示した。
【０２０２】
実 施 例 ９
フェノールレッドは膵β細胞についてのアミロイド凝集体の細胞毒性効果を阻害する
培養物中の膵β細胞についてのｈＩＡＰＰアミロイド集合体の細胞毒性効果を調整するためのフェノールレッドの能力を取扱った。グルコースに対して通常のインシュリン分泌応答を有する高度に分化されたマウスβ細胞系（βＴＣ−ｔｅｔ Ｆｌｅｉｓｃｈｅｒ １９９８ ＳＵｐｒａ）を使用した。細胞はフェノールレッドありまたはなしで増殖され、新鮮なｈＩＡＰＰを増殖培地に添加した。ＭＴＴ細胞生存性アッセイは、培地中のフェノールレッドの存在がβ細胞をｈＩＡＰＰ集合体の細胞毒性効果から保護し、細胞生存性を５０％から８０％へ増大する（ｐ＜０．０５）（図１０ａ）ことを明らかに示した。ｈＩＡＰＰの存在下で増殖されたβ細胞の走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）分析はｈＩＡＰＰ細胞毒性について前に報告したように広範な膜ブレブ形成［Ｓａａｆｉ，Ｅ． Ｌ．，Ｋｏｎａｒｋｏｗｓｋａ，Ｂ．，Ｚｈａｎｇ，Ｓ．，Ｋｉｓｔｌｅｒ，Ｊ．ａｎｄ Ｃｏｏｐｅｒ，Ｇ．Ｊ．（２００１）Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｈａｔ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｓ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｂｙ ｗｈｉｃｈ ｈｕｍａｎ ａｍｙｌｉｎ ｅｖｏｋｅｓ ｄｅａｔｈ ｉｎ ＲＩＮｍ５Ｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｉｓｌｅｔ ｂｅｔａ−ｃｅｌｌｓ，Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔ．２５，３３９−３５０］、および細胞の大多数の典型的な細胞形態の崩壊（図１０ｄ）を示した。他方、未処理細胞（図１０ｈ）とｈＩＡＰＰおよびフェノールレッドの存在下で増殖された細胞（図１０ｆ）の間で実際に有意な差は全く観察されることができなかった。両方の場合において、細胞のほとんどは通常の形態を維持した。目に見えるブレブ形成は全くなく、微小突起および葉状仮足の膜範囲が存在していた。さらに、低倍率のＳＥＭ検査で、β細胞の通常のアレイはフェノールレッドで保護された細胞およびコントロール細胞（それぞれ図１０ｅおよび１０ｇ）で観察されることができた。著しく対照的に、フェノールレッド保護のないＩＡＰＰインキュベーションでは単離されかつ形態変更された細胞だけが観察されることができた。
【０２０３】
これらの結果を総合すると、フェノールレッドが細胞、特に膵β細胞についてのｈＩＡＰＰ１−３７原繊維の細胞毒性効果を阻害することを示す。
【０２０４】
分かりやすくするため別個の実施態様で説明されている本発明のいくつもの特徴は、組み合わせて単一の実施態様にして提供することもできることは分かるであろう。逆に、簡略化するため単一の実施態様で説明されている本発明の各種特徴は、別個に又は適切なサブコンビネーションで提供することもできる。
【０２０５】
本発明を、その具体的実施態様とともに説明してきたが、多くの変形と変更が当業技術者には明らかであることは明白である。したがって、本発明は、本願の特許請求の範囲の精神と広い範囲内に入っているこのような変形と変更をすべて包含することが意図される。本明細書に記載のすべての刊行物、特許及び特許願は、あたかも、個々の刊行物、特許又は特許願の各々が、本願に具体的にかつ個々に参照して示されているのと同程度に、全体を本願に援用するものである。さらに、本願における任意の文献の引用もしくは確認は、このような文献が本発明に対する従来技術として利用できるという自白とみなすべきではない。
【図面の簡単な説明】
【０２０６】
【図１】フェノールレッドの存在下でのｈＩＡＰＰコアアミロイド形成ペプチド（ｈＩＡＰＰ２２−２９及びｈＩＡＰＰ２０−２９）凝集の阻害を示すグラフである。
【図２】円偏光二色性を使用して測定された、フェノールレッドの不存在（図２ａ）又は存在（図２ｂ）下のｈＩＡＰＰ１−３７ペプチドの二次構造変移を示すグラフである。
【図３ａ】チオフラビンＴ蛍光アッセイによって測定された、ヒトＩＡＰＰ１−３７原繊維形成のフェノールレッドの効果を示すグラフである。
【図３ｂ−ｃ】チオフラビンＴ蛍光アッセイによって測定された、ヒトＩＡＰＰ１−３７原繊維形成のフェノールレッドの効果を示すグラフである。
【図４ａ】フェノールレッド及びフェノールフタレイン阻害剤の不存在又は存在下のｈＩＡＰＰ２２−２９，ｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチド、及びｈＩＡＰＰ１−３７の形態を示す顕微鏡写真である。
【図４ｂ】フェノールレッド及びフェノールフタレイン阻害剤の不存在又は存在下のｈＩＡＰＰ２２−２９，ｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチド、及びｈＩＡＰＰ１−３７の形態を示す顕微鏡写真である。
【図４ｃ】フェノールレッド及びフェノールフタレイン阻害剤の不存在又は存在下のｈＩＡＰＰ２２−２９，ｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチド、及びｈＩＡＰＰ１−３７の形態を示す顕微鏡写真である。
【図５ａ】ＴｈＴ蛍光アッセイによって測定された、緑茶ポリフェノールによるｈＩＡＰＰ原繊維形成の阻害を示すヒストグラムである。
【図５ｂ】ＴｈＴ蛍光アッセイによって測定された、緑茶ポリフェノールによるｈＩＡＰＰ原繊維形成の阻害を示すヒストグラムである。
【図６】ＴｈＴ蛍光アッセイによって測定された、ピロカテコールバイオレットによるｈＩＡＰＰ１−３７原繊維形成の阻害を明らかにする比較プロットを与える（四角は阻害剤の添加なしを示し、三角は４μＭピロカテコールの添加を示し、円は４０μＭピロカテコールバイオレットの添加を示す）。
【図７】阻害剤フェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、ジアセトキシフェノールレッド（ＰＦ３）及びジメトキシフェノールレッド（ＰＦ４）の化学構造（２Ｄ）を与える。
【図８】チオフラビンＴ蛍光アッセイによって測定された、ＰＦ３及びＰＦ４によるｈＩＡＰＰ１−３７原繊維形成の阻害を示すヒストグラムである。
【図９】ｈＩＡＰＰ１−３７の存在下でインキュベートされたＰＣ１２細胞についてフェノールレッドの用量依存救助的効果を示す棒グラフである。
【図１０ａ−ｄ】ｈＩＡＰＰ凝集の存在下でインキュベートされた膵β細胞についてのＰＲの救助的効果を示す。図１０ａはフェノールレッドあり又はなしのそれぞれの培地においてｈＩＡＰＰの不存在下でインキュベートされた細胞と比較した細胞生存性を示す。図１０ｂ−ｄはｈＩＡＰＰ単独の添加後の細胞を示す。
【図１０ｅ−ｈ】ｈＩＡＰＰ凝集の存在下でインキュベートされた膵β細胞についてのＰＲの救助的効果を示す。図１０ｅ−ｆは増殖培地において４０μＭフェノールレッドの存在下でｈＩＡＰＰで処理された細胞を示す。図１０ｇ−ｈはｈＩＡＰＰで処理されていないコントロール細胞を示す。
【配列表フリーテキスト】
【０２０７】
配列番号１〜３は合成ペプチドの配列である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミロイド原繊維形成を予防するための化合物、それを含有する組成物、及びそれを使用する方法に関する。特に、本発明は、アミロイド関連疾患の処置のためのフェノールレッドの如き高分子芳香族化合物及びその新規な誘導体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミロイド物質沈着（これはまたアミロイド斑形成とも呼ばれる）は、アルツハイマー病、プリオンに関連した脳障害、ＩＩ型糖尿病、家族性アミロイドーシスおよび軽鎖アミロイドーシスを含む、関連性のない様々な病理学的状態の中心的な特徴である。
【０００３】
アミロイド物質は、直径が約８０Å〜１００Åである一定しない長さの堅い非分岐タンパク質性原繊維の密な網状構造から構成される。アミロイド原繊維は、その長軸が原繊維の長軸に直交する逆平行β−プリーツシートに配置されたポリペプチド鎖のコア構造を含有する［Ｂｏｔｈ他（１９９７）、Ｎａｔｕｒｅ、３８５：７８７〜９３；Ｇｌｅｎｎｅｒ（１９８０）、Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３０２：１２８３〜９２］。
【０００４】
約２０個のアミロイド原繊維タンパク質がこれまでにインビボで同定され、特異的な疾患と相関づけられている。これらのタンパク質は互いにアミノ酸配列相同性を全く有さないか又はほとんど有していないが、アミロイド原繊維のコア構造は本質的には同じである。アミロイド原繊維のこの共通するコア構造、およびアミロイド沈着物における共通物質の存在は、アミロイド物質の特定の形態を特徴づけるデータが、アミロイド物質の他の形態にもまた関係することがあり、従って、ＩＩ型糖尿病、アルツハイマー痴呆、またはプリオンに関連した脳障害などのアミロイド関連疾患に対する薬物を開発するための鋳型設計において具体化され得ることを示唆している。
【０００５】
さらに、アミロイド沈着物は、インビボでは不活性ではないようであり、むしろ、代謝回転の動的状態にあり、そして、原繊維の形成が停止される場合、退行することさえもあり得る［Ｇｉｌｌｍｏｒｅ他（１９９７）、Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．、９９：２４５〜５６］。
【０００６】
従って、アミロイドポリペプチド産生を阻害するか、またはアミロイドーシスを阻害するために設計された治療は、アミロイド関連疾患を処置するために有用であり得る。
【０００７】
アミロイドポリペプチド産生の阻害−アミロイドポリペプチドの産生の直接的な阻害が、例えば、ヒト小島アミロイドポリペプチドのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用によって達成され得る。インビトロでは、小島アミロイドポリペプチドのｍＲＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの添加またはアンチセンス相補的ＤＮＡの発現は、細胞のインスリンのｍＲＮＡ含有量およびタンパク質含有量を増大させており、これにより、この方法の潜在的な有効性が明らかにされている［Ｋｕｌｋａｒｎｉ他（１９９６）、Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．、１５１：３４１〜８；Ｎｏｖｉａｌｓ他（１９９８）、Ｐａｎｃｒｅａｓ、１７：１８２〜６］。しかしながら、そのようなアンチセンス分子のインビボ有効性を明らかにする実験結果は何ら明らかにされていない。
【０００８】
アミロイド原繊維の形成の阻害−小島アミロイドを含むアミロイドは、血清アミロイドＰ成分、アポリポタンパク質Ｅおよびパールカンなどの潜在的な安定化物質または保護物質を含有する。発達中のアミロイド原繊維に対するそれらの結合を阻止することにより、アミロイド形成タンパク質の特定部分に対して特異的な抗体による処置［Ｓｏｌｏｍｏｎ他（１９９７）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４：４１０９〜１２］が可能であるように、アミロイド形成を阻害することができる［Ｋａｈｎ他（１９９９）、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、４８：２４１〜５３］。
【０００９】
下記には、アミロイド構造を脱安定化する能力を有する薬物を操作するための現在の試みがまとめられている。
【００１０】
脱安定化化合物−ヘパリン硫酸がすべてのアミロイドの成分として同定されており、ヘパリン硫酸はまた、炎症に関連するアミロイド誘導のごく初期段階においても関係している。Ｋｉｓｉｌｅｖｓｋｙおよび共同研究者（Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．、１：１４３〜１４８、１９９５）は、ヘパリン硫酸が炎症関連のアミロイド前駆体およびアルツハイマー病（ＡＤ）のβ−ペプチドと相互作用することを妨害する低分子量のアニオン性のスルホネート化合物またはスルフェート化合物の使用を記載した。ヘパリン硫酸は、アミロイドタンパク質の折りたたみパターンに特徴的な増大したβ−シート構造を受け入れるために可溶性アミロイド前駆体（ＳＡＡ２）に特異的な影響を及ぼす。これらのアニオン性のスルホネート化合物またはスルフェート化合物は、電子顕微鏡写真によってモニターされたとき、ヘパリンにより加速されるＡβ原繊維形成を阻害することが示され、また、事前に形成された原繊維をインビトロで分解することができた。さらに、これらの化合物は、急性モデルおよび慢性モデルにおいてインビボで、マウスの脾臓での炎症関連のアミロイドの進行を実質的に停止させた。しかしながら、最も強力な化合物［すなわち、ポリ（ビニルスルホネート）］は急性毒性を示した。類似する毒性が、免疫グロブリン軽鎖アミロイドーシス（ＡＬ）患者においてアミロイド再吸収を誘導することが認められている別の化合物ＩＤＯＸ（アントラサイクリン ４’−ヨード−４’−デオキシドキソルビシン）に関して観測されている［Ｍｅｒｌｉｎｉ他（１９９５）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ］。
【００１１】
脱安定化抗体−抗β−アミロイドモノクローナル抗体が、インビトロでβ−アミロイド斑を脱凝集し、β−アミロイド斑の形成を予防することにおいて効果的であることが示されている（米国特許第５６８８５６１号）。しかしながら、そのような抗体のインビボでの有効性を明らかにする実験結果は何ら明らかにされていない。
【００１２】
小分子−アミロイドポリペプチドと結合し、かつタンパク質の本来の折りたたみを安定化させる小分子の使用の可能性が、トランスチレチン（ＴＴＲ）タンパク質の場合に試みられている［Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（１９９８）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９５：１２９６５〜１２９６０；Ｏｚａ（１９９９）、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、９：１〜６］。これまでに、チロキシンおよびフルフェナム酸などの分子が、アミロイド形成をもたらす立体配座変化を妨げることができることが明らかにされている。しかしながら、動物モデルにおけるこれらの化合物の使用は、未だ立証されておらず、また、これらのリガンドと結合することができる、ＴＴＲ以外のタンパク質が血液中に存在するために損なわれ得る。
【００１３】
抗酸化剤−別の提案された治療は、酸化ストレスを回避し、アミロイドタンパク質をその還元状態（すなわち、モノマーおよびダイマー）で維持するために抗酸化剤を摂取することであった。亜硫酸塩の使用は、ＴＴＲのより安定なモノマーをインビトロおよびインビボの両方でもたらすことが示されていた［Ａｌｔｌａｎｄ（１９９９）、Ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｔｉｃｓ、２：１８３〜１８８］。しかしながら、抗酸化作用の完全な特徴づけは依然として得られておらず、可能な治療法に関する結果の解釈は困難なままである。
【００１４】
脱安定化ペプチド−β−プリーツシートを破壊する合成ペプチド（「β−シート破壊剤」）を加えることにより、原繊維が解離し、アミロイドーシスが妨げられたという発見［Ｓｏｔｏ他（１９９８）、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、４：８２２〜８２６］は、臨床的観点から特に有望である。簡単に記載すると、５残基のペプチドにより、アミロイドβ−タンパク質の原繊維形成が阻害され、事前に形成された原繊維がインビトロで分解され、そして、細胞培養において原繊維により誘導されるニューロンの死が妨げられた。さらに、このβ−シート破壊剤ペプチドは、アミロイドβ−タンパク質の沈着をインビボで著しく減少させ、そしてアミロイドーシスのラット脳モデルにおいてアミロイド原繊維の形成を完全に阻止した。
【００１５】
緑茶抽出物−公開Ｎｏ．２００２００８６０６７及び２００２０１５１５０６を有する米国特許出願は、アミロイド疾患を処置するための緑茶抽出物の様々な成分の使用を教示する。これらの特許出願は、これらの成分がアミロイド原繊維形成を阻害することを教示するが、それらはこれらの緑茶成分にかかる活性を与える機構も共通の構造的特徴も教示できていない。
【００１６】
本発明者は、芳香族相互作用が、分子認識及び自己会合を指示する構造的かつ機能的要素として作用することによってアミロイド原繊維形成において重要な役割を果すことを以前に示した。
【００１７】
それゆえ、本発明を考えながら、かかる芳香族相互作用に関与しうる複数（例えば二つ以上）の芳香族部分を有する化合物がアミロイド原繊維形成の阻害剤として有効に作用しうることを想像した。
【００１８】
本発明を実施に移しているとき、本発明者は、アミロイド形成がフェノールレッド（ＰＲ）の如き高分子芳香族化合物によって強く阻害されうることを実際に明らかにし、それはアミロイド関連疾患の処置におけるこれらの化合物の使用を示唆する。
【発明の開示】
【００１９】
本発明の一つの側面によれば、アミロイド関連疾患の処置のために特定される薬剤の製造のための、下記一般式Ｉを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩またはそのプロドラッグの使用が提供される：
式中、Ｘ，Ｙ及びＺは各々独立して、炭素、酸素、硫黄、ＣＲ１１Ｒ１２またはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６からなる群から選択されるが、Ｘ，Ｙ及びＺの少なくとも一つは酸素または硫黄であり；
