タバココナジラミのバイオタイプの判別方法
【課題】タバココナジラミにおけるバイオタイプＱの新規な判別方法等を提供する。
【解決手段】バイオタイプＱで特異的に高発現しているチトクロームＰ４５０またはその一部をコードする遺伝子を単離し、塩基配列を決定した。そして、当該遺伝子の発現量を測定することによって、バイオタイプＱの判別が可能であることを見出した。さらに、当該遺伝子のうちのいくつかは新規のポリヌクレオチドであること、および当該遺伝子がコードするタンパク質のうちのいくつかは新規のタンパク質である。特定の９遺伝子から選択される１つ以上の遺伝子の発現量を測定するタバココナジラミバイオタイプＱの判別方法。
【解決手段】バイオタイプＱで特異的に高発現しているチトクロームＰ４５０またはその一部をコードする遺伝子を単離し、塩基配列を決定した。そして、当該遺伝子の発現量を測定することによって、バイオタイプＱの判別が可能であることを見出した。さらに、当該遺伝子のうちのいくつかは新規のポリヌクレオチドであること、および当該遺伝子がコードするタンパク質のうちのいくつかは新規のタンパク質である。特定の９遺伝子から選択される１つ以上の遺伝子の発現量を測定するタバココナジラミバイオタイプＱの判別方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タバココナジラミのバイオタイプの判別方法、特にタバココナジラミにおけるバイオタイプＱの判別方法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
タバココナジラミ（Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ）は成虫の大きさが０．８ｍｍ程度の微小な害虫で、日本の施設園芸においては主にトマト、キュウリ、及びナス等の施設栽培の作物に寄生する。タバココナジラミの幼虫及び成虫は、作物に吸汁害を与えることの他に、成虫はトマト黄化葉巻病等のウイルス病を媒介することが知られている。タバココナジラミには、形態的には区別できないが、遺伝的、及び生物学的に異なる約４０種類のバイオタイプが存在する（例えば、非特許文献１を参照）。日本には在来のタバココナジラミが分布しているが、野外でサツマイモ等にわずかに寄生するだけで、作物栽培上それほど重要な害虫ではなかった。しかし、１９８９年頃に日本国外から薬剤の効きにくいタバココナジラミであるシルバーリーフコナジラミ（タバココナジラミバイオタイプＢ）が日本に侵入してきた。さらに、２００３年頃に、九州で、これまで知られていなかったバイオタイプのタバココナジラミの発生が観察された。これはタバココナジラミバイオタイプＢと遺伝的に異なり、日本国外では存在が知られていたバイオタイプＱであることが判明した（非特許文献２）。バイオタイプＱは、その後分布地域を拡大し、東北地方にまで分布するようになった。すなわち、日本では通常、バイオタイプＢ、およびバイオタイプＱの２種類のバイオタイプのタバココナジラミが存在しているが、バイオタイプＱはバイオタイプＢに比べて、従来汎用されている薬剤による防除が困難なため、作物栽培上、深刻な問題となっている（例えば、非特許文献２、３を参照）。
したがって、作物栽培施設に発生したタバココナジラミがバイオタイプＢであるかＱであるかを判別することは、防除対策を立てる上で極めて重要である。形態的にバイオタイプＢと区別できないタバココナジラミバイオタイプＱを判別する方法としては、これまで、ポリアクリルアミドゲル電気泳動による非特異的エステラーゼのバンドパターンによる方法、および特定の遺伝子における変異に基づく方法（非特許文献４）が提案されている。
しかしなお、タバココナジラミバイオタイプＱの新規な判別方法の開発が求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｐｅｒｒｉｎｇ，Ｃｒｏｐ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，２００１年，２０，ｐ．７２５−７３７
【０００４】
【非特許文献２】松浦，今月の農業，２００６年２月，ｐ．５７−６１
【０００５】
【非特許文献３】本多，植物防疫，２００５年，５９巻，ｐ．２９９−３０４
【０００６】
【非特許文献４】上田，九病虫研会報，２００６年，５２巻，ｐ．４４−４８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、タバココナジラミにおけるバイオタイプＱの新規な判別方法等を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記の課題に鑑み、鋭意検討した結果、バイオタイプＱで特異的に高発現しているチトクロームＰ４５０またはその一部をコードする遺伝子を単離し、塩基配列を決定した。そして、当該遺伝子の発現量を測定することによって、バイオタイプＱの判別が可能であることを見出し、本発明に到った。
さらに、当該遺伝子のうちのいくつかは新規のポリヌクレオチドであること、および当該遺伝子がコードするタンパク質のうちのいくつかは新規のタンパク質であることが判明した。
すなわち、本発明は、以下の［１］〜［６］に記載の発明等を提供するものである。
［１］
（Ａ）バイオタイプＱであるか否かの判別に供されるタバココナジラミから試料を得ること、
（Ｂ）以下の（１）〜（１１）の遺伝子から選択される１つ以上の遺伝子の発現量を測定すること、
（１）配列番号１で示される塩基配列を含む遺伝子
（２）配列番号２で示される塩基配列を含む遺伝子
（３）配列番号３で示される塩基配列を含む遺伝子
（４）配列番号４で示される塩基配列を含む遺伝子
（５）配列番号５で示される塩基配列を含む遺伝子
（６）配列番号６で示される塩基配列を含む遺伝子
（７）配列番号７で示される塩基配列を含む遺伝子
（８）配列番号８で示される塩基配列を含む遺伝子
（９）配列番号９で示される塩基配列を含む遺伝子
（１０）配列番号１０で示される塩基配列を含む遺伝子
（１１）配列番号１１で示される塩基配列を含む遺伝子
（Ｃ）バイオタイプＱまたはＢであることが判明しているタバココナジラミにおける前記（Ｂ）で選択した遺伝子の発現量を用意すること、および
（Ｄ）前記（Ｂ）で測定した発現量と前記（Ｃ）で用意した発現量とを比較すること
を含む、タバココナジラミバイオタイプＱの判別方法。
［２］
遺伝子の発現量をリアルタイムＰＣＲによって測定することを特徴とする、前記［１］に記載の判別方法。
［３］
以下の（１）〜（７）の塩基配列のいずれかを含むポリヌクレオチド。
（１）配列番号１で示される塩基配列
（２）配列番号４で示される塩基配列
（３）配列番号５で示される塩基配列
（４）配列番号６で示される塩基配列
（５）配列番号７で示される塩基配列
（６）配列番号８で示される塩基配列
（７）配列番号９で示される塩基配列
［４］
以下の（１）〜（２２）の塩基配列のいずれかからなるオリゴヌクレオチド。
（１）配列番号２３で示される塩基配列
（２）配列番号２４で示される塩基配列
（３）配列番号２５で示される塩基配列
（４）配列番号２６で示される塩基配列
（５）配列番号２７で示される塩基配列
（６）配列番号２８で示される塩基配列
（７）配列番号２９で示される塩基配列
（８）配列番号３０で示される塩基配列
（９）配列番号３１で示される塩基配列
（１０）配列番号３２で示される塩基配列
（１１）配列番号３３で示される塩基配列
（１２）配列番号３４で示される塩基配列
（１３）配列番号３５で示される塩基配列
（１４）配列番号３６で示される塩基配列
（１５）配列番号３７で示される塩基配列
（１６）配列番号３８で示される塩基配列
（１７）配列番号３９で示される塩基配列
（１８）配列番号４０で示される塩基配列
（１９）配列番号４１で示される塩基配列
（２０）配列番号４２で示される塩基配列
（２１）配列番号４３で示される塩基配列
（２２）配列番号４４で示される塩基配列
［５］
以下の（１）〜（１３）の塩基配列のいずれかからなるオリゴヌクレオチド。
（１）配列番号４５で示される塩基配列
（２）配列番号４６で示される塩基配列
（３）配列番号４７で示される塩基配列
（４）配列番号４８で示される塩基配列
（５）配列番号４９で示される塩基配列
（６）配列番号５０で示される塩基配列
（７）配列番号５１で示される塩基配列
（８）配列番号５２で示される塩基配列
（９）配列番号５３で示される塩基配列
（１０）配列番号５４で示される塩基配列
（１１）配列番号５５で示される塩基配列
（１２）配列番号５６で示される塩基配列
［６］
以下の（１）〜（１１）のプライマーセットから選択されるプライマーセット。
（１）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号１の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（２）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号２の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号２の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（３）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号３の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号３の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（４）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号４の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号４の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（５）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号５の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号５の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（６）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号６の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号６の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（７）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号７の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号７の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（８）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号８の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号８の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（９）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号９の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号９の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（１０）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号１０の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１０の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（１１）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号１１の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１１の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、タバココナジラミにおいてバイオタイプＱを判別することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、配列番号１で示される塩基配列である。
【図２】図２は、配列番号２で示される塩基配列である。
【図３】図３は、配列番号３で示される塩基配列である。
【図４】図４は、配列番号４で示される塩基配列である。
【図５】図５は、配列番号５で示される塩基配列である。
【図６】図６は、配列番号６で示される塩基配列である。
【図７】図７は、配列番号７で示される塩基配列である。
【図８】図８は、配列番号８で示される塩基配列である。
【図９】図９は、配列番号９で示される塩基配列である。
【図１０】図１０は、配列番号１０で示される塩基配列である。
【図１１】図１１は、配列番号１１で示される塩基酸配列である。
【図１２】図１２は、配列番号１２で示されるアミノ酸配列である。
【図１３】図１３は、配列番号１３で示されるアミノ酸配列である。
【図１４】図１４は、配列番号１４で示されるアミノ酸配列である。
【図１５】図１５は、配列番号１５で示されるアミノ酸配列である。
【図１６】図１６は、配列番号１６で示されるアミノ酸配列である。
【図１７】図１７は、配列番号１７で示されるアミノ酸配列である。
【図１８】図１８は、配列番号１８で示されるアミノ酸配列である。
【図１９】図１９は、配列番号１９で示されるアミノ酸配列である。
【図２０】図２０は、配列番号２０で示されるアミノ酸配列である。
【図２１】図２１は、配列番号２１で示されるアミノ酸配列である。
【図２２】図２２は、配列番号２２で示されるアミノ酸配列である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１２】
［タバココナジラミバイオタイプＱの判別方法］
本発明の一態様は、
（Ａ）バイオタイプＱであるか否かの判別に供されるタバココナジラミから試料を得ること、
（Ｂ）以下の（１）〜（１１）の遺伝子から選択される１つ以上の遺伝子の発現量を測定すること、
（１）配列番号１で示される塩基配列を含む遺伝子
（２）配列番号２で示される塩基配列を含む遺伝子
（３）配列番号３で示される塩基配列を含む遺伝子
（４）配列番号４で示される塩基配列を含む遺伝子
（５）配列番号５で示される塩基配列を含む遺伝子
（６）配列番号６で示される塩基配列を含む遺伝子
（７）配列番号７で示される塩基配列を含む遺伝子
（８）配列番号８で示される塩基配列を含む遺伝子
（９）配列番号９で示される塩基配列を含む遺伝子
（１０）配列番号１０で示される塩基配列を含む遺伝子
（１１）配列番号１１で示される塩基配列を含む遺伝子
（Ｃ）バイオタイプＱまたはＢであることが判明しているタバココナジラミにおける前記（Ｂ）で選択した遺伝子の発現量を用意すること、および
（Ｄ）前記（Ｂ）で測定した発現量と前記（Ｃ）で用意した発現量とを比較すること
を含む、タバココナジラミバイオタイプＱの判別方法である。
本明細中、当該判別方法を、本発明の判別方法と称する場合がある。
また、本明細書中、当該発現量を、本発明における遺伝子発現量と称する場合がある。
【００１３】
