ケミカルバイオセンサー
【課題】前処理を必要とせずに、短時間でカテコールアミン類を検出することのできる、新規のケミカルバイオセンサーを提供する。
【解決手段】被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子からなる導電性高分子層１を備えた。導電性高分子層１に流れる電流値の変化を電流検出器６により検出することにより、又は、導電性高分子層１により反射される光の反射率の変化を反射光検出器10により検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【解決手段】被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子からなる導電性高分子層１を備えた。導電性高分子層１に流れる電流値の変化を電流検出器６により検出することにより、又は、導電性高分子層１により反射される光の反射率の変化を反射光検出器10により検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体内で分泌されるカテコールアミン類などのストレス性物質の検出に用いられるケミカルバイオセンサーに関する。
【背景技術】
【０００２】
カテコールアミンは、分子中にカテコール骨格をもつ生理活性アミンであり、ノルアドレナリン（ＮＡｄ）（米国ではノルエピネフリン）、アドレナリン（Ａｄ）（同エピネフリン）、ドーパミンなどが知られている。
【０００３】
ＮＡｄやＡｄは、副腎から血中に放出されるホルモンであり、血圧上昇、心拍数上昇に関わっているほか、シナプスにおいては神経伝達物質としても作用している。
【０００４】
一方、ドーパミンは中枢神経において神経伝達物質として作用し、運動調整、意欲、学習に関わっており、ドーパミン不足が統合失調症やパーキンソン病に関係するとされている。
【０００５】
このように、生体内で重要な役割を担っているカテコールアミンの測定は、病気の診断、医薬品の開発、医学、薬学の研究などにおいて不可欠な手段となっているが、現在、液体クロマトグラフを用いた方法が一般的に行われている。液体クロマトグラフ法では、カラムで分離したカテコールアミン類を検出するために、酸化還元電位を測定する方法や、予め蛍光物質を結合させておきその蛍光を検出する方法などがとられているが、前処理が必要であることと時間がかかることが問題となっていた。
【特許文献１】特開平５−１１３４３８号公報
【特許文献２】特開平５−９３６９０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明は、前処理を必要とせずに、短時間でカテコールアミン類を検出することのできる、新規のケミカルバイオセンサーを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明のケミカルバイオセンサーは、被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子からなる導電性高分子層を備えたものである。
【０００８】
また、前記導電性高分子層は、基板上に形成されたものである。
【０００９】
また、前記基板は導電性を有し、前記導電性高分子層は、前記基板上に電気化学的に合成されたものである。
【００１０】
また、前記導電性高分子層と前記基板との間に導電層が形成され、前記導電性高分子層は、前記導電層上に電気化学的に合成されたものである。
【００１１】
また、前記導電性高分子層に流れる電流値の変化を検出する電流値検出手段を備えたものである。
【００１２】
また、前記導電性高分子層により反射される光の反射率の変化を検出する反射率検出手段を備えたものである。
【００１３】
また、前記プローブ分子は、ベンジルアミン誘導体、フェニルグリシノニトリル誘導体、ジフェニルエチレンジアミン誘導体のいずれかである。
【００１４】
また、前記被検出物質は、カテコール類、カテコールアミン類、ヒドロキシインドール類のいずれかである。
【００１５】
また、前記電流値検出手段と前記反射率検出手段により、前記導電性高分子層に流れる電流値の変化と、前記導電性高分子層により反射される光の反射率の変化とを、同時に検出可能に構成されたものである。
【発明の効果】
【００１６】
本発明のケミカルバイオセンサーによれば、被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子からなる導電性高分子層を備えており、導電性高分子層に流れる電流値の変化、又は、導電性高分子層により反射される光の反射率の変化を検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【００１７】
また、前記導電性高分子層は、基板上に形成されたことにより、導電性高分子層を容易に形成することができ、また、取り扱いを容易にすることができる。
【００１８】
また、前記基板は導電性を有し、前記導電性高分子層は、前記基板上に電気化学的に合成されたことにより、導電性高分子層を電気化学的に容易に形成することができる。