Ｒ１−Ｒ１６は各々独立して、水素、孤立電子対、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、フェニル、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール、ジヒドロキシフェノール、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、チオカルボキシ、カルボニル、オキソ、チオカルボニル、スルフィニル及びスルホニルからなる群から選択されるか、または不存在であるか、またはＲ１−Ｒ４の少なくとも二つ及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも二つは少なくとも一つの五員または六員芳香族、ヘテロ芳香族、脂環式またはヘテロ脂環式環を形成し；
Ｒ１−Ｒ４の少なくとも一つはヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｏ−カルボキシ及びＯ−チオカルボキシからなる群から選択され、及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも一つはフェノール、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールを含む。
【００２０】
以下に記載される本発明の好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｘは炭素であり、ＹはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６であり、Ｚは酸素である。
【００２１】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｒ９はオキソであり、Ｒ１０は不存在である。
【００２２】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｒ１３−Ｒ１６の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される。
【００２３】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｒ１及びＲ３の各々はヒドロキシである。
【００２４】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｒ１３−Ｒ１６の少なくとも一つはアルキルである。
【００２５】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｘは炭素であり、Ｙは酸素であり、Ｚは炭素または硫黄であり、Ｒ５及びＲ６の少なくとも一つはオキソである。
【００２６】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、Ｒ９及びＲ１０の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される。
【００２７】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、上記化合物はフェノールレッド、ジメトキシフェノールレッド、メトキシフェノールレッド、ジアセトキシフェノールレッド、アセトキシフェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、カテキン、エピガロカテキンガラート、エピカテキンガラート、エピカテキン、エピガロカテキン、エリオジクチオール（ｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）、ケルセチン、プロシアニジン、ヒドロキシフェニル、トコフェロール及びブロモフェノールレッドからなる群から選択される。
【００２８】
本発明の別の側面によれば、包装材料と包装材料内に含有されるアミロイド関連疾患を処置するために特定される薬学的組成物を含む製品であって、薬学的組成物が有効成分としての上記化合物、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む製品が提供される。
【００２９】
本発明のさらに別の側面によれば、対象のアミロイド関連疾患を処置する方法であって、その必要性のある対象に治療的に有効な量の上記化合物を投与し、それによって対象のアミロイド関連疾患を処置することを含む方法が提供される。
【００３０】
以下に記載される本発明の好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、投与は４ｍｇ／ｋｇ体重／時を越えない化合物の濃度で実施される。
【００３１】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、投与は経口的に実施される。
【００３２】
本発明のさらに別の側面によれば、治療有効量の上記化合物及び薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物が提供される。
【００３３】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、薬学的組成物は抗アミロイド薬をさらに含む。
【００３４】
記載された好ましい実施態様におけるさらなる特徴によれば、抗アミロイド薬はアミロイド脱安定化抗体、アミロイド脱安定化ペプチド及び抗アミロイド小分子からなる群から選択される。
【００３５】
本発明のさらに別の側面によれば、下記一般式ＩＩを有する新規化合物、その薬学的に受容可能な塩又はそのプロドラッグが提供される：
式中、Ｑ１及びＱ２は各々独立して、酸素及び硫黄からなる群から選択され、
Ａ１及びＡ２は各々独立して、水素、アルキル、アリール、シクロアルキル及びカルボニルからなる群から選択され、
Ｑ１及びＱ２が各々水素であるとき、Ａ１及びＡ２の一方は水素であり、他方はアルキル、シクロアルキル、アリール及びカルボニルからなる群から選択され、好ましくはメチル又はアセチルである。
【００３６】
本発明は、アミロイド原繊維形成を予防するための組成物及びそれを使用する方法を提供することによって現在知られている構成の欠点を首尾よく対処する。
【００３７】
本明細書で使用される技術用語と科学用語はすべて、特に断らない限り、本発明の属する技術分野の当業者が共通して理解しているのと同じ意味を持っている。本明細書に記載されているのと類似の又は均等の方法と材料は本発明を実施又は試験するのに使用できるが、適切な方法と材料は以下に述べる。争いが生じた場合、定義を含めて本特許明細書が基準である。さらに、本明細書の材料、方法及び実施例は例示することだけを目的とし本発明を限定することを意図しない。
【００３８】
図面の説明
本明細書では本発明を単に例示し図面を参照して説明する。特に詳細に図面を参照して、示されている詳細が例示として本発明の好ましい実施態様を例示考察することだけを目的としており、本発明の原理や概念の側面の最も有用でかつ容易に理解される説明であると考えられるものを提供するために提示していることを強調するものである。この点について、本発明を基本的に理解するのに必要である以上に詳細に本発明の構造の詳細を示す試みはされていないが、図面について行う説明によって本発明のいくつもの形態を実際に具体化する方法は当業者には明らかになるであろう。
図１ａ−ｂはフェノールレッドの存在下でのｈＩＡＰＰコアアミロイド形成ペプチド（ｈＩＡＰＰ２２−２９及びｈＩＡＰＰ２０−２９）凝集の阻害を示すグラフである。１ｍＭペプチドはＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．２）及び４％ＤＭＳＯに溶解された。フェノールレッド阻害剤は同じ緩衝条件で１０ｍＭの最終濃度に溶解された。各試料について濁度は５６０ｎｍで連続的に測定された。図１ａ−ｈＩＡＰＰ２２−２９（ＮＦＧＡＩＬＳＳ）凝集。図１ｂ−コントロールとしてフェノールフタレインを用いたｈＩＡＰＰ２０−２９（ＳＮＮＦＧＡＩＬＳＳ）凝集。緩衝液及びフェノールレッドのバックグラウンド値は関連測定から引かれた。
図２ａ−ｂは円偏光二色性を使用して測定された、フェノールレッドの不存在（図２ａ）又は存在（図２ｂ）下のｈＩＡＰＰ１−３７ペプチドの二次構造変移を示すグラフである。ヒトｈＩＡＰＰ１−３７はＨＦＩＰに溶解され、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈され、４０μＭフェノールレッドのあり又はなしで４μＭの最終濃度及び１％ＨＦＩＰにされた。不溶解性ペプチドは遠心分離を使用して除去された。阻害剤の不存在（図２ａ）下では、ｈＩＡＰＰ１−３７は６時間内で無秩序なコイル立体構造からの変移を示し、この変移は２６時間内に最大値に達することに注意されたい。しかしながら、４０μＭフェノールレッド阻害剤の存在（図２ｂ）下では、βシート立体構造への変移の明らかな阻害がある（２１８ｎｍピーク）。
図３ａ−ｃはチオフラビンＴ蛍光アッセイによって測定された、ヒトＩＡＰＰ１−３７原繊維形成のフェノールレッドの効果を示すグラフである。図３ａ−ヒトＩＡＰＰ１−３７はＨＦＩＰに溶解され、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈され、４０μＭフェノールレッドのあり又はなしで４μＭの最終濃度及び１％ＨＦＩＰにされた。不溶解性ペプチドは遠心分離を使用して分離された。蛍光値は各試料に３μＭ Ｔｈｔを添加した後に測定された。約２０時間の遅延段階後、蛍光値はフェノールレッド阻害剤の存在下での一定の低いレベルとは対照的に阻害剤なしで有意に増大したことを注意されたい。図３ｂ−図３ａのようにフェノールレッドの段階的な濃度のみをより敏感な蛍光計とともに使用し、それは測定された試料における最大フェノールレッド量が４μＭを越えないように試料の希釈度を１０倍にすることを可能にした。示されるように用量依存阻害は２．５μＭの〜ＩＣ５０で明らかであった。図３ｃ−５日間のインキュベーション後の図３ｂの試料の終点蛍光を示す。
図４ａ−ｃはフェノールレッド及びフェノールフタレイン阻害剤の不存在又は存在下のｈＩＡＰＰ２２−２９，ｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチド、及びｈＩＡＰＰ１−３７の形態を示す顕微鏡写真である。ｈＩＡＰＰ２２−２９及びｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチドは図１ａ−ｃに記載されるように作られ、ｈＩＡＰＰ１−３７は図３ａ−ｃに記載されるように作られた。試料は酢酸ウラニルで１０μｌ試料を染色することに生成され、次いで８０ｋＶで操作するＪＥＯＬ １２００ＥＸ電子顕微鏡で観察された。全てのペプチドに対して明確な形態上の差異は明白であり、それはフェノールレッドによる原繊維形成の速動性阻害効果を示した。逆に、フェノールフタレイン分子による阻害効果は明白でなかった（図４ｂ）。
図５ａ−ｂはＴｈＴ蛍光アッセイによって測定された、緑茶ポリフェノールによるｈＩＡＰＰ原繊維形成の阻害を示すヒストグラムである。図５ａについての色コード：青色−４８時間、赤色３日間、黄色８日間、緑色１２日間。緑茶ポリフェノールの存在下での３日間のインキュベーション後の阻害効果の詳細な観察（図５ｂ）はガラート群について高い効力を示した。
図６はＴｈＴ蛍光アッセイによって測定された、ピロカテコールバイオレットによるｈＩＡＰＰ１−３７原繊維形成の阻害を明らかにする比較プロットを与える（四角は阻害剤の添加なしを示し、三角は４μＭピロカテコールの添加を示し、円は４０μＭピロカテコールバイオレットの添加を示す）。
図７は阻害剤フェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、ジアセトキシフェノールレッド（ＰＦ３）及びジメトキシフェノールレッド（ＰＦ４）の化学構造（２Ｄ）を与える。
図８ａ−ｂはチオフラビンＴ蛍光アッセイによって測定された、ＰＦ３及びＰＦ４によるｈＩＡＰＰ１−３７原繊維形成の阻害を示すヒストグラムである。試料はｈＩＡＰＰストック溶液の希釈直後に遠心分離されるか（図８ａ）又は遠心分離されないままであった（図８ｂ）。
図９はｈＩＡＰＰ１−３７の存在下でインキュベートされたＰＣ１２細胞についてフェノールレッドの用量依存救助的効果を示す棒グラフである。値は平均±ＳＤ（ｎ＝４）である。
図１０ａ−ｈはｈＩＡＰＰ凝集の存在下でインキュベートされた膵β細胞についてのＰＲの救助的効果を示す。βＴＣ−ｔｅｔ齧歯類β細胞はフェノールレッドあり又はなしの血清不含ＤＭＥＭにおいて４μＭ ｈＩＡＰＰ１−３７で２４時間インキュベートされた。ＭＴＴ還元は一晩インキュベーションした後に測定された。図１０ａはフェノールレッドあり又はなしのそれぞれの培地においてｈＩＡＰＰの不存在下でインキュベートされた細胞と比較した細胞生存性を示す。値は平均±ＳＤ（ｎ＝４），＊ｐ＝０．０３，＊＊ｐ＜０．００５。図１０ｂ−ｈは同じ条件下で顕微鏡カバースリップ上で増殖されたβ細胞のＳＥＭ分析を示す顕微鏡写真である。図１０ｂ−ｄはｈＩＡＰＰ単独の添加後の細胞を示す。これらの細胞は膜ブレブ形成及び崩壊を示す。図１０ｅ−ｆは増殖培地において４０μＭフェノールレッドの存在下でｈＩＡＰＰで処理された細胞を示す。図１０ｇ−ｈはｈＩＡＰＰで処理されていないコントロール細胞を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３９】
本発明は、例えば糖尿病の如きアミロイド関連疾患の処置に使用されることができる芳香族化合物に関する。
【００４０】
本発明の原理および操作は、図面および付随する説明を参照してより良く理解することができる。
【００４１】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳しく説明する前に、本発明は、その適用において、下記の説明に示すかまたは実施例に例証される細部に限定されないことを理解しなければならない。本発明は、他の実施形態が可能であり、または様々な方法で実践もしくは実施される。また、本明細書中で用いられる表現および用語は説明のためであり、限定的であると見なすべきでないことを理解しなければならない。
【００４２】
アミロイド原繊維形成を妨げるか、またはアミロイド物質を分解するための数多くの治療方法が従来技術に記載されている。しかしながら、現在の治療方法は、細胞毒性、非特異性および送達といった壁によって制限されている。
【００４３】
本発明者は、芳香族相互作用が分子認識及び自己会合を指示する構造的かつ機能的要素として作用することによってアミロイド原繊維形成において重要な役割を果すことを以前に示した［Ａｚｒｉｅｌ及びＧａｚｉｔ（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２７６：３４１５６−３４１６１；Ｇａｚｉｔ（２００２）ＦＡＳＥＢ Ｊ．１６：７７−８３］。結果として、芳香族ペプチドはアミロイド原繊維形成を阻害することが示された。
【００４４】
本発明を実施に移しているとき、本発明者は、アミロイド形成がフェノールレッド（ＰＲ）の如き芳香族化合物によって強く阻害されうることを明らかにし、それはアミロイド関連疾患の処置におけるこれらの化合物の使用を示唆する。
【００４５】
後述する実施例の節で示されるように、フェノールレッド及びその誘導体（例えばジアセトキシフェノールレッド及びジメトキシフェノールレッド）、緑茶ポリフェノール、及びピロカテコールバイオレットの如き本発明の芳香族化合物は多数の生化学的かつ微細構造形態分析によって測定されるようにアミロイドペプチド（ｈＩＡＰＰ２２−２９）の凝集を効果的に阻害した。これと一致して、膵β細胞に対するｈＩＡＰＰ１−３７原繊維細胞毒性における顕著な阻害はフェノールレッドの存在下で明らかであり（後述する実施例の節の実施例８−９参照）、本発明の芳香族化合物をＩＩ型糖尿病の如きアミロイド関連疾患を処置するための有望なツールにさせる。
【００４６】
従って、本発明は、対象のアミロイド関連疾患を処置する方法を提供する。
【００４７】
本発明による好ましい個体対象は、イヌ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、及びウシの如き哺乳類である。好ましくは本発明による個体対象はヒトである。
【００４８】
用語「処置する」は、アミロイド斑形成を減少させるか、もしくは予防すること、または、罹患組織における斑の出現を実質的に減少させることを示す。表現「アミロイド斑」は、原繊維アミロイド、ならびに、凝集したが、原繊維ではないアミロイド（以降、「プロト原繊維アミロイド」、これもまた病原性であり得る）を示す［Ａｎａｇｕｉａｎｏ他（２００２）、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、４１：１１３３８〜４３参照］。
【００４９】
本発明に従って処置されるアミロイド関連疾患には、ＩＩ型糖尿病、アルツハイマー病（ＡＤ）、早発型アルツハイマー病、遅発型アルツハイマー病、前徴アルツハイマー病、パーキンソン病、ＳＡＡアミロイドーシス、遺伝性アイスランド症候群、多発性骨髄腫、髄様ガン、大動脈の医学的ガン腫、インスリン注射アミロイドーシス、プリオン全身性アミロイドーシス、慢性炎症アミロイドーシス、ハンチントン病、老年性全身性アミロイドーシス、下垂体アミロイドーシス、遺伝性腎アミロイドーシス、家族性英国痴呆、フィンランド遺伝性アミロイドーシス、家族性非神経障害性アミロイドーシス［Ｇａｚｉｔ（２００２）、Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、９：１６６７〜１６７５］、そして、プリオン病（ヒツジおよびヤギのスクレイピー、ならびに、ウシ類のウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）を含む）［ＷｉｌｅｓｍｉｔｈおよびＷｅｌｌｓ（１９９１）、Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７２：２１〜３８］、そして、ヒトのプリオン病（これには、（ｉ）クールー、（ｉｉ）クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、（ｉｉｉ）ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病（ＧＳＳ）および（ｉｖ）致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）が含まれる）［Ｇａｊｄｕｓｅｋ（１９７７）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９７：９４３〜９６０；Ｍｅｄｏｒｉ、Ｔｒｉｔｓｃｈｌｅｒ他（１９９２）、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ、３２６：４４４〜４４９］が含まれるが、これらに限定されない。
