ダイオキシン類の分析方法
【課題】少量の被検体で、ダイオキシン類を高精度かつ迅速に、しかも、効率よく測定可能なダイオキシン類の分析方法を提供する。
【解決手段】被検体１１を高温かつ高圧力に保持する第１工程と、抽出液中の夾雑物を自動クリーンアップ装置１３によって除去して精製した後、濃縮して濃縮液を作製する第２工程と、濃縮液中のダイオキシン類を分析する第３工程とを有し、自動クリーンアップ装置１３では、連結カラム２２の上流側に供給した抽出液中のダイオキシン類を活性炭カラム２１に吸着させると共に抽出液中の夾雑物を除去する有機溶媒を連結カラム２２に供給する操作と、活性炭カラム２１に吸着しているダイオキシン類を脱離させる有機溶媒を少なくとも活性炭カラム２１に供給する操作とを自動的に行う。
【解決手段】被検体１１を高温かつ高圧力に保持する第１工程と、抽出液中の夾雑物を自動クリーンアップ装置１３によって除去して精製した後、濃縮して濃縮液を作製する第２工程と、濃縮液中のダイオキシン類を分析する第３工程とを有し、自動クリーンアップ装置１３では、連結カラム２２の上流側に供給した抽出液中のダイオキシン類を活性炭カラム２１に吸着させると共に抽出液中の夾雑物を除去する有機溶媒を連結カラム２２に供給する操作と、活性炭カラム２１に吸着しているダイオキシン類を脱離させる有機溶媒を少なくとも活性炭カラム２１に供給する操作とを自動的に行う。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被検体、例えば、食品、排煙、排ガス、排水、水道原水、浄水、焼却灰、廃棄物、土壌、動植物等に含まれるダイオキシン類を短期間かつ高精度で測定するダイオキシン類の分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、被検体（例えば、食品、焼却灰、廃棄物、土壌、動植物等の試料そのものや、排煙、排ガス、排水、水道原水、浄水等を通過させたフィルター等）に含まれるダイオキシン類は、公定法（例えば、非特許文献１、２参照）によって、以下のように分析されている。まず、（１）細かく粉砕して秤量した被検体を有機溶媒に供給し、被検体中のダイオキシン類を有機溶媒で抽出し、（２）有機溶媒中のダイオキシン類を精製及び濃縮した後、（３）ダイオキシン類を各成分に分離する分析カラム（キャピラリーカラム）を備えた高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計で測定している。ここで、本発明において、ダイオキシン類とは、ポリ塩化ジベンゾ−パラ−ジオキシン（ＰＣＤＤｓ）、ポリ塩化ジベンゾフラン（ＰＣＤＦｓ）、及びコプラナーＰＣＢ（Ｃｏ−ＰＣＢ）である。
【０００３】
【非特許文献１】食品中のダイオキシン類及びコプラナーＰＣＢの測定方法暫定ガイドライン、厚生省、平成１１年１０月
【非特許文献２】日本工業規格、ＪＩＳ Ｋ０３１１、１９９９年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、前記従来のダイオキシン類の分析方法は未だ解決すべき以下のような問題があった。
通常、被検体中のダイオキシン類の濃度は低く、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計で検出する際には、大量の試料が必要であった。特に、食品中のダイオキシン類を測定する場合、例えば、１００ｇ以上の食品を採取しなければならない。また、被検体中のダイオキシン類を有機溶媒に抽出する際には、分液漏斗による振とう抽出法では２時間、また、ソックスレー抽出法では１６時間以上行わなければならなかった。更に、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計において、分析カラムで各成分を効率よく分離するためには、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に注入するサンプル（濃縮液）の量を１〜２μＬ（マイクロリットル）程度と少量にしなければならず、ダイオキシン類を高感度で測定することができなかった。また、ダイオキシン類の抽出及び精製等の操作は、自動化されていないため、作業効率が悪く、時間（３０日程度）とコスト（主に、人件費）がかかっていた。
【０００５】
本発明はかかる事情に鑑みてなされたもので、少量の被検体で、ダイオキシン類を高精度かつ迅速に、しかも、効率よく測定可能なダイオキシン類の分析方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
前記目的に沿う本発明に係るダイオキシン類の分析方法は、被検体を高温かつ高圧力に保持する高速溶媒抽出装置によって該被検体中のダイオキシン類を有機溶媒に抽出させて抽出液を作製する第１工程と、該抽出液中の夾雑物を多層シリカゲルカラム及び活性炭カラムを連結した連結カラムを備えた自動クリーンアップ装置によって除去して前記抽出液からダイオキシン類を精製した後、濃縮して濃縮液を作製する第２工程と、該濃縮液を溶媒除去大量試料注入装置を取付けた高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に供給し、前記濃縮液中のダイオキシン類を分析する第３工程とを有するダイオキシン類の分析方法であって、
前記自動クリーンアップ装置では、前記連結カラムの上流側に供給した前記抽出液中のダイオキシン類を前記活性炭カラムに吸着させると共に前記抽出液中の夾雑物を除去する有機溶媒を前記連結カラムに供給する操作と、前記活性炭カラムに吸着しているダイオキシン類を脱離させる有機溶媒を少なくとも前記活性炭カラムに供給する操作とを自動的に行う。
【０００７】
高速溶媒抽出装置は、被検体を入れた有機溶媒（抽出溶媒）を高温（例えば、１００〜２００℃）かつ高圧（例えば、１５００〜２０００ｐｓｉ）の条件下におき、有機溶媒中にダイオキシン類を抽出させる高速溶媒抽出（Accelerated Solvent Extraction、ＡＳＥ）を行う装置であって、例えば、ダイオネクス社製のＡＳＥ−３００（商品名）、ＡＳＥ−２００（商品名）等が使用できる。ここで、ダイオキシン類を溶出させる有機溶媒としては、トルエン、ベンゼン、アセトン、ヘキサン等があり、１種単独もしくは２種以上を混合して使用することができる。
通常、高速溶媒抽出前の試料（被検体）又は高速溶媒抽出後の抽出液に、クリーンアップスパイク（内部標準物質）を添加する。
【０００８】
自動クリーンアップ装置は、抽出液中の夾雑物、例えば、油脂成分や色素等を自動的に除去する装置であって、例えば、ジーエルサイエンス株式会社（ＧＬＳ社）製のＤＡＣ６９５（商品名）、ＤＡＣ６９５Ｗ（商品名）等が使用できる。自動クリーンアップ装置は、抽出液中のダイオキシン類を吸着せず、夾雑物を吸着して除去可能な多層シリカゲルカラムと、供給する有機溶媒によって抽出液中のダイオキシン類を吸着又は脱離可能な活性炭カラムとを連結した連結カラムが装着されている。
【０００９】
ここで、多層シリカゲルカラムとしては、硝酸銀シリカゲル及び硫酸シリカゲルを備えた例えば、ＧＬＳ社製の多層クリーンアップカートリッジ（商品名）が使用できる。また、活性炭カラムとしては、表面に活性炭を析出させた球状のシリカゲル、例えば、ＧＬＳ社製のカーボンシリカゲルカートリッジ（商品名）が使用できる。なお、活性炭カラムとして、吸着性能の異なる複数（例えば、２つ）のカーボンシリカゲルを積層して充填したものを使用することもできる。
【００１０】
自動クリーンアップ装置では、例えば、まず連結カラムの上流側に予め抽出液を供給しておき、次に連結カラムの上流から有機溶媒（例えば、ヘキサン、ジクロロメタン含有ヘキサン）を自動的に供給して、抽出液中の夾雑物を多層シリカゲルカラムに吸着させると共に、ダイオキシン類を活性炭カラムに吸着させ、更に有機溶媒（例えば、トルエン等）を少なくとも活性炭カラムに自動的に供給して、活性炭カラムに吸着しているダイオキシン類を脱離させて精製を行うことができる。
【００１１】
また、高速溶媒抽出装置で得られた抽出液を自動クリーンアップ装置で精製する前に、抽出液を濃縮した後、抽出液中の有機物を取り除く硫酸処理を行うのが好ましい。
更に、高速溶媒抽出装置で得られた抽出液を自動クリーンアップ装置で精製した後、例えば、エバポレーター等で有機溶媒を除去して、例えば、１ｍＬ程度まで濃縮して濃縮液を作製する。なお、精製操作及び濃縮操作は、それぞれ１又は２回以上行ってもよい。
【００１２】
更に、濃縮液には、低沸点の有機溶媒（例えば、ジクロロメタン、ヘキサン）が含まれ蒸発し易くなっており、有機溶媒の蒸発及び内容物の乾固に伴って濃縮液中のダイオキシン類が揮散することがある。従って、窒素気流により濃縮液中の低沸点の有機溶媒を、乾固しないように注意しながら極少量の有機溶媒が残る程度になるまで濃縮した後、回収率の算出に必要なシリンジスパイク（内部標準物質）を含んだ高沸点の有機溶媒（例えば、ノナン、デカン等）に置き換えて（転溶して）、測定試料とする。
【００１３】
また、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計の注入口の温度は、注入された試料（濃縮液）を瞬間的に気化させるために、試料中の有機溶媒に合わせて高温（２００〜２５０℃）に設定されており、濃縮液に含まれる有機溶媒を一種類（例えば、ノナン）に揃えることにより、注入口の温度を測定試料毎に変更する必要がなくなる。
【００１４】
溶媒除去大量試料注入装置は、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に注入された濃縮液をプレカラムで有機溶媒とダイオキシン類とに分離し、分離した有機溶媒を除去すると共に、分離したダイオキシン類のみを分析カラムで各成分に分離し、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に供給する溶媒除去大量注入法を行う装置（Solvent Cut Large Volume Injection System、以下、単に「ＳＣＬＶ」ともいう）であって、例えば、エス・ジー・イー（ＳＧＥ）社製のＳＣＬＶ（商品名）が使用できる。これによって、従来（１〜２μＬ程度）よりも大量（１０μＬ程度）の濃縮液、すなわち、大量のダイオキシン類を高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に注入することができる。
【００１５】
高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計は、キャピラリーカラムでダイオキシン類の各成分を時間分離するガスクロマトグラフと、時間分離された各成分をイオン化し、磁場及び電場において二重（質量とエネルギー）収束させて、１００００以上の分解能で質量分離を行い、選択的イオンモニタリング（ＳＩＭ）法で測定する二重収束磁場型質量分析計とを有している。ガスクロマトグラフに、例えば、アジレント社製のＨＰ６８９０Ｐｌｕｓ（商品名）を使用し、二重収束磁場型質量分析計に、例えば、マイクロマス社製のＡｕｔｏＳｐｅｃＵＬＴＩＭＡ（商品名）を使用し、これらを組み合わせて、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計とすることができる。
【００１６】
本発明のダイオキシン類の分析方法によって、被検体中の濃度が低く、しかも毒性の高い、特に、４〜８塩化ジオキシン、４〜８塩化ジベンゾフラン、及びノンオルトＣｏ−ＰＣＢを高感度で分析することができる。
【００１７】
本発明に係るダイオキシン類の分析方法において、前記溶媒除去大量試料注入装置は、前記濃縮液中の有機溶媒及び前記ダイオキシン類を分離するプレカラムと、該プレカラムで分離された有機溶媒を除去する溶媒除去部と、前記プレカラムで分離され前記溶媒除去部を通過したダイオキシン類を捕集するコールドトラップと、該コールドトラップで捕集したダイオキシン類を各成分に分離する分析カラムとを備え、
