エスクレチン誘導体、その製造方法及びマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤
【目的】 エスクレチン誘導体、その製造方法及びマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を提供する。
【構成】 エスクレチン誘導体は下記一般式（Ｉ）で表される。
【化１】
Ｒ1 及びＲ2 は−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 、単糖類残基、アシル化単糖類残基；Ｒ1又はＲ2 の少なくとも１方は−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 ；Ｒ4 及びＲ5 はＨ、ＯＨ、アルキル、アリール若しくはアラルキル、又はＲ4 とＲ5 とは３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基を形成でき；Ｒ3 は−ＣＯＯＲ8 、Ｈ、ＯＨ、アルキル、アリール又はアラルキル；Ｒ3 は３位又は４位；Ｒ8 はＨ又はアルキル。
【構成】 エスクレチン誘導体は下記一般式（Ｉ）で表される。
【化１】
Ｒ1 及びＲ2 は−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 、単糖類残基、アシル化単糖類残基；Ｒ1又はＲ2 の少なくとも１方は−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 ；Ｒ4 及びＲ5 はＨ、ＯＨ、アルキル、アリール若しくはアラルキル、又はＲ4 とＲ5 とは３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基を形成でき；Ｒ3 は−ＣＯＯＲ8 、Ｈ、ＯＨ、アルキル、アリール又はアラルキル；Ｒ3 は３位又は４位；Ｒ8 はＨ又はアルキル。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規なエスクレチン誘導体、その製造方法、及び前記エスクレチン誘導体を含有するマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】マトリックスメタロプロテアーゼ（matrix metalloproteinase；以下、ＭＭＰｓとも称する）は、細胞外マトリックスのタンパク質成分を分解する金属酵素の総称である。ＭＭＰｓは、通常、以下の４群に分類されている。すなわち、コラゲナーゼ群〔例えば、間質性コラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）及び白血球コラゲナーゼ（ＭＭＰ−８）〕、ゼラチナーゼ／ＩＶ型コラゲナーゼ群〔例えば、ゼラチナーゼＡ（ＭＭＰ−２）及びゼラチナーゼＢ（ＭＭＰ−９）〕、ストロムライシン群〔例えば、ストロムライシン−１（ＭＭＰ−３）、ストロムライシン−２（ＭＭＰ−１０）及びストロムライシン−３（ＭＭＰ−１１）〕、及びその他の群〔例えば、マトリライシン（ＭＭＰ−７）〕である。近年、これらのＭＭＰｓと各種疾患との関係が徐々に明らかになってきている。例えば、岡田ら〔マトリックスメタロプロテアーゼと炎症：組織培養、１９（１１）３８６−３９０、１９９３〕は、（ａ）慢性関節リウマチや変形性関節症の滑膜及び関節軟骨組織、（ｂ）角膜潰瘍、（ｃ）創傷治癒、（ｄ）肉芽腫、（ｅ）歯周囲炎、（ｆ）皮膚水泡性疾患、（ｇ）糸球体腎炎、（ｈ）肺気腫、（ｉ）病的骨吸収、及び（ｊ）癌組織の浸潤・転移等の病的組織ではＭＭＰｓが深く関与している可能性を紹介している。例えば、腫瘍組織や炎症局所ではこれらＭＭＰｓの産生が上昇していることが遺伝子及びタンパク質レベルで確認されている。従って、ＭＭＰｓの産生や活性を阻害することのできる物質は、これらの各種疾患に対して何らかの有効な作用を示すことが期待されている。従来、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤としては、これらの酵素と類似の構造をもつペプチド（例えば、特表平４−５０１４２３号公報）やヒドロキサム酸（例えば、特開平６−２５６２９３号公報）が知られていた。しかしながら、これらは、加水分解を受け易く、効果が持続しにくいという欠点をもっていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的は、従来のペプチド系化合物等のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤とは別異の化合物で、標的組織への親和性及び滞留性を向上させ、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害作用が持続する新規の化合物を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】前記の目的は、本発明により、一般式（Ｉ）：
【化６】
〔式中、Ｒ1 及びＲ2 はそれぞれ独立に、−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 、単糖類残基、又はアシル化された単糖類残基であって、Ｒ1 又はＲ2 の少なくとも１方は−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 であるものとし、Ｒ4 及びＲ5 はそれぞれ独立に、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基若しくはアラルキル基であるか、又はＲ4 とＲ5 とはそれらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基を形成していることができるものとし、Ｒ3 は−ＣＯＯＲ8 、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基、又はアラルキル基であって、Ｒ3 の結合位置は３位又は４位であることができるものとし、Ｒ8 は水素原子又はアルキル基である〕で表されるエスクレチン誘導体又はその塩によって達成することができる。また、本発明は、一般式（XI）
【化７】
（式中、Ｒ3 は前記と同じ意味である）で表される化合物、一般式（II）
【化８】
（式中、Ｒ3 は前記と同じ意味であり、Ｒ7 は単糖類残基又はアシル化された単糖類残基である）で表される化合物、又は一般式（II’）
【化９】
（式中、Ｒ3 及びはＲ6 は前記と同じ意味である）で表される化合物と、一般式（Ｘ）
【化１０】
Ｒ5 （Ｒ4 ）ＮＣＯＸ （Ｘ）
（式中、Ｘはハロゲン基であり、Ｒ4 及びＲ5 は前記と同じ意味である）で表される化合物とを反応させることを特徴とする、前記一般式（Ｉ）で表されるエスクレチン誘導体又はその塩の製造方法に関する。更に、本発明は、前記一般式（Ｉ）で表されるエスクレチン誘導体又は製剤学的に許容することのできるその塩を含有するマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤にも関する。
【０００５】本明細書において単糖類残基とは、単糖類化合物の１位の水酸基を除いた残基である。これらの単糖類は、（ＣＨ2 Ｏ）ｎ［ｎは３以上の整数］で表される化合物だけでなく、それらの誘導体であるデオキシ糖、アミノ糖、糖酸、糖アルコール等を含み、更に硫酸エステル、燐酸エステル等のエステル類、及びこれらのエステル類の塩類、メチルエーテル等のエーテル類、アミノ糖若しくは糖酸の塩類等を含む。単糖類の具体例は、例えば、水野 卓・西沢一俊共著「図解糖質化学便覧」共立出版株式会社（１９７１）に記載されている化合物をあげることができる。
【０００６】好ましい単糖類は、ペントース又はヘキソースである。ペントースで好ましい例は、アラビノース、キシロース、リボース、又はデオキシリボースである。ヘキソースで好ましい例は、マンノース、アロース、アルトロース、タロース、グルコース、ガラクトース、イドース、グロース、フルクトース、ラムノース、フコース、グルコサミン、Ｎ−アシルグルコサミン、ガラクトサミン、Ｎ−アシルガラクトサミン、Ｎ−アシルムラミン酸、グルクロン酸、グロン酸、イズロン酸、アスコルビン酸、マンニット、又はソルビット等である。これらの単糖類の可能な硫酸エステル、燐酸エステル、及び塩類も含まれる。より好ましい単糖類は、マンノース、グルコース、ガラクトース、フルクトース、ラムノース、フコース、グルコサミン，Ｎ−アシルグルコサミン、ガラクトサミン、Ｎ−アシルガラクトサミン、又はグルクロン酸である。これらの単糖類の可能な硫酸エステル、燐酸エステル、及び塩類も含まれる。更により好ましい単糖類は、グルコース、ガラクトース、ラムノース、Ｎ−アシルグルコサミン、Ｎ−アシルガラクトサミン、又はグルクロン酸である。これらの単糖類の可能な硫酸エステル、燐酸エステル、及び塩類も含まれる。Ｎ−アシル糖のアシル基は、好ましくは炭素数２〜２０のアシル基、より好ましくは炭素数２〜５のアシル基、更により好ましくはアセチル基である。
【０００７】本発明のエスクレチン誘導体に含まれるアシル化された単糖類残基は、上記の単糖類残基の水酸基の少なくとも１個がアシル化されたものである。アシル化された単糖類残基のアシル基は、好ましくは炭素数２〜２０のアシル基、より好ましくは炭素数２〜６のアシル基、更により好ましくはアセチル基又はピバロイル基である。１個又は全ての水酸基がアシル化された単糖類残基が好ましく、全ての水酸基がアセチル化された単糖類残基が特に好ましい。また、ヘキソースの１個の水酸基がアシル化される場合、６位の水酸基のアシル化が好ましく、６位の水酸基がピバロイル化されたヘキソース残基が最も好ましい。
【０００８】本発明のエスクレチン誘導体に含まれる単糖類及びアシル化された単糖類は、Ｄ−体又はＬ−体のいずれでもよく、また、ピラノース型又はフラノース型のいずれでもよい。本発明のエスクレチン誘導体において、エスクレチン部分と単糖類残基又はアシル化された単糖類残基との結合は、グリコシド結合である。グリコシド１位の立体配置は、α−アノマー又はβ−アノマーのいずれでもよい。
【０００９】本発明のエスクレチン誘導体に含まれる−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 において、Ｒ4及びＲ5 はそれぞれ独立に、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基若しくはアラルキル基であるか、又はＲ4 とＲ5 とはそれらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基を形成していることができるものとする。
【００１０】前記のＲ4 及びＲ5 としてのアルキル基は、好ましくは脂肪族アルキル基、より好ましくは炭素数１〜４個の低級アルキル基、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基又はｔ−ブチル基であり、メチル基又はエチル基が特に好ましく、メチル基が最も好ましい。これらのアルキル基は、１個又は２個以上の置換基、例えば、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子）及び／又は水酸基で置換されていることができ、具体的にはヒドロキシメチル基、三フッ化メチル基又はクロルエチル基などが好ましい。Ｒ4 及びＲ5 のアリール基は、好ましくは炭素数６〜１２個のアリール基、例えば、フェニル基、ナフチル基、又はビフェニル基であり、これらのアリール基は、１個又は２個以上の置換基、例えば、炭素数１〜４個の低級アルキル基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子）及び／又は水酸基で置換されていることができる。フェニル基又は置換フェニル基が好ましい。更に、Ｒ4 及びＲ5 としてのアラルキル基は、好ましくは炭素数６〜１２個のアリール基で置換された炭素数１〜４個の低級アルキル基であり、例えば、ベンジル基、フェニルエチル基、フェニルプロピル基、又はフェニルブチル基である。前記アラルキル基のアリール部分も１個又は２個以上の置換基、例えば、炭素数１〜４個の低級アルキル基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子）及び／又は水酸基で置換されていてもよく、ベンジル基又は置換ベンジル基が好ましい。
【００１１】前記のＲ4 とＲ5 とが一緒になって形成された３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基は、場合により１個以上のヘテロ原子（例えば、窒素原子、酸素原子及び／又はイオウ原子）が介在していることのあるアルキレンアミノ基であり、例えば、１−アゼチジニル基（ＮＣ3 Ｈ6 ）、１−ピロリジニル基（ＮＣ4 Ｈ8 ）、ピペリジノ基（ＮＣ5 Ｈ10）、モルホリノ基（ＮＣ4 Ｈ8 Ｏ）、チオモルホリノ基（ＮＣ4 Ｈ8 Ｓ）又は１−ピペラジニル基（ＮＣ4 Ｈ8 ＮＨ）を挙げることができる。
【００１２】本発明のエスクレチン誘導体に含まれるＲ3 は、−ＣＯＯＲ8 （Ｒ8 は水素原子又はアルキル基である）、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基、又はアラルキル基であって、クマリン環の３位又は４位の炭素原子と結合している。以下、本明細書中において、クマリン環の３位に置換基を有するエスクレチン化合物を３−置換エスクレチン化合物と、あるいは、クマリン環の４位に置換基を有するエスクレチン化合物を４−置換エスクレチン化合物と称することがある。前記のＲ3 の−ＣＯＯＲ8 は、カルボキシル基又はそのアルキルエステル基であり、Ｒ8 のアルキル基は、好ましくは脂肪族アルキル基、より好ましくは炭素数１〜４個の低級アルキル基（例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基又はｔ−ブチル基）である。
【００１３】前記のＲ3 のアルキル基は、好ましくは脂肪族アルキル基、より好ましくは炭素数１〜４個の低級アルキル基、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基又はｔ−ブチル基であり、メチル基又はエチル基が特に好ましく、メチル基が最も好ましい。前記のＲ3 のアリール基は、好ましくは炭素数６〜１２個のアリール基、例えば、フェニル基、ナフチル基、又はビフェニル基であり、これらのアリール基は、１個又は２個以上の置換基、例えば、炭素数１〜４個の低級アルキル基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子）及び／又は水酸基で置換されていることができる。フェニル基又は置換フェニル基が好ましい。更に、前記のＲ3 のアラルキル基は、好ましくは炭素数６〜１２個のアリール基で置換された炭素数１〜４個の低級アルキル基であり、例えば、ベンジル基、フェニルエチル基、フェニルプロピル基、又はフェニルブチル基である。前記アラルキル基のアリール部分も１個又は２個以上の置換基、例えば、炭素数１〜４個の低級アルキル基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子）及び／又は水酸基で置換されていてもよく、ベンジル基又は置換ベンジル基が好ましい。
【００１４】本発明のエスクレチン誘導体の塩は、糖の硫酸エステル又はリン酸エステル、ウロン酸等の糖酸のカルボキシル基、アミノ糖のアミノ基、エスクレチン骨格の３位又は４位の水酸基、アルキレンアミノ基に介在する窒素原子などに形成される。例えば、無機酸若しくは有機酸との塩や無機塩基若しくは有機塩基との塩が含まれ、製剤学的に許容される塩が好ましい。酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩又はｐ−トルエンスルホン酸塩、更には、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸又はフマル酸などのジカルボン酸塩、更に、酢酸、プロピオン酸又は酪酸などのモノカルボン酸塩等である。また、本発明のエスクレチン誘導体の塩の形成に適した無機塩基は、例えば、アンモニア、カリウム、ナトリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム等の水酸化物、炭酸塩及び重炭酸塩等である。有機塩基との塩としては、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリエチルアミンのようなモノ−、ジ−又はトリ−アルキルアミン塩、モノ−、ジ−又はトリ−ヒドロキシアルキルアミン塩、グアニジン塩、Ｎ−メチルグルコサミン塩、アミノ酸塩等である。
【００１５】本発明において、前記一般式（Ｉ）の各基Ｒ1 、Ｒ2 、及びＲ3 の定義に含まれるすべての基は、それぞれ独立に任意の１つの基を選択して、それらを任意の別の基と組み合わせることができる。従って、前記一般式（Ｉ）で表されるエスクレチン誘導体には、それら任意に選択された基のすべての可能な組み合わせから構成されるすべての新規化合物が含まれる。本発明の化合物の具体例としては、表１〜表４に示す化合物を挙げることができる。以下の表１〜表４で、Ｍｅはメチル基であり、Ｅｔはエチル基であり、ＮＣ4 Ｈ8 Ｏはモルホリノ基であり、ＮＡｃＧｌｃはＮ−アセチルグルコサミン残基であり、Ｐｉｖは６−ピバロイル化体であり、Ｇｌｃはグルコース残基であり、Ｇａｌはガラクトース残基であり、ＮＡｃＧａｌはＮ−アセチルガラクトサミン残基であり、ＧｌｃＵＡはグルクロン酸残基である。
【００１６】
【表１】
Ｒ1 （又はＲ2 ） Ｒ2 （又はＲ1 ） Ｒ3 CON(Me)2 CON(Me)2 H CON(Me)2 NAcGlc H CON(Me)2 PivNAcGlc H CON(Me)2 Glc H CON(Me)2 Gal H CON(Me)2 NAcGal H CON(Me)2 GlcUA H CON(Me)2 CON(Me)2 3-Me CON(Me)2 NAcGlc 3-Me CON(Me)2 PivNAcGlc 3-Me CON(Me)2 Glc 3-Me CON(Me)2 Gal 3-Me CON(Me)2 NAcGal 3-Me CON(Me)2 GlcUA 3-Me CON(Me)2 CON(Me)2 4-Me CON(Me)2 NAcGlc 4-Me CON(Me)2 PivNAcGlc 4-Me CON(Me)2 Glc 4-Me CON(Me)2 Gal 4-Me CON(Me)2 NAcGal 4-Me CON(Me)2 GlcUA 4-Me CON(Me)2 CON(Me)2 3-COOMe CON(Me)2 NAcGlc 3-COOMe CON(Me)2 PivNAcGlc 3-COOMe CON(Me)2 Glc 3-COOMe CON(Me)2 Gal 3-COOMe
【００１７】
【表２】
Ｒ1 （又はＲ2 ） Ｒ2 （又はＲ1 ） Ｒ3 CON(Me)2 NAcGal 3-COOMe CON(Me)2 GlcUA 3-COOMe CON(Et)2 CON(Et)2 H CON(Et)2 NAcGlc H CON(Et)2 PivNAcGlc H CON(Et)2 Glc H CON(Et)2 Gal H CON(Et)2 NAcGal H CON(Et)2 GlcUA H CON(Et)2 CON(Et)2 3-Me CON(Et)2 NAcGlc 3-Me CON(Et)2 PivNAcGlc 3-Me CON(Et)2 Glc 3-Me CON(Et)2 Gal 3-Me CON(Et)2 NAcGal 3-Me CON(Et)2 GlcUA 3-Me CON(Et)2 CON(Et)2 4-Me CON(Et)2 NAcGlc 4-Me CON(Et)2 PivNAcGlc 4-Me CON(Et)2 Glc 4-Me CON(Et)2 Gal 4-Me CON(Et)2 NAcGal 4-Me CON(Et)2 GlcUA 4-Me CON(Et)2 CON(Et)2 3-COOMe CON(Et)2 NAcGlc 3-COOMe CON(Et)2 PivNAcGlc 3-COOMe
【００１８】
【表３】
Ｒ1 （又はＲ2 ） Ｒ2 （又はＲ1 ） Ｒ3 CON(Et)2 Glc 3-COOMe CON(Et)2 Gal 3-COOMe CON(Et)2 NAcGal 3-COOMe CON(Et)2 GlcUA 3-COOMe CONC4H8O CONC4H8O H CONC4H8O NAcGlc H CONC4H8O PivNAcGlc H CONC4H8O Glc H CONC4H8O Gal H CONC4H8O NAcGal H CONC4H8O GlcUA H CONC4H8O CONC4H8O 3-Me CONC4H8O NAcGlc 3-Me CONC4H8O PivNAcGlc 3-Me CONC4H8O Glc 3-Me CONC4H8O Gal 3-Me CONC4H8O NAcGal 3-Me CONC4H8O GlcUA 3-Me CONC4H8O CONC4H8O 4-Me CONC4H8O NAcGlc 4-Me CONC4H8O PivNAcGlc 4-Me CONC4H8O Glc 4-Me CONC4H8O Gal 4-Me CONC4H8O NAcGal 4-Me CONC4H8O GlcUA 4-Me CONC4H8O CONC4H8O 3-COOMe
