モナティンの非天然型立体異性体塩の結晶及びその使用
【課題】甘味物質として使用可能であり、モナティンの非天然型である立体異性体の塩の結晶を新規に提供する。この結晶は安定であり、高甘味度を呈し、甘味剤又はその成分として、更には飲食品等への甘味付与成分としての使用が期待できる。新規甘味物質である上記塩の結晶を使用する甘味剤や、甘味が付与された飲食品等の製品を提供することができる。
【解決手段】当該立体異性体の塩にはモナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体の塩が含まれるが、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体の塩が特に好ましい。
【解決手段】当該立体異性体の塩にはモナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体の塩が含まれるが、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体の塩が特に好ましい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、モナティンの非天然型立体異性体塩の結晶及びその使用に関し、更に詳しくは甘味剤又はその有効成分（甘味料）として優れている、天然型モナティン（Monatin）（（２Ｓ，４Ｓ）体）の立体異性体塩（非天然型立体異性体塩）の結晶、当該非天然型立体異性体塩の混合物の結晶、このような非天然型立体異性体塩のうち少なくとも１種と天然型モナティン（（２Ｓ、４Ｓ）体）塩を含む混合物の結晶、並びにこれらの塩の結晶の使用に関する。この非天然型立体異性体塩には、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体等非天然型の各種立体異性体の塩が含まれ、このような塩の代表例として、このような塩の単独品（当該非天然型立体異性体の何れか１種の塩）、その複数種の塩混合物、これら少なくとも１種の塩を含む混合物（組成物）等を挙げることができる。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の高度化に伴い、特に糖分の摂取過多による肥満及びこれに伴う各種疾病が問題となっており、砂糖に代わる低カロリー甘味剤の開発が強く望まれている。求められる甘味剤には甘味強度以外に、低カロリー、安全性、熱や酸に対する安定性、甘味質、コスト等、多くの諸特性、要件が求められる。
【０００３】
現在、各種の甘味剤が使用又は提案されている。例えば、甘味強度（甘味度）が強く工業的に大量生産可能な甘味剤として実用化され、広範に使用されているものとして、安全性と甘味質の面で優れているアスパルテームが存在する。更に、アスパルテームの誘導体についての研究も盛んに行われている。これら以外にも、甘味剤として各種の特性を有する甘味物質が提案され、実用化に向けた検討がなされている。また、天然に存在し大量に採取できる植物由来のソーマチン、グリチルリチン、ステビオシド等が天然甘味剤として現在使用されている。このような情況下に、甘味剤としての実用化が期待でき、甘味度が強い甘味物質の開発が求められている。
【０００４】
モナティンは南アフリカの北部トランスバール（northern Transvaal）地方に自生する植物シュレロチトン イリシホリアス（Schlerochiton ilicifolius）の根皮から単離された天然由来のアミノ酸誘導体であり、R. Vleggaar等により、その構造に関し、(2S,4S)-2-amino-4-carboxy-4-hydroxy-5-(3-indolyl)-pentanoic acid（(2S,4S)-4-hydroxy-4-(3-indolylmethyl)-glutamic acid；後述の構造式（１）参照。）と報告されている（R. Vleggaar et. Al., J. Chem. Soc. Perkin Trans., 3095-3098, (1992)参照。）。また、この天然植物由来の（２Ｓ，４Ｓ）体（天然型モナティン）の甘味強度は、同文献等によると、ショ糖の８００倍〜１４００倍と報告されている。モナティンの合成法については、幾つかの方法が報告されているものの、それらの多くは立体異性体混合物の合成法に関するものであり、天然型モナティンと同一化学構造式を有する４種の立体異性体それぞれを純品として合成、単離し、それらの諸性質を詳細に調べ、報告した例は殆ど無い。（その合成例については、P. J. van Wyk et. al., ZA 87/4288, ZA 88/4220、Holzapfel et. al., Synthetic Communications, 24(22), 3197-3211 (1994)、 E. Abushanab et. al., US 5,994,559 (1999)、K. Nakamura et. al., Organic Letters, 2, 2967-2970 (2000)等を参照することができる。）
【０００５】
先ず、最初にモナティンについて言及しているP. J. van Wyk等の特許文献によると、彼等はＸ線結晶構造解析で天然に存在し強い甘味を持つ立体異性体が（２Ｓ，４Ｓ）体か或いは（２Ｒ，４Ｒ）体であることをつきとめているが、（２Ｓ）−アスパラギン酸から（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｓ，４Ｒ）体との混合物を合成した結果と総合して、天然に存在して強い甘味を持つ立体異性体は（２Ｓ，４Ｓ）体の可能性が高いと報告している。次に、前述のR. Vleggaar等の文献によると天然植物に存在するモナティンの立体異性体（立体構造）は唯一（２Ｓ，４Ｓ）体であり、その甘味強度はショ糖の８００〜１４００倍であると報告している。これらの情報を基にすると、天然に存在し強い甘味の本体であるモナティンの立体異性体（立体構造）は（２Ｓ，４Ｓ）体と考えるのが妥当である。
