ジアミノフェノチアジニウム化合物の調製方法
誘導体（ＩＩ）を精製するためのステップを含む、ジアミノフェノチアジニウム型の化合物を調製するための方法。この方法から得られる生成物は、高い純度を有する。薬剤を調製するための、これらの化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、ジアミノフェノチアジニウム型の化合物を調製するための新規な方法であり、特に、これらの化合物を精製するための方法である。詳細にはメチレンブルーに関し、またその主題は、この方法から得られる生成物、即ちその純度が従来技術で知られているものより高い生成物でもある。本発明の主題は、薬剤を調製するための、これらの化合物の使用でもある。
【背景技術】
【０００２】
メチレンブルーまたは３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジン−５−イリウムクロライドとしても知られている塩化メチルチオニニウムは、下式に相当する有機化合物である。
【０００３】
【化１】
【０００４】
この化合物は、長い間、酸化還元指示薬および染料として、生物物理学的な系における光学的顕色剤として、分離材としてのナノポーラス材料において、また、フォトエレクトロクロミックイメージングにおいて、使用されてきた。また、防腐剤、抗感染剤として、解毒剤として、および診断薬としての、その使用も知られている。特に、婦人科学、新生児学、癌腫学、腫瘍学、泌尿器学、眼科学、および胃腸病学での用途が見出されている。治療分野での新しい用途は、血液中の病原性汚染物の低減（ＧＢ２３７３７８７）や、過度の血行力学的反応の予防または阻害など、開発の途中である（ＷＯ０３／０８２２９６）。
【０００５】
この化合物に関する多くの合成方法について、最も古くは１８７７年以来記述されてきた（独国特許第１８８６号）。これらの方法全ては、一般に、少なくとも１つの合成段階で金属化合物を使用するという事実を有している。
【０００６】
特許ＤＥ−１８８６は、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，４−ジアミノベンゼンの酸化カップリングをＨ２ＳおよびＦｅＣｌ３により実施する方法について記述している。
【０００７】
Ｆｉｅｚ Ｄａｖｉｄ他、「Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｏｆ Ｄｙｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、１９４９、Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、３０８〜３１４は、二酸化マンガンまたは硫酸銅で処理することによってチアジン環を形成する方法について述べている。この方法は、塩化亜鉛、二クロム酸ナトリウム、およびチオ硫酸アルミニウムによる処理も含む。
【０００８】
文献ＷＯ２００５／０５４２１７は、メチレンブルー誘導体、およびその調製方法について述べている。これらの化合物を調製するための方法は、出発生成物としてフェノチアジンを使用する。現在、フェノチアジンを調製するための既知の方法は全て、金属原子が合成の終わりにフェノチアジンをキレート化する金属反応体を必要とする。したがって、この方法を用いて得られた生成物は、アズールＢなどの通常の有機汚染物質に加え、金属基によって必然的に汚染される。
【０００９】
文献ＷＯ２００６／０３２８７９は、鉄による還元ステップ、二クロム酸ナトリウムによる酸化ステップ、および硫酸銅による酸化ステップを含む、メチレンブルーを調製するための方法について述べている。
【００１０】
これらの方法は、不純物、特にメチレンブルーの金属不純物を減少させるために、退屈で費用のかかる精製を実施する必要がある。後続の精製ステップにも関わらず、これらの様々なプロセスは、多くの金属不純物、および有機不純物、特にアズールＢ、アズールＣ、およびアズールＡも含むメチレンブルーを必然的に生成する。
【００１１】
文献ＷＯ２００６／０３２８７９は、ヨーロッパ薬局方によって確定された最大閾値の１０％という金属不純物のレベルを達成することが可能であると主張しているが、実施例によれば、このレベルは全ての金属に関して同時に得られないこと、および精製ステップの結果は必ずしも再現可能とは限らないことに留意されたい。様々な市販のメチレンブルーの金属含量の詳細な分析が、この文献には例示されている。
【００１２】
メチレンブルーを製造できる、ましてや工業的な量で以前の要求に適合する品質のメチレンブルーを製造できるメチレンブルーの製造業者がいなかったので、ヨーロッパ薬局方により最近（２００６年４月）、金属不純物の許容閾値の増加に関して改正がなされた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】ＧＢ２３７３７８７
【特許文献２】ＷＯ０３／０８２２９６
【特許文献３】独国特許第１８８６号
【特許文献４】ＷＯ２００５／０５４２１７
【特許文献５】ＷＯ２００６／０３２８７９
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｆｉｅｚ Ｄａｖｉｄ他、「Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｏｆ Ｄｙｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、１９４９、Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、３０８〜３１４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
したがって、本発明の第１の主題は、非常に純度の高いメチレンブルーとの接触をもたらし、特に非常に低いレベルの金属および有機不純物を含み、満足のいく経済条件下で工業的規模にまで外挿により推定することができ、さらに、品質のばらつきに影響を受けない、メチレンブルーの調製方法の開発であった。ある変形例によれば、本発明の方法は、メチレンブルーを精製するための方法である。
【００１６】
開発された方法は、メチレンブルーに適用されるだけではなく、ジアミノフェノチアジニウム型のその他の誘導体にも適用される。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明の方法は、下式（Ｉ）に相当する化合物を調製するための方法である
【００１８】
【化２】
【００１９】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、互いに独立に、
−水素原子、
−ハロゲン原子およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルオキシカルボニル、または−ＣＯＮＨ２官能基から選択された１個または複数の官能基で必要に応じて置換された、飽和または不飽和の直鎖状、分枝状、または環状Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルオキシカルボニル、または−ＣＯＮＨ２官能基から選択された、１個または複数の官能基で必要に応じて置換されたアリール基
からなる群から選択することができ、
図１（Ｉ）中に続けて配置された２個のＲｉ基（ｉ＝１、２、．．．、１０）は、環が形成されるように一緒になってもよいことが理解され、例えばＲ１とＲ５、またはＲ５とＲ６、Ｒ７とＲ８、Ｒ８とＲ３、Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ９、Ｒ１０とＲ２、またはＲ２とＲ１は、第４の環が形成されるように必要に応じて置換された単一のアルキル鎖からなるものでよく、
さらに、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、互いに独立に、ハロゲン原子：Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩから選択することができ、
Ｘ−は、有機または無機陰イオンを表す）。
【００２０】
例えば、使用することができる陰イオンには、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、または硝酸などの無機酸の陰イオン；例えば酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、または安息香酸などの有機酸の陰イオンが含まれ、これらにはＯＨ−も含まれる。
【００２１】
この方法は、式（ＩＩ）の化合物からの金属化合物の分離を可能にする条件下で、式（ＩＩ）の化合物が精製ステップに供される、少なくとも１つのステップを含むことを特徴とする
【００２２】
【化３】
【００２３】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０基は、式（Ｉ）の場合と同じ定義を有し、Ｒは、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびニトロ基から選択された１個または複数の官能基で必要に応じて置換された、フェニルまたはベンジル基、
−直鎖状、分枝状、または環状Ｃ１〜Ｃ８アルキル基、
−Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ基、
−Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ基、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびニトロ基から選択された１個または複数の官能基で、芳香核上で必要に応じて置換された、フェニルオキシまたはベンジルオキシ基
から選択された基を表し、
Ｚは、ＯおよびＳから選択された原子を表す）。
【００２４】
式（ＩＩ）の化合物の精製は、式（ＩＩ）の化合物からの金属化合物の分離、即ち、金属化合物を保持することが可能な担体を通した濾過、適切な溶媒からの結晶化、または当業者に知られている任意のその他の方法を可能にする条件下で実施される。
【００２５】
精製が、金属化合物を保持することが可能な担体を通した濾過によって実施される場合、そのような担体は、シリカゲル、アルミナゲル（中性、塩基性、または酸性）、必要に応じて変性させた珪藻土、セライト、微多孔膜、チオールやカルボン酸、第三級アミン官能基などの金属捕捉基によりグラフト化された樹脂および金属捕捉基によりグラフト化された繊維、または金属を保持する性質を有する任意のその他の担体から選択することができる。グラフト化繊維の中では、特に、Ｓｍｏｐｅｘ（登録商標）という商標でＪｏｈｎｓｏｎ Ｍａｔｔｈｅｙ社から販売されている製品を挙げることができる。珪藻土の中では、Ｃｌａｒｃｅｌ（登録商標）という商標でＣＥＣＡ社から販売されている製品を挙げることができる。
【００２６】
