クロピドグレル及びその誘導体の製造方法
本発明は、クロピドグレル及びその誘導体を製造する方法に関し、より詳しくは、ラセミック２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルから酵素を用いた加水分解反応を通じて光学活性体である（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルを製造し、これを中間体として使用して血小板凝集抑制活性を有する（Ｓ）−クロピドグレル及びその誘導体を製造する方法に関する。本発明によれば、本発明に従うクロピドグレル及びその誘導体製造方法は、製造工程が単純で、かつ光学分割剤の使用無しで少量の酵素のみを使用することによって生産コストを低減することができ、高光学純度で得られた（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルを中間体として使用することによって、高光学純度を有するクロピドグレル及びその誘導体の量産に適合するだけでなく、製造工程で毒性の強い物質を使用しないので、環境保護にも寄与することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クロピドグレル及びその誘導体を製造する方法に関し、より詳しくは、ラセミック２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルから酵素を用いた加水分解反応を通じて光学活性体である（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルを製造し、これを中間体として使用して血小板凝集抑制活性を有する（Ｓ）−クロピドグレル及びその誘導体を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
クロピドグレル（clopidogrel）は、＜化１＞でＲ１がメチル基である化合物であって、その化学名がメチル−（Ｓ）−α−（ｏ−クロロフェニル）−６、７−ジヒドロチエノ［３、２−ｃ］ピリジン−５（４Ｈ）−アセテートであり、力強い血小板凝集抑制活性（platelet aggregation inhibitory activity）及び抗血栓活性（anti-thrombotic activity）を表して、脳卒中、血栓、塞栓などの末梢動脈性疾患及び心筋梗塞、狭心症などの冠状動脈性疾患の治療に使用する血管系疾患治療剤である。
【０００３】
【化１】
【０００４】
クロピドグレルは、２−クロロ、または２−ブロモ形態であるメチル−２−（２−クロロフェニル）アセテートを製造した後、４、５、６、７−テトラヒドロチエノ［３、２、ｃ］ピリジンと反応させてラセミック形態で製造される（米国特許４，５２９，５９６、米国特許５，０３６，１５６、及び米国特許５，１８９，１７０）。しかしながら、クロピドグレルは、右旋性光学活性剤である（Ｓ）−光学異性質体のみ治療剤に活用できるので、左旋性の（Ｒ）−鏡像異性質体が実質的に含まれないように光学的に純粋に製造しようとする試みが進行された。
【０００５】
このような試みのうちの代表的な例として、米国特許４，８４７，２６５では、ラセミッククロピドグレルを合成した後に光学分割剤であるカンパスルホン酸で（Ｓ）−クロピドグレルのみを選択的に部分立体異性質体塩で形成させた後、再結晶により（Ｒ）−光学異性質体が含まれない塩形態で収得し、ＮａＨＣＯ３などの弱塩基として光学分割剤を除去する工程により（Ｓ）−クロピドグレルを製造した。
【０００６】
米国特許５，２０４，４６９では、２−クロロフェニルグリシン、または２−クロロフェニルグリシンメチルエステルを光学分割剤であるカンパスルホン酸、またはタルタリック酸で部分立体異性質体塩で形成させて再結晶により収得した後、２−チエニルエチルパラ−トルエンスルホネートと反応させて下記の＜化２＞として表示される化合物を製造した後、これをホルムアルデヒドと環化（cyclization）反応を遂行して（Ｓ）−クロピドグレルを製造するか、または既存の工程のように２−クロロまたは２−ブロモ形態であるメチル−２−（２−クロロフェニル）アセテートを製造し、２−チエニルエチルパラ−トルエンスルホネートと反応させてラセミック形態の＜化２＞として表示される化合物を製造した後、カンパスルホン酸またはタルタリック酸で部分立体異性質体塩で形成させて再結晶により収得した後、光学分割剤を除去して（Ｓ）−光学異性質体（２）を収得し、これを上記の方法のように、ホルムアルデヒドと環化反応させて（Ｓ）−クロピドグレルを製造した。
【０００７】
米国特許６，０８０，８７５では、２−クロロフェニルグリシンメチルエステルを２，４−ジニトロベンゾイルフェニルグリシンで光学分割した後、ＮａＨＣＯ３水溶液で光学分割剤を除去させ、２−チエニルグリシデートナトリウムと反応させて＜化２＞として表示される化合物を製造した。
【０００８】
【化２】
【０００９】
これと類似するように、ＷＯ９８／５１６８９でも２−クロロベンズアルデヒドとシアン化ナトリウムを反応させた後、２−チエニルエチルアミンで＜化３＞として表示されるアセトニトリル化合物を製造してカンパスルホン酸で光学分割するか、または＜化４＞として表示されるアセトアミドに転換した後にタルタリック酸に光学分割し、＜化２＞として表示されるメチルエステル化合物に転換させた後、ホルムアルデヒドで環化して（Ｓ）−クロピドグレルを製造した。
【００１０】
【化３】
【００１１】
【化４】
【００１２】
一方、韓国公開特許２００７−００６８０４３では、＜化５＞として表示されるクロピドグレルラセミックカルボキシ酸を製造した後、シンコニンを用いて部分立体異性質体塩に転換した後、酸条件で適切な溶媒に抽出して（Ｓ）−クロピドグレルカルボキシ酸を光学分離し、メタノールで反応して（Ｓ）−クロピドグレルを製造したし、韓国公開特許２００６−０１３４５４１では、＜化５＞として表示されるクロピドグレルラセミックカルボキシ酸を高価の光学分割剤である（１Ｒ、２Ｒ）−（−）−２−アミノ−１−フェニル−１、３−プロパンジオールのような光学活性アミン誘導体に（Ｓ）−クロピドグレルカルボキシ酸を光学分割させた後、メタノールで反応して（Ｓ）−クロピドグレルを製造した。
【００１３】
【化５】
【００１４】
しかしながら、上記の方法は全てクロピドグレルに相応するラセミ体またはその中間体に高価の光学分割剤を使用して光学分割を遂行し、光学分割時間が数日に達する問題点があり、光学分割の初期に収得した部分立体異性体塩の光学純度が充分でないので、製薬学的に要求される充分な光学純度を得るためには、追加に精製しなければならないので、これは歩留りの低下をもたらした。だけでなく、光学分割に使われたカンパスルホン酸の場合、水によく溶ける性質を有することによって、これを反応溶液から回収することが難しくて、やむをえず廃棄しなければならず、シンコニンの場合にも毒性が非常に強くて環境的に不利であるという問題点がある。また、上記開示された方法では、高価の２−チエニルエチルアミン、２−チエニルエチルアルコール、または２−チエニルエチルブロマイドのような試薬を使用して合成した後、反対の形態である（Ｒ）−鏡像異性体を廃棄しなければならないので、経済的には勿論、環境的に極めて不利であるということができる。
【００１５】
併せて、韓国公開特許２００６−００９８００９でも上記の方法のようにタルタリック酸で光学分割した（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンメチルエステルを２−チエニルアセテートと反応させて＜化６＞として表示される（Ｓ）−メチル−２−（２−チエニルアセテートアミド）−２−（２−クロロフェニル）アセテートを製造した後、アミド機能基を還元反応して＜化２＞として表示される化合物を製造し、ホルムアルデヒドで環化して（Ｓ）−クロピドグレルを製造したものであって、光学分割時、上記のような問題点を相変わらず有しており、またアミド機能基を還元させる場合には、メチルエステルもまた還元されて歩留りが格段に低下する問題点がある。
【００１６】
【化６】
【００１７】
このような問題点を改善するために、（Ｒ）−メチル−２−クロロマンデレートスルホン誘導体と２−チエニルエチルアミンとを反応させて上記＜化２＞の中間体を形成させた後、ホルムアルデヒドで環化反応をするか、または４、５、６、７−テトラヒドロチエノ［３、２−ｃ］ピリジンを用いて＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレルを製造したし（ＷＯ９９／１８１１０）、Ｎ，Ｎ’−ビス−４、５、６、７−テトラヒドロチエノ［３、２−ｃ］ピリジルメタンを（Ｒ）−メチル−２−ブロモ−２−（２−クロロフェニル）アセテート、または（Ｒ）−２−クロロフェニルアセテートスルホン誘導体と反応させて（Ｓ）−クロピドグレルを製造したが（ＷＯ０３／０９３２７６）、離脱基であるスルホン酸誘導体、またはハロゲン及び反応の条件によってラセミ化されて光学純度が低下する可能性が大きいので、大量工程では不利であるという短所がある。
【００１８】
また、米国特許６，８５８，７３４では、２−クロロベンズアルデヒドと２−チエニルエチルアミンとを反応させて＜化７＞のような化合物を製造した後、ストレッカー触媒を使用して非対称合成を遂行して＜化８＞と表示される（Ｓ）−形態の化合物を製造した後、ホルムアルデヒドで環化を実施し、ニトリルをメチルエステルに転換して（Ｓ）−クロピドグレルを製造したが、非対称合成時に毒性の強いシアン酸を使用しなければならず、反応後、光学純度が８５％程度に過ぎないという問題点がある。
【００１９】
【化７】
【００２０】
【化８】
【００２１】
