アレルギー抑制オリゴ糖
【課題】 1−ケストースのイムノグロブリンＡ（ＩｇＡ）抗体の増強作用およびイムノグロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体の産生抑制作用、腸内ビフィズス菌の増殖活性作用および乳幼児のアトピー性皮膚炎の改善性についてヒト試験により確認し、１−ケストースを用いたアレルギー抑制オリゴ糖を提供すること。
【解決手段】 １−ケストースを有効成分として含有し、この１−ケストースによるＩｇＡ抗体の産生増強作用、ＩｇＥ抗体の産生抑制作用、および腸内ビフィズス菌の増殖活性作用を利用して、乳幼児のアトピー性皮膚炎をはじめとするアレルギーの発症を予防およびアレルギー症状の治療に寄与する。
【解決手段】 １−ケストースを有効成分として含有し、この１−ケストースによるＩｇＡ抗体の産生増強作用、ＩｇＥ抗体の産生抑制作用、および腸内ビフィズス菌の増殖活性作用を利用して、乳幼児のアトピー性皮膚炎をはじめとするアレルギーの発症を予防およびアレルギー症状の治療に寄与する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギーを抑制するのに効果的なオリゴ糖に関し、特に、１−ケストースによってイムノグロブリンＡ（以下、「ＩｇＡ」という。）の産生を増強し、またはイムノグロブリンＥ（以下、「ＩｇＥ」という。）の産生を抑制し、腸内ビフィズス菌を増加させることによってアレルギーの発症予防またはアレルギー治療に好適なアレルギー抑制オリゴ糖に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
アレルギーは、異物等の外敵に対して自己防衛機能を発揮する免疫系が異常となることによって生じる疾患である。アレルギーには、食物アレルギー、花粉症、アトピー性皮膚炎等の症状があり、幅広い年齢層にわたり発症し、発生部位や症状も異なる疾患が含まれる。
【０００３】
アレルギー疾患の特徴として、アトピー素因のある人が乳幼児期にアトピー性皮膚炎にかかっており、次いで幼児期に気管支喘息になり、成人になるとアレルギー性鼻炎が出現するといったアレルギーの中心症状が年齢によって変化するアレルギーの連鎖現象（アレルギーマーチ）がある。このようなアレルギーマーチによる症状の継続は社会的にも大きな問題となっており、早急な対策が望まれている。そして、そのようなアレルギーマーチに対しては、乳幼児などの早期の段階においてアトピー性皮膚炎の適正な治療が講じられれば、その後のアレルギー発症の予防が期待できるといえる。
【０００４】
アレルギー発生の原因としては、様々な抗体の中でもＩｇＥという抗体が中心となっていることが知られている。したがって、アレルギー予防策としては、そのＩｇＥの産生を抑える方法が考えられる。
【０００５】
また、抗体の中でＩｇＡという抗体は、人間の腸管に存在し、特に分泌型ＩｇＡは免疫系を賦活する作用が知られている。本来、口から摂取する食物はすべて異物であり、多くの場合、腸管での吸収において異種タンパクに寛容なシステムが働く。この腸管免疫寛容機能の中心がＩｇＡであると指摘されている。したがって、他のアレルギー予防策としては、前記ＩｇＡを活性化させる方法が考えられる。
【０００６】
さらに、アレルギー発症には発症前の腸内細菌叢の構成が関連しており、アレルギーを発症した児童は、健康児に比べて新生児の時期に腸内細菌叢のビフィズス菌が少ない傾向が報告されている。そこで、アレルギー予防策として腸内細菌叢の構成バランスを改善する方法も考えられる。
【０００７】
一方、アレルギーに対する薬剤を使用する治療には、発症時の各部位に直接作用するものや異物がＩｇＥと結合することを妨げるものなどがあるが、医師による処方が必要であり、継続・中止の判断も難しく、副作用が生じた事例が多数報告されている。
【０００８】
また、食品においても、アレルギーの抑制に対する効果を示す報告はあるが、植物の抽出成分であって当該効果を示す成分が不明確なものや菌類のため保存・保管に注意を要するもの、あるいは味質に難があるものが多いという問題が指摘されている。
【０００９】
特に、アトピー性皮膚炎の患者は主に乳幼児であるため、安全性が確認されたものである必要があるし、乳幼児が日常摂取しやすい形状にできるような加工性の高いものが求められる。
【００１０】
ところで、従来、アレルギーの抑制機能を有する物質に関する発明が幾つか提案されており、例えば、特開平８−１５７３７９号公報には、フラクトオリゴ糖を含有するアレルギー予防材が記載されている（特許文献１）。また、特開２００３−２０１２３９号公報には、フラクトオリゴ糖を含有する免疫賦活食品が記載されている（特許文献２）。
【特許文献１】特開平８−１５７３７９号公報
【特許文献２】特開２００３−２０１２３９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
しかしながら、前述した特許文献１に記載の発明は、マグネシウム吸収促進によるものであって免疫系に対する作用は記載されていない。また、特許文献２に記載の発明は、免疫賦活作用に関する記載はあるが、種々のオリゴ糖の混合物による効果が示されており、混合物中における活性の主体が何であるのか特定できておらず、特にケストースの作用効果に関して記載されていない。発明者等の実験によれば、１−ケストースの純度が低いオリゴ糖ではＩｇＥ抗体の産生を抑制できない結果が得られており、このため発明者等は１−ケストースのアレルギー抑制の作用効果に着目している。
【００１２】
さらに、発明者らは、１−ケストースを主成分とするオリゴ糖が腸内有用菌であるビフィズス菌を増殖させて腸内細菌叢の構成バランスを改善する効果を見出しており、この効果によるアトピー性皮膚炎等のアレルギー抑制作用にも注目している。
【００１３】
一方、ケストースは、３糖類のオリゴ糖であって、野菜・穀類にも含まれており、長年の食経験によって副作用などの心配がない物質である。また、結晶化された１−ケストースは、吸湿性が低く、かつ砂糖に近い味質の上、溶解性も砂糖と同程度という物性上の特徴がある。したがって、乳幼児が日常的に無理なく摂取・飲用するには好適な素材ともいえよう。
【００１４】
本発明は、前述した問題点を解決するためになされたものであって、１−ケストースのＩｇＡ抗体の増強作用、ＩｇＥ抗体の産生抑制作用、腸内ビフィズス菌の増殖活性作用および乳幼児のアトピー性皮膚炎の改善性についてヒト試験により確認し、１−ケストースを用いたアレルギー抑制オリゴ糖を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明に係るアレルギー抑制オリゴ糖は、フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有される。
【００１６】
また、本発明に係るアレルギー抑制オリゴ糖は、フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、ＩｇＡ抗体の産生増強作用を備えている。
【００１７】
さらに、本発明に係るアレルギー抑制オリゴ糖は、フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、ＩｇＥ抗体の産生抑制作用を備えている。
【００１８】
そして、本発明に係るアレルギー抑制オリゴ糖は、フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、乳幼児の腸内ビフィズス菌の増加作用を備えている。
【００１９】
また、本発明に係るアレルギー抑制オリゴ糖は、フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、乳幼児のアトピー性皮膚炎を抑制する。
【００２０】
本発明において、１−ケストースの純度が９５％以上の結晶化されたケストースであってもよい。
【００２１】
また、本発明において、有効量が１日当たり０．０１５（ｇ／ｋｇ体重）以上であってもよい。
【発明の効果】
【００２２】
本発明によれば、アレルギーの原因であるＩｇＥ（ＩｇＧ１）抗体の産生抑制効果を発揮し、腸管免疫寛容の中心であるＩｇＡ抗体の増強効果を有し、アレルギーの予防や治療に効果を奏することができる。また、腸内細菌叢の構成バランスを改善し、乳幼児期のアトピー性皮膚炎の予防および治療に効果を発揮し、その後のアレルギー発症の予防が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本願発明者等は、特願２００４−１２６０８６号において、１−ケストースを高純度で含有するオリゴ糖が、クロストリジウム属菌数の多い有害菌優性腸内環境下であってもビフィズス菌を増殖させることができることを見出しているところであるが、今回、さらに１−ケストースの有用性について様々な研究を続けた結果、１−ケストースを高純度で含有するオリゴ糖がアレルギー抑制効果を兼ね備えていることを見出した。
【００２４】
ここで、本実施形態で使用する１−ケストースは、１分子のグルコースと２分子のフルクトースからなる三糖類のオリゴ糖である。１−ケストースを主成分とするオリゴ糖は、特開昭５８−２０１９８０公報に開示されているような各種酵素でショ糖を原料に酵素反応を行い、１−ケストース含有組成物を得た後、特開２０００−２３２８７８号公報で開示されているようなクロマト分離により１−ケストースの純度を上げ、最後に特公平６−７００７５号公報に開示されているような結晶化法で９５％以上の結晶として製造することができる。このように製造された１−ケストースを主成分とする結晶オリゴ糖は、溶解性に優れており、難消化性で低エネルギーである。そして、ＩｇＡ産生増強作用やＩｇＥ産生抑制作用を有している。なお、本実施形態の１−ケストースを有効成分とするオリゴ糖としては、食品新素材有効利用技術シリーズＮｏ．１３「１−ケストース」（社団法人菓子総合技術センター発行）に記載されている１−ケストースが最も望ましい。そこで、以下において、前記１−ケストースのアレルギー抑制効果を実証する各種の実施例の結果について説明する。
【実施例１】
【００２５】
『実施例１：ＩｇＡの産生に与える影響を確認する実験』
実施例１では、１−ケストースがＩｇＡの産生に与える影響を調べる実験を行った。
【００２６】