【００１９】
【表４】
Ｒ1 （又はＲ2 ） Ｒ2 （又はＲ1 ） Ｒ3 CONC4H8O NAcGlc 3-COOMe CONC4H8O PivNAcGlc 3-COOMe CONC4H8O Glc 3-COOMe CONC4H8O Gal 3-COOMe CONC4H8O NAcGal 3-COOMe CONC4H8O GlcUA 3-COOMe
【００２０】本発明のエスクレチン誘導体は、例えば、以下に示す方法により製造することができる。すなわち、一般式（XI）
【化１１】
（式中、Ｒ3 は前記と同じ意味である）で表される化合物、一般式（II）
【化１２】
（式中、Ｒ3 及びＲ6 は前記と同じ意味である）で表される化合物、又は一般式（II’）
【化１３】
（式中、Ｒ3 及びＲ6 は前記と同じ意味である）で表される化合物と、一般式（Ｘ）
【化１４】
Ｒ5 （Ｒ4 ）ＮＣＯＸ （Ｘ）
（式中、Ｘはハロゲン基であり、Ｒ4 及びＲ5 は前記と同じ意味である）で表される化合物とを反応させることによって調製することができる。
【００２１】すなわち、前記一般式（XI）で表される化合物と前記一般式（Ｘ）で表される化合物とを反応させることにより、クマリン環の６位及び７位に合計２個のカルバモイル基〔−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 〕を有する本発明のエスクレチン誘導体を得ることができる。また、前記一般式（II）で表される化合物と前記一般式（Ｘ）で表される化合物とを反応させることにより、クマリン環の６位に単糖類残基又はアシル化された単糖類残基を有し、７位にカルバモイル基を有する本発明のエスクレチン誘導体を得ることができる。更に、前記一般式（II’）で表される化合物と前記一般式（Ｘ）で表される化合物とを反応させることにより、クマリン環の６位にカルバモイル基を有し、７位に単糖類残基又はアシル化された単糖類残基を有する本発明のエスクレチン誘導体を得ることができる。その製造方法の代表例を、カルバモイル基〔−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 〕が２個の場合と１個の場合とに分けて、以下に詳細に説明する。
【００２２】（Ａ）カルバモイル基が２個の場合反応工程式（Ｉ）を以下に示す。
【化１５】
式中、Ｒ3 、Ｒ4 及びＲ5 は前記と同じ意味である。
【００２３】本反応工程式（Ｉ）の工程１は、エスクレチン又は３−置換若しくは４−置換エスクレチン化合物（XI）とハロゲン化カルバモイル化合物（好ましくは塩化カルバモイル化合物）（Ｘ）との反応で、カルバモイル基を６及び７−位に導入した本発明のエスクレチン誘導体（XIII）を得る反応工程である。塩化カルバモイル化合物は、通常試薬として、例えば、東京化成工業株式会社から入手することができる。上記一般式（Ｘ）におけるＲ4 とＲ5 とがそれらと結合している窒素原子と一緒になって形成した３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基である場合の塩化カルバモイル化合物は、対応する環状アミンとホスゲン等との反応から得ることができる。上記一般式（Ｘ）におけるＲ4 とＲ5 とがその他の置換基である場合の塩化カルバモイル化合物は、対応するアミンとホスゲン等との反応から得ることができる。
【００２４】エスクレチンは、試薬として、例えば、東京化成工業株式会社から入手することができる。３−置換又は４−置換エスクレチン化合物のうち、４−メチルエスクレチンは、試薬として、例えば、東京化成工業株式会社から入手することができる。更に、４−置換エスクレチン化合物は、一般的に、一般式(XII)
【化１６】
（式中、Ｒ3 は前記と同じ意味である）で表される化合物と無水酢酸と酢酸ナトリウムとを反応させるＫｏｓｔａｎｅｃｋｉ−Ｒｏｂｉｎｓｏｎ反応（Ｔ．Ｃ．Ｃｈａｄｈａ，Ｈ．Ｓ．Ｍａｈａｌ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９３３，ｐ．１４９５参照）により合成することができる。前記一般式(XII) 中でＲ3 が水素原子である化合物を用いると、同様の反応によりエスクレチンを合成することができる。更に、Ｒ3 が水酸基である４−置換エスクレチン化合物を得るには、Ｒ3 が保護基Ｂを有する水酸基−ＯＢ、例えばベンジルオキシ基等の化合物を用いて同様の反応により得たエスクレチン誘導体を水素化分解して保護基をはずすことにより合成することができる。この場合、保護基をもつ状態で工程１を行い、後で保護基をはずす方法が好ましい。
【００２５】３−置換又は４−置換エスクレチン化合物のうち、３−置換エスクレチン化合物は、一般にサリチルアルデヒドにＫｎｏｅｖｅｎａｇｅｌ反応を行なうと収率よく合成することができる。例えば、Ｅ．Ｃ．Ｈｏｒｎｉｎｇ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，６９，９６８（１９４７）に記載の
【化１７】
で表される反応、又はＤ．Ｇ．Ｃｒｏｓｂｙ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２７，３０８３（１９６２）に記載の
【化１８】
で表される反応により、３−置換エスクレチン化合物を得ることができる。
【００２６】工程１は、有機溶媒（例えば、ピリジン、トリエチルアミン、又はジイソプロピルエチルアミン）を用い、適当な塩基（例えば、ピリジン又はトリエチルアミン）の存在下に、１０〜１００℃で、０．１〜１００時間反応させて行うことができる。有機溶媒としてピリジンを用いると、ピリジンは塩基としても作用するので、他に塩基を加える必要がなくて都合がよい。
【００２７】（Ｂ）カルバモイル基が１個の場合一般式（Ｉ）で表される化合物のＲ1 がカルバモイル基であり、Ｒ2 が単糖類残基又はアシル化された単糖類残基であるエスクレチン誘導体を製造する場合の基本的な反応工程式（II）は次の通りである。
【化１９】
【００２８】上記反応工程式（II）の（２）〜（１３）を、以下に工程２〜１３として説明する。なお、上記反応工程式（II）は、各化合物の６位と７位の置換基をそれぞれ入れ換えれば、一般式（Ｉ）で表される化合物のＲ2 がカルバモイル基であり、Ｒ1 が単糖類残基又はアシル化された単糖類残基であるエスクレチン誘導体を製造する場合の基本的な反応工程式となる。以下、上記反応工程式は、この場合を含むものとして説明する。この反応工程式（II）においては、先ず７位（又は６位）の水酸基を保護した一般式（IV）で表される化合物を合成する。Ｒ3 が水素原子の場合、一般式（IV）で表される化合物は、エスクレチンの６位水酸基にグルコースが結合したエスクリン（すなわち７−ヒドロキシ−６−グルコシルオキシクマリン）（IX）又はエスクレチンの７位水酸基にグルコースが結合したシコリイン（すなわち６−ヒドロキシ−７−グルコシルオキシクマリン）を原料にして、まず水酸基を保護基で保護し（工程２）、次いで加水分解（工程３）を行うことにより、得ることができる。エスクリン及びシコリインは天然物であり、試薬として入手可能である。更に、エスクレチンを原料として、以下に記載する工程２と同様の反応工程により、水酸基２個のうち１個を保護基で保護したエスクレチン（IV）を合成することもできる。
【００２９】Ｒ3 が水素原子以外の場合は、前記のようにして得られる３−置換又は４−置換エスクレチン化合物を原料として、以下に記載する工程２と同様の反応工程により、水酸基２個のうち１個を保護基で保護した３−置換又は４−置換エスクレチン化合物（IV）を合成することができる。例えば、アルコール溶媒中、炭酸カリウム等の塩基触媒存在下に塩化ベンジルと反応させることにより、６位又は７位の水酸基をベンジル基で保護した３−置換又は４−置換エスクレチン化合物を容易に得ることができる。この場合、工程３を実施することなく、６位又は７位の水酸基を保護した化合物（IV）を得ることができる。
【００３０】（２）工程２本工程［反応工程式（II）の（２）］は、一般式（IX）で表されるエスクリン化合物（IX）（式中、Ｇｌｃはグルコース残基を表す）の７位の水酸基に保護基を導入して化合物（VIII）を得る反応工程である。化合物（IX）の代わりに、例えば、シコリインを原料にすれば、６位と７位の置換基が逆の化合物を得ることができる。この反応工程においては、水酸基の保護基Ｚとハロゲン原子Ｘからなる化合物ＺＸ（例えば、塩化ベンジル又は塩化ベンジルオキシカルボニル）と化合物（IX）（例えば、エスクリン又はシコリイン）とを有機溶媒中で塩基の存在下に、４〜８０℃で、０．５〜４８時間反応させて化合物（VIII）を得ることができる。この反応は、キレート剤、例えば、１８−クラウン−６−エーテルとヨウ化カリウムの存在下に行うことが好ましい。保護基Ｚとしては、水素化分解により除去することのできる基（例えば、ベンジル基、ベンジルオキシカルボニル基等）を用いることが好ましい。前記有機溶媒として、例えば、ジメチルホルムアミド、メタノール、エタノール等を用いることができ、前記塩基として、例えば、炭酸ナトリウムや炭酸カリウム等を用いることができる。
【００３１】（３）工程３本工程［反応工程式（II）の（３）］は、７位水酸基を保護したエスクリン化合物（VIII）を加水分解して、７位水酸基を保護したエスクレチン化合物（IV）を得る反応工程である。同様に、６位水酸基を保護したシコリイン化合物を加水分解して６位水酸基を保護したエスクレチン化合物を得ることができる。ハロゲン化水素酸等の酸水溶液及びアルコール等の有機溶媒の混合液と、７位水酸基を保護したエスクリン化合物（VIII）又は６位水酸基を保護したシコリイン化合物とを、４０〜１２０℃、好ましくは加熱還流下に、０．５〜１０時間反応させて、化合物（IV）を得ることができる。
【００３２】（４）工程４本工程［反応工程式（II）の（４）］は、単糖類のアシル化反応工程である。例えば、単糖類Ｒ61ＯＨ（VII)（式中、ＯＨは１位の水酸基を表し、Ｒ61は１位の水酸基以外に少なくとも１個の遊離の水酸基を有する単糖類残基を表す）と、酸無水物Ａ2 Ｏ（式中、Ａはアシル基を表す）若しくはハロゲン化アシルＡＸ（式中、Ａはアシル基であり、Ｘはハロゲン原子を表す）とを、ピリジン、水酸化ナトリウム等の塩基の存在下に、必要なら適当な溶媒、例えば、クロロホルム、メタノール、水等を用いて、反応させることにより、アシル化された単糖類Ｒ62ＯＡ（VI）（式中、Ｒ62は基Ｒ61の１位の水酸基以外の遊離の水酸基の少なくとも１個がアシル化された単糖類残基を表し、Ａは前記と同じ意味である）を得ることができる。反応温度は通常、−２０℃〜＋５０℃、好ましくは室温である。反応時間は通常、１時間〜２日間である。
【００３３】（５）工程５本工程［反応工程式（II）の（５）］は、アシル化された単糖類（VI）の１位のアシルオキシ基をハロゲン原子に置換する反応工程である。例えば、ガス状のハロゲン化水素ＨＸ（式中、Ｘはハロゲン原子を表す）を無水酢酸などのカルボン酸無水物Ａ2 Ｏ（式中、Ａはアシル基を表す）に溶解させて、アシル化された単糖類Ｒ62ＯＡ（VI）と反応させることにより、１位のアシルオキシ基をハロゲン原子で置換したアシル化された単糖類Ｒ62Ｘ（Ｖ）を得ることができる。反応温度は通常、−２０℃〜＋５０℃、好ましくは室温である。反応時間は通常、０．１時間〜１０日間である。
【００３４】（６）工程６本工程［反応工程式（II）の（６）］は、単糖類Ｒ61ＯＨ（VII ）から一段階反応で一般式Ｒ62Ｘ（Ｖ）で表される化合物を得る反応工程である。例えば、ハロゲン化アシルＡＸと単糖類Ｒ61ＯＨ（VII ）とを反応させて一般式Ｒ62Ｘ（Ｖ）で表される化合物を得ることができる。反応温度は通常、４℃〜８０℃である。反応時間は通常、０．５時間〜２日間である。なお、以上の工程２、４、５、及び６におけるＸは、同一のハロゲンである必要はない。
【００３５】（７）工程７本工程［反応工程式（II）の（７）］は、７位（又は６位）の水酸基を保護したエスクレチン化合物（IV）において、６位（又は７位）の保護されていない水酸基にアシル化された単糖類残基Ｒ62を導入する反応工程である。例えば、苛性アルカリ水溶液−アセトン溶液等のアルカリ水溶液を含む有機溶媒中で、一般式（IV）で表される化合物と単糖類誘導体（Ｖ）とを、４〜８０℃で、反応させて一般式（IIIa）で表される化合物を得ることができる。または、クロロホルム、アセトニトリル等の有機溶媒に一般式（IV）で表される化合物と単糖類誘導体（Ｖ）を溶解し、この溶液に、苛性アルカリ水溶液に溶解した有機基を有するハロゲン化アンモニウム化合物（相間移動触媒）又はトリエチルアミン等（塩基触媒）を、４〜５０℃で、滴下した後、４〜８０℃で、０．５時間〜１０日間反応させて一般式（IIIa）で表される化合物を得ることができる。この場合、苛性アルカリ水溶液としては、例えば、水酸化ナトリウム水溶液を用いることができ、有機基を有するハロゲン化アンモニウム化合物としては、例えば、塩化ベンジルトリエチルアンモニウムを用いることができる。なお、相間移動触媒とは、水層と有機層を自由に移動することのできる試薬である。
【００３６】（８）工程８本工程［反応工程式（II）の（８）］は、アシル化された単糖類残基Ｒ62及び水酸基保護基Ｚを有する化合物（IIIa）を水素化分解して、アシル化された単糖類残基Ｒ62を有する化合物（IIa ）を得る反応工程である。本反応は、パラジウム系又は白金系触媒存在下に、４〜８０℃で、０．５〜４８時間、水素ガスと反応させて行うことができる。パラジウム系触媒としては、パラジウム−硫酸バリウム又はパラジウム−炭素等を用いるのが好ましい。
【００３７】（９）工程９本工程［反応工程式（II）の（９）］は、アシル化された単糖類残基Ｒ62及び水酸基保護基Ｚを有する化合物（IIIa）を脱アシル化して、単糖類残基Ｒ61及び水酸基保護基Ｚを有する化合物（IIIb）を得る反応工程である。例えば、本反応は、一般式（IIIa）で表される化合物をメタノール等の有機溶媒に溶解し、不活性ガス（例えば、窒素ガス又はアルゴンガス）気流中、メタノール等のアルコールに溶解したカリウム又はナトリウム等のアルカリ金属を反応させて行うことができる。反応温度は通常、４〜７０℃、反応時間は通常、０．１〜７２時間である。
【００３８】（１０）工程１０本工程［反応工程式（II）の（１０）］は、単糖類残基Ｒ61及び水酸基保護基Ｚを有する化合物（IIIb）を水素化分解して、単糖類残基Ｒ61を有する化合物（IIb)を得る反応である。本反応は、パラジウム系又は白金系触媒存在下に、４〜７０℃で、０．１〜４８時間、水素ガスと反応させて行うことができる。パラジウム系触媒としては、パラジウム−硫酸バリウム、パラジウム−炭素等を用いるのが好ましい。
【００３９】（１０’）工程１０’（工程１０の前処理工程）
化合物（IIIb）の単糖類残基Ｒ61を、別の単糖類残基Ｒ61に変換（アシル化を除く）してから、工程１０を実施すると、別の単糖類残基Ｒ61を有する相当する化合物（IIb ）を得ることができる。例えば、単糖類残基Ｒ61が−ＣＨ2 ＯＨを有する場合、この基を酸化して−ＣＯＯＨとすることにより、−ＣＯＯＨを有する別の単糖類残基Ｒ61をもつ化合物（IIb ）を得ることができる。この例としては、グルコース残基を酸化してグルクロン酸残基とする反応をあげることができる。また、化合物（IIIb）の単糖類残基Ｒ61の水酸基をアシル化（例えば、６単糖類残基の６位の水酸基をピバロイル化）し、化合物（IIIa）が担持していたＲ62とは別のアシル化単糖類残基Ｒ62に変換してから、工程１０を実施すると、化合物（IIIa）とは別のアシル化単糖類残基を有する化合物（IIb ）を得ることができる。単糖類残基Ｒ61の水酸基をアシル化する反応は、基本的には工程４と同様にして行うことができる。
【００４０】（１１）工程１１本工程［反応工程式（II）の（１１）］は、アシル化された単糖類残基Ｒ62を有する化合物（IIa ）を脱アシル化して、単糖類残基Ｒ61を有する化合物（IIb）を得る反応工程である。本反応は、基本的に前記の工程９と同様にして実施することができる。
【００４１】（１２）工程１２本工程［反応工程式（II）の（１２）］は、アシル化された単糖類残基Ｒ62を有する化合物（IIa ）とハロゲン化カルバモイル化合物（Ｘ）とを反応させて、カルバモイル基とアシル化された単糖類残基Ｒ62とを有するエスクレチン誘導体（Ia）を得る反応工程である。工程１２は、有機溶媒（例えば、ピリジン、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン）を用い、適当な塩基（例えば、ピリジン、トリエチルアミン又はアニリン）を存在させてもよく、１０〜１００℃で、０．１〜１００時間反応させて行うことができる。有機溶媒としてピリジンを用いると、ピリジンは塩基としても作用するので、他に塩基を加える必要がなくて都合がよい。
【００４２】（１３）工程１３本工程［反応工程式（II）の（１３）］は、工程１０において得た単糖類残基Ｒ61〔化合物（IIIa）が担持していたＲ62とは別のアシル化単糖類残基Ｒ62の場合を含む〕を有する化合物（IIb ）とハロゲン化カルバモイル化合物（Ｘ）とを反応させて、カルバモイル基と前記各種の単糖類残基Ｒ61とを有するエスクレチン誘導体（Ib）を得る反応工程である。工程１３は、基本的に前記の工程１２と同様にして実施することができる。なお、単糖類残基Ｒ61又はＲ62がＮ−アシルアミノ基をもつ場合、さらに脱アシル化反応を行うことによりアシル基を含まないアミノ糖残基Ｒ61とカルバモイル基とが結合したエスクレチン誘導体を得ることができる。この反応は、単糖類残基がＮ−アシルアミノ糖であるエスクレチン誘導体とアルカリ水溶液（好ましくは０．１〜１２Ｎ−ＮａＯＨ）とを、４０〜１２０℃で、１〜４８時間反応させることにより行うことができる。
【００４３】公知の方法を用いることにより、本発明による遊離のエスクレチン誘導体を塩に変え、またある塩を別の塩に変えることができ、更に、本発明によるエスクレチン誘導体の塩を遊離のエスクレチン誘導体に変えることができる。例えば、遊離カルボン酸基を含むＮ−アセチルグルコサミン基やウロン酸基を結合しているエスクレチン誘導体の場合には、塩を形成させることができる。すなわち、それらのエスクレチン誘導体と等モルの水酸化アルカリ（例えば、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム）を作用させると、遊離カルボン酸基をアルカリ塩に変換させることができる。またそれらの塩の水溶液を、塩酸又は硫酸で酸性にすると、遊離化合物にもどすことができる。遊離アミノ基を有する化合物に対しては、有機酸（リンゴ酸、クエン酸、酢酸）などを等量作用させることにより、対応する塩を形成させることができる。無機酸、例えば塩酸又は硫酸を作用させると、塩酸塩又は硫酸塩に導くことができる。この塩にアルカリを作用させると、再び遊離塩基に導くことが可能である。塩は水に可溶であるが、遊離体は難溶であるので、析出させて単離することが可能である。
【００４４】反応生成物の精製法としては、抽出、クロマトグラフィー、結晶化、再沈澱等を利用することができる。精製物の構造は、赤外線吸収スペクトル、紫外線吸収スペクトル、核磁気共鳴吸収スペクトル、元素分析、質量スペクトル等により確認することができる。
【００４５】本発明のエスクレチン誘導体について毒性を調べた。前記誘導体の代表例を、２０００ｍｇ／ｋｇ（体重）の量で、雄マウス及び雄ラットに経口投与した後、７日間観察したが、死亡例はなく、特筆すべき毒性は見られなかった。本発明のエスクレチン誘導体は、きわめて安全な化合物である（後記実施例１３参照）。本発明のエスクレチン誘導体は、マウスＦＨＣモデルにおいて、エスクレチンと比較して、高濃度の化合物がＦＨＣ（大腿骨頭軟骨）中に長時間取り込まれ滞留する（後記実施例１５参照）。本発明のエスクレチン誘導体は、薬理作用として、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害作用を有する（後記実施例１４参照）。従って、本発明のエスクレチン誘導体又は製剤学的に許容することのできるその塩は、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害作用により、マトリックス分解を伴う各種疾患の治療のためのマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の有効成分として有用である。これらマトリックス分解を伴う各種疾患の例は、関節症（例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症、肩関節周囲炎、頸肩腕症候群、腰痛症等）、角膜潰瘍、創傷、肉芽腫、歯周病、皮膚水泡性疾患、糸球体腎炎、肺気腫、骨吸収、腫瘍の湿潤・転移等である。