ここに、本発明者らは上記の従来技術の問題点を改善するために例の努力した結果、ラセミック２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルを水溶液または溶媒を含む水溶液の上で酵素を使用して加水分解反応を通じた光学活性体である（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を製造した後、製造された（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を中間体として使用すれば、血小板凝集抑制活性を有する（Ｓ）−クロピドグレル及びその誘導体を容易に製造することができるということを確認し、本発明を完成するようになった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
本発明の目的は、簡単な製造工程と低廉な費用で光学純度の高い（Ｓ）−クロピドグレル及びその誘導体を製造する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
上記の目的を達成するために、本発明は、（ａ）＜化９＞として表示されるラセミック−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を酵素で加水分解反応させて＜化１０＞として表示される光学活性体化合物を製造するステップと、（ｂ）上記製造された＜化１０＞として表示される光学活性体化合物を＜化１１＞として表示される化合物と反応させて＜化１２＞として表示される化合物を製造するステップと、（ｃ）上記製造された＜化１２＞として表示される化合物を酸存在下でホルミル化剤（formylating agent）と環化（cyclization）反応させるステップと、を含む、下記＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレル、その誘導体、またはその塩を製造する方法を提供する。
【００２４】
【化１】
【００２５】
【化９】
【００２６】
【化１０】
【００２７】
【化１１】
【００２８】
【化１２】
【００２９】
上記の化学式で、上記Ｒ１は水素、置換または非置換された炭素数１乃至８のアルキル基、置換または非置換された炭素数１乃至８のアルケニル基、ベンジル基または炭素数３乃至６のサイクロアルキル基であり、Ｘは弗素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、ブロム（Ｂｒ）、及びヨウ素（Ｉ）から構成された群から選択されるハロゲン原子、または−ＯＳＯ２Ｒ２（ここで、上記Ｒ２は置換または非置換された炭素数１乃至８のアルキル基、置換または非置換されたアリール基、置換または非置換されたアリルアルキル基、置換または非置換されたヘテロアリル基、または置換または非置換されたヘテロアリルアルキル基である）を意味する。
【００３０】
本発明の他の特徴及び具現例は次の詳細な説明及び添付の特許請求範囲からより明らかになる。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
発明の詳細な説明及び具体的な具現例
本発明は（ａ）＜化９＞として表示されるラセミック２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を酵素で加水分解反応させて＜化１０＞として表示される光学活性体化合物を製造するステップと、（ｂ）上記製造された＜化１０＞として表示される光学活性体化合物を＜化１１＞として表示される化合物と反応させて＜化１２＞として表示される化合物を製造するステップと、（ｃ）上記製造された＜化１２＞として表示される化合物を酸存在下でホルミル化剤（formylating agent）と環化（cyclization）反応させるステップと、を含む、＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレル、その誘導体、またはその塩を製造する方法に関するものである。
【００３２】
【化１】
【００３３】
【化９】
【００３４】
【化１０】
【００３５】
【化１１】
【００３６】
【化１２】
【００３７】
上記の化学式で、上記Ｒ１は水素、置換または非置換された炭素数１乃至８のアルキル基、置換または非置換された炭素数１乃至８のアルケニル基、ベンジル基、または炭素数３乃至６のサイクロアルキル基であり、Ｘは弗素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、ブロム（Ｂｒ）、及びヨウ素（Ｉ）から構成された群から選択されるハロゲン原子、または−ＯＳＯ２Ｒ２（ここで、上記Ｒ２は置換または非置換された炭素数１乃至８のアルキル基、置換または非置換されたアリール基、置換または非置換されたアリルアルキル基、置換または非置換されたヘテロアリル基、または置換または非置換されたヘテロアリルアルキル基である）を意味する。
【００３８】
このような、本発明に従う＜化１＞として表示されるクロピドグレル、その誘導体、またはその塩は、下記＜式１＞に表示された方法により製造できる。
【式１】
【００３９】
【００４０】
上記＜式１＞で、上記Ｒ１またはＸは前述した通りである。
【００４１】
上記＜式１＞に表れたように、＜化９＞として表示されるラセミック２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を水溶液または溶媒を含む水溶液の上で加水分解能を有する酵素を使用して加水分解反応を通じた光学活性体である（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物（化１０）を製造した後、製造された（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物（化１０）を中間体として使用して＜化１１＞として表示される化合物と反応させて＜化１２＞として表示される化合物を製造し、これを環化反応を通じて血小板凝集抑制活性を有する（Ｓ）−クロピドグレル、その塩、またはその誘導体（化１）を製造することができる。
【００４２】
具体的に、本発明に従う＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレル、その誘導体、またはその塩は、低廉な価格で商業的確保が可能であるとか、低廉な費用で製造が容易な＜化９＞として表示される２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を出発物質として使用することができる。２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物は、水溶液状または溶媒を含有する水溶液状で加水分解酵素またはこれを含む菌株を使用して立体選択的加水分解反応により＜化１０＞として表示される光学活性（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル、または（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンを製造することができる。
【００４３】
本発明に従う加水分解反応は、ｐＨ４〜１０及び温度１０〜７０℃条件で遂行されることを特徴とすることができ、上記ｐＨ及び温度範囲を逸脱する場合には酵素の不安定化を誘発したり、副反応を発生させることができる。
【００４４】
本発明において、上記酵素は、プロテアーゼ（protease）またはリパーゼ（lipase）のような加水分解酵素を用いることを特徴とすることができ、上記加水分解酵素には、フレーバザイム（flavourzyme）、プロテアーゼＡ（protease A）、アルカラーゼ（alcalase）、サビナーゼ（savinase）、プロタメックス（protamex）、エスペラーゼ（esperase）、ノボザイム４３５（novozyme 435、Novozyme社）、エステラーゼ（esterlase）、アシラーゼ（acylase）、及びこれらの混合物などを使用することができるが、これに限定されるのではない。併せて、上記酵素原に上記加水分解酵素を含有する微生物を使用することもできる。このような菌株には、バシラス属菌株（Bacillus sp）、アスペルギルスオリザ（aspergillus orizae）、アスペルギルスニガー（aspergillus niger）、カンジダアンタークティカ（Candida antarctica）、及びこれらの混合物などを例示することができるが、加水分解酵素を含む菌株または微生物であれば、制限無しで使用できる。
【００４５】
本発明に従う立体選択的な加水分解反応の後にはアセト酸エチル、メチレンクロライド、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、１、２−ジメトキシエタン、１、２−ジクロロエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、及びこれらの混合物から構成された群から選択される溶媒を用いて高光学純度の（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル、及び（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンを抽出して容易に（Ｒ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル、及び（Ｒ）−２−クロロフェニルグリシンから分離できる。
【００４６】