式（ＩＩ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物から開始して、式（Ｉ）の化合物を還元することによって、次いで必要に応じて、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）型の活性化剤の存在下、フェノチアジニウム環のアミン官能基と適切な保護基Ｒ−ＣＺ−Ｙ（式中、ＲおよびＺは上記にて定義されたものと同じ定義を有し、Ｙは、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、またはＢｒなどのハロゲン基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、−ＯＣＯＲ（無水物）基、およびヒドロキシル基から選択された脱離基を表す。）とを反応させることによって得ることができる。Ｒは、フェニル基およびトルイル基から選択することが有利である。
【００２７】
式（ＩＩ）の化合物が式（Ｉ）の化合物から開始して得られる場合、その全体的なプロセスは、式（Ｉ）の化合物の精製である。しかし、式（ＩＩ）の化合物は、出発生成物として生成物（Ｉ）を使用しないその他の方法を用いて、得ることができる。
【００２８】
ベンゾイルロイコメチレンブルーなど、式（ＩＩ）のいくつかの化合物は、市販されている。
【００２９】
式（Ｉ）によって表される化合物は、いくつかの等価な共鳴構造によって表すことができる。非限定的な例示として、式（Ｉ）の場合と等価なその他の構造を以下に示す。
【００３０】
【化４】
【００３１】
式（Ｉ）および式（ＩＩ）では、同一でも異なっていてもよいＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、好ましくは水素原子およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択される。Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、Ｈを表すことが有利である。
【００３２】
下記の要件：
−ＸがＣｌまたはＯＨを表すこと、
−同一でも異なっていてもよいＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、水素原子およびメチルから選択されること、
−Ｒ６が水素原子を表すこと、
−Ｒ７が水素原子を表すこと、
−ＺがＯを表すこと
の１つまたは複数を満たすことがより有利である。
【００３３】
式（Ｉ）の化合物は、塩化テトラメチルチオニンまたはメチレンブルーであることが有利である。
【００３４】
別の変形例によれば、式（Ｉ）の化合物は、塩化ジメチルチオニンもしくはアズールＡ、または塩化トリメチルチオニンもしくはアズールＢ、または塩化モノメチルチオニンもしくはアズールＣである。
【００３５】
本発明によれば、式（Ｉ）の化合物を調製するための方法は、式（ＩＩ）の化合物を精製するための少なくとも１つのステップを含み；特にこの精製は、シリカゲルやアルミナゲル（中性、塩基性、または酸性）、必要に応じて変性させた珪藻土、金属捕捉剤により官能化された樹脂、金属捕捉剤により官能化された繊維、セライト、微多孔膜、または金属化合物を保持することが可能な任意のその他の担体など、金属化合物を保持することが可能な担体を通して式（ＩＩ）の化合物を濾過するための、少なくとも１つのステップを含む。
【００３６】
さらに詳細に、この変形例によれば、式（ＩＩ）の化合物は適切な溶媒に可溶化され、フィルターは、ガラスカラムや焼結ガラスフィルター、工業用スピンドライヤーなど、適切な受け器に濾過担体を導入して調製される。選択された濾過担体が充填された受け器には、好ましくは式（ＩＩ）の化合物が溶解するものと同じ溶媒によって、湿り気が与えられる。
【００３７】
式（ＩＩ）の化合物を含有する溶液はフィルター上に堆積し、フィルターを通った溶液は回収され、このフィルターは、式（ＩＩ）の化合物を可溶化するのに役立てたものと同一でも異なっていてもよい溶媒で数回濯ぐ。溶出した画分を回収し、必要に応じて濃縮する。
【００３８】
式（ＩＩ）の化合物を可溶化するのに使用することができる溶媒の中で、好ましくは、塩素化溶媒、例えばジクロロメタンもしくはクロロホルム、イソプロパノールやエタノール、メタノールなどのアルコール、またはアセトニトリル、酢酸エチル、もしくはテトラヒドロフラン、またはこれらの溶媒の混合物を挙げることができる。
【００３９】
式（Ｉ）の化合物の溶液は、１ｇ／ｌから１０３ｇ／ｌに及ぶ濃度のものが有利である。より低い濃度では、体積が大きすぎる溶媒を使用することになり、その結果、安全性および材料のサイズに関する問題が生ずる。より高い濃度は、生成物の溶解度から想定することが難しい。
【００４０】
濾過される生成物１ｋｇ当たり、濾過支持体を約０．１から１０ｋｇ使用することが考えられる。式（ＩＩ）の生成物が完全に溶出するまで、式（ＩＩ）の生成物１ｋｇ当たり０．１から５０Ｌの溶媒で、フィルターを濯ぐことを考えることが有利である。本発明の方法には、式（ＩＩ）の生成物からその金属不純物を除去するという利点がある。
【００４１】
結晶化によって式（ＩＩ）の化合物を精製するのに選択される場合、溶媒は、エタノールなどのアルコール、および塩化メチレンなどの塩素化溶媒から選択することが有利である。
【００４２】
式（ＩＩ）の化合物は、必要に応じてジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）型の活性化剤の存在下、保護基Ｒ−ＣＺ−Ｙ（式中、ＹはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、−ＯＣＯＲ（無水物）基、およびヒドロキシル基から有利に選択される。）と反応する式（Ｉ）の化合物から開始して生成することが有利である。
【００４３】
反応は、水中、または水と別の溶媒、例えばアセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、または任意のその他の適切な有機溶媒との混合物中の、塩基性または中性の媒体中で、従来通り実施される。
【００４４】
反応は発熱性であり、混合物の温度を周囲温度程度に維持することを可能にする冷却手段が、好ましく使用される。
【００４５】
出発生成物（Ｉ）は、市販されており、またはＷＯ２００６／０３２８７９に記載されているような知られている方法によって調製される。
【００４６】
一般に、式（Ｉ）の生成物は、生成物（Ｉ）中に不純物として見出される金属誘導体の使用を必要とする、合成方法を用いて調製される。これは、メチレンブルーの場合に言えることであるが、アズールＡ、アズールＢおよびアズールＣの場合にも言える。
【００４７】
式（Ｉ）の化合物は、その金属および有機不純物を、直接、簡単に、かつ効率的に除去することができない。従来技術の方法は、収量が不十分で、残留不純物のレベルを制御することが難しい生成物が得られる、連続的な再結晶を必要とする。
【００４８】
さらに、式（Ｉ）の生成物がキレート金属の性質を有するのに対し、生成物（ＩＩ）はキレート化されていない。したがって、その精製は、式（Ｉ）の化合物の直接的な精製よりも非常に効率的である。
【００４９】
本発明の方法の様々なステップでは、いかなる外部汚染も導入されないように、非金属材料と、金属基を含まない反応体および溶媒とを使用するのに注意が払われる。
【００５０】
式（ＩＩ）の生成物が、本発明の方法により精製された後、特に濾過にかけられた後、式（ＩＩ）の化合物のフェノチアジン環のアミンを脱保護するステップが、有利に実施される。この脱保護は、金属汚染物質の導入を回避しながらかつ式（Ｉ）の化合物の分解を防止する条件下で、当業者に知られている任意の手段によって実施される。Ｒ−ＣＺ−基の脱保護に使用することができる手段の中で、キノン、例えば２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、ＨＮＯ３、ＨＣｌＯ４、Ｉ２、ＨＣｌ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ２Ｏ２および紫外線による処理を挙げることができる。キノンがこのステップには好ましく使用され、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンが非常に好ましい。この脱保護反応は、酢酸エチル、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、およびアセトンから選択された溶媒中で実施されることが有利である。このステップに好ましい溶媒は、アセトニトリルである。
【００５１】
有利な脱保護条件は、化合物（ＩＩ）に対して０．８０から１．１モル当量のＤＤＱの使用に備え、さらにより有利には、化合物（ＩＩ）に対して０．８５から１．０５モル当量のＤＤＱであり、有利には０．９０から１モル当量である。この脱保護は、−４０℃から−５℃の間の温度で実施されることが好ましい。完全に除外するものではないが、より低い温度では反応時間が長くなるという欠点がもたらされる可能性があり、より高い温度では副生成物の形成をもたらす可能性がある。
【００５２】
所望のＸ−陰イオンを含む式（Ｉ）の化合物を得るために、使用される手段に応じて、イオン交換を実施することが必要と考えられる。好ましくはこのイオン交換は、有利には酢酸エチル中で、ＨＣｌにより処理することによって実施される。その他の溶媒を使用してもよいが、副生成物の形成をもたらす可能性のあるものがある。
【００５３】
上記にて開示された式（ＩＩ）の化合物の脱保護に関する条件は、このステップ中に金属不純物を導入することなくまたは有機不純物を形成することなく、式（Ｉ）の化合物の実現を可能にするので、特に有利である。本発明の１つの変形例によれば、金属を保持することが可能な担体での濾過以外の手段、例えば適切な溶媒からの結晶化によって、式（ＩＩ）の化合物を精製することを考えることができる。この変形例によれば、式（ＩＩ）の化合物は、金属化合物の使用を含まない任意の脱保護手段を使用して、特にキノンを使用して、特にＤＤＱを使用して、好ましくは上記にて開示された条件下で引き続き脱保護化される。
【００５４】
したがって本発明の別の主題は、金属化合物の使用を含まない脱保護手段を使用して、式（ＩＩ）の化合物のフェノチアジン環のアミンのＲ−ＣＺ−基を脱保護するための、少なくとも１つのステップを含むことを特徴とする、上述の式（Ｉ）に相当する化合物を調製するための方法である。
【００５５】
「金属化合物の使用を含まない脱保護手段」という表現は、いかなる金属部品も含まない反応器、例えばエナメル加工された反応器内での、非金属反応体、および金属基を含まない（＜０．０１ｐｐｍ）溶媒の使用を意味するものとする。
【００５６】
Ｒ−ＣＺ−基を脱保護するために使用することができる手段の中で、キノン、例えば２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、ＨＮＯ３、ＨＣｌＯ４、Ｉ２、ＨＣｌ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ２Ｏ２および紫外線による処理を挙げることができる。キノンがこのステップでは好ましく使用され、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンが非常に好ましい。上述のＤＤＱを使用するための条件を用いることが、有利である。
【００５７】