本発明の判別方法に供される、タバココナジラミ由来の試料は、タバココナジラミのポリヌクレオチドを含有するものであり、タバココナジラミの細胞、組織、または全体（通常、虫体全体）から、測定する対象となる試料の種類に応じて、公知の方法で、抽出および処理することができる。
当該試料は、特に限定されるものではないが、（１）ＤＮＡ試料、および（２）タバココナジラミから抽出したＲＮＡから、逆転写酵素を用いて調製したｃＤＮＡ試料などが好ましい。
タバココナジラミのＤＮＡの抽出は、公知の方法で行えばよく、例えば、ＰｒｅｐＭａｎ ＵｌｔｒａＲｅａｇｅｎｔ（商品名、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）等を用いて行うことができる。
タバココナジラミのＲＮＡの抽出は、例えば、ＲＮｅａｓｙキット（商品名、Ｑｉａｇｅｎ社）等を用いて行うことができる。
ｃＤＮＡの調製に用いられる逆転写酵素としては、例えば、ＲｅｖｅｒＴｒａ Ａｃｅ（商品名、ＴＯＹＯＢＯ社）、ＰｒｉｍｒＳｃｒｉｐｔ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（商品名、タカラバイオ社）、Ｓｕｐｅｒ Ｓｃｒｉｐｔ ＩＩＩ（商品名、ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）等が挙げられる。
【００１４】
本明細書中、「遺伝子」とは、１つのポリペプチド鎖の産生に関与するポリヌクレオチドを意味する。当該「遺伝子」は、二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。当該「二本鎖」には、二本鎖ＤＮＡ 、二本鎖ＲＮＡ、およびＤＮＡ：ＲＮＡのハイブリッドが包含される。一本鎖の場合は、センス鎖（すなわち、コード鎖）であっても、アンチセンス鎖（すなわち、非コード鎖）であってもよい。当該遺伝子は、ポリヌクレオチドの１次配列を規定する構造遺伝子の塩基配列に加えて、構造遺伝子以外の配列、例えば、調節遺伝子（例、プロモーター）の塩基配列、および非翻訳領域の塩基配列等を含んでいてもよい。
配列番号１〜１１で示される塩基配列を、図１〜図１１に示す。図中、塩基配列は、５’末端から３’末端の方向に記載されている。
本明細書中、塩基配列中の塩基を表示する記号は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ ambiguity codeに従う。また、ｉはイノシンを表す。
下記においても記載しているように、これらの塩基配列は、ｃＤＮＡの塩基配列である。したがって、ゲノム中では、これらの塩基配列は、イントロンによって分断されて存在している場合がある。
また、実施例でも記載しているように、配列番号７で示される塩基配列は、Ｐ４５０の構造遺伝子の完全長の塩基配列を含むものであり、その他の塩基配列（配列番号１〜６、および７〜１１）は、Ｐ４５０の構造遺伝子の一部の塩基配列を含むものであると推定される。
【００１５】
測定の簡便性の観点では、上記（１）〜（１１）に示される遺伝子から選択される少数（好ましくは、１つ）の遺伝子の発現量を測定することが好ましい。
一方、バイオタイプＱの判別の厳密性の観点では、上記（１）〜（１１）に示される遺伝子から選択されるより多数（例、２つ〜９つ）の遺伝子の発現量を測定することが好ましい。
上記（１）〜（１１）に示される遺伝子の中でも、好ましくは上記（１）、（２）、（４）、（５）、（７）、（８）、（１０）、および（１１）に示される遺伝子である。
いずれの場合も、本発明の判別方法は、好ましくは、配列番号４で示される塩基配列を含む遺伝子の発現の測定を含む。
【００１６】
本発明の判別方法において、遺伝子の発現量の測定は、当該遺伝子の発現の産物、すなわち転写産物（ｍＲＮＡ）または翻訳産物（ポリペプチド）の量を測定することによって実施できる。なお、当業者に明らかなように、ある遺伝子の発現量を測定する目的においては、この遺伝子に特徴的な部分配列の発現量を測定すればよい。測定の容易さの観点から、転写産物の量を測定することが好ましい。その方法としては、特に限定されず、ノーザンハイブリダイゼーション法、マイクロアレイ法、および定量的ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）（例、リアルタイムＰＣＲ）等が挙げられるが、なかでもリアルタイムＰＣＲが好ましい。
【００１７】
リアルタイムＰＣＲは、市販の装置ならびに市販のキットおよび試薬を用いて、その使用説明書に記載の方法および条件に従って実施する事ができる。
具体的には、配列番号１〜１１で示される塩基配列のいずれかに基づいて設計したプライマーを用いたＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）を行い、ＰＣＲによる増幅を経時的に測定することで、増幅率に基づいて鋳型となるｃＤＮＡの定量を行なう。
ＰＣＲに用いるプライマー（センスプライマーおよびアンチセンスプライマー）は、配列番号１〜１１で示される塩基配列のいずれかに基づいて設計し、慣用の化学合成方法によって調製できる。
【００１８】
上記「配列番号１〜１１で示される塩基配列のいずれかに基づいて設計したプライマー」として好ましくは、それぞれ以下のプライマーセットである。
なお、当業者に明らかなように、センスプライマーがセンス鎖に由来する塩基配列の場合、アンチセンスプライマーはアンチセンス鎖に由来する塩基配列である。
また、本明細書中、Ｔｍ値（Ｍｅｌｔｉｎｇ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ、融解温度、℃）は、Nearest Neighbor 法に基づき次の数式で計算された数値である。
Tm＝[1000ΔH/｛-10.8+ΔS+Rln(Ct/4)｝]-273.15+16.6log[Na+]
ここで、数式中の記号および数値は下記を示す。
ΔH：ハイブリッドにおける最近接エンタルピー変化の合計[kcal/mol]
-10.8：ΔS(initiation)[cal/mol・K]
ΔS：ハイブリッドにおける最近接エントロピー変化の合計[cal/mol・K]
R：気体定数(1.987cal/deg・mol)
Ct：オリゴのtotalモル濃度[mol/l]。0.5μMで計算する。
Na+：Na+のモル濃度[mol/l]。50mMで計算する。
（１）配列番号１で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号１の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００１９】
（２）配列番号２で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号２の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号２の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２０】
（３）配列番号３で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号３の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号３の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２１】
（４）配列番号４で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号４の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号４の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２２】
（５）配列番号５で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号５の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号５の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２３】
（６）配列番号６で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号６の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号６の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２４】
（７）配列番号７で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号７の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号７の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２５】
（８）配列番号８で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号８の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号８の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２６】
（９）配列番号９で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号９の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号９の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（１０）配列番号１０で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号１０の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１０の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（１１）配列番号１１で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号１１の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１１の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２７】
なかでも、塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入されていない塩基配列からなるオリゴヌクレオチドが、それぞれ好ましい。
なかでも、特に好ましいプライマーセットを以下に示す。当該プライマーセットのセンスプライマーおよびアンチセンスプライマーは、いずれも新規なオリゴヌクレオチドであり、本発明の一態様である。
【００２８】
（１）配列番号１で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ａ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 5'-CGCAAGACCACCGAAACC-3'（配列番号２３）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー： 5'-AGGAGACTCCGGAGGAAGAAGA-3'（配列番号２４）からなるオリゴヌクレオチド
【００２９】
（２）配列番号２で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｂ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 5'-GGTGGCCGAGAAGCTTCAG-3'（配列番号２５）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー： 5'-CTTGCCTCCTCGCGAATC-3'（配列番号２６）からなるオリゴヌクレオチド
【００３０】
（３）配列番号３で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｃ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-GCCCACAACGGCACTCTAGA-3'（配列番号２７）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-AACTGCCTCCATGTAAACAAGCT-3'（配列番号２８）からなるオリゴヌクレオチド
【００３１】
（４）配列番号４で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｄ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-GAAGCACGAGGTGGAAAACT-3'（配列番号２９）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-CGCACTCCATGTAACGCATCT-3'（配列番号３０）からなるオリゴヌクレオチド
【００３２】
（５）配列番号５で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｅ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-TGCCCGGAACGTATCTACCT-3'（配列番号３１）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-GAATCGCATCCCCATACAGATC-3'（配列番号３２）からなるオリゴヌクレオチド
【００３３】
（６）配列番号６で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｆ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-TTGCACCACGACCCACAGT-3'（配列番号３３）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-CCGTTCCGGGTCGAATTT-3'（配列番号３４）からなるオリゴヌクレオチド
【００３４】
（７）配列番号７で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｇ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-AGGTCCAGGAGAAACTCTTCAAAG-3'（配列番号３５）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-TGATCTCCCCACCGGATTC-3'（配列番号３６）からなるオリゴヌクレオチド
【００３５】
（８）配列番号８で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｈ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-GAGTCTCCATCACGATCCAAAAT-3'（配列番号３７）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-GAGAACCGTTCAGGGTCGAA-3'（配列番号３８）からなるオリゴヌクレオチド
【００３６】