【００１９】
また、前記導電性高分子層と前記基板との間に導電層が形成され、前記導電性高分子層は、前記導電層上に電気化学的に合成されたことにより、導電性高分子層を電気化学的に容易に形成することができる。
【００２０】
また、前記導電性高分子層に流れる電流値の変化を検出する電流値検出手段を備えており、導電性高分子層に流れる電流値の変化を電流値検出手段により検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【００２１】
また、前記導電性高分子層により反射される光の反射率の変化を検出する反射率検出手段を備えており、導電性高分子層により反射される光の反射率の変化を反射率検出手段により検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【００２２】
また、前記プローブ分子は、ベンジルアミン誘導体、フェニルグリシノニトリル誘導体、ジフェニルエチレンジアミン誘導体のいずれかであり、被検出物質としてのカテコール類、カテコールアミン類、ヒドロキシインドール類などと特異的に化学結合するので、前処理を必要とせずに、短時間でこれらの被検出物質を検出することができる。
【００２３】
また、前記電流値検出手段と前記反射率検出手段により、前記導電性高分子層に流れる電流値の変化と、前記導電性高分子層により反射される光の反射率の変化とを、同時に検出可能に構成されたことにより、より確実に被検物質を検出することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
本発明のケミカルバイオセンサーは、被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子からなる導電性高分子層を備えたものである。
【００２５】
本発明の対象となる被検出物質は、主に、カテコール類、カテコールアミン類、ヒドロキシインドール類であり、カテコールアミン類としては、化１に記載のドーパミン、アドレナリン、ノルアドレナリン、ヒドロキシインドール類としては、化１に記載のセロトニンなどが挙げられる。なお、これらは一例であり、本発明の対象とする被検出物質はこれらに限定されるものではない。
【００２６】
【化１】
【００２７】
そして、これらの被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子としては、これらに限定されるものではないが、ベンジルアミン誘導体、フェニルグリシノニトリル誘導体、ジフェニルエチレンジアミン誘導体などが挙げられる。
【００２８】
本発明のケミカルバイオセンサーを構成する導電性高分子層は、導電性を有する高分子からなり、例えば、上記のプローブ分子を重合させて形成することができ、化２に示すポリ（３−アミノベンジルアミン）などが導電性高分子として好適に用いられる。
【００２９】
【化２】
【００３０】
導電性高分子層は、基板上に形成することで容易に形成することができる。また、基板上に形成されたことにより、取り扱いを容易にすることができる。基板の種類は特定のものに限定されず、例えば、金属、ガラス、プラスチック、金属酸化物などからなるものを用いることができる。
【００３１】
そして、導電性高分子層を基板上に形成するためには、予め化学的に合成した導電性高分子を基板上に物理的に塗布する方法や基板に化学的に共有結合させる方法、電解重合法などにより電気化学的に導電性を有する基板上で導電性高分子を重合させて合成する方法などを用いることができる。
【００３２】
なお、電解重合法などにより電気化学的に合成する場合に用いられる基板は、基板自体に導電性を有するもののほか、基板表面に金属膜などの導電層が形成されたものを用いることができる。基板表面に導電層が形成されたものを用いる場合は、導電層上に導電性高分子層が合成され、導電性高分子層と基板との間に導電層が形成された構成となる。導電性を有する基板や導電層が形成された基板を用いることで、導電性高分子層を電気化学的に容易に形成することができる。
【００３３】
つぎに、本発明のケミカルバイオセンサーの一実施例について、図１を参照しながら説明する。
【００３４】
１はポリ（３−アミノベンジルアミン）からなる導電性高分子膜であり、この導電性高分子膜１は、基板２上に形成された金薄膜からなる導電層３上に形成されている。なお、導電性高分子層１は、導電層３上に電気化学的に合成されたものである。そして、基板２の導電層３が設けられていない面には、シリンドリカルプリズム４が接している。また、導電性高分子膜１の導電層３に接していない面にはリン酸緩衝液が満たされた溶液槽５が設けられ、この溶液槽５中のリン酸緩衝液が導電性高分子膜１に接触するようになっている。
【００３５】
また、６は導電性高分子層１に電圧を印加して、導電性高分子層１に流れる電流値の変化を検出する電流値検出手段としての電流検出器であり、この電流検出器６は、導電層３に接続する作用電極７、溶液槽５中の液体に接する参照電極８と対極電極９を備えている。
【００３６】