【００５０】
本発明による方法は、その必要性のある対象に、治療的有効量の下記一般式Ｉを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩又はそのプロドラッグを投与することによって実施される：
式中、Ｘ，Ｙ及びＺは各々独立して、炭素、酸素、硫黄、ＣＲ１１Ｒ１２またはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６からなる群から選択されるが、Ｘ，Ｙ及びＺの少なくとも一つは酸素または硫黄であり；
Ｒ１−Ｒ１６は各々独立して、水素、孤立電子対、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、フェニル、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール、ジヒドロキシフェノール、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、チオカルボキシ、カルボニル、オキソ、チオカルボニル、スルフィニル及びスルホニルからなる群から選択されるか、または不存在であるか、またはＲ１−Ｒ４の少なくとも二つ及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも二つは少なくとも一つの五員または六員芳香族、ヘテロ芳香族、脂環式またはへテロ脂環式環を形成し；
Ｒ１−Ｒ４の少なくとも一つはヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｏ−カルボキシ及びＯ−チオカルボキシからなる群から選択され、及び／又は
Ｒ５−Ｒ１６の少なくとも一つはフェノール、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールを含む。
【００５１】
それゆえ本発明の化合物は少なくとも一つのフェノール部分（好ましくは少なくとも二つのフェノール部分）を含む。以下にさらに定義されるように、フェノール部分の各々は、好ましくは一つ以上のヒドロキシ基（従ってヒドロキシフェノール又はジヒドロキシフェノール）によって置換又は非置換されてもよい。フェノール部分の各々は以下に表わされるように、それ自体、即ちヒドロキシフェニル部分として、又はアルコキシル化又はカルボキシル化フェノール部分として、即ちアルコキシフェニル又はカルボキシフェニル部分として本発明の化合物内で存在させることができる。
【００５２】
本明細書中で使用される用語「アルキル」は、直鎖基および分枝鎖基を含む飽和した脂肪族炭化水素を示す。好ましくは、アルキル基は１個〜２０個の炭素原子を有する。数値範囲、例えば「１個〜２０個」が本明細書で述べられる場合は常に、それは基（この場合はアルキル基）が１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子などの２０個までの炭素原子を含むということを意味する。さらに好ましくは、アルキル基は、１個〜１０個の炭素原子を有する中程度のサイズのアルキルである。最も好ましくは、他に示さない限り、アルキル基は、１個〜４個の炭素原子を有する低級アルキルである。アルキル基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は以下で定義される）。
【００５３】
「シクロアルキル」基は、環の１つまたは複数が完全共役のπ電子系を有しない、すべて炭素からなる単環基または縮合環（すなわち、隣接炭素原子対を共有する環）基を示す。シクロアルキル基の非限定な例には、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキサジエン、シクロヘプタン、シクロヘプタトリエンおよびアダマンタンがある。シクロアルキル基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は以下で定義される）。
【００５４】
「ヒドロキシ」基は、−ＯＨ基を示す。
【００５５】
「アルケニル」基は、少なくとも２つの炭素原子と少なくとも１つの炭素−炭素二重結合からなる上で定義されたようなアルキル基を示す。
【００５６】
「アルキニル」基は、少なくとも２つの炭素原子と少なくとも１つの炭素−炭素三重結合からなる上で定義されたようなアルキル基を示す。
【００５７】
「アリール」基は、完全共役のπ電子系を有する、すべて炭素からなる単環基または縮合多環（すなわち、隣接炭素原子対を共有する環）基を示す。アリール基の非限定的な例には、フェニル、ナフタレニルおよびアントラセニルがある。アリール基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００５８】
本発明による置換されたアリールの好ましい例はフェノールである。
【００５９】
本明細書中で使用される用語「フェノール」は、ヒドロキシ基によって置換されたフェニルを示す。フェノール基は置換または非置換でありうる。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００６０】
本発明による置換されたフェノールの好ましい例はヒドロキシフェノールである。
【００６１】
本明細書中で使用される用語「ヒドロキシフェノール」は、用語「ジヒドロキシフェノール」も包含するが、上で定義されたようなフェノールを示し、それは一つ以上の追加のヒドロキシ基によってさらに置換される。追加のヒドロキシ基はフェノールのヒドロキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。ヒドロキシフェノールはさらに置換又は非置換であるうる。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００６２】
本発明による置換されたアリールの別の好ましい例は、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル及びチオアリールオキシフェニルを含む。
【００６３】
本明細書中で使用される用語「アルコキシフェニル」は、本明細書中で定義されるアルコキシ基によって置換されたフェニルを示す。アルコキシ基の代表例はメトキシである。
【００６４】
用語「チオアルコキシフェニル」は、本明細書中で定義されるチオアルコキシ基によって置換されたフェニルを示す。
【００６５】
用語「アリールオキシフェニル」は、本明細書中で定義されるアリールオキシ基によって置換されたフェニルを示す。
【００６６】
用語「チオアリールオキシフェニル」は、本明細書中で定義されるチオアリールオキシ基によって置換されたフェニルを示す。
【００６７】
アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル及びチオアリールオキシフェニル基の各々は、置換又は非置換でありうる。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００６８】
アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル及びチオアリールオキシフェニル基の好ましい置換基は、アルコキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ及び／又はチオアリールオキシ基を含み、従って好ましい置換されたアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル及びチオアリールオキシフェニルの例はジアルコキシフェニル、ジチオアルコキシフェニル、ジアリールオキシフェニル及びジチオアリールオキシフェニル、及び他の組み合わせを含む。
【００６９】
本明細書中で使用される用語「ジアルコキシフェニル」は、上で定義されたアルコキシフェニルを示し、それは一つ以上の追加のアルコキシ基によってさらに置換される。追加のアルコキシ基はアルコキシフェニルのアルコキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。
【００７０】
用語「ジチオアルコキシフェニル」は、上で定義されたチオアルコキシフェニルを示し、それは一つ以上の追加のチオアルコキシ基によってさらに置換される。追加のチオアルコキシ基はチオアルコキシフェニルのチオアルコキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。
【００７１】
用語「ジアリールオキシフェニル」は、上で定義されたアリールオキシフェニルを示し、それは一つ以上の追加のアリールオキシ基によってさらに置換される。追加のアリールオキシ基はアリールオキシフェニルのアリールオキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。
【００７２】
用語「ジチオアリールオキシフェニル」は、上で定義されたチオアリールオキシフェニルを示し、それは一つ以上の追加のチオアリールオキシ基によってさらに置換される。追加のチオアリールオキシ基はチオアリールオキシフェニルのチオアリールオキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。
【００７３】
ジアルコキシフェニル、ジチオアルコキシフェニル、ジアリールオキシフェニル及びジチオアリールオキシフェニルの各々は、さらに置換又は非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００７４】
本発明による置換されたアリールの別の好ましい例はカルボキシフェニル及びチオカルボキシフェニルを含む。
【００７５】
本明細書中で使用される用語「カルボキシフェニル」は、本明細書中で定義されたＯ−カルボキシ基によって置換されたフェニルを示す。Ｏ−カルボキシ基の代表例はＯ−アセトキシである。
【００７６】
用語「チオカルボキシフェニル」は、本明細書中で定義されたチオカルボキシ基によって置換されたフェニルを示す。
【００７７】
カルボキシフェニル及びチオカルボキシフェニルは置換又は非置換でありうる。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００７８】
好ましい置換基は追加のＯ−カルボキシ又はチオカルボキシ基を含み、従って好ましい置換されたカルボキシフェニル及びチオカルボキシフェニルの例はジカルボキシフェニル及びジチオカルボキシフェニルを含む。
【００７９】
本明細書中で使用される用語「ジカルボキシフェニル」は、上で定義されたカルボキフェニル、例えばアセトキシフェニルを示し、それは一つ以上の追加のカルボキシ基によってさらに置換される。追加のカルボキシ基はカルボキシフェニルのカルボキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。
【００８０】
用語「ジチオカルボキシフェニル」は、上で定義されたチオカルボキシフェニルを示し、それは一つ以上の追加のチオカルボキシ基によってさらに置換される。追加のチオカルボキシ基はチオカルボキシフェニルのチオカルボキシ基に対してパラ、オルト及び／又はメタ位置であることができる。
【００８１】
ジカルボキシフェニル及びジチオカルボキシフェニルの各々はさらは置換又は非置換でありうる。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００８２】
用語「ヘテロアリール」基は、例えば、窒素、酸素および硫黄などの１個または複数個の原子を環（１つまたは複数）に有し、さらには完全共役のπ電子系を有する単環基または縮合環（すなわち、隣接原子対を共有する環）基を示す。ヘテロアリール基の非限定的な例には、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリンおよびプリンが含まれる。ヘテロアリール基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
【００８３】
「ヘテロ脂環」基は、例えば、窒素、酸素および硫黄などの１個または複数個の原子を環（１つまたは複数）に有する単環基または縮合環基を示す。環はまた、１つまたは複数の二重結合を有することができる。しかしながら、環は完全共役のπ電子系を有しない。ヘテロ脂環基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホニウム、ケトエステル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、エーテル、カルボキシ、チオカルボキシ、チオエーテル、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、グアニル、グアニジノ、およびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。代表例はピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、モルフォリノなどである。
【００８４】
「ハロ」基は、フッ素、塩素、臭素又は沃素を示す。
【００８５】
「アルコキシ」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｏ−アルキル基および−Ｏ−シクロアルキル基の両方を示す。
【００８６】
「アリールオキシ」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｏ−アリール基および−Ｏ−ヘテロアリール基の両方を示す。
【００８７】
「チオヒドロキシ」基は−ＳＨ基を示す。
【００８８】
「チオアルコキシ」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｓ−アルキル基および−Ｓ−シクロアルキル基の両方を示す。
【００８９】
「チオアリールオキシ」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｓ−アリール基および−Ｓ−ヘテロアリール基の両方を示す。
【００９０】
「オキソ」基は、＝Ｏ基を示す。
【００９１】
「カルボニル」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ′基（式中、Ｒ′は、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、（環の炭素を通して結合された）ヘテロアリール、または（環の炭素を通して結合された）ヘテロ脂環である）を示す。
【００９２】
「チオカルボニル」基は−Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ′基（式中、Ｒ′は本明細書中で定義される通りである）を示す。
【００９３】
「Ｃ−カルボキシ」基は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ′基（式中、Ｒ′は本明細書中で定義される通りである）を示す。
【００９４】
「Ｏ−カルボキシ」基はＲ′′Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−基（式中、Ｒ′′は本明細書中で定義される通りである）を示す。
【００９５】
「チオカルボキシ」基はＲ′′Ｃ（＝Ｏ）−Ｓ−基（式中、Ｒ′′は本明細書中で定義される通りである）を示す。
【００９６】
「スルフィニル」基は−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ′′基（式中、Ｒ′′は本明細書中で定義される通りである）を示す。
【００９７】
「スルホニル」基は−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ′′基（式中、Ｒ′′は本明細書中で定義される通りである）を示す。
【００９８】
「トリハロメチル」基は−ＣＸ基（式中、Ｘは本明細書中で定義されるようなハロ基である）を示す。
【００９９】
「トリハロメタンスルホニル」基はＸ３ＣＳ（＝Ｏ）２−基（式中、Ｘは本明細書中で定義されるようなハロ基である）を示す。
【０１００】
「Ｓ−スルホンアミド」基は−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲ′Ｒ′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０１】
「Ｎ−スルホンアミド」基はＲ′Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲ′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０２】
「トリハロメタンスルホンアミド」基はＸ３ＣＳ（＝Ｏ）２ＮＲ′−基（式中、Ｒ′及びＸは各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０３】
「Ｏ−カルバミル」基は−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ′Ｒ′′−基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０４】
「Ｎ−カルバミル」基はＲ′′ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ′−基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０５】