本実施例１で使用した１−ケストースを含有するオリゴ糖は、１−ケストースを９８重量％、ニストースを１．０重量％、ショ糖を１．０重量％の組成からなるオリゴ糖、つまり、１−ケストースの純度が９８％のオリゴ糖である。そして、１−ケストースを有効成分とするアレルギー抑制オリゴ糖を、アレルギー症状を自覚している成人男性４名に対し、３ｇずつ１ヶ月間摂取してもらい、摂取前と摂取後に糞便を採取し、糞便中のＩｇＡの測定と腸内細菌の測定を行った。
【００２７】
ＩｇＡの測定においては、採取した糞便をリン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）で２０倍に希釈し、遠心分離機で上澄みを採取後、さらにそれを１０倍に希釈して測定用サンプルとした。そして、抗ヒトＩｇＡマウスモノクローナル抗体（ナカライテスク（株））と、それにＨＲＰ（horseradish peroxidase）で標識したＨＲＰ標識抗体を作製した。その後一般的なエライザ法により測定した。
【００２８】
一方、腸内細菌の測定においては、測定用サンプル液を平板寒天培地上に０．０５ｍｌずつ滴下して培地表面に塗布した。そして、３５℃で３〜５日嫌気培養後、細菌の同定および細菌数を算出した。
【００２９】
以下、実施例１におけるＩｇＡの測定結果を図１および図２に示し、腸内細菌の測定結果を図３ないし図６に示す。図１および図２に示すように、いずれの被験者においても１ヶ月摂取後の糞便中のＩｇＡ濃度は増加し、特に被験者Ａ〜Ｃの３人は、糞便中のＩｇＡ濃度が２倍以上に増加した。各被験者のＩｇＡ平均濃度は、１−ケストース摂取前では０．６１（μｇ／ｍｌ）に対し、１ヶ月摂取後では１．０６（μｇ／ｍｌ）となり、１．７倍以上に増加している。この結果から、１−ケストースを摂取することにより、腸管内ＩｇＡを増加させられることが示された。
【００３０】
つぎに、腸内細菌の測定結果について検討する。腸内細菌は、有用菌であるビフィズス菌およびラクトバチルス菌（乳酸桿菌）と、有害菌とされているクロストリジウム菌を同定した。図３は、１−ケストース摂取前の各細菌数およびビフィズス菌占有率を示す表であり、図４は１−ケストースを１ヶ月摂取後の各細菌数およびビフィズス菌占有率を示す表である。また、図５および図６は、ビフィズス菌についてグラフ化したものである。各図に示すように、被験者Ａ〜Ｄの１−ケストース摂取前のビフィズス菌数は、それぞれ１０９．１、１０９．７、１０９．７、１０９．４であったのが、１ヶ月摂取後では、１０１０．０、１０１０．１、１０１０．１、１０１０．１、といずれも増加した。平均値でみると、１−ケストース摂取前のビフィズス菌数は１０９．５であったのが、１ヶ月摂取後では１０１０．１と大きく増加した。
【００３１】
また、被験者ＢおよびＣでは、クロストリジウム菌がそれぞれ１０７．１から１０６．９、１０７．６から１０７．３へと減少した。平均値でみると、１−ケストース摂取前のクロストリジウム菌数は１０７．５であったのが、１ヶ月摂取後では１０７．３と減少した。なお、菌数は糞便湿重１ｇ当たりのものである。
【００３２】
総菌数に対するビフィズス菌の占有率でみると、各被験者の占有率は大きく増加しており、平均では１９．９７％であったものが、１ヶ月摂取後には４３．０５％まで増加し、腸内においてビフィズス菌が優性になることが示された。特に、被験者ＡおよびＢは、１１．６７％から５２．３８％、３８．５７％から５７．１４％へとビフィズス菌数が過半数以上にまで増加し、腸内環境の著しい改善が確認された。通常、腸内環境では、バクテロイデス菌の占有率が４０％程度と高く、その他の菌は２０％程度を占めることが多い。このため、ビフィズス菌の占有率が４０％を超えれば最優性菌となり、ビフィズス菌による腸内環境改善効果が明確に現れると考えられるところ、本実施例１の結果によれば、１−ケストースの摂取による腸内環境の改善効果が認められる。
【００３３】
なお、ビフィズス菌とアレルギーとの関係について言及すれば、ビフィズス菌の経口摂取を続けることにより、マクロファージやＮＫ細胞などの免疫系に関わる細胞の活性が増強されることがわかっている。また、ビフィズス菌などのグラム陽性菌は腸管免疫系においてアレルギー抑制に関わるＴｈ１細胞を誘導することが知られている。したがって、腸内ビフィズス菌の増加は、アレルギーの予防または治療に効果があると考えられている。
【００３４】
以上の実施例１により、１−ケストースがＩｇＡの産生を増強し、ビフィズス菌の数および腸内占有率も増加させることができるものであり、腸内環境の改善に好適であることが認められた。
【実施例２】
【００３５】
『実施例２：ＩｇＧ１およびＩｇＥの産生に与える影響を確認する実験』
実施例２では、１−ケストースがＩｇＧ１およびＩｇＥの産生に与える影響を調べるため、無菌マウスに１−ケストースを投与し、その投与前後における血清中のＩｇＧ１およびＩｇＥの量を測定した。
【００３６】
本実施例２において、実験に供したマウスは、無菌状態で誕生させた４週齢雄マウス（ＢＡＬＢ／ｃ系統）であり、このマウスを一群１０〜１５匹用いた。これらのマウスにヒト乳児糞便を１００倍に希釈したものを０．５ｍｌ経口摂取し、無菌状態で２週間育成した。その後、そのマウスに卵白アルブミン（ＯＶＡ）５ｍｇを４日間経口投与した。つぎに、免疫寛容の成立の有無を調べるために、卵白アルブミン経口投与後１，３，５，７週目にそれぞれ卵白アルブミン１μｇに水酸化アルミニウムゲル０．１ｍｇを加えた液を腹腔内に注射した。これらのヒトフローラ定着マウスを用いて１−ケストースを投与した群と投与しない群について、９週目に血清中の抗卵白アルブミンＩｇＧ１および抗卵白アルブミンＩｇＥをエライザ法により測定した。
【００３７】
その結果、図７および図８に示すように、まず無菌マウスでは、抗卵白アルブミンであるＩｇＧ１（抗ＯＶＡＩｇＧ１）が１５８３（unit/ml）、抗卵白アルブミンであるＩｇＥ（抗ＯＶＡＩｇＥ）が４９６（unit/ml）検出され、抗体の生成が確認された。一方、通常の無菌ではないマウスでは、抗ＯＶＡＩｇＧ１が４（unit/ml）検出されるとともに、抗ＯＶＡＩｇＥが３３（unit/ml）検出されており、前記無菌マウスに比べて格段に低い値を示しており、経口免疫寛容の導入が成立したことが認められ、経口免疫寛容の効果判定試験系（卵白アルブミン＋水酸化アルミニウムゲル）が適切であることが確認された。
【００３８】
そして、無菌マウスにヒト糞便菌を定着させたヒトフローラ定着マウスでは、１−ケストース投与前の抗ＯＶＡＩｇＧ１が４１（unit/ml）、抗ＯＶＡＩｇＥが２０４（unit/ml）となり、いずれも無菌マウスに比較して低い数値を示した。さらに、このヒトフローラ定着マウスに１−ケストースを投与した群では、それぞれ抗ＯＶＡＩｇＧ１が３１（unit/ml）、抗ＯＶＡＩｇＥが１５６（unit/ml）に減少し、無菌マウスに比較してさらに低い値を示した。これによって、１−ケストースが経口免疫寛容の導入をより確実に行わせる効果があることが認められた。
【００３９】
以上の実施例２により、１−ケストースがＩｇＧ１およびＩｇＥの産生を抑制し、経口免疫寛容の成立に好適であることが認められた。
【実施例３】
【００４０】
『実施例３：１−ケストース投与前後におけるヒトの血清中のＩｇＥ量を測定する実験』
本実施例３では、１−ケストースがヒトの血清中におけるＩｇＥの量に与える影響を調べるため、被験者に１−ケストースを投与し、その投与前後における血清中の非特異的ＩｇＥの量を測定した。
【００４１】
被験者は、アレルギー症状があるボランティア２名（成人男女各１名）について、１−ケストース３ｇを１ヶ月間摂取してもらい、血清中の非特異的ＩｇＥ等の血液成分の測定を行った。
【００４２】
その結果、図９に示すように、非特異的ＩｇＥの基準値は３６６（IU/ml）以下であるところ、成人男性の非特異的ＩｇＥ量は、１−ケストース摂取前では５０５（IU/ml）であって基準値を超えていたが、摂取して１ヶ月後には３５４（IU/ml）へと基準値内まで減少した。また、成人女性の非特異的ＩｇＥも１−ケストースを摂取する前では３８１（IU/ml）であって基準値を超えていたが、摂取して１ヶ月後には３１３（IU/ml）へと基準値内まで減少した。なお、ＣＲＰ（Ｃ−反応プロテイン）値は１−ケストース摂取前後でいずれも陰性であって肝機能等への影響は認められず、他の臓器および血液成分への影響は認められなかった。
【００４３】
以上の実施例３により、１−ケストースがヒトに対してもＩｇＥの産生を抑制する効果が得られることを確認できた。
【実施例４】
【００４４】
『実施例４：フラクトオリゴ糖含有組成物の腸内菌叢改善効果を比較する実験』
本実施例４では、無菌マウスを使ってフラクトオリゴ糖を構成する各組成物の腸内菌叢の改善効果の強さを比較した。実験に供したマウスは、無菌状態で誕生させた４週齢雄マウス（ＢＡＬＢ／ｃ系統）であり、このマウスを一群１０〜１５匹用いた。これらのマウスにヒト乳児糞便を１００倍に希釈したものを０．５ｍｌ経口摂取し、無菌状態で２週間育成した。フラクトオリゴ糖の構成物は、３糖類のケストース、４糖類のニストース、５糖類のＦ−ニストースである。本実施例４で使用したケストースは、１−ケストース９９．０％、ニストース０．５％、スクロース０．５％の組成物である。また、ニストースは、ニストース９９．０％、１−ケストース０．９％、スクロース０．１％の組成物である。また、Ｆ−ニストースは、Ｆ−ニストース８２．０％、その他の５糖類１３．０％、その他の成分５．０％の組成物である。その他、比較のためコントロール群には滅菌水を強制投与したマウスと、一般的なフラクトオリゴ糖（１−ケストース重量３５．８％，ニストース５０．９重量％，Ｆ−ニストース８．５重量％）を投与したマウスについても測定した。図１０に各供試糖の組成を示す。各オリゴ糖を無菌マウスに５日間経口投与し、ビフィズス菌の増殖程度として総菌数に対する割合を求めた。
【００４５】
その結果、図１１に示すように、ビフィズス菌の増殖の程度として総菌数に対する割合で比較すると、ケストースが１２．５９％と最も高く、次いでニストースが７．９４％、F−ニストースが７．９４％となった。一方、フラクトオリゴ糖は１０．００％であった。いずれもコントロールマウスに比べてビフィズス菌の占有率が向上して腸内環境が改善されているが、ケストースが最も改善効果が高いことが認められた。
【００４６】