また、10は導電性高分子層１により反射される光の反射率の変化を検出する反射率検出手段としての反射光検出器である。この反射光検出器10は、光照射器11が発する波長６３２．８ｎｍのｐ偏光の光が導電性高分子層１により反射されたときの光強度の変化を検出するように構成されている。
【００３７】
上記のケミカルバイオセンサーにおいて、作用電極７に正の電圧を印加して導電性高分子層１を電気化学的に酸化させた状態で、溶液槽５のリン酸緩衝液に被検出物質として、例えばアドレナリンを添加すると、アドレナリン分子は導電性高分子層１と結合する。なお、アドレナリン分子が導電性高分子層１と結合したときの化学構造は、化３又は化４に示すようになっていると推定される。
【００３８】
【化３】
【００３９】
【化４】
【００４０】
この結合により、導電性高分子層１にアノード電流が流れる。この電流は、電流検出器６により電流値の変化として検出される。また、この結合により、導電性高分子層１の膜厚が増加する。この膜厚の増加は、反射光検出器10により反射率の変化として検出される。なお、電流検出器６による電流値の変化の検出、反射光検出器10による反射率の変化の検出は、同時に行うことができるように構成されている。
【００４１】
本実施例で導電性高分子として用いたポリ（３−アミノベンジルアミン）は導電性であり、電気化学的に酸化した状態でアドレナリンなどのカテコールアミン類と反応すると化学結合し、膜厚が増加することにより反射率が増加するという性質がある。この変化を反射光検出器10で測定することにより、カテコールアミン類を検出することが可能である。さらに、カテコールアミン類が導電性高分子膜に結合すること誘電率が変化するので、この変化を電流の変化として検出することでカテコールアミン類を検出することも可能である。
【００４２】
このように、本実施例のケミカルバイオセンサーによれば、被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子からなる導電性高分子層１を備えており、導電性高分子層１に流れる電流値の変化、又は、導電性高分子層により反射される光の反射率の変化を検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【００４３】
また、前記導電性高分子層１は、基板２上に形成されたことにより、導電性高分子層１を容易に形成することができ、また、取り扱いを容易にすることができる。
【００４４】
また、前記導電性高分子層１と前記基板２との間に導電層３が形成され、前記導電性高分子層１は、前記導電層３上に電気化学的に合成されたことにより、導電性高分子層を電気化学的に容易に形成することができる。
【００４５】
また、前記導電性高分子層１に流れる電流値の変化を検出する電流値検出手段としての電流検出器６を備えており、導電性高分子層１に流れる電流値の変化を電流検出器６により検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【００４６】
また、前記導電性高分子層１により反射される光の反射率の変化を検出する反射率検出手段としての反射光検出器10を備えており、導電性高分子層１により反射される光の反射率の変化を反射光検出器10により検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【００４７】
また、電流検出器６と反射光検出器10により、前記導電性高分子層１に流れる電流値の変化と、前記導電性高分子層１により反射される光の反射率の変化とを、同時に検出可能に構成されたことにより、より確実に被検物質を検出することができる。
【００４８】
さらに、試料を前処理することなく、その場で連続的にカテコールアミン類を測定することが可能となるので、臨床分野、研究開発分野で応用されることが期待される。
【００４９】
以下、より具体的な実施例に基づいて、本発明について詳細に説明する。なお、本発明は、以下の実施例によって制限されるものではない。
【実施例１】
【００５０】
０．０５Ｍの３−アミノベンジルアミン、０．５Ｍの硫酸を溶解した溶液中に金電極を浸した。金電極に通電して３−アミノベンジルアミンを電解重合することによって、金電極上に電気化学的にポリ（３−アミノベンジルアミン）膜を堆積した。
【００５１】
ここで、電解重合は、以下の条件で行った。銀・塩化銀参照電極に対して−０．２Ｖ〜０．９Ｖの間を掃引速度２０ｍＶ／ｓで１０サイクル −０．２Ｖ〜０．９５Ｖを１０サイクル、−０．２Ｖ〜１．１を１０サイクル行った。なお、対電極には白金を用いた。膜厚はおおよそ９．２ｎｍであった。
【実施例２】
【００５２】
リン酸緩衝液中で、実施例１で作製したポリ（３−アミノベンジルアミン）膜に電圧を印加して電気化学的に酸化させた状態とし、この状態でリン酸緩衝液にアドレナリンを投入し、膜表面での反射率を測定した。
【００５３】
ここで、測定は、以下の条件で行った。電圧を０．６５Ｖ一定に保ち、反射率が一定になった約２５０秒後にリン酸緩衝役中で０．１ｍＭの濃度になるようにカテコールアミンを投入した。反射率は、入射角度５３．５°に固定することにより測定を行った。