【００４６】本発明のエスクレチン誘導体又は製剤学的に許容することのできるその塩を有効成分とするマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の製剤形態は、一般的な形態でよい。前記誘導体単独、又は前記誘導体と製剤上許容し得る担体若しくは希釈剤との混合物のいずれでも、製剤として使用することができる。製剤中の有効成分の量も限定されるものではないが、例えば、０．０１〜１００重量％、好ましくは０．１〜７０重量％であることができる。本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、経口又は非経口のいずれでも投与することができる。本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の投与量は、対象（哺乳動物、特にはヒト）、年齢、個人差、病状等に依るので、特に限定されないが、例えば、一般にヒトを対象とする場合、本発明のエスクレチン誘導体の経口投与量は、１日当たり０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは０．５〜２００ｍｇ／ｋｇ（体重）であることができる。通常、１日量を、１回又は２〜４回に分けて投与することができる。
【００４７】
【作用】本発明によるエスクレチン誘導体は、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害作用を有するので、マトリックスメタロプロテアーゼが関与する各種の疾患の治療に有効である。例えば、関節症を例にとると、関節症には、慢性関節リウマチ、リウマチ熱、変形性関節症等がある。これらの慢性関節リウマチと変形性関節症では、病因、病態に大きな違いがあるが、いずれも最終的には、軟骨破壊により関節機能が障害される点では共通している。従って、軟骨破壊や組織破壊を抑制することができれば、病態の改善につながる。関節軟骨は、軟骨細胞と軟骨マトリックスから構成されている。軟骨マトリックスは、軟骨細胞が産生する線維性タンパク質であるタイプIIコラーゲンと、タンパク質多糖複合体であるプロテオグリカンとがヒアルロン酸と非共有的に結合し、複雑にからみあうことにより形成された３次元マトリックス構造であり、その中には多量の水分が保持されており、これにより正常の関節機能が維持されている。プロテオグリカンを構成する主な多糖類は、コンドロイチン硫酸とケラタン硫酸からなるグリコサミノグリカンである。慢性関節リウマチや変形性関節症のような病態では、コラゲナーゼ、ゼラチナーゼ、ストロムライシン、マトリライシン等のマトリックスプロテアーゼが活性化され、破壊を増大させることが知られている。従って、このマトリックスメタロプロテアーゼの阻害剤は、それらの疾患に対して有効であると考えられる。
【００４８】一方、転移性癌細胞は、異常な増殖性と血管新生誘導能、又は免疫応答からの忌避といった造腫瘍性細胞のもつ基本的な能力に加えて、異常な運動性と接着性、更に、細胞外マトリックス分解酵素の産生、浸潤及び転移部位での増殖、血管新生等の能力を備えている。これらのうち、湿潤、増殖、及び血管新生等のプロセスにおいても細胞外プロテアーゼが積極的に関与していることが明らかになっている。従って、これら細胞外マトリックスプロテアーゼの産生・分泌・活性化を抑える物質は癌の転移防止にも有用であると考えられる。
【００４９】本発明によるエスクレチン誘導体においては、エスクレチン化合物の６位及び７位水酸基の両方にカルバモイル基若しくは置換カルバモイル基を有しているか、あるいは６位及び７位水酸基の一方にカルバモイル基若しくは置換カルバモイル基を有し、他方に軟骨マトリックス成分と類似の単糖類を有しているので、生体内利用効率の高いマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤となる。
【００５０】
【実施例】以下、実施例によって本発明を更に具体的に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。
実施例１：６，７−ビス（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルオキシ）クマリン［I-1 ］の合成（工程１）エスクレチン（東京化成工業株式会社製）［XI-1］（３００ｍｇ）をピリジン（１２ｍｌ）に溶解し、塩化Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイル（０．６２ｍｌ）を加えて、６０℃に加熱した。同温度で４時間反応後、飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍｌ）を加え、クロロホルム（５０ｍｌ×３）にて抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｋｉｅｓｅｌ ｇｅｌ ５０ｇ；クロロホルム／メタノール＝１０／１）にて精製し、標記化合物（５３６．１ｍｇ、収率９９．４％）を白色固体として得た。
融点：１６０−１６１℃質量スペクトル（ｍ／ｅ，ＥＩ）：３２０（Ｍ+ ）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ，５００ＭＨｚ，δ ｐｐｍ）：３．０２ ａｎｄ ３．０８（２ｓ，６Ｈ，ＣＯＮＭｅ2 ），６．３９（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４），７．２６ ａｎｄ ７．３８（２ｓ，２Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−８），７．６３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ−ｄｉｓｋ，ν ｃｍ-1）：１７２５ｓ，１３９０ｍ，１１６０ｓ，１１５０ｓ，１１３０ｓ
【００５１】実施例２：７−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシクマリン［IV-2］の合成（工程２及び３）ナス型フラスコ（１００ｍｌ）に、エスクリン（１．０ｇ）、塩化ベンジル（１．０ｇ）、炭酸カリウム（０．７ｇ）、触媒量の１８−クラウン−６−エーテルとヨウ化カリウム、及びジメチルホルムアミド（４０ｍｌ）を加え、この混合物を６０℃で８時間攪拌しながら反応させた。反応混合物を減圧濃縮し、残渣を氷水中に注いだ。析出した結晶を濾取し、メタノールより再結晶して、７−ベンジルオキシ−６−Ｄ−グルコシルオキシクマリン〔VIII-2〕〔融点１８４−１８６℃、質量スペクトル（Ｍ+ ）４３０、収率８６．４％〕を得た。化合物〔VIII-2〕（０．６ｇ）を、メタノール（３５ｍｌ）−１０％塩酸（３５ｍｌ）混液中で、１時間加熱還流した。反応混合物を減圧濃縮し、結晶を濾取して、標記化合物〔IV-2〕（収率９０．３％）を得た。
融点：１９３−１９５℃質量スペクトル（Ｍ+ ）：２６８
【００５２】実施例３：２−アセトアミド−１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノース〔VI-2〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程４）ナス型フラスコ（５００ｍｌ）に、無水酢酸（１２．２５ｇ）と乾燥ピリジン（１８．９８ｇ）との混合溶液を加え、次に室温で少しずつＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン〔VII-2 〕（４．４３ｇ）を加えた。この溶液を室温で一晩攪拌した。反応液を氷水（１５０ｍｌ）に注いで、エーテル（１００ｍｌ）で２回抽出した。水層を減圧下、６５℃で濃縮乾固して、粗生成物（９．４０７ｇ）を得た。粗生成物を酢酸エチル（１５０ｍｌ）に溶解し、この溶液を水（５ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、ロータリーエバポレーターで減圧乾固して油状物質を得た。油状物質にエーテルを加えてつき崩すことにより、標記化合物（６．４７ｇ，収率８３．１％）を白色結晶として得た。
Ｒｆ：０．３９（酢酸エチル）
融点：１８５−１８７℃1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，δ ｐｐｍ）：１．９４（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ），２．０９（ｓ，３Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），４．００（ｍ，１Ｈ，Ｃ５−Ｈ），４．０７（ｄ，１Ｈ，Ｃ６−Ｈ），４．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｃ６−Ｈ），４．４８（ｄｔ，１Ｈ，Ｃ２−Ｈ），５．２３（ｍ，２Ｈ，Ｃ３，４−Ｈ），５．７２（ｄ，１Ｈ，ＮＨ），６．１７（ｄ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈ）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ，ν ｃｍ-1）：３３６０ｓ，３０２５ｍ，２９８０ｍ，１７４０ｓ，１６７５ｓ，１５２０ｓ，１４２５ｓ，１３８０ｓ，１２３０ｓ，１１３０ｓ，１０２５ｓ，９４０ｓ，８９０ｍ，８４０ｍ
【００５３】実施例４：２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−１−クロロ−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノース〔V-2 〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程５）ナス型フラスコ（５０ｍｌ）に無水酢酸（６ｍｌ）を加えた。この無水酢酸に、０℃で、乾燥塩化水素ガスを吹き込んで飽和させた。重量増加は約１．５ｇであった。この溶液に、実施例３で調製した２−アセトアミド−１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノース〔VI-2〕（２．０ｇ）を加え、この混合物を室温で６日間攪拌した。反応混合物に塩化メチレン（２５ｍｌ）を加えて、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍｌ）で２回洗浄した。集めた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後濃縮して、粗生成物（１．３２ｇ）を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー〔直径２．５ｃｍ×長さ１０．５ｃｍ、シリカゲル１５ｇ、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１：４）〕により分離精製して、標記化合物（８７１．７ｍｇ、収率４６．４％）を白色結晶として得た。
Ｒｆ：０．６７（酢酸エチル）
融点：１２５−１２６℃質量スペクトル（ｍ／ｅ）：７３１（２Ｍ＋１），３５６（１００），３２４，３０６，２２８，１６８，１５０1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，δ ｐｐｍ）：１．９９（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，６Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ），４．１４（ｄ，１Ｈ，Ｃ５−Ｈ），４．２８（ｍ，２Ｈ，Ｃ６−Ｈ），４．５４（ｄｔ，１Ｈ，Ｃ２），５．２２（ｔ，１Ｈ，Ｃ４−Ｈ），５．３３（ｔ，１Ｈ，Ｃ３−Ｈ），５．９８（ｄ，１Ｈ），６．１９（ｄ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈ）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ，ν ｃｍ-1）：３３００ｗ，１７５０ｓ，１６５０ｍ，１５５０ｍ，１４４０ｍ，１３８０ｍ，１２９５ｍ，１２３５ｓ，１２１５ｓ，１１２０ｍ，１０３５ｍ，９８０ｗ，９１８ｗ，８９５ｗ
【００５４】実施例５：２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−１−クロロ−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノース〔V-2 〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程６）ナス型フラスコ（２００ｍｌ）に塩化アセチル（２５ｍｌ）を入れ、攪拌しながら、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン〔VII-2 〕（１２．５ｇ）を少しずつ加えた。４時間後、反応液は発熱して、ゆるい還流が起こった。反応液を一晩攪拌すると淡赤色の粘稠な固体となった。この固体に塩化メチレン（１００ｍｌ）を加えてこの固体を溶解し、溶液を冷たい飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した。集めた有機層を蒸留水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後濃縮して、粗生成物（２３．８ｇ）を得た。粗生成物をエーテルから結晶化して、標記化合物（１６．０ｇ、収率７７％）を白色結晶として得た。
【００５５】実施例６：６−（β−２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIa-2〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程７）ナス型フラスコ（２５ｍｌ）に、前記実施例４又は５で調製した２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−１−クロロ−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノース〔V-2 〕（９１４．５ｍｇ）、前記実施例２で調製した７−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシクマリン〔IV-2〕（３３５．５ｍｇ）、及びクロロホルム（１０ｍｌ）を入れて、懸濁液とした。この懸濁液に、１．２５Ｎ−ＮａＯＨ（１２．５ｍｌ）に溶かした塩化ベンジルトリエチルアンモニウム（１１３．９ｍｇ）を加えて、アルゴン雰囲気下、３時間還流した後、室温まで放冷した。反応混合物を塩化メチレン（４０ｍｌ）で希釈した後、有機層を分離した。水層を塩化メチレン（２０ｍｌ）で抽出した。集めた有機層を飽和食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後濃縮して、粗生成物（１．１６ｇ）を得た。粗生成物をメタノール／塩化メチレンで処理して、標記化合物（１５０．４ｍｇ、収率２１．１％）を白色針状結晶として得た。
Ｒｆ：０．５６（酢酸エチル）
融点：２２４−２２７℃質量スペクトル（ｍ／ｅ）：５９７，５３７，５２３，４１９，３２９，２６８，２０９，１６７，１２５（１００）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，δ ｐｐｍ）：１．５４（ｓ，３Ｈ），２．０２（ｓ，３Ｈ）、２．０３（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），３．０７（ｍ，１Ｈ，Ｃ５−Ｈ），４．１４（ｍ，２Ｈ，Ｃ−６，Ｃ２−Ｈ），４．２６（ｄｄ，１Ｈ，Ｃ６−Ｈ），５．０４（ｄ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ，ｂｅｎｚｙｌ），５．１１（ｑ，１Ｈ，Ｃ４−Ｈ），５．２３（ｔ，１Ｈ，Ｃ３−Ｈ），６．２９（ｄ，Ｃ３），６．９２（ｓ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），７．４６（ｍ，５Ｈ），７．５９（ｄ，Ｃ４）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ，ν ｃｍ-1）：３３００ｍ，２９７５ｗ，２９００ｗ，１７４０ｓ，１６６０ｓ，１６２０ｓ，１５５５ｍ，１５２０ｍ，１４４０ｍ，１３８０ｓ，１２３０ｓ，１１８０ｍ，１１４０ｍ，１１２０ｍ，１０６０ｓ，１０４０ｓ，９３０ｍ，９００ｍ，８７０ｍ，８１０ｓ，７３０ｍ
【００５６】実施例７：６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIb-2〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程９）ナス型フラスコ（１００ｍｌ）に、前記実施例６で調製した６−（β−２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIa-2〕（３５１ｍｇ）とメタノール（９０ｍｌ）を入れ、懸濁液とした。この懸濁液に、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液（２８％）を５滴加えて、４０℃まで加熱し、攪拌した。反応液は、１０分後に透明となり、２０分後に白色沈澱を生じた。反応液を室温で１．５時間攪拌後、０．１Ｎ−ＨＣｌで中和した。沈澱をグラスフィルターで濾取し、メタノールで洗浄後、減圧下に乾燥して、標記化合物（２６２．６ｍｇ、収率９５．１％）を白色針状結晶として得た。
融点：２４４−２４６℃Ｒｆ：０．７３（クロロホルム／メタノール／水（７：３：０．５））
質量スペクトル（ｍ／ｅ）：４７２（Ｍ＋１），３８２，２６９，２５３，２０４，１８５，１６８，１３８，９１1Ｈ−ＮＭＲ（ｄ6 −ＤＭＳＯ，δ ｐｐｍ）：１．７３（ｓ，３Ｈ，Ｎ−Ａｃ），３．２３（ｑ，１Ｈ），３．４３（ｔ，１Ｈ），３．５１（ｍ，１Ｈ），３．７３（ｑ，２Ｈ），５．０２（ｄ，１Ｈ），５．２５（ｓ，２Ｈ，ｂｅｎｚｙｌ），６．３０（ｄ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ），７．１２（ｓ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ），７．３１（ｔ，１Ｈ，ｐａｒａ−ｂｅｎｚｙｌ），７．３９（ｔ，２Ｈ，ｍｅｔａ−ｂｅｎｚｙｌ），７．４３（ｓ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ），７．４８（ｄ，２Ｈ），７．７９（ｄ，１Ｈ，ＡｃＮＨ），７．８９（ｄ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ，ν ｃｍ-1）：３４０５ｓ，３２７５ｍ，２９００ｗ，１７５０ｓ，１６６５ｓ，１６１５ｍ，１５４０ｍ，１４３０ｍ，１３９０ｍ，１３８０ｍ，１３１０ｓ，１２７０ｓ，１２４０ｗ，１１７５ｍ，１１１０ｍ，１０９０ｓ
【００５７】実施例８：６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ヒドロキシクマリン〔IIb-2 〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程１０）ナス型フラスコ（１００ｍｌ）に、前記実施例７で調製した６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIb-2〕（３１５．５ｍｇ）と１５％の含水ジメトキシエタン（６０ｍｌ）を入れ、溶液とした。この溶液に１０％パラジウム−炭素（以下、Ｐｄ／Ｃと称する ）（２４ｍｇ）を触媒として加えて、この混合物を水素雰囲気下、室温で１時間攪拌した。反応混合物から、減圧下溶媒を除去して、灰色の粉末を得た。この粉末に、水／テトラヒドロフラン／メタノール（５：１：０．２）混合液（４３５ｍｌ）を加え、７５℃に加熱して溶解した。触媒を濾別し、濾液を５０ｍｌまで濃縮した後、冷蔵庫に一晩放置し、標記化合物（２２８．０ｍｇ、収率８９．３％）を白色針状結晶として得た。Ｒｆ：０．５６（クロロホルム／メタノール／水（７：３：０．５））
融点：２６５−２６６℃元素分析 Ｃ17Ｈ19Ｏ9 Ｎとして実験値： Ｃ ５３．２５， Ｈ ４．９１， Ｎ ３．５５理論値： Ｃ ５３．５５， Ｈ ５．０２， Ｎ ３．６７1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，δ ｐｐｍ）：１．８３（ｓ，３Ｈ），３．２３（ｔ，１Ｈ，Ｃ３−Ｈ），３．３５（ｍ，１Ｈ），３．４８（ｔ，１Ｈ），３．５２（ｍ，１Ｈ），５．００（ｄ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈ），６．２４（ｄ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ），６．８３（ｓ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ），７．３６（ｓ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ），７．８８（ｄ，１Ｈ）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ，ν ｃｍ-1）：３３７５ｓ，３２４０ｗ，２９３０ｗ，１６４０ｓ，１６６５ｓ，１６００ｓ，１５５０ｍ，１４０５ｍ，１２７５ｍ，１２５５ｍ，１２２５ｗ，１１７２ｗ，１１４０ｗ，１１２０ｍ，１０８５ｍ，１０４２ｍ，１０２５ｗ，９９５ｍ，９３０ｍ，８９０ｍ，８６１ｍ，８２０ｍ
