プロスタグランジン類を含有する眼科用水中油型エマルジョン
本発明は、活性剤としての少なくとも１種のプロスタグランジンと、少なくとも２種の非イオン性界面活性剤の組合せを含む界面活性成分とを含む眼科用途のための水中油型エマルジョンに関する。このエマルジョンは、医療用途、特に緑内障の治療に好適であり、プロスタグランジン活性剤の化学安定性が向上されており、室温でも長期の貯蔵が可能である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性剤としての少なくとも１種のプロスタグランジンと、少なくとも２種の非イオン性界面活性剤の組合せを含む界面活性成分とを含む水中油型エマルジョンに関する。このエマルジョンは、眼科用途、特に緑内障および／または高眼圧症の治療に好適であり、向上したプロスタグランジン活性剤の化学安定性を有し、長期の貯蔵、例えば室温での長期の貯蔵が可能である。
【背景技術】
【０００２】
プロスタグランジン類は、ヒトの組織または器官に見られ、広範な生理活性を有する化学種である。いくつかのプロスタグランジンの合成F2α類縁体は、眼科用医薬、とりわけ眼圧降下性抗緑内障剤として有用であることが知られている。例えば、ラタノプロスト、トラボプロスト、ビマトプロスト、およびウノプロストンが、それぞれ、商標名Xalatan（登録商標）、Travatan（登録商標）、Lumigan（登録商標）、およびRescula（登録商標）の下で、高眼圧症および緑内障の治療のための眼科用点眼溶液として市場に導入されている。
【０００３】
これらのプロスタグランジン類縁体に関連する問題は、これらの水溶性が幾分低いこと、およびとりわけ水溶液中におけるこれらの化学的不安定性である。このため、多数のさまざまな眼科用製剤が、このような問題を克服するために提案されてきた。
【０００４】
欧州特許出願公開第0435682号には、プロスタグランジン類と、疎水性キャビティを有する水溶性錯化剤であるシクロデキストリン類との包摂錯体の使用が記載されている。ここでは、プロスタグランジン類などの疎水性薬剤が前記キャビティ内に包摂されて、高い水溶性および高い水中安定性がもたらされる。
【０００５】
シクロデキストリンを含有するラタノプロスト眼科用製剤の安定性および臨床上の有用性は、The Journal of Clinical Pharmacology 47, 121-126, 2007に記載されている。
【０００６】
プロスタグランジン類を錯化し且つ安定化するための、変性シクロデキストリン類（すなわち、エーテル化シクロデキストリン類）の使用が、欧州特許出願公開第0330511号において提唱されている。
【０００７】
溶液のpHを5〜6.25の範囲の値に調節することによる、あるいはε-アミノカプロン酸を添加することによる、ランタノプロストの眼科用水溶液の安定化が、欧州特許出願公開第1532981号に記載されている。
【０００８】
プロスタグランジン類の溶解性および安定性は、ポリエトキシル化されたヒマシ油をその水溶液に添加するによっても改善される（米国特許第5,849,792号）。
【０００９】
プロスタグランジン類の眼科用製剤が、米国特許出願公開第2004/076678号に提唱されている。ここでは、アクリレート、セルロース、または他のポリマー類が、眼への投与時の有効性を引き延ばすためにプロスタグランジン類の水溶液に添加されている。
【００１０】
眼科用エマルジョンの一例が米国特許第3,608,073号に記載されており、ピロカルピン、油、水性相、および界面剤を含有する製剤を対象としている。
【００１１】
欧州特許出願公開第0521799号は、油、両性界面活性剤、およびリン脂質を用いる眼科用サブミクロンエマルジョンの調製を教示している。
【００１２】
油、水性相、およびリン脂質からなる成分が、高圧ホモジナイゼーションにかけられて、フルビプロフェンを含有する眼科用途のためのサブミクロンエマルジョンが生じている（米国特許第5,171,566号）。
【００１３】
サブミクロンエマルジョンを安定化するために、疎水性懸濁化粒子を添加することが米国特許出願公開第2003/215471号に示唆されている。
ランタノプロストの、高圧ホモジナイゼーションによって得られるマイクロエマルジョンが、Int. J. Pharm., 305, 176-179, 2005に記載されている。この安定化は、ポリビニルアルコールを乳化剤として用いることによって得られている。
【００１４】
ベンザルコニウムクロライドは、眼科用製剤のために最も使用されている抗菌性防腐剤の１つであるが、ベンザルコニウムクロライドは、液滴を安定化するその正電荷のおかげで、眼科用マイクロエマルジョンの製剤においても広く使用されている（米国特許第5,698,219号）。この正電荷は、他の陽イオン性剤によっても供給されうる（国際公開第2006/050838号）。
【００１５】
プロスタグランジン類の投与のための、正に荷電したマイクロエマルジョンの使用が、国際公開第2006/050836号または同第2007/042262号に記載されている。この界面膜は、非イオン性界面活性剤と、陽イオン性剤〔例えば、四級アンモニウム化合物
（ベンザルコニウムクロライドを含む）、アミノアルコール、ビグアナイド塩など〕との組合せによって形成される。得られるエマルジョンは、少なくとも16 mVのゼータ電位を有する。
【００１６】
しかし、眼科用途のための陽イオン性剤の使用は、眼への忍容性を保証するために注意深く検証される必要がある（Eur. J. Pharm. Biopharm., 53, 263-280, 2002）。
【００１７】
特定数の炭素原子を有するベンザルコニウムクロライド、界面活性剤、および等張化剤の組合せが、安定な眼科用ランタノプロスト溶液を記載する欧州特許出願公開第1547599号において記載されている。
【００１８】
欧州特許出願公開第0458588号には、高眼圧症の治療に有用な薬剤の製造のための眼圧降下に相乗効果を有する組合せであって、13,14-ジヒドロ-15-ケト-20-C1〜6アルキルプロスタグランジンと、ポリオキシエチレンソルビタン不飽和C10〜C24脂肪酸モノエステルとの組合せが開示されている。
【００１９】
欧州特許出願公開第1655021号には、医薬などの疎水性成分の送達用賦形剤として有用な水中油型エマルジョンが記載されており、この場合において、エマルジョン粒子は、正味の正電荷を有しており、陽イオン剤を含んでいる。
【００２０】
欧州特許出願公開第1681059号には、プロスタグランジンF2α誘導体類、油、水溶性ポリマー、および水を含有する水中油型エマルジョンを含む医薬組成物が記載されている。水溶性ポリマーは、ポリビニル化合物、水溶性セルロース化合物、または多糖類であることができる。油は、動物油もしくは植物油、および／または中鎖脂肪酸トリグリセリドであることができる。
【００２１】
米国特許出願公開第2006/0182781号には、眼科用ミクロ粒子組成物であって、ミクロ粒子が、ポリマーマトリックスと、活性剤（例えば、プロスタグランジン）とを含むものが記載されている。
【００２２】
国際公開第2004/082625号および米国特許出願公開第2007/0036829号には、水性相に分散された油性小球を含む自己乳化性眼科用組成物であって、この小球が、活性剤成分と極性油性成分とを含むものが記載されている。この油性成分は、エマルジョンの総質量の最高で1.25質量％までの量で存在する。
【００２３】
米国特許第5,827,835号には、少なくとも30 KDの分子量を有する非イオン性セルロースエーテル、油、水、および場合により乳化剤を含む非毒性エマルジョン組成物が記載されている。このエマルジョンは、プロスタグランジン類などの医薬をさらに含んでいてもよい。
【００２４】
国際公開第02/064166号には、少なくとも１種のモノグリセリド、少なくとも１種の乳化剤、水溶液、および少なくとも１種の有機溶媒を含む組成物が記載されている。
【００２５】
韓国特許出願公開第2003/0046553号には、プロスタグランジンE1を活性成分として含む温度感受性の外用エマルジョン組成物が記載されている。この組成物は、皮膚に適用され、体温でゲルを形成する。しかし、このゲルの形成は、眼科用途には好ましくない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２６】
【特許文献１】欧州特許出願公開第1681059号
【特許文献２】米国特許出願公開第2006/0182781号
【特許文献３】国際公開第2004/082625号パンフレット
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２７】
意外にも、フロスタグランジン活性剤を含有する油相と、水性相と、少なくとも２種の非イオン性界面活性剤を含む組合せを含む界面活性成分とを組み合わせることにより、眼科用途のための安定なサブミクロンエマルジョンが自発的に形成されることが見出された。これらのエマルジョンは、好ましくは、実質的に中性の電気化学的電荷（ゼータ電位）を有し、かつ、そのマイクロエマルジョンの物理的性質においてもプロスタグランジン活性剤の化学的安定性においても優れた安定性を有する。このエマルジョンは、単に成分を混合して自発的なマイクロエマルジョン化を起こさせることによって調製することができる。高エネルギープロセス（例えば、高圧ホモジナイゼーションおよび／または音波処理など）を適用する必要はない。このことが、この系のさらなる安定化に寄与する。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
このように、本発明の主題は、成分として、
(i) 油性分散相、
(ii) 油性相成分(i)中に溶解された、活性剤としての少なくとも１種のプロスタグランジン、
(iii) 少なくとも２種の非イオン性界面活性剤の組合せを含む界面活性剤、および
(iv) 場合により製剤成分を含んでいてもよい水性連続相、
を含み、実質的に中性のゼータ電位を有する、眼科用途のための水中油型エマルジョンである。
【００２９】
本発明のエマルジョンは、医薬製剤、特に眼科用製剤としての使用に適している。好ましくは、本水中油型エマルジョンは、緑内障および／または高眼圧症などの眼疾患の予防、緩和、および／または治療のために使用される。
【００３０】
本発明のエマルジョンは、長期の貯蔵期間後の活性成分の回収率として例えばHPLCによって測定される、高い化学安定性を特徴とする。25℃にて6ヶ月、より好ましくは9ヶ月、最も好ましくは12ヶ月貯蔵した後の活性成分の回収率は、少なくとも80％、より好ましくは少なくとも90％、最も好ましくは95％である。45℃にて14日間、より好ましくは30日間、最も好ましくは45日間貯蔵した後の活性成分の回収率は、少なくとも80％、より好ましくは少なくとも90％、最も好ましくは95％である。さらに、本発明の製剤は、液滴サイズの測定によって判断される高い物理的安定性を特徴とする。好ましくは、エマルジョンは、25℃にて少なくとも6ヶ月間および45℃にて少なくとも45日間安定である。
【００３１】
とりわけ好ましい実施態様では、本エマルジョンが、25℃にて少なくとも6ヶ月、より好ましくは少なくとも9ヶ月、最も好ましくは少なくとも12ヶ月の化学的および物理的な安定性を有することが明らかになった。驚くべきことに、この化学的および物理的な安定性が、瓶の開封によって低下しないことが明らかになった。
【００３２】
本発明のエマルジョンは、好ましくは、油性液滴の平均サイズが1μm未満のマイクロエマルジョンである。より好ましくは、この油性液滴の平均液滴サイズは、700 nm以下である。本発明のエマルジョンは、その物理的状態が4℃〜45℃まで変化せず、ゲルを形成しないことがさらに好ましい。
【００３３】
好ましくは、本エマルジョンは、実質的に中性のゼータ電位、すなわち-10 mV〜+10 mVの間、好ましくは-4 mV〜+4 mVの間、より好ましくは-2 mV〜+2 mVの間のゼータ電位を有することを特徴とする。
【００３４】
油性相(i)は、好ましくは、エマルジョンの総質量に基づいて少なくとも3質量％、より好ましくは少なくとも5質量％の量で存在する。油性相の最大量は、エマルジョンの総質量に基づいて好ましくは25質量％、より好ましくは20質量％である。油性相(i)は、医薬品として許容可能な油（例えば、動物油、植物油、合成油、またはこれらの混合物）から選択される。好ましくは、油性相は、医薬品として許容可能な脂肪酸エステル、例えば、脂肪酸トリグリセリドまたは脂肪酸モノエステルを含む。
【００３５】
より好ましくは、油性相の成分は、以下の４つの要素に基づいて選択される：
(1) 眼への適用への許容性；
(2) 少なくとも0.1 mg/ml、好ましくは少なくとも2 mg/ml、より好ましくは少なくとも10 mg/mlの、プロスタグランジン成分(ii)の良好な溶解度；
(3) 上述したプロスタグランジン成分(ii)の化学的安定性；および
(4) 少なくともlogP=0.5、好ましくは少なくともlogP=2の、油性相により多く分配される油／水の分配係数。
