フコシルキトビオース誘導体の製造方法
【課題】
本発明は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体の効率的で大量調製にも対応可能な新規製造方法の提供、及び、該方法に利用可能な新規グルコサミン誘導体の提供を目的とする。
【解決手段】
下記の式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環する過程を含む、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する方法。さらに、本発明により製造されたフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を担持した高分子化合物。また、本発明の実施に利用可能なＮ−アセチルグルコサミン誘導体。
本発明は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体の効率的で大量調製にも対応可能な新規製造方法の提供、及び、該方法に利用可能な新規グルコサミン誘導体の提供を目的とする。
【解決手段】
下記の式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環する過程を含む、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する方法。さらに、本発明により製造されたフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を担持した高分子化合物。また、本発明の実施に利用可能なＮ−アセチルグルコサミン誘導体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体を利用したフコシルキトビオース誘導体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
花粉症などに代表されるアレルギー疾患は、近年、多くの人々に発症が認められており、その症状の続く期間が比較的長いこと、常にマスクなどにより外気の遮断に注意する必要があるなど、日常生活に対して多大な影響を及ぼしている。
アレルギーは、発生のメカニズムから主として４つのタイプに分類される。そのうち、原因抗原（アレルゲン）との接触から発症するまでの時間が比較的短い即時型としてI型、II型、III型、発症までの時間が比較的長い遅延型としてIV型の各タイプが知られている。これらのタイプは、アレルギーの発症過程の相違や原因となる因子の相違によって分類されている。I型アレルギーの反応因子はＩｇＥタイプの免疫グロブリンであり、アレルゲンが体内に侵入しＩｇＥ産生細胞を刺激することで産生される。産生されたＩｇＥは、肥満細胞、好塩基球に結合し、そのＩｇＥにさらにアレルゲンである抗原が結合すると、肥満細胞や好塩基球からヒスタミン、セロトニンなどの生理活性物質が放出される。放出されたヒスタミンなどの生理活性物質は、血管透過性の亢進、血管の拡張、平滑筋の収縮などを引き起こし、また、浮腫や掻痒感などを生じさせる。これらの症状はアレルゲンの侵入から短時間（１０分程度）で発症する。I型アレルギーとして知られている疾患には、花粉症、蕁麻疹、食物アレルギー、薬剤アレルギー、気管支喘息、アトピー性皮膚炎などがあり、反応が全身性であって急速な血圧低下を引き起こすアナフィラキシーショックを来す場合もある。
【０００３】
II型アレルギーは、ＩｇＧ、ＩｇＭタイプの免疫グロブリンが関与し、抗原性を有する自己の細胞に結合し、さらに白血球が関与し、細胞破壊を引き起こすものである。代表的な疾患としては、自己免疫性溶血性貧血、不適合輸血、悪性貧血などが知られている。
さらに、もう１つの即時型アレルギーであるIII型アレルギーは、ＩｇＧが関与し、抗原、抗体及び補体によって形成された免疫複合体が血管を介して組織に到達し、当該組織に傷害をもたらすものである。代表的な疾患としては、血清病、全身性エリトマトーデス、急性糸球体腎炎などが挙げられる。
そして、遅延型として知られるIV型アレルギーは、体液性免疫とは関係なく、Ｔ細胞、マクロファージなどが関与する細胞性免疫に関連する。IV型アレルギーは、Ｔ細胞の関与によって炎症反応が引き起こされるものであるが、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞のいずれが関与するかによって、炎症反応の発症機序が異なる。IV型アレルギーは即時型と異なり、発症までに１〜２日程度要する。代表的な疾患として、接触皮膚炎、シェーングレン症候群、ギラン・バレー症候群などが知られている。
【０００４】
I型アレルギー中でも花粉症の罹患者は年々増加の一途を辿っており、有効な治療方法の確立が期待されるところである。I型アレルギーの根治的治療法として、減感作療法などが現在行われており、このような治療法において使用される植物由来のアレルゲンの供給も必要とされている。植物のアレルゲンとしては、フコシルα（１→３）キトビオースを有する糖タンパク質が関係しているとの報告がなされているが、遊離型の糖鎖では、アレルゲンとＩｇＥの結合を有意には阻害していないとの報告などもあり、糖鎖以外にペプチド領域の構造などもＩｇＥとの結合には重要であろうとの見解も存在する。
しかし、フコシルα（１→３）キトビオースがアレルギー発症において重要な関連性を有する可能性は高く、この糖鎖を利用した新たなアレルギー治療法の開発が待たれるところである。フコシルα（１→３）キトビオースは、天然資源から大量に単離することが困難であり、また、フコシルα（１→３）キトビオースの合成方法も報告されてはいるが、報告されている方法では収率が低いため、本化合物をアレルゲンのソースとして利用するには、さらなる効率的で大量調製に適した方法論の確立が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｏｇｕｒｉら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２８：３１９６−３２０２，１９８０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明者らは、上記事情に鑑み、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体の製造方法につき鋭意研究を行った結果、従来の技術よりも収率の点で優れ、大量調製も可能な製造方法の確立に成功し、本発明を完成させた。
従って、本発明は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体の効率的で大量調製にも対応可能な新規製造方法の提供を目的とする。
さらに、本発明は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体の効率的で大量調製にも対応可能な新規製造方法に利用可能な新規グルコサミン誘導体の提供を目的とする。
また、本発明は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体を担持したポリマー、デンドリマー又は多糖の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
すなわち、本発明は、下記の式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環する過程を含む、下記の式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する方法である。
【化１】
【化２】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表し、Ｒ９は、水素原子、低級アルキル基を表す。]
また、本発明は、下記の式（ I ）、式（ II ）及び式（ III ）の化合物から式（ IV ）の化合物を合成し、式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環することにより、式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する方法である。
【化３】
【化４】
【化５】
【化６】
【化７】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表し、Ｒ９は、水素原子、低級アルキル基を表し、Ｌａｕは（ＣＨ２）１１ＣＨ３であり、ＴｒｏｃはＣＯＯＣＨ２ＣＣｌ３である。]
【０００８】
さらに、本発明は、式（ I ）の化合物と式（ II ）の化合物から下記の式（ VI ）の化合物を合成し、式（ VI ）の化合物と式（ III ）の化合物から式（ IV ）の化合物を合成し、式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環することにより、式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する方法である。
【化８】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表す。]
【０００９】
さらに、本発明は、式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を合成するために有用な式（ I ）で表されるアセチルグルコサミン誘導体もしくはその塩、又はそれらの溶媒和物もしくは水和物である。
【００１０】
また、本発明は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体を含む（担持する）ポリマー、デンドリマー又は多糖である。本発明のポリマー、デンドリマー又は多糖は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体（本発明の方法によって製造されるものを含む）が結合したものであれば特に限定はされない。例えば、本発明のポリマーとして、次式（ＶＩＩ）で表されるポリマーなどを挙げることができる。
【化９】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表し、Ｒ９は、水素原子、低級アルキル基を表す。また、ｘ及びｚは１以上の整数であり、ｙは０あるいは１以上の整数である。]
【００１１】
フコシルα（１→３）キトビオース誘導体の製造方法としては、Ｔｅｊｉｍａらにより報告された方法が知られている（非特許文献１）。しかし、この方法によると、最終産物であるフコシルα（１→３）キトビオース誘導体の収率が４６．６％と低く、大量調製を行う上で、費用、時間、労力の面で、大きな負担が予想される。
本発明の方法によれば、収率が７４％と高く、従来技術であるＴｅｊｉｍａらの方法よりも大幅に収率の向上を達成することができる。本発明の方法とＴｅｊｉｍａらの方法との相違は、合成中間体の無水環グルコサミンの無水環を開環するタイミングにある。発明者らは、上記式（ VI ）に示すように無水環の状態でフコースを導入した方が最終産物であるフコシルα（１→３）キトビオース誘導体の収率が顕著に上昇することを見出し、本発明を完成させた。すなわち、先行技術が報告された当時、無水環の化合物の３位の水酸基の求核性は低いとされており（非特許文献１を参照のこと）、無水環を保持した状態でのフコースの導入は効率が悪く、技術的にも困難であると考えられていた。さらに、フコース導入後の無水環の開環反応により、フコースとの結合が切断されてしまう可能性もあった。これに対し、本発明においては、むしろ、効率が悪いとされた無水環を保持した状態でのフコースの導入を試みることによって、最終産物の顕著な収率上昇を達成したのである。
さらに、本発明において使用される式（ I ）の化合物は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体の高い収率を達成する上で有効である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、高い収率で式（ V ）に示すフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を合成することが可能となる。
【００１３】
本発明により、植物アレルギー（例えば、花粉症など）のアレルゲンの研究材料を大量に供給することが可能となる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
式（ I ）〜式（ VII ）中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は、水素原子又は保護基として利用可能な置換基であればいずれであってもよく、同一でも異なってもよい。ここで保護基としては、当業者が選択可能なものであれば特に限定はされず、例えば、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基が好ましく、例えば、アセチル基、ベンジル基がより好ましい。
また、Ｒ９は、水素原子、炭素数１〜５の低級アルキル基であり、好ましくは、メチル基である。
【００１５】
本発明のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体の製造方法においては、例えば、式（ I ）、式（ II ）及び式（ III ）の化合物を使用することができる。
式（ II ）においてＲ４がベンジル基、Ｒ５が水素である化合物（９）は以下のスキームにより製造することができる。
【化１０】
【００１６】
式（ I ）において、Ｒ１〜Ｒ３がアセチル基である化合物（１５）は、例えば、以下のスキームにより製造することができる。
【化１１】
【００１７】
式（ III ）において、Ｒ６〜Ｒ８がベンジル基、Ｒ９がメチル基である化合物（２５）は、例えば、以下のスキームにより製造することができる。
【化１２】
【００１８】
式（ IV ）中、Ｒ１〜Ｒ３がアセチル基であり、Ｒ６〜Ｒ８がベンジル基、Ｒ９がメチル基である化合物は、例えば、上記化合物（９）、化合物（１５）及び化合物（２５）から合成することができ、結合の順番は特に限定されない。化合物（９）と化合物（１５）を先に結合させ、次いで、化合物（２５）を結合させる方法は、例えば、以下に示す工程により実施することができる。
【００１９】
化合物（９）と化合物（１５）は、例えば、以下のスキームにより結合することができる。
【化１３】
【００２０】
次に、化合物（１６）中、Ｔｒｏｃをアセチル基に置換し、アジド部分をアセトアミド基に変換し、ベンジル基を水素に置換して化合物（２０）を合成する。
【化１４】
【００２１】
化合物（２０）と化合物（２５）をグリコシル化反応により結合して、化合物（２６）を合成する。
【化１５】
得られた化合物（２６）の１，６−無水環を開環すれば、式（５）中、Ｒ１〜Ｒ３がアセチル基、Ｒ６〜Ｒ８がベンジル基、Ｒ９がメチル基である以下のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造することができる。１，６−無水環の開環方法としては、フコースとの結合を切断しない方法であれば、当業者に容易に選択し得るいかなる方法を使用することも可能であるが、例えば、無水酢酸存在下、酸で処理するアセトリシス（酢化分解、加酢酸分解）反応などにより実施することが好ましい。
【化１６】
次に本発明を具体例によって説明するがこれらの例によって本発明が限定されるものではない。
【００２２】
本発明の式（ＶＩＩ）の化合物は、例えば、以下のようにして合成することができる。化合物（２９）をオキサゾリン誘導体へ変換後、重合性アグリコンを導入し、脱保護するとモノマーが得られる。これを重合させれば式（ＶＩＩ）が得られる。
【化１７】
【実施例】
【００２３】
１．キトビオースユニットの合成
１，６−アンヒドロ−２，３−Ｏ−エンド−ベンジリデン−β−Ｄ−マンノピラノース（４）
【化１８】
窒素雰囲気下、６０℃で一晩乾燥させた Ｄ−マンノース（１）（５．０ｇ，２７．８ｍｍｏｌ）をピリジン（７５ｍＬ）に溶解し、氷冷下、ピリジン（２０ｍＬ）に溶解した塩化トシル（６．３６ｇ，３３．４ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、滴下終了後、室温に戻して攪拌した。１時間後、余分な塩化トシルを加水分解させるため、水（３５ｍＬ）を加え、（２）に変換した。精製することなく、氷冷下、１Ｍ 水酸化ナトリウムを反応溶液がｐＨ１０になるまで滴下した後、室温で攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、３Ｍ 塩化水素を反応溶液がｐＨ７になるまで滴下した。トルエン共沸によって濃縮し、熱酢酸エチル（１２５ｍＬ）を用いて３度デカンテーションを行い、濃縮することにより（３）（４．０８ｇ）の粗生成物を得た。
得られた（３）の粗生成物をＤＭＦに溶解し、ベンジルアルコールジメチルアセタール（６．８７ｍＬ）を滴下した後、ｐ−トルエンスルホン酸（０．４４ｇ）を加えた。減圧下、６０℃で３時間加熱攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、炭酸水素ナトリウムを反応溶液がｐＨ７になるように加え、反応を停止させた。トルエン共沸を行い、残渣をクロロホルムに希釈させ、氷水、飽和食塩水を用いて順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮した。エタノールを用いて結晶化を行い、目的の化合物（４）（１．７７ｇ，２５％）を得た。
Rf 0.33{10:1 (v/v) CHCl3-MeOH };
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 7.68-7.63 (m, 2H, aromatic), 7.42-7.38 (m, 3H, aromatic), 5.76 (s, 1H, CHPh), 5.54 (s, 1H, H-1), 4.60 (dd, 1H, J5,6a = 1.3 Hz, J5,6b = 6.3 Hz, H-5), 4.26-4.17 (m, 2H, H-2, H-3), 4.10-4.05 (m, 2H, H-4, H-6a), 3.88 (dd, 1H, J5,6b = 6.3 Hz, J6a,6b = 7.4 Hz, H-6b), 2.41 (d, 1H, OH)
【００２４】
４−Ｏ−アセチル−１，６−アンヒドロ−２，３−Ｏ−エンド−ベンジリデン−β−Ｄ−マンノピラノース（５）
【化１９】
窒素雰囲気下、化合物（４）（６．６７ｇ，２６．７ｍｍｏｌ）をピリジン（６０ｍＬ）に溶解し、氷冷下、無水酢酸（７．５６ｍＬ，８０．１ｍｍｏｌ）を滴下した後、室温に戻して一晩攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、氷冷下、メタノール（１０ｍＬ）を加え余分な無水酢酸を分解させ、濃縮した。残渣をクロロホルムに希釈させ、氷水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水を用いて順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮した。エタノールを用いてエタノールを用いて結晶化を行い、目的の化合物（５）（７．８０ｇ，１００％）を得た。
Rf 0.61{2:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 7.68-7.63 (m, 2H, aromatic), 7.42-7.38 (m, 3H, aromatic), 5.76 (s, 1H, CHPh), 5.54 (s, 1H, H-1), 5.12 (s, 1H, H-4), 4.60 (dd, 1H, J5,6a = 1.3 Hz, J5,6b = 6.2 Hz, H-5), 4.25-4.17 (m, 2H, H-2, H-3), 4.11 (dd, 1H, J5,6a = 1.5 Hz, J6a,6b = 7.7 Hz, H-6a), 3.88 (dd, 1H, J5,6b = 6.2 Hz, J6a,6b = 7.5 Hz, H-6b), 2.17 (s, 3H, OAc).
【００２５】
４−Ｏ−アセチル−１，６−アンヒドロ−３−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノース（６）
【化２０】
窒素雰囲気下、化合物（５）（１０．０ｇ，３４．２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、活性化したモレキュラーシーブス４Ａ（１０ｇ）を加えた。反応液にボラントリメチルアミン錯体（１７．５ｇ，２３９ｍｍｏｌ）を加え攪拌した後、氷冷下、塩化アルミニウム（３１．９ｇ，２３９ｍｍｏｌ）を少量ずつに分けて加え室温に戻して攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、セライト濾過を行った。濾液をクロロホルムに希釈させ、氷水、１Ｍ 塩化水素水、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮した。濃縮した残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［８：１（ｖ／ｖ）トルエン−酢酸エチル、シリカゲル ８００ｍＬ］で精製し、化合物（６）を（８．８９ｇ，８８％）を得た。
Rf 0.46{2:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 7.45-7.28 (m, 5H, aromatic), 5.37 (s, 1H, H-1), 4.98 (s, 1H, H-4), 4.86 (d, 1H, Jgem = 11.5 Hz, one of CH2Ph), 4.62 (d, 1H, Jgem = 11.7 Hz, one of CH2Ph), 4.56 (dd, 1H, J5,6a = 5.9 Hz, J5,6b = 1.1 Hz, H-5) 4.20 (d, 1H, J5,6b = 0.8 Hz, J6a,6b = 7.4 Hz, H-6a), 3.79(d, 1H, J5,6a = 6.0 Hz, J6a,6b = 7.4 Hz, H-6a), 3.71(m, 1H, H-2), 3.70 (dd, 1H, J3,4 = 6.1 Hz, J2,3 = 1.9 Hz, H-3), 3.05 (d, 1H, J2,OH = 10.3 Hz, OH), 2.15 (s, 3H, OAc).