前記分析カラムは、液相が９０％ビスシアノプロピル／１０％フェニルシアノプロピルポリシロキサンからなるシアノプロピル基で形成された強極性のキャピラリーカラムであって、内径が０．１５〜０．２ｍｍかつ液相の厚みが０．０５〜０．１５μｍであるのが好ましい。
【００１８】
溶媒除去大量試料注入装置において、プレカラムでは、注入された濃縮液が有機溶媒とダイオキシン類とに時間分離される。この際、先にプレカラムから排出される有機溶媒は、溶媒除去部によって除去され、後にプレカラムから排出されるダイオキシン類は、溶媒除去部を通過した後、コールドトラップで冷却されて捕集される。この際、ダイオキシン類は、液化又は固化している。コールドトラップで濃縮液中の実質的に全てのダイオキシン類を捕集した後、冷却を停止してダイオキシン類を気化させ、分析カラムに供給する。分析カラムとしては、例えば、レステック社製のＲｔｘ−２３３０（商品名）が使用できる。この分析カラムによって、４及び５塩化ジオキシン及び４〜６塩化ジベンゾフランを高感度に測定できる。
【００１９】
本発明に係るダイオキシン類の分析方法において、前記第２工程では、前記抽出液を前記自動クリーンアップ装置で精製した後、多検体濃縮装置を用いて濃縮を行ってもよい。
多検体濃縮装置は、複数の溶液を同時に濃縮可能な装置であって、例えば、ビュッヒ社製の多検体高密度濃縮装置シンコア・アナリスト（商品名）が使用できる。また、多検体濃縮装置は、高速溶媒抽出装置で得られた抽出液を硫酸処理する前に濃縮する際に使用してもよい。
【００２０】
本発明に係るダイオキシン類の分析方法において、前記第２工程では、前記抽出液を前記自動クリーンアップ装置で精製した後、更にゲル浸透クロマトグラフィーを行うＧＰＣクリーンアップシステムで精製を行って、濃縮を行ってもよい。
ゲル浸透クロマトグラフィー（Gel Permeation Chromatography、ＧＰＣ）は、サイズ排除クロマトグラフィー（Size Exclusion Chromatography）の１つであって、有機溶媒中の成分を分子の大きさによって分画するものである。
【００２１】
ＧＰＣクリーンアップシステムとしては、例えば、ＧＬＳ株式会社製のＡＳＣ６９８（商品名）が使用できる。ここで、ＧＰＣクリーンアップシステムでは、ポリスチレン・ジビニルベンゼン共重合体からなるＧＰＣカラムが使用され、自動クリーンアップ装置で精製された溶液中のダイオキシン類を更に精製することができる。また、ＡＳＣ６９８は、有機溶媒を一定の速度で供給するポンプと、一定量のサンプルを注入するオートサンプラーと、ダイオキシン類と夾雑物とを分離するＧＰＣカラムと、ダイオキシン類と夾雑物との分離状況を測定する紫外可視検出器と、分離された溶液を分画するフラクションコレクターとを備えている。
【００２２】
本発明に係るダイオキシン類の分析方法において、前記第１工程から前記第３工程をオンラインで行うこともできる。
【発明の効果】
【００２３】
請求項１〜５に記載のダイオキシン類の分析方法においては、高速溶媒抽出装置によって被検体中のダイオキシン類を抽出するので、従来の振とう抽出法やソックスレー抽出法よりも短時間で抽出することができる。また、自動クリーンアップ装置によって抽出液中の夾雑物を自動的に除去するので、効率よく夾雑物を除去できると共に、作業性が向上する。更に、濃縮液を溶媒除去大量試料注入装置を取付けた高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に供給するので、従来よりも濃縮液、すなわち、ダイオキシン類を大量に供給することができ、高精度に分析できる。
【００２４】
特に、請求項２記載のダイオキシン類の分析方法においては、溶媒除去大量試料注入装置の分析カラムは、液相が９０％ビスシアノプロピル／１０％フェニルシアノプロピルポリシロキサンからなるシアノプロピル基で形成された強極性のキャピラリーカラムであって、内径が０．１５〜０．２ｍｍかつ液相の厚みが０．０５〜０．１５μｍであるので、特に、低塩素数のダイオキシン類、例えば、４及び５塩化ジオキシンと、４〜６塩化ジベンゾフランを効率よく分離することができる。
【００２５】
請求項３記載のダイオキシン類の分析方法においては、多検体濃縮装置を用いて濃縮を行うので、複数のサンプルを同時に濃縮でき、処理時間を短縮することができる。
請求項４記載のダイオキシン類の分析方法においては、抽出液を自動クリーンアップ装置で精製した後、更にゲル浸透クロマトグラフィーを行うＧＰＣクリーンアップシステムで精製を行って、濃縮を行うので、被検体の性質に合わせて精製方法を選択できる。
請求項５記載のダイオキシン類の分析方法においては、第１工程から第３工程をオンラインで行うので、より作業効率が向上する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
続いて、添付した図面を参照しつつ、本発明を具体化した実施の形態につき説明し、本発明の理解に供する。
ここで、図１は本発明の第１の実施の形態に係るダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システムの説明図、図２は同ダイオキシン類の分析システムの自動クリーンアップ装置の説明図、図３（Ａ）、（Ｂ）はそれぞれ自動クリーンアップ装置に接続する多層シリカゲルカラム、活性炭カラムの説明図、図４は同ダイオキシン類の分析システムの多検体濃縮装置の要部説明図、図５は同ダイオキシン類の分析システムの溶媒除去大量試料注入装置の説明図、図６は本発明の第２の実施の形態に係るダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システムの説明図、図７は同ダイオキシン類の分析システムのＧＰＣクリーンアップシステムの説明図である。
【００２７】
図１〜図５を参照して、本発明の第１の実施の形態に係るダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システム（以下、単に「分析システム」ともいう）１０について説明する。
分析システム１０は、環境試料、例えば、所定量の水道原水を通過させたフィルターを被検体１１とし、被検体１１中のダイオキシン類（ポリ塩化ジベンゾ−パラ−ジオキシン（ＰＣＤＤｓ）、ポリ塩化ジベンゾフラン（ＰＣＤＦｓ）、及びコプラナーＰＣＢ（Ｃｏ−ＰＣＢ））を分析するものである。
【００２８】
図１に示すように、分析システム１０は、細かく粉砕して秤量した被検体１１を、高温かつ高圧力に保持して被検体１１中のダイオキシン類を有機溶媒（抽出溶媒）に抽出させて抽出液Ｂを作製する高速溶媒抽出装置１２と、抽出液Ｂ中の夾雑物を除去して精製した精製液Ｓ、Ｔを作製する自動クリーンアップ装置１３と、精製液Ｓ、Ｔを濃縮して濃縮液Ｕ、Ｖを作製する多検体濃縮装置１４と、濃縮液Ｕ、Ｖ中のダイオキシン類を分析する溶媒除去大量試料注入装置１５を取付けた高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６とを有している。以下、詳しく説明する。
【００２９】
高速溶媒抽出装置１２は、被検体１１及び有機溶媒Ａ（例えば、ヘキサン）を入れる抽出容器１８と、抽出容器１８内を高温（１００〜２００℃）にする図示しない加熱手段と、抽出容器１８内を高圧（１５００〜２０００ｐｓｉ）にする図示しない加圧手段と、抽出容器１８の下部に配置され、有機溶媒Ａにダイオキシン類を抽出した抽出液Ｂを貯留する貯留容器１９とを備えている。高速溶媒抽出装置１２では、例えば、最大長さが０．０１〜１０ｍｍ程度に細かく粉砕して、２０ｇ程度を秤量した被検体１１を、適量の珪藻土又は無水硫酸ナトリウムからなる分散剤（図示せず）と混合して、例えば、９９ｍＬ容量の抽出容器１８内に入れ、加熱手段及び加圧手段によって、抽出容器１８内を高温かつ高圧（例えば、１５０℃かつ１５００ｐｓｉ）とする高速溶媒抽出（Accelerated Solvent Extraction）を行って、ダイオキシン類を有機溶媒Ａに抽出し、生成した抽出液Ｂを貯留容器１９に貯留する。
【００３０】
分析システム１０では、有機溶媒Ａとしてヘキサンを使用したが、ヘキサン以外に、ベンゼン、アセトン、トルエン等も使用でき、これらを２種以上混合して使用することもできる。なお、分析システム１０においては、高速溶媒抽出装置１２として、例えば、ダイオネクス社製のＡＳＥ−３００を使用している。
また、分析システム１０では、高速溶媒抽出装置１２の貯留容器１９内に貯留された抽出液Ｂを、更に濃縮した後、硫酸を加えて有機物を取り除く硫酸処理を行っている。ここで、濃縮には、多検体濃縮装置、エバポレーター等を使用することができる。
【００３１】
図２に示すように、自動クリーンアップ装置１３は、上流側に配置される多層シリカゲルカラム２０及び下流側に配置される活性炭カラム２１を連結した連結カラム２２を有している。また、自動クリーンアップ装置１３は、多層シリカゲルカラム２０の上流側及び下流側にそれぞれ設けられる三方コック２３、２４と、２つの三方コック２３、２４に連結される迂回流路２５とを備えた流路切換ユニット２６を有している。なお、分析システム１０では、三方コック２４を三方コック２３の動きに合わせて手動で操作しているが、三方コック２３と連動させてもよい。
また、自動クリーンアップ装置１３は、三方コック２３の上流側に設けられるポンプ２７と、ポンプ２７の上流側に図示しない複数のバルブからなるバルブ機構２８を介して設けられる３つの有機溶媒Ｃ（ヘキサン）、有機溶媒Ｄ（ジクロロメタン含有ヘキサン）、及び有機溶媒Ｅ（トルエン）をそれぞれ貯留する溶媒用容器２９〜３１とを有している。
【００３２】
自動クリーンアップ装置１３では、バルブ機構２８及び流路切換ユニット２６によって、溶媒用容器２９〜３１内にそれぞれ貯留された有機溶媒Ｃ〜Ｅを、多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム２１へ供給する操作、又は多層シリカゲルカラム２０に供給せずに迂回流路２５を介して活性炭カラム２１に供給する操作を自動的に行うようになっている。
なお、分析システム１０では、自動クリーンアップ装置１３として、４検体の精製を同時に行うことができるＧＬＳ社製のＤＡＣ６９５を使用しているが、説明を簡単にするために、図２においては１検体の流路についてのみ記載している。
【００３３】
図３（Ａ）に示すように、多層シリカゲルカラム２０は、例えば、ＧＬＳ社製のＰＰ製４層クリーンアップカートリッジ（商品名）であって、上流側から順に無水硫酸ナトリウムＦ、シリカゲルＧ、１０％硝酸銀シリカゲルＨ、シリカゲルＧ、２２％硫酸シリカゲルＩ、４４％硫酸シリカゲルＪ、シリカゲルＧ、２％水酸化カリウムシリカゲルＫ、及びシリカゲルＧの層が形成され、その両端部にはポリエチレン製のフィルターＬがそれぞれ配置されている。なお、多層シリカゲルカラムとして、無水硫酸ナトリウム、１０％硝酸銀シリカゲル、及び４４％硫酸シリカゲルを備えた２層クリーンアップカートリッジ（商品名）を使用することもできる。
【００３４】
また、図３（Ｂ）に示すように、活性炭カラム２１は、例えば、ＧＬＳ社製の２層式カーボンシリカゲルカートリッジ（商品名）であって、上流側から順に炭素量が３重量％のカーボンシリカゲルＭ及び８重量％のカーボンシリカゲルＮの層が形成され、カーボンシリカゲルＭ、Ｎの両端部及び中間部に石英ウール及びガラス繊維ろ紙からなるフィルターＯが配置され、更に上流側のフィルターＯの上部にテフロン（登録商標）製のＯ−リングＰを介して、テフロン（登録商標）製のキャップＱが取付けられている。なお、活性炭カラムとして、５重量％のカーボンシリカゲルを備えた単層式カーボンシリカゲルカートリッジ（商品名）を使用してもよい。
【００３５】
