ポリフェノール組成物の製造方法
【課題】植物抽出物からポリフェノール組成物を製造する方法を提供すること。
【解決手段】次の工程（１）〜（４）：
（１）ポリフェノール類を含有する植物抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程、
（２）前記合成吸着剤に１０〜６０質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、非重合体カテキン類を溶出させる工程、
（３）前記合成吸着剤に２０〜１００質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、ポリフェノール組成物を含む画分を溶出させる工程、
（４）前記ポリフェノール組成物を含む画分から有機溶媒を除去する工程
を含む、ポリフェノール組成物の製造方法。
【解決手段】次の工程（１）〜（４）：
（１）ポリフェノール類を含有する植物抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程、
（２）前記合成吸着剤に１０〜６０質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、非重合体カテキン類を溶出させる工程、
（３）前記合成吸着剤に２０〜１００質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、ポリフェノール組成物を含む画分を溶出させる工程、
（４）前記ポリフェノール組成物を含む画分から有機溶媒を除去する工程
を含む、ポリフェノール組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物抽出物からポリフェノール組成物を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、消費者の嗜好の多様化、健康ブームにより、多種多様の健康食品が上市され需要が拡大している。例えば、ポリフェノール類は抗酸化力を有することが知られており、抗動脈硬化、抗アレルギー、血流増強等の効果が期待されるため、健康食品の重要な成分として認識されている。
【０００３】
このようなポリフェノール類は、例えば、茶抽出物を合成吸着剤に吸着させた後、合成吸着剤に有機溶媒水溶液を接触させて非重合体カテキン類を溶出させ、次いで非重合体カテキン類を含む溶出液を活性炭と接触させ、そして溶出液を濃縮することで、非重合体カテキン類を主成分として含有するものとして製造されている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００８−７９６０９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、上記製造方法においては、単蒸留により溶出液から有機溶媒の除去を試みると、蒸留中にボトム液が粘稠になり、場合によって蒸留釜の内壁にポリフェノール類の粘稠物が析出するなど蒸留操作の安定性が損なわれることがある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、植物抽出物からポリフェノール組成物を分画する方法について種々検討したところ、ポリフェノール類を含有する植物抽出物を合成吸着剤に吸着させた後、合成吸着剤に１０〜６０質量％の有機溶媒水溶液を接触させて非重合体カテキン類を含む画分を溶出させ、更に合成吸着剤に２０〜１００質量％の有機溶媒水溶を接触させてポリフェノール組成物を含む画分を溶出させ、そしてポリフェノール組成物を含む画分から、精留により有機溶媒を除去することで、分散性が良好なポリフェノール組成物が得られることを見出した。
【０００７】
すなわち、本発明は、次の工程（１）〜（４）：
（１）ポリフェノール類を含有する植物抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程、
（２）上記合成吸着剤に１０〜６０質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、非重合体カテキン類を含む画分を溶出させる工程、
（３）上記合成吸着剤に２０〜１００質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、ポリフェノール組成物を含む画分を溶出させる工程、
（４）上記ポリフェノール組成物を含む画分から、精留により有機溶媒を除去する工程
を含む、ポリフェノール組成物の製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、植物抽出物からポリフェノール組成物を安定に効率よく得ることができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明のポリフェノール組成物の製造方法は、上記のとおり、工程（１）、（２）、（３）及び（４）を含むことを特徴とする。以下、各工程について詳細に説明する。
【００１０】
［工程（１）］
本発明に係る工程（１）は、ポリフェノール類を含有する植物抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程である。
本工程で使用する植物抽出物としては、ポリフェノール類を含有するものであれば特に限定されないが、例えば、カメリアシネンシス（Camellia sinensis）から得られる抽出物が例示される。ここで、本明細書において「ポリフェノール類」は非重合体カテキン類を主成分とするものである。一方、「ポリフェノール組成物」は酒石酸鉄法により測定されるポリフェノールを含有するものであり、例えば、フラボノール類、フラバノール類、プロアントシアニジン類及びそれらの重合体、並びにそれらの配糖体が包含される。フラバノール類としては、例えば、非重合体カテキン類の重合体が例示され、フラボノール類としては、例えば、フラボノールアグリコン、フラボノール配糖体が例示される。また、「ルチン」とは、フラボノール配糖体の一種であり、ケルセチンの３位の酸素原子にβ−ルチノース（６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノシル−Ｄ−β−グルコース）が結合したものである。更に、「カメリアシネンシス」とは、ツバキ科ツバキ属のチャノキのことである。その加工方法により、不発酵茶、半発酵茶、発酵茶に大別することができる。
本工程においては、植物抽出物として茶抽出物が好適に使用され、中でも不発酵茶から得られる茶抽出物が好ましい。
不発酵茶としては、Camellia属、例えば、C.var.sinensis（やぶきた種を含む）、C.var.assamica及びそれらの雑種から選択される茶から製茶された、茎茶、棒茶、芽茶、番茶、碾茶、釜入り茶等の緑茶が例示される。半発酵茶としては、総称して烏龍茶と呼ばれる鉄観音、色種、黄金桂、武夷岩茶等が例示される。発酵茶としては、紅茶と呼ばれるダージリン、ウバ、キーマン等が例示される。ここで、本明細書において「不発酵茶、半発酵茶、発酵茶、緑茶、烏龍茶、紅茶」とは、飲用に供される茶抽出物ではなく、該茶抽出物を得るための茶原料をいう。