【００２６】
４−Ｏ−アセチル−１，６−アンヒドロ−２−アジド−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（８）
【化２１】
アルゴン雰囲気下、化合物（６）（１３．０ｇ，４４．２ｍｍｏｌ）をジクロロエタン（８５ｍＬ）に溶解し、−１０℃でピリジン（７．１５ｍＬ，８８．４ｍｍｏｌ）を滴下した後、無水トリフルオロメタンスルホン酸（１１．２ｍＬ，６６．３ｍｍｏｌ）を滴下した。その後０℃に昇温させ、３時間攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、メタノールを加え余分な無水トリフルオロメタンスルホン酸を分解させた。反応液をクロロホルムに希釈させ、氷水、１Ｍ 塩化水素水、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮することにより、化合物（７）を得た。
アルゴン雰囲気下、残渣をＤＭＦ（１００ｍＬ）に溶解し、アジ化ナトリウム（８．６２ｇ，１３２ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、反応液をクロロホルムで希釈し、氷水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［６：１（ｖ／ｖ）ヘキサン−酢酸エチル、シリカゲル８００ｍＬ］で精製し、化合物（８）（１２．８ｇ，９１％）を得た。
Rf 0.50{8:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 7.42-7.30 (m, 5H, aromatic), 5.52 (s, 1H, H-1), 4.78 (s, 1H, H-4), 4.75 (d, 1H, Jgem = 12.1 Hz, one of CH2Ph), 4.68 (d, 1H, Jgem = 12.1 Hz, one of CH2Ph), 4.62 (m, 1H, H-5), 4.22 (dd, 1H, J5,6b = 1.1 Hz, J6a,6b = 7.4 Hz, H-6b), 3.82 (dd, 1H, J5,6a = 5.9 Hz, J6a,6b = 7.5 Hz, H-6a), 3.62 (quint, 1H, H-3), 3.26 (s, 1H, H-2), 2.15 (s, 3H, OAc).
【００２７】
１，６−アンヒドロ−２−アジド−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（９）
【化２２】
窒素雰囲気下、化合物（８）（１２．８ｇ，４０．０ｍｍｏｌ）をメタノール（１３０ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（０．２１ｇ，４．００ｍｍｏｌ）を加え室温で１時間攪拌した。ＴＬＣにて反応終了確認後、陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂ（Ｈ＋）を加え、綿濾過し、濃縮することにより化合物（９）（１１．８ｇ，１００％）を定量的に得た。
Rf 0.45{8:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 7.37-7.33 (m, 5H, aromatic), 5.45 (s, 1H, H-1), 4.63 (s, 2H, CH2Ph), 4.57 (m, 1H, H-5), 4.26 (dd, 1H, J5,6b = 1.1 Hz, J6a,6b = 7.3 Hz, H-6b), 3.81 (dd, 1H, J5,6a = 5.9 Hz, J6a,6b = 7.1 Hz, H-6a), 3.61 (s, 1H, H-3), 3.62 (m, 4H, H-4), 3.52 (s, 1H, H-2), 2.70 (br, 1H, OH).
【００２８】
１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−［ｐ−メトキシベンジリデン（アミノ）］−β−Ｄ−グルコピラノース（１２）
【化２３】
窒素雰囲気下、Ｄ−グルコサミン塩酸塩（１０）（３０．０ｇ，０．１４ｍｏｌ）を１Ｍ 水酸化ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）に溶解し、ｐ−アニスアルデヒド（２０．３ｍＬ）加え攪拌する。その後、氷冷下、２時間攪拌を続け、反応溶液を氷水で濾過し、続いてエタノールとジエチルエーテルの混合液［１：１（ｖ／ｖ）エタノール−ジエチルエーテル］で洗浄し、乾燥させることで化合物（１１）（３８．７ｇ，９３％）を得た。
窒素雰囲気下、得られた化合物（１１）（３８．７ｇ，０．１３ｍｏｌ）をピリジン（１５０ｍＬ）に溶解し、氷冷下、無水酢酸（９０ｍＬ）加え１時間攪拌した後、室温にして一晩攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、氷水に落とし、濾過洗浄し、乾燥させて化合物（１２）（４２．０ｇ，６５％）を得た。
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 8.16 (s, 1H, N=CH), 7.68 (m, 2H, aromatic), 6.94 (m, 1H, aromatic), 5.96 (d, 1H, J1,2 = 8.2 Hz, H-1), 5.48 (dd, 1H, J2,3 = 9.5 Hz, J3,4 = 9.6 Hz, H-3), 5.19 (dd, 1H, J3,4 = 9.9 Hz, J4,5 = 9.7 Hz, H-4), 4.43 (dd, 1H, J5,6b = 4.6 Hz, J6a,6b = 12.5 Hz, H-6b), 4.17 (dd, 1H, J5,6a = 2.0 Hz, J6a,6b = 12.5 Hz, H-6a), 4.02 (m, 1H, 5H), 3.84 (s, 3H, CH3), 3.50 (dd, J1,2 = 8.2 Hz, J2,3 = 9.5 Hz, H-2), 2.01, 2.04, 2.02 and 1.88 (each s, 12H, OAc).
【００２９】
１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン−ヒドロクロライド（１３）
【化２４】
化合物（１２）（４２．０ｇ，０．０９ｍｏｌ）を温めたアセトン（４２０ｍＬ）に溶解し、５Ｍ 塩化水素水（１９．０ｍＬ）加え、氷冷下、ジエチルエーテル（３２０ｍＬ）を加え、一晩攪拌した。反応溶液を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させて化合物（１３）（３４．５ｇ，１００％）を定量的に得た。
1H NMR (200 MHz, D2O): δ 5.82 (d, 1H, J1,2 = 8.79 Hz, H-1), 5.36 (dd, 1H, J2,3 = 10.5 Hz, J3,4 = 9.2 Hz, H-3), 5.01 (dd, 1H, J3,4 = 9.4 Hz, J4,5 = 9.3 Hz, H-4), 4.25 (dd, 1H, J5,6b = 4.6 Hz, J6a,6b = 13.3 Hz, H-6b), 4.08-3.99 (m, 2H, H-5, H-6a), 3.65 (dd, 1H, J1,2 = 8.8 Hz, J2,3 = 10.4 Hz, H-2), 2.05, 197, and 1.92 (each s, 12H, OAc).
【００３０】
１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルアミド）−β−Ｄ−グルコピラノース（１４）
【化２５】
化合物（１３）（３４．４ｇ，０．０９ｍｏｌ）を塩化メチレン（４００ｍＬ）とピリジン（８５ｍＬ）に溶解し、オルト蟻酸トリクロロエチル（ＴｒｏｃＣｌ）（３１ｍＬ，０．２７ｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣにて反応終了を確認後、メタノールを加え反応を止め、濃縮した。残渣をクロロホルムに希釈させ、１Ｍ 硫酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮した。酢酸エチル−ヘキサンで再結晶化を行い、化合物（１４）（４６．７ｇ，１００％）を定量的に得た。
Rf 0.60{1:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 5.77(d, 1H, J1,2 = 8.8 Hz, H-1), 5.45 (d, 1H, J2,NH = 9.3 Hz, NH), 5.33 (dd, 1H, J2,3 = 9.5 Hz, J3,4 = 9.9 Hz, H-3), 5.16 (dd, 1H, J3,4 = 9.5 Hz, J4,5 = 9.7 Hz, H-4), 4.73 (s, 2H, Cl3CCH2), 4.35 (dd, 1H, J5,6b = 4.6 Hz, J6b,6a = 12.5 Hz, H-6b), 4.16 (dd, 1H, J5,6a = 2.0 Hz, J6a,6b = 12.5 Hz, H-6a), 4.05-3.83 (m, 2H, H-2, H-5), 2.12(m, 12H, OAc).
【００３１】
ドデシル ３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルアミド）−β−Ｄ−グルコピラノース（１５）
【化２６】
窒素雰囲気下、化合物（１４）（２．０ｇ，３．８３ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍＬ）に溶解し、１−ドデカンチオール（２．７４ｍＬ，１１．５ｍｍｏｌ）を加え攪拌し、三フッ化ホウ素・ジエチルエーテル錯体（０．９６ｍＬ，７．７６ｍｍｏｌ）を滴下した。２．５時間攪拌した後、ＴＬＣにて反応終了を確認し、クロロホルムに希釈させ、氷水、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮した後、エタノールで再結晶化を行い、化合物（１５）（２．４８ｇ，９７％）を得た。
Rf 0.60{2:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.25 (dd, 1H, J3,4 = 9.8 Hz, J2,3 = 9.8 Hz, H-3), 5.16 (d, 1H, J2,NH = 9.3 Hz, NH), 5.11 (dd, 1H, J3,4 = 9.7 Hz, J4,5 = 9.7 Hz, H-4), 4.81 (d, 1H, Jgem =12.0 Hz, one of Cl3CCH2), 4.70 (d, 1H, Jgem =12.0 Hz, one of Cl3CCH2), 4.62 (d, 1H, J1,2 = 10.3 Hz, H-1), 4.28 (dd, 1H, J5,6a = 5.0 Hz, J6a,6b = 12.3 Hz, H-6a), 4.15 (dd, 1H, J5,6b = 2.3 Hz, J6a,6b = 12.3 Hz, H-6b), 3.81 (q, 1H, J2,3 = 10.0 Hz, J1,2 = 10.1 Hz, H-2), 3.72-3.68 (m, 1H, H-5), 2.72-2.66 (m, 2H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 2.08 and 2.03 (s, 9H, OAc) 1.61-1.56 (m, 2H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 1.41-1.26 (m, 18H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 0.91-0.86 (m, 1H, 6.6 Hz, SCH2CH2(CH2)9CH3).
【００３２】
４−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１，６−アンヒドロ−２−アジド−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（１６）
【化２７】
化合物（９）（０．３ｇ，１．０ｍｍｏｌ）と化合物（１５）（１．３３ｇ，２．０ｍｍｏｌ）を塩化メチレンに溶解し、活性化したモレキュラーシーブス４Ａ（１．５ｇ）を加え、氷冷下で攪拌した。窒素雰囲気下、ＮＩＳ（０．６７ｇ，３．０ｍｍｏｌ）とＴＭＳＯＴｆ（０．０５４ｍＬ，０．３ｍｍｏｌ）を加えた。−２０℃、２．５時間攪拌した後、トリエチルアミン（０．０４２ｍＬ）を加えて反応を止め、セライト濾過を行った。濾液をクロロホルムに希釈させ、氷水、１０％ チオ硫酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［４：１（ｖ／ｖ）トルエン−酢酸エチル、 シリカゲル２００ｍＬ］で精製した。イソプロピルアルコールで再結晶化を行い、化合物（１６）（０．６ｇ，８１％）を得た。
Rf 0.29{2:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 7.38-7.29 (m, 5H, phenyl), 5.61(t, 1H, J 9.9 Hz, NH), 5.47 (s, 1H, H-1), 5.33 (d, 1H, J2,NH’ = 6.4 Hz, NH’), 5.20 (d, 1H, J1’,2’ 7.6 Hz, H-1’), 5.07 (t, 1H, J4’,5’ = 9.8 Hz, H-4’), 4.79-4.57 (m, 5H, Cl3CCH2, PhCH2), 4.22 (dd, 1H, J5,6a’ = 4.6 Hz, J6a’,6b’ = 12.3 Hz, H-6a’), 4.14-4.10 (m, 2H, H-6a, H-6b’), 3.86 (s, 1H, H-1), 3.79 (s, 1H, H-4), 3.76 (m, 1H, H-6b), 3.07 (m, 1H, H-5’), 3.78 (m, 1H, H-2’), 3.81 (s, 1H, H-2), 2.04 and 2.03(s, 9H, OAc).
FAB-MS calcd for C28H33Cl3N4O13 [M+H]+ :739.1. Found: 739.2.
【００３３】
２．フコシルキトビオース誘導体の合成
２−アセトアミド−４−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１，６−アンヒドロ−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（１７）．
【化２８】
窒素雰囲気下、化合物（１６）（２．５ｇ，３．４ｍｍｏｌ）をピリジン（２５ｍＬ）に溶解し、氷冷下、チオ酢酸（１３ｍＬ，０．２７ｍｏｌ）を加え、攪拌した。３０分後、室温に戻し、一晩攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、反応溶液をトルエンで共沸させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［１：０（ｖ／ｖ）→２：１（ｖ／ｖ）→ ０：１（ｖ／ｖ）トルエン−酢酸エチル、シリカゲル２５０ｍＬ］で精製し、キトビオース誘導体（１７）（２．６８ｇ，１００％）を定量的に得た．
Rf 0.19{10:4:1 (v/v/v) CHCl3-EtOAc-MeOH};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ7.34-7.29 (m, 5H, phenyl), 6.77(d, 1H, J2,H = 8.1 Hz, NH), 5.61 (d, 1H, J2,NH’ 8.8 Hz, NH’), 5.28 (s, 1H, H-1), 5.16 (m, 2H, H-4’, H-3’), 4.84 (m, 2H, H-1’, ), 4.59 (m, 4H, Cl3CCH2, PhCH2), 4.31 (m, 3H, H-6a, H-6b’, H-6b), 4.05 (d, 1H, H-3), 3.83-3.72(m, 3H, H-4, H-5’,H-6b’), 3.65 (s, 2H, H-2), 2.07-2.03(m, 12H, OAc).
FAB-MS calcd for C30H37Cl3N2O14 [M+H]+ :755.1. Found: 755.5.
Anal. Calcd for C30H37Cl3N2O14: C, 47.66; H, 4.93; N, 3.71, Found: C, 47.76; H, 4.89; N, 3.51.
【００３４】
２−アセトアミド−４−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１，６−アンヒドロ−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（１９）
【化２９】
化合物（１７）（３．３ｇ，４．４ｍｍｏｌ）を酢酸（３３ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下、室温で亜鉛粉末（６．５ｇ）を加え、攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、セライト濾過により亜鉛粉末を除去し、濃縮することにより化合物（１８）を得た。
得られた化合物（１８）をピリジン（３５ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（３．１ｍＬ）を加え、室温で攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、氷冷下でメタノール（１ｍＬ）を加え、残っている無水酢酸をつぶした。反応溶液をトルエンで共沸させ、クロロホルムに希釈させ、氷水、１Ｍ 塩化水素水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［１０：４：１（ｖ／ｖ／ｖ）クロロホルム−酢酸エチル−メタノール、シリカゲル３００ｍＬ］で精製し濃縮することにより化合物（１９）（２．６ｇ，９７％）を得た。
Rf 0.24{10:4:1 (v/v/v) CHCl3-EtOAc-MeOH};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ7.36-7.27 (m, 5H, aromatic), 6.77 (d, 1H, J2,NH = 10.0 Hz, NH), 5.88 (d, 1H, J2,NH’ = 8.8 Hz, NH’), 5.30 (s, 1H, H-1), 5.13 (m, 2H, H-4’, H-3’), 4.81 (d, 1H, J1,2 = 12.0 Hz, H-1’β), 4.51 (m, 3H, H-5, PhCH2), 4.34 (d, 1H, J2,3 = 6.4 Hz H-2), 4.29 (m, 2H, H-6a’, H-6b), 4.19-4.11 (m, 1H, H-2’), 4.09 (dd, 1H, J5,6b’ = 2.4 Hz, J6a’,6b’ = 12.4 Hz, H-6b’), 3.79 (s, 1H, H-4), 3.76 (t, 1H, J2,3 = 6.5 Hz, H-3), 3.61 (m, 1H, H-5’), 3.53 (s, 1H, H-6a), 2.12, 2.08, 2.05, 2.03 and 2.00 (each s, 15H, OAc).
FAB-MS calcd for C29H38N2O13 [M+H]+ :623.2. Found: 623.5.
【００３５】
２−アセトアミド−４−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１，６−アンヒドロ−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（２０）
【化３０】
化合物（１９）（０．９５ｇ，１．５３ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶解し、パラジウム／炭素（４５０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下室温で６日攪拌し活性炭濾過を行った。濾液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ［５：４：１（ｖ／ｖ／ｖ）クロロホルム−酢酸エチル−メタノール、シリカゲル７５ｍＬ］で精製しエタノールで結晶化することにより、化合物（２０）（０．８１ｇ，１００％）を定量的に得た。
Rf 0.40{2:4:1 (v/v/v) CHCl3-EtOAc-MeOH};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ6.90 (d, 1H, J2,NH = 10.0 Hz, NH), 6.18 (d, 1H, J2’,NH’ = 9.2 Hz, NH’), 5.32 (s, 1H, H-1), 5.14 (m, 2H, H-3’, H-4’), 4.55 (m, 1H, H-5), 4.55 (m, 1H, J1’,2’ = 8.4 Hz, H-1’b), 4.31 (m, 2H, H-4, H-6a’), 4,24 (m, 2H, H-2’, H-2), 4.13 (dd, 1H, J5’,6b’ = 2.2 Hz, J6a’,6b’ = 11.8 Hz, H-6b’), 3.80 (m, 3H, H-3, H-6a, H-6b), 3.68 (ddd, 1H, J5’,6b’ = 2.2 Hz, H-5’), 3.50 (d, 1H, J3,OH = 5.6 Hz, OH), 2.13, 2.10, 2.06, 2.04 and 1.99 (each s, 15H, OAc).
