ウイルス関連リンパ増殖性障害を処置または予防するための方法
本開示は、進行性のウイルス関連のリンパ増殖性障害、ＥＢＶ関連のリンパ増殖性障害、および移植後リンパ増殖性障害を予防、処置または遅らせるための方法に関する。この方法においては、ＴＧＦ−βアンタゴニスト、例えば、抗ＴＧＦ−β抗体を被験体に投与する。ＴＧＦ−βアンタゴニストを投与することによって、ウイルス関連のリンパ増殖性障害を処置するため、そしてウイルス関連リンパ増殖性障害に対するＴ細胞の応答性を強化するための方法も記載される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その開示全体が参照によって本明細書に援用される、２００４年１０月１３日出願の米国仮特許出願第６０／６１８，４５８号に対する優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
リンパ増殖性障害（ＬＰＤ）を含む増殖性障害は高頻度に免疫抑制を伴う。例えば、器官または組織の移植後の免疫抑制療法は、特定の新生物に関連しており、そして多くのＬＰＤが、ウイルス感染を含む免疫不全の背景で発現する（非特許文献１に概説）。
【０００３】
移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）は、固形臓器および幹細胞移植の破壊的な合併症であって、７０〜８０％の死亡率を有し得る（非特許文献２）。ＰＴＬＤはしばしば、ほとんどの健常な成人において潜伏感染を樹立するヘルペスウイルスである、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）に関連する。ＰＴＬＤの頻度は、移植された器官、ならびに免疫抑制の頻度および期間に応じて変化する。腎移植のレシピエントにおいては、ＰＴＬＤは患者の１〜２％で生じるが、その頻度は、骨髄で、および肺移植のレシピエントでは２０％程度の高さである（非特許文献２、前出）。以前に抗ＥＢＶ免疫を樹立していない小児および移植のレシピエントは、とりわけＰＴＬＤの発症のリスクが最大である。ＰＴＬＤの治療の許容された標準はなく、そして患者の疾患の進行はしばしば、現在利用可能な治療に応答性ではない。しかし、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）活性は、ＰＴＬＤからの予防および回復に関与すると考えられる。
【０００４】
免疫抑制は、潜伏感染した細胞のＥＢＶ由来形質転換の進行を正常には予防する、ＥＢＶ特異的な細胞免疫を阻害すると考えられる。免疫抑制の低下はＰＴＬＤ患者の全てではないが、ある程度の例を処置するのには有効である（非特許文献２、前出）が、このような治療は、移植片の損失および他の重篤な合併症を生じ得る、急性拒絶のエピソードを発症させる確率を増大する。ＣＤ−２０タンパク質に関する抗ウイルス、細胞およびモノクローナル抗体療法が、ある程度のＰＴＬＤ患者の処置について示され得る。しかし完全に満足なものはない（非特許文献３；非特許文献４）。
【０００５】
９例のＰＴＬＤ患者の予備的な臨床的観察では、低ＩＦＮ−γ産生に関連する特定のＩＦＮ−γサイトカイン遺伝子型が、ＰＴＬＤを発症する腎臓移植レシピエントにおいて蔓延していることが示された（非特許文献５）。ＩＦＮ−γは、免疫サーベイランスに重要である細胞免疫における重要な調節性サイトカインである。ＩＦＮ−γ遺伝子における１つの多形性は、チミジン（Ｔ）またはアデノシン（Ａ）のいずれかを含む＋８７４位置の一塩基遺伝子多型（単一ヌクレオチド多型）である。＋８７４位置のチミジンの存在は、高サイトカイン産生に関連するマイクロサテライト反復と相関しており、そしてＮＦ−ｋＢ結合部位を生成する（非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８）。Ｔ／Ｔ遺伝子型はしばしば、「高プロデューサー（ｈｉｇｈ ｐｒｏｄｕｃｅｒ）」と呼ばれ、そしてＡ／Ａ遺伝子型は「低プロデューサー（ｌｏｗ ｐｒｏｄｕｃｅｒ）」と呼ばれる（非特許文献８）。臨床研究では、低い産生である、Ａ／Ａ ＩＦＮ−γ遺伝子型は、１３５例の非ＰＴＬＤ腎移植患者のうちの２７％に比較して、９例のＰＴＬＤ患者のうち８０％で存在し（非特許文献５、前出）、そして多形性は、ＰＴＬＤ発症の潜在的な危険因子として同定された。
【０００６】
トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ−β）は、ＩＦＮ−γに拮抗性であって、ＥＢＶの活性化、複製および形質転換の増大に関係している（非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１；非特許文献１２）。ＴＧＦ−βはまた、Ｔ細胞エフェクター機能を含む、複数のＴ細胞および抗原提示細胞（ＡＰＣ）機能を抑制する偏在性の多能性のサイトカインであり、そしてそうでなければ免疫学的監視を阻害し得る（非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５を参照のこと）。ＴＧＦ−βおよびＩＦＮ−γの拮抗性および調節対抗活性（ｃｏｕｎｔｅｒ−ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ）は、非特許文献１６に概説されており、そして研究によって、ＩＦＮ−γがＴＧＦ−β活性を阻害し得、逆もまた真であることが示されている。
【非特許文献１】Ｂｒｕｓａｍｏｌｉｎｏら、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ７４：６０５〜６２２（１９８９）
【非特許文献２】Ｐａｙａら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６８：１５１７〜１５２５（１９９９）
【非特許文献３】Ｌｉｕら、Ｒｅｃｅｎｔ Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５９：１２３〜１３３（２００２）
【非特許文献４】Ｚｉｌｚら、Ｊ．Ｈｅａｒｔ Ｌｕｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０：７７０〜７７２（２００１）
【非特許文献５】ＶａｎＢｕｓｋｉｒｋら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．３３：１８３４（２００１）
【非特許文献６】Ｐｒａｖｉｃａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２５：１７６Ｓ（１９９７）
【非特許文献７】Ｐｒａｖｉｃａら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ２６：１〜３（１９９９）
【非特許文献８】Ｐｒａｖｉｃａら、Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６１：８６３〜８６６（２０００）
【非特許文献９】Ｓｃｈｕｓｔｅｒら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２８４：８２〜８６（１９９１）
【非特許文献１０】ｄｉＲｅｎｚｏら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ５７：９１４〜９１９（１９９４）
【非特許文献１１】Ｌｉａｎｇら，Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７７：２３３４５〜２３３５７（２００２）
【非特許文献１２】Ｆａｈｍｉら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：５８１０〜５８１８（２０００）
【非特許文献１３】Ｌｅｔｔｅｒｉｏら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：１３７〜１６１（１９９８）
【非特許文献１４】Ｇｏｌｄ，Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｇ．１０：３０３〜３６０（１９９９）
【非特許文献１５】Ａｌｔｉｏｋら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．４０：１１１〜１１５（１９９４）
【非特許文献１６】Ｓｔｒｏｂｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １８：６１〜６４（１９９７）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
現在の治療は、最適ではないので、ＰＴＬＤを含むウイルス関連のＬＰＤを処置または予防するための方法および組成物が必要である。低いＩＦＮ−γレベルおよび／または不十分なＴ細胞応答性に関連するリンパ増殖性の障害を処置する方法の必要性も存在する。特異的な治療を受けるための候補を含む、処置の候補である患者を同定する更なる手段が必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
本発明は、例えば、ＴＧＦ−βアンタゴニストの投与によるＴＧＦ−β活性の阻害が、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）を含む進行性のウイルス関連リンパ増殖性障害（ＬＰＤ）を予防、処置または遅らせるという発見に関する。ＴＧＦ−βアンタゴニストの投与は、ＬＰＤからの防御、およびヒトＣＤ８＋細胞の増殖を生じる。さらに、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖およびＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、ＴＧＦ−β活性の阻害およびＬＰＤの阻害と相関する。
【０００９】
本発明は、ＥＢＶ関連ＬＰＤおよびＰＴＬＤを含む、ウイルス関連のＬＰＤの発症のリスクを処置、予防、および軽減するための方法を提供する。この方法はさらに、例えば、ヘルペスウイルス、ＨＨＶ−８、サイトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｃ型レトロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（Ｃ型レトロウイルス）および／またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２）のようなウイルス感染に対するＴ細胞応答性を増強するための方法を提供する。この開示された方法は、ＬＰＤのリスクがあるか、ＬＰＤに感受性であるか、またはＬＰＤに罹患している哺乳動物被験体に対して、ＴＧＦ−βアンタゴニストの治療上有効な量を投与する工程を包含する。本発明の方法によって処置される集団としては、限定はしないが、ＬＰＤに罹患しているかまたはその発生のリスクがある被験体が挙げられ、これには、例えば、免疫不全を有するか、または免疫抑制を誘導するように処置されている被験体が挙げられる。特定の実施形態では、ＩＦＮ−γのレベルが低い個体でウイルス関連障害を処置するための方法が提供される。
【００１０】
本発明はさらに、ウイルス関連ＬＰＤの発症の１つ以上の危険因子の存在、またはその進行もしくは処置に対する応答性を評価して、この危険因子を有する被験体に対してＴＧＦ−βアンタゴニストを投与するための方法を提供する。例えば、ＩＦＮ−γレベルまたはＩＦＮ−γ遺伝子型を評価するかまたは測定する工程、および低ＩＦＮ−γレベルを有するか、またはＡ／ＴもしくはＡ／Ａ＋８７４遺伝子型を有する被験体を処置する工程を包含する方法が本明細書において提供される。
【００１１】
本発明の方法において用いられる投与方法および組成物が提供される。開示された方法では、ＴＧＦ−βアンタゴニストとしては、限定はしないが、ＴＧＦ−βの１つ以上のアイソフォームに対する抗体；ＴＧＦ−βレセプターに対する抗体；可溶性ＴＧＦ−βレセプターおよびそのフラグメント；ならびにＴＧＦ−β阻害性の糖およびプロテオグリカン、ならびにＴＧＦ−βの低分子インヒビターが挙げられる。
【００１２】
特定の実施形態では、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、モノクローナル抗体またはそのフラグメントであって、ＴＧＦ−βのそのレセプターに対する結合をブロックする。非限定的な例示的な実施形態としては、非ヒトモノクローナル抗ＴＧＦ−β抗体、例えば、マウスモノクローナル抗体１Ｄ１１（１Ｄ１１．１６、ＡＴＣＣ寄託指定番号ＨＢ９８４９としても公知）、その誘導体（例えば、ヒト化抗体）および完全ヒトモノクローナル抗ＴＧＦ−β１抗体（例えば、ＷＯ００／６６６３１に記載されるＣＡＴ１９２）またはその誘導体が挙げられる。
【００１３】
以下の要約および以下の説明は、特許請求された本発明の限定ではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
（詳細な説明）
本発明は、抗ＴＧＦ−β抗体のような、ＴＧＦ−βアンタゴニストを用いるＴＧＦ−βの阻害または中和が、哺乳動物被験体におけるウイルス関連ＬＰＤの発症および進行を軽減させるという発見および実証に一部は基づく。このデータによって、ＴＧＦ−βアンタゴニストの使用は、それで処置された被験体における低ＩＦＮ−γレベルと関連する腫瘍発達の進行を予防または阻害することが示される。これらのデータはまた、ＴＧＦ−βアンタゴニストの投与がＣＴＬ再刺激および増殖のＴＧＦ−β阻害を逆転することを示す。ＬＰＤのマウスモデルにおけるＴＧＦ−βの中和は、ＣＤ８＋細胞の増殖を生じ、そしてＬＰＤ進行を軽減する。さらに、このデータによって、ＩＦＮ−γ遺伝子型は、例えば、ＰＴＬＤのリスクがより大きい移植レシピエントを同定するのに、そして予防的および治療的なストラテジーを開発するのに、有用な情報を提供することが示される。従って、本発明は、ウイルス関連の障害およびＬＰＤ、例えば、哺乳動物における、ウイルス関連ＬＰＤ、ＥＢＶ関連ＬＰＤおよび／または移植後リンパ増殖性障害の発症のリスクを処置、予防および軽減するための方法を提供する。
【００１５】
本発明がさらに容易に理解され得るように、特定の用語を最初に規定する。さらなる定義は、詳細な説明全体にわたって示される。
【００１６】
「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、本明細書において用いる場合、免疫グロブリンまたはその一部を指し、そして供給源、産生の方法および他の特徴にかかわらず抗原結合部位を含む任意のポリペプチドを包含する。この用語は、限定はしないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単価抗体、多価抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、単鎖抗体、キメラ抗体、合成抗体、組み換え抗体、ハイブリッド抗体、変異抗体、およびＣＤＲグラフト化（接合）抗体を包含する。当業者によって認識されるように、このような分子のいずれか、例えば、「ヒト（ｈｕｍａｎ）」抗体は、その免疫原性を減少するか、その親和性を増大するか、その特異性を変更するか、または他の目的のために、操作され（例えば、「生殖系列にされ（ｇｅｒｍｌｉｎｅｄ）」）てもよい。「抗原結合ドメイン（ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ）」という用語は、抗原の一部または全てに対して特異的に結合するかまたは相補的である領域を含む、抗体分子の一部をいう。抗原が大きい場合、抗体は、この抗原の特定の一部にしか結合しなくてもよい。「エピトープ」または「抗原性決定基（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ）」とは、抗体の抗原結合ドメインとの特異的な相互作用を担う抗原分子の一部である。抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）またはその一部を含んでもよい。抗原結合ドメインは、１つ以上の抗体可変ドメインによって提供され得る（例えば、ＶＨドメインからなる、いわゆる、Ｆｄ抗体フラグメント、またはＶＨドメインおよびＶＬドメインからなる、いわゆる、Ｆｖ抗体フラグメント）。「抗ＴＧＦ−β抗体（ａｎｔｉ−ＴＧＦ−β ａｎｔｉｂｏｄｙ）」または「ＴＧＦ−βの少なくとも１つのアイソフォームに対する抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ ｉｓｏｆｏｒｍ ｏｆ ＴＧＦ−β）」という用語は、ＴＧＦ−βの少なくとも１つのエピトープに対して特異的に結合する任意の抗体をいう。「ＴＧＦ−βレセプター抗体（ＴＧＦ−β ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」および「ＴＧＦ−βレセプターに対する抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ ａ ＴＧＦ−β ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」という用語は、ＴＧＦ−βレセプターの少なくとも１つのエピトープ（例えば、Ｉ型、ＩＩ型またはＩＩＩ型）に特異的に結合する任意の抗体をいう。
【００１７】
本明細書において用いる場合、「治療的な化合物（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」という用語は、ＴＧＦ−βの生物学的な活性に、直接的または間接的に影響することによって、ＴＧＦ−βを調節するかまたは阻害し得る任意の化合物をいう。
【００１８】
「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」、「中和する（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ）」、「拮抗する（ａｎｔａｇｏｎｉｚｅ）」およびそれらの同語源の用語は、ある化合物が特定の反応または生物学的活性のアンタゴニストとして作用する能力をいう。量または生物学的活性の減少は好ましくは、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上である。この用語は、目的の生物学的活性を担う少なくとも１つのタンパク質（例えば、ＴＧＦ−βおよびＴＧＦ−βレセプター）の相対的な量または活性における減少をいう。さらに、この用語は、例えば、アッセイ（例えば、Ｔ細胞傷害性、活性化または増殖アッセイ）において測定されたとおり、または本明細書に記載のように、ＴＧＦ−βまたはＴＧＦ−βレセプターの生物学的活性における相対的な減少をいう。
【００１９】
本明細書において用いる場合、「ＴＧＦ−βアンタゴニスト」およびその同語源の用語、例えば、「インヒビター（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）」、「中和剤（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｇｅｎｔ）」および「下方制御因子（ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）」とは、ＴＧＦ−βの生物学的活性のアンタゴニストとして作用する、化合物（または、必要に応じて、その特性）をいう。ＴＧＦ−βアンタゴニストは、例えば、ＴＧＦ−βに結合して、その活性を中和し得るか、ＴＧＦ−β発現レベルを減少し得るか、安定性または活性な成熟型への前駆体分子の変換に影響し得るか、１つ以上のレセプターに対するＴＧＦ−βの結合を妨害するか、またはＴＧＦ−βレセプターの細胞内シグナル伝達を妨げ得る。「ＴＧＦ−βアンタゴニストに対する（ｄｉｒｅｃｔ ＴＧＦ−β ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）」という用語は一般に、ＴＧＦ−βの生物学的活性を直接下方制御する任意の化合物をいう。ある分子は、それが、ＴＧＦ−β遺伝子、ＴＧＦ−β転写物、ＴＧＦ−βポリペプチド、ＴＧＦ−βリガンドまたはＴＧＦ−βレセプターと相互作用することによって活性を下方制御する場合、ＴＧＦ−βの生物学的活性を「直接下方制御する（ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｓ）」。ＴＧＦ−βアンタゴニストの生物学的活性を中和することを評価するための方法は、当該分野で公知であり、そして例は下に記載している。
【００２０】
「リンパ増殖性障害（ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」、「ＬＰＤ」およびそれらの同語源の用語は、リンパ系組織（例えば、リンパ節、脾臓、胸腺）で生成されたリンパ球、白血球が過剰生産されるかまたは異常に作用する障害をいう。ＬＰＤは、リンパ球またはリンパ組織の異常な増殖、すなわち、例えば、「ウイルス関連リンパ増殖性障害（ｖｉｒａｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」または「移植後リンパ増殖性障害（ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」を包含する。リンパ球としては、胸腺由来リンパ球（Ｔ細胞）、例えば、骨髄由来のリンパ球（Ｂ細胞）およびナチュラルキラー（ＮＫ細胞）が挙げられる。リンパ球は、増殖、活性化および成熟を含む多数の異なる段階を通じて進行し、そしてリンパ腫または異常な増殖が各々の段階で発達し得る。障害は、悪性の新生物であってもよく（そして、侵襲性もしくは無痛性、または低、中もしくは高い悪性度として分類されてもよく）、これには、ＩＦＮ−γに関連する障害が挙げられ、またはこの障害は、リンパ細胞の非悪性の異常な増殖に関与し得る。ＬＰＤとしては、処置なしでは解消されない、そして／または過剰な細胞増殖、例えば、増殖性、モノクローナル、ポリクローナルもしくはオリゴクローンのリンパ系腫瘍に関与する、任意のモノクローナルまたはポリクローナルのＬＰＤが挙げられる。細胞増殖は、正常よりも急速であってもよいし、そして新規の増殖中断を開始した刺激後に継続してもよい。新生物は、構造的な組織化および正常な組織との機能的な協調の、部分的または完全な欠失を示し、そして良性（良性腫瘍）または悪性（ガン）のいずれであってもよいが組織の別個の塊を形成してもよい。リンパ系（またはその他）の細胞または組織の異常な増殖、機能または構造を検出する方法は、ＰＴＬＤのようなウイルス関連ＬＰＤを診断、その進行をモニター、またはその治療因子の有効性をアッセイするために用いられ得る。特定の実施形態では、ＬＰＤとしては、ガンを含まない。他の実施形態では、ウイルス関連のＬＰＤとしては、ガンを含まない。
【００２１】
このような疾患または障害としては、限定はしないが、Ｔ細胞リンパ増殖性疾患、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、侵襲性大細胞リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、バーキットリンパ腫、カポジ肉腫、およびエプスタイン・バーウイルス関連リンパ腫が挙げられる。「移植後リンパ増殖性障害（ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｌｙｍｐｈｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」すなわち「ＰＴＬＤ」とは、器官、組織または幹細胞移植および付随する免疫抑制療法に関連する、変化した過形成および／または新生物性の障害をいう。ＰＴＬＤとしては、例えば、反応性のポリクローナルＢ細胞過形成のようなリンパ球過形成から、ポリクローナルまたはモノクローナルのＢ細胞リンパ腫におよぶ障害が挙げられる。侵襲性の非ホジキンリンパ腫の例としては、限定はしないが、びまん性大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＨＴＬＶ−１＋）、外套細胞リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、真性組織球性リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫および侵襲性ＮＫ細胞白血病が挙げられる。無痛性非ホジキンリンパ腫の例としては、限定はしないが、濾胞性リンパ腫、びまん性小リンパ球性リンパ腫／慢性リンパ球性白血病、リンパ形成性（ｌｙｍｐｈｏｐｌａｓｔｉｃ）リンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ＭＡＬＴ（節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫）、単球様 Ｂ細胞リンパ腫（節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫）、有毛リンパ球を有する脾リンパ腫（脾性辺縁帯リンパ腫）、ヘアリー細胞白血病および菌状息肉腫／セザリー症候群が挙げられる。
【００２２】
「ウイルス関連（ｖｉｒａｌ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）」増殖性障害とは、ウイルスによって生じるかまたはウイルスと相関するＬＰＤをいう。ウイルス関連ＬＰＤは、例えば、ヘルペスウイルス、ＨＨＶ−８、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｃ型レトロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（Ｃ型レトロウイルス）および／またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２）などによって生じてもよいし、またはそれらに関連してもよい。ＨＩＶまたはＡＩＤＳ関連のガンとしては、ＨＩＶ関連のＬＰＤが挙げられ、そして例は、カポジ肉腫、非ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＨＴＬＶ−１＋）およびＡＩＤＳ関連リンパ腫である。「ＥＢＶ−関連（ＥＢＶ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）」障害としては、例えば、単核球症、上咽頭癌、浸潤性乳癌、胃癌およびＥＢＶ関連ＬＰＤが挙げられる。「ＥＢＶ−関連ＬＰＤ（ＥＢＶ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＬＰＤ）」としては、限定はしないが、原発性ＣＮＳリンパ腫、ＰＴＬＤ、バーキットリンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、Ｘ連鎖ＬＰＤ、チェディアック−東症候群、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫が挙げられる。難治性の非ホジキンリンパ腫、例えば、外套細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、およびＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫の約４０％が、例えば、ＥＢＶに関連する。Ｘ連鎖性ＬＰＤはしばしば、ＥＢＶウイルス感染に対するＴ細胞媒介性応答を包含する。ＡＩＤＳ患者、器官移植レシピエントおよび遺伝的免疫障害におけるような免疫不全は、潜伏ＥＢＶを再活性化させ得、これは、例えば、異常なリンパ球の増殖およびＥＢＶ関連ＬＰＤを発症させる能力を生じる。ＬＰＤに関与する細胞のような、異常な細胞におけるウイルスまたはウイルス感染の存在を検出する方法は、当該分野で公知である。ウイルス核酸またはポリペプチドは、例えば、異常な細胞のような、細胞、組織または生物で検出され得る。また、ウイルスに特異的な免疫応答を検出する方法が公知である。トランス−ビボＤＴＨアッセイのような遅延型過敏性（ＤＴＨ）アッセイを用いて、例えば、制御性Ｔ細胞を検出してもよい。このようなアッセイでは、ヒトまたは他の哺乳動物末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、例えば、ウイルス抗原の存在下または非存在下でキャリアコントロールと混合して、異種のナイーブなレシピエント、例えば、ナイーブなマウスの耳介または足蹠に注射する。ＰＢＭＣのドナーがチャレンジ抗原に対して以前に感作されていた場合、ＤＴＨ様の膨張反応が観察される。
【００２３】
低ＩＦＮ−γに関連するＬＰＤ、または低ＩＦＮ−γレベルに関連がある、またはないウイルス関連ＬＰＤについて「リスクがある（ａｔ ｒｉｓｋ）」被験体とは、障害を発症する確率を増大する１つ以上の危険因子を有する被験体である。ウイルス関連のＬＰＤまたはＰＴＬＤを発症するリスクがあると被験体をみなす要因の１つは、彼または彼女が、ＩＦＮ−γ遺伝子の＋８７４位置でＡ／ＡまたはＡ／Ｔ遺伝子型のようなＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型についてホモ接合性であるかまたはヘテロ接合性であるかということである。低ＩＦＮ−γレベルに関連するＬＰＤまたはウイルス関連ＬＰＤのリスクがある被験体は、１つ以上の他の危険因子を有し得、これにはとりわけ、以下が挙げられる：免疫不全；免疫抑制療法；器官、組織または細胞の移植（幹細胞移植を含む）；移植前のＥＢＶ血清陰性状態；ＥＢＶ再活性化；潜伏性ウイルスの再活性化；免疫不全患者における原発性ＥＢＶまたは他のウイルス感染；被験体の年齢（すなわち、小児または成人）；ならびに移植片拒絶を妨げるために投与される免疫抑制療法のタイプおよび期間など。リスクがある被験体は、例えば、血液および組織におけるウイルス負荷を評価する（例えば、移植後の増大したウイルス負荷を検討する）ことによって、またはリンパ球、Ｂ細胞の数もしくは総血清ＩｇＭの増大を試験することによって、同定され得る。ＥＢＶ（または他のウイルス）は、必要に応じて、サザンブロットハイブリダイゼーションによって、または定量的ＰＣＲもしくは半定量的ＰＣＲを含むポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、または被験体の血液、血清もしくは組織中の陽性のウイルス血清学（抗ウイルスカプシド抗原ＩｇＧ（ＥＢＶ血清学））によって、検出され得る。
【００２４】