好適な油性相成分の具体的な例は、オレイン酸エチル、Miglyol(登録商標)812（すなわちC8〜10脂肪酸トリグリセリドの混合物）、ヒマシ油、コーン油、またはこれらの混合物である。
【００３６】
本発明の水中油型エマルジョンは、少なくとも１種のプロスタグランジンを活性剤として含む。好ましくは、プロスタグランジンは、親油性プロスタグランジン、例えば、プロスタグランジンF2α類縁体、例えば、ラタノプロスト、トラボプロスト、ビマトプロスト、ウノプロストン、またはこれらの２種以上の混合物である。より好ましくは、プロスタグランジン成分は、ラタノプロストである。プロスタグランジン類は、好ましくは、エマルジョンの総質量に基づいて0.001〜5質量％、より好ましくは0.002〜0.1質量％の量で存在する。
【００３７】
界面活性剤成分(ii)は、少なくとも２種の非イオン性界面活性剤の組合せを含む。この２種の界面活性剤の組合せの選択は、好ましくは、以下の考慮に基づいて行う。
【００３８】
(1) 眼科用途に許容可能な（眼への忍容性を有する）非イオン性界面活性剤だけを用いること；および
(2) 界面活性剤の組合せおよび量は、第一の非イオン性界面活性剤を油性相または水性相に添加し、油性相と水性相とを混合し、さらに第二の非イオン性界面活性剤を、この混合物に、均質な油／水エマルジョンが相分離または視認可能な液滴の形成なしに形成されるための十分量で添加した場合に、レーザー光散乱解析によって測定して平均液滴サイズが1μm未満、より好ましくは700 nm以下となるように選択すること。
【００３９】
界面活性剤成分(iii)の非イオン性界面活性剤は、親油性非イオン性界面活性剤、親水性非イオン性界面活性剤、またはこれらの組合せから選択することができる。好ましくは、界面活性剤成分(iii)の非イオン性界面活性剤の組み合わされた総HLB値は、少なくとも10、好ましくは少なくとも13であり、かつ好ましくは最高で20、より好ましくは最高で18までである。界面活性剤は、自発的なエマルジョン形成を促進する量で存在する。好ましくは、界面活性剤成分は、第一および第二の非イオン性界面活性剤を、エマルジョンの総質量に基づいてそれぞれ0.1〜10質量％の量で存在する。組み合わせた非イオン性界面活性剤の量は、エマルジョンの総質量に基づいて、好ましくは1〜20質量％、より好ましくは2〜12質量％である。
【００４０】
非イオン性界面活性剤は、好ましくは、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル類、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンのモノ-またはポリエステル、および／またはポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテルから選択される。好ましくは、界面活性剤成分(iii)の非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート（Tween 80(登録商標)）、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート（Tween 20(登録商標)）、ポリオキシエチレン(2)セチルエーテル（Brij 52(登録商標)）、ポリオキシエチレン(10)セチルエーテル（Brij 56(登録商標)）、およびポリオキシエチレン(20)セチルエーテル（Brij 58(登録商標)）からなる群から選択される。より好ましくは、界面活性剤成分(iii)の非イオン性界面活性剤の組合せは、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート（Tween 80(登録商標)）／ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート（Tween 20(登録商標)）、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート（Tween 80(登録商標)）／ポリオキシル(2)セチルエーテル（Brij 52(登録商標)）、ポリオキシル(2)セチルエーテル（Brij 52(登録商標)）／ポリオキシル(20)セチルエーテル（Brij 58(登録商標)）、およびポリオキシル(20)セチルエーテル（Brij 58(登録商標)）／ポリオキシル(10)セチルエーテル（Brij 56(登録商標)）から選択される。
【００４１】
本発明の水中油型エマルジョンは、好ましくは、陽イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、短鎖アルコール（例えば、C1〜4の一価アルコール）、脂肪酸（例えば、C4〜8の脂肪酸）を含まず、あるいは、レシチン類または／およびリン脂質類を含まない。このような化合物は、眼への適合性または物理的／化学的不安定性の問題を有する可能性がある。
【００４２】
しかし、エマルジョンは、眼科用製剤に通常使用される他の成分、例えば、緩衝剤（例えば、リン酸塩類、クエン酸塩類など）、等張剤（例えば、グリセロール、ソルビトール、グルコース、塩化ナトリウムなど）、増粘化合物（例えば、ヒドロキシプロピルセルロースまたは他の水溶性セルロース誘導体類、ポリメチルメタクリレートもしくは他のポリアクリル酸誘導体類、キトサン、ヒアルロン酸、ポリビニルピロリドンなど）、抗菌性防腐剤（特にクロロブタノール）、抗酸化剤、または安定剤などを含んでいてよい。エマルジョンは、プロスタグランジンを唯一の活性剤として含んでいてもよい。異なる実施態様では、エマルジョンは、１種以上のさらなる活性剤、特に、好ましくは水性相に存在する親水性活性剤を含んでいてもよい。
【００４３】
さらなる活性剤の好ましい例は、以下のとおりである：
− ベータブロッカー、例えば、チモロール、レボブノロール、ベタキソロールなど、
− 抗炎症剤、例えば、ケトロラック、ベータ-またはデキサメタソンなど、
− 抗ウイルス剤、例えば、アシクロビルなど、
− 局所用眼科用麻酔剤、例えば、オキシブプロカインなど、
− 抗アレルギー剤、例えば、オロパタジン、アゼラスチン、エピナスチン、ロドキサミドなど、
− 抗ドライアイ剤、例えば、ヒアルロン酸、アセチルシステイン、ポリビニルアルコールなど、
− 他の眼圧(IOP)降下薬、例えば、ブリモニジン、ブリンゾラミド、ドルゾラミドなど、
− 緑内障の緊急治療剤、例えば、ピロカルピンなど。
【００４４】
エマルジョンの水性相(iv)は、好ましくは、医薬品として許容可能な水性相、好ましくは滅菌水、精製水、または眼科用途に適切な任意の他の種類の水からなる群から選択される水性相である。水性相は、エマルジョンの総質量に基づいて、好ましくは30〜95質量％の量、より好ましくは50〜95質量％の量で存在する。水性相の量には、場合により添加される、標準的な眼科用剤、緩衝材、防腐剤、等張剤なども含まれる。
【００４５】
とりわけ好ましい実施態様では、成分(i)から成分(iv)は、エマルジョンの総質量に基づいて、以下の量：
(i) 5.0質量％〜20.0質量％の油性相、
(ii) 0.001質量％〜5.0質量％のプロスタグランジン活性剤、
(iii) 0.1質量％〜10.0質量％の第一の非イオン性界面活性剤および0.1質量％〜10.0質量％の第二の非イオン性界面活性剤、
(iv) 50.0質量％〜95.0質量％の水性相、
で存在する。
【００４６】
上述した成分は、混合されると、安定なサブミクロンエマルジョンを、高エネルギー剪断手段を用いる必要なく自発的に生成する。例えば、エマルジョンは、下記工程：
(a) 場合により、製剤成分を水性相に溶解させる工程、
(b) 第一の非イオン性界面活性剤を水性相または油性相のいずれかに溶解させる工程、
(c) 第二の非イオン性界面活性剤を、水性相または油性相のいずれかに溶解させる工程、
(d) プロスタグランジン活性剤を油性相に溶解させる工程、および
(e) 油性相と水性相とを混合する工程
を含む方法によって調製することができる。
混合工程は、標準的な混合方法、例えば、パドルミキサー、磁気撹拌機、ホモジナイザーなどを使用する方法で実施することが好ましい。高エネルギー混合方法、例えば、高圧ホモジナイゼーションまたは音波処理を避けることができる。しかし、高エネルギー混合方法、例えば、高圧ホモジナイゼーションまたは音波処理を用いることもできる。
【００４７】
医薬品目的のためには、エマルジョンは、滅菌した成分および装置を用いて製造することが好ましい。製造工程の全ての工程は、無菌条件下で実施することが好ましく、最終的な製剤は、公的な薬局方の要求基準にしたがって試験する。エマルジョンを、多数回投与用製剤として製剤化する場合には、抗菌性防腐剤（例えばクロロブタノールなど）を添加する。
【実施例】
【００４８】
本発明を、以下の実施例によってさらに説明する。これらの実施例は、いかなる意味においても限定的なものであると解釈されるべきではない。
【００４９】
［実施例１］
0.44 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する油／界面活性剤溶液（オレイン酸エチル：Tween(登録商標)80：Tween(登録商標)20＝1:1:0.5（質量：質量：質量））と、生理的水性相（0.9％NaCl/pH 7.4）とを、パドルミキサーを用いて混合することによって、油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:20（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成は以下のとおりである。
ラタノプロスト 0.005 g
オレイン酸エチル 4.51 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(Tween(登録商標)80) 4.51 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート(Tween(登録商標)20) 2.30 g
生理溶液（0.9％NaCl/pH 7.4） 88.7 g
【００５０】
［実施例２］
0.33 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する油／界面活性剤溶液（Myglyol 812：Tween(登録商標)80：Tween(登録商標)20＝1:1.5:1）と、等張剤（ソルビトール）を含有するリン酸緩衝水溶液（リン酸二水素ナトリウム／リン酸一水素ナトリウム）とを、磁気撹拌機を用いて混合することによって、油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:20（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成は以下のとおりである。
ラタノプロスト 0.005 g
Myglyol 812 4.28 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(Tween(登録商標)80) 6.42 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート(Tween(登録商標)20) 4.28 g
リン酸緩衝水溶液（リン酸二水素ナトリウム／リン酸一水素ナトリウム、ソルビトール） 85.02 g
【００５１】
［実施例３］
0.39 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する油／界面活性剤溶液（ヒマシ油：Brij(登録商標)56＝1:0.036）と、Brij(登録商標)58を4質量％の割合で含有する生理的水性相（0.9％NaCl/pH 7.4）とを、パドルミキサーを用いて混合することによって、液体状の油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:10（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成は以下のとおりである。
ラタノプロスト 0.001 g
ヒマシ油 17.9 g
ポリオキシル(20)セチルエーテル(Brij(登録商標)58) 6.98 g
ポリオキシル(10) セチルエーテル(Brij(登録商標)56) 0.64 g
生理水性相（0.9％NaCl/pH 7.4） 174.5 g
【００５２】
［実施例４］
0.45 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する油／界面活性剤溶液（オレイン酸エチル：Tween(登録商標)80：Tween(登録商標)20＝1:1:0.5）と、抗菌剤（クロロブタノール0.5％）を含有する生理的水性相（0.9％NaCl/pH 7.4）とを、パドルミキサーを用いて混合することによって、油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:20（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成は以下のとおりである。