（９）配列番号９で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｉ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-TGATGCTGATCGGACAACTGA-3'（配列番号３９）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-AGAGGTCCAGAGCTTGTTTCCA-3'（配列番号４０）からなるオリゴヌクレオチド
（１０）配列番号１０で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｊ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-CGCTCTCGACATCATTTGTGA-3'（配列番号４１）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-GGTTTTTTCTTGCGCGTTAATT-3'（配列番号４２）からなるオリゴヌクレオチド
（１１）配列番号１１で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｋ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-CGGTGGATGATCTGCGATCTA-3'（配列番号４３）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-AACAGCCGCAAGCTTTCCT-3'（配列番号４４）からなるオリゴヌクレオチド
なかでも好ましくは、上記（１）プライマーセット（ａ）、（２）プライマーセット（ｂ）、（４）プライマーセット（ｄ）、（５）プライマーセット（ｅ）、（７）プライマーセット（ｇ）、（８）プライマーセット（ｊ）、および（１０）プライマーセット（ｋ）、および（１１）プライマーセット（ｋ）に示される遺伝子である。
【００３７】
供試されるタバココナジラミがバイオタイプＱであるかどうかの判別は、測定した遺伝子の発現量を、バイオタイプＱであることが判明しているタバココナジラミにおける前記遺伝子の発現量と比較することによって行われる。
また、別法として、供試されるタバココナジラミがバイオタイプＱであるかどうかの判別は、測定した遺伝子の発現量を、バイオタイプＢであることが判明しているタバココナジラミにおける前記遺伝子の発現量と比較することによって、行ってもよい。
バイオタイプＱまたはＢであることが判明しているタバココナジラミにおける遺伝子の発現量は、供試されるタバココナジラミの遺伝子の発現量と、同じ方法で、同時に測定されたものであってもよく、予め別に測定された発現量であってもよい。
これらの発現量の測定は、好ましくは、内部標準遺伝子を基準にした比較Ｃｔ法で供試個体群間の相対定量により行われる。内部標準遺伝子としては、例えば、β−アクチン等を挙げることができる。また、タバココナジラミバイオタイプＱであることが確認されている個体群、およびタバココナジラミバイオタイプＢであることが確認されている個体群の両方との、本発明における遺伝子発現量の比較を行うことが、より好ましい。
なお、タバココナジラミバイオタイプＢは、タバココナジラミバイオタイプＱに比べて本発明における遺伝子発現量が低いので、ネガティブコントロールとして使用される。
【００３８】
本発明のタバココナジラミにおけるバイオタイプＱの判別方法は、
（１）本発明の判別方法を用いてタバココナジラミバイオタイプＱであるかどうかを判別することにより、有効な薬剤を選択する等の適切な防除対策を実施すること、
（２）本発明の判別方法を用いて各地から採集したタバココナジラミがバイオタイプＱであるかどうかを判別することにより、すなわちモニタリングを実施しすることにより、タバココナジラミバイオタイプＱの地理的分布を把握すること、
（３）選別したタバココナジラミバイオタイプＱを用いることで、タバココナジラミバイオタイプＱに有効な薬剤のスクリーニングに用いること
などに利用することができる。
【００３９】
また、配列番号１〜１１で示される塩基配列からなる遺伝子は、タバココナジラミの薬剤耐性に関与すると推測されるので、本発明の判別方法は、タバココナジラミバイオタイプＱの判別とは無関係に、タバココナジラミの薬剤耐性の評価にも使用する事ができる。
なお、上記から明らかなように、本発明のバイオタイプＱの判別方法は、そのままバイオタイプＢの判別方法に適用できる。すなわち、バイオタイプＢの判別方法は、本発明のバイオタイプＱの判別方法の一側面である。
したがって、本発明は、
（Ａ）バイオタイプＢであるか否かの判別に供されるタバココナジラミから試料を得ること、
（Ｂ）以下の（１）〜（１１）の遺伝子から選択される１つ以上の遺伝子の発現量を測定すること、
（１）配列番号１で示される塩基配列を含む遺伝子
（２）配列番号２で示される塩基配列を含む遺伝子
（３）配列番号３で示される塩基配列を含む遺伝子
（４）配列番号４で示される塩基配列を含む遺伝子
（５）配列番号５で示される塩基配列を含む遺伝子
（６）配列番号６で示される塩基配列を含む遺伝子
（７）配列番号７で示される塩基配列を含む遺伝子
（８）配列番号８で示される塩基配列を含む遺伝子
（９）配列番号９で示される塩基配列を含む遺伝子
（１０）配列番号１０で示される塩基配列を含む遺伝子
（１１）配列番号１１で示される塩基配列を含む遺伝子
（Ｃ）バイオタイプＱまたはＢであることが判明しているタバココナジラミにおける前記（Ｂ）で選択した遺伝子の発現量を用意すること、および
（Ｄ）前記（Ｂ）で測定した発現量と前記（Ｃ）で用意した発現量とを比較すること
を含む、タバココナジラミバイオタイプＢもまた提供するものである。
【００４０】
［本発明のポリヌクレオチド、およびその製造方法］
以下の（１）〜（７）に示されるいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドは、新規のポリヌクレオチドであり、本発明の一態様である。これらのポリヌクレオチドを、本発明のポリヌクレオチドと称する場合がある。
（１）配列番号１で示される塩基配列
（２）配列番号４で示される塩基配列
（３）配列番号５で示される塩基配列
（４）配列番号６で示される塩基配列
（５）配列番号７で示される塩基配列
（６）配列番号８で示される塩基配列
（７）配列番号９で示される塩基配列
【００４１】
本発明のポリヌクレオチドは、二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。当該「二本鎖」には、二本鎖ＤＮＡ 、二本鎖ＲＮＡ、およびＤＮＡ：ＲＮＡのハイブリッドが包含される。一本鎖の場合は、センス鎖（すなわち、コード鎖）であっても、アンチセンス鎖（すなわち、非コード鎖）であってもよい。すなわち、配列番号１〜１１で示される塩基配列の相補的配列からなるポリヌクレオチドも本発明の範囲内である。
また、配列番号１〜１１で示される塩基配列からなるポリヌクレオチドがイントロンで分断されているもの、およびベクター等に連結されているものも、本発明のポリヌクレオチドの範囲内である。
これらのＤＮＡは、例えば、タバココナジラミバイオタイプＱの細胞、組織または全体から慣用の遺伝子工学的手法に従って調製したｃＤＮＡライブラリーを用いて、配列番号１〜１１で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセットを用いたＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）を行うことにより調製することができる。当該プライマーは、慣用の化学合成方法によって合成することができる。
また、別法として、配列番号１〜１１で示される塩基配列に基づき、慣用の化学合成方法によって、これらの遺伝子を調製することができる。
また、配列番号１〜１１で示される塩基配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＰ４５０としての性質を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドも本発明のポリヌクレオチドに含まれる。ストリンジェントな条件とは、ポリヌクレオチド同士がハイブリダイズすることができる条件であれば特に限定されない。ストリンジェントな条件については、田村隆明編「改訂遺伝子工学実験ノート」羊土社（２００４）、特に下巻４章に記載されており、ここに記載の条件を使用し得る。具体的には、例えば、１００％（ｖ／ｖ）ホルムアミド、２０×ＳＳＣ（３Ｍ ＮａＣｌ、０．３Ｍクエン酸ナトリウム）、１００×デンハルト溶液（２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン、２％（ｗ／ｖ）フィコール、２％（ｗ／ｖ）ポリビニルピロリドン）、１Ｍリン酸ナトリウム、１０％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、および１０ｍｇ／ｍｌのＤＮＡを含む溶液中、ハイブリダイゼーション温度４２℃、を挙げることができるが、これに限定されない。
【００４２】
［本発明のタンパク質、およびその製造方法］
配列番号１〜１１で示される塩基配列によってコードされるタンパク質のアミノ酸配列（配列番号１２〜２２）を図１２〜２２に示す。図中、アミノ酸配列は、Ｎ末端からＣ末端の方向に記載されている。これらのアミノ酸配列からなるタンパク質のうち、配列番号１２、および１５〜２０で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質は新規であり、本発明の一態様である。本明細書中、これらのタンパク質を、本発明のタンパク質と称する場合がある。
本発明のタンパク質は、例えば、本発明のポリヌクレオチドを用い、慣用の遺伝子工学的手法に従って調製することができる。
また、別法として、慣用のＰ４５０タンパク質の抽出および精製方法に従い、タバココナジラミバイオタイプＱの細胞、組織または全体から本発明のタンパク質を抽出および精製することにより、調製することができる。
【実施例】
【００４３】
以下に、実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００４４】
（タバココナジラミ個体群のＰ４５０遺伝子の取得）
日本各地から採集したタバココナジラミ９個体群（１：兵庫県加西市、２：愛知県愛西市、３：愛知県愛西市、４：京都府精華町、５：高知県安芸市、６：三重県桑名郡、７：茨城県神栖市、８：熊本県八代市、９：福岡県柳川市）の虫体全体から、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（商品名、Ｑｉａｇｅｎ社）を用いてＲＮＡを抽出した。得られたＴｏｔａｌ ＲＮＡからＲｅｖｅｒＴｒａ Ａｃｅ ｑＰＣＲ ＲＴ Ｋｉｔ（商品名、ＴＯＹＯＢＯ社）を用いてｃＤＮＡを合成した。
上記ｃＤＮＡを鋳型とし、ディジェネレートプライマーを用いてディジェネレートＰＣＲを行った。
ディジェネレートプライマーとしては、下記のセンスプライマーおよびアンチセンスプライマーのセットを用いた。これらのプライマーは、新規のポリヌクレオチドであり、本発明の一態様である。
プライマーセット(A)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-TTCTWYNTKGCYGGNTTTGAGAC-3'(配列番号４５) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'-CCAATRCADWTSCKTGGACCATCNCCAAA-3' (配列番号４６) からなるオリゴヌクレオチド
プライマーセット(B)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-YTTCRTBGSKGGYTTYGAGACGAC-3' (配列番号４７) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'-WGCRAAYCKCAKYCCDATRCA-3' (配列番号４８) からなるオリゴヌクレオチド
プライマーセット(C)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-YTTCRTBGSKGGYTTYGAGACGAC-3' (配列番号４７) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'-BARRTAVGWBCCDGGVACDATYTT-3' (配列番号４９) からなるオリゴヌクレオチド
プライマーセット(D)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-ATGCGNWSNACNYTRAGTCC-3' (配列番号５０) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'-GGTCCHRCNCCRAANGG-3' (配列番号５１) からなるオリゴヌクレオチド
プライマーセット(E)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-GAYATGATIMAIHTKYTGWTGGA-3' (配列番号５２) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'- CCIATRCARTTICKIGGICC-3' (配列番号５３)
プライマーセット(Ｆ)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-AARATNMTYRCNCCBRCSTTCCA-3' (配列番号５４) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'-CKNGGTCCDGCVSWRAAVGG-3' (配列番号５５)
プライマーセット(Ｇ)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-ABNNTBTBNGMAACYGCHATGGG-3' (配列番号５６) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'-CKNGGTCCDGCVSWRAAVGG-3' (配列番号５５)
からなるオリゴヌクレオチド
ディジェネレートＰＣＲはＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社のＧｅｎｅ Ａｍｐ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ ２４００上で、ＴａＫａＲａ Ｅｘ ｔａｑ（商品名、タカラバイオ社）を用いて行った。反応液の組成はＥｘ Ｔａｑ：０.１μＬ、ｄＮＴＰ：１.６μＬ、１０×Ｂｕｆｆｅｒ：２μＬ、センスプライマー(１０μＭ)：０.２μＬ、アンチセンスプライマー(１０μＭ)：０.２μＬ、サンプル（各個体群由来のｃＤＮＡ）：２μＬおよび滅菌蒸留水：３２.７５μＬとした。なお、プライマー、サンプルおよび滅菌蒸留水以外はすべて上記Ｅｘ Ｔａｑに付属のものである。反応条件は、９４℃／２分に引き続き、９４℃／３０秒および５０℃／３０秒、７２℃／１分の反応を３５サイクル行い、最後に７２℃／５分の反応を行った。ＰＣＲ後、１.５％アガロースゲル上で電気泳動を１００Ｖで３５分間行い、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎで染色後、予想される大きさと同程度のバンドを切り出し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（商品名、Ｑｉａｇｅｎ社）を用いてゲル抽出を行った。ゲル抽出後、Ｚｅｒｏ Ｂｌｕｎｔ ＴＯＰＯ ＰＣＲ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ（商品名、ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いてライゲーションを行った。この際、当該ＰＣＲ産物はそのままクローニングベクターに組み込むか、または適宜、制限酵素で処理することにより付着末端を付与し、これを当該付着末端に対して相補的な付着末端を有するクローニングベクターにライゲーションさせることにより組み込んだ。付属のコンピテントセルへ導入後、ＬＢ寒天培地(５０μＬ／ｍｌ カナマイシン、Ｘ−ｇａｌ添加)へ塗布し３７℃で一晩培養した。培養後、コロニーをいくつかピックアップしインサートが確認されたものについて、シーケンス反応を行った。