【００５８】実施例９：６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルオキシ）クマリン〔Ib-2〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程１３）前記実施例８で調製した６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ヒドロキシクマリン〔IIb-2 〕（７．３０ｇ）をピリジン（３６５ｍｌ）に懸濁した。この懸濁液に塩化Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイル（１．８５ｍｌ）を加え、６０℃で一昼夜攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し、残渣にエタノールを加えて加熱した。熱時濾過によりピリジン塩酸塩を除き、続いてエタノールより再結晶して、標記化合物（４．８０ｇ、収率５５．４％）を白色固体として得た。
融点：１４８．０−１４９．０℃質量スペクトル（ＥＩ、ｍ／ｅ）：４５３（Ｍ＋１）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ，５００ＭＨｚ，δ ｐｐｍ）：１．７９（ｓ，３Ｈ，Ａｃ），２．９０ａｎｄ３．０１（２ｓ，６Ｈ，Ｍｅ2 ＮＣＯ），３．２２−３．２８（ｍ，Ｈ−４’），３．３４−３．４１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３’，Ｈ−５’），３．５０−３．５６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ’），３．７０−３．７９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−６ａ’），４．５９（ｔ，１Ｈ，６’−ＯＨ），４．９８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’），５．０５（ｄ，１Ｈ，３’−ＯＨ），５．１２（ｄ，１Ｈ，４’−ＯＨ），６．４６（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４’），７．２５ａｎｄ７．４４（２ｓ，２Ｈ，Ａｒ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＮＨＡｃ），７．９８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ−ｄｉｓｋ，ν ｃｍ-1）：３５５０ｓ，３４５０ｓ，１７４５ｓ，１７２５ｓ，１１７０ｍ，１１００ｍ
【００５９】実施例１０：６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIb-2p 〕〔糖成分がグルコサミンの場合の工程１０’（アシル基１個の導入）〕
前記実施例７で調製した６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIb-2〕（１０．０ｇ）を無水ピリジン（２００ｍｌ）に懸濁し、無水ピバリン酸（４．７４ｇ）及び４−ジメチルアミノピリジン（２．５９ｇ）を加え、室温で３日間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー〔Ｋｉｅｓｅｌ ｇｅｌ ６０（５００ｇ），クロロホルム／メタノール＝１５／１〕により精製し、標記化合物（９．１１ｇ、収率７７％）を白色固体として得た。
融点：１７９．５−１８２．０℃質量スペクトル（ｍ／ｅ，ＦＡＢ）：５５６（Ｍ＋１）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，５００ＭＨｚ，δ ｐｐｍ）：１．０６（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），１．７６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ＣＯ−），３．２４（ｔｄ，１Ｈ，Ｈ−４’），３．４８（ｂｒ ｑ，１Ｈ，Ｈ−３’），３．５７−３．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’），３．７２（ｑ，１Ｈ，Ｈ−２’），４．０５（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６’ａ），４．３６（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６’ｂ），５．１２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’），５．１８（ｄ，１Ｈ，３’−ＯＨ），５．２４（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨ2−），５．２７（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨ2 −），５．３８（ｄ，１Ｈ，４’−ＯＨ），６．３１（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４），７．１８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−５）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ ｄｉｓｋ，ν ｃｍ-1）：３４００ｍ，１７２５ｓ，１６５５ｍ，１６１５ｍ，１２７５ｓ
【００６０】実施例１１：６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ヒドロキシクマリン〔IIb-2P〕（糖成分がグルコサミンの場合の工程１０類似の工程）前記実施例１０で調製した６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIb-2P 〕（５３２ｍｇ）をジメトキシエタン（１６ｍｌ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ（３０ｍｇ）を加え、この混合物を水素雰囲気下で室温で３時間攪拌した。反応終了後、濾過により触媒を除去し、溶媒を減圧留去することにより淡黄色固体（４４３ｍｇ）を得た。この固体を熱水から再結晶し、標記化合物（３５８ｍｇ、収率７７％）を白色針状結晶として得た。
融点：１３３．０−１３６．０℃質量スペクトル（ｍ／ｅ，ＦＡＢ）：４６６（Ｍ＋１）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ，δ ｐｐｍ）：１．０６（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），１．８４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ＣＯ−），３．２３（ｔｄ，１Ｈ，Ｈ−４’），３．５３（ｂｒ ｑ，１Ｈ，Ｈ−３’），３．５７−３．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’），３．６２（ｑ，１Ｈ，Ｈ−２’），４．０４（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６’ａ），４．３９（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６’ｂ），５．０７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’），５．１９（ｄ，１Ｈ，３’−ＯＨ），５．３８（ｄ，１Ｈ，４’−ＯＨ），６．２４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４），６．８１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−５），７．２８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−８），７．９０（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３），７．９４（ｄ，１Ｈ，−ＮＨＣＯＣＨ3 ），９．９１（ｂｒ ｓ，１Ｈ，ＡｒＯＨ）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ ｄｉｓｋ，ν ｃｍ-1）：３４００ｓ，１７２０ｓ，１６５０ｓ，１６２０ｓ，１５６５ｓ，１３００ｓ，１２８０ｓ，１２５５ｓ，１１７０ｍ，１１４０ｍ，１０７０ｓ
【００６１】実施例１２：６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−（Ｎ，Ｎ−カルバモイルオキシ）クマリン〔Ib-2P 〕（糖成分がグルコサミンの場合の工程１３類似の工程）前記実施例１１で調製した６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ヒドロキシクマリン〔IIb-2P〕（６１８ｍｇ）をピリジン（２５ｍｌ）に溶解した。この溶液に塩化Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイル（１４６ｍｇ）を加え、７０℃で５．５時間反応させた。反応混合物を減圧濃縮し、残渣（固体）を得た。この固体を水から再結晶して、標記化合物（３７０ｍｇ、収率５２％）を白色結晶として得た。
Ｒｆ：０．３９（クロロホルム／メタノール（１０：２））
融点：２４４−２４５℃（分解）
質量スペクトル（ｍ／ｅ，ＦＡＢ）：５３７（Ｍ＋１）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ，５００ＭＨｚ，δ ｐｐｍ）：１．１１（ｓ，９Ｈ，（ＣＨ3 ）3 Ｃ−），１．８０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ＣＯ−），２．９０（ｓ，３Ｈ，（ＣＨ3 ）2 Ｎ−），３．０２（ｓ，３Ｈ，（ＣＨ3 ）2 Ｎ−），３．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’），３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’），３．７２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’），３．７６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’），４．０３（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６’ａ），４．３９（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６’ｂ），５．０７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’），５．１７（ｄ，１Ｈ，３−ＯＨ），５．４１（ｄ，１Ｈ，４−ＯＨ），６．４８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４），７．２６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−５），７．４４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−８），７．７３（ｄ，１Ｈ，−ＣＯＮＨ−），７．９２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ−ｄｉｓｋ，ν ｃｍ-1）：３３７５ｓ，２９７０ｗ，２９１５ｗ，２８７５ｗ，１７４０ｓ，１７２０ｓ，１６５５ｍ，１５４５ｍ，１４３０ｍ，１３８０ｍ，１２８５ｓ，１２６０ｍ，１１７０ｓ，１１４０ｍ，１０９０ｍ，１０５０ｍ
【００６２】実施例１３：エスクレチン誘導体の急性毒性試験本発明のエスクレチン誘導体の急性毒性について、Ｃｒｊ：ＣＤ−１（ＩＣＲ）雄性マウス（６週齢）及びＷｉｓｔａｒ雄性ラット（６週齢）を用いて検討した。６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルオキシ）クマリン〔Ib-2〕（実施例９）を１，０００及び２，０００ｍｇ／ｋｇの量で経口投与した後、７日間観察したところ、死亡例は観察されなかった。また、一般状態及び体重変化に関しても、対照群と比較して何等変化は観察されなかった。他の本発明のエスクレチン誘導体、すなわち、６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−（Ｎ，Ｎ−カルバモイルオキシ）クマリン〔Ib-2P 〕についても同様であった。なお、本実験においては各群２匹の動物を使用した。
【００６３】実施例１４：ウサギ軟骨器官培養系における間質型コラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）の産生阻害作用ウサギ（ニュージーランドホワイト、雄、６週齢）の肩及び膝の関節軟骨を採取し、細片した後、０．２％ラクトアルブミン含有ダルベッコＭＥＭ培養液を用いて試験を開始した。試験薬剤を、ジメチルスルオキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した後、培養液に添加した。ＤＭＳＯの濃度は、培養液に対して０．２５重量％とした。薬剤添加２時間後に、刺激剤としてインターロイキン−１α（以下、ＩＬ−１αと称する）を１００ｕｎｉｔ／ｍｌ添加し、次いで４８時間培養を行った。培養後の培養上清を用いて、ＭＭＰ−１の活性を測定した。ＭＭＰ−１の測定には、コラーゲン技術研修会製のコラゲノキット（ＣＬＮ−１００）を用いた。なお、結果については、１群につきｎ＝４で試験して、その平均値±標準誤差で表示した。本発明のエスクレチン誘導体としては、６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルオキシ）クマリン〔Ib-2〕を用いた。結果を図１に示す。図１の横軸は、ＩＬ−１αのみを添加した時のＭＭＰ−１の産生量に対する、ＩＬ−１α及び薬剤の両方を添加した時のＭＭＰ−１産生量の割合（％）である。コントロールは、ＩＬ−１αも薬剤も添加しない場合であり、ＭＭＰ−１はほとんど産生しなかった。ＩＬ−１αのみを添加すると、ＭＭＰ−１が産生された。これに対して、本発明のエスクレチン誘導体〔Ib-2〕はＩＬ−１αのみを添加した時のＭＭＰ−１産生量を抑制している。
【００６４】実施例１５：マウスＦＨＣモデルにおける薬物動態学的解析（１）モデルの作製本モデルの作製は、Ｄ．Ａ．Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙ等の方法を用いて行った（Ｄ．Ａ．Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｇｅｎｔｓ Ａｃｔｉｏｎｓ，ｖｏｌ．３８，ｐ．１２６−１３４，１９９３参照）。Ｓ．Ｄ．系雄性ラットの左右の大腿骨頭軟骨（以下、ＦＨＣと称する）を、クリーンベンチ内で無菌的に摘出した。摘出したＦＨＣを、抗生物質を含むＨａｍＦ−１２培養液で洗い、湿重量を測定した。重量測定後、ＦＨＣを約１ｃｍ四方のコットン２枚に包み、埋め込み時まで培養液中で氷冷した。このＦＨＣを、背部を剃毛したＢＡＬＢ／Ｃ雌性マウスの背部皮下に無菌的に埋め込み、切開部位を縫合後、手術用瞬間接着剤（商品名：アロンアルファー、東亜合成社製）で完全に塞いだ。
【００６５】（２）エスクレチン及び６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルオキシ）クマリン〔Ib-2〕投与後のＦＨＣ中での薬物動態学的解析上記マウスＦＨＣモデルを用い、薬物動態学的にエスクレチンと本発明のエスクレチン誘導体［Ib-2］との比較を行った。エスクレチン１８７ｍｇ／ｋｇ又はそれと等モル量の本発明のエスクレチン誘導体［Ib-2］５３４ｍｇ／ｋｇを、ＦＨＣ埋め込み３日後に、経口投与した。投与後、経時的にＦＨＣを回収してパパインで分解後、ＦＨＣに取り込まれた薬剤量を高速液体クロマトグラフィーで分析した。なお、本実験においては各群３匹のマウスを使用した。結果を図２に示す。図２で本発明のエスクレチン誘導体［Ib-2］を投与した時の取り込み量を●、エスクレチンを投与した時の取り込み量を○で示す。図２に示すように、本発明のエスクレチン誘導体［Ib-2］の方が、エスクレチンと比較して高濃度の化合物がＦＨＣ中に長時間取り込まれ、滞留することが明らかとなった。
【００６６】
【発明の効果】本発明の新規エスクレチン誘導体又はその塩は、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害作用を有する。本発明の新規エスクレチン誘導体又はその塩は、エスクレチン、４−アルキルエスクレチン等と比較して、軟骨マトリックスへの取り込みや親和性及び局所での薬物の滞留性が向上し、生体内利用効率が高く、更に低毒性である。従って、本発明のエスクレチン誘導体又はその塩は、広くマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤として、癌の浸潤・転移、糸球体腎炎、骨吸収症、関節症（例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症、肩関節周囲炎、頚肩腕症候群、腰痛症等）、角膜潰瘍、創傷、肉芽腫、歯周病、皮膚水泡性疾患、肺気腫等の治療に極めて有用な用途を有する。
【図面の簡単な説明】
【図１】本明細書の実施例１４で行ったウサギ軟骨器官培養系における間質型コラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）の産生抑制作用を示すグラフである。ＩＬ−１αのみを添加した時のＭＭＰ−１の産生量を１００％として、それに対するＩＬ−１α及び供試化合物の両方を添加した時のＭＭＰ−１の産生量の割合（％）で示してある。
【図２】本明細書の実施例１５で行ったマウスＦＨＣモデルにおける、大腿骨頭軟骨（ＦＨＣ）中への本発明化合物又はエスクレチンの各取り込み量を示すグラフである。
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規なエスクレチン誘導体、その製造方法、及び前記エスクレチン誘導体を含有するマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】マトリックスメタロプロテアーゼ（matrix metalloproteinase；以下、ＭＭＰｓとも称する）は、細胞外マトリックスのタンパク質成分を分解する金属酵素の総称である。ＭＭＰｓは、通常、以下の４群に分類されている。すなわち、コラゲナーゼ群〔例えば、間質性コラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）及び白血球コラゲナーゼ（ＭＭＰ−８）〕、ゼラチナーゼ／ＩＶ型コラゲナーゼ群〔例えば、ゼラチナーゼＡ（ＭＭＰ−２）及びゼラチナーゼＢ（ＭＭＰ−９）〕、ストロムライシン群〔例えば、ストロムライシン−１（ＭＭＰ−３）、ストロムライシン−２（ＭＭＰ−１０）及びストロムライシン−３（ＭＭＰ−１１）〕、及びその他の群〔例えば、マトリライシン（ＭＭＰ−７）〕である。近年、これらのＭＭＰｓと各種疾患との関係が徐々に明らかになってきている。例えば、岡田ら〔マトリックスメタロプロテアーゼと炎症：組織培養、１９（１１）３８６−３９０、１９９３〕は、（ａ）慢性関節リウマチや変形性関節症の滑膜及び関節軟骨組織、（ｂ）角膜潰瘍、（ｃ）創傷治癒、（ｄ）肉芽腫、（ｅ）歯周囲炎、（ｆ）皮膚水泡性疾患、（ｇ）糸球体腎炎、（ｈ）肺気腫、（ｉ）病的骨吸収、及び（ｊ）癌組織の浸潤・転移等の病的組織ではＭＭＰｓが深く関与している可能性を紹介している。例えば、腫瘍組織や炎症局所ではこれらＭＭＰｓの産生が上昇していることが遺伝子及びタンパク質レベルで確認されている。従って、ＭＭＰｓの産生や活性を阻害することのできる物質は、これらの各種疾患に対して何らかの有効な作用を示すことが期待されている。従来、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤としては、これらの酵素と類似の構造をもつペプチド（例えば、特表平４−５０１４２３号公報）やヒドロキサム酸（例えば、特開平６−２５６２９３号公報）が知られていた。しかしながら、これらは、加水分解を受け易く、効果が持続しにくいという欠点をもっていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的は、従来のペプチド系化合物等のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤とは別異の化合物で、標的組織への親和性及び滞留性を向上させ、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害作用が持続する新規の化合物を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】前記の目的は、本発明により、一般式（Ｉ）：