ラタノプロスト 0.0075 g
オレイン酸エチル 6.62 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(Tween(登録商標)80) 6.62 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート(Tween(登録商標)20) 3.31 g
クロロブタノール 0.80 g
生理水性相（0.9％NaCl/pH 7.4） 132.6 g
【００５３】
［実施例５］
0.59 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する油／界面活性剤溶液（オレイン酸エチル：Brij(登録商標)52＝1:0.045）と、Brij(登録商標)58を4質量％の割合で含有するクエン酸緩衝溶液（クエン酸、クエン酸ナトリウム）とを、剪断ミキサーを用いて混合することによって、油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。このクエン酸緩衝溶液には、ソルビトールが等張剤として溶解されていた。油性相と水性相との比は、およそ1:20（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成：
ラタノプロスト 0.0050 g
オレイン酸エチル 4.65 g
ポリオキシル(20)セチルエーテル(Brij(登録商標)58) 3.66 g
ポリオキシル(2) セチルエーテル(Brij(登録商標)52) 0.21 g
クエン酸緩衝液（クエン酸、クエン酸ナトリウム、ソルビトール） 91.5 g
【００５４】
［実施例６］
0.40 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する界面活性剤／油溶液（ヒマシ油：Brij(登録商標)52＝1:0.05）と、Brij(登録商標)58を4質量％の割合で含有するクエン酸緩衝溶液（クエン酸、クエン酸ナトリウム）とを、剪断ミキサーを用いて混合することによって、油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。このクエン酸緩衝溶液には、グリセロールが等張剤として溶解されていた。油性相と水性相との比は、およそ1:10（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成：
ラタノプロスト 0.01 g
ヒマシ油 17.3 g
ポリオキシル(20)セチルエーテル(Brij(登録商標)58) 7.0 g
ポリオキシル(2) セチルエーテル(Brij(登録商標)52) 0.84 g
クエン酸緩衝液（クエン酸、クエン酸ナトリウム、グリセロール） 174.8 g
【００５５】
［実施例７］
0.41 mg/mlの濃度で溶解されたトラボプロストを含有する油／界面活性剤溶液（オレイン酸エチル：Tween(登録商標)80：Brij(登録商標)52＝1:1:0.04）と、生理的水性相（pH 7.4、0.9％NaCl）とを、パドルミキサーを用いて混合することによって、液体状の油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:20（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成：
トラボプロスト 0.0040 g
オレイン酸エチル 4.51 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(Tween(登録商標)80) 4.48 g
ポリオキシル(2) セチルエーテル(Brij(登録商標)52) 0.18 g
生理溶液（0.9％NaCl、pH 7.4） 90.3 g
【００５６】
［実施例８］
2.3 mg/mlの濃度で溶解されたビマトプロストを含有する油／界面活性剤相（Mygliol 812：Tween(登録商標)80：Tween(登録商標)20＝1:1.5:0.5）と、抗菌剤（クロロブタノール0.5％）を含有する生理的水性相（0.9％NaCl、pH 7.4）とを、パドルミキサーを用いて混合することによって、液体状の油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:20（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成：
ビマトプロスト 0.06 g
Mygliol 812 8.46 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(Tween(登録商標)80) 12.89 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート(Tween(登録商標)20) 4.40 g
クロロブタノール 1.0 g
生理水性相（0.9％NaCl、pH 7.4） 173.1 g
【００５７】
以下の実施例は、プロスタグランジンの安定性に対する特定の油／水比の範囲の効果を示すために、低い油／水比で比較のために調製した。
【００５８】
［比較例Ａ］
0.79 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する油／界面活性剤溶液（オレイン酸エチル：Tween(登録商標)80：Tween(登録商標)20＝1:1:0.5）と、生理的水性相（0.9％NaCl、pH 7.4）とを、パドルミキサーを用いて混合することによって、油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:40（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成：
ラタノプロスト 0.0125 g
オレイン酸エチル 6.37 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(Tween(登録商標)80) 6.37 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート(Tween(登録商標)20) 3.15 g
生理溶液（0.9％NaCl、pH 7.4） 234.1 g
【００５９】
［実施例９］
上記実施例に記載したとおりに調製した油／水サブミクロンエマルジョンを、物理化学的な観点（サブミクロンエマルジョンのサイズおよび電気化学的電荷、さまざまな貯蔵条件下でのプロスタグランジンの化学的安定性、抗菌有効性）から特性決定した。得られたデータを、本明細書の以下の段落および表において報告する。
【００６０】
［９．１］：本発明のサブミクロンエマルジョンの液滴の電気化学的な電荷測定
実施例１〜８および比較例Ａに示したとおりに調製したサブミクロンエマルジョンの液滴のサイズおよび電気化学的電荷を、動的レーザー光散乱法（Malvern Instruments社、Zetasizer Nano ZS）によって測定した。
【００６１】
ゼータ電位の測定は、Malvern Instruments Ltd社（英国）のZetasizer Nano ZSを使用して実施した。分析すべき試料（0.75 ml）を、気泡を避けるためにシリンジを用いて、電極に装着された折り畳まれたキャピラリーセル内に入れた。このセルを、装置に挿入し、自動測定シークエンスを開始させた。個々の測定結果が全て一緒に蓄積されて、最終的なゼータ電位結果を与えるために加算される。分析のために試料を希釈する必要はなく、したがって、試料の特性が人為的に変化する危険が全くなかった。
【００６２】
データを表１に報告する。
【００６３】
【表１】
【００６４】
調製した全ての製剤は、均質な液体状分散物となり、相の分離または視認可能な大きい液滴が全く無かった。実際に、表１に報告したデータにより、少なくとも700 nm未満の液滴サイズを有するサブミクロンエマルジョンの形成が裏付けられている。電気化学的な電荷（ゼータ電位）の値は、いずれもおよそ0に等しく、界面剤として非イオン性界面活性剤を使用した結果としてほとんど中性の電荷を示していた。
【００６５】
［９．２］：ランタノプロストの化学的安定性の試験
45℃、25℃、および4℃の貯蔵条件での安定性の試験を、実施例１のランタノプロストのサブミクロンエマルジョンについて実施した。
【００６６】
試料をガラス容器に保存し、市販のラタノプロスト眼科用水性溶液（Xalatan(登録商標)）を参照製品として用いた。45℃では、実施例１のサブミクロンエマルジョンを、ガラス瓶内だけでなく、２種類のプラスチックボトル内に入れた。
【００６７】
Xalatan(登録商標)製剤は、単純な緩衝等張水溶液であり、以下の成分から製造されている：
ラタノプロスト（100 ml中0.005 g）
塩化ナトリウム
リン酸一水素ナトリウム
リン酸二水素ナトリウム、
ベンザルコニウムクロライド
注入可能物とするための水
【００６８】
この組成物は、本発明のマイクロエマルジョンとは全く異なっている。オレイン酸エチルなどの油性成分が全く存在せず、ベンジルアルコニウムクロライドなどの強いカチオン性防腐剤が存在する。これに対して、本製剤は、Tween(登録商標)80およびTween(登録商標)20などの非イオン性界面活性剤だけを含む。
【００６９】
ランタノプロスト含有量を、UV検出器を備えたHPLC（Aglientシリーズ1100）を使用し、２種の移動相の混合物を用いて測定した。下記表２ａ、２ｂ、２ｃに報告したデータは、液体製剤1 ml当たりのランタノプロスト濃度で示した。
【００７０】
【表２Ａ】
【表２Ｂ】
【表２Ｃ】
【００７１】
報告したデータは、市販されている水溶液であるXalatan(登録商標)との比較における本発明のサブミクロンエマルジョンの明らかにより高い安定性を実証している。25℃での非常に良好な安定性が特に興味深いことを強調する。25℃での良好な安定性は、低温条件の必要性を避けて室温貯蔵の表示を可能にする。さらに、表２ｃにおける45℃でのデータは、本発明のマイクロエマルジョンが、ガラス瓶内でもプラスチック容器内でもXalatan(登録商標)より大幅により安定であることを明らかにしている。
【００７２】
このように、実施例１の製剤は、試験した条件下で、液体のままであり、均質であり、全く相分離しなかった。
【００７３】
プロスタグランジンの化学的安定性に対するサブミクロンエマルジョンの油／水比の潜在的な影響を、本発明のサブミクロンエマルジョン（実施例１）の安定性と、比較例Ａのサブミクロンエマルジョン（より希釈された油／水比においてのみ異なる実施例）とを比較することによって試験した。
【００７４】
ランタノプロスト濃度は、既に記述したHPLC法で測定する。
【００７５】
【表３】
【００７６】
表３に報告したデータは、高い油／水比を有するエマルジョン（実施例１、油／水比＝1/20）が、より低い油／水比を有するエマルジョン（比較例Ａ、油／水比＝1/40）より安定であることを明らかに示している。
【００７７】
［９．３］：サブミクロンエマルジョンの物理化学的安定性
さまざまな温度で貯蔵した本発明の製剤を、レーザー光散乱（Malvern Zetasizer Nano ZS）によってその液滴サイズについて特性決定した。データを表４に報告する。
【００７８】
【表４】
【００７９】
表４のデータによって明らかに認められるように、本発明の眼科用プロスタグランジン製剤は、高温で長期間後でもサブミクロンサイズの液滴のを維持していた。
【００８０】
［９．４］：サブミクロンエマルジョンの抗菌効果
眼科用製剤の場合、製剤の貯蔵中および使用中に微生物の混入が防止されることを明らかに示して、製剤の抗菌有効性を実証することが必須である。
【００８１】
したがって、サブミクロエマルジョンの水性相中に、温和な非刺激性防腐剤であるクロロブタノールを組み入れた（実施例４）。この製剤を、イタリアの薬局方（11th edition, pp 533-534, 2002）の要件（ヨーロッパ薬局方に沿った要件）に従って試験した。この公的な試験は、試験下の製剤に、２種の細菌〔緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、ブドウ球菌（Staphylococcus aereus）〕および１種の菌〔カンジダ（Candida albicans）〕を、制御された濃度で接種することに基づいている。最高で１ヶ月までの予め定められた時点で、接種した製剤の分析十分量の試料の生存微生物数を分析した。データを以下の表５に報告する。
【００８２】
【表５】
【００８３】
表５に報告したデータは、試験したサブマイクロエマルジョンの非常に良好な抗菌有効性を示している。実際に、容認判定Ａの公的な基準を満たしている。
【００８４】
さらに、クロロブタノールを防腐剤として含有する本発明の製剤（実施例４）が、高温での長期保存後でも安定であることが明らかとなった。
【００８５】
【表６】
【００８６】
安定性は、９．２節で記述したとおりに、HPLC分析法によって試験した。