シーケンス反応はＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製の９８００ Ｆａｓｔ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ上で、Ｂｉｇ Ｄｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ ｖ３.１ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｋｉｔ（商品名、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いて行った。反応条件は９６℃／１分に引き続き、９６℃／１０秒、５０℃／５秒、６０℃／１分３０秒を３０サイクル行った。
シーケンス反応後、Ｄｙｅ Ｅｘ ２．０ Ｓｐｉｎ Ｋｉｔ（商品名、Ｑｉａｇｅｎ社）を用いて精製を行い、アプライドバイオシステムズ社製のＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ３１００ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒで塩基配列の解析を行った。塩基配列を明らかにしたＰＣＲ産物がＰ４５０か否かは、塩基配列をアミノ酸配列に翻訳したペプチドがＰ４５０モチーフを有するかにより判別した。すなわち、ＷｘｘｘＲ、ＧｘＥ／ＤＴＴ、ＥｘｘＲ、ＰｘｘＦｘＰＥ／ＤＲＦ、ＰＦｘｘＧｘＲｘＣｘＧ／Ａ（各アルファベットはアミノ酸の一文字記号を示す。また、ｘは不特定のアミノ酸を示す。「／」は「または」を意味する。すなわち、ＰｘｘＦｘＰＥ／ＤＲＦは、ＰｘｘＦｘＰＥＲＦまたはＰｘｘＦｘＰＤＲＦを意味する。）のアミノ酸配列を持ち、かつ、ＢＬＡＳＴにより他の生物のＰ４５０と相同性が高いＰＣＲ産物を選択した。
プライマーセット（Ａ）により、配列番号１〜３でそれぞれ示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
プライマーセット（Ｂ）により、配列番号４で示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
プライマーセット（Ｃ）により、配列番号５で示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
プライマーセット（Ｄ）により、配列番号６〜８でそれぞれ示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
プライマーセット（Ｅ）により、配列番号９で示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
プライマーセット（Ｆ）により、配列番号１０で示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
プライマーセット（Ｇ）により、配列番号１１で示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
こうして得られた１１種のＰ４５０遺伝子の塩基配列を配列番号１〜１１として図１〜１１に示す。
Ｐ４５０のモチーフ検索から、このうち配列番号７で示される塩基配列は、Ｐ４５０の構造遺伝子の完全長の塩基配列を含むものであり、その他の塩基配列（配列番号１〜６、および８〜１１）は、Ｐ４５０の構造遺伝子の一部の塩基配列を含むものであると推定された。
【実施例２】
【００４５】
（タバココナジラミ個体群のＰ４５０遺伝子の発現量の測定）
実施例１で得られた１１種類のタバココナジラミチトクロームＰ４５０遺伝子（配列番号１〜１１）について、リアルタイムＰＣＲ用に個々の遺伝子の特異的プライマーを設計した（上記プライマーセット（ａ）〜（ｋ）、配列番号２３〜４４）。
上記ｃＤＮＡを鋳型とし、当該特異的プライマーを用いてリアルタイムＰＣＲ行った。リアルタイムＰＣＲは、アプライドバイオシステムズ社製のＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ７５００ Ｆａｓｔ リアルタイムＰＣＲシステム上で、ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ（商品名、タカラバイオ）を用いて行った。
反応液の組成は、ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ：１０μＬ、ＲＯＸ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｄｙｅ：０．４μＬ、センスプライマー（１０μＭ）：０．４μＬ、アンチセンスプライマー（１０μＭ）：０．４μＬ、サンプル（各個体群由来のｃＤＮＡ）：１μＬおよび滅菌蒸留水：７.８μＬとした。なお、プライマー、サンプルおよび滅菌蒸留水以外はすべて上記ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑに付属のものである。反応条件は、９５度／２０秒に引き続き、９５度／３秒および６０℃／３０秒の反応を４０サイクル行った。
リアルタイムＰＣＲで測定した遺伝子発現量を表１および表２に示した。各個体群の遺伝子発現量は感受性の加西個体群の発現量を１として相対的に示した。
表中、「従来法」とは、当該分野での標準的な方法であり、具体的には、次のように実施した。タバココナジラミ成虫１頭よりPrepMan Ultra Reagent （商品名、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いてＤＮＡを抽出した。プライマーを用いてＰＣＲによりミトコンドリアチトクロームｃサブユニットＩ ＤＮＡ（ＣＯＩ）の増幅を行なった。ＰＣＲ産物を制限酵素（EcoT14 IとStu I）で消化し、１％アガロースゲルを用い電気泳動した。エチジウムブロマイド処理後トランスイルミネーターで断片を確認した。なお、バイオタイプＱはEcoT14 IでＰＣＲ産物は切断され、バイオタイプＢはStu Iで切断される。
［表１］
発現量：個体群１における発現量を１として相対値で示した。
（非特許文献２参照）。
［表２］
発現量：個体群１における発現量を１として相対値で示した。
（非特許文献２参照）。
以上のように、バイオタイプＢおよびバイオタイプＱの間では、プライマーセット（ａ）〜（ｋ）を用いた遺伝子発現量の測定値に差が見られた。これにより、本発明の遺伝子の発現量を測定することにより、バイオタイプＱを判別できることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００４６】
本発明によれば、タバココナジラミバイオタイプＱを判別することができる。
【配列表フリーテキスト】
【００４７】
配列番号２３〜５６で示される塩基配列は、それぞれプライマーである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タバココナジラミのバイオタイプの判別方法、特にタバココナジラミにおけるバイオタイプＱの判別方法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
タバココナジラミ（Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ）は成虫の大きさが０．８ｍｍ程度の微小な害虫で、日本の施設園芸においては主にトマト、キュウリ、及びナス等の施設栽培の作物に寄生する。タバココナジラミの幼虫及び成虫は、作物に吸汁害を与えることの他に、成虫はトマト黄化葉巻病等のウイルス病を媒介することが知られている。タバココナジラミには、形態的には区別できないが、遺伝的、及び生物学的に異なる約４０種類のバイオタイプが存在する（例えば、非特許文献１を参照）。日本には在来のタバココナジラミが分布しているが、野外でサツマイモ等にわずかに寄生するだけで、作物栽培上それほど重要な害虫ではなかった。しかし、１９８９年頃に日本国外から薬剤の効きにくいタバココナジラミであるシルバーリーフコナジラミ（タバココナジラミバイオタイプＢ）が日本に侵入してきた。さらに、２００３年頃に、九州で、これまで知られていなかったバイオタイプのタバココナジラミの発生が観察された。これはタバココナジラミバイオタイプＢと遺伝的に異なり、日本国外では存在が知られていたバイオタイプＱであることが判明した（非特許文献２）。バイオタイプＱは、その後分布地域を拡大し、東北地方にまで分布するようになった。すなわち、日本では通常、バイオタイプＢ、およびバイオタイプＱの２種類のバイオタイプのタバココナジラミが存在しているが、バイオタイプＱはバイオタイプＢに比べて、従来汎用されている薬剤による防除が困難なため、作物栽培上、深刻な問題となっている（例えば、非特許文献２、３を参照）。
したがって、作物栽培施設に発生したタバココナジラミがバイオタイプＢであるかＱであるかを判別することは、防除対策を立てる上で極めて重要である。形態的にバイオタイプＢと区別できないタバココナジラミバイオタイプＱを判別する方法としては、これまで、ポリアクリルアミドゲル電気泳動による非特異的エステラーゼのバンドパターンによる方法、および特定の遺伝子における変異に基づく方法（非特許文献４）が提案されている。
しかしなお、タバココナジラミバイオタイプＱの新規な判別方法の開発が求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｐｅｒｒｉｎｇ，Ｃｒｏｐ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，２００１年，２０，ｐ．７２５−７３７
【０００４】
【非特許文献２】松浦，今月の農業，２００６年２月，ｐ．５７−６１
【０００５】
【非特許文献３】本多，植物防疫，２００５年，５９巻，ｐ．２９９−３０４
【０００６】
【非特許文献４】上田，九病虫研会報，２００６年，５２巻，ｐ．４４−４８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、タバココナジラミにおけるバイオタイプＱの新規な判別方法等を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記の課題に鑑み、鋭意検討した結果、バイオタイプＱで特異的に高発現しているチトクロームＰ４５０またはその一部をコードする遺伝子を単離し、塩基配列を決定した。そして、当該遺伝子の発現量を測定することによって、バイオタイプＱの判別が可能であることを見出し、本発明に到った。
さらに、当該遺伝子のうちのいくつかは新規のポリヌクレオチドであること、および当該遺伝子がコードするタンパク質のうちのいくつかは新規のタンパク質であることが判明した。
すなわち、本発明は、以下の［１］〜［６］に記載の発明等を提供するものである。
［１］
（Ａ）バイオタイプＱであるか否かの判別に供されるタバココナジラミから試料を得ること、
（Ｂ）以下の（１）〜（１１）の遺伝子から選択される１つ以上の遺伝子の発現量を測定すること、
（１）配列番号１で示される塩基配列を含む遺伝子
（２）配列番号２で示される塩基配列を含む遺伝子
（３）配列番号３で示される塩基配列を含む遺伝子
（４）配列番号４で示される塩基配列を含む遺伝子
（５）配列番号５で示される塩基配列を含む遺伝子
（６）配列番号６で示される塩基配列を含む遺伝子
（７）配列番号７で示される塩基配列を含む遺伝子
（８）配列番号８で示される塩基配列を含む遺伝子
（９）配列番号９で示される塩基配列を含む遺伝子
（１０）配列番号１０で示される塩基配列を含む遺伝子
（１１）配列番号１１で示される塩基配列を含む遺伝子
（Ｃ）バイオタイプＱまたはＢであることが判明しているタバココナジラミにおける前記（Ｂ）で選択した遺伝子の発現量を用意すること、および
（Ｄ）前記（Ｂ）で測定した発現量と前記（Ｃ）で用意した発現量とを比較すること
を含む、タバココナジラミバイオタイプＱの判別方法。
［２］
遺伝子の発現量をリアルタイムＰＣＲによって測定することを特徴とする、前記［１］に記載の判別方法。
［３］
以下の（１）〜（７）の塩基配列のいずれかを含むポリヌクレオチド。
（１）配列番号１で示される塩基配列
（２）配列番号４で示される塩基配列
（３）配列番号５で示される塩基配列
（４）配列番号６で示される塩基配列
（５）配列番号７で示される塩基配列
（６）配列番号８で示される塩基配列
（７）配列番号９で示される塩基配列
［４］
以下の（１）〜（２２）の塩基配列のいずれかからなるオリゴヌクレオチド。
（１）配列番号２３で示される塩基配列
（２）配列番号２４で示される塩基配列
（３）配列番号２５で示される塩基配列
（４）配列番号２６で示される塩基配列
（５）配列番号２７で示される塩基配列
（６）配列番号２８で示される塩基配列
（７）配列番号２９で示される塩基配列
（８）配列番号３０で示される塩基配列
（９）配列番号３１で示される塩基配列
（１０）配列番号３２で示される塩基配列
（１１）配列番号３３で示される塩基配列
（１２）配列番号３４で示される塩基配列
（１３）配列番号３５で示される塩基配列
（１４）配列番号３６で示される塩基配列
（１５）配列番号３７で示される塩基配列
（１６）配列番号３８で示される塩基配列
（１７）配列番号３９で示される塩基配列
（１８）配列番号４０で示される塩基配列
（１９）配列番号４１で示される塩基配列
（２０）配列番号４２で示される塩基配列
（２１）配列番号４３で示される塩基配列
（２２）配列番号４４で示される塩基配列
［５］
以下の（１）〜（１３）の塩基配列のいずれかからなるオリゴヌクレオチド。
（１）配列番号４５で示される塩基配列
（２）配列番号４６で示される塩基配列
（３）配列番号４７で示される塩基配列
（４）配列番号４８で示される塩基配列
（５）配列番号４９で示される塩基配列
（６）配列番号５０で示される塩基配列
（７）配列番号５１で示される塩基配列
（８）配列番号５２で示される塩基配列
（９）配列番号５３で示される塩基配列
（１０）配列番号５４で示される塩基配列
（１１）配列番号５５で示される塩基配列
（１２）配列番号５６で示される塩基配列
［６］
以下の（１）〜（１１）のプライマーセットから選択されるプライマーセット。