前述したような方法により得られた高光学純度の（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル、及び（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンは、＜式１＞の＜化１１＞として表示される２−チエニルエチルスルホン誘導体、または２−チエニルエチルハロゲン誘導体のような化合物と反応させて＜化１２＞として表示される化合物を製造した後、＜化１２＞として表示される化合物を公知の方法により酸存在下でホルミル化剤（formylating agent）を使用して環化（cyclization）反応により目的物質である＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレル誘導体を製造することができる。
本発明において、上記ホルミル化剤（formylating agent）は、ホルムアルデヒド、ホルムアルデヒド水化物及びホルムアルデヒド重合体から構成された群から選択されることができ、酸は塩を製造するためのものであって、硫酸、塩酸、ブロム酸、スルホン酸、ホルム酸、アセト酸のような無機酸または有機酸を使用することができる。
【００４７】
本発明に従う（Ｓ）−クロピドグレルの塩はそれの固形性または安定性があるか否かに関わらず、ヨーロッパ特許第０，２８１，４５９号、または国際特許公開ＷＯ２００４／０７４２１５号に記述されたような通常のクロピドグレルの酸付加塩を意味する。このような塩を形成するために使われた典型的な無機酸は、塩酸、ブロム酸、ヨウ素酸、窒酸、硫酸、燐酸、亜燐酸（hypophosphoric）などを含む。また、脂肪族モノ及びジカルボキシル酸、フェニル−置換されたアルカンオイック酸、ヒドロキシアルカンオイック酸、及びヒドロキシアルカンジオイック酸、芳香族酸、脂肪族及び芳香族スルホン酸のような有機酸から誘導された塩が使用できる。したがって、このような薬学的に許容可能な塩は、アセテート、フェニルアセテート、トリフルオロアセテート、アクリレート、アスコルベート、ベンゾエート、クロロベンゾエート、ジニトロベンゾエート、ヒドロキシベンゾエート、メトキシベンゾエート、メチルベンゾエート、ｏ−アセトキシベンゾエート、ナフタレン−２−ベンゾエート、ブロマイド、イソブチレート、フェニルブチレート、ベータ−ヒドロキシブチレート、クロライド、シンナメート、シトレート、ホルメート、フマレート、グリコレート、ヘプタノエート、ラクテート、マレート、ヒドロキシマレート、マロネート、メシレート、ニトレート、オキサレート、フタレート、ホスフェート、モノヒドロゲンホスフェート、ジヒドロゲンホスフェート、メタホスフェート、パイロホスフェート、プロピオネート、フェニルプロピオネート、サリシレート、サクシネート、スルフェート、ビスルフェート、パイロスルフェート、スルファイト、ビスルファイト、スルホネート、ベンゼンスルホネート、ｐ−ブロモフェニルスルホネート、クロロベンゼンスルホネート、エタンスルホネート、２−ヒドロキシエタンスルホネート、メタンスルホネート、ナフタレン−１−スルホネート、ナフタレン−２−スルホネート、ｐ−トルエンスルホネート、キシレンスルホネート、タルタレートなどを含むことができ、好ましい塩はビスルフェート塩とすることができる。
【００４８】
本発明に従う（Ｓ）−クロピドグレル、その誘導体、またはその塩を製造する方法は、２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルの加水分解反応を通ジて遂行することによって、反応が簡単で、かつ反応後の回収が容易であり、２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルの加水分解反応により収得された高光学純度を有する（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシン、または（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル中間体を用いて高光学純度を有する（Ｓ）−クロピドグレル及びその誘導体を製造できるので、従来の製法に比べてより経済的に製造することができる。
【００４９】
実施形態
以下、実施形態を通じて本発明をより詳細に説明する。これら実施形態は本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲がこれら実施形態により制限されることと解釈されないことは当業界で通常の知識を有する者において自明なことである。
【００５０】
実施形態１：ラセミック２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルの製造
メタノール５００ｍｌにラセミック２−クロロフェニルグリシン１００ｇを入れて、−１０℃でチオニルクロライド７０ｍｌを徐々に落とした後、５０℃で昇温させて４時間の間攪拌した。攪拌後、揮発性物質は減圧濃縮して除去させ、メチレンクロライド１Ｌと水１００ｍｌを入れて希薄させた後、ＮａＯＨ水溶液で中和させ、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液５００ｍｌを用いて有機層を洗浄した。洗浄された上記混合溶液のメチレンクロライド層を分離させ、ＭｇＳＯ４で水分を除去した後、減圧濃縮してラセミック２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（１ａ）１０４．６ｇ（歩留り：９７．３％）を製造した。
【００５１】
一方、ラセミック２−クロロフェニルグリシンブチルエステル（１ｂ）はメタノールの代わりにブタノールを使用して上記の条件で反応してラセミック２−クロロフェニルグリシンブチルエステル（１ｂ）１２４．０ｇ（歩留り：９５．２％）を製造した。上記の化合物に対するＮＭＲ分析は下記の通りである。
「1a : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.4-7.2(m, 4H), 5.00(s, 1H), 3.72(s, 3H), 1.95(s, 2H)
1b : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.4-7.2(m, 4H), 5.00(s, 1H), 4.13(t, 2H), 1.95(s, 2H), 1.59-1.50(m, 2H), 1.31-1.19(m, 2H), 0.84(t, 3H)」
【００５２】
実施形態２：加水分解反応を通じた光学活性（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルの製造
０．１Ｍ燐酸緩衝溶液（potassium phosphate buffer、ｐＨ７．５）１，０００ｍｌが入っている反応器に実施形態１で製造されたラセミック２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（１ａ）２００ｇを入れて、アルカラーゼ２．５Ｌ（alcalase ２．５Ｌ）酵素１０ｍｌ（１％、ｖ／ｖ）を添加した後、上記溶液を３０℃、２５０ｒｐｍで反応を遂行した。ｐＨを一定に維持するために２Ｎ ＮａＯＨ水溶液で投入して調整した。２４時間反応の後、上記溶液にエチルアセテート１，０００ｍｌを入れて９９％以上の光学純度を有する光学活性（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（２ａ）を抽出し、ＭｇＳＯ４で水分を除去した後、減圧濃縮して光学純度９９．８％ｅｅを有する（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（２ａ）８５．６ｇ（歩留り：８５．６％、（Ｓ）−異性質体対比）を得た。
【００５３】
一方、光学活性（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンブチルエステル（２ｂ）は、上記の条件でラセミック２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（１ａ）の代わりにラセミック２−クロロフェニルグリシンブチルエステル（１ｂ）を使用して光学純度９９．２％ｅｅを有する（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンブチルエステル（２ｂ）５７．２ｇ（歩留り：５７．２％、（Ｓ）−異性質体対比）を製造した。上記化合物に対する光学純度は光学活性クラウンエーテル形態であるカイロシル（Chirosil）ＲＣＡ（＋）（１５０×４．６ｍｍ、５μｍ）キラルコラムが取り付けられた液体クロマトグラフィー（Waters社、モデル１５２５）を用いて分析したし、ＮＭＲ分析は下記の通りである。
「1a : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.4-7.2(m, 4H), 5.00(s, 1H), 3.72(s, 3H), 1.95(s, 2H)
1b : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.4-7.2(m, 4H), 5.00(s, 1H), 4.13(t, 2H), 1.95(s, 2H), 1.59-1.50(m, 2H), 1.31-1.19(m, 2H), 0.84(t, 3H)」
【００５４】
実施形態３：光学活性（Ｓ）−アルキル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート塩酸塩の製造
実施形態２で製造された（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（２ａ）１００ｇをアセトニトリル１，０００ｍｌに溶かし、炭酸水素カリウム６０ｇと２−チエニルエチルパラトルエンスルホネート１５６ｇを入れて、２０時間の間還流させた。上記混合物を減圧して揮発性物質を除去し、アセト酸エチルで溶かした後、蒸溜水で有機層を洗浄した。有機層が分離された上記混合物は０℃で濃い塩酸を落として結晶を析出させ、析出された結晶を抽出して真空乾燥させた後、（Ｓ）−メチル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート（３ａ）塩酸塩１２５．４ｇ（歩留り：７２．３％）を得た。