【００１１】
植物の抽出方法としては、攪拌抽出、ドリップ抽出等の従来の方法を採用することができる。また、抽出時の水にあらかじめアスコルビン酸ナトリウムなどの有機酸又は有機酸塩類を添加してもよい。更に、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法も併用してもよい。このようにして得られた抽出液は、そのままでも、乾燥、濃縮しても本工程に使用できる。植物抽出物の形態としては、液体、スラリー、半固体、固体の状態が挙げられる。
【００１２】
本工程に使用する植物抽出物としては、植物から抽出した抽出液を使用する代わりに、植物抽出物の濃縮物を水又は有機溶媒に溶解又は希釈して用いても、植物からの抽出液と植物抽出物の濃縮物とを併用してもよい。
ここで、植物抽出物の濃縮物とは、植物から熱水又は有機溶媒水溶液により抽出された抽出物を濃縮したものをいう。例えば、茶抽出物の濃縮物は、特開昭５９−２１９３８４号公報、特開平４−２０５８９号公報、特開平５−２６０９０７号公報、特開平５−３０６２７９号公報等に記載の方法により調製することができる。植物抽出物の濃縮物として、市販品を使用してもよく、例えば、三井農林社製「ポリフェノン」、伊藤園社製「テアフラン」、太陽化学社製「サンフェノン」等の緑茶抽出物の濃縮物が例示される。
植物抽出物として茶抽出物を使用する場合、茶抽出物としては、ポリフェノール組成物の生産性の観点から、固形分中の非重合体カテキン類の含有量が１０〜６０質量％、特に２０〜５０質量％であるものが好ましい。
【００１３】
本工程に使用する合成吸着剤としては、アンバーライトＸＡＤ４、ＸＡＤ１６ＨＰ、ＸＡＤ１１８０、ＸＡＤ２０００、（供給元：米国ローム＆ハース社）、ダイヤイオンＨＰ２０、ＨＰ２１（三菱化学社製）、セパビーズＳＰ８５０、ＳＰ８２５、ＳＰ７００、ＳＰ７０（三菱化学社製）、ＶＰＯＣ１０６２（Ｂａｙｅｒ社製）等のスチレン系；セパビーズＳＰ２０５、ＳＰ２０６、ＳＰ２０７（三菱化学社製）等の芳香環に臭素原子を導入して吸着能を高めた置換スチレン系；ダイヤイオンＨＰ１ＭＧ、ＨＰ２ＭＧ（三菱化学社製）等のメタクリル系；アンバーライトＸＡＤ７６１（ロームアンドハース社製）等のフェノール系；アンバーライトＸＡＤ７ＨＰ（ロームアンドハース社製）等のアクリル系；ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ、ＨＷ-４０Ｃ（東ソー社製）等のポリビニル系；ＳＥＰＨＡＤＥＸ、ＬＨ−２０（ファルマシア社製）等のデキストラン系が例示される。中でも、その母体が、スチレン系（特にスチレン−ジビニルベンゼン共重合体）、メタクリル系、アクリル系、ポリビニル系であるものが好ましく、特にスチレン系であるものがポリフェノール類と夾雑物との分離性の点から好ましい。
【００１４】
合成吸着剤の使用量は、植物抽出物の非重合体カテキン類の全質量と、合成吸着剤の容量との比が３〜６０ｇ／Ｌ、特に１０〜５０ｇ/Ｌであることが、夾雑物の除去効率及びポリフェノール組成物の回収率の向上の観点から好ましい。
【００１５】
植物抽出物を合成吸着剤に吸着させる方法としては、植物抽出物を合成吸着剤に添加し撹拌して吸着させた後、ろ過操作により合成吸着剤を回収するバッチ方法、又は合成吸着剤を充填したカラムに植物抽出物を通液して吸着させるカラム方法を採用することができるが、生産性の点からカラムによる連続処理方法が好ましい。
【００１６】
本工程においては、かかる吸着処理前に、合成吸着剤中の不純物の除去、植物抽出物の吸着能の向上の観点から、合成吸着剤を洗浄してもよい。洗浄方法としては、例えば、次の方法が例示される。先ず、空間速度（ＳＶ）＝０．５〜１０［ｈ-1］、合成吸着剤に対する通液倍数（ＢＶ）＝２〜１０［ｖ／ｖ］の条件でエタノール水溶液（例えば、エタノール濃度４０〜５０質量％）を合成吸着剤が充填されたカラムに通液して合成吸着剤中の不純物を除去する。次いで、ＳＶ＝０．５〜１０［ｈ-1］、ＢＶ＝１〜６０［ｖ／ｖ］の条件で水をカラムに通液してカラム内のエタノールを水に置換する。
【００１７】
合成吸着剤に吸着させる際、植物抽出物中の非重合体カテキン類の濃度は、０．１〜１５質量％、更に０．２〜１０質量％、特に０．５〜５質量％であることが、合成吸着剤への吸着効率の点から好ましい。植物抽出物の濃度を上記範囲内に調整するために、植物抽出物を水で希釈しても、濃縮してもよい。水としては、例えば、水道水、精製水、イオン交換水が例示される。
【００１８】
植物抽出物の通液条件は、植物抽出物の吸着能の向上の点から、好ましは、ＳＶ＝０．５〜１０[ｈ-1]、特にＳＶ＝０．５〜３［ｈ-1］であり、かつＢＶ＝０．５〜１０[ｖ／ｖ]、特にＢＶ＝０．５〜５[ｖ／ｖ]である。
【００１９】
植物抽出物の通液後においては、合成吸着剤を水で少なくとも１回洗浄することが好ましい。合成吸着剤の洗浄に使用する水としては、上記と同様のものが例示される。洗浄水にはアルコール等の水溶性有機溶媒を混合してもよく、有機溶媒濃度は５質量％未満、更に２質量％未満、特に１質量％未満であることが好ましい。
【００２０】
この洗浄工程の通液条件は、好ましくは、ＳＶ＝０．５〜１０[ｈ-1]であり、かつＢＶ＝０．５〜３[Ｌ／Ｌ]、特にＢＶ＝０．５〜２[Ｌ／Ｌ]である。これにより、合成吸着剤に付着した夾雑物を効率よく除去することができる。
【００２１】
［工程（２）］
本発明に係る工程（２）は、合成吸着剤に１０〜６０質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、非重合体カテキン類を含む画分を溶出させる工程である。これにより、植物抽出物中の非重合体カテキン類を低減させることが可能になる。
本工程で使用する有機溶媒としては、水溶液有機溶媒が好ましく、例えば、アセトン等のケトン、メタノール、エタノール等のアルコール、酢酸エチル等のエステルが例示される。中でも、飲食品への使用の観点から、アルコール、特にエタノールが好ましい。また、水としては、上記と同様に、水道水、精製水、イオン交換水が例示される。
本工程で使用する有機溶媒水溶液中の有機溶媒濃度は１０〜６０質量％であるが、非重合体カテキン類の溶出効率及びポリフェノール組成物の回収率の向上の観点から、２０〜５０質量％、特に２５〜４０質量％未満であることが好ましい。
【００２２】
本工程の通液条件は、好ましくは、ＳＶ＝０．５〜１０［ｈ-1］、特にＳＶ＝０．５〜３［ｈ-1］であり、かつＢＶ＝０．５〜１０[ｖ／ｖ]、特にＢＶ＝１．０〜５[ｖ／ｖ]である。これにより、非重合体カテキン類をより一層効率よく溶出させることができる。
【００２３】
［工程（３）］
本発明に係る工程（３）は、合成吸着剤に２０〜１００質量％の有機溶媒水溶を接触させて、ポリフェノール組成物を含む画分を溶出させる工程である。これにより、植物抽出物からポリフェノール組成物を効率よく分画することが可能になる。
本工程で使用する有機溶媒水溶液としては、工程（２）の有機溶媒水溶液よりも疎水性の高いものが好ましく、例えば、工程（２）の有機溶媒水溶液よりも有機溶媒濃度の高い水溶液、あるいは工程（２）の有機溶媒よりも炭素数の多い有機溶媒を含む水溶液が好適に使用される。有機溶媒としては、上記と同様の水溶液有機溶媒が好ましく、特にアルコールが好ましい。また、水としては、上記と同様のものを使用することができる。