（１）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号１の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（２）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号２の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号２の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（３）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号３の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号３の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（４）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号４の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号４の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（５）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号５の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号５の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（６）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号６の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号６の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（７）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号７の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号７の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（８）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号８の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号８の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（９）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号９の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号９の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（１０）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号１０の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１０の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（１１）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号１１の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１１の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、タバココナジラミにおいてバイオタイプＱを判別することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、配列番号１で示される塩基配列である。
【図２】図２は、配列番号２で示される塩基配列である。
【図３】図３は、配列番号３で示される塩基配列である。
【図４】図４は、配列番号４で示される塩基配列である。
【図５】図５は、配列番号５で示される塩基配列である。
【図６】図６は、配列番号６で示される塩基配列である。
【図７】図７は、配列番号７で示される塩基配列である。
【図８】図８は、配列番号８で示される塩基配列である。
【図９】図９は、配列番号９で示される塩基配列である。
【図１０】図１０は、配列番号１０で示される塩基配列である。
【図１１】図１１は、配列番号１１で示される塩基酸配列である。
【図１２】図１２は、配列番号１２で示されるアミノ酸配列である。
【図１３】図１３は、配列番号１３で示されるアミノ酸配列である。
【図１４】図１４は、配列番号１４で示されるアミノ酸配列である。
【図１５】図１５は、配列番号１５で示されるアミノ酸配列である。
【図１６】図１６は、配列番号１６で示されるアミノ酸配列である。
【図１７】図１７は、配列番号１７で示されるアミノ酸配列である。
【図１８】図１８は、配列番号１８で示されるアミノ酸配列である。
【図１９】図１９は、配列番号１９で示されるアミノ酸配列である。
【図２０】図２０は、配列番号２０で示されるアミノ酸配列である。
【図２１】図２１は、配列番号２１で示されるアミノ酸配列である。
【図２２】図２２は、配列番号２２で示されるアミノ酸配列である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１２】
［タバココナジラミバイオタイプＱの判別方法］
本発明の一態様は、
（Ａ）バイオタイプＱであるか否かの判別に供されるタバココナジラミから試料を得ること、
（Ｂ）以下の（１）〜（１１）の遺伝子から選択される１つ以上の遺伝子の発現量を測定すること、
（１）配列番号１で示される塩基配列を含む遺伝子
（２）配列番号２で示される塩基配列を含む遺伝子
（３）配列番号３で示される塩基配列を含む遺伝子
（４）配列番号４で示される塩基配列を含む遺伝子
（５）配列番号５で示される塩基配列を含む遺伝子
（６）配列番号６で示される塩基配列を含む遺伝子
（７）配列番号７で示される塩基配列を含む遺伝子
（８）配列番号８で示される塩基配列を含む遺伝子
（９）配列番号９で示される塩基配列を含む遺伝子
（１０）配列番号１０で示される塩基配列を含む遺伝子
（１１）配列番号１１で示される塩基配列を含む遺伝子
（Ｃ）バイオタイプＱまたはＢであることが判明しているタバココナジラミにおける前記（Ｂ）で選択した遺伝子の発現量を用意すること、および
（Ｄ）前記（Ｂ）で測定した発現量と前記（Ｃ）で用意した発現量とを比較すること
を含む、タバココナジラミバイオタイプＱの判別方法である。
本明細中、当該判別方法を、本発明の判別方法と称する場合がある。
また、本明細書中、当該発現量を、本発明における遺伝子発現量と称する場合がある。
【００１３】
本発明の判別方法に供される、タバココナジラミ由来の試料は、タバココナジラミのポリヌクレオチドを含有するものであり、タバココナジラミの細胞、組織、または全体（通常、虫体全体）から、測定する対象となる試料の種類に応じて、公知の方法で、抽出および処理することができる。
当該試料は、特に限定されるものではないが、（１）ＤＮＡ試料、および（２）タバココナジラミから抽出したＲＮＡから、逆転写酵素を用いて調製したｃＤＮＡ試料などが好ましい。
タバココナジラミのＤＮＡの抽出は、公知の方法で行えばよく、例えば、ＰｒｅｐＭａｎ ＵｌｔｒａＲｅａｇｅｎｔ（商品名、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）等を用いて行うことができる。
タバココナジラミのＲＮＡの抽出は、例えば、ＲＮｅａｓｙキット（商品名、Ｑｉａｇｅｎ社）等を用いて行うことができる。
ｃＤＮＡの調製に用いられる逆転写酵素としては、例えば、ＲｅｖｅｒＴｒａ Ａｃｅ（商品名、ＴＯＹＯＢＯ社）、ＰｒｉｍｒＳｃｒｉｐｔ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（商品名、タカラバイオ社）、Ｓｕｐｅｒ Ｓｃｒｉｐｔ ＩＩＩ（商品名、ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）等が挙げられる。
【００１４】
本明細書中、「遺伝子」とは、１つのポリペプチド鎖の産生に関与するポリヌクレオチドを意味する。当該「遺伝子」は、二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。当該「二本鎖」には、二本鎖ＤＮＡ 、二本鎖ＲＮＡ、およびＤＮＡ：ＲＮＡのハイブリッドが包含される。一本鎖の場合は、センス鎖（すなわち、コード鎖）であっても、アンチセンス鎖（すなわち、非コード鎖）であってもよい。当該遺伝子は、ポリヌクレオチドの１次配列を規定する構造遺伝子の塩基配列に加えて、構造遺伝子以外の配列、例えば、調節遺伝子（例、プロモーター）の塩基配列、および非翻訳領域の塩基配列等を含んでいてもよい。
配列番号１〜１１で示される塩基配列を、図１〜図１１に示す。図中、塩基配列は、５’末端から３’末端の方向に記載されている。
本明細書中、塩基配列中の塩基を表示する記号は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ ambiguity codeに従う。また、ｉはイノシンを表す。
下記においても記載しているように、これらの塩基配列は、ｃＤＮＡの塩基配列である。したがって、ゲノム中では、これらの塩基配列は、イントロンによって分断されて存在している場合がある。
また、実施例でも記載しているように、配列番号７で示される塩基配列は、Ｐ４５０の構造遺伝子の完全長の塩基配列を含むものであり、その他の塩基配列（配列番号１〜６、および７〜１１）は、Ｐ４５０の構造遺伝子の一部の塩基配列を含むものであると推定される。
【００１５】
測定の簡便性の観点では、上記（１）〜（１１）に示される遺伝子から選択される少数（好ましくは、１つ）の遺伝子の発現量を測定することが好ましい。
一方、バイオタイプＱの判別の厳密性の観点では、上記（１）〜（１１）に示される遺伝子から選択されるより多数（例、２つ〜９つ）の遺伝子の発現量を測定することが好ましい。
上記（１）〜（１１）に示される遺伝子の中でも、好ましくは上記（１）、（２）、（４）、（５）、（７）、（８）、（１０）、および（１１）に示される遺伝子である。
いずれの場合も、本発明の判別方法は、好ましくは、配列番号４で示される塩基配列を含む遺伝子の発現の測定を含む。
【００１６】
本発明の判別方法において、遺伝子の発現量の測定は、当該遺伝子の発現の産物、すなわち転写産物（ｍＲＮＡ）または翻訳産物（ポリペプチド）の量を測定することによって実施できる。なお、当業者に明らかなように、ある遺伝子の発現量を測定する目的においては、この遺伝子に特徴的な部分配列の発現量を測定すればよい。測定の容易さの観点から、転写産物の量を測定することが好ましい。その方法としては、特に限定されず、ノーザンハイブリダイゼーション法、マイクロアレイ法、および定量的ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）（例、リアルタイムＰＣＲ）等が挙げられるが、なかでもリアルタイムＰＣＲが好ましい。
【００１７】
リアルタイムＰＣＲは、市販の装置ならびに市販のキットおよび試薬を用いて、その使用説明書に記載の方法および条件に従って実施する事ができる。
具体的には、配列番号１〜１１で示される塩基配列のいずれかに基づいて設計したプライマーを用いたＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）を行い、ＰＣＲによる増幅を経時的に測定することで、増幅率に基づいて鋳型となるｃＤＮＡの定量を行なう。
ＰＣＲに用いるプライマー（センスプライマーおよびアンチセンスプライマー）は、配列番号１〜１１で示される塩基配列のいずれかに基づいて設計し、慣用の化学合成方法によって調製できる。
【００１８】
上記「配列番号１〜１１で示される塩基配列のいずれかに基づいて設計したプライマー」として好ましくは、それぞれ以下のプライマーセットである。
なお、当業者に明らかなように、センスプライマーがセンス鎖に由来する塩基配列の場合、アンチセンスプライマーはアンチセンス鎖に由来する塩基配列である。
また、本明細書中、Ｔｍ値（Ｍｅｌｔｉｎｇ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ、融解温度、℃）は、Nearest Neighbor 法に基づき次の数式で計算された数値である。
Tm＝[1000ΔH/｛-10.8+ΔS+Rln(Ct/4)｝]-273.15+16.6log[Na+]
ここで、数式中の記号および数値は下記を示す。
ΔH：ハイブリッドにおける最近接エンタルピー変化の合計[kcal/mol]
-10.8：ΔS(initiation)[cal/mol・K]
ΔS：ハイブリッドにおける最近接エントロピー変化の合計[cal/mol・K]
R：気体定数(1.987cal/deg・mol)
Ct：オリゴのtotalモル濃度[mol/l]。0.5μMで計算する。
Na+：Na+のモル濃度[mol/l]。50mMで計算する。
（１）配列番号１で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号１の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００１９】
（２）配列番号２で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号２の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号２の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２０】
（３）配列番号３で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号３の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号３の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２１】
（４）配列番号４で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号４の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号４の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２２】
（５）配列番号５で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号５の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号５の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２３】
（６）配列番号６で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号６の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号６の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２４】
（７）配列番号７で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号７の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号７の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２５】
（８）配列番号８で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号８の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号８の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２６】