ここで、まず、高速溶媒抽出装置１２で抽出した後、濃縮して硫酸処理を行った抽出液Ｂを連結カラム２２の上部に供給した後、ポンプ２７を駆動させると共に、バルブ機構２８及び流路切換ユニット２６を切り換えて、溶媒用容器２９から有機溶媒Ｃを多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム２１に供給して通過させる。抽出液Ｂ中の夾雑物（例えば、油脂成分や色素等）は、多層シリカゲルカラム２０に吸着されて除去され、多層シリカゲルカラム２０を通過したダイオキシン類（ＰＣＤＤｓ、ＰＣＤＦｓ、及びＣｏ−ＰＣＢ）を含む粗精製液Ｒが得られる。更に、粗精製液Ｒは活性炭カラム２１に供給され、粗精製液Ｒ中のダイオキシン類は、活性炭カラム２１に吸着（保持）され、粗精製液Ｒ中の夾雑物及びＣｏ−ＰＣＢ以外のＰＣＢは活性炭カラム２１から排出される。このように、有機溶媒Ｃは、抽出液Ｂ中の夾雑物及びダイオキシン類をそれぞれ多層シリカゲルカラム２０、活性炭カラム２１に吸着させることができるものを使用する。
【００３６】
次に、バルブ機構２８を操作して、多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム２１に溶媒用容器３０から有機溶媒Ｄを供給し、活性炭カラム２１に吸着されているモノオルトＣｏ−ＰＣＢを含む精製液Ｓを溶出させる。従って、精製液Ｓには有機溶媒Ｄが含まれている。このように、有機溶媒Ｄは、多層シリカゲルカラム２０に吸着している夾雑物は脱離させず、活性炭カラム２１に吸着しているモノオルトＣｏ−ＰＣＢを脱離することができるものを使用する。
【００３７】
更に、バルブ機構２８及び三方コック２３、２４を操作して、多層シリカゲルカラム２０を通さずに、迂回流路２５を介して活性炭カラム２１に溶媒用容器３１から有機溶媒Ｅを供給し、活性炭カラム２１に吸着されているモノオルトＣｏ−ＰＣＢ以外のダイオキシン類を含む精製液Ｔを溶出させる。従って、精製液Ｔには、有機溶媒Ｅが含まれている。なお、有機溶媒Ｅを多層シリカゲルカラム２０に供給した場合には、多層シリカゲルカラム２０に吸着された夾雑物が脱離するので、流路切換ユニット２６によって、多層シリカゲルカラム２０に有機溶媒Ｅを供給させないようにしている。このように、有機溶媒Ｅは、活性炭カラム２１に吸着しているモノオルトＣｏ−ＰＣＢ以外のダイオキシン類を脱離することができるものを使用する。
【００３８】
ここで、精製液Ｓ及び精製液Ｔは、自動クリーンアップ装置１３に設けられた貯留容器３２、３３にそれぞれ貯留される（図１参照）。また、分析システム１０では、精製液Ｓ、Ｔを別々に分画しているが、これらを混合してもよい。モノオルトＣｏ−ＰＣＢとモノオルトＣｏ−ＰＣＢ以外のダイオキシン類とを分離しない場合には、多層シリカゲルカラム２０に夾雑物を、活性炭カラム２１にダイオキシン類をそれぞれ吸着させた後、ダイオキシン類を同時に脱離させる有機溶媒（例えば、トルエン）を活性炭カラム２１に供給してもよい。
【００３９】
図４に示すように、多検体濃縮装置１４は、下部に縮径部３５を有する複数、例えば、６つの容器３６と、各容器３６の中央部分を加熱する加熱部３７と、各縮径部３５の近傍に配置され縮径部３５を冷却する冷却管３８とを備え、別々の容器３６に入れた精製液Ｓ、Ｔをそれぞれ加熱して濃縮し、濃縮液Ｕ、Ｖを作製する。濃縮液Ｕ、Ｖが溜まる縮径部３５は冷却管３８内に供給される冷却水によって冷却されるので、乾固し難くなっている。分析システム１０では、多検体濃縮装置１４として、例えば、ビュッヒ社製の多検体高密度濃縮装置シンコア・アナリスト（商品名）を使用している。
なお、多検体濃縮装置１４の代わりに、例えば、エバポレーター等を使用することができる。また、前記した精製及び濃縮の操作を、それぞれ１又は２回以上行ってもよい。
【００４０】
更に、濃縮液Ｕ中の有機溶媒Ｄ、及び濃縮液Ｖ中の有機溶媒Ｅを、高沸点の有機溶媒Ｗ（例えば、ノナン）にそれぞれ転溶する。特に、濃縮液Ｕに含まれる低沸点の有機溶媒Ｄを、高沸点の有機溶媒Ｗとすることにより、濃縮液Ｕが乾固し難くなり、ダイオキシン類の揮散を防ぐことができる。また、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６の注入口３９（図１、図５参照）の温度は、注入された試料（濃縮液Ｕ、Ｖ）を瞬間的に気化させるために、試料中の有機溶媒に合わせて高温（２００〜２５０℃）に設定するため、濃縮液Ｕ、Ｖに含まれる有機溶媒Ｄ、Ｅを、有機溶媒Ｗに揃えることにより、注入口３９の温度を測定試料毎に変更する必要がなくなる。有機溶媒Ｗとしては、デカンを使用してもよい。
【００４１】
溶媒除去大量試料注入装置１５は、濃縮液Ｕ、Ｖに含まれる有機溶媒Ｗを除去することで、濃縮液Ｕ、Ｖ、すなわち、ダイオキシン類を、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６に大量に注入する溶媒除去大量注入法を行う装置である。図５に示すように、溶媒除去大量試料注入装置１５は、注入口３９に注入された濃縮液Ｕ、Ｖ中の有機溶媒Ｗ及びダイオキシン類を時間分離（この際には有機溶媒Ｗが先に排出される）するプレカラム４０と、プレカラム４０で分離された有機溶媒Ｗを排出する溶媒除去部４１と、プレカラム４０から排出されたダイオキシン類を冷却して液体又は固体として捕集するコールドトラップ４２と、コールドトラップ４２の冷却を停止して捕集されたダイオキシン類を気化することによって供給されたダイオキシン類を各成分に時間分離する分析カラム４３とを有している。ここで、分析システム１０では、溶媒除去大量試料注入装置１５として、例えば、ＳＧＥ社製のＳＣＬＶ（商品名）を使用している。
【００４２】
分析カラム４３は、液相が９０％ビスシアノプロピル／１０％フェニルシアノプロピルポリシロキサンからなるシアノプロピル基で形成された強極性のキャピラリーカラムであり、しかも、内径が０．１５〜０．２ｍｍかつ液相の厚みが０．０５〜０．１５μｍである。分析カラム４３によって、４及び５塩化ジオキシンと、４〜６塩化ジベンゾフランとを高感度に測定することができる。また、分析システム１０では、分析カラム４３として、例えば、レステック社製のキャピラリーカラムであるＲｔｘ−２３３０を使用している。溶媒除去大量試料注入装置１５では、プレカラム４０としてＳＧＥ社製のＢＰＸ−５を使用している。
【００４３】
なお、６〜８塩化ジオキシンと、７及び８塩化ジベンゾフランと、ノンオルトＣｏ−ＰＣＢとを分析する場合には、溶媒除去大量試料注入装置１５の分析カラム４３をＳＧＥ社製のＢＰＸ−５に換えている。また、モノオルトＣｏ−ＰＣＢは、溶媒除去大量試料注入装置を使用せず、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６に、ＳＧＥ社製のＨＴ８又はＨＴ８−ＰＣＢを取付けて測定している。
【００４４】
図１に示すように、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６は、溶媒除去大量試料注入装置１５の分析カラム４３でダイオキシン類の各成分を時間分離するガスクロマトグラフ４５と、時間分離された各成分をイオン化し、磁場及び電場において二重（質量とエネルギー）収束させて、１００００以上の分解能で質量分離を行い、選択的イオンモニタリング（ＳＩＭ）法で測定する二重収束磁場型質量分析計４６とを有している。ここで、分析システム１０では、例えば、ガスクロマトグラフ４５としてアジレント社製のＨＰ６８９０Ｐｌｕｓを、二重収束磁場型質量分析計４６としてマイクロマス社製のＡｕｔｏＳｐｅｃＵＬＴＩＭＡを使用している。
【００４５】
次に、ダイオキシン類の分析システム１０を使用したダイオキシン類の分析方法について説明する。
（第１工程）
高速溶媒抽出装置１２によって、被検体１１を高温かつ高圧力に保持して被検体１１中のダイオキシン類を有機溶媒Ａに抽出させて抽出液Ｂを作製する。
【００４６】
（第２工程）
第１工程で得られた抽出液Ｂを多検体濃縮装置で濃縮した後、硫酸処理を行って抽出液Ｂ中の有機物を取り除く。次に、自動クリーンアップ装置１３の多層シリカゲルカラム２０の上流側に、硫酸処理を行った抽出液Ｂを供給した後、ポンプ２７を駆動させると共に、バルブ機構２８及び流路切換ユニット２６を切り換えて、溶媒用容器２９から有機溶媒Ｃを多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム２１を通過させ、抽出液Ｂ中の夾雑物を多層シリカゲルカラム２０に吸着させると共に、多層シリカゲルカラム２０を通過して抽出液Ｂ中の夾雑物が除去された粗精製液Ｒ中のダイオキシン類を活性炭カラム２１に吸着させる。この際に、多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム２１に吸着されない抽出液Ｂ中の夾雑物及びＣｏ−ＰＣＢ以外のＰＣＢを排出する。
【００４７】
更に、バルブ機構２８を操作して、溶媒用容器３０から有機溶媒Ｄを多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム２１に供給し、活性炭カラム２１に吸着されているモノオルトＣｏ−ＰＣＢを含む精製液Ｓを溶出させ、貯留容器３２に貯留する。次に、バルブ機構２８及び三方コック２３、２４を操作して、溶媒用容器３１から有機溶媒Ｅを、多層シリカゲルカラム２０を通さずに迂回流路２５を介して活性炭カラム２１に供給し、活性炭カラム２１に吸着されている残り（モノオルトＣｏ−ＰＣＢ以外）のダイオキシン類を含む精製液Ｔを溶出させ、貯留容器３３に貯留する。
更に、得られた精製液Ｓ、Ｔを多検体濃縮装置１４でそれぞれ濃縮して濃縮液Ｕ、Ｖとした後、濃縮液Ｕ、Ｖにそれぞれ含まれる有機溶媒Ｄ、Ｅを有機溶媒Ｗに転溶する。
【００４８】
（第３工程）
次に、４及び５塩化ジオキシン及び４〜６塩化ジベンゾフランを測定するために、プレカラム４０をＢＰＸ−５に、分析カラム４３をＲｔｘ−２３３０とした溶媒除去大量試料注入装置１５を高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６に取付ける。有機溶媒Ｗで転溶した濃縮液Ｖを注入口３９から注入して、４及び５塩化ジオキシン及び４〜６塩化ジベンゾフランを測定する。
また、６〜８塩化ジオキシンと、７及び８塩化ジベンゾフランと、ノンオルトＣｏ−ＰＣＢとを分析する場合には、溶媒除去大量試料注入装置１５の分析カラムをＳＧＥ社製のＢＰＸ−５に換え、有機溶媒Ｗで転溶した濃縮液Ｖを注入口３９から注入して測定する。
更に、モノオルトＣｏ−ＰＣＢを測定する場合には、溶媒除去大量試料注入装置１５を取り外し、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６に、ＨＴ８又はＨＴ８−ＰＣＢを取付け、注入口３９から濃縮液Ｕを供給して測定を行う。
【００４９】
図６及び図７を参照して、本発明の第２の実施の形態に係るダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システム５０について説明する。なお、ダイオキシン類の分析システム１０と同一の構成要素については同一の番号を付してその詳しい説明を省略する。
【００５０】
分析システム５０は、食品試料を被検体５１としている点と、活性炭カラム５２が低濃度の活性炭粉末（例えば、無水硫酸ナトリウムに対して０．１重量％となるように活性炭粉末を混合したもの）からなり、多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム５２を連結して連結カラム５３が形成されている点と、第２工程で自動クリーンアップ装置１３の連結カラム５３に有機溶媒Ｃを流さないで有機溶媒Ｄを流し、夾雑物及びモノオルトＣｏ−ＰＣＢを含む粗精製液Ｘを流出させ、この粗精製液Ｘをゲル浸透クロマトグラフィー（Gel Permeation Chromatography）を行うＧＰＣクリーンアップシステム５４で精製する点とが、分析システム１０と異なっている。
【００５１】
図７に示すように、ＧＰＣクリーンアップシステム５４は、一定量のサンプル（粗精製液Ｘ）を自動的に注入するオートサンプラー５５と、オートサンプラー５５から供給された粗精製液Ｘと有機溶媒Ｙ（例えば、アセトン）を一定の速度で供給するポンプ５６と、ポンプ５６によって供給された粗精製液Ｘ中のダイオキシン類と夾雑物とを分離するＧＰＣカラム５７と、ダイオキシン類と夾雑物との分離状況を所定の波長（例えば、２２０ｎｍ）で検知して波形で表示する紫外可視検出器５８と、分離された溶液を分画するフラクションコレクター５９とを備えている。
