シュードプロリンジペプチド
式（Ｉ）（式中、Ｒ１はαアミノ酸の側鎖であり、Ｒ２はアミノ保護基であり、そしてＲ３およびＲ４は水素またはＣ１−４−アルキルから独立して選択され、Ｒ５は水素またはメチルである）のシュードプロリンジペプチドを、式（ＩＩ）（式中、Ｒ１およびＲ２は上記の通りである）のアミノ酸誘導体から出発して製造するための３工程の方法を開示する。シュードプロリンジペプチドはＳｅｒ、ＴｈｒおよびＣｙｓのための可逆的保護基として使用することができて、それゆえにペプチド化学の分野における多用途の手段である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式
【０００２】
【化１】
【０００３】
の化合物の製造のための新規方法に関するものである。
【０００４】
式Ｉのシュードプロリンジペプチドは、Ｓｅｒ、ＴｈｒおよびＣｙｓのための可逆的保護基として使用することができ、ペプチド化学の分野においていくつかの固有の問題を克服するための多用途の手段であることが判明している［ＪＡＣＳ １９９６，１１８，９２１８−９２２７］。ペプチド配列内でYＰｒｏの存在はβ−シート構造の分裂をもたらし、分子間凝集の原因として考慮される。得られた増加した溶媒和およびＦｍｏｃ固体相ペプチド合成のようなペプチド集合体におけるカップリング速度論は、特に「difficult sequences」を含有するペプチドに対して鎖延長を促進する。
【０００５】
本発明の目的は、高収率でいかなるクロマトグラフィー精製工程なしに生成物を得ることを可能にさせる式Ｉのシュードプロリンジペプチドの短期間で技術的に実行可能な合成を提供することである。
【０００６】
目的は、以下に概説したような方法で達成されている。
式
【０００７】
【化２】
【０００８】
〔式中、Ｒ１はαアミノ酸の側鎖であり、Ｒ２はアミノ保護基であり、そしてＲ３およびＲ４は水素またはＣ１−４−アルキルから独立して選択され、Ｒ５は水素またはメチルである〕
の化合物の製造のための方法は、
【０００９】
ａ） 式
【００１０】
【化３】
【００１１】
〔式中、Ｒ１およびＲ２は上記の通りである〕
のアミノ酸誘導体を、セリンまたはトレオニンで変換して、次の工程において、
式
【００１２】
【化４】
【００１３】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ５は上記の通りであり、
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の全てが水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は水素、Ｃ１−４−アルキルまたはＣ３−７−シクロアルキルから独立して選択される〕
のアンモニウム塩として得られたジペプチドを結晶化すること、
【００１４】
ｂ） 式ＩＩＩのアンモニウム塩から酸の存在下で遊離酸を遊離して、抽出によりアミンを除去すること、
そして
【００１５】
ｃ）
【００１６】
【化５】
【００１７】
〔式中、Ｒ３およびＲ４の両方が水素でないという条件で、Ｒ３およびＲ４は水素またはＣ１−４−アルキルから独立して選択され、Ｒ９ａおよびＲ９ｂは独立してＣ１−４−アルキルであり、Ｒ１０はＣ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルカノイルまたはアリールの意味を有し、そしてＲ１１は水素またはＣ１−３−アルキルである〕
から選択される化合物と、酸触媒の存在下で閉環をもたらすこと
を含む。
【００１８】
セリンまたはトレオニンが、ラセミ化合物としてかまたはそれらの異性体のさまざまな混合物中で、そのＬ−配置中またはそれらのＤ−配置中のどちらか一方を使用できることがさらに理解される。好ましくはＬ−配置を使用する。
【００１９】
用語「Ｃ１−４−アルキル」は、１〜４個の炭素原子の分岐鎖または直鎖の一価の飽和脂肪族炭化水素基を言う。この用語は、さらに、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、Ｓ−ブチルおよびｔ−ブチルなどの基により例示される。
【００２０】
用語「Ｃ３−７−シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはシクロヘプチルなどの、３〜７個の炭素原子を含有するシクロアルキル基を言う。
【００２１】
用語「アリール」は、フェニル基またはナフチル基、好ましくはフェニル基に関連し、それらは場合により、ハロゲン、ヒドロキシ、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ、アルキル）、Ｎ（アルキル）２、カルボキシ、アミノカルボニル、アルキル、アルコキシ、アリールおよび／またはアリールオキシにより単置換または多置換されることができる。好ましいアリール基はフェニルである。
【００２２】
用語「アルカノイル」は、アセチル、ｎ−プロパノイル、イソプロパノイル、ｎ−ブタノイル、ｓ−ブタノイルおよびｔ−ブタノイルなどのＣ１−４−アルキルカルボニル基に関連し、好ましくはアセチルである。
【００２３】
特に、Ｒ１に使用される用語「アミノ酸の側鎖」は、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパラギン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、アラニン、セリン、トレオニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アミノイソ酪酸およびプロリンから選択されるαアミノ酸の側鎖を言う。
【００２４】
ヒドロキシ基を有するアミノ酸の側鎖において、ヒドロキシ基は以下に定義したようなヒドロキシ保護基により場合により保護されていることが理解される。付加アミノ基を有する側鎖において、アミノ基は以下に定義したようなアミノ保護基により場合により保護される。
【００２５】
好ましくはＲ１は、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、アスパラギン、グルタミン、グルタミン酸、リジン、アスパラギン酸、アラニン、セリン、トレオニン、チロシンおよびトリプトファンの側鎖を表す。より好ましいのは、セリンおよびトレオニンである。
【００２６】
用語「アミノ保護基」は、アミノ基の反応性を妨げるために従来使用される任意の置換基を言う。適切なアミノ保護基は、Green T.,“Protective Groups in Organic Synthesis”,Chapter 7,John WileyとSons,Inc.,1991,309-385に記述されている。適切なアミノ保護基は、Ｆｍｏｃ、Ｃｂｚ、Ｍｏｚ、Ｂｏｃ、Ｔｒｏｃ、ＴｅｏｃまたはＶｏｃである。好ましいアミノ保護基はＦｍｏｃである。
【００２７】
用語「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ基の反応性を妨げるために従来使用される任意の置換基を言う。適切なヒドロキシ保護基は、Green T.,“Protective Groups in Organic Synthesis”,Chapter 1,John WileyとSons,Inc.,1991,10-142に記述されている。適切なヒドロキシ保護基は、ｔ−ブチル、ベンジル、ＴＢＤＭＳまたはＴＢＤＰＳである。好ましいヒドロキシ保護基はｔ−ブチルである。
【００２８】
明細書および請求項に使用される略語の意味は、以下の表に概説される通りである。
【００２９】
【表１】
【００３０】
工程ａ）
最初の工程ａ）において、
式
【００３１】
【化６】
【００３２】
〔式中、Ｒ１およびＲ２は上記の通りである〕
のアミノ酸誘導体を、セリンまたはトレオニンと反応させ、得られたジペプチドを、
式
【００３３】
【化７】
【００３４】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は上記の通りである〕
のアンモニウム塩として結晶化する。
【００３５】