【化６】
〔式中、Ｒ1 及びＲ2 はそれぞれ独立に、−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 、単糖類残基、又はアシル化された単糖類残基であって、Ｒ1 又はＲ2 の少なくとも１方は−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 であるものとし、Ｒ4 及びＲ5 はそれぞれ独立に、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基若しくはアラルキル基であるか、又はＲ4 とＲ5 とはそれらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基を形成していることができるものとし、Ｒ3 は−ＣＯＯＲ8 、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基、又はアラルキル基であって、Ｒ3 の結合位置は３位又は４位であることができるものとし、Ｒ8 は水素原子又はアルキル基である〕で表されるエスクレチン誘導体又はその塩によって達成することができる。また、本発明は、一般式（XI）
【化７】
（式中、Ｒ3 は前記と同じ意味である）で表される化合物、一般式（II）
【化８】
（式中、Ｒ3 は前記と同じ意味であり、Ｒ7 は単糖類残基又はアシル化された単糖類残基である）で表される化合物、又は一般式（II’）
【化９】
（式中、Ｒ3 及びはＲ6 は前記と同じ意味である）で表される化合物と、一般式（Ｘ）
【化１０】
Ｒ5 （Ｒ4 ）ＮＣＯＸ （Ｘ）
（式中、Ｘはハロゲン基であり、Ｒ4 及びＲ5 は前記と同じ意味である）で表される化合物とを反応させることを特徴とする、前記一般式（Ｉ）で表されるエスクレチン誘導体又はその塩の製造方法に関する。更に、本発明は、前記一般式（Ｉ）で表されるエスクレチン誘導体又は製剤学的に許容することのできるその塩を含有するマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤にも関する。
【０００５】本明細書において単糖類残基とは、単糖類化合物の１位の水酸基を除いた残基である。これらの単糖類は、（ＣＨ2 Ｏ）ｎ［ｎは３以上の整数］で表される化合物だけでなく、それらの誘導体であるデオキシ糖、アミノ糖、糖酸、糖アルコール等を含み、更に硫酸エステル、燐酸エステル等のエステル類、及びこれらのエステル類の塩類、メチルエーテル等のエーテル類、アミノ糖若しくは糖酸の塩類等を含む。単糖類の具体例は、例えば、水野 卓・西沢一俊共著「図解糖質化学便覧」共立出版株式会社（１９７１）に記載されている化合物をあげることができる。
【０００６】好ましい単糖類は、ペントース又はヘキソースである。ペントースで好ましい例は、アラビノース、キシロース、リボース、又はデオキシリボースである。ヘキソースで好ましい例は、マンノース、アロース、アルトロース、タロース、グルコース、ガラクトース、イドース、グロース、フルクトース、ラムノース、フコース、グルコサミン、Ｎ−アシルグルコサミン、ガラクトサミン、Ｎ−アシルガラクトサミン、Ｎ−アシルムラミン酸、グルクロン酸、グロン酸、イズロン酸、アスコルビン酸、マンニット、又はソルビット等である。これらの単糖類の可能な硫酸エステル、燐酸エステル、及び塩類も含まれる。より好ましい単糖類は、マンノース、グルコース、ガラクトース、フルクトース、ラムノース、フコース、グルコサミン，Ｎ−アシルグルコサミン、ガラクトサミン、Ｎ−アシルガラクトサミン、又はグルクロン酸である。これらの単糖類の可能な硫酸エステル、燐酸エステル、及び塩類も含まれる。更により好ましい単糖類は、グルコース、ガラクトース、ラムノース、Ｎ−アシルグルコサミン、Ｎ−アシルガラクトサミン、又はグルクロン酸である。これらの単糖類の可能な硫酸エステル、燐酸エステル、及び塩類も含まれる。Ｎ−アシル糖のアシル基は、好ましくは炭素数２〜２０のアシル基、より好ましくは炭素数２〜５のアシル基、更により好ましくはアセチル基である。
【０００７】本発明のエスクレチン誘導体に含まれるアシル化された単糖類残基は、上記の単糖類残基の水酸基の少なくとも１個がアシル化されたものである。アシル化された単糖類残基のアシル基は、好ましくは炭素数２〜２０のアシル基、より好ましくは炭素数２〜６のアシル基、更により好ましくはアセチル基又はピバロイル基である。１個又は全ての水酸基がアシル化された単糖類残基が好ましく、全ての水酸基がアセチル化された単糖類残基が特に好ましい。また、ヘキソースの１個の水酸基がアシル化される場合、６位の水酸基のアシル化が好ましく、６位の水酸基がピバロイル化されたヘキソース残基が最も好ましい。
【０００８】本発明のエスクレチン誘導体に含まれる単糖類及びアシル化された単糖類は、Ｄ−体又はＬ−体のいずれでもよく、また、ピラノース型又はフラノース型のいずれでもよい。本発明のエスクレチン誘導体において、エスクレチン部分と単糖類残基又はアシル化された単糖類残基との結合は、グリコシド結合である。グリコシド１位の立体配置は、α−アノマー又はβ−アノマーのいずれでもよい。
【０００９】本発明のエスクレチン誘導体に含まれる−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 において、Ｒ4及びＲ5 はそれぞれ独立に、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基若しくはアラルキル基であるか、又はＲ4 とＲ5 とはそれらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基を形成していることができるものとする。
【００１０】前記のＲ4 及びＲ5 としてのアルキル基は、好ましくは脂肪族アルキル基、より好ましくは炭素数１〜４個の低級アルキル基、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基又はｔ−ブチル基であり、メチル基又はエチル基が特に好ましく、メチル基が最も好ましい。これらのアルキル基は、１個又は２個以上の置換基、例えば、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子）及び／又は水酸基で置換されていることができ、具体的にはヒドロキシメチル基、三フッ化メチル基又はクロルエチル基などが好ましい。Ｒ4 及びＲ5 のアリール基は、好ましくは炭素数６〜１２個のアリール基、例えば、フェニル基、ナフチル基、又はビフェニル基であり、これらのアリール基は、１個又は２個以上の置換基、例えば、炭素数１〜４個の低級アルキル基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子）及び／又は水酸基で置換されていることができる。フェニル基又は置換フェニル基が好ましい。更に、Ｒ4 及びＲ5 としてのアラルキル基は、好ましくは炭素数６〜１２個のアリール基で置換された炭素数１〜４個の低級アルキル基であり、例えば、ベンジル基、フェニルエチル基、フェニルプロピル基、又はフェニルブチル基である。前記アラルキル基のアリール部分も１個又は２個以上の置換基、例えば、炭素数１〜４個の低級アルキル基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子）及び／又は水酸基で置換されていてもよく、ベンジル基又は置換ベンジル基が好ましい。
【００１１】前記のＲ4 とＲ5 とが一緒になって形成された３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基は、場合により１個以上のヘテロ原子（例えば、窒素原子、酸素原子及び／又はイオウ原子）が介在していることのあるアルキレンアミノ基であり、例えば、１−アゼチジニル基（ＮＣ3 Ｈ6 ）、１−ピロリジニル基（ＮＣ4 Ｈ8 ）、ピペリジノ基（ＮＣ5 Ｈ10）、モルホリノ基（ＮＣ4 Ｈ8 Ｏ）、チオモルホリノ基（ＮＣ4 Ｈ8 Ｓ）又は１−ピペラジニル基（ＮＣ4 Ｈ8 ＮＨ）を挙げることができる。
【００１２】本発明のエスクレチン誘導体に含まれるＲ3 は、−ＣＯＯＲ8 （Ｒ8 は水素原子又はアルキル基である）、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基、又はアラルキル基であって、クマリン環の３位又は４位の炭素原子と結合している。以下、本明細書中において、クマリン環の３位に置換基を有するエスクレチン化合物を３−置換エスクレチン化合物と、あるいは、クマリン環の４位に置換基を有するエスクレチン化合物を４−置換エスクレチン化合物と称することがある。前記のＲ3 の−ＣＯＯＲ8 は、カルボキシル基又はそのアルキルエステル基であり、Ｒ8 のアルキル基は、好ましくは脂肪族アルキル基、より好ましくは炭素数１〜４個の低級アルキル基（例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基又はｔ−ブチル基）である。
【００１３】前記のＲ3 のアルキル基は、好ましくは脂肪族アルキル基、より好ましくは炭素数１〜４個の低級アルキル基、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基又はｔ−ブチル基であり、メチル基又はエチル基が特に好ましく、メチル基が最も好ましい。前記のＲ3 のアリール基は、好ましくは炭素数６〜１２個のアリール基、例えば、フェニル基、ナフチル基、又はビフェニル基であり、これらのアリール基は、１個又は２個以上の置換基、例えば、炭素数１〜４個の低級アルキル基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子）及び／又は水酸基で置換されていることができる。フェニル基又は置換フェニル基が好ましい。更に、前記のＲ3 のアラルキル基は、好ましくは炭素数６〜１２個のアリール基で置換された炭素数１〜４個の低級アルキル基であり、例えば、ベンジル基、フェニルエチル基、フェニルプロピル基、又はフェニルブチル基である。前記アラルキル基のアリール部分も１個又は２個以上の置換基、例えば、炭素数１〜４個の低級アルキル基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子）及び／又は水酸基で置換されていてもよく、ベンジル基又は置換ベンジル基が好ましい。
【００１４】本発明のエスクレチン誘導体の塩は、糖の硫酸エステル又はリン酸エステル、ウロン酸等の糖酸のカルボキシル基、アミノ糖のアミノ基、エスクレチン骨格の３位又は４位の水酸基、アルキレンアミノ基に介在する窒素原子などに形成される。例えば、無機酸若しくは有機酸との塩や無機塩基若しくは有機塩基との塩が含まれ、製剤学的に許容される塩が好ましい。酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩又はｐ−トルエンスルホン酸塩、更には、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸又はフマル酸などのジカルボン酸塩、更に、酢酸、プロピオン酸又は酪酸などのモノカルボン酸塩等である。また、本発明のエスクレチン誘導体の塩の形成に適した無機塩基は、例えば、アンモニア、カリウム、ナトリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム等の水酸化物、炭酸塩及び重炭酸塩等である。有機塩基との塩としては、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリエチルアミンのようなモノ−、ジ−又はトリ−アルキルアミン塩、モノ−、ジ−又はトリ−ヒドロキシアルキルアミン塩、グアニジン塩、Ｎ−メチルグルコサミン塩、アミノ酸塩等である。
【００１５】本発明において、前記一般式（Ｉ）の各基Ｒ1 、Ｒ2 、及びＲ3 の定義に含まれるすべての基は、それぞれ独立に任意の１つの基を選択して、それらを任意の別の基と組み合わせることができる。従って、前記一般式（Ｉ）で表されるエスクレチン誘導体には、それら任意に選択された基のすべての可能な組み合わせから構成されるすべての新規化合物が含まれる。本発明の化合物の具体例としては、表１〜表４に示す化合物を挙げることができる。以下の表１〜表４で、Ｍｅはメチル基であり、Ｅｔはエチル基であり、ＮＣ4 Ｈ8 Ｏはモルホリノ基であり、ＮＡｃＧｌｃはＮ−アセチルグルコサミン残基であり、Ｐｉｖは６−ピバロイル化体であり、Ｇｌｃはグルコース残基であり、Ｇａｌはガラクトース残基であり、ＮＡｃＧａｌはＮ−アセチルガラクトサミン残基であり、ＧｌｃＵＡはグルクロン酸残基である。
【００１６】
【表１】
Ｒ1 （又はＲ2 ） Ｒ2 （又はＲ1 ） Ｒ3 CON(Me)2 CON(Me)2 H CON(Me)2 NAcGlc H CON(Me)2 PivNAcGlc H CON(Me)2 Glc H CON(Me)2 Gal H CON(Me)2 NAcGal H CON(Me)2 GlcUA H CON(Me)2 CON(Me)2 3-Me CON(Me)2 NAcGlc 3-Me CON(Me)2 PivNAcGlc 3-Me CON(Me)2 Glc 3-Me CON(Me)2 Gal 3-Me CON(Me)2 NAcGal 3-Me CON(Me)2 GlcUA 3-Me CON(Me)2 CON(Me)2 4-Me CON(Me)2 NAcGlc 4-Me CON(Me)2 PivNAcGlc 4-Me CON(Me)2 Glc 4-Me CON(Me)2 Gal 4-Me CON(Me)2 NAcGal 4-Me CON(Me)2 GlcUA 4-Me CON(Me)2 CON(Me)2 3-COOMe CON(Me)2 NAcGlc 3-COOMe CON(Me)2 PivNAcGlc 3-COOMe CON(Me)2 Glc 3-COOMe CON(Me)2 Gal 3-COOMe
【００１７】
【表２】
Ｒ1 （又はＲ2 ） Ｒ2 （又はＲ1 ） Ｒ3 CON(Me)2 NAcGal 3-COOMe CON(Me)2 GlcUA 3-COOMe CON(Et)2 CON(Et)2 H CON(Et)2 NAcGlc H CON(Et)2 PivNAcGlc H CON(Et)2 Glc H CON(Et)2 Gal H CON(Et)2 NAcGal H CON(Et)2 GlcUA H CON(Et)2 CON(Et)2 3-Me CON(Et)2 NAcGlc 3-Me CON(Et)2 PivNAcGlc 3-Me CON(Et)2 Glc 3-Me CON(Et)2 Gal 3-Me CON(Et)2 NAcGal 3-Me CON(Et)2 GlcUA 3-Me CON(Et)2 CON(Et)2 4-Me CON(Et)2 NAcGlc 4-Me CON(Et)2 PivNAcGlc 4-Me CON(Et)2 Glc 4-Me CON(Et)2 Gal 4-Me CON(Et)2 NAcGal 4-Me CON(Et)2 GlcUA 4-Me CON(Et)2 CON(Et)2 3-COOMe CON(Et)2 NAcGlc 3-COOMe CON(Et)2 PivNAcGlc 3-COOMe
【００１８】
【表３】
Ｒ1 （又はＲ2 ） Ｒ2 （又はＲ1 ） Ｒ3 CON(Et)2 Glc 3-COOMe CON(Et)2 Gal 3-COOMe CON(Et)2 NAcGal 3-COOMe CON(Et)2 GlcUA 3-COOMe CONC4H8O CONC4H8O H CONC4H8O NAcGlc H CONC4H8O PivNAcGlc H CONC4H8O Glc H CONC4H8O Gal H CONC4H8O NAcGal H CONC4H8O GlcUA H CONC4H8O CONC4H8O 3-Me CONC4H8O NAcGlc 3-Me CONC4H8O PivNAcGlc 3-Me CONC4H8O Glc 3-Me CONC4H8O Gal 3-Me CONC4H8O NAcGal 3-Me CONC4H8O GlcUA 3-Me CONC4H8O CONC4H8O 4-Me CONC4H8O NAcGlc 4-Me CONC4H8O PivNAcGlc 4-Me CONC4H8O Glc 4-Me CONC4H8O Gal 4-Me CONC4H8O NAcGal 4-Me CONC4H8O GlcUA 4-Me CONC4H8O CONC4H8O 3-COOMe
【００１９】
【表４】
Ｒ1 （又はＲ2 ） Ｒ2 （又はＲ1 ） Ｒ3 CONC4H8O NAcGlc 3-COOMe CONC4H8O PivNAcGlc 3-COOMe CONC4H8O Glc 3-COOMe CONC4H8O Gal 3-COOMe CONC4H8O NAcGal 3-COOMe CONC4H8O GlcUA 3-COOMe
【００２０】本発明のエスクレチン誘導体は、例えば、以下に示す方法により製造することができる。すなわち、一般式（XI）
【化１１】
（式中、Ｒ3 は前記と同じ意味である）で表される化合物、一般式（II）
【化１２】
（式中、Ｒ3 及びＲ6 は前記と同じ意味である）で表される化合物、又は一般式（II’）
【化１３】
（式中、Ｒ3 及びＲ6 は前記と同じ意味である）で表される化合物と、一般式（Ｘ）
【化１４】
Ｒ5 （Ｒ4 ）ＮＣＯＸ （Ｘ）
（式中、Ｘはハロゲン基であり、Ｒ4 及びＲ5 は前記と同じ意味である）で表される化合物とを反応させることによって調製することができる。
【００２１】すなわち、前記一般式（XI）で表される化合物と前記一般式（Ｘ）で表される化合物とを反応させることにより、クマリン環の６位及び７位に合計２個のカルバモイル基〔−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 〕を有する本発明のエスクレチン誘導体を得ることができる。また、前記一般式（II）で表される化合物と前記一般式（Ｘ）で表される化合物とを反応させることにより、クマリン環の６位に単糖類残基又はアシル化された単糖類残基を有し、７位にカルバモイル基を有する本発明のエスクレチン誘導体を得ることができる。更に、前記一般式（II’）で表される化合物と前記一般式（Ｘ）で表される化合物とを反応させることにより、クマリン環の６位にカルバモイル基を有し、７位に単糖類残基又はアシル化された単糖類残基を有する本発明のエスクレチン誘導体を得ることができる。その製造方法の代表例を、カルバモイル基〔−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 〕が２個の場合と１個の場合とに分けて、以下に詳細に説明する。
【００２２】（Ａ）カルバモイル基が２個の場合反応工程式（Ｉ）を以下に示す。
【化１５】
式中、Ｒ3 、Ｒ4 及びＲ5 は前記と同じ意味である。
【００２３】本反応工程式（Ｉ）の工程１は、エスクレチン又は３−置換若しくは４−置換エスクレチン化合物（XI）とハロゲン化カルバモイル化合物（好ましくは塩化カルバモイル化合物）（Ｘ）との反応で、カルバモイル基を６及び７−位に導入した本発明のエスクレチン誘導体（XIII）を得る反応工程である。塩化カルバモイル化合物は、通常試薬として、例えば、東京化成工業株式会社から入手することができる。上記一般式（Ｘ）におけるＲ4 とＲ5 とがそれらと結合している窒素原子と一緒になって形成した３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基である場合の塩化カルバモイル化合物は、対応する環状アミンとホスゲン等との反応から得ることができる。上記一般式（Ｘ）におけるＲ4 とＲ5 とがその他の置換基である場合の塩化カルバモイル化合物は、対応するアミンとホスゲン等との反応から得ることができる。
【００２４】エスクレチンは、試薬として、例えば、東京化成工業株式会社から入手することができる。３−置換又は４−置換エスクレチン化合物のうち、４−メチルエスクレチンは、試薬として、例えば、東京化成工業株式会社から入手することができる。更に、４−置換エスクレチン化合物は、一般的に、一般式(XII)
【化１６】