【０００６】
K. Nakamura等は前記引例の文献で、モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体とモナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体の塩酸塩を単離しこれらの甘味強度について、それぞれ天然標品のモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）と同等の甘味、及び恐らくは不純物として混在すると考えられるモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）に由来するものと思われる僅かな甘味を呈したと報告しているが、具体的な甘味強度についての報告は無い。即ち、この文献はモナティンの非天然型立体異性体（（２Ｓ，４Ｓ）体以外）の甘味強度について言及した初めての例であるが、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体塩酸塩には殆ど甘味が無いと報告している。
【０００７】
一方、T. Kitahara等は甘味料としてモナティンの各立体異性体の選択的合成法について報告しているが、各立体異性体の甘味度については報告していない（T. Kitahara等、日本農芸化学会、２０００年度大会 講演要旨集、３Ｂ１２８β（２２１ページ）参照。）。
【０００８】
これらの情報を総合すると、下記のことが判明している：
（１）天然に存在し、８００〜１４００倍の甘味強度を持つモナティンの立体異性体（立体構造）は（２Ｓ，４Ｓ）体である；及び
（２）モナティンの他の非天然型立体異性体については、その一部について少量を単離した例はあるがその純品を単離精製し、甘味効果を確認した例は無い。
【０００９】
即ち、これまで、５〜１０％のショ糖濃度に相当する実用濃度での、モナティンの各立体異性体の甘味強度については、天然由来のモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）を除いて、明確なデータは無い。従って、モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）以外のモナティンの非天然型立体異性体が甘味剤として使用可能かどうか既存の文献、特許文献等からは知り得ない。換言すれば、天然由来のモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）を除き、甘味度（甘味強度）についての信頼できる情報に乏しく、先行技術情報を総合判断した場合には、モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）以外の非天然型モナティン立体異性体については甘味度が低く、甘味剤としての有用性が期待できないと考えざるを得ない情況にあった。
【００１０】
この一因として、これまで前記各種立体異性体を合成し、単離精製する方法が見出されていなかったことが挙げられる。
【００１１】
従って、少なくとも数百ｍｇ以上の天然型モナティン及びその３種の非天然型立体異性体それぞれを純品として単離精製し、それぞれの光学純度と甘味強度を明らかにし、更にモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）及びその立体異性体（即ち、非天然型立体異性体）の甘味剤としての有用性を明らかにし、その結果有用性の高い成分を含む甘味剤を開発することが求められている。
【００１２】
モナティンの各種立体異性体を高純度に分離する方法として、先ず結晶化の方法が考えられる。そこで、モナティンの結晶（遊離体、塩等の形態を含む。）について若干説明すると、以下の通りである。
【００１３】
従来の報告では、前述のR. Vleggaar等の文献にモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の遊離体の結晶を水、酢酸及びエタノール（１：１：５）の混合溶媒から得たと報告されており、その融点は２１６℃〜２２０℃と記載されている。また、P. J. van Wyk等の特許文献には、モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の遊離体（crystalline solid）の融点は２４７℃〜２６５℃（分解）であると記載されているが、各種塩に関してはアモルファス状固体（amorphous solid）であると報告されている。前述のC. W. Holzapfel等の文献には合成モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｒ，４Ｒ）体混合物の遊離体の結晶を水及び酢酸（１０：１）の混合溶媒から２度の晶析により得て、その融点が２１２℃〜２１４℃であると報告されている。従って、モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体の遊離体等これら２例以外のモナティンの非天然型立体異性体及びそれら複数の立体異性体混合物については、遊離体はもとより、各種塩に関しても結晶状態で単離されたことは無く、従って物性値その他の情報は全く知られていない。即ち、モナティンに関しては、従来のイオン交換クロマトグラフィー等による精製法に比べて、精製手段として最も簡便かつ有効な方法である晶析法及びそれによって得られる結晶についての知見はモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の遊離体及びモナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｒ，４Ｒ）体の遊離体混合物の２例を除いては無く、特に塩の結晶については皆無である。即ち、モナティンの各種立体異性体を甘味剤として実用化する観点からこのような結晶についてその諸物性を明らかにすることが、先ず求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】ZA 87/4288