式ＩＩのアミノ酸誘導体は、一般の市販の化合物である。Ｒ１およびＲ２に与えられる優先によれば、式ＩＩの適切なアミノ酸誘導体は、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、またはＦｍｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨである。
【００３６】
式ＩＩのセリンまたはトレオニンとカップリングする前に、アミノ酸誘導体を活性化剤で好都合に活性化する。
【００３７】
適切な活性化剤は、ＤＩＣ／ＨＯＳｕ、ＤＩＣ／ペンタフルオロフェノール、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ、ＤＣＣ／ＨＯＳｕ、ＤＣＣ／ペンタフルオロフェノール、ＤＣＣ／ＨＯＢｔ、ＥＤＣ（ｘＨＣｌ）／ＨＯＳｕまたはＨＢＴＵ／ＨＯＢｔから選択することができる。好ましいカップリング剤はＤＩＣ／ＨＯＳｕである。式Ｉのアミノ酸誘導体の１当量に関連して、ＤＩＣは通常１．０〜１．４当量の量で使用され、ＨＯＳｕは通常１．０〜１．８当量の量で使用される。
【００３８】
一般に、活性化反応は、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトンまたはテトラヒドロフランなどの適切な有機溶媒、好ましくは−５℃〜２５℃の温度で酢酸エチルの存在下で実施する。
【００３９】
次に、セリンまたはトレオニンとの、好ましくはＬ−セリンまたはＬ−トレオニンとのカップリングは、１０℃〜３０℃の温度で、酢酸エチル、アセトンもしくはテトラヒドロフランなどの有機溶媒、または水とその混合物の存在下で実施することができる。好ましい溶媒は、アセトンと水の混合物である。
【００４０】
セリンまたはトレオニンと式ＩＩのアミノ酸誘導体との比率は、通常１．５〜３．０〜１、好ましくは２．０〜１の範囲で選択される。反応混合物のｐＨは、７．５〜９．０の値で好都合に設定される。
【００４１】
式ＩＩＩのアンモニウム塩の形成は、
式
【００４２】
【化８】
【００４３】
〔式中、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の全てが水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１−４−アルキルまたはＣ３−７−シクロアルキルから独立して選択される〕
のアミンを前もって形成されたジペプチドに加えることにより起こる。
【００４４】
式Ｖの適切なアミンは、全てのＲ６、Ｒ７およびＲ８が水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、水素、エチルまたはシクロヘキシルから独立して選択されるものである。シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミンおよびトリエチルアミンは、好ましいアミン類であり；ジシクロヘキシルアミンが式Ｖで使用される最も好ましいアミンである。結晶化は、通例、適切な有機溶媒中で、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールまたはｉ−プロパノールのような低級アルコール類中で、あるいは酢酸エチルまたはテトラヒドロフラン中でもたらされる。好ましい溶媒はエタノールである。
【００４５】
式ＩＩＩのアンモニウム塩は従来記述されておらず、こうして本発明のさらなる実施態様である。
【００４６】
好ましいアンモニウム塩は、式ＩＩＩのジシクロヘキシルアンモニウム塩（ここで、Ｒ１およびＲ２は上記の通りであり、Ｒ５は水素またはメチルであり、Ｒ６は水素であり、そしてＲ７およびＲ８はシクロヘキシルである）である。より好ましいのは式ＩＩＩの化合物であり、
ここで：
ａ） Ｒ１がＯ−ｔＢｕ保護を有するＬ−セリン側鎖を表し、Ｒ２がＦｍｏｃであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６が水素であり、そしてＲ７およびＲ８がシクロヘキシルである。
ｂ） Ｒ１がＯ−ｔＢｕ保護を有するＬ−セリン側鎖を表し、Ｒ２がＦｍｏｃであり、Ｒ５がメチルであり、Ｒ６が水素であり、そしてＲ７およびＲ８がシクロヘキシルである。
ｃ） Ｒ１がＯ−ｔＢｕ保護を有するＬ−トレオニン側鎖を表し、Ｒ２がＦｍｏｃであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６が水素であり、そしてＲ７およびＲ８がシクロヘキシルである。
ｄ） Ｒ１がＯ−ｔＢｕ保護を有するＬ−トレオニン側鎖を表し、Ｒ２がＦｍｏｃであり、Ｒ５がメチルであり、Ｒ６が水素であり、そしてＲ７およびＲ８がシクロヘキシルである。
【００４７】
工程ｂ）
続く工程ｂ）において、ジペプチドの遊離酸を酸の存在下で遊離して、式Ｖのプロトン化アミンを抽出により除去する。特に、式ＩＩＩのアンモニウム塩の遊離酸を鉱酸の存在下で遊離して、アミンを水および／または無機塩の水溶液での抽出により除去する間、有機溶媒中に溶解させる。
【００４８】
適切な鉱酸は含水硫酸または含水ＨＣｌ、好ましくは含水硫酸である。
【００４９】
遊離酸を溶解するための適切な有機溶媒は、酢酸エチル、ｔ−ブチルメチルエーテルまたは塩化メチレンから選択することができる。ｔ−ブチルメチルエーテルが好ましい溶媒であることが見い出されている。
【００５０】
遊離酸を含有する有機相は、一般に水および／または塩化ナトリウムのような無機塩の水溶液で、アミンを完全に除去するために数回洗浄する。
【００５１】
工程ｃ）
工程ｃ）において、工程ｂ）で得られたジペプチドの遊離酸の閉環は、酸触媒の存在下で、
【００５２】
【化９】
【００５３】
〔式中、Ｒ３およびＲ４の両方が水素でないという条件で、Ｒ３およびＲ４は水素またはＣ１−４−アルキルから独立して選択され、Ｒ９ａおよびＲ９ｂは独立してＣ１−４−アルキルであり、Ｒ１０はＣ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルカノイルまたはアリールの意味を有し、そしてＲ１１は水素またはＣ１−３−アルキルである〕
から選択される化合物を用いてもたらされる。
【００５４】
好ましくは、閉環は、式ＩＶａおよびＩＶｃの化合物を用いてもたらされ、より好ましくは、化合物が２，２−ジメトキシプロパン、２−メトキシプロペンまたは２−アセトキシプロペンから選択され、それにより、２，２−ジメトキシプロパンが最も好ましい化合物である。
理想的には、式ＩＶの化合物は、工程ｂ）で得られたジペプチドとの関連で、６．０〜１６．０当量、好ましくは７．０〜１０．０当量の量で使用される。
【００５５】
適切な酸触媒は、メタンスルホン酸、（＋）カンフル−１０−スルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウムから選択され、さらにメタンスルホン酸が好ましい。酸触媒は、通常、工程ｂ）で得られたジペプチドとの関連で、０．０５〜０．３０当量、好ましくは０．１０〜０．２０当量の量で適用される。
【００５６】
閉環は、還流温度で、テトラヒドロフラン、塩化メチレンまたはトルエン、好ましくはテトラヒドロフランなどの有機溶媒の存在下でもたらされる。
【００５７】
標的生成物の単離および仕上げは、当技術分野で公知である方法を使用することにより実施することができる。
【００５８】
以下の実施例は、それを制限することなしに本発明を例示する。
【００５９】
実施例
実施例１