（式中、Ｒ3 は前記と同じ意味である）で表される化合物と無水酢酸と酢酸ナトリウムとを反応させるＫｏｓｔａｎｅｃｋｉ−Ｒｏｂｉｎｓｏｎ反応（Ｔ．Ｃ．Ｃｈａｄｈａ，Ｈ．Ｓ．Ｍａｈａｌ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９３３，ｐ．１４９５参照）により合成することができる。前記一般式(XII) 中でＲ3 が水素原子である化合物を用いると、同様の反応によりエスクレチンを合成することができる。更に、Ｒ3 が水酸基である４−置換エスクレチン化合物を得るには、Ｒ3 が保護基Ｂを有する水酸基−ＯＢ、例えばベンジルオキシ基等の化合物を用いて同様の反応により得たエスクレチン誘導体を水素化分解して保護基をはずすことにより合成することができる。この場合、保護基をもつ状態で工程１を行い、後で保護基をはずす方法が好ましい。
【００２５】３−置換又は４−置換エスクレチン化合物のうち、３−置換エスクレチン化合物は、一般にサリチルアルデヒドにＫｎｏｅｖｅｎａｇｅｌ反応を行なうと収率よく合成することができる。例えば、Ｅ．Ｃ．Ｈｏｒｎｉｎｇ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，６９，９６８（１９４７）に記載の
【化１７】
で表される反応、又はＤ．Ｇ．Ｃｒｏｓｂｙ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２７，３０８３（１９６２）に記載の
【化１８】
で表される反応により、３−置換エスクレチン化合物を得ることができる。
【００２６】工程１は、有機溶媒（例えば、ピリジン、トリエチルアミン、又はジイソプロピルエチルアミン）を用い、適当な塩基（例えば、ピリジン又はトリエチルアミン）の存在下に、１０〜１００℃で、０．１〜１００時間反応させて行うことができる。有機溶媒としてピリジンを用いると、ピリジンは塩基としても作用するので、他に塩基を加える必要がなくて都合がよい。
【００２７】（Ｂ）カルバモイル基が１個の場合一般式（Ｉ）で表される化合物のＲ1 がカルバモイル基であり、Ｒ2 が単糖類残基又はアシル化された単糖類残基であるエスクレチン誘導体を製造する場合の基本的な反応工程式（II）は次の通りである。
【化１９】
【００２８】上記反応工程式（II）の（２）〜（１３）を、以下に工程２〜１３として説明する。なお、上記反応工程式（II）は、各化合物の６位と７位の置換基をそれぞれ入れ換えれば、一般式（Ｉ）で表される化合物のＲ2 がカルバモイル基であり、Ｒ1 が単糖類残基又はアシル化された単糖類残基であるエスクレチン誘導体を製造する場合の基本的な反応工程式となる。以下、上記反応工程式は、この場合を含むものとして説明する。この反応工程式（II）においては、先ず７位（又は６位）の水酸基を保護した一般式（IV）で表される化合物を合成する。Ｒ3 が水素原子の場合、一般式（IV）で表される化合物は、エスクレチンの６位水酸基にグルコースが結合したエスクリン（すなわち７−ヒドロキシ−６−グルコシルオキシクマリン）（IX）又はエスクレチンの７位水酸基にグルコースが結合したシコリイン（すなわち６−ヒドロキシ−７−グルコシルオキシクマリン）を原料にして、まず水酸基を保護基で保護し（工程２）、次いで加水分解（工程３）を行うことにより、得ることができる。エスクリン及びシコリインは天然物であり、試薬として入手可能である。更に、エスクレチンを原料として、以下に記載する工程２と同様の反応工程により、水酸基２個のうち１個を保護基で保護したエスクレチン（IV）を合成することもできる。
【００２９】Ｒ3 が水素原子以外の場合は、前記のようにして得られる３−置換又は４−置換エスクレチン化合物を原料として、以下に記載する工程２と同様の反応工程により、水酸基２個のうち１個を保護基で保護した３−置換又は４−置換エスクレチン化合物（IV）を合成することができる。例えば、アルコール溶媒中、炭酸カリウム等の塩基触媒存在下に塩化ベンジルと反応させることにより、６位又は７位の水酸基をベンジル基で保護した３−置換又は４−置換エスクレチン化合物を容易に得ることができる。この場合、工程３を実施することなく、６位又は７位の水酸基を保護した化合物（IV）を得ることができる。
【００３０】（２）工程２本工程［反応工程式（II）の（２）］は、一般式（IX）で表されるエスクリン化合物（IX）（式中、Ｇｌｃはグルコース残基を表す）の７位の水酸基に保護基を導入して化合物（VIII）を得る反応工程である。化合物（IX）の代わりに、例えば、シコリインを原料にすれば、６位と７位の置換基が逆の化合物を得ることができる。この反応工程においては、水酸基の保護基Ｚとハロゲン原子Ｘからなる化合物ＺＸ（例えば、塩化ベンジル又は塩化ベンジルオキシカルボニル）と化合物（IX）（例えば、エスクリン又はシコリイン）とを有機溶媒中で塩基の存在下に、４〜８０℃で、０．５〜４８時間反応させて化合物（VIII）を得ることができる。この反応は、キレート剤、例えば、１８−クラウン−６−エーテルとヨウ化カリウムの存在下に行うことが好ましい。保護基Ｚとしては、水素化分解により除去することのできる基（例えば、ベンジル基、ベンジルオキシカルボニル基等）を用いることが好ましい。前記有機溶媒として、例えば、ジメチルホルムアミド、メタノール、エタノール等を用いることができ、前記塩基として、例えば、炭酸ナトリウムや炭酸カリウム等を用いることができる。
【００３１】（３）工程３本工程［反応工程式（II）の（３）］は、７位水酸基を保護したエスクリン化合物（VIII）を加水分解して、７位水酸基を保護したエスクレチン化合物（IV）を得る反応工程である。同様に、６位水酸基を保護したシコリイン化合物を加水分解して６位水酸基を保護したエスクレチン化合物を得ることができる。ハロゲン化水素酸等の酸水溶液及びアルコール等の有機溶媒の混合液と、７位水酸基を保護したエスクリン化合物（VIII）又は６位水酸基を保護したシコリイン化合物とを、４０〜１２０℃、好ましくは加熱還流下に、０．５〜１０時間反応させて、化合物（IV）を得ることができる。
【００３２】（４）工程４本工程［反応工程式（II）の（４）］は、単糖類のアシル化反応工程である。例えば、単糖類Ｒ61ＯＨ（VII)（式中、ＯＨは１位の水酸基を表し、Ｒ61は１位の水酸基以外に少なくとも１個の遊離の水酸基を有する単糖類残基を表す）と、酸無水物Ａ2 Ｏ（式中、Ａはアシル基を表す）若しくはハロゲン化アシルＡＸ（式中、Ａはアシル基であり、Ｘはハロゲン原子を表す）とを、ピリジン、水酸化ナトリウム等の塩基の存在下に、必要なら適当な溶媒、例えば、クロロホルム、メタノール、水等を用いて、反応させることにより、アシル化された単糖類Ｒ62ＯＡ（VI）（式中、Ｒ62は基Ｒ61の１位の水酸基以外の遊離の水酸基の少なくとも１個がアシル化された単糖類残基を表し、Ａは前記と同じ意味である）を得ることができる。反応温度は通常、−２０℃〜＋５０℃、好ましくは室温である。反応時間は通常、１時間〜２日間である。
【００３３】（５）工程５本工程［反応工程式（II）の（５）］は、アシル化された単糖類（VI）の１位のアシルオキシ基をハロゲン原子に置換する反応工程である。例えば、ガス状のハロゲン化水素ＨＸ（式中、Ｘはハロゲン原子を表す）を無水酢酸などのカルボン酸無水物Ａ2 Ｏ（式中、Ａはアシル基を表す）に溶解させて、アシル化された単糖類Ｒ62ＯＡ（VI）と反応させることにより、１位のアシルオキシ基をハロゲン原子で置換したアシル化された単糖類Ｒ62Ｘ（Ｖ）を得ることができる。反応温度は通常、−２０℃〜＋５０℃、好ましくは室温である。反応時間は通常、０．１時間〜１０日間である。
【００３４】（６）工程６本工程［反応工程式（II）の（６）］は、単糖類Ｒ61ＯＨ（VII ）から一段階反応で一般式Ｒ62Ｘ（Ｖ）で表される化合物を得る反応工程である。例えば、ハロゲン化アシルＡＸと単糖類Ｒ61ＯＨ（VII ）とを反応させて一般式Ｒ62Ｘ（Ｖ）で表される化合物を得ることができる。反応温度は通常、４℃〜８０℃である。反応時間は通常、０．５時間〜２日間である。なお、以上の工程２、４、５、及び６におけるＸは、同一のハロゲンである必要はない。
【００３５】（７）工程７本工程［反応工程式（II）の（７）］は、７位（又は６位）の水酸基を保護したエスクレチン化合物（IV）において、６位（又は７位）の保護されていない水酸基にアシル化された単糖類残基Ｒ62を導入する反応工程である。例えば、苛性アルカリ水溶液−アセトン溶液等のアルカリ水溶液を含む有機溶媒中で、一般式（IV）で表される化合物と単糖類誘導体（Ｖ）とを、４〜８０℃で、反応させて一般式（IIIa）で表される化合物を得ることができる。または、クロロホルム、アセトニトリル等の有機溶媒に一般式（IV）で表される化合物と単糖類誘導体（Ｖ）を溶解し、この溶液に、苛性アルカリ水溶液に溶解した有機基を有するハロゲン化アンモニウム化合物（相間移動触媒）又はトリエチルアミン等（塩基触媒）を、４〜５０℃で、滴下した後、４〜８０℃で、０．５時間〜１０日間反応させて一般式（IIIa）で表される化合物を得ることができる。この場合、苛性アルカリ水溶液としては、例えば、水酸化ナトリウム水溶液を用いることができ、有機基を有するハロゲン化アンモニウム化合物としては、例えば、塩化ベンジルトリエチルアンモニウムを用いることができる。なお、相間移動触媒とは、水層と有機層を自由に移動することのできる試薬である。
【００３６】（８）工程８本工程［反応工程式（II）の（８）］は、アシル化された単糖類残基Ｒ62及び水酸基保護基Ｚを有する化合物（IIIa）を水素化分解して、アシル化された単糖類残基Ｒ62を有する化合物（IIa ）を得る反応工程である。本反応は、パラジウム系又は白金系触媒存在下に、４〜８０℃で、０．５〜４８時間、水素ガスと反応させて行うことができる。パラジウム系触媒としては、パラジウム−硫酸バリウム又はパラジウム−炭素等を用いるのが好ましい。
【００３７】（９）工程９本工程［反応工程式（II）の（９）］は、アシル化された単糖類残基Ｒ62及び水酸基保護基Ｚを有する化合物（IIIa）を脱アシル化して、単糖類残基Ｒ61及び水酸基保護基Ｚを有する化合物（IIIb）を得る反応工程である。例えば、本反応は、一般式（IIIa）で表される化合物をメタノール等の有機溶媒に溶解し、不活性ガス（例えば、窒素ガス又はアルゴンガス）気流中、メタノール等のアルコールに溶解したカリウム又はナトリウム等のアルカリ金属を反応させて行うことができる。反応温度は通常、４〜７０℃、反応時間は通常、０．１〜７２時間である。
【００３８】（１０）工程１０本工程［反応工程式（II）の（１０）］は、単糖類残基Ｒ61及び水酸基保護基Ｚを有する化合物（IIIb）を水素化分解して、単糖類残基Ｒ61を有する化合物（IIb)を得る反応である。本反応は、パラジウム系又は白金系触媒存在下に、４〜７０℃で、０．１〜４８時間、水素ガスと反応させて行うことができる。パラジウム系触媒としては、パラジウム−硫酸バリウム、パラジウム−炭素等を用いるのが好ましい。
【００３９】（１０’）工程１０’（工程１０の前処理工程）
化合物（IIIb）の単糖類残基Ｒ61を、別の単糖類残基Ｒ61に変換（アシル化を除く）してから、工程１０を実施すると、別の単糖類残基Ｒ61を有する相当する化合物（IIb ）を得ることができる。例えば、単糖類残基Ｒ61が−ＣＨ2 ＯＨを有する場合、この基を酸化して−ＣＯＯＨとすることにより、−ＣＯＯＨを有する別の単糖類残基Ｒ61をもつ化合物（IIb ）を得ることができる。この例としては、グルコース残基を酸化してグルクロン酸残基とする反応をあげることができる。また、化合物（IIIb）の単糖類残基Ｒ61の水酸基をアシル化（例えば、６単糖類残基の６位の水酸基をピバロイル化）し、化合物（IIIa）が担持していたＲ62とは別のアシル化単糖類残基Ｒ62に変換してから、工程１０を実施すると、化合物（IIIa）とは別のアシル化単糖類残基を有する化合物（IIb ）を得ることができる。単糖類残基Ｒ61の水酸基をアシル化する反応は、基本的には工程４と同様にして行うことができる。
【００４０】（１１）工程１１本工程［反応工程式（II）の（１１）］は、アシル化された単糖類残基Ｒ62を有する化合物（IIa ）を脱アシル化して、単糖類残基Ｒ61を有する化合物（IIb）を得る反応工程である。本反応は、基本的に前記の工程９と同様にして実施することができる。
【００４１】（１２）工程１２本工程［反応工程式（II）の（１２）］は、アシル化された単糖類残基Ｒ62を有する化合物（IIa ）とハロゲン化カルバモイル化合物（Ｘ）とを反応させて、カルバモイル基とアシル化された単糖類残基Ｒ62とを有するエスクレチン誘導体（Ia）を得る反応工程である。工程１２は、有機溶媒（例えば、ピリジン、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン）を用い、適当な塩基（例えば、ピリジン、トリエチルアミン又はアニリン）を存在させてもよく、１０〜１００℃で、０．１〜１００時間反応させて行うことができる。有機溶媒としてピリジンを用いると、ピリジンは塩基としても作用するので、他に塩基を加える必要がなくて都合がよい。
【００４２】（１３）工程１３本工程［反応工程式（II）の（１３）］は、工程１０において得た単糖類残基Ｒ61〔化合物（IIIa）が担持していたＲ62とは別のアシル化単糖類残基Ｒ62の場合を含む〕を有する化合物（IIb ）とハロゲン化カルバモイル化合物（Ｘ）とを反応させて、カルバモイル基と前記各種の単糖類残基Ｒ61とを有するエスクレチン誘導体（Ib）を得る反応工程である。工程１３は、基本的に前記の工程１２と同様にして実施することができる。なお、単糖類残基Ｒ61又はＲ62がＮ−アシルアミノ基をもつ場合、さらに脱アシル化反応を行うことによりアシル基を含まないアミノ糖残基Ｒ61とカルバモイル基とが結合したエスクレチン誘導体を得ることができる。この反応は、単糖類残基がＮ−アシルアミノ糖であるエスクレチン誘導体とアルカリ水溶液（好ましくは０．１〜１２Ｎ−ＮａＯＨ）とを、４０〜１２０℃で、１〜４８時間反応させることにより行うことができる。
【００４３】公知の方法を用いることにより、本発明による遊離のエスクレチン誘導体を塩に変え、またある塩を別の塩に変えることができ、更に、本発明によるエスクレチン誘導体の塩を遊離のエスクレチン誘導体に変えることができる。例えば、遊離カルボン酸基を含むＮ−アセチルグルコサミン基やウロン酸基を結合しているエスクレチン誘導体の場合には、塩を形成させることができる。すなわち、それらのエスクレチン誘導体と等モルの水酸化アルカリ（例えば、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム）を作用させると、遊離カルボン酸基をアルカリ塩に変換させることができる。またそれらの塩の水溶液を、塩酸又は硫酸で酸性にすると、遊離化合物にもどすことができる。遊離アミノ基を有する化合物に対しては、有機酸（リンゴ酸、クエン酸、酢酸）などを等量作用させることにより、対応する塩を形成させることができる。無機酸、例えば塩酸又は硫酸を作用させると、塩酸塩又は硫酸塩に導くことができる。この塩にアルカリを作用させると、再び遊離塩基に導くことが可能である。塩は水に可溶であるが、遊離体は難溶であるので、析出させて単離することが可能である。
【００４４】反応生成物の精製法としては、抽出、クロマトグラフィー、結晶化、再沈澱等を利用することができる。精製物の構造は、赤外線吸収スペクトル、紫外線吸収スペクトル、核磁気共鳴吸収スペクトル、元素分析、質量スペクトル等により確認することができる。
【００４５】本発明のエスクレチン誘導体について毒性を調べた。前記誘導体の代表例を、２０００ｍｇ／ｋｇ（体重）の量で、雄マウス及び雄ラットに経口投与した後、７日間観察したが、死亡例はなく、特筆すべき毒性は見られなかった。本発明のエスクレチン誘導体は、きわめて安全な化合物である（後記実施例１３参照）。本発明のエスクレチン誘導体は、マウスＦＨＣモデルにおいて、エスクレチンと比較して、高濃度の化合物がＦＨＣ（大腿骨頭軟骨）中に長時間取り込まれ滞留する（後記実施例１５参照）。本発明のエスクレチン誘導体は、薬理作用として、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害作用を有する（後記実施例１４参照）。従って、本発明のエスクレチン誘導体又は製剤学的に許容することのできるその塩は、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害作用により、マトリックス分解を伴う各種疾患の治療のためのマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の有効成分として有用である。これらマトリックス分解を伴う各種疾患の例は、関節症（例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症、肩関節周囲炎、頸肩腕症候群、腰痛症等）、角膜潰瘍、創傷、肉芽腫、歯周病、皮膚水泡性疾患、糸球体腎炎、肺気腫、骨吸収、腫瘍の湿潤・転移等である。
【００４６】本発明のエスクレチン誘導体又は製剤学的に許容することのできるその塩を有効成分とするマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の製剤形態は、一般的な形態でよい。前記誘導体単独、又は前記誘導体と製剤上許容し得る担体若しくは希釈剤との混合物のいずれでも、製剤として使用することができる。製剤中の有効成分の量も限定されるものではないが、例えば、０．０１〜１００重量％、好ましくは０．１〜７０重量％であることができる。本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、経口又は非経口のいずれでも投与することができる。本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の投与量は、対象（哺乳動物、特にはヒト）、年齢、個人差、病状等に依るので、特に限定されないが、例えば、一般にヒトを対象とする場合、本発明のエスクレチン誘導体の経口投与量は、１日当たり０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは０．５〜２００ｍｇ／ｋｇ（体重）であることができる。通常、１日量を、１回又は２〜４回に分けて投与することができる。
【００４７】
【作用】本発明によるエスクレチン誘導体は、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害作用を有するので、マトリックスメタロプロテアーゼが関与する各種の疾患の治療に有効である。例えば、関節症を例にとると、関節症には、慢性関節リウマチ、リウマチ熱、変形性関節症等がある。これらの慢性関節リウマチと変形性関節症では、病因、病態に大きな違いがあるが、いずれも最終的には、軟骨破壊により関節機能が障害される点では共通している。従って、軟骨破壊や組織破壊を抑制することができれば、病態の改善につながる。関節軟骨は、軟骨細胞と軟骨マトリックスから構成されている。軟骨マトリックスは、軟骨細胞が産生する線維性タンパク質であるタイプIIコラーゲンと、タンパク質多糖複合体であるプロテオグリカンとがヒアルロン酸と非共有的に結合し、複雑にからみあうことにより形成された３次元マトリックス構造であり、その中には多量の水分が保持されており、これにより正常の関節機能が維持されている。プロテオグリカンを構成する主な多糖類は、コンドロイチン硫酸とケラタン硫酸からなるグリコサミノグリカンである。慢性関節リウマチや変形性関節症のような病態では、コラゲナーゼ、ゼラチナーゼ、ストロムライシン、マトリライシン等のマトリックスプロテアーゼが活性化され、破壊を増大させることが知られている。従って、このマトリックスメタロプロテアーゼの阻害剤は、それらの疾患に対して有効であると考えられる。
【００４８】一方、転移性癌細胞は、異常な増殖性と血管新生誘導能、又は免疫応答からの忌避といった造腫瘍性細胞のもつ基本的な能力に加えて、異常な運動性と接着性、更に、細胞外マトリックス分解酵素の産生、浸潤及び転移部位での増殖、血管新生等の能力を備えている。これらのうち、湿潤、増殖、及び血管新生等のプロセスにおいても細胞外プロテアーゼが積極的に関与していることが明らかになっている。従って、これら細胞外マトリックスプロテアーゼの産生・分泌・活性化を抑える物質は癌の転移防止にも有用であると考えられる。
【００４９】本発明によるエスクレチン誘導体においては、エスクレチン化合物の６位及び７位水酸基の両方にカルバモイル基若しくは置換カルバモイル基を有しているか、あるいは６位及び７位水酸基の一方にカルバモイル基若しくは置換カルバモイル基を有し、他方に軟骨マトリックス成分と類似の単糖類を有しているので、生体内利用効率の高いマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤となる。
【００５０】
【実施例】以下、実施例によって本発明を更に具体的に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。