「Ｏ−チオカルバミル」基は−ＯＣ（＝Ｓ）−ＮＲ′Ｒ′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０６】
「Ｎ−チオカルバミル」基はＲ′′ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ′−基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０７】
「アミノ」基は−ＮＲ′Ｒ′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０８】
「Ｃ−アミド」基は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ′Ｒ′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１０９】
「Ｎ−アミド」基はＲ′Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ′′−基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１１０】
「尿素」基は−ＮＲ′Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ′′Ｒ′′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りであり、Ｒ′′′はＲ′またはＲ′′のいずれかとして定義される）を示す。
【０１１１】
「グアニジノ」基は−Ｒ′ＮＣ（＝Ｎ）−ＮＲ′′Ｒ′′′基（式中、Ｒ′，Ｒ′′及びＲ′′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１１２】
「グアニル」基はＲ′Ｒ′′ＮＣ（＝Ｎ）−基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
【０１１３】
「ニトロ」基は−ＮＯ２基を示す。
【０１１４】
「シアノ」基は−Ｃ≡Ｎ基を示す。
【０１１５】
「アゾ」基は−Ｎ＝Ｎ基を示す。
【０１１６】
用語「ホスホニル」は−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ′）（ＯＲ′′）基を示し、式中、Ｒ′及びＲ′′は各々上述の通り定義される。
【０１１７】
用語「ホスフィニル」は−ＰＲ′Ｒ′′基（式中、Ｒ′及びＲ′′は各々上述の通り定義される）を示す。
【０１１８】
それゆえ本発明による好ましい化合物は、例えばフェノールレッド及びその類似体を含み、従って上の式においてＸは炭素であり、Ｙは酸素であり、Ｚは炭素又は硫黄であり、Ｒ５及びＲ６の少なくとも一つはオキソであり、この用語は上で定義された通りである。かかる化合物は、フェノールで縮合され、かつさらに一つ以上のフェノール又はフェニル基によって置換される複素環式環を含み、従って、Ｒ５−Ｒ１０の少なくとも一つは上で定義されたようなフェノール又はヒドロキシフェノールである。Ｒ５−Ｒ１０の少なくとも一つ、好ましくは二つがヒドロキシフェノールである、かかる化合物は例えばピロカテコールバイオレット及びその類似体を含む。
【０１１９】
Ｚが硫黄である、この範ちゅうの化合物は典型的にはフェノールレッド類似体であり、Ｚが炭素である化合物は典型的にはフェノールフタレイン類似体である。フェノールレッド、ピロカテコールバイオレット及びフェノールフタレインの化学構造は図７に示されている。
【０１２０】
本発明によるさらにより好ましい化合物は、Ｘが炭素であり、ＹがＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６であり、Ｚが酸素である上の式を有する化合物を含む。かかる化合物はそれゆえフェニルに縮合されたテトラヒドロピランを含む。
【０１２１】
この範ちゅうの化合物の好ましい例は例えばエピカテキン、エピガロカテキン、エピガロカテキンガラートなどのカテキンの類似体及び誘導体を含み、全ては上の式においてＲ１及びＲ３位置に二つのヒドロキシ基を含み、Ｒ１３−Ｒ１６位置の一つ以上にテトラヒドロピラン環に直接的又は間接的に結合されたヒドロキシフェノール又はジヒドロキシフェノール基を含む。
【０１２２】
以下の実施例の節で示されるように、追加のフェノール部分を含むカテキンガラートは、極めて可能性のある阻害剤であり、従って化合物中のフェニル部分の数の重要な役割を示すことが見出された。
【０１２３】
これらの化合物の追加の好ましい例は、Ｒ９がオキソであり、Ｒ１０が不存在である、フェニル縮合された酸化テトラヒドロピラン環を含む。
【０１２４】
この範ちゅうのさらに追加の好ましい化合物はトコフェロール及びその類似体を含み、それはＲ１３−Ｒ１６位置に一つ以上のアルキル基を含み、そのアルキル基は８個より多い炭素原子を有するアルキル及び／又は低級アルキル（例えばメチル）を含むことができる。
【０１２５】
さらに本発明によれば、上記化合物の各々はさらに、二量体の形態であることができる。かかる二量体の形態は上記式を有する二つの部分を含み、それらの間にＲ１−Ｒ１６を介して直接的又は間接的に結合されている。
【０１２６】
それゆえ本発明に従って使用されうる化合物の例は、限定されないが、フェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、カテキン、エピガロカテキンガラート、エピカテキンガラート、エピカテキン、エピガロカテキン、エリロジクチオール、ケルセチン、ピロシアニジン、ヒドロキシフェニル、トコフェロール、ブロモフェノールレッド、その類似体、その誘導体及びその組み合わせを含む。
【０１２７】
本発明による現在最も好ましい化合物はフェノールレッド、ピロカテコールバイオレット及びカテキンガラートファミリーの化合物（さらなる詳細について以下の実施例の節を参照）である。
【０１２８】
しかしながら、本発明に従って使用されることができる追加の好ましい化合物は上で掲載された化合物のモノ−、ジ−、トリ−及びテトラ−アルコキシ（例えばメトキシ）又はカルボキシ（例えばアセトキシ）誘導体を含む。かかる誘導体は、フェノール又はヒドロキシフェノール部分中の一つ以上のヒドロキシ基が例えばアルキル又はアシル基によって誘導体化され、アルコキシフェニル部分、ジアルコキシフェニル部分、カルボキシフェニル部分又はジカルボキシフェニル部分を生じる化合物を含むことを意味される。
【０１２９】
アルコキシフェニル部分、ジアルコキシフェニル部分、カルボキシフェニル部分又はジカルボキシフェニル部分、並びにその類似体（例えば、上で示したようにアリールオキシフェニル、チオアルコキシフェニルなど）による一つ以上のフェノール部分の置換を生じるヒドロキシ基のかかる誘導体化は極めて有利である。なぜならば、それは化合物の親水性を低下し、従って腸におけるそれらの吸収を増大するからである。
【０１３０】
業界で良く知られているように、親水性化合物は典型的には、ヒトの腸上皮の劣った透過性による相対的に低い吸収を特徴とする。これらの低い吸収パラメータのため、親水性化合物での処置は経口投与時に高い用量の投与を必要とする。従って、上記化合物の親水性の低下は特に腸におけるその増大した吸収を与え、その効果的な経口投与を可能にする。化合物の親水性をそれらの吸収時に低下する効果は、Ｃａｃｏ−２細胞及び平行人工膜透過アッセイ（ｐａｒａｌｌｅｌ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ（ＰＡＭＰＡ））を含む幾つかのモデルで明らかに示された。これらの研究は増大した疎水性が小さな有機化合物の透過性を有意に改良することを示した［Ａｎｏ（２００４）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．１２：２５７−２６４；Ａｎｏ（２００４）１２：２４９−２５５］。
【０１３１】
かかる誘導体の代表例は、限定されないが、フェノールレッドにおける一つのフェノール部分がそれぞれメトキシフェニル又はアセトキシフェニル部分によって置換されるメトキシフェノールレッド及びアセトキシフェノールレッド、フェノールレッドにおける二つのフェノール部分がそれぞれ二つのメトキシフェニル又はアセトキシフェニル部分によって置換されるジメトキシフェノールレッド（明細書中でＰＦ４としても言及される）及びジアセトキシフェノールレッド（明細書中でＰＦ３としても言及される）を含む。ＰＦ３及びＰＦ４の化学構造は図７に与えられる。
【０１３２】
フェノールレッドのモノ誘導体、即ちメトキシフェノールレッド及びアセトキシフェノールレッド及びその類似体は特に重要である。これらのモノ誘導体は、上で詳述したように、（ｉ）ヒドロキシ基の存在による増大した阻害活性；（ｉｉ）その部分的な親水性による増大した経口生物学的利用率；及び（ｉｉｉ）その部分的な疎水性による増大した吸収率を同時に与える。
【０１３３】
化合物の阻害活性に対するヒドロキシ基の効果は、以下の実施例の節において示されている（例えば実施例５参照）。経口生物学的利用率に対する化合物の親水性の効果は、業界で良く知られており、例えばＨｉｔｅ他（２００３）Ｐａｒｔ １．Ｏｒａｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｐｏｏｒｌｙ Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｄｒｕｇｓ．ＰＭＰＳ Ｓｕｍｍｅｒ ｐｐ：３８−４０に示されている。
【０１３４】
従って、本発明のフェノールレッドモノ誘導体は、増大した阻害活性、増大した経口生物学的利用率及び増大した吸収率を組み合わせることによって極めて有利である。
【０１３５】
二つのヒドロキシ基がアルキル又はアシル基によって誘導体化される幾つかのフェノールレッド誘導体は知られているが、これらの化合物はアミロイド原繊維形成を阻害するために今まで使用されていなかった。さらに、上述のフェノールレッドのモノ誘導体の選択的合成はこれまで実施されてこなかった。
【０１３６】
従って、本発明の別の側面によれば、以下のような一般式ＩＩを有する新規なフェノールレッド誘導体が提供される：
式中、Ｑ１及びＱ２は各々独立して、酸素及び硫黄からなる群から選択され；
Ａ１及びＡ２は各々独立して、水素、アルキル、アリール、シクロアルキル及びカルボニルからなる群から選択され、
Ｑ１及びＱ２が各々酸素であるとき、Ａ１及びＡ２の一方は水素であり、他方はアルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択される。
【０１３７】
それゆえ、これらのフェノールレッド誘導体は例えば、Ｑ１及びＱ２が各々酸素であり、Ａ１及びＡ２の一方が水素であり、他方がアルキル、好ましくはメチルであるメトキシフェノールレッド、及びＱ１及びＱ２が各々酸素であり、Ａ１及びＡ２の一方が水素であり、他方がカルボニル、好ましくはアセチル（Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３基）であるアセトキシフェノールレッドを含む。
【０１３８】
上記化合物は、そのまま又はその薬学的に受容可能な塩又はプロドラッグとして投与されることができるか又は本発明のこの及び他の側面に利用されることができる。
【０１３９】
用語「プロドラッグ」は、インビボで活性化合物（活性親ドラッグ）に変換される薬剤を示す。プロドラッグは典型的には、親ドラッグの投与を容易にするために有用である。それらは例えば経口投与によって生物学的利用可能であればよく、親ドラッグはそうでなくてもよい。プロドラッグはまた、薬学的組成物において親ドラッグと比較して改良された溶解性を有してもよい。プロドラッグはまた、インビボでの活性化合物の徐放性を達成するために使用されることが多い。プロドラッグの限定されない例は一つ以上のフェノール部分を有する本発明の化合物であり、それはエステル（「プロドラッグ」）として投与される。かかるプロドラッグはインビボで加水分解され、それによって遊離化合物（親ドラッグ）を与える。選択されたエステルはプロドラッグの加水分解速度と溶解性の両方に影響を与えうる。
【０１４０】
語句「薬学的に受容可能な塩」は、親化合物の電荷を有する種及びその対イオンを示し、それは典型的には投与された化合物の生物学的活性及び特性をなくさずに、親化合物の溶解性を変更したり及び／又は親化合物による生物体に対する有意な刺激を減らすために使用される。薬学的に受容可能な塩の限定されない例は、アンモニウム、ナトリウム、カリウムなどのフェノールアニオン及びカチオンであるだろう。
【０１４１】
上記化合物はさらに、水和物として、即ち化合物と水分子の間で形成される変化可能な化学量論（例えば、ジ−、トリ−、テトラ−、ペンタ−、ヘキサ−など）の錯体として利用または投与されることができる。
【０１４２】
好ましくは、本発明の化合物は４ｍｇ／ｋｇ×ｈｒを越えない濃度で投与される。
【０１４３】
本発明の化合物は、そのものとして、または、薬学的に受容可能なキャリアと混合される薬学的組成物の一部として個体に与えることができる。
【０１４４】
本明細書で使用する「薬学的（医薬）組成物」は、本明細書に記載される活性成分の１つまたは複数と、他の化学成分（例えば生理学的に適切なキャリアおよび賦形剤）との製剤を指す。薬学的組成物の目的は処置される対象への化合物の投与を容易にすることである。
【０１４５】
本明細書において「活性成分（有効成分）」という用語は、生物学的効果を説明できる化合物を指す。
【０１４６】
以下、交互に用いられる「生理学的に受容可能なキャリア」および「薬学的に受容可能なキャリア」という用語は、対象に対して著しい刺激の原因にならず、かつ投与される化合物の生物学的活性および特性を抑止しないキャリアまたは希釈剤を指す。本発明の薬学的組成物の好ましいキャリアは、限定されないが、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、有機媒体および水性媒体の両方で広範囲の可溶性を有する生物適合ポリマーを含む［Ｍｕｔｔｅｒ他（１９７９）］。
【０１４７】
本明細書において「賦形剤」という用語は、活性成分の投与をさらに容易にするために薬学的組成物に添加される不活性物質を指す。賦形剤の例には炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖類、様々なタイプのデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコールなどがあるが、これらに限定されない。
【０１４８】
薬物の製剤および投与に関する技術は「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（ペンシルバニア州イーストン）の最新版に見いだすことができ、それは参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４９】
適当な投与経路としては、例えば経口送達、直腸送達、経粘膜送達、特に経鼻腔送達、腸管送達または腸管外送達（筋肉内注射、皮下注射、および骨髄内注射、ならびに髄腔内注射、直接脳室内注射、静脈内注射、腹腔内注射、鼻腔内注入、または眼内注射を含む）などを挙げることができる。
【０１５０】
あるいは、全身的な方法よりもむしろ、例えば患者の身体の特定の領域に直接製剤を注射する局所的な方法で製剤を投与してもよい。
【０１５１】
本発明の薬学的組成物は当技術分野で周知の方法により、例えば通常の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、研和、乳化、カプセル化、捕捉または凍結乾燥法などを利用して製造することができる。
【０１５２】
本発明に従って使用される薬学的組成物は、活性成分を薬学的に使用できる製剤に加工しやすくする賦形剤および補助剤を含む１つまたは複数の生理学的に受容可能なキャリアを使って、常法により製剤化することができる。適切な製剤は選択した投与経路に依存する。
【０１５３】
注射の場合は、水性溶液（好ましくはハンクス液、リンゲル液または生理食塩水緩衝液などの生体適合緩衝液）に、本発明の活性成分を製剤化することができる。経粘膜投与の場合は、浸透される壁に適切な浸透剤を製剤中に添加する。そのような浸透剤は当技術分野では広く知られている。
【０１５４】
経口投与の場合は、活性化合物を当技術分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアと混合することにより、化合物を容易に製剤化することができる。かかるキャリアを使用することにより、本発明の化合物を、患者による経口摂取用の錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁剤などとして製剤化することができる。経口用医薬品は固形の賦形剤を使用し、随意に、得られた混合物を粉砕し、所望により適当な補助剤を添加してから、顆粒の混合物を加工して、錠剤または糖衣錠の核錠を得ることによって、製造することができる。適切な賦形剤には、充填剤、例えば乳糖、ショ糖、マンニトールまたはソルビトールを含む糖類、セルロース調製物、例えばトウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、バレイショデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの生理的に受容可能なポリマーがある。所望により、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはその塩（例えばアルギン酸ナトリウム）などの崩壊剤を添加してもよい。
【０１５５】
糖衣錠の核錠には適当なコーティングが施される。この目的には濃厚な糖溶液を使用することができ、その糖溶液は、所望により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液、および適当な有機溶媒または溶媒混合物を含むことができる。識別のためまたは活性化合物用量の様々な組合わせを特徴づけるために、錠剤または糖衣錠剤皮に染料または顔料を加えてもよい。
【０１５６】