機械的な撹拌棒、Ｐｔ−１００温度計、還流冷却器、滴下漏斗および窒素入口を装備した二重被覆ガラス反応器１０００mLに、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（１）２５ｇ（６４．９mmol）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド９．６６ｇ（８３．１mmol）および酢酸エチル１８０mLを仕込んだ。得られた懸濁液を０℃に冷却した。酢酸エチル２０mL中のジイソプロピルカルボジイミド１０．４９ｇ（８３．１mmol）の溶液を、１５分以内に加えた。得られた混合物を０℃で２時間、次にもう１時間室温で撹拌して、サンプリングした。溶媒を、減圧下（ｃａ．２２０mbar）で、最大５０℃の被覆温度で完全に除去した。残留物を、３５℃〜４０℃の内部温度でアセトン２５０mLで処理し、２０℃に冷却して、水１３．５mLで処理した。ｐＨを、１Ｍ ＨＣｌ １．０mLで、ｐＨ２−３に設定して、得られた混合物を１２時間、２０℃で撹拌して、サンプリングした。次に、懸濁液を−５℃〜０℃に冷却して、１時間この温度で撹拌した。沈殿物を濾別して、反応器およびフィルターを冷アセトン（０℃）５０mLですすいだ。清澄で無色の濾液を、２０℃で、６０分以内に、水１２２．５ml中のＬ−セリン１３．５７ｇ（１２７．８mmol）および炭酸ナトリウム１３．６３ｇ（２５７mmol）の溶液に加えた。得られた混合物を１時間、２０℃で撹拌して、サンプリングした。ｐＨを、ＨＣｌ（３７％）２８ｇで、ｐＨ２−３に設定して、有機溶媒を減圧下（＜２５０mbar）で、最大５０℃の被覆温度で除去した。得られた懸濁液を３５℃〜４０℃で、酢酸エチル１２５mLで処理して、得られた清澄な二相の溶液を２０℃に冷却した。相を分離して、有機相を全体として酢酸エチル２５０mLで２回抽出した。合わせた有機層を全体としてＮａＣｌ水溶液（１０％w/w）２２５mLで３回洗浄した。得られた有機溶液を濃縮して、溶媒を減圧下で最大５０℃の被覆温度でほとんど完全に除去した。残留物をエタノール２５０mLに溶解して、その後、溶媒の一部（７５mL）を減圧下（ｃａ．１７０mbar）で、最大５０℃の被覆温度で再度除去した。得られた溶液をエタノール４６２．５mLで処理して、２０℃に冷却した。エタノール１１８mL中のジシクロヘキシルアミン１１．８３ｇ（６３．９mmol）の溶液の約２０％（ｃａ．２９．５mL）を加えた。生成物が沈殿しはじめたらすぐ、混合物を取り除いた。懸濁液を１時間室温で撹拌して、その後ジシクロヘキシルアミン溶液の残りを少なくとも２時間以内にゆっくり加えた。滴下漏斗をエタノール２５mLですすいだ。内部温度を４時間以内に０℃に下げて、その後、懸濁液を一晩この温度で撹拌した。沈殿物を吸引を用いて濾過し、フィルターケークを冷エタノール（０℃）１１７．５mLで洗浄して、減圧下で乾燥して（５０℃、２０mbar）、無色の固体として、（Ｓ，Ｓ）−２−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル−アミノ］−３−ヒドロキシ−プロピオン酸ジシクロヘキシル−アンモニウム塩（３） ３５．７ｇ［（Ｓ）−３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニル−アミノ）−プロピオン酸から出発する収率８２％、ＨＰＬＣに基づく９６．８％（w/w）純度］が得られた。
【００６０】
ＨＰＬＣ分析を純（Ｓ，Ｓ）−２−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル−アミノ］−３−ヒドロキシ−プロピオン酸ジシクロヘキシル−アンモニウム塩（３）の外部標準を使用して実施した。ＨＰＣＬのための条件：カラム ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ）、４．６×１５０mm、３．５μｍ；紫外検出 ２０６nm；勾配のための溶液：水（Ａ）、２０mM ＫＨ２ＰＯ４−緩衝液、ｐＨ２．５（Ｂ）、アセトニトリル（Ｃ）；流量 １．０mL／min；２０℃。
勾配：
【００６１】
【表２】
【００６２】
保持時間：
（Ｓ，Ｓ）−２−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル−アミノ］−３−ヒドロキシ−プロピオン酸ジシクロヘキシル−アンモニウム塩（３） ８．４分
Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（１） １１．６分
【００６３】
このＨＰＬＣ−法は、（３）の遊離酸の分析のための値をもたらす。この値から、対応しているジシクロヘキシルアンモニウム塩の分析値を算出して、遊離酸とジシクロヘキシルアンモニウムの１：１の化学量論的比率を仮定した。
【００６４】
ドデカンの内部標準を使用するＧＣ分析を、ジシクロヘキシルアミンの含有量を測定するために使用した。ＧＣのための条件：カラム溶融石英、１００％ ポリジメチルシロキサン、１μｍ、Ｌ＝１５ｍ、ＩＤ＝０．２５mm；キャリアガス 水素、圧力：５３ｋＰａ、ｌｉｎ．速度：７３cm／ｓ、分割比：１：１００。
温度プログラム：
【００６５】
【表３】
【００６６】
保持時間：
ドデカン ４．１０分
ジシクロヘキシルアミン ４．９０分
【００６７】
実施例２
機械的な撹拌棒、Ｐｔ−１００温度計、還流冷却器、綿フィルター付滴下漏斗、および窒素入口を装備した二重被覆ガラス反応器５００mLに、（Ｓ，Ｓ）−２−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−プロピオニルアミノ］−３−ヒドロキシ−プロピオン酸ジシクロヘキシルアンモニウム塩（３）２５．０ｇ（３７．０mmol）、tert−ブチルメチルエーテル１００mLおよび水４４．３mL中の硫酸（９６％）４．７０ｇの溶液を仕込んだ。混合物を９０分間室温で撹拌した。水相を分離して、有機相を塩化ナトリウム水溶液（０．５％−w/w）総量７６mlを２回で、再度水３８mLで洗浄した。有機溶媒を減圧下（５００−１００mbar）および被覆温度５０℃で完全に除去した。泡状の残留物をテトラヒドロフラン１００mLに溶解して、溶媒を減圧（５００−１００mbar）および被覆温度５０℃で再度完全に除去した。残留物をテトラヒドロフラン４５０mlに溶解して、得られた清澄な溶液を２，２−ジメトキシプロパン３５．４ｇ（３３３mmol）とメタンスルホン酸０．６５ｇ（６．７mmol）で処理した。分子ふるい（０．４nm）７３ｇ上の蒸留液が戻る間、混合物を還流下、被覆温度８５℃で加熱した。１６時間後、僅かに帯黄色の溶液を２０℃に冷却しサンプリングして、混合物をトリエチルアミン０．８２８ｇ（８．１４mmol）で処理して、１０分間撹拌した。溶媒を減圧下（３５０−１００mbar）および被覆温度５０℃で完全に除去した。残留物をtert−ブチルメチルエーテル１００mLで処理して、減圧下（３５０−１００mbar）および被覆温度５０℃で再度完全に濃縮した。残留物をtert−ブチルメチルエーテル１７５mLに溶解して、２０℃〜２５℃に冷却した。溶液を水８７．５mLで処理して、１０分間撹拌した。相を分離して、有機相を減圧下（３５０−１００mbar）および被覆温度５０℃で完全に濃縮した。泡状の残留物をtert−ブチルメチルエーテル１００mLに溶解して、減圧下（３５０−１００mbar）および被覆温度５０℃で完全に濃縮した。この工程を、tert−ブチルメチルエーテルの総量２００mLを２回で繰り返した。残留物を２０℃〜２５℃でtert−ブチルメチルエーテル４５．２mLに溶解して、イソプロパノール２２．６mLで処理した。この温度で、溶液をペンタン１７５mLで処理し、取り除いて、次に少なくとも１５分間の撹拌を維持して、１時間以内にペンタン２００mLで再度ゆっくり処理した。得られた溶液を４〜１６時間撹拌して、次に１−２時間以内で０℃に冷却して、あと２時間この温度で再度撹拌した。沈殿物を吸引で濾過し、フィルターケークを冷ペンタン（０℃）の総量６０mlを２分割で洗浄して、減圧下で乾燥して（５０℃、２０mbar）、無色の固体として、（Ｓ，Ｓ）−３−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イル−メトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル］−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−４−カルボン酸（４）１４．３ｇ［（Ｓ，Ｓ）−２−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−プロピオニルアミノ］−３−ヒドロキシ−プロピオン酸ジシクロヘキシル−アンモニウム塩から出発する収率７５％、ＨＰＬＣに基づく９８．７％（w/w）純度］が得られた。
【００６８】