以上の実施例４により、フラクトオリゴ糖の組成物のうち、１−ケストースが最もビフィズス菌の増殖作用に効果を発揮し、腸内環境の改善に好適であることが認められた。
【実施例５】
【００４７】
『実施例５：１−ケストースとフラクトオリゴ糖との有効性に関する比較実験』
上記実施例４の結果を分析すれば、ビフィズス菌増殖効果は、フラクトオリゴ糖の組成物のうち１−ケストースが最も高い効果を発揮し、フラクトオリゴ糖よりも好結果を示した。このことから腸内環境の改善には純度の高い１−ケストースが効果的であることが認められるところ、さらに直接的なアレルギー抑制効果を確認するため、実施例５では、１−ケストースとフラクトオリゴ糖と摂取することによるＩｇＥ抑制効果について実験した。
【００４８】
本実施例５では、日常的にアレルギー症状の自覚がある成人女性４名（２７歳〜４５歳）を被験者とし、１−ケストースとフラクトオリゴ糖を摂取してもらい、各被験者の非特異的ＩｇＥを測定した。実験方法は、摂取前の非特異的ＩｇＥを測定しておき、まず１−ケストースを１日１回３ｇを食後に摂取させ、これを４週間継続した。５週目に血液を採取して非特異的ＩｇＥを測定し、その後摂取しない期間を２週間空けて、フラクトオリゴ糖を１日１回食後に３ｇ摂取させ、これを４週間継続し、その後血液を採取した。本実施例５に使用した１−ケストースは、純度９５％以上のものであり、また、フラクトオリゴ糖は市販品であってニストース５１％、１−ケストース３６％を含むニストースを主成分とするオリゴ糖である。なお、被験者には、実験期間中、他のオリゴ糖や乳酸菌などのプレバイオティクスおよびプロバイオティクス等の健康食品の摂取を控えさせた。実施例５の結果を図１２に示す。
【００４９】
図１２に示すように、被験者４人中３人は１−ケストースの摂取により非特異的ＩｇＥが著しく減少したのに対し、フラクトオリゴ糖を摂取すると、逆に全員が摂取前よりも非特異的ＩｇＥを増加させる結果となった。
【００５０】
具体的には、被験者Ａでは、摂取前の非特異的ＩｇＥが５４１（IU/ml）であったのが、１−ケストース摂取後に２９８（IU/ml）となって約４５％の減少効果が得られた。同様に、被験者Ｂでは、摂取前では４２２（IU/ml）であったのが、１−ケストース摂取後に２８２（IU/ml）となって３２％以上減少し、被験者Ｃでは、摂取前では３２３（IU/ml）であったのが、１−ケストース摂取後に２７５（IU/ml）となって約２５％の減少効果が得られた。
【００５１】
一方、フラクトオリゴ糖を摂取した場合、非特異的ＩｇＥ量は、被験者Ａでは５９８（IU/ml）となって１０％以上増加してしまった。また、同様に被験者Ｂでは４７８（IU/ml）となって１３％以上増加し、被験者Ｄでは３５６（IU/ml）となって１１％以上増加してしまった。
【００５２】
なお、被験者Ｃは、１−ケストースを摂取しても非特異的ＩｇＥが減少せず、約３％程度増加しているが、フラクトオリゴ糖を摂取すると５７％以上も増加する結果となり、フラクトオリゴ糖に比較して１−ケストースの優位性が明らかに認められる。
【００５３】
以上の結果を平均値として示すと、摂取前の非特異的ＩｇＥ量は４０３．８（IU/ml）であったが、１−ケストース摂取後に２９８．８となって約２６％以上の減少効果が得られるのに対し、フラクトオリゴ糖を摂取しても減少せず、逆に４８７．３（IU/ml）となって２０％以上も増加してしまう。
【００５４】
以上の実施例５により、１−ケストースの摂取により非特異的ＩｇＥの抑制効果が得られるが、フラクトオリゴ糖を摂取しても非特異的ＩｇＥの抑制効果は得られず、逆に非特異的ＩｇＥの産生を増加させてしまう。実施例４の結果も加味すれば、フラクトオリゴ糖を構成するニストースおよびＦ−ニストースが、１−ケストースの非特異的ＩｇＥ抑制効果を打ち消し、むしろＩｇＥの産生を増加させてしまうと考えられる。
【００５５】
以上のことから非特異的ＩｇＥの抑制効果、つまりアレルギー抑制効果は、１−ケストースの純度が高い組成物である必要があり、フラクトオリゴ糖の中でも１−ケストースの純度が低く、ニストース等が主成分のものでは、アレルギー抑制効果が得られないことが確認された。そして、フラクトオリゴ糖に占める１−ケストースの純度は、少なくともニストースよりも組成比率が多くて第１組成物である必要があり、好ましくは純度９０％以上、より好ましくは純度９５％以上であることが好適である。なお、１−ケストースの純度の程度は、少なくともＩｇＡ抗体の産生増加の作用効果を奏するもの、あるいはＩｇＥ抗体の産生抑制効果が得られるものであることが必要である。
【実施例６】
【００５６】
『実施例６：１−ケストースの有効量に関する実験』
上記各実施例により、成人に対して１−ケストースのプレバイオティクスとしての効果を示す量は１日３ｇであることが確認できている。その後、ボランティアによる実験により１日２ｇで便通改善効果が示されている。そこで、本実施例６では、さらに少量の１日１ｇで腸内環境の改善効果を示すか否かの確認のため、ボランティアによる試験を行った。被験者は３８歳から５６歳までの健康成人男性４名であって、各人の体重は被験者Ａが６７ｋｇ、被験者Ｂが５６ｋｇ、被験者Ｃが５９ｋｇ、被験者Ｄが６３ｋｇである。
【００５７】
実験方法は、まず最初に１−ケストース摂取前の各被験者の糞便を採取し、ビフィズス菌、ラクトバチルス菌、クロストリジウム菌、総菌数をそれぞれ測定した。そして、１−ケストースを１日１回１ｇ摂取し、これを２週間継続した。１５日目に各被験者の糞便を採取し、腸内細菌の測定を行った。更に１週間１−ケストースの摂取を行わない期間を隔てて２２日目から２週間、１−ケストースを１日１回３ｇ摂取し、３６日目に各被験者の糞便を採取して腸内細菌の測定を行った。これらの結果を図１３および図１４に示す。
【００５８】
図１３および図１４は対数値で示しているところ、被験者のすべてにおいて、１−ケストース１ｇおよび３ｇの摂取により、ビフィズス菌が増加した。平均値で示すと、１−ケストース摂取前ではビフィズス菌量が１０９．７３であったのが、１日１回１ｇ摂取によって１０９．８５に増加し、さらに１日１回３ｇ摂取によって１０１０．１８ まで増加した。これにより少なくとも体重６０ｋｇ前後の成人男性に対する１−ケストースの有効量は１日１ｇであることが確認された。なお、菌数は糞便湿重１ｇ当たりのものである。
【００５９】
一方、副作用のおそれのない１−ケストースの摂取量についても検討した。外部ボランティアの被験者に対し１日１回１０ｇを与えて確認したところ、この摂取量であっても下痢は生ぜず、臓器および血液成分への影響は認められなかった。また、別のボランティアによる試験では、体重１ｋｇ・１日当たり０．４ｇ、すなわち体重６０ｋｇの人であれば１日２４ｇまで摂取しても下痢症状は生じないことを確認している。
【００６０】
以上の実施例６により、各被験者の体重１ｋｇ当たりの有効量を算出すると、被験者Ａは０．０１５（ｇ／ｋｇ体重）、被験者Ｂは０．０１８（ｇ／ｋｇ体重）、被験者Ｃは０．０１７（ｇ／ｋｇ体重）、被験者Ｄは０．０１６（ｇ／ｋｇ体重）であって、平均値では０．０１６（ｇ／ｋｇ体重）であった。したがって、１−ケストースの有効量は成人男性であれば少なくとも１日当たり０．０１５（ｇ／ｋｇ体重）以上摂取すれば、本発明の目的とする効果が得られることがわかる。一方、１日当たり０．４（ｇ／ｋｇ体重）以下の摂取量であれば下痢等の症状が生じない。
【００６１】
よって、本発明のアトピー性皮膚炎治療効果が得られる１−ケストースの用量は、患者の年齢、体重等の患者の状態、投与経路、病気の症状と重篤度等を考慮した上で適宜設定することができる。例えば、経口投与の場合、成人（体重６０ｋｇとして）に対するケストースの投与量は、１人１日あたり、０．９〜２４ｇであるのが好ましく、より好ましくは２〜６ｇである。小児（体重１０ｋｇとして）に対するケストースの投与量は、１人１日あたり、０．１５〜４ｇであるのが好ましく、より好ましくは０．３〜３ｇである。直腸投与の場合、成人（体重６０ｋｇとして）に対するケストースの投与量は、１人１日あたり、０．９〜２４ｇであるのが好ましく、より好ましくは２〜６ｇである。
【実施例７】
【００６２】
『実施例７：アトピー性皮膚炎患者における１−ケストースの臨床試験』
上記各実施例により、日常的にアレルギー症状の自覚がある成人に対して、１−ケストースがアレルギー原因であるＩｇＥ抗体の産生抑制、ＩｇＡ抗体の増強、ビフィズス菌の増殖活性等の効果が確認された。そこで、実施例７では、より根本的な対策として、アトピー素因をもつアレルギー疾患患者を乳幼児期に治療することにより、その後の様々なアレルギー発生の予防が期待できることに鑑み、アトピー性皮膚炎の症状をもつ乳幼児を対象とした臨床試験を行った。
【００６３】
臨床試験の対象者は、０才から３才までの食物アレルギーを合併した乳幼児アトピー性皮膚炎疾患であって、皮疹重症度が軽症〜重症の１３名とした。なお、試験実施にあたっては、対象児の親の同意を得て行った。
【００６４】
試験方法は、２週間の観察期間の後、純度９８％の１−ケストースを１日１回水またはジュース類に混ぜて摂取させ、これを１２週間継続した。１歳以下の被験者には１日１ｇを摂取させ、２〜３歳の被験者には１日２ｇを摂取させた。なお、試験は被験者に摂取前１ヶ月以上ステロイド外用剤を使用していない状態で開始し、試験期間中には保湿剤を中心に使用させ、食物アレルゲン除去食を摂取させた。
【００６５】
臨床試験の評価は、摂取開始時、摂取開始６週後、摂取開始１２週後の終了時、摂取終了４〜８週後にそれぞれ診察により皮膚重症度判定を行うとともに便検査を行った。摂取終了後４〜８週間をおいて検査をしたのは薬効の持続効果をみるためである。便検査では、糞便を採取して便中細菌のビフィズス菌の占有率を算出した。皮疹重症度判定は、日本皮膚科学会重症度検討委員会による部位別重症度判定（全身を頭部・体幹前部・体幹後部・上肢・下肢の５つの部分に区分し各部位のグローバルな評価（０〜４段階）の総和を算出する）を用いた。これらの結果を図１５に示す。
【００６６】