本工程で使用する有機溶媒水溶液中の有機溶媒濃度は２０〜１００質量％であるが、ポリフェノール組成物の回収率の向上の点から、３０〜８０質量％、特に４０〜６０質量％であることが好ましい。
本工程の通液条件は、好ましくは、ＳＶ＝０．５〜１０［ｈ-1］、特にＳＶ＝０．５〜３［ｈ-1］であり、かつＢＶ＝０．５〜１０[ｖ／ｖ]、特にＢＶ＝１．０〜５[ｖ／ｖ]である。これにより、ポリフェノール組成物をより一層効率よく溶出させることができる。
【００２４】
［工程（４）］
本発明に係る工程（４）は、工程（３）で得られたポリフェノール組成物を含む画分から、精留により有機溶媒を除去する工程である。これにより、植物抽出物からポリフェノール組成物を得ることができる。なお、本工程により除去される有機溶媒には、水が含まれていてもよい。
「精留」とは、蒸留において留分の一部を還流させ、その還流液と蒸気とを精留塔内で向流接触させる蒸留操作であり、実質的に還流を行わない「単蒸留」とは区別される。精留を実施するには、所定の理論段数を有する精留塔と、留分の一部を所定の割合（還流比）で還流できる還流分配器を備えていることが必要である。
本工程においては、前工程で得られたポリフェノール組成物を含む画分中の有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度が３０質量％を超えるとき、当該画分に加水して上記有機溶媒濃度を３０質量％以下に調整することが好ましい。上記画分への加水は、有機溶媒水溶液中の有機溶媒濃度が５〜３０質量％、更に１０〜２５質量％、特に１５〜２０質量％となるように行うことが好ましい。これにより、ボトム液が粘稠になり難く、ポリフェノール組成物を含む画分から有機溶媒を安定に除去することができる。なお、加水時期は、精留時にポリフェノール組成物を含む画分が加水された状態であれば特に限定されるものではない。
【００２５】
本工程の精留は、バッチ式でも、連続式でもよく、必要に応じて加圧又は減圧下で行うことができる。また、精留条件は有機溶媒の種類により適宜設定することが可能であるが、ボトム液の粘稠化防止の観点から、理論段数が５〜１００段、更に１０〜８０段、特２０〜６５段である精留塔を用い、かつ還流比が２〜１００、更に１０〜８０、特に２０〜６０の条件で行うことが好ましい。
更に、精留による有機溶媒の留出率は、１０〜９０質量％、特に３０〜６０質量％とすることが好ましい。ここで、「留出率」とは、精留前の有機溶媒の全質量に対する留出した有機溶媒の質量の割合をいう。
本工程の精留を上記条件にて行うことで、精留後のボトム液中のポリフェノール組成物濃度を１質量％以下（好ましくは０．５質量％以下）、かつボトム液中の有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度を０．５質量％以下（好ましくは０．１質量％以下、特に好ましくは０．０５質量％以下）とすることができる。なお、ボトム液中のポリフェノール組成物濃度及び有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度は、０質量％であってもよい。
また、精留塔の塔頂温度は有機溶媒の沸点に対して０．５〜３℃、特に１〜２．５℃高いことが好ましく、また精留塔の塔底温度は有機溶媒の沸点に対して５〜２０℃、特に８〜１５℃高いことが好ましい。
【００２６】
このようにして、植物抽出液から、本発明のポリフェノール組成物を得ることができる。ポリフェノール組成物の形態としては、例えば、水分散液、粉体が例示される。粉体の形態が望ましい場合は、噴霧乾燥や凍結乾燥等の方法により粉体化することができる。
本発明の製造方法により得られたポリフェノール組成物は、次の成分（Ａ）及び（Ｂ）を特定の比率で含有することができる。ここで、成分（Ａ）は、高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中のフラボノールアグリコンの総量であり、また成分（Ｂ）は、酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中のポリフェノールの総量である。ここで、「固形分」とは、ポリフェノール組成物を１０５℃の電気恒温乾燥機で３時間乾燥して揮発物質を除いた残分をいう。なお、成分（Ａ）及び（Ｂ）は、後掲の実施例に記載の方法により定量することができる。
風味や水への溶解性の観点から、成分（Ａ）は０．７〜５０質量％であることが好ましく、また成分（Ｂ）は５〜９５質量％、特に１０〜９０質量％であることが好ましい。更に、上記（Ａ）及び（Ｂ）の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］は０．５〜１８であることが好ましい。
また、ポリフェノール組成物は（Ｃ）ルチンを含有してもよく、成分（Ｃ）はポリフェノール組成物の固形分中に０．４〜３０質量％含有することが好ましい。
【実施例】
【００２７】
１．非重合体カテキン類及びカフェインの測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式ＳＣＬ−１０ＡＶＰ、島津製作所製）を用い、オクタデシル基導入液体クロマトグラフ用パックドカラム（Ｌ−カラムＴＭ ＯＤＳ、４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ：財団法人 化学物質評価研究機構製）を装着し、カラム温度３５℃でグラディエント法により分析した。移動相Ａ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有する蒸留水溶液、Ｂ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有するアセトニトリル溶液とし、試料注入量は２０μＬ、ＵＶ検出器波長は２８０ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００２８】
時間（分） Ａ液濃度（体積％） Ｂ液濃度（体積％）
０．０ ９７ ３
５．０ ９７ ３
３７．０ ８０ ２０
４３．０ ８０ ２０
４３．５ ０ １００
４８．５ ０ １００
４９．０ ９７ ３
６０．０ ９７ ３
【００２９】
２．ルチンの測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式Ｗａｔｅｒｓ２６９５、ＷＡＴＥＲＳ製）を用い、カラム（Ｓｈｉｍｐａｃｈ ＶＰ ＯＤＳ、１５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．）を装着し、カラム温度４０℃でグラディエント法により分析した。移動相Ｃ液はリン酸を０．０５質量％含有する蒸留水溶液、Ｄ液はメタノール溶液とし、流速は１ｍＬ／分、試料注入量は１０μＬ、ＵＶ検出器波長は３６８ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００３０】