【００５２】
ＧＰＣカラム５７は、例えば、有機溶媒中の成分を分子の大きさによって分画可能なポリスチレン・ジビニルベンゼン共重合体からなり、自動クリーンアップ装置１３で粗精製された溶液（粗精製液Ｘ）中のダイオキシン類を精製できる。
ここで、分析システム５０では、ＧＰＣクリーンアップシステム５４として、ＧＬＳ株式会社製のＡＳＣ６９８（商品名）を使用し、ＧＰＣカラム５７として、ＧＬＳ株式会社製のＭＳｐａｋ ＧＦ−３１０ ４Ｄを使用している。
【００５３】
次に、ダイオキシン類の分析システム５０を使用したダイオキシン類の分析方法について説明する。
（第１工程）
食品を、例えば、最大長さが０．０１〜１０ｍｍ程度に細かく粉砕して、２０ｇ程度を秤量した被検体５１を、適量の珪藻土又は無水硫酸ナトリウムからなる分散剤（図示せず）と混合し、これらを抽出容器１８内に入れ、被検体５１中のダイオキシン類を高速溶媒抽出装置１２を使用して有機溶媒Ａに抽出させて抽出液Ｂを作製する。
【００５４】
（第２工程）
高速溶媒抽出装置１２で抽出した後、濃縮して硫酸処理を行った抽出液Ｂを自動クリーンアップ装置１３の多層シリカゲルカラム２０の上流側に供給した後、有機溶媒Ｄ（ジクロロメタン含有ヘキサン）を多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム５２に供給する。これによって、多層シリカゲルカラム２０に夾雑物を吸着させ、活性炭カラム５２にモノオルトＣｏ−ＰＣＢ以外のダイオキシン類を吸着させることができ、多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム５２に吸着しない夾雑物とモノオルトＣｏ−ＰＣＢを含む粗精製液Ｘを連結カラム５３から流出させ、貯留容器３２に貯留する。
【００５５】
次に、有機溶媒Ｅを多層シリカゲルカラム２０を通さずに、迂回流路２５を介して活性炭カラム５２に供給し、活性炭カラム５２に吸着されている残り（モノオルトＣｏ−ＰＣＢ以外）のダイオキシン類を流出させた精製液Ｔを貯留容器３３に貯留する。
ここで、貯留容器３２に貯留されている粗精製液Ｘは、モノオルトＣｏ−ＰＣＢと夾雑物を含んでいるので、ＧＰＣクリーンアップシステム５４で精製して精製液Ｓを得る。精製液Ｓ、Ｔをそれぞれ多検体濃縮装置１４で濃縮して濃縮液Ｕ、Ｖを作製し、更に濃縮液Ｕ、Ｖを有機溶媒Ｗで転溶する。
【００５６】
（第３工程）
プレカラム４０をＢＰＸ−５とし、分析カラム４３をＲｔｘ−２３３０とした溶媒除去大量試料注入装置１５を高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６に取付けた後、有機溶媒Ｗで転溶した濃縮液Ｖを注入口３９から注入して、４及び５塩化ジオキシン及び４〜６塩化ジベンゾフランを測定する。また、溶媒除去大量試料注入装置１５の分析カラムをＳＧＥ社製のＢＰＸ−５に換え、有機溶媒Ｗで転溶した濃縮液Ｖを注入口３９から注入して、６〜８塩化ジオキシンと、７及び８塩化ジベンゾフランと、ノンオルトＣｏ−ＰＣＢとを測定する。更に、溶媒除去大量試料注入装置１５を取り外し、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６に、ＨＴ８又はＨＴ８−ＰＣＢを取付け、注入口３９から濃縮液Ｕを供給して、モノオルトＣｏ−ＰＣＢの測定を行う。
【実施例】
【００５７】
次に、本発明の作用効果を確認するために行った実施例について説明する。
実施例として、本発明のダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システム、すなわち、高速溶媒抽出装置、自動クリーンアップ装置、ＧＰＣクリーンアップシステム、多検体濃縮装置、及び溶媒除去大量試料注入装置を取付けた高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計を使用して、被検体である食品（例えば、２０ｇ）中のダイオキシン類の分析を行った。また、比較例として、公定法（非特許文献１参照）を用いて食品（例えば、１００ｇ）中のダイオキシン類を分析した。なお、比較例において、ダイオキシン類の抽出は振とう抽出法で行った。
【００５８】
被検体からダイオキシン類を抽出して実施例及び比較例での回収率を比較した結果、実施例は、比較例と同等の４０〜１２０％となり、良好な結果が得られた。この際に抽出を行った時間は、実施例では３０分間、比較例では２時間となり、実施例では抽出時間を短縮できた。なお、比較例においてソックスレー抽出法を用いた場合には、１６時間以上かかる。また、実施例では、抽出に使用する有機溶媒の量が、比較例のおよそ１／４程度に減少し、コストを下げることができた。更に、実施例では、精製操作及び濃縮操作が自動的に行われるので、比較例よりも作業効率が向上した。
【００５９】
高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に注入されるサンプル（濃縮液）の量は、比較例では１〜２μＬであり、これに含まれるダイオキシン類の量は少ないが、実施例では、溶媒除去大量試料注入装置によって濃縮液中の有機溶媒を除去するので、１０μＬ程度と大量の濃縮液、すなわち、５〜１０倍程度のダイオキシン類を注入するため、高感度でダイオキシン類を検出することができた。
また、実施例では、分析カラムとして、液相が９０％ビスシアノプロピル／１０％フェニルシアノプロピルポリシロキサンからなるシアノプロピル基で形成された強極性で、内径が０．１５〜０．２ｍｍかつ液相の厚みが０．０５〜０．１５μｍであるキャピラリーカラム（例えば、Ｒｔｘ−２３３０）を使用しているので、４及び５塩化ジオキシンと、４〜６塩化ジベンゾフランとが高感度で分析できた。なお、実施例では、２，３，７，８−４塩化ジオキシン（ＴｅＣＤＤ）の標準品の注入量が０．８ｐｇ（ピコグラム）でＳ／Ｎ（signal-to-noise ratio、信号対雑音比）が６５０であり、比較例では、注入量が２ｐｇでＳ／Ｎが２５０であり、感度が６５倍程度向上した。
【００６０】
以上のように、ダイオキシン類の分析には、比較例において、大量の試料を用いて、長期間（約３０日）かかっていたが、実施例では、少量の試料を用いて、短期間（約５日間）でかつ高感度に測定することができた。また、実施例では、各操作が自動的に行われるので、作業効率が向上した。これによって、分析にかかる費用も低くすることが可能となった。
【００６１】
本発明は、前記した実施の形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を変更しない範囲での変更は可能であり、例えば、前記したそれぞれの実施の形態や変形例の一部又は全部を組み合わせて本発明のダイオキシン類の分析システム及び分析方法を構成する場合も本発明の権利範囲に含まれる。
例えば、前記実施の形態のダイオキシン類の分析方法において、被検体を水道原水を濾過したフィルター及び食品としたが、焼却灰、廃棄物、土壌、動植物（母乳、血液等）等の試料そのものや、排煙、排ガス、排水、浄水等を通過させたフィルター等としてもよい。また、第１工程から第３工程をオンラインで行ってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】本発明の第１の実施の形態に係るダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システムの説明図である。
【図２】同ダイオキシン類の分析システムの自動クリーンアップ装置の説明図である。
【図３】（Ａ）、（Ｂ）はそれぞれ自動クリーンアップ装置に接続する多層シリカゲルカラム、活性炭カラムの説明図である。
【図４】同ダイオキシン類の分析システムの多検体濃縮装置の要部説明図である。
【図５】同ダイオキシン類の分析システムの溶媒除去大量試料注入装置の説明図である。
【図６】本発明の第２の実施の形態に係るダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システムの説明図である。
【図７】同ダイオキシン類の分析システムのＧＰＣクリーンアップシステムの説明図である。
【符号の説明】
【００６３】
１０：ダイオキシン類の分析システム、１１：被検体、１２：高速溶媒抽出装置、１３：自動クリーンアップ装置、１４：多検体濃縮装置、１５：溶媒除去大量試料注入装置、１６：高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計、１８：抽出容器、１９：貯留容器、２０：多層シリカゲルカラム、２１：活性炭カラム、２２：連結カラム、２３、２４：三方コック、２５：迂回流路、２６：流路切換ユニット、２７：ポンプ、２８：バルブ機構、２９〜３１：溶媒用容器、３２、３３：貯留容器、３５：縮径部、３６：容器、３７：加熱部、３８：冷却管、３９：注入口、４０：プレカラム、４１：溶媒除去部、４２：コールドトラップ、４３：分析カラム、４５：ガスクロマトグラフ、４６：二重収束磁場型質量分析計、５０：ダイオキシン類の分析システム、５１：被検体、５２：活性炭カラム、５３：連結カラム、５４：ＧＰＣクリーンアップシステム、５５：オートサンプラー、５６：ポンプ、５７：ＧＰＣカラム、５８：紫外可視検出器、５９：フラクションコレクター
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被検体、例えば、食品、排煙、排ガス、排水、水道原水、浄水、焼却灰、廃棄物、土壌、動植物等に含まれるダイオキシン類を短期間かつ高精度で測定するダイオキシン類の分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、被検体（例えば、食品、焼却灰、廃棄物、土壌、動植物等の試料そのものや、排煙、排ガス、排水、水道原水、浄水等を通過させたフィルター等）に含まれるダイオキシン類は、公定法（例えば、非特許文献１、２参照）によって、以下のように分析されている。まず、（１）細かく粉砕して秤量した被検体を有機溶媒に供給し、被検体中のダイオキシン類を有機溶媒で抽出し、（２）有機溶媒中のダイオキシン類を精製及び濃縮した後、（３）ダイオキシン類を各成分に分離する分析カラム（キャピラリーカラム）を備えた高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計で測定している。ここで、本発明において、ダイオキシン類とは、ポリ塩化ジベンゾ−パラ−ジオキシン（ＰＣＤＤｓ）、ポリ塩化ジベンゾフラン（ＰＣＤＦｓ）、及びコプラナーＰＣＢ（Ｃｏ−ＰＣＢ）である。
【０００３】
【非特許文献１】食品中のダイオキシン類及びコプラナーＰＣＢの測定方法暫定ガイドライン、厚生省、平成１１年１０月
【非特許文献２】日本工業規格、ＪＩＳ Ｋ０３１１、１９９９年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、前記従来のダイオキシン類の分析方法は未だ解決すべき以下のような問題があった。
通常、被検体中のダイオキシン類の濃度は低く、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計で検出する際には、大量の試料が必要であった。特に、食品中のダイオキシン類を測定する場合、例えば、１００ｇ以上の食品を採取しなければならない。また、被検体中のダイオキシン類を有機溶媒に抽出する際には、分液漏斗による振とう抽出法では２時間、また、ソックスレー抽出法では１６時間以上行わなければならなかった。更に、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計において、分析カラムで各成分を効率よく分離するためには、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に注入するサンプル（濃縮液）の量を１〜２μＬ（マイクロリットル）程度と少量にしなければならず、ダイオキシン類を高感度で測定することができなかった。また、ダイオキシン類の抽出及び精製等の操作は、自動化されていないため、作業効率が悪く、時間（３０日程度）とコスト（主に、人件費）がかかっていた。