（９）配列番号９で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号９の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号９の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（１０）配列番号１０で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号１０の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１０の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（１１）配列番号１１で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 配列番号１１の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１１の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基（好ましくは１５〜２６塩基）からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【００２７】
なかでも、塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入されていない塩基配列からなるオリゴヌクレオチドが、それぞれ好ましい。
なかでも、特に好ましいプライマーセットを以下に示す。当該プライマーセットのセンスプライマーおよびアンチセンスプライマーは、いずれも新規なオリゴヌクレオチドであり、本発明の一態様である。
【００２８】
（１）配列番号１で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ａ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 5'-CGCAAGACCACCGAAACC-3'（配列番号２３）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー： 5'-AGGAGACTCCGGAGGAAGAAGA-3'（配列番号２４）からなるオリゴヌクレオチド
【００２９】
（２）配列番号２で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｂ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー： 5'-GGTGGCCGAGAAGCTTCAG-3'（配列番号２５）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー： 5'-CTTGCCTCCTCGCGAATC-3'（配列番号２６）からなるオリゴヌクレオチド
【００３０】
（３）配列番号３で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｃ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-GCCCACAACGGCACTCTAGA-3'（配列番号２７）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-AACTGCCTCCATGTAAACAAGCT-3'（配列番号２８）からなるオリゴヌクレオチド
【００３１】
（４）配列番号４で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｄ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-GAAGCACGAGGTGGAAAACT-3'（配列番号２９）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-CGCACTCCATGTAACGCATCT-3'（配列番号３０）からなるオリゴヌクレオチド
【００３２】
（５）配列番号５で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｅ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-TGCCCGGAACGTATCTACCT-3'（配列番号３１）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-GAATCGCATCCCCATACAGATC-3'（配列番号３２）からなるオリゴヌクレオチド
【００３３】
（６）配列番号６で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｆ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-TTGCACCACGACCCACAGT-3'（配列番号３３）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-CCGTTCCGGGTCGAATTT-3'（配列番号３４）からなるオリゴヌクレオチド
【００３４】
（７）配列番号７で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｇ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-AGGTCCAGGAGAAACTCTTCAAAG-3'（配列番号３５）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-TGATCTCCCCACCGGATTC-3'（配列番号３６）からなるオリゴヌクレオチド
【００３５】
（８）配列番号８で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｈ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-GAGTCTCCATCACGATCCAAAAT-3'（配列番号３７）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-GAGAACCGTTCAGGGTCGAA-3'（配列番号３８）からなるオリゴヌクレオチド
【００３６】
（９）配列番号９で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｉ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-TGATGCTGATCGGACAACTGA-3'（配列番号３９）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-AGAGGTCCAGAGCTTGTTTCCA-3'（配列番号４０）からなるオリゴヌクレオチド
（１０）配列番号１０で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｊ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-CGCTCTCGACATCATTTGTGA-3'（配列番号４１）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-GGTTTTTTCTTGCGCGTTAATT-3'（配列番号４２）からなるオリゴヌクレオチド
（１１）配列番号１１で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセット（ｋ）
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー：塩基配列 5'-CGGTGGATGATCTGCGATCTA-3'（配列番号４３）からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー：塩基配列 5'-AACAGCCGCAAGCTTTCCT-3'（配列番号４４）からなるオリゴヌクレオチド
なかでも好ましくは、上記（１）プライマーセット（ａ）、（２）プライマーセット（ｂ）、（４）プライマーセット（ｄ）、（５）プライマーセット（ｅ）、（７）プライマーセット（ｇ）、（８）プライマーセット（ｊ）、および（１０）プライマーセット（ｋ）、および（１１）プライマーセット（ｋ）に示される遺伝子である。
【００３７】
供試されるタバココナジラミがバイオタイプＱであるかどうかの判別は、測定した遺伝子の発現量を、バイオタイプＱであることが判明しているタバココナジラミにおける前記遺伝子の発現量と比較することによって行われる。
また、別法として、供試されるタバココナジラミがバイオタイプＱであるかどうかの判別は、測定した遺伝子の発現量を、バイオタイプＢであることが判明しているタバココナジラミにおける前記遺伝子の発現量と比較することによって、行ってもよい。
バイオタイプＱまたはＢであることが判明しているタバココナジラミにおける遺伝子の発現量は、供試されるタバココナジラミの遺伝子の発現量と、同じ方法で、同時に測定されたものであってもよく、予め別に測定された発現量であってもよい。
これらの発現量の測定は、好ましくは、内部標準遺伝子を基準にした比較Ｃｔ法で供試個体群間の相対定量により行われる。内部標準遺伝子としては、例えば、β−アクチン等を挙げることができる。また、タバココナジラミバイオタイプＱであることが確認されている個体群、およびタバココナジラミバイオタイプＢであることが確認されている個体群の両方との、本発明における遺伝子発現量の比較を行うことが、より好ましい。
なお、タバココナジラミバイオタイプＢは、タバココナジラミバイオタイプＱに比べて本発明における遺伝子発現量が低いので、ネガティブコントロールとして使用される。
【００３８】
本発明のタバココナジラミにおけるバイオタイプＱの判別方法は、
（１）本発明の判別方法を用いてタバココナジラミバイオタイプＱであるかどうかを判別することにより、有効な薬剤を選択する等の適切な防除対策を実施すること、
（２）本発明の判別方法を用いて各地から採集したタバココナジラミがバイオタイプＱであるかどうかを判別することにより、すなわちモニタリングを実施しすることにより、タバココナジラミバイオタイプＱの地理的分布を把握すること、
（３）選別したタバココナジラミバイオタイプＱを用いることで、タバココナジラミバイオタイプＱに有効な薬剤のスクリーニングに用いること
などに利用することができる。
【００３９】
また、配列番号１〜１１で示される塩基配列からなる遺伝子は、タバココナジラミの薬剤耐性に関与すると推測されるので、本発明の判別方法は、タバココナジラミバイオタイプＱの判別とは無関係に、タバココナジラミの薬剤耐性の評価にも使用する事ができる。
なお、上記から明らかなように、本発明のバイオタイプＱの判別方法は、そのままバイオタイプＢの判別方法に適用できる。すなわち、バイオタイプＢの判別方法は、本発明のバイオタイプＱの判別方法の一側面である。
したがって、本発明は、
（Ａ）バイオタイプＢであるか否かの判別に供されるタバココナジラミから試料を得ること、
（Ｂ）以下の（１）〜（１１）の遺伝子から選択される１つ以上の遺伝子の発現量を測定すること、
（１）配列番号１で示される塩基配列を含む遺伝子
（２）配列番号２で示される塩基配列を含む遺伝子
（３）配列番号３で示される塩基配列を含む遺伝子
（４）配列番号４で示される塩基配列を含む遺伝子
（５）配列番号５で示される塩基配列を含む遺伝子
（６）配列番号６で示される塩基配列を含む遺伝子
（７）配列番号７で示される塩基配列を含む遺伝子
（８）配列番号８で示される塩基配列を含む遺伝子
（９）配列番号９で示される塩基配列を含む遺伝子
（１０）配列番号１０で示される塩基配列を含む遺伝子
（１１）配列番号１１で示される塩基配列を含む遺伝子
（Ｃ）バイオタイプＱまたはＢであることが判明しているタバココナジラミにおける前記（Ｂ）で選択した遺伝子の発現量を用意すること、および
（Ｄ）前記（Ｂ）で測定した発現量と前記（Ｃ）で用意した発現量とを比較すること
を含む、タバココナジラミバイオタイプＢもまた提供するものである。
【００４０】
［本発明のポリヌクレオチド、およびその製造方法］
以下の（１）〜（７）に示されるいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドは、新規のポリヌクレオチドであり、本発明の一態様である。これらのポリヌクレオチドを、本発明のポリヌクレオチドと称する場合がある。
（１）配列番号１で示される塩基配列
（２）配列番号４で示される塩基配列
（３）配列番号５で示される塩基配列
（４）配列番号６で示される塩基配列
（５）配列番号７で示される塩基配列
（６）配列番号８で示される塩基配列
（７）配列番号９で示される塩基配列
【００４１】
本発明のポリヌクレオチドは、二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。当該「二本鎖」には、二本鎖ＤＮＡ 、二本鎖ＲＮＡ、およびＤＮＡ：ＲＮＡのハイブリッドが包含される。一本鎖の場合は、センス鎖（すなわち、コード鎖）であっても、アンチセンス鎖（すなわち、非コード鎖）であってもよい。すなわち、配列番号１〜１１で示される塩基配列の相補的配列からなるポリヌクレオチドも本発明の範囲内である。
また、配列番号１〜１１で示される塩基配列からなるポリヌクレオチドがイントロンで分断されているもの、およびベクター等に連結されているものも、本発明のポリヌクレオチドの範囲内である。
これらのＤＮＡは、例えば、タバココナジラミバイオタイプＱの細胞、組織または全体から慣用の遺伝子工学的手法に従って調製したｃＤＮＡライブラリーを用いて、配列番号１〜１１で示される塩基配列に基づいて設計したプライマーセットを用いたＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）を行うことにより調製することができる。当該プライマーは、慣用の化学合成方法によって合成することができる。
また、別法として、配列番号１〜１１で示される塩基配列に基づき、慣用の化学合成方法によって、これらの遺伝子を調製することができる。
また、配列番号１〜１１で示される塩基配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＰ４５０としての性質を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドも本発明のポリヌクレオチドに含まれる。ストリンジェントな条件とは、ポリヌクレオチド同士がハイブリダイズすることができる条件であれば特に限定されない。ストリンジェントな条件については、田村隆明編「改訂遺伝子工学実験ノート」羊土社（２００４）、特に下巻４章に記載されており、ここに記載の条件を使用し得る。具体的には、例えば、１００％（ｖ／ｖ）ホルムアミド、２０×ＳＳＣ（３Ｍ ＮａＣｌ、０．３Ｍクエン酸ナトリウム）、１００×デンハルト溶液（２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン、２％（ｗ／ｖ）フィコール、２％（ｗ／ｖ）ポリビニルピロリドン）、１Ｍリン酸ナトリウム、１０％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、および１０ｍｇ／ｍｌのＤＮＡを含む溶液中、ハイブリダイゼーション温度４２℃、を挙げることができるが、これに限定されない。