ＨＰＬＣ分析を純（Ｓ，Ｓ）−３−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イル−メトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル］−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−４−カルボン酸（４）の外部標準を使用して実施した。ＨＰＬＣのための条件：カラム ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８ （Ｗａｔｅｒｓ）、４．６×１５０mm、３．５μｍ；紫外検出 ２０６nm；勾配のための溶液：水（Ａ）、２０mM ＫＨ２ＰＯ４−緩衝液、ｐＨ２．５（Ｂ）、アセトニトリル（Ｃ）；流量 １．０mL／min；２０℃。
勾配：
【００６９】
【表４】
【００７０】
保持時間：
（Ｓ，Ｓ）−３−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イル−メトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル］−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−４−カルボン酸（４） ７．３分
（Ｓ，Ｓ）−２−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル−アミノ］−３−ヒドロキシ−プロピオン酸ジシクロヘキシル−アンモニウム塩（３） ３．０分
Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（１） ５．６分
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式
【０００２】
【化１】
【０００３】
の化合物の製造のための新規方法に関するものである。
【０００４】
式Ｉのシュードプロリンジペプチドは、Ｓｅｒ、ＴｈｒおよびＣｙｓのための可逆的保護基として使用することができ、ペプチド化学の分野においていくつかの固有の問題を克服するための多用途の手段であることが判明している［ＪＡＣＳ １９９６，１１８，９２１８−９２２７］。ペプチド配列内でYＰｒｏの存在はβ−シート構造の分裂をもたらし、分子間凝集の原因として考慮される。得られた増加した溶媒和およびＦｍｏｃ固体相ペプチド合成のようなペプチド集合体におけるカップリング速度論は、特に「difficult sequences」を含有するペプチドに対して鎖延長を促進する。
【０００５】
本発明の目的は、高収率でいかなるクロマトグラフィー精製工程なしに生成物を得ることを可能にさせる式Ｉのシュードプロリンジペプチドの短期間で技術的に実行可能な合成を提供することである。
【０００６】
目的は、以下に概説したような方法で達成されている。
式
【０００７】
【化２】
【０００８】
〔式中、Ｒ１はαアミノ酸の側鎖であり、Ｒ２はアミノ保護基であり、そしてＲ３およびＲ４は水素またはＣ１−４−アルキルから独立して選択され、Ｒ５は水素またはメチルである〕
の化合物の製造のための方法は、
【０００９】
ａ） 式
【００１０】
【化３】
【００１１】
〔式中、Ｒ１およびＲ２は上記の通りである〕
のアミノ酸誘導体を、セリンまたはトレオニンで変換して、次の工程において、
式
【００１２】
【化４】
【００１３】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ５は上記の通りであり、
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の全てが水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は水素、Ｃ１−４−アルキルまたはＣ３−７−シクロアルキルから独立して選択される〕
のアンモニウム塩として得られたジペプチドを結晶化すること、
【００１４】
ｂ） 式ＩＩＩのアンモニウム塩から酸の存在下で遊離酸を遊離して、抽出によりアミンを除去すること、
そして
【００１５】
ｃ）
【００１６】
【化５】
【００１７】
〔式中、Ｒ３およびＲ４の両方が水素でないという条件で、Ｒ３およびＲ４は水素またはＣ１−４−アルキルから独立して選択され、Ｒ９ａおよびＲ９ｂは独立してＣ１−４−アルキルであり、Ｒ１０はＣ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルカノイルまたはアリールの意味を有し、そしてＲ１１は水素またはＣ１−３−アルキルである〕
から選択される化合物と、酸触媒の存在下で閉環をもたらすこと
を含む。
【００１８】
セリンまたはトレオニンが、ラセミ化合物としてかまたはそれらの異性体のさまざまな混合物中で、そのＬ−配置中またはそれらのＤ−配置中のどちらか一方を使用できることがさらに理解される。好ましくはＬ−配置を使用する。
【００１９】
用語「Ｃ１−４−アルキル」は、１〜４個の炭素原子の分岐鎖または直鎖の一価の飽和脂肪族炭化水素基を言う。この用語は、さらに、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、Ｓ−ブチルおよびｔ−ブチルなどの基により例示される。
【００２０】
用語「Ｃ３−７−シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはシクロヘプチルなどの、３〜７個の炭素原子を含有するシクロアルキル基を言う。
【００２１】
用語「アリール」は、フェニル基またはナフチル基、好ましくはフェニル基に関連し、それらは場合により、ハロゲン、ヒドロキシ、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ、アルキル）、Ｎ（アルキル）２、カルボキシ、アミノカルボニル、アルキル、アルコキシ、アリールおよび／またはアリールオキシにより単置換または多置換されることができる。好ましいアリール基はフェニルである。
【００２２】
用語「アルカノイル」は、アセチル、ｎ−プロパノイル、イソプロパノイル、ｎ−ブタノイル、ｓ−ブタノイルおよびｔ−ブタノイルなどのＣ１−４−アルキルカルボニル基に関連し、好ましくはアセチルである。
【００２３】
特に、Ｒ１に使用される用語「アミノ酸の側鎖」は、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパラギン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、アラニン、セリン、トレオニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アミノイソ酪酸およびプロリンから選択されるαアミノ酸の側鎖を言う。
【００２４】
ヒドロキシ基を有するアミノ酸の側鎖において、ヒドロキシ基は以下に定義したようなヒドロキシ保護基により場合により保護されていることが理解される。付加アミノ基を有する側鎖において、アミノ基は以下に定義したようなアミノ保護基により場合により保護される。
【００２５】
好ましくはＲ１は、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、アスパラギン、グルタミン、グルタミン酸、リジン、アスパラギン酸、アラニン、セリン、トレオニン、チロシンおよびトリプトファンの側鎖を表す。より好ましいのは、セリンおよびトレオニンである。
【００２６】
用語「アミノ保護基」は、アミノ基の反応性を妨げるために従来使用される任意の置換基を言う。適切なアミノ保護基は、Green T.,“Protective Groups in Organic Synthesis”,Chapter 7,John WileyとSons,Inc.,1991,309-385に記述されている。適切なアミノ保護基は、Ｆｍｏｃ、Ｃｂｚ、Ｍｏｚ、Ｂｏｃ、Ｔｒｏｃ、ＴｅｏｃまたはＶｏｃである。好ましいアミノ保護基はＦｍｏｃである。
【００２７】
用語「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ基の反応性を妨げるために従来使用される任意の置換基を言う。適切なヒドロキシ保護基は、Green T.,“Protective Groups in Organic Synthesis”,Chapter 1,John WileyとSons,Inc.,1991,10-142に記述されている。適切なヒドロキシ保護基は、ｔ−ブチル、ベンジル、ＴＢＤＭＳまたはＴＢＤＰＳである。好ましいヒドロキシ保護基はｔ−ブチルである。