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ171.89, 171.75, 170.93, 170.76 and 169.27 (-C=O of ester), 101.59(C-1), 99.76(C-1’), 74.98 (C-3), 72.52 (C-5), 72.07 (C-3’), 72.03 (C-5’), 71.09 (C-4’), 53.96 (C-2’), 50.77(C-2), 23.63 and 22.75 (-NHCOCH3), 20.78, 20.72 and 20.60 (-COOCH3).
FAB-MS calcd for C22H32N2O13 [M+H]+ :533.2. Found: 533.3.
Anal. Calcd for C22H32N2O13: C, 49.62; H, 6.06; N, 5.26, Found: C, 49.36; H, 5.84; N, 5.01.
【００３６】
１，２，３，４−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｌ−フコピラノース（２２）
【化３１】
Ｌ−フコース（２１）（１０ｇ，６１ｍｍｏｌ）をピリジン（８０ｍＬ）に溶解し、０℃ に冷却し、無水酢酸（７０ｍＬ）を滴下した。滴下終了後、室温で一晩攪拌した。反応溶液をトルエンで共沸させ、残渣に氷水を加えた。水層をクロロホルムで抽出し、続いて有機層を１Ｍ 塩化水素水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濃縮することにより化合物（２２）（２０．２ｇ，１００％）を定量的に得た。
Rf 0.55{ 1:1 (v/v) toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ6.35 (d, 1H, J1,2 = 1.8 Hz, H-1α), 5.71 (d, 1H, J3,4 = 8.1 Hz, H-1β).
【００３７】
ドデシル −ｌ，２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−チオ−Ｌ−フコピラノシド（２３）
【化３２】
化合物（２２）（２２ｇ）を１，２−ジクロロエタン（１２０ｍＬ）に溶解し、１−ドデカンチオール（２９ｍＬ）を加え、窒素雰囲気下、氷冷下で三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（１２ｍＬ）を滴下した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、クロロホルムに希釈させ、氷水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［８：１（ｖ／ｖ）ヘキサン−酢酸エチル、シリカゲル１Ｌ］で精製し濃縮することにより化合物（２３）（２４ｇ，８５％）を得た。
Rf 0.40{6:1 (v/v) Hexane-EtOAc};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ5.28 (d, 1H, J4,5 = 3.2 Hz, H-4), 5.24 (t, 1H, J1,2 = J2,3 = 10.0 Hz, H-2), 5.06 (dd, 1H, J2,3 = 10.0 Hz, J3,4 = 3.2 Hz, H-3), 4.45 (d, 1H, J1,2 = 10.0 Hz, H-1β), 3.61 (q, 1H, J5,6 = 6.4 Hz, H-5), 2.74 (m, 2H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 2.18, 2.07 and 1.99 (each s, 9H, OAc), 1.67 (m, 2H, CH2CH2(CH2)9CH3), 1.45-1.26 (m, 18H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 1.23 (d, 3H, J5,6 = 6.4 Hz, H-6), 0.90 (t, 3H, Jvic = 6.8 Hz SCH2CH2(CH2)9CH3).
【００３８】
ドデシル −１−チオ−β−Ｌ−フコピラノシド（２４）
【化３３】
化合物（２３）（３０．２ｇ，６３．６ｍｍｏｌ）をメタノール（１２０ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（１．０３ｇ，１９．１ｍｍｏｌ）加え、窒素雰囲気下、室温で一晩攪拌した後、陽イオン交換樹脂を用いて、ｐＨ調整を行い、濾過、濃縮することにより、化合物（２４）（２２．２ｇ，１００％）を定量的に得た。
【００３９】
ドデシル ２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−１−チオ−β−Ｌ−フコピラノシド（２５）
【化３４】
５５％ 水素化ナトリウム（１．２４ｇ）をヘキサンで数回洗浄した後、ヘキサンを減圧留去しアルゴン置換した後、ＤＭＦ（１０ｍＬ）を加えた。窒素雰囲気下、氷冷し、ＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶解した化合物（２４）（０．９４ｇ，２．７０ｍｍｏｌ）を滴下した。臭素化ベンジル（２．０４ｍＬ，１７．２ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、室温に戻して３時間半攪拌した。その後、氷冷下でメタノール（１０ｍＬ）をゆっくり滴下し、反応を停止させた。反応溶液をトルエンで共沸させ、酢酸エチルで希釈させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ［１０：１（ｖ／ｖ）ヘキサン−酢酸エチル、シリカゲル１００ｍＬ］で精製し、濃縮後、エタノールにて結晶化することにより化合物（２５）（１．３４ｇ，８１％）を得た。
Rf 0.40{6:1 (v/v) Hexane-EtOAc};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ7.41-7.26 (m, 15H, aromatic), 5.01 (d, 1H, Jgem = 12.0 Hz, one of CH2Ph), 4.91 (d, 1H, Jgem = 10.4 Hz, one of CH2Ph), 4.81 (d, 1H, Jgem = 10.0 Hz, one of CH2Ph), 4.76 (s, 1H, one of CH2Ph), 4.75 (s, 1H, one of CH2Ph), 4.71 (d, 1H, Jgem = 11.6 Hz, one of CH2Ph), 4.37 (d, 1H, J1,2 = 9.6 Hz, H-1β), 3.83 (t, 1H, J2,3 = 9.4 Hz, H-2), 3.61 (d, 1H, J3,4 = 2.4 Hz, H-4), 3.57 (dd, 1H, J2,3 = 9.2 Hz, J3,4 = 2.4 Hz, H-3), 3.49 (q, 1H, J5,6 = 6.4 Hz, H-5), 2.78-2.65 (m, 2H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 1.67-1.54 (m, 2H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 1.38-1.22 (m, 18H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 1.21 (d, 3H, J5,6 = 6.4 Hz, H-6), 0.90 (t, 3H, Jvic = 6.6 Hz, SCH2CH2(CH2)9CH3).
【００４０】
Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−１，６−アンヒドロ−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（２６）
【化３５】
化合物（２０）（１００ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）と化合物（２５）（２３２ｇ，０．３８ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（４．５ｍＬ）に溶解し、活性化したモレキュラーシーブス ４Ａ（０．３５ｍｇ）を加え、アルゴン雰囲気下、氷冷下で攪拌した。−１５℃に冷却し、ＮＩＳ（１２８ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）とＴＭＳＯＴｆ（０．０１ｍＬ，０．０６ｍｍｏｌ）を加え、２．５時間攪拌した後、トリエチルアミン（０．０１ｍＬ）を加えて反応を止め、セライト濾過を行った。濾液をクロロホルムに希釈させ、１０％ チオ硫酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［５：１ （ｖ／ｖ）トルエン−酢酸エチル、シリカゲル１１０ｍＬ］で精製し、濃縮することにより化合物（２６）（１１０ｍｇ，６２％）を得た。
Rf 0.55{5:4:1 (v/v/v) CHCl3-EtOAc-MeOH};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ7.41-7.27 (m, 15H, 3×phenyl), 6.66(d, 1H, J 9.87 Hz, NH), 5.80 (d, 1H, J2,NH 8.79 Hz, NH’’), 5.30 (s, 1H, H-1), 5.14-5.06 (m, 3H, H-1’, H-4’’, H-3’’), 4.98-4.60 (m, 6H, 3×PhCH2), 4.52 (d, 1H, J 8.23 Hz, H-1’’), 4.44 (d, 1H, J 5.13 Hz, H-5’), 4.28-4.042 (m, 6H, H-2, H-6a, H-3’, H-6b’, H-2’,H-2’’), 3.83-3.58(m, 6H, H-5’’, H-5, H-3, H-6a’, H-6b, H-4, H-4’’), 2.11-1.97(m, 15H, 5×Ac), 1.11(d, 3H, Me).
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ101(C-1), 100(C-1’’), 96(C-1’).
FAB-MS calcd for C49H33N2O17 [M+H]+ :949.4. Found: 949.6.
【００４１】
３．フコシルキトビオース誘導体の変換１
Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−１，６−アンヒドロ−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（２８）
【化３６】
化合物（２６）（３００ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶解し、パラジウム／炭素（１．０ｇ）を加え、水素雰囲気下室温で一晩攪拌し活性炭濾過を行った。濾液を濃縮することで化合物（２７）を得た。
続けて、残渣をピリジン（５．０ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（０．８ｍＬ）を加え一晩攪拌した。系中に氷水、クロロホルムを加え、水層をクロロホルムで抽出した後、有機層を１Ｍ 塩化水素水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、反応溶液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［５：４：１ （ｖ／ｖ／ｖ） クロロホルム−酢酸エチル−メタノール、シリカゲル ４０ｍＬ］で精製し、濃縮することで化合物（２８）（２３８ｍｇ，９４％）を得た。
Rf 0.79{5:1 (v/v) CHCl3-MeOH};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.75(d, 1H, J2,NH = 10.4 Hz, NH), 6.03 (d, 1H, J2’’,NH’’ = 9.2 Hz, NH’’), 5.38 (d, 1H, J1,2, = 3.6 Hz, H-1’a)), 5.26-5.23 (m, 3H, H-1, H-4’’, H-3’’), 5.13-5.05 (m, 3H, H-2’, ), 4.54 (d, 1H, J 1’’,2’’ = 8.0 Hz, H-1’’b), 4.50 (d, 1H, J = 5.6 Hz, H-5’) 4.29 (dd, 1H, J = 4.8 Hz, J = 12.4 Hz, H-6a’’), 4.23 (d, 1H, J = 5.6 Hz, H-2), 4.19 (d, 1H, J = 10.0 Hz, H-2’’), 4.14 (dd, 1H, J = 2.4 Hz, J = 12.4 Hz, H-6b’’), 4.06-4.02 (m, 2H, ,), 3.77-3.72 (m, 3H, H-5, H-3, H-6b, H-4’), 3.68-3.64 (m, 1H, H-5’’), 2.17, 2.16, 2.13, 2.09, 2.08, 2.06, 2.05, 2.00 (each s, 24H, 5×Ac), 1.13 (d, 3H, J = 6.4 Hz, H-6).
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ101.07 (C-1), 99.79 (C-1’’), 93.39 (C-1’).
MALDI-TOF-MS calcd for C49H48N2O20 [M+H]+ :805.3. Found: 805.2.
【００４２】
Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノース（２９）
【化３７】
化合物（２８）（５０ｍｇ，０．０６２ｍｍｏｌ）を無水酢酸（２．０ｍＬ）に溶解し、氷冷下、トリフルオロ酢酸（０．１４ｍＬ，０．１８ｍｍｏｌ）を加え一晩攪拌した。反応溶液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［５：４：１（ｖ／ｖ／ｖ） クロロホルム−酢酸エチル−メタノール、シリカゲル３０ｍＬ］で精製し、濃縮することで化合物（２９）（３６ｍｇ，６４％）を得た。
Rf 0.52{2:4:1 (v/v/v) CHCl3-EtOAc-MeOH};
FAB-MS calcd for C38H54N2O23 [M+H]+ :907.3. Found: 907.5.
【００４３】
４．フコシルキトビオース誘導体の変換２
Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジルα−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノース（３０）
【化３８】
化合物（２６）（７５ｍｇ，０．０７９ｍｍｏｌ）を無水酢酸（１．０ｍＬ）に溶解し、０℃でトリフルオロ酢酸（０．１８ｍＬ）を加え、５時間攪拌した。トリエチルアミン（０．３２ｍＬ）を加え反応を止め、トルエン共沸により濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［１５：１４：１（ｖ／ｖ／ｖ）クロロホルム−酢酸エチル−メタノール、 シリカゲル３０ｍＬ］で精製し、濃縮することにより化合物（３０）（４７ｍｇ，５７％）を得た。
Rf 0.46{5:4:1 (v/v/v) CHCl3-EtOAc-MeOH};
FAB-MS calcd for C53H66N2O20 [M+H]+ :1051.4. Found: 1051.8.
【００４４】
Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノース（２９）
【化３９】
化合物（３０）（４０ｍｇ，０．０３８ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１ｍＬ）に溶解し、パラジウム／炭素（３０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下室温で３日攪拌し活性炭濾過を行った。濾液を濃縮することにより化合物（３１）を得た。
続けて、残渣をピリジン（１ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（０．２ｍＬ）を加え攪拌した。反応溶液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［５：４：１（ｖ／ｖ／ｖ） クロロホルム−酢酸エチル−メタノール、シリカゲル１０ｍＬ］で精製し、濃縮することにより化合物（２９）（２６ｍｇ，７５％）を得た。
FAB-MS calcd for C38H54N2O23 [M+H]+ :907.3. Found: 907.5.
【００４５】
５．フコシルキトビオースポリマーの合成
w−[（１−オキソ―２−プロペニル）アミノ]ヘキシル Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（３２）
フコシルキトビオース完全アセチル体（３０）（１５０ｍｇ，１６５μｍｏｌ）を１，２-ジクロロエタン（１．０ｍＬ）に溶解させ、アルゴン置換し、０℃でトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（３３μＬ，１８２μｍｏｌ）を加え５０℃で２．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応を確認したところあまり進んでいなかったのでトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（１５μＬ，８２．５μｍｏｌ）を加え、５０℃で２時間撹拌した。ここで更に、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（１０μＬ，５５μｍｏｌ）を加え、５０℃で３０分撹拌した。氷冷下、トリメチルアミン（４．８４ｍＬ，３４．７ｍｍｏｌ）を加え、反応を停止させ、反応液を濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル １５ｇ、クロロホルム：酢酸エチル：メタノール：トリメチルアミン＝１０００：４００：１００：５）で精製することにより、目的のオキサゾリン体（３１）（１３６ｍｇ，９７．１％）を得た。
Rf 0.21 [2:4:1 (v/v/v) chloroform-ethyl acetate-methanol];
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ6.00 (d, 1 H, JNH’,2 = 9.5 Hz, NH’), 5.93 (d, 1 H, J1,2 = 6.4 Hz, H-1), 5.41 (d, 1 H, J1’’,2’’ = 4.0 Hz, H-1’’a), 5.31-5.26 (m, 2 H, H-4’’, H-3’’), 5.23 (t, 1 H, H-3’), 5.11 (dd, 1 H, J2’,3’ = 2.0 Hz, H-2’), 4.32-4.08 (m, 6 H, H-6b’, H-6b, H-5’’, H-6a’, H-6a, H-2), 3.92-3.85 (m, 1 H, H-2’), 3.69-3.64 (m, 2 H, H-4, H-5’), 3.71-3.33 (m, 1 H, H-5), 2.17, 2.15, 2.06, 2.03, 1.98 and 1.92 (each s, 18 H, 6×OAc), 2.08 (d, 3 H, CH3), 1.98 and 1.92 (each s, 6H, 2×NHAc), 1.18 (d, 3 H, J5’’,6’’ = 6.8 Hz, H-6’’);
【００４６】
【化４０】
オキサゾリン体（３１）（６７．９ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）とアクリルアミドアルコール（３４ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）を１，２-ジクロロエタン（１．０ｍＬ）に溶解させ、室温でｐ-トルエンスルホン酸ピリジン塩（２．０ｍｇ，８．０μｍｏｌ）を加え９０℃で加熱還流させながら２時間撹拌した。氷冷し、トリエチルアミン（０．２ｍＬ）を加え中和し、トルエンを加えて溶媒を減圧留去した。残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（４０ｇ、クロロホルム：酢酸エチル：メタノール＝１０：９：１．５）で精製し、更にフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（４０ｇ、クロロホルム：メタノール＝１１：１）で精製することによりフコシルキトビオース保護体モノマー（３２）（５５．４ｍｇ，６７．９％）を白色泡状粉末として得た。
Rf 0.37 [2:4:1 (v/v/v) chloroform-ethyl acetate-methanol]; IR (neat) 2926 (nC-H) 1748 (nC=O) 1661 (nNHC=O) 1626 (nC=C) 1537 (δN-H) 1233 (nC-N) 1045 (nC-O-C) cm-1;
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ6.72 (dd, 1 H, JNH,2 = 9.5 Hz, NH), 6.33 (dd, 1 H, Jvic(trans) = 17.0 Hz, Jgem = 1.4 Hz, one of -CH=CH2), 6.22 (br t, 1 H, J = 5.4 Hz, -NHCOCH=CH2), 6.18 (dd, 1 H, Jvic(trans) = 17.0 Hz, Jvic(cis) = 10.2 Hz, -CH=CH2), 5.66 (dd, 1 H, Jvic(cis) = 10.2 Hz, Jgem = 1.4 Hz, one of -CH=CH2), 5.42 (d, 1 H, J1’’,2’’ = 3.8 Hz, H-1’’a), 5.31-5.28 (m, 2 H, H-4’’, H-3’’), 5.13 (m, 3 H, H-2’’, H-3’, H-4’), 4.53-4.37 (m, 5 H, H-5’’, H-6a, H-1’’b, -OCH2), 4.36 (d, 1 H, J1,2 = 8.4 Hz, H-1b), 4.17 (dd, 1 H, Jgem = 1.6 Hz, J5,6b = 12.4 Hz, H-6b), 4.11-4.06 (m, 2 H, H-2’, H-2), 3.96 (t, 1H, J3,4 = 5.7 Hz, H-4), 3.84 (t, 1 H, J3,4 = 5.7 Hz, H-3), 3.80-3.71 (m, 2 H, H-6’b, H-5), 3.67-3.64 (m, 1 H, H-5’), 3.44-3.27 (m, 3 H, H-6’a, -CH2NHCO-), 2.18, 2.16, 2.14, 2.11, 2.09, 2.05, 2.04 and 2.03 (each s, 21 H, 7×OAc), 1.96 (s, 6H, 2×NHAc), 1.58-1.49 (m, 4 H, -OCH2CH2CH2CH2CH2CH2NHCO-), 1.42-1.30 (m, 4 H, -OCH2CH2CH2CH2CH2CH2NHCO-), 1.20 (d, 3 H, J5’’,6’’ = 6.8 Hz, H-6’’);
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δd 171.40, 170.77, 170.65, 170.64, 170.61, 170.49, 169.87 and 169.19 (-C=O of ester), 165.71 (-C=O of amide), 130.99 (-CH=CH2), 126.28 (-CH=CH2), 100.98 (C-1), 100.09 (C-1’), 95.15 (C-1’’), 73.75 (C-4), 73.57 (C-3), 72.82 (C-5), 72.49 (C-5’), 72.25 (C-4’), 71.36 (C-4’’), 68.91 (C-6’), 67.92 (C-3’), 67.86 (C-3’’), 67.82 (C-2’’), 65.02 (C-5’’), 63.69 (-OCH2-), 61.61 (C-6), 53.97 (C-2’), 51.31 (C-2), 38.99 (-CH2NH-), 29.12 and 28.80 (-OCH2CH2-, -CH2CH2NH-), 26.08 and 25.34 (-OCH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2NH-), 23.27 and 23.13 (-NHCOCH3), 20.97, 20.82, 20.66, 20.64 and 20.55 (-COOCH3), 15.84 (C-6’’) ;
MALDI-TOF-MS calcd for C45H67N3O23 [M+Na]+: 1040.406.269. Found: 1040.384.