実施例１：６，７−ビス（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルオキシ）クマリン［I-1 ］の合成（工程１）エスクレチン（東京化成工業株式会社製）［XI-1］（３００ｍｇ）をピリジン（１２ｍｌ）に溶解し、塩化Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイル（０．６２ｍｌ）を加えて、６０℃に加熱した。同温度で４時間反応後、飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍｌ）を加え、クロロホルム（５０ｍｌ×３）にて抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｋｉｅｓｅｌ ｇｅｌ ５０ｇ；クロロホルム／メタノール＝１０／１）にて精製し、標記化合物（５３６．１ｍｇ、収率９９．４％）を白色固体として得た。
融点：１６０−１６１℃質量スペクトル（ｍ／ｅ，ＥＩ）：３２０（Ｍ+ ）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ，５００ＭＨｚ，δ ｐｐｍ）：３．０２ ａｎｄ ３．０８（２ｓ，６Ｈ，ＣＯＮＭｅ2 ），６．３９（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４），７．２６ ａｎｄ ７．３８（２ｓ，２Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−８），７．６３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ−ｄｉｓｋ，ν ｃｍ-1）：１７２５ｓ，１３９０ｍ，１１６０ｓ，１１５０ｓ，１１３０ｓ
【００５１】実施例２：７−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシクマリン［IV-2］の合成（工程２及び３）ナス型フラスコ（１００ｍｌ）に、エスクリン（１．０ｇ）、塩化ベンジル（１．０ｇ）、炭酸カリウム（０．７ｇ）、触媒量の１８−クラウン−６−エーテルとヨウ化カリウム、及びジメチルホルムアミド（４０ｍｌ）を加え、この混合物を６０℃で８時間攪拌しながら反応させた。反応混合物を減圧濃縮し、残渣を氷水中に注いだ。析出した結晶を濾取し、メタノールより再結晶して、７−ベンジルオキシ−６−Ｄ−グルコシルオキシクマリン〔VIII-2〕〔融点１８４−１８６℃、質量スペクトル（Ｍ+ ）４３０、収率８６．４％〕を得た。化合物〔VIII-2〕（０．６ｇ）を、メタノール（３５ｍｌ）−１０％塩酸（３５ｍｌ）混液中で、１時間加熱還流した。反応混合物を減圧濃縮し、結晶を濾取して、標記化合物〔IV-2〕（収率９０．３％）を得た。
融点：１９３−１９５℃質量スペクトル（Ｍ+ ）：２６８
【００５２】実施例３：２−アセトアミド−１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノース〔VI-2〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程４）ナス型フラスコ（５００ｍｌ）に、無水酢酸（１２．２５ｇ）と乾燥ピリジン（１８．９８ｇ）との混合溶液を加え、次に室温で少しずつＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン〔VII-2 〕（４．４３ｇ）を加えた。この溶液を室温で一晩攪拌した。反応液を氷水（１５０ｍｌ）に注いで、エーテル（１００ｍｌ）で２回抽出した。水層を減圧下、６５℃で濃縮乾固して、粗生成物（９．４０７ｇ）を得た。粗生成物を酢酸エチル（１５０ｍｌ）に溶解し、この溶液を水（５ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、ロータリーエバポレーターで減圧乾固して油状物質を得た。油状物質にエーテルを加えてつき崩すことにより、標記化合物（６．４７ｇ，収率８３．１％）を白色結晶として得た。
Ｒｆ：０．３９（酢酸エチル）
融点：１８５−１８７℃1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，δ ｐｐｍ）：１．９４（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ），２．０９（ｓ，３Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），４．００（ｍ，１Ｈ，Ｃ５−Ｈ），４．０７（ｄ，１Ｈ，Ｃ６−Ｈ），４．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｃ６−Ｈ），４．４８（ｄｔ，１Ｈ，Ｃ２−Ｈ），５．２３（ｍ，２Ｈ，Ｃ３，４−Ｈ），５．７２（ｄ，１Ｈ，ＮＨ），６．１７（ｄ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈ）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ，ν ｃｍ-1）：３３６０ｓ，３０２５ｍ，２９８０ｍ，１７４０ｓ，１６７５ｓ，１５２０ｓ，１４２５ｓ，１３８０ｓ，１２３０ｓ，１１３０ｓ，１０２５ｓ，９４０ｓ，８９０ｍ，８４０ｍ
【００５３】実施例４：２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−１−クロロ−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノース〔V-2 〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程５）ナス型フラスコ（５０ｍｌ）に無水酢酸（６ｍｌ）を加えた。この無水酢酸に、０℃で、乾燥塩化水素ガスを吹き込んで飽和させた。重量増加は約１．５ｇであった。この溶液に、実施例３で調製した２−アセトアミド−１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノース〔VI-2〕（２．０ｇ）を加え、この混合物を室温で６日間攪拌した。反応混合物に塩化メチレン（２５ｍｌ）を加えて、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍｌ）で２回洗浄した。集めた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後濃縮して、粗生成物（１．３２ｇ）を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー〔直径２．５ｃｍ×長さ１０．５ｃｍ、シリカゲル１５ｇ、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１：４）〕により分離精製して、標記化合物（８７１．７ｍｇ、収率４６．４％）を白色結晶として得た。
Ｒｆ：０．６７（酢酸エチル）
融点：１２５−１２６℃質量スペクトル（ｍ／ｅ）：７３１（２Ｍ＋１），３５６（１００），３２４，３０６，２２８，１６８，１５０1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，δ ｐｐｍ）：１．９９（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，６Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ），４．１４（ｄ，１Ｈ，Ｃ５−Ｈ），４．２８（ｍ，２Ｈ，Ｃ６−Ｈ），４．５４（ｄｔ，１Ｈ，Ｃ２），５．２２（ｔ，１Ｈ，Ｃ４−Ｈ），５．３３（ｔ，１Ｈ，Ｃ３−Ｈ），５．９８（ｄ，１Ｈ），６．１９（ｄ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈ）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ，ν ｃｍ-1）：３３００ｗ，１７５０ｓ，１６５０ｍ，１５５０ｍ，１４４０ｍ，１３８０ｍ，１２９５ｍ，１２３５ｓ，１２１５ｓ，１１２０ｍ，１０３５ｍ，９８０ｗ，９１８ｗ，８９５ｗ
【００５４】実施例５：２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−１−クロロ−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノース〔V-2 〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程６）ナス型フラスコ（２００ｍｌ）に塩化アセチル（２５ｍｌ）を入れ、攪拌しながら、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン〔VII-2 〕（１２．５ｇ）を少しずつ加えた。４時間後、反応液は発熱して、ゆるい還流が起こった。反応液を一晩攪拌すると淡赤色の粘稠な固体となった。この固体に塩化メチレン（１００ｍｌ）を加えてこの固体を溶解し、溶液を冷たい飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した。集めた有機層を蒸留水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後濃縮して、粗生成物（２３．８ｇ）を得た。粗生成物をエーテルから結晶化して、標記化合物（１６．０ｇ、収率７７％）を白色結晶として得た。
【００５５】実施例６：６−（β−２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIa-2〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程７）ナス型フラスコ（２５ｍｌ）に、前記実施例４又は５で調製した２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−１−クロロ−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノース〔V-2 〕（９１４．５ｍｇ）、前記実施例２で調製した７−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシクマリン〔IV-2〕（３３５．５ｍｇ）、及びクロロホルム（１０ｍｌ）を入れて、懸濁液とした。この懸濁液に、１．２５Ｎ−ＮａＯＨ（１２．５ｍｌ）に溶かした塩化ベンジルトリエチルアンモニウム（１１３．９ｍｇ）を加えて、アルゴン雰囲気下、３時間還流した後、室温まで放冷した。反応混合物を塩化メチレン（４０ｍｌ）で希釈した後、有機層を分離した。水層を塩化メチレン（２０ｍｌ）で抽出した。集めた有機層を飽和食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後濃縮して、粗生成物（１．１６ｇ）を得た。粗生成物をメタノール／塩化メチレンで処理して、標記化合物（１５０．４ｍｇ、収率２１．１％）を白色針状結晶として得た。
Ｒｆ：０．５６（酢酸エチル）
融点：２２４−２２７℃質量スペクトル（ｍ／ｅ）：５９７，５３７，５２３，４１９，３２９，２６８，２０９，１６７，１２５（１００）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，δ ｐｐｍ）：１．５４（ｓ，３Ｈ），２．０２（ｓ，３Ｈ）、２．０３（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），３．０７（ｍ，１Ｈ，Ｃ５−Ｈ），４．１４（ｍ，２Ｈ，Ｃ−６，Ｃ２−Ｈ），４．２６（ｄｄ，１Ｈ，Ｃ６−Ｈ），５．０４（ｄ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ，ｂｅｎｚｙｌ），５．１１（ｑ，１Ｈ，Ｃ４−Ｈ），５．２３（ｔ，１Ｈ，Ｃ３−Ｈ），６．２９（ｄ，Ｃ３），６．９２（ｓ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），７．４６（ｍ，５Ｈ），７．５９（ｄ，Ｃ４）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ，ν ｃｍ-1）：３３００ｍ，２９７５ｗ，２９００ｗ，１７４０ｓ，１６６０ｓ，１６２０ｓ，１５５５ｍ，１５２０ｍ，１４４０ｍ，１３８０ｓ，１２３０ｓ，１１８０ｍ，１１４０ｍ，１１２０ｍ，１０６０ｓ，１０４０ｓ，９３０ｍ，９００ｍ，８７０ｍ，８１０ｓ，７３０ｍ
【００５６】実施例７：６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIb-2〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程９）ナス型フラスコ（１００ｍｌ）に、前記実施例６で調製した６−（β−２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIa-2〕（３５１ｍｇ）とメタノール（９０ｍｌ）を入れ、懸濁液とした。この懸濁液に、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液（２８％）を５滴加えて、４０℃まで加熱し、攪拌した。反応液は、１０分後に透明となり、２０分後に白色沈澱を生じた。反応液を室温で１．５時間攪拌後、０．１Ｎ−ＨＣｌで中和した。沈澱をグラスフィルターで濾取し、メタノールで洗浄後、減圧下に乾燥して、標記化合物（２６２．６ｍｇ、収率９５．１％）を白色針状結晶として得た。
融点：２４４−２４６℃Ｒｆ：０．７３（クロロホルム／メタノール／水（７：３：０．５））
質量スペクトル（ｍ／ｅ）：４７２（Ｍ＋１），３８２，２６９，２５３，２０４，１８５，１６８，１３８，９１1Ｈ−ＮＭＲ（ｄ6 −ＤＭＳＯ，δ ｐｐｍ）：１．７３（ｓ，３Ｈ，Ｎ−Ａｃ），３．２３（ｑ，１Ｈ），３．４３（ｔ，１Ｈ），３．５１（ｍ，１Ｈ），３．７３（ｑ，２Ｈ），５．０２（ｄ，１Ｈ），５．２５（ｓ，２Ｈ，ｂｅｎｚｙｌ），６．３０（ｄ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ），７．１２（ｓ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ），７．３１（ｔ，１Ｈ，ｐａｒａ−ｂｅｎｚｙｌ），７．３９（ｔ，２Ｈ，ｍｅｔａ−ｂｅｎｚｙｌ），７．４３（ｓ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ），７．４８（ｄ，２Ｈ），７．７９（ｄ，１Ｈ，ＡｃＮＨ），７．８９（ｄ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ，ν ｃｍ-1）：３４０５ｓ，３２７５ｍ，２９００ｗ，１７５０ｓ，１６６５ｓ，１６１５ｍ，１５４０ｍ，１４３０ｍ，１３９０ｍ，１３８０ｍ，１３１０ｓ，１２７０ｓ，１２４０ｗ，１１７５ｍ，１１１０ｍ，１０９０ｓ
【００５７】実施例８：６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ヒドロキシクマリン〔IIb-2 〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程１０）ナス型フラスコ（１００ｍｌ）に、前記実施例７で調製した６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIb-2〕（３１５．５ｍｇ）と１５％の含水ジメトキシエタン（６０ｍｌ）を入れ、溶液とした。この溶液に１０％パラジウム−炭素（以下、Ｐｄ／Ｃと称する ）（２４ｍｇ）を触媒として加えて、この混合物を水素雰囲気下、室温で１時間攪拌した。反応混合物から、減圧下溶媒を除去して、灰色の粉末を得た。この粉末に、水／テトラヒドロフラン／メタノール（５：１：０．２）混合液（４３５ｍｌ）を加え、７５℃に加熱して溶解した。触媒を濾別し、濾液を５０ｍｌまで濃縮した後、冷蔵庫に一晩放置し、標記化合物（２２８．０ｍｇ、収率８９．３％）を白色針状結晶として得た。Ｒｆ：０．５６（クロロホルム／メタノール／水（７：３：０．５））
融点：２６５−２６６℃元素分析 Ｃ17Ｈ19Ｏ9 Ｎとして実験値： Ｃ ５３．２５， Ｈ ４．９１， Ｎ ３．５５理論値： Ｃ ５３．５５， Ｈ ５．０２， Ｎ ３．６７1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，δ ｐｐｍ）：１．８３（ｓ，３Ｈ），３．２３（ｔ，１Ｈ，Ｃ３−Ｈ），３．３５（ｍ，１Ｈ），３．４８（ｔ，１Ｈ），３．５２（ｍ，１Ｈ），５．００（ｄ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈ），６．２４（ｄ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ），６．８３（ｓ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ），７．３６（ｓ，１Ｈ，ｃｏｕｍａｒｉｎ），７．８８（ｄ，１Ｈ）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ，ν ｃｍ-1）：３３７５ｓ，３２４０ｗ，２９３０ｗ，１６４０ｓ，１６６５ｓ，１６００ｓ，１５５０ｍ，１４０５ｍ，１２７５ｍ，１２５５ｍ，１２２５ｗ，１１７２ｗ，１１４０ｗ，１１２０ｍ，１０８５ｍ，１０４２ｍ，１０２５ｗ，９９５ｍ，９３０ｍ，８９０ｍ，８６１ｍ，８２０ｍ
【００５８】実施例９：６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルオキシ）クマリン〔Ib-2〕の合成（糖成分がグルコサミンの場合の工程１３）前記実施例８で調製した６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ヒドロキシクマリン〔IIb-2 〕（７．３０ｇ）をピリジン（３６５ｍｌ）に懸濁した。この懸濁液に塩化Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイル（１．８５ｍｌ）を加え、６０℃で一昼夜攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し、残渣にエタノールを加えて加熱した。熱時濾過によりピリジン塩酸塩を除き、続いてエタノールより再結晶して、標記化合物（４．８０ｇ、収率５５．４％）を白色固体として得た。
融点：１４８．０−１４９．０℃質量スペクトル（ＥＩ、ｍ／ｅ）：４５３（Ｍ＋１）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ，５００ＭＨｚ，δ ｐｐｍ）：１．７９（ｓ，３Ｈ，Ａｃ），２．９０ａｎｄ３．０１（２ｓ，６Ｈ，Ｍｅ2 ＮＣＯ），３．２２−３．２８（ｍ，Ｈ−４’），３．３４−３．４１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３’，Ｈ−５’），３．５０−３．５６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ’），３．７０−３．７９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−６ａ’），４．５９（ｔ，１Ｈ，６’−ＯＨ），４．９８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’），５．０５（ｄ，１Ｈ，３’−ＯＨ），５．１２（ｄ，１Ｈ，４’−ＯＨ），６．４６（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４’），７．２５ａｎｄ７．４４（２ｓ，２Ｈ，Ａｒ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＮＨＡｃ），７．９８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ−ｄｉｓｋ，ν ｃｍ-1）：３５５０ｓ，３４５０ｓ，１７４５ｓ，１７２５ｓ，１１７０ｍ，１１００ｍ
【００５９】実施例１０：６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIb-2p 〕〔糖成分がグルコサミンの場合の工程１０’（アシル基１個の導入）〕
前記実施例７で調製した６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIb-2〕（１０．０ｇ）を無水ピリジン（２００ｍｌ）に懸濁し、無水ピバリン酸（４．７４ｇ）及び４−ジメチルアミノピリジン（２．５９ｇ）を加え、室温で３日間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー〔Ｋｉｅｓｅｌ ｇｅｌ ６０（５００ｇ），クロロホルム／メタノール＝１５／１〕により精製し、標記化合物（９．１１ｇ、収率７７％）を白色固体として得た。