図１５に示すように、皮膚重症度判定により、１−ケストース摂取中の被験者すべてにおいて、皮疹の程度が有意に改善した。特に、１３名中６名（被験者３、４、５、８、１２、１３）は１−ケストース摂取終了後または終了４〜８週後には、皮疹が完全になくなった。また、摂取終了後の調査を行った１１名中７名（被験者３、４、５、６、９、１２、１３）は摂取終了４〜８週後においても悪化または再発することなく、１−ケストース摂取による皮疹の改善効果の持続が認められた。皮疹の改善はアトピー性皮膚炎の治療において最も重要な効果であり、１−ケストースはその皮疹の改善に著しい改善効果があることが確認された。特に本試験の実施時期が皮疹増悪期である初夏にもかかわらず、悪化例がなく改善効果を示した点は評価できる。
【００６７】
また、便中細菌のビフィズス菌の占有率は、便の採取ができなかった被験者１２を除き、１２週間の１−ケストース摂取により、１２名中１０名（被験者１、２、３、５、６、８、９、１０、１１、１３）において増加し、腸内環境叢の構成バランスの改善が示された。また、４回すべての便検査を行うことのできた被験者９名におけるビフィズス菌の平均占有率は、１−ケストース摂取前では３０．１％であったのに対し、１−ケストース摂取６週後には４２．３％、１２週後には５６．０％となり著しい増加が認められた。一般的な乳幼児のビフィズス菌占有率が５０％以上であることから、本臨床試験における１−ケストースによるビフィズス菌占有率の上昇作用は、非常に有効な結果であることが分かる。
【００６８】
しかし、摂取終了４〜８週後には、上昇したビフィズス菌の平均占有率を維持していた被験者は少なく、全体的に低下傾向を示し平均占有率は３２．７％に低下していた。このためビフィズス菌の維持を目的とするならば、１−ケストースを持続的に摂取するのが好ましい。ただし、前述したように、ビフィズス菌が低下してもなお皮疹の改善効果は維持されている結果であった。
【００６９】
以上、皮疹結果とビフィズス菌の占有率に関して統計解析を行った。まず皮疹結果について、１−ケストース摂取開始時、摂取開始６週後、摂取開始１２週後、摂取終了４〜８週後の４ポイントに関して多群検定モデルにおける２群間の比較を行った。このパラメトリック検定法（Fisher's PLSD検定）による結果、摂取開始時と摂取開始１２週後の差および摂取開始時と摂取終了４〜８週後の差に有意性が認められた。そのときのｐ値はそれぞれ０．００２２および０．００２５であった。次に、ビフィズス菌の占有率（全菌数に対するビフィズス菌の割合）について皮疹結果と同様の解析を同様の群間で実施した。その結果、摂取開始時と摂取開始１２週後の差に有意性が認められた。そのときのｐ値は０．０３０８であった。
【００７０】
一方、１−ケストース摂取による下痢などの副作用は観察されず、かえって便通の改善した被験者が多くなる有用な結果が得られた。なお、被験者４に一過性の下痢がみられたが、摂取中に回復しており１−ケストース摂取による副作用ではないと考えられる。
【００７１】
以上の実施例７より、１−ケストース摂取中には、皮疹の改善効果だけでなく便中細菌のビフィズス菌占有率の上昇作用が認められた。そして、１−ケストース摂取終了４〜８週後には、便中細菌のビフィズス菌占有率が摂取開始時に近い値に低下していたものの、皮疹の改善効果は維持されており、１−ケストースは乳幼児における乾燥肌、ひび割れ、紅斑、擦過傷、角質剥離等の肌の諸症状および掻痒感や痛み等の症状を伴うアトピー性皮膚炎の治療および予防に有効であることが確認できた。
【００７２】
『実施例８：１−ケストースを含有する薬剤の製造例』
つぎに、１−ケストースを使用して主にアトピー性皮膚炎治療剤を想定した薬剤の製造例について説明する。
【００７３】
［薬剤製造例１：散剤１，０００ｇ分、１−ケストース含量８００ｍｇ／１ｇ］
薬剤製造例１では、１−ケストース８００ｇ、乳糖２００ｇをよく混合した後、９０％エタノール３００ｍＬを添加して湿潤させた。湿潤粉末を造粒した後、６０℃で１６時間通風乾燥した。乾燥後、整粒して適当な細かさの散剤を得た。
【００７４】
［薬剤製造例２：錠剤５，０００錠分、１−ケストース含量６０ｍｇ／１錠］
薬剤製造例２の錠剤は１−ケストースを含む粉末混合物を作り、顆粒化またはスラグ化し、次いで崩壊剤または滑沢剤を加えた後、打錠することにより製造することができる。具体的には、１−ケストース３００ｇ、粉末還元麦芽糖水飴３８０ｇ、コメデンプン１８０ｇ、デキストリン１００ｇをよく混合した後、９０％エタノール３００ｍLを添加して湿潤させた。湿潤粉末を押し出し造粒した後、６０℃で１６時間通風乾燥した。乾燥後、顆粒を８５０μｍの篩を用いて整粒し、続いて顆粒４７０ｇにショ糖脂肪酸エステル５０ｇを添加し、混合した後、ロータリー打錠機（６Ｂ−２、菊水製作所製）を用いて打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤を得た。
【００７５】
以上の実施例８により、１−ケストースは、食品のみならず薬剤に含有させて製造することができ、医薬品として利用できることが確認できた。
【００７６】
なお、実施例８に示すような１−ケストースを主成分とするアレルギー抑制剤は、上記条件に限定されず適時変更することができる。例えば、１日１回の服用に限らず１日２〜４回に分割して服用してもよい。また、投与方法は、特に限定されず、経口投与や直腸投与など患者により適時変えることができる。そして、剤型も特に限定されず、投与方法に適した剤型を適宜選択することができる。例えば、経口投与の場合には、散剤、錠剤、糖衣剤、カプセル剤、顆粒剤、ドライシロップ剤、液剤、シロップ剤、ドロップ剤、ドリンク剤、その他の剤型等の固形または液状の剤型にすることができる。
【００７７】
以上のような各実施形態のアレルギー抑制オリゴ糖によれば、アレルギーの原因であるＩｇＥ（ＩｇＧ１）抗体の産生を抑制し、腸管免疫寛容の中心であるＩｇＡ抗体の産生を増強し、さらに腸内ビフィズス菌を増加させて腸内環境の改善に寄与するため、アレルギーの予防や治療の効果を奏する。
【００７８】
特に乳幼児のアトピー性皮膚炎の改善に有意な効果が得られ、しかも１−ケストースは安全性が高いとともに、吸湿性が低くて溶解性が高いことから乳幼児にとって日常的に摂取・飲用するには極めて好適であり、長期間の利用による予防効果も高いものといえる。また、乳幼児の時期においてアトピー性皮膚炎を改善することにより、アトピー素因を有する患者のアレルギーマーチを効果的に防止ないし抑制することが期待できる。
【００７９】
以上の効果を奏するオリゴ糖としては、１−ケストースの純度が高いものが好ましく、少なくとも１−ケストースがニストースよりも組成比率で高く、好ましくは１−ケストースの純度が９０％以上、より好ましくは純度９５％以上のものである。
【００８０】
なお、本発明に係るアレルギー抑制オリゴ糖は、前述した実施形態に限定されるものではなく、適宜変更することができる。
【００８１】
例えば、本実施形態で使用した１−ケストースを主とするオリゴ糖は、食形態としては粉、その溶解物、打錠物、カプセル状等、任意の形態を選択することができる。例えば、１−ケストース５０重量部、デキストリン３０重量部、植物性油脂２０重量部を用いて常法に従って抗アトピー性皮膚炎用錠菓などとしてもよい。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】実施例１において、１−ケストース摂取前後の糞便中のＩｇＡ濃度を測定した結果を示す図表である。
【図２】実施例１において、図１の結果をグラフ化した図である。
【図３】実施例１において、１−ケストース摂取前の腸管内菌数を示す図表である。
【図４】実施例１において、１−ケストース摂取後の腸管内菌数を示す図表である。
【図５】実施例１において、１−ケストース摂取前後の腸管内におけるビフィズス菌数の変化を示すグラフである。
【図６】実施例１において、１−ケストース摂取前後の腸管内におけるビフィズス菌の占有率の変化を示すグラフである。
【図７】実施例２において、１−ケストースの投与によるＩｇＧ１量の変化に基づく経口免疫寛容誘導効果を示すグラフである。
【図８】実施例２において、１−ケストースの投与によるＩｇＥ量に基づく経口免疫寛容誘導効果を示すグラフである。
【図９】実施例３において、１−ケストースの投与前後におけるヒトの血清中のＩｇＥ量の測定結果を示す図表である。
【図１０】実施例４において、実験に供した糖の組成を示す図表である。
【図１１】実施例４において、フラクトオリゴ糖を構成する各物質による腸内菌叢改善効果の強さを比較したグラフである。
【図１２】実施例５において、１−ケストースとフラクトオリゴ糖とのＩｇＥ抑制効果を比較した図表である。
【図１３】実施例６において、１−ケストースの有効量を定めるための実験結果を示す図表である。
【図１４】実施例６において、１−ケストースの有効量に対するビフィズス菌の数量をグラフ化した図である。
【図１５】実施例７において、１−ケストース摂取前後の臨床所見とビフィズス菌の占有率、副作用の有無を示す図表である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギーを抑制するのに効果的なオリゴ糖に関し、特に、１−ケストースによってイムノグロブリンＡ（以下、「ＩｇＡ」という。）の産生を増強し、またはイムノグロブリンＥ（以下、「ＩｇＥ」という。）の産生を抑制し、腸内ビフィズス菌を増加させることによってアレルギーの発症予防またはアレルギー治療に好適なアレルギー抑制オリゴ糖に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
アレルギーは、異物等の外敵に対して自己防衛機能を発揮する免疫系が異常となることによって生じる疾患である。アレルギーには、食物アレルギー、花粉症、アトピー性皮膚炎等の症状があり、幅広い年齢層にわたり発症し、発生部位や症状も異なる疾患が含まれる。
【０００３】
アレルギー疾患の特徴として、アトピー素因のある人が乳幼児期にアトピー性皮膚炎にかかっており、次いで幼児期に気管支喘息になり、成人になるとアレルギー性鼻炎が出現するといったアレルギーの中心症状が年齢によって変化するアレルギーの連鎖現象（アレルギーマーチ）がある。このようなアレルギーマーチによる症状の継続は社会的にも大きな問題となっており、早急な対策が望まれている。そして、そのようなアレルギーマーチに対しては、乳幼児などの早期の段階においてアトピー性皮膚炎の適正な治療が講じられれば、その後のアレルギー発症の予防が期待できるといえる。
【０００４】