【００５５】
一方、（Ｓ）−ブチル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート（３ｂ）塩酸塩は、上記の条件で（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（２ａ）の代わりに（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンブチルエステル（２ｂ）を使用して（Ｓ）−ブチル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート（３ｂ）塩酸塩８８．１ｇ（歩留り：５４．８％）で製造した。上記の化合物に対するＮＭＲ分析は、下記の通りである。
「3a : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.40-7.32(m, 2H), 7.27-7.21(m, 2H), 7.12(d, 1H), 6.92(dd, 1H), 6.82(d, 1H), 4.93(s, 1H), 3.69(s, 3H), 3.03(t, 2H), 2.96-2.88(m, 1H), 2.82-2.74(m, 1H), 2.18(s, 1H)
3b : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.37-7.33(m, 2H), 7.27-7.21(m, 2H), 7.12(d, 1H), 6.91(dd, 1H), 6.82(d, 1H), 4.91(s, 1H), 4.09(t, 2H), 3.03(t, 2H), 2.96-2.88(m, 1H), 2.83-2.74(m, 1H), 2.35(s, 1H), 1.57-1.48(m, 2H), 1.29-1.19(m, 2H), 0.83(t, 3H)]
【００５６】
実施形態４：光学活性（Ｓ）−クロピドグレルアルキル誘導体ビスルフェート塩の製造
実施形態３で合成された（Ｓ）−メチル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート（３ａ）塩酸塩２００ｇに３５％のホルムアルデヒド水溶液６００ｍｌを入れて、４時間の間還流させた後、上記反応物をアセト酸エチルに希薄した後、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で洗浄し、上記反応物で有機層を分離した。分離された上記有機層を減圧濃縮して溶媒を除去した後、アセトンに溶かし、０℃で濃い硫酸を落として結晶を析出させた。析出された上記結晶を濾過して真空乾燥させて光学純度９９．５％ｅｅを有する（Ｓ）−クロピドグレル（４ａ）ビスルフェート塩生成物を１７９．７ｇ（歩留り：８３．９％）得た。
【００５７】
一方、（Ｓ）−クロピドグレルブチルエステル誘導体（４ｂ）のビスルフェート塩は、上記のような条件で（Ｓ）−メチル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート（３ａ）塩酸塩の代わりに（Ｓ）−ブチル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート（３ｂ）塩酸塩を使用して光学純度９９．０％ｅｅを有する（Ｓ）−クロピドグレルブチルエステル誘導体（４ｂ）１４３．４ｇ（歩留り：６７．４％）を製造した。上記の化合物に対する光学純度はウルトロンＥＳ−ＯＶＭ（Ultron ES−OVM）（Ovomucoid製品、１５０×４．６ｍｍ、５μｍ）コラムが取り付けられた液体クロマトグラフィー（Waters社、モデル１５２５）を用いて分析したし、ＮＭＲ分析結果は、下記の通りである。
「4a : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.72(dd, 1H), 7.41(dd, 1H), 7.33-7.23(m, 2H), 7.06(d, 1H), 6.67(d, 1H), 4.94(s, 1H), 3.73(s, 3H), 3.80-3.62(dd, 2H), 2.89(s, 4H)
4b : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.72(dd, 1H), 7.40(dd, 1H), 7.29-7.24(m, 2H), 7.06(d, 1H), 6.67(d, 1H), 4.89(s, 1H), 4.13(t, 2H), 3.78-3.60(dd, 2H), 2.89(s, 4H), 1.60-1.50(m, 2H), 1.32-1.19(m, 2H), 0.86(t, 3H)」
【産業上の利用可能性】
【００５８】
以上、詳述したように、本発明によれば、本発明に従うクロピドグレル及びその誘導体製造方法は、製造工程が単純で、かつ光学分割剤の使用無しで少量の酵素のみを使用することによって生産コストを低減することができ、高光学純度で得られた（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルを中間体として使用することによって、高光学純度を有するクロピドグレル及びその誘導体の量産に適合するだけでなく、製造工程で毒性の強い物質を使用しないので、環境保護にも寄与することができる。
【００５９】
以上、本発明内容の特定の部分を詳細に記述したところ、当業界の通常の知識を有する者にあって、このような具体的技術は単に好ましい実施様態であるだけであり、これによって本発明の範囲が制限されないことは明らかである。したがって、本発明の実質的な範囲は添付の請求項とそれらの等価物により定義されるべきである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クロピドグレル及びその誘導体を製造する方法に関し、より詳しくは、ラセミック２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルから酵素を用いた加水分解反応を通じて光学活性体である（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルを製造し、これを中間体として使用して血小板凝集抑制活性を有する（Ｓ）−クロピドグレル及びその誘導体を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
クロピドグレル（clopidogrel）は、＜化１＞でＲ１がメチル基である化合物であって、その化学名がメチル−（Ｓ）−α−（ｏ−クロロフェニル）−６、７−ジヒドロチエノ［３、２−ｃ］ピリジン−５（４Ｈ）−アセテートであり、力強い血小板凝集抑制活性（platelet aggregation inhibitory activity）及び抗血栓活性（anti-thrombotic activity）を表して、脳卒中、血栓、塞栓などの末梢動脈性疾患及び心筋梗塞、狭心症などの冠状動脈性疾患の治療に使用する血管系疾患治療剤である。
【０００３】
【化１】
【０００４】
クロピドグレルは、２−クロロ、または２−ブロモ形態であるメチル−２−（２−クロロフェニル）アセテートを製造した後、４、５、６、７−テトラヒドロチエノ［３、２、ｃ］ピリジンと反応させてラセミック形態で製造される（米国特許４，５２９，５９６、米国特許５，０３６，１５６、及び米国特許５，１８９，１７０）。しかしながら、クロピドグレルは、右旋性光学活性剤である（Ｓ）−光学異性質体のみ治療剤に活用できるので、左旋性の（Ｒ）−鏡像異性質体が実質的に含まれないように光学的に純粋に製造しようとする試みが進行された。
【０００５】
このような試みのうちの代表的な例として、米国特許４，８４７，２６５では、ラセミッククロピドグレルを合成した後に光学分割剤であるカンパスルホン酸で（Ｓ）−クロピドグレルのみを選択的に部分立体異性質体塩で形成させた後、再結晶により（Ｒ）−光学異性質体が含まれない塩形態で収得し、ＮａＨＣＯ３などの弱塩基として光学分割剤を除去する工程により（Ｓ）−クロピドグレルを製造した。
【０００６】
米国特許５，２０４，４６９では、２−クロロフェニルグリシン、または２−クロロフェニルグリシンメチルエステルを光学分割剤であるカンパスルホン酸、またはタルタリック酸で部分立体異性質体塩で形成させて再結晶により収得した後、２−チエニルエチルパラ−トルエンスルホネートと反応させて下記の＜化２＞として表示される化合物を製造した後、これをホルムアルデヒドと環化（cyclization）反応を遂行して（Ｓ）−クロピドグレルを製造するか、または既存の工程のように２−クロロまたは２−ブロモ形態であるメチル−２−（２−クロロフェニル）アセテートを製造し、２−チエニルエチルパラ−トルエンスルホネートと反応させてラセミック形態の＜化２＞として表示される化合物を製造した後、カンパスルホン酸またはタルタリック酸で部分立体異性質体塩で形成させて再結晶により収得した後、光学分割剤を除去して（Ｓ）−光学異性質体（２）を収得し、これを上記の方法のように、ホルムアルデヒドと環化反応させて（Ｓ）−クロピドグレルを製造した。
【０００７】
米国特許６，０８０，８７５では、２−クロロフェニルグリシンメチルエステルを２，４−ジニトロベンゾイルフェニルグリシンで光学分割した後、ＮａＨＣＯ３水溶液で光学分割剤を除去させ、２−チエニルグリシデートナトリウムと反応させて＜化２＞として表示される化合物を製造した。
【０００８】
【化２】
【０００９】
