本発明は、抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を投与することによって、頭痛（例えば、片頭痛、群発性頭痛、および緊張性頭痛）および顔面紅潮を含めた血管運動症状などのＣＧＲＰ関連障害を予防または治療する方法を特色とする。ＣＧＲＰに対するアンタゴニスト抗体Ｇ１およびＧ１に由来する抗体も記載する。
【図１】

【特許請求の範囲】
【請求項１】
３７℃で表面プラズモン共鳴によって測定される、ヒトα−ＣＧＲＰに対する結合親和性（Ｋ_Ｄ）が５０ｎＭ以下である抗体。
【請求項２】
配列番号１とアミノ酸配列が少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
配列番号１の９９位のアミノ酸残基がＬであり、またはＡ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、ＶもしくはＲによって置換され、配列番号１の１００位のアミノ酸残基がＡであり、またはＬ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｙ、Ｃ、Ｇ、Ｔ、ＫもしくはＰによって置換されている、請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
配列番号２とアミノ酸配列が少なくとも９０％同一であるＶ_Ｌドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
ａ．配列番号３で示されるＣＤＲ Ｈ１、
ｂ．配列番号４で示されるＣＤＲ Ｈ２、
ｃ．配列番号５で示されるＣＤＲ Ｈ３、
ｄ．配列番号６で示されるＣＤＲ Ｌ１、
ｅ．配列番号７で示されるＣＤＲ Ｌ２、
ｆ．配列番号８で示されるＣＤＲ Ｌ３、ならびに
ｇ．表６で示されるＬ１、Ｌ２およびＨ２の変異体
からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項６】
ａ．配列番号５で示されるＶ_ＨＣＤＲ３、または１つもしくは２つの保存的アミノ酸置換により配列番号５と異なる配列と、
ｂ．配列番号８で示されるＶ_ＬＣＤＲ３、または１つもしくは２つの保存的アミノ酸置換により配列番号８と異なる配列と
を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
配列番号１とアミノ酸配列が少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈドメインと、配列番号２とアミノ酸配列が少なくとも９０％同一であるＶ_Ｌドメインとを含む抗体。
【請求項８】
抗体がＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＤ分子であり、またはそれに由来する、請求項７に記載の抗体。
【請求項９】
ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−６８６７の発現ベクターによって産生される重鎖を含む、請求項７に記載の抗体。
【請求項１０】
ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−６８６６の発現ベクターによって産生される軽鎖を含む、請求項７に記載の抗体。
【請求項１１】
請求項１に記載の抗体と、薬学的に許容できる添加剤とを含む医薬組成物。
【請求項１２】
個体中の少なくとも１つの血管運動症状を予防または治療する方法であって、有効量の抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体を個体に投与するステップを含む方法。
【請求項１３】
前記血管運動症状が、前兆を伴うもしくは伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、または緊張性頭痛である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記血管運動症状が顔面紅潮である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
抗ＣＧＲＰアンタゴニスト抗体が、請求項１から１０に記載の抗体のいずれかである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
抗ＧＣＲＰアンタゴニスト抗体が、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−６８６７およびＰＴＡ−６８６６の発現ベクターによって産生される抗体である、請求項１２に記載の方法。

【図１】１２種のマウス抗体のアラニン置換ヒトα−ＣＧＲＰフラグメントに対する結合親和性を示した図である。結合親和性は、チップ上のＣＧＲＰ上にＦａｂを送流させることにより、Ｂｉａｃｏｒｅを用いて２５℃で測定された。四角で囲まれた部分の値は、親フラグメント（２５〜３７（イタリック体））と比較したアラニン変異体の親和性の減失を表示している。例外として、Ｋ３５Ａは１９〜３７の親フラグメントに由来している。^「ａ」は、１９〜３７および２５〜３７フラグメントへの親和性の値が、異なるセンサーチップ上の２種類の独立した測定による平均値±標準偏差の平均値であることを表している。^「Ｂ」は、これらの反応が二相性のオフレートのために単純な二分子反応モデルから逸脱していたことを表しており、そのためそれらの親和性は立体構造変化モデルを用いて決定された。グレイスケール階調：白色（１．０）は親ペプチドの親和性、明灰色（０．５未満）は親ペプチドより高い結合親和性を、暗灰色（２を超える）は親ペプチドより低い親和性を、黒色は結合がまったく認められなかったことを表している。