【特許文献２】ZA 88/4220
【特許文献３】US 5,994,559
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Holzapfel et. al., Synthetic Communications, 24(22), 3197-3211 (1994)
【非特許文献２】K. Nakamura et. al., Organic Letters, 2, 2967-2970 (2000)
【非特許文献３】T. Kitahara等、日本農芸化学会、２０００年度大会 講演要旨集、３Ｂ１２８β（２２１ページ）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明が解決しようとする課題は甘味剤としての実用化が期待でき、甘味強度が強い甘味物質を提供することにある。具体的には、天然型モナティン及びその３種の非天然型立体異性体をそれぞれ純品、特に結晶として分離精製し、これらの光学純度を確認する方法を確立し、更に、ショ糖の８００倍〜１４００倍と言われている天然型モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の甘味強度（甘味度）を確認すると共に、他の３種の立体異性体の甘味強度を決定し、これらの立体異性体の甘味剤としての実用性を明らかにすることにある。更に、これらの立体異性体の各種塩の結晶に関して、諸物性を始めとする特徴を明らかにし、物性面からの実用性を明らかにすることも重要な課題である。
【００１７】
尚、前述の通り、天然型モナティンはその立体構造において（２Ｓ，４Ｓ）体を示すが、本発明においては、それと同一の化学構造式を有する化合物を全て「モナティン」と総称し、従って、モナティンの非天然型立体異性体を、「天然型モナティンの立体異性体」、「非天然型モナティン」、「モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体」、「モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体」、或いは「モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体」等と称する。また、これらの立体異性体に、モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）を加えて、これらを「４種の立体異性体」と称したり、特に天然型モナティンを、「モナティン」、「モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）」或いは「モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体」等と称する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明者等は上記課題を解決すべくモナティンについて鋭意検討を行った。先ず、K. Nakamura等の方法に従って、モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体とモナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体との、及びモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体と（２Ｒ，４Ｓ）体との立体異性体（異性体混合物）を合成し、これらの立体異性体混合物から逆相ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）で目的とする立体異性体を分離、取得した。これらの方法によって得た立体異性体は後述の方法で各種塩基との塩として結晶化して更に高純度の結晶を得ることもできた。次に、これらの立体異性体の光学純度を光学活性カラムＨＰＬＣ法で確認した。更に、得られたモナティンの４種立体異性体の甘味強度をショ糖を標準液として測定して決定した。
【００１９】
その結果、天然型モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の甘味強度は、従来報告されている値よりもはるかに低いものであることが判明し、これ以外の非天然型立体異性体については何れもモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）以上の甘味強度を有し、その中には（２Ｓ，４Ｓ）体に比較して格段に優れた甘味強度を有するものも存在し、これらが甘味物質として優れていることを見出した。
【００２０】
即ち、モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体が５％のショ糖水溶液と比較して約１３００倍、またモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体が５％のショ糖水溶液と比較して約２７００倍の甘味強度をそれぞれ有することを新たに見出し、非天然型立体異性体のうち（２Ｒ）体が特に甘味剤として優れているとの新知見を得た。
【００２１】