【００５４】
その結果、図２に示すように、アドレナリンの投入により、膜表面での反射率が増加した。これは、アドレナリンが膜表面に結合して膜厚が増加したことに起因するものである。
【実施例３】
【００５５】
実施例１で作製したポリ（３−アミノベンジルアミン）膜を電気的に酸化させた状態で、電流値の変化と反射率の変化を同時測定した。
【００５６】
ここで、測定は、以下の条件で行った。電圧を０．６５Ｖ一定に保ち、反射率が一定になった約２５０秒後にリン酸緩衝役中で０．１ｍＭの濃度になるようにカテコールアミンを投入した。反射率は、入射角度５３．５°に固定することにより測定を行った。金電極と白金電極の間を流れる電流も同時に検出を行った。
【００５７】
その結果、アドレナリンの吸着により酸化状態のポリ（３−アミノベンジルアミン）膜がさらに酸化され、図３に示すように、電流の増大が確認された。また、同時に反射率が増加した。
【実施例４】
【００５８】
０．０５Ｍのアニリン、０．５Ｍの硫酸を溶解した溶液中に金電極を浸した。金電極に通電してアニリンを電解重合することによって、金電極上に電気化学的にポリアニリン膜を堆積した。ここで、−０．２Ｖ〜０．９Ｖの間を２０ｍＶ／ｓで２サイクル行うことによりポリアニリン膜を作製した。
【００５９】
そして、リン酸緩衝液中で、実施例１で作製したポリ（３−アミノベンジルアミン）膜と、上記で作製したポリアニリン膜にそれぞれ電圧を印加して電気化学的に酸化させた状態とし、この状態でリン酸緩衝液にアドレナリンを投入し、電流値の変化を測定した。
【００６０】
ここで、測定は、以下の条件で行った。ポリ（３−アミノベンジルアミン）膜、ポリアニリン膜、それぞれの場合において、銀・塩化銀参照電極に対して０．６５Ｖの電圧で膜を酸化状態にして、ほぼ一定となるように２分以上経過してから、リン酸緩衝液中で１ｍＭのカテコールアミンを投入し、金電極と白金電極の間に流れる電流値を測定した。
【００６１】
その結果、図４に示すように、ポリアニリン膜では電流値の変化はほとんどないのに対し、ポリ（３−アミノベンジルアミン）膜では、大きな電流値の変化が見られた。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】本発明のケミカルバイオセンサーの一実施例を示す概略図である。
【図２】実施例２における反射率の変化の測定結果を示すグラフである。
【図３】実施例３における電流値と反射率の変化の同時測定結果を示すグラフである。
【図４】実施例４における電流値の変化の測定結果を示すグラフである。
【符号の説明】
【００６３】
１ 導電性高分子層
２ 基板
３ 導電層
６ 電流検出器（電流値検出手段）
10 反射光検出器（反射率検出手段）
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体内で分泌されるカテコールアミン類などのストレス性物質の検出に用いられるケミカルバイオセンサーに関する。
【背景技術】
【０００２】
カテコールアミンは、分子中にカテコール骨格をもつ生理活性アミンであり、ノルアドレナリン（ＮＡｄ）（米国ではノルエピネフリン）、アドレナリン（Ａｄ）（同エピネフリン）、ドーパミンなどが知られている。
【０００３】
ＮＡｄやＡｄは、副腎から血中に放出されるホルモンであり、血圧上昇、心拍数上昇に関わっているほか、シナプスにおいては神経伝達物質としても作用している。
【０００４】
一方、ドーパミンは中枢神経において神経伝達物質として作用し、運動調整、意欲、学習に関わっており、ドーパミン不足が統合失調症やパーキンソン病に関係するとされている。
【０００５】
このように、生体内で重要な役割を担っているカテコールアミンの測定は、病気の診断、医薬品の開発、医学、薬学の研究などにおいて不可欠な手段となっているが、現在、液体クロマトグラフを用いた方法が一般的に行われている。液体クロマトグラフ法では、カラムで分離したカテコールアミン類を検出するために、酸化還元電位を測定する方法や、予め蛍光物質を結合させておきその蛍光を検出する方法などがとられているが、前処理が必要であることと時間がかかることが問題となっていた。
【特許文献１】特開平５−１１３４３８号公報
【特許文献２】特開平５−９３６９０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明は、前処理を必要とせずに、短時間でカテコールアミン類を検出することのできる、新規のケミカルバイオセンサーを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明のケミカルバイオセンサーは、被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子からなる導電性高分子層を備えたものである。
【０００８】
また、前記導電性高分子層は、基板上に形成されたものである。
【０００９】
また、前記基板は導電性を有し、前記導電性高分子層は、前記基板上に電気化学的に合成されたものである。
【００１０】