経口使用が可能な薬学的組成物には、ゼラチン製の押込み式カプセル剤ならびにゼラチンと可塑剤（グリセロールまたはソルビトールなど）とでできた軟密封カプセル剤が含まれる。押込み式カプセル剤は、乳糖などの充填剤、デンプンなどの結合剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、および所望により安定剤と混合した活性成分を含むことができる。軟カプセル剤の場合は、活性効成分を適当な液体（脂肪油、液体パラフィンまたは液体ポリエチレングリコールなど）に溶解または懸濁することができる。さらに安定剤を加えてもよい。経口投与用製剤は全て、選択した投与経路に適した投与量でなければならない。
【０１５７】
経口腔粘膜投与の場合、本組成物は常法によって製剤化された錠剤または口中錠の形態をとることができる。
【０１５８】
鼻腔吸入による投与の場合、本発明に従って使用するための活性成分は、適当な噴射剤（例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、または二酸化炭素）を使って、加圧容器または噴霧器から、エアロゾルスプレーの形で便利に送達される。加圧エアロゾルの場合、投与量単位は、バルブを設けて、計量した量を送達することによって、決定することができる。本化合物と適当な粉末基剤（乳糖またはデンプンなど）との粉末混合物を含む、ディスペンサーに使用するための（例えばゼラチン製）カプセルおよびカートリッジを処方することもできる。
【０１５９】
本明細書に記載の製剤は、例えばボーラス注射または持続注入などによる非経口投与用に製剤化することもできる。注射用製剤は、例えばアンプルなどに一回量型として、または多用量容器に入れて、所望により保存剤を添加して提供することができる。本組成物は油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルションであることができ、懸濁化剤、安定剤および／または分散剤などの調剤用薬剤を含んでもよい。
【０１６０】
非経口投与用の薬学的組成物として、水溶性活性製剤の水溶液が挙げられる。さらに、活性成分の懸濁液を適当な油性または水性注射懸濁液として調製することもできる。適切な親油性の溶媒またはビヒクルには、ゴマ油などの脂肪油、オレイン酸エチルなどの合成脂肪酸エステル、トリグリセリドまたはリポソームなどがある。水溶性注射懸濁剤は、懸濁液の粘度を増加させる物質、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールまたはデキストランなどを含んでもよい。所望により、懸濁剤は、高濃度溶液の調製物を得ることができるように、活性成分の溶解度を増加させる適当な安定化剤または化合物をさらに含んでもよい。
【０１６１】
あるいは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル（例えば滅菌パイロジェンフリー水に基づく溶液）で構成させる粉末の形態をとってもよい。
【０１６２】
本発明の製剤は、例えば通常の坐剤用基剤（カカオ脂または他のグリセリドなど）を使って、坐剤または停留浣腸剤などの直腸用組成物に製剤化することもできる。
【０１６３】
本発明で使用するのに好適な薬学的組成物は、活性成分が意図した目的を達成するのに有効な量で含まれる組成物を含む。より具体的には、治療有効量とは、病気の症状を予防、緩和または改善するのに有効な、あるいは処置される対象の生存を延長させるのに有効な活性成分の量を意味する。
【０１６４】
治療有効量の決定は当業者の能力の範囲内でよい。
【０１６５】
本発明の方法において使用される製剤に関して、治療有効量または用量は、まずインビトロアッセイによって推定することができる。例えば、用量を、動物モデルで策定することができ、そのような情報を使って、ヒトで有効な用量をより正確に決定することができる。
【０１６６】
本明細書に記載する活性成分の毒性および治療効力は、標準的なインビトロ薬学的手法により、細胞培養または実験動物で決定することができる。これらのインビトロ、細胞培養アッセイおよび動物実験で得られたデータは、ヒトに使用する用量範囲の策定に利用することができる。投与量は、利用する投与経路及び使用する投与形態に依存して変動しうる。個々の医師は患者の状態を考慮して正確な処方、投与経路および投与量を選択することができる（例えば「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」（１９７５）第１章、第１頁のＦｉｎｇｌ他の記事を参照されたい）。
【０１６７】
処置すべき状態の重症度および反応性に応じて、投与は単回投与または複数回投与とすることができる。この場合、処置は数日〜数週間または治癒が達成されるかもしくは疾患状態の軽減が達成されるまで持続する。
【０１６８】
投与すべき組成物の量は、当然ながら、処置対象、病気の重症度、投与方法、処方医の判断などに依存するだろう。
【０１６９】
また、適合する医薬キャリア中に調剤された本発明の製剤を含む組成物を製造し、適当な容器に入れ、表示された状態の処置に関する表示を与えることができる。
【０１７０】
本発明の組成物は、所望により、活性成分を含む１つまたは複数の単位剤形を含有するパックまたはディスペンサー装置、例えばＦＤＡ認可キットとして提供することができる。パックは、例えば、ブリスターパックのように金属箔またはプラスチック箔からなってもよい。パックまたはディスペンサー装置には、投与上の注意を添付してもよい。パックまたはディスペンサーには、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって指定された形式で容器に添付された、組成物の形状またはヒトもしくは動物への投与に関する当局の認可を示す通知を載せてもよい。そのような通知は、例えば処方薬に関して米国食品医薬品局によって許可されたラベリング、または許可された添付書類であることができる。
【０１７１】
本発明に従ったアミロイド関連疾患の処置は業界で知られた他の処置方法と組み合わせてもよいことは認識されるだろう（即ち、組み合わせ処置）。従って、本発明の化合物は追加の抗アミロイド薬と共に（同時に又は別個に）投与されてもよい。かかる抗アミロイド薬の例は、限定されないが、アミロイド脱安定化抗体、アミロイド脱安定化ペプチド及び抗アミロイド小分子（かかる薬剤のさらなる詳細は前述の背景技術で与えられる）を含む。
【０１７２】
本発明の追加の目的、利点及び新規な特徴は、下記実施例を考察すれば、当業技術者には明らかになるであろう。なおこれら実施例は本発明を限定するものではない。さらに、先に詳述されかつ本願の特許請求の範囲の項に特許請求されている本発明の各種実施態様及び側面の各々は下記実施例の実験によって支持されている。
【実施例】
【０１７３】
上記説明とともに、以下の実施例を参照して本発明を例示する。なおこれら実施例によって本発明は限定されない。
【０１７４】
本明細書で使用される用語と本発明で利用される実験方法には、分子、生化学、微生物学及び組み換えＤＮＡの技法が広く含まれている。これらの技法は文献に詳細に説明されている［例えば以下の諸文献を参照されたい。「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」Ｓａｍｂｒｏｏｋら１９８９年；Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｒ．Ｍ．編１９９４年「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｉ〜ＩＩＩ巻；Ａｕｓｕｂｅｌら著１９８９年「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，米国メリーランド州バルチモア；Ｐｅｒｂａｌ著「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，米国ニューヨーク１９８８年；Ｗａｔｓｏｎら、「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ」Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ、米国ニューヨーク；Ｂｉｒｒｅｎら編「Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ」１〜４巻、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、米国ニューヨーク１９９８年；米国特許の４６６６８２８号、４６８３２０２号、４８０１５３１号、５１９２６５９号及び５２７２０５７号に記載される方法；Ｃｅｌｌｉｓ， Ｊ．Ｅ．編「Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」Ｉ〜ＩＩＩ巻１９９４年；Ｃｏｌｉｇａｎ， Ｊ．Ｅ．編「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」Ｉ〜ＩＩＩ巻１９９４年；Ｓｔｉｔｅｓら編「Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（第８版）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ、米国コネティカット州ノーウォーク１９９４年；ＭｉｓｈｅｌｌとＳｈｉｉｇｉ編「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．、米国ニューヨーク１９８０年；また利用可能な免疫検定法は、例えば以下の特許と科学文献に広範囲にわたって記載されている。米国特許の３７９１９３２号、３８３９１５３号、３８５０７５２号、３８５０５７８号、３８５３９８７号、３８６７５１７号、３８７９２６２号、３９０１６５４号、３９３５０７４号、３９８４５３３号、３９９６３４５号、４０３４０７４号、４０９８８７６号、４８７９２１９号、５０１１７７１号及び５２８１５２１号；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．編「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」１９８４年；Ｈａｍｅｓ， Ｂ．Ｄ．及びＨｉｇｇｉｎｓ Ｓ．Ｊ．編「Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」１９８５年；Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．及びＨｉｇｇｉｎｓ Ｓ．Ｊ．編「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」１９８４年；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ， Ｒ．Ｉ．編「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」１９８６年；「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ」ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ １９８６年；Ｐｅｒｂａｌ， Ｂ．著「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」１９８４年及び「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」１〜３１７巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；「ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、米国カリフォルニア州サンディエゴ１９９０年；Ｍａｒｓｈａｋら、「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ−Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ」、ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ、１９９６年；なおこれらの文献類は、あたかも本願に完全に記載されているように援用するものである］。その外の一般的な文献は、本明細書を通じて提供される。本明細書に記載の方法は当業技術界で周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。本明細書に含まれるすべての情報は本願に援用するものである。
【０１７５】
材料および方法
ペプチド合成：
固相法を使用するペプチド合成を、ｈＩＡＰＰ２２−２９（配列番号１）およびｈＩＡＰＰ２０−２９（配列番号２）に対してＰｅｐｔｒｏｎ，Ｉｎｃ（Ｔａｅｊｅｏｎ、韓国）によって、ｈＩＡＰＰ１−３７（配列番号３）に対してＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ（ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ ＣＡ、米国）によって行なった。ペプチドの正体はイオンスプレー質量分析法によって確認され、ペプチドの純度は逆相高圧液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によって確認された。ｈＩＡＰＰ２２−２９およびｈＩＡＰＰ２０−２９に対するストック溶液は、５０ｍＭの濃度でＭｅ２ＳＯ（ＤＭＳＯ）にペプチドの凍結乾燥形態を溶解することによって調製された。ｈＩＡＰＰ１−３７のストック溶液は、４００μＭの濃度で３，３，３，３′，３′，３′−ヘキサフルオロ−２−プロパノール（ＨＦＩＰ）にペプチドの凍結乾燥された形態を溶解することによって調製された。いかなる事前の凝集も避けるためにストック溶液は各実験前に２分間超音波処理された。
【０１７６】
材料−フェノールレッドはＳｉｇｍａ（Ｒｅｈｏｖｏｔ、イスラエル）から購入された。ピロカテコールバイオレットはＲｉｅｄｅｌ−ｄｅ Ｈａｅｅｎ（Ｓｅｅｌｚｅ、ドイツ）から購入された。ジアセトキシフェノールレッド（ＰＦ３）およびジメトキシフェノールレッド（ＰＦ４）はＴＡＭＩ ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｌｔｄ．（Ｈａｉｆａ、イスラエル）によって合成され、エピガロカテキンガラート、ガロカテキンガラート、ガロカテキン、エピガロカテキン、カテキンおよびコンゴーレッドはＳＩＧＭＡ（Ｒｅｈｏｖｏｔ、イスラエル）から購入され、エピカテキンガラートおよびエピカテキンはＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓから購入された。
【０１７７】
速動性凝集アッセイ：
ｈＩＡＰＰ２２−２９およびｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチドのストック溶液は、凍結乾燥されたペプチドを１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．２）緩衝液に希釈して１ｍＭペプチドおよび４％ＤＭＳＯの最終濃度にすることによって調製された。濁度データは室温で４０５または５６０ｎｍで収集された。試験された試料と同じ量のＤＭＳＯを含有する緩衝溶液はブランクとして使用された。濁度は使い捨てＵＶｅｔｔｅキュベット（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、ドイツ）およびＳｃｉｎｃｏ Ｓ−３１００分光光度計を使用して測定された。
【０１７８】
チオフラビンＴ蛍光アッセイ：
ｈＩＡＰＰ１−３７の原繊維化はチオフラビンＴ色素結合アッセイによってモニターされた。ｈＩＡＰＰ１−３７ストック溶液は阻害剤ありまたはなしで１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）において４μＭの最終濃度に、そして１％（ｖｏｌ）の最終ＨＦＩＰ濃度に希釈された。希釈直後、試料を４℃で２００００ｇで２０分間遠心分離し、上澄み画分を蛍光測定のために使用した。各測定ごとに、ＴｈＴを添加して３μＭの最終濃度にし、測定をＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（励起４５０ｎｍ，２．５ｎｍスリット；発光４８０ｎｍ，１０ｎｍスリット）を使用して実施した。フェノールレッド濃度依存阻害実験に対して、試料を、最大フェノールレッド濃度が４μＭを越えないように１０倍希釈し、Ｊｏｂｉｎ Ｙｖｏｎ Ｈｏｒｉｂａ Ｆｌｕｏｒｏｍａｘ ３蛍光計（励起４５０ｎｍ，２．５ｎｍスリット；発光４８２ｎｍ，５ｎｍスリット）を使用して測定した。バックグラウンドは全ての試料から差し引かれた。
【０１７９】
円偏光二色性分光分析：
二次構造形成を追及するために、ｈＩＡＰＰ１−３７（４μＭ）を、阻害剤（４０μＭ）ありまたはなしで上述のように調製した。スペクトルは、ＡＶＩＶ ２０２ ＣＤ分光計を使用して、１ｎｍ間隔および４秒平均化時間で、２００−２５０ｎｍで２５℃で記録された。最終走査値はベースラインの減算を表わし（ｈＩＡＰＰの場合の緩衝液、及び阻害アッセイについてはフェノールレッドを有する緩衝液）、ＡＶＩＶ ＣＤＳ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．７３ソフトウェアを使用して平滑化した。
【０１８０】
透過電子顕微鏡観察：
凝集アッセイからのｈＩＡＰＰ２２−２９またはｈＩＡＰＰ２０−２９、および蛍光アッセイからのｈＩＡＰＰ１−３７の１０μＬ試料を、４００メッシュの銅グリッド（ＳＰＩ ｓｕｐｐｌｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｃｈｅｓｔｅｒ ＰＡ）上に置き、カーボン安定化ホルムバールフィルムによって覆った。１分後、過剰な液体を除き、グリッドを２％酢酸ウラニル水溶液でさらに２分間ネガティブ染色した。試料を８０ｋＶで操作するＪＥＯＬ １２００ＥＸ電子顕微鏡で観察した。
【０１８１】