【００４２】
［本発明のタンパク質、およびその製造方法］
配列番号１〜１１で示される塩基配列によってコードされるタンパク質のアミノ酸配列（配列番号１２〜２２）を図１２〜２２に示す。図中、アミノ酸配列は、Ｎ末端からＣ末端の方向に記載されている。これらのアミノ酸配列からなるタンパク質のうち、配列番号１２、および１５〜２０で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質は新規であり、本発明の一態様である。本明細書中、これらのタンパク質を、本発明のタンパク質と称する場合がある。
本発明のタンパク質は、例えば、本発明のポリヌクレオチドを用い、慣用の遺伝子工学的手法に従って調製することができる。
また、別法として、慣用のＰ４５０タンパク質の抽出および精製方法に従い、タバココナジラミバイオタイプＱの細胞、組織または全体から本発明のタンパク質を抽出および精製することにより、調製することができる。
【実施例】
【００４３】
以下に、実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００４４】
（タバココナジラミ個体群のＰ４５０遺伝子の取得）
日本各地から採集したタバココナジラミ９個体群（１：兵庫県加西市、２：愛知県愛西市、３：愛知県愛西市、４：京都府精華町、５：高知県安芸市、６：三重県桑名郡、７：茨城県神栖市、８：熊本県八代市、９：福岡県柳川市）の虫体全体から、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（商品名、Ｑｉａｇｅｎ社）を用いてＲＮＡを抽出した。得られたＴｏｔａｌ ＲＮＡからＲｅｖｅｒＴｒａ Ａｃｅ ｑＰＣＲ ＲＴ Ｋｉｔ（商品名、ＴＯＹＯＢＯ社）を用いてｃＤＮＡを合成した。
上記ｃＤＮＡを鋳型とし、ディジェネレートプライマーを用いてディジェネレートＰＣＲを行った。
ディジェネレートプライマーとしては、下記のセンスプライマーおよびアンチセンスプライマーのセットを用いた。これらのプライマーは、新規のポリヌクレオチドであり、本発明の一態様である。
プライマーセット(A)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-TTCTWYNTKGCYGGNTTTGAGAC-3'(配列番号４５) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'-CCAATRCADWTSCKTGGACCATCNCCAAA-3' (配列番号４６) からなるオリゴヌクレオチド
プライマーセット(B)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-YTTCRTBGSKGGYTTYGAGACGAC-3' (配列番号４７) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'-WGCRAAYCKCAKYCCDATRCA-3' (配列番号４８) からなるオリゴヌクレオチド
プライマーセット(C)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-YTTCRTBGSKGGYTTYGAGACGAC-3' (配列番号４７) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'-BARRTAVGWBCCDGGVACDATYTT-3' (配列番号４９) からなるオリゴヌクレオチド
プライマーセット(D)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-ATGCGNWSNACNYTRAGTCC-3' (配列番号５０) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'-GGTCCHRCNCCRAANGG-3' (配列番号５１) からなるオリゴヌクレオチド
プライマーセット(E)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-GAYATGATIMAIHTKYTGWTGGA-3' (配列番号５２) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'- CCIATRCARTTICKIGGICC-3' (配列番号５３)
プライマーセット(Ｆ)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-AARATNMTYRCNCCBRCSTTCCA-3' (配列番号５４) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'-CKNGGTCCDGCVSWRAAVGG-3' (配列番号５５)
プライマーセット(Ｇ)
次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット。
センスプライマー: 塩基配列 5'-ABNNTBTBNGMAACYGCHATGGG-3' (配列番号５６) からなるオリゴヌクレオチド
アンチセンスプライマー: 塩基配列 5'-CKNGGTCCDGCVSWRAAVGG-3' (配列番号５５)
からなるオリゴヌクレオチド
ディジェネレートＰＣＲはＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社のＧｅｎｅ Ａｍｐ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ ２４００上で、ＴａＫａＲａ Ｅｘ ｔａｑ（商品名、タカラバイオ社）を用いて行った。反応液の組成はＥｘ Ｔａｑ：０.１μＬ、ｄＮＴＰ：１.６μＬ、１０×Ｂｕｆｆｅｒ：２μＬ、センスプライマー(１０μＭ)：０.２μＬ、アンチセンスプライマー(１０μＭ)：０.２μＬ、サンプル（各個体群由来のｃＤＮＡ）：２μＬおよび滅菌蒸留水：３２.７５μＬとした。なお、プライマー、サンプルおよび滅菌蒸留水以外はすべて上記Ｅｘ Ｔａｑに付属のものである。反応条件は、９４℃／２分に引き続き、９４℃／３０秒および５０℃／３０秒、７２℃／１分の反応を３５サイクル行い、最後に７２℃／５分の反応を行った。ＰＣＲ後、１.５％アガロースゲル上で電気泳動を１００Ｖで３５分間行い、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎで染色後、予想される大きさと同程度のバンドを切り出し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（商品名、Ｑｉａｇｅｎ社）を用いてゲル抽出を行った。ゲル抽出後、Ｚｅｒｏ Ｂｌｕｎｔ ＴＯＰＯ ＰＣＲ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ（商品名、ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いてライゲーションを行った。この際、当該ＰＣＲ産物はそのままクローニングベクターに組み込むか、または適宜、制限酵素で処理することにより付着末端を付与し、これを当該付着末端に対して相補的な付着末端を有するクローニングベクターにライゲーションさせることにより組み込んだ。付属のコンピテントセルへ導入後、ＬＢ寒天培地(５０μＬ／ｍｌ カナマイシン、Ｘ−ｇａｌ添加)へ塗布し３７℃で一晩培養した。培養後、コロニーをいくつかピックアップしインサートが確認されたものについて、シーケンス反応を行った。
シーケンス反応はＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製の９８００ Ｆａｓｔ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ上で、Ｂｉｇ Ｄｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ ｖ３.１ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｋｉｔ（商品名、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いて行った。反応条件は９６℃／１分に引き続き、９６℃／１０秒、５０℃／５秒、６０℃／１分３０秒を３０サイクル行った。
シーケンス反応後、Ｄｙｅ Ｅｘ ２．０ Ｓｐｉｎ Ｋｉｔ（商品名、Ｑｉａｇｅｎ社）を用いて精製を行い、アプライドバイオシステムズ社製のＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ３１００ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒで塩基配列の解析を行った。塩基配列を明らかにしたＰＣＲ産物がＰ４５０か否かは、塩基配列をアミノ酸配列に翻訳したペプチドがＰ４５０モチーフを有するかにより判別した。すなわち、ＷｘｘｘＲ、ＧｘＥ／ＤＴＴ、ＥｘｘＲ、ＰｘｘＦｘＰＥ／ＤＲＦ、ＰＦｘｘＧｘＲｘＣｘＧ／Ａ（各アルファベットはアミノ酸の一文字記号を示す。また、ｘは不特定のアミノ酸を示す。「／」は「または」を意味する。すなわち、ＰｘｘＦｘＰＥ／ＤＲＦは、ＰｘｘＦｘＰＥＲＦまたはＰｘｘＦｘＰＤＲＦを意味する。）のアミノ酸配列を持ち、かつ、ＢＬＡＳＴにより他の生物のＰ４５０と相同性が高いＰＣＲ産物を選択した。
プライマーセット（Ａ）により、配列番号１〜３でそれぞれ示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
プライマーセット（Ｂ）により、配列番号４で示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
プライマーセット（Ｃ）により、配列番号５で示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
プライマーセット（Ｄ）により、配列番号６〜８でそれぞれ示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
プライマーセット（Ｅ）により、配列番号９で示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
プライマーセット（Ｆ）により、配列番号１０で示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
プライマーセット（Ｇ）により、配列番号１１で示される塩基配列からなる遺伝子が得られた。
こうして得られた１１種のＰ４５０遺伝子の塩基配列を配列番号１〜１１として図１〜１１に示す。
Ｐ４５０のモチーフ検索から、このうち配列番号７で示される塩基配列は、Ｐ４５０の構造遺伝子の完全長の塩基配列を含むものであり、その他の塩基配列（配列番号１〜６、および８〜１１）は、Ｐ４５０の構造遺伝子の一部の塩基配列を含むものであると推定された。
【実施例２】
【００４５】
（タバココナジラミ個体群のＰ４５０遺伝子の発現量の測定）
実施例１で得られた１１種類のタバココナジラミチトクロームＰ４５０遺伝子（配列番号１〜１１）について、リアルタイムＰＣＲ用に個々の遺伝子の特異的プライマーを設計した（上記プライマーセット（ａ）〜（ｋ）、配列番号２３〜４４）。
上記ｃＤＮＡを鋳型とし、当該特異的プライマーを用いてリアルタイムＰＣＲ行った。リアルタイムＰＣＲは、アプライドバイオシステムズ社製のＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ７５００ Ｆａｓｔ リアルタイムＰＣＲシステム上で、ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ（商品名、タカラバイオ）を用いて行った。
反応液の組成は、ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ：１０μＬ、ＲＯＸ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｄｙｅ：０．４μＬ、センスプライマー（１０μＭ）：０．４μＬ、アンチセンスプライマー（１０μＭ）：０．４μＬ、サンプル（各個体群由来のｃＤＮＡ）：１μＬおよび滅菌蒸留水：７.８μＬとした。なお、プライマー、サンプルおよび滅菌蒸留水以外はすべて上記ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑに付属のものである。反応条件は、９５度／２０秒に引き続き、９５度／３秒および６０℃／３０秒の反応を４０サイクル行った。
リアルタイムＰＣＲで測定した遺伝子発現量を表１および表２に示した。各個体群の遺伝子発現量は感受性の加西個体群の発現量を１として相対的に示した。
表中、「従来法」とは、当該分野での標準的な方法であり、具体的には、次のように実施した。タバココナジラミ成虫１頭よりPrepMan Ultra Reagent （商品名、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いてＤＮＡを抽出した。プライマーを用いてＰＣＲによりミトコンドリアチトクロームｃサブユニットＩ ＤＮＡ（ＣＯＩ）の増幅を行なった。ＰＣＲ産物を制限酵素（EcoT14 IとStu I）で消化し、１％アガロースゲルを用い電気泳動した。エチジウムブロマイド処理後トランスイルミネーターで断片を確認した。なお、バイオタイプＱはEcoT14 IでＰＣＲ産物は切断され、バイオタイプＢはStu Iで切断される。
［表１］
発現量：個体群１における発現量を１として相対値で示した。
（非特許文献２参照）。
［表２］
発現量：個体群１における発現量を１として相対値で示した。
（非特許文献２参照）。
以上のように、バイオタイプＢおよびバイオタイプＱの間では、プライマーセット（ａ）〜（ｋ）を用いた遺伝子発現量の測定値に差が見られた。これにより、本発明の遺伝子の発現量を測定することにより、バイオタイプＱを判別できることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００４６】
本発明によれば、タバココナジラミバイオタイプＱを判別することができる。
【配列表フリーテキスト】
【００４７】
配列番号２３〜５６で示される塩基配列は、それぞれプライマーである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）バイオタイプＱであるか否かの判別に供されるタバココナジラミから試料を得ること、
（Ｂ）以下の（１）〜（１１）の遺伝子から選択される１つ以上の遺伝子の発現量を測定すること、
（１）配列番号１で示される塩基配列を含む遺伝子
（２）配列番号２で示される塩基配列を含む遺伝子
（３）配列番号３で示される塩基配列を含む遺伝子
（４）配列番号４で示される塩基配列を含む遺伝子
（５）配列番号５で示される塩基配列を含む遺伝子
（６）配列番号６で示される塩基配列を含む遺伝子
（７）配列番号７で示される塩基配列を含む遺伝子
（８）配列番号８で示される塩基配列を含む遺伝子
（９）配列番号９で示される塩基配列を含む遺伝子
（１０）配列番号１０で示される塩基配列を含む遺伝子
（１１）配列番号１１で示される塩基配列を含む遺伝子
（Ｃ）バイオタイプＱまたはＢであることが判明しているタバココナジラミにおける前記（Ｂ）で選択した遺伝子の発現量を用意すること、および
（Ｄ）前記（Ｂ）で測定した発現量と前記（Ｃ）で用意した発現量とを比較すること
を含む、タバココナジラミバイオタイプＱの判別方法。
【請求項２】
遺伝子の発現量をリアルタイムＰＣＲによって測定することを特徴とする、請求項１に記載の判別方法。
【請求項３】
以下の（１）〜（７）の塩基配列のいずれかを含むポリヌクレオチド。