【００８７】
［実施例１０］：眼への刺激可能性の測定
本発明の油／水マイクロエマルジョン（ラタノプロストを含まないもの）を、眼への刺激可能性に関して試験した。再構成ヒト角膜上皮Skin Ethicモデル（RHCE）（Nguyen D. H., Beuerman R. W., De Wever B.およびRosdy M. 「Three-dimensional construct of the human corneal epithelium for in vitro toxicology.」、H. SalemおよびS. A. Katz, Editors, 「Alternative Toxicological Methods」, CRC Press (2003), pp. 147-159）を用いた。アッセイの原理は、試験物質への局所的な曝露後の、再構成されたヒト角膜上皮培養物における細胞毒性を、MTT（3-[4,5-ジメチルチアゾール-2-イル]-2,5-ジフェニル-テトラゾリウムブロマイド）比色還元アッセイによって測定することに基づいている。
【００８８】
試験物質を、60分の曝露期間および16時間の曝露後のインキュベーション期間経過後に、以下の予想モデルにしたがうMTT生存分析に基づいて分類した。
【００８９】
i) 試験物質は、組織の生存率が50％より高い場合には、眼に対して非刺激性であると判断される。
ii) 試験物質は、組織の生存率が50％以下である場合には、眼に対して刺激性であると判断される。
【００９０】
陰性対照組織と比較して、試験物質で処理した組織の相対的なMTT生存率は、60分の曝露期間および16時間の曝露後のインキュベーション期間経過後に、104.3％であった。
【００９１】
結論として、試験条件下では、試験物質は非刺激性であると判断された。
【００９２】
［実施例１１］：ｉｎ ｖｉｖｏ試験
本発明の油／水マイクロエマルジョン（ラタノプロストを含まないもの）を、眼への刺激可能性に関して、in vivoのウサギ試験モデルで試験した。この試験は、３匹のニュージーランド白ウサギについて実施した。単回の適用で、0.1 mlのマイクロエマルジョンを適用し、その後1日後、2日後、および3日後に数値化を行った。試験方法は、ISO 10993-1: 2003、ISO 10993-10: 2002、およびISO 10993-12: 2007に従った。眼への刺激性スコアの値を、表７に示す。
【００９３】
【表７】
【００９４】
マイクロエマルジョンは、適用後にわずかな刺激効果をもたらし、滴下後24時間以内に十分に回復可能であるということができる。これらの結果に基づいて、本マイクロエマルジョンは、眼への刺激性がないと判断することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性剤としての少なくとも１種のプロスタグランジンと、少なくとも２種の非イオン性界面活性剤の組合せを含む界面活性成分とを含む水中油型エマルジョンに関する。このエマルジョンは、眼科用途、特に緑内障および／または高眼圧症の治療に好適であり、向上したプロスタグランジン活性剤の化学安定性を有し、長期の貯蔵、例えば室温での長期の貯蔵が可能である。
【背景技術】
【０００２】
プロスタグランジン類は、ヒトの組織または器官に見られ、広範な生理活性を有する化学種である。いくつかのプロスタグランジンの合成F2α類縁体は、眼科用医薬、とりわけ眼圧降下性抗緑内障剤として有用であることが知られている。例えば、ラタノプロスト、トラボプロスト、ビマトプロスト、およびウノプロストンが、それぞれ、商標名Xalatan（登録商標）、Travatan（登録商標）、Lumigan（登録商標）、およびRescula（登録商標）の下で、高眼圧症および緑内障の治療のための眼科用点眼溶液として市場に導入されている。
【０００３】
これらのプロスタグランジン類縁体に関連する問題は、これらの水溶性が幾分低いこと、およびとりわけ水溶液中におけるこれらの化学的不安定性である。このため、多数のさまざまな眼科用製剤が、このような問題を克服するために提案されてきた。
【０００４】
欧州特許出願公開第0435682号には、プロスタグランジン類と、疎水性キャビティを有する水溶性錯化剤であるシクロデキストリン類との包摂錯体の使用が記載されている。ここでは、プロスタグランジン類などの疎水性薬剤が前記キャビティ内に包摂されて、高い水溶性および高い水中安定性がもたらされる。
【０００５】
シクロデキストリンを含有するラタノプロスト眼科用製剤の安定性および臨床上の有用性は、The Journal of Clinical Pharmacology 47, 121-126, 2007に記載されている。
【０００６】
プロスタグランジン類を錯化し且つ安定化するための、変性シクロデキストリン類（すなわち、エーテル化シクロデキストリン類）の使用が、欧州特許出願公開第0330511号において提唱されている。
【０００７】
溶液のpHを5〜6.25の範囲の値に調節することによる、あるいはε-アミノカプロン酸を添加することによる、ランタノプロストの眼科用水溶液の安定化が、欧州特許出願公開第1532981号に記載されている。
【０００８】
プロスタグランジン類の溶解性および安定性は、ポリエトキシル化されたヒマシ油をその水溶液に添加するによっても改善される（米国特許第5,849,792号）。
【０００９】
プロスタグランジン類の眼科用製剤が、米国特許出願公開第2004/076678号に提唱されている。ここでは、アクリレート、セルロース、または他のポリマー類が、眼への投与時の有効性を引き延ばすためにプロスタグランジン類の水溶液に添加されている。
【００１０】
眼科用エマルジョンの一例が米国特許第3,608,073号に記載されており、ピロカルピン、油、水性相、および界面剤を含有する製剤を対象としている。
【００１１】
欧州特許出願公開第0521799号は、油、両性界面活性剤、およびリン脂質を用いる眼科用サブミクロンエマルジョンの調製を教示している。
【００１２】
油、水性相、およびリン脂質からなる成分が、高圧ホモジナイゼーションにかけられて、フルビプロフェンを含有する眼科用途のためのサブミクロンエマルジョンが生じている（米国特許第5,171,566号）。
【００１３】
サブミクロンエマルジョンを安定化するために、疎水性懸濁化粒子を添加することが米国特許出願公開第2003/215471号に示唆されている。
ランタノプロストの、高圧ホモジナイゼーションによって得られるマイクロエマルジョンが、Int. J. Pharm., 305, 176-179, 2005に記載されている。この安定化は、ポリビニルアルコールを乳化剤として用いることによって得られている。
【００１４】
ベンザルコニウムクロライドは、眼科用製剤のために最も使用されている抗菌性防腐剤の１つであるが、ベンザルコニウムクロライドは、液滴を安定化するその正電荷のおかげで、眼科用マイクロエマルジョンの製剤においても広く使用されている（米国特許第5,698,219号）。この正電荷は、他の陽イオン性剤によっても供給されうる（国際公開第2006/050838号）。
【００１５】
プロスタグランジン類の投与のための、正に荷電したマイクロエマルジョンの使用が、国際公開第2006/050836号または同第2007/042262号に記載されている。この界面膜は、非イオン性界面活性剤と、陽イオン性剤〔例えば、四級アンモニウム化合物
（ベンザルコニウムクロライドを含む）、アミノアルコール、ビグアナイド塩など〕との組合せによって形成される。得られるエマルジョンは、少なくとも16 mVのゼータ電位を有する。
【００１６】
しかし、眼科用途のための陽イオン性剤の使用は、眼への忍容性を保証するために注意深く検証される必要がある（Eur. J. Pharm. Biopharm., 53, 263-280, 2002）。
【００１７】
特定数の炭素原子を有するベンザルコニウムクロライド、界面活性剤、および等張化剤の組合せが、安定な眼科用ランタノプロスト溶液を記載する欧州特許出願公開第1547599号において記載されている。
【００１８】
欧州特許出願公開第0458588号には、高眼圧症の治療に有用な薬剤の製造のための眼圧降下に相乗効果を有する組合せであって、13,14-ジヒドロ-15-ケト-20-C1〜6アルキルプロスタグランジンと、ポリオキシエチレンソルビタン不飽和C10〜C24脂肪酸モノエステルとの組合せが開示されている。
【００１９】
欧州特許出願公開第1655021号には、医薬などの疎水性成分の送達用賦形剤として有用な水中油型エマルジョンが記載されており、この場合において、エマルジョン粒子は、正味の正電荷を有しており、陽イオン剤を含んでいる。
【００２０】
欧州特許出願公開第1681059号には、プロスタグランジンF2α誘導体類、油、水溶性ポリマー、および水を含有する水中油型エマルジョンを含む医薬組成物が記載されている。水溶性ポリマーは、ポリビニル化合物、水溶性セルロース化合物、または多糖類であることができる。油は、動物油もしくは植物油、および／または中鎖脂肪酸トリグリセリドであることができる。
【００２１】
米国特許出願公開第2006/0182781号には、眼科用ミクロ粒子組成物であって、ミクロ粒子が、ポリマーマトリックスと、活性剤（例えば、プロスタグランジン）とを含むものが記載されている。
【００２２】
国際公開第2004/082625号および米国特許出願公開第2007/0036829号には、水性相に分散された油性小球を含む自己乳化性眼科用組成物であって、この小球が、活性剤成分と極性油性成分とを含むものが記載されている。この油性成分は、エマルジョンの総質量の最高で1.25質量％までの量で存在する。
【００２３】
米国特許第5,827,835号には、少なくとも30 KDの分子量を有する非イオン性セルロースエーテル、油、水、および場合により乳化剤を含む非毒性エマルジョン組成物が記載されている。このエマルジョンは、プロスタグランジン類などの医薬をさらに含んでいてもよい。
【００２４】
国際公開第02/064166号には、少なくとも１種のモノグリセリド、少なくとも１種の乳化剤、水溶液、および少なくとも１種の有機溶媒を含む組成物が記載されている。
【００２５】
韓国特許出願公開第2003/0046553号には、プロスタグランジンE1を活性成分として含む温度感受性の外用エマルジョン組成物が記載されている。この組成物は、皮膚に適用され、体温でゲルを形成する。しかし、このゲルの形成は、眼科用途には好ましくない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２６】
【特許文献１】欧州特許出願公開第1681059号
【特許文献２】米国特許出願公開第2006/0182781号
【特許文献３】国際公開第2004/082625号パンフレット
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２７】
意外にも、フロスタグランジン活性剤を含有する油相と、水性相と、少なくとも２種の非イオン性界面活性剤を含む組合せを含む界面活性成分とを組み合わせることにより、眼科用途のための安定なサブミクロンエマルジョンが自発的に形成されることが見出された。これらのエマルジョンは、好ましくは、実質的に中性の電気化学的電荷（ゼータ電位）を有し、かつ、そのマイクロエマルジョンの物理的性質においてもプロスタグランジン活性剤の化学的安定性においても優れた安定性を有する。このエマルジョンは、単に成分を混合して自発的なマイクロエマルジョン化を起こさせることによって調製することができる。高エネルギープロセス（例えば、高圧ホモジナイゼーションおよび／または音波処理など）を適用する必要はない。このことが、この系のさらなる安定化に寄与する。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
このように、本発明の主題は、成分として、
(i) 油性分散相、
(ii) 油性相成分(i)中に溶解された、活性剤としての少なくとも１種のプロスタグランジン、
(iii) 少なくとも２種の非イオン性界面活性剤の組合せを含む界面活性剤、および
(iv) 場合により製剤成分を含んでいてもよい水性連続相、
を含み、実質的に中性のゼータ電位を有する、眼科用途のための水中油型エマルジョンである。
【００２９】
本発明のエマルジョンは、医薬製剤、特に眼科用製剤としての使用に適している。好ましくは、本水中油型エマルジョンは、緑内障および／または高眼圧症などの眼疾患の予防、緩和、および／または治療のために使用される。
【００３０】
本発明のエマルジョンは、長期の貯蔵期間後の活性成分の回収率として例えばHPLCによって測定される、高い化学安定性を特徴とする。25℃にて6ヶ月、より好ましくは9ヶ月、最も好ましくは12ヶ月貯蔵した後の活性成分の回収率は、少なくとも80％、より好ましくは少なくとも90％、最も好ましくは95％である。45℃にて14日間、より好ましくは30日間、最も好ましくは45日間貯蔵した後の活性成分の回収率は、少なくとも80％、より好ましくは少なくとも90％、最も好ましくは95％である。さらに、本発明の製剤は、液滴サイズの測定によって判断される高い物理的安定性を特徴とする。好ましくは、エマルジョンは、25℃にて少なくとも6ヶ月間および45℃にて少なくとも45日間安定である。