【００４７】
w−[（１−オキソ―２−プロペニル）アミノ]ヘキシル Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（α−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（３３）
【化４１】
フコシルキトビオースモノマー保護体（３２）（６６ｍｇ，６４μｍｏｌ）をメタノール（２．５ｍＬ）に溶解させ、０．１Ｍナトリウムメトキシド/メタノール溶液（０．４５ｍＬ）を加え、室温で４時間撹拌した。強酸性陽イオン交換樹脂を加え、中和を行い、綿ろ過によってイオン交換樹脂を取り除き、ろ液を濃縮した。残渣を分取型リサイクルＨＰＬＣ（カラム ＪＡＩＧＥＬ-Ｗ５２５； 溶媒 メタノール）で精製し、濃縮することによりフコシルキトビオース脱保護モノマー（３３）（４５ｍｇ，９５．５％）を得た。
Rf 0.47 [3:3:1 (v/v/v) chloroform-methanol-water]; IR (KBr) 3414 (nO-H) 2937 (nC-H) 1657 (nNHC=O) 1628 (nC=C) 1557 (δN-H) 1047 (nC-O-C) cm-1;
1H NMR (400 MHz, D2O): δ6.21 6.18 (dd, 1 H, Jvic(trans) = 17.1 Hz, Jvic(cis) = 10.0 Hz, -CH=CH2), 6.14 (d, 1 H, Jvic(trans) = 17.0 Hz, one of -CH=CH2), 5.71 (d, 1 H, Jvic(cis) = 10.0 Hz, one of -CH=CH2), 5.09 (d, 1 H, J1’’,2’’ = 3.6 Hz, H-1’’a), 4.73-4.68 (m, 1 H, H-5’’), 4.49 (d, 1H, J1,2 = 8.0 Hz, H-1b), 4.44 (d, 1 H, J1’,2’ = 7.6 Hz, H-1’b), 3.96-3.35 (several m, 16 H, H-2, H-3, H-4, H-5, H-6a, H-6b, H-3', H-4', H-5', H-6'a, H-6'b, H-2", H-3", H-4", OCH2-), 3.25-3.16 (m, 3 H, H-2', -CH2ND-), 2.00 and 1.97 (each s, 6 H, NDAc), 1.55-1.44 (m, 4 H, OCH2CH2-, -CH2CH2ND-), 1.34-1.25 (m, 4 H, -OCH2CH2CH2CH2CH2CH2NHCO-), 1.24 (d, 3 H, J5'',6'' = 6.4 Hz);
13C NMR (100 MHz, D2O): δ 174.55, 174.06 and 168.36 (-C=O of amide), 129.99 (-CH=CH2), 126.87 (-CH=CH2), 100.89 (C-1), 100.35 (C-1’), 98.45 (C-1’’), 75.91, 75.26, 74.79, 73.55, 71.96, 70.62, 70.43, 69.12, 67.62, 66.61, 61.51, 59.87, 55.72, 55.61, 39.28 (-CH2ND-), 28.40 and 28.19 (-CH2CH2ND-, -OCH2CH2-), 25.60 and 24.66 (-CH2CH2CH2ND-, -OCH2CH2CH2-), 22.19 and 22.01 (-NDCOCH3), 15.41 (C-6’’);
MALDI-TOF-MS calcd for C31H53N3O16 [M+Na]+: 746.332. Found: 746.286.
【００４８】
フコシルキトビオースポリマー（３４）
【化４２】
【００４９】
フコシルキトビオースホモポリマー（３４ａ）（ｘ：ｙ：ｚ＝１：０：２９）
フコシルキトビオース脱保護体モノマー（３３）（２８．０ｍｇ，３８．７μｍｏｌ）を脱気した脱イオン水−エタノール（ｖ／ｖ＝１：１，０．３ｍＬ）に溶解させ、約３０分間脱気した。アルゴン雰囲気下、室温でＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラエチルメチレンジアミン（１．１５μＬ，７．７３μｍｏｌ）と過硫酸アンモニウム（０．８８ｍｇ，３．８７μｍｏｌ）を加え、５０℃に昇温し６時間撹拌した。０．０２Ｍピリジン／酢酸緩衝液（０．１ｍＬ）を加え反応を停止させ、ゲルろ過（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ-５０，溶媒 脱イオン水）で低分子量域を除き、凍結乾燥することによりフコシルキトビオースポリマー（３４ａ）（２４．０ｍｇ，８５．７％）を白色凍結乾燥粉として得た。
Mn 13 kDa, Mw 21 kDa, Mw/Mn 1.57;
1H NMR (400 MHz, D2O): δ5.11 (br s, 1 H, H-1’’a), 4.90-4.70 (m, 1 H, H-5’’), 4.52-4.48 (br d, 2 H, H-1, H-1’), 3.95-3.38 (several m, 16 H, H-2, H-3, H-4, H-5, H-6a, H-6b, H-3’, H-4’, H-5’, H-6’a, H-6’b, H-2’’, H-3’’, H-4’’, OCH2-), 3.25-3.06 (m, 3 H, H-2', -CH2ND-), 2.13-2.00 (m, 1 H, -CH-(sugar)-CH2-), 2.04 and 2.01 (each s, 6 H, NDAc), 1.58-1.40 (m, 6 H, OCH2CH2-, -CH2CH2ND-, -CH-(sugar)-CH2-), 1.34-1.23 (m, 7 H, -OCH2CH2CH2CH2CH2CH2NDCO-, H-6’’);
13C NMR (100 MHz, D2O): δ174.40 and 173.77 (-C=O of amide), 100.87, 100.35, 98.48, 75.93, 75.31, 74.84, 73.58, 71.99, 70.64, 70.36, 69.16, 67.68, 66.61, 61.53, 59.93, 55.74, 55.61, 39.52, 28.63, 26.06, 24.85, 22.43, 22.20, 15.55;
【００５０】
フコシルキトビオースポリマー（３４ｂ）（ｘ：ｙ：ｚ＝１：５：２１４）
フコシルキトビオース脱保護体モノマー（３３）（２０．０ｍｇ，２７．６μｍｏｌ）とアクリルアミド（９．８ｍｇ，１３８μｍｏｌ）を脱気した脱イオン水−エタノール（ｖ／ｖ＝１：１，０．２ｍＬ）に溶解させ、約３０分間脱気した。アルゴン雰囲気下、室温でＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラエチルメチレンジアミン（０．８９μＬ，５．５２μｍｏｌ）と過硫酸アンモニウム（１．２６ｍｇ，２．７６μｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。０．０２Ｍピリジン／酢酸緩衝液（０．２ｍＬ）を加え反応を停止させ、ゲルろ過（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ-５０，溶媒 脱イオン水）で低分子量域を除き、凍結乾燥することによりフコシルキトビオースポリマー（３４ｂ）（２０．６ｍｇ，９５．８％）を白色凍結乾燥粉として得た。
Mn 157 kDa, Mw 214 kDa, Mw/Mn 1.38;
1H NMR (400 MHz, D2O): δ5.09 (d, 1 H, J1’’,2’’ = 3.6 Hz, H-1’’a), 4.90-4.68 (m, 1 H, H-5’’), 4.50 (d, 1 H, J1,2 = 8.4 Hz, H-1b), 4.45 (d, 1 H, J1’,2’ = 7.6 Hz, H-1’b), 3.96-3.35 (several m, 16 H, H-2, H-3, H-4, H-5, H-6a, H-6b, H-3’, H-4’, H-5’, H-6’a, H-6’b, H-2’’, H-3’’, H-4’’, OCH2-), 3.25-3.16 (m, 3 H, H-2’, -CH2ND-), 2.35-2.05 (m, 6 H, -CH-(sugar)-CH2-, -CH-(ND2)-CH2-), 2.01 and 1.98 (each s, 6 H, NDAc), 1.76-1.40 (m, 16 H, -OCH2CH2-, -CH2CH2ND-, -CH-(sugar)-CH2-, -CH-(ND2)-CH2-), 1.33-1.25 (m, 4 H, -OCH2CH2CH2CH2CH2CH2NDCO-), 1.24 (d, 3 H, J5'',6'' = 6.8 Hz);
13C NMR (100 MHz, D2O): δ 180.10 175.23 and 174.73 (-C=O of amide), 101.63, 101.07, 99.19, 76.63, 75.99, 75.54, 74.27, 72.70, 71.34, 71.21, 69.85, 68.35, 67.32, 62.23, 60.61, 56.44, 56.32, 42.78, 42.40, 40.05, 36.65, 35.49, 29.21, 29.00, 26.55, 22.99, 22.77, 16.16;
【００５１】
フコシルキトビオースポリマー（３４ｃ）（ｘ：ｙ：ｚ＝１：１０：１４１）
フコシルキトビオース脱保護体モノマー（３３）（１５．０ｍｇ，２０．７μｍｏｌ）とアクリルアミド（１４．７ｍｇ，２０７μｍｏｌ）を脱気した脱イオン水-エタノール（ｖ／ｖ＝１：１，０．４ｍＬ）に溶解させ、約１５分間脱気した。アルゴン雰囲気下、室温でＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラエチルメチレンジアミン（０．６２μＬ，４．１４μｍｏｌ）と過硫酸アンモニウム（０．４７ｍｇ，２．０７μｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。０．０２Ｍピリジン／酢酸緩衝液（０．２ｍＬ）を加え反応を停止させ、ゲルろ過（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ-５０，溶媒 脱イオン水）で低分子量域を除き、凍結乾燥することによりフコシルキトビオースポリマー（３４ｃ）（２５．１ｍｇ，８４．５％）を白色凍結乾燥粉として得た。
Mn 136 kDa, Mw 207 kDa, Mw/Mn 1.52;
1H NMR (400 MHz, D2O): δ 5.11 (d, 1 H, J1’’,2’’ = 3.6 Hz, H-1’’a), 4.72-4.65 (m, 1 H, H-5’’), 4.51 (d, 1 H, J1,2 = 8.0 Hz, H-1b), 4.47 (d, 1 H, J1’,2’ = 8.0 Hz, H-1’b), 3.95-3.37 (several m, 16 H, H-2, H-3, H-4, H-5, H-6a, H-6b, H-3’, H-4’, H-5’, H-6’a, H-6’b, H-2’’, H-3’’, H-4’’, OCH2-), 3.24-3.16 (m, 3 H, H-2’, -CH2ND-), 2.35-2.08 (m, 11 H, -CH-(sugar)-CH2-, -CH-(ND2)-CH2-), 2.02 and 2.00 (each s, 6 H, NDAc), 1.78-1.43 (m, 30 H, -OCH2CH2-, -CH2CH2ND-, -CH-(sugar)-CH2-, -CH-(ND2)-CH2-), 1.33-1.25 (m, 4 H, -OCH2CH2CH2CH2CH2CH2NDCO-), 1.25 (d, 3 H, J5'',6'' = 6.4 Hz);
13C NMR (100 MHz, D2O): δ 180.09 175.21 and 174.72 (-C=O of amide), 101.62, 101.06, 99.18, 76.62, 75.98, 75.53, 74.27, 72.69, 71.33, 71.19, 69.84, 68.34, 67.31, 62.22, 60.59, 56.43, 56.31, 42.79, 42.39, 40.05, 36.52, 35.53, 29.20, 28.98, 26.53, 25.39, 22.98, 22.76, 16.14.