時間（分） Ｃ液濃度（体積％） Ｄ液濃度（体積％）
０．０ ９５ ５
２０．０ ８０ ２０
４０．０ ３０ ７０
４１．０ ０ １００
４６．０ ０ １００
４７．０ ９５ ５
６０．０ ９５ ５
【００３１】
３．フラボノールアグリコン（ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロール）の測定
（１）試料の加水分解
試料溶液５ｍＬにメルカプトエタノール２００μＬ、２Ｎ塩酸５００μＬを添加した。その後、ドライブロックバス（アズワン株式会社製）にて１２０℃で４０分間加熱し、冷却した。
【００３２】
（２）分析
加水分解後の試料溶液中に存在しているミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールを、高速液体クロマトグラフィーにより定量した。なお、定量はグラディエント法により行ったが、その分析方法は上記「ルチンの測定」と同じである。
【００３３】
（３）フラボノールアグリコンの総量
上記分析により定量されたミリセチン量、ケルセチン量及びケンフェロール量の総和として求めた。
【００３４】
４．ポリフェノールの測定
（１）試薬の調製
１）酒石酸鉄試薬の調製
５００ｍＬメスフラスコに硫酸第一鉄七水塩０．５０ｇと（＋）酒石酸ナトリウム・カリウム四水和物２．５０ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。
【００３５】
２）リン酸バッファーの調製
２０００ｍＬメスフラスコにリン酸水素二ナトリウム・二水和物２０．００ｇとリン酸二水素カリウム２．９０ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。この溶液のｐＨが７．５〜７．６になるように調整した。ｐＨ７．６を超える場合、リン酸二水素カリウム・二水和物０．９ｇ／１００ｍＬ水溶液を添加し、ｐＨ７．５未満の場合、リン酸二水素カリウム１．２ｇ／１００ｍＬ水溶液を添加し調整した。
【００３６】
（２）装置及び器具
１）分光光度計（Ｕ−２０１０；日立製作所製）
２）石英製セル（１０ｍｍ×１０ｍｍ）
３）２５ｍＬ、１００ｍＬ、２００ｍＬ、５００ｍＬ、２０００ｍＬのメスフラスコ
４）１ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、２０ｍＬ、３０ｍＬのホールピペット
５）１ｍＬ、３ｍＬ、５ｍＬのマイクロピペット
【００３７】
（３）分析条件
１）測定波長：５４０ｎｍ
２）温度 ：２０℃±２℃
【００３８】
（４）操作：
１）検量線作成
ｉ）没食子酸エチル約０．５ｇを使用前に２〜３時間乾燥させた。
ii）２００ｍＬメスフラスコに乾燥した没食子酸エチル０．２ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。（１００ｍｇ／１００ｍＬ標準液）
iii）１００ｍＬメスフラスコに、ii）の標準液を用い、５ｍｇ／１００ｍＬ、１０ｍｇ／１００ｍＬ、２０ｍｇ／１００ｍＬ、３０ｍｇ／１００ｍＬの各標準液を調整した。
iv）２５ｍＬメスフラスコに、iii）の標準液をそれぞれ５ｍＬ採取し、酒石酸鉄試薬５ｍＬを加えリン酸バッファーでメスアップした。また、ブランクとして標準液を加えないものを調製した。
ｖ）分光光度計にて吸光度を測定し検量線を作成した。
なお、検量線については下記を目安にし、逸脱した時は再調整した。
Ｒ２ ：０．９９９５〜１．００００
検量線傾き：３４．５±０．４
切片 ：０．３以下
【００３９】
２）試料測定
ｉ）イオン交換水にて分光光度計をゼロ補正した。
ii）２５ｍＬメスフラスコに試料を所定量採取し、酒石酸鉄試薬５ｍＬを加えリン酸バッファーでメスアップした後、吸光度を測定した。なお、吸光度の測定は、発色後４０分以内とした。
【００４０】
実施例１〜２及び比較例１〜２
緑茶葉（大葉種）を熱水で抽出した後、噴霧乾燥により緑茶抽出物を得た。緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度３０質量％であった。
次いで、緑茶抽出物の非重合体カテキン類濃度が１質量％になるようにイオン交換水で希釈した。次いで、緑茶抽出物の希釈液８００ｇをカラム（内径５０ｍｍ×高さ１８０ｍｍ、容積３５３．３ｍＬ）に充填した合成吸着剤（ＳＰ−７０、三菱化学（株）製）２００ｍＬに吸着させた。
次いで、イオン交換水３００ｍＬ、３０質量％エタノール水溶液４００ｍＬを順次合成吸着剤に通液して非重合体カテキン類を含む画分を溶出させた。次いで、合成吸着剤に５０質量％エタノール水溶液を４００ｍＬ通液してポリフェノール組成物を含む画分（ポリフェノール組成物濃度０．１〜０．２質量％）を溶出させた。なお、本分画操作はすべて、通液速度ＳＶ＝０．８〜１．２［ｈ-1］になるように流量調整して行った。
次いで、表１に示す条件にて、ポリフェノール組成物を含む画分からエタノールを除去した後、凍結乾燥してポリフェノール組成物を得た。なお、実施例２のポリフェノール組成物を含む画分は、実施例１のポリフェノール組成物を含む画分に加水し、当該画分中の有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度を調整した。また、精留の場合、理論段数は５４段、還流比は５０に設定した。エタノール除去後において、ボトム液の分散状態を観察するとともに、ボトム液中のポリフェノール組成物濃度及び有機溶媒濃度を測定した。
【００４１】
【表１】
【００４２】
表１から明らかなように、工程（３）で得られたポリフェノール組成物を含む画分中の有機溶媒水溶液から、精留により有機溶媒を除去することで、ボトム液が粘稠になり難くなり、その結果ポリフェノール組成物を安定に効率よく得ることができる。特に、精留前の工程（３）で得られたポリフェノール組成物を含む画分の有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度が３０質量％を超えるとき、該画分に加水し該画分中の有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度を３０質量％以下に低下させることで、より一層効率よく安定にポリフェノール組成物を得ることが可能である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物抽出物からポリフェノール組成物を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、消費者の嗜好の多様化、健康ブームにより、多種多様の健康食品が上市され需要が拡大している。例えば、ポリフェノール類は抗酸化力を有することが知られており、抗動脈硬化、抗アレルギー、血流増強等の効果が期待されるため、健康食品の重要な成分として認識されている。
【０００３】