「免疫不全（ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）」は、遺伝性であっても、後天性であっても、または医原性（診断、医学的治療または外科的手順によって誘導される）であってもよい。遺伝性の免疫不全の例としては、例えば、重症複合免疫不全、自己免疫疾患、Ｘ連鎖免疫不全、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、分類不能型免疫不全、チェディアック−東症候群、ウィスコット・アルドリッチ症候群または毛細血管拡張性運動失調症が挙げられる。後天性免疫不全は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のような疾患または感染によって生じ得る。医原性免疫不全としては、免疫抑制療法によって生じるものが挙げられ、これには、器官または組織の移植に付随する治療が挙げられる。免疫抑制治療療法とは、免疫抑制を誘導する化合物または組成物の投与をいい、すなわち、これは免疫学的な応答の発生を予防または妨害する。治療的な免疫抑制は、シクロスポリン、アザチオプリンおよび／またはプレドニゾロン、ならびに本明細書のいずれかに列挙されるものを含む他の免疫抑制剤の投与を包含し得る。
【００２５】
「処置（する）（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療法（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｅｔｈｏｄ）」およびそれらの同語源の用語は、処置または予防／対処用の手段をいう。処置の必要な個体としては、特定の医学的障害を既に有する個体、ならびに最終的に障害に罹患し得る個体が挙げられる。処置の必要性は、例えば、障害の発生に関連する１つ以上の危険因子の存在、障害の存在もしくは進行、または障害を有する被験体の処置に対する受容度によって、評価され得る。処置としては、障害の進行を遅らせることまたは逆転することを含み得る。
【００２６】
「治療的に有効な用量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｄｏｓｅ）」または「治療上有効な量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」という用語は、被験体においてＬＰＤ、ウイルス関連ＬＰＤ、ＥＢＶ関連ＬＰＤおよび／または移植後ＬＰＤの症状の発現の予防もしくは遅延または寛解を、あるいは所望の生物学的転帰の獲得、例えば、異常な増殖の減少を生じる化合物の量をいう。有効な量は、当該分野で周知の、そして本明細書の引き続くセクションに記載のような方法によって決定され得る。
【００２７】
「特異的な相互作用（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）」、「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」、またはそれらの同語源の用語は、２つ以上の分子が、生理学的な条件下で比較的安定である複合体を形成することを意味する。特定の結合は、高い親和性および低〜中度の能力で特徴付けられる。非特異的な結合は通常、中度〜高度の能力で低親和性を有する。代表的には、結合は、親和性定数Ｋａが１０６Ｍ−１より高いか、好ましくは１０８Ｍ−１より高い場合に特異的とみなされる。必要に応じて、非特異的な結合は、結合条件を変化することによって特異的な結合に実質的に影響することなく、軽減され得る。この条件は、当該分野で公知であり、そして慣用的な技術を用いる当業者は適切な条件を選択し得る。この条件は通常、結合タンパク質の濃度、溶液のイオン強度、温度、結合させる時間、無関係の分子（例えば、血清アルブミン、ミルクカゼイン）の濃度などに関して規定される。
【００２８】
「実質的に同一である（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｉｄｅｎｔｉｃａｌ）」という句は、関連のアミノ酸配列が、所定の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であることを意味する。例えば、このような配列は、種々の種由来の改変体であってもよいし、またはそれらは、所定の配列から短縮、欠失、アミノ酸置換または付加によって誘導されてもよい。例えば、ＴＧＦ−βアンタゴニストの変異体、フラグメントまたは誘導体は、ＴＧＦ−βアンタゴニストに比較した場合、実質的に同一のアミノ酸または核酸配列を有し得、そしてＴＧＦ−βの生物学的活性を直接阻害する能力を保持し得る。２つのアミノ酸配列の間の同一性パーセントは、標準的なアラインメントアルゴリズム、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３〜４１０（１９９０）に記載のＢａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）、Ｎｅｅｄｌｍａｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４４〜４５３（１９７０）のアルゴリズム、またはＭｅｙｅｒｓら、Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１〜１７（１９８８）のアルゴリズムなどによって決定され得る。このようなアルゴリズムは、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＰおよび「ＢＬＡＳＴ ２ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」プログラム（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴを参照のこと）に組み込まれている。このようなプログラムを利用する場合、デフォールトパラメーターが用いられ得る。例えば、ヌクレオチド配列については、以下の設定を「ＢＬＡＳＴ ２ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」について用いてもよい：プログラムＢＬＡＳＴＮ、マッチ２についてリウォード、ミスマッチ−２についてペナルティー、オープンギャップおよびエクステンションギャップペナルティーがそれぞれ５および２、ギャップｘ＿ドロップオフ ５０、期待値１０、ワードサイズ１１、フィルターＯＮ。アミノ酸配列については、以下の設定を、「ＢＬＡＳＴ ２ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」について用いてもよい：プログラムＢＬＡＳＴＰ、マトリックスＢＬＯＳＵＭ６２、オープンギャップおよびエクステンションギャップペナルティーがそれぞれ１１および１、ギャップｘ＿ドロップオフ ５０、期待値１０、ワードサイズ３、フィルターＯＮ。本出願のアミノ酸配列および核酸配列は、参照によって援用されるものを含み、これには、ホモログ、改変体または実質的に同一な配列を挙げることができる。
【００２９】
本明細書において用いる場合、「ＴＧＦ−β」は、他に特に示さない限り、ＴＧＦ−βの任意の１つ以上のアイソフォームをいう。同様に、「ＴＧＦ−βレセプター（ＴＧＦ−β ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」という用語は、他に示さない限り、少なくとも１つのＴＧＦ−βアイソフォームに結合する任意のレセプターをいう。現在、ＴＧＦ−βの５つの公知のアイソフォームがあり（ＴＧＦ−β１〜β５）、その全てがお互いに相同であり（６０〜８０％同一性）、約２５ｋＤａのホモ二量体を形成し、そして共通のＴＧＦ−βレセプター（ＴβＲ−Ｉ、ＴβＲ−ＩＩ、ＴβＲ−ＩＩＢおよびＴβＲ−ＩＩＩ）に作用する。ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、およびＴＧＦ−β３は、哺乳動物に見出される。ＴＧＦ−βの構造的および機能的な局面、ならびにＴＧＦ−βレセプターは、当該分野で周知である（例えば、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、編、Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍら、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，２００１を参照のこと）。ＴＧＦ−βは種の間で極めてよく保存されている。例えば、ラットおよびヒト成熟ＴＧＦ−β１のアミノ酸配列はほぼ同一である。従って、ＴＧＦ−βのアンタゴニストは、高い種交差反応性を有すると期待される。
【００３０】
（ＴＧＦ−βアンタゴニスト）
ＴＧＦ−βは、成熟ＴＧＦ−βを生成するために分泌の前に切断される約４００アミノ酸（ａａ）のプレプロタンパク質として合成されるジスルフィド結合した二量体である。「潜伏関連ペプチド（ｌａｔｅｎｃｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）」（ＬＡＰ）として公知のＮ末端切断フラグメントは、この二量体に対して非共有的に結合したままであってもよく、これによってＴＧＦ−βを不活性化する。インビボで単離されたＴＧＦ−βは、ＬＡＰに関連したこの不活性な「潜伏（ｌａｔｅｎｔ）」型において主に見出される。潜伏ＴＧＦ−β複合体は、いくつかの方式で、例えば、陽イオン非依存性マンノース−６−リン酸塩／インスリン様増殖因子ＩＩレセプターと呼ばれる細胞表面レセプターに対する結合によって、活性化され得る。結合は、ＬＡＰ内のグリコシル化部位に結合したマンノース−６−リン酸塩残基を通じて生じる。レセプターに対する結合の際、ＴＧＦ−βは、成熟形態で放出される。次いで、成熟の活性なＴＧＦ−βはそのレセプターに対する結合が遊離されて、その生物学的機能を発揮する。ＩＩ型ＴＧＦ−βレセプターにおける主要なＴＧＦ−β結合ドメインは、１９個のアミノ酸配列に対してマッピングされている（Ｄｅｒｍｅｔｒｉｏｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１：１２７５５（１９９６））。
【００３１】
本発明の方法において用いられ得るＴＧＦ−βアンタゴニストの例としては、限定はしないが、以下が挙げられる：ＴＧＦ−βの１つ以上のアイソフォームに対するモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体（米国特許第５，５７１，７１４号；ＷＯ９７／１３８４４；ＷＯ００／６６６３１；ドミナントネガティブおよび可溶性のＴＧＦ−βレセプターまたはＴＧＦ−βレセプターに対する抗体（Ｆｌａｖｅｌｌら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：４６〜５３（２００２）；米国特許第５，６９３，６０７号；米国特許第６，００１，９６９号；米国特許第６，００８，０１１号；米国特許第６，０１０，８７２号；ＷＯ９２／００３３０；ＷＯ９３／０９２２８；ＷＯ９５／１０６１０号；およびＷＯ９８／４８０２４）；ＬＡＰ（ＷＯ９１／０８２９１）；ＬＡＰ関連ＴＧＦ−β（ＷＯ９４／０９８１２）；ＴＧＦ−β結合糖タンパク質／プロテオグリカン、例えば、フェチュイン（米国特許第５，８２１，２２７号）；デコリン、ビグリカン、フィブロモジュリン、ルミカンおよびエンドグリン（米国特許第５，５８３，１０３号；米国特許第５，６５４，２７０号；米国特許第５，７０５，６０９号；米国特許第５，７２６，１４９号；米国特許第５，８２４，６５５号；米国特許第５，８３０，８４７号；米国特許第６，０１５，６９３号；ＷＯ９１／０４７４８；ＷＯ９１／１０７２７；ＷＯ９３／０９８００およびＷＯ９４／１０１８７）；ＴＧＦ−βアクセサリレセプターであって、ｒ１５０タンパク質、その可溶型、誘導体または前駆体のような、ＴＧＦ−β１に直接結合するレセプターを含む、レセプター（米国特許公開番号２００４０１９１８６０）；マンノース−６−リン酸塩またはマンノース−１−リン酸塩（米国特許第５，５２０，９２６号）；プロラクチン（ＷＯ９７／４０８４８）；インスリン様増殖因子ＩＩ（ＷＯ９８／１７３０４）；植物、真菌および細菌の抽出物（ＥＵ ８１３８７５；ＪＰ ８１１９９８４；および米国特許第５，６９３，６１０号）；アンチセンスオリゴヌクレオチド（米国特許第５，６８３，９８８号；米国特許第５，７７２，９９５号；米国特許第５，８２１，２３４号；米国特許第５，８６９，４６２号およびＷＯ９４／２５５８８）；低分子インヒビター、例えば、セリン／トレオニンキナーゼインヒビター（ＷＯ０４／２１９８９；ＷＯ０３／８７３０４；ＷＯ０４／２６８７１；ＷＯ０４／２６３０２；ＷＯ０４／２４１５９、米国特許第６，１８４，２２６号；ＷＯ０３／９７６３９；およびＷＯ０４／１６６０６）；ＳＭＡＤおよびＭＡＤを含む、ＴＧＦ−βシグナル伝達に関与するタンパク質（欧州特許８７４０４６；ＷＯ９７／３１０２０；ＷＯ９７／３８７２９；ＷＯ９８／０３６６３；ＷＯ９８／０７７３５；ＷＯ９８／０７８４９；ＷＯ９８／４５４６７；ＷＯ９８／５３０６８；ＷＯ９８／５５５１２；ＷＯ９８／５６９１３；ＷＯ９８／５３８３０；ＷＯ９９／５０２９６；米国特許第５，８３４，２４８号；米国特許第５，８０７，７０８号；および米国特許第５，９４８，６３９号）、ＳｋｉおよびＳｎｏ（Ｖｏｇｅｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６：６６５（１９９９）；およびＳｔｒｏｓｃｈｅｉｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６：７７１〜７７４（１９９９））ならびにＴＧＦ−βの生物学的活性を直接阻害する能力を保持する上記で同定された分子の任意の変異体、フラグメントまたは誘導体。
【００３２】
ある実施形態では、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、直接のＴＧＦ−βアンタゴニスト、例えば、ＴＧＦ−βのそのレセプターに対する結合をブロックする抗体である。この抗体は、ＴＧＦ−βの少なくとも１つのアイソフォームに対して、または少なくとも１つのＴＧＦ−βレセプターの細胞外ドメインに対して特異的に結合するような抗体である。いくつかの他の実施形態では、抗ＴＧＦ−β抗体は、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３からなる群より選択されるＴＧＦ−βの少なくとも１つのアイソフォームに対して特異的に結合する。さらに他の実施形態では、抗ＴＧＦ−β抗体は特異的に以下の少なくとも１つに対して結合する：（ａ）ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３（「汎中和抗体（ｐａｎ−ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」とも呼ばれる）；（ｂ）ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２；（ｃ）ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β３；ならびに（ｄ）ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３。種々の実施形態では、ＴＧＦ−βの、それが特異的に結合する、少なくとも１つのアイソフォームについてのＴＧＦ−β抗体の親和性定数Ｋａは好ましくは、１０６Ｍ−１、１０７Ｍ−１、１０８Ｍ−１、１０９Ｍ−１、１０１０Ｍ−１、１０１１Ｍ−１、１０１１Ｍ−１、または１０１２Ｍ−１より大きい。なおさらなる実施形態では、本発明の抗体は、ヒトＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２および／またはＴＧＦ−β３に対して実質的に同一であるタンパク質に特異的に結合する。またヒトでの使用について意図されるのは、引用文献に記載された任意の脊椎動物種由来の非ヒト抗体のヒト化型および誘導体である。このような改変体の産生は、当業者の通常の技術の十分に範囲内である（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ編、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ、第２版、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９５を参照のこと）。
【００３３】
非限定的な例示的な実施形態では、抗ＴＧＦ−β抗体は、ハイブリドーマ１Ｄ１１．１６によって生成されるマウスモノクローナル抗体１Ｄ１１である（ＡＴＣＣ寄託指定番号（Ｄｅｐｏｓｉｔ Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ Ｎｏ．）ＨＢ９８４９、米国特許第５，５７１，７１４号；同第５，７７２，９９８号；および同第５，７８３，１８５号にも記載）。１Ｄ１１重鎖可変領域の配列は、アクセッション番号ＡＡＢ４６７８７として利用可能である。従って、関連の実施形態では、抗ＴＧＦ−β抗体は、１Ｄ１１の誘導体、例えば、ＡＡＢ４６７８７における配列と同一のＣＤＲ配列を含む抗体、例えばヒト化抗体である。なおさらなる非限定的な例示的実施例では、抗ＴＧＦ−β抗体は、Ｌｕｃａｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：１４１５〜１４２２（１９９０）に従う抗体、またはファージディスプレイによって生成される完全ヒト組み換え抗体、例えば、ＷＯ００／６６６３１、米国特許第６，４９２，４９７号および米国特許出願第２００３／００９１５６６号および２００３／００６４０６９号に記載されるＣＡＴ１９２、またはそれらに開示されるＣＤＲ配列を含む抗体である。なおさらなる実施形態では、抗ＴＧＦ−β抗体は、１Ｄ１１、ＣＡＴ１９２またはＣＡＴ１５２からガイドされた選択によって生成される抗体である。
【００３４】
１Ｄ１１抗体はＴＧＦ−βの３つ全ての哺乳動物アイソフォームに特異的に結合するが、ＣＡＴ１９２はＴＧＦ−β１にのみ特異的に結合する。１Ｄ１１およびＣＡＴ１９２についてのこの抗原親和性はそれぞれ、ほぼ１ｎＭおよび８．４ｐＭである。１Ｄ１１のエピトープ（Ｄａｓｃｈら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：１５３６〜１５４１（１９９８））およびＣＡＴ１９２は、成熟ＴＧＦ−βのＣ末端部分にマッピングされている。
【００３５】
ＴＧＦ−βおよびＴＧＦ−βアンタゴニストの中和生物学的活性を評価する方法は当該分野で公知である。インビトロのバイオアッセイにおいてさらに頻繁に用いられるいくつかの例としては以下が挙げられる：
（１）ＥＧＦの存在下における軟寒天中でのＮＲＫ細胞のコロニー形成の誘導（Ｒｏｂｅｒｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：５３３９〜５３４３（１９８１））；
（２）軟骨性表現型を発現する原始的間葉細胞の分化の誘導（Ｓｅｙｅｄｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：２２６７〜２２７１（１９８５））；
（３）Ｍｖ１Ｌｕミンク肺上皮細胞の増殖の阻害（Ｄａｎｉｅｌｐｏｕｒら、（１９８９）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１３８：７９〜８６）およびＢＢＣ−１サル腎臓細胞（Ｈｏｌｌｅｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５９８９〜５９９２（１９８０））；
（４）Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウス胸腺細胞の有糸分裂誘発の阻害（Ｗｒａｎｎら、ＥＭＢＯ Ｊ．６：１６３３〜１６３６（１９８７））；
（５）ラットＬ６筋芽細胞の分化の阻害（Ｆｌｏｒｉｎｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１：１６５０９〜１６５１３（１９８６））；
（６）フィブロネクチン産生の阻害（Ｗｒａｎａら、Ｃｅｌｌ ７１：１００３〜１０１４（１９９２））；
（７）ルシフェラーゼレポーター遺伝子に融合されたプラスミノーゲンアクチベータインヒビターＩ（ＰＡＩ−１）プロモーターの誘導（Ａｂｅら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２１６：２７６〜２８４（１９９４））；
（８）サンドイッチ酵素連結免疫吸着アッセイ（Ｄａｎｉｅｌｐｏｕｒら、Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ ２：６１〜７１（１９８９））；ならびに
（９）Ｓｉｎｇｈら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１３（２４）：４３５５〜４３５９（２００３）に記載の細胞アッセイ。
【００３６】
（用途および投与の方法）
本発明の方法は、哺乳動物被験体に対してＴＧＦ−βアンタゴニストを投与して、ウイルス関連リンパ増殖性障害（ＬＰＤ）の発症のリスクを処置、予防または軽減して、低ＩＦＮ−γレベルに関連する増殖性傷害を処置する工程を包含する。特定の実施形態では、低ＩＦＮ−γレベルを有する個体、または低ＩＦＮ−γレベルに関連するＩＦＮ−γ遺伝子型を有する個体におけるウイルス関連障害を処置するための方法が提供される。
【００３７】
本発明はさらに、ウイルス関連のＬＰＤの存在もしくは発達についての１つ以上の危険因子の存在、または処置に対するその進行もしくは応答性を評価するため、そしてその危険因子を有する被験体に対してＴＧＦ−βアンタゴニストを投与するための方法を提供する。例えば、ＩＦＮ−γレベルまたはＩＦＮ−γ遺伝子型を評価または測定する工程、ならびに低ＩＦＮ−γレベルまたはＡ／ＴもしくはＡ／Ａ＋８７４遺伝子型を有する被験体を処置する工程を包含する方法が本明細書において提供される。
【００３８】
特定の実施形態では、ウイルス関連ＬＰＤは、ヘルペスウイルス、例えばＨＨＶ−８、サイトメガロウイルス、またはエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）による感染に関連する。他の実施形態では、ウイルス関連障害は、例えば、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型のようなＣ型レトロウイルスによる感染に関連する。他の実施形態では、ウイルス関連の障害は、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、ＨＩＶ、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２）による感染に関連する。
【００３９】
この開示された方法は、ウイルス関連ＬＰＤのリスクがあるか、それに感受性であるか、またはそれに罹患している哺乳動物被験体に対して、治療上有効な量のＴＧＦ−βアンタゴニストを投与する工程を包含する。本発明の方法によって処置される集団としては、限定はしないが、ウイルス関連ＬＰＤまたは低レベルのＩＦＮ−γに関連するＬＰＤに罹患しているかまたはその発生のリスクがある被験体、例えば、免疫不全またはウイルス感染を有する被験体が挙げられる。
【００４０】
本発明の方法に従って処置された被験体としては、限定はしないが、ヒト、ヒヒ、チンパンジーおよび他の霊長類、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）、ウサギ、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、およびブタが挙げられる。好ましくは、この被験体は、哺乳動物である。他の実施形態では、この被験体は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物である。
【００４１】
ウイルス関連のＬＰＤの発症または進行を評価するため、そしてそのインヒビターを評価するためには多くの方法が利用可能である。ＬＰＤは、リンパ球またはリンパ組織の異常な増殖に関与する疾患または状態、すなわち、例えば、「ウイルス関連のリンパ増殖性障害（ｖｉｒａｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」、「ＥＢＶ関連ＬＰＤ（ＥＢＶ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＬＰＤ）」または「移植後リンパ増殖性障害（ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」である。このような障害としては、限定はしないが、上記のような、任意の急性または慢性の疾患または障害が挙げられる。
【００４２】
ＬＰＤの発症または進行は、アデノパシー（リンパ節の腫脹または肥大）、脾腫、または拡張するリンパのクローンによる器官浸潤に起因する症状、例えば、異常な膨満（胃腸管）、または肺の異常（肺）によって評価され得る。ＰＴＬＤの症状としては、例えば、発熱、寝汗および体重減少が挙げられる。ＬＰＤの存在または進行はまた、例えば、胸部、腹部および骨盤のコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン；ガリウム−６７単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）スキャン、骨髄吸引および生検；ならびに肝機能および腎機能の評価、血清腫瘍マーカー、および血清乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）によって検出されてもよい。
【００４３】
ＥＢＶまたは他のウイルスの存在（潜伏感染または活性な感染）は、限定はしないが、ＥＢＶの潜伏膜タンパク質−１についてのようなウイルスＲＮＡまたは免疫組織化学のインサイチュハイブリダイゼーションを含む、当該分野で公知の技術によって検出されてもよい。さらに、インサイチュの逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＩＳ−ＲＴ−ＰＣＲ）は、例えば、ウイルスタンパク質のフォワードおよびリバースプライマー、例えば、ＥＢＶチミジンキナーゼプライマーを用いて、潜伏または活性なウイルス活性を検出するために用いられ得る（Ｐｏｒｃｕら、Ｂｌｏｏｄ １００：２３４１〜２３４８（２００２））。
【００４４】
ＬＰＤは、異常なリンパ球増殖によって特徴付けられる。リンパ（またはその他）の細胞または組織の異常な増殖、機能または構造を検出するための方法は、ＬＰＤの治療因子の有効性を診断するか、その進行をモニターするか、またはアッセイするために用いられてもよい。リンパ球増殖は、フローサイトメトリー、または総Ｔ細胞もしくはＢ細胞の数を決定するための他の手段、ＣＤ８＋細胞およびＴ細胞増殖の細胞ベースのアッセイを用いて測定され得る。リンパ球の状態および増殖はまた、抗原チャレンジに対する応答性の細胞ベースのアッセイ、例えば、混合リンパ球反応性アッセイによって、または例えば、Ｔ細胞上でのＣＤ２５、ＣＤ６９および／もしくはＣＤ７１のような活性化抗原の存在を測定することによって測定されてもよい。
【００４５】
本発明の方法は、異常なリンパ球増殖または蓄積を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上まで減少させ得る。ある実施形態では、本発明は、ウイルス関連のリンパ増殖性障害を処置または寛解して、被験体のリンパ増殖性障害の１つ以上の症状を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれ以上まで改善させる方法を提供する。処置のための他の指標としては、限定はしないが、以前に、そして下の節において考察されるものを含む、ＬＰＤまたはＰＴＬＤの１つ以上の危険因子の存在が挙げられる。障害を発症するリスクがあるかもしくはそれに感受性の被験体、またはＴＧＦ−βアンタゴニストでの処置に対して特に受容性であり得る被験体は、このような１つ以上の危険因子の有無を確認することによって同定され得る。
【００４６】
（サイトカイン遺伝子型）
ある被験体は、ＩＦＮ−γ遺伝子の＋８７４位置でＡ／ＡまたはＡ／Ｔ遺伝子型のような、ＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型についてホモ接合性であるかまたはヘテロ接合性である場合、ウイルス関連リンパ増殖性障害、ＬＰＤまたはＰＴＬＤを発症するリスクがあるか、または感受性である。種々のサイトカイン多形性の相対的なサイトカイン産生レベルを評価するための方法としては、刺激された末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）を用いるエキソビボのサイトカイン産生アッセイが挙げられる。従って、＋８７４におけるＩＦＮ−γ多形性のエキソビボＩＦＮ−γ産生の研究において、低プロデューサーＡ／Ａ遺伝子型は、ＩＦＮ−γレベルの約４０％、５０％、６０％、７０％または８０％の減少を示す。ＩＦＮ−γレベルは、Ｔ／Ｔ遺伝子型細胞に比較した、培地単独中において培養した細胞の上清における、ＩＦＮ−γを含まないＰＰＤ刺激された細胞中で培養された細胞の上清中で測定されてもよい。
【００４７】
（サイトカインレベル）
開示された方法は、被験体において、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、８、６、５または４ｐｇ／ｍＬ未満の循環しているＩＦＮ−γレベルで有用であり得る。さらに、この処置は、リンパ増殖性の障害に関連するか、またはそれによって生じるＴＧＦ−βレベルを増大する場合、被験体において、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｎｇ／ｍＬ以上の循環中のＴＧＦ−βレベルで有用であり得る。ＴＧＦ−βまたはＩＦＮ−γレベル（総レベルまたは活性レベル）は、例えば、血液、血清または尿のような体液において測定され得る。ある実施形態では、特許請求された方法は、ＴＧＦ−βアンタゴニストの投与であって、被験体中の循環しているＴＧＦ−βレベルの検出不能レベルへの低下を、または処置前の被験体のＴＧＦ−βレベルの１％、２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％または７０％未満への低下を可能にするための投与を包含する。同様に、特許請求された方法は、ＴＧＦ−βアンタゴニストの投与であって、循環しているＩＦＮ−γレベルの少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％またはそれ以上の増大を可能にするための投与を包含する。サイトカイン血清レベルは、例えば、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイのような、そして本明細書に記載のような酵素イムノアッセイ技術を用いて測定される。
【００４８】
当業者は、ＩＦＮ−γ遺伝子または他の遺伝子内の遺伝子多形性であって、その生成物がＩＦＮ−γレベルに影響するものは、ＩＦＮ−γ産生または他のサイトカインのレベルが影響され得るいくつかの機構のうちの１つであることを理解する。ＩＦＮ−γレベルに影響する他の因子としては、ＩＦＮ−γ遺伝子内の他の多形性、またはＩＦＮ−γ産生に影響する転写、転写後もしくは翻訳後の機構が挙げられる。
【００４９】