【００２８】
明細書および請求項に使用される略語の意味は、以下の表に概説される通りである。
【００２９】
【表１】
【００３０】
工程ａ）
最初の工程ａ）において、
式
【００３１】
【化６】
【００３２】
〔式中、Ｒ１およびＲ２は上記の通りである〕
のアミノ酸誘導体を、セリンまたはトレオニンと反応させ、得られたジペプチドを、
式
【００３３】
【化７】
【００３４】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は上記の通りである〕
のアンモニウム塩として結晶化する。
【００３５】
式ＩＩのアミノ酸誘導体は、一般の市販の化合物である。Ｒ１およびＲ２に与えられる優先によれば、式ＩＩの適切なアミノ酸誘導体は、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、またはＦｍｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨである。
【００３６】
式ＩＩのセリンまたはトレオニンとカップリングする前に、アミノ酸誘導体を活性化剤で好都合に活性化する。
【００３７】
適切な活性化剤は、ＤＩＣ／ＨＯＳｕ、ＤＩＣ／ペンタフルオロフェノール、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ、ＤＣＣ／ＨＯＳｕ、ＤＣＣ／ペンタフルオロフェノール、ＤＣＣ／ＨＯＢｔ、ＥＤＣ（ｘＨＣｌ）／ＨＯＳｕまたはＨＢＴＵ／ＨＯＢｔから選択することができる。好ましいカップリング剤はＤＩＣ／ＨＯＳｕである。式Ｉのアミノ酸誘導体の１当量に関連して、ＤＩＣは通常１．０〜１．４当量の量で使用され、ＨＯＳｕは通常１．０〜１．８当量の量で使用される。
【００３８】
一般に、活性化反応は、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトンまたはテトラヒドロフランなどの適切な有機溶媒、好ましくは−５℃〜２５℃の温度で酢酸エチルの存在下で実施する。
【００３９】
次に、セリンまたはトレオニンとの、好ましくはＬ−セリンまたはＬ−トレオニンとのカップリングは、１０℃〜３０℃の温度で、酢酸エチル、アセトンもしくはテトラヒドロフランなどの有機溶媒、または水とその混合物の存在下で実施することができる。好ましい溶媒は、アセトンと水の混合物である。
【００４０】
セリンまたはトレオニンと式ＩＩのアミノ酸誘導体との比率は、通常１．５〜３．０〜１、好ましくは２．０〜１の範囲で選択される。反応混合物のｐＨは、７．５〜９．０の値で好都合に設定される。
【００４１】
式ＩＩＩのアンモニウム塩の形成は、
式
【００４２】
【化８】
【００４３】
〔式中、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の全てが水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１−４−アルキルまたはＣ３−７−シクロアルキルから独立して選択される〕
のアミンを前もって形成されたジペプチドに加えることにより起こる。
【００４４】
式Ｖの適切なアミンは、全てのＲ６、Ｒ７およびＲ８が水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、水素、エチルまたはシクロヘキシルから独立して選択されるものである。シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミンおよびトリエチルアミンは、好ましいアミン類であり；ジシクロヘキシルアミンが式Ｖで使用される最も好ましいアミンである。結晶化は、通例、適切な有機溶媒中で、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールまたはｉ−プロパノールのような低級アルコール類中で、あるいは酢酸エチルまたはテトラヒドロフラン中でもたらされる。好ましい溶媒はエタノールである。
【００４５】
式ＩＩＩのアンモニウム塩は従来記述されておらず、こうして本発明のさらなる実施態様である。
【００４６】
好ましいアンモニウム塩は、式ＩＩＩのジシクロヘキシルアンモニウム塩（ここで、Ｒ１およびＲ２は上記の通りであり、Ｒ５は水素またはメチルであり、Ｒ６は水素であり、そしてＲ７およびＲ８はシクロヘキシルである）である。より好ましいのは式ＩＩＩの化合物であり、
ここで：
ａ） Ｒ１がＯ−ｔＢｕ保護を有するＬ−セリン側鎖を表し、Ｒ２がＦｍｏｃであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６が水素であり、そしてＲ７およびＲ８がシクロヘキシルである。
ｂ） Ｒ１がＯ−ｔＢｕ保護を有するＬ−セリン側鎖を表し、Ｒ２がＦｍｏｃであり、Ｒ５がメチルであり、Ｒ６が水素であり、そしてＲ７およびＲ８がシクロヘキシルである。
ｃ） Ｒ１がＯ−ｔＢｕ保護を有するＬ−トレオニン側鎖を表し、Ｒ２がＦｍｏｃであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６が水素であり、そしてＲ７およびＲ８がシクロヘキシルである。
ｄ） Ｒ１がＯ−ｔＢｕ保護を有するＬ−トレオニン側鎖を表し、Ｒ２がＦｍｏｃであり、Ｒ５がメチルであり、Ｒ６が水素であり、そしてＲ７およびＲ８がシクロヘキシルである。
【００４７】
工程ｂ）
続く工程ｂ）において、ジペプチドの遊離酸を酸の存在下で遊離して、式Ｖのプロトン化アミンを抽出により除去する。特に、式ＩＩＩのアンモニウム塩の遊離酸を鉱酸の存在下で遊離して、アミンを水および／または無機塩の水溶液での抽出により除去する間、有機溶媒中に溶解させる。
【００４８】
適切な鉱酸は含水硫酸または含水ＨＣｌ、好ましくは含水硫酸である。
【００４９】
遊離酸を溶解するための適切な有機溶媒は、酢酸エチル、ｔ−ブチルメチルエーテルまたは塩化メチレンから選択することができる。ｔ−ブチルメチルエーテルが好ましい溶媒であることが見い出されている。
【００５０】
遊離酸を含有する有機相は、一般に水および／または塩化ナトリウムのような無機塩の水溶液で、アミンを完全に除去するために数回洗浄する。
【００５１】
工程ｃ）
工程ｃ）において、工程ｂ）で得られたジペプチドの遊離酸の閉環は、酸触媒の存在下で、
【００５２】
【化９】
【００５３】
〔式中、Ｒ３およびＲ４の両方が水素でないという条件で、Ｒ３およびＲ４は水素またはＣ１−４−アルキルから独立して選択され、Ｒ９ａおよびＲ９ｂは独立してＣ１−４−アルキルであり、Ｒ１０はＣ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルカノイルまたはアリールの意味を有し、そしてＲ１１は水素またはＣ１−３−アルキルである〕
から選択される化合物を用いてもたらされる。
【００５４】
好ましくは、閉環は、式ＩＶａおよびＩＶｃの化合物を用いてもたらされ、より好ましくは、化合物が２，２−ジメトキシプロパン、２−メトキシプロペンまたは２−アセトキシプロペンから選択され、それにより、２，２−ジメトキシプロパンが最も好ましい化合物である。
理想的には、式ＩＶの化合物は、工程ｂ）で得られたジペプチドとの関連で、６．０〜１６．０当量、好ましくは７．０〜１０．０当量の量で使用される。
【００５５】
適切な酸触媒は、メタンスルホン酸、（＋）カンフル−１０−スルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウムから選択され、さらにメタンスルホン酸が好ましい。酸触媒は、通常、工程ｂ）で得られたジペプチドとの関連で、０．０５〜０．３０当量、好ましくは０．１０〜０．２０当量の量で適用される。
【００５６】
閉環は、還流温度で、テトラヒドロフラン、塩化メチレンまたはトルエン、好ましくはテトラヒドロフランなどの有機溶媒の存在下でもたらされる。
【００５７】
標的生成物の単離および仕上げは、当技術分野で公知である方法を使用することにより実施することができる。
【００５８】
以下の実施例は、それを制限することなしに本発明を例示する。
【００５９】
実施例
実施例１