融点：１７９．５−１８２．０℃質量スペクトル（ｍ／ｅ，ＦＡＢ）：５５６（Ｍ＋１）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，５００ＭＨｚ，δ ｐｐｍ）：１．０６（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），１．７６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ＣＯ−），３．２４（ｔｄ，１Ｈ，Ｈ−４’），３．４８（ｂｒ ｑ，１Ｈ，Ｈ−３’），３．５７−３．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’），３．７２（ｑ，１Ｈ，Ｈ−２’），４．０５（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６’ａ），４．３６（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６’ｂ），５．１２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’），５．１８（ｄ，１Ｈ，３’−ＯＨ），５．２４（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨ2−），５．２７（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨ2 −），５．３８（ｄ，１Ｈ，４’−ＯＨ），６．３１（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４），７．１８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−５）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ ｄｉｓｋ，ν ｃｍ-1）：３４００ｍ，１７２５ｓ，１６５５ｍ，１６１５ｍ，１２７５ｓ
【００６０】実施例１１：６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ヒドロキシクマリン〔IIb-2P〕（糖成分がグルコサミンの場合の工程１０類似の工程）前記実施例１０で調製した６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ベンジルオキシクマリン〔IIIb-2P 〕（５３２ｍｇ）をジメトキシエタン（１６ｍｌ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ（３０ｍｇ）を加え、この混合物を水素雰囲気下で室温で３時間攪拌した。反応終了後、濾過により触媒を除去し、溶媒を減圧留去することにより淡黄色固体（４４３ｍｇ）を得た。この固体を熱水から再結晶し、標記化合物（３５８ｍｇ、収率７７％）を白色針状結晶として得た。
融点：１３３．０−１３６．０℃質量スペクトル（ｍ／ｅ，ＦＡＢ）：４６６（Ｍ＋１）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ，δ ｐｐｍ）：１．０６（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），１．８４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ＣＯ−），３．２３（ｔｄ，１Ｈ，Ｈ−４’），３．５３（ｂｒ ｑ，１Ｈ，Ｈ−３’），３．５７−３．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’），３．６２（ｑ，１Ｈ，Ｈ−２’），４．０４（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６’ａ），４．３９（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６’ｂ），５．０７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’），５．１９（ｄ，１Ｈ，３’−ＯＨ），５．３８（ｄ，１Ｈ，４’−ＯＨ），６．２４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４），６．８１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−５），７．２８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−８），７．９０（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３），７．９４（ｄ，１Ｈ，−ＮＨＣＯＣＨ3 ），９．９１（ｂｒ ｓ，１Ｈ，ＡｒＯＨ）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ ｄｉｓｋ，ν ｃｍ-1）：３４００ｓ，１７２０ｓ，１６５０ｓ，１６２０ｓ，１５６５ｓ，１３００ｓ，１２８０ｓ，１２５５ｓ，１１７０ｍ，１１４０ｍ，１０７０ｓ
【００６１】実施例１２：６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−（Ｎ，Ｎ−カルバモイルオキシ）クマリン〔Ib-2P 〕（糖成分がグルコサミンの場合の工程１３類似の工程）前記実施例１１で調製した６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−ヒドロキシクマリン〔IIb-2P〕（６１８ｍｇ）をピリジン（２５ｍｌ）に溶解した。この溶液に塩化Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイル（１４６ｍｇ）を加え、７０℃で５．５時間反応させた。反応混合物を減圧濃縮し、残渣（固体）を得た。この固体を水から再結晶して、標記化合物（３７０ｍｇ、収率５２％）を白色結晶として得た。
Ｒｆ：０．３９（クロロホルム／メタノール（１０：２））
融点：２４４−２４５℃（分解）
質量スペクトル（ｍ／ｅ，ＦＡＢ）：５３７（Ｍ＋１）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ，５００ＭＨｚ，δ ｐｐｍ）：１．１１（ｓ，９Ｈ，（ＣＨ3 ）3 Ｃ−），１．８０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ＣＯ−），２．９０（ｓ，３Ｈ，（ＣＨ3 ）2 Ｎ−），３．０２（ｓ，３Ｈ，（ＣＨ3 ）2 Ｎ−），３．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’），３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’），３．７２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’），３．７６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’），４．０３（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６’ａ），４．３９（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６’ｂ），５．０７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’），５．１７（ｄ，１Ｈ，３−ＯＨ），５．４１（ｄ，１Ｈ，４−ＯＨ），６．４８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４），７．２６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−５），７．４４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−８），７．７３（ｄ，１Ｈ，−ＣＯＮＨ−），７．９２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ−ｄｉｓｋ，ν ｃｍ-1）：３３７５ｓ，２９７０ｗ，２９１５ｗ，２８７５ｗ，１７４０ｓ，１７２０ｓ，１６５５ｍ，１５４５ｍ，１４３０ｍ，１３８０ｍ，１２８５ｓ，１２６０ｍ，１１７０ｓ，１１４０ｍ，１０９０ｍ，１０５０ｍ
【００６２】実施例１３：エスクレチン誘導体の急性毒性試験本発明のエスクレチン誘導体の急性毒性について、Ｃｒｊ：ＣＤ−１（ＩＣＲ）雄性マウス（６週齢）及びＷｉｓｔａｒ雄性ラット（６週齢）を用いて検討した。６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルオキシ）クマリン〔Ib-2〕（実施例９）を１，０００及び２，０００ｍｇ／ｋｇの量で経口投与した後、７日間観察したところ、死亡例は観察されなかった。また、一般状態及び体重変化に関しても、対照群と比較して何等変化は観察されなかった。他の本発明のエスクレチン誘導体、すなわち、６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−（Ｎ，Ｎ−カルバモイルオキシ）クマリン〔Ib-2P 〕についても同様であった。なお、本実験においては各群２匹の動物を使用した。
【００６３】実施例１４：ウサギ軟骨器官培養系における間質型コラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）の産生阻害作用ウサギ（ニュージーランドホワイト、雄、６週齢）の肩及び膝の関節軟骨を採取し、細片した後、０．２％ラクトアルブミン含有ダルベッコＭＥＭ培養液を用いて試験を開始した。試験薬剤を、ジメチルスルオキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した後、培養液に添加した。ＤＭＳＯの濃度は、培養液に対して０．２５重量％とした。薬剤添加２時間後に、刺激剤としてインターロイキン−１α（以下、ＩＬ−１αと称する）を１００ｕｎｉｔ／ｍｌ添加し、次いで４８時間培養を行った。培養後の培養上清を用いて、ＭＭＰ−１の活性を測定した。ＭＭＰ−１の測定には、コラーゲン技術研修会製のコラゲノキット（ＣＬＮ−１００）を用いた。なお、結果については、１群につきｎ＝４で試験して、その平均値±標準誤差で表示した。本発明のエスクレチン誘導体としては、６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルオキシ）クマリン〔Ib-2〕を用いた。結果を図１に示す。図１の横軸は、ＩＬ−１αのみを添加した時のＭＭＰ−１の産生量に対する、ＩＬ−１α及び薬剤の両方を添加した時のＭＭＰ−１産生量の割合（％）である。コントロールは、ＩＬ−１αも薬剤も添加しない場合であり、ＭＭＰ−１はほとんど産生しなかった。ＩＬ−１αのみを添加すると、ＭＭＰ−１が産生された。これに対して、本発明のエスクレチン誘導体〔Ib-2〕はＩＬ−１αのみを添加した時のＭＭＰ−１産生量を抑制している。
【００６４】実施例１５：マウスＦＨＣモデルにおける薬物動態学的解析（１）モデルの作製本モデルの作製は、Ｄ．Ａ．Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙ等の方法を用いて行った（Ｄ．Ａ．Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｇｅｎｔｓ Ａｃｔｉｏｎｓ，ｖｏｌ．３８，ｐ．１２６−１３４，１９９３参照）。Ｓ．Ｄ．系雄性ラットの左右の大腿骨頭軟骨（以下、ＦＨＣと称する）を、クリーンベンチ内で無菌的に摘出した。摘出したＦＨＣを、抗生物質を含むＨａｍＦ−１２培養液で洗い、湿重量を測定した。重量測定後、ＦＨＣを約１ｃｍ四方のコットン２枚に包み、埋め込み時まで培養液中で氷冷した。このＦＨＣを、背部を剃毛したＢＡＬＢ／Ｃ雌性マウスの背部皮下に無菌的に埋め込み、切開部位を縫合後、手術用瞬間接着剤（商品名：アロンアルファー、東亜合成社製）で完全に塞いだ。
【００６５】（２）エスクレチン及び６−（β−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−７−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルオキシ）クマリン〔Ib-2〕投与後のＦＨＣ中での薬物動態学的解析上記マウスＦＨＣモデルを用い、薬物動態学的にエスクレチンと本発明のエスクレチン誘導体［Ib-2］との比較を行った。エスクレチン１８７ｍｇ／ｋｇ又はそれと等モル量の本発明のエスクレチン誘導体［Ib-2］５３４ｍｇ／ｋｇを、ＦＨＣ埋め込み３日後に、経口投与した。投与後、経時的にＦＨＣを回収してパパインで分解後、ＦＨＣに取り込まれた薬剤量を高速液体クロマトグラフィーで分析した。なお、本実験においては各群３匹のマウスを使用した。結果を図２に示す。図２で本発明のエスクレチン誘導体［Ib-2］を投与した時の取り込み量を●、エスクレチンを投与した時の取り込み量を○で示す。図２に示すように、本発明のエスクレチン誘導体［Ib-2］の方が、エスクレチンと比較して高濃度の化合物がＦＨＣ中に長時間取り込まれ、滞留することが明らかとなった。
【００６６】
【発明の効果】本発明の新規エスクレチン誘導体又はその塩は、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害作用を有する。本発明の新規エスクレチン誘導体又はその塩は、エスクレチン、４−アルキルエスクレチン等と比較して、軟骨マトリックスへの取り込みや親和性及び局所での薬物の滞留性が向上し、生体内利用効率が高く、更に低毒性である。従って、本発明のエスクレチン誘導体又はその塩は、広くマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤として、癌の浸潤・転移、糸球体腎炎、骨吸収症、関節症（例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症、肩関節周囲炎、頚肩腕症候群、腰痛症等）、角膜潰瘍、創傷、肉芽腫、歯周病、皮膚水泡性疾患、肺気腫等の治療に極めて有用な用途を有する。
【図面の簡単な説明】
【図１】本明細書の実施例１４で行ったウサギ軟骨器官培養系における間質型コラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）の産生抑制作用を示すグラフである。ＩＬ−１αのみを添加した時のＭＭＰ−１の産生量を１００％として、それに対するＩＬ−１α及び供試化合物の両方を添加した時のＭＭＰ−１の産生量の割合（％）で示してある。
【図２】本明細書の実施例１５で行ったマウスＦＨＣモデルにおける、大腿骨頭軟骨（ＦＨＣ）中への本発明化合物又はエスクレチンの各取り込み量を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】 一般式（Ｉ）
【化１】
〔式中、Ｒ1 及びＲ2 はそれぞれ独立に、−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 、単糖類残基、又はアシル化された単糖類残基であって、Ｒ1 又はＲ2 の少なくとも１方は−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 であるものとし、Ｒ4 及びＲ5 はそれぞれ独立に、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基若しくはアラルキル基であるか、又はＲ4 とＲ5 とはそれらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基を形成していることができるものとし、Ｒ3 は−ＣＯＯＲ8 、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基、又はアラルキル基であって、Ｒ3 の結合位置は３位又は４位であることができるものとし、Ｒ8 は水素原子又はアルキル基である〕で表されるエスクレチン誘導体又はその塩。
【請求項２】 一般式（XI）
【化２】
（式中、Ｒ3 は−ＣＯＯＲ8 、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基、又はアラルキル基であり、Ｒ8 は水素原子又はアルキル基である）で表される化合物、一般式（II）
【化３】
（式中、Ｒ3 は前記と同じ意味であり、Ｒ6 は単糖類残基又はアシル化された単糖類残基である）で表される化合物、又は一般式（II’）
【化４】
（式中、Ｒ3 及びＲ6 は前記と同じ意味である）で表される化合物と、一般式（Ｘ）
【化５】
Ｒ5 （Ｒ4 ）ＮＣＯＸ （Ｘ）
（式中、Ｘはハロゲン基であり、Ｒ4 及びＲ5 はそれぞれ独立に、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基若しくはアラルキル基であるか、又はＲ4 とＲ5とはそれらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基を形成していることができるものとする）で表される化合物とを反応させることを特徴とする、請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表されるエスクレチン誘導体又はその塩の製造方法。
【請求項３】 請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表されるエスクレチン誘導体又は製剤学的に許容することのできるその塩を含むことを特徴とする、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。
【請求項１】 一般式（Ｉ）
【化１】
〔式中、Ｒ1 及びＲ2 はそれぞれ独立に、−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 、単糖類残基、又はアシル化された単糖類残基であって、Ｒ1 又はＲ2 の少なくとも１方は−ＣＯＮ（Ｒ4 ）Ｒ5 であるものとし、Ｒ4 及びＲ5 はそれぞれ独立に、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基若しくはアラルキル基であるか、又はＲ4 とＲ5 とはそれらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基を形成していることができるものとし、Ｒ3 は−ＣＯＯＲ8 、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基、又はアラルキル基であって、Ｒ3 の結合位置は３位又は４位であることができるものとし、Ｒ8 は水素原子又はアルキル基である〕で表されるエスクレチン誘導体又はその塩。
【請求項２】 一般式（XI）
【化２】
（式中、Ｒ3 は−ＣＯＯＲ8 、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基、又はアラルキル基であり、Ｒ8 は水素原子又はアルキル基である）で表される化合物、一般式（II）
【化３】
（式中、Ｒ3 は前記と同じ意味であり、Ｒ6 は単糖類残基又はアシル化された単糖類残基である）で表される化合物、又は一般式（II’）
【化４】
（式中、Ｒ3 及びＲ6 は前記と同じ意味である）で表される化合物と、一般式（Ｘ）
【化５】
Ｒ5 （Ｒ4 ）ＮＣＯＸ （Ｘ）
（式中、Ｘはハロゲン基であり、Ｒ4 及びＲ5 はそれぞれ独立に、水素原子、水酸基、アルキル基、アリール基若しくはアラルキル基であるか、又はＲ4 とＲ5とはそれらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員の飽和脂肪族環状アミノ基を形成していることができるものとする）で表される化合物とを反応させることを特徴とする、請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表されるエスクレチン誘導体又はその塩の製造方法。
【請求項３】 請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表されるエスクレチン誘導体又は製剤学的に許容することのできるその塩を含むことを特徴とする、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開平８−１８３７８５
【公開日】平成８年（１９９６）７月１６日
【国際特許分類】
【出願番号】特願平６−３４００１６
【出願日】平成６年（１９９４）１２月２８日
【出願人】（０００００１１００）呉羽化学工業株式会社 (477)
【公開日】平成８年（１９９６）７月１６日
【国際特許分類】
【出願日】平成６年（１９９４）１２月２８日
【出願人】（０００００１１００）呉羽化学工業株式会社 (477)
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