【０００５】
本発明はかかる事情に鑑みてなされたもので、少量の被検体で、ダイオキシン類を高精度かつ迅速に、しかも、効率よく測定可能なダイオキシン類の分析方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
前記目的に沿う本発明に係るダイオキシン類の分析方法は、被検体を高温かつ高圧力に保持する高速溶媒抽出装置によって該被検体中のダイオキシン類を有機溶媒に抽出させて抽出液を作製する第１工程と、該抽出液中の夾雑物を多層シリカゲルカラム及び活性炭カラムを連結した連結カラムを備えた自動クリーンアップ装置によって除去して前記抽出液からダイオキシン類を精製した後、濃縮して濃縮液を作製する第２工程と、該濃縮液を溶媒除去大量試料注入装置を取付けた高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に供給し、前記濃縮液中のダイオキシン類を分析する第３工程とを有するダイオキシン類の分析方法であって、
前記自動クリーンアップ装置では、前記連結カラムの上流側に供給した前記抽出液中のダイオキシン類を前記活性炭カラムに吸着させると共に前記抽出液中の夾雑物を除去する有機溶媒を前記連結カラムに供給する操作と、前記活性炭カラムに吸着しているダイオキシン類を脱離させる有機溶媒を少なくとも前記活性炭カラムに供給する操作とを自動的に行う。
【０００７】
高速溶媒抽出装置は、被検体を入れた有機溶媒（抽出溶媒）を高温（例えば、１００〜２００℃）かつ高圧（例えば、１５００〜２０００ｐｓｉ）の条件下におき、有機溶媒中にダイオキシン類を抽出させる高速溶媒抽出（Accelerated Solvent Extraction、ＡＳＥ）を行う装置であって、例えば、ダイオネクス社製のＡＳＥ−３００（商品名）、ＡＳＥ−２００（商品名）等が使用できる。ここで、ダイオキシン類を溶出させる有機溶媒としては、トルエン、ベンゼン、アセトン、ヘキサン等があり、１種単独もしくは２種以上を混合して使用することができる。
通常、高速溶媒抽出前の試料（被検体）又は高速溶媒抽出後の抽出液に、クリーンアップスパイク（内部標準物質）を添加する。
【０００８】
自動クリーンアップ装置は、抽出液中の夾雑物、例えば、油脂成分や色素等を自動的に除去する装置であって、例えば、ジーエルサイエンス株式会社（ＧＬＳ社）製のＤＡＣ６９５（商品名）、ＤＡＣ６９５Ｗ（商品名）等が使用できる。自動クリーンアップ装置は、抽出液中のダイオキシン類を吸着せず、夾雑物を吸着して除去可能な多層シリカゲルカラムと、供給する有機溶媒によって抽出液中のダイオキシン類を吸着又は脱離可能な活性炭カラムとを連結した連結カラムが装着されている。
【０００９】
ここで、多層シリカゲルカラムとしては、硝酸銀シリカゲル及び硫酸シリカゲルを備えた例えば、ＧＬＳ社製の多層クリーンアップカートリッジ（商品名）が使用できる。また、活性炭カラムとしては、表面に活性炭を析出させた球状のシリカゲル、例えば、ＧＬＳ社製のカーボンシリカゲルカートリッジ（商品名）が使用できる。なお、活性炭カラムとして、吸着性能の異なる複数（例えば、２つ）のカーボンシリカゲルを積層して充填したものを使用することもできる。
【００１０】
自動クリーンアップ装置では、例えば、まず連結カラムの上流側に予め抽出液を供給しておき、次に連結カラムの上流から有機溶媒（例えば、ヘキサン、ジクロロメタン含有ヘキサン）を自動的に供給して、抽出液中の夾雑物を多層シリカゲルカラムに吸着させると共に、ダイオキシン類を活性炭カラムに吸着させ、更に有機溶媒（例えば、トルエン等）を少なくとも活性炭カラムに自動的に供給して、活性炭カラムに吸着しているダイオキシン類を脱離させて精製を行うことができる。
【００１１】
また、高速溶媒抽出装置で得られた抽出液を自動クリーンアップ装置で精製する前に、抽出液を濃縮した後、抽出液中の有機物を取り除く硫酸処理を行うのが好ましい。
更に、高速溶媒抽出装置で得られた抽出液を自動クリーンアップ装置で精製した後、例えば、エバポレーター等で有機溶媒を除去して、例えば、１ｍＬ程度まで濃縮して濃縮液を作製する。なお、精製操作及び濃縮操作は、それぞれ１又は２回以上行ってもよい。
【００１２】
更に、濃縮液には、低沸点の有機溶媒（例えば、ジクロロメタン、ヘキサン）が含まれ蒸発し易くなっており、有機溶媒の蒸発及び内容物の乾固に伴って濃縮液中のダイオキシン類が揮散することがある。従って、窒素気流により濃縮液中の低沸点の有機溶媒を、乾固しないように注意しながら極少量の有機溶媒が残る程度になるまで濃縮した後、回収率の算出に必要なシリンジスパイク（内部標準物質）を含んだ高沸点の有機溶媒（例えば、ノナン、デカン等）に置き換えて（転溶して）、測定試料とする。
【００１３】
また、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計の注入口の温度は、注入された試料（濃縮液）を瞬間的に気化させるために、試料中の有機溶媒に合わせて高温（２００〜２５０℃）に設定されており、濃縮液に含まれる有機溶媒を一種類（例えば、ノナン）に揃えることにより、注入口の温度を測定試料毎に変更する必要がなくなる。
【００１４】
溶媒除去大量試料注入装置は、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に注入された濃縮液をプレカラムで有機溶媒とダイオキシン類とに分離し、分離した有機溶媒を除去すると共に、分離したダイオキシン類のみを分析カラムで各成分に分離し、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に供給する溶媒除去大量注入法を行う装置（Solvent Cut Large Volume Injection System、以下、単に「ＳＣＬＶ」ともいう）であって、例えば、エス・ジー・イー（ＳＧＥ）社製のＳＣＬＶ（商品名）が使用できる。これによって、従来（１〜２μＬ程度）よりも大量（１０μＬ程度）の濃縮液、すなわち、大量のダイオキシン類を高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に注入することができる。
【００１５】
高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計は、キャピラリーカラムでダイオキシン類の各成分を時間分離するガスクロマトグラフと、時間分離された各成分をイオン化し、磁場及び電場において二重（質量とエネルギー）収束させて、１００００以上の分解能で質量分離を行い、選択的イオンモニタリング（ＳＩＭ）法で測定する二重収束磁場型質量分析計とを有している。ガスクロマトグラフに、例えば、アジレント社製のＨＰ６８９０Ｐｌｕｓ（商品名）を使用し、二重収束磁場型質量分析計に、例えば、マイクロマス社製のＡｕｔｏＳｐｅｃＵＬＴＩＭＡ（商品名）を使用し、これらを組み合わせて、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計とすることができる。
【００１６】
本発明のダイオキシン類の分析方法によって、被検体中の濃度が低く、しかも毒性の高い、特に、４〜８塩化ジオキシン、４〜８塩化ジベンゾフラン、及びノンオルトＣｏ−ＰＣＢを高感度で分析することができる。
【００１７】
本発明に係るダイオキシン類の分析方法において、前記溶媒除去大量試料注入装置は、前記濃縮液中の有機溶媒及び前記ダイオキシン類を分離するプレカラムと、該プレカラムで分離された有機溶媒を除去する溶媒除去部と、前記プレカラムで分離され前記溶媒除去部を通過したダイオキシン類を捕集するコールドトラップと、該コールドトラップで捕集したダイオキシン類を各成分に分離する分析カラムとを備え、
前記分析カラムは、液相が９０％ビスシアノプロピル／１０％フェニルシアノプロピルポリシロキサンからなるシアノプロピル基で形成された強極性のキャピラリーカラムであって、内径が０．１５〜０．２ｍｍかつ液相の厚みが０．０５〜０．１５μｍであるのが好ましい。
【００１８】
溶媒除去大量試料注入装置において、プレカラムでは、注入された濃縮液が有機溶媒とダイオキシン類とに時間分離される。この際、先にプレカラムから排出される有機溶媒は、溶媒除去部によって除去され、後にプレカラムから排出されるダイオキシン類は、溶媒除去部を通過した後、コールドトラップで冷却されて捕集される。この際、ダイオキシン類は、液化又は固化している。コールドトラップで濃縮液中の実質的に全てのダイオキシン類を捕集した後、冷却を停止してダイオキシン類を気化させ、分析カラムに供給する。分析カラムとしては、例えば、レステック社製のＲｔｘ−２３３０（商品名）が使用できる。この分析カラムによって、４及び５塩化ジオキシン及び４〜６塩化ジベンゾフランを高感度に測定できる。
【００１９】
本発明に係るダイオキシン類の分析方法において、前記第２工程では、前記抽出液を前記自動クリーンアップ装置で精製した後、多検体濃縮装置を用いて濃縮を行ってもよい。
多検体濃縮装置は、複数の溶液を同時に濃縮可能な装置であって、例えば、ビュッヒ社製の多検体高密度濃縮装置シンコア・アナリスト（商品名）が使用できる。また、多検体濃縮装置は、高速溶媒抽出装置で得られた抽出液を硫酸処理する前に濃縮する際に使用してもよい。
【００２０】
本発明に係るダイオキシン類の分析方法において、前記第２工程では、前記抽出液を前記自動クリーンアップ装置で精製した後、更にゲル浸透クロマトグラフィーを行うＧＰＣクリーンアップシステムで精製を行って、濃縮を行ってもよい。
ゲル浸透クロマトグラフィー（Gel Permeation Chromatography、ＧＰＣ）は、サイズ排除クロマトグラフィー（Size Exclusion Chromatography）の１つであって、有機溶媒中の成分を分子の大きさによって分画するものである。
【００２１】
ＧＰＣクリーンアップシステムとしては、例えば、ＧＬＳ株式会社製のＡＳＣ６９８（商品名）が使用できる。ここで、ＧＰＣクリーンアップシステムでは、ポリスチレン・ジビニルベンゼン共重合体からなるＧＰＣカラムが使用され、自動クリーンアップ装置で精製された溶液中のダイオキシン類を更に精製することができる。また、ＡＳＣ６９８は、有機溶媒を一定の速度で供給するポンプと、一定量のサンプルを注入するオートサンプラーと、ダイオキシン類と夾雑物とを分離するＧＰＣカラムと、ダイオキシン類と夾雑物との分離状況を測定する紫外可視検出器と、分離された溶液を分画するフラクションコレクターとを備えている。
【００２２】
本発明に係るダイオキシン類の分析方法において、前記第１工程から前記第３工程をオンラインで行うこともできる。
【発明の効果】
【００２３】
請求項１〜５に記載のダイオキシン類の分析方法においては、高速溶媒抽出装置によって被検体中のダイオキシン類を抽出するので、従来の振とう抽出法やソックスレー抽出法よりも短時間で抽出することができる。また、自動クリーンアップ装置によって抽出液中の夾雑物を自動的に除去するので、効率よく夾雑物を除去できると共に、作業性が向上する。更に、濃縮液を溶媒除去大量試料注入装置を取付けた高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に供給するので、従来よりも濃縮液、すなわち、ダイオキシン類を大量に供給することができ、高精度に分析できる。
【００２４】
特に、請求項２記載のダイオキシン類の分析方法においては、溶媒除去大量試料注入装置の分析カラムは、液相が９０％ビスシアノプロピル／１０％フェニルシアノプロピルポリシロキサンからなるシアノプロピル基で形成された強極性のキャピラリーカラムであって、内径が０．１５〜０．２ｍｍかつ液相の厚みが０．０５〜０．１５μｍであるので、特に、低塩素数のダイオキシン類、例えば、４及び５塩化ジオキシンと、４〜６塩化ジベンゾフランを効率よく分離することができる。