また、前記導電性高分子層と前記基板との間に導電層が形成され、前記導電性高分子層は、前記導電層上に電気化学的に合成されたものである。
【００１１】
また、前記導電性高分子層に流れる電流値の変化を検出する電流値検出手段を備えたものである。
【００１２】
また、前記導電性高分子層により反射される光の反射率の変化を検出する反射率検出手段を備えたものである。
【００１３】
また、前記プローブ分子は、ベンジルアミン誘導体、フェニルグリシノニトリル誘導体、ジフェニルエチレンジアミン誘導体のいずれかである。
【００１４】
また、前記被検出物質は、カテコール類、カテコールアミン類、ヒドロキシインドール類のいずれかである。
【００１５】
また、前記電流値検出手段と前記反射率検出手段により、前記導電性高分子層に流れる電流値の変化と、前記導電性高分子層により反射される光の反射率の変化とを、同時に検出可能に構成されたものである。
【発明の効果】
【００１６】
本発明のケミカルバイオセンサーによれば、被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子からなる導電性高分子層を備えており、導電性高分子層に流れる電流値の変化、又は、導電性高分子層により反射される光の反射率の変化を検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【００１７】
また、前記導電性高分子層は、基板上に形成されたことにより、導電性高分子層を容易に形成することができ、また、取り扱いを容易にすることができる。
【００１８】
また、前記基板は導電性を有し、前記導電性高分子層は、前記基板上に電気化学的に合成されたことにより、導電性高分子層を電気化学的に容易に形成することができる。
【００１９】
また、前記導電性高分子層と前記基板との間に導電層が形成され、前記導電性高分子層は、前記導電層上に電気化学的に合成されたことにより、導電性高分子層を電気化学的に容易に形成することができる。
【００２０】
また、前記導電性高分子層に流れる電流値の変化を検出する電流値検出手段を備えており、導電性高分子層に流れる電流値の変化を電流値検出手段により検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【００２１】
また、前記導電性高分子層により反射される光の反射率の変化を検出する反射率検出手段を備えており、導電性高分子層により反射される光の反射率の変化を反射率検出手段により検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【００２２】
また、前記プローブ分子は、ベンジルアミン誘導体、フェニルグリシノニトリル誘導体、ジフェニルエチレンジアミン誘導体のいずれかであり、被検出物質としてのカテコール類、カテコールアミン類、ヒドロキシインドール類などと特異的に化学結合するので、前処理を必要とせずに、短時間でこれらの被検出物質を検出することができる。
【００２３】
また、前記電流値検出手段と前記反射率検出手段により、前記導電性高分子層に流れる電流値の変化と、前記導電性高分子層により反射される光の反射率の変化とを、同時に検出可能に構成されたことにより、より確実に被検物質を検出することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
本発明のケミカルバイオセンサーは、被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子からなる導電性高分子層を備えたものである。
【００２５】
本発明の対象となる被検出物質は、主に、カテコール類、カテコールアミン類、ヒドロキシインドール類であり、カテコールアミン類としては、化１に記載のドーパミン、アドレナリン、ノルアドレナリン、ヒドロキシインドール類としては、化１に記載のセロトニンなどが挙げられる。なお、これらは一例であり、本発明の対象とする被検出物質はこれらに限定されるものではない。
【００２６】
【化１】
【００２７】
そして、これらの被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子としては、これらに限定されるものではないが、ベンジルアミン誘導体、フェニルグリシノニトリル誘導体、ジフェニルエチレンジアミン誘導体などが挙げられる。
【００２８】
本発明のケミカルバイオセンサーを構成する導電性高分子層は、導電性を有する高分子からなり、例えば、上記のプローブ分子を重合させて形成することができ、化２に示すポリ（３−アミノベンジルアミン）などが導電性高分子として好適に用いられる。
【００２９】
【化２】
【００３０】
導電性高分子層は、基板上に形成することで容易に形成することができる。また、基板上に形成されたことにより、取り扱いを容易にすることができる。基板の種類は特定のものに限定されず、例えば、金属、ガラス、プラスチック、金属酸化物などからなるものを用いることができる。
【００３１】