アレルギー発生の原因としては、様々な抗体の中でもＩｇＥという抗体が中心となっていることが知られている。したがって、アレルギー予防策としては、そのＩｇＥの産生を抑える方法が考えられる。
【０００５】
また、抗体の中でＩｇＡという抗体は、人間の腸管に存在し、特に分泌型ＩｇＡは免疫系を賦活する作用が知られている。本来、口から摂取する食物はすべて異物であり、多くの場合、腸管での吸収において異種タンパクに寛容なシステムが働く。この腸管免疫寛容機能の中心がＩｇＡであると指摘されている。したがって、他のアレルギー予防策としては、前記ＩｇＡを活性化させる方法が考えられる。
【０００６】
さらに、アレルギー発症には発症前の腸内細菌叢の構成が関連しており、アレルギーを発症した児童は、健康児に比べて新生児の時期に腸内細菌叢のビフィズス菌が少ない傾向が報告されている。そこで、アレルギー予防策として腸内細菌叢の構成バランスを改善する方法も考えられる。
【０００７】
一方、アレルギーに対する薬剤を使用する治療には、発症時の各部位に直接作用するものや異物がＩｇＥと結合することを妨げるものなどがあるが、医師による処方が必要であり、継続・中止の判断も難しく、副作用が生じた事例が多数報告されている。
【０００８】
また、食品においても、アレルギーの抑制に対する効果を示す報告はあるが、植物の抽出成分であって当該効果を示す成分が不明確なものや菌類のため保存・保管に注意を要するもの、あるいは味質に難があるものが多いという問題が指摘されている。
【０００９】
特に、アトピー性皮膚炎の患者は主に乳幼児であるため、安全性が確認されたものである必要があるし、乳幼児が日常摂取しやすい形状にできるような加工性の高いものが求められる。
【００１０】
ところで、従来、アレルギーの抑制機能を有する物質に関する発明が幾つか提案されており、例えば、特開平８−１５７３７９号公報には、フラクトオリゴ糖を含有するアレルギー予防材が記載されている（特許文献１）。また、特開２００３−２０１２３９号公報には、フラクトオリゴ糖を含有する免疫賦活食品が記載されている（特許文献２）。
【特許文献１】特開平８−１５７３７９号公報
【特許文献２】特開２００３−２０１２３９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
しかしながら、前述した特許文献１に記載の発明は、マグネシウム吸収促進によるものであって免疫系に対する作用は記載されていない。また、特許文献２に記載の発明は、免疫賦活作用に関する記載はあるが、種々のオリゴ糖の混合物による効果が示されており、混合物中における活性の主体が何であるのか特定できておらず、特にケストースの作用効果に関して記載されていない。発明者等の実験によれば、１−ケストースの純度が低いオリゴ糖ではＩｇＥ抗体の産生を抑制できない結果が得られており、このため発明者等は１−ケストースのアレルギー抑制の作用効果に着目している。
【００１２】
さらに、発明者らは、１−ケストースを主成分とするオリゴ糖が腸内有用菌であるビフィズス菌を増殖させて腸内細菌叢の構成バランスを改善する効果を見出しており、この効果によるアトピー性皮膚炎等のアレルギー抑制作用にも注目している。
【００１３】
一方、ケストースは、３糖類のオリゴ糖であって、野菜・穀類にも含まれており、長年の食経験によって副作用などの心配がない物質である。また、結晶化された１−ケストースは、吸湿性が低く、かつ砂糖に近い味質の上、溶解性も砂糖と同程度という物性上の特徴がある。したがって、乳幼児が日常的に無理なく摂取・飲用するには好適な素材ともいえよう。
【００１４】
本発明は、前述した問題点を解決するためになされたものであって、１−ケストースのＩｇＡ抗体の増強作用、ＩｇＥ抗体の産生抑制作用、腸内ビフィズス菌の増殖活性作用および乳幼児のアトピー性皮膚炎の改善性についてヒト試験により確認し、１−ケストースを用いたアレルギー抑制オリゴ糖を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明に係るアレルギー抑制オリゴ糖は、フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有される。
【００１６】
また、本発明に係るアレルギー抑制オリゴ糖は、フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、ＩｇＡ抗体の産生増強作用を備えている。
【００１７】
さらに、本発明に係るアレルギー抑制オリゴ糖は、フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、ＩｇＥ抗体の産生抑制作用を備えている。
【００１８】
そして、本発明に係るアレルギー抑制オリゴ糖は、フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、乳幼児の腸内ビフィズス菌の増加作用を備えている。
【００１９】
また、本発明に係るアレルギー抑制オリゴ糖は、フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、乳幼児のアトピー性皮膚炎を抑制する。
【００２０】
本発明において、１−ケストースの純度が９５％以上の結晶化されたケストースであってもよい。
【００２１】
また、本発明において、有効量が１日当たり０．０１５（ｇ／ｋｇ体重）以上であってもよい。
【発明の効果】
【００２２】
本発明によれば、アレルギーの原因であるＩｇＥ（ＩｇＧ１）抗体の産生抑制効果を発揮し、腸管免疫寛容の中心であるＩｇＡ抗体の増強効果を有し、アレルギーの予防や治療に効果を奏することができる。また、腸内細菌叢の構成バランスを改善し、乳幼児期のアトピー性皮膚炎の予防および治療に効果を発揮し、その後のアレルギー発症の予防が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本願発明者等は、特願２００４−１２６０８６号において、１−ケストースを高純度で含有するオリゴ糖が、クロストリジウム属菌数の多い有害菌優性腸内環境下であってもビフィズス菌を増殖させることができることを見出しているところであるが、今回、さらに１−ケストースの有用性について様々な研究を続けた結果、１−ケストースを高純度で含有するオリゴ糖がアレルギー抑制効果を兼ね備えていることを見出した。
【００２４】
ここで、本実施形態で使用する１−ケストースは、１分子のグルコースと２分子のフルクトースからなる三糖類のオリゴ糖である。１−ケストースを主成分とするオリゴ糖は、特開昭５８−２０１９８０公報に開示されているような各種酵素でショ糖を原料に酵素反応を行い、１−ケストース含有組成物を得た後、特開２０００−２３２８７８号公報で開示されているようなクロマト分離により１−ケストースの純度を上げ、最後に特公平６−７００７５号公報に開示されているような結晶化法で９５％以上の結晶として製造することができる。このように製造された１−ケストースを主成分とする結晶オリゴ糖は、溶解性に優れており、難消化性で低エネルギーである。そして、ＩｇＡ産生増強作用やＩｇＥ産生抑制作用を有している。なお、本実施形態の１−ケストースを有効成分とするオリゴ糖としては、食品新素材有効利用技術シリーズＮｏ．１３「１−ケストース」（社団法人菓子総合技術センター発行）に記載されている１−ケストースが最も望ましい。そこで、以下において、前記１−ケストースのアレルギー抑制効果を実証する各種の実施例の結果について説明する。
【実施例１】
【００２５】
『実施例１：ＩｇＡの産生に与える影響を確認する実験』
実施例１では、１−ケストースがＩｇＡの産生に与える影響を調べる実験を行った。
【００２６】
本実施例１で使用した１−ケストースを含有するオリゴ糖は、１−ケストースを９８重量％、ニストースを１．０重量％、ショ糖を１．０重量％の組成からなるオリゴ糖、つまり、１−ケストースの純度が９８％のオリゴ糖である。そして、１−ケストースを有効成分とするアレルギー抑制オリゴ糖を、アレルギー症状を自覚している成人男性４名に対し、３ｇずつ１ヶ月間摂取してもらい、摂取前と摂取後に糞便を採取し、糞便中のＩｇＡの測定と腸内細菌の測定を行った。
【００２７】
ＩｇＡの測定においては、採取した糞便をリン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）で２０倍に希釈し、遠心分離機で上澄みを採取後、さらにそれを１０倍に希釈して測定用サンプルとした。そして、抗ヒトＩｇＡマウスモノクローナル抗体（ナカライテスク（株））と、それにＨＲＰ（horseradish peroxidase）で標識したＨＲＰ標識抗体を作製した。その後一般的なエライザ法により測定した。
【００２８】
一方、腸内細菌の測定においては、測定用サンプル液を平板寒天培地上に０．０５ｍｌずつ滴下して培地表面に塗布した。そして、３５℃で３〜５日嫌気培養後、細菌の同定および細菌数を算出した。
【００２９】
以下、実施例１におけるＩｇＡの測定結果を図１および図２に示し、腸内細菌の測定結果を図３ないし図６に示す。図１および図２に示すように、いずれの被験者においても１ヶ月摂取後の糞便中のＩｇＡ濃度は増加し、特に被験者Ａ〜Ｃの３人は、糞便中のＩｇＡ濃度が２倍以上に増加した。各被験者のＩｇＡ平均濃度は、１−ケストース摂取前では０．６１（μｇ／ｍｌ）に対し、１ヶ月摂取後では１．０６（μｇ／ｍｌ）となり、１．７倍以上に増加している。この結果から、１−ケストースを摂取することにより、腸管内ＩｇＡを増加させられることが示された。
【００３０】
つぎに、腸内細菌の測定結果について検討する。腸内細菌は、有用菌であるビフィズス菌およびラクトバチルス菌（乳酸桿菌）と、有害菌とされているクロストリジウム菌を同定した。図３は、１−ケストース摂取前の各細菌数およびビフィズス菌占有率を示す表であり、図４は１−ケストースを１ヶ月摂取後の各細菌数およびビフィズス菌占有率を示す表である。また、図５および図６は、ビフィズス菌についてグラフ化したものである。各図に示すように、被験者Ａ〜Ｄの１−ケストース摂取前のビフィズス菌数は、それぞれ１０９．１、１０９．７、１０９．７、１０９．４であったのが、１ヶ月摂取後では、１０１０．０、１０１０．１、１０１０．１、１０１０．１、といずれも増加した。平均値でみると、１−ケストース摂取前のビフィズス菌数は１０９．５であったのが、１ヶ月摂取後では１０１０．１と大きく増加した。
【００３１】