【００５２】
【表１】
【００５３】
６．フコシルキトビオースポリマーとＷＧＡレクチンとの結合評価
フコシルα（１→３）キトビオースの三糖構造は、植物に特徴的な構造であるが、これを担持するポリマーが植物由来のレクチンであるＷＧＡと結合するかどうか、及びフコシルα（１→３）キトビオースのモノマーと比較した結合親和性について検討した。
ＷＧＡと糖鎖が結合すると、ＷＧＡ側に存在する結合部位付近の芳香族アミノ酸（Ｔｙｒ，Ｔｒｐ）の環境が変化し、発する蛍光の強度が変化する。この現象を利用して、ＷＧＡと糖鎖との結合親和性を測定することができる。測定の結果、フコシルα（１→３）キトビオースポリマーとＷＧＡとの結合が確認され、その結合親和性は、フコシルα（１→３）キトビオースモノマーより約３０倍程度高くなることが分かった（表２）。
【表２】
【産業上の利用可能性】
【００５４】
本発明は、植物アレルゲンとして重要なフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を効率的かつ大量に製造する方法を提供するもので、花粉症などに代表される植物アレルギーの治療法及び治療剤の開発に大きく貢献することが期待される。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体を利用したフコシルキトビオース誘導体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
花粉症などに代表されるアレルギー疾患は、近年、多くの人々に発症が認められており、その症状の続く期間が比較的長いこと、常にマスクなどにより外気の遮断に注意する必要があるなど、日常生活に対して多大な影響を及ぼしている。
アレルギーは、発生のメカニズムから主として４つのタイプに分類される。そのうち、原因抗原（アレルゲン）との接触から発症するまでの時間が比較的短い即時型としてI型、II型、III型、発症までの時間が比較的長い遅延型としてIV型の各タイプが知られている。これらのタイプは、アレルギーの発症過程の相違や原因となる因子の相違によって分類されている。I型アレルギーの反応因子はＩｇＥタイプの免疫グロブリンであり、アレルゲンが体内に侵入しＩｇＥ産生細胞を刺激することで産生される。産生されたＩｇＥは、肥満細胞、好塩基球に結合し、そのＩｇＥにさらにアレルゲンである抗原が結合すると、肥満細胞や好塩基球からヒスタミン、セロトニンなどの生理活性物質が放出される。放出されたヒスタミンなどの生理活性物質は、血管透過性の亢進、血管の拡張、平滑筋の収縮などを引き起こし、また、浮腫や掻痒感などを生じさせる。これらの症状はアレルゲンの侵入から短時間（１０分程度）で発症する。I型アレルギーとして知られている疾患には、花粉症、蕁麻疹、食物アレルギー、薬剤アレルギー、気管支喘息、アトピー性皮膚炎などがあり、反応が全身性であって急速な血圧低下を引き起こすアナフィラキシーショックを来す場合もある。
【０００３】
II型アレルギーは、ＩｇＧ、ＩｇＭタイプの免疫グロブリンが関与し、抗原性を有する自己の細胞に結合し、さらに白血球が関与し、細胞破壊を引き起こすものである。代表的な疾患としては、自己免疫性溶血性貧血、不適合輸血、悪性貧血などが知られている。
さらに、もう１つの即時型アレルギーであるIII型アレルギーは、ＩｇＧが関与し、抗原、抗体及び補体によって形成された免疫複合体が血管を介して組織に到達し、当該組織に傷害をもたらすものである。代表的な疾患としては、血清病、全身性エリトマトーデス、急性糸球体腎炎などが挙げられる。
そして、遅延型として知られるIV型アレルギーは、体液性免疫とは関係なく、Ｔ細胞、マクロファージなどが関与する細胞性免疫に関連する。IV型アレルギーは、Ｔ細胞の関与によって炎症反応が引き起こされるものであるが、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞のいずれが関与するかによって、炎症反応の発症機序が異なる。IV型アレルギーは即時型と異なり、発症までに１〜２日程度要する。代表的な疾患として、接触皮膚炎、シェーングレン症候群、ギラン・バレー症候群などが知られている。
【０００４】
I型アレルギー中でも花粉症の罹患者は年々増加の一途を辿っており、有効な治療方法の確立が期待されるところである。I型アレルギーの根治的治療法として、減感作療法などが現在行われており、このような治療法において使用される植物由来のアレルゲンの供給も必要とされている。植物のアレルゲンとしては、フコシルα（１→３）キトビオースを有する糖タンパク質が関係しているとの報告がなされているが、遊離型の糖鎖では、アレルゲンとＩｇＥの結合を有意には阻害していないとの報告などもあり、糖鎖以外にペプチド領域の構造などもＩｇＥとの結合には重要であろうとの見解も存在する。
しかし、フコシルα（１→３）キトビオースがアレルギー発症において重要な関連性を有する可能性は高く、この糖鎖を利用した新たなアレルギー治療法の開発が待たれるところである。フコシルα（１→３）キトビオースは、天然資源から大量に単離することが困難であり、また、フコシルα（１→３）キトビオースの合成方法も報告されてはいるが、報告されている方法では収率が低いため、本化合物をアレルゲンのソースとして利用するには、さらなる効率的で大量調製に適した方法論の確立が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｏｇｕｒｉら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２８：３１９６−３２０２，１９８０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明者らは、上記事情に鑑み、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体の製造方法につき鋭意研究を行った結果、従来の技術よりも収率の点で優れ、大量調製も可能な製造方法の確立に成功し、本発明を完成させた。
従って、本発明は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体の効率的で大量調製にも対応可能な新規製造方法の提供を目的とする。
さらに、本発明は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体の効率的で大量調製にも対応可能な新規製造方法に利用可能な新規グルコサミン誘導体の提供を目的とする。
また、本発明は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体を担持したポリマー、デンドリマー又は多糖の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
すなわち、本発明は、下記の式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環する過程を含む、下記の式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する方法である。
【化１】
【化２】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表し、Ｒ９は、水素原子、低級アルキル基を表す。]
また、本発明は、下記の式（ I ）、式（ II ）及び式（ III ）の化合物から式（ IV ）の化合物を合成し、式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環することにより、式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する方法である。
【化３】
【化４】
【化５】
【化６】
【化７】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表し、Ｒ９は、水素原子、低級アルキル基を表し、Ｌａｕは（ＣＨ２）１１ＣＨ３であり、ＴｒｏｃはＣＯＯＣＨ２ＣＣｌ３である。]
【０００８】
さらに、本発明は、式（ I ）の化合物と式（ II ）の化合物から下記の式（ VI ）の化合物を合成し、式（ VI ）の化合物と式（ III ）の化合物から式（ IV ）の化合物を合成し、式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環することにより、式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する方法である。
【化８】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表す。]
【０００９】
さらに、本発明は、式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を合成するために有用な式（ I ）で表されるアセチルグルコサミン誘導体もしくはその塩、又はそれらの溶媒和物もしくは水和物である。
【００１０】
また、本発明は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体を含む（担持する）ポリマー、デンドリマー又は多糖である。本発明のポリマー、デンドリマー又は多糖は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体（本発明の方法によって製造されるものを含む）が結合したものであれば特に限定はされない。例えば、本発明のポリマーとして、次式（ＶＩＩ）で表されるポリマーなどを挙げることができる。
【化９】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表し、Ｒ９は、水素原子、低級アルキル基を表す。また、ｘ及びｚは１以上の整数であり、ｙは０あるいは１以上の整数である。]
【００１１】
フコシルα（１→３）キトビオース誘導体の製造方法としては、Ｔｅｊｉｍａらにより報告された方法が知られている（非特許文献１）。しかし、この方法によると、最終産物であるフコシルα（１→３）キトビオース誘導体の収率が４６．６％と低く、大量調製を行う上で、費用、時間、労力の面で、大きな負担が予想される。
本発明の方法によれば、収率が７４％と高く、従来技術であるＴｅｊｉｍａらの方法よりも大幅に収率の向上を達成することができる。本発明の方法とＴｅｊｉｍａらの方法との相違は、合成中間体の無水環グルコサミンの無水環を開環するタイミングにある。発明者らは、上記式（ VI ）に示すように無水環の状態でフコースを導入した方が最終産物であるフコシルα（１→３）キトビオース誘導体の収率が顕著に上昇することを見出し、本発明を完成させた。すなわち、先行技術が報告された当時、無水環の化合物の３位の水酸基の求核性は低いとされており（非特許文献１を参照のこと）、無水環を保持した状態でのフコースの導入は効率が悪く、技術的にも困難であると考えられていた。さらに、フコース導入後の無水環の開環反応により、フコースとの結合が切断されてしまう可能性もあった。これに対し、本発明においては、むしろ、効率が悪いとされた無水環を保持した状態でのフコースの導入を試みることによって、最終産物の顕著な収率上昇を達成したのである。
さらに、本発明において使用される式（ I ）の化合物は、フコシルα（１→３）キトビオース誘導体の高い収率を達成する上で有効である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、高い収率で式（ V ）に示すフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を合成することが可能となる。
【００１３】
本発明により、植物アレルギー（例えば、花粉症など）のアレルゲンの研究材料を大量に供給することが可能となる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
式（ I ）〜式（ VII ）中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は、水素原子又は保護基として利用可能な置換基であればいずれであってもよく、同一でも異なってもよい。ここで保護基としては、当業者が選択可能なものであれば特に限定はされず、例えば、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基が好ましく、例えば、アセチル基、ベンジル基がより好ましい。
また、Ｒ９は、水素原子、炭素数１〜５の低級アルキル基であり、好ましくは、メチル基である。
【００１５】
本発明のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体の製造方法においては、例えば、式（ I ）、式（ II ）及び式（ III ）の化合物を使用することができる。
式（ II ）においてＲ４がベンジル基、Ｒ５が水素である化合物（９）は以下のスキームにより製造することができる。
【化１０】
【００１６】
式（ I ）において、Ｒ１〜Ｒ３がアセチル基である化合物（１５）は、例えば、以下のスキームにより製造することができる。
【化１１】
【００１７】
式（ III ）において、Ｒ６〜Ｒ８がベンジル基、Ｒ９がメチル基である化合物（２５）は、例えば、以下のスキームにより製造することができる。
【化１２】
【００１８】
式（ IV ）中、Ｒ１〜Ｒ３がアセチル基であり、Ｒ６〜Ｒ８がベンジル基、Ｒ９がメチル基である化合物は、例えば、上記化合物（９）、化合物（１５）及び化合物（２５）から合成することができ、結合の順番は特に限定されない。化合物（９）と化合物（１５）を先に結合させ、次いで、化合物（２５）を結合させる方法は、例えば、以下に示す工程により実施することができる。
【００１９】
化合物（９）と化合物（１５）は、例えば、以下のスキームにより結合することができる。
【化１３】
【００２０】
次に、化合物（１６）中、Ｔｒｏｃをアセチル基に置換し、アジド部分をアセトアミド基に変換し、ベンジル基を水素に置換して化合物（２０）を合成する。
【化１４】
【００２１】
化合物（２０）と化合物（２５）をグリコシル化反応により結合して、化合物（２６）を合成する。
【化１５】
得られた化合物（２６）の１，６−無水環を開環すれば、式（５）中、Ｒ１〜Ｒ３がアセチル基、Ｒ６〜Ｒ８がベンジル基、Ｒ９がメチル基である以下のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造することができる。１，６−無水環の開環方法としては、フコースとの結合を切断しない方法であれば、当業者に容易に選択し得るいかなる方法を使用することも可能であるが、例えば、無水酢酸存在下、酸で処理するアセトリシス（酢化分解、加酢酸分解）反応などにより実施することが好ましい。
【化１６】
次に本発明を具体例によって説明するがこれらの例によって本発明が限定されるものではない。
【００２２】
本発明の式（ＶＩＩ）の化合物は、例えば、以下のようにして合成することができる。化合物（２９）をオキサゾリン誘導体へ変換後、重合性アグリコンを導入し、脱保護するとモノマーが得られる。これを重合させれば式（ＶＩＩ）が得られる。
【化１７】
【実施例】
【００２３】
１．キトビオースユニットの合成
１，６−アンヒドロ−２，３−Ｏ−エンド−ベンジリデン−β−Ｄ−マンノピラノース（４）
【化１８】
窒素雰囲気下、６０℃で一晩乾燥させた Ｄ−マンノース（１）（５．０ｇ，２７．８ｍｍｏｌ）をピリジン（７５ｍＬ）に溶解し、氷冷下、ピリジン（２０ｍＬ）に溶解した塩化トシル（６．３６ｇ，３３．４ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、滴下終了後、室温に戻して攪拌した。１時間後、余分な塩化トシルを加水分解させるため、水（３５ｍＬ）を加え、（２）に変換した。精製することなく、氷冷下、１Ｍ 水酸化ナトリウムを反応溶液がｐＨ１０になるまで滴下した後、室温で攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、３Ｍ 塩化水素を反応溶液がｐＨ７になるまで滴下した。トルエン共沸によって濃縮し、熱酢酸エチル（１２５ｍＬ）を用いて３度デカンテーションを行い、濃縮することにより（３）（４．０８ｇ）の粗生成物を得た。
得られた（３）の粗生成物をＤＭＦに溶解し、ベンジルアルコールジメチルアセタール（６．８７ｍＬ）を滴下した後、ｐ−トルエンスルホン酸（０．４４ｇ）を加えた。減圧下、６０℃で３時間加熱攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、炭酸水素ナトリウムを反応溶液がｐＨ７になるように加え、反応を停止させた。トルエン共沸を行い、残渣をクロロホルムに希釈させ、氷水、飽和食塩水を用いて順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮した。エタノールを用いて結晶化を行い、目的の化合物（４）（１．７７ｇ，２５％）を得た。
Rf 0.33{10:1 (v/v) CHCl3-MeOH };
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 7.68-7.63 (m, 2H, aromatic), 7.42-7.38 (m, 3H, aromatic), 5.76 (s, 1H, CHPh), 5.54 (s, 1H, H-1), 4.60 (dd, 1H, J5,6a = 1.3 Hz, J5,6b = 6.3 Hz, H-5), 4.26-4.17 (m, 2H, H-2, H-3), 4.10-4.05 (m, 2H, H-4, H-6a), 3.88 (dd, 1H, J5,6b = 6.3 Hz, J6a,6b = 7.4 Hz, H-6b), 2.41 (d, 1H, OH)
【００２４】
４−Ｏ−アセチル−１，６−アンヒドロ−２，３−Ｏ−エンド−ベンジリデン−β−Ｄ−マンノピラノース（５）
【化１９】
窒素雰囲気下、化合物（４）（６．６７ｇ，２６．７ｍｍｏｌ）をピリジン（６０ｍＬ）に溶解し、氷冷下、無水酢酸（７．５６ｍＬ，８０．１ｍｍｏｌ）を滴下した後、室温に戻して一晩攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、氷冷下、メタノール（１０ｍＬ）を加え余分な無水酢酸を分解させ、濃縮した。残渣をクロロホルムに希釈させ、氷水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水を用いて順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮した。エタノールを用いてエタノールを用いて結晶化を行い、目的の化合物（５）（７．８０ｇ，１００％）を得た。
Rf 0.61{2:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 7.68-7.63 (m, 2H, aromatic), 7.42-7.38 (m, 3H, aromatic), 5.76 (s, 1H, CHPh), 5.54 (s, 1H, H-1), 5.12 (s, 1H, H-4), 4.60 (dd, 1H, J5,6a = 1.3 Hz, J5,6b = 6.2 Hz, H-5), 4.25-4.17 (m, 2H, H-2, H-3), 4.11 (dd, 1H, J5,6a = 1.5 Hz, J6a,6b = 7.7 Hz, H-6a), 3.88 (dd, 1H, J5,6b = 6.2 Hz, J6a,6b = 7.5 Hz, H-6b), 2.17 (s, 3H, OAc).
【００２５】
４−Ｏ−アセチル−１，６−アンヒドロ−３−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノース（６）
【化２０】
窒素雰囲気下、化合物（５）（１０．０ｇ，３４．２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、活性化したモレキュラーシーブス４Ａ（１０ｇ）を加えた。反応液にボラントリメチルアミン錯体（１７．５ｇ，２３９ｍｍｏｌ）を加え攪拌した後、氷冷下、塩化アルミニウム（３１．９ｇ，２３９ｍｍｏｌ）を少量ずつに分けて加え室温に戻して攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、セライト濾過を行った。濾液をクロロホルムに希釈させ、氷水、１Ｍ 塩化水素水、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮した。濃縮した残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［８：１（ｖ／ｖ）トルエン−酢酸エチル、シリカゲル ８００ｍＬ］で精製し、化合物（６）を（８．８９ｇ，８８％）を得た。
Rf 0.46{2:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 7.45-7.28 (m, 5H, aromatic), 5.37 (s, 1H, H-1), 4.98 (s, 1H, H-4), 4.86 (d, 1H, Jgem = 11.5 Hz, one of CH2Ph), 4.62 (d, 1H, Jgem = 11.7 Hz, one of CH2Ph), 4.56 (dd, 1H, J5,6a = 5.9 Hz, J5,6b = 1.1 Hz, H-5) 4.20 (d, 1H, J5,6b = 0.8 Hz, J6a,6b = 7.4 Hz, H-6a), 3.79(d, 1H, J5,6a = 6.0 Hz, J6a,6b = 7.4 Hz, H-6a), 3.71(m, 1H, H-2), 3.70 (dd, 1H, J3,4 = 6.1 Hz, J2,3 = 1.9 Hz, H-3), 3.05 (d, 1H, J2,OH = 10.3 Hz, OH), 2.15 (s, 3H, OAc).
【００２６】
４−Ｏ−アセチル−１，６−アンヒドロ−２−アジド−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（８）
【化２１】
アルゴン雰囲気下、化合物（６）（１３．０ｇ，４４．２ｍｍｏｌ）をジクロロエタン（８５ｍＬ）に溶解し、−１０℃でピリジン（７．１５ｍＬ，８８．４ｍｍｏｌ）を滴下した後、無水トリフルオロメタンスルホン酸（１１．２ｍＬ，６６．３ｍｍｏｌ）を滴下した。その後０℃に昇温させ、３時間攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、メタノールを加え余分な無水トリフルオロメタンスルホン酸を分解させた。反応液をクロロホルムに希釈させ、氷水、１Ｍ 塩化水素水、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮することにより、化合物（７）を得た。
アルゴン雰囲気下、残渣をＤＭＦ（１００ｍＬ）に溶解し、アジ化ナトリウム（８．６２ｇ，１３２ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、反応液をクロロホルムで希釈し、氷水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［６：１（ｖ／ｖ）ヘキサン−酢酸エチル、シリカゲル８００ｍＬ］で精製し、化合物（８）（１２．８ｇ，９１％）を得た。
Rf 0.50{8:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 7.42-7.30 (m, 5H, aromatic), 5.52 (s, 1H, H-1), 4.78 (s, 1H, H-4), 4.75 (d, 1H, Jgem = 12.1 Hz, one of CH2Ph), 4.68 (d, 1H, Jgem = 12.1 Hz, one of CH2Ph), 4.62 (m, 1H, H-5), 4.22 (dd, 1H, J5,6b = 1.1 Hz, J6a,6b = 7.4 Hz, H-6b), 3.82 (dd, 1H, J5,6a = 5.9 Hz, J6a,6b = 7.5 Hz, H-6a), 3.62 (quint, 1H, H-3), 3.26 (s, 1H, H-2), 2.15 (s, 3H, OAc).