そして、導電性高分子層を基板上に形成するためには、予め化学的に合成した導電性高分子を基板上に物理的に塗布する方法や基板に化学的に共有結合させる方法、電解重合法などにより電気化学的に導電性を有する基板上で導電性高分子を重合させて合成する方法などを用いることができる。
【００３２】
なお、電解重合法などにより電気化学的に合成する場合に用いられる基板は、基板自体に導電性を有するもののほか、基板表面に金属膜などの導電層が形成されたものを用いることができる。基板表面に導電層が形成されたものを用いる場合は、導電層上に導電性高分子層が合成され、導電性高分子層と基板との間に導電層が形成された構成となる。導電性を有する基板や導電層が形成された基板を用いることで、導電性高分子層を電気化学的に容易に形成することができる。
【００３３】
つぎに、本発明のケミカルバイオセンサーの一実施例について、図１を参照しながら説明する。
【００３４】
１はポリ（３−アミノベンジルアミン）からなる導電性高分子膜であり、この導電性高分子膜１は、基板２上に形成された金薄膜からなる導電層３上に形成されている。なお、導電性高分子層１は、導電層３上に電気化学的に合成されたものである。そして、基板２の導電層３が設けられていない面には、シリンドリカルプリズム４が接している。また、導電性高分子膜１の導電層３に接していない面にはリン酸緩衝液が満たされた溶液槽５が設けられ、この溶液槽５中のリン酸緩衝液が導電性高分子膜１に接触するようになっている。
【００３５】
また、６は導電性高分子層１に電圧を印加して、導電性高分子層１に流れる電流値の変化を検出する電流値検出手段としての電流検出器であり、この電流検出器６は、導電層３に接続する作用電極７、溶液槽５中の液体に接する参照電極８と対極電極９を備えている。
【００３６】
また、10は導電性高分子層１により反射される光の反射率の変化を検出する反射率検出手段としての反射光検出器である。この反射光検出器10は、光照射器11が発する波長６３２．８ｎｍのｐ偏光の光が導電性高分子層１により反射されたときの光強度の変化を検出するように構成されている。
【００３７】
上記のケミカルバイオセンサーにおいて、作用電極７に正の電圧を印加して導電性高分子層１を電気化学的に酸化させた状態で、溶液槽５のリン酸緩衝液に被検出物質として、例えばアドレナリンを添加すると、アドレナリン分子は導電性高分子層１と結合する。なお、アドレナリン分子が導電性高分子層１と結合したときの化学構造は、化３又は化４に示すようになっていると推定される。
【００３８】
【化３】
【００３９】
【化４】
【００４０】
この結合により、導電性高分子層１にアノード電流が流れる。この電流は、電流検出器６により電流値の変化として検出される。また、この結合により、導電性高分子層１の膜厚が増加する。この膜厚の増加は、反射光検出器10により反射率の変化として検出される。なお、電流検出器６による電流値の変化の検出、反射光検出器10による反射率の変化の検出は、同時に行うことができるように構成されている。
【００４１】
本実施例で導電性高分子として用いたポリ（３−アミノベンジルアミン）は導電性であり、電気化学的に酸化した状態でアドレナリンなどのカテコールアミン類と反応すると化学結合し、膜厚が増加することにより反射率が増加するという性質がある。この変化を反射光検出器10で測定することにより、カテコールアミン類を検出することが可能である。さらに、カテコールアミン類が導電性高分子膜に結合すること誘電率が変化するので、この変化を電流の変化として検出することでカテコールアミン類を検出することも可能である。
【００４２】
このように、本実施例のケミカルバイオセンサーによれば、被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子からなる導電性高分子層１を備えており、導電性高分子層１に流れる電流値の変化、又は、導電性高分子層により反射される光の反射率の変化を検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【００４３】
また、前記導電性高分子層１は、基板２上に形成されたことにより、導電性高分子層１を容易に形成することができ、また、取り扱いを容易にすることができる。
【００４４】
また、前記導電性高分子層１と前記基板２との間に導電層３が形成され、前記導電性高分子層１は、前記導電層３上に電気化学的に合成されたことにより、導電性高分子層を電気化学的に容易に形成することができる。
【００４５】
また、前記導電性高分子層１に流れる電流値の変化を検出する電流値検出手段としての電流検出器６を備えており、導電性高分子層１に流れる電流値の変化を電流検出器６により検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【００４６】
また、前記導電性高分子層１により反射される光の反射率の変化を検出する反射率検出手段としての反射光検出器10を備えており、導電性高分子層１により反射される光の反射率の変化を反射光検出器10により検出することにより、前処理を必要とせずに、短時間で被検物質を検出することができる。
【００４７】