【図２Ａ−２Ｂ】ＣＧＲＰ８〜３７（４００ｎｍｏｌ／ｋｇ）、抗体４９０１（２５ｍｇ／ｋｇ）および抗体７Ｄ１１（２５ｍｇ／ｋｇ）投与による皮膚血流への影響を、３０秒間の電気パルス刺激後の血液細胞の流束として測定した図である。ＣＧＲＰ８〜３７は電気パルス刺激３〜５分前に静脈内（ｉｖ）に投与された。抗体は電気パルス刺激７２時間前に腹腔内（ＩＰ）に投与された。グラフ中の各点はそれぞれ図に表したような条件下で処置された１匹のラットのＡＵＣを表示している。グラフ中の各線はそれぞれ図に示したような条件下で処置されたラットのＡＵＣの平均値を表示している。ＡＵＣ（血中濃度時間曲線下面積）は、Δ流束×Δ時間に等しい。「Δ流束」は電気パルス刺激後の流束単位の変化を表示しており、「Δ時間」は血液細胞流束レベルが電気パルス刺激前のレベルに戻るのに要した時間を表示している。
【図３】抗体４９０１の異なる用量（２５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇ）の投与による皮膚血流への影響を、３０秒間の電気パルス刺激後の血液細胞の流束として測定した図である。抗体は電気パルス刺激２４時間前に静脈内（ＩＶ）に投与された。グラフ中の各点はそれぞれ図に表したような条件下で処置された１匹のラットのＡＵＣを表示している。グラフ中の各線はそれぞれ図に示したような条件下で処置されたラットのＡＵＣの平均値を表示している。
【図４Ａ−４Ｂ】抗体４９０１（１ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）、抗体７Ｅ９（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）および抗体８Ｂ６（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）投与による皮膚血流への影響を、３０秒間の電気パルス刺激後の血液細胞の流束として測定した図である。抗体は静脈内（ｉ．ｖ）に投与され、抗体投与３０、６０、９０および１２０分後に電気パルス刺激が行われた。Ｙ軸は抗体をまったく投与しなかった場合（時間０分）のＡＵＣレベルと比較したＡＵＣの割合を表示している。Ｘ軸は抗体投与から電気パルス刺激までの時間（分）を表示している。「＊」は時間０分時の値と比較した場合のＰ＜０．０５を、「＊＊」はＰ＜０．０１を表示している。データはダネット多重比較検定を用いて一元配置分散分析で解析が行われた。
【図５】抗体Ｇ１の重鎖可変領域（配列番号１）および軽鎖可変領域（配列番号２）のアミノ酸配列の図である。ＫａｂａｔのＣＤＲは太字で書かれ、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲには下腺が付されている。重鎖および軽鎖の可変領域のアミノ酸残基には順次番号が付されている。
【図６】Ｂｉａｃｏｒｅを使用したペプチド競合による抗体Ｇ１のエピトープマッピングの図である。Ｎ−ビオチン化ヒトα−ＣＧＲＰはＳＡセンサーチップ上で捕捉された。Ｇ１Ｆａｂ（５０ｎＭ）は、競合ペプチド非存在下で、または１０ｕＭの競合ペプチドと１時間事前にインキュベートされた後、チップ上に送流された。チップ上でのＧ１Ｆａｂのヒトα−ＣＧＲＰへの結合を測定した。Ｙ軸は、競合ペプチド非存在下での結合と比較した、競合ペプチドの存在下で阻止された結合の割合を表示している。
【図７】抗体Ｇ１投与（１ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）または媒体（０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０加ＰＢＳ）の皮膚血流への影響を、３０秒間の電気パルス刺激後の血液細胞の流束として測定した図である。抗体Ｇ１および媒体が静脈内（ｉ．ｖ．）に投与され、抗体投与３０、６０、９０および１２０分後に神経電気パルス刺激が行われた。Ｙ軸は、抗体がまったく投与されていないまたは媒体（１００％と定義されている）が投与された時点（時間０分）のＡＵＣレベルと比較したＡＵＣの割合を表示している。Ｘ軸は、抗体投与から電気パルス刺激までの時間（分）を表示している。「＊」は媒体と比較した場合のＰ＜０．０５を、「＊＊」はＰ＜０．０１を表示している。データは二元配置分散分析およびＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの事後分析を用いて解析された。
【図８Ａ】Ｇ１抗体（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）または媒体（０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０加ＰＢＳ）投与の皮膚血流への影響を、投薬後２４時間で行われた３０秒間の電気パルス刺激後、血液細胞の流束として測定した図である。抗体Ｇ１または媒体は、神経の電気パルス刺激の２４時間前に静脈内（ｉ．ｖ．）に投与された。Ｙ軸は、血中濃度時間曲線下面積を表示している（血液細胞流束の変化×電気パルス刺激から血液細胞の流束がベースラインに戻るまでの時間の変化、ＡＵＣ）。Ｘ軸は、抗体Ｇ１の異なる投与量を表示している。「＊」は媒体と比較した場合のＰ＜０．０５を、「＊＊」はＰ＜０．０１を表示している。データは、一元配置分散分析およびダネット多重比較検定を用いて分析された。