正常なヒトＩＦＮ−γ血清レベルは、３０ｐｇ／ｍｌ＋／−１０ｐｇ／ｍｌであるかまたはほぼそうであるが、ＩＦＮ−γレベルは、例えば、リンパ球レベルおよびＩＦＮ−γ遺伝子型で変化する。ＩＦＮ−γレベルは、外傷、感染、ガンおよび自己免疫のような病的な環境下で増大する。正常なヒト体液におけるＴＧＦ−β濃度は、血漿中でＴＧＦ−β１の１ｍＬあたり約５ｎｇ程度で、尿中では１ｍｇのクレアチニンあたり３００ｐｇのＴＧＦ−β１である。正常なヒト血漿では、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３のレベルは、０．２ｎｇ／ｍＬ未満である。
【００５０】
（免疫不全および移植）
免疫不全を有する被験体、または器官、組織もしくは細胞の移植片を有したかもしくは有している被験体は、例えば、ＬＰＤのリスクがある。ＰＴＬＤの頻度は、移植された器官または組織によって変化し、そして移植片の例としては、心臓、腎臓、肺、肝臓、角膜、骨髄、幹細胞、血管および島細胞の移植片が挙げられる。移植に関連する免疫抑制療法は、被験体をＬＰＤのリスクにおく。移植被験体におけるＰＴＬＤのようなＬＰＤの発症のさらなる危険因子としては、絶対的および相対的なＴ細胞数、ＣＤ８＋Ｔ細胞数、ＣＤ８＋細胞のようなＴ細胞の経時的な変化、移植された器官のタイプ、ＥＢＶ血清陰性状態、ＥＢＶウイルス負荷、被験体の年齢（すなわち、小児か成人か）、移植片拒絶を予防するために投与された免疫抑制療法のタイプおよび期間、免疫抑制の程度、ならびに主要組織適合性（ＭＨＣ）不適合の程度などが挙げられる。５歳未満、１０歳未満、１５歳未満、または１８歳未満の移植レシピエントは、ＰＴＬＤのようなＬＰＤ発症のリスクが増大する。骨髄または肺移植のレシピエントは、ＰＴＬＤの２０％の頻度を有し、そして腎移植片レシピエントは、１〜２％のＰＴＬＤ頻度を有する。器官、組織または細胞移植片の時点またはその後に生じる初代ＥＢＶ感染は、被験体をＬＰＤのリスクにさせる。詳細には、移植ドナーがＥＢＶ＋であるが、レシピエントがＥＢＶ−である場合、初代ウイルス感染は、ＰＴＬＤのリスクの増大を伴っている。免疫不全の被験体におけるＥＢＶまたは他のウイルス感染は、被験体をＬＰＤのリスクにさせる。リスクがある被験体は、例えば、血液および組織中のウイルス負荷を評価することによって（例えば、移植後のウイルス負荷の増大を調べる）、または白血球、Ｂ細胞または総血清ＩｇＭの数の増大を試験することによって、同定され得る。ＥＢＶ（または他のウイルス）は、必要に応じて、サザンブロットハイブリダイゼーションによって、または定量的もしくは半定量的ＰＣＲを含むポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、または被験体の血液、血清もしくは組織における陽性のウイルス血清学（抗ウイルスカプシド抗原ＩｇＧ（ＥＢＶ血清学））によって検出され得る。異なるドナーに感染するＥＢＶ株およびドナーのアトピーの状態は、ＬＰＤ発症の他の潜在的な危険因子である。
【００５１】
本発明の方法は、免疫不全を有する被験体において有用であり得る。例えば、本発明の方法は、免疫機能が、正常の２５％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、９０％またはそれ以上まで低くなる免疫不全を有する被験体において１つ以上のＬＰＤを処置または予防するために用いられ得る。この方法は、例えば、５００、４００、３００、２００、１００，７５、５０、２５または１０細胞／μＬ未満というＴ細胞カウント、ＣＤ８＋細胞カウント、ＣＤ３＋／ＣＤ８＋細胞カウント、またはＥＢＶ特異的なＴ細胞カウントを有する被験体において用いられ得る。
【００５２】
（免疫抑制因子）
免疫不全は、免疫抑制因子の投与から生じ得る。「免疫抑制因子（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ａｇｅｎｔ）」、「免疫抑制薬、免疫抑制剤（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ）」および「免疫抑制薬、免疫抑制剤（ｉｍｍｕｎｏｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ）」という用語は、本明細書において用いる場合、免疫抑制を誘導する化合物または組成物をいい、すなわち、これは、免疫学的応答の発生を予防または妨害する。免疫抑制剤の例としては、限定はしないが、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（商標）、Ｎｅｏｒａｌ（商標）（シクロスポリン）；Ｐｒｏｇｒａｆ（商標）、Ｐｒｏｔｏｐｉｃ（商標）（タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ））；Ｒａｐａｍｕｎｅ（商標）（シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ））；ＳＺＤ−ＲＡＤ、ＦＴＹ７２０；Ｃｅｒｔｉｃａｎ（商標）（エベロニムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ラパマイシン誘導体）；ｃａｍｐａｔｈ−１Ｈ（抗ＣＤ５２抗体）；Ｒｉｔｕｘａｎ（商標）（リツキシマブ、抗ＣＤ２０抗体）；ＯＫＴ４；ＬＥＡ２９Ｙ（ＢＭＳ−２２４８１８、ＣＴＬＡ４１ｇ）；インドリル−ＡＳＣ（タクロリムスおよびアスコマイシンの３２インドールエーテル誘導体）；Ｉｍｕｒａｎ（商標）（アザチオプリン）；Ａｔｇａｍ（商標）（抗胸腺細胞／グロブリン）；Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ（商標）（ＯＫＴ３；ムロマナブ−ＣＤ３）；Ｃｅｌｌｃｅｐｔ（商標）（ミコフェノレートモフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ ｍｏｆｅｔｉｌ））；Ｔｈｙｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（登録商標）；Ｚｅｎａｐａｘ（商標）（ダクリズマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ））；Ｃｙｔｏｘａｎ（商標）（シクロホスファミド）；プレドニゾン、プレドニゾロンおよび他のコルチコステロイドマロノニトリルアミド（ＭＮＡ（レフルノミド、ＦＫ７７８、ＦＫ７７９））；および１５−デオキシスペルグアリン（ＤＳＧ）が挙げられる。
【００５３】
ある因子の免疫抑制活性を評価するための方法は当該分野で公知である。薬理学的な介入の存在下または非存在下におけるインビボにおける移植された器官の生存時間の長さは、免疫応答の抑制のための定量的測定値として機能する。インビトロアッセイはまた、例えば、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ（例えば、Ｆａｔｈｍａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１８：１２３２〜１２３８（１９７７））；ＣＤ３アッセイ（抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）を介する免疫細胞の比活性）（例えば、Ｋｈａｎｎａら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６７：８８２〜８８９（１９９９）；Ｋｈａｎｎａら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６７：Ｓ５８（１９９９）を参照のこと）；およびＩＬ−２Ｒアッセイ（外因的に添加されたサイトカインＩＬ−２を用いた免疫細胞の特異的な活性化）（例えば、Ｆａｒｒａｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２６：１１２０〜１１２５（１９８１）を参照のこと）を用いてもよい。
【００５４】
（治療的な方法）
本発明の方法に従うＴＧＦ−βアンタゴニストの投与は、任意の特定の送達系に限定されず、そして限定はしないが、非経口（皮下、静脈内、髄内、動脈内、筋肉内、または腹腔内注射）直腸、局所、経皮または経口（例えば、カプセル、懸濁物または錠剤内で）を挙げることができる。個体に対する投与は、単回投与でも、または反復投与で行われてもよく、そして任意の種々の生理学的な受容可能な塩型で、および／または受容可能な製剤的なキャリアとともに、および／または薬学的組成物（前に記載）の一部として添加物として行われてもよい。生理学的に受容可能な塩型および標準的な薬学的処方の技術および賦形剤は、当業者には周知である（例えば、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）２００３，第５７版、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，２００２；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ編、Ｇｅｎｎａｄｏら、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００を参照のこと）。
【００５５】
個体に対するアンタゴニストの投与はまた、遺伝子治療の方法によって達成されてもよく、ここでこのアンタゴニストをコードする核酸配列は、インビボで患者に、またはインビトロで細胞に投与されて次いで患者に導入されてもよく、そしてこのアンタゴニスト（例えば、アンチセンスＲＮＡ、可溶性ＴＧＦ−βレセプター）は、その核酸配列によってコードされる産物の発現によって生成される。ＴＧＦ−βアンタゴニストを送達するための遺伝子治療の方法は、当業者に公知である（例えば、Ｆａｋｈｒａｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，Ｕ．Ｓ．Ａ．，９３：２９０９〜２９１４（１９９６）を参照のこと）。
【００５６】
この開示された方法では、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、単独で、同時に、または重複する間隔もしくは重複しない間隔で連続して、１つ以上のさらなる生物学的に活性な因子、例えば抗ウイルス剤とともに投与されてもよい。抗ウイルス剤の例としては、限定はしないが、アシクロビル、ガンシクロビルおよびフォスカーネットなどが挙げられる。さらなる生物学的に活性な因子としては、免疫抑制剤、抗Ｂ細胞モノクローナル抗体、およびＥＢＶ特異的な自己のＣＴＬなどを挙げることができる。ＴＧＦ−βアンタゴニストは、例えば、ＰＴＬＤを有する被験体を処置するために、免疫抑制療法における減少と同時に投与されてもよい。連続的な投与では、ＴＧＦ−βアンタゴニストおよびさらなる因子（単数または複数）は、任意の順序で投与されてもよい。ある実施形態では、重複する間隔の長さは、２、４、６、１２、２４、または４８週より長い。
【００５７】
アンタゴニストは、単独の活性化合物として、または別の化合物もしくは組成物とともに投与されてもよい。他に示さない限り、このアンタゴニストは、疾患の症状および進行の重篤度に依存して、約１０μｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。最も一般には、抗体は、外来患者の設定で、緩徐な静脈内（ＩＶ）注入によって約０．１〜１５ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、１ヶ月に２回、または月１回の投与によって投与される。アンタゴニストの適切で治療的に有効な用量は、治療を行う医師によって選択され、そしておよそ１０μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、そして１０ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇにおよぶ。さらに、実施例に、またはＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）２００３，第５７版、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，２００２に示される特定の用量を用いてもよい。
【００５８】
以下の実施例は、本発明の例示的な実施形態を提供する。当業者は、本発明の趣旨または範囲を変更することなく行われ得る、多数の改変および変異を認識する。このような改変および変異は、本発明の範囲内に包含される。この実施例は、決して本発明を限定しない。
【実施例】
【００５９】
（実施例１）
ＩＦＮ−γ遺伝子型とＰＴＬＤ臨床観察との関連：１２ＰＴＬＤ患者のサイトカイン遺伝子型をさらに、以前に報告された９例のＰＴＬＤ患者におけるサイトカイン遺伝子型の予備的な評価に対して分析し（ＶａｎＢｕｓｋｉｒｋら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．３３：１８３４（２００１））。１２例のＰＴＬＤ患者のサイトカイン遺伝子型決定によって、ＩＦＮ−γ遺伝子のＡ／Ａ遺伝子型を有する患者の割合が、ＰＴＬＤ患者では、１３５例の非ＰＴＬＤ移植患者よりも、同じ移植中心で高いことが示される（５８％対２７％、ｐ＝０．０２）。この研究では、ＴＧＦ−β、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＴＮＦ−αの遺伝子型分布の観察では、ＰＴＬＤと非ＰＴＬＤ患者との間の統計学的に有意な相違は示されない。この研究によってＩＦＮ−γＡ／Ａ遺伝子型はＰＴＬＤにおける危険因子として特定される。
【００６０】
被験体の遺伝子型およびＬＰＤと関連する他の要因の分析：被験体またはドナーの遺伝子型を評価するために、ゲノムＤＮＡを、Ｑｉａｇｅｎ（Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）ＤＮＡ抽出キットを用いてＰＢＬから単離した。ＨＬＡ分析は、Ｐｅｌ−Ｆｒｅｅｚ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＡＢ／ＤＲ ＰＣＲ−ＳＳＰユニトレイ（Ｂｒｏｗｎ Ｄｅｅｒ，ＷＩ）を用いて行った。ＴＧＦ−β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＩＦＮ−γのサイトカイン遺伝子型決定は、Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ（Ｃａｎｏｇａ Ｐａｒｋ，ＣＡ）からＣｙｔｇｅｎサイトカイン遺伝子型決定トレイを用いて達成した。ＰＣＲ産物は、２％アガロースゲルで泳動して、臭化エチジウムで可視化した。バンド形成パターンを、製造業者のテンプレートを用いて解釈して、各々のレーンにおいて内部コントロールと比較した。
【００６１】
ＳＣＩＤマウスへの注射またはＣＴＬ再刺激培養物中での使用の前に、ＥＬＩＳＡ（Ｍｅｒｉｄｉａｎ，Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）およびＥＢＶ反応性トランスビボＤＴＨアッセイによって、被験体およびＰＢＬドナーをＥＢＶ反応性について試験した。
【００６２】
Ｔ細胞およびＴ細胞サブセットを評価するために、標準の３色フローサイトメトリーによって新鮮な血液サンプル上でフローサイトメトリーを用いる。ＥＢＶ反応性ＣＤ８＋Ｔ細胞を、潜在遺伝子ＥＢＮＡ−３Ａ、または前初期溶菌遺伝子ＢＺＬＦ−１由来の免疫優性のＥＢＶペプチドと複合したＨＬＡ−Ｂ８テトラマーを用いてフローサイトメトリーによって検出する。凍結された患者末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を生存可能に解凍し、３７℃で一晩インキュベートし、次いでＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離によって精製して細片を除く。細胞を、フィコエリトリン（ＰＥ）結合体化マウス抗ＣＤ８およびフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）結合体化マウス抗ＣＤ３抗体（両方ともＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡより）およびアロフィコシアニン（ＡＰＣ）結合体化ＨＬＡ適合テトラマー試薬または非反応性コントロールで染色する。各々のフロー分析について約１０５個のリンパ球ゲート（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ｇａｔｅｄ）（前方散乱および側方散乱に基づく）事象を収集する。
【００６３】
（実施例２）
ｈｕ−ＰＢＬ ＳＣＩＤマウスにおけるＩＦＮ−γ遺伝子型とＬＰＤ発症との関係：健康なＥＢＶ血清陽性ドナー由来のヒト（ｈｕ）末梢血白血球（ＰＢＬ）がＳＣＩＤマウスに注射されているｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスは、自然のＥＢＶ由来リンパ増殖性疾患（ＬＰＤ）の再現性モデルである。ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスで生じるＥＢＶ陽性Ｂ細胞腫瘍は、表現型的にそして遺伝子型的にＰＴＬＤと極めて類似している（Ｐｉｃｃｈｉｏら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：２４６８〜２４７７（１９９２）；Ｂａｉｏｃｃｈｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：５５７７〜５５８１（１９９４））。このモデルシステムでは、ＬＰＤの生成および発症は、ドナー（異質性が詳細に研究されていない）の間で変化する（Ｐｉｃｃｈｉｏら、前出；Ｍｏｓｉｅｒら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ８：７３５〜７４０（１９９２）；Ｃｏｐｐｏｌａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：２５１４〜２５２２（１９９８））。
【００６４】
マウスＮＫ細胞はまた、ＬＰＤ発症に影響することが公知であり（Ｂａｉｏｃｃｈｉら、前出；Ｌａｃｅｒｄａら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６１：４９２〜４９７（１９９６））、マウスマクロファージも同様であり（Ｙｏｓｈｉｎｏら、Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２６：１２１１〜１２１６（２０００））、そしてマウスＮＫ細胞を活性化する異なる能力は、ＬＰＤ発症におけるいくつかの異質性を担い得ることが可能である。ＮＫ細胞は、このモデルをさらに厳密にするために、この研究では意図的に枯渇も無効にもされなかった。従って、サイトカイン多形性およびＬＰＤの任意の観察された関係によって強力な関係が示される。
【００６５】
ＬＰＤのｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスモデルは以下のとおりである：雌性Ｂａｌｂ／ｃまたはＣＢ．１７ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄ（ＳＣＩＤ）マウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ ＲｉｖｅｒまたはＴａｃｏｎｉｃから購入した。マウスは、ＮＩＨおよび施設の承認したガイドラインに従って飼育および処理した。マウスには５０×１０６ヒトＰＢＬを腹腔内に生理食塩水中で与えた。ＰＢＬは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｒｅｄ Ｃｒｏｓｓのロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｃｋｓ）から、または治験審査委員会の承認したプロトコールを用いてボランティアから入手した。ＰＢＬは、標準的な方法に従ってｆｉｃｏｌｌ−ｈｙｐａｑｕｅによって単離した。各々のドナーからのＰＢＬを３〜５匹の別のマウスに注射した。ヒトＰＢＬ移植を、前に記載されたとおり、マウス血清に含まれるヒトＩｇＧの存在についてＥＬＩＳＡで週に２回モニターした（Ｂａｉｏｃｃｈｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：５５７７〜５５８１（１９９４））。この研究に含まれるマウスは、７５０μｇ／ｍｌを超えるヒトＩｇＧを有し、これは、腫瘍が検出された場合１ｍｇ／ｍｌより大きくまで増大した。潜伏時間（潜時）は、注射後のマウスが瀕死になるかまたは死ぬまでの時間として規定された（Ｐｉｃｃｈｉｏら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．５２：２４６８〜２４７７（１９９２））。全ての動物を、腫瘍の存在について死亡時に検査して、これらの腫瘍は、フローサイトメトリーを用いてヒトＢ細胞由来であることを確認した。ヒト腫瘍を確認したマウスのみを、ＬＰＤを有するとみなした。
【００６６】
ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウス研究では、各々の４９個のＥＢＶ反応性ドナー由来のＰＢＬを１ドナーあたり３〜５匹のＳＣＩＤマウスに注射した。レシピエントのマウスを、ヒト細胞による移植（血清中のヒトＩｇＧによって証明されるとおり）およびＬＰＤの発症（少数のＣＤ４５＋ＣＤ３＋細胞が浸潤したヒトＣＤ４５＋ＣＤ１９／ＣＤ２０＋腫瘍）について最大６ヶ月までモニターした。表１に示されるとおり、ドナーのうち４７％（４９のうち２３）のＰＢＬが２０週後にＬＰＤを生じなかったが、２４％（４９のうち１２）がＬＰＤ腫瘍を急速に発症し（ＬＰＤへの中央時間、８週）浸透が高かった（中央値１００％、範囲８０〜１００％）。ドナーの残り（２９％、４９のうち１４）由来のＰＢＬはＬＰＤを後に生じ（中央値１２週）、そしてそれより少ないマウスでは（浸透度中央値５５％、範囲３３〜１００％）。正確なウイルコクソンの順位和検定によって決定した場合、急速性群と中間／遅発性群との間の潜時および浸透の相違は統計学的に有意である（ｐ＜０．０００１）。
【００６７】
【表１】
自然のＥＢＶ−ＬＰＤのＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスモデルでは、４９例のドナーでのサイトカイン遺伝子型データによって、ＬＰＤ発症におけるドナー由来の生存度はＩＦＮ−γ遺伝子型と相関することが実証される。この研究におけるＥＢＶ−血清陽性ドナーの５３％がｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスで６ヶ月以内にＬＰＤを生じた。ＬＰＤを生じるドナーのうち、１２例がＬＰＤを急速に生じ（ＬＰＤまでの中央時間、８週）、高い浸透度であった（中央値１００％）。他のＬＰＤプロデューサー表現型は、より遅くＬＰＤを発症し（中央時間１２週）、浸透度は低かった（中央値５５％）。
【００６８】
サイトカイン遺伝子型がＬＰＤ発症と相関するか否かを決定するために、ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスにおいてＥＢＶ−ＬＰＤを生じるために用いたＰＢＬでのＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＴＧＦ−βのサイトカイン遺伝子型の分布を研究した。急速な高い浸透度のＬＰＤプロデューサーを、中間／遅発性ＬＰＤプロデューサーと、そしてＰＢＬがＬＰＤを生じないドナーと比較した（表１に決定されるように）。表２は、ＩＦＮ−γについての多形性の分布の分析が急速性ＬＰＤプロデューサーと他の２つの群との間で統計的に有意な相違を示したことを実証する。１２例の急速性ＬＰＤプロデューサーのうち、Ｔ／Ｔ遺伝子型のものはなく、５例がＴ／Ａ遺伝子型（４１．７％）で、７例がＡ／Ａ遺伝子型であった（５８．３％）。対照的に、ＰＢＬが中間／遅発性ＬＰＤを生じるかまたは全く生じないドナーは、遺伝子型のさらに異種の分布を示した（１４ Ｔ／Ｔ、３７．８％；１５ Ｔ／Ａ、４３．３％そして８Ａ／Ａ、１８．９％）。
【００６９】
【表２】
Ａ３〜５ ＳＣＩＤマウスを、１匹のＰＢＬドナーあたりに注射し、そして血清中の７５０μｇ／ｍｌを超えるヒトＩｇＧによって証明されるとおり全てのマウスは移植された。
＊Ａ／Ａ遺伝子型は急速性ＬＰＤ群においては有意に、より広がっている、ｐ＝０．０１４４。
＊＊Ａ対立遺伝子の存在（Ａ／Ａ＋Ｔ／Ａ）は急速性ＬＰＤ群ではより有意に広がっている、ｐ＝０．０２５７。
【００７０】
これらのデータの統計的な分析によって、Ａ／Ａ遺伝子型は中間／遅発性ＬＰＤプロデューサーおよびＬＰＤなしプロデューサーに比較して急速性ＬＰＤプロデューサーでは有意に高い頻度であったことが示される（ｐ＝０．０１４４）。急速性ＬＰＤプロデューサーの中のＴ／Ｔ遺伝子型の非存在によって、Ｔ対立遺伝子の存在が、ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスにおけるＬＰＤ発症がないことと相関していることが示唆される。急速性ＬＰＤプロデユーサーのうち全て（１２のうち１２）に少なくとも１つのＡ対立遺伝子が存在し、これは中間／遅発性ＬＰＤプロデューサー（１４のうち８）およびＬＰＤなしのプロデューサーと対照的であって、ここでは２３のドナーのうち１５に少なくとも１つのＡ対立遺伝子が存在した。これは３群の間で統計学的に有意な相違である（ｐ＝０．２５７）。ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−１０のサイトカイン多形性分布を分析した場合、ドナーの群の間に統計学的な相違は観察されなかった。ＴＧＦ−β遺伝子型について報告された分布と同様に（Ｐｅｒｒｙら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６：１９３〜１９７（１９９８））、ドナーのほとんどが高いＴＧＦ−β産生の遺伝子型を示した。実際、４９例のＰＢＬドナーのうち４８例、そして急速性ＬＰＤを生じるドナーの全てが、高いＴＧＦ−β産生に関連した遺伝子型を有した。
【００７１】
重要な事に、これらのデータによって、＋８７４塩基でのＩＦＮ−γについてのＡ（アデノシン）対立遺伝子がＬＰＤ産生と強力に関係していることが示される。急速な高浸透のＬＰＤドナーのうち、５８％がＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ）にホモ接合性であったが、４２％がヘテロ接合性（Ｔ／Ａ）であった。急速な高頻度ＬＰＤプロデューサーのうちＴ対立遺伝子にホモ接合性であったものはなかった。対照的に、全ての遺伝子型が、遅発性ＬＰＤを生じるかまたは決して生じないドナーの群で示された。急速ＬＰＤプロデューサーのうちＡ／Ａ遺伝子型の頻度は、中間／遅発性ＬＰＤプロデューサーおよびＬＰＤなしドナーに比較して有意に異なった（ｐ＝０．０１４４）。また有意である（ｐ＝０．０２５７）のは、他の２つのＬＰＤ群に比較した、急速性ＬＰＤプロデューサーにおけるＡ対立遺伝子の存在である。これらのデータは、ＰＴＬＤ患者の臨床観察を映し出しており、このことはｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスにおけるＩＦＮ−γ遺伝子型とＬＰＤ産生との関係が危険因子または臨床的な有意差の指標であることを示唆している。
【００７２】
（実施例３）
ＩＦＮ−γおよびＴＧＦ−β遺伝子型のサイトカイン産生：＋８７４塩基でのＡ／Ａ、Ｔ／ＡおよびＴ／Ｔ ＩＦＮ−γ遺伝子型は、それぞれ低、中および高というサイトカインインビトロ産生に相当することが報告されている（Ｐｒａｖｉｃａら、Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６１：８６３〜８６６（２０００）；Ｈｏｆｆｍａｎｎら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ７２：１４４４〜１４５０（２００１）；Ｌｏｐｅｚ−Ｍａｄｅｒｕｅｌｏら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６７：９７０〜９７５（２００３））。本発明者らは、同じ抗原性刺激が提供された場合、すなわち、同じＥＢＶ−ＬＣＬを用いるＨＬＡ−Ａ、−Ｂマッチしたドナーの試験において、サイトカイン産生との遺伝子型のクリアカットな関係を観察した。これらの基準を満たす４つのドナーのうち、Ａ／Ａ遺伝子型ドナーは、最小のＩＦＮ−γを生じ（４，９２８＋／−１，７９５ｐｇ／ｍｌ）、２つのＡ／Ｔ遺伝子型ドナーは、中間量のサイトカインを生じ（２５，９４５＋／−９５８ｐｇ／ｍｌ）、そして１つのＴ／Ｔ遺伝子型ドナーは、最高のＩＦＮ−γを生じた（４１，３１２＋／−１，８１１ｐｇ／ｍｌ）。これらの培養物の上清に対する１０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−βの投与で、ＩＦＮ−γ産生はそれぞれほぼ６８％、３５％および６６％まで減少した。
【００７３】
＋８７４多形性遺伝子型によるＩＦＮ−γ産生の以前に公開された研究では、個体の静脈の全血（２０ｍｌ）からＰＢＭＣを得て、エキソビボサイトカイン産生をアッセイした（Ｌｏｐｅｚ−Ｍａｄｅｒｕｅｌｏら、前出）。細胞を２．０×１０６細胞／ｍｌの濃度で培養して、精製されたタンパク質誘導性（ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）（ＰＰＤ）抗原（１０μｇ／ｍｌ；Ｓｔａｔｅｎｓ Ｓｅｒｕｍｉｎｓｔｉｔｕｔ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を用いて５％ＣＯ２とともに３７℃で９６時間、刺激した。培養上清を回収して、ＩＦＮ−γのＥＬＩＳＡキットでアッセイした（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍｅｒｉｌｌｏ，ＣＡ）。このアッセイは４ｐｇ／ｍｌの検出限界を示した。分析と分析の間の、そしてアッセイ内の変異係数は１０％未満であった。Ａ／Ａ＋８７４遺伝子型は、約６００ｐｇ／ｍＬのＩＦＮ−γレベルを生じたが、ＴＡ／ＴＴ遺伝子型は約１２００ｐｇ／ｍＬというＩＦＮ−γレベルを生じ、このＩＦＮ−γレベルは、ＰＰＤ刺激した細胞の上清中の濃度から培地単独で培養した細胞の上清中の濃度を引いたものとして示した（Ｌｏｐｅｚ−Ｍａｄｅｒｕｅｌｏら、前出）。
【００７４】
従って、低レベルのＩＦＮ−γ産生は、＋８７４多形性でのＡ（アデノシン）に関連しており、そしてウイルス関連のＬＰＤまたはＰＴＬＤのような増殖性障害と関連する独立した危険因子として作用し得る。低ＩＦＮ−γ産生のさらなる原因は、予想されており、そして特許請求された方法によって包含される。
【００７５】