化合物（Ｉ）が得られるような、化合物（ＩＩ）の脱保護のための方法は、生成物（ＩＩ）に比べていかなる追加の金属不純物も含まない化合物（Ｉ）を実現することを可能にする。さらに、これらの脱保護条件は、有機分解生成物の形成を防止する。実際に、式（Ｉ）の化合物は限られた安定性を有し、ある処理条件の使用の結果、例えばメチレンブルーから、後に分離することが困難になるアズールＡ、ＢおよびＣへの分解が生じる。
【００５８】
本発明の方法は、工業規模で、信頼性があり、再現性があり、かつ利用可能な手法により、金属汚染物質を含まずかつ高い化学的純度を有する式（Ｉ）の化合物を利用することを可能にする。これらの品質は、薬学的品質を有する式（Ｉ）の生成物を提供することができるようにするのに不可欠である。
【００５９】
特に、本発明の調製または精製方法は、メチレンブルー１ｇ当たりカドミウムを０．０２μｇ／以下含むメチレンブルーまたは塩化テトラメチルチオニンを、工業的な量でかつ再現可能に得ることを可能にする唯一のものである。そのような生成物は、本発明の別の主題を構成する。
【００６０】
本発明の別の主題は、ヨーロッパ薬局方５．４（２００６年４月刊行）の条件下でＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィ）によって測定した場合に９７％よりも高い純度、好ましくは９８％よりも高く、さらにより好ましくは９９％よりも高い純度を有し、かつメチレンブルー１ｇ当たりアルミニウムを４．５μｇ／ｇ未満、有利にはアルミニウムを３μｇ／ｇ未満、さらにより有利にはアルミニウムを２．５μｇ／ｇ未満含む、メチレンブルーまたは塩化テトラメチルチオニンである。
【００６１】
本発明の方法は、ヨーロッパ薬局方５．４（２００６年４月刊行）の条件下でＨＰＬＣによって測定した場合に９７％よりも高い純度、好ましくは９８％よりも高く、さらにより好ましくは９９％よりもよりも高い純度を有し、かつメチレンブルー１ｇ当たりスズを０．５μｇ／ｇ未満含む、メチレンブルーまたは塩化テトラメチルチオニンを得るための唯一のものでもある。そのような生成物は、本発明の別の主題を構成する。
【００６２】
本発明の方法は、ヨーロッパ薬局方５．４（２００６年４月刊行）の条件下でＨＰＬＣによって測定した場合に９７％よりも高い純度、好ましくは９８％よりも高く、さらにより好ましくは９９％よりもよりも高い純度を有し、かつメチレンブルー１ｇ当たりクロムを０．９５μｇ／ｇ未満、有利には０．９０μｇ／ｇ未満、さらにより好ましくは０．８０μｇ／ｇ未満含む、メチレンブルーまたは塩化テトラメチルチオニンを得るための唯一のものでもある。
【００６３】
本発明の方法は、ヨーロッパ薬局方５．４（２００６年４月刊行）の条件下でＨＰＬＣによって測定した場合に不純物を３％未満、好ましくは２％未満、さらにより好ましくは１％未満含み、金属不純物のレベルが２０μｇ／ｇ未満、有利には１５μｇ／ｇ未満、さらにより有利には１０μｇ／ｇ未満である、メチレンブルーまたは塩化テトラメチルチオノンを工業的な量で得るための、唯一のものである。
【００６４】
本発明の別の主題は、メチレンブルーまたは塩化テトラメチルチオニンを除き、金属不純物全体のレベルが１００μｇ／ｇ未満、有利には５０μｇ／ｇ未満、特に３０μｇ／ｇ未満である、式（Ｉ）の化合物である。この化合物は、下記の要件の１つまたは複数を満たすことが好ましい：
−ヨーロッパ薬局方５．４（２００６年４月刊行）の条件下でＨＰＬＣによって測定した場合の純度が９７％よりも高く、好ましくは９８％よりも高く、さらにより好ましくは９９％よりも高く、
−アルミニウムのレベルが５μｇ／ｇ未満、有利には４μｇ／ｇ未満、さらにより有利には３μｇ／ｇ未満であり、
−カドミウムのレベルが０．１μｇ／ｇ未満、有利には０．０５μｇ／ｇ未満、さらにより有利には０．０２μｇ／ｇ未満であり、
−スズのレベルが０．５μｇ／ｇ未満、有利には０．４μｇ／ｇ未満、さらにより有利には０．３μｇ／ｇ未満である。
【００６５】
メチレンブルーは、様々な感染症の治療において、何十年もの間使用されている。これは、防腐剤、抗感染症薬として、解毒剤として、また診断薬として使用される。最近、その抗ウイルス活性が実証され、感染などの病的状態、特に敗血性ショック、血液または血漿中の病原性汚染物の存在、過度の血行力学的反応、ＨＩＶ、西ナイルウイルス、またはＣ型肝炎ウイルスによる感染、アルツハイマー病、マラリア、乳癌、または躁鬱病に有効な薬剤の調製に使用することができる。
【００６６】
最後にメチレンブルーは、化粧品、または眼科で利用するための製品に、使用することもできる。
【００６７】
これらの治療的用途の全てにおいて、また特にアルツハイマー病の予防および治療という意味において、高い純度を有しかつ特に金属不純物をほとんど含まないメチレンブルーを有することが必要である。
【００６８】
薬学的に許容される担体内で、本発明のメチレンブルーを含む薬剤は、本発明の別の主題を構成する。
【００６９】
担体と、投与されるメチレンブルーの量は、当業者に周知である。
【００７０】
本発明の別の主題は、上述の少なくとも１つのプロセスステップ、特に、式（Ｉ）の化合物を精製するためのステップおよび／または（Ｉ）が得られるように化合物（ＩＩ）の脱保護を行うためのステップを含むことを特徴とする、式（Ｉ）の化合物を含む薬剤を調製するための方法である。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】メチレンブルーの合成スキーム
【発明を実施するための形態】
【００７２】
実験の項
市販のメチレンブルーを、図１のプロセスに従って精製する。
【００７３】
１ − ベンゾイルロイコメチレンブルーの合成（ステップＡ）
下記の物質を、窒素下に、スターラを備えた１２０Ｌのジャケット付き反応器内に導入する：
−蒸留水８０Ｌ、
−大量の金属不純物（Ａｌ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｃｒ）を含む、照会番号ＣＩ５２０１５としてＬｅａｎｃａｒｅ Ｌｔｄ社から販売されているメチレンブルー４．２ｋｇ（１０．７モル）。
【００７４】
混合物を１５分間撹拌したままにし、次いで８５％のハイドロスルファイトナトリウムＮａ２Ｓ２Ｏ４の水溶液６．９ｋｇを添加する。色がブルーからベージュに変化する。混合物をさらに４５分間撹拌したままにし、次いでペレットの形をした水酸化ナトリウム２．６９ｋｇを添加する。反応温度を１８から２０℃の間に維持する。添加の所要時間は３０分であり、得られた混合物を、さらに３０分間撹拌したままにする。塩化ベンゾイル７．９０Ｌを、引き続き滴下する。反応混合物は、緑−ベージュ色に変化する。添加の所要時間は２時間であり、次いで得られた混合物を、２０時間撹拌したままにする。
【００７５】
処理：
撹拌を停止させた後、混合物を１５分間沈殿させることによって分離し、上澄みを引き上げる。水８０ｌ（２５体積）を添加し、撹拌および沈殿による分離の後、上澄みを再び引き上げる。ＥｔＯＨ２４Ｌを添加し、約５分間撹拌した後、水１６Ｌを添加する。１５分間撹拌した後、混合物を受け器に通して濾過する。この操作を３回繰り返す。乾燥後、ベンゾイルロイコメチレンブルー２．９ｋｇ（収率：６６％）が得られる。
【００７６】
２ − 精製
ＣＨ２Ｃｌ２３０Ｌに可溶化した、第１のステップから得られたベンゾイルロイコメチレンブルー４．２５ｋｇを使用する。溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２３０Ｌで濯ぎを行いながら、シリカ（Ｍｅｒｃｋ Ｇｅｒｕｄａｎ Ｓｉ６０）（１１．５ｋｇ）３部およびＦｏｎｔａｉｎｅｂｌｅａｕの砂０．５ｋｇに通して濾過する。ＣＨ２Ｃｌ２は、真空蒸発させることによって除去する。エタノール６Ｌを添加する。混合物を冷気中で撹拌したままにし、次いで受け器に通して濾過する。得られた生成物を真空乾燥する。精製したベンゾイルロイコメチレンブルー３．４ｋｇが得られる（収率：８０％）。
純度：＋９９％ＨＰＬＣ
金属：金属の含量（単位：μｇ／ｇ）を、３つの試験に関して表１に示す。
【００７７】
【表１】
【００７８】
３ − 脱ベンゾイル化
下記の物質：
−アセトニトリル（ＡＣＮ）４５Ｌ、
−第２のステップから得られたベンゾイルロイコメチレンブルー１．６ｋｇを、周囲温度で１００Ｌのジャケット付きエナメル加工反応器内に導入し、撹拌する。混合物を、周囲温度で３０分間撹拌し、次いで温度を−１８℃まで下げる。ＡＣＮ４Ｌ中に可溶化したＤＤＱ９５０ｇを、一度に添加する。混合物を、−１８℃で２時間撹拌したままにする。濾過を行う。３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジンとＤＤＱとの複合体が得られ、これを後続のステップで直接使用する。
【００７９】
４ − 塩化
第３のステップから得られたケークを、いくつかの小片に分けて、ジャケット付きエナメル加工反応器内に再導入する。ＥｔＯＡｃ ４Ｌを添加する。混合物を周囲温度で３０分間撹拌したままにし、温度を−１８℃まで下げる。ＥｔＯＡｃ １６ＬにＨＣｌ ２．５ｋｇを溶かしたもの（４Ｎ溶液）を添加する。混合物を、−１８℃で２時間撹拌する。混合物を濾過し、次いでケークを反応器内に再導入する。ＥｔＯＡｃ ３０Ｌを−１８℃で添加し、混合物を再び濾過する。
【００８０】
５ − 中和
アセトン３０Ｌを添加し、その後、水５００ｍｌ中にＮａＯＨ２００ｇを可溶化した溶液を添加する。混合物を濾過する。第４のステップから得られた生成物を、アセトン３０Ｌと共に反応器内に導入する。媒体を、周囲温度で１時間撹拌する。ｐＨは４．０である。媒体を濾過する。これを受け器上で、真空中に放置する。
【００８１】
６ − 精製および水和
第５のステップからの生成物１．９ｋｇ、およびＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨが５０／５０の混合物３０Ｌを、周囲温度のＮ２下で、４０Ｌのエナメル加工した反応器内に導入する。得られた混合物を還流する（４３℃）。これを、マイクロファイバーフィルター（Ｗｈａｔｍａｎ ＧＦ／Ｄ）で、高温条件下で濾過する。この操作を２回実施する。反応器を、脱塩水で清浄化する。濾液を反応器内に再導入する。溶媒２４リットルを、２８℃で真空蒸留する（３時間）。媒体を反応器内に戻す。精密濾過した水１Ｌを添加する。混合物を−１８℃まで冷却する。ＥｔＯＡｃ ４０Ｌを添加し、得られた混合物を、冷気中で一晩撹拌したままにする。これを濾過する。ＥｔＯＡｃ １０Ｌを用いてペーストに作製する。三水和物の形をとる、精製されたメチレンブルー１．４ｋｇが得られる。
【００８２】
金属不純物を分析し、表２に報告する。
【００８３】
【表２】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、ジアミノフェノチアジニウム型の化合物を調製するための新規な方法であり、特に、これらの化合物を精製するための方法である。詳細にはメチレンブルーに関し、またその主題は、この方法から得られる生成物、即ちその純度が従来技術で知られているものより高い生成物でもある。本発明の主題は、薬剤を調製するための、これらの化合物の使用でもある。
【背景技術】
【０００２】
メチレンブルーまたは３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジン−５−イリウムクロライドとしても知られている塩化メチルチオニニウムは、下式に相当する有機化合物である。
