本発明は、パラミクソウイルス科のニューモウイルス亜科に属する、哺乳動物ネガティブ鎖RNAウイルスであるメタニューモウイルス(MPV)の改良株に関する。本発明は更に、トリプシン非存在下で哺乳動物MPVを増殖させる方法に関する。本発明の方法および組成物は、例えばMPV感染症に対するワクチンの調製に使用できる

【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物メタニューモウイルスを、培地1ミリリットル当たり20ミリ単位未満のトリプシン比活性を有する培地中で培養することを含む、哺乳動物メタニューモウイルスを増殖させる方法。
【請求項２】
哺乳動物メタニューモウイルスがヒトメタニューモウイルスである、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
培地にトリプシンを外部から添加しない、請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
培地に血清を添加しない、請求項1または2に記載の方法。
【請求項５】
哺乳動物メタニューモウイルスのFタンパク質の切断部位にあるRQSR切断モチーフが、少なくとも1つのアミノ酸置換を含む、請求項1または2に記載の方法。
【請求項６】
哺乳動物メタニューモウイルスのFタンパク質が、配列番号314と比較して少なくとも1つの追加のアミノ酸置換を含む、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
RQSR切断モチーフ中のアミノ酸置換が、RQPR配列を生じるセリンからプロリンへの置換である、請求項5に記載の方法。
【請求項８】
Fタンパク質における追加のアミノ酸置換が、以下のE93K、Q100K、E92K、E93V、I95S、E96K、Q94K、Q94H、I95S、N97K、またはN97Hの少なくとも1つである、請求項6に記載の方法。
【請求項９】
Fタンパク質における追加のアミノ酸置換がE93Kである、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
追加のアミノ酸置換が、RQSRモチーフ中のアミノ酸置換を安定化させる、請求項6に記載の方法。
【請求項１１】
トリプシンの非存在下で増殖することができる、分離した哺乳動物メタニューモウイルス。
【請求項１２】
哺乳動物メタニューモウイルスがヒトメタニューモウイルスである、請求項11に記載のウイルス。
【請求項１３】
哺乳動物メタニューモウイルスのFタンパク質の切断部位にあるRQSR切断モチーフが、少なくとも1つのアミノ酸置換を含む、請求項11または12に記載のウイルス。
【請求項１４】
哺乳動物メタニューモウイルスのFタンパク質が、配列番号314と比べて少なくとも1つの追加のアミノ酸置換を含む、請求項13に記載のウイルス。
【請求項１５】
RQSR切断モチーフ中のアミノ酸置換が、RQPR配列を生じるセリンからプロリンへの置換である、請求項13に記載のウイルス。
【請求項１６】
Fタンパク質における追加のアミノ酸置換が、以下のE93K、Q100K、E92K、E93V、I95S、E96K、Q94K、Q94H、I95S、N97K、またはN97Hの少なくとも1つである、請求項14に記載のウイルス。
【請求項１７】
追加のアミノ酸置換が、RQSRモチーフ中のアミノ酸置換を安定化させる、請求項14に記載のウイルス。
【請求項１８】
Fタンパク質における追加のアミノ酸置換がE93Kである、請求項16に記載のウイルス。
【請求項１９】
哺乳動物メタニューモウイルスのFタンパク質をコードする単離された核酸であって、前記Fタンパク質が、S101Pアミノ酸置換と、以下のE93K、Q100K、E92K、E93V、I95S、E96K、Q94K、Q94H、I95S、N97K、またはN97Hの少なくとも1つとを含む核酸。
【請求項２０】
哺乳動物メタニューモウイルスがヒトメタニューモウイルスである、請求項19に記載の核酸。
【請求項２１】
トリプシン非存在下で哺乳動物メタニューモウイルスの安定増殖を支持する、哺乳動物メタニューモウイルスのFタンパク質を同定する方法であって、
(a)Fタンパク質の切断部位にRQPRモチーフを含む哺乳動物メタニューモウイルスを、トリプシン非存在下で少なくとも2継代の間増殖させるステップと、
(b)合胞体形成を測定するステップと
を含み、ステップ(a)前の哺乳動物メタニューモウイルスによる合胞体形成に比した合胞体形成の増加は、哺乳動物メタニューモウイルスのFタンパク質が、トリプシン非存在下で哺乳動物メタニューモウイルスの安定増殖を支持する追加のアミノ酸置換を獲得したことを示す方法。
【請求項２２】
トリプシン非存在下で哺乳動物メタニューモウイルスの安定増殖を支持する、哺乳動物メタニューモウイルスのFタンパク質を同定する方法であって、
(a)Fタンパク質の切断部位にRQPRモチーフを含む哺乳動物メタニューモウイルスを、トリプシン非存在下で少なくとも2継代の間増殖させるステップと、
(b)Fタンパク質の切断を測定するステップと
を含み、ステップ(a)前の哺乳動物メタニューモウイルスによるFタンパク質の切断に比したFタンパク質切断の増加は、哺乳動物メタニューモウイルスのFタンパク質が、トリプシン非存在下で哺乳動物メタニューモウイルスの安定増殖を支持する追加のアミノ酸置換を獲得したことを示す、方法。
【請求項２３】
切断部位にRQPRモチーフを含むFタンパク質のトリプシン非依存的切断を促進する、哺乳動物メタニューモウイルスのFタンパク質変異体を同定する方法であって、
(a)哺乳動物メタニューモウイルスをトリプシン非存在下で少なくとも2継代の間増殖させるステップと、
(b)Fタンパク質の切断効率を決定するステップと
を含み、Fタンパク質の増加した切断効率は、Fタンパク質が、Fタンパク質のトリプシン非依存的切断を促進する変異を獲得したことを示す、方法。
【請求項２４】
切断部位にRQPRモチーフを含む、哺乳動物メタニューモウイルスのFタンパク質の切断を触媒するプロテアーゼを同定する方法であって、
(a)Fタンパク質を試験プロテアーゼと接触させるステップと、
(b)Fタンパク質の切断が起こったか否かを決定するステップと
を含み、Fタンパク質の切断が起きたことは、プロテアーゼがFタンパク質の切断を触媒することを示す、方法。
【請求項２５】
哺乳動物メタニューモウイルスがヒトメタニューモウイルスである、請求項21、22、23または24に記載の方法。
【請求項２６】
哺乳動物メタニューモウイルスがS101P変異を保持している、請求項21、22、23または24に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【公表番号】特表２００８−５３７４８２（Ｐ２００８−５３７４８２Ａ）
【公表日】平成２０年９月１８日（２００８．９．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５０１０５４（Ｐ２００８−５０１０５４）
【出願日】平成１８年３月９日（２００６．３．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００９０１０
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０９９３６０
【国際公開日】平成１８年９月２１日（２００６．９．２１）
【出願人】（５０５３９６２２４）メッドイミューン　バクシーンズ，インコーポレイティド (13)
【Ｆターム（参考）】