同様に、高いＴＧＦ−β産生を有する遺伝子型が同定されて評価されてもよい。上記で注記したとおり、この研究におけるほとんどのＰＢＬドナーが高い産生に関連するＴＧＦ−β遺伝子型を示し、そして急速なＬＰＤを産生するドナーは全てが、高いＴＧＦ−β産生に関連する遺伝子型を有した（Ｐｅｒｒｅｙら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６：１９３〜１９７（１９９８）を参照のこと）。
【００７６】
（実施例４）
ＣＴＬ活性のＴＧＦ−β阻害は、ＩＦＮ−γ遺伝子型に関連している：ＩＦＮ−γ遺伝子型とＣＴＬ機能との間の関係をさらに検討するために、本発明者らは次に、ＴＧＦ−βがインビトロにおいてＣＴＬ活性の再刺激を阻害し得るか否かを試験した。ＰＢＬをＴＧＦ−β１の存在下または非存在下において、照射されたＨＬＡ適合ＬＣＬ刺激因子とともに、５日間培養した。ＣＴＬ活性を標準的なＣＴＬアッセイを用いて評価した。
【００７７】
ＥＢＶ抗原に対するＣＴＬ活性を検出するには、５〜１２日の再刺激培養を要する（Ｖｏｏｉｊｓら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２：５９１〜５９７（１９９５））。ＰＢＬを、１０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−βの存在下または非存在下においてＨＬＡ−Ａ、−ＢマッチしたＬＣＬとともに５日間培養した。生きている細胞を３回洗浄して、外因性のＴＧＦ−βを除去し、そしてＣＴＬ活性を標準的な溶解アッセイを用いて、そして本明細書に記載のとおり評価した。
【００７８】
細胞溶解アッセイ：標準的な非放射性細胞傷害性アッセイは、５〜７日の再刺激培養物由来のＰＢＬ、およびＨＬＡ適合または不適合のＬＣＬ株を種々のエフェクター対標的比で用いて設定し、標的細胞は５×１０４〜１×１０５細胞／ｍｌにプレートした。全てのサンプルは３連でプレートした。アラマーブルー（ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅ）（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ，Ｃａｒｍｉｌｌｏ，ＣＡ）を１：１０の希釈で用いた。細胞を２４時間培養して、Ｃｙｔｏｆｌｏｕｒ ＩＩ蛍光マルチウェルプレートリーダー（Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）において、５３０ｎｍの励起波長および５９０ｎｍの発光波長で読み取った。溶解パーセントは以下のように決定した：｛標的単独−［（Ｅ＋Ｔ）−（Ｅ単独）］／標的単独｝。溶解単位（ｌｙｔｉｃ ｕｎｉｔ）（ＬＵ）は、選択された溶解値（この場合３０％）を得るのに必要なリンパ球の数として任意に規定する。ＬＵを規定するために、全ての曲線は、この溶解値を通過しなければならず、そしてこれはこの曲線の直線部分でなければならない。１００万個の細胞あたりのＬＵの数は、以下の式を用いて算出する：１００万個の細胞あたりのＬＵ＝１０６／［（＃エフェクター／溶解パーセント）×（３０）］。
【００７９】
データは、ＴＧＦ−βの非存在下においてＬＣＬとともに培養したＰＢＬのコントロール溶解のパーセントとして示す。各々のドナーについては、標的の比に対して複数のエフェクターを三連で試験して、曲線の直線部分からＬＵを決定した。阻害パーセントは、ＴＧＦ−β処理した培養物に対するコントロールからＬＵを用いて算出した。示された結果は、各々のドナーについての代表的な実験からの三連での平均および標準偏差である。ｔ検定によって分析した場合、ＴＧＦ−βの存在下で再刺激されたＡ／ＡおよびＴ／Ａ ＰＢＬにおけるＣＴＬ活性は、ＴＧＦ−βとの培養後のＴ／Ｔ ＰＢＬにおける、コントロールのＣＴＬ活性またはＣＴＬ活性のいずれかから有意に異なる（ｐ＝０．０１５）。Ｔ／Ｔ遺伝子型は、ある場合には、マウス−ヒトキメラモデルにおける「ＰＴＬＤ」表現型を与え得、これはこのモデルにおいてＬＰＤの急速な発症をもたらす。さらに、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、急速および／または高浸透ＬＰＤを生じるＴ／ＴドナーＰＢＬを用いてｈｕ ＰＢＬ ＳＣＩＤマウスモデルにおける生存を増大するのに有効である。
【００８０】
図１Ａによって、ＴＧＦ−βが再刺激培養物に添加された場合、Ａ／ＡまたはＡ／ＴのＩＦＮ−γ遺伝子型を有する個体由来のＰＢＬでは、ＣＴＬ応答が障害されていたことが示される。これらのドナーについてのＴＧＦ−β処理した培養物は、コントロールの培養物に比較して細胞溶解が２５〜７０％阻害された。対照的に、ＴＧＦ−βは、このアッセイではＴ／Ｔ遺伝子型ＰＢＬのＣＴＬ再刺激に対して効果を有することが検出されなかった。データは、溶解単位（ＬＵ）を用いて決定された、コントロール溶解の平均パーセントとして示される。Ａ／Ａ＋Ｔ／Ａ遺伝子型培養物と、Ｔ／Ｔ遺伝子型培養物との間の相違は有意であった（ｐ＝０．０１５）。
【００８１】
この研究では、ＣＴＬをＩＦＮ−γ遺伝子型（示さず）にかかわらずインビトロで効率的に再刺激し、これによって、ＣＴＬ再刺激におけるＣＴＬ前駆体の欠失または一般的な欠失が、ＬＰＤ発症を有するＡ／Ａ遺伝子型の関係を説明できないということが示される。これらのデータによって、ＴＧＦ−βが存在する場合、ＣＴＬ再刺激は、このモデルで急速および／または高浸透ＬＰＤを生じるＰＢＬと関連した遺伝子型であるＡ／ＡまたはＡ／Ｔ遺伝子型ＰＢＬでは有意に減少したということが示される。
【００８２】
（実施例５）
増殖阻害アッセイにおけるＴＧＦ−βアンタゴニストの活性：２週間のＬＣＬ増殖阻害アッセイを用いるＣＴＬ再刺激の阻害に対するＴＧＦ−βの効果は、Ｗｉｌｓｏｎら（Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２６：１０１〜１１０（２００１））に記載されるのと同様に、次にアッセイした。増殖阻害アッセイは、あるセット数の再刺激したＣＴＬが滴定した数のＬＣＬを、通常のＣＴＬアッセイよりもストリンジェントな条件下で溶解する能力を評価する。ＣＴＬによって殺傷されないＬＣＬは、増殖し、そして代謝活性において検出可能な相違が、２週間後に示される。
【００８３】
図１Ｂは、適合したＬＣＬ増殖をＣＴＬが妨げる能力は、ＴＧＦ−βの存在下においてＣＴＬ再刺激によって阻害されることを示す。ＣＴＬは、１０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−βの存在下または非存在下において再刺激した。５日の終わりの時点で、ＣＴＬ活性は、図１Ａのように標準的なＣＴＬアッセイによって評価した。さらに、再刺激された細胞の一部（１０４／ウェル）を、滴定した数のＨＬＡ−Ａ−Ａ、−Ｂの適合した、または不適合のＬＣＬとともに２週間培養した。データは、アラマーブルーによって決定される、ＬＣＬのみを含むウェル中での増殖に比較した、ＣＴＬおよびＬＣＬの両方を含むウェル中での、ＬＣＬ増殖の平均パーセント±ＳＤとして示す。データは、８：１のエフェクター対標的比で各々の遺伝子型の３つのドナーについて合わせた。黒塗りのバー：ＴＧＦ−βの非存在下で再刺激されたコントロールＣＴＬ。白抜きのバー：ＴＧＦ−βの存在下で再刺激されたＣＴＬ。
【００８４】
これらのデータによって、ＣＴＬは、適合したＬＣＬの増殖は長期間阻害したが、不適合のＬＣＬは阻害しなかったこと、そしてＴＧＦ−βの存在下で再刺激されたＡ／ＡまたはＡ／Ｔ遺伝子型ＣＴＬ（ｎ＝３ドナー）は、それらの適合したＬＣＬ標的の増殖を阻害しなかったことが示される。このアッセイでは、ＴＧＦ−βの存在下で再刺激されたＴ／Ｔ遺伝子型ＣＴＬ（ｎ＝３ドナー）は、コントロールのＣＴＬと同様にＬＣＬ増殖を阻害した。Ｔ／Ｔ遺伝子型は疾患状態と一般的に関連が低いので、このモデルでの急速および／または高い浸透ＬＰＤを示すＴ／Ｔドナーは、最近同定された。予備的な研究によって、急速なＬＰＤを生じるＴ／Ｔ細胞は、このアッセイにおいてＴＧＦ−βに感受性であることが示される。従って、上記のアッセイは、ＣＴＬ再刺激のＴＧＦ−β阻害を検出した。
【００８５】
（実施例６）
ＴＧＦ−βアンタゴニストでの処置は、ｈｕ ＰＢＬ ＳＣＩＤマウスの生存を長引かせる：抗ＴＧＦ−βでのインビボ処置は、ｈｕ ＰＢＬ ＳＣＩＤマウスの生存を改善する。一般的な集団のほとんどと同様、急速性ＬＰＤドナーの全てが、高いＴＧＦ−β産生に関連する遺伝子型を示した。ＴＧＦ−βがＣＴＬ再刺激を阻害できることを示しているインビトロのデータに基づいて、ｈｕ ＰＢＬ ＳＣＩＤマウスの生存に対する抗ＴＧＦ−βでの処置の効果を検討した。これらのデータは、ｈｕ ＰＢＬ ＳＣＩＤマウスにおけるＴＧＦ−βの減少が生存を延長することを示す。
【００８６】
図２に実証されるとおり、抗ＴＧＦ−β抗体を用いる生存トライアルでは、抗ＴＧＦ−β処置したマウスにおいて８０日を超える１００％生存が得られた。対照的に、全てのコントロールの動物が７０日以内に死んだ。これらのデータによって、ＬＰＤ発症におけるＴＧＦ−βの重要な役割が示される。
【００８７】
この研究では、ＳＣＩＤマウスに、実施例２に記載されるように５千万個のＰＢＬを注射した。動物にはＰＢＳ（ｎ＝３）、アイソタイプ１００μｇコントロール抗体（ｎ＝５）または１００μｇの抗ＴＧＦ−β（ｎ＝５）のいずれかを、実験期間中１日おきに与えた。動物は、それらの血清中では７５０μｇ／ｍｌを超えるヒトＩｇＧの存在によって移植されていることが確認され、そしてＬＰＤ発症についてモニターが行われた。生存時間は、各々の群について決定した。動物が死ぬかまたは瀕死になった時、フローサイトメトリーを行ってＬＰＤの発症を確認した。示されたとおり、全てのコントロール動物（ＰＢＳまたはアイソタイプコントロール抗体）は、７０日以内に死んだが、抗ＴＧＦ−β抗体で処置した動物は、８０日より長く生存した。生存の相違は、極めて有意であった（ＰＢＳ対抗ＴＧＦ−βについてｐ＝０．００４、そしてアイソタイプコントロール対抗ＴＧＦ−βについてｐ＝０．００２）。
【００８８】
ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスに、１００μｇのＰＢＳ、アイソタイプコントロール抗体または市販の抗ＴＧＦ−β抗体（Ｇｅｎｚｙｍｅ）を、実験の期間にわたって１週に３回、腹腔内に注射した。全ての動物は、注射後４週目で血清中において７５０μｇ／ｍｌを超えるヒトＩｇＧによって証明されるとおり、移植された（示さず）。図２に示されるとおり、ＰＢＳまたはアイソタイプコントロール抗体のいずれかで処置した動物は、平均生存が６０日であった。対照的に、抗ＴＧＦ−βで処置した動物は、８０日より長く生存した。従って抗ＴＧＦ−β処置は、ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスの生存を有意に増強した（ｐ＜０．００２）。
【００８９】
（実施例７）
ＴＧＦ−βのインビボ中和はＬＰＤを軽減し、ＣＤ８＋の増殖および活性を生じる：抗ＴＧＦ−β抗体でのインビボ処置が生存を延長する機構を検討するために、そして抗ＴＧＦ−β処置の有用性を評価するために、Ａ４１１抗ＴＧＦ−β抗体および第二のＰＢＬドナーを用いる第二の実験を行なった。このプロトコールでは、ＴＧＦ−βレベル、ＬＰＤ発症およびＣＤ８Ｔ細胞増殖を評価した。ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスには最初に、抗ＴＧＦ−β抗体を１週に３回注射して、ヒトＩｇレベル、血清ＴＧＦ−βおよびＬＤＰの発症をモニターした。全ての動物は、注射後４週目で血清中の７５０μｇ／ｍｌを超えるヒトＩｇＧによって証明されるように移植された（示さず）。ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスは通常１２０００ｐｇ／ｍｌのＴＧＦ−βの循環レベルを示した。抗ＴＧＦ−βでの動物の処置は、そのレベルを４０００ｐｇ／ｍｌ未満まで有意に減少させた（ｐ＜０．０５）。
【００９０】
図３Ａによって、抗ＴＧＦ−βがインビボでＴＧＦ−βを中和することが示される。ＴＧＦ−βレベルに対する効果を評価するために、ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスに、１２５μｇの抗ＴＧＦ−β抗体（Ａ４１１）またはＰＢＳを１週間に３回注射した。血清サンプルをＴＧＦ−βの存在について６週目にＥＬＩＳＡで試験した。図３Ａのデータは、１群あたり５匹のマウスでの３連の決定に由来するＴＧＦ−βの平均ｐｇ／ｍｌとして示す。
【００９１】
ＬＤＰ発症を次に決定した。動物を９週目で屠殺して、その時点で１００％のコントロール動物は、ヒトＢ細胞腫瘍を発症した。対照的に、１２５μｇの抗ＴＧＦ−βを投与された動物のうちわずか２０％（５匹のうち１匹）しかＬＰＤを発症しなかった（図３Ｂ）。図３Ｂは、抗ＴＧＦ−βがＬＰＤの発症率を用量依存性の様式で軽減することを示す。ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスを、１００μｇまたは１２５μｇの抗ＴＧＦ−β抗体Ａ４１１またはマウスＩｇＧを用いて、９週間の間週に３回処置した。回収時に、Ｂ細胞腫瘍の存在を視覚的に評価して、フローサイトメトリーによって確認した。
【００９２】
ｈｕ ＰＢＬ ＳＣＩＤマウス由来の脾細胞および腫瘍細胞をフローサイトメトリーを介して分析して、実施例１に記載のようにＣＤ８＋Ｔ細胞レベルおよびＴ細胞活性化を評価した。全ての抗体およびアイソタイプコントロール抗体を直接結合体化して、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から得た。サンプルはＦＡＣＳｃａｎ（ＢＤ）上で読んで、Ｃｅｌｌ Ｑｕｅｓｔソフトウェアを用いて分析した。
【００９３】
脾臓および腫瘍のフローサイトメトリー分析によって、ヒトＣＤ８＋細胞が抗ＴＧＦ−β処置マウスにおいて劇的に増殖したことが示された。コントロールマウスは、それらの脾臓において中央値０％のＣＤ８＋細胞を有した。これらのマウスはまれに、脾臓においてヒト細胞を有し、ヒト細胞が存在する場合、それらが、ヒトＢ細胞であった。対照的に、１２５μｇの抗ＴＧＦ−βを投与された動物はそれらの脾臓で１７．５％というＣＤ８＋細胞の中央値を有した。Ｂ細胞腫瘍を発症した１匹の処置動物は、脾臓において有意な数のＢ細胞（２５％）、および有意な数のＣＤ８＋細胞（２５％）を有した。重要なことに、ＣＤ８＋Ｔ細胞はまた、１匹の腫瘍陽性抗ＴＧＦ−β処置動物の腫瘍でも増殖した。
【００９４】
抗ＴＧＦ−βが生存を延長した機構を決定するために、異なる抗体およびさらなるＰＢＬドナーの両方を用いて、さらなる実験を行なった。コントロール処置マウスは、浸潤するＣＤ８＋Ｔ細胞が極めて少ない（＜５％）Ｂ細胞腫瘍を有した。これらの動物の脾臓は、Ｂ細胞浸潤を有したが、ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤は有さなかった。対照的に、ＴＧＦ−βの中和は、腫瘍におけるヒトＣＤ８＋細胞の劇的な増大を生じた。これらのＣＤ８＋細胞は、ＣＤ４５ＲＯおよびＣＤ２５＋であって、このことは、それらが活性化された記憶細胞であったことを示している。ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞はまた、これらのマウスの脾臓に浸潤したが、ＣＤ２５は発現しなかった。
【００９５】
（実施例８）
抗ＴＧＦ−βの効果をさらに検討するために、第三のドナーを用いるさらなる研究を行なった。ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスに、１００μｇの抗ＴＧＦ−β抗体（Ａ４１１）またはマウスＩｇＧを、９週間にわたって１日おきに注射した（図４）。抗ＴＧＦ−β処置は、これらの動物の血清においてＴＧＦ−βを有効に中和した（示さず）。フローサイトメトリーを用いて、腫瘍（図４Ａ）および脾臓（図４Ｂ）におけるヒト細胞の増殖を評価した。
【００９６】
図４Ａは、抗ＴＧＦ−βおよびコントロールで処置したｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍のフローサイトメトリー分析を示す。腫瘍は、ヒトＢ細胞およびＴ細胞の増殖および活性化の存在についてフローサイトメトリーによって分析した（収集時点で）。データは、各々の群における代表的な動物から示される（１群あたりｎ＝５マウス）。
【００９７】
図４Ｂは、抗ＴＧＦ−βおよびコントロール処置したｈｕ ＰＢＬＳＣＩＤマウスからの脾臓のサイトメトリー分析を示す。ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスに、１００μｇの抗ＴＧＦ−β（Ａ４１１）またはマウスＩｇＧを９週間にわたって１日おきに注射した。収集時に、脾臓を、ヒトＢ細胞およびＴ細胞の増殖および活性化の存在についてフローサイトメトリーによって分析した。データは、各々の群における代表的な動物から示す（１群あたりｎ＝５マウス）。
【００９８】
これらのデータによって、コントロールＩｇＧ処置マウス由来の腫瘍は、ヒトＢ細胞および極めて少ないＣＤ８＋Ｔ細胞を含むことが示される。同様に、これらの動物由来の脾臓は、Ｂ細胞を含むが、Ｔ細胞がある場合は極めて少ない。対照的に、抗ＴＧＦ−β処置マウス由来の腫瘍および脾臓は、多数のＣＤ８＋Ｔ細胞を示した。これらのＣＤ８＋細胞は、ＣＤ４５ＲＯを発現する主に記憶細胞であって、腫瘍では、ＣＤ８＋細胞のほとんどがまたＣＤ２５を発現し、このことは、それらが活性化されたことを示している。脾臓におけるＣＤ８＋細胞のほとんどがＣＤ２５を発現しなかった。
【００９９】
本明細書は、本明細書内に引用される参考文献の教示に照らして最も徹底的に理解される。本明細書内の実施形態は、本発明の実施形態の例示を提供しており、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。当業者は、多数の他の実施形態が、本発明によって包含されることを容易に認識する。本開示に引用される全ての刊行物、特許および生物学的配列は、その全体が参照によって援用される。参照によって援用される物質が矛盾するか、または本明細書内で不整合である程度までは、本明細書は、任意のこのような物質に優先する。本明細書において任意の参照を引用しても、このような参照が本発明に対する先行技術であるという承認ではない。
【０１００】
他に示さない限り、特許請求の範囲を含む本明細書で用いられる成分、細胞培養物、処置条件などの数値を表す全ての数は、全ての場合において、「約、およそ（ａｂｏｕｔ）」という用語によって修飾されていると理解されるべきである。従って、他に逆に示されない限り、数的なパラメーターは、近似であり、かつ本発明によって得られるべく探求される所望の特性に依存して変化し得る。他に示さない限り、一連の要素に先行する「少なくとも（ａｔ ｌｅａｓｔ）」という用語は、そのつながりにおけるあらゆる要素を指すことが理解されるべきである。当業者は、慣用的な実験以下を用いて、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識または確定することができる。このような等価物は、添付の特許請求の範囲によって包含されるものとする。
【０１０１】
本発明の他の実施形態は、本明細書に開示される本発明の仕様および実行の考慮から当業者に明白である。本明細書および実施例は、例としてのみ解釈されるものとし、本発明の真の範囲および趣旨は、添付の特許請求の範囲によって示されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【０１０２】
【図１Ａ】図１Ａは、Ａ／Ａ、Ａ／ＴまたはＴ／Ｔ ＩＦＮ−γ遺伝子型を有する個体由来の末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を比較する細胞溶解アッセイにおけるＴＧＦ−βの効果を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、適合したＬＣＬ増殖をＣＴＬが防止する能力に対するＴＧＦ−βの効果は、ＴＧＦ−βの存在下でのＣＴＬ再刺激によって阻害されることを示す。
【図２】図２は、抗ＴＧＦ−β抗体での処置が、リンパ増殖性疾患のヒトＰＢＬ重症複合免疫不全（ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤ）マウスモデルにおいて、ＬＰＤからの死亡を妨げることを示す。
【図３】図３Ａは、抗ＴＧＦ−β抗体がインビボでＴＧＦ−βを中和することを示す。図３Ｂは、抗ＴＧＦ−β抗体がＬＰＤの頻度をｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤモデルにおいて用量依存性の様式で減少させることを実証する。
【図４Ａ】図４Ａは、抗ＴＧＦ−β抗体およびコントロールで処置したｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍のフローサイトメトリー分析を示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、抗ＴＧＦ−β抗体およびコントロールで処置したｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウス由来の脾臓のサイトメトリー解析を示す。これらのデータによって、コントロールのＩｇＧ処置したマウス由来の腫瘍および脾臓はヒトＢ細胞および極めて少ないＣＤ８＋Ｔ細胞を含んだが、抗ＴＧＦ−β処置したｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスの腫瘍および脾臓には多数のＣＤ８＋Ｔ細胞が存在することが実証される。
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その開示全体が参照によって本明細書に援用される、２００４年１０月１３日出願の米国仮特許出願第６０／６１８，４５８号に対する優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
リンパ増殖性障害（ＬＰＤ）を含む増殖性障害は高頻度に免疫抑制を伴う。例えば、器官または組織の移植後の免疫抑制療法は、特定の新生物に関連しており、そして多くのＬＰＤが、ウイルス感染を含む免疫不全の背景で発現する（非特許文献１に概説）。
【０００３】
移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）は、固形臓器および幹細胞移植の破壊的な合併症であって、７０〜８０％の死亡率を有し得る（非特許文献２）。ＰＴＬＤはしばしば、ほとんどの健常な成人において潜伏感染を樹立するヘルペスウイルスである、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）に関連する。ＰＴＬＤの頻度は、移植された器官、ならびに免疫抑制の頻度および期間に応じて変化する。腎移植のレシピエントにおいては、ＰＴＬＤは患者の１〜２％で生じるが、その頻度は、骨髄で、および肺移植のレシピエントでは２０％程度の高さである（非特許文献２、前出）。以前に抗ＥＢＶ免疫を樹立していない小児および移植のレシピエントは、とりわけＰＴＬＤの発症のリスクが最大である。ＰＴＬＤの治療の許容された標準はなく、そして患者の疾患の進行はしばしば、現在利用可能な治療に応答性ではない。しかし、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）活性は、ＰＴＬＤからの予防および回復に関与すると考えられる。
【０００４】
免疫抑制は、潜伏感染した細胞のＥＢＶ由来形質転換の進行を正常には予防する、ＥＢＶ特異的な細胞免疫を阻害すると考えられる。免疫抑制の低下はＰＴＬＤ患者の全てではないが、ある程度の例を処置するのには有効である（非特許文献２、前出）が、このような治療は、移植片の損失および他の重篤な合併症を生じ得る、急性拒絶のエピソードを発症させる確率を増大する。ＣＤ−２０タンパク質に関する抗ウイルス、細胞およびモノクローナル抗体療法が、ある程度のＰＴＬＤ患者の処置について示され得る。しかし完全に満足なものはない（非特許文献３；非特許文献４）。
【０００５】
９例のＰＴＬＤ患者の予備的な臨床的観察では、低ＩＦＮ−γ産生に関連する特定のＩＦＮ−γサイトカイン遺伝子型が、ＰＴＬＤを発症する腎臓移植レシピエントにおいて蔓延していることが示された（非特許文献５）。ＩＦＮ−γは、免疫サーベイランスに重要である細胞免疫における重要な調節性サイトカインである。ＩＦＮ−γ遺伝子における１つの多形性は、チミジン（Ｔ）またはアデノシン（Ａ）のいずれかを含む＋８７４位置の一塩基遺伝子多型（単一ヌクレオチド多型）である。＋８７４位置のチミジンの存在は、高サイトカイン産生に関連するマイクロサテライト反復と相関しており、そしてＮＦ−ｋＢ結合部位を生成する（非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８）。Ｔ／Ｔ遺伝子型はしばしば、「高プロデューサー（ｈｉｇｈ ｐｒｏｄｕｃｅｒ）」と呼ばれ、そしてＡ／Ａ遺伝子型は「低プロデューサー（ｌｏｗ ｐｒｏｄｕｃｅｒ）」と呼ばれる（非特許文献８）。臨床研究では、低い産生である、Ａ／Ａ ＩＦＮ−γ遺伝子型は、１３５例の非ＰＴＬＤ腎移植患者のうちの２７％に比較して、９例のＰＴＬＤ患者のうち８０％で存在し（非特許文献５、前出）、そして多形性は、ＰＴＬＤ発症の潜在的な危険因子として同定された。
【０００６】
トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ−β）は、ＩＦＮ−γに拮抗性であって、ＥＢＶの活性化、複製および形質転換の増大に関係している（非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１；非特許文献１２）。ＴＧＦ−βはまた、Ｔ細胞エフェクター機能を含む、複数のＴ細胞および抗原提示細胞（ＡＰＣ）機能を抑制する偏在性の多能性のサイトカインであり、そしてそうでなければ免疫学的監視を阻害し得る（非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５を参照のこと）。ＴＧＦ−βおよびＩＦＮ−γの拮抗性および調節対抗活性（ｃｏｕｎｔｅｒ−ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ）は、非特許文献１６に概説されており、そして研究によって、ＩＦＮ−γがＴＧＦ−β活性を阻害し得、逆もまた真であることが示されている。
【非特許文献１】Ｂｒｕｓａｍｏｌｉｎｏら、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ７４：６０５〜６２２（１９８９）
【非特許文献２】Ｐａｙａら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６８：１５１７〜１５２５（１９９９）
【非特許文献３】Ｌｉｕら、Ｒｅｃｅｎｔ Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５９：１２３〜１３３（２００２）
【非特許文献４】Ｚｉｌｚら、Ｊ．Ｈｅａｒｔ Ｌｕｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０：７７０〜７７２（２００１）
【非特許文献５】ＶａｎＢｕｓｋｉｒｋら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．３３：１８３４（２００１）
【非特許文献６】Ｐｒａｖｉｃａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２５：１７６Ｓ（１９９７）
【非特許文献７】Ｐｒａｖｉｃａら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ２６：１〜３（１９９９）
【非特許文献８】Ｐｒａｖｉｃａら、Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６１：８６３〜８６６（２０００）
【非特許文献９】Ｓｃｈｕｓｔｅｒら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２８４：８２〜８６（１９９１）
【非特許文献１０】ｄｉＲｅｎｚｏら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ５７：９１４〜９１９（１９９４）
【非特許文献１１】Ｌｉａｎｇら，Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７７：２３３４５〜２３３５７（２００２）
【非特許文献１２】Ｆａｈｍｉら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：５８１０〜５８１８（２０００）
【非特許文献１３】Ｌｅｔｔｅｒｉｏら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：１３７〜１６１（１９９８）
【非特許文献１４】Ｇｏｌｄ，Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｇ．１０：３０３〜３６０（１９９９）
【非特許文献１５】Ａｌｔｉｏｋら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．４０：１１１〜１１５（１９９４）
【非特許文献１６】Ｓｔｒｏｂｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １８：６１〜６４（１９９７）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
現在の治療は、最適ではないので、ＰＴＬＤを含むウイルス関連のＬＰＤを処置または予防するための方法および組成物が必要である。低いＩＦＮ−γレベルおよび／または不十分なＴ細胞応答性に関連するリンパ増殖性の障害を処置する方法の必要性も存在する。特異的な治療を受けるための候補を含む、処置の候補である患者を同定する更なる手段が必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
本発明は、例えば、ＴＧＦ−βアンタゴニストの投与によるＴＧＦ−β活性の阻害が、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）を含む進行性のウイルス関連リンパ増殖性障害（ＬＰＤ）を予防、処置または遅らせるという発見に関する。ＴＧＦ−βアンタゴニストの投与は、ＬＰＤからの防御、およびヒトＣＤ８＋細胞の増殖を生じる。さらに、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖およびＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、ＴＧＦ−β活性の阻害およびＬＰＤの阻害と相関する。
【０００９】