また、電流検出器６と反射光検出器10により、前記導電性高分子層１に流れる電流値の変化と、前記導電性高分子層１により反射される光の反射率の変化とを、同時に検出可能に構成されたことにより、より確実に被検物質を検出することができる。
【００４８】
さらに、試料を前処理することなく、その場で連続的にカテコールアミン類を測定することが可能となるので、臨床分野、研究開発分野で応用されることが期待される。
【００４９】
以下、より具体的な実施例に基づいて、本発明について詳細に説明する。なお、本発明は、以下の実施例によって制限されるものではない。
【実施例１】
【００５０】
０．０５Ｍの３−アミノベンジルアミン、０．５Ｍの硫酸を溶解した溶液中に金電極を浸した。金電極に通電して３−アミノベンジルアミンを電解重合することによって、金電極上に電気化学的にポリ（３−アミノベンジルアミン）膜を堆積した。
【００５１】
ここで、電解重合は、以下の条件で行った。銀・塩化銀参照電極に対して−０．２Ｖ〜０．９Ｖの間を掃引速度２０ｍＶ／ｓで１０サイクル −０．２Ｖ〜０．９５Ｖを１０サイクル、−０．２Ｖ〜１．１を１０サイクル行った。なお、対電極には白金を用いた。膜厚はおおよそ９．２ｎｍであった。
【実施例２】
【００５２】
リン酸緩衝液中で、実施例１で作製したポリ（３−アミノベンジルアミン）膜に電圧を印加して電気化学的に酸化させた状態とし、この状態でリン酸緩衝液にアドレナリンを投入し、膜表面での反射率を測定した。
【００５３】
ここで、測定は、以下の条件で行った。電圧を０．６５Ｖ一定に保ち、反射率が一定になった約２５０秒後にリン酸緩衝役中で０．１ｍＭの濃度になるようにカテコールアミンを投入した。反射率は、入射角度５３．５°に固定することにより測定を行った。
【００５４】
その結果、図２に示すように、アドレナリンの投入により、膜表面での反射率が増加した。これは、アドレナリンが膜表面に結合して膜厚が増加したことに起因するものである。
【実施例３】
【００５５】
実施例１で作製したポリ（３−アミノベンジルアミン）膜を電気的に酸化させた状態で、電流値の変化と反射率の変化を同時測定した。
【００５６】
ここで、測定は、以下の条件で行った。電圧を０．６５Ｖ一定に保ち、反射率が一定になった約２５０秒後にリン酸緩衝役中で０．１ｍＭの濃度になるようにカテコールアミンを投入した。反射率は、入射角度５３．５°に固定することにより測定を行った。金電極と白金電極の間を流れる電流も同時に検出を行った。
【００５７】
その結果、アドレナリンの吸着により酸化状態のポリ（３−アミノベンジルアミン）膜がさらに酸化され、図３に示すように、電流の増大が確認された。また、同時に反射率が増加した。
【実施例４】
【００５８】
０．０５Ｍのアニリン、０．５Ｍの硫酸を溶解した溶液中に金電極を浸した。金電極に通電してアニリンを電解重合することによって、金電極上に電気化学的にポリアニリン膜を堆積した。ここで、−０．２Ｖ〜０．９Ｖの間を２０ｍＶ／ｓで２サイクル行うことによりポリアニリン膜を作製した。
【００５９】
そして、リン酸緩衝液中で、実施例１で作製したポリ（３−アミノベンジルアミン）膜と、上記で作製したポリアニリン膜にそれぞれ電圧を印加して電気化学的に酸化させた状態とし、この状態でリン酸緩衝液にアドレナリンを投入し、電流値の変化を測定した。
【００６０】
ここで、測定は、以下の条件で行った。ポリ（３−アミノベンジルアミン）膜、ポリアニリン膜、それぞれの場合において、銀・塩化銀参照電極に対して０．６５Ｖの電圧で膜を酸化状態にして、ほぼ一定となるように２分以上経過してから、リン酸緩衝液中で１ｍＭのカテコールアミンを投入し、金電極と白金電極の間に流れる電流値を測定した。
【００６１】
その結果、図４に示すように、ポリアニリン膜では電流値の変化はほとんどないのに対し、ポリ（３−アミノベンジルアミン）膜では、大きな電流値の変化が見られた。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】本発明のケミカルバイオセンサーの一実施例を示す概略図である。
【図２】実施例２における反射率の変化の測定結果を示すグラフである。
【図３】実施例３における電流値と反射率の変化の同時測定結果を示すグラフである。
【図４】実施例４における電流値の変化の測定結果を示すグラフである。
【符号の説明】
【００６３】
１ 導電性高分子層
２ 基板
３ 導電層
６ 電流検出器（電流値検出手段）
10 反射光検出器（反射率検出手段）
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子からなる導電性高分子層を備えたことを特徴とするケミカルバイオセンサー。
【請求項２】
前記導電性高分子層は、基板上に形成されたことを特徴とする請求項１記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項３】
前記基板は導電性を有し、前記導電性高分子層は、前記基板上に電気化学的に合成されたことを特徴とする請求項２記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項４】