次に、前述の合成法等によって得たモナティンの立体異性体混合物を各種塩基との塩として晶析する方法、誘導体として晶析する方法、誘導体を光学異性体分離カラムで分離する方法等を検討し、これらの方法によっても各立体異性体を光学的に純品として得ることに成功した。このようにして得られたそれぞれの立体異性体及びそれらの混合物の各種晶析条件を見出し、各種塩の結晶を初めて取得することに成功し、甘味強度を始め種々の物性値を測定することができた。特に、今回初めて得ることができたこれらの塩基との塩の結晶、特にモナティンの非天然型立体異性体塩の結晶が、従来知られていたR. Vleggaar等の報告にある（２Ｓ，４Ｓ）体の遊離体結晶や、P. J. van Wyk等の特許文献でアモルファス状固体としてのみ知られていた各種塩の非晶形物質に比べ、単離精製の容易さや結晶状態での安定性等の点で優れた諸性質を持つことを見出した。特に、甘味強度の強いモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体のカリウム塩は、結晶化の際に用いる有機溶媒を付着溶媒として含まない点、加熱安定性に優れている点、酸性条件下で晶析を行って得る遊離体に比べて着色し難い点等で最も実用的な製品形態として優れている。
【００２２】
更に、このモナティンの非天然型立体異性体塩の結晶を使用して、甘味剤或いは飲食品等を提供できることを見出した。
【００２３】
以上のような各種の知見に基づいて本発明が完成されるに到った。
【００２４】
以上、本発明においては、天然の立体異性体であるモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）を始めとして、これを含めてそれと同一化学構造式を有する４種の立体（光学）異性体の分離精製及びこれらの光学純度の確認を初めて行うと共に、モナティンの全立体異性体（４種）のより正確な甘味強度を明らかにした。この結果、モナティンの非天然型立体異性体塩の新規な結晶が、従来得られている（２Ｓ，４Ｓ）体等の遊離体の結晶や前述特許記載の塩のアモルファス状固体に比べて甘味物質及び甘味物質としての実用的な製品形態として優れていること、即ちモナティンの非天然型立体異性体塩の結晶が甘味剤として有用性を有することが見出され、中でもモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩結晶が４立体異性体の中で最も強力で、従来の知見からは予測し得ない甘味強度を有し、実用に供する甘味剤又はその成分として最も適していることも確認された。
【００２５】
即ち、本発明は、一つの形態として、モナティンの非天然型立体異性体塩の結晶に存する。本発明はアミノ酸系甘味物質、モナティン（Monatin）の非天然型立体異性体塩の結晶に関し、この立体異性体塩にはモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩、（２Ｒ，４Ｓ）体塩及び（２Ｓ，４Ｒ）体塩の少なくとも１種が含まれる。
【００２６】
本発明において、当該立体異性体塩の結晶を構成する化合物は前記非天然型立体異性体の塩であり、その水和物、溶媒和物等の形態でもよい。更に、この化合物はこのようなモナティンの塩で、分子内で環化したラクトン又はラクタムの形態、及び／又は含まれる官能基の少なくとも一つが保護された形態でもよい。
【００２７】
本発明の結晶に含まれる塩の種類、形態等には、特に制限は無い。最終的製品としての食品用として使用される場合には当然食品用に使用可能な塩が採用される。その他、中間体として適した塩も有用である。これらのこと（上記結晶の形態及び塩の種類、形態等）は、モナティンの非天然型立体異性体塩（結晶）の形態の場合に限らず、後述するように混合して使用される場合のモナティンの天然型立体異性体塩（結晶）の形態についても同様に適用される。
【００２８】
このような塩の形態としては、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アンモニア等とのアンモニウム塩、リジン、アルギニン等のアミノ酸との塩、塩酸、硫酸等の無機酸との塩、クエン酸、酢酸等の有機酸との塩及びサッカリン（ｓａｃｃｈａｒｉｎ）、アセスルフェーム（ａｃｅｓｕｌｆａｍｅ）、シクラミン酸（ｃｙｃｌａｍｉｃ ａｃｉｄ）、グリチルリチン酸（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃ ａｃｉｄ）、アスパルテーム（ａｓｐａｒｔａｍｅ）等の他の甘味剤又はその成分との塩が挙げられ、これらも前述の通り前記本発明に使用する当該立体異性体の塩や、使用される場合の天然型モナティンの塩に適用することができる。
【００２９】
上記塩の形成方法については、本発明についての説明（実施例等）に基いて、必要により慣用され又は公知の造塩方法を利用して、目的とする塩を調製することができる。
【００３０】
前記立体異性体の中には、使用される場合の天然型モナティンを含めて、カルボキシル基、水酸基、アミノ基、インドリル（インドール）基等の官能基が含まれているが、これらの官能基は保護されていてもよい。保護基としては、有機化学、特にアミノ酸やペプチド化学においてそれぞれの保護基として常用される保護基を使用することができる。
【００３１】
本発明の結晶には、下記の内容[１]−[６]が含まれる。
【００３２】
尚、天然型モナティンである（２Ｓ，４Ｓ）体、並びに非天然型モナティンである（２Ｓ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体は下記の構造式（１）、（２）、（３）及び（４）で示される。
【００３３】
[１]