このようなポリフェノール類は、例えば、茶抽出物を合成吸着剤に吸着させた後、合成吸着剤に有機溶媒水溶液を接触させて非重合体カテキン類を溶出させ、次いで非重合体カテキン類を含む溶出液を活性炭と接触させ、そして溶出液を濃縮することで、非重合体カテキン類を主成分として含有するものとして製造されている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００８−７９６０９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、上記製造方法においては、単蒸留により溶出液から有機溶媒の除去を試みると、蒸留中にボトム液が粘稠になり、場合によって蒸留釜の内壁にポリフェノール類の粘稠物が析出するなど蒸留操作の安定性が損なわれることがある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、植物抽出物からポリフェノール組成物を分画する方法について種々検討したところ、ポリフェノール類を含有する植物抽出物を合成吸着剤に吸着させた後、合成吸着剤に１０〜６０質量％の有機溶媒水溶液を接触させて非重合体カテキン類を含む画分を溶出させ、更に合成吸着剤に２０〜１００質量％の有機溶媒水溶を接触させてポリフェノール組成物を含む画分を溶出させ、そしてポリフェノール組成物を含む画分から、精留により有機溶媒を除去することで、分散性が良好なポリフェノール組成物が得られることを見出した。
【０００７】
すなわち、本発明は、次の工程（１）〜（４）：
（１）ポリフェノール類を含有する植物抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程、
（２）上記合成吸着剤に１０〜６０質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、非重合体カテキン類を含む画分を溶出させる工程、
（３）上記合成吸着剤に２０〜１００質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、ポリフェノール組成物を含む画分を溶出させる工程、
（４）上記ポリフェノール組成物を含む画分から、精留により有機溶媒を除去する工程
を含む、ポリフェノール組成物の製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、植物抽出物からポリフェノール組成物を安定に効率よく得ることができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明のポリフェノール組成物の製造方法は、上記のとおり、工程（１）、（２）、（３）及び（４）を含むことを特徴とする。以下、各工程について詳細に説明する。
【００１０】
［工程（１）］
本発明に係る工程（１）は、ポリフェノール類を含有する植物抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程である。
本工程で使用する植物抽出物としては、ポリフェノール類を含有するものであれば特に限定されないが、例えば、カメリアシネンシス（Camellia sinensis）から得られる抽出物が例示される。ここで、本明細書において「ポリフェノール類」は非重合体カテキン類を主成分とするものである。一方、「ポリフェノール組成物」は酒石酸鉄法により測定されるポリフェノールを含有するものであり、例えば、フラボノール類、フラバノール類、プロアントシアニジン類及びそれらの重合体、並びにそれらの配糖体が包含される。フラバノール類としては、例えば、非重合体カテキン類の重合体が例示され、フラボノール類としては、例えば、フラボノールアグリコン、フラボノール配糖体が例示される。また、「ルチン」とは、フラボノール配糖体の一種であり、ケルセチンの３位の酸素原子にβ−ルチノース（６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノシル−Ｄ−β−グルコース）が結合したものである。更に、「カメリアシネンシス」とは、ツバキ科ツバキ属のチャノキのことである。その加工方法により、不発酵茶、半発酵茶、発酵茶に大別することができる。
本工程においては、植物抽出物として茶抽出物が好適に使用され、中でも不発酵茶から得られる茶抽出物が好ましい。
不発酵茶としては、Camellia属、例えば、C.var.sinensis（やぶきた種を含む）、C.var.assamica及びそれらの雑種から選択される茶から製茶された、茎茶、棒茶、芽茶、番茶、碾茶、釜入り茶等の緑茶が例示される。半発酵茶としては、総称して烏龍茶と呼ばれる鉄観音、色種、黄金桂、武夷岩茶等が例示される。発酵茶としては、紅茶と呼ばれるダージリン、ウバ、キーマン等が例示される。ここで、本明細書において「不発酵茶、半発酵茶、発酵茶、緑茶、烏龍茶、紅茶」とは、飲用に供される茶抽出物ではなく、該茶抽出物を得るための茶原料をいう。
【００１１】
植物の抽出方法としては、攪拌抽出、ドリップ抽出等の従来の方法を採用することができる。また、抽出時の水にあらかじめアスコルビン酸ナトリウムなどの有機酸又は有機酸塩類を添加してもよい。更に、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法も併用してもよい。このようにして得られた抽出液は、そのままでも、乾燥、濃縮しても本工程に使用できる。植物抽出物の形態としては、液体、スラリー、半固体、固体の状態が挙げられる。
【００１２】
本工程に使用する植物抽出物としては、植物から抽出した抽出液を使用する代わりに、植物抽出物の濃縮物を水又は有機溶媒に溶解又は希釈して用いても、植物からの抽出液と植物抽出物の濃縮物とを併用してもよい。
ここで、植物抽出物の濃縮物とは、植物から熱水又は有機溶媒水溶液により抽出された抽出物を濃縮したものをいう。例えば、茶抽出物の濃縮物は、特開昭５９−２１９３８４号公報、特開平４−２０５８９号公報、特開平５−２６０９０７号公報、特開平５−３０６２７９号公報等に記載の方法により調製することができる。植物抽出物の濃縮物として、市販品を使用してもよく、例えば、三井農林社製「ポリフェノン」、伊藤園社製「テアフラン」、太陽化学社製「サンフェノン」等の緑茶抽出物の濃縮物が例示される。
植物抽出物として茶抽出物を使用する場合、茶抽出物としては、ポリフェノール組成物の生産性の観点から、固形分中の非重合体カテキン類の含有量が１０〜６０質量％、特に２０〜５０質量％であるものが好ましい。
【００１３】
本工程に使用する合成吸着剤としては、アンバーライトＸＡＤ４、ＸＡＤ１６ＨＰ、ＸＡＤ１１８０、ＸＡＤ２０００、（供給元：米国ローム＆ハース社）、ダイヤイオンＨＰ２０、ＨＰ２１（三菱化学社製）、セパビーズＳＰ８５０、ＳＰ８２５、ＳＰ７００、ＳＰ７０（三菱化学社製）、ＶＰＯＣ１０６２（Ｂａｙｅｒ社製）等のスチレン系；セパビーズＳＰ２０５、ＳＰ２０６、ＳＰ２０７（三菱化学社製）等の芳香環に臭素原子を導入して吸着能を高めた置換スチレン系；ダイヤイオンＨＰ１ＭＧ、ＨＰ２ＭＧ（三菱化学社製）等のメタクリル系；アンバーライトＸＡＤ７６１（ロームアンドハース社製）等のフェノール系；アンバーライトＸＡＤ７ＨＰ（ロームアンドハース社製）等のアクリル系；ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ、ＨＷ-４０Ｃ（東ソー社製）等のポリビニル系；ＳＥＰＨＡＤＥＸ、ＬＨ−２０（ファルマシア社製）等のデキストラン系が例示される。中でも、その母体が、スチレン系（特にスチレン−ジビニルベンゼン共重合体）、メタクリル系、アクリル系、ポリビニル系であるものが好ましく、特にスチレン系であるものがポリフェノール類と夾雑物との分離性の点から好ましい。