ＭＴＴアッセイ−βＴＣ−ｔｅｔ細胞［Ｆｌｅｉｓｃｈｅｒ，Ｎ．，Ｃｈｅｎ Ｃ．，Ｓｕｒａｎａ，Ｍ．，Ｌｅｉｓｅｒ， Ｍ．，Ｒｏｓｓｅｔｔｉ，Ｌ．，Ｐｒａｌｏｎｇ， Ｗ．およびＥｆｒａｔ，Ｓ．（１９９８）Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌｌｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｂｅｔａ−ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４７，１４１９−１４２５］またはＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ＃ ＣＲＬ−１７２１）を、それぞれ２４ウェルプレート（２×１０５／ウェル）または９６ウェルプレート（１×１０４／ウェル）に置き、２４時間接着させた。合成ｈＩＡＰＰ１−３７ストック溶液を希釈してフェノールレッドありまたはなしのＤＭＥＭを含有する血清不含増殖培地［Ｆｌｅｉｓｃｈｅｒ（１９９８）Ｓｕｐｒａ］において４μＭの最終濃度にした。希釈直後、試料を２００００ｇで２０分間４℃で遠心分離し、上澄みを３０分間窒素で泡立たせて残留ＨＦＩＰを蒸発した。細胞をＰＢＳで二回洗浄し、２４時間上澄みでインキュベートした。ＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ Ｍ−２１２８）を次いで３時間添加した後、溶解緩衝液を添加して一晩インキュベートした。アッセイは製造者の指示に従って実施された。試料は５７０ｎｍで読まれた。細胞生存率はフェノールレッドありまたはなしのそれぞれの培地においてｈＩＡＰＰの不存在下でインキュベートされた細胞と比較して計算された。
【０１８２】
走査電子顕微鏡観察：細胞を、ＭＴＴアッセイと同じ条件下でガラス顕微鏡カバースリップ上で増殖した。ｈＩＡＰＰでのインキュベーション直後、細胞を２％グルタルアルデヒド（ｖ／ｖ）で固定し、４℃で２４時間貯蔵した。細胞はエタノールの濃度の増加（３０％，５０％，７０％，９０％，９５％，１００％）とともに連続的に脱水され、臨界点乾燥器で乾燥された。標本カバースリップをコロイド金で被覆し、２５ｋＶで操作するＪＯＥＬ ＪＳＭ ８４０Ａ顕微鏡を使用して観察した。
【０１８３】
実 施 例 １
ｈＩＡＰＰのコアアミロイド形成フラグメントの凝集についてのフェノールレッドの効果
ｈＩＡＰＰ（ｈＩＡＰＰ２２−２９，ｈＩＡＰＰ２０−２９）のコアアミロイド形成フラグメントは水溶液で凝集する。かかる凝集挙動はアミロイド形成のための予備アッセイとして役立った。
【０１８４】
フェノールレッドのアミロイド形成を阻害する能力を評価するために、１ｍＭ ｈＩＡＰＰ２２−２９およびｈＩＡＰＰ２０−２９（それぞれ配列番号１および配列番号２）の凝集は４０ｍＭフェノールレッドの不存在または存在下で調査された。ｈＩＡＰＰコアペプチドに対するフェノールレッド分子の特異性を同定するため、極めて小さい分子−スルホン基の不足によってのみ異なるフェノールフタレインはコントロールとして使用された（図７）。
【０１８５】
図１ａ−ｂに示されるように、ｈＩＡＰＰ２０−２９凝集速度はｈＩＡＰＰ２２−２９より低く、全ての試料においてほぼ２時間の遅延時間が明らかであった。フェノールフタレインを使用する阻害効果は全く明らかでなく、その凝集曲線は３時間後に劇的に増大したｈＩＡＰＰ２０−２９凝集と同様であった（図１ｂ）。阻害剤としてフェノールレッドを使用することは凝集を減少させ、それは３時間のインキュベーション後の凝集レベルにおいて極めて小さい上昇を示した。
【０１８６】
図１ａに示されるようにｈＩＡＰＰ２２−２９は数秒内に凝集し、その濁度は１０分のインキュベーション後に平坦域に達した。しかしながら、フェノールレッドの存在下では、ｈＩＡＰＰ２２−２９の凝集は実質的に終結され、ずっと低い速度および濁度の一定レベルを示した。
【０１８７】
実 施 例 ２
円偏光二色性（ＣＤ）を使用する二次構造評価
野生型ｈＩＡＰＰ１−３７（配列番号３）は原繊維化プロセス内で無秩序なコイル立体構造からβシートへの変移を受ける。この二次構造の変移はフェノールレッドの存在または不存在下で行なわれる。ｈＩＡＰＰ１−３７はＨＦＩＰに溶解され、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）に希釈されて１％ ＨＦＩＰおよび４μＭの最終濃度にされた。ペプチドの二次構造の変化は９６時間モニターされた。
【０１８８】
図２ａに示されるように、フェノールレッドの不存在下では、ｈＩＡＰＰ１−３７は６時間内でβシート構造への初期変移および２４時間内で最大楕円率（２１８ｎｍ、それはβシート構造に相当する）を示した。これらの構造は９６時間相対的に安定したままであった。
【０１８９】
１０モル比のフェノールレッドを添加すると、βシート立体構造への変移は有意に阻害され（図２ｂ）、２１８ｎｍの楕円率の初期の極めて低いレベルは４６時間後に測定され、極めて遅い増大が９６時間後に示された。
【０１９０】
実 施 例 ３
チオフラビンＴ蛍光によるアミロイド原繊維形成
チオフラビンＴ（ＴｈＴ）はアミロイド形成のレベルを検出するために一般に使用される。ｈＩＡＰＰ１−３７溶液は上記のように調製された。フェノールレッドの存在または不存在下でのインキュベーションおよび各試料への３μＭ ＴｈＴの添加後、蛍光を測定した。
【０１９１】
図３ａに示されるように、フェノールレッドの不存在下では、ｈＩＡＰＰ１−３７は約２０時間の遅延段階を示し、その後蛍光レベルが迅速に増大した。４０μＭのフェノールレッドの存在下では、極めて低くかつ一定のレベルの蛍光がアッセイ全体に対して検出された。ｈＩＡＰＰペプチドの凝集についてのフェノールレッドの用量依存阻害効果は図３ｂ−ｃに示される。高いフェノールレッド濃度（ｈＩＡＰＰに対して４倍より高いフェノールレッド）は２４時間後、一定の低い蛍光レベルを示した。一週間のインキュベーション後であっても、濃度依存阻害は同様であり（図３ｃ）、約９０％の阻害レベルは２０μＭ以上のフェノールレッド濃度に対して達成された。これらの結果はフェノールレッドがアミロイド原繊維形成の潜在的な阻害剤であることを実証する。
【０１９２】
実 施 例 ４
ＴＥＭによって測定されるフェノールレッドを有するｈＩＡＰＰ原繊維の形態
（実施例３に記載される）凝集アッセイからとったｈＩＡＰＰ２２−２９およびｈＩＡＰＰ２０−２９の試料を透過電子顕微鏡を使用して視覚化した。図４ａに示されるように、ｈＩＡＰＰ２２−２９ペプチドの両試料において凝集の開始後３および７２時間で明瞭で良く規定されたアミロイド繊維が観察され、７２時間後繊維密度および幅において小さな増加があった。対照的に、フェノールレッドの存在下では、３時間後に繊維は全く観察されなかったが、７２時間後に異なる形態を有するほんの少量の原繊維が観察された。同じ結果はフェノールレッド阻害剤の存在下の２４時間インキュベーション後のｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチド（図４ｂ）で得られた。同じ条件下でフェノールフタレインを使用して阻害は全く観察されず、原繊維構造はＴＥＭグリッド上で明白であった。
【０１９３】
図４ｃに示されるように、ｈＩＡＰＰ１−３７アミロイド−シスの阻害剤としてフェノールレッドを使用するとき、同じ阻害傾向が観察された。繊維形成における有意な速動性阻害は繊維形成の第一段階において存在し（約３０時間）、そこではフェノールレッドの存在下では繊維は全く存在しなかった。
【０１９４】
実 施 例 ５
緑茶ポリフェノールでのＩＡＰＰ原繊維形成の阻害
ＴｈＴはｈＩＡＰＰ１−３７原繊維形成についての緑茶ポリフェノール化合物の阻害効果を決定するために使用された（実施例３参照）。
【０１９５】
結果：
図５ａに示されるように、全てのポリフェノール化合物はｈＩＡＰＰ単独と比較してｈＩＡＰＰ１−３７原繊維形成について長期間阻害効果を有していた。この阻害はコンゴーレッドの阻害効果に類似していた。ＩＡＰＰ単独の蛍光値は４８時間後、増大したが、阻害剤の存在下のｈＩＡＰＰ１−３７蛍光の初期増加は７２時間後のみ検出可能であった。
【０１９６】
阻害効果のより詳細な観察はガラート基を有する全てのポリフェノール（即ち、追加のフェノール環を含有する）は良好な阻害剤であることを示した（図５ｂ）。これは阻害効果について追加の芳香族環に対する重要性があることを示唆しうる。この結果はβ−アミロイドについてのアポモルフィンの阻害効果およびスクレピー−関連プリオンタンパク質についての種々のポリフェノールの阻害効果を記載する二つの他のグループ［ＬａｓｈｕｅｌらＪ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．２００２ ２７７：４２８８１−９０；ＫｏｃｉｓｃｏらＪ．Ｖｉｒｏｌ．２００４ ７７：１０２８８−１０２９４］によって独立して確認された。
【０１９７】
実 施 例 ６
ピロカテコールバイオレットによるヒト小島アミロイドポリペプチド原繊維形成の用量依存阻害
実験手順
チオフラビンＴ蛍光アッセイ：ｈＩＡＰＰ１−３７の原繊維化は４０μＭまたは４μＭの阻害剤濃度を使用して、上記のように、チオフラビンＴ（ＴｈＴ）色素結合アッセイによってモニターされた。
【０１９８】
結果
図６に示されるように、ＴｈＴアッセイで得られた結果はピロカテコールバイオレットがｈＩＡＰＰ１−３７によるアミロイド形成を効果的に阻害することを明らかに示す。ピロカテコールバイオレットのないｈＩＡＰＰは蛍光レベルにおいて急速な増加を示したが、第一時間ポイント（２．６時間）で既にピーク値によって示されるように、４μＭピロカテコールバイオレットの追加はアッセイ全体にわたって有意に低いレベルの蛍光を生じ、４０μＭピロカテコールバイオレットの追加でさらに強い阻害効果が検出された。
【０１９９】
実 施 例 ７
フェノールレッド誘導体によるＩＡＰＰ原繊維形成の阻害
フェノールレッドと比較して原繊維形成を阻害するための上記のフェノールレッド誘導体ＰＦ３（ジアセトキシフェノールレッド、図７）およびＰＦ４（ジメトキシフェノールレッド、図７）の能力を評価するために、蛍光ＴｈＴ速動性アッセイを実施した。
【０２００】
結果
図８ａ−ｂから明らかなように、ＰＦ３およびＰＦ４（４０μＭ）分子の両方はフェノールレッド分子に対して低下した阻害効果を示した。ＰＦ３分子は安定していないことが見出され、数分内の可溶化で破粋する傾向を示した。ＰＦ４分子の相対的な阻害効果は、特に試料が遠心分離されないとき、より明白であった（図８ｂ）。
【０２０１】
実 施 例 ８
フェノールレッドはｈＩＡＰＰで処理されたＰＣ１２細胞についての生存効果を導き出す
ｈＩＡＰＰ１−３７凝集体によって誘導された細胞毒性についてのフェノールレッドの効果を研究するために、ＰＣ１２細胞系を使用した。細胞は、新鮮なｈＩＡＰＰ１−３７を増殖培地に加えながら、フェノールレッドの段階的濃度ありまたはなしで９６ウェルプレートで増殖された。２４時間のインキュベーション後、細胞生存率は、ＩＡＰＰ試料吸光度を、同じフェノールレッド濃度を含有する非ＩＡＰＰコントロールで置換することによって計算された。図９から明らかなように、ＭＴＴ細胞生存率アッセイはフェノールレッドによる細胞の濃度依存救助を示した。
【０２０２】
実 施 例 ９
フェノールレッドは膵β細胞についてのアミロイド凝集体の細胞毒性効果を阻害する
培養物中の膵β細胞についてのｈＩＡＰＰアミロイド集合体の細胞毒性効果を調整するためのフェノールレッドの能力を取扱った。グルコースに対して通常のインシュリン分泌応答を有する高度に分化されたマウスβ細胞系（βＴＣ−ｔｅｔ Ｆｌｅｉｓｃｈｅｒ １９９８ ＳＵｐｒａ）を使用した。細胞はフェノールレッドありまたはなしで増殖され、新鮮なｈＩＡＰＰを増殖培地に添加した。ＭＴＴ細胞生存性アッセイは、培地中のフェノールレッドの存在がβ細胞をｈＩＡＰＰ集合体の細胞毒性効果から保護し、細胞生存性を５０％から８０％へ増大する（ｐ＜０．０５）（図１０ａ）ことを明らかに示した。ｈＩＡＰＰの存在下で増殖されたβ細胞の走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）分析はｈＩＡＰＰ細胞毒性について前に報告したように広範な膜ブレブ形成［Ｓａａｆｉ，Ｅ． Ｌ．，Ｋｏｎａｒｋｏｗｓｋａ，Ｂ．，Ｚｈａｎｇ，Ｓ．，Ｋｉｓｔｌｅｒ，Ｊ．ａｎｄ Ｃｏｏｐｅｒ，Ｇ．Ｊ．（２００１）Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｈａｔ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｓ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｂｙ ｗｈｉｃｈ ｈｕｍａｎ ａｍｙｌｉｎ ｅｖｏｋｅｓ ｄｅａｔｈ ｉｎ ＲＩＮｍ５Ｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｉｓｌｅｔ ｂｅｔａ−ｃｅｌｌｓ，Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔ．２５，３３９−３５０］、および細胞の大多数の典型的な細胞形態の崩壊（図１０ｄ）を示した。他方、未処理細胞（図１０ｈ）とｈＩＡＰＰおよびフェノールレッドの存在下で増殖された細胞（図１０ｆ）の間で実際に有意な差は全く観察されることができなかった。両方の場合において、細胞のほとんどは通常の形態を維持した。目に見えるブレブ形成は全くなく、微小突起および葉状仮足の膜範囲が存在していた。さらに、低倍率のＳＥＭ検査で、β細胞の通常のアレイはフェノールレッドで保護された細胞およびコントロール細胞（それぞれ図１０ｅおよび１０ｇ）で観察されることができた。著しく対照的に、フェノールレッド保護のないＩＡＰＰインキュベーションでは単離されかつ形態変更された細胞だけが観察されることができた。
【０２０３】
これらの結果を総合すると、フェノールレッドが細胞、特に膵β細胞についてのｈＩＡＰＰ１−３７原繊維の細胞毒性効果を阻害することを示す。
【０２０４】
分かりやすくするため別個の実施態様で説明されている本発明のいくつもの特徴は、組み合わせて単一の実施態様にして提供することもできることは分かるであろう。逆に、簡略化するため単一の実施態様で説明されている本発明の各種特徴は、別個に又は適切なサブコンビネーションで提供することもできる。
【０２０５】
本発明を、その具体的実施態様とともに説明してきたが、多くの変形と変更が当業技術者には明らかであることは明白である。したがって、本発明は、本願の特許請求の範囲の精神と広い範囲内に入っているこのような変形と変更をすべて包含することが意図される。本明細書に記載のすべての刊行物、特許及び特許願は、あたかも、個々の刊行物、特許又は特許願の各々が、本願に具体的にかつ個々に参照して示されているのと同程度に、全体を本願に援用するものである。さらに、本願における任意の文献の引用もしくは確認は、このような文献が本発明に対する従来技術として利用できるという自白とみなすべきではない。
【図面の簡単な説明】
【０２０６】
【図１】フェノールレッドの存在下でのｈＩＡＰＰコアアミロイド形成ペプチド（ｈＩＡＰＰ２２−２９及びｈＩＡＰＰ２０−２９）凝集の阻害を示すグラフである。
【図２】円偏光二色性を使用して測定された、フェノールレッドの不存在（図２ａ）又は存在（図２ｂ）下のｈＩＡＰＰ１−３７ペプチドの二次構造変移を示すグラフである。
【図３ａ】チオフラビンＴ蛍光アッセイによって測定された、ヒトＩＡＰＰ１−３７原繊維形成のフェノールレッドの効果を示すグラフである。
【図３ｂ−ｃ】チオフラビンＴ蛍光アッセイによって測定された、ヒトＩＡＰＰ１−３７原繊維形成のフェノールレッドの効果を示すグラフである。
【図４ａ】フェノールレッド及びフェノールフタレイン阻害剤の不存在又は存在下のｈＩＡＰＰ２２−２９，ｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチド、及びｈＩＡＰＰ１−３７の形態を示す顕微鏡写真である。
【図４ｂ】フェノールレッド及びフェノールフタレイン阻害剤の不存在又は存在下のｈＩＡＰＰ２２−２９，ｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチド、及びｈＩＡＰＰ１−３７の形態を示す顕微鏡写真である。
【図４ｃ】フェノールレッド及びフェノールフタレイン阻害剤の不存在又は存在下のｈＩＡＰＰ２２−２９，ｈＩＡＰＰ２０−２９ペプチド、及びｈＩＡＰＰ１−３７の形態を示す顕微鏡写真である。
【図５ａ】ＴｈＴ蛍光アッセイによって測定された、緑茶ポリフェノールによるｈＩＡＰＰ原繊維形成の阻害を示すヒストグラムである。
【図５ｂ】ＴｈＴ蛍光アッセイによって測定された、緑茶ポリフェノールによるｈＩＡＰＰ原繊維形成の阻害を示すヒストグラムである。
【図６】ＴｈＴ蛍光アッセイによって測定された、ピロカテコールバイオレットによるｈＩＡＰＰ１−３７原繊維形成の阻害を明らかにする比較プロットを与える（四角は阻害剤の添加なしを示し、三角は４μＭピロカテコールの添加を示し、円は４０μＭピロカテコールバイオレットの添加を示す）。
【図７】阻害剤フェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、ジアセトキシフェノールレッド（ＰＦ３）及びジメトキシフェノールレッド（ＰＦ４）の化学構造（２Ｄ）を与える。
【図８】チオフラビンＴ蛍光アッセイによって測定された、ＰＦ３及びＰＦ４によるｈＩＡＰＰ１−３７原繊維形成の阻害を示すヒストグラムである。
【図９】ｈＩＡＰＰ１−３７の存在下でインキュベートされたＰＣ１２細胞についてフェノールレッドの用量依存救助的効果を示す棒グラフである。
【図１０ａ−ｄ】ｈＩＡＰＰ凝集の存在下でインキュベートされた膵β細胞についてのＰＲの救助的効果を示す。図１０ａはフェノールレッドあり又はなしのそれぞれの培地においてｈＩＡＰＰの不存在下でインキュベートされた細胞と比較した細胞生存性を示す。図１０ｂ−ｄはｈＩＡＰＰ単独の添加後の細胞を示す。
【図１０ｅ−ｈ】ｈＩＡＰＰ凝集の存在下でインキュベートされた膵β細胞についてのＰＲの救助的効果を示す。図１０ｅ−ｆは増殖培地において４０μＭフェノールレッドの存在下でｈＩＡＰＰで処理された細胞を示す。図１０ｇ−ｈはｈＩＡＰＰで処理されていないコントロール細胞を示す。
【配列表フリーテキスト】
【０２０７】