これと類似するように、ＷＯ９８／５１６８９でも２−クロロベンズアルデヒドとシアン化ナトリウムを反応させた後、２−チエニルエチルアミンで＜化３＞として表示されるアセトニトリル化合物を製造してカンパスルホン酸で光学分割するか、または＜化４＞として表示されるアセトアミドに転換した後にタルタリック酸に光学分割し、＜化２＞として表示されるメチルエステル化合物に転換させた後、ホルムアルデヒドで環化して（Ｓ）−クロピドグレルを製造した。
【００１０】
【化３】
【００１１】
【化４】
【００１２】
一方、韓国公開特許２００７−００６８０４３では、＜化５＞として表示されるクロピドグレルラセミックカルボキシ酸を製造した後、シンコニンを用いて部分立体異性質体塩に転換した後、酸条件で適切な溶媒に抽出して（Ｓ）−クロピドグレルカルボキシ酸を光学分離し、メタノールで反応して（Ｓ）−クロピドグレルを製造したし、韓国公開特許２００６−０１３４５４１では、＜化５＞として表示されるクロピドグレルラセミックカルボキシ酸を高価の光学分割剤である（１Ｒ、２Ｒ）−（−）−２−アミノ−１−フェニル−１、３−プロパンジオールのような光学活性アミン誘導体に（Ｓ）−クロピドグレルカルボキシ酸を光学分割させた後、メタノールで反応して（Ｓ）−クロピドグレルを製造した。
【００１３】
【化５】
【００１４】
しかしながら、上記の方法は全てクロピドグレルに相応するラセミ体またはその中間体に高価の光学分割剤を使用して光学分割を遂行し、光学分割時間が数日に達する問題点があり、光学分割の初期に収得した部分立体異性体塩の光学純度が充分でないので、製薬学的に要求される充分な光学純度を得るためには、追加に精製しなければならないので、これは歩留りの低下をもたらした。だけでなく、光学分割に使われたカンパスルホン酸の場合、水によく溶ける性質を有することによって、これを反応溶液から回収することが難しくて、やむをえず廃棄しなければならず、シンコニンの場合にも毒性が非常に強くて環境的に不利であるという問題点がある。また、上記開示された方法では、高価の２−チエニルエチルアミン、２−チエニルエチルアルコール、または２−チエニルエチルブロマイドのような試薬を使用して合成した後、反対の形態である（Ｒ）−鏡像異性体を廃棄しなければならないので、経済的には勿論、環境的に極めて不利であるということができる。
【００１５】
併せて、韓国公開特許２００６−００９８００９でも上記の方法のようにタルタリック酸で光学分割した（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンメチルエステルを２−チエニルアセテートと反応させて＜化６＞として表示される（Ｓ）−メチル−２−（２−チエニルアセテートアミド）−２−（２−クロロフェニル）アセテートを製造した後、アミド機能基を還元反応して＜化２＞として表示される化合物を製造し、ホルムアルデヒドで環化して（Ｓ）−クロピドグレルを製造したものであって、光学分割時、上記のような問題点を相変わらず有しており、またアミド機能基を還元させる場合には、メチルエステルもまた還元されて歩留りが格段に低下する問題点がある。
【００１６】
【化６】
【００１７】
このような問題点を改善するために、（Ｒ）−メチル−２−クロロマンデレートスルホン誘導体と２−チエニルエチルアミンとを反応させて上記＜化２＞の中間体を形成させた後、ホルムアルデヒドで環化反応をするか、または４、５、６、７−テトラヒドロチエノ［３、２−ｃ］ピリジンを用いて＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレルを製造したし（ＷＯ９９／１８１１０）、Ｎ，Ｎ’−ビス−４、５、６、７−テトラヒドロチエノ［３、２−ｃ］ピリジルメタンを（Ｒ）−メチル−２−ブロモ−２−（２−クロロフェニル）アセテート、または（Ｒ）−２−クロロフェニルアセテートスルホン誘導体と反応させて（Ｓ）−クロピドグレルを製造したが（ＷＯ０３／０９３２７６）、離脱基であるスルホン酸誘導体、またはハロゲン及び反応の条件によってラセミ化されて光学純度が低下する可能性が大きいので、大量工程では不利であるという短所がある。
【００１８】
また、米国特許６，８５８，７３４では、２−クロロベンズアルデヒドと２−チエニルエチルアミンとを反応させて＜化７＞のような化合物を製造した後、ストレッカー触媒を使用して非対称合成を遂行して＜化８＞と表示される（Ｓ）−形態の化合物を製造した後、ホルムアルデヒドで環化を実施し、ニトリルをメチルエステルに転換して（Ｓ）−クロピドグレルを製造したが、非対称合成時に毒性の強いシアン酸を使用しなければならず、反応後、光学純度が８５％程度に過ぎないという問題点がある。
【００１９】
【化７】
【００２０】
【化８】
【００２１】
ここに、本発明者らは上記の従来技術の問題点を改善するために例の努力した結果、ラセミック２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルを水溶液または溶媒を含む水溶液の上で酵素を使用して加水分解反応を通じた光学活性体である（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を製造した後、製造された（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を中間体として使用すれば、血小板凝集抑制活性を有する（Ｓ）−クロピドグレル及びその誘導体を容易に製造することができるということを確認し、本発明を完成するようになった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
本発明の目的は、簡単な製造工程と低廉な費用で光学純度の高い（Ｓ）−クロピドグレル及びその誘導体を製造する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
上記の目的を達成するために、本発明は、（ａ）＜化９＞として表示されるラセミック−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を酵素で加水分解反応させて＜化１０＞として表示される光学活性体化合物を製造するステップと、（ｂ）上記製造された＜化１０＞として表示される光学活性体化合物を＜化１１＞として表示される化合物と反応させて＜化１２＞として表示される化合物を製造するステップと、（ｃ）上記製造された＜化１２＞として表示される化合物を酸存在下でホルミル化剤（formylating agent）と環化（cyclization）反応させるステップと、を含む、下記＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレル、その誘導体、またはその塩を製造する方法を提供する。
【００２４】
【化１】
【００２５】
【化９】
【００２６】
【化１０】
【００２７】
【化１１】
【００２８】
【化１２】
【００２９】
上記の化学式で、上記Ｒ１は水素、置換または非置換された炭素数１乃至８のアルキル基、置換または非置換された炭素数１乃至８のアルケニル基、ベンジル基または炭素数３乃至６のサイクロアルキル基であり、Ｘは弗素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、ブロム（Ｂｒ）、及びヨウ素（Ｉ）から構成された群から選択されるハロゲン原子、または−ＯＳＯ２Ｒ２（ここで、上記Ｒ２は置換または非置換された炭素数１乃至８のアルキル基、置換または非置換されたアリール基、置換または非置換されたアリルアルキル基、置換または非置換されたヘテロアリル基、または置換または非置換されたヘテロアリルアルキル基である）を意味する。
【００３０】
本発明の他の特徴及び具現例は次の詳細な説明及び添付の特許請求範囲からより明らかになる。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
発明の詳細な説明及び具体的な具現例
本発明は（ａ）＜化９＞として表示されるラセミック２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を酵素で加水分解反応させて＜化１０＞として表示される光学活性体化合物を製造するステップと、（ｂ）上記製造された＜化１０＞として表示される光学活性体化合物を＜化１１＞として表示される化合物と反応させて＜化１２＞として表示される化合物を製造するステップと、（ｃ）上記製造された＜化１２＞として表示される化合物を酸存在下でホルミル化剤（formylating agent）と環化（cyclization）反応させるステップと、を含む、＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレル、その誘導体、またはその塩を製造する方法に関するものである。
【００３２】
【化１】
【００３３】
【化９】
【００３４】
【化１０】
【００３５】
【化１１】
【００３６】
【化１２】
【００３７】
上記の化学式で、上記Ｒ１は水素、置換または非置換された炭素数１乃至８のアルキル基、置換または非置換された炭素数１乃至８のアルケニル基、ベンジル基、または炭素数３乃至６のサイクロアルキル基であり、Ｘは弗素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、ブロム（Ｂｒ）、及びヨウ素（Ｉ）から構成された群から選択されるハロゲン原子、または−ＯＳＯ２Ｒ２（ここで、上記Ｒ２は置換または非置換された炭素数１乃至８のアルキル基、置換または非置換されたアリール基、置換または非置換されたアリルアルキル基、置換または非置換されたヘテロアリル基、または置換または非置換されたヘテロアリルアルキル基である）を意味する。
【００３８】
このような、本発明に従う＜化１＞として表示されるクロピドグレル、その誘導体、またはその塩は、下記＜式１＞に表示された方法により製造できる。
【式１】
【００３９】