【０００３】
【化１】
【０００４】
この化合物は、長い間、酸化還元指示薬および染料として、生物物理学的な系における光学的顕色剤として、分離材としてのナノポーラス材料において、また、フォトエレクトロクロミックイメージングにおいて、使用されてきた。また、防腐剤、抗感染剤として、解毒剤として、および診断薬としての、その使用も知られている。特に、婦人科学、新生児学、癌腫学、腫瘍学、泌尿器学、眼科学、および胃腸病学での用途が見出されている。治療分野での新しい用途は、血液中の病原性汚染物の低減（ＧＢ２３７３７８７）や、過度の血行力学的反応の予防または阻害など、開発の途中である（ＷＯ０３／０８２２９６）。
【０００５】
この化合物に関する多くの合成方法について、最も古くは１８７７年以来記述されてきた（独国特許第１８８６号）。これらの方法全ては、一般に、少なくとも１つの合成段階で金属化合物を使用するという事実を有している。
【０００６】
特許ＤＥ−１８８６は、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，４−ジアミノベンゼンの酸化カップリングをＨ２ＳおよびＦｅＣｌ３により実施する方法について記述している。
【０００７】
Ｆｉｅｚ Ｄａｖｉｄ他、「Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｏｆ Ｄｙｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、１９４９、Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、３０８〜３１４は、二酸化マンガンまたは硫酸銅で処理することによってチアジン環を形成する方法について述べている。この方法は、塩化亜鉛、二クロム酸ナトリウム、およびチオ硫酸アルミニウムによる処理も含む。
【０００８】
文献ＷＯ２００５／０５４２１７は、メチレンブルー誘導体、およびその調製方法について述べている。これらの化合物を調製するための方法は、出発生成物としてフェノチアジンを使用する。現在、フェノチアジンを調製するための既知の方法は全て、金属原子が合成の終わりにフェノチアジンをキレート化する金属反応体を必要とする。したがって、この方法を用いて得られた生成物は、アズールＢなどの通常の有機汚染物質に加え、金属基によって必然的に汚染される。
【０００９】
文献ＷＯ２００６／０３２８７９は、鉄による還元ステップ、二クロム酸ナトリウムによる酸化ステップ、および硫酸銅による酸化ステップを含む、メチレンブルーを調製するための方法について述べている。
【００１０】
これらの方法は、不純物、特にメチレンブルーの金属不純物を減少させるために、退屈で費用のかかる精製を実施する必要がある。後続の精製ステップにも関わらず、これらの様々なプロセスは、多くの金属不純物、および有機不純物、特にアズールＢ、アズールＣ、およびアズールＡも含むメチレンブルーを必然的に生成する。
【００１１】
文献ＷＯ２００６／０３２８７９は、ヨーロッパ薬局方によって確定された最大閾値の１０％という金属不純物のレベルを達成することが可能であると主張しているが、実施例によれば、このレベルは全ての金属に関して同時に得られないこと、および精製ステップの結果は必ずしも再現可能とは限らないことに留意されたい。様々な市販のメチレンブルーの金属含量の詳細な分析が、この文献には例示されている。
【００１２】
メチレンブルーを製造できる、ましてや工業的な量で以前の要求に適合する品質のメチレンブルーを製造できるメチレンブルーの製造業者がいなかったので、ヨーロッパ薬局方により最近（２００６年４月）、金属不純物の許容閾値の増加に関して改正がなされた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】ＧＢ２３７３７８７
【特許文献２】ＷＯ０３／０８２２９６
【特許文献３】独国特許第１８８６号
【特許文献４】ＷＯ２００５／０５４２１７
【特許文献５】ＷＯ２００６／０３２８７９
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｆｉｅｚ Ｄａｖｉｄ他、「Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｏｆ Ｄｙｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、１９４９、Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、３０８〜３１４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
したがって、本発明の第１の主題は、非常に純度の高いメチレンブルーとの接触をもたらし、特に非常に低いレベルの金属および有機不純物を含み、満足のいく経済条件下で工業的規模にまで外挿により推定することができ、さらに、品質のばらつきに影響を受けない、メチレンブルーの調製方法の開発であった。ある変形例によれば、本発明の方法は、メチレンブルーを精製するための方法である。
【００１６】
開発された方法は、メチレンブルーに適用されるだけではなく、ジアミノフェノチアジニウム型のその他の誘導体にも適用される。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明の方法は、下式（Ｉ）に相当する化合物を調製するための方法である
【００１８】
【化２】
【００１９】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、互いに独立に、
−水素原子、
−ハロゲン原子およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルオキシカルボニル、または−ＣＯＮＨ２官能基から選択された１個または複数の官能基で必要に応じて置換された、飽和または不飽和の直鎖状、分枝状、または環状Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルオキシカルボニル、または−ＣＯＮＨ２官能基から選択された、１個または複数の官能基で必要に応じて置換されたアリール基
からなる群から選択することができ、
図１（Ｉ）中に続けて配置された２個のＲｉ基（ｉ＝１、２、．．．、１０）は、環が形成されるように一緒になってもよいことが理解され、例えばＲ１とＲ５、またはＲ５とＲ６、Ｒ７とＲ８、Ｒ８とＲ３、Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ９、Ｒ１０とＲ２、またはＲ２とＲ１は、第４の環が形成されるように必要に応じて置換された単一のアルキル鎖からなるものでよく、
さらに、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、互いに独立に、ハロゲン原子：Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩから選択することができ、
Ｘ−は、有機または無機陰イオンを表す）。
【００２０】
例えば、使用することができる陰イオンには、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、または硝酸などの無機酸の陰イオン；例えば酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、または安息香酸などの有機酸の陰イオンが含まれ、これらにはＯＨ−も含まれる。
【００２１】
この方法は、式（ＩＩ）の化合物からの金属化合物の分離を可能にする条件下で、式（ＩＩ）の化合物が精製ステップに供される、少なくとも１つのステップを含むことを特徴とする
【００２２】
【化３】
【００２３】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０基は、式（Ｉ）の場合と同じ定義を有し、Ｒは、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびニトロ基から選択された１個または複数の官能基で必要に応じて置換された、フェニルまたはベンジル基、
−直鎖状、分枝状、または環状Ｃ１〜Ｃ８アルキル基、
−Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ基、
−Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ基、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびニトロ基から選択された１個または複数の官能基で、芳香核上で必要に応じて置換された、フェニルオキシまたはベンジルオキシ基
から選択された基を表し、
Ｚは、ＯおよびＳから選択された原子を表す）。
【００２４】
式（ＩＩ）の化合物の精製は、式（ＩＩ）の化合物からの金属化合物の分離、即ち、金属化合物を保持することが可能な担体を通した濾過、適切な溶媒からの結晶化、または当業者に知られている任意のその他の方法を可能にする条件下で実施される。
【００２５】
精製が、金属化合物を保持することが可能な担体を通した濾過によって実施される場合、そのような担体は、シリカゲル、アルミナゲル（中性、塩基性、または酸性）、必要に応じて変性させた珪藻土、セライト、微多孔膜、チオールやカルボン酸、第三級アミン官能基などの金属捕捉基によりグラフト化された樹脂および金属捕捉基によりグラフト化された繊維、または金属を保持する性質を有する任意のその他の担体から選択することができる。グラフト化繊維の中では、特に、Ｓｍｏｐｅｘ（登録商標）という商標でＪｏｈｎｓｏｎ Ｍａｔｔｈｅｙ社から販売されている製品を挙げることができる。珪藻土の中では、Ｃｌａｒｃｅｌ（登録商標）という商標でＣＥＣＡ社から販売されている製品を挙げることができる。
【００２６】
式（ＩＩ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物から開始して、式（Ｉ）の化合物を還元することによって、次いで必要に応じて、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）型の活性化剤の存在下、フェノチアジニウム環のアミン官能基と適切な保護基Ｒ−ＣＺ−Ｙ（式中、ＲおよびＺは上記にて定義されたものと同じ定義を有し、Ｙは、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、またはＢｒなどのハロゲン基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、−ＯＣＯＲ（無水物）基、およびヒドロキシル基から選択された脱離基を表す。）とを反応させることによって得ることができる。Ｒは、フェニル基およびトルイル基から選択することが有利である。
【００２７】
式（ＩＩ）の化合物が式（Ｉ）の化合物から開始して得られる場合、その全体的なプロセスは、式（Ｉ）の化合物の精製である。しかし、式（ＩＩ）の化合物は、出発生成物として生成物（Ｉ）を使用しないその他の方法を用いて、得ることができる。
【００２８】
ベンゾイルロイコメチレンブルーなど、式（ＩＩ）のいくつかの化合物は、市販されている。
【００２９】