【００１４】
合成吸着剤の使用量は、植物抽出物の非重合体カテキン類の全質量と、合成吸着剤の容量との比が３〜６０ｇ／Ｌ、特に１０〜５０ｇ/Ｌであることが、夾雑物の除去効率及びポリフェノール組成物の回収率の向上の観点から好ましい。
【００１５】
植物抽出物を合成吸着剤に吸着させる方法としては、植物抽出物を合成吸着剤に添加し撹拌して吸着させた後、ろ過操作により合成吸着剤を回収するバッチ方法、又は合成吸着剤を充填したカラムに植物抽出物を通液して吸着させるカラム方法を採用することができるが、生産性の点からカラムによる連続処理方法が好ましい。
【００１６】
本工程においては、かかる吸着処理前に、合成吸着剤中の不純物の除去、植物抽出物の吸着能の向上の観点から、合成吸着剤を洗浄してもよい。洗浄方法としては、例えば、次の方法が例示される。先ず、空間速度（ＳＶ）＝０．５〜１０［ｈ-1］、合成吸着剤に対する通液倍数（ＢＶ）＝２〜１０［ｖ／ｖ］の条件でエタノール水溶液（例えば、エタノール濃度４０〜５０質量％）を合成吸着剤が充填されたカラムに通液して合成吸着剤中の不純物を除去する。次いで、ＳＶ＝０．５〜１０［ｈ-1］、ＢＶ＝１〜６０［ｖ／ｖ］の条件で水をカラムに通液してカラム内のエタノールを水に置換する。
【００１７】
合成吸着剤に吸着させる際、植物抽出物中の非重合体カテキン類の濃度は、０．１〜１５質量％、更に０．２〜１０質量％、特に０．５〜５質量％であることが、合成吸着剤への吸着効率の点から好ましい。植物抽出物の濃度を上記範囲内に調整するために、植物抽出物を水で希釈しても、濃縮してもよい。水としては、例えば、水道水、精製水、イオン交換水が例示される。
【００１８】
植物抽出物の通液条件は、植物抽出物の吸着能の向上の点から、好ましは、ＳＶ＝０．５〜１０[ｈ-1]、特にＳＶ＝０．５〜３［ｈ-1］であり、かつＢＶ＝０．５〜１０[ｖ／ｖ]、特にＢＶ＝０．５〜５[ｖ／ｖ]である。
【００１９】
植物抽出物の通液後においては、合成吸着剤を水で少なくとも１回洗浄することが好ましい。合成吸着剤の洗浄に使用する水としては、上記と同様のものが例示される。洗浄水にはアルコール等の水溶性有機溶媒を混合してもよく、有機溶媒濃度は５質量％未満、更に２質量％未満、特に１質量％未満であることが好ましい。
【００２０】
この洗浄工程の通液条件は、好ましくは、ＳＶ＝０．５〜１０[ｈ-1]であり、かつＢＶ＝０．５〜３[Ｌ／Ｌ]、特にＢＶ＝０．５〜２[Ｌ／Ｌ]である。これにより、合成吸着剤に付着した夾雑物を効率よく除去することができる。
【００２１】
［工程（２）］
本発明に係る工程（２）は、合成吸着剤に１０〜６０質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、非重合体カテキン類を含む画分を溶出させる工程である。これにより、植物抽出物中の非重合体カテキン類を低減させることが可能になる。
本工程で使用する有機溶媒としては、水溶液有機溶媒が好ましく、例えば、アセトン等のケトン、メタノール、エタノール等のアルコール、酢酸エチル等のエステルが例示される。中でも、飲食品への使用の観点から、アルコール、特にエタノールが好ましい。また、水としては、上記と同様に、水道水、精製水、イオン交換水が例示される。
本工程で使用する有機溶媒水溶液中の有機溶媒濃度は１０〜６０質量％であるが、非重合体カテキン類の溶出効率及びポリフェノール組成物の回収率の向上の観点から、２０〜５０質量％、特に２５〜４０質量％未満であることが好ましい。
【００２２】
本工程の通液条件は、好ましくは、ＳＶ＝０．５〜１０［ｈ-1］、特にＳＶ＝０．５〜３［ｈ-1］であり、かつＢＶ＝０．５〜１０[ｖ／ｖ]、特にＢＶ＝１．０〜５[ｖ／ｖ]である。これにより、非重合体カテキン類をより一層効率よく溶出させることができる。
【００２３】
［工程（３）］
本発明に係る工程（３）は、合成吸着剤に２０〜１００質量％の有機溶媒水溶を接触させて、ポリフェノール組成物を含む画分を溶出させる工程である。これにより、植物抽出物からポリフェノール組成物を効率よく分画することが可能になる。
本工程で使用する有機溶媒水溶液としては、工程（２）の有機溶媒水溶液よりも疎水性の高いものが好ましく、例えば、工程（２）の有機溶媒水溶液よりも有機溶媒濃度の高い水溶液、あるいは工程（２）の有機溶媒よりも炭素数の多い有機溶媒を含む水溶液が好適に使用される。有機溶媒としては、上記と同様の水溶液有機溶媒が好ましく、特にアルコールが好ましい。また、水としては、上記と同様のものを使用することができる。
本工程で使用する有機溶媒水溶液中の有機溶媒濃度は２０〜１００質量％であるが、ポリフェノール組成物の回収率の向上の点から、３０〜８０質量％、特に４０〜６０質量％であることが好ましい。
本工程の通液条件は、好ましくは、ＳＶ＝０．５〜１０［ｈ-1］、特にＳＶ＝０．５〜３［ｈ-1］であり、かつＢＶ＝０．５〜１０[ｖ／ｖ]、特にＢＶ＝１．０〜５[ｖ／ｖ]である。これにより、ポリフェノール組成物をより一層効率よく溶出させることができる。
【００２４】
［工程（４）］
本発明に係る工程（４）は、工程（３）で得られたポリフェノール組成物を含む画分から、精留により有機溶媒を除去する工程である。これにより、植物抽出物からポリフェノール組成物を得ることができる。なお、本工程により除去される有機溶媒には、水が含まれていてもよい。
「精留」とは、蒸留において留分の一部を還流させ、その還流液と蒸気とを精留塔内で向流接触させる蒸留操作であり、実質的に還流を行わない「単蒸留」とは区別される。精留を実施するには、所定の理論段数を有する精留塔と、留分の一部を所定の割合（還流比）で還流できる還流分配器を備えていることが必要である。
本工程においては、前工程で得られたポリフェノール組成物を含む画分中の有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度が３０質量％を超えるとき、当該画分に加水して上記有機溶媒濃度を３０質量％以下に調整することが好ましい。上記画分への加水は、有機溶媒水溶液中の有機溶媒濃度が５〜３０質量％、更に１０〜２５質量％、特に１５〜２０質量％となるように行うことが好ましい。これにより、ボトム液が粘稠になり難く、ポリフェノール組成物を含む画分から有機溶媒を安定に除去することができる。なお、加水時期は、精留時にポリフェノール組成物を含む画分が加水された状態であれば特に限定されるものではない。
【００２５】
本工程の精留は、バッチ式でも、連続式でもよく、必要に応じて加圧又は減圧下で行うことができる。また、精留条件は有機溶媒の種類により適宜設定することが可能であるが、ボトム液の粘稠化防止の観点から、理論段数が５〜１００段、更に１０〜８０段、特２０〜６５段である精留塔を用い、かつ還流比が２〜１００、更に１０〜８０、特に２０〜６０の条件で行うことが好ましい。