【００４０】
上記＜式１＞で、上記Ｒ１またはＸは前述した通りである。
【００４１】
上記＜式１＞に表れたように、＜化９＞として表示されるラセミック２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を水溶液または溶媒を含む水溶液の上で加水分解能を有する酵素を使用して加水分解反応を通じた光学活性体である（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物（化１０）を製造した後、製造された（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物（化１０）を中間体として使用して＜化１１＞として表示される化合物と反応させて＜化１２＞として表示される化合物を製造し、これを環化反応を通じて血小板凝集抑制活性を有する（Ｓ）−クロピドグレル、その塩、またはその誘導体（化１）を製造することができる。
【００４２】
具体的に、本発明に従う＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレル、その誘導体、またはその塩は、低廉な価格で商業的確保が可能であるとか、低廉な費用で製造が容易な＜化９＞として表示される２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を出発物質として使用することができる。２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物は、水溶液状または溶媒を含有する水溶液状で加水分解酵素またはこれを含む菌株を使用して立体選択的加水分解反応により＜化１０＞として表示される光学活性（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル、または（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンを製造することができる。
【００４３】
本発明に従う加水分解反応は、ｐＨ４〜１０及び温度１０〜７０℃条件で遂行されることを特徴とすることができ、上記ｐＨ及び温度範囲を逸脱する場合には酵素の不安定化を誘発したり、副反応を発生させることができる。
【００４４】
本発明において、上記酵素は、プロテアーゼ（protease）またはリパーゼ（lipase）のような加水分解酵素を用いることを特徴とすることができ、上記加水分解酵素には、フレーバザイム（flavourzyme）、プロテアーゼＡ（protease A）、アルカラーゼ（alcalase）、サビナーゼ（savinase）、プロタメックス（protamex）、エスペラーゼ（esperase）、ノボザイム４３５（novozyme 435、Novozyme社）、エステラーゼ（esterlase）、アシラーゼ（acylase）、及びこれらの混合物などを使用することができるが、これに限定されるのではない。併せて、上記酵素原に上記加水分解酵素を含有する微生物を使用することもできる。このような菌株には、バシラス属菌株（Bacillus sp）、アスペルギルスオリザ（aspergillus orizae）、アスペルギルスニガー（aspergillus niger）、カンジダアンタークティカ（Candida antarctica）、及びこれらの混合物などを例示することができるが、加水分解酵素を含む菌株または微生物であれば、制限無しで使用できる。
【００４５】
本発明に従う立体選択的な加水分解反応の後にはアセト酸エチル、メチレンクロライド、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、１、２−ジメトキシエタン、１、２−ジクロロエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、及びこれらの混合物から構成された群から選択される溶媒を用いて高光学純度の（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル、及び（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンを抽出して容易に（Ｒ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル、及び（Ｒ）−２−クロロフェニルグリシンから分離できる。
【００４６】
前述したような方法により得られた高光学純度の（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル、及び（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンは、＜式１＞の＜化１１＞として表示される２−チエニルエチルスルホン誘導体、または２−チエニルエチルハロゲン誘導体のような化合物と反応させて＜化１２＞として表示される化合物を製造した後、＜化１２＞として表示される化合物を公知の方法により酸存在下でホルミル化剤（formylating agent）を使用して環化（cyclization）反応により目的物質である＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレル誘導体を製造することができる。
本発明において、上記ホルミル化剤（formylating agent）は、ホルムアルデヒド、ホルムアルデヒド水化物及びホルムアルデヒド重合体から構成された群から選択されることができ、酸は塩を製造するためのものであって、硫酸、塩酸、ブロム酸、スルホン酸、ホルム酸、アセト酸のような無機酸または有機酸を使用することができる。
【００４７】
本発明に従う（Ｓ）−クロピドグレルの塩はそれの固形性または安定性があるか否かに関わらず、ヨーロッパ特許第０，２８１，４５９号、または国際特許公開ＷＯ２００４／０７４２１５号に記述されたような通常のクロピドグレルの酸付加塩を意味する。このような塩を形成するために使われた典型的な無機酸は、塩酸、ブロム酸、ヨウ素酸、窒酸、硫酸、燐酸、亜燐酸（hypophosphoric）などを含む。また、脂肪族モノ及びジカルボキシル酸、フェニル−置換されたアルカンオイック酸、ヒドロキシアルカンオイック酸、及びヒドロキシアルカンジオイック酸、芳香族酸、脂肪族及び芳香族スルホン酸のような有機酸から誘導された塩が使用できる。したがって、このような薬学的に許容可能な塩は、アセテート、フェニルアセテート、トリフルオロアセテート、アクリレート、アスコルベート、ベンゾエート、クロロベンゾエート、ジニトロベンゾエート、ヒドロキシベンゾエート、メトキシベンゾエート、メチルベンゾエート、ｏ−アセトキシベンゾエート、ナフタレン−２−ベンゾエート、ブロマイド、イソブチレート、フェニルブチレート、ベータ−ヒドロキシブチレート、クロライド、シンナメート、シトレート、ホルメート、フマレート、グリコレート、ヘプタノエート、ラクテート、マレート、ヒドロキシマレート、マロネート、メシレート、ニトレート、オキサレート、フタレート、ホスフェート、モノヒドロゲンホスフェート、ジヒドロゲンホスフェート、メタホスフェート、パイロホスフェート、プロピオネート、フェニルプロピオネート、サリシレート、サクシネート、スルフェート、ビスルフェート、パイロスルフェート、スルファイト、ビスルファイト、スルホネート、ベンゼンスルホネート、ｐ−ブロモフェニルスルホネート、クロロベンゼンスルホネート、エタンスルホネート、２−ヒドロキシエタンスルホネート、メタンスルホネート、ナフタレン−１−スルホネート、ナフタレン−２−スルホネート、ｐ−トルエンスルホネート、キシレンスルホネート、タルタレートなどを含むことができ、好ましい塩はビスルフェート塩とすることができる。
【００４８】
本発明に従う（Ｓ）−クロピドグレル、その誘導体、またはその塩を製造する方法は、２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルの加水分解反応を通ジて遂行することによって、反応が簡単で、かつ反応後の回収が容易であり、２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルの加水分解反応により収得された高光学純度を有する（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシン、または（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル中間体を用いて高光学純度を有する（Ｓ）−クロピドグレル及びその誘導体を製造できるので、従来の製法に比べてより経済的に製造することができる。
【００４９】
実施形態
以下、実施形態を通じて本発明をより詳細に説明する。これら実施形態は本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲がこれら実施形態により制限されることと解釈されないことは当業界で通常の知識を有する者において自明なことである。
【００５０】
実施形態１：ラセミック２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルの製造
メタノール５００ｍｌにラセミック２−クロロフェニルグリシン１００ｇを入れて、−１０℃でチオニルクロライド７０ｍｌを徐々に落とした後、５０℃で昇温させて４時間の間攪拌した。攪拌後、揮発性物質は減圧濃縮して除去させ、メチレンクロライド１Ｌと水１００ｍｌを入れて希薄させた後、ＮａＯＨ水溶液で中和させ、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液５００ｍｌを用いて有機層を洗浄した。洗浄された上記混合溶液のメチレンクロライド層を分離させ、ＭｇＳＯ４で水分を除去した後、減圧濃縮してラセミック２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（１ａ）１０４．６ｇ（歩留り：９７．３％）を製造した。