また、被験者ＢおよびＣでは、クロストリジウム菌がそれぞれ１０７．１から１０６．９、１０７．６から１０７．３へと減少した。平均値でみると、１−ケストース摂取前のクロストリジウム菌数は１０７．５であったのが、１ヶ月摂取後では１０７．３と減少した。なお、菌数は糞便湿重１ｇ当たりのものである。
【００３２】
総菌数に対するビフィズス菌の占有率でみると、各被験者の占有率は大きく増加しており、平均では１９．９７％であったものが、１ヶ月摂取後には４３．０５％まで増加し、腸内においてビフィズス菌が優性になることが示された。特に、被験者ＡおよびＢは、１１．６７％から５２．３８％、３８．５７％から５７．１４％へとビフィズス菌数が過半数以上にまで増加し、腸内環境の著しい改善が確認された。通常、腸内環境では、バクテロイデス菌の占有率が４０％程度と高く、その他の菌は２０％程度を占めることが多い。このため、ビフィズス菌の占有率が４０％を超えれば最優性菌となり、ビフィズス菌による腸内環境改善効果が明確に現れると考えられるところ、本実施例１の結果によれば、１−ケストースの摂取による腸内環境の改善効果が認められる。
【００３３】
なお、ビフィズス菌とアレルギーとの関係について言及すれば、ビフィズス菌の経口摂取を続けることにより、マクロファージやＮＫ細胞などの免疫系に関わる細胞の活性が増強されることがわかっている。また、ビフィズス菌などのグラム陽性菌は腸管免疫系においてアレルギー抑制に関わるＴｈ１細胞を誘導することが知られている。したがって、腸内ビフィズス菌の増加は、アレルギーの予防または治療に効果があると考えられている。
【００３４】
以上の実施例１により、１−ケストースがＩｇＡの産生を増強し、ビフィズス菌の数および腸内占有率も増加させることができるものであり、腸内環境の改善に好適であることが認められた。
【実施例２】
【００３５】
『実施例２：ＩｇＧ１およびＩｇＥの産生に与える影響を確認する実験』
実施例２では、１−ケストースがＩｇＧ１およびＩｇＥの産生に与える影響を調べるため、無菌マウスに１−ケストースを投与し、その投与前後における血清中のＩｇＧ１およびＩｇＥの量を測定した。
【００３６】
本実施例２において、実験に供したマウスは、無菌状態で誕生させた４週齢雄マウス（ＢＡＬＢ／ｃ系統）であり、このマウスを一群１０〜１５匹用いた。これらのマウスにヒト乳児糞便を１００倍に希釈したものを０．５ｍｌ経口摂取し、無菌状態で２週間育成した。その後、そのマウスに卵白アルブミン（ＯＶＡ）５ｍｇを４日間経口投与した。つぎに、免疫寛容の成立の有無を調べるために、卵白アルブミン経口投与後１，３，５，７週目にそれぞれ卵白アルブミン１μｇに水酸化アルミニウムゲル０．１ｍｇを加えた液を腹腔内に注射した。これらのヒトフローラ定着マウスを用いて１−ケストースを投与した群と投与しない群について、９週目に血清中の抗卵白アルブミンＩｇＧ１および抗卵白アルブミンＩｇＥをエライザ法により測定した。
【００３７】
その結果、図７および図８に示すように、まず無菌マウスでは、抗卵白アルブミンであるＩｇＧ１（抗ＯＶＡＩｇＧ１）が１５８３（unit/ml）、抗卵白アルブミンであるＩｇＥ（抗ＯＶＡＩｇＥ）が４９６（unit/ml）検出され、抗体の生成が確認された。一方、通常の無菌ではないマウスでは、抗ＯＶＡＩｇＧ１が４（unit/ml）検出されるとともに、抗ＯＶＡＩｇＥが３３（unit/ml）検出されており、前記無菌マウスに比べて格段に低い値を示しており、経口免疫寛容の導入が成立したことが認められ、経口免疫寛容の効果判定試験系（卵白アルブミン＋水酸化アルミニウムゲル）が適切であることが確認された。
【００３８】
そして、無菌マウスにヒト糞便菌を定着させたヒトフローラ定着マウスでは、１−ケストース投与前の抗ＯＶＡＩｇＧ１が４１（unit/ml）、抗ＯＶＡＩｇＥが２０４（unit/ml）となり、いずれも無菌マウスに比較して低い数値を示した。さらに、このヒトフローラ定着マウスに１−ケストースを投与した群では、それぞれ抗ＯＶＡＩｇＧ１が３１（unit/ml）、抗ＯＶＡＩｇＥが１５６（unit/ml）に減少し、無菌マウスに比較してさらに低い値を示した。これによって、１−ケストースが経口免疫寛容の導入をより確実に行わせる効果があることが認められた。
【００３９】
以上の実施例２により、１−ケストースがＩｇＧ１およびＩｇＥの産生を抑制し、経口免疫寛容の成立に好適であることが認められた。
【実施例３】
【００４０】
『実施例３：１−ケストース投与前後におけるヒトの血清中のＩｇＥ量を測定する実験』
本実施例３では、１−ケストースがヒトの血清中におけるＩｇＥの量に与える影響を調べるため、被験者に１−ケストースを投与し、その投与前後における血清中の非特異的ＩｇＥの量を測定した。
【００４１】
被験者は、アレルギー症状があるボランティア２名（成人男女各１名）について、１−ケストース３ｇを１ヶ月間摂取してもらい、血清中の非特異的ＩｇＥ等の血液成分の測定を行った。
【００４２】
その結果、図９に示すように、非特異的ＩｇＥの基準値は３６６（IU/ml）以下であるところ、成人男性の非特異的ＩｇＥ量は、１−ケストース摂取前では５０５（IU/ml）であって基準値を超えていたが、摂取して１ヶ月後には３５４（IU/ml）へと基準値内まで減少した。また、成人女性の非特異的ＩｇＥも１−ケストースを摂取する前では３８１（IU/ml）であって基準値を超えていたが、摂取して１ヶ月後には３１３（IU/ml）へと基準値内まで減少した。なお、ＣＲＰ（Ｃ−反応プロテイン）値は１−ケストース摂取前後でいずれも陰性であって肝機能等への影響は認められず、他の臓器および血液成分への影響は認められなかった。
【００４３】
以上の実施例３により、１−ケストースがヒトに対してもＩｇＥの産生を抑制する効果が得られることを確認できた。
【実施例４】
【００４４】
『実施例４：フラクトオリゴ糖含有組成物の腸内菌叢改善効果を比較する実験』
本実施例４では、無菌マウスを使ってフラクトオリゴ糖を構成する各組成物の腸内菌叢の改善効果の強さを比較した。実験に供したマウスは、無菌状態で誕生させた４週齢雄マウス（ＢＡＬＢ／ｃ系統）であり、このマウスを一群１０〜１５匹用いた。これらのマウスにヒト乳児糞便を１００倍に希釈したものを０．５ｍｌ経口摂取し、無菌状態で２週間育成した。フラクトオリゴ糖の構成物は、３糖類のケストース、４糖類のニストース、５糖類のＦ−ニストースである。本実施例４で使用したケストースは、１−ケストース９９．０％、ニストース０．５％、スクロース０．５％の組成物である。また、ニストースは、ニストース９９．０％、１−ケストース０．９％、スクロース０．１％の組成物である。また、Ｆ−ニストースは、Ｆ−ニストース８２．０％、その他の５糖類１３．０％、その他の成分５．０％の組成物である。その他、比較のためコントロール群には滅菌水を強制投与したマウスと、一般的なフラクトオリゴ糖（１−ケストース重量３５．８％，ニストース５０．９重量％，Ｆ−ニストース８．５重量％）を投与したマウスについても測定した。図１０に各供試糖の組成を示す。各オリゴ糖を無菌マウスに５日間経口投与し、ビフィズス菌の増殖程度として総菌数に対する割合を求めた。
【００４５】
その結果、図１１に示すように、ビフィズス菌の増殖の程度として総菌数に対する割合で比較すると、ケストースが１２．５９％と最も高く、次いでニストースが７．９４％、F−ニストースが７．９４％となった。一方、フラクトオリゴ糖は１０．００％であった。いずれもコントロールマウスに比べてビフィズス菌の占有率が向上して腸内環境が改善されているが、ケストースが最も改善効果が高いことが認められた。
【００４６】
以上の実施例４により、フラクトオリゴ糖の組成物のうち、１−ケストースが最もビフィズス菌の増殖作用に効果を発揮し、腸内環境の改善に好適であることが認められた。
【実施例５】
【００４７】
『実施例５：１−ケストースとフラクトオリゴ糖との有効性に関する比較実験』
上記実施例４の結果を分析すれば、ビフィズス菌増殖効果は、フラクトオリゴ糖の組成物のうち１−ケストースが最も高い効果を発揮し、フラクトオリゴ糖よりも好結果を示した。このことから腸内環境の改善には純度の高い１−ケストースが効果的であることが認められるところ、さらに直接的なアレルギー抑制効果を確認するため、実施例５では、１−ケストースとフラクトオリゴ糖と摂取することによるＩｇＥ抑制効果について実験した。
【００４８】
本実施例５では、日常的にアレルギー症状の自覚がある成人女性４名（２７歳〜４５歳）を被験者とし、１−ケストースとフラクトオリゴ糖を摂取してもらい、各被験者の非特異的ＩｇＥを測定した。実験方法は、摂取前の非特異的ＩｇＥを測定しておき、まず１−ケストースを１日１回３ｇを食後に摂取させ、これを４週間継続した。５週目に血液を採取して非特異的ＩｇＥを測定し、その後摂取しない期間を２週間空けて、フラクトオリゴ糖を１日１回食後に３ｇ摂取させ、これを４週間継続し、その後血液を採取した。本実施例５に使用した１−ケストースは、純度９５％以上のものであり、また、フラクトオリゴ糖は市販品であってニストース５１％、１−ケストース３６％を含むニストースを主成分とするオリゴ糖である。なお、被験者には、実験期間中、他のオリゴ糖や乳酸菌などのプレバイオティクスおよびプロバイオティクス等の健康食品の摂取を控えさせた。実施例５の結果を図１２に示す。
【００４９】
図１２に示すように、被験者４人中３人は１−ケストースの摂取により非特異的ＩｇＥが著しく減少したのに対し、フラクトオリゴ糖を摂取すると、逆に全員が摂取前よりも非特異的ＩｇＥを増加させる結果となった。
【００５０】
具体的には、被験者Ａでは、摂取前の非特異的ＩｇＥが５４１（IU/ml）であったのが、１−ケストース摂取後に２９８（IU/ml）となって約４５％の減少効果が得られた。同様に、被験者Ｂでは、摂取前では４２２（IU/ml）であったのが、１−ケストース摂取後に２８２（IU/ml）となって３２％以上減少し、被験者Ｃでは、摂取前では３２３（IU/ml）であったのが、１−ケストース摂取後に２７５（IU/ml）となって約２５％の減少効果が得られた。
【００５１】
一方、フラクトオリゴ糖を摂取した場合、非特異的ＩｇＥ量は、被験者Ａでは５９８（IU/ml）となって１０％以上増加してしまった。また、同様に被験者Ｂでは４７８（IU/ml）となって１３％以上増加し、被験者Ｄでは３５６（IU/ml）となって１１％以上増加してしまった。