【００２７】
１，６−アンヒドロ−２−アジド−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（９）
【化２２】
窒素雰囲気下、化合物（８）（１２．８ｇ，４０．０ｍｍｏｌ）をメタノール（１３０ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（０．２１ｇ，４．００ｍｍｏｌ）を加え室温で１時間攪拌した。ＴＬＣにて反応終了確認後、陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂ（Ｈ＋）を加え、綿濾過し、濃縮することにより化合物（９）（１１．８ｇ，１００％）を定量的に得た。
Rf 0.45{8:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 7.37-7.33 (m, 5H, aromatic), 5.45 (s, 1H, H-1), 4.63 (s, 2H, CH2Ph), 4.57 (m, 1H, H-5), 4.26 (dd, 1H, J5,6b = 1.1 Hz, J6a,6b = 7.3 Hz, H-6b), 3.81 (dd, 1H, J5,6a = 5.9 Hz, J6a,6b = 7.1 Hz, H-6a), 3.61 (s, 1H, H-3), 3.62 (m, 4H, H-4), 3.52 (s, 1H, H-2), 2.70 (br, 1H, OH).
【００２８】
１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−［ｐ−メトキシベンジリデン（アミノ）］−β−Ｄ−グルコピラノース（１２）
【化２３】
窒素雰囲気下、Ｄ−グルコサミン塩酸塩（１０）（３０．０ｇ，０．１４ｍｏｌ）を１Ｍ 水酸化ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）に溶解し、ｐ−アニスアルデヒド（２０．３ｍＬ）加え攪拌する。その後、氷冷下、２時間攪拌を続け、反応溶液を氷水で濾過し、続いてエタノールとジエチルエーテルの混合液［１：１（ｖ／ｖ）エタノール−ジエチルエーテル］で洗浄し、乾燥させることで化合物（１１）（３８．７ｇ，９３％）を得た。
窒素雰囲気下、得られた化合物（１１）（３８．７ｇ，０．１３ｍｏｌ）をピリジン（１５０ｍＬ）に溶解し、氷冷下、無水酢酸（９０ｍＬ）加え１時間攪拌した後、室温にして一晩攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、氷水に落とし、濾過洗浄し、乾燥させて化合物（１２）（４２．０ｇ，６５％）を得た。
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 8.16 (s, 1H, N=CH), 7.68 (m, 2H, aromatic), 6.94 (m, 1H, aromatic), 5.96 (d, 1H, J1,2 = 8.2 Hz, H-1), 5.48 (dd, 1H, J2,3 = 9.5 Hz, J3,4 = 9.6 Hz, H-3), 5.19 (dd, 1H, J3,4 = 9.9 Hz, J4,5 = 9.7 Hz, H-4), 4.43 (dd, 1H, J5,6b = 4.6 Hz, J6a,6b = 12.5 Hz, H-6b), 4.17 (dd, 1H, J5,6a = 2.0 Hz, J6a,6b = 12.5 Hz, H-6a), 4.02 (m, 1H, 5H), 3.84 (s, 3H, CH3), 3.50 (dd, J1,2 = 8.2 Hz, J2,3 = 9.5 Hz, H-2), 2.01, 2.04, 2.02 and 1.88 (each s, 12H, OAc).
【００２９】
１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン−ヒドロクロライド（１３）
【化２４】
化合物（１２）（４２．０ｇ，０．０９ｍｏｌ）を温めたアセトン（４２０ｍＬ）に溶解し、５Ｍ 塩化水素水（１９．０ｍＬ）加え、氷冷下、ジエチルエーテル（３２０ｍＬ）を加え、一晩攪拌した。反応溶液を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させて化合物（１３）（３４．５ｇ，１００％）を定量的に得た。
1H NMR (200 MHz, D2O): δ 5.82 (d, 1H, J1,2 = 8.79 Hz, H-1), 5.36 (dd, 1H, J2,3 = 10.5 Hz, J3,4 = 9.2 Hz, H-3), 5.01 (dd, 1H, J3,4 = 9.4 Hz, J4,5 = 9.3 Hz, H-4), 4.25 (dd, 1H, J5,6b = 4.6 Hz, J6a,6b = 13.3 Hz, H-6b), 4.08-3.99 (m, 2H, H-5, H-6a), 3.65 (dd, 1H, J1,2 = 8.8 Hz, J2,3 = 10.4 Hz, H-2), 2.05, 197, and 1.92 (each s, 12H, OAc).
【００３０】
１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルアミド）−β−Ｄ−グルコピラノース（１４）
【化２５】
化合物（１３）（３４．４ｇ，０．０９ｍｏｌ）を塩化メチレン（４００ｍＬ）とピリジン（８５ｍＬ）に溶解し、オルト蟻酸トリクロロエチル（ＴｒｏｃＣｌ）（３１ｍＬ，０．２７ｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣにて反応終了を確認後、メタノールを加え反応を止め、濃縮した。残渣をクロロホルムに希釈させ、１Ｍ 硫酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮した。酢酸エチル−ヘキサンで再結晶化を行い、化合物（１４）（４６．７ｇ，１００％）を定量的に得た。
Rf 0.60{1:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 5.77(d, 1H, J1,2 = 8.8 Hz, H-1), 5.45 (d, 1H, J2,NH = 9.3 Hz, NH), 5.33 (dd, 1H, J2,3 = 9.5 Hz, J3,4 = 9.9 Hz, H-3), 5.16 (dd, 1H, J3,4 = 9.5 Hz, J4,5 = 9.7 Hz, H-4), 4.73 (s, 2H, Cl3CCH2), 4.35 (dd, 1H, J5,6b = 4.6 Hz, J6b,6a = 12.5 Hz, H-6b), 4.16 (dd, 1H, J5,6a = 2.0 Hz, J6a,6b = 12.5 Hz, H-6a), 4.05-3.83 (m, 2H, H-2, H-5), 2.12(m, 12H, OAc).
【００３１】
ドデシル ３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルアミド）−β−Ｄ−グルコピラノース（１５）
【化２６】
窒素雰囲気下、化合物（１４）（２．０ｇ，３．８３ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍＬ）に溶解し、１−ドデカンチオール（２．７４ｍＬ，１１．５ｍｍｏｌ）を加え攪拌し、三フッ化ホウ素・ジエチルエーテル錯体（０．９６ｍＬ，７．７６ｍｍｏｌ）を滴下した。２．５時間攪拌した後、ＴＬＣにて反応終了を確認し、クロロホルムに希釈させ、氷水、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮した後、エタノールで再結晶化を行い、化合物（１５）（２．４８ｇ，９７％）を得た。
Rf 0.60{2:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.25 (dd, 1H, J3,4 = 9.8 Hz, J2,3 = 9.8 Hz, H-3), 5.16 (d, 1H, J2,NH = 9.3 Hz, NH), 5.11 (dd, 1H, J3,4 = 9.7 Hz, J4,5 = 9.7 Hz, H-4), 4.81 (d, 1H, Jgem =12.0 Hz, one of Cl3CCH2), 4.70 (d, 1H, Jgem =12.0 Hz, one of Cl3CCH2), 4.62 (d, 1H, J1,2 = 10.3 Hz, H-1), 4.28 (dd, 1H, J5,6a = 5.0 Hz, J6a,6b = 12.3 Hz, H-6a), 4.15 (dd, 1H, J5,6b = 2.3 Hz, J6a,6b = 12.3 Hz, H-6b), 3.81 (q, 1H, J2,3 = 10.0 Hz, J1,2 = 10.1 Hz, H-2), 3.72-3.68 (m, 1H, H-5), 2.72-2.66 (m, 2H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 2.08 and 2.03 (s, 9H, OAc) 1.61-1.56 (m, 2H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 1.41-1.26 (m, 18H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 0.91-0.86 (m, 1H, 6.6 Hz, SCH2CH2(CH2)9CH3).
【００３２】
４−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１，６−アンヒドロ−２−アジド−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（１６）
【化２７】
化合物（９）（０．３ｇ，１．０ｍｍｏｌ）と化合物（１５）（１．３３ｇ，２．０ｍｍｏｌ）を塩化メチレンに溶解し、活性化したモレキュラーシーブス４Ａ（１．５ｇ）を加え、氷冷下で攪拌した。窒素雰囲気下、ＮＩＳ（０．６７ｇ，３．０ｍｍｏｌ）とＴＭＳＯＴｆ（０．０５４ｍＬ，０．３ｍｍｏｌ）を加えた。−２０℃、２．５時間攪拌した後、トリエチルアミン（０．０４２ｍＬ）を加えて反応を止め、セライト濾過を行った。濾液をクロロホルムに希釈させ、氷水、１０％ チオ硫酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［４：１（ｖ／ｖ）トルエン−酢酸エチル、 シリカゲル２００ｍＬ］で精製した。イソプロピルアルコールで再結晶化を行い、化合物（１６）（０．６ｇ，８１％）を得た。
Rf 0.29{2:1 (v/v) Toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ 7.38-7.29 (m, 5H, phenyl), 5.61(t, 1H, J 9.9 Hz, NH), 5.47 (s, 1H, H-1), 5.33 (d, 1H, J2,NH’ = 6.4 Hz, NH’), 5.20 (d, 1H, J1’,2’ 7.6 Hz, H-1’), 5.07 (t, 1H, J4’,5’ = 9.8 Hz, H-4’), 4.79-4.57 (m, 5H, Cl3CCH2, PhCH2), 4.22 (dd, 1H, J5,6a’ = 4.6 Hz, J6a’,6b’ = 12.3 Hz, H-6a’), 4.14-4.10 (m, 2H, H-6a, H-6b’), 3.86 (s, 1H, H-1), 3.79 (s, 1H, H-4), 3.76 (m, 1H, H-6b), 3.07 (m, 1H, H-5’), 3.78 (m, 1H, H-2’), 3.81 (s, 1H, H-2), 2.04 and 2.03(s, 9H, OAc).
FAB-MS calcd for C28H33Cl3N4O13 [M+H]+ :739.1. Found: 739.2.
【００３３】
２．フコシルキトビオース誘導体の合成
２−アセトアミド−４−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１，６−アンヒドロ−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（１７）．
【化２８】
窒素雰囲気下、化合物（１６）（２．５ｇ，３．４ｍｍｏｌ）をピリジン（２５ｍＬ）に溶解し、氷冷下、チオ酢酸（１３ｍＬ，０．２７ｍｏｌ）を加え、攪拌した。３０分後、室温に戻し、一晩攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、反応溶液をトルエンで共沸させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［１：０（ｖ／ｖ）→２：１（ｖ／ｖ）→ ０：１（ｖ／ｖ）トルエン−酢酸エチル、シリカゲル２５０ｍＬ］で精製し、キトビオース誘導体（１７）（２．６８ｇ，１００％）を定量的に得た．
Rf 0.19{10:4:1 (v/v/v) CHCl3-EtOAc-MeOH};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ7.34-7.29 (m, 5H, phenyl), 6.77(d, 1H, J2,H = 8.1 Hz, NH), 5.61 (d, 1H, J2,NH’ 8.8 Hz, NH’), 5.28 (s, 1H, H-1), 5.16 (m, 2H, H-4’, H-3’), 4.84 (m, 2H, H-1’, ), 4.59 (m, 4H, Cl3CCH2, PhCH2), 4.31 (m, 3H, H-6a, H-6b’, H-6b), 4.05 (d, 1H, H-3), 3.83-3.72(m, 3H, H-4, H-5’,H-6b’), 3.65 (s, 2H, H-2), 2.07-2.03(m, 12H, OAc).
FAB-MS calcd for C30H37Cl3N2O14 [M+H]+ :755.1. Found: 755.5.
Anal. Calcd for C30H37Cl3N2O14: C, 47.66; H, 4.93; N, 3.71, Found: C, 47.76; H, 4.89; N, 3.51.
【００３４】
２−アセトアミド−４−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１，６−アンヒドロ−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（１９）
【化２９】
化合物（１７）（３．３ｇ，４．４ｍｍｏｌ）を酢酸（３３ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下、室温で亜鉛粉末（６．５ｇ）を加え、攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、セライト濾過により亜鉛粉末を除去し、濃縮することにより化合物（１８）を得た。
得られた化合物（１８）をピリジン（３５ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（３．１ｍＬ）を加え、室温で攪拌した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、氷冷下でメタノール（１ｍＬ）を加え、残っている無水酢酸をつぶした。反応溶液をトルエンで共沸させ、クロロホルムに希釈させ、氷水、１Ｍ 塩化水素水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［１０：４：１（ｖ／ｖ／ｖ）クロロホルム−酢酸エチル−メタノール、シリカゲル３００ｍＬ］で精製し濃縮することにより化合物（１９）（２．６ｇ，９７％）を得た。
Rf 0.24{10:4:1 (v/v/v) CHCl3-EtOAc-MeOH};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ7.36-7.27 (m, 5H, aromatic), 6.77 (d, 1H, J2,NH = 10.0 Hz, NH), 5.88 (d, 1H, J2,NH’ = 8.8 Hz, NH’), 5.30 (s, 1H, H-1), 5.13 (m, 2H, H-4’, H-3’), 4.81 (d, 1H, J1,2 = 12.0 Hz, H-1’β), 4.51 (m, 3H, H-5, PhCH2), 4.34 (d, 1H, J2,3 = 6.4 Hz H-2), 4.29 (m, 2H, H-6a’, H-6b), 4.19-4.11 (m, 1H, H-2’), 4.09 (dd, 1H, J5,6b’ = 2.4 Hz, J6a’,6b’ = 12.4 Hz, H-6b’), 3.79 (s, 1H, H-4), 3.76 (t, 1H, J2,3 = 6.5 Hz, H-3), 3.61 (m, 1H, H-5’), 3.53 (s, 1H, H-6a), 2.12, 2.08, 2.05, 2.03 and 2.00 (each s, 15H, OAc).
FAB-MS calcd for C29H38N2O13 [M+H]+ :623.2. Found: 623.5.
【００３５】
２−アセトアミド−４−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１，６−アンヒドロ−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（２０）
【化３０】
化合物（１９）（０．９５ｇ，１．５３ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶解し、パラジウム／炭素（４５０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下室温で６日攪拌し活性炭濾過を行った。濾液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ［５：４：１（ｖ／ｖ／ｖ）クロロホルム−酢酸エチル−メタノール、シリカゲル７５ｍＬ］で精製しエタノールで結晶化することにより、化合物（２０）（０．８１ｇ，１００％）を定量的に得た。
Rf 0.40{2:4:1 (v/v/v) CHCl3-EtOAc-MeOH};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ6.90 (d, 1H, J2,NH = 10.0 Hz, NH), 6.18 (d, 1H, J2’,NH’ = 9.2 Hz, NH’), 5.32 (s, 1H, H-1), 5.14 (m, 2H, H-3’, H-4’), 4.55 (m, 1H, H-5), 4.55 (m, 1H, J1’,2’ = 8.4 Hz, H-1’b), 4.31 (m, 2H, H-4, H-6a’), 4,24 (m, 2H, H-2’, H-2), 4.13 (dd, 1H, J5’,6b’ = 2.2 Hz, J6a’,6b’ = 11.8 Hz, H-6b’), 3.80 (m, 3H, H-3, H-6a, H-6b), 3.68 (ddd, 1H, J5’,6b’ = 2.2 Hz, H-5’), 3.50 (d, 1H, J3,OH = 5.6 Hz, OH), 2.13, 2.10, 2.06, 2.04 and 1.99 (each s, 15H, OAc).
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ171.89, 171.75, 170.93, 170.76 and 169.27 (-C=O of ester), 101.59(C-1), 99.76(C-1’), 74.98 (C-3), 72.52 (C-5), 72.07 (C-3’), 72.03 (C-5’), 71.09 (C-4’), 53.96 (C-2’), 50.77(C-2), 23.63 and 22.75 (-NHCOCH3), 20.78, 20.72 and 20.60 (-COOCH3).
FAB-MS calcd for C22H32N2O13 [M+H]+ :533.2. Found: 533.3.
Anal. Calcd for C22H32N2O13: C, 49.62; H, 6.06; N, 5.26, Found: C, 49.36; H, 5.84; N, 5.01.
【００３６】
１，２，３，４−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｌ−フコピラノース（２２）
【化３１】
Ｌ−フコース（２１）（１０ｇ，６１ｍｍｏｌ）をピリジン（８０ｍＬ）に溶解し、０℃ に冷却し、無水酢酸（７０ｍＬ）を滴下した。滴下終了後、室温で一晩攪拌した。反応溶液をトルエンで共沸させ、残渣に氷水を加えた。水層をクロロホルムで抽出し、続いて有機層を１Ｍ 塩化水素水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濃縮することにより化合物（２２）（２０．２ｇ，１００％）を定量的に得た。
Rf 0.55{ 1:1 (v/v) toluene-EtOAc};
1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ6.35 (d, 1H, J1,2 = 1.8 Hz, H-1α), 5.71 (d, 1H, J3,4 = 8.1 Hz, H-1β).