機械的な撹拌棒、Ｐｔ−１００温度計、還流冷却器、滴下漏斗および窒素入口を装備した二重被覆ガラス反応器１０００mLに、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（１）２５ｇ（６４．９mmol）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド９．６６ｇ（８３．１mmol）および酢酸エチル１８０mLを仕込んだ。得られた懸濁液を０℃に冷却した。酢酸エチル２０mL中のジイソプロピルカルボジイミド１０．４９ｇ（８３．１mmol）の溶液を、１５分以内に加えた。得られた混合物を０℃で２時間、次にもう１時間室温で撹拌して、サンプリングした。溶媒を、減圧下（ｃａ．２２０mbar）で、最大５０℃の被覆温度で完全に除去した。残留物を、３５℃〜４０℃の内部温度でアセトン２５０mLで処理し、２０℃に冷却して、水１３．５mLで処理した。ｐＨを、１Ｍ ＨＣｌ １．０mLで、ｐＨ２−３に設定して、得られた混合物を１２時間、２０℃で撹拌して、サンプリングした。次に、懸濁液を−５℃〜０℃に冷却して、１時間この温度で撹拌した。沈殿物を濾別して、反応器およびフィルターを冷アセトン（０℃）５０mLですすいだ。清澄で無色の濾液を、２０℃で、６０分以内に、水１２２．５ml中のＬ−セリン１３．５７ｇ（１２７．８mmol）および炭酸ナトリウム１３．６３ｇ（２５７mmol）の溶液に加えた。得られた混合物を１時間、２０℃で撹拌して、サンプリングした。ｐＨを、ＨＣｌ（３７％）２８ｇで、ｐＨ２−３に設定して、有機溶媒を減圧下（＜２５０mbar）で、最大５０℃の被覆温度で除去した。得られた懸濁液を３５℃〜４０℃で、酢酸エチル１２５mLで処理して、得られた清澄な二相の溶液を２０℃に冷却した。相を分離して、有機相を全体として酢酸エチル２５０mLで２回抽出した。合わせた有機層を全体としてＮａＣｌ水溶液（１０％w/w）２２５mLで３回洗浄した。得られた有機溶液を濃縮して、溶媒を減圧下で最大５０℃の被覆温度でほとんど完全に除去した。残留物をエタノール２５０mLに溶解して、その後、溶媒の一部（７５mL）を減圧下（ｃａ．１７０mbar）で、最大５０℃の被覆温度で再度除去した。得られた溶液をエタノール４６２．５mLで処理して、２０℃に冷却した。エタノール１１８mL中のジシクロヘキシルアミン１１．８３ｇ（６３．９mmol）の溶液の約２０％（ｃａ．２９．５mL）を加えた。生成物が沈殿しはじめたらすぐ、混合物を取り除いた。懸濁液を１時間室温で撹拌して、その後ジシクロヘキシルアミン溶液の残りを少なくとも２時間以内にゆっくり加えた。滴下漏斗をエタノール２５mLですすいだ。内部温度を４時間以内に０℃に下げて、その後、懸濁液を一晩この温度で撹拌した。沈殿物を吸引を用いて濾過し、フィルターケークを冷エタノール（０℃）１１７．５mLで洗浄して、減圧下で乾燥して（５０℃、２０mbar）、無色の固体として、（Ｓ，Ｓ）−２−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル−アミノ］−３−ヒドロキシ−プロピオン酸ジシクロヘキシル−アンモニウム塩（３） ３５．７ｇ［（Ｓ）−３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニル−アミノ）−プロピオン酸から出発する収率８２％、ＨＰＬＣに基づく９６．８％（w/w）純度］が得られた。
【００６０】
ＨＰＬＣ分析を純（Ｓ，Ｓ）−２−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル−アミノ］−３−ヒドロキシ−プロピオン酸ジシクロヘキシル−アンモニウム塩（３）の外部標準を使用して実施した。ＨＰＣＬのための条件：カラム ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ）、４．６×１５０mm、３．５μｍ；紫外検出 ２０６nm；勾配のための溶液：水（Ａ）、２０mM ＫＨ２ＰＯ４−緩衝液、ｐＨ２．５（Ｂ）、アセトニトリル（Ｃ）；流量 １．０mL／min；２０℃。
勾配：
【００６１】
【表２】
【００６２】
保持時間：
（Ｓ，Ｓ）−２−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル−アミノ］−３−ヒドロキシ−プロピオン酸ジシクロヘキシル−アンモニウム塩（３） ８．４分
Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（１） １１．６分
【００６３】
このＨＰＬＣ−法は、（３）の遊離酸の分析のための値をもたらす。この値から、対応しているジシクロヘキシルアンモニウム塩の分析値を算出して、遊離酸とジシクロヘキシルアンモニウムの１：１の化学量論的比率を仮定した。
【００６４】
ドデカンの内部標準を使用するＧＣ分析を、ジシクロヘキシルアミンの含有量を測定するために使用した。ＧＣのための条件：カラム溶融石英、１００％ ポリジメチルシロキサン、１μｍ、Ｌ＝１５ｍ、ＩＤ＝０．２５mm；キャリアガス 水素、圧力：５３ｋＰａ、ｌｉｎ．速度：７３cm／ｓ、分割比：１：１００。
温度プログラム：
【００６５】
【表３】
【００６６】
保持時間：
ドデカン ４．１０分
ジシクロヘキシルアミン ４．９０分
【００６７】
実施例２
機械的な撹拌棒、Ｐｔ−１００温度計、還流冷却器、綿フィルター付滴下漏斗、および窒素入口を装備した二重被覆ガラス反応器５００mLに、（Ｓ，Ｓ）−２−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−プロピオニルアミノ］−３−ヒドロキシ−プロピオン酸ジシクロヘキシルアンモニウム塩（３）２５．０ｇ（３７．０mmol）、tert−ブチルメチルエーテル１００mLおよび水４４．３mL中の硫酸（９６％）４．７０ｇの溶液を仕込んだ。混合物を９０分間室温で撹拌した。水相を分離して、有機相を塩化ナトリウム水溶液（０．５％−w/w）総量７６mlを２回で、再度水３８mLで洗浄した。有機溶媒を減圧下（５００−１００mbar）および被覆温度５０℃で完全に除去した。泡状の残留物をテトラヒドロフラン１００mLに溶解して、溶媒を減圧（５００−１００mbar）および被覆温度５０℃で再度完全に除去した。残留物をテトラヒドロフラン４５０mlに溶解して、得られた清澄な溶液を２，２−ジメトキシプロパン３５．４ｇ（３３３mmol）とメタンスルホン酸０．６５ｇ（６．７mmol）で処理した。分子ふるい（０．４nm）７３ｇ上の蒸留液が戻る間、混合物を還流下、被覆温度８５℃で加熱した。１６時間後、僅かに帯黄色の溶液を２０℃に冷却しサンプリングして、混合物をトリエチルアミン０．８２８ｇ（８．１４mmol）で処理して、１０分間撹拌した。溶媒を減圧下（３５０−１００mbar）および被覆温度５０℃で完全に除去した。残留物をtert−ブチルメチルエーテル１００mLで処理して、減圧下（３５０−１００mbar）および被覆温度５０℃で再度完全に濃縮した。残留物をtert−ブチルメチルエーテル１７５mLに溶解して、２０℃〜２５℃に冷却した。溶液を水８７．５mLで処理して、１０分間撹拌した。相を分離して、有機相を減圧下（３５０−１００mbar）および被覆温度５０℃で完全に濃縮した。泡状の残留物をtert−ブチルメチルエーテル１００mLに溶解して、減圧下（３５０−１００mbar）および被覆温度５０℃で完全に濃縮した。この工程を、tert−ブチルメチルエーテルの総量２００mLを２回で繰り返した。残留物を２０℃〜２５℃でtert−ブチルメチルエーテル４５．２mLに溶解して、イソプロパノール２２．６mLで処理した。この温度で、溶液をペンタン１７５mLで処理し、取り除いて、次に少なくとも１５分間の撹拌を維持して、１時間以内にペンタン２００mLで再度ゆっくり処理した。得られた溶液を４〜１６時間撹拌して、次に１−２時間以内で０℃に冷却して、あと２時間この温度で再度撹拌した。沈殿物を吸引で濾過し、フィルターケークを冷ペンタン（０℃）の総量６０mlを２分割で洗浄して、減圧下で乾燥して（５０℃、２０mbar）、無色の固体として、（Ｓ，Ｓ）−３−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イル−メトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル］−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−４−カルボン酸（４）１４．３ｇ［（Ｓ，Ｓ）−２−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−プロピオニルアミノ］−３−ヒドロキシ−プロピオン酸ジシクロヘキシル−アンモニウム塩から出発する収率７５％、ＨＰＬＣに基づく９８．７％（w/w）純度］が得られた。