前記導電性高分子層と前記基板との間に導電層が形成され、前記導電性高分子層は、前記導電層上に電気化学的に合成されたことを特徴とする請求項２記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項５】
前記導電性高分子層に流れる電流値の変化を検出する電流値検出手段を備えたことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項６】
前記導電性高分子層により反射される光の反射率の変化を検出する反射率検出手段を備えたことを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項７】
前記プローブ分子は、ベンジルアミン誘導体、フェニルグリシノニトリル誘導体、ジフェニルエチレンジアミン誘導体のいずれかであることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項８】
前記被検物質は、カテコール類、カテコールアミン類、ヒドロキシインドール類のいずれかであることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項９】
前記電流値検出手段と前記反射率検出手段により、前記導電性高分子層に流れる電流値の変化と、前記導電性高分子層により反射される光の反射率の変化とを、同時に検出可能に構成されたことを特徴とする請求項６〜８のいずれか１項記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項１】
被検出物質と特異的に化学結合する部位を有するプローブ分子からなる導電性高分子層を備えたことを特徴とするケミカルバイオセンサー。
【請求項２】
前記導電性高分子層は、基板上に形成されたことを特徴とする請求項１記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項３】
前記基板は導電性を有し、前記導電性高分子層は、前記基板上に電気化学的に合成されたことを特徴とする請求項２記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項４】
前記導電性高分子層と前記基板との間に導電層が形成され、前記導電性高分子層は、前記導電層上に電気化学的に合成されたことを特徴とする請求項２記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項５】
前記導電性高分子層に流れる電流値の変化を検出する電流値検出手段を備えたことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項６】
前記導電性高分子層により反射される光の反射率の変化を検出する反射率検出手段を備えたことを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項７】
前記プローブ分子は、ベンジルアミン誘導体、フェニルグリシノニトリル誘導体、ジフェニルエチレンジアミン誘導体のいずれかであることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項８】
前記被検物質は、カテコール類、カテコールアミン類、ヒドロキシインドール類のいずれかであることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項記載のケミカルバイオセンサー。
【請求項９】
前記電流値検出手段と前記反射率検出手段により、前記導電性高分子層に流れる電流値の変化と、前記導電性高分子層により反射される光の反射率の変化とを、同時に検出可能に構成されたことを特徴とする請求項６〜８のいずれか１項記載のケミカルバイオセンサー。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００９−１８０７０４（Ｐ２００９−１８０７０４Ａ）
【公開日】平成２１年８月１３日（２００９．８．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２２５０９（Ｐ２００８−２２５０９）
【出願日】平成２０年２月１日（２００８．２．１）
【出願人】（３０４０２７２７９）国立大学法人 新潟大学 (310)
【出願人】（３０１０２１５３３）独立行政法人産業技術総合研究所 (6,529)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年８月１３日（２００９．８．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年２月１日（２００８．２．１）
【出願人】（３０４０２７２７９）国立大学法人 新潟大学 (310)
【出願人】（３０１０２１５３３）独立行政法人産業技術総合研究所 (6,529)
【Ｆターム（参考）】
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