【００３１】
とりわけ好ましい実施態様では、本エマルジョンが、25℃にて少なくとも6ヶ月、より好ましくは少なくとも9ヶ月、最も好ましくは少なくとも12ヶ月の化学的および物理的な安定性を有することが明らかになった。驚くべきことに、この化学的および物理的な安定性が、瓶の開封によって低下しないことが明らかになった。
【００３２】
本発明のエマルジョンは、好ましくは、油性液滴の平均サイズが1μm未満のマイクロエマルジョンである。より好ましくは、この油性液滴の平均液滴サイズは、700 nm以下である。本発明のエマルジョンは、その物理的状態が4℃〜45℃まで変化せず、ゲルを形成しないことがさらに好ましい。
【００３３】
好ましくは、本エマルジョンは、実質的に中性のゼータ電位、すなわち-10 mV〜+10 mVの間、好ましくは-4 mV〜+4 mVの間、より好ましくは-2 mV〜+2 mVの間のゼータ電位を有することを特徴とする。
【００３４】
油性相(i)は、好ましくは、エマルジョンの総質量に基づいて少なくとも3質量％、より好ましくは少なくとも5質量％の量で存在する。油性相の最大量は、エマルジョンの総質量に基づいて好ましくは25質量％、より好ましくは20質量％である。油性相(i)は、医薬品として許容可能な油（例えば、動物油、植物油、合成油、またはこれらの混合物）から選択される。好ましくは、油性相は、医薬品として許容可能な脂肪酸エステル、例えば、脂肪酸トリグリセリドまたは脂肪酸モノエステルを含む。
【００３５】
より好ましくは、油性相の成分は、以下の４つの要素に基づいて選択される：
(1) 眼への適用への許容性；
(2) 少なくとも0.1 mg/ml、好ましくは少なくとも2 mg/ml、より好ましくは少なくとも10 mg/mlの、プロスタグランジン成分(ii)の良好な溶解度；
(3) 上述したプロスタグランジン成分(ii)の化学的安定性；および
(4) 少なくともlogP=0.5、好ましくは少なくともlogP=2の、油性相により多く分配される油／水の分配係数。
好適な油性相成分の具体的な例は、オレイン酸エチル、Miglyol(登録商標)812（すなわちC8〜10脂肪酸トリグリセリドの混合物）、ヒマシ油、コーン油、またはこれらの混合物である。
【００３６】
本発明の水中油型エマルジョンは、少なくとも１種のプロスタグランジンを活性剤として含む。好ましくは、プロスタグランジンは、親油性プロスタグランジン、例えば、プロスタグランジンF2α類縁体、例えば、ラタノプロスト、トラボプロスト、ビマトプロスト、ウノプロストン、またはこれらの２種以上の混合物である。より好ましくは、プロスタグランジン成分は、ラタノプロストである。プロスタグランジン類は、好ましくは、エマルジョンの総質量に基づいて0.001〜5質量％、より好ましくは0.002〜0.1質量％の量で存在する。
【００３７】
界面活性剤成分(ii)は、少なくとも２種の非イオン性界面活性剤の組合せを含む。この２種の界面活性剤の組合せの選択は、好ましくは、以下の考慮に基づいて行う。
【００３８】
(1) 眼科用途に許容可能な（眼への忍容性を有する）非イオン性界面活性剤だけを用いること；および
(2) 界面活性剤の組合せおよび量は、第一の非イオン性界面活性剤を油性相または水性相に添加し、油性相と水性相とを混合し、さらに第二の非イオン性界面活性剤を、この混合物に、均質な油／水エマルジョンが相分離または視認可能な液滴の形成なしに形成されるための十分量で添加した場合に、レーザー光散乱解析によって測定して平均液滴サイズが1μm未満、より好ましくは700 nm以下となるように選択すること。
【００３９】
界面活性剤成分(iii)の非イオン性界面活性剤は、親油性非イオン性界面活性剤、親水性非イオン性界面活性剤、またはこれらの組合せから選択することができる。好ましくは、界面活性剤成分(iii)の非イオン性界面活性剤の組み合わされた総HLB値は、少なくとも10、好ましくは少なくとも13であり、かつ好ましくは最高で20、より好ましくは最高で18までである。界面活性剤は、自発的なエマルジョン形成を促進する量で存在する。好ましくは、界面活性剤成分は、第一および第二の非イオン性界面活性剤を、エマルジョンの総質量に基づいてそれぞれ0.1〜10質量％の量で存在する。組み合わせた非イオン性界面活性剤の量は、エマルジョンの総質量に基づいて、好ましくは1〜20質量％、より好ましくは2〜12質量％である。
【００４０】
非イオン性界面活性剤は、好ましくは、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル類、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンのモノ-またはポリエステル、および／またはポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテルから選択される。好ましくは、界面活性剤成分(iii)の非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート（Tween 80(登録商標)）、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート（Tween 20(登録商標)）、ポリオキシエチレン(2)セチルエーテル（Brij 52(登録商標)）、ポリオキシエチレン(10)セチルエーテル（Brij 56(登録商標)）、およびポリオキシエチレン(20)セチルエーテル（Brij 58(登録商標)）からなる群から選択される。より好ましくは、界面活性剤成分(iii)の非イオン性界面活性剤の組合せは、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート（Tween 80(登録商標)）／ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート（Tween 20(登録商標)）、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート（Tween 80(登録商標)）／ポリオキシル(2)セチルエーテル（Brij 52(登録商標)）、ポリオキシル(2)セチルエーテル（Brij 52(登録商標)）／ポリオキシル(20)セチルエーテル（Brij 58(登録商標)）、およびポリオキシル(20)セチルエーテル（Brij 58(登録商標)）／ポリオキシル(10)セチルエーテル（Brij 56(登録商標)）から選択される。
【００４１】
本発明の水中油型エマルジョンは、好ましくは、陽イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、短鎖アルコール（例えば、C1〜4の一価アルコール）、脂肪酸（例えば、C4〜8の脂肪酸）を含まず、あるいは、レシチン類または／およびリン脂質類を含まない。このような化合物は、眼への適合性または物理的／化学的不安定性の問題を有する可能性がある。
【００４２】
しかし、エマルジョンは、眼科用製剤に通常使用される他の成分、例えば、緩衝剤（例えば、リン酸塩類、クエン酸塩類など）、等張剤（例えば、グリセロール、ソルビトール、グルコース、塩化ナトリウムなど）、増粘化合物（例えば、ヒドロキシプロピルセルロースまたは他の水溶性セルロース誘導体類、ポリメチルメタクリレートもしくは他のポリアクリル酸誘導体類、キトサン、ヒアルロン酸、ポリビニルピロリドンなど）、抗菌性防腐剤（特にクロロブタノール）、抗酸化剤、または安定剤などを含んでいてよい。エマルジョンは、プロスタグランジンを唯一の活性剤として含んでいてもよい。異なる実施態様では、エマルジョンは、１種以上のさらなる活性剤、特に、好ましくは水性相に存在する親水性活性剤を含んでいてもよい。
【００４３】
さらなる活性剤の好ましい例は、以下のとおりである：
− ベータブロッカー、例えば、チモロール、レボブノロール、ベタキソロールなど、
− 抗炎症剤、例えば、ケトロラック、ベータ-またはデキサメタソンなど、
− 抗ウイルス剤、例えば、アシクロビルなど、
− 局所用眼科用麻酔剤、例えば、オキシブプロカインなど、
− 抗アレルギー剤、例えば、オロパタジン、アゼラスチン、エピナスチン、ロドキサミドなど、
− 抗ドライアイ剤、例えば、ヒアルロン酸、アセチルシステイン、ポリビニルアルコールなど、
− 他の眼圧(IOP)降下薬、例えば、ブリモニジン、ブリンゾラミド、ドルゾラミドなど、
− 緑内障の緊急治療剤、例えば、ピロカルピンなど。
【００４４】
エマルジョンの水性相(iv)は、好ましくは、医薬品として許容可能な水性相、好ましくは滅菌水、精製水、または眼科用途に適切な任意の他の種類の水からなる群から選択される水性相である。水性相は、エマルジョンの総質量に基づいて、好ましくは30〜95質量％の量、より好ましくは50〜95質量％の量で存在する。水性相の量には、場合により添加される、標準的な眼科用剤、緩衝材、防腐剤、等張剤なども含まれる。
【００４５】
とりわけ好ましい実施態様では、成分(i)から成分(iv)は、エマルジョンの総質量に基づいて、以下の量：
(i) 5.0質量％〜20.0質量％の油性相、
(ii) 0.001質量％〜5.0質量％のプロスタグランジン活性剤、
(iii) 0.1質量％〜10.0質量％の第一の非イオン性界面活性剤および0.1質量％〜10.0質量％の第二の非イオン性界面活性剤、
(iv) 50.0質量％〜95.0質量％の水性相、
で存在する。
【００４６】
上述した成分は、混合されると、安定なサブミクロンエマルジョンを、高エネルギー剪断手段を用いる必要なく自発的に生成する。例えば、エマルジョンは、下記工程：
(a) 場合により、製剤成分を水性相に溶解させる工程、
(b) 第一の非イオン性界面活性剤を水性相または油性相のいずれかに溶解させる工程、
(c) 第二の非イオン性界面活性剤を、水性相または油性相のいずれかに溶解させる工程、
(d) プロスタグランジン活性剤を油性相に溶解させる工程、および
(e) 油性相と水性相とを混合する工程
を含む方法によって調製することができる。
混合工程は、標準的な混合方法、例えば、パドルミキサー、磁気撹拌機、ホモジナイザーなどを使用する方法で実施することが好ましい。高エネルギー混合方法、例えば、高圧ホモジナイゼーションまたは音波処理を避けることができる。しかし、高エネルギー混合方法、例えば、高圧ホモジナイゼーションまたは音波処理を用いることもできる。
【００４７】
医薬品目的のためには、エマルジョンは、滅菌した成分および装置を用いて製造することが好ましい。製造工程の全ての工程は、無菌条件下で実施することが好ましく、最終的な製剤は、公的な薬局方の要求基準にしたがって試験する。エマルジョンを、多数回投与用製剤として製剤化する場合には、抗菌性防腐剤（例えばクロロブタノールなど）を添加する。
【実施例】
【００４８】
本発明を、以下の実施例によってさらに説明する。これらの実施例は、いかなる意味においても限定的なものであると解釈されるべきではない。
【００４９】
［実施例１］
0.44 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する油／界面活性剤溶液（オレイン酸エチル：Tween(登録商標)80：Tween(登録商標)20＝1:1:0.5（質量：質量：質量））と、生理的水性相（0.9％NaCl/pH 7.4）とを、パドルミキサーを用いて混合することによって、油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:20（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成は以下のとおりである。
ラタノプロスト 0.005 g
オレイン酸エチル 4.51 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(Tween(登録商標)80) 4.51 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート(Tween(登録商標)20) 2.30 g
生理溶液（0.9％NaCl/pH 7.4） 88.7 g
【００５０】
［実施例２］
0.33 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する油／界面活性剤溶液（Myglyol 812：Tween(登録商標)80：Tween(登録商標)20＝1:1.5:1）と、等張剤（ソルビトール）を含有するリン酸緩衝水溶液（リン酸二水素ナトリウム／リン酸一水素ナトリウム）とを、磁気撹拌機を用いて混合することによって、油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:20（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成は以下のとおりである。