【００６８】
ＨＰＬＣ分析を純（Ｓ，Ｓ）−３−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イル−メトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル］−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−４−カルボン酸（４）の外部標準を使用して実施した。ＨＰＬＣのための条件：カラム ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８ （Ｗａｔｅｒｓ）、４．６×１５０mm、３．５μｍ；紫外検出 ２０６nm；勾配のための溶液：水（Ａ）、２０mM ＫＨ２ＰＯ４−緩衝液、ｐＨ２．５（Ｂ）、アセトニトリル（Ｃ）；流量 １．０mL／min；２０℃。
勾配：
【００６９】
【表４】
【００７０】
保持時間：
（Ｓ，Ｓ）−３−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イル−メトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル］−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−４−カルボン酸（４） ７．３分
（Ｓ，Ｓ）−２−［３−tert−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−プロピオニル−アミノ］−３−ヒドロキシ−プロピオン酸ジシクロヘキシル−アンモニウム塩（３） ３．０分
Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（１） ５．６分
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１０】
〔式中、Ｒ１は、αアミノ酸の側鎖であり、Ｒ２は、アミノ保護基であり、そしてＲ３およびＲ４は、水素またはＣ１−４−アルキルから独立して選択され、Ｒ５は、水素またはメチルである〕
の化合物の製造方法であって、
ａ） 式
【化１１】
〔式中、Ｒ１およびＲ２は上記の通りである〕
のアミノ酸誘導体を、セリンまたはトレオニンで変換して、次の工程において、
式
【化１２】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ５は上記の通りであり、
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の全てが水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１−４−アルキルまたはＣ３−７−シクロアルキルから独立して選択される〕
のアンモニウム塩として得られたジペプチドを結晶化すること、
ｂ） 式ＩＩＩのアンモニウム塩から、酸の存在下で遊離酸を遊離して、抽出によりアミンを除去すること、
そして
ｃ）
【化１３】
〔式中、Ｒ３およびＲ４の両方が水素でないという条件で、Ｒ３およびＲ４は水素またはＣ１−４−アルキルから独立して選択され、Ｒ９ａおよびＲ９ｂは独立してＣ１−４−アルキルであり、Ｒ１０はＣ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルカノイルまたはアリールの意味を有し、そしてＲ１１は水素またはＣ１−３−アルキルである〕
から選択される化合物で、酸触媒の存在下で閉環をもたらすこと
を含む方法。
【請求項２】
Ｒ１が、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパラギン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、アラニン、セリン、トレオニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アミノイソ酪酸およびプロリンから選択される側鎖であることを特徴とする、請求項１の方法。
【請求項３】
Ｒ２が、Ｆｍｏｃ、Ｃｂｚ、Ｍｏｚ、Ｂｏｃ、Ｔｒｏｃ、ＴｅｏｃまたはＶｏｃから選択されることを特徴とする、請求項１または２の方法。
【請求項４】
式ＩＩのアミノ酸誘導体が、セリンまたはトレオニンとカップリングする前に、活性化剤を用いて活性化されることを特徴とする、請求項１〜３の方法。
【請求項５】
活性化剤が、ＤＩＣ／ＨＯＳｕ、ＤＩＣ／ペンタフルオロフェノール、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ、ＤＣＣ／ＨＯＳｕ、ＤＣＣ／ペンタフルオロフェノール、ＤＣＣ／ＨＯＢｔ、ＥＤＣ（ｘＨＣｌ）／ＨＯＳｕまたはＨＢＴＵ／ＨＯＢｔから選択されることを特徴とする、請求項４の方法。
【請求項６】
活性化剤がＤＩＣ／ＨＯＳｕであることを特徴とする、請求項４および５の方法。
【請求項７】
セリンまたはトレオニンと式Ｉのアミノ酸誘導体の比率が、１．５〜３．０〜１の範囲で選択されることを特徴とする、請求項１〜６の方法。
【請求項８】
式ＩＩＩのアンモニウム塩が、
式
【化１４】
〔式中、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の全てが水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１−４−アルキルまたはＣ３−７−シクロアルキルから独立して選択される〕
のアミンをジペプチドに加えることにより形成されることを特徴とする、請求項１〜７の方法。
【請求項９】
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の全てが水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、水素、エチルまたはシクロヘキシルから独立して選択されることを特徴とする、請求項８の方法。
【請求項１０】
ジシクロヘキシルアミンを加えることを特徴とする、請求項８〜９の方法。
【請求項１１】
結晶化が、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｉ−プロパノール、酢酸エチルまたはテトラヒドロフランから選択される有機溶媒中で起こることを特徴とする、請求項８〜１０の方法。
【請求項１２】
式ＩＩＩのアンモニウム塩の遊離酸が鉱酸の存在下で遊離して、アミンを、水および／または無機塩の水溶液で抽出により除去する間、有機溶媒に溶解させることを特徴とする、請求項１〜１１の方法。
【請求項１３】
閉環が、２，２−ジメトキシプロパン、２−メトキシプロペンまたは２−アセトキシプロペンでもたらされることを特徴とする、請求項１〜１２の方法。
【請求項１４】
閉環が、２，２−ジメトキシプロパンでもたらされることを特徴とする、請求項１３の方法。
【請求項１５】
閉環のための酸触媒が、メタンスルホン酸、（＋）カンフル−１０−スルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウムから選択されることを特徴とする、請求項１〜１４の方法。
【請求項１６】
閉環が有機溶媒の存在下でもたらされることを特徴とする、請求項１および１３〜１５の方法。
【請求項１７】
式
【化１５】
〔式中、Ｒ１はαアミノ酸の側鎖であり、Ｒ２はアミノ保護基であり、そしてＲ５は水素またはメチルであり、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の全てが水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１−４−アルキルまたはＣ３−７−シクロアルキルから独立して選択される〕