【００５１】
一方、ラセミック２−クロロフェニルグリシンブチルエステル（１ｂ）はメタノールの代わりにブタノールを使用して上記の条件で反応してラセミック２−クロロフェニルグリシンブチルエステル（１ｂ）１２４．０ｇ（歩留り：９５．２％）を製造した。上記の化合物に対するＮＭＲ分析は下記の通りである。
「1a : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.4-7.2(m, 4H), 5.00(s, 1H), 3.72(s, 3H), 1.95(s, 2H)
1b : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.4-7.2(m, 4H), 5.00(s, 1H), 4.13(t, 2H), 1.95(s, 2H), 1.59-1.50(m, 2H), 1.31-1.19(m, 2H), 0.84(t, 3H)」
【００５２】
実施形態２：加水分解反応を通じた光学活性（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルの製造
０．１Ｍ燐酸緩衝溶液（potassium phosphate buffer、ｐＨ７．５）１，０００ｍｌが入っている反応器に実施形態１で製造されたラセミック２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（１ａ）２００ｇを入れて、アルカラーゼ２．５Ｌ（alcalase ２．５Ｌ）酵素１０ｍｌ（１％、ｖ／ｖ）を添加した後、上記溶液を３０℃、２５０ｒｐｍで反応を遂行した。ｐＨを一定に維持するために２Ｎ ＮａＯＨ水溶液で投入して調整した。２４時間反応の後、上記溶液にエチルアセテート１，０００ｍｌを入れて９９％以上の光学純度を有する光学活性（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（２ａ）を抽出し、ＭｇＳＯ４で水分を除去した後、減圧濃縮して光学純度９９．８％ｅｅを有する（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（２ａ）８５．６ｇ（歩留り：８５．６％、（Ｓ）−異性質体対比）を得た。
【００５３】
一方、光学活性（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンブチルエステル（２ｂ）は、上記の条件でラセミック２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（１ａ）の代わりにラセミック２−クロロフェニルグリシンブチルエステル（１ｂ）を使用して光学純度９９．２％ｅｅを有する（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンブチルエステル（２ｂ）５７．２ｇ（歩留り：５７．２％、（Ｓ）−異性質体対比）を製造した。上記化合物に対する光学純度は光学活性クラウンエーテル形態であるカイロシル（Chirosil）ＲＣＡ（＋）（１５０×４．６ｍｍ、５μｍ）キラルコラムが取り付けられた液体クロマトグラフィー（Waters社、モデル１５２５）を用いて分析したし、ＮＭＲ分析は下記の通りである。
「1a : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.4-7.2(m, 4H), 5.00(s, 1H), 3.72(s, 3H), 1.95(s, 2H)
1b : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.4-7.2(m, 4H), 5.00(s, 1H), 4.13(t, 2H), 1.95(s, 2H), 1.59-1.50(m, 2H), 1.31-1.19(m, 2H), 0.84(t, 3H)」
【００５４】
実施形態３：光学活性（Ｓ）−アルキル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート塩酸塩の製造
実施形態２で製造された（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（２ａ）１００ｇをアセトニトリル１，０００ｍｌに溶かし、炭酸水素カリウム６０ｇと２−チエニルエチルパラトルエンスルホネート１５６ｇを入れて、２０時間の間還流させた。上記混合物を減圧して揮発性物質を除去し、アセト酸エチルで溶かした後、蒸溜水で有機層を洗浄した。有機層が分離された上記混合物は０℃で濃い塩酸を落として結晶を析出させ、析出された結晶を抽出して真空乾燥させた後、（Ｓ）−メチル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート（３ａ）塩酸塩１２５．４ｇ（歩留り：７２．３％）を得た。
【００５５】
一方、（Ｓ）−ブチル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート（３ｂ）塩酸塩は、上記の条件で（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンメチルエステル（２ａ）の代わりに（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンブチルエステル（２ｂ）を使用して（Ｓ）−ブチル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート（３ｂ）塩酸塩８８．１ｇ（歩留り：５４．８％）で製造した。上記の化合物に対するＮＭＲ分析は、下記の通りである。
「3a : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.40-7.32(m, 2H), 7.27-7.21(m, 2H), 7.12(d, 1H), 6.92(dd, 1H), 6.82(d, 1H), 4.93(s, 1H), 3.69(s, 3H), 3.03(t, 2H), 2.96-2.88(m, 1H), 2.82-2.74(m, 1H), 2.18(s, 1H)
3b : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.37-7.33(m, 2H), 7.27-7.21(m, 2H), 7.12(d, 1H), 6.91(dd, 1H), 6.82(d, 1H), 4.91(s, 1H), 4.09(t, 2H), 3.03(t, 2H), 2.96-2.88(m, 1H), 2.83-2.74(m, 1H), 2.35(s, 1H), 1.57-1.48(m, 2H), 1.29-1.19(m, 2H), 0.83(t, 3H)]
【００５６】
実施形態４：光学活性（Ｓ）−クロピドグレルアルキル誘導体ビスルフェート塩の製造
実施形態３で合成された（Ｓ）−メチル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート（３ａ）塩酸塩２００ｇに３５％のホルムアルデヒド水溶液６００ｍｌを入れて、４時間の間還流させた後、上記反応物をアセト酸エチルに希薄した後、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で洗浄し、上記反応物で有機層を分離した。分離された上記有機層を減圧濃縮して溶媒を除去した後、アセトンに溶かし、０℃で濃い硫酸を落として結晶を析出させた。析出された上記結晶を濾過して真空乾燥させて光学純度９９．５％ｅｅを有する（Ｓ）−クロピドグレル（４ａ）ビスルフェート塩生成物を１７９．７ｇ（歩留り：８３．９％）得た。
【００５７】
一方、（Ｓ）−クロピドグレルブチルエステル誘導体（４ｂ）のビスルフェート塩は、上記のような条件で（Ｓ）−メチル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート（３ａ）塩酸塩の代わりに（Ｓ）−ブチル−α−（２−チエニルエチルアミノ）（２−クロロフェニル）アセテート（３ｂ）塩酸塩を使用して光学純度９９．０％ｅｅを有する（Ｓ）−クロピドグレルブチルエステル誘導体（４ｂ）１４３．４ｇ（歩留り：６７．４％）を製造した。上記の化合物に対する光学純度はウルトロンＥＳ−ＯＶＭ（Ultron ES−OVM）（Ovomucoid製品、１５０×４．６ｍｍ、５μｍ）コラムが取り付けられた液体クロマトグラフィー（Waters社、モデル１５２５）を用いて分析したし、ＮＭＲ分析結果は、下記の通りである。
「4a : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.72(dd, 1H), 7.41(dd, 1H), 7.33-7.23(m, 2H), 7.06(d, 1H), 6.67(d, 1H), 4.94(s, 1H), 3.73(s, 3H), 3.80-3.62(dd, 2H), 2.89(s, 4H)
4b : 1H-NMR(CDCl3, 300MHz)=7.72(dd, 1H), 7.40(dd, 1H), 7.29-7.24(m, 2H), 7.06(d, 1H), 6.67(d, 1H), 4.89(s, 1H), 4.13(t, 2H), 3.78-3.60(dd, 2H), 2.89(s, 4H), 1.60-1.50(m, 2H), 1.32-1.19(m, 2H), 0.86(t, 3H)」
【産業上の利用可能性】
【００５８】