【００２５】
請求項３記載のダイオキシン類の分析方法においては、多検体濃縮装置を用いて濃縮を行うので、複数のサンプルを同時に濃縮でき、処理時間を短縮することができる。
請求項４記載のダイオキシン類の分析方法においては、抽出液を自動クリーンアップ装置で精製した後、更にゲル浸透クロマトグラフィーを行うＧＰＣクリーンアップシステムで精製を行って、濃縮を行うので、被検体の性質に合わせて精製方法を選択できる。
請求項５記載のダイオキシン類の分析方法においては、第１工程から第３工程をオンラインで行うので、より作業効率が向上する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
続いて、添付した図面を参照しつつ、本発明を具体化した実施の形態につき説明し、本発明の理解に供する。
ここで、図１は本発明の第１の実施の形態に係るダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システムの説明図、図２は同ダイオキシン類の分析システムの自動クリーンアップ装置の説明図、図３（Ａ）、（Ｂ）はそれぞれ自動クリーンアップ装置に接続する多層シリカゲルカラム、活性炭カラムの説明図、図４は同ダイオキシン類の分析システムの多検体濃縮装置の要部説明図、図５は同ダイオキシン類の分析システムの溶媒除去大量試料注入装置の説明図、図６は本発明の第２の実施の形態に係るダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システムの説明図、図７は同ダイオキシン類の分析システムのＧＰＣクリーンアップシステムの説明図である。
【００２７】
図１〜図５を参照して、本発明の第１の実施の形態に係るダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システム（以下、単に「分析システム」ともいう）１０について説明する。
分析システム１０は、環境試料、例えば、所定量の水道原水を通過させたフィルターを被検体１１とし、被検体１１中のダイオキシン類（ポリ塩化ジベンゾ−パラ−ジオキシン（ＰＣＤＤｓ）、ポリ塩化ジベンゾフラン（ＰＣＤＦｓ）、及びコプラナーＰＣＢ（Ｃｏ−ＰＣＢ））を分析するものである。
【００２８】
図１に示すように、分析システム１０は、細かく粉砕して秤量した被検体１１を、高温かつ高圧力に保持して被検体１１中のダイオキシン類を有機溶媒（抽出溶媒）に抽出させて抽出液Ｂを作製する高速溶媒抽出装置１２と、抽出液Ｂ中の夾雑物を除去して精製した精製液Ｓ、Ｔを作製する自動クリーンアップ装置１３と、精製液Ｓ、Ｔを濃縮して濃縮液Ｕ、Ｖを作製する多検体濃縮装置１４と、濃縮液Ｕ、Ｖ中のダイオキシン類を分析する溶媒除去大量試料注入装置１５を取付けた高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６とを有している。以下、詳しく説明する。
【００２９】
高速溶媒抽出装置１２は、被検体１１及び有機溶媒Ａ（例えば、ヘキサン）を入れる抽出容器１８と、抽出容器１８内を高温（１００〜２００℃）にする図示しない加熱手段と、抽出容器１８内を高圧（１５００〜２０００ｐｓｉ）にする図示しない加圧手段と、抽出容器１８の下部に配置され、有機溶媒Ａにダイオキシン類を抽出した抽出液Ｂを貯留する貯留容器１９とを備えている。高速溶媒抽出装置１２では、例えば、最大長さが０．０１〜１０ｍｍ程度に細かく粉砕して、２０ｇ程度を秤量した被検体１１を、適量の珪藻土又は無水硫酸ナトリウムからなる分散剤（図示せず）と混合して、例えば、９９ｍＬ容量の抽出容器１８内に入れ、加熱手段及び加圧手段によって、抽出容器１８内を高温かつ高圧（例えば、１５０℃かつ１５００ｐｓｉ）とする高速溶媒抽出（Accelerated Solvent Extraction）を行って、ダイオキシン類を有機溶媒Ａに抽出し、生成した抽出液Ｂを貯留容器１９に貯留する。
【００３０】
分析システム１０では、有機溶媒Ａとしてヘキサンを使用したが、ヘキサン以外に、ベンゼン、アセトン、トルエン等も使用でき、これらを２種以上混合して使用することもできる。なお、分析システム１０においては、高速溶媒抽出装置１２として、例えば、ダイオネクス社製のＡＳＥ−３００を使用している。
また、分析システム１０では、高速溶媒抽出装置１２の貯留容器１９内に貯留された抽出液Ｂを、更に濃縮した後、硫酸を加えて有機物を取り除く硫酸処理を行っている。ここで、濃縮には、多検体濃縮装置、エバポレーター等を使用することができる。
【００３１】
図２に示すように、自動クリーンアップ装置１３は、上流側に配置される多層シリカゲルカラム２０及び下流側に配置される活性炭カラム２１を連結した連結カラム２２を有している。また、自動クリーンアップ装置１３は、多層シリカゲルカラム２０の上流側及び下流側にそれぞれ設けられる三方コック２３、２４と、２つの三方コック２３、２４に連結される迂回流路２５とを備えた流路切換ユニット２６を有している。なお、分析システム１０では、三方コック２４を三方コック２３の動きに合わせて手動で操作しているが、三方コック２３と連動させてもよい。
また、自動クリーンアップ装置１３は、三方コック２３の上流側に設けられるポンプ２７と、ポンプ２７の上流側に図示しない複数のバルブからなるバルブ機構２８を介して設けられる３つの有機溶媒Ｃ（ヘキサン）、有機溶媒Ｄ（ジクロロメタン含有ヘキサン）、及び有機溶媒Ｅ（トルエン）をそれぞれ貯留する溶媒用容器２９〜３１とを有している。
【００３２】
自動クリーンアップ装置１３では、バルブ機構２８及び流路切換ユニット２６によって、溶媒用容器２９〜３１内にそれぞれ貯留された有機溶媒Ｃ〜Ｅを、多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム２１へ供給する操作、又は多層シリカゲルカラム２０に供給せずに迂回流路２５を介して活性炭カラム２１に供給する操作を自動的に行うようになっている。
なお、分析システム１０では、自動クリーンアップ装置１３として、４検体の精製を同時に行うことができるＧＬＳ社製のＤＡＣ６９５を使用しているが、説明を簡単にするために、図２においては１検体の流路についてのみ記載している。
【００３３】
図３（Ａ）に示すように、多層シリカゲルカラム２０は、例えば、ＧＬＳ社製のＰＰ製４層クリーンアップカートリッジ（商品名）であって、上流側から順に無水硫酸ナトリウムＦ、シリカゲルＧ、１０％硝酸銀シリカゲルＨ、シリカゲルＧ、２２％硫酸シリカゲルＩ、４４％硫酸シリカゲルＪ、シリカゲルＧ、２％水酸化カリウムシリカゲルＫ、及びシリカゲルＧの層が形成され、その両端部にはポリエチレン製のフィルターＬがそれぞれ配置されている。なお、多層シリカゲルカラムとして、無水硫酸ナトリウム、１０％硝酸銀シリカゲル、及び４４％硫酸シリカゲルを備えた２層クリーンアップカートリッジ（商品名）を使用することもできる。
【００３４】
また、図３（Ｂ）に示すように、活性炭カラム２１は、例えば、ＧＬＳ社製の２層式カーボンシリカゲルカートリッジ（商品名）であって、上流側から順に炭素量が３重量％のカーボンシリカゲルＭ及び８重量％のカーボンシリカゲルＮの層が形成され、カーボンシリカゲルＭ、Ｎの両端部及び中間部に石英ウール及びガラス繊維ろ紙からなるフィルターＯが配置され、更に上流側のフィルターＯの上部にテフロン（登録商標）製のＯ−リングＰを介して、テフロン（登録商標）製のキャップＱが取付けられている。なお、活性炭カラムとして、５重量％のカーボンシリカゲルを備えた単層式カーボンシリカゲルカートリッジ（商品名）を使用してもよい。
【００３５】
ここで、まず、高速溶媒抽出装置１２で抽出した後、濃縮して硫酸処理を行った抽出液Ｂを連結カラム２２の上部に供給した後、ポンプ２７を駆動させると共に、バルブ機構２８及び流路切換ユニット２６を切り換えて、溶媒用容器２９から有機溶媒Ｃを多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム２１に供給して通過させる。抽出液Ｂ中の夾雑物（例えば、油脂成分や色素等）は、多層シリカゲルカラム２０に吸着されて除去され、多層シリカゲルカラム２０を通過したダイオキシン類（ＰＣＤＤｓ、ＰＣＤＦｓ、及びＣｏ−ＰＣＢ）を含む粗精製液Ｒが得られる。更に、粗精製液Ｒは活性炭カラム２１に供給され、粗精製液Ｒ中のダイオキシン類は、活性炭カラム２１に吸着（保持）され、粗精製液Ｒ中の夾雑物及びＣｏ−ＰＣＢ以外のＰＣＢは活性炭カラム２１から排出される。このように、有機溶媒Ｃは、抽出液Ｂ中の夾雑物及びダイオキシン類をそれぞれ多層シリカゲルカラム２０、活性炭カラム２１に吸着させることができるものを使用する。
【００３６】
次に、バルブ機構２８を操作して、多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム２１に溶媒用容器３０から有機溶媒Ｄを供給し、活性炭カラム２１に吸着されているモノオルトＣｏ−ＰＣＢを含む精製液Ｓを溶出させる。従って、精製液Ｓには有機溶媒Ｄが含まれている。このように、有機溶媒Ｄは、多層シリカゲルカラム２０に吸着している夾雑物は脱離させず、活性炭カラム２１に吸着しているモノオルトＣｏ−ＰＣＢを脱離することができるものを使用する。
【００３７】
更に、バルブ機構２８及び三方コック２３、２４を操作して、多層シリカゲルカラム２０を通さずに、迂回流路２５を介して活性炭カラム２１に溶媒用容器３１から有機溶媒Ｅを供給し、活性炭カラム２１に吸着されているモノオルトＣｏ−ＰＣＢ以外のダイオキシン類を含む精製液Ｔを溶出させる。従って、精製液Ｔには、有機溶媒Ｅが含まれている。なお、有機溶媒Ｅを多層シリカゲルカラム２０に供給した場合には、多層シリカゲルカラム２０に吸着された夾雑物が脱離するので、流路切換ユニット２６によって、多層シリカゲルカラム２０に有機溶媒Ｅを供給させないようにしている。このように、有機溶媒Ｅは、活性炭カラム２１に吸着しているモノオルトＣｏ−ＰＣＢ以外のダイオキシン類を脱離することができるものを使用する。
【００３８】
ここで、精製液Ｓ及び精製液Ｔは、自動クリーンアップ装置１３に設けられた貯留容器３２、３３にそれぞれ貯留される（図１参照）。また、分析システム１０では、精製液Ｓ、Ｔを別々に分画しているが、これらを混合してもよい。モノオルトＣｏ−ＰＣＢとモノオルトＣｏ−ＰＣＢ以外のダイオキシン類とを分離しない場合には、多層シリカゲルカラム２０に夾雑物を、活性炭カラム２１にダイオキシン類をそれぞれ吸着させた後、ダイオキシン類を同時に脱離させる有機溶媒（例えば、トルエン）を活性炭カラム２１に供給してもよい。
【００３９】
図４に示すように、多検体濃縮装置１４は、下部に縮径部３５を有する複数、例えば、６つの容器３６と、各容器３６の中央部分を加熱する加熱部３７と、各縮径部３５の近傍に配置され縮径部３５を冷却する冷却管３８とを備え、別々の容器３６に入れた精製液Ｓ、Ｔをそれぞれ加熱して濃縮し、濃縮液Ｕ、Ｖを作製する。濃縮液Ｕ、Ｖが溜まる縮径部３５は冷却管３８内に供給される冷却水によって冷却されるので、乾固し難くなっている。分析システム１０では、多検体濃縮装置１４として、例えば、ビュッヒ社製の多検体高密度濃縮装置シンコア・アナリスト（商品名）を使用している。
なお、多検体濃縮装置１４の代わりに、例えば、エバポレーター等を使用することができる。また、前記した精製及び濃縮の操作を、それぞれ１又は２回以上行ってもよい。
【００４０】