ラタノプロスト 0.005 g
Myglyol 812 4.28 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(Tween(登録商標)80) 6.42 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート(Tween(登録商標)20) 4.28 g
リン酸緩衝水溶液（リン酸二水素ナトリウム／リン酸一水素ナトリウム、ソルビトール） 85.02 g
【００５１】
［実施例３］
0.39 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する油／界面活性剤溶液（ヒマシ油：Brij(登録商標)56＝1:0.036）と、Brij(登録商標)58を4質量％の割合で含有する生理的水性相（0.9％NaCl/pH 7.4）とを、パドルミキサーを用いて混合することによって、液体状の油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:10（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成は以下のとおりである。
ラタノプロスト 0.001 g
ヒマシ油 17.9 g
ポリオキシル(20)セチルエーテル(Brij(登録商標)58) 6.98 g
ポリオキシル(10) セチルエーテル(Brij(登録商標)56) 0.64 g
生理水性相（0.9％NaCl/pH 7.4） 174.5 g
【００５２】
［実施例４］
0.45 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する油／界面活性剤溶液（オレイン酸エチル：Tween(登録商標)80：Tween(登録商標)20＝1:1:0.5）と、抗菌剤（クロロブタノール0.5％）を含有する生理的水性相（0.9％NaCl/pH 7.4）とを、パドルミキサーを用いて混合することによって、油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:20（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成は以下のとおりである。
ラタノプロスト 0.0075 g
オレイン酸エチル 6.62 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(Tween(登録商標)80) 6.62 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート(Tween(登録商標)20) 3.31 g
クロロブタノール 0.80 g
生理水性相（0.9％NaCl/pH 7.4） 132.6 g
【００５３】
［実施例５］
0.59 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する油／界面活性剤溶液（オレイン酸エチル：Brij(登録商標)52＝1:0.045）と、Brij(登録商標)58を4質量％の割合で含有するクエン酸緩衝溶液（クエン酸、クエン酸ナトリウム）とを、剪断ミキサーを用いて混合することによって、油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。このクエン酸緩衝溶液には、ソルビトールが等張剤として溶解されていた。油性相と水性相との比は、およそ1:20（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成：
ラタノプロスト 0.0050 g
オレイン酸エチル 4.65 g
ポリオキシル(20)セチルエーテル(Brij(登録商標)58) 3.66 g
ポリオキシル(2) セチルエーテル(Brij(登録商標)52) 0.21 g
クエン酸緩衝液（クエン酸、クエン酸ナトリウム、ソルビトール） 91.5 g
【００５４】
［実施例６］
0.40 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する界面活性剤／油溶液（ヒマシ油：Brij(登録商標)52＝1:0.05）と、Brij(登録商標)58を4質量％の割合で含有するクエン酸緩衝溶液（クエン酸、クエン酸ナトリウム）とを、剪断ミキサーを用いて混合することによって、油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。このクエン酸緩衝溶液には、グリセロールが等張剤として溶解されていた。油性相と水性相との比は、およそ1:10（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成：
ラタノプロスト 0.01 g
ヒマシ油 17.3 g
ポリオキシル(20)セチルエーテル(Brij(登録商標)58) 7.0 g
ポリオキシル(2) セチルエーテル(Brij(登録商標)52) 0.84 g
クエン酸緩衝液（クエン酸、クエン酸ナトリウム、グリセロール） 174.8 g
【００５５】
［実施例７］
0.41 mg/mlの濃度で溶解されたトラボプロストを含有する油／界面活性剤溶液（オレイン酸エチル：Tween(登録商標)80：Brij(登録商標)52＝1:1:0.04）と、生理的水性相（pH 7.4、0.9％NaCl）とを、パドルミキサーを用いて混合することによって、液体状の油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:20（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成：
トラボプロスト 0.0040 g
オレイン酸エチル 4.51 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(Tween(登録商標)80) 4.48 g
ポリオキシル(2) セチルエーテル(Brij(登録商標)52) 0.18 g
生理溶液（0.9％NaCl、pH 7.4） 90.3 g
【００５６】
［実施例８］
2.3 mg/mlの濃度で溶解されたビマトプロストを含有する油／界面活性剤相（Mygliol 812：Tween(登録商標)80：Tween(登録商標)20＝1:1.5:0.5）と、抗菌剤（クロロブタノール0.5％）を含有する生理的水性相（0.9％NaCl、pH 7.4）とを、パドルミキサーを用いて混合することによって、液体状の油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:20（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成：
ビマトプロスト 0.06 g
Mygliol 812 8.46 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(Tween(登録商標)80) 12.89 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート(Tween(登録商標)20) 4.40 g
クロロブタノール 1.0 g
生理水性相（0.9％NaCl、pH 7.4） 173.1 g
【００５７】
以下の実施例は、プロスタグランジンの安定性に対する特定の油／水比の範囲の効果を示すために、低い油／水比で比較のために調製した。
【００５８】
［比較例Ａ］
0.79 mg/mlの濃度で溶解されたラタノプロストを含有する油／界面活性剤溶液（オレイン酸エチル：Tween(登録商標)80：Tween(登録商標)20＝1:1:0.5）と、生理的水性相（0.9％NaCl、pH 7.4）とを、パドルミキサーを用いて混合することによって、油／水サブミクロンエマルジョンを調製した。油性相と水性相との比は、およそ1:40（質量／質量）であった。
得られたサブミクロンエマルジョンの組成：
ラタノプロスト 0.0125 g
オレイン酸エチル 6.37 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(Tween(登録商標)80) 6.37 g
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート(Tween(登録商標)20) 3.15 g
生理溶液（0.9％NaCl、pH 7.4） 234.1 g
【００５９】
［実施例９］
上記実施例に記載したとおりに調製した油／水サブミクロンエマルジョンを、物理化学的な観点（サブミクロンエマルジョンのサイズおよび電気化学的電荷、さまざまな貯蔵条件下でのプロスタグランジンの化学的安定性、抗菌有効性）から特性決定した。得られたデータを、本明細書の以下の段落および表において報告する。
【００６０】
［９．１］：本発明のサブミクロンエマルジョンの液滴の電気化学的な電荷測定
実施例１〜８および比較例Ａに示したとおりに調製したサブミクロンエマルジョンの液滴のサイズおよび電気化学的電荷を、動的レーザー光散乱法（Malvern Instruments社、Zetasizer Nano ZS）によって測定した。
【００６１】
ゼータ電位の測定は、Malvern Instruments Ltd社（英国）のZetasizer Nano ZSを使用して実施した。分析すべき試料（0.75 ml）を、気泡を避けるためにシリンジを用いて、電極に装着された折り畳まれたキャピラリーセル内に入れた。このセルを、装置に挿入し、自動測定シークエンスを開始させた。個々の測定結果が全て一緒に蓄積されて、最終的なゼータ電位結果を与えるために加算される。分析のために試料を希釈する必要はなく、したがって、試料の特性が人為的に変化する危険が全くなかった。
【００６２】
データを表１に報告する。
【００６３】
【表１】
【００６４】
調製した全ての製剤は、均質な液体状分散物となり、相の分離または視認可能な大きい液滴が全く無かった。実際に、表１に報告したデータにより、少なくとも700 nm未満の液滴サイズを有するサブミクロンエマルジョンの形成が裏付けられている。電気化学的な電荷（ゼータ電位）の値は、いずれもおよそ0に等しく、界面剤として非イオン性界面活性剤を使用した結果としてほとんど中性の電荷を示していた。
【００６５】
［９．２］：ランタノプロストの化学的安定性の試験
45℃、25℃、および4℃の貯蔵条件での安定性の試験を、実施例１のランタノプロストのサブミクロンエマルジョンについて実施した。
【００６６】
試料をガラス容器に保存し、市販のラタノプロスト眼科用水性溶液（Xalatan(登録商標)）を参照製品として用いた。45℃では、実施例１のサブミクロンエマルジョンを、ガラス瓶内だけでなく、２種類のプラスチックボトル内に入れた。
【００６７】
Xalatan(登録商標)製剤は、単純な緩衝等張水溶液であり、以下の成分から製造されている：
ラタノプロスト（100 ml中0.005 g）
塩化ナトリウム
リン酸一水素ナトリウム
リン酸二水素ナトリウム、
ベンザルコニウムクロライド
注入可能物とするための水
【００６８】
この組成物は、本発明のマイクロエマルジョンとは全く異なっている。オレイン酸エチルなどの油性成分が全く存在せず、ベンジルアルコニウムクロライドなどの強いカチオン性防腐剤が存在する。これに対して、本製剤は、Tween(登録商標)80およびTween(登録商標)20などの非イオン性界面活性剤だけを含む。
【００６９】
ランタノプロスト含有量を、UV検出器を備えたHPLC（Aglientシリーズ1100）を使用し、２種の移動相の混合物を用いて測定した。下記表２ａ、２ｂ、２ｃに報告したデータは、液体製剤1 ml当たりのランタノプロスト濃度で示した。
【００７０】
【表２Ａ】
【表２Ｂ】
【表２Ｃ】
【００７１】
報告したデータは、市販されている水溶液であるXalatan(登録商標)との比較における本発明のサブミクロンエマルジョンの明らかにより高い安定性を実証している。25℃での非常に良好な安定性が特に興味深いことを強調する。25℃での良好な安定性は、低温条件の必要性を避けて室温貯蔵の表示を可能にする。さらに、表２ｃにおける45℃でのデータは、本発明のマイクロエマルジョンが、ガラス瓶内でもプラスチック容器内でもXalatan(登録商標)より大幅により安定であることを明らかにしている。
【００７２】
このように、実施例１の製剤は、試験した条件下で、液体のままであり、均質であり、全く相分離しなかった。
【００７３】
プロスタグランジンの化学的安定性に対するサブミクロンエマルジョンの油／水比の潜在的な影響を、本発明のサブミクロンエマルジョン（実施例１）の安定性と、比較例Ａのサブミクロンエマルジョン（より希釈された油／水比においてのみ異なる実施例）とを比較することによって試験した。
【００７４】
ランタノプロスト濃度は、既に記述したHPLC法で測定する。
【００７５】
【表３】
【００７６】
表３に報告したデータは、高い油／水比を有するエマルジョン（実施例１、油／水比＝1/20）が、より低い油／水比を有するエマルジョン（比較例Ａ、油／水比＝1/40）より安定であることを明らかに示している。