【００５２】
なお、被験者Ｃは、１−ケストースを摂取しても非特異的ＩｇＥが減少せず、約３％程度増加しているが、フラクトオリゴ糖を摂取すると５７％以上も増加する結果となり、フラクトオリゴ糖に比較して１−ケストースの優位性が明らかに認められる。
【００５３】
以上の結果を平均値として示すと、摂取前の非特異的ＩｇＥ量は４０３．８（IU/ml）であったが、１−ケストース摂取後に２９８．８となって約２６％以上の減少効果が得られるのに対し、フラクトオリゴ糖を摂取しても減少せず、逆に４８７．３（IU/ml）となって２０％以上も増加してしまう。
【００５４】
以上の実施例５により、１−ケストースの摂取により非特異的ＩｇＥの抑制効果が得られるが、フラクトオリゴ糖を摂取しても非特異的ＩｇＥの抑制効果は得られず、逆に非特異的ＩｇＥの産生を増加させてしまう。実施例４の結果も加味すれば、フラクトオリゴ糖を構成するニストースおよびＦ−ニストースが、１−ケストースの非特異的ＩｇＥ抑制効果を打ち消し、むしろＩｇＥの産生を増加させてしまうと考えられる。
【００５５】
以上のことから非特異的ＩｇＥの抑制効果、つまりアレルギー抑制効果は、１−ケストースの純度が高い組成物である必要があり、フラクトオリゴ糖の中でも１−ケストースの純度が低く、ニストース等が主成分のものでは、アレルギー抑制効果が得られないことが確認された。そして、フラクトオリゴ糖に占める１−ケストースの純度は、少なくともニストースよりも組成比率が多くて第１組成物である必要があり、好ましくは純度９０％以上、より好ましくは純度９５％以上であることが好適である。なお、１−ケストースの純度の程度は、少なくともＩｇＡ抗体の産生増加の作用効果を奏するもの、あるいはＩｇＥ抗体の産生抑制効果が得られるものであることが必要である。
【実施例６】
【００５６】
『実施例６：１−ケストースの有効量に関する実験』
上記各実施例により、成人に対して１−ケストースのプレバイオティクスとしての効果を示す量は１日３ｇであることが確認できている。その後、ボランティアによる実験により１日２ｇで便通改善効果が示されている。そこで、本実施例６では、さらに少量の１日１ｇで腸内環境の改善効果を示すか否かの確認のため、ボランティアによる試験を行った。被験者は３８歳から５６歳までの健康成人男性４名であって、各人の体重は被験者Ａが６７ｋｇ、被験者Ｂが５６ｋｇ、被験者Ｃが５９ｋｇ、被験者Ｄが６３ｋｇである。
【００５７】
実験方法は、まず最初に１−ケストース摂取前の各被験者の糞便を採取し、ビフィズス菌、ラクトバチルス菌、クロストリジウム菌、総菌数をそれぞれ測定した。そして、１−ケストースを１日１回１ｇ摂取し、これを２週間継続した。１５日目に各被験者の糞便を採取し、腸内細菌の測定を行った。更に１週間１−ケストースの摂取を行わない期間を隔てて２２日目から２週間、１−ケストースを１日１回３ｇ摂取し、３６日目に各被験者の糞便を採取して腸内細菌の測定を行った。これらの結果を図１３および図１４に示す。
【００５８】
図１３および図１４は対数値で示しているところ、被験者のすべてにおいて、１−ケストース１ｇおよび３ｇの摂取により、ビフィズス菌が増加した。平均値で示すと、１−ケストース摂取前ではビフィズス菌量が１０９．７３であったのが、１日１回１ｇ摂取によって１０９．８５に増加し、さらに１日１回３ｇ摂取によって１０１０．１８ まで増加した。これにより少なくとも体重６０ｋｇ前後の成人男性に対する１−ケストースの有効量は１日１ｇであることが確認された。なお、菌数は糞便湿重１ｇ当たりのものである。
【００５９】
一方、副作用のおそれのない１−ケストースの摂取量についても検討した。外部ボランティアの被験者に対し１日１回１０ｇを与えて確認したところ、この摂取量であっても下痢は生ぜず、臓器および血液成分への影響は認められなかった。また、別のボランティアによる試験では、体重１ｋｇ・１日当たり０．４ｇ、すなわち体重６０ｋｇの人であれば１日２４ｇまで摂取しても下痢症状は生じないことを確認している。
【００６０】
以上の実施例６により、各被験者の体重１ｋｇ当たりの有効量を算出すると、被験者Ａは０．０１５（ｇ／ｋｇ体重）、被験者Ｂは０．０１８（ｇ／ｋｇ体重）、被験者Ｃは０．０１７（ｇ／ｋｇ体重）、被験者Ｄは０．０１６（ｇ／ｋｇ体重）であって、平均値では０．０１６（ｇ／ｋｇ体重）であった。したがって、１−ケストースの有効量は成人男性であれば少なくとも１日当たり０．０１５（ｇ／ｋｇ体重）以上摂取すれば、本発明の目的とする効果が得られることがわかる。一方、１日当たり０．４（ｇ／ｋｇ体重）以下の摂取量であれば下痢等の症状が生じない。
【００６１】
よって、本発明のアトピー性皮膚炎治療効果が得られる１−ケストースの用量は、患者の年齢、体重等の患者の状態、投与経路、病気の症状と重篤度等を考慮した上で適宜設定することができる。例えば、経口投与の場合、成人（体重６０ｋｇとして）に対するケストースの投与量は、１人１日あたり、０．９〜２４ｇであるのが好ましく、より好ましくは２〜６ｇである。小児（体重１０ｋｇとして）に対するケストースの投与量は、１人１日あたり、０．１５〜４ｇであるのが好ましく、より好ましくは０．３〜３ｇである。直腸投与の場合、成人（体重６０ｋｇとして）に対するケストースの投与量は、１人１日あたり、０．９〜２４ｇであるのが好ましく、より好ましくは２〜６ｇである。
【実施例７】
【００６２】
『実施例７：アトピー性皮膚炎患者における１−ケストースの臨床試験』
上記各実施例により、日常的にアレルギー症状の自覚がある成人に対して、１−ケストースがアレルギー原因であるＩｇＥ抗体の産生抑制、ＩｇＡ抗体の増強、ビフィズス菌の増殖活性等の効果が確認された。そこで、実施例７では、より根本的な対策として、アトピー素因をもつアレルギー疾患患者を乳幼児期に治療することにより、その後の様々なアレルギー発生の予防が期待できることに鑑み、アトピー性皮膚炎の症状をもつ乳幼児を対象とした臨床試験を行った。
【００６３】
臨床試験の対象者は、０才から３才までの食物アレルギーを合併した乳幼児アトピー性皮膚炎疾患であって、皮疹重症度が軽症〜重症の１３名とした。なお、試験実施にあたっては、対象児の親の同意を得て行った。
【００６４】
試験方法は、２週間の観察期間の後、純度９８％の１−ケストースを１日１回水またはジュース類に混ぜて摂取させ、これを１２週間継続した。１歳以下の被験者には１日１ｇを摂取させ、２〜３歳の被験者には１日２ｇを摂取させた。なお、試験は被験者に摂取前１ヶ月以上ステロイド外用剤を使用していない状態で開始し、試験期間中には保湿剤を中心に使用させ、食物アレルゲン除去食を摂取させた。
【００６５】
臨床試験の評価は、摂取開始時、摂取開始６週後、摂取開始１２週後の終了時、摂取終了４〜８週後にそれぞれ診察により皮膚重症度判定を行うとともに便検査を行った。摂取終了後４〜８週間をおいて検査をしたのは薬効の持続効果をみるためである。便検査では、糞便を採取して便中細菌のビフィズス菌の占有率を算出した。皮疹重症度判定は、日本皮膚科学会重症度検討委員会による部位別重症度判定（全身を頭部・体幹前部・体幹後部・上肢・下肢の５つの部分に区分し各部位のグローバルな評価（０〜４段階）の総和を算出する）を用いた。これらの結果を図１５に示す。
【００６６】
図１５に示すように、皮膚重症度判定により、１−ケストース摂取中の被験者すべてにおいて、皮疹の程度が有意に改善した。特に、１３名中６名（被験者３、４、５、８、１２、１３）は１−ケストース摂取終了後または終了４〜８週後には、皮疹が完全になくなった。また、摂取終了後の調査を行った１１名中７名（被験者３、４、５、６、９、１２、１３）は摂取終了４〜８週後においても悪化または再発することなく、１−ケストース摂取による皮疹の改善効果の持続が認められた。皮疹の改善はアトピー性皮膚炎の治療において最も重要な効果であり、１−ケストースはその皮疹の改善に著しい改善効果があることが確認された。特に本試験の実施時期が皮疹増悪期である初夏にもかかわらず、悪化例がなく改善効果を示した点は評価できる。
【００６７】
また、便中細菌のビフィズス菌の占有率は、便の採取ができなかった被験者１２を除き、１２週間の１−ケストース摂取により、１２名中１０名（被験者１、２、３、５、６、８、９、１０、１１、１３）において増加し、腸内環境叢の構成バランスの改善が示された。また、４回すべての便検査を行うことのできた被験者９名におけるビフィズス菌の平均占有率は、１−ケストース摂取前では３０．１％であったのに対し、１−ケストース摂取６週後には４２．３％、１２週後には５６．０％となり著しい増加が認められた。一般的な乳幼児のビフィズス菌占有率が５０％以上であることから、本臨床試験における１−ケストースによるビフィズス菌占有率の上昇作用は、非常に有効な結果であることが分かる。
【００６８】
しかし、摂取終了４〜８週後には、上昇したビフィズス菌の平均占有率を維持していた被験者は少なく、全体的に低下傾向を示し平均占有率は３２．７％に低下していた。このためビフィズス菌の維持を目的とするならば、１−ケストースを持続的に摂取するのが好ましい。ただし、前述したように、ビフィズス菌が低下してもなお皮疹の改善効果は維持されている結果であった。
【００６９】
以上、皮疹結果とビフィズス菌の占有率に関して統計解析を行った。まず皮疹結果について、１−ケストース摂取開始時、摂取開始６週後、摂取開始１２週後、摂取終了４〜８週後の４ポイントに関して多群検定モデルにおける２群間の比較を行った。このパラメトリック検定法（Fisher's PLSD検定）による結果、摂取開始時と摂取開始１２週後の差および摂取開始時と摂取終了４〜８週後の差に有意性が認められた。そのときのｐ値はそれぞれ０．００２２および０．００２５であった。次に、ビフィズス菌の占有率（全菌数に対するビフィズス菌の割合）について皮疹結果と同様の解析を同様の群間で実施した。その結果、摂取開始時と摂取開始１２週後の差に有意性が認められた。そのときのｐ値は０．０３０８であった。
【００７０】
一方、１−ケストース摂取による下痢などの副作用は観察されず、かえって便通の改善した被験者が多くなる有用な結果が得られた。なお、被験者４に一過性の下痢がみられたが、摂取中に回復しており１−ケストース摂取による副作用ではないと考えられる。
【００７１】