配列番号１〜３は合成ペプチドの配列である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミロイド関連疾患の処置のために特定される薬剤の製造のための、下記一般式Ｉを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩またはそのプロドラッグの使用：
式中、Ｘ，Ｙ及びＺは各々独立して、炭素、酸素、硫黄、ＣＲ１１Ｒ１２またはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６からなる群から選択されるが、Ｘ，Ｙ及びＺの少なくとも一つは酸素または硫黄であり；
Ｒ１−Ｒ１６は各々独立して、水素、孤立電子対、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、フェニル、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール、ジヒドロキシフェノール、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、チオカルボキシ、カルボニル、オキソ、チオカルボニル、スルフィニル及びスルホニルからなる群から選択されるか、または不存在であるか、またはＲ１−Ｒ４の少なくとも二つ及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも二つは少なくとも一つの五員または六員芳香族、ヘテロ芳香族、脂環式またはへテロ脂環式環を形成し；
Ｒ１−Ｒ４の少なくとも一つはヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ、チオアリールオキシ、カルボキシ及びチオカルボキシからなる群から選択され、及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも一つはフェノール、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールを含み、但し上記化合物はカテキン、エピカテキン、ガロカテキンガラート、エピガロカテキンガラート、エピガロカテキン、およびエピカテキンガラートのいずれのものでもない。
【請求項２】
Ｘは炭素であり、ＹはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６であり、Ｚは酸素である請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｒ９はオキソであり、Ｒ１０は不存在である請求項２に記載の使用。
【請求項４】
Ｒ１３−Ｒ１６の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項２または３に記載の使用。
【請求項５】
Ｒ１及びＲ３の各々はヒドロキシである請求項４に記載の使用。
【請求項６】
Ｒ１３−１６の少なくとも一つはアルキルである請求項２に記載の使用。
【請求項７】
Ｘは炭素であり、Ｙは酸素であり、Ｚは炭素または硫黄であり、Ｒ５及びＲ６の少なくとも一つはオキソである請求項１に記載の使用。
【請求項８】
Ｒ９及びＲ１０の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記化合物はフェノールレッド、ジメトキシフェノールレッド、メトキシフェノールレッド、ジアセトキシフェノールレッド、アセトキシフェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、カテキン、エピガロカテキンガラート、エピカテキンガラート、エピカテキン、エピガロカテキン、エリオジクチオール、ケルセチン、プロシアニジン、ヒドロキシフェニル、トコフェロール及びブロモフェノールレッドからなる群から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
包装材料と前記包装材料内に含有されるアミロイド関連疾患を処置するために特定される薬学的組成物を含む製品であって、前記薬学的組成物が有効成分としての下記一般式Ｉを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩またはそのプロドラッグ、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む製品：
式中、Ｘ，Ｙ及びＺは各々独立して、炭素、酸素、硫黄、ＣＲ１１Ｒ１２またはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６からなる群から選択されるが、Ｘ，Ｙ及びＺの少なくとも一つは酸素または硫黄であり；
Ｒ１−Ｒ１６は各々独立して、水素、孤立電子対、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、フェニル、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール、ジヒドロキシフェノール、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、チオカルボキシ、カルボニル、オキソ、チオカルボニル、スルフィニル及びスルホニルからなる群から選択されるか、または不存在であるか、またはＲ１−Ｒ４の少なくとも二つ及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも二つは少なくとも一つの五員または六員芳香族、ヘテロ芳香族、脂環式またはへテロ脂環式環を形成し；
Ｒ１−Ｒ４の少なくとも一つはヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ、チオアリールオキシ、カルボキシ及びチオカルボキシからなる群から選択され、及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも一つはフェノール、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールを含み、但し上記化合物はカテキン、エピカテキン、ガロカテキンガラート、エピガロカテキンガラート、エピガロカテキン、およびエピカテキンガラートのいずれのものでもない。
【請求項１１】
Ｘは炭素であり、ＹはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６であり、Ｚは酸素である請求項１０に記載の製品。
【請求項１２】
Ｒ９はオキソであり、Ｒ１０は不存在である請求項１１に記載の製品。
【請求項１３】
Ｒ１３−Ｒ１６の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項１１または１２に記載の製品。
【請求項１４】
Ｒ１及びＲ３の各々はヒドロキシである請求項１３に記載の製品。
【請求項１５】
Ｒ１３−１６の少なくとも一つはアルキルである請求項１１に記載の製品。
【請求項１６】
Ｘは炭素であり、Ｙは酸素であり、Ｚは炭素または硫黄であり、Ｒ５及びＲ６の少なくとも一つはオキソである請求項１０に記載の製品。
【請求項１７】
Ｒ９及びＲ１０の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項１６に記載の製品。
【請求項１８】
前記化合物はフェノールレッド、ジメトキシフェノールレッド、メトキシフェノールレッド、ジアセトキシフェノールレッド、アセトキシフェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、カテキン、エピガロカテキンガラート、エピカテキンガラート、エピカテキン、エピガロカテキン、エリオジクチオール、ケルセチン、プロシアニジン、ヒドロキシフェニル、トコフェロール及びブロモフェノールレッドからなる群から選択される請求項１０に記載の製品。
【請求項１９】
対象のアミロイド関連疾患を処置する方法であって、その必要性のある対象に治療的に有効な量の下記一般式Ｉを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩またはそのプロドラッグを投与し、それによって対象のアミロイド関連疾患を処置することを含む方法：
式中、Ｘ，Ｙ及びＺは各々独立して、炭素、酸素、硫黄、ＣＲ１１Ｒ１２またはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６からなる群から選択されるが、Ｘ，Ｙ及びＺの少なくとも一つは酸素または硫黄であり；
Ｒ１−Ｒ１６は各々独立して、水素、孤立電子対、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、フェニル、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール、ジヒドロキシフェノール、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、チオカルボキシ、カルボニル、オキソ、チオカルボニル、スルフィニル及びスルホニルからなる群から選択されるか、または不存在であるか、またはＲ１−Ｒ４の少なくとも二つ及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも二つは少なくとも一つの五員または六員芳香族、ヘテロ芳香族、脂環式またはへテロ脂環式環を形成し；
Ｒ１−Ｒ４の少なくとも一つはヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ、チオアリールオキシ、カルボキシ及びチオカルボキシからなる群から選択され、及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも一つはフェノール、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールを含み、但し上記化合物はカテキン、エピカテキン、ガロカテキンガラート、エピガロカテキンガラート、エピガロカテキン、およびエピカテキンガラートのいずれのものでもない。
【請求項２０】
前記投与は４ｍｇ／ｋｇ体重／時を越えない前記化合物の濃度で実施される請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記投与は経口的に実施される請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
Ｘは炭素であり、ＹはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６であり、Ｚは酸素である請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ９はオキソであり、Ｒ１０は不存在である請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
Ｒ１３−Ｒ１６の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
Ｒ１及びＲ３の各々はヒドロキシである請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
Ｒ１３−１６の少なくとも一つはアルキルである請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
Ｘは炭素であり、Ｙは酸素であり、Ｚは炭素または硫黄であり、Ｒ５及びＲ６の少なくとも一つはオキソである請求項１９に記載の方法。
【請求項２８】
Ｒ９及びＲ１０の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記化合物はフェノールレッド、ジメトキシフェノールレッド、メトキシフェノールレッド、ジアセトキシフェノールレッド、アセトキシフェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、カテキン、エピガロカテキンガラート、エピカテキンガラート、エピカテキン、エピガロカテキン、エリオジクチオール、ケルセチン、プロシアニジン、ヒドロキシフェニル、トコフェロール及びブロモフェノールレッドからなる群から選択される請求項１９に記載の方法。
【請求項３０】
治療有効量の下記一般式Ｉを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩またはそのプロドラッグ、及び薬学的に受容可能なキャリアを含むアミロイド関連疾患の処置に使用するための薬学的組成物：
式中、Ｘ，Ｙ及びＺは各々独立して、炭素、酸素、硫黄、ＣＲ１１Ｒ１２またはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６からなる群から選択されるが、Ｘ，Ｙ及びＺの少なくとも一つは酸素または硫黄であり；
Ｒ１−Ｒ１６は各々独立して、水素、孤立電子対、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、フェニル、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール、ジヒドロキシフェノール、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、チオカルボキシ、カルボニル、オキソ、チオカルボニル、スルフィニル及びスルホニルからなる群から選択されるか、または不存在であるか、またはＲ１−Ｒ４の少なくとも二つ及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも二つは少なくとも一つの五員または六員芳香族、ヘテロ芳香族、脂環式またはヘテロ脂環式環を形成し；
Ｒ１−Ｒ４の少なくとも一つはヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ、チオアリールオキシ、カルボキシ及びチオカルボキシからなる群から選択され、及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも一つはフェノール、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールを含み、但し上記化合物はカテキン、エピカテキン、ガロカテキンガラート、エピガロカテキンガラート、エピガロカテキン、およびエピカテキンガラートのいずれのものでもない。
【請求項３１】
Ｘは炭素であり、ＹはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６であり、Ｚは酸素である請求項３０に記載の薬学的組成物。
【請求項３２】
Ｒ９はオキソであり、Ｒ１０は不存在である請求項３１に記載の薬学的組成物用。
【請求項３３】
Ｒ１３−Ｒ１６の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項３１または３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３４】
Ｒ１及びＲ３の各々はヒドロキシである請求項３３に記載の薬学的組成物。
【請求項３５】
Ｒ１３−１６の少なくとも一つはアルキルである請求項３１に記載の薬学的組成物。
【請求項３６】
Ｘは炭素であり、Ｙは酸素であり、Ｚは炭素または硫黄であり、Ｒ５及びＲ６の少なくとも一つはオキソである請求項３０に記載の薬学的組成物。
【請求項３７】
Ｒ９及びＲ１０の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項３６に記載の薬学的組成物。
【請求項３８】
前記化合物はフェノールレッド、ジメトキシフェノールレッド、メトキシフェノールレッド、ジアセトキシフェノールレッド、アセトキシフェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、カテキン、エピガロカテキンガラート、エピカテキンガラート、エピカテキン、エピガロカテキン、エリオジクチオール、ケルセチン、プロシアニジン、ヒドロキシフェニル、トコフェロール及びブロモフェノールレッドからなる群から選択される請求項３０に記載の薬学的組成物。
【請求項３９】
抗アミロイド薬をさらに含む請求項３０に記載の薬学的組成物。
【請求項４０】
前記抗アミロイド薬はアミロイド脱安定化抗体、アミロイド脱安定化ペプチド及び抗アミロイド小分子からなる群から選択される請求項３９に記載の薬学的組成物。
【請求項４１】
下記一般式ＩＩを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩又はそのプロドラッグ：
式中、Ｑ１及びＱ２は各々独立して、酸素及び硫黄からなる群から選択され、
Ａ１及びＡ２は各々独立して、水素、アルキル、アリール、シクロアルキル及びカルボニルからなる群から選択され、
Ｑ１及びＱ２が各々水素であるとき、Ａ１及びＡ２の一方は水素であり、他方はアルキル、シクロアルキル、アリール及びカルボニルからなる群から選択される。
【請求項４２】
Ｑ１及びＱ２は各々酸素であり、Ａ１及びＡ２の一方が水素であり、他方がメチルである請求項４１に記載の化合物。
【請求項４３】
Ｑ１及びＱ２は各々酸素であり、Ａ１及びＡ２の一方が水素であり、他方がアセチルである請求項４１に記載の化合物。
【請求項１】
アミロイド関連疾患の処置のために特定される薬剤の製造のための、下記一般式Ｉを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩またはそのプロドラッグの使用：
式中、Ｘ，Ｙ及びＺは各々独立して、炭素、酸素、硫黄、ＣＲ１１Ｒ１２またはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６からなる群から選択されるが、Ｘ，Ｙ及びＺの少なくとも一つは酸素または硫黄であり；
Ｒ１−Ｒ１６は各々独立して、水素、孤立電子対、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、フェニル、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール、ジヒドロキシフェノール、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、チオカルボキシ、カルボニル、オキソ、チオカルボニル、スルフィニル及びスルホニルからなる群から選択されるか、または不存在であるか、またはＲ１−Ｒ４の少なくとも二つ及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも二つは少なくとも一つの五員または六員芳香族、ヘテロ芳香族、脂環式またはへテロ脂環式環を形成し；