本発明は、ＥＢＶ関連ＬＰＤおよびＰＴＬＤを含む、ウイルス関連のＬＰＤの発症のリスクを処置、予防、および軽減するための方法を提供する。この方法はさらに、例えば、ヘルペスウイルス、ＨＨＶ−８、サイトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｃ型レトロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（Ｃ型レトロウイルス）および／またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２）のようなウイルス感染に対するＴ細胞応答性を増強するための方法を提供する。この開示された方法は、ＬＰＤのリスクがあるか、ＬＰＤに感受性であるか、またはＬＰＤに罹患している哺乳動物被験体に対して、ＴＧＦ−βアンタゴニストの治療上有効な量を投与する工程を包含する。本発明の方法によって処置される集団としては、限定はしないが、ＬＰＤに罹患しているかまたはその発生のリスクがある被験体が挙げられ、これには、例えば、免疫不全を有するか、または免疫抑制を誘導するように処置されている被験体が挙げられる。特定の実施形態では、ＩＦＮ−γのレベルが低い個体でウイルス関連障害を処置するための方法が提供される。
【００１０】
本発明はさらに、ウイルス関連ＬＰＤの発症の１つ以上の危険因子の存在、またはその進行もしくは処置に対する応答性を評価して、この危険因子を有する被験体に対してＴＧＦ−βアンタゴニストを投与するための方法を提供する。例えば、ＩＦＮ−γレベルまたはＩＦＮ−γ遺伝子型を評価するかまたは測定する工程、および低ＩＦＮ−γレベルを有するか、またはＡ／ＴもしくはＡ／Ａ＋８７４遺伝子型を有する被験体を処置する工程を包含する方法が本明細書において提供される。
【００１１】
本発明の方法において用いられる投与方法および組成物が提供される。開示された方法では、ＴＧＦ−βアンタゴニストとしては、限定はしないが、ＴＧＦ−βの１つ以上のアイソフォームに対する抗体；ＴＧＦ−βレセプターに対する抗体；可溶性ＴＧＦ−βレセプターおよびそのフラグメント；ならびにＴＧＦ−β阻害性の糖およびプロテオグリカン、ならびにＴＧＦ−βの低分子インヒビターが挙げられる。
【００１２】
特定の実施形態では、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、モノクローナル抗体またはそのフラグメントであって、ＴＧＦ−βのそのレセプターに対する結合をブロックする。非限定的な例示的な実施形態としては、非ヒトモノクローナル抗ＴＧＦ−β抗体、例えば、マウスモノクローナル抗体１Ｄ１１（１Ｄ１１．１６、ＡＴＣＣ寄託指定番号ＨＢ９８４９としても公知）、その誘導体（例えば、ヒト化抗体）および完全ヒトモノクローナル抗ＴＧＦ−β１抗体（例えば、ＷＯ００／６６６３１に記載されるＣＡＴ１９２）またはその誘導体が挙げられる。
【００１３】
以下の要約および以下の説明は、特許請求された本発明の限定ではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
（詳細な説明）
本発明は、抗ＴＧＦ−β抗体のような、ＴＧＦ−βアンタゴニストを用いるＴＧＦ−βの阻害または中和が、哺乳動物被験体におけるウイルス関連ＬＰＤの発症および進行を軽減させるという発見および実証に一部は基づく。このデータによって、ＴＧＦ−βアンタゴニストの使用は、それで処置された被験体における低ＩＦＮ−γレベルと関連する腫瘍発達の進行を予防または阻害することが示される。これらのデータはまた、ＴＧＦ−βアンタゴニストの投与がＣＴＬ再刺激および増殖のＴＧＦ−β阻害を逆転することを示す。ＬＰＤのマウスモデルにおけるＴＧＦ−βの中和は、ＣＤ８＋細胞の増殖を生じ、そしてＬＰＤ進行を軽減する。さらに、このデータによって、ＩＦＮ−γ遺伝子型は、例えば、ＰＴＬＤのリスクがより大きい移植レシピエントを同定するのに、そして予防的および治療的なストラテジーを開発するのに、有用な情報を提供することが示される。従って、本発明は、ウイルス関連の障害およびＬＰＤ、例えば、哺乳動物における、ウイルス関連ＬＰＤ、ＥＢＶ関連ＬＰＤおよび／または移植後リンパ増殖性障害の発症のリスクを処置、予防および軽減するための方法を提供する。
【００１５】
本発明がさらに容易に理解され得るように、特定の用語を最初に規定する。さらなる定義は、詳細な説明全体にわたって示される。
【００１６】
「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、本明細書において用いる場合、免疫グロブリンまたはその一部を指し、そして供給源、産生の方法および他の特徴にかかわらず抗原結合部位を含む任意のポリペプチドを包含する。この用語は、限定はしないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単価抗体、多価抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、単鎖抗体、キメラ抗体、合成抗体、組み換え抗体、ハイブリッド抗体、変異抗体、およびＣＤＲグラフト化（接合）抗体を包含する。当業者によって認識されるように、このような分子のいずれか、例えば、「ヒト（ｈｕｍａｎ）」抗体は、その免疫原性を減少するか、その親和性を増大するか、その特異性を変更するか、または他の目的のために、操作され（例えば、「生殖系列にされ（ｇｅｒｍｌｉｎｅｄ）」）てもよい。「抗原結合ドメイン（ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ）」という用語は、抗原の一部または全てに対して特異的に結合するかまたは相補的である領域を含む、抗体分子の一部をいう。抗原が大きい場合、抗体は、この抗原の特定の一部にしか結合しなくてもよい。「エピトープ」または「抗原性決定基（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ）」とは、抗体の抗原結合ドメインとの特異的な相互作用を担う抗原分子の一部である。抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）またはその一部を含んでもよい。抗原結合ドメインは、１つ以上の抗体可変ドメインによって提供され得る（例えば、ＶＨドメインからなる、いわゆる、Ｆｄ抗体フラグメント、またはＶＨドメインおよびＶＬドメインからなる、いわゆる、Ｆｖ抗体フラグメント）。「抗ＴＧＦ−β抗体（ａｎｔｉ−ＴＧＦ−β ａｎｔｉｂｏｄｙ）」または「ＴＧＦ−βの少なくとも１つのアイソフォームに対する抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ ｉｓｏｆｏｒｍ ｏｆ ＴＧＦ−β）」という用語は、ＴＧＦ−βの少なくとも１つのエピトープに対して特異的に結合する任意の抗体をいう。「ＴＧＦ−βレセプター抗体（ＴＧＦ−β ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」および「ＴＧＦ−βレセプターに対する抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ ａ ＴＧＦ−β ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」という用語は、ＴＧＦ−βレセプターの少なくとも１つのエピトープ（例えば、Ｉ型、ＩＩ型またはＩＩＩ型）に特異的に結合する任意の抗体をいう。
【００１７】
本明細書において用いる場合、「治療的な化合物（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」という用語は、ＴＧＦ−βの生物学的な活性に、直接的または間接的に影響することによって、ＴＧＦ−βを調節するかまたは阻害し得る任意の化合物をいう。
【００１８】
「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」、「中和する（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ）」、「拮抗する（ａｎｔａｇｏｎｉｚｅ）」およびそれらの同語源の用語は、ある化合物が特定の反応または生物学的活性のアンタゴニストとして作用する能力をいう。量または生物学的活性の減少は好ましくは、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上である。この用語は、目的の生物学的活性を担う少なくとも１つのタンパク質（例えば、ＴＧＦ−βおよびＴＧＦ−βレセプター）の相対的な量または活性における減少をいう。さらに、この用語は、例えば、アッセイ（例えば、Ｔ細胞傷害性、活性化または増殖アッセイ）において測定されたとおり、または本明細書に記載のように、ＴＧＦ−βまたはＴＧＦ−βレセプターの生物学的活性における相対的な減少をいう。
【００１９】
本明細書において用いる場合、「ＴＧＦ−βアンタゴニスト」およびその同語源の用語、例えば、「インヒビター（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）」、「中和剤（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｇｅｎｔ）」および「下方制御因子（ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）」とは、ＴＧＦ−βの生物学的活性のアンタゴニストとして作用する、化合物（または、必要に応じて、その特性）をいう。ＴＧＦ−βアンタゴニストは、例えば、ＴＧＦ−βに結合して、その活性を中和し得るか、ＴＧＦ−β発現レベルを減少し得るか、安定性または活性な成熟型への前駆体分子の変換に影響し得るか、１つ以上のレセプターに対するＴＧＦ−βの結合を妨害するか、またはＴＧＦ−βレセプターの細胞内シグナル伝達を妨げ得る。「ＴＧＦ−βアンタゴニストに対する（ｄｉｒｅｃｔ ＴＧＦ−β ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）」という用語は一般に、ＴＧＦ−βの生物学的活性を直接下方制御する任意の化合物をいう。ある分子は、それが、ＴＧＦ−β遺伝子、ＴＧＦ−β転写物、ＴＧＦ−βポリペプチド、ＴＧＦ−βリガンドまたはＴＧＦ−βレセプターと相互作用することによって活性を下方制御する場合、ＴＧＦ−βの生物学的活性を「直接下方制御する（ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｓ）」。ＴＧＦ−βアンタゴニストの生物学的活性を中和することを評価するための方法は、当該分野で公知であり、そして例は下に記載している。
【００２０】
「リンパ増殖性障害（ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」、「ＬＰＤ」およびそれらの同語源の用語は、リンパ系組織（例えば、リンパ節、脾臓、胸腺）で生成されたリンパ球、白血球が過剰生産されるかまたは異常に作用する障害をいう。ＬＰＤは、リンパ球またはリンパ組織の異常な増殖、すなわち、例えば、「ウイルス関連リンパ増殖性障害（ｖｉｒａｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」または「移植後リンパ増殖性障害（ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」を包含する。リンパ球としては、胸腺由来リンパ球（Ｔ細胞）、例えば、骨髄由来のリンパ球（Ｂ細胞）およびナチュラルキラー（ＮＫ細胞）が挙げられる。リンパ球は、増殖、活性化および成熟を含む多数の異なる段階を通じて進行し、そしてリンパ腫または異常な増殖が各々の段階で発達し得る。障害は、悪性の新生物であってもよく（そして、侵襲性もしくは無痛性、または低、中もしくは高い悪性度として分類されてもよく）、これには、ＩＦＮ−γに関連する障害が挙げられ、またはこの障害は、リンパ細胞の非悪性の異常な増殖に関与し得る。ＬＰＤとしては、処置なしでは解消されない、そして／または過剰な細胞増殖、例えば、増殖性、モノクローナル、ポリクローナルもしくはオリゴクローンのリンパ系腫瘍に関与する、任意のモノクローナルまたはポリクローナルのＬＰＤが挙げられる。細胞増殖は、正常よりも急速であってもよいし、そして新規の増殖中断を開始した刺激後に継続してもよい。新生物は、構造的な組織化および正常な組織との機能的な協調の、部分的または完全な欠失を示し、そして良性（良性腫瘍）または悪性（ガン）のいずれであってもよいが組織の別個の塊を形成してもよい。リンパ系（またはその他）の細胞または組織の異常な増殖、機能または構造を検出する方法は、ＰＴＬＤのようなウイルス関連ＬＰＤを診断、その進行をモニター、またはその治療因子の有効性をアッセイするために用いられ得る。特定の実施形態では、ＬＰＤとしては、ガンを含まない。他の実施形態では、ウイルス関連のＬＰＤとしては、ガンを含まない。
【００２１】
このような疾患または障害としては、限定はしないが、Ｔ細胞リンパ増殖性疾患、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、侵襲性大細胞リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、バーキットリンパ腫、カポジ肉腫、およびエプスタイン・バーウイルス関連リンパ腫が挙げられる。「移植後リンパ増殖性障害（ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｌｙｍｐｈｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」すなわち「ＰＴＬＤ」とは、器官、組織または幹細胞移植および付随する免疫抑制療法に関連する、変化した過形成および／または新生物性の障害をいう。ＰＴＬＤとしては、例えば、反応性のポリクローナルＢ細胞過形成のようなリンパ球過形成から、ポリクローナルまたはモノクローナルのＢ細胞リンパ腫におよぶ障害が挙げられる。侵襲性の非ホジキンリンパ腫の例としては、限定はしないが、びまん性大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＨＴＬＶ−１＋）、外套細胞リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、真性組織球性リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫および侵襲性ＮＫ細胞白血病が挙げられる。無痛性非ホジキンリンパ腫の例としては、限定はしないが、濾胞性リンパ腫、びまん性小リンパ球性リンパ腫／慢性リンパ球性白血病、リンパ形成性（ｌｙｍｐｈｏｐｌａｓｔｉｃ）リンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ＭＡＬＴ（節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫）、単球様 Ｂ細胞リンパ腫（節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫）、有毛リンパ球を有する脾リンパ腫（脾性辺縁帯リンパ腫）、ヘアリー細胞白血病および菌状息肉腫／セザリー症候群が挙げられる。
【００２２】
「ウイルス関連（ｖｉｒａｌ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）」増殖性障害とは、ウイルスによって生じるかまたはウイルスと相関するＬＰＤをいう。ウイルス関連ＬＰＤは、例えば、ヘルペスウイルス、ＨＨＶ−８、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｃ型レトロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（Ｃ型レトロウイルス）および／またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２）などによって生じてもよいし、またはそれらに関連してもよい。ＨＩＶまたはＡＩＤＳ関連のガンとしては、ＨＩＶ関連のＬＰＤが挙げられ、そして例は、カポジ肉腫、非ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＨＴＬＶ−１＋）およびＡＩＤＳ関連リンパ腫である。「ＥＢＶ−関連（ＥＢＶ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）」障害としては、例えば、単核球症、上咽頭癌、浸潤性乳癌、胃癌およびＥＢＶ関連ＬＰＤが挙げられる。「ＥＢＶ−関連ＬＰＤ（ＥＢＶ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＬＰＤ）」としては、限定はしないが、原発性ＣＮＳリンパ腫、ＰＴＬＤ、バーキットリンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、Ｘ連鎖ＬＰＤ、チェディアック−東症候群、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫が挙げられる。難治性の非ホジキンリンパ腫、例えば、外套細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、およびＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫の約４０％が、例えば、ＥＢＶに関連する。Ｘ連鎖性ＬＰＤはしばしば、ＥＢＶウイルス感染に対するＴ細胞媒介性応答を包含する。ＡＩＤＳ患者、器官移植レシピエントおよび遺伝的免疫障害におけるような免疫不全は、潜伏ＥＢＶを再活性化させ得、これは、例えば、異常なリンパ球の増殖およびＥＢＶ関連ＬＰＤを発症させる能力を生じる。ＬＰＤに関与する細胞のような、異常な細胞におけるウイルスまたはウイルス感染の存在を検出する方法は、当該分野で公知である。ウイルス核酸またはポリペプチドは、例えば、異常な細胞のような、細胞、組織または生物で検出され得る。また、ウイルスに特異的な免疫応答を検出する方法が公知である。トランス−ビボＤＴＨアッセイのような遅延型過敏性（ＤＴＨ）アッセイを用いて、例えば、制御性Ｔ細胞を検出してもよい。このようなアッセイでは、ヒトまたは他の哺乳動物末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、例えば、ウイルス抗原の存在下または非存在下でキャリアコントロールと混合して、異種のナイーブなレシピエント、例えば、ナイーブなマウスの耳介または足蹠に注射する。ＰＢＭＣのドナーがチャレンジ抗原に対して以前に感作されていた場合、ＤＴＨ様の膨張反応が観察される。
【００２３】
低ＩＦＮ−γに関連するＬＰＤ、または低ＩＦＮ−γレベルに関連がある、またはないウイルス関連ＬＰＤについて「リスクがある（ａｔ ｒｉｓｋ）」被験体とは、障害を発症する確率を増大する１つ以上の危険因子を有する被験体である。ウイルス関連のＬＰＤまたはＰＴＬＤを発症するリスクがあると被験体をみなす要因の１つは、彼または彼女が、ＩＦＮ−γ遺伝子の＋８７４位置でＡ／ＡまたはＡ／Ｔ遺伝子型のようなＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型についてホモ接合性であるかまたはヘテロ接合性であるかということである。低ＩＦＮ−γレベルに関連するＬＰＤまたはウイルス関連ＬＰＤのリスクがある被験体は、１つ以上の他の危険因子を有し得、これにはとりわけ、以下が挙げられる：免疫不全；免疫抑制療法；器官、組織または細胞の移植（幹細胞移植を含む）；移植前のＥＢＶ血清陰性状態；ＥＢＶ再活性化；潜伏性ウイルスの再活性化；免疫不全患者における原発性ＥＢＶまたは他のウイルス感染；被験体の年齢（すなわち、小児または成人）；ならびに移植片拒絶を妨げるために投与される免疫抑制療法のタイプおよび期間など。リスクがある被験体は、例えば、血液および組織におけるウイルス負荷を評価する（例えば、移植後の増大したウイルス負荷を検討する）ことによって、またはリンパ球、Ｂ細胞の数もしくは総血清ＩｇＭの増大を試験することによって、同定され得る。ＥＢＶ（または他のウイルス）は、必要に応じて、サザンブロットハイブリダイゼーションによって、または定量的ＰＣＲもしくは半定量的ＰＣＲを含むポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、または被験体の血液、血清もしくは組織中の陽性のウイルス血清学（抗ウイルスカプシド抗原ＩｇＧ（ＥＢＶ血清学））によって、検出され得る。
【００２４】
「免疫不全（ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）」は、遺伝性であっても、後天性であっても、または医原性（診断、医学的治療または外科的手順によって誘導される）であってもよい。遺伝性の免疫不全の例としては、例えば、重症複合免疫不全、自己免疫疾患、Ｘ連鎖免疫不全、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、分類不能型免疫不全、チェディアック−東症候群、ウィスコット・アルドリッチ症候群または毛細血管拡張性運動失調症が挙げられる。後天性免疫不全は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のような疾患または感染によって生じ得る。医原性免疫不全としては、免疫抑制療法によって生じるものが挙げられ、これには、器官または組織の移植に付随する治療が挙げられる。免疫抑制治療療法とは、免疫抑制を誘導する化合物または組成物の投与をいい、すなわち、これは免疫学的な応答の発生を予防または妨害する。治療的な免疫抑制は、シクロスポリン、アザチオプリンおよび／またはプレドニゾロン、ならびに本明細書のいずれかに列挙されるものを含む他の免疫抑制剤の投与を包含し得る。
【００２５】
「処置（する）（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療法（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｅｔｈｏｄ）」およびそれらの同語源の用語は、処置または予防／対処用の手段をいう。処置の必要な個体としては、特定の医学的障害を既に有する個体、ならびに最終的に障害に罹患し得る個体が挙げられる。処置の必要性は、例えば、障害の発生に関連する１つ以上の危険因子の存在、障害の存在もしくは進行、または障害を有する被験体の処置に対する受容度によって、評価され得る。処置としては、障害の進行を遅らせることまたは逆転することを含み得る。
【００２６】
「治療的に有効な用量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｄｏｓｅ）」または「治療上有効な量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」という用語は、被験体においてＬＰＤ、ウイルス関連ＬＰＤ、ＥＢＶ関連ＬＰＤおよび／または移植後ＬＰＤの症状の発現の予防もしくは遅延または寛解を、あるいは所望の生物学的転帰の獲得、例えば、異常な増殖の減少を生じる化合物の量をいう。有効な量は、当該分野で周知の、そして本明細書の引き続くセクションに記載のような方法によって決定され得る。
【００２７】
「特異的な相互作用（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）」、「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」、またはそれらの同語源の用語は、２つ以上の分子が、生理学的な条件下で比較的安定である複合体を形成することを意味する。特定の結合は、高い親和性および低〜中度の能力で特徴付けられる。非特異的な結合は通常、中度〜高度の能力で低親和性を有する。代表的には、結合は、親和性定数Ｋａが１０６Ｍ−１より高いか、好ましくは１０８Ｍ−１より高い場合に特異的とみなされる。必要に応じて、非特異的な結合は、結合条件を変化することによって特異的な結合に実質的に影響することなく、軽減され得る。この条件は、当該分野で公知であり、そして慣用的な技術を用いる当業者は適切な条件を選択し得る。この条件は通常、結合タンパク質の濃度、溶液のイオン強度、温度、結合させる時間、無関係の分子（例えば、血清アルブミン、ミルクカゼイン）の濃度などに関して規定される。
【００２８】
「実質的に同一である（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｉｄｅｎｔｉｃａｌ）」という句は、関連のアミノ酸配列が、所定の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であることを意味する。例えば、このような配列は、種々の種由来の改変体であってもよいし、またはそれらは、所定の配列から短縮、欠失、アミノ酸置換または付加によって誘導されてもよい。例えば、ＴＧＦ−βアンタゴニストの変異体、フラグメントまたは誘導体は、ＴＧＦ−βアンタゴニストに比較した場合、実質的に同一のアミノ酸または核酸配列を有し得、そしてＴＧＦ−βの生物学的活性を直接阻害する能力を保持し得る。２つのアミノ酸配列の間の同一性パーセントは、標準的なアラインメントアルゴリズム、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３〜４１０（１９９０）に記載のＢａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）、Ｎｅｅｄｌｍａｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４４〜４５３（１９７０）のアルゴリズム、またはＭｅｙｅｒｓら、Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１〜１７（１９８８）のアルゴリズムなどによって決定され得る。このようなアルゴリズムは、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＰおよび「ＢＬＡＳＴ ２ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」プログラム（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴを参照のこと）に組み込まれている。このようなプログラムを利用する場合、デフォールトパラメーターが用いられ得る。例えば、ヌクレオチド配列については、以下の設定を「ＢＬＡＳＴ ２ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」について用いてもよい：プログラムＢＬＡＳＴＮ、マッチ２についてリウォード、ミスマッチ−２についてペナルティー、オープンギャップおよびエクステンションギャップペナルティーがそれぞれ５および２、ギャップｘ＿ドロップオフ ５０、期待値１０、ワードサイズ１１、フィルターＯＮ。アミノ酸配列については、以下の設定を、「ＢＬＡＳＴ ２ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」について用いてもよい：プログラムＢＬＡＳＴＰ、マトリックスＢＬＯＳＵＭ６２、オープンギャップおよびエクステンションギャップペナルティーがそれぞれ１１および１、ギャップｘ＿ドロップオフ ５０、期待値１０、ワードサイズ３、フィルターＯＮ。本出願のアミノ酸配列および核酸配列は、参照によって援用されるものを含み、これには、ホモログ、改変体または実質的に同一な配列を挙げることができる。
【００２９】
本明細書において用いる場合、「ＴＧＦ−β」は、他に特に示さない限り、ＴＧＦ−βの任意の１つ以上のアイソフォームをいう。同様に、「ＴＧＦ−βレセプター（ＴＧＦ−β ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」という用語は、他に示さない限り、少なくとも１つのＴＧＦ−βアイソフォームに結合する任意のレセプターをいう。現在、ＴＧＦ−βの５つの公知のアイソフォームがあり（ＴＧＦ−β１〜β５）、その全てがお互いに相同であり（６０〜８０％同一性）、約２５ｋＤａのホモ二量体を形成し、そして共通のＴＧＦ−βレセプター（ＴβＲ−Ｉ、ＴβＲ−ＩＩ、ＴβＲ−ＩＩＢおよびＴβＲ−ＩＩＩ）に作用する。ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、およびＴＧＦ−β３は、哺乳動物に見出される。ＴＧＦ−βの構造的および機能的な局面、ならびにＴＧＦ−βレセプターは、当該分野で周知である（例えば、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、編、Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍら、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，２００１を参照のこと）。ＴＧＦ−βは種の間で極めてよく保存されている。例えば、ラットおよびヒト成熟ＴＧＦ−β１のアミノ酸配列はほぼ同一である。従って、ＴＧＦ−βのアンタゴニストは、高い種交差反応性を有すると期待される。
【００３０】
（ＴＧＦ−βアンタゴニスト）
ＴＧＦ−βは、成熟ＴＧＦ−βを生成するために分泌の前に切断される約４００アミノ酸（ａａ）のプレプロタンパク質として合成されるジスルフィド結合した二量体である。「潜伏関連ペプチド（ｌａｔｅｎｃｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）」（ＬＡＰ）として公知のＮ末端切断フラグメントは、この二量体に対して非共有的に結合したままであってもよく、これによってＴＧＦ−βを不活性化する。インビボで単離されたＴＧＦ−βは、ＬＡＰに関連したこの不活性な「潜伏（ｌａｔｅｎｔ）」型において主に見出される。潜伏ＴＧＦ−β複合体は、いくつかの方式で、例えば、陽イオン非依存性マンノース−６−リン酸塩／インスリン様増殖因子ＩＩレセプターと呼ばれる細胞表面レセプターに対する結合によって、活性化され得る。結合は、ＬＡＰ内のグリコシル化部位に結合したマンノース−６−リン酸塩残基を通じて生じる。レセプターに対する結合の際、ＴＧＦ−βは、成熟形態で放出される。次いで、成熟の活性なＴＧＦ−βはそのレセプターに対する結合が遊離されて、その生物学的機能を発揮する。ＩＩ型ＴＧＦ−βレセプターにおける主要なＴＧＦ−β結合ドメインは、１９個のアミノ酸配列に対してマッピングされている（Ｄｅｒｍｅｔｒｉｏｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１：１２７５５（１９９６））。
【００３１】