更に、精留による有機溶媒の留出率は、１０〜９０質量％、特に３０〜６０質量％とすることが好ましい。ここで、「留出率」とは、精留前の有機溶媒の全質量に対する留出した有機溶媒の質量の割合をいう。
本工程の精留を上記条件にて行うことで、精留後のボトム液中のポリフェノール組成物濃度を１質量％以下（好ましくは０．５質量％以下）、かつボトム液中の有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度を０．５質量％以下（好ましくは０．１質量％以下、特に好ましくは０．０５質量％以下）とすることができる。なお、ボトム液中のポリフェノール組成物濃度及び有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度は、０質量％であってもよい。
また、精留塔の塔頂温度は有機溶媒の沸点に対して０．５〜３℃、特に１〜２．５℃高いことが好ましく、また精留塔の塔底温度は有機溶媒の沸点に対して５〜２０℃、特に８〜１５℃高いことが好ましい。
【００２６】
このようにして、植物抽出液から、本発明のポリフェノール組成物を得ることができる。ポリフェノール組成物の形態としては、例えば、水分散液、粉体が例示される。粉体の形態が望ましい場合は、噴霧乾燥や凍結乾燥等の方法により粉体化することができる。
本発明の製造方法により得られたポリフェノール組成物は、次の成分（Ａ）及び（Ｂ）を特定の比率で含有することができる。ここで、成分（Ａ）は、高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中のフラボノールアグリコンの総量であり、また成分（Ｂ）は、酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中のポリフェノールの総量である。ここで、「固形分」とは、ポリフェノール組成物を１０５℃の電気恒温乾燥機で３時間乾燥して揮発物質を除いた残分をいう。なお、成分（Ａ）及び（Ｂ）は、後掲の実施例に記載の方法により定量することができる。
風味や水への溶解性の観点から、成分（Ａ）は０．７〜５０質量％であることが好ましく、また成分（Ｂ）は５〜９５質量％、特に１０〜９０質量％であることが好ましい。更に、上記（Ａ）及び（Ｂ）の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］は０．５〜１８であることが好ましい。
また、ポリフェノール組成物は（Ｃ）ルチンを含有してもよく、成分（Ｃ）はポリフェノール組成物の固形分中に０．４〜３０質量％含有することが好ましい。
【実施例】
【００２７】
１．非重合体カテキン類及びカフェインの測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式ＳＣＬ−１０ＡＶＰ、島津製作所製）を用い、オクタデシル基導入液体クロマトグラフ用パックドカラム（Ｌ−カラムＴＭ ＯＤＳ、４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ：財団法人 化学物質評価研究機構製）を装着し、カラム温度３５℃でグラディエント法により分析した。移動相Ａ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有する蒸留水溶液、Ｂ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有するアセトニトリル溶液とし、試料注入量は２０μＬ、ＵＶ検出器波長は２８０ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００２８】
時間（分） Ａ液濃度（体積％） Ｂ液濃度（体積％）
０．０ ９７ ３
５．０ ９７ ３
３７．０ ８０ ２０
４３．０ ８０ ２０
４３．５ ０ １００
４８．５ ０ １００
４９．０ ９７ ３
６０．０ ９７ ３
【００２９】
２．ルチンの測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式Ｗａｔｅｒｓ２６９５、ＷＡＴＥＲＳ製）を用い、カラム（Ｓｈｉｍｐａｃｈ ＶＰ ＯＤＳ、１５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．）を装着し、カラム温度４０℃でグラディエント法により分析した。移動相Ｃ液はリン酸を０．０５質量％含有する蒸留水溶液、Ｄ液はメタノール溶液とし、流速は１ｍＬ／分、試料注入量は１０μＬ、ＵＶ検出器波長は３６８ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００３０】
時間（分） Ｃ液濃度（体積％） Ｄ液濃度（体積％）
０．０ ９５ ５
２０．０ ８０ ２０
４０．０ ３０ ７０
４１．０ ０ １００
４６．０ ０ １００
４７．０ ９５ ５
６０．０ ９５ ５
【００３１】
３．フラボノールアグリコン（ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロール）の測定
（１）試料の加水分解
試料溶液５ｍＬにメルカプトエタノール２００μＬ、２Ｎ塩酸５００μＬを添加した。その後、ドライブロックバス（アズワン株式会社製）にて１２０℃で４０分間加熱し、冷却した。
【００３２】
（２）分析
加水分解後の試料溶液中に存在しているミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールを、高速液体クロマトグラフィーにより定量した。なお、定量はグラディエント法により行ったが、その分析方法は上記「ルチンの測定」と同じである。
【００３３】
（３）フラボノールアグリコンの総量
上記分析により定量されたミリセチン量、ケルセチン量及びケンフェロール量の総和として求めた。
【００３４】
４．ポリフェノールの測定
（１）試薬の調製
１）酒石酸鉄試薬の調製
５００ｍＬメスフラスコに硫酸第一鉄七水塩０．５０ｇと（＋）酒石酸ナトリウム・カリウム四水和物２．５０ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。
【００３５】
２）リン酸バッファーの調製
２０００ｍＬメスフラスコにリン酸水素二ナトリウム・二水和物２０．００ｇとリン酸二水素カリウム２．９０ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。この溶液のｐＨが７．５〜７．６になるように調整した。ｐＨ７．６を超える場合、リン酸二水素カリウム・二水和物０．９ｇ／１００ｍＬ水溶液を添加し、ｐＨ７．５未満の場合、リン酸二水素カリウム１．２ｇ／１００ｍＬ水溶液を添加し調整した。
【００３６】
（２）装置及び器具
１）分光光度計（Ｕ−２０１０；日立製作所製）
２）石英製セル（１０ｍｍ×１０ｍｍ）
３）２５ｍＬ、１００ｍＬ、２００ｍＬ、５００ｍＬ、２０００ｍＬのメスフラスコ
４）１ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、２０ｍＬ、３０ｍＬのホールピペット
５）１ｍＬ、３ｍＬ、５ｍＬのマイクロピペット
【００３７】
（３）分析条件
１）測定波長：５４０ｎｍ
２）温度 ：２０℃±２℃