更に、濃縮液Ｕ中の有機溶媒Ｄ、及び濃縮液Ｖ中の有機溶媒Ｅを、高沸点の有機溶媒Ｗ（例えば、ノナン）にそれぞれ転溶する。特に、濃縮液Ｕに含まれる低沸点の有機溶媒Ｄを、高沸点の有機溶媒Ｗとすることにより、濃縮液Ｕが乾固し難くなり、ダイオキシン類の揮散を防ぐことができる。また、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６の注入口３９（図１、図５参照）の温度は、注入された試料（濃縮液Ｕ、Ｖ）を瞬間的に気化させるために、試料中の有機溶媒に合わせて高温（２００〜２５０℃）に設定するため、濃縮液Ｕ、Ｖに含まれる有機溶媒Ｄ、Ｅを、有機溶媒Ｗに揃えることにより、注入口３９の温度を測定試料毎に変更する必要がなくなる。有機溶媒Ｗとしては、デカンを使用してもよい。
【００４１】
溶媒除去大量試料注入装置１５は、濃縮液Ｕ、Ｖに含まれる有機溶媒Ｗを除去することで、濃縮液Ｕ、Ｖ、すなわち、ダイオキシン類を、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６に大量に注入する溶媒除去大量注入法を行う装置である。図５に示すように、溶媒除去大量試料注入装置１５は、注入口３９に注入された濃縮液Ｕ、Ｖ中の有機溶媒Ｗ及びダイオキシン類を時間分離（この際には有機溶媒Ｗが先に排出される）するプレカラム４０と、プレカラム４０で分離された有機溶媒Ｗを排出する溶媒除去部４１と、プレカラム４０から排出されたダイオキシン類を冷却して液体又は固体として捕集するコールドトラップ４２と、コールドトラップ４２の冷却を停止して捕集されたダイオキシン類を気化することによって供給されたダイオキシン類を各成分に時間分離する分析カラム４３とを有している。ここで、分析システム１０では、溶媒除去大量試料注入装置１５として、例えば、ＳＧＥ社製のＳＣＬＶ（商品名）を使用している。
【００４２】
分析カラム４３は、液相が９０％ビスシアノプロピル／１０％フェニルシアノプロピルポリシロキサンからなるシアノプロピル基で形成された強極性のキャピラリーカラムであり、しかも、内径が０．１５〜０．２ｍｍかつ液相の厚みが０．０５〜０．１５μｍである。分析カラム４３によって、４及び５塩化ジオキシンと、４〜６塩化ジベンゾフランとを高感度に測定することができる。また、分析システム１０では、分析カラム４３として、例えば、レステック社製のキャピラリーカラムであるＲｔｘ−２３３０を使用している。溶媒除去大量試料注入装置１５では、プレカラム４０としてＳＧＥ社製のＢＰＸ−５を使用している。
【００４３】
なお、６〜８塩化ジオキシンと、７及び８塩化ジベンゾフランと、ノンオルトＣｏ−ＰＣＢとを分析する場合には、溶媒除去大量試料注入装置１５の分析カラム４３をＳＧＥ社製のＢＰＸ−５に換えている。また、モノオルトＣｏ−ＰＣＢは、溶媒除去大量試料注入装置を使用せず、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６に、ＳＧＥ社製のＨＴ８又はＨＴ８−ＰＣＢを取付けて測定している。
【００４４】
図１に示すように、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６は、溶媒除去大量試料注入装置１５の分析カラム４３でダイオキシン類の各成分を時間分離するガスクロマトグラフ４５と、時間分離された各成分をイオン化し、磁場及び電場において二重（質量とエネルギー）収束させて、１００００以上の分解能で質量分離を行い、選択的イオンモニタリング（ＳＩＭ）法で測定する二重収束磁場型質量分析計４６とを有している。ここで、分析システム１０では、例えば、ガスクロマトグラフ４５としてアジレント社製のＨＰ６８９０Ｐｌｕｓを、二重収束磁場型質量分析計４６としてマイクロマス社製のＡｕｔｏＳｐｅｃＵＬＴＩＭＡを使用している。
【００４５】
次に、ダイオキシン類の分析システム１０を使用したダイオキシン類の分析方法について説明する。
（第１工程）
高速溶媒抽出装置１２によって、被検体１１を高温かつ高圧力に保持して被検体１１中のダイオキシン類を有機溶媒Ａに抽出させて抽出液Ｂを作製する。
【００４６】
（第２工程）
第１工程で得られた抽出液Ｂを多検体濃縮装置で濃縮した後、硫酸処理を行って抽出液Ｂ中の有機物を取り除く。次に、自動クリーンアップ装置１３の多層シリカゲルカラム２０の上流側に、硫酸処理を行った抽出液Ｂを供給した後、ポンプ２７を駆動させると共に、バルブ機構２８及び流路切換ユニット２６を切り換えて、溶媒用容器２９から有機溶媒Ｃを多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム２１を通過させ、抽出液Ｂ中の夾雑物を多層シリカゲルカラム２０に吸着させると共に、多層シリカゲルカラム２０を通過して抽出液Ｂ中の夾雑物が除去された粗精製液Ｒ中のダイオキシン類を活性炭カラム２１に吸着させる。この際に、多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム２１に吸着されない抽出液Ｂ中の夾雑物及びＣｏ−ＰＣＢ以外のＰＣＢを排出する。
【００４７】
更に、バルブ機構２８を操作して、溶媒用容器３０から有機溶媒Ｄを多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム２１に供給し、活性炭カラム２１に吸着されているモノオルトＣｏ−ＰＣＢを含む精製液Ｓを溶出させ、貯留容器３２に貯留する。次に、バルブ機構２８及び三方コック２３、２４を操作して、溶媒用容器３１から有機溶媒Ｅを、多層シリカゲルカラム２０を通さずに迂回流路２５を介して活性炭カラム２１に供給し、活性炭カラム２１に吸着されている残り（モノオルトＣｏ−ＰＣＢ以外）のダイオキシン類を含む精製液Ｔを溶出させ、貯留容器３３に貯留する。
更に、得られた精製液Ｓ、Ｔを多検体濃縮装置１４でそれぞれ濃縮して濃縮液Ｕ、Ｖとした後、濃縮液Ｕ、Ｖにそれぞれ含まれる有機溶媒Ｄ、Ｅを有機溶媒Ｗに転溶する。
【００４８】
（第３工程）
次に、４及び５塩化ジオキシン及び４〜６塩化ジベンゾフランを測定するために、プレカラム４０をＢＰＸ−５に、分析カラム４３をＲｔｘ−２３３０とした溶媒除去大量試料注入装置１５を高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６に取付ける。有機溶媒Ｗで転溶した濃縮液Ｖを注入口３９から注入して、４及び５塩化ジオキシン及び４〜６塩化ジベンゾフランを測定する。
また、６〜８塩化ジオキシンと、７及び８塩化ジベンゾフランと、ノンオルトＣｏ−ＰＣＢとを分析する場合には、溶媒除去大量試料注入装置１５の分析カラムをＳＧＥ社製のＢＰＸ−５に換え、有機溶媒Ｗで転溶した濃縮液Ｖを注入口３９から注入して測定する。
更に、モノオルトＣｏ−ＰＣＢを測定する場合には、溶媒除去大量試料注入装置１５を取り外し、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６に、ＨＴ８又はＨＴ８−ＰＣＢを取付け、注入口３９から濃縮液Ｕを供給して測定を行う。
【００４９】
図６及び図７を参照して、本発明の第２の実施の形態に係るダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システム５０について説明する。なお、ダイオキシン類の分析システム１０と同一の構成要素については同一の番号を付してその詳しい説明を省略する。
【００５０】
分析システム５０は、食品試料を被検体５１としている点と、活性炭カラム５２が低濃度の活性炭粉末（例えば、無水硫酸ナトリウムに対して０．１重量％となるように活性炭粉末を混合したもの）からなり、多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム５２を連結して連結カラム５３が形成されている点と、第２工程で自動クリーンアップ装置１３の連結カラム５３に有機溶媒Ｃを流さないで有機溶媒Ｄを流し、夾雑物及びモノオルトＣｏ−ＰＣＢを含む粗精製液Ｘを流出させ、この粗精製液Ｘをゲル浸透クロマトグラフィー（Gel Permeation Chromatography）を行うＧＰＣクリーンアップシステム５４で精製する点とが、分析システム１０と異なっている。
【００５１】
図７に示すように、ＧＰＣクリーンアップシステム５４は、一定量のサンプル（粗精製液Ｘ）を自動的に注入するオートサンプラー５５と、オートサンプラー５５から供給された粗精製液Ｘと有機溶媒Ｙ（例えば、アセトン）を一定の速度で供給するポンプ５６と、ポンプ５６によって供給された粗精製液Ｘ中のダイオキシン類と夾雑物とを分離するＧＰＣカラム５７と、ダイオキシン類と夾雑物との分離状況を所定の波長（例えば、２２０ｎｍ）で検知して波形で表示する紫外可視検出器５８と、分離された溶液を分画するフラクションコレクター５９とを備えている。
【００５２】
ＧＰＣカラム５７は、例えば、有機溶媒中の成分を分子の大きさによって分画可能なポリスチレン・ジビニルベンゼン共重合体からなり、自動クリーンアップ装置１３で粗精製された溶液（粗精製液Ｘ）中のダイオキシン類を精製できる。
ここで、分析システム５０では、ＧＰＣクリーンアップシステム５４として、ＧＬＳ株式会社製のＡＳＣ６９８（商品名）を使用し、ＧＰＣカラム５７として、ＧＬＳ株式会社製のＭＳｐａｋ ＧＦ−３１０ ４Ｄを使用している。
【００５３】
次に、ダイオキシン類の分析システム５０を使用したダイオキシン類の分析方法について説明する。
（第１工程）
食品を、例えば、最大長さが０．０１〜１０ｍｍ程度に細かく粉砕して、２０ｇ程度を秤量した被検体５１を、適量の珪藻土又は無水硫酸ナトリウムからなる分散剤（図示せず）と混合し、これらを抽出容器１８内に入れ、被検体５１中のダイオキシン類を高速溶媒抽出装置１２を使用して有機溶媒Ａに抽出させて抽出液Ｂを作製する。
【００５４】
（第２工程）
高速溶媒抽出装置１２で抽出した後、濃縮して硫酸処理を行った抽出液Ｂを自動クリーンアップ装置１３の多層シリカゲルカラム２０の上流側に供給した後、有機溶媒Ｄ（ジクロロメタン含有ヘキサン）を多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム５２に供給する。これによって、多層シリカゲルカラム２０に夾雑物を吸着させ、活性炭カラム５２にモノオルトＣｏ−ＰＣＢ以外のダイオキシン類を吸着させることができ、多層シリカゲルカラム２０及び活性炭カラム５２に吸着しない夾雑物とモノオルトＣｏ−ＰＣＢを含む粗精製液Ｘを連結カラム５３から流出させ、貯留容器３２に貯留する。
【００５５】
次に、有機溶媒Ｅを多層シリカゲルカラム２０を通さずに、迂回流路２５を介して活性炭カラム５２に供給し、活性炭カラム５２に吸着されている残り（モノオルトＣｏ−ＰＣＢ以外）のダイオキシン類を流出させた精製液Ｔを貯留容器３３に貯留する。
ここで、貯留容器３２に貯留されている粗精製液Ｘは、モノオルトＣｏ−ＰＣＢと夾雑物を含んでいるので、ＧＰＣクリーンアップシステム５４で精製して精製液Ｓを得る。精製液Ｓ、Ｔをそれぞれ多検体濃縮装置１４で濃縮して濃縮液Ｕ、Ｖを作製し、更に濃縮液Ｕ、Ｖを有機溶媒Ｗで転溶する。
【００５６】
（第３工程）
プレカラム４０をＢＰＸ−５とし、分析カラム４３をＲｔｘ−２３３０とした溶媒除去大量試料注入装置１５を高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６に取付けた後、有機溶媒Ｗで転溶した濃縮液Ｖを注入口３９から注入して、４及び５塩化ジオキシン及び４〜６塩化ジベンゾフランを測定する。また、溶媒除去大量試料注入装置１５の分析カラムをＳＧＥ社製のＢＰＸ−５に換え、有機溶媒Ｗで転溶した濃縮液Ｖを注入口３９から注入して、６〜８塩化ジオキシンと、７及び８塩化ジベンゾフランと、ノンオルトＣｏ−ＰＣＢとを測定する。更に、溶媒除去大量試料注入装置１５を取り外し、高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計１６に、ＨＴ８又はＨＴ８−ＰＣＢを取付け、注入口３９から濃縮液Ｕを供給して、モノオルトＣｏ−ＰＣＢの測定を行う。
【実施例】
【００５７】
次に、本発明の作用効果を確認するために行った実施例について説明する。