【００３７】
ドデシル −ｌ，２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−チオ−Ｌ−フコピラノシド（２３）
【化３２】
化合物（２２）（２２ｇ）を１，２−ジクロロエタン（１２０ｍＬ）に溶解し、１−ドデカンチオール（２９ｍＬ）を加え、窒素雰囲気下、氷冷下で三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（１２ｍＬ）を滴下した。ＴＬＣにて反応終了を確認後、クロロホルムに希釈させ、氷水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［８：１（ｖ／ｖ）ヘキサン−酢酸エチル、シリカゲル１Ｌ］で精製し濃縮することにより化合物（２３）（２４ｇ，８５％）を得た。
Rf 0.40{6:1 (v/v) Hexane-EtOAc};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ5.28 (d, 1H, J4,5 = 3.2 Hz, H-4), 5.24 (t, 1H, J1,2 = J2,3 = 10.0 Hz, H-2), 5.06 (dd, 1H, J2,3 = 10.0 Hz, J3,4 = 3.2 Hz, H-3), 4.45 (d, 1H, J1,2 = 10.0 Hz, H-1β), 3.61 (q, 1H, J5,6 = 6.4 Hz, H-5), 2.74 (m, 2H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 2.18, 2.07 and 1.99 (each s, 9H, OAc), 1.67 (m, 2H, CH2CH2(CH2)9CH3), 1.45-1.26 (m, 18H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 1.23 (d, 3H, J5,6 = 6.4 Hz, H-6), 0.90 (t, 3H, Jvic = 6.8 Hz SCH2CH2(CH2)9CH3).
【００３８】
ドデシル −１−チオ−β−Ｌ−フコピラノシド（２４）
【化３３】
化合物（２３）（３０．２ｇ，６３．６ｍｍｏｌ）をメタノール（１２０ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（１．０３ｇ，１９．１ｍｍｏｌ）加え、窒素雰囲気下、室温で一晩攪拌した後、陽イオン交換樹脂を用いて、ｐＨ調整を行い、濾過、濃縮することにより、化合物（２４）（２２．２ｇ，１００％）を定量的に得た。
【００３９】
ドデシル ２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−１−チオ−β−Ｌ−フコピラノシド（２５）
【化３４】
５５％ 水素化ナトリウム（１．２４ｇ）をヘキサンで数回洗浄した後、ヘキサンを減圧留去しアルゴン置換した後、ＤＭＦ（１０ｍＬ）を加えた。窒素雰囲気下、氷冷し、ＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶解した化合物（２４）（０．９４ｇ，２．７０ｍｍｏｌ）を滴下した。臭素化ベンジル（２．０４ｍＬ，１７．２ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、室温に戻して３時間半攪拌した。その後、氷冷下でメタノール（１０ｍＬ）をゆっくり滴下し、反応を停止させた。反応溶液をトルエンで共沸させ、酢酸エチルで希釈させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ［１０：１（ｖ／ｖ）ヘキサン−酢酸エチル、シリカゲル１００ｍＬ］で精製し、濃縮後、エタノールにて結晶化することにより化合物（２５）（１．３４ｇ，８１％）を得た。
Rf 0.40{6:1 (v/v) Hexane-EtOAc};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ7.41-7.26 (m, 15H, aromatic), 5.01 (d, 1H, Jgem = 12.0 Hz, one of CH2Ph), 4.91 (d, 1H, Jgem = 10.4 Hz, one of CH2Ph), 4.81 (d, 1H, Jgem = 10.0 Hz, one of CH2Ph), 4.76 (s, 1H, one of CH2Ph), 4.75 (s, 1H, one of CH2Ph), 4.71 (d, 1H, Jgem = 11.6 Hz, one of CH2Ph), 4.37 (d, 1H, J1,2 = 9.6 Hz, H-1β), 3.83 (t, 1H, J2,3 = 9.4 Hz, H-2), 3.61 (d, 1H, J3,4 = 2.4 Hz, H-4), 3.57 (dd, 1H, J2,3 = 9.2 Hz, J3,4 = 2.4 Hz, H-3), 3.49 (q, 1H, J5,6 = 6.4 Hz, H-5), 2.78-2.65 (m, 2H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 1.67-1.54 (m, 2H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 1.38-1.22 (m, 18H, SCH2CH2(CH2)9CH3), 1.21 (d, 3H, J5,6 = 6.4 Hz, H-6), 0.90 (t, 3H, Jvic = 6.6 Hz, SCH2CH2(CH2)9CH3).
【００４０】
Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−１，６−アンヒドロ−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（２６）
【化３５】
化合物（２０）（１００ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）と化合物（２５）（２３２ｇ，０．３８ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（４．５ｍＬ）に溶解し、活性化したモレキュラーシーブス ４Ａ（０．３５ｍｇ）を加え、アルゴン雰囲気下、氷冷下で攪拌した。−１５℃に冷却し、ＮＩＳ（１２８ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）とＴＭＳＯＴｆ（０．０１ｍＬ，０．０６ｍｍｏｌ）を加え、２．５時間攪拌した後、トリエチルアミン（０．０１ｍＬ）を加えて反応を止め、セライト濾過を行った。濾液をクロロホルムに希釈させ、１０％ チオ硫酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［５：１ （ｖ／ｖ）トルエン−酢酸エチル、シリカゲル１１０ｍＬ］で精製し、濃縮することにより化合物（２６）（１１０ｍｇ，６２％）を得た。
Rf 0.55{5:4:1 (v/v/v) CHCl3-EtOAc-MeOH};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ7.41-7.27 (m, 15H, 3×phenyl), 6.66(d, 1H, J 9.87 Hz, NH), 5.80 (d, 1H, J2,NH 8.79 Hz, NH’’), 5.30 (s, 1H, H-1), 5.14-5.06 (m, 3H, H-1’, H-4’’, H-3’’), 4.98-4.60 (m, 6H, 3×PhCH2), 4.52 (d, 1H, J 8.23 Hz, H-1’’), 4.44 (d, 1H, J 5.13 Hz, H-5’), 4.28-4.042 (m, 6H, H-2, H-6a, H-3’, H-6b’, H-2’,H-2’’), 3.83-3.58(m, 6H, H-5’’, H-5, H-3, H-6a’, H-6b, H-4, H-4’’), 2.11-1.97(m, 15H, 5×Ac), 1.11(d, 3H, Me).
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ101(C-1), 100(C-1’’), 96(C-1’).
FAB-MS calcd for C49H33N2O17 [M+H]+ :949.4. Found: 949.6.
【００４１】
３．フコシルキトビオース誘導体の変換１
Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−１，６−アンヒドロ−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（２８）
【化３６】
化合物（２６）（３００ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶解し、パラジウム／炭素（１．０ｇ）を加え、水素雰囲気下室温で一晩攪拌し活性炭濾過を行った。濾液を濃縮することで化合物（２７）を得た。
続けて、残渣をピリジン（５．０ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（０．８ｍＬ）を加え一晩攪拌した。系中に氷水、クロロホルムを加え、水層をクロロホルムで抽出した後、有機層を１Ｍ 塩化水素水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、セライト濾過を行い、反応溶液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［５：４：１ （ｖ／ｖ／ｖ） クロロホルム−酢酸エチル−メタノール、シリカゲル ４０ｍＬ］で精製し、濃縮することで化合物（２８）（２３８ｍｇ，９４％）を得た。
Rf 0.79{5:1 (v/v) CHCl3-MeOH};
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.75(d, 1H, J2,NH = 10.4 Hz, NH), 6.03 (d, 1H, J2’’,NH’’ = 9.2 Hz, NH’’), 5.38 (d, 1H, J1,2, = 3.6 Hz, H-1’a)), 5.26-5.23 (m, 3H, H-1, H-4’’, H-3’’), 5.13-5.05 (m, 3H, H-2’, ), 4.54 (d, 1H, J 1’’,2’’ = 8.0 Hz, H-1’’b), 4.50 (d, 1H, J = 5.6 Hz, H-5’) 4.29 (dd, 1H, J = 4.8 Hz, J = 12.4 Hz, H-6a’’), 4.23 (d, 1H, J = 5.6 Hz, H-2), 4.19 (d, 1H, J = 10.0 Hz, H-2’’), 4.14 (dd, 1H, J = 2.4 Hz, J = 12.4 Hz, H-6b’’), 4.06-4.02 (m, 2H, ,), 3.77-3.72 (m, 3H, H-5, H-3, H-6b, H-4’), 3.68-3.64 (m, 1H, H-5’’), 2.17, 2.16, 2.13, 2.09, 2.08, 2.06, 2.05, 2.00 (each s, 24H, 5×Ac), 1.13 (d, 3H, J = 6.4 Hz, H-6).
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ101.07 (C-1), 99.79 (C-1’’), 93.39 (C-1’).
MALDI-TOF-MS calcd for C49H48N2O20 [M+H]+ :805.3. Found: 805.2.
【００４２】
Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノース（２９）
【化３７】
化合物（２８）（５０ｍｇ，０．０６２ｍｍｏｌ）を無水酢酸（２．０ｍＬ）に溶解し、氷冷下、トリフルオロ酢酸（０．１４ｍＬ，０．１８ｍｍｏｌ）を加え一晩攪拌した。反応溶液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［５：４：１（ｖ／ｖ／ｖ） クロロホルム−酢酸エチル−メタノール、シリカゲル３０ｍＬ］で精製し、濃縮することで化合物（２９）（３６ｍｇ，６４％）を得た。
Rf 0.52{2:4:1 (v/v/v) CHCl3-EtOAc-MeOH};
FAB-MS calcd for C38H54N2O23 [M+H]+ :907.3. Found: 907.5.
【００４３】
４．フコシルキトビオース誘導体の変換２
Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジルα−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノース（３０）
【化３８】
化合物（２６）（７５ｍｇ，０．０７９ｍｍｏｌ）を無水酢酸（１．０ｍＬ）に溶解し、０℃でトリフルオロ酢酸（０．１８ｍＬ）を加え、５時間攪拌した。トリエチルアミン（０．３２ｍＬ）を加え反応を止め、トルエン共沸により濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［１５：１４：１（ｖ／ｖ／ｖ）クロロホルム−酢酸エチル−メタノール、 シリカゲル３０ｍＬ］で精製し、濃縮することにより化合物（３０）（４７ｍｇ，５７％）を得た。
Rf 0.46{5:4:1 (v/v/v) CHCl3-EtOAc-MeOH};
FAB-MS calcd for C53H66N2O20 [M+H]+ :1051.4. Found: 1051.8.
【００４４】
Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノース（２９）
【化３９】
化合物（３０）（４０ｍｇ，０．０３８ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１ｍＬ）に溶解し、パラジウム／炭素（３０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下室温で３日攪拌し活性炭濾過を行った。濾液を濃縮することにより化合物（３１）を得た。
続けて、残渣をピリジン（１ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（０．２ｍＬ）を加え攪拌した。反応溶液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［５：４：１（ｖ／ｖ／ｖ） クロロホルム−酢酸エチル−メタノール、シリカゲル１０ｍＬ］で精製し、濃縮することにより化合物（２９）（２６ｍｇ，７５％）を得た。
FAB-MS calcd for C38H54N2O23 [M+H]+ :907.3. Found: 907.5.
【００４５】
５．フコシルキトビオースポリマーの合成
w−[（１−オキソ―２−プロペニル）アミノ]ヘキシル Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（３２）
フコシルキトビオース完全アセチル体（３０）（１５０ｍｇ，１６５μｍｏｌ）を１，２-ジクロロエタン（１．０ｍＬ）に溶解させ、アルゴン置換し、０℃でトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（３３μＬ，１８２μｍｏｌ）を加え５０℃で２．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応を確認したところあまり進んでいなかったのでトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（１５μＬ，８２．５μｍｏｌ）を加え、５０℃で２時間撹拌した。ここで更に、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（１０μＬ，５５μｍｏｌ）を加え、５０℃で３０分撹拌した。氷冷下、トリメチルアミン（４．８４ｍＬ，３４．７ｍｍｏｌ）を加え、反応を停止させ、反応液を濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル １５ｇ、クロロホルム：酢酸エチル：メタノール：トリメチルアミン＝１０００：４００：１００：５）で精製することにより、目的のオキサゾリン体（３１）（１３６ｍｇ，９７．１％）を得た。
Rf 0.21 [2:4:1 (v/v/v) chloroform-ethyl acetate-methanol];
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ6.00 (d, 1 H, JNH’,2 = 9.5 Hz, NH’), 5.93 (d, 1 H, J1,2 = 6.4 Hz, H-1), 5.41 (d, 1 H, J1’’,2’’ = 4.0 Hz, H-1’’a), 5.31-5.26 (m, 2 H, H-4’’, H-3’’), 5.23 (t, 1 H, H-3’), 5.11 (dd, 1 H, J2’,3’ = 2.0 Hz, H-2’), 4.32-4.08 (m, 6 H, H-6b’, H-6b, H-5’’, H-6a’, H-6a, H-2), 3.92-3.85 (m, 1 H, H-2’), 3.69-3.64 (m, 2 H, H-4, H-5’), 3.71-3.33 (m, 1 H, H-5), 2.17, 2.15, 2.06, 2.03, 1.98 and 1.92 (each s, 18 H, 6×OAc), 2.08 (d, 3 H, CH3), 1.98 and 1.92 (each s, 6H, 2×NHAc), 1.18 (d, 3 H, J5’’,6’’ = 6.8 Hz, H-6’’);
【００４６】
【化４０】
オキサゾリン体（３１）（６７．９ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）とアクリルアミドアルコール（３４ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）を１，２-ジクロロエタン（１．０ｍＬ）に溶解させ、室温でｐ-トルエンスルホン酸ピリジン塩（２．０ｍｇ，８．０μｍｏｌ）を加え９０℃で加熱還流させながら２時間撹拌した。氷冷し、トリエチルアミン（０．２ｍＬ）を加え中和し、トルエンを加えて溶媒を減圧留去した。残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（４０ｇ、クロロホルム：酢酸エチル：メタノール＝１０：９：１．５）で精製し、更にフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（４０ｇ、クロロホルム：メタノール＝１１：１）で精製することによりフコシルキトビオース保護体モノマー（３２）（５５．４ｍｇ，６７．９％）を白色泡状粉末として得た。
Rf 0.37 [2:4:1 (v/v/v) chloroform-ethyl acetate-methanol]; IR (neat) 2926 (nC-H) 1748 (nC=O) 1661 (nNHC=O) 1626 (nC=C) 1537 (δN-H) 1233 (nC-N) 1045 (nC-O-C) cm-1;
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ6.72 (dd, 1 H, JNH,2 = 9.5 Hz, NH), 6.33 (dd, 1 H, Jvic(trans) = 17.0 Hz, Jgem = 1.4 Hz, one of -CH=CH2), 6.22 (br t, 1 H, J = 5.4 Hz, -NHCOCH=CH2), 6.18 (dd, 1 H, Jvic(trans) = 17.0 Hz, Jvic(cis) = 10.2 Hz, -CH=CH2), 5.66 (dd, 1 H, Jvic(cis) = 10.2 Hz, Jgem = 1.4 Hz, one of -CH=CH2), 5.42 (d, 1 H, J1’’,2’’ = 3.8 Hz, H-1’’a), 5.31-5.28 (m, 2 H, H-4’’, H-3’’), 5.13 (m, 3 H, H-2’’, H-3’, H-4’), 4.53-4.37 (m, 5 H, H-5’’, H-6a, H-1’’b, -OCH2), 4.36 (d, 1 H, J1,2 = 8.4 Hz, H-1b), 4.17 (dd, 1 H, Jgem = 1.6 Hz, J5,6b = 12.4 Hz, H-6b), 4.11-4.06 (m, 2 H, H-2’, H-2), 3.96 (t, 1H, J3,4 = 5.7 Hz, H-4), 3.84 (t, 1 H, J3,4 = 5.7 Hz, H-3), 3.80-3.71 (m, 2 H, H-6’b, H-5), 3.67-3.64 (m, 1 H, H-5’), 3.44-3.27 (m, 3 H, H-6’a, -CH2NHCO-), 2.18, 2.16, 2.14, 2.11, 2.09, 2.05, 2.04 and 2.03 (each s, 21 H, 7×OAc), 1.96 (s, 6H, 2×NHAc), 1.58-1.49 (m, 4 H, -OCH2CH2CH2CH2CH2CH2NHCO-), 1.42-1.30 (m, 4 H, -OCH2CH2CH2CH2CH2CH2NHCO-), 1.20 (d, 3 H, J5’’,6’’ = 6.8 Hz, H-6’’);
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δd 171.40, 170.77, 170.65, 170.64, 170.61, 170.49, 169.87 and 169.19 (-C=O of ester), 165.71 (-C=O of amide), 130.99 (-CH=CH2), 126.28 (-CH=CH2), 100.98 (C-1), 100.09 (C-1’), 95.15 (C-1’’), 73.75 (C-4), 73.57 (C-3), 72.82 (C-5), 72.49 (C-5’), 72.25 (C-4’), 71.36 (C-4’’), 68.91 (C-6’), 67.92 (C-3’), 67.86 (C-3’’), 67.82 (C-2’’), 65.02 (C-5’’), 63.69 (-OCH2-), 61.61 (C-6), 53.97 (C-2’), 51.31 (C-2), 38.99 (-CH2NH-), 29.12 and 28.80 (-OCH2CH2-, -CH2CH2NH-), 26.08 and 25.34 (-OCH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2NH-), 23.27 and 23.13 (-NHCOCH3), 20.97, 20.82, 20.66, 20.64 and 20.55 (-COOCH3), 15.84 (C-6’’) ;
MALDI-TOF-MS calcd for C45H67N3O23 [M+Na]+: 1040.406.269. Found: 1040.384.