（１）配列番号１で示される塩基配列
（２）配列番号４で示される塩基配列
（３）配列番号５で示される塩基配列
（４）配列番号６で示される塩基配列
（５）配列番号７で示される塩基配列
（６）配列番号８で示される塩基配列
（７）配列番号９で示される塩基配列
【請求項４】
以下の（１）〜（２２）の塩基配列のいずれかからなるオリゴヌクレオチド。
（１）配列番号２３で示される塩基配列
（２）配列番号２４で示される塩基配列
（３）配列番号２５で示される塩基配列
（４）配列番号２６で示される塩基配列
（５）配列番号２７で示される塩基配列
（６）配列番号２８で示される塩基配列
（７）配列番号２９で示される塩基配列
（８）配列番号３０で示される塩基配列
（９）配列番号３１で示される塩基配列
（１０）配列番号３２で示される塩基配列
（１１）配列番号３３で示される塩基配列
（１２）配列番号３４で示される塩基配列
（１３）配列番号３５で示される塩基配列
（１４）配列番号３６で示される塩基配列
（１５）配列番号３７で示される塩基配列
（１６）配列番号３８で示される塩基配列
（１７）配列番号３９で示される塩基配列
（１８）配列番号４０で示される塩基配列
（１９）配列番号４１で示される塩基配列
（２０）配列番号４２で示される塩基配列
（２１）配列番号４３で示される塩基配列
（２２）配列番号４４で示される塩基配列
【請求項５】
以下の（１）〜（１３）の塩基配列のいずれかからなるオリゴヌクレオチド。
（１）配列番号４５で示される塩基配列
（２）配列番号４６で示される塩基配列
（３）配列番号４７で示される塩基配列
（４）配列番号４８で示される塩基配列
（５）配列番号４９で示される塩基配列
（６）配列番号５０で示される塩基配列
（７）配列番号５１で示される塩基配列
（８）配列番号５２で示される塩基配列
（９）配列番号５３で示される塩基配列
（１０）配列番号５４で示される塩基配列
（１１）配列番号５５で示される塩基配列
（１２）配列番号５６で示される塩基配列
【請求項６】
以下の（１）〜（１１）のプライマーセットから選択されるプライマーセット。
（１）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号１の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（２）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号２の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号２の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（３）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号３の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号３の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（４）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号４の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号４の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（５）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号５の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号５の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（６）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号６の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号６の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（７）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号７の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号７の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（８）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号８の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号８の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（９）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号９の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号９の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（１０）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号１０の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１０の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（１１）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号１１の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１１の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【請求項１】
（Ａ）バイオタイプＱであるか否かの判別に供されるタバココナジラミから試料を得ること、
（Ｂ）以下の（１）〜（１１）の遺伝子から選択される１つ以上の遺伝子の発現量を測定すること、
（１）配列番号１で示される塩基配列を含む遺伝子
（２）配列番号２で示される塩基配列を含む遺伝子
（３）配列番号３で示される塩基配列を含む遺伝子
（４）配列番号４で示される塩基配列を含む遺伝子
（５）配列番号５で示される塩基配列を含む遺伝子
（６）配列番号６で示される塩基配列を含む遺伝子
（７）配列番号７で示される塩基配列を含む遺伝子
（８）配列番号８で示される塩基配列を含む遺伝子
（９）配列番号９で示される塩基配列を含む遺伝子
（１０）配列番号１０で示される塩基配列を含む遺伝子
（１１）配列番号１１で示される塩基配列を含む遺伝子
（Ｃ）バイオタイプＱまたはＢであることが判明しているタバココナジラミにおける前記（Ｂ）で選択した遺伝子の発現量を用意すること、および
（Ｄ）前記（Ｂ）で測定した発現量と前記（Ｃ）で用意した発現量とを比較すること
を含む、タバココナジラミバイオタイプＱの判別方法。
【請求項２】
遺伝子の発現量をリアルタイムＰＣＲによって測定することを特徴とする、請求項１に記載の判別方法。
【請求項３】
以下の（１）〜（７）の塩基配列のいずれかを含むポリヌクレオチド。
（１）配列番号１で示される塩基配列
（２）配列番号４で示される塩基配列
（３）配列番号５で示される塩基配列
（４）配列番号６で示される塩基配列
（５）配列番号７で示される塩基配列
（６）配列番号８で示される塩基配列
（７）配列番号９で示される塩基配列
【請求項４】
以下の（１）〜（２２）の塩基配列のいずれかからなるオリゴヌクレオチド。
（１）配列番号２３で示される塩基配列
（２）配列番号２４で示される塩基配列
（３）配列番号２５で示される塩基配列
（４）配列番号２６で示される塩基配列
（５）配列番号２７で示される塩基配列
（６）配列番号２８で示される塩基配列
（７）配列番号２９で示される塩基配列
（８）配列番号３０で示される塩基配列
（９）配列番号３１で示される塩基配列
（１０）配列番号３２で示される塩基配列
（１１）配列番号３３で示される塩基配列
（１２）配列番号３４で示される塩基配列
（１３）配列番号３５で示される塩基配列
（１４）配列番号３６で示される塩基配列
（１５）配列番号３７で示される塩基配列
（１６）配列番号３８で示される塩基配列
（１７）配列番号３９で示される塩基配列
（１８）配列番号４０で示される塩基配列
（１９）配列番号４１で示される塩基配列
（２０）配列番号４２で示される塩基配列
（２１）配列番号４３で示される塩基配列
（２２）配列番号４４で示される塩基配列
【請求項５】
以下の（１）〜（１３）の塩基配列のいずれかからなるオリゴヌクレオチド。
（１）配列番号４５で示される塩基配列
（２）配列番号４６で示される塩基配列
（３）配列番号４７で示される塩基配列
（４）配列番号４８で示される塩基配列
（５）配列番号４９で示される塩基配列
（６）配列番号５０で示される塩基配列
（７）配列番号５１で示される塩基配列
（８）配列番号５２で示される塩基配列
（９）配列番号５３で示される塩基配列
（１０）配列番号５４で示される塩基配列
（１１）配列番号５５で示される塩基配列
（１２）配列番号５６で示される塩基配列
【請求項６】
以下の（１）〜（１１）のプライマーセットから選択されるプライマーセット。
（１）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号１の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（２）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号２の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号２の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（３）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号３の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号３の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（４）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号４の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号４の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（５）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号５の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号５の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（６）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号６の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号６の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（７）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号７の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号７の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（８）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号８の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号８の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（９）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号９の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号９の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（１０）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号１０の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１０の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
（１１）次のセンスプライマーとアンチセンスプライマーからなるプライマーセット：
センスプライマー： 配列番号１１の塩基配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
アンチセンスプライマー： 配列番号１１の塩基配列の相補配列のうち連続する少なくとも１５塩基からなる塩基配列、または当該塩基配列において１もしくは２個の塩基が欠失、置換 、付加もしくは挿入された塩基配列からなるオリゴヌクレオチドであって、Ｔｍ値が６５から６８を示すオリゴヌクレオチド。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【公開番号】特開２０１０−６８７９７（Ｐ２０１０−６８７９７Ａ）
【公開日】平成２２年４月２日（２０１０．４．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−４０９６１（Ｐ２００９−４０９６１）
【出願日】平成２１年２月２４日（２００９．２．２４）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成１８〜２０年度、独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構、新たな農林水産政策を推進する実用技術開発事業の委託研究、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（０００００２０９３）住友化学株式会社 (8,981)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年４月２日（２０１０．４．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年２月２４日（２００９．２．２４）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成１８〜２０年度、独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構、新たな農林水産政策を推進する実用技術開発事業の委託研究、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（０００００２０９３）住友化学株式会社 (8,981)
【Ｆターム（参考）】
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