【００３８】
（４）操作：
１）検量線作成
ｉ）没食子酸エチル約０．５ｇを使用前に２〜３時間乾燥させた。
ii）２００ｍＬメスフラスコに乾燥した没食子酸エチル０．２ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。（１００ｍｇ／１００ｍＬ標準液）
iii）１００ｍＬメスフラスコに、ii）の標準液を用い、５ｍｇ／１００ｍＬ、１０ｍｇ／１００ｍＬ、２０ｍｇ／１００ｍＬ、３０ｍｇ／１００ｍＬの各標準液を調整した。
iv）２５ｍＬメスフラスコに、iii）の標準液をそれぞれ５ｍＬ採取し、酒石酸鉄試薬５ｍＬを加えリン酸バッファーでメスアップした。また、ブランクとして標準液を加えないものを調製した。
ｖ）分光光度計にて吸光度を測定し検量線を作成した。
なお、検量線については下記を目安にし、逸脱した時は再調整した。
Ｒ２ ：０．９９９５〜１．００００
検量線傾き：３４．５±０．４
切片 ：０．３以下
【００３９】
２）試料測定
ｉ）イオン交換水にて分光光度計をゼロ補正した。
ii）２５ｍＬメスフラスコに試料を所定量採取し、酒石酸鉄試薬５ｍＬを加えリン酸バッファーでメスアップした後、吸光度を測定した。なお、吸光度の測定は、発色後４０分以内とした。
【００４０】
実施例１〜２及び比較例１〜２
緑茶葉（大葉種）を熱水で抽出した後、噴霧乾燥により緑茶抽出物を得た。緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度３０質量％であった。
次いで、緑茶抽出物の非重合体カテキン類濃度が１質量％になるようにイオン交換水で希釈した。次いで、緑茶抽出物の希釈液８００ｇをカラム（内径５０ｍｍ×高さ１８０ｍｍ、容積３５３．３ｍＬ）に充填した合成吸着剤（ＳＰ−７０、三菱化学（株）製）２００ｍＬに吸着させた。
次いで、イオン交換水３００ｍＬ、３０質量％エタノール水溶液４００ｍＬを順次合成吸着剤に通液して非重合体カテキン類を含む画分を溶出させた。次いで、合成吸着剤に５０質量％エタノール水溶液を４００ｍＬ通液してポリフェノール組成物を含む画分（ポリフェノール組成物濃度０．１〜０．２質量％）を溶出させた。なお、本分画操作はすべて、通液速度ＳＶ＝０．８〜１．２［ｈ-1］になるように流量調整して行った。
次いで、表１に示す条件にて、ポリフェノール組成物を含む画分からエタノールを除去した後、凍結乾燥してポリフェノール組成物を得た。なお、実施例２のポリフェノール組成物を含む画分は、実施例１のポリフェノール組成物を含む画分に加水し、当該画分中の有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度を調整した。また、精留の場合、理論段数は５４段、還流比は５０に設定した。エタノール除去後において、ボトム液の分散状態を観察するとともに、ボトム液中のポリフェノール組成物濃度及び有機溶媒濃度を測定した。
【００４１】
【表１】
【００４２】
表１から明らかなように、工程（３）で得られたポリフェノール組成物を含む画分中の有機溶媒水溶液から、精留により有機溶媒を除去することで、ボトム液が粘稠になり難くなり、その結果ポリフェノール組成物を安定に効率よく得ることができる。特に、精留前の工程（３）で得られたポリフェノール組成物を含む画分の有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度が３０質量％を超えるとき、該画分に加水し該画分中の有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度を３０質量％以下に低下させることで、より一層効率よく安定にポリフェノール組成物を得ることが可能である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の工程（１）〜（４）：
（１）ポリフェノール類を含有する植物抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程、
（２）前記合成吸着剤に１０〜６０質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、非重合体カテキン類を含む画分を溶出させる工程、
（３）前記合成吸着剤に２０〜１００質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、ポリフェノール組成物を含む画分を溶出させる工程、
（４）前記ポリフェノール組成物を含む画分から、精留により有機溶媒を除去する工程
を含む、ポリフェノール組成物の製造方法。
【請求項２】
前記工程（４）において、前記工程（３）で得られたポリフェノール組成物を含む画分中の有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度が３０質量％を超えるとき、前記画分に加水して前記有機溶媒濃度を３０質量％以下に調整する、請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
前記工程（４）において、理論段数５〜１００段の精留塔を用いて還流比２〜１００の条件で精留を行う、請求項１又は２記載の製造方法。
【請求項１】
次の工程（１）〜（４）：
（１）ポリフェノール類を含有する植物抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程、
（２）前記合成吸着剤に１０〜６０質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、非重合体カテキン類を含む画分を溶出させる工程、
（３）前記合成吸着剤に２０〜１００質量％の有機溶媒水溶液を接触させて、ポリフェノール組成物を含む画分を溶出させる工程、
（４）前記ポリフェノール組成物を含む画分から、精留により有機溶媒を除去する工程
を含む、ポリフェノール組成物の製造方法。
【請求項２】
前記工程（４）において、前記工程（３）で得られたポリフェノール組成物を含む画分中の有機溶媒水溶液の有機溶媒濃度が３０質量％を超えるとき、前記画分に加水して前記有機溶媒濃度を３０質量％以下に調整する、請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
前記工程（４）において、理論段数５〜１００段の精留塔を用いて還流比２〜１００の条件で精留を行う、請求項１又は２記載の製造方法。
【公開番号】特開２０１０−２６８７６１（Ｐ２０１０−２６８７６１Ａ）
【公開日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１２５１５３（Ｐ２００９−１２５１５３）
【出願日】平成２１年５月２５日（２００９．５．２５）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年５月２５日（２００９．５．２５）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
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