本発明の方法において用いられ得るＴＧＦ−βアンタゴニストの例としては、限定はしないが、以下が挙げられる：ＴＧＦ−βの１つ以上のアイソフォームに対するモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体（米国特許第５，５７１，７１４号；ＷＯ９７／１３８４４；ＷＯ００／６６６３１；ドミナントネガティブおよび可溶性のＴＧＦ−βレセプターまたはＴＧＦ−βレセプターに対する抗体（Ｆｌａｖｅｌｌら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：４６〜５３（２００２）；米国特許第５，６９３，６０７号；米国特許第６，００１，９６９号；米国特許第６，００８，０１１号；米国特許第６，０１０，８７２号；ＷＯ９２／００３３０；ＷＯ９３／０９２２８；ＷＯ９５／１０６１０号；およびＷＯ９８／４８０２４）；ＬＡＰ（ＷＯ９１／０８２９１）；ＬＡＰ関連ＴＧＦ−β（ＷＯ９４／０９８１２）；ＴＧＦ−β結合糖タンパク質／プロテオグリカン、例えば、フェチュイン（米国特許第５，８２１，２２７号）；デコリン、ビグリカン、フィブロモジュリン、ルミカンおよびエンドグリン（米国特許第５，５８３，１０３号；米国特許第５，６５４，２７０号；米国特許第５，７０５，６０９号；米国特許第５，７２６，１４９号；米国特許第５，８２４，６５５号；米国特許第５，８３０，８４７号；米国特許第６，０１５，６９３号；ＷＯ９１／０４７４８；ＷＯ９１／１０７２７；ＷＯ９３／０９８００およびＷＯ９４／１０１８７）；ＴＧＦ−βアクセサリレセプターであって、ｒ１５０タンパク質、その可溶型、誘導体または前駆体のような、ＴＧＦ−β１に直接結合するレセプターを含む、レセプター（米国特許公開番号２００４０１９１８６０）；マンノース−６−リン酸塩またはマンノース−１−リン酸塩（米国特許第５，５２０，９２６号）；プロラクチン（ＷＯ９７／４０８４８）；インスリン様増殖因子ＩＩ（ＷＯ９８／１７３０４）；植物、真菌および細菌の抽出物（ＥＵ ８１３８７５；ＪＰ ８１１９９８４；および米国特許第５，６９３，６１０号）；アンチセンスオリゴヌクレオチド（米国特許第５，６８３，９８８号；米国特許第５，７７２，９９５号；米国特許第５，８２１，２３４号；米国特許第５，８６９，４６２号およびＷＯ９４／２５５８８）；低分子インヒビター、例えば、セリン／トレオニンキナーゼインヒビター（ＷＯ０４／２１９８９；ＷＯ０３／８７３０４；ＷＯ０４／２６８７１；ＷＯ０４／２６３０２；ＷＯ０４／２４１５９、米国特許第６，１８４，２２６号；ＷＯ０３／９７６３９；およびＷＯ０４／１６６０６）；ＳＭＡＤおよびＭＡＤを含む、ＴＧＦ−βシグナル伝達に関与するタンパク質（欧州特許８７４０４６；ＷＯ９７／３１０２０；ＷＯ９７／３８７２９；ＷＯ９８／０３６６３；ＷＯ９８／０７７３５；ＷＯ９８／０７８４９；ＷＯ９８／４５４６７；ＷＯ９８／５３０６８；ＷＯ９８／５５５１２；ＷＯ９８／５６９１３；ＷＯ９８／５３８３０；ＷＯ９９／５０２９６；米国特許第５，８３４，２４８号；米国特許第５，８０７，７０８号；および米国特許第５，９４８，６３９号）、ＳｋｉおよびＳｎｏ（Ｖｏｇｅｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６：６６５（１９９９）；およびＳｔｒｏｓｃｈｅｉｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６：７７１〜７７４（１９９９））ならびにＴＧＦ−βの生物学的活性を直接阻害する能力を保持する上記で同定された分子の任意の変異体、フラグメントまたは誘導体。
【００３２】
ある実施形態では、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、直接のＴＧＦ−βアンタゴニスト、例えば、ＴＧＦ−βのそのレセプターに対する結合をブロックする抗体である。この抗体は、ＴＧＦ−βの少なくとも１つのアイソフォームに対して、または少なくとも１つのＴＧＦ−βレセプターの細胞外ドメインに対して特異的に結合するような抗体である。いくつかの他の実施形態では、抗ＴＧＦ−β抗体は、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３からなる群より選択されるＴＧＦ−βの少なくとも１つのアイソフォームに対して特異的に結合する。さらに他の実施形態では、抗ＴＧＦ−β抗体は特異的に以下の少なくとも１つに対して結合する：（ａ）ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３（「汎中和抗体（ｐａｎ−ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」とも呼ばれる）；（ｂ）ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２；（ｃ）ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β３；ならびに（ｄ）ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３。種々の実施形態では、ＴＧＦ−βの、それが特異的に結合する、少なくとも１つのアイソフォームについてのＴＧＦ−β抗体の親和性定数Ｋａは好ましくは、１０６Ｍ−１、１０７Ｍ−１、１０８Ｍ−１、１０９Ｍ−１、１０１０Ｍ−１、１０１１Ｍ−１、１０１１Ｍ−１、または１０１２Ｍ−１より大きい。なおさらなる実施形態では、本発明の抗体は、ヒトＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２および／またはＴＧＦ−β３に対して実質的に同一であるタンパク質に特異的に結合する。またヒトでの使用について意図されるのは、引用文献に記載された任意の脊椎動物種由来の非ヒト抗体のヒト化型および誘導体である。このような改変体の産生は、当業者の通常の技術の十分に範囲内である（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ編、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ、第２版、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９５を参照のこと）。
【００３３】
非限定的な例示的な実施形態では、抗ＴＧＦ−β抗体は、ハイブリドーマ１Ｄ１１．１６によって生成されるマウスモノクローナル抗体１Ｄ１１である（ＡＴＣＣ寄託指定番号（Ｄｅｐｏｓｉｔ Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ Ｎｏ．）ＨＢ９８４９、米国特許第５，５７１，７１４号；同第５，７７２，９９８号；および同第５，７８３，１８５号にも記載）。１Ｄ１１重鎖可変領域の配列は、アクセッション番号ＡＡＢ４６７８７として利用可能である。従って、関連の実施形態では、抗ＴＧＦ−β抗体は、１Ｄ１１の誘導体、例えば、ＡＡＢ４６７８７における配列と同一のＣＤＲ配列を含む抗体、例えばヒト化抗体である。なおさらなる非限定的な例示的実施例では、抗ＴＧＦ−β抗体は、Ｌｕｃａｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：１４１５〜１４２２（１９９０）に従う抗体、またはファージディスプレイによって生成される完全ヒト組み換え抗体、例えば、ＷＯ００／６６６３１、米国特許第６，４９２，４９７号および米国特許出願第２００３／００９１５６６号および２００３／００６４０６９号に記載されるＣＡＴ１９２、またはそれらに開示されるＣＤＲ配列を含む抗体である。なおさらなる実施形態では、抗ＴＧＦ−β抗体は、１Ｄ１１、ＣＡＴ１９２またはＣＡＴ１５２からガイドされた選択によって生成される抗体である。
【００３４】
１Ｄ１１抗体はＴＧＦ−βの３つ全ての哺乳動物アイソフォームに特異的に結合するが、ＣＡＴ１９２はＴＧＦ−β１にのみ特異的に結合する。１Ｄ１１およびＣＡＴ１９２についてのこの抗原親和性はそれぞれ、ほぼ１ｎＭおよび８．４ｐＭである。１Ｄ１１のエピトープ（Ｄａｓｃｈら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：１５３６〜１５４１（１９９８））およびＣＡＴ１９２は、成熟ＴＧＦ−βのＣ末端部分にマッピングされている。
【００３５】
ＴＧＦ−βおよびＴＧＦ−βアンタゴニストの中和生物学的活性を評価する方法は当該分野で公知である。インビトロのバイオアッセイにおいてさらに頻繁に用いられるいくつかの例としては以下が挙げられる：
（１）ＥＧＦの存在下における軟寒天中でのＮＲＫ細胞のコロニー形成の誘導（Ｒｏｂｅｒｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：５３３９〜５３４３（１９８１））；
（２）軟骨性表現型を発現する原始的間葉細胞の分化の誘導（Ｓｅｙｅｄｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：２２６７〜２２７１（１９８５））；
（３）Ｍｖ１Ｌｕミンク肺上皮細胞の増殖の阻害（Ｄａｎｉｅｌｐｏｕｒら、（１９８９）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１３８：７９〜８６）およびＢＢＣ−１サル腎臓細胞（Ｈｏｌｌｅｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５９８９〜５９９２（１９８０））；
（４）Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウス胸腺細胞の有糸分裂誘発の阻害（Ｗｒａｎｎら、ＥＭＢＯ Ｊ．６：１６３３〜１６３６（１９８７））；
（５）ラットＬ６筋芽細胞の分化の阻害（Ｆｌｏｒｉｎｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１：１６５０９〜１６５１３（１９８６））；
（６）フィブロネクチン産生の阻害（Ｗｒａｎａら、Ｃｅｌｌ ７１：１００３〜１０１４（１９９２））；
（７）ルシフェラーゼレポーター遺伝子に融合されたプラスミノーゲンアクチベータインヒビターＩ（ＰＡＩ−１）プロモーターの誘導（Ａｂｅら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２１６：２７６〜２８４（１９９４））；
（８）サンドイッチ酵素連結免疫吸着アッセイ（Ｄａｎｉｅｌｐｏｕｒら、Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ ２：６１〜７１（１９８９））；ならびに
（９）Ｓｉｎｇｈら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１３（２４）：４３５５〜４３５９（２００３）に記載の細胞アッセイ。
【００３６】
（用途および投与の方法）
本発明の方法は、哺乳動物被験体に対してＴＧＦ−βアンタゴニストを投与して、ウイルス関連リンパ増殖性障害（ＬＰＤ）の発症のリスクを処置、予防または軽減して、低ＩＦＮ−γレベルに関連する増殖性傷害を処置する工程を包含する。特定の実施形態では、低ＩＦＮ−γレベルを有する個体、または低ＩＦＮ−γレベルに関連するＩＦＮ−γ遺伝子型を有する個体におけるウイルス関連障害を処置するための方法が提供される。
【００３７】
本発明はさらに、ウイルス関連のＬＰＤの存在もしくは発達についての１つ以上の危険因子の存在、または処置に対するその進行もしくは応答性を評価するため、そしてその危険因子を有する被験体に対してＴＧＦ−βアンタゴニストを投与するための方法を提供する。例えば、ＩＦＮ−γレベルまたはＩＦＮ−γ遺伝子型を評価または測定する工程、ならびに低ＩＦＮ−γレベルまたはＡ／ＴもしくはＡ／Ａ＋８７４遺伝子型を有する被験体を処置する工程を包含する方法が本明細書において提供される。
【００３８】
特定の実施形態では、ウイルス関連ＬＰＤは、ヘルペスウイルス、例えばＨＨＶ−８、サイトメガロウイルス、またはエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）による感染に関連する。他の実施形態では、ウイルス関連障害は、例えば、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型のようなＣ型レトロウイルスによる感染に関連する。他の実施形態では、ウイルス関連の障害は、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、ＨＩＶ、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２）による感染に関連する。
【００３９】
この開示された方法は、ウイルス関連ＬＰＤのリスクがあるか、それに感受性であるか、またはそれに罹患している哺乳動物被験体に対して、治療上有効な量のＴＧＦ−βアンタゴニストを投与する工程を包含する。本発明の方法によって処置される集団としては、限定はしないが、ウイルス関連ＬＰＤまたは低レベルのＩＦＮ−γに関連するＬＰＤに罹患しているかまたはその発生のリスクがある被験体、例えば、免疫不全またはウイルス感染を有する被験体が挙げられる。
【００４０】
本発明の方法に従って処置された被験体としては、限定はしないが、ヒト、ヒヒ、チンパンジーおよび他の霊長類、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）、ウサギ、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、およびブタが挙げられる。好ましくは、この被験体は、哺乳動物である。他の実施形態では、この被験体は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物である。
【００４１】
ウイルス関連のＬＰＤの発症または進行を評価するため、そしてそのインヒビターを評価するためには多くの方法が利用可能である。ＬＰＤは、リンパ球またはリンパ組織の異常な増殖に関与する疾患または状態、すなわち、例えば、「ウイルス関連のリンパ増殖性障害（ｖｉｒａｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」、「ＥＢＶ関連ＬＰＤ（ＥＢＶ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＬＰＤ）」または「移植後リンパ増殖性障害（ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」である。このような障害としては、限定はしないが、上記のような、任意の急性または慢性の疾患または障害が挙げられる。
【００４２】
ＬＰＤの発症または進行は、アデノパシー（リンパ節の腫脹または肥大）、脾腫、または拡張するリンパのクローンによる器官浸潤に起因する症状、例えば、異常な膨満（胃腸管）、または肺の異常（肺）によって評価され得る。ＰＴＬＤの症状としては、例えば、発熱、寝汗および体重減少が挙げられる。ＬＰＤの存在または進行はまた、例えば、胸部、腹部および骨盤のコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン；ガリウム−６７単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）スキャン、骨髄吸引および生検；ならびに肝機能および腎機能の評価、血清腫瘍マーカー、および血清乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）によって検出されてもよい。
【００４３】
ＥＢＶまたは他のウイルスの存在（潜伏感染または活性な感染）は、限定はしないが、ＥＢＶの潜伏膜タンパク質−１についてのようなウイルスＲＮＡまたは免疫組織化学のインサイチュハイブリダイゼーションを含む、当該分野で公知の技術によって検出されてもよい。さらに、インサイチュの逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＩＳ−ＲＴ−ＰＣＲ）は、例えば、ウイルスタンパク質のフォワードおよびリバースプライマー、例えば、ＥＢＶチミジンキナーゼプライマーを用いて、潜伏または活性なウイルス活性を検出するために用いられ得る（Ｐｏｒｃｕら、Ｂｌｏｏｄ １００：２３４１〜２３４８（２００２））。
【００４４】
ＬＰＤは、異常なリンパ球増殖によって特徴付けられる。リンパ（またはその他）の細胞または組織の異常な増殖、機能または構造を検出するための方法は、ＬＰＤの治療因子の有効性を診断するか、その進行をモニターするか、またはアッセイするために用いられてもよい。リンパ球増殖は、フローサイトメトリー、または総Ｔ細胞もしくはＢ細胞の数を決定するための他の手段、ＣＤ８＋細胞およびＴ細胞増殖の細胞ベースのアッセイを用いて測定され得る。リンパ球の状態および増殖はまた、抗原チャレンジに対する応答性の細胞ベースのアッセイ、例えば、混合リンパ球反応性アッセイによって、または例えば、Ｔ細胞上でのＣＤ２５、ＣＤ６９および／もしくはＣＤ７１のような活性化抗原の存在を測定することによって測定されてもよい。
【００４５】
本発明の方法は、異常なリンパ球増殖または蓄積を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上まで減少させ得る。ある実施形態では、本発明は、ウイルス関連のリンパ増殖性障害を処置または寛解して、被験体のリンパ増殖性障害の１つ以上の症状を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれ以上まで改善させる方法を提供する。処置のための他の指標としては、限定はしないが、以前に、そして下の節において考察されるものを含む、ＬＰＤまたはＰＴＬＤの１つ以上の危険因子の存在が挙げられる。障害を発症するリスクがあるかもしくはそれに感受性の被験体、またはＴＧＦ−βアンタゴニストでの処置に対して特に受容性であり得る被験体は、このような１つ以上の危険因子の有無を確認することによって同定され得る。
【００４６】
（サイトカイン遺伝子型）
ある被験体は、ＩＦＮ−γ遺伝子の＋８７４位置でＡ／ＡまたはＡ／Ｔ遺伝子型のような、ＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型についてホモ接合性であるかまたはヘテロ接合性である場合、ウイルス関連リンパ増殖性障害、ＬＰＤまたはＰＴＬＤを発症するリスクがあるか、または感受性である。種々のサイトカイン多形性の相対的なサイトカイン産生レベルを評価するための方法としては、刺激された末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）を用いるエキソビボのサイトカイン産生アッセイが挙げられる。従って、＋８７４におけるＩＦＮ−γ多形性のエキソビボＩＦＮ−γ産生の研究において、低プロデューサーＡ／Ａ遺伝子型は、ＩＦＮ−γレベルの約４０％、５０％、６０％、７０％または８０％の減少を示す。ＩＦＮ−γレベルは、Ｔ／Ｔ遺伝子型細胞に比較した、培地単独中において培養した細胞の上清における、ＩＦＮ−γを含まないＰＰＤ刺激された細胞中で培養された細胞の上清中で測定されてもよい。
【００４７】
（サイトカインレベル）
開示された方法は、被験体において、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、８、６、５または４ｐｇ／ｍＬ未満の循環しているＩＦＮ−γレベルで有用であり得る。さらに、この処置は、リンパ増殖性の障害に関連するか、またはそれによって生じるＴＧＦ−βレベルを増大する場合、被験体において、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｎｇ／ｍＬ以上の循環中のＴＧＦ−βレベルで有用であり得る。ＴＧＦ−βまたはＩＦＮ−γレベル（総レベルまたは活性レベル）は、例えば、血液、血清または尿のような体液において測定され得る。ある実施形態では、特許請求された方法は、ＴＧＦ−βアンタゴニストの投与であって、被験体中の循環しているＴＧＦ−βレベルの検出不能レベルへの低下を、または処置前の被験体のＴＧＦ−βレベルの１％、２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％または７０％未満への低下を可能にするための投与を包含する。同様に、特許請求された方法は、ＴＧＦ−βアンタゴニストの投与であって、循環しているＩＦＮ−γレベルの少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％またはそれ以上の増大を可能にするための投与を包含する。サイトカイン血清レベルは、例えば、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイのような、そして本明細書に記載のような酵素イムノアッセイ技術を用いて測定される。
【００４８】
当業者は、ＩＦＮ−γ遺伝子または他の遺伝子内の遺伝子多形性であって、その生成物がＩＦＮ−γレベルに影響するものは、ＩＦＮ−γ産生または他のサイトカインのレベルが影響され得るいくつかの機構のうちの１つであることを理解する。ＩＦＮ−γレベルに影響する他の因子としては、ＩＦＮ−γ遺伝子内の他の多形性、またはＩＦＮ−γ産生に影響する転写、転写後もしくは翻訳後の機構が挙げられる。
【００４９】
正常なヒトＩＦＮ−γ血清レベルは、３０ｐｇ／ｍｌ＋／−１０ｐｇ／ｍｌであるかまたはほぼそうであるが、ＩＦＮ−γレベルは、例えば、リンパ球レベルおよびＩＦＮ−γ遺伝子型で変化する。ＩＦＮ−γレベルは、外傷、感染、ガンおよび自己免疫のような病的な環境下で増大する。正常なヒト体液におけるＴＧＦ−β濃度は、血漿中でＴＧＦ−β１の１ｍＬあたり約５ｎｇ程度で、尿中では１ｍｇのクレアチニンあたり３００ｐｇのＴＧＦ−β１である。正常なヒト血漿では、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３のレベルは、０．２ｎｇ／ｍＬ未満である。
【００５０】
（免疫不全および移植）
免疫不全を有する被験体、または器官、組織もしくは細胞の移植片を有したかもしくは有している被験体は、例えば、ＬＰＤのリスクがある。ＰＴＬＤの頻度は、移植された器官または組織によって変化し、そして移植片の例としては、心臓、腎臓、肺、肝臓、角膜、骨髄、幹細胞、血管および島細胞の移植片が挙げられる。移植に関連する免疫抑制療法は、被験体をＬＰＤのリスクにおく。移植被験体におけるＰＴＬＤのようなＬＰＤの発症のさらなる危険因子としては、絶対的および相対的なＴ細胞数、ＣＤ８＋Ｔ細胞数、ＣＤ８＋細胞のようなＴ細胞の経時的な変化、移植された器官のタイプ、ＥＢＶ血清陰性状態、ＥＢＶウイルス負荷、被験体の年齢（すなわち、小児か成人か）、移植片拒絶を予防するために投与された免疫抑制療法のタイプおよび期間、免疫抑制の程度、ならびに主要組織適合性（ＭＨＣ）不適合の程度などが挙げられる。５歳未満、１０歳未満、１５歳未満、または１８歳未満の移植レシピエントは、ＰＴＬＤのようなＬＰＤ発症のリスクが増大する。骨髄または肺移植のレシピエントは、ＰＴＬＤの２０％の頻度を有し、そして腎移植片レシピエントは、１〜２％のＰＴＬＤ頻度を有する。器官、組織または細胞移植片の時点またはその後に生じる初代ＥＢＶ感染は、被験体をＬＰＤのリスクにさせる。詳細には、移植ドナーがＥＢＶ＋であるが、レシピエントがＥＢＶ−である場合、初代ウイルス感染は、ＰＴＬＤのリスクの増大を伴っている。免疫不全の被験体におけるＥＢＶまたは他のウイルス感染は、被験体をＬＰＤのリスクにさせる。リスクがある被験体は、例えば、血液および組織中のウイルス負荷を評価することによって（例えば、移植後のウイルス負荷の増大を調べる）、または白血球、Ｂ細胞または総血清ＩｇＭの数の増大を試験することによって、同定され得る。ＥＢＶ（または他のウイルス）は、必要に応じて、サザンブロットハイブリダイゼーションによって、または定量的もしくは半定量的ＰＣＲを含むポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、または被験体の血液、血清もしくは組織における陽性のウイルス血清学（抗ウイルスカプシド抗原ＩｇＧ（ＥＢＶ血清学））によって検出され得る。異なるドナーに感染するＥＢＶ株およびドナーのアトピーの状態は、ＬＰＤ発症の他の潜在的な危険因子である。
【００５１】
本発明の方法は、免疫不全を有する被験体において有用であり得る。例えば、本発明の方法は、免疫機能が、正常の２５％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、９０％またはそれ以上まで低くなる免疫不全を有する被験体において１つ以上のＬＰＤを処置または予防するために用いられ得る。この方法は、例えば、５００、４００、３００、２００、１００，７５、５０、２５または１０細胞／μＬ未満というＴ細胞カウント、ＣＤ８＋細胞カウント、ＣＤ３＋／ＣＤ８＋細胞カウント、またはＥＢＶ特異的なＴ細胞カウントを有する被験体において用いられ得る。
【００５２】
（免疫抑制因子）
免疫不全は、免疫抑制因子の投与から生じ得る。「免疫抑制因子（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ａｇｅｎｔ）」、「免疫抑制薬、免疫抑制剤（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ）」および「免疫抑制薬、免疫抑制剤（ｉｍｍｕｎｏｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ）」という用語は、本明細書において用いる場合、免疫抑制を誘導する化合物または組成物をいい、すなわち、これは、免疫学的応答の発生を予防または妨害する。免疫抑制剤の例としては、限定はしないが、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（商標）、Ｎｅｏｒａｌ（商標）（シクロスポリン）；Ｐｒｏｇｒａｆ（商標）、Ｐｒｏｔｏｐｉｃ（商標）（タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ））；Ｒａｐａｍｕｎｅ（商標）（シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ））；ＳＺＤ−ＲＡＤ、ＦＴＹ７２０；Ｃｅｒｔｉｃａｎ（商標）（エベロニムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ラパマイシン誘導体）；ｃａｍｐａｔｈ−１Ｈ（抗ＣＤ５２抗体）；Ｒｉｔｕｘａｎ（商標）（リツキシマブ、抗ＣＤ２０抗体）；ＯＫＴ４；ＬＥＡ２９Ｙ（ＢＭＳ−２２４８１８、ＣＴＬＡ４１ｇ）；インドリル−ＡＳＣ（タクロリムスおよびアスコマイシンの３２インドールエーテル誘導体）；Ｉｍｕｒａｎ（商標）（アザチオプリン）；Ａｔｇａｍ（商標）（抗胸腺細胞／グロブリン）；Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ（商標）（ＯＫＴ３；ムロマナブ−ＣＤ３）；Ｃｅｌｌｃｅｐｔ（商標）（ミコフェノレートモフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ ｍｏｆｅｔｉｌ））；Ｔｈｙｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（登録商標）；Ｚｅｎａｐａｘ（商標）（ダクリズマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ））；Ｃｙｔｏｘａｎ（商標）（シクロホスファミド）；プレドニゾン、プレドニゾロンおよび他のコルチコステロイドマロノニトリルアミド（ＭＮＡ（レフルノミド、ＦＫ７７８、ＦＫ７７９））；および１５−デオキシスペルグアリン（ＤＳＧ）が挙げられる。
【００５３】
ある因子の免疫抑制活性を評価するための方法は当該分野で公知である。薬理学的な介入の存在下または非存在下におけるインビボにおける移植された器官の生存時間の長さは、免疫応答の抑制のための定量的測定値として機能する。インビトロアッセイはまた、例えば、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ（例えば、Ｆａｔｈｍａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１８：１２３２〜１２３８（１９７７））；ＣＤ３アッセイ（抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）を介する免疫細胞の比活性）（例えば、Ｋｈａｎｎａら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６７：８８２〜８８９（１９９９）；Ｋｈａｎｎａら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６７：Ｓ５８（１９９９）を参照のこと）；およびＩＬ−２Ｒアッセイ（外因的に添加されたサイトカインＩＬ−２を用いた免疫細胞の特異的な活性化）（例えば、Ｆａｒｒａｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２６：１１２０〜１１２５（１９８１）を参照のこと）を用いてもよい。
【００５４】
（治療的な方法）
本発明の方法に従うＴＧＦ−βアンタゴニストの投与は、任意の特定の送達系に限定されず、そして限定はしないが、非経口（皮下、静脈内、髄内、動脈内、筋肉内、または腹腔内注射）直腸、局所、経皮または経口（例えば、カプセル、懸濁物または錠剤内で）を挙げることができる。個体に対する投与は、単回投与でも、または反復投与で行われてもよく、そして任意の種々の生理学的な受容可能な塩型で、および／または受容可能な製剤的なキャリアとともに、および／または薬学的組成物（前に記載）の一部として添加物として行われてもよい。生理学的に受容可能な塩型および標準的な薬学的処方の技術および賦形剤は、当業者には周知である（例えば、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）２００３，第５７版、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，２００２；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ編、Ｇｅｎｎａｄｏら、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００を参照のこと）。
【００５５】
個体に対するアンタゴニストの投与はまた、遺伝子治療の方法によって達成されてもよく、ここでこのアンタゴニストをコードする核酸配列は、インビボで患者に、またはインビトロで細胞に投与されて次いで患者に導入されてもよく、そしてこのアンタゴニスト（例えば、アンチセンスＲＮＡ、可溶性ＴＧＦ−βレセプター）は、その核酸配列によってコードされる産物の発現によって生成される。ＴＧＦ−βアンタゴニストを送達するための遺伝子治療の方法は、当業者に公知である（例えば、Ｆａｋｈｒａｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，Ｕ．Ｓ．Ａ．，９３：２９０９〜２９１４（１９９６）を参照のこと）。
【００５６】