Ｒ１−Ｒ４の少なくとも一つはヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ、チオアリールオキシ、カルボキシ及びチオカルボキシからなる群から選択され、及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも一つはフェノール、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールを含み、但し上記化合物はカテキン、エピカテキン、ガロカテキンガラート、エピガロカテキンガラート、エピガロカテキン、およびエピカテキンガラートのいずれのものでもない。
【請求項２】
Ｘは炭素であり、ＹはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６であり、Ｚは酸素である請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｒ９はオキソであり、Ｒ１０は不存在である請求項２に記載の使用。
【請求項４】
Ｒ１３−Ｒ１６の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項２または３に記載の使用。
【請求項５】
Ｒ１及びＲ３の各々はヒドロキシである請求項４に記載の使用。
【請求項６】
Ｒ１３−１６の少なくとも一つはアルキルである請求項２に記載の使用。
【請求項７】
Ｘは炭素であり、Ｙは酸素であり、Ｚは炭素または硫黄であり、Ｒ５及びＲ６の少なくとも一つはオキソである請求項１に記載の使用。
【請求項８】
Ｒ９及びＲ１０の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記化合物はフェノールレッド、ジメトキシフェノールレッド、メトキシフェノールレッド、ジアセトキシフェノールレッド、アセトキシフェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、カテキン、エピガロカテキンガラート、エピカテキンガラート、エピカテキン、エピガロカテキン、エリオジクチオール、ケルセチン、プロシアニジン、ヒドロキシフェニル、トコフェロール及びブロモフェノールレッドからなる群から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
包装材料と前記包装材料内に含有されるアミロイド関連疾患を処置するために特定される薬学的組成物を含む製品であって、前記薬学的組成物が有効成分としての下記一般式Ｉを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩またはそのプロドラッグ、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む製品：
式中、Ｘ，Ｙ及びＺは各々独立して、炭素、酸素、硫黄、ＣＲ１１Ｒ１２またはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６からなる群から選択されるが、Ｘ，Ｙ及びＺの少なくとも一つは酸素または硫黄であり；
Ｒ１−Ｒ１６は各々独立して、水素、孤立電子対、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、フェニル、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール、ジヒドロキシフェノール、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、チオカルボキシ、カルボニル、オキソ、チオカルボニル、スルフィニル及びスルホニルからなる群から選択されるか、または不存在であるか、またはＲ１−Ｒ４の少なくとも二つ及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも二つは少なくとも一つの五員または六員芳香族、ヘテロ芳香族、脂環式またはへテロ脂環式環を形成し；
Ｒ１−Ｒ４の少なくとも一つはヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ、チオアリールオキシ、カルボキシ及びチオカルボキシからなる群から選択され、及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも一つはフェノール、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールを含み、但し上記化合物はカテキン、エピカテキン、ガロカテキンガラート、エピガロカテキンガラート、エピガロカテキン、およびエピカテキンガラートのいずれのものでもない。
【請求項１１】
Ｘは炭素であり、ＹはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６であり、Ｚは酸素である請求項１０に記載の製品。
【請求項１２】
Ｒ９はオキソであり、Ｒ１０は不存在である請求項１１に記載の製品。
【請求項１３】
Ｒ１３−Ｒ１６の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項１１または１２に記載の製品。
【請求項１４】
Ｒ１及びＲ３の各々はヒドロキシである請求項１３に記載の製品。
【請求項１５】
Ｒ１３−１６の少なくとも一つはアルキルである請求項１１に記載の製品。
【請求項１６】
Ｘは炭素であり、Ｙは酸素であり、Ｚは炭素または硫黄であり、Ｒ５及びＲ６の少なくとも一つはオキソである請求項１０に記載の製品。
【請求項１７】
Ｒ９及びＲ１０の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項１６に記載の製品。
【請求項１８】
前記化合物はフェノールレッド、ジメトキシフェノールレッド、メトキシフェノールレッド、ジアセトキシフェノールレッド、アセトキシフェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、カテキン、エピガロカテキンガラート、エピカテキンガラート、エピカテキン、エピガロカテキン、エリオジクチオール、ケルセチン、プロシアニジン、ヒドロキシフェニル、トコフェロール及びブロモフェノールレッドからなる群から選択される請求項１０に記載の製品。
【請求項１９】
対象のアミロイド関連疾患を処置する方法であって、その必要性のある対象に治療的に有効な量の下記一般式Ｉを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩またはそのプロドラッグを投与し、それによって対象のアミロイド関連疾患を処置することを含む方法：
式中、Ｘ，Ｙ及びＺは各々独立して、炭素、酸素、硫黄、ＣＲ１１Ｒ１２またはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６からなる群から選択されるが、Ｘ，Ｙ及びＺの少なくとも一つは酸素または硫黄であり；
Ｒ１−Ｒ１６は各々独立して、水素、孤立電子対、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、フェニル、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール、ジヒドロキシフェノール、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、チオカルボキシ、カルボニル、オキソ、チオカルボニル、スルフィニル及びスルホニルからなる群から選択されるか、または不存在であるか、またはＲ１−Ｒ４の少なくとも二つ及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも二つは少なくとも一つの五員または六員芳香族、ヘテロ芳香族、脂環式またはへテロ脂環式環を形成し；
Ｒ１−Ｒ４の少なくとも一つはヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ、チオアリールオキシ、カルボキシ及びチオカルボキシからなる群から選択され、及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも一つはフェノール、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールを含み、但し上記化合物はカテキン、エピカテキン、ガロカテキンガラート、エピガロカテキンガラート、エピガロカテキン、およびエピカテキンガラートのいずれのものでもない。
【請求項２０】
前記投与は４ｍｇ／ｋｇ体重／時を越えない前記化合物の濃度で実施される請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記投与は経口的に実施される請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
Ｘは炭素であり、ＹはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６であり、Ｚは酸素である請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ９はオキソであり、Ｒ１０は不存在である請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
Ｒ１３−Ｒ１６の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
Ｒ１及びＲ３の各々はヒドロキシである請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
Ｒ１３−１６の少なくとも一つはアルキルである請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
Ｘは炭素であり、Ｙは酸素であり、Ｚは炭素または硫黄であり、Ｒ５及びＲ６の少なくとも一つはオキソである請求項１９に記載の方法。
【請求項２８】
Ｒ９及びＲ１０の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記化合物はフェノールレッド、ジメトキシフェノールレッド、メトキシフェノールレッド、ジアセトキシフェノールレッド、アセトキシフェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、カテキン、エピガロカテキンガラート、エピカテキンガラート、エピカテキン、エピガロカテキン、エリオジクチオール、ケルセチン、プロシアニジン、ヒドロキシフェニル、トコフェロール及びブロモフェノールレッドからなる群から選択される請求項１９に記載の方法。
【請求項３０】
治療有効量の下記一般式Ｉを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩またはそのプロドラッグ、及び薬学的に受容可能なキャリアを含むアミロイド関連疾患の処置に使用するための薬学的組成物：
式中、Ｘ，Ｙ及びＺは各々独立して、炭素、酸素、硫黄、ＣＲ１１Ｒ１２またはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６からなる群から選択されるが、Ｘ，Ｙ及びＺの少なくとも一つは酸素または硫黄であり；
Ｒ１−Ｒ１６は各々独立して、水素、孤立電子対、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、フェニル、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール、ジヒドロキシフェノール、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、チオカルボキシ、カルボニル、オキソ、チオカルボニル、スルフィニル及びスルホニルからなる群から選択されるか、または不存在であるか、またはＲ１−Ｒ４の少なくとも二つ及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも二つは少なくとも一つの五員または六員芳香族、ヘテロ芳香族、脂環式またはヘテロ脂環式環を形成し；
Ｒ１−Ｒ４の少なくとも一つはヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ、チオアリールオキシ、カルボキシ及びチオカルボキシからなる群から選択され、及び／又はＲ５−Ｒ１６の少なくとも一つはフェノール、アルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールを含み、但し上記化合物はカテキン、エピカテキン、ガロカテキンガラート、エピガロカテキンガラート、エピガロカテキン、およびエピカテキンガラートのいずれのものでもない。
【請求項３１】
Ｘは炭素であり、ＹはＲ１３Ｒ１４Ｃ−ＣＲ１５Ｒ１６であり、Ｚは酸素である請求項３０に記載の薬学的組成物。
【請求項３２】
Ｒ９はオキソであり、Ｒ１０は不存在である請求項３１に記載の薬学的組成物用。
【請求項３３】
Ｒ１３−Ｒ１６の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項３１または３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３４】
Ｒ１及びＲ３の各々はヒドロキシである請求項３３に記載の薬学的組成物。
【請求項３５】
Ｒ１３−１６の少なくとも一つはアルキルである請求項３１に記載の薬学的組成物。
【請求項３６】
Ｘは炭素であり、Ｙは酸素であり、Ｚは炭素または硫黄であり、Ｒ５及びＲ６の少なくとも一つはオキソである請求項３０に記載の薬学的組成物。
【請求項３７】
Ｒ９及びＲ１０の少なくとも一つはアルコキシフェニル、チオアルコキシフェニル、アリールオキシフェニル、チオアリールオキシフェニル、カルボキシフェニル、チオカルボキシフェニル、フェノール、ヒドロキシフェノール及びジヒドロキシフェノールからなる群から選択される請求項３６に記載の薬学的組成物。
【請求項３８】
前記化合物はフェノールレッド、ジメトキシフェノールレッド、メトキシフェノールレッド、ジアセトキシフェノールレッド、アセトキシフェノールレッド、ピロカテコールバイオレット、フェノールフタレイン、カテキン、エピガロカテキンガラート、エピカテキンガラート、エピカテキン、エピガロカテキン、エリオジクチオール、ケルセチン、プロシアニジン、ヒドロキシフェニル、トコフェロール及びブロモフェノールレッドからなる群から選択される請求項３０に記載の薬学的組成物。
【請求項３９】
抗アミロイド薬をさらに含む請求項３０に記載の薬学的組成物。
【請求項４０】
前記抗アミロイド薬はアミロイド脱安定化抗体、アミロイド脱安定化ペプチド及び抗アミロイド小分子からなる群から選択される請求項３９に記載の薬学的組成物。
【請求項４１】
下記一般式ＩＩを有する化合物、その薬学的に受容可能な塩又はそのプロドラッグ：
式中、Ｑ１及びＱ２は各々独立して、酸素及び硫黄からなる群から選択され、
Ａ１及びＡ２は各々独立して、水素、アルキル、アリール、シクロアルキル及びカルボニルからなる群から選択され、
Ｑ１及びＱ２が各々水素であるとき、Ａ１及びＡ２の一方は水素であり、他方はアルキル、シクロアルキル、アリール及びカルボニルからなる群から選択される。
【請求項４２】
Ｑ１及びＱ２は各々酸素であり、Ａ１及びＡ２の一方が水素であり、他方がメチルである請求項４１に記載の化合物。
【請求項４３】
Ｑ１及びＱ２は各々酸素であり、Ａ１及びＡ２の一方が水素であり、他方がアセチルである請求項４１に記載の化合物。
【図１】
【図２】
【図３ａ】
【図３ｂ−ｃ】
【図５ａ】
【図５ｂ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図４ａ】
【図４ｂ】
【図４ｃ】
【図１０ａ−ｄ】
【図１０ｅ−ｈ】
【図２】
【図３ａ】
【図３ｂ−ｃ】
【図５ａ】
【図５ｂ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図４ａ】
【図４ｂ】
【図４ｃ】
【図１０ａ−ｄ】
【図１０ｅ−ｈ】
【公表番号】特表２００７−５０６７３２（Ｐ２００７−５０６７３２Ａ）
【公表日】平成１９年３月２２日（２００７．３．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５２７５７１（Ｐ２００６−５２７５７１）
【出願日】平成１６年９月２３日（２００４．９．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＬ２００４／０００８９０
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０２７９０１
【国際公開日】平成１７年３月３１日（２００５．３．３１）
【出願人】（５０４２９２０１５）テル アヴィヴ ユニヴァーシティ フューチャー テクノロジー ディヴェロップメント エル．ピー． (7)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年３月２２日（２００７．３．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年９月２３日（２００４．９．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＬ２００４／０００８９０
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０２７９０１
【国際公開日】平成１７年３月３１日（２００５．３．３１）
【出願人】（５０４２９２０１５）テル アヴィヴ ユニヴァーシティ フューチャー テクノロジー ディヴェロップメント エル．ピー． (7)
【Ｆターム（参考）】
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