の化合物。
【請求項１８】
Ｒ１およびＲ２が上記の通りであり、Ｒ６が水素であり、そしてＲ７およびＲ８がシクロヘキシルである、請求項１７の化合物。
【請求項１】
式
【化１０】
〔式中、Ｒ１は、αアミノ酸の側鎖であり、Ｒ２は、アミノ保護基であり、そしてＲ３およびＲ４は、水素またはＣ１−４−アルキルから独立して選択され、Ｒ５は、水素またはメチルである〕
の化合物の製造方法であって、
ａ） 式
【化１１】
〔式中、Ｒ１およびＲ２は上記の通りである〕
のアミノ酸誘導体を、セリンまたはトレオニンで変換して、次の工程において、
式
【化１２】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ５は上記の通りであり、
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の全てが水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１−４−アルキルまたはＣ３−７−シクロアルキルから独立して選択される〕
のアンモニウム塩として得られたジペプチドを結晶化すること、
ｂ） 式ＩＩＩのアンモニウム塩から、酸の存在下で遊離酸を遊離して、抽出によりアミンを除去すること、
そして
ｃ）
【化１３】
〔式中、Ｒ３およびＲ４の両方が水素でないという条件で、Ｒ３およびＲ４は水素またはＣ１−４−アルキルから独立して選択され、Ｒ９ａおよびＲ９ｂは独立してＣ１−４−アルキルであり、Ｒ１０はＣ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルカノイルまたはアリールの意味を有し、そしてＲ１１は水素またはＣ１−３−アルキルである〕
から選択される化合物で、酸触媒の存在下で閉環をもたらすこと
を含む方法。
【請求項２】
Ｒ１が、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパラギン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、アラニン、セリン、トレオニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アミノイソ酪酸およびプロリンから選択される側鎖であることを特徴とする、請求項１の方法。
【請求項３】
Ｒ２が、Ｆｍｏｃ、Ｃｂｚ、Ｍｏｚ、Ｂｏｃ、Ｔｒｏｃ、ＴｅｏｃまたはＶｏｃから選択されることを特徴とする、請求項１または２の方法。
【請求項４】
式ＩＩのアミノ酸誘導体が、セリンまたはトレオニンとカップリングする前に、活性化剤を用いて活性化されることを特徴とする、請求項１〜３の方法。
【請求項５】
活性化剤が、ＤＩＣ／ＨＯＳｕ、ＤＩＣ／ペンタフルオロフェノール、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ、ＤＣＣ／ＨＯＳｕ、ＤＣＣ／ペンタフルオロフェノール、ＤＣＣ／ＨＯＢｔ、ＥＤＣ（ｘＨＣｌ）／ＨＯＳｕまたはＨＢＴＵ／ＨＯＢｔから選択されることを特徴とする、請求項４の方法。
【請求項６】
活性化剤がＤＩＣ／ＨＯＳｕであることを特徴とする、請求項４および５の方法。
【請求項７】
セリンまたはトレオニンと式Ｉのアミノ酸誘導体の比率が、１．５〜３．０〜１の範囲で選択されることを特徴とする、請求項１〜６の方法。
【請求項８】
式ＩＩＩのアンモニウム塩が、
式
【化１４】
〔式中、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の全てが水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１−４−アルキルまたはＣ３−７−シクロアルキルから独立して選択される〕
のアミンをジペプチドに加えることにより形成されることを特徴とする、請求項１〜７の方法。
【請求項９】
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の全てが水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、水素、エチルまたはシクロヘキシルから独立して選択されることを特徴とする、請求項８の方法。
【請求項１０】
ジシクロヘキシルアミンを加えることを特徴とする、請求項８〜９の方法。
【請求項１１】
結晶化が、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｉ−プロパノール、酢酸エチルまたはテトラヒドロフランから選択される有機溶媒中で起こることを特徴とする、請求項８〜１０の方法。
【請求項１２】
式ＩＩＩのアンモニウム塩の遊離酸が鉱酸の存在下で遊離して、アミンを、水および／または無機塩の水溶液で抽出により除去する間、有機溶媒に溶解させることを特徴とする、請求項１〜１１の方法。
【請求項１３】
閉環が、２，２−ジメトキシプロパン、２−メトキシプロペンまたは２−アセトキシプロペンでもたらされることを特徴とする、請求項１〜１２の方法。
【請求項１４】
閉環が、２，２−ジメトキシプロパンでもたらされることを特徴とする、請求項１３の方法。
【請求項１５】
閉環のための酸触媒が、メタンスルホン酸、（＋）カンフル−１０−スルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウムから選択されることを特徴とする、請求項１〜１４の方法。
【請求項１６】
閉環が有機溶媒の存在下でもたらされることを特徴とする、請求項１および１３〜１５の方法。
【請求項１７】
式
【化１５】
〔式中、Ｒ１はαアミノ酸の側鎖であり、Ｒ２はアミノ保護基であり、そしてＲ５は水素またはメチルであり、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の全てが水素でないという条件で、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１−４−アルキルまたはＣ３−７−シクロアルキルから独立して選択される〕
の化合物。
【請求項１８】
Ｒ１およびＲ２が上記の通りであり、Ｒ６が水素であり、そしてＲ７およびＲ８がシクロヘキシルである、請求項１７の化合物。
【公表番号】特表２００９−５４１４１２（Ｐ２００９−５４１４１２Ａ）
【公表日】平成２１年１１月２６日（２００９．１１．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５１７１０４（Ｐ２００９−５１７１０４）
【出願日】平成１９年６月１８日（２００７．６．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５５９８８
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０００６４１
【国際公開日】平成２０年１月３日（２００８．１．３）
【出願人】（５９１００３０１３）エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー (1,754)
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１１月２６日（２００９．１１．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年６月１８日（２００７．６．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５５９８８
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０００６４１
【国際公開日】平成２０年１月３日（２００８．１．３）
【出願人】（５９１００３０１３）エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー (1,754)
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
【Ｆターム（参考）】
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