以上の実施例７より、１−ケストース摂取中には、皮疹の改善効果だけでなく便中細菌のビフィズス菌占有率の上昇作用が認められた。そして、１−ケストース摂取終了４〜８週後には、便中細菌のビフィズス菌占有率が摂取開始時に近い値に低下していたものの、皮疹の改善効果は維持されており、１−ケストースは乳幼児における乾燥肌、ひび割れ、紅斑、擦過傷、角質剥離等の肌の諸症状および掻痒感や痛み等の症状を伴うアトピー性皮膚炎の治療および予防に有効であることが確認できた。
【００７２】
『実施例８：１−ケストースを含有する薬剤の製造例』
つぎに、１−ケストースを使用して主にアトピー性皮膚炎治療剤を想定した薬剤の製造例について説明する。
【００７３】
［薬剤製造例１：散剤１，０００ｇ分、１−ケストース含量８００ｍｇ／１ｇ］
薬剤製造例１では、１−ケストース８００ｇ、乳糖２００ｇをよく混合した後、９０％エタノール３００ｍＬを添加して湿潤させた。湿潤粉末を造粒した後、６０℃で１６時間通風乾燥した。乾燥後、整粒して適当な細かさの散剤を得た。
【００７４】
［薬剤製造例２：錠剤５，０００錠分、１−ケストース含量６０ｍｇ／１錠］
薬剤製造例２の錠剤は１−ケストースを含む粉末混合物を作り、顆粒化またはスラグ化し、次いで崩壊剤または滑沢剤を加えた後、打錠することにより製造することができる。具体的には、１−ケストース３００ｇ、粉末還元麦芽糖水飴３８０ｇ、コメデンプン１８０ｇ、デキストリン１００ｇをよく混合した後、９０％エタノール３００ｍLを添加して湿潤させた。湿潤粉末を押し出し造粒した後、６０℃で１６時間通風乾燥した。乾燥後、顆粒を８５０μｍの篩を用いて整粒し、続いて顆粒４７０ｇにショ糖脂肪酸エステル５０ｇを添加し、混合した後、ロータリー打錠機（６Ｂ−２、菊水製作所製）を用いて打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤を得た。
【００７５】
以上の実施例８により、１−ケストースは、食品のみならず薬剤に含有させて製造することができ、医薬品として利用できることが確認できた。
【００７６】
なお、実施例８に示すような１−ケストースを主成分とするアレルギー抑制剤は、上記条件に限定されず適時変更することができる。例えば、１日１回の服用に限らず１日２〜４回に分割して服用してもよい。また、投与方法は、特に限定されず、経口投与や直腸投与など患者により適時変えることができる。そして、剤型も特に限定されず、投与方法に適した剤型を適宜選択することができる。例えば、経口投与の場合には、散剤、錠剤、糖衣剤、カプセル剤、顆粒剤、ドライシロップ剤、液剤、シロップ剤、ドロップ剤、ドリンク剤、その他の剤型等の固形または液状の剤型にすることができる。
【００７７】
以上のような各実施形態のアレルギー抑制オリゴ糖によれば、アレルギーの原因であるＩｇＥ（ＩｇＧ１）抗体の産生を抑制し、腸管免疫寛容の中心であるＩｇＡ抗体の産生を増強し、さらに腸内ビフィズス菌を増加させて腸内環境の改善に寄与するため、アレルギーの予防や治療の効果を奏する。
【００７８】
特に乳幼児のアトピー性皮膚炎の改善に有意な効果が得られ、しかも１−ケストースは安全性が高いとともに、吸湿性が低くて溶解性が高いことから乳幼児にとって日常的に摂取・飲用するには極めて好適であり、長期間の利用による予防効果も高いものといえる。また、乳幼児の時期においてアトピー性皮膚炎を改善することにより、アトピー素因を有する患者のアレルギーマーチを効果的に防止ないし抑制することが期待できる。
【００７９】
以上の効果を奏するオリゴ糖としては、１−ケストースの純度が高いものが好ましく、少なくとも１−ケストースがニストースよりも組成比率で高く、好ましくは１−ケストースの純度が９０％以上、より好ましくは純度９５％以上のものである。
【００８０】
なお、本発明に係るアレルギー抑制オリゴ糖は、前述した実施形態に限定されるものではなく、適宜変更することができる。
【００８１】
例えば、本実施形態で使用した１−ケストースを主とするオリゴ糖は、食形態としては粉、その溶解物、打錠物、カプセル状等、任意の形態を選択することができる。例えば、１−ケストース５０重量部、デキストリン３０重量部、植物性油脂２０重量部を用いて常法に従って抗アトピー性皮膚炎用錠菓などとしてもよい。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】実施例１において、１−ケストース摂取前後の糞便中のＩｇＡ濃度を測定した結果を示す図表である。
【図２】実施例１において、図１の結果をグラフ化した図である。
【図３】実施例１において、１−ケストース摂取前の腸管内菌数を示す図表である。
【図４】実施例１において、１−ケストース摂取後の腸管内菌数を示す図表である。
【図５】実施例１において、１−ケストース摂取前後の腸管内におけるビフィズス菌数の変化を示すグラフである。
【図６】実施例１において、１−ケストース摂取前後の腸管内におけるビフィズス菌の占有率の変化を示すグラフである。
【図７】実施例２において、１−ケストースの投与によるＩｇＧ１量の変化に基づく経口免疫寛容誘導効果を示すグラフである。
【図８】実施例２において、１−ケストースの投与によるＩｇＥ量に基づく経口免疫寛容誘導効果を示すグラフである。
【図９】実施例３において、１−ケストースの投与前後におけるヒトの血清中のＩｇＥ量の測定結果を示す図表である。
【図１０】実施例４において、実験に供した糖の組成を示す図表である。
【図１１】実施例４において、フラクトオリゴ糖を構成する各物質による腸内菌叢改善効果の強さを比較したグラフである。
【図１２】実施例５において、１−ケストースとフラクトオリゴ糖とのＩｇＥ抑制効果を比較した図表である。
【図１３】実施例６において、１−ケストースの有効量を定めるための実験結果を示す図表である。
【図１４】実施例６において、１−ケストースの有効量に対するビフィズス菌の数量をグラフ化した図である。
【図１５】実施例７において、１−ケストース摂取前後の臨床所見とビフィズス菌の占有率、副作用の有無を示す図表である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるアレルギー抑制オリゴ糖。
【請求項２】
フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、ＩｇＡ抗体の産生増強作用を備えているアレルギー抑制オリゴ糖。
【請求項３】
フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、ＩｇＥ抗体の産生抑制作用を備えているアレルギー抑制オリゴ糖。
【請求項４】
フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、乳幼児の腸内ビフィズス菌の増加作用を備えているアレルギー抑制オリゴ糖。
【請求項５】
フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、乳幼児のアトピー性皮膚炎を抑制するアレルギー抑制オリゴ糖。
【請求項６】
請求項１〜請求項５のいずれかにおいて、前記１−ケストースの純度が９５％以上の結晶化されたケストースであるアレルギー抑制オリゴ糖。
【請求項７】
請求項１〜請求項６のいずれかにおいて、有効量が１日当たり０．０１５（ｇ／ｋｇ体重）以上であるアレルギー抑制オリゴ糖。
【請求項１】
フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるアレルギー抑制オリゴ糖。
【請求項２】
フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、ＩｇＡ抗体の産生増強作用を備えているアレルギー抑制オリゴ糖。
【請求項３】
フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、ＩｇＥ抗体の産生抑制作用を備えているアレルギー抑制オリゴ糖。
【請求項４】
フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、乳幼児の腸内ビフィズス菌の増加作用を備えているアレルギー抑制オリゴ糖。
【請求項５】
フラクトオリゴ糖において１−ケストースが最大組成比率の第１組成物として含有されるオリゴ糖であって、乳幼児のアトピー性皮膚炎を抑制するアレルギー抑制オリゴ糖。
【請求項６】
請求項１〜請求項５のいずれかにおいて、前記１−ケストースの純度が９５％以上の結晶化されたケストースであるアレルギー抑制オリゴ糖。
【請求項７】
請求項１〜請求項６のいずれかにおいて、有効量が１日当たり０．０１５（ｇ／ｋｇ体重）以上であるアレルギー抑制オリゴ糖。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
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【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【公開番号】特開２００８−２８０３５４（Ｐ２００８−２８０３５４Ａ）
【公開日】平成２０年１１月２０日（２００８．１１．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１６６４６３（Ｐ２００８−１６６４６３）
【出願日】平成２０年６月２５日（２００８．６．２５）
【分割の表示】特願２００５−３７１００５（Ｐ２００５−３７１００５）の分割
【原出願日】平成１７年１２月２２日（２００５．１２．２２）
【出願人】（３９００２２９５４）ホクレン農業協同組合連合会 (14)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年１１月２０日（２００８．１１．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年６月２５日（２００８．６．２５）
【分割の表示】特願２００５−３７１００５（Ｐ２００５−３７１００５）の分割
【原出願日】平成１７年１２月２２日（２００５．１２．２２）
【出願人】（３９００２２９５４）ホクレン農業協同組合連合会 (14)
【Ｆターム（参考）】
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