【図８Ｂ】抗体Ｇ１（０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ）または媒体（０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０加ＰＢＳ）投与の皮膚血流への影響を、投薬７日後での３０秒間の電気パルス刺激後に、血液細胞の流束として測定した図である。抗体Ｇ１または媒体は、神経の電気パルス刺激の７日前に静脈内（ｉ．ｖ．）に投与された。Ｙ軸は、ｔｏｔａｌＡＵＣを表示している。Ｘ軸は抗体Ｇ１の異なる投薬量を表示している。「＊＊」は媒体と比較した場合のＰ＜０．０１を、「＊＊＊」はＰ＜０．００１を表示している。データは、一元配置分散分析およびダネット多重比較検定を用いて解析された。
【図８Ｃ】図８Ａおよび８Ｂからのデータの曲線適合解析の図である。抗体Ｇ１または媒体は、神経の電気パルス刺激の２４時間前または７日前のいずれかに静脈内（ｉ．ｖ．）に投与された。Ｙ軸は、ｔｏｔａｌＡＵＣを表示し、Ｘ軸は、ＥＣ_５０を決定するために、抗体Ｇ１の変動容量をｍｇ／ｋｇ単位で対数目盛で表示している。
【図９】抗体ｍｕ７Ｅ９（１０ｍｇ／ｋｇ）、ＢＩＢＮ４０９６ＢＳまたは媒体（０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０加ＰＢＳ）の、電場刺激後の中硬膜動脈の直径の変化に対する影響を示した図である。抗体ｍｕ７Ｅ９、ＢＩＢＮ４０９６ＢＳまたは媒体は、電場刺激後に対するベースラインの反応が確立された後、０分時点に静脈内（ｉ．ｖ．）に投与を行った。Ｙ軸は、電場刺激後の中硬膜動脈の直径の変化を表示している。安静時の直径は０％に相当する。Ｘ軸は電気パルス刺激の時間（分）を表示している。「＊」は媒体と比較した場合のＰ＜０．０５を、「＊＊」はＰ＜０．０１を表示している。データは、一元配置分散分析およびダネット多重比較検定を用いて解析された。
【図１０】抗体Ｇ１（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）または媒体（０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０加ＰＢＳ）の、電場刺激後の中硬膜動脈の直径の変化に対する影響を示した図である。抗体Ｇ１または媒体は、電場刺激の７日前に静脈内（ｉ．ｖ．）に投与された。Ｙ軸は、中硬膜動脈の直径の変化を表示している。安静時の直径が０％に相当する。Ｘ軸は刺激電圧を表示している。「＊」は媒体と比較した場合のＰ＜０．０５を、「＊＊」はＰ＜０．０１を、「＊＊＊」はＰ＜０．００１を表示している。データは、二元配置分散分析およびＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの事後分析を用いて分析された。
【図１１Ａ】２４時間前に静脈内（ｉ．ｖ．）に投与された抗体ｍｕ４９０１（１０ ＭＧ／ＫＧ）または媒体（０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０加ＰＢＳ）の、モルヒネ中毒のラットにおけるナロキソン（１ｍｇ／ｋｇ）の皮下投与に誘導された中核体温の低下に対する影響を示した図である。Ｙ軸は、ベースラインからの体温の違いを表示している。Ｘ軸は、ナロキソンの投与時点から測った時間を表示している。
【図１１Ｂ】２４時間前に静脈内（ｉ．ｖ．）に投与された抗体ｍｕ４９０１（１０ｍｇ／ｋｇ）または媒体（０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０加ＰＢＳ）の、モルヒネ中毒のラットにおけるナロキソン（１ｍｇ／ｋｇ）の皮下投与に誘導された尾表面体温の上昇に対する影響を示した図である。Ｙ軸は、ベースラインからの体温の違いを表示している。Ｘ軸は、ナロキソンの投与時点から測った時間を表示している。
【０３０５】
【図１】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図３】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図８Ｃ】

【図９】

【図１０】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【公表番号】特表２００９−５１５９４２（Ｐ２００９−５１５９４２Ａ）
【公表日】平成２１年４月１６日（２００９．４．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５４０７１５（Ｐ２００８−５４０７１５）
【出願日】平成１８年１１月２日（２００６．１１．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００６／００３１８１
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０５４８０９
【国際公開日】平成１９年５月１８日（２００７．５．１８）
【出願人】（５０５１２９４１５）ライナット　ニューロサイエンス　コーポレイション (33)
【Ｆターム（参考）】