以上、詳述したように、本発明によれば、本発明に従うクロピドグレル及びその誘導体製造方法は、製造工程が単純で、かつ光学分割剤の使用無しで少量の酵素のみを使用することによって生産コストを低減することができ、高光学純度で得られた（Ｓ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルを中間体として使用することによって、高光学純度を有するクロピドグレル及びその誘導体の量産に適合するだけでなく、製造工程で毒性の強い物質を使用しないので、環境保護にも寄与することができる。
【００５９】
以上、本発明内容の特定の部分を詳細に記述したところ、当業界の通常の知識を有する者にあって、このような具体的技術は単に好ましい実施様態であるだけであり、これによって本発明の範囲が制限されないことは明らかである。したがって、本発明の実質的な範囲は添付の請求項とそれらの等価物により定義されるべきである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次のステップを含む＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレル、その誘導体、またはその塩を製造する方法：
（ａ）＜化９＞として表示されるラセミック２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を酵素で加水分解反応させて＜化１０＞として表示される光学活性体化合物を製造するステップと、
（ｂ）前記製造された＜化１０＞として表示される光学活性体化合物を＜化１１＞として表示される化合物と反応させて＜化１２＞として表示される化合物を製造するステップと、
（ｃ）前記製造された＜化１２＞として表示される化合物を酸存在下でホルミル化剤（formylating agent）と環化（cyclization）反応させて＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレル、その誘導体、またはその塩を製造するステップと、
を含むことを特徴とする、クロピドグレル及びその誘導体の製造方法。
【化１】
【化９】
【化１０】
【化１１】
【化１２】
前記の化学式で、前記Ｒ１は水素、置換または非置換された炭素数１乃至８のアルキル基、置換または非置換された炭素数１乃至８のアルケニル基、ベンジル基、または炭素数３乃至６のサイクロアルキル基であり、Ｘは弗素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、ブロム（Ｂｒ）、及びヨウ素（Ｉ）から構成された群から選択されるハロゲン原子、または−ＯＳＯ２Ｒ２（ここで、前記Ｒ２は置換または非置換された炭素数１乃至８のアルキル基、置換または非置換されたアリール基、置換または非置換されたアリルアルキル基、置換または非置換されたヘテロアリール基、または置換または非置換されたヘテロアリルアルキル基である）を意味する。
【請求項２】
前記酵素は、加水分解酵素であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ホルミル化剤（formylating agent）は、ホルムアルデヒド、ホルムアルデヒド水化物、及びホルムアルデヒド重合体から構成された群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記（ｃ）ステップの酸は、有機酸、無機酸、及びこれらの混合物から構成された群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記（ａ）ステップの加水分解反応は、ｐＨ４〜１０及び温度１０〜７０℃条件で遂行されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記（ａ）ステップは、加水分解反応後に生成される（Ｒ）−２−クロロフェニルグリシン、及び（Ｒ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルを溶媒を使用して分離するステップをさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記溶媒は、アセト酸エチル、メチレンクロライド、ジエチルエーテル、ジイソプリピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、１、２−ジメトキシエタン、１、２−ジクロロエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、及びこれらの混合物から構成された群から選択されることを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項１】
次のステップを含む＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレル、その誘導体、またはその塩を製造する方法：
（ａ）＜化９＞として表示されるラセミック２−クロロフェニルグリシンアルキルエステル化合物を酵素で加水分解反応させて＜化１０＞として表示される光学活性体化合物を製造するステップと、
（ｂ）前記製造された＜化１０＞として表示される光学活性体化合物を＜化１１＞として表示される化合物と反応させて＜化１２＞として表示される化合物を製造するステップと、
（ｃ）前記製造された＜化１２＞として表示される化合物を酸存在下でホルミル化剤（formylating agent）と環化（cyclization）反応させて＜化１＞として表示される（Ｓ）−クロピドグレル、その誘導体、またはその塩を製造するステップと、
を含むことを特徴とする、クロピドグレル及びその誘導体の製造方法。
【化１】
【化９】
【化１０】
【化１１】
【化１２】
前記の化学式で、前記Ｒ１は水素、置換または非置換された炭素数１乃至８のアルキル基、置換または非置換された炭素数１乃至８のアルケニル基、ベンジル基、または炭素数３乃至６のサイクロアルキル基であり、Ｘは弗素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、ブロム（Ｂｒ）、及びヨウ素（Ｉ）から構成された群から選択されるハロゲン原子、または−ＯＳＯ２Ｒ２（ここで、前記Ｒ２は置換または非置換された炭素数１乃至８のアルキル基、置換または非置換されたアリール基、置換または非置換されたアリルアルキル基、置換または非置換されたヘテロアリール基、または置換または非置換されたヘテロアリルアルキル基である）を意味する。
【請求項２】
前記酵素は、加水分解酵素であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ホルミル化剤（formylating agent）は、ホルムアルデヒド、ホルムアルデヒド水化物、及びホルムアルデヒド重合体から構成された群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記（ｃ）ステップの酸は、有機酸、無機酸、及びこれらの混合物から構成された群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記（ａ）ステップの加水分解反応は、ｐＨ４〜１０及び温度１０〜７０℃条件で遂行されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記（ａ）ステップは、加水分解反応後に生成される（Ｒ）−２−クロロフェニルグリシン、及び（Ｒ）−２−クロロフェニルグリシンアルキルエステルを溶媒を使用して分離するステップをさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記溶媒は、アセト酸エチル、メチレンクロライド、ジエチルエーテル、ジイソプリピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、１、２−ジメトキシエタン、１、２−ジクロロエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、及びこれらの混合物から構成された群から選択されることを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【公表番号】特表２０１１−５２２５３５（Ｐ２０１１−５２２５３５Ａ）
【公表日】平成２３年８月４日（２０１１．８．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１２３９２（Ｐ２０１１−５１２３９２）
【出願日】平成２１年６月９日（２００９．６．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００９／００３０８３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１５１２５６
【国際公開日】平成２１年１２月１７日（２００９．１２．１７）
【出願人】（５１０３２１４３５）エンジーテック リミテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年８月４日（２０１１．８．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年６月９日（２００９．６．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００９／００３０８３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１５１２５６
【国際公開日】平成２１年１２月１７日（２００９．１２．１７）
【出願人】（５１０３２１４３５）エンジーテック リミテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
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