【００４７】
w−[（１−オキソ―２−プロペニル）アミノ]ヘキシル Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−［Ｏ−（α−Ｌ−フコピラノシル）−（１→３）］−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（３３）
【化４１】
フコシルキトビオースモノマー保護体（３２）（６６ｍｇ，６４μｍｏｌ）をメタノール（２．５ｍＬ）に溶解させ、０．１Ｍナトリウムメトキシド/メタノール溶液（０．４５ｍＬ）を加え、室温で４時間撹拌した。強酸性陽イオン交換樹脂を加え、中和を行い、綿ろ過によってイオン交換樹脂を取り除き、ろ液を濃縮した。残渣を分取型リサイクルＨＰＬＣ（カラム ＪＡＩＧＥＬ-Ｗ５２５； 溶媒 メタノール）で精製し、濃縮することによりフコシルキトビオース脱保護モノマー（３３）（４５ｍｇ，９５．５％）を得た。
Rf 0.47 [3:3:1 (v/v/v) chloroform-methanol-water]; IR (KBr) 3414 (nO-H) 2937 (nC-H) 1657 (nNHC=O) 1628 (nC=C) 1557 (δN-H) 1047 (nC-O-C) cm-1;
1H NMR (400 MHz, D2O): δ6.21 6.18 (dd, 1 H, Jvic(trans) = 17.1 Hz, Jvic(cis) = 10.0 Hz, -CH=CH2), 6.14 (d, 1 H, Jvic(trans) = 17.0 Hz, one of -CH=CH2), 5.71 (d, 1 H, Jvic(cis) = 10.0 Hz, one of -CH=CH2), 5.09 (d, 1 H, J1’’,2’’ = 3.6 Hz, H-1’’a), 4.73-4.68 (m, 1 H, H-5’’), 4.49 (d, 1H, J1,2 = 8.0 Hz, H-1b), 4.44 (d, 1 H, J1’,2’ = 7.6 Hz, H-1’b), 3.96-3.35 (several m, 16 H, H-2, H-3, H-4, H-5, H-6a, H-6b, H-3', H-4', H-5', H-6'a, H-6'b, H-2", H-3", H-4", OCH2-), 3.25-3.16 (m, 3 H, H-2', -CH2ND-), 2.00 and 1.97 (each s, 6 H, NDAc), 1.55-1.44 (m, 4 H, OCH2CH2-, -CH2CH2ND-), 1.34-1.25 (m, 4 H, -OCH2CH2CH2CH2CH2CH2NHCO-), 1.24 (d, 3 H, J5'',6'' = 6.4 Hz);
13C NMR (100 MHz, D2O): δ 174.55, 174.06 and 168.36 (-C=O of amide), 129.99 (-CH=CH2), 126.87 (-CH=CH2), 100.89 (C-1), 100.35 (C-1’), 98.45 (C-1’’), 75.91, 75.26, 74.79, 73.55, 71.96, 70.62, 70.43, 69.12, 67.62, 66.61, 61.51, 59.87, 55.72, 55.61, 39.28 (-CH2ND-), 28.40 and 28.19 (-CH2CH2ND-, -OCH2CH2-), 25.60 and 24.66 (-CH2CH2CH2ND-, -OCH2CH2CH2-), 22.19 and 22.01 (-NDCOCH3), 15.41 (C-6’’);
MALDI-TOF-MS calcd for C31H53N3O16 [M+Na]+: 746.332. Found: 746.286.
【００４８】
フコシルキトビオースポリマー（３４）
【化４２】
【００４９】
フコシルキトビオースホモポリマー（３４ａ）（ｘ：ｙ：ｚ＝１：０：２９）
フコシルキトビオース脱保護体モノマー（３３）（２８．０ｍｇ，３８．７μｍｏｌ）を脱気した脱イオン水−エタノール（ｖ／ｖ＝１：１，０．３ｍＬ）に溶解させ、約３０分間脱気した。アルゴン雰囲気下、室温でＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラエチルメチレンジアミン（１．１５μＬ，７．７３μｍｏｌ）と過硫酸アンモニウム（０．８８ｍｇ，３．８７μｍｏｌ）を加え、５０℃に昇温し６時間撹拌した。０．０２Ｍピリジン／酢酸緩衝液（０．１ｍＬ）を加え反応を停止させ、ゲルろ過（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ-５０，溶媒 脱イオン水）で低分子量域を除き、凍結乾燥することによりフコシルキトビオースポリマー（３４ａ）（２４．０ｍｇ，８５．７％）を白色凍結乾燥粉として得た。
Mn 13 kDa, Mw 21 kDa, Mw/Mn 1.57;
1H NMR (400 MHz, D2O): δ5.11 (br s, 1 H, H-1’’a), 4.90-4.70 (m, 1 H, H-5’’), 4.52-4.48 (br d, 2 H, H-1, H-1’), 3.95-3.38 (several m, 16 H, H-2, H-3, H-4, H-5, H-6a, H-6b, H-3’, H-4’, H-5’, H-6’a, H-6’b, H-2’’, H-3’’, H-4’’, OCH2-), 3.25-3.06 (m, 3 H, H-2', -CH2ND-), 2.13-2.00 (m, 1 H, -CH-(sugar)-CH2-), 2.04 and 2.01 (each s, 6 H, NDAc), 1.58-1.40 (m, 6 H, OCH2CH2-, -CH2CH2ND-, -CH-(sugar)-CH2-), 1.34-1.23 (m, 7 H, -OCH2CH2CH2CH2CH2CH2NDCO-, H-6’’);
13C NMR (100 MHz, D2O): δ174.40 and 173.77 (-C=O of amide), 100.87, 100.35, 98.48, 75.93, 75.31, 74.84, 73.58, 71.99, 70.64, 70.36, 69.16, 67.68, 66.61, 61.53, 59.93, 55.74, 55.61, 39.52, 28.63, 26.06, 24.85, 22.43, 22.20, 15.55;
【００５０】
フコシルキトビオースポリマー（３４ｂ）（ｘ：ｙ：ｚ＝１：５：２１４）
フコシルキトビオース脱保護体モノマー（３３）（２０．０ｍｇ，２７．６μｍｏｌ）とアクリルアミド（９．８ｍｇ，１３８μｍｏｌ）を脱気した脱イオン水−エタノール（ｖ／ｖ＝１：１，０．２ｍＬ）に溶解させ、約３０分間脱気した。アルゴン雰囲気下、室温でＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラエチルメチレンジアミン（０．８９μＬ，５．５２μｍｏｌ）と過硫酸アンモニウム（１．２６ｍｇ，２．７６μｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。０．０２Ｍピリジン／酢酸緩衝液（０．２ｍＬ）を加え反応を停止させ、ゲルろ過（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ-５０，溶媒 脱イオン水）で低分子量域を除き、凍結乾燥することによりフコシルキトビオースポリマー（３４ｂ）（２０．６ｍｇ，９５．８％）を白色凍結乾燥粉として得た。
Mn 157 kDa, Mw 214 kDa, Mw/Mn 1.38;
1H NMR (400 MHz, D2O): δ5.09 (d, 1 H, J1’’,2’’ = 3.6 Hz, H-1’’a), 4.90-4.68 (m, 1 H, H-5’’), 4.50 (d, 1 H, J1,2 = 8.4 Hz, H-1b), 4.45 (d, 1 H, J1’,2’ = 7.6 Hz, H-1’b), 3.96-3.35 (several m, 16 H, H-2, H-3, H-4, H-5, H-6a, H-6b, H-3’, H-4’, H-5’, H-6’a, H-6’b, H-2’’, H-3’’, H-4’’, OCH2-), 3.25-3.16 (m, 3 H, H-2’, -CH2ND-), 2.35-2.05 (m, 6 H, -CH-(sugar)-CH2-, -CH-(ND2)-CH2-), 2.01 and 1.98 (each s, 6 H, NDAc), 1.76-1.40 (m, 16 H, -OCH2CH2-, -CH2CH2ND-, -CH-(sugar)-CH2-, -CH-(ND2)-CH2-), 1.33-1.25 (m, 4 H, -OCH2CH2CH2CH2CH2CH2NDCO-), 1.24 (d, 3 H, J5'',6'' = 6.8 Hz);
13C NMR (100 MHz, D2O): δ 180.10 175.23 and 174.73 (-C=O of amide), 101.63, 101.07, 99.19, 76.63, 75.99, 75.54, 74.27, 72.70, 71.34, 71.21, 69.85, 68.35, 67.32, 62.23, 60.61, 56.44, 56.32, 42.78, 42.40, 40.05, 36.65, 35.49, 29.21, 29.00, 26.55, 22.99, 22.77, 16.16;
【００５１】
フコシルキトビオースポリマー（３４ｃ）（ｘ：ｙ：ｚ＝１：１０：１４１）
フコシルキトビオース脱保護体モノマー（３３）（１５．０ｍｇ，２０．７μｍｏｌ）とアクリルアミド（１４．７ｍｇ，２０７μｍｏｌ）を脱気した脱イオン水-エタノール（ｖ／ｖ＝１：１，０．４ｍＬ）に溶解させ、約１５分間脱気した。アルゴン雰囲気下、室温でＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラエチルメチレンジアミン（０．６２μＬ，４．１４μｍｏｌ）と過硫酸アンモニウム（０．４７ｍｇ，２．０７μｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。０．０２Ｍピリジン／酢酸緩衝液（０．２ｍＬ）を加え反応を停止させ、ゲルろ過（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ-５０，溶媒 脱イオン水）で低分子量域を除き、凍結乾燥することによりフコシルキトビオースポリマー（３４ｃ）（２５．１ｍｇ，８４．５％）を白色凍結乾燥粉として得た。
Mn 136 kDa, Mw 207 kDa, Mw/Mn 1.52;
1H NMR (400 MHz, D2O): δ 5.11 (d, 1 H, J1’’,2’’ = 3.6 Hz, H-1’’a), 4.72-4.65 (m, 1 H, H-5’’), 4.51 (d, 1 H, J1,2 = 8.0 Hz, H-1b), 4.47 (d, 1 H, J1’,2’ = 8.0 Hz, H-1’b), 3.95-3.37 (several m, 16 H, H-2, H-3, H-4, H-5, H-6a, H-6b, H-3’, H-4’, H-5’, H-6’a, H-6’b, H-2’’, H-3’’, H-4’’, OCH2-), 3.24-3.16 (m, 3 H, H-2’, -CH2ND-), 2.35-2.08 (m, 11 H, -CH-(sugar)-CH2-, -CH-(ND2)-CH2-), 2.02 and 2.00 (each s, 6 H, NDAc), 1.78-1.43 (m, 30 H, -OCH2CH2-, -CH2CH2ND-, -CH-(sugar)-CH2-, -CH-(ND2)-CH2-), 1.33-1.25 (m, 4 H, -OCH2CH2CH2CH2CH2CH2NDCO-), 1.25 (d, 3 H, J5'',6'' = 6.4 Hz);
13C NMR (100 MHz, D2O): δ 180.09 175.21 and 174.72 (-C=O of amide), 101.62, 101.06, 99.18, 76.62, 75.98, 75.53, 74.27, 72.69, 71.33, 71.19, 69.84, 68.34, 67.31, 62.22, 60.59, 56.43, 56.31, 42.79, 42.39, 40.05, 36.52, 35.53, 29.20, 28.98, 26.53, 25.39, 22.98, 22.76, 16.14.
【００５２】
【表１】
【００５３】
６．フコシルキトビオースポリマーとＷＧＡレクチンとの結合評価
フコシルα（１→３）キトビオースの三糖構造は、植物に特徴的な構造であるが、これを担持するポリマーが植物由来のレクチンであるＷＧＡと結合するかどうか、及びフコシルα（１→３）キトビオースのモノマーと比較した結合親和性について検討した。
ＷＧＡと糖鎖が結合すると、ＷＧＡ側に存在する結合部位付近の芳香族アミノ酸（Ｔｙｒ，Ｔｒｐ）の環境が変化し、発する蛍光の強度が変化する。この現象を利用して、ＷＧＡと糖鎖との結合親和性を測定することができる。測定の結果、フコシルα（１→３）キトビオースポリマーとＷＧＡとの結合が確認され、その結合親和性は、フコシルα（１→３）キトビオースモノマーより約３０倍程度高くなることが分かった（表２）。
【表２】
【産業上の利用可能性】
【００５４】
本発明は、植物アレルゲンとして重要なフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を効率的かつ大量に製造する方法を提供するもので、花粉症などに代表される植物アレルギーの治療法及び治療剤の開発に大きく貢献することが期待される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環する過程を含む、下記の式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する方法。
【化１】
【化２】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表し、Ｒ９は、水素原子、低級アルキル基を表す。]
【請求項２】
下記の式（ I ）、式（ II ）及び式（ III ）の化合物から式（ IV ）の化合物を合成し、式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環することにより、式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する請求項１に記載の方法。
【化３】
【化４】
【化５】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表し、Ｒ９は、水素原子、低級アルキル基を表し、Ｌａｕは（ＣＨ２）１１ＣＨ３であり、ＴｒｏｃはＣＯＯＣＨ２ＣＣｌ３である。]
【請求項３】
式（ I ）の化合物と式（ II ）の化合物から下記の式（ VI ）の化合物を合成し、式（ VI ）の化合物と式（ III ）の化合物から式（ IV ）の化合物を合成し、式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環することにより、式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する請求項２に記載の方法。
【化６】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表す。]
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８が、アセチル基又はベンジル基、Ｒ９がメチル基である請求項１乃至３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれかの方法で製造されたフコシルα（１→３）キトビオース誘導体もしくはその塩、又はそれらの溶媒和物もしくは水和物。
【請求項６】
請求項２に記載の式（ I ）で表されるアセチルグルコサミン誘導体もしくはその塩、又はそれらの溶媒和物もしくは水和物。
【請求項７】
請求項５に記載のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を担持したポリマー、デンドリマー又は多糖。
【請求項１】
下記の式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環する過程を含む、下記の式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する方法。
【化１】
【化２】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表し、Ｒ９は、水素原子、低級アルキル基を表す。]
【請求項２】
下記の式（ I ）、式（ II ）及び式（ III ）の化合物から式（ IV ）の化合物を合成し、式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環することにより、式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する請求項１に記載の方法。
【化３】
【化４】
【化５】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表し、Ｒ９は、水素原子、低級アルキル基を表し、Ｌａｕは（ＣＨ２）１１ＣＨ３であり、ＴｒｏｃはＣＯＯＣＨ２ＣＣｌ３である。]
【請求項３】
式（ I ）の化合物と式（ II ）の化合物から下記の式（ VI ）の化合物を合成し、式（ VI ）の化合物と式（ III ）の化合物から式（ IV ）の化合物を合成し、式（ IV ）の化合物中の１，６−無水環を開環することにより、式（ V ）のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を製造する請求項２に記載の方法。
【化６】
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は同一又は異なる置換基で、水素原子、アセチル基、ベンジル基、パラメトキシベンジル基、オルトニトロベンジル基を表す。]
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８が、アセチル基又はベンジル基、Ｒ９がメチル基である請求項１乃至３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれかの方法で製造されたフコシルα（１→３）キトビオース誘導体もしくはその塩、又はそれらの溶媒和物もしくは水和物。
【請求項６】
請求項２に記載の式（ I ）で表されるアセチルグルコサミン誘導体もしくはその塩、又はそれらの溶媒和物もしくは水和物。
【請求項７】
請求項５に記載のフコシルα（１→３）キトビオース誘導体を担持したポリマー、デンドリマー又は多糖。
【公開番号】特開２０１０−２２９１２６（Ｐ２０１０−２２９１２６Ａ）
【公開日】平成２２年１０月１４日（２０１０．１０．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−３４２２９（Ｐ２０１０−３４２２９）
【出願日】平成２２年２月１９日（２０１０．２．１９）
【出願人】（５０４１９０５４８）国立大学法人埼玉大学 (292)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１０月１４日（２０１０．１０．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年２月１９日（２０１０．２．１９）
【出願人】（５０４１９０５４８）国立大学法人埼玉大学 (292)
【Ｆターム（参考）】
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