この開示された方法では、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、単独で、同時に、または重複する間隔もしくは重複しない間隔で連続して、１つ以上のさらなる生物学的に活性な因子、例えば抗ウイルス剤とともに投与されてもよい。抗ウイルス剤の例としては、限定はしないが、アシクロビル、ガンシクロビルおよびフォスカーネットなどが挙げられる。さらなる生物学的に活性な因子としては、免疫抑制剤、抗Ｂ細胞モノクローナル抗体、およびＥＢＶ特異的な自己のＣＴＬなどを挙げることができる。ＴＧＦ−βアンタゴニストは、例えば、ＰＴＬＤを有する被験体を処置するために、免疫抑制療法における減少と同時に投与されてもよい。連続的な投与では、ＴＧＦ−βアンタゴニストおよびさらなる因子（単数または複数）は、任意の順序で投与されてもよい。ある実施形態では、重複する間隔の長さは、２、４、６、１２、２４、または４８週より長い。
【００５７】
アンタゴニストは、単独の活性化合物として、または別の化合物もしくは組成物とともに投与されてもよい。他に示さない限り、このアンタゴニストは、疾患の症状および進行の重篤度に依存して、約１０μｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。最も一般には、抗体は、外来患者の設定で、緩徐な静脈内（ＩＶ）注入によって約０．１〜１５ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、１ヶ月に２回、または月１回の投与によって投与される。アンタゴニストの適切で治療的に有効な用量は、治療を行う医師によって選択され、そしておよそ１０μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、そして１０ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇにおよぶ。さらに、実施例に、またはＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）２００３，第５７版、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，２００２に示される特定の用量を用いてもよい。
【００５８】
以下の実施例は、本発明の例示的な実施形態を提供する。当業者は、本発明の趣旨または範囲を変更することなく行われ得る、多数の改変および変異を認識する。このような改変および変異は、本発明の範囲内に包含される。この実施例は、決して本発明を限定しない。
【実施例】
【００５９】
（実施例１）
ＩＦＮ−γ遺伝子型とＰＴＬＤ臨床観察との関連：１２ＰＴＬＤ患者のサイトカイン遺伝子型をさらに、以前に報告された９例のＰＴＬＤ患者におけるサイトカイン遺伝子型の予備的な評価に対して分析し（ＶａｎＢｕｓｋｉｒｋら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．３３：１８３４（２００１））。１２例のＰＴＬＤ患者のサイトカイン遺伝子型決定によって、ＩＦＮ−γ遺伝子のＡ／Ａ遺伝子型を有する患者の割合が、ＰＴＬＤ患者では、１３５例の非ＰＴＬＤ移植患者よりも、同じ移植中心で高いことが示される（５８％対２７％、ｐ＝０．０２）。この研究では、ＴＧＦ−β、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＴＮＦ−αの遺伝子型分布の観察では、ＰＴＬＤと非ＰＴＬＤ患者との間の統計学的に有意な相違は示されない。この研究によってＩＦＮ−γＡ／Ａ遺伝子型はＰＴＬＤにおける危険因子として特定される。
【００６０】
被験体の遺伝子型およびＬＰＤと関連する他の要因の分析：被験体またはドナーの遺伝子型を評価するために、ゲノムＤＮＡを、Ｑｉａｇｅｎ（Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）ＤＮＡ抽出キットを用いてＰＢＬから単離した。ＨＬＡ分析は、Ｐｅｌ−Ｆｒｅｅｚ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＡＢ／ＤＲ ＰＣＲ−ＳＳＰユニトレイ（Ｂｒｏｗｎ Ｄｅｅｒ，ＷＩ）を用いて行った。ＴＧＦ−β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＩＦＮ−γのサイトカイン遺伝子型決定は、Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ（Ｃａｎｏｇａ Ｐａｒｋ，ＣＡ）からＣｙｔｇｅｎサイトカイン遺伝子型決定トレイを用いて達成した。ＰＣＲ産物は、２％アガロースゲルで泳動して、臭化エチジウムで可視化した。バンド形成パターンを、製造業者のテンプレートを用いて解釈して、各々のレーンにおいて内部コントロールと比較した。
【００６１】
ＳＣＩＤマウスへの注射またはＣＴＬ再刺激培養物中での使用の前に、ＥＬＩＳＡ（Ｍｅｒｉｄｉａｎ，Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）およびＥＢＶ反応性トランスビボＤＴＨアッセイによって、被験体およびＰＢＬドナーをＥＢＶ反応性について試験した。
【００６２】
Ｔ細胞およびＴ細胞サブセットを評価するために、標準の３色フローサイトメトリーによって新鮮な血液サンプル上でフローサイトメトリーを用いる。ＥＢＶ反応性ＣＤ８＋Ｔ細胞を、潜在遺伝子ＥＢＮＡ−３Ａ、または前初期溶菌遺伝子ＢＺＬＦ−１由来の免疫優性のＥＢＶペプチドと複合したＨＬＡ−Ｂ８テトラマーを用いてフローサイトメトリーによって検出する。凍結された患者末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を生存可能に解凍し、３７℃で一晩インキュベートし、次いでＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離によって精製して細片を除く。細胞を、フィコエリトリン（ＰＥ）結合体化マウス抗ＣＤ８およびフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）結合体化マウス抗ＣＤ３抗体（両方ともＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡより）およびアロフィコシアニン（ＡＰＣ）結合体化ＨＬＡ適合テトラマー試薬または非反応性コントロールで染色する。各々のフロー分析について約１０５個のリンパ球ゲート（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ｇａｔｅｄ）（前方散乱および側方散乱に基づく）事象を収集する。
【００６３】
（実施例２）
ｈｕ−ＰＢＬ ＳＣＩＤマウスにおけるＩＦＮ−γ遺伝子型とＬＰＤ発症との関係：健康なＥＢＶ血清陽性ドナー由来のヒト（ｈｕ）末梢血白血球（ＰＢＬ）がＳＣＩＤマウスに注射されているｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスは、自然のＥＢＶ由来リンパ増殖性疾患（ＬＰＤ）の再現性モデルである。ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスで生じるＥＢＶ陽性Ｂ細胞腫瘍は、表現型的にそして遺伝子型的にＰＴＬＤと極めて類似している（Ｐｉｃｃｈｉｏら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：２４６８〜２４７７（１９９２）；Ｂａｉｏｃｃｈｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：５５７７〜５５８１（１９９４））。このモデルシステムでは、ＬＰＤの生成および発症は、ドナー（異質性が詳細に研究されていない）の間で変化する（Ｐｉｃｃｈｉｏら、前出；Ｍｏｓｉｅｒら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ８：７３５〜７４０（１９９２）；Ｃｏｐｐｏｌａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：２５１４〜２５２２（１９９８））。
【００６４】
マウスＮＫ細胞はまた、ＬＰＤ発症に影響することが公知であり（Ｂａｉｏｃｃｈｉら、前出；Ｌａｃｅｒｄａら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６１：４９２〜４９７（１９９６））、マウスマクロファージも同様であり（Ｙｏｓｈｉｎｏら、Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２６：１２１１〜１２１６（２０００））、そしてマウスＮＫ細胞を活性化する異なる能力は、ＬＰＤ発症におけるいくつかの異質性を担い得ることが可能である。ＮＫ細胞は、このモデルをさらに厳密にするために、この研究では意図的に枯渇も無効にもされなかった。従って、サイトカイン多形性およびＬＰＤの任意の観察された関係によって強力な関係が示される。
【００６５】
ＬＰＤのｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスモデルは以下のとおりである：雌性Ｂａｌｂ／ｃまたはＣＢ．１７ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄ（ＳＣＩＤ）マウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ ＲｉｖｅｒまたはＴａｃｏｎｉｃから購入した。マウスは、ＮＩＨおよび施設の承認したガイドラインに従って飼育および処理した。マウスには５０×１０６ヒトＰＢＬを腹腔内に生理食塩水中で与えた。ＰＢＬは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｒｅｄ Ｃｒｏｓｓのロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｃｋｓ）から、または治験審査委員会の承認したプロトコールを用いてボランティアから入手した。ＰＢＬは、標準的な方法に従ってｆｉｃｏｌｌ−ｈｙｐａｑｕｅによって単離した。各々のドナーからのＰＢＬを３〜５匹の別のマウスに注射した。ヒトＰＢＬ移植を、前に記載されたとおり、マウス血清に含まれるヒトＩｇＧの存在についてＥＬＩＳＡで週に２回モニターした（Ｂａｉｏｃｃｈｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：５５７７〜５５８１（１９９４））。この研究に含まれるマウスは、７５０μｇ／ｍｌを超えるヒトＩｇＧを有し、これは、腫瘍が検出された場合１ｍｇ／ｍｌより大きくまで増大した。潜伏時間（潜時）は、注射後のマウスが瀕死になるかまたは死ぬまでの時間として規定された（Ｐｉｃｃｈｉｏら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．５２：２４６８〜２４７７（１９９２））。全ての動物を、腫瘍の存在について死亡時に検査して、これらの腫瘍は、フローサイトメトリーを用いてヒトＢ細胞由来であることを確認した。ヒト腫瘍を確認したマウスのみを、ＬＰＤを有するとみなした。
【００６６】
ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウス研究では、各々の４９個のＥＢＶ反応性ドナー由来のＰＢＬを１ドナーあたり３〜５匹のＳＣＩＤマウスに注射した。レシピエントのマウスを、ヒト細胞による移植（血清中のヒトＩｇＧによって証明されるとおり）およびＬＰＤの発症（少数のＣＤ４５＋ＣＤ３＋細胞が浸潤したヒトＣＤ４５＋ＣＤ１９／ＣＤ２０＋腫瘍）について最大６ヶ月までモニターした。表１に示されるとおり、ドナーのうち４７％（４９のうち２３）のＰＢＬが２０週後にＬＰＤを生じなかったが、２４％（４９のうち１２）がＬＰＤ腫瘍を急速に発症し（ＬＰＤへの中央時間、８週）浸透が高かった（中央値１００％、範囲８０〜１００％）。ドナーの残り（２９％、４９のうち１４）由来のＰＢＬはＬＰＤを後に生じ（中央値１２週）、そしてそれより少ないマウスでは（浸透度中央値５５％、範囲３３〜１００％）。正確なウイルコクソンの順位和検定によって決定した場合、急速性群と中間／遅発性群との間の潜時および浸透の相違は統計学的に有意である（ｐ＜０．０００１）。
【００６７】
【表１】
自然のＥＢＶ−ＬＰＤのＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスモデルでは、４９例のドナーでのサイトカイン遺伝子型データによって、ＬＰＤ発症におけるドナー由来の生存度はＩＦＮ−γ遺伝子型と相関することが実証される。この研究におけるＥＢＶ−血清陽性ドナーの５３％がｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスで６ヶ月以内にＬＰＤを生じた。ＬＰＤを生じるドナーのうち、１２例がＬＰＤを急速に生じ（ＬＰＤまでの中央時間、８週）、高い浸透度であった（中央値１００％）。他のＬＰＤプロデューサー表現型は、より遅くＬＰＤを発症し（中央時間１２週）、浸透度は低かった（中央値５５％）。
【００６８】
サイトカイン遺伝子型がＬＰＤ発症と相関するか否かを決定するために、ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスにおいてＥＢＶ−ＬＰＤを生じるために用いたＰＢＬでのＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＴＧＦ−βのサイトカイン遺伝子型の分布を研究した。急速な高い浸透度のＬＰＤプロデューサーを、中間／遅発性ＬＰＤプロデューサーと、そしてＰＢＬがＬＰＤを生じないドナーと比較した（表１に決定されるように）。表２は、ＩＦＮ−γについての多形性の分布の分析が急速性ＬＰＤプロデューサーと他の２つの群との間で統計的に有意な相違を示したことを実証する。１２例の急速性ＬＰＤプロデューサーのうち、Ｔ／Ｔ遺伝子型のものはなく、５例がＴ／Ａ遺伝子型（４１．７％）で、７例がＡ／Ａ遺伝子型であった（５８．３％）。対照的に、ＰＢＬが中間／遅発性ＬＰＤを生じるかまたは全く生じないドナーは、遺伝子型のさらに異種の分布を示した（１４ Ｔ／Ｔ、３７．８％；１５ Ｔ／Ａ、４３．３％そして８Ａ／Ａ、１８．９％）。
【００６９】
【表２】
Ａ３〜５ ＳＣＩＤマウスを、１匹のＰＢＬドナーあたりに注射し、そして血清中の７５０μｇ／ｍｌを超えるヒトＩｇＧによって証明されるとおり全てのマウスは移植された。
＊Ａ／Ａ遺伝子型は急速性ＬＰＤ群においては有意に、より広がっている、ｐ＝０．０１４４。
＊＊Ａ対立遺伝子の存在（Ａ／Ａ＋Ｔ／Ａ）は急速性ＬＰＤ群ではより有意に広がっている、ｐ＝０．０２５７。
【００７０】
これらのデータの統計的な分析によって、Ａ／Ａ遺伝子型は中間／遅発性ＬＰＤプロデューサーおよびＬＰＤなしプロデューサーに比較して急速性ＬＰＤプロデューサーでは有意に高い頻度であったことが示される（ｐ＝０．０１４４）。急速性ＬＰＤプロデューサーの中のＴ／Ｔ遺伝子型の非存在によって、Ｔ対立遺伝子の存在が、ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスにおけるＬＰＤ発症がないことと相関していることが示唆される。急速性ＬＰＤプロデユーサーのうち全て（１２のうち１２）に少なくとも１つのＡ対立遺伝子が存在し、これは中間／遅発性ＬＰＤプロデューサー（１４のうち８）およびＬＰＤなしのプロデューサーと対照的であって、ここでは２３のドナーのうち１５に少なくとも１つのＡ対立遺伝子が存在した。これは３群の間で統計学的に有意な相違である（ｐ＝０．２５７）。ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−１０のサイトカイン多形性分布を分析した場合、ドナーの群の間に統計学的な相違は観察されなかった。ＴＧＦ−β遺伝子型について報告された分布と同様に（Ｐｅｒｒｙら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６：１９３〜１９７（１９９８））、ドナーのほとんどが高いＴＧＦ−β産生の遺伝子型を示した。実際、４９例のＰＢＬドナーのうち４８例、そして急速性ＬＰＤを生じるドナーの全てが、高いＴＧＦ−β産生に関連した遺伝子型を有した。
【００７１】
重要な事に、これらのデータによって、＋８７４塩基でのＩＦＮ−γについてのＡ（アデノシン）対立遺伝子がＬＰＤ産生と強力に関係していることが示される。急速な高浸透のＬＰＤドナーのうち、５８％がＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ）にホモ接合性であったが、４２％がヘテロ接合性（Ｔ／Ａ）であった。急速な高頻度ＬＰＤプロデューサーのうちＴ対立遺伝子にホモ接合性であったものはなかった。対照的に、全ての遺伝子型が、遅発性ＬＰＤを生じるかまたは決して生じないドナーの群で示された。急速ＬＰＤプロデューサーのうちＡ／Ａ遺伝子型の頻度は、中間／遅発性ＬＰＤプロデューサーおよびＬＰＤなしドナーに比較して有意に異なった（ｐ＝０．０１４４）。また有意である（ｐ＝０．０２５７）のは、他の２つのＬＰＤ群に比較した、急速性ＬＰＤプロデューサーにおけるＡ対立遺伝子の存在である。これらのデータは、ＰＴＬＤ患者の臨床観察を映し出しており、このことはｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスにおけるＩＦＮ−γ遺伝子型とＬＰＤ産生との関係が危険因子または臨床的な有意差の指標であることを示唆している。
【００７２】
（実施例３）
ＩＦＮ−γおよびＴＧＦ−β遺伝子型のサイトカイン産生：＋８７４塩基でのＡ／Ａ、Ｔ／ＡおよびＴ／Ｔ ＩＦＮ−γ遺伝子型は、それぞれ低、中および高というサイトカインインビトロ産生に相当することが報告されている（Ｐｒａｖｉｃａら、Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６１：８６３〜８６６（２０００）；Ｈｏｆｆｍａｎｎら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ７２：１４４４〜１４５０（２００１）；Ｌｏｐｅｚ−Ｍａｄｅｒｕｅｌｏら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６７：９７０〜９７５（２００３））。本発明者らは、同じ抗原性刺激が提供された場合、すなわち、同じＥＢＶ−ＬＣＬを用いるＨＬＡ−Ａ、−Ｂマッチしたドナーの試験において、サイトカイン産生との遺伝子型のクリアカットな関係を観察した。これらの基準を満たす４つのドナーのうち、Ａ／Ａ遺伝子型ドナーは、最小のＩＦＮ−γを生じ（４，９２８＋／−１，７９５ｐｇ／ｍｌ）、２つのＡ／Ｔ遺伝子型ドナーは、中間量のサイトカインを生じ（２５，９４５＋／−９５８ｐｇ／ｍｌ）、そして１つのＴ／Ｔ遺伝子型ドナーは、最高のＩＦＮ−γを生じた（４１，３１２＋／−１，８１１ｐｇ／ｍｌ）。これらの培養物の上清に対する１０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−βの投与で、ＩＦＮ−γ産生はそれぞれほぼ６８％、３５％および６６％まで減少した。
【００７３】
＋８７４多形性遺伝子型によるＩＦＮ−γ産生の以前に公開された研究では、個体の静脈の全血（２０ｍｌ）からＰＢＭＣを得て、エキソビボサイトカイン産生をアッセイした（Ｌｏｐｅｚ−Ｍａｄｅｒｕｅｌｏら、前出）。細胞を２．０×１０６細胞／ｍｌの濃度で培養して、精製されたタンパク質誘導性（ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）（ＰＰＤ）抗原（１０μｇ／ｍｌ；Ｓｔａｔｅｎｓ Ｓｅｒｕｍｉｎｓｔｉｔｕｔ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を用いて５％ＣＯ２とともに３７℃で９６時間、刺激した。培養上清を回収して、ＩＦＮ−γのＥＬＩＳＡキットでアッセイした（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍｅｒｉｌｌｏ，ＣＡ）。このアッセイは４ｐｇ／ｍｌの検出限界を示した。分析と分析の間の、そしてアッセイ内の変異係数は１０％未満であった。Ａ／Ａ＋８７４遺伝子型は、約６００ｐｇ／ｍＬのＩＦＮ−γレベルを生じたが、ＴＡ／ＴＴ遺伝子型は約１２００ｐｇ／ｍＬというＩＦＮ−γレベルを生じ、このＩＦＮ−γレベルは、ＰＰＤ刺激した細胞の上清中の濃度から培地単独で培養した細胞の上清中の濃度を引いたものとして示した（Ｌｏｐｅｚ−Ｍａｄｅｒｕｅｌｏら、前出）。
【００７４】
従って、低レベルのＩＦＮ−γ産生は、＋８７４多形性でのＡ（アデノシン）に関連しており、そしてウイルス関連のＬＰＤまたはＰＴＬＤのような増殖性障害と関連する独立した危険因子として作用し得る。低ＩＦＮ−γ産生のさらなる原因は、予想されており、そして特許請求された方法によって包含される。
【００７５】
同様に、高いＴＧＦ−β産生を有する遺伝子型が同定されて評価されてもよい。上記で注記したとおり、この研究におけるほとんどのＰＢＬドナーが高い産生に関連するＴＧＦ−β遺伝子型を示し、そして急速なＬＰＤを産生するドナーは全てが、高いＴＧＦ−β産生に関連する遺伝子型を有した（Ｐｅｒｒｅｙら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６：１９３〜１９７（１９９８）を参照のこと）。
【００７６】
（実施例４）
ＣＴＬ活性のＴＧＦ−β阻害は、ＩＦＮ−γ遺伝子型に関連している：ＩＦＮ−γ遺伝子型とＣＴＬ機能との間の関係をさらに検討するために、本発明者らは次に、ＴＧＦ−βがインビトロにおいてＣＴＬ活性の再刺激を阻害し得るか否かを試験した。ＰＢＬをＴＧＦ−β１の存在下または非存在下において、照射されたＨＬＡ適合ＬＣＬ刺激因子とともに、５日間培養した。ＣＴＬ活性を標準的なＣＴＬアッセイを用いて評価した。
【００７７】
ＥＢＶ抗原に対するＣＴＬ活性を検出するには、５〜１２日の再刺激培養を要する（Ｖｏｏｉｊｓら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２：５９１〜５９７（１９９５））。ＰＢＬを、１０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−βの存在下または非存在下においてＨＬＡ−Ａ、−ＢマッチしたＬＣＬとともに５日間培養した。生きている細胞を３回洗浄して、外因性のＴＧＦ−βを除去し、そしてＣＴＬ活性を標準的な溶解アッセイを用いて、そして本明細書に記載のとおり評価した。
【００７８】
細胞溶解アッセイ：標準的な非放射性細胞傷害性アッセイは、５〜７日の再刺激培養物由来のＰＢＬ、およびＨＬＡ適合または不適合のＬＣＬ株を種々のエフェクター対標的比で用いて設定し、標的細胞は５×１０４〜１×１０５細胞／ｍｌにプレートした。全てのサンプルは３連でプレートした。アラマーブルー（ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅ）（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ，Ｃａｒｍｉｌｌｏ，ＣＡ）を１：１０の希釈で用いた。細胞を２４時間培養して、Ｃｙｔｏｆｌｏｕｒ ＩＩ蛍光マルチウェルプレートリーダー（Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）において、５３０ｎｍの励起波長および５９０ｎｍの発光波長で読み取った。溶解パーセントは以下のように決定した：｛標的単独−［（Ｅ＋Ｔ）−（Ｅ単独）］／標的単独｝。溶解単位（ｌｙｔｉｃ ｕｎｉｔ）（ＬＵ）は、選択された溶解値（この場合３０％）を得るのに必要なリンパ球の数として任意に規定する。ＬＵを規定するために、全ての曲線は、この溶解値を通過しなければならず、そしてこれはこの曲線の直線部分でなければならない。１００万個の細胞あたりのＬＵの数は、以下の式を用いて算出する：１００万個の細胞あたりのＬＵ＝１０６／［（＃エフェクター／溶解パーセント）×（３０）］。
【００７９】
データは、ＴＧＦ−βの非存在下においてＬＣＬとともに培養したＰＢＬのコントロール溶解のパーセントとして示す。各々のドナーについては、標的の比に対して複数のエフェクターを三連で試験して、曲線の直線部分からＬＵを決定した。阻害パーセントは、ＴＧＦ−β処理した培養物に対するコントロールからＬＵを用いて算出した。示された結果は、各々のドナーについての代表的な実験からの三連での平均および標準偏差である。ｔ検定によって分析した場合、ＴＧＦ−βの存在下で再刺激されたＡ／ＡおよびＴ／Ａ ＰＢＬにおけるＣＴＬ活性は、ＴＧＦ−βとの培養後のＴ／Ｔ ＰＢＬにおける、コントロールのＣＴＬ活性またはＣＴＬ活性のいずれかから有意に異なる（ｐ＝０．０１５）。Ｔ／Ｔ遺伝子型は、ある場合には、マウス−ヒトキメラモデルにおける「ＰＴＬＤ」表現型を与え得、これはこのモデルにおいてＬＰＤの急速な発症をもたらす。さらに、ＴＧＦ−βアンタゴニストは、急速および／または高浸透ＬＰＤを生じるＴ／ＴドナーＰＢＬを用いてｈｕ ＰＢＬ ＳＣＩＤマウスモデルにおける生存を増大するのに有効である。
【００８０】
図１Ａによって、ＴＧＦ−βが再刺激培養物に添加された場合、Ａ／ＡまたはＡ／ＴのＩＦＮ−γ遺伝子型を有する個体由来のＰＢＬでは、ＣＴＬ応答が障害されていたことが示される。これらのドナーについてのＴＧＦ−β処理した培養物は、コントロールの培養物に比較して細胞溶解が２５〜７０％阻害された。対照的に、ＴＧＦ−βは、このアッセイではＴ／Ｔ遺伝子型ＰＢＬのＣＴＬ再刺激に対して効果を有することが検出されなかった。データは、溶解単位（ＬＵ）を用いて決定された、コントロール溶解の平均パーセントとして示される。Ａ／Ａ＋Ｔ／Ａ遺伝子型培養物と、Ｔ／Ｔ遺伝子型培養物との間の相違は有意であった（ｐ＝０．０１５）。
【００８１】
この研究では、ＣＴＬをＩＦＮ−γ遺伝子型（示さず）にかかわらずインビトロで効率的に再刺激し、これによって、ＣＴＬ再刺激におけるＣＴＬ前駆体の欠失または一般的な欠失が、ＬＰＤ発症を有するＡ／Ａ遺伝子型の関係を説明できないということが示される。これらのデータによって、ＴＧＦ−βが存在する場合、ＣＴＬ再刺激は、このモデルで急速および／または高浸透ＬＰＤを生じるＰＢＬと関連した遺伝子型であるＡ／ＡまたはＡ／Ｔ遺伝子型ＰＢＬでは有意に減少したということが示される。
【００８２】
（実施例５）
増殖阻害アッセイにおけるＴＧＦ−βアンタゴニストの活性：２週間のＬＣＬ増殖阻害アッセイを用いるＣＴＬ再刺激の阻害に対するＴＧＦ−βの効果は、Ｗｉｌｓｏｎら（Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２６：１０１〜１１０（２００１））に記載されるのと同様に、次にアッセイした。増殖阻害アッセイは、あるセット数の再刺激したＣＴＬが滴定した数のＬＣＬを、通常のＣＴＬアッセイよりもストリンジェントな条件下で溶解する能力を評価する。ＣＴＬによって殺傷されないＬＣＬは、増殖し、そして代謝活性において検出可能な相違が、２週間後に示される。
【００８３】
図１Ｂは、適合したＬＣＬ増殖をＣＴＬが妨げる能力は、ＴＧＦ−βの存在下においてＣＴＬ再刺激によって阻害されることを示す。ＣＴＬは、１０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−βの存在下または非存在下において再刺激した。５日の終わりの時点で、ＣＴＬ活性は、図１Ａのように標準的なＣＴＬアッセイによって評価した。さらに、再刺激された細胞の一部（１０４／ウェル）を、滴定した数のＨＬＡ−Ａ−Ａ、−Ｂの適合した、または不適合のＬＣＬとともに２週間培養した。データは、アラマーブルーによって決定される、ＬＣＬのみを含むウェル中での増殖に比較した、ＣＴＬおよびＬＣＬの両方を含むウェル中での、ＬＣＬ増殖の平均パーセント±ＳＤとして示す。データは、８：１のエフェクター対標的比で各々の遺伝子型の３つのドナーについて合わせた。黒塗りのバー：ＴＧＦ−βの非存在下で再刺激されたコントロールＣＴＬ。白抜きのバー：ＴＧＦ−βの存在下で再刺激されたＣＴＬ。
【００８４】
これらのデータによって、ＣＴＬは、適合したＬＣＬの増殖は長期間阻害したが、不適合のＬＣＬは阻害しなかったこと、そしてＴＧＦ−βの存在下で再刺激されたＡ／ＡまたはＡ／Ｔ遺伝子型ＣＴＬ（ｎ＝３ドナー）は、それらの適合したＬＣＬ標的の増殖を阻害しなかったことが示される。このアッセイでは、ＴＧＦ−βの存在下で再刺激されたＴ／Ｔ遺伝子型ＣＴＬ（ｎ＝３ドナー）は、コントロールのＣＴＬと同様にＬＣＬ増殖を阻害した。Ｔ／Ｔ遺伝子型は疾患状態と一般的に関連が低いので、このモデルでの急速および／または高い浸透ＬＰＤを示すＴ／Ｔドナーは、最近同定された。予備的な研究によって、急速なＬＰＤを生じるＴ／Ｔ細胞は、このアッセイにおいてＴＧＦ−βに感受性であることが示される。従って、上記のアッセイは、ＣＴＬ再刺激のＴＧＦ−β阻害を検出した。
【００８５】
（実施例６）
ＴＧＦ−βアンタゴニストでの処置は、ｈｕ ＰＢＬ ＳＣＩＤマウスの生存を長引かせる：抗ＴＧＦ−βでのインビボ処置は、ｈｕ ＰＢＬ ＳＣＩＤマウスの生存を改善する。一般的な集団のほとんどと同様、急速性ＬＰＤドナーの全てが、高いＴＧＦ−β産生に関連する遺伝子型を示した。ＴＧＦ−βがＣＴＬ再刺激を阻害できることを示しているインビトロのデータに基づいて、ｈｕ ＰＢＬ ＳＣＩＤマウスの生存に対する抗ＴＧＦ−βでの処置の効果を検討した。これらのデータは、ｈｕ ＰＢＬ ＳＣＩＤマウスにおけるＴＧＦ−βの減少が生存を延長することを示す。
【００８６】
図２に実証されるとおり、抗ＴＧＦ−β抗体を用いる生存トライアルでは、抗ＴＧＦ−β処置したマウスにおいて８０日を超える１００％生存が得られた。対照的に、全てのコントロールの動物が７０日以内に死んだ。これらのデータによって、ＬＰＤ発症におけるＴＧＦ−βの重要な役割が示される。
【００８７】
この研究では、ＳＣＩＤマウスに、実施例２に記載されるように５千万個のＰＢＬを注射した。動物にはＰＢＳ（ｎ＝３）、アイソタイプ１００μｇコントロール抗体（ｎ＝５）または１００μｇの抗ＴＧＦ−β（ｎ＝５）のいずれかを、実験期間中１日おきに与えた。動物は、それらの血清中では７５０μｇ／ｍｌを超えるヒトＩｇＧの存在によって移植されていることが確認され、そしてＬＰＤ発症についてモニターが行われた。生存時間は、各々の群について決定した。動物が死ぬかまたは瀕死になった時、フローサイトメトリーを行ってＬＰＤの発症を確認した。示されたとおり、全てのコントロール動物（ＰＢＳまたはアイソタイプコントロール抗体）は、７０日以内に死んだが、抗ＴＧＦ−β抗体で処置した動物は、８０日より長く生存した。生存の相違は、極めて有意であった（ＰＢＳ対抗ＴＧＦ−βについてｐ＝０．００４、そしてアイソタイプコントロール対抗ＴＧＦ−βについてｐ＝０．００２）。
【００８８】
ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスに、１００μｇのＰＢＳ、アイソタイプコントロール抗体または市販の抗ＴＧＦ−β抗体（Ｇｅｎｚｙｍｅ）を、実験の期間にわたって１週に３回、腹腔内に注射した。全ての動物は、注射後４週目で血清中において７５０μｇ／ｍｌを超えるヒトＩｇＧによって証明されるとおり、移植された（示さず）。図２に示されるとおり、ＰＢＳまたはアイソタイプコントロール抗体のいずれかで処置した動物は、平均生存が６０日であった。対照的に、抗ＴＧＦ−βで処置した動物は、８０日より長く生存した。従って抗ＴＧＦ−β処置は、ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスの生存を有意に増強した（ｐ＜０．００２）。
【００８９】
（実施例７）
ＴＧＦ−βのインビボ中和はＬＰＤを軽減し、ＣＤ８＋の増殖および活性を生じる：抗ＴＧＦ−β抗体でのインビボ処置が生存を延長する機構を検討するために、そして抗ＴＧＦ−β処置の有用性を評価するために、Ａ４１１抗ＴＧＦ−β抗体および第二のＰＢＬドナーを用いる第二の実験を行なった。このプロトコールでは、ＴＧＦ−βレベル、ＬＰＤ発症およびＣＤ８Ｔ細胞増殖を評価した。ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスには最初に、抗ＴＧＦ−β抗体を１週に３回注射して、ヒトＩｇレベル、血清ＴＧＦ−βおよびＬＤＰの発症をモニターした。全ての動物は、注射後４週目で血清中の７５０μｇ／ｍｌを超えるヒトＩｇＧによって証明されるように移植された（示さず）。ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスは通常１２０００ｐｇ／ｍｌのＴＧＦ−βの循環レベルを示した。抗ＴＧＦ−βでの動物の処置は、そのレベルを４０００ｐｇ／ｍｌ未満まで有意に減少させた（ｐ＜０．０５）。
【００９０】
図３Ａによって、抗ＴＧＦ−βがインビボでＴＧＦ−βを中和することが示される。ＴＧＦ−βレベルに対する効果を評価するために、ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスに、１２５μｇの抗ＴＧＦ−β抗体（Ａ４１１）またはＰＢＳを１週間に３回注射した。血清サンプルをＴＧＦ−βの存在について６週目にＥＬＩＳＡで試験した。図３Ａのデータは、１群あたり５匹のマウスでの３連の決定に由来するＴＧＦ−βの平均ｐｇ／ｍｌとして示す。
【００９１】
ＬＤＰ発症を次に決定した。動物を９週目で屠殺して、その時点で１００％のコントロール動物は、ヒトＢ細胞腫瘍を発症した。対照的に、１２５μｇの抗ＴＧＦ−βを投与された動物のうちわずか２０％（５匹のうち１匹）しかＬＰＤを発症しなかった（図３Ｂ）。図３Ｂは、抗ＴＧＦ−βがＬＰＤの発症率を用量依存性の様式で軽減することを示す。ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスを、１００μｇまたは１２５μｇの抗ＴＧＦ−β抗体Ａ４１１またはマウスＩｇＧを用いて、９週間の間週に３回処置した。回収時に、Ｂ細胞腫瘍の存在を視覚的に評価して、フローサイトメトリーによって確認した。
【００９２】
ｈｕ ＰＢＬ ＳＣＩＤマウス由来の脾細胞および腫瘍細胞をフローサイトメトリーを介して分析して、実施例１に記載のようにＣＤ８＋Ｔ細胞レベルおよびＴ細胞活性化を評価した。全ての抗体およびアイソタイプコントロール抗体を直接結合体化して、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から得た。サンプルはＦＡＣＳｃａｎ（ＢＤ）上で読んで、Ｃｅｌｌ Ｑｕｅｓｔソフトウェアを用いて分析した。
【００９３】
脾臓および腫瘍のフローサイトメトリー分析によって、ヒトＣＤ８＋細胞が抗ＴＧＦ−β処置マウスにおいて劇的に増殖したことが示された。コントロールマウスは、それらの脾臓において中央値０％のＣＤ８＋細胞を有した。これらのマウスはまれに、脾臓においてヒト細胞を有し、ヒト細胞が存在する場合、それらが、ヒトＢ細胞であった。対照的に、１２５μｇの抗ＴＧＦ−βを投与された動物はそれらの脾臓で１７．５％というＣＤ８＋細胞の中央値を有した。Ｂ細胞腫瘍を発症した１匹の処置動物は、脾臓において有意な数のＢ細胞（２５％）、および有意な数のＣＤ８＋細胞（２５％）を有した。重要なことに、ＣＤ８＋Ｔ細胞はまた、１匹の腫瘍陽性抗ＴＧＦ−β処置動物の腫瘍でも増殖した。
【００９４】
抗ＴＧＦ−βが生存を延長した機構を決定するために、異なる抗体およびさらなるＰＢＬドナーの両方を用いて、さらなる実験を行なった。コントロール処置マウスは、浸潤するＣＤ８＋Ｔ細胞が極めて少ない（＜５％）Ｂ細胞腫瘍を有した。これらの動物の脾臓は、Ｂ細胞浸潤を有したが、ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤は有さなかった。対照的に、ＴＧＦ−βの中和は、腫瘍におけるヒトＣＤ８＋細胞の劇的な増大を生じた。これらのＣＤ８＋細胞は、ＣＤ４５ＲＯおよびＣＤ２５＋であって、このことは、それらが活性化された記憶細胞であったことを示している。ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞はまた、これらのマウスの脾臓に浸潤したが、ＣＤ２５は発現しなかった。
【００９５】
（実施例８）
抗ＴＧＦ−βの効果をさらに検討するために、第三のドナーを用いるさらなる研究を行なった。ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスに、１００μｇの抗ＴＧＦ−β抗体（Ａ４１１）またはマウスＩｇＧを、９週間にわたって１日おきに注射した（図４）。抗ＴＧＦ−β処置は、これらの動物の血清においてＴＧＦ−βを有効に中和した（示さず）。フローサイトメトリーを用いて、腫瘍（図４Ａ）および脾臓（図４Ｂ）におけるヒト細胞の増殖を評価した。
【００９６】
図４Ａは、抗ＴＧＦ−βおよびコントロールで処置したｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍のフローサイトメトリー分析を示す。腫瘍は、ヒトＢ細胞およびＴ細胞の増殖および活性化の存在についてフローサイトメトリーによって分析した（収集時点で）。データは、各々の群における代表的な動物から示される（１群あたりｎ＝５マウス）。
【００９７】
図４Ｂは、抗ＴＧＦ−βおよびコントロール処置したｈｕ ＰＢＬＳＣＩＤマウスからの脾臓のサイトメトリー分析を示す。ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスに、１００μｇの抗ＴＧＦ−β（Ａ４１１）またはマウスＩｇＧを９週間にわたって１日おきに注射した。収集時に、脾臓を、ヒトＢ細胞およびＴ細胞の増殖および活性化の存在についてフローサイトメトリーによって分析した。データは、各々の群における代表的な動物から示す（１群あたりｎ＝５マウス）。
【００９８】
これらのデータによって、コントロールＩｇＧ処置マウス由来の腫瘍は、ヒトＢ細胞および極めて少ないＣＤ８＋Ｔ細胞を含むことが示される。同様に、これらの動物由来の脾臓は、Ｂ細胞を含むが、Ｔ細胞がある場合は極めて少ない。対照的に、抗ＴＧＦ−β処置マウス由来の腫瘍および脾臓は、多数のＣＤ８＋Ｔ細胞を示した。これらのＣＤ８＋細胞は、ＣＤ４５ＲＯを発現する主に記憶細胞であって、腫瘍では、ＣＤ８＋細胞のほとんどがまたＣＤ２５を発現し、このことは、それらが活性化されたことを示している。脾臓におけるＣＤ８＋細胞のほとんどがＣＤ２５を発現しなかった。
【００９９】
本明細書は、本明細書内に引用される参考文献の教示に照らして最も徹底的に理解される。本明細書内の実施形態は、本発明の実施形態の例示を提供しており、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。当業者は、多数の他の実施形態が、本発明によって包含されることを容易に認識する。本開示に引用される全ての刊行物、特許および生物学的配列は、その全体が参照によって援用される。参照によって援用される物質が矛盾するか、または本明細書内で不整合である程度までは、本明細書は、任意のこのような物質に優先する。本明細書において任意の参照を引用しても、このような参照が本発明に対する先行技術であるという承認ではない。
【０１００】
他に示さない限り、特許請求の範囲を含む本明細書で用いられる成分、細胞培養物、処置条件などの数値を表す全ての数は、全ての場合において、「約、およそ（ａｂｏｕｔ）」という用語によって修飾されていると理解されるべきである。従って、他に逆に示されない限り、数的なパラメーターは、近似であり、かつ本発明によって得られるべく探求される所望の特性に依存して変化し得る。他に示さない限り、一連の要素に先行する「少なくとも（ａｔ ｌｅａｓｔ）」という用語は、そのつながりにおけるあらゆる要素を指すことが理解されるべきである。当業者は、慣用的な実験以下を用いて、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識または確定することができる。このような等価物は、添付の特許請求の範囲によって包含されるものとする。
【０１０１】
本発明の他の実施形態は、本明細書に開示される本発明の仕様および実行の考慮から当業者に明白である。本明細書および実施例は、例としてのみ解釈されるものとし、本発明の真の範囲および趣旨は、添付の特許請求の範囲によって示されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【０１０２】
【図１Ａ】図１Ａは、Ａ／Ａ、Ａ／ＴまたはＴ／Ｔ ＩＦＮ−γ遺伝子型を有する個体由来の末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を比較する細胞溶解アッセイにおけるＴＧＦ−βの効果を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、適合したＬＣＬ増殖をＣＴＬが防止する能力に対するＴＧＦ−βの効果は、ＴＧＦ−βの存在下でのＣＴＬ再刺激によって阻害されることを示す。
【図２】図２は、抗ＴＧＦ−β抗体での処置が、リンパ増殖性疾患のヒトＰＢＬ重症複合免疫不全（ｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤ）マウスモデルにおいて、ＬＰＤからの死亡を妨げることを示す。
【図３】図３Ａは、抗ＴＧＦ−β抗体がインビボでＴＧＦ−βを中和することを示す。図３Ｂは、抗ＴＧＦ−β抗体がＬＰＤの頻度をｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤモデルにおいて用量依存性の様式で減少させることを実証する。
【図４Ａ】図４Ａは、抗ＴＧＦ−β抗体およびコントロールで処置したｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍のフローサイトメトリー分析を示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、抗ＴＧＦ−β抗体およびコントロールで処置したｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウス由来の脾臓のサイトメトリー解析を示す。これらのデータによって、コントロールのＩｇＧ処置したマウス由来の腫瘍および脾臓はヒトＢ細胞および極めて少ないＣＤ８＋Ｔ細胞を含んだが、抗ＴＧＦ−β処置したｈｕ ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウスの腫瘍および脾臓には多数のＣＤ８＋Ｔ細胞が存在することが実証される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物被験体におけるウイルス関連のリンパ増殖性障害の発症のリスクを処置、予防または軽減する方法であって、治療的に有効な量のＴＧＦ−βアンタゴニストを該被験体に対して投与する工程を包含し、該被験体がウイルス関連リンパ増殖性障害を有するか、またはそのリスクがある、方法。
【請求項２】
前記ウイルス関連の増殖性障害が、ヘルペスウイルス、ＨＨＶ−８、サイトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｃ型レトロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型およびヒト免疫不全ウイルスから選択されるウイルスに関連する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ウイルス関連リンパ増殖性障害がエプスタイン−バーウイルス関連のリンパ増殖性障害である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ウイルス関連リンパ増殖性障害が移植後リンパ増殖性障害である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記被験体がＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記被験体がＩＦＮ−γ遺伝子の＋８７４位置でアデノシンを有する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＴＧＦ−βアンタゴニストが、抗ＴＧＦ−β抗体、抗ＴＧＦ−βレセプター抗体、および可溶性ＴＧＦ−βレセプターから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記抗ＴＧＦ−β抗体または抗ＴＧＦ−βレセプター抗体がヒト型またはヒト化型である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記抗ＴＧＦ−β抗体がＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３に特異的に結合する、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗ＴＧＦ−β抗体がＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２に特異的に結合する、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体が１Ｄ１１、またはそのヒトもしくはヒト化誘導体である、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体がＴＧＦ−β１に特異的に結合する、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗体がＣＡＴ１９２またはその誘導体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記被験体が移植に起因するリスクがある、請求項４に記載の方法。
【請求項１５】
前記移植が、心臓、腎臓、肺、肝臓、角膜、骨髄、幹細胞、血管および島細胞の移植から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記被験体が免疫不全に起因するリスクがある、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記被験体が免疫抑制療法に起因するリスクがある、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
哺乳動物被験体におけるウイルス感染に対してＴ細胞応答性を増強するための方法であって、該被験体に対してＴＧＦ−βアンタゴニストの治療上有効な量を投与する工程を包含し、該被験体がウイルス関連リンパ増殖障害を有するかまたはそのリスクがある、方法。
【請求項１９】
前記ウイルス関連リンパ増殖性障害が、ヘルペスウイルス、ＨＨＶ−８、サイトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｃ型レトロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型およびヒト免疫不全ウイルスから選択されるウイルスに関連する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ウイルス関連リンパ増殖性障害がヘルペスウイルス関連のリンパ増殖性障害である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記ウイルス関連増殖性障害がＥＢＶ関連リンパ増殖性障害である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＥＢＶ関連リンパ増殖性障害が、原発性ＣＮＳリンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、バーキットリンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、Ｘ連鎖性リンパ増殖性障害、チェディアック−東症候群およびホジキンリンパ腫から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ウイルス関連リンパ増殖性障害がＨＩＶ関連リンパ増殖性障害である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
ウイルス関連リンパ増殖性障害に対するＴ細胞応答性を増強するための方法であって、ＴＧＦ−βアンタゴニストの治療上有効な量をそれを必要とする哺乳動物被験体に対して投与してそれによって異常な細胞増殖を軽減する工程を包含する、方法。
【請求項２５】
低ＩＦＮ−γレベルに関連するウイルス関連リンパ増殖性障害を処置する方法であって、治療上有効な量のＴＧＦ−βアンタゴニストをそれを必要とする哺乳動物被験体に対して投与する工程を包含する、方法。
【請求項２６】
高ＴＧＦ−βレベルに関連するウイルス関連リンパ増殖性障害を処置する方法であって、治療上有効な量のＴＧＦ−βアンタゴニストをそれを必要とする哺乳動物被験体に対して投与する工程を包含する、方法。
【請求項２７】
ウイルス関連リンパ増殖性障害の発症のリスクを処置、予防または軽減するためにＴＧＦ−βアンタゴニストの投与のための候補被験体を同定する方法であって、ある被験体がＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型を有するか否かを決定する工程を包含する、方法。
【請求項２８】
前記被験体がＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型についてホモ接合性である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記被験体がＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型についてヘテロ接合性である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記被験体がＩＦＮ−γ遺伝子の＋８７４位置でアデノシンを有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記被験体が、ウイルス関連リンパ増殖性障害のリスクがある、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記被験体がウイルス関連リンパ増殖性障害を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
ウイルス関連リンパ増殖性障害の発症のリスクを処置、予防または軽減するためにＴＧＦ−βアンタゴニストの投与のための候補被験体を同定する方法であって、ある被験体が低ＩＦＮ−γレベルを有するか否かを決定する工程を包含する、方法。
【請求項３４】
ウイルス関連リンパ増殖性障害を処置するためにＴＧＦ−βアンタゴニストの投与のための候補被験体を選択する方法であって、ある被験体がＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型を有するか否かを決定する工程を包含する、方法。
【請求項３５】
前記被験体がＩＦＮ−γ遺伝子の＋８７４位置でアデノシンを有するか否かを決定する工程をさらに包含する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
ウイルス関連リンパ増殖性障害を処置するためにＴＧＦ−βアンタゴニストの投与のための候補を選択する方法であって、被験体が低ＩＦＮ−γレベルを有するか否かを決定する工程を包含する、方法。
【請求項１】
哺乳動物被験体におけるウイルス関連のリンパ増殖性障害の発症のリスクを処置、予防または軽減する方法であって、治療的に有効な量のＴＧＦ−βアンタゴニストを該被験体に対して投与する工程を包含し、該被験体がウイルス関連リンパ増殖性障害を有するか、またはそのリスクがある、方法。
【請求項２】
前記ウイルス関連の増殖性障害が、ヘルペスウイルス、ＨＨＶ−８、サイトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｃ型レトロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型およびヒト免疫不全ウイルスから選択されるウイルスに関連する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ウイルス関連リンパ増殖性障害がエプスタイン−バーウイルス関連のリンパ増殖性障害である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ウイルス関連リンパ増殖性障害が移植後リンパ増殖性障害である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記被験体がＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記被験体がＩＦＮ−γ遺伝子の＋８７４位置でアデノシンを有する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＴＧＦ−βアンタゴニストが、抗ＴＧＦ−β抗体、抗ＴＧＦ−βレセプター抗体、および可溶性ＴＧＦ−βレセプターから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記抗ＴＧＦ−β抗体または抗ＴＧＦ−βレセプター抗体がヒト型またはヒト化型である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記抗ＴＧＦ−β抗体がＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３に特異的に結合する、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗ＴＧＦ−β抗体がＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２に特異的に結合する、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体が１Ｄ１１、またはそのヒトもしくはヒト化誘導体である、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体がＴＧＦ−β１に特異的に結合する、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗体がＣＡＴ１９２またはその誘導体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記被験体が移植に起因するリスクがある、請求項４に記載の方法。
【請求項１５】
前記移植が、心臓、腎臓、肺、肝臓、角膜、骨髄、幹細胞、血管および島細胞の移植から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記被験体が免疫不全に起因するリスクがある、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記被験体が免疫抑制療法に起因するリスクがある、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
哺乳動物被験体におけるウイルス感染に対してＴ細胞応答性を増強するための方法であって、該被験体に対してＴＧＦ−βアンタゴニストの治療上有効な量を投与する工程を包含し、該被験体がウイルス関連リンパ増殖障害を有するかまたはそのリスクがある、方法。
【請求項１９】
前記ウイルス関連リンパ増殖性障害が、ヘルペスウイルス、ＨＨＶ−８、サイトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｃ型レトロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型およびヒト免疫不全ウイルスから選択されるウイルスに関連する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ウイルス関連リンパ増殖性障害がヘルペスウイルス関連のリンパ増殖性障害である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記ウイルス関連増殖性障害がＥＢＶ関連リンパ増殖性障害である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＥＢＶ関連リンパ増殖性障害が、原発性ＣＮＳリンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、バーキットリンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、Ｘ連鎖性リンパ増殖性障害、チェディアック−東症候群およびホジキンリンパ腫から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ウイルス関連リンパ増殖性障害がＨＩＶ関連リンパ増殖性障害である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
ウイルス関連リンパ増殖性障害に対するＴ細胞応答性を増強するための方法であって、ＴＧＦ−βアンタゴニストの治療上有効な量をそれを必要とする哺乳動物被験体に対して投与してそれによって異常な細胞増殖を軽減する工程を包含する、方法。
【請求項２５】
低ＩＦＮ−γレベルに関連するウイルス関連リンパ増殖性障害を処置する方法であって、治療上有効な量のＴＧＦ−βアンタゴニストをそれを必要とする哺乳動物被験体に対して投与する工程を包含する、方法。
【請求項２６】
高ＴＧＦ−βレベルに関連するウイルス関連リンパ増殖性障害を処置する方法であって、治療上有効な量のＴＧＦ−βアンタゴニストをそれを必要とする哺乳動物被験体に対して投与する工程を包含する、方法。
【請求項２７】
ウイルス関連リンパ増殖性障害の発症のリスクを処置、予防または軽減するためにＴＧＦ−βアンタゴニストの投与のための候補被験体を同定する方法であって、ある被験体がＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型を有するか否かを決定する工程を包含する、方法。
【請求項２８】
前記被験体がＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型についてホモ接合性である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記被験体がＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型についてヘテロ接合性である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記被験体がＩＦＮ−γ遺伝子の＋８７４位置でアデノシンを有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記被験体が、ウイルス関連リンパ増殖性障害のリスクがある、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記被験体がウイルス関連リンパ増殖性障害を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
ウイルス関連リンパ増殖性障害の発症のリスクを処置、予防または軽減するためにＴＧＦ−βアンタゴニストの投与のための候補被験体を同定する方法であって、ある被験体が低ＩＦＮ−γレベルを有するか否かを決定する工程を包含する、方法。
【請求項３４】
ウイルス関連リンパ増殖性障害を処置するためにＴＧＦ−βアンタゴニストの投与のための候補被験体を選択する方法であって、ある被験体がＩＦＮ−γの低プロデューサー遺伝子型を有するか否かを決定する工程を包含する、方法。
【請求項３５】
前記被験体がＩＦＮ−γ遺伝子の＋８７４位置でアデノシンを有するか否かを決定する工程をさらに包含する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
ウイルス関連リンパ増殖性障害を処置するためにＴＧＦ−βアンタゴニストの投与のための候補を選択する方法であって、被験体が低ＩＦＮ−γレベルを有するか否かを決定する工程を包含する、方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【公表番号】特表２００８−５１５９８３（Ｐ２００８−５１５９８３Ａ）
【公表日】平成２０年５月１５日（２００８．５．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５３６８２７（Ｐ２００７−５３６８２７）
【出願日】平成１７年１０月１２日（２００５．１０．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３６６１３
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０４４４３３
【国際公開日】平成１８年４月２７日（２００６．４．２７）
【出願人】（５０４３２５２８７）ザ オハイオ ステート ユニバーシティー リサーチ ファウンデーション (24)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年５月１５日（２００８．５．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１０月１２日（２００５．１０．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３６６１３
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０４４４３３
【国際公開日】平成１８年４月２７日（２００６．４．２７）
【出願人】（５０４３２５２８７）ザ オハイオ ステート ユニバーシティー リサーチ ファウンデーション (24)
【Ｆターム（参考）】
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