式（Ｉ）によって表される化合物は、いくつかの等価な共鳴構造によって表すことができる。非限定的な例示として、式（Ｉ）の場合と等価なその他の構造を以下に示す。
【００３０】
【化４】
【００３１】
式（Ｉ）および式（ＩＩ）では、同一でも異なっていてもよいＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、好ましくは水素原子およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択される。Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、Ｈを表すことが有利である。
【００３２】
下記の要件：
−ＸがＣｌまたはＯＨを表すこと、
−同一でも異なっていてもよいＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、水素原子およびメチルから選択されること、
−Ｒ６が水素原子を表すこと、
−Ｒ７が水素原子を表すこと、
−ＺがＯを表すこと
の１つまたは複数を満たすことがより有利である。
【００３３】
式（Ｉ）の化合物は、塩化テトラメチルチオニンまたはメチレンブルーであることが有利である。
【００３４】
別の変形例によれば、式（Ｉ）の化合物は、塩化ジメチルチオニンもしくはアズールＡ、または塩化トリメチルチオニンもしくはアズールＢ、または塩化モノメチルチオニンもしくはアズールＣである。
【００３５】
本発明によれば、式（Ｉ）の化合物を調製するための方法は、式（ＩＩ）の化合物を精製するための少なくとも１つのステップを含み；特にこの精製は、シリカゲルやアルミナゲル（中性、塩基性、または酸性）、必要に応じて変性させた珪藻土、金属捕捉剤により官能化された樹脂、金属捕捉剤により官能化された繊維、セライト、微多孔膜、または金属化合物を保持することが可能な任意のその他の担体など、金属化合物を保持することが可能な担体を通して式（ＩＩ）の化合物を濾過するための、少なくとも１つのステップを含む。
【００３６】
さらに詳細に、この変形例によれば、式（ＩＩ）の化合物は適切な溶媒に可溶化され、フィルターは、ガラスカラムや焼結ガラスフィルター、工業用スピンドライヤーなど、適切な受け器に濾過担体を導入して調製される。選択された濾過担体が充填された受け器には、好ましくは式（ＩＩ）の化合物が溶解するものと同じ溶媒によって、湿り気が与えられる。
【００３７】
式（ＩＩ）の化合物を含有する溶液はフィルター上に堆積し、フィルターを通った溶液は回収され、このフィルターは、式（ＩＩ）の化合物を可溶化するのに役立てたものと同一でも異なっていてもよい溶媒で数回濯ぐ。溶出した画分を回収し、必要に応じて濃縮する。
【００３８】
式（ＩＩ）の化合物を可溶化するのに使用することができる溶媒の中で、好ましくは、塩素化溶媒、例えばジクロロメタンもしくはクロロホルム、イソプロパノールやエタノール、メタノールなどのアルコール、またはアセトニトリル、酢酸エチル、もしくはテトラヒドロフラン、またはこれらの溶媒の混合物を挙げることができる。
【００３９】
式（Ｉ）の化合物の溶液は、１ｇ／ｌから１０３ｇ／ｌに及ぶ濃度のものが有利である。より低い濃度では、体積が大きすぎる溶媒を使用することになり、その結果、安全性および材料のサイズに関する問題が生ずる。より高い濃度は、生成物の溶解度から想定することが難しい。
【００４０】
濾過される生成物１ｋｇ当たり、濾過支持体を約０．１から１０ｋｇ使用することが考えられる。式（ＩＩ）の生成物が完全に溶出するまで、式（ＩＩ）の生成物１ｋｇ当たり０．１から５０Ｌの溶媒で、フィルターを濯ぐことを考えることが有利である。本発明の方法には、式（ＩＩ）の生成物からその金属不純物を除去するという利点がある。
【００４１】
結晶化によって式（ＩＩ）の化合物を精製するのに選択される場合、溶媒は、エタノールなどのアルコール、および塩化メチレンなどの塩素化溶媒から選択することが有利である。
【００４２】
式（ＩＩ）の化合物は、必要に応じてジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）型の活性化剤の存在下、保護基Ｒ−ＣＺ−Ｙ（式中、ＹはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、−ＯＣＯＲ（無水物）基、およびヒドロキシル基から有利に選択される。）と反応する式（Ｉ）の化合物から開始して生成することが有利である。
【００４３】
反応は、水中、または水と別の溶媒、例えばアセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、または任意のその他の適切な有機溶媒との混合物中の、塩基性または中性の媒体中で、従来通り実施される。
【００４４】
反応は発熱性であり、混合物の温度を周囲温度程度に維持することを可能にする冷却手段が、好ましく使用される。
【００４５】
出発生成物（Ｉ）は、市販されており、またはＷＯ２００６／０３２８７９に記載されているような知られている方法によって調製される。
【００４６】
一般に、式（Ｉ）の生成物は、生成物（Ｉ）中に不純物として見出される金属誘導体の使用を必要とする、合成方法を用いて調製される。これは、メチレンブルーの場合に言えることであるが、アズールＡ、アズールＢおよびアズールＣの場合にも言える。
【００４７】
式（Ｉ）の化合物は、その金属および有機不純物を、直接、簡単に、かつ効率的に除去することができない。従来技術の方法は、収量が不十分で、残留不純物のレベルを制御することが難しい生成物が得られる、連続的な再結晶を必要とする。
【００４８】
さらに、式（Ｉ）の生成物がキレート金属の性質を有するのに対し、生成物（ＩＩ）はキレート化されていない。したがって、その精製は、式（Ｉ）の化合物の直接的な精製よりも非常に効率的である。
【００４９】
本発明の方法の様々なステップでは、いかなる外部汚染も導入されないように、非金属材料と、金属基を含まない反応体および溶媒とを使用するのに注意が払われる。
【００５０】
式（ＩＩ）の生成物が、本発明の方法により精製された後、特に濾過にかけられた後、式（ＩＩ）の化合物のフェノチアジン環のアミンを脱保護するステップが、有利に実施される。この脱保護は、金属汚染物質の導入を回避しながらかつ式（Ｉ）の化合物の分解を防止する条件下で、当業者に知られている任意の手段によって実施される。Ｒ−ＣＺ−基の脱保護に使用することができる手段の中で、キノン、例えば２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、ＨＮＯ３、ＨＣｌＯ４、Ｉ２、ＨＣｌ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ２Ｏ２および紫外線による処理を挙げることができる。キノンがこのステップには好ましく使用され、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンが非常に好ましい。この脱保護反応は、酢酸エチル、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、およびアセトンから選択された溶媒中で実施されることが有利である。このステップに好ましい溶媒は、アセトニトリルである。
【００５１】
有利な脱保護条件は、化合物（ＩＩ）に対して０．８０から１．１モル当量のＤＤＱの使用に備え、さらにより有利には、化合物（ＩＩ）に対して０．８５から１．０５モル当量のＤＤＱであり、有利には０．９０から１モル当量である。この脱保護は、−４０℃から−５℃の間の温度で実施されることが好ましい。完全に除外するものではないが、より低い温度では反応時間が長くなるという欠点がもたらされる可能性があり、より高い温度では副生成物の形成をもたらす可能性がある。
【００５２】
所望のＸ−陰イオンを含む式（Ｉ）の化合物を得るために、使用される手段に応じて、イオン交換を実施することが必要と考えられる。好ましくはこのイオン交換は、有利には酢酸エチル中で、ＨＣｌにより処理することによって実施される。その他の溶媒を使用してもよいが、副生成物の形成をもたらす可能性のあるものがある。
【００５３】
上記にて開示された式（ＩＩ）の化合物の脱保護に関する条件は、このステップ中に金属不純物を導入することなくまたは有機不純物を形成することなく、式（Ｉ）の化合物の実現を可能にするので、特に有利である。本発明の１つの変形例によれば、金属を保持することが可能な担体での濾過以外の手段、例えば適切な溶媒からの結晶化によって、式（ＩＩ）の化合物を精製することを考えることができる。この変形例によれば、式（ＩＩ）の化合物は、金属化合物の使用を含まない任意の脱保護手段を使用して、特にキノンを使用して、特にＤＤＱを使用して、好ましくは上記にて開示された条件下で引き続き脱保護化される。
【００５４】
したがって本発明の別の主題は、金属化合物の使用を含まない脱保護手段を使用して、式（ＩＩ）の化合物のフェノチアジン環のアミンのＲ−ＣＺ−基を脱保護するための、少なくとも１つのステップを含むことを特徴とする、上述の式（Ｉ）に相当する化合物を調製するための方法である。
【００５５】
「金属化合物の使用を含まない脱保護手段」という表現は、いかなる金属部品も含まない反応器、例えばエナメル加工された反応器内での、非金属反応体、および金属基を含まない（＜０．０１ｐｐｍ）溶媒の使用を意味するものとする。
【００５６】
Ｒ−ＣＺ−基を脱保護するために使用することができる手段の中で、キノン、例えば２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、ＨＮＯ３、ＨＣｌＯ４、Ｉ２、ＨＣｌ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ２Ｏ２および紫外線による処理を挙げることができる。キノンがこのステップでは好ましく使用され、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンが非常に好ましい。上述のＤＤＱを使用するための条件を用いることが、有利である。
【００５７】
化合物（Ｉ）が得られるような、化合物（ＩＩ）の脱保護のための方法は、生成物（ＩＩ）に比べていかなる追加の金属不純物も含まない化合物（Ｉ）を実現することを可能にする。さらに、これらの脱保護条件は、有機分解生成物の形成を防止する。実際に、式（Ｉ）の化合物は限られた安定性を有し、ある処理条件の使用の結果、例えばメチレンブルーから、後に分離することが困難になるアズールＡ、ＢおよびＣへの分解が生じる。
【００５８】
本発明の方法は、工業規模で、信頼性があり、再現性があり、かつ利用可能な手法により、金属汚染物質を含まずかつ高い化学的純度を有する式（Ｉ）の化合物を利用することを可能にする。これらの品質は、薬学的品質を有する式（Ｉ）の生成物を提供することができるようにするのに不可欠である。
【００５９】
特に、本発明の調製または精製方法は、メチレンブルー１ｇ当たりカドミウムを０．０２μｇ／以下含むメチレンブルーまたは塩化テトラメチルチオニンを、工業的な量でかつ再現可能に得ることを可能にする唯一のものである。そのような生成物は、本発明の別の主題を構成する。
【００６０】