【００７７】
［９．３］：サブミクロンエマルジョンの物理化学的安定性
さまざまな温度で貯蔵した本発明の製剤を、レーザー光散乱（Malvern Zetasizer Nano ZS）によってその液滴サイズについて特性決定した。データを表４に報告する。
【００７８】
【表４】
【００７９】
表４のデータによって明らかに認められるように、本発明の眼科用プロスタグランジン製剤は、高温で長期間後でもサブミクロンサイズの液滴のを維持していた。
【００８０】
［９．４］：サブミクロンエマルジョンの抗菌効果
眼科用製剤の場合、製剤の貯蔵中および使用中に微生物の混入が防止されることを明らかに示して、製剤の抗菌有効性を実証することが必須である。
【００８１】
したがって、サブミクロエマルジョンの水性相中に、温和な非刺激性防腐剤であるクロロブタノールを組み入れた（実施例４）。この製剤を、イタリアの薬局方（11th edition, pp 533-534, 2002）の要件（ヨーロッパ薬局方に沿った要件）に従って試験した。この公的な試験は、試験下の製剤に、２種の細菌〔緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、ブドウ球菌（Staphylococcus aereus）〕および１種の菌〔カンジダ（Candida albicans）〕を、制御された濃度で接種することに基づいている。最高で１ヶ月までの予め定められた時点で、接種した製剤の分析十分量の試料の生存微生物数を分析した。データを以下の表５に報告する。
【００８２】
【表５】
【００８３】
表５に報告したデータは、試験したサブマイクロエマルジョンの非常に良好な抗菌有効性を示している。実際に、容認判定Ａの公的な基準を満たしている。
【００８４】
さらに、クロロブタノールを防腐剤として含有する本発明の製剤（実施例４）が、高温での長期保存後でも安定であることが明らかとなった。
【００８５】
【表６】
【００８６】
安定性は、９．２節で記述したとおりに、HPLC分析法によって試験した。
【００８７】
［実施例１０］：眼への刺激可能性の測定
本発明の油／水マイクロエマルジョン（ラタノプロストを含まないもの）を、眼への刺激可能性に関して試験した。再構成ヒト角膜上皮Skin Ethicモデル（RHCE）（Nguyen D. H., Beuerman R. W., De Wever B.およびRosdy M. 「Three-dimensional construct of the human corneal epithelium for in vitro toxicology.」、H. SalemおよびS. A. Katz, Editors, 「Alternative Toxicological Methods」, CRC Press (2003), pp. 147-159）を用いた。アッセイの原理は、試験物質への局所的な曝露後の、再構成されたヒト角膜上皮培養物における細胞毒性を、MTT（3-[4,5-ジメチルチアゾール-2-イル]-2,5-ジフェニル-テトラゾリウムブロマイド）比色還元アッセイによって測定することに基づいている。
【００８８】
試験物質を、60分の曝露期間および16時間の曝露後のインキュベーション期間経過後に、以下の予想モデルにしたがうMTT生存分析に基づいて分類した。
【００８９】
i) 試験物質は、組織の生存率が50％より高い場合には、眼に対して非刺激性であると判断される。
ii) 試験物質は、組織の生存率が50％以下である場合には、眼に対して刺激性であると判断される。
【００９０】
陰性対照組織と比較して、試験物質で処理した組織の相対的なMTT生存率は、60分の曝露期間および16時間の曝露後のインキュベーション期間経過後に、104.3％であった。
【００９１】
結論として、試験条件下では、試験物質は非刺激性であると判断された。
【００９２】
［実施例１１］：ｉｎ ｖｉｖｏ試験
本発明の油／水マイクロエマルジョン（ラタノプロストを含まないもの）を、眼への刺激可能性に関して、in vivoのウサギ試験モデルで試験した。この試験は、３匹のニュージーランド白ウサギについて実施した。単回の適用で、0.1 mlのマイクロエマルジョンを適用し、その後1日後、2日後、および3日後に数値化を行った。試験方法は、ISO 10993-1: 2003、ISO 10993-10: 2002、およびISO 10993-12: 2007に従った。眼への刺激性スコアの値を、表７に示す。
【００９３】
【表７】
【００９４】
マイクロエマルジョンは、適用後にわずかな刺激効果をもたらし、滴下後24時間以内に十分に回復可能であるということができる。これらの結果に基づいて、本マイクロエマルジョンは、眼への刺激性がないと判断することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の成分：
(i) 油性分散相、
(ii) 油性相成分(i)中に溶解された、活性剤としての少なくとも１種のプロスタグランジン、
(iii) 少なくとも２種の非イオン性界面活性剤の組合せを含む界面活性剤、および
(iv) 場合により製剤成分を含んでいてもよい水性連続相、
を含み、実質的に中性のゼータ電位を有する、眼科用途のための水中油型エマルジョン。
【請求項２】
油性相(i)が、前記エマルジョンの総質量に基づいて少なくとも5質量％の量で存在する、請求項１に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項３】
油性相成分(i)が、医薬品として許容可能な油、例えば、動物油、植物油、合成油、およびこれらの混合物などから選択される、請求項１または２に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項４】
油性相成分(i)が、オレイン酸エチル、Ｃ８〜Ｃ１０脂肪酸トリグリセリドの混合物、ヒマシ油、コーン油、またはこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項５】
プロスタグランジン成分(ii) の油性相(i)への溶解度が、少なくとも0.1 mg/mlである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項６】
プロスタグランジン成分(ii) の油性相(i)への溶解度が、少なくとも10 mg/mlである、請求項５に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項７】
プロスタグランジン成分(ii)の油／水の分配係数logPが、少なくとも0.5であり、油性相(i)に多く分配される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項８】
プロスタグランジン成分(ii)の油／水の分配係数logPが、少なくとも2であり、油性相(i) に多く分配される、請求項７に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項９】
プロスタグランジン成分(ii)が、プロスタグランジンF2α類似体である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１０】
プロスタグランジン成分(ii)が、ラタノプロスト、トラボプロスト、ビマトプロスト、およびウノプロストン、ならびにこれらの２種以上の混合物からなる群から選択される、請求項９に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１１】
前記プロスタグランジン成分(ii)がラタノプロストである、請求項１０に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１２】
界面活性剤成分(iii)の前記少なくとも２種の非イオン性界面活性剤が、親油性非イオン性界面活性剤、親水性非イオン性界面活性剤、またはこれらの組合せから選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１３】
界面活性剤成分(iii)の前記非イオン性界面活性剤の組み合わされた総HLB値が、少なくとも10、好ましくは少なくとも13であり、かつ好ましくは最高で18までである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１４】
界面活性剤成分(iii)の前記少なくとも２種の界面活性剤が、自己エマルジョン化を促進する量で存在する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１５】
界面活性剤成分(iii)の前記非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート（Tween 80(登録商標)）、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート（Tween 20(登録商標)）、ポリオキシエチレン(2)セチルエーテル（Brij 52(登録商標)）、ポリオキシエチレン(10)セチルエーテル（Brij 56(登録商標)）、およびポリオキシエチレン(20)セチルエーテル（Brij 58(登録商標)）からなる群から選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１６】
界面活性剤成分(iii)の前記非イオン性界面活性剤の組合せが、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート（Tween 80(登録商標)）とポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート（Tween 20(登録商標)）との組合せ、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート（Tween 80(登録商標)）とポリオキシル(2)セチルエーテル（Brij 52(登録商標)）との組合せ、ポリオキシル(2)セチルエーテル（Brij 52(登録商標)）とポリオキシル(20)セチルエーテル（Brij 58(登録商標)）との組合せ、およびポリオキシル(20)セチルエーテル（Brij 58(登録商標)）とポリオキシル(10)セチルエーテル（Brij 56(登録商標)）との組合せから選択される、請求項１５に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１７】
水性相成分(iv)が、医薬品として許容可能な水性相、好ましくは滅菌水、精製水、または眼科用途に適切な任意の他の種類の水からなる群から選択される水性相である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１８】
水性相成分(iv)が、場合によりさらなる添加剤、例えば、緩衝剤、等張剤、増粘化合物、抗菌性防腐剤、抗酸化剤、安定剤などを含んでいてもよい、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１９】
前記抗菌性防腐剤がクロロブタノールである、請求項１８に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２０】
-10 mV〜+10 mV、好ましくは-4 mV〜+4 mVのゼータ電位を有する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２１】
前記油の液滴の平均サイズが1μm未満であるマイクロエマルジョンである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２２】
前記エマルジョンの油性液滴の平均液滴サイズが700 nm以下である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２３】
25℃にて少なくとも6ヶ月間、好ましくは少なくとも9ヶ月間、より好ましくは少なくとも12ヶ月間安定である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２４】
成分(i)から成分(iv)が、エマルジョンの総質量に基づいて、以下の量：
(i) 5.0質量％〜20.0質量％の油性相、
(ii) 0.001質量％〜5.0質量％のプロスタグランジン活性剤、
(iii) 0.1質量％〜10.0質量％の第一の非イオン性界面活性剤および0.1質量％〜10.0質量％の第二の非イオン性界面活性剤、
(iv) 50.0質量％〜95.0質量％の水性相、
で存在する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２５】
前記エマルジョンが、共界面活性剤成分を含まない、特に、短鎖アルコール、モノカルボン酸、陽イオン性および／または陰イオン性界面活性剤、ならびに、レシチンおよび／またはリン脂質から選択される共界面活性剤成分を含まない、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２６】