実施例として、本発明のダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システム、すなわち、高速溶媒抽出装置、自動クリーンアップ装置、ＧＰＣクリーンアップシステム、多検体濃縮装置、及び溶媒除去大量試料注入装置を取付けた高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計を使用して、被検体である食品（例えば、２０ｇ）中のダイオキシン類の分析を行った。また、比較例として、公定法（非特許文献１参照）を用いて食品（例えば、１００ｇ）中のダイオキシン類を分析した。なお、比較例において、ダイオキシン類の抽出は振とう抽出法で行った。
【００５８】
被検体からダイオキシン類を抽出して実施例及び比較例での回収率を比較した結果、実施例は、比較例と同等の４０〜１２０％となり、良好な結果が得られた。この際に抽出を行った時間は、実施例では３０分間、比較例では２時間となり、実施例では抽出時間を短縮できた。なお、比較例においてソックスレー抽出法を用いた場合には、１６時間以上かかる。また、実施例では、抽出に使用する有機溶媒の量が、比較例のおよそ１／４程度に減少し、コストを下げることができた。更に、実施例では、精製操作及び濃縮操作が自動的に行われるので、比較例よりも作業効率が向上した。
【００５９】
高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に注入されるサンプル（濃縮液）の量は、比較例では１〜２μＬであり、これに含まれるダイオキシン類の量は少ないが、実施例では、溶媒除去大量試料注入装置によって濃縮液中の有機溶媒を除去するので、１０μＬ程度と大量の濃縮液、すなわち、５〜１０倍程度のダイオキシン類を注入するため、高感度でダイオキシン類を検出することができた。
また、実施例では、分析カラムとして、液相が９０％ビスシアノプロピル／１０％フェニルシアノプロピルポリシロキサンからなるシアノプロピル基で形成された強極性で、内径が０．１５〜０．２ｍｍかつ液相の厚みが０．０５〜０．１５μｍであるキャピラリーカラム（例えば、Ｒｔｘ−２３３０）を使用しているので、４及び５塩化ジオキシンと、４〜６塩化ジベンゾフランとが高感度で分析できた。なお、実施例では、２，３，７，８−４塩化ジオキシン（ＴｅＣＤＤ）の標準品の注入量が０．８ｐｇ（ピコグラム）でＳ／Ｎ（signal-to-noise ratio、信号対雑音比）が６５０であり、比較例では、注入量が２ｐｇでＳ／Ｎが２５０であり、感度が６５倍程度向上した。
【００６０】
以上のように、ダイオキシン類の分析には、比較例において、大量の試料を用いて、長期間（約３０日）かかっていたが、実施例では、少量の試料を用いて、短期間（約５日間）でかつ高感度に測定することができた。また、実施例では、各操作が自動的に行われるので、作業効率が向上した。これによって、分析にかかる費用も低くすることが可能となった。
【００６１】
本発明は、前記した実施の形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を変更しない範囲での変更は可能であり、例えば、前記したそれぞれの実施の形態や変形例の一部又は全部を組み合わせて本発明のダイオキシン類の分析システム及び分析方法を構成する場合も本発明の権利範囲に含まれる。
例えば、前記実施の形態のダイオキシン類の分析方法において、被検体を水道原水を濾過したフィルター及び食品としたが、焼却灰、廃棄物、土壌、動植物（母乳、血液等）等の試料そのものや、排煙、排ガス、排水、浄水等を通過させたフィルター等としてもよい。また、第１工程から第３工程をオンラインで行ってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】本発明の第１の実施の形態に係るダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システムの説明図である。
【図２】同ダイオキシン類の分析システムの自動クリーンアップ装置の説明図である。
【図３】（Ａ）、（Ｂ）はそれぞれ自動クリーンアップ装置に接続する多層シリカゲルカラム、活性炭カラムの説明図である。
【図４】同ダイオキシン類の分析システムの多検体濃縮装置の要部説明図である。
【図５】同ダイオキシン類の分析システムの溶媒除去大量試料注入装置の説明図である。
【図６】本発明の第２の実施の形態に係るダイオキシン類の分析方法を適用したダイオキシン類の分析システムの説明図である。
【図７】同ダイオキシン類の分析システムのＧＰＣクリーンアップシステムの説明図である。
【符号の説明】
【００６３】
１０：ダイオキシン類の分析システム、１１：被検体、１２：高速溶媒抽出装置、１３：自動クリーンアップ装置、１４：多検体濃縮装置、１５：溶媒除去大量試料注入装置、１６：高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計、１８：抽出容器、１９：貯留容器、２０：多層シリカゲルカラム、２１：活性炭カラム、２２：連結カラム、２３、２４：三方コック、２５：迂回流路、２６：流路切換ユニット、２７：ポンプ、２８：バルブ機構、２９〜３１：溶媒用容器、３２、３３：貯留容器、３５：縮径部、３６：容器、３７：加熱部、３８：冷却管、３９：注入口、４０：プレカラム、４１：溶媒除去部、４２：コールドトラップ、４３：分析カラム、４５：ガスクロマトグラフ、４６：二重収束磁場型質量分析計、５０：ダイオキシン類の分析システム、５１：被検体、５２：活性炭カラム、５３：連結カラム、５４：ＧＰＣクリーンアップシステム、５５：オートサンプラー、５６：ポンプ、５７：ＧＰＣカラム、５８：紫外可視検出器、５９：フラクションコレクター
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検体を高温かつ高圧力に保持する高速溶媒抽出装置によって該被検体中のダイオキシン類を有機溶媒に抽出させて抽出液を作製する第１工程と、該抽出液中の夾雑物を多層シリカゲルカラム及び活性炭カラムを連結した連結カラムを備えた自動クリーンアップ装置によって除去して前記抽出液からダイオキシン類を精製した後、濃縮して濃縮液を作製する第２工程と、該濃縮液を溶媒除去大量試料注入装置を取付けた高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に供給し、前記濃縮液中のダイオキシン類を分析する第３工程とを有するダイオキシン類の分析方法であって、
前記自動クリーンアップ装置では、前記連結カラムの上流側に供給した前記抽出液中のダイオキシン類を前記活性炭カラムに吸着させると共に前記抽出液中の夾雑物を除去する有機溶媒を前記連結カラムに供給する操作と、前記活性炭カラムに吸着しているダイオキシン類を脱離させる有機溶媒を少なくとも前記活性炭カラムに供給する操作とを自動的に行うことを特徴とするダイオキシン類の分析方法。
【請求項２】
請求項１記載のダイオキシン類の分析方法において、前記溶媒除去大量試料注入装置は、前記濃縮液中の有機溶媒及び前記ダイオキシン類を分離するプレカラムと、該プレカラムで分離された有機溶媒を除去する溶媒除去部と、前記プレカラムで分離され前記溶媒除去部を通過したダイオキシン類を捕集するコールドトラップと、該コールドトラップで捕集したダイオキシン類を各成分に分離する分析カラムとを備え、
前記分析カラムは、液相が９０％ビスシアノプロピル／１０％フェニルシアノプロピルポリシロキサンからなるシアノプロピル基で形成された強極性のキャピラリーカラムであって、内径が０．１５〜０．２ｍｍかつ液相の厚みが０．０５〜０．１５μｍであることを特徴とするダイオキシン類の分析方法。
【請求項３】
請求項１及び２のいずれか１項に記載のダイオキシン類の分析方法において、前記第２工程では、前記抽出液を前記自動クリーンアップ装置で精製した後、多検体濃縮装置を用いて濃縮を行うことを特徴とするダイオキシン類の分析方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のダイオキシン類の分析方法において、前記第２工程では、前記抽出液を前記自動クリーンアップ装置で精製した後、更にゲル浸透クロマトグラフィーを行うＧＰＣクリーンアップシステムで精製を行って、濃縮を行うことを特徴とするダイオキシン類の分析方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のダイオキシン類の分析方法において、前記第１工程から前記第３工程をオンラインで行うことを特徴とするダイオキシン類の分析方法。
【請求項１】
被検体を高温かつ高圧力に保持する高速溶媒抽出装置によって該被検体中のダイオキシン類を有機溶媒に抽出させて抽出液を作製する第１工程と、該抽出液中の夾雑物を多層シリカゲルカラム及び活性炭カラムを連結した連結カラムを備えた自動クリーンアップ装置によって除去して前記抽出液からダイオキシン類を精製した後、濃縮して濃縮液を作製する第２工程と、該濃縮液を溶媒除去大量試料注入装置を取付けた高分解能ガスクロマトグラフ／質量分析計に供給し、前記濃縮液中のダイオキシン類を分析する第３工程とを有するダイオキシン類の分析方法であって、
前記自動クリーンアップ装置では、前記連結カラムの上流側に供給した前記抽出液中のダイオキシン類を前記活性炭カラムに吸着させると共に前記抽出液中の夾雑物を除去する有機溶媒を前記連結カラムに供給する操作と、前記活性炭カラムに吸着しているダイオキシン類を脱離させる有機溶媒を少なくとも前記活性炭カラムに供給する操作とを自動的に行うことを特徴とするダイオキシン類の分析方法。
【請求項２】
請求項１記載のダイオキシン類の分析方法において、前記溶媒除去大量試料注入装置は、前記濃縮液中の有機溶媒及び前記ダイオキシン類を分離するプレカラムと、該プレカラムで分離された有機溶媒を除去する溶媒除去部と、前記プレカラムで分離され前記溶媒除去部を通過したダイオキシン類を捕集するコールドトラップと、該コールドトラップで捕集したダイオキシン類を各成分に分離する分析カラムとを備え、
前記分析カラムは、液相が９０％ビスシアノプロピル／１０％フェニルシアノプロピルポリシロキサンからなるシアノプロピル基で形成された強極性のキャピラリーカラムであって、内径が０．１５〜０．２ｍｍかつ液相の厚みが０．０５〜０．１５μｍであることを特徴とするダイオキシン類の分析方法。
【請求項３】
請求項１及び２のいずれか１項に記載のダイオキシン類の分析方法において、前記第２工程では、前記抽出液を前記自動クリーンアップ装置で精製した後、多検体濃縮装置を用いて濃縮を行うことを特徴とするダイオキシン類の分析方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のダイオキシン類の分析方法において、前記第２工程では、前記抽出液を前記自動クリーンアップ装置で精製した後、更にゲル浸透クロマトグラフィーを行うＧＰＣクリーンアップシステムで精製を行って、濃縮を行うことを特徴とするダイオキシン類の分析方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のダイオキシン類の分析方法において、前記第１工程から前記第３工程をオンラインで行うことを特徴とするダイオキシン類の分析方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【公開番号】特開２００７−２２５２８３（Ｐ２００７−２２５２８３Ａ）
【公開日】平成１９年９月６日（２００７．９．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−４３２２３（Ｐ２００６−４３２２３）
【出願日】平成１８年２月２１日（２００６．２．２１）
【出願人】（５９１０６５５４９）福岡県 (121)
【公開日】平成１９年９月６日（２００７．９．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年２月２１日（２００６．２．２１）
【出願人】（５９１０６５５４９）福岡県 (121)
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