本発明の別の主題は、ヨーロッパ薬局方５．４（２００６年４月刊行）の条件下でＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィ）によって測定した場合に９７％よりも高い純度、好ましくは９８％よりも高く、さらにより好ましくは９９％よりも高い純度を有し、かつメチレンブルー１ｇ当たりアルミニウムを４．５μｇ／ｇ未満、有利にはアルミニウムを３μｇ／ｇ未満、さらにより有利にはアルミニウムを２．５μｇ／ｇ未満含む、メチレンブルーまたは塩化テトラメチルチオニンである。
【００６１】
本発明の方法は、ヨーロッパ薬局方５．４（２００６年４月刊行）の条件下でＨＰＬＣによって測定した場合に９７％よりも高い純度、好ましくは９８％よりも高く、さらにより好ましくは９９％よりもよりも高い純度を有し、かつメチレンブルー１ｇ当たりスズを０．５μｇ／ｇ未満含む、メチレンブルーまたは塩化テトラメチルチオニンを得るための唯一のものでもある。そのような生成物は、本発明の別の主題を構成する。
【００６２】
本発明の方法は、ヨーロッパ薬局方５．４（２００６年４月刊行）の条件下でＨＰＬＣによって測定した場合に９７％よりも高い純度、好ましくは９８％よりも高く、さらにより好ましくは９９％よりもよりも高い純度を有し、かつメチレンブルー１ｇ当たりクロムを０．９５μｇ／ｇ未満、有利には０．９０μｇ／ｇ未満、さらにより好ましくは０．８０μｇ／ｇ未満含む、メチレンブルーまたは塩化テトラメチルチオニンを得るための唯一のものでもある。
【００６３】
本発明の方法は、ヨーロッパ薬局方５．４（２００６年４月刊行）の条件下でＨＰＬＣによって測定した場合に不純物を３％未満、好ましくは２％未満、さらにより好ましくは１％未満含み、金属不純物のレベルが２０μｇ／ｇ未満、有利には１５μｇ／ｇ未満、さらにより有利には１０μｇ／ｇ未満である、メチレンブルーまたは塩化テトラメチルチオノンを工業的な量で得るための、唯一のものである。
【００６４】
本発明の別の主題は、メチレンブルーまたは塩化テトラメチルチオニンを除き、金属不純物全体のレベルが１００μｇ／ｇ未満、有利には５０μｇ／ｇ未満、特に３０μｇ／ｇ未満である、式（Ｉ）の化合物である。この化合物は、下記の要件の１つまたは複数を満たすことが好ましい：
−ヨーロッパ薬局方５．４（２００６年４月刊行）の条件下でＨＰＬＣによって測定した場合の純度が９７％よりも高く、好ましくは９８％よりも高く、さらにより好ましくは９９％よりも高く、
−アルミニウムのレベルが５μｇ／ｇ未満、有利には４μｇ／ｇ未満、さらにより有利には３μｇ／ｇ未満であり、
−カドミウムのレベルが０．１μｇ／ｇ未満、有利には０．０５μｇ／ｇ未満、さらにより有利には０．０２μｇ／ｇ未満であり、
−スズのレベルが０．５μｇ／ｇ未満、有利には０．４μｇ／ｇ未満、さらにより有利には０．３μｇ／ｇ未満である。
【００６５】
メチレンブルーは、様々な感染症の治療において、何十年もの間使用されている。これは、防腐剤、抗感染症薬として、解毒剤として、また診断薬として使用される。最近、その抗ウイルス活性が実証され、感染などの病的状態、特に敗血性ショック、血液または血漿中の病原性汚染物の存在、過度の血行力学的反応、ＨＩＶ、西ナイルウイルス、またはＣ型肝炎ウイルスによる感染、アルツハイマー病、マラリア、乳癌、または躁鬱病に有効な薬剤の調製に使用することができる。
【００６６】
最後にメチレンブルーは、化粧品、または眼科で利用するための製品に、使用することもできる。
【００６７】
これらの治療的用途の全てにおいて、また特にアルツハイマー病の予防および治療という意味において、高い純度を有しかつ特に金属不純物をほとんど含まないメチレンブルーを有することが必要である。
【００６８】
薬学的に許容される担体内で、本発明のメチレンブルーを含む薬剤は、本発明の別の主題を構成する。
【００６９】
担体と、投与されるメチレンブルーの量は、当業者に周知である。
【００７０】
本発明の別の主題は、上述の少なくとも１つのプロセスステップ、特に、式（Ｉ）の化合物を精製するためのステップおよび／または（Ｉ）が得られるように化合物（ＩＩ）の脱保護を行うためのステップを含むことを特徴とする、式（Ｉ）の化合物を含む薬剤を調製するための方法である。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】メチレンブルーの合成スキーム
【発明を実施するための形態】
【００７２】
実験の項
市販のメチレンブルーを、図１のプロセスに従って精製する。
【００７３】
１ − ベンゾイルロイコメチレンブルーの合成（ステップＡ）
下記の物質を、窒素下に、スターラを備えた１２０Ｌのジャケット付き反応器内に導入する：
−蒸留水８０Ｌ、
−大量の金属不純物（Ａｌ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｃｒ）を含む、照会番号ＣＩ５２０１５としてＬｅａｎｃａｒｅ Ｌｔｄ社から販売されているメチレンブルー４．２ｋｇ（１０．７モル）。
【００７４】
混合物を１５分間撹拌したままにし、次いで８５％のハイドロスルファイトナトリウムＮａ２Ｓ２Ｏ４の水溶液６．９ｋｇを添加する。色がブルーからベージュに変化する。混合物をさらに４５分間撹拌したままにし、次いでペレットの形をした水酸化ナトリウム２．６９ｋｇを添加する。反応温度を１８から２０℃の間に維持する。添加の所要時間は３０分であり、得られた混合物を、さらに３０分間撹拌したままにする。塩化ベンゾイル７．９０Ｌを、引き続き滴下する。反応混合物は、緑−ベージュ色に変化する。添加の所要時間は２時間であり、次いで得られた混合物を、２０時間撹拌したままにする。
【００７５】
処理：
撹拌を停止させた後、混合物を１５分間沈殿させることによって分離し、上澄みを引き上げる。水８０ｌ（２５体積）を添加し、撹拌および沈殿による分離の後、上澄みを再び引き上げる。ＥｔＯＨ２４Ｌを添加し、約５分間撹拌した後、水１６Ｌを添加する。１５分間撹拌した後、混合物を受け器に通して濾過する。この操作を３回繰り返す。乾燥後、ベンゾイルロイコメチレンブルー２．９ｋｇ（収率：６６％）が得られる。
【００７６】
２ − 精製
ＣＨ２Ｃｌ２３０Ｌに可溶化した、第１のステップから得られたベンゾイルロイコメチレンブルー４．２５ｋｇを使用する。溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２３０Ｌで濯ぎを行いながら、シリカ（Ｍｅｒｃｋ Ｇｅｒｕｄａｎ Ｓｉ６０）（１１．５ｋｇ）３部およびＦｏｎｔａｉｎｅｂｌｅａｕの砂０．５ｋｇに通して濾過する。ＣＨ２Ｃｌ２は、真空蒸発させることによって除去する。エタノール６Ｌを添加する。混合物を冷気中で撹拌したままにし、次いで受け器に通して濾過する。得られた生成物を真空乾燥する。精製したベンゾイルロイコメチレンブルー３．４ｋｇが得られる（収率：８０％）。
純度：＋９９％ＨＰＬＣ
金属：金属の含量（単位：μｇ／ｇ）を、３つの試験に関して表１に示す。
【００７７】
【表１】
【００７８】
３ − 脱ベンゾイル化
下記の物質：
−アセトニトリル（ＡＣＮ）４５Ｌ、
−第２のステップから得られたベンゾイルロイコメチレンブルー１．６ｋｇを、周囲温度で１００Ｌのジャケット付きエナメル加工反応器内に導入し、撹拌する。混合物を、周囲温度で３０分間撹拌し、次いで温度を−１８℃まで下げる。ＡＣＮ４Ｌ中に可溶化したＤＤＱ９５０ｇを、一度に添加する。混合物を、−１８℃で２時間撹拌したままにする。濾過を行う。３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジンとＤＤＱとの複合体が得られ、これを後続のステップで直接使用する。
【００７９】
４ − 塩化
第３のステップから得られたケークを、いくつかの小片に分けて、ジャケット付きエナメル加工反応器内に再導入する。ＥｔＯＡｃ ４Ｌを添加する。混合物を周囲温度で３０分間撹拌したままにし、温度を−１８℃まで下げる。ＥｔＯＡｃ １６ＬにＨＣｌ ２．５ｋｇを溶かしたもの（４Ｎ溶液）を添加する。混合物を、−１８℃で２時間撹拌する。混合物を濾過し、次いでケークを反応器内に再導入する。ＥｔＯＡｃ ３０Ｌを−１８℃で添加し、混合物を再び濾過する。
【００８０】
５ − 中和
アセトン３０Ｌを添加し、その後、水５００ｍｌ中にＮａＯＨ２００ｇを可溶化した溶液を添加する。混合物を濾過する。第４のステップから得られた生成物を、アセトン３０Ｌと共に反応器内に導入する。媒体を、周囲温度で１時間撹拌する。ｐＨは４．０である。媒体を濾過する。これを受け器上で、真空中に放置する。
【００８１】
６ − 精製および水和
第５のステップからの生成物１．９ｋｇ、およびＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨが５０／５０の混合物３０Ｌを、周囲温度のＮ２下で、４０Ｌのエナメル加工した反応器内に導入する。得られた混合物を還流する（４３℃）。これを、マイクロファイバーフィルター（Ｗｈａｔｍａｎ ＧＦ／Ｄ）で、高温条件下で濾過する。この操作を２回実施する。反応器を、脱塩水で清浄化する。濾液を反応器内に再導入する。溶媒２４リットルを、２８℃で真空蒸留する（３時間）。媒体を反応器内に戻す。精密濾過した水１Ｌを添加する。混合物を−１８℃まで冷却する。ＥｔＯＡｃ ４０Ｌを添加し、得られた混合物を、冷気中で一晩撹拌したままにする。これを濾過する。ＥｔＯＡｃ １０Ｌを用いてペーストに作製する。三水和物の形をとる、精製されたメチレンブルー１．４ｋｇが得られる。
【００８２】
金属不純物を分析し、表２に報告する。
【００８３】
【表２】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式（Ｉ）に相当する化合物を調製するための方法であって
【化１】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、互いに独立に、
−水素原子、
−ハロゲン原子、およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、または−ＣＯＮＨ２官能基から選択された１個または複数の官能基で必要に応じて置換された、飽和または不飽和の直鎖状、分枝状、または環状Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルオキシカルボニル、または−ＣＯＮＨ２官能基から選択された、１個または複数の官能基で必要に応じて置換されたアリール基
からなる群から選択することができ、
さらに、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、互いに独立に、ハロゲン原子：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩから選択することができ、
Ｘ−は、有機または無機陰イオンを表す。）、
式（ＩＩ）の化合物からの金属化合物の分離を可能にする条件下で式（ＩＩ）の化合物が精製ステップに供される、少なくとも１つのステップを含むことを特徴とする方法
【化２】
（式中、Ｒは、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびニトロ基から選択された１個または複数の官能基で必要に応じて置換された、フェニルまたはベンジル基、
−直鎖状、分枝状、または環状Ｃ１〜Ｃ８アルキル基、
−Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ基、
−Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ基、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびニトロ基から選択された１個または複数の官能基で、芳香核上で必要に応じて置換された、フェニルオキシまたはベンジルオキシ基
から選択された基を表し、
Ｚは、ＯおよびＳから選択された原子を表す。）。
【請求項２】
同一でも異なっていてもよいＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が、水素原子およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
下記の要件、即ち：
−Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０はＨを表す、
−ＸはＣｌまたはＯＨを表す、
−同一でも異なっていてもよいＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、水素原子およびメチルから選択される、
−Ｒ６は水素原子を表す、
−Ｒ７は水素原子を表す、
−ＺはＯを表す
の１つまたは複数が満たされることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
式（Ｉ）の化合物が、塩化テトラメチルチオニンまたはメチレンブルーであることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
式（Ｉ）の化合物が、
塩化ジメチルチオニンまたはアズールＡ、
塩化トリメチルチオニンまたはアズールＢ、
塩化モノメチルチオニンまたはアズールＣ
から選択されることを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
精製ステップが、金属化合物の保持が可能な担体を通した少なくとも１回の濾過を含むことを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
濾過担体が、シリカゲル、中性、塩基性または酸性のアルミナゲル、必要に応じて変性させた珪藻土、セライト、微多孔膜、金属捕捉基でグラフト化された樹脂、および金属捕捉基でグラフト化された繊維から選択されることを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
濾過では、式（ＩＩ）の化合物が、ジクロロメタン、クロロホルムなどの塩素化溶媒、エタノール、イソプロパノール、メタノールなどのアルコール、アセトニトリル、酢酸エチル、もしくはテトラヒドロフラン、またはこれらの溶媒の混合物から選択された溶媒中に可溶化されることを特徴とする、請求項６および７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
式（ＩＩ）の化合物のフェノチアジン環のアミンを脱保護するためのステップも含むことを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンなどのキノン、ＨＮＯ３、ＨＣｌＯ４、Ｉ２、ＨＣｌ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ２Ｏ２、および紫外線による処理から選択された手段によって、脱保護が実施されることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
脱保護が、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンにより実施されることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ＨＣｌで処理することによる、イオン交換のためのステップも含むことを特徴とする、請求項９から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
下式（Ｉ）に相当する化合物を調製するための方法であって
【化３】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、互いに独立に、
−水素原子、
−ハロゲン原子、およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、または−ＣＯＮＨ２官能基から選択された１個または複数の官能基で必要に応じて置換された、飽和または不飽和の直鎖状、分枝状、または環状Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルオキシカルボニル、または−ＣＯＮＨ２官能基から選択された、１個または複数の官能基で必要に応じて置換されたアリール基
からなる群から選択することができ、
さらに、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、互いに独立に、ハロゲン原子：Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩから選択することができ、
Ｘ−は、有機または無機陰イオンを表す。）、
式（ＩＩ）の化合物が、金属化合物の使用を含まない脱保護手段を使用して環のアミンを脱保護するためのステップに供される、少なくとも１つのステップを含むことを特徴とする方法
【化４】
（式中、Ｒは、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびニトロ基から選択された１個または複数の官能基で必要に応じて置換された、フェニルまたはベンジル基、
−直鎖状、分枝状、または環状Ｃ１〜Ｃ８アルキル基、
−Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ基、
−Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ基、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびニトロ基から選択された１個または複数の官能基で、芳香核上で必要に応じて置換された、フェニルオキシまたはベンジルオキシ基
から選択された基を表し、
Ｚは、ＯおよびＳから選択された原子を表す。）。
【請求項１４】
脱保護手段が、キノン、ＨＮＯ３、ＨＣｌＯ４、Ｉ２、ＨＣｌ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ２Ｏ２、および紫外線による処理から選択されることを特徴とする、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
脱保護手段が２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）であることを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の、少なくとも１つのステップを含むことを特徴とする、請求項１によって定義された式（Ｉ）の化合物を含む薬剤を調製するための方法。
【請求項１７】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の、少なくとも１つのステップを含むことを特徴とする、メチレンブルーを含む薬剤を調製するための方法。
【請求項１８】
メチレンブルー１ｇ当たり、０．０２μｇ以下の量のカドミウムを含むことを特徴とする、メチレンブルー（３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジン−５−イリウムクロライド）。
【請求項１９】
９７％より高い純度を有し、アルミニウムを４．５μｇ／ｇ未満、有利にはアルミニウムを３μｇ／ｇ未満、さらにより有利にはアルミニウムを２．５μｇ／ｇ未満含む、メチレンブルー（３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジン−５−イリウムクロライド）。
【請求項２０】
９７％より高い純度を有し、スズを０．５μｇ／ｇ未満、有利にはスズを０．３μｇ／ｇ未満含む、メチレンブルー（３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジン−５−イリウムクロライド）。
【請求項２１】
メチレンブルー１ｇ当たり、０．９５μｇ以下の量のクロムを含むことを特徴とする、メチレンブルー（３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジン−５−イリウムクロライド）。
【請求項２２】
不純物を３％未満含み、金属不純物のレベルが２０μｇ／ｇ未満、有利には１５μｇ／ｇ未満、さらにより有利には１０μｇ／ｇ未満である、メチレンブルー（３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジン−５−イリウムクロライド）。
【請求項２３】
薬学的に許容される担体中に、請求項１８から２２のいずれか一項に記載のメチレンブルーを含む薬剤。
【請求項２４】
感染症、敗血性ショック、血液または血漿中の病原性汚染物の存在、過度の血行力学的反応、ＨＩＶ、西ナイルウイルスまたはＣ型肝炎ウイルスによる感染症、アルツハイマー病、マラリア、乳癌、および躁鬱病
から選択された病的状態を、予防または治療する薬剤を調製するための、請求項１８から２２のいずれか一項に記載のメチレンブルーの使用。
【請求項１】
下式（Ｉ）に相当する化合物を調製するための方法であって
【化１】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、互いに独立に、
−水素原子、
−ハロゲン原子、およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、または−ＣＯＮＨ２官能基から選択された１個または複数の官能基で必要に応じて置換された、飽和または不飽和の直鎖状、分枝状、または環状Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルオキシカルボニル、または−ＣＯＮＨ２官能基から選択された、１個または複数の官能基で必要に応じて置換されたアリール基
からなる群から選択することができ、
さらに、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、互いに独立に、ハロゲン原子：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩから選択することができ、
Ｘ−は、有機または無機陰イオンを表す。）、
式（ＩＩ）の化合物からの金属化合物の分離を可能にする条件下で式（ＩＩ）の化合物が精製ステップに供される、少なくとも１つのステップを含むことを特徴とする方法
【化２】
（式中、Ｒは、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびニトロ基から選択された１個または複数の官能基で必要に応じて置換された、フェニルまたはベンジル基、
−直鎖状、分枝状、または環状Ｃ１〜Ｃ８アルキル基、
−Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ基、
−Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ基、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびニトロ基から選択された１個または複数の官能基で、芳香核上で必要に応じて置換された、フェニルオキシまたはベンジルオキシ基
から選択された基を表し、
Ｚは、ＯおよびＳから選択された原子を表す。）。
【請求項２】
同一でも異なっていてもよいＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が、水素原子およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
下記の要件、即ち：
−Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０はＨを表す、
−ＸはＣｌまたはＯＨを表す、
−同一でも異なっていてもよいＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、水素原子およびメチルから選択される、
−Ｒ６は水素原子を表す、
−Ｒ７は水素原子を表す、
−ＺはＯを表す
の１つまたは複数が満たされることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
式（Ｉ）の化合物が、塩化テトラメチルチオニンまたはメチレンブルーであることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
式（Ｉ）の化合物が、
塩化ジメチルチオニンまたはアズールＡ、
塩化トリメチルチオニンまたはアズールＢ、
塩化モノメチルチオニンまたはアズールＣ
から選択されることを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
精製ステップが、金属化合物の保持が可能な担体を通した少なくとも１回の濾過を含むことを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
濾過担体が、シリカゲル、中性、塩基性または酸性のアルミナゲル、必要に応じて変性させた珪藻土、セライト、微多孔膜、金属捕捉基でグラフト化された樹脂、および金属捕捉基でグラフト化された繊維から選択されることを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
濾過では、式（ＩＩ）の化合物が、ジクロロメタン、クロロホルムなどの塩素化溶媒、エタノール、イソプロパノール、メタノールなどのアルコール、アセトニトリル、酢酸エチル、もしくはテトラヒドロフラン、またはこれらの溶媒の混合物から選択された溶媒中に可溶化されることを特徴とする、請求項６および７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
式（ＩＩ）の化合物のフェノチアジン環のアミンを脱保護するためのステップも含むことを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンなどのキノン、ＨＮＯ３、ＨＣｌＯ４、Ｉ２、ＨＣｌ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ２Ｏ２、および紫外線による処理から選択された手段によって、脱保護が実施されることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
脱保護が、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンにより実施されることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ＨＣｌで処理することによる、イオン交換のためのステップも含むことを特徴とする、請求項９から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
下式（Ｉ）に相当する化合物を調製するための方法であって
【化３】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、互いに独立に、
−水素原子、
−ハロゲン原子、およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、または−ＣＯＮＨ２官能基から選択された１個または複数の官能基で必要に応じて置換された、飽和または不飽和の直鎖状、分枝状、または環状Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルオキシカルボニル、または−ＣＯＮＨ２官能基から選択された、１個または複数の官能基で必要に応じて置換されたアリール基
からなる群から選択することができ、
さらに、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、互いに独立に、ハロゲン原子：Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩから選択することができ、
Ｘ−は、有機または無機陰イオンを表す。）、
式（ＩＩ）の化合物が、金属化合物の使用を含まない脱保護手段を使用して環のアミンを脱保護するためのステップに供される、少なくとも１つのステップを含むことを特徴とする方法
【化４】
（式中、Ｒは、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびニトロ基から選択された１個または複数の官能基で必要に応じて置換された、フェニルまたはベンジル基、
−直鎖状、分枝状、または環状Ｃ１〜Ｃ８アルキル基、
−Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ基、
−Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ基、
−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびニトロ基から選択された１個または複数の官能基で、芳香核上で必要に応じて置換された、フェニルオキシまたはベンジルオキシ基
から選択された基を表し、
Ｚは、ＯおよびＳから選択された原子を表す。）。
【請求項１４】
脱保護手段が、キノン、ＨＮＯ３、ＨＣｌＯ４、Ｉ２、ＨＣｌ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ２Ｏ２、および紫外線による処理から選択されることを特徴とする、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
脱保護手段が２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）であることを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の、少なくとも１つのステップを含むことを特徴とする、請求項１によって定義された式（Ｉ）の化合物を含む薬剤を調製するための方法。
【請求項１７】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の、少なくとも１つのステップを含むことを特徴とする、メチレンブルーを含む薬剤を調製するための方法。
【請求項１８】
メチレンブルー１ｇ当たり、０．０２μｇ以下の量のカドミウムを含むことを特徴とする、メチレンブルー（３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジン−５−イリウムクロライド）。
【請求項１９】
９７％より高い純度を有し、アルミニウムを４．５μｇ／ｇ未満、有利にはアルミニウムを３μｇ／ｇ未満、さらにより有利にはアルミニウムを２．５μｇ／ｇ未満含む、メチレンブルー（３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジン−５−イリウムクロライド）。
【請求項２０】
９７％より高い純度を有し、スズを０．５μｇ／ｇ未満、有利にはスズを０．３μｇ／ｇ未満含む、メチレンブルー（３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジン−５−イリウムクロライド）。
【請求項２１】
メチレンブルー１ｇ当たり、０．９５μｇ以下の量のクロムを含むことを特徴とする、メチレンブルー（３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジン−５−イリウムクロライド）。
【請求項２２】
不純物を３％未満含み、金属不純物のレベルが２０μｇ／ｇ未満、有利には１５μｇ／ｇ未満、さらにより有利には１０μｇ／ｇ未満である、メチレンブルー（３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジン−５−イリウムクロライド）。
【請求項２３】
薬学的に許容される担体中に、請求項１８から２２のいずれか一項に記載のメチレンブルーを含む薬剤。
【請求項２４】
感染症、敗血性ショック、血液または血漿中の病原性汚染物の存在、過度の血行力学的反応、ＨＩＶ、西ナイルウイルスまたはＣ型肝炎ウイルスによる感染症、アルツハイマー病、マラリア、乳癌、および躁鬱病
から選択された病的状態を、予防または治療する薬剤を調製するための、請求項１８から２２のいずれか一項に記載のメチレンブルーの使用。
【図１】
【公表番号】特表２００９−５４２７８１（Ｐ２００９−５４２７８１Ａ）
【公表日】平成２１年１２月３日（２００９．１２．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５１８９２８（Ｐ２００９−５１８９２８）
【出願日】平成１９年７月１２日（２００７．７．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００７／００１１９３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／００６９７９
【国際公開日】平成２０年１月１７日（２００８．１．１７）
【出願人】（５０９０１１３８５）プロヴァンス テクノロジーズ (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１２月３日（２００９．１２．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年７月１２日（２００７．７．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００７／００１１９３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／００６９７９
【国際公開日】平成２０年１月１７日（２００８．１．１７）
【出願人】（５０９０１１３８５）プロヴァンス テクノロジーズ (2)
【Ｆターム（参考）】
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