緑内障および／または高眼圧症の予防、緩和、および／または治療のための、眼科用製剤として使用するための、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２７】
請求項１〜２６のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョンの製造方法であって、
(a) 場合により、製剤成分を前記水性相に溶解させる工程、
(b) 第一の非イオン性界面活性剤を前記水性相または前記油性相のいずれかに溶解させる工程、
(c) 第二の非イオン性界面活性剤を、前記水性相または前記油性相のいずれかに溶解させる工程、
(d) 前記プロスタグランジン活性剤を前記油性相に溶解させる工程、および
(e) 前記油性相と前記水性相とを混合する工程
を含む、方法。
【請求項２８】
混合工程(e)を、高エネルギー剪断プロセス、例えば、高圧ホモジナイゼーションまたは音波処理（sonication）などを用いないで行う、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
水中油型エマルジョンが、混合工程(e)において自然発生的に形成される、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
混合工程(e)を、高エネルギー剪断プロセス、例えば、高圧ホモジナイゼーションまたは音波処理（sonication）などを用いて行う、請求項２７に記載の方法。
【請求項１】
下記の成分：
(i) 油性分散相、
(ii) 油性相成分(i)中に溶解された、活性剤としての少なくとも１種のプロスタグランジン、
(iii) 少なくとも２種の非イオン性界面活性剤の組合せを含む界面活性剤、および
(iv) 場合により製剤成分を含んでいてもよい水性連続相、
を含み、実質的に中性のゼータ電位を有する、眼科用途のための水中油型エマルジョン。
【請求項２】
油性相(i)が、前記エマルジョンの総質量に基づいて少なくとも5質量％の量で存在する、請求項１に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項３】
油性相成分(i)が、医薬品として許容可能な油、例えば、動物油、植物油、合成油、およびこれらの混合物などから選択される、請求項１または２に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項４】
油性相成分(i)が、オレイン酸エチル、Ｃ８〜Ｃ１０脂肪酸トリグリセリドの混合物、ヒマシ油、コーン油、またはこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項５】
プロスタグランジン成分(ii) の油性相(i)への溶解度が、少なくとも0.1 mg/mlである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項６】
プロスタグランジン成分(ii) の油性相(i)への溶解度が、少なくとも10 mg/mlである、請求項５に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項７】
プロスタグランジン成分(ii)の油／水の分配係数logPが、少なくとも0.5であり、油性相(i)に多く分配される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項８】
プロスタグランジン成分(ii)の油／水の分配係数logPが、少なくとも2であり、油性相(i) に多く分配される、請求項７に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項９】
プロスタグランジン成分(ii)が、プロスタグランジンF2α類似体である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１０】
プロスタグランジン成分(ii)が、ラタノプロスト、トラボプロスト、ビマトプロスト、およびウノプロストン、ならびにこれらの２種以上の混合物からなる群から選択される、請求項９に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１１】
前記プロスタグランジン成分(ii)がラタノプロストである、請求項１０に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１２】
界面活性剤成分(iii)の前記少なくとも２種の非イオン性界面活性剤が、親油性非イオン性界面活性剤、親水性非イオン性界面活性剤、またはこれらの組合せから選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１３】
界面活性剤成分(iii)の前記非イオン性界面活性剤の組み合わされた総HLB値が、少なくとも10、好ましくは少なくとも13であり、かつ好ましくは最高で18までである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１４】
界面活性剤成分(iii)の前記少なくとも２種の界面活性剤が、自己エマルジョン化を促進する量で存在する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１５】
界面活性剤成分(iii)の前記非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート（Tween 80(登録商標)）、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート（Tween 20(登録商標)）、ポリオキシエチレン(2)セチルエーテル（Brij 52(登録商標)）、ポリオキシエチレン(10)セチルエーテル（Brij 56(登録商標)）、およびポリオキシエチレン(20)セチルエーテル（Brij 58(登録商標)）からなる群から選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１６】
界面活性剤成分(iii)の前記非イオン性界面活性剤の組合せが、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート（Tween 80(登録商標)）とポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート（Tween 20(登録商標)）との組合せ、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート（Tween 80(登録商標)）とポリオキシル(2)セチルエーテル（Brij 52(登録商標)）との組合せ、ポリオキシル(2)セチルエーテル（Brij 52(登録商標)）とポリオキシル(20)セチルエーテル（Brij 58(登録商標)）との組合せ、およびポリオキシル(20)セチルエーテル（Brij 58(登録商標)）とポリオキシル(10)セチルエーテル（Brij 56(登録商標)）との組合せから選択される、請求項１５に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１７】
水性相成分(iv)が、医薬品として許容可能な水性相、好ましくは滅菌水、精製水、または眼科用途に適切な任意の他の種類の水からなる群から選択される水性相である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１８】
水性相成分(iv)が、場合によりさらなる添加剤、例えば、緩衝剤、等張剤、増粘化合物、抗菌性防腐剤、抗酸化剤、安定剤などを含んでいてもよい、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１９】
前記抗菌性防腐剤がクロロブタノールである、請求項１８に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２０】
-10 mV〜+10 mV、好ましくは-4 mV〜+4 mVのゼータ電位を有する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２１】
前記油の液滴の平均サイズが1μm未満であるマイクロエマルジョンである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２２】
前記エマルジョンの油性液滴の平均液滴サイズが700 nm以下である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２３】
25℃にて少なくとも6ヶ月間、好ましくは少なくとも9ヶ月間、より好ましくは少なくとも12ヶ月間安定である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２４】
成分(i)から成分(iv)が、エマルジョンの総質量に基づいて、以下の量：
(i) 5.0質量％〜20.0質量％の油性相、
(ii) 0.001質量％〜5.0質量％のプロスタグランジン活性剤、
(iii) 0.1質量％〜10.0質量％の第一の非イオン性界面活性剤および0.1質量％〜10.0質量％の第二の非イオン性界面活性剤、
(iv) 50.0質量％〜95.0質量％の水性相、
で存在する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２５】
前記エマルジョンが、共界面活性剤成分を含まない、特に、短鎖アルコール、モノカルボン酸、陽イオン性および／または陰イオン性界面活性剤、ならびに、レシチンおよび／またはリン脂質から選択される共界面活性剤成分を含まない、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２６】
緑内障および／または高眼圧症の予防、緩和、および／または治療のための、眼科用製剤として使用するための、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項２７】
請求項１〜２６のいずれか一項に記載の水中油型エマルジョンの製造方法であって、
(a) 場合により、製剤成分を前記水性相に溶解させる工程、
(b) 第一の非イオン性界面活性剤を前記水性相または前記油性相のいずれかに溶解させる工程、
(c) 第二の非イオン性界面活性剤を、前記水性相または前記油性相のいずれかに溶解させる工程、
(d) 前記プロスタグランジン活性剤を前記油性相に溶解させる工程、および
(e) 前記油性相と前記水性相とを混合する工程
を含む、方法。
【請求項２８】
混合工程(e)を、高エネルギー剪断プロセス、例えば、高圧ホモジナイゼーションまたは音波処理（sonication）などを用いないで行う、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
水中油型エマルジョンが、混合工程(e)において自然発生的に形成される、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
混合工程(e)を、高エネルギー剪断プロセス、例えば、高圧ホモジナイゼーションまたは音波処理（sonication）などを用いて行う、請求項２７に記載の方法。
【公表番号】特表２０１０−５２４９９２（Ｐ２０１０−５２４９９２Ａ）
【公表日】平成２２年７月２２日（２０１０．７．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５０４５４３（Ｐ２０１０−５０４５４３）
【出願日】平成２０年４月２４日（２００８．４．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／００３３１７
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１２８７７９
【国際公開日】平成２０年１０月３０日（２００８．１０．３０）
【出願人】（５０９２９４４４９）アザト・ファルマ・アーゲー (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年７月２２日（２０１０．７．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年４月２４日（２００８．４．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／００３３１７
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１２８７７９
【国際公開日】平成２０年１０月３０日（２００８．１０．３０）
【出願人】（５０９２９４４４９）アザト・ファルマ・アーゲー (2)
【Ｆターム（参考）】
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