当該非天然型立体異性体塩として、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体塩、（２Ｒ，４Ｒ）体塩及び（２Ｒ，４Ｓ）体塩を挙げることができる。当該塩の結晶としては水和物及び溶媒和物等の形態でもよい。
これら立体異性体塩の中では、モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体及び（２Ｒ，４Ｒ）体がより好ましく、更にモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体が最も好ましい。このような本発明に含まれる塩の結晶は、単離精製の容易さ及び保存安定性に優れていること等から好ましい。
【００３４】
[２]
上記本発明の非天然型立体異性体塩の結晶は、当該立体異性体の塩（水和物、溶媒和物等の形態を含む。）を、好ましくは少なくとも９５％程度、より好ましくは少なくとも９７％程度の化学純度で有することができる。
【００３５】
[３]
上記本発明の非天然型立体異性体塩の結晶は、好ましくは少なくとも９０％程度、より好ましくは少なくとも９４％程度、更に好ましくは少なくとも９８％程度の光学純度を有することができる。例えば、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体の塩（水和物、溶媒和物、それら塩混合物の形態等を含む。）の高光学純度品を挙げることができる。
【００３６】
[４]
上記本発明の立体異性体塩の結晶として、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体の立体異性体塩の中から選択される、少なくとも２種の混合物結晶を採用することができる。
【００３７】
[５]
上記本発明の非天然型立体異性体塩の結晶としては、５〜１０％の実用濃度のショ糖の、好ましくは少なくとも２００倍程度、より好ましくは少なくとも１０００倍程度の甘味強度を示すものを採用することができる。
【００３８】
[６]
上記本発明の立体異性体塩の結晶は、天然型モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の塩の結晶との混合状態で使用することができる。この場合、全モナティンに対して、当該モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体を、好ましくは多くとも７０％程度、より好ましくは多くとも５０％程度含有することができる。
【００３９】
当該天然型モナティン塩の結晶を構成する化合物は天然型モナティンの塩であり、その水和物、溶媒和物等の形態で使用することもできる。更に、この化合物を、このようなモナティンの塩で、分子内で環化したラクトン又はラクタムの形態、及び／又は含まれる官能基の少なくとも一つが保護された形態で使用することができる。
【００４０】
この場合にも、当該天然型立体異性体を含む塩の結晶状態での、混合物結晶の甘味強度として、上記実用濃度のショ糖の、好ましくは少なくとも２００倍程度、より好ましくは少なくとも１０００倍程度のものを好ましいものとして、目的とする混合物結晶を調製することができる。
【００４１】
上記好ましい例として、モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体とモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体との塩の混合物結晶、特にモナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体塩とモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩との比率（重量）が１：０．５〜２程度、特に好ましくは１：１程度である塩の混合物結晶を挙げることができる。
【００４２】
本発明は、別の形態として、上記本発明（前記[１]から[６]を含む。）の非天然型立体異性体塩の結晶を含有することに特徴を有する甘味剤にも存する。
【００４３】
当該甘味剤には、甘味剤用の担体及び／又は増量剤等を含んでいてもよい。
【００４４】
甘味剤用に使用できることが知られ、また今後そのために開発される担体や、増量剤を含んでいてもよい。更に、甘味剤のために使用され得る添加剤を含むことも当然できる。甘味剤は動物用、例えば哺乳動物用、特にヒト用に使用される。
【００４５】
本発明は、更に別の形態として、上記本発明（前記[１]から[６]を含む。）の非天然型立体異性体の塩の結晶を含有することに特徴を有する甘味が付与された飲食品等の製品にも存する。
【００４６】
甘味が求められる動物用製品、特にヒト用の飲食品で甘味が求められる飲食品等に甘味剤の少なくとも一部として、当該結晶を使用することができる。その他、歯磨き、薬品等口内の衛生目的で、或いは経口的に使用される製品で甘味を付与すべき製品に当該結晶が使用され得る。
【００４７】
前記本発明の甘味剤及び飲食品等の製品には、更に他の甘味剤成分（甘味料）、特に糖類、並びに他の人工甘味料及び天然の甘味料の少なくとも１種を含有することができる。例えば、ショ糖、アスパルテーム、アセスルフェーム、スクラロース、サッカリン、ステビオサイド、キシロース、トレハロース、ソルビトール、マルチトール等を併用することができる。
【発明の効果】
【００４８】
本発明により、新規甘味物質、モナティンの非天然型立体異性体塩の結晶を有効成分として使用することにより新規甘味剤又は甘味を付与した飲食品等の製品を提供することができる。当該立体異性体塩の結晶は、特に保存安定性に優れ、強い甘味強度を示し、甘味剤として優れた呈味性を発現する。その中でも当該非天然型立体異性体塩の結晶として、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩（カリウム塩等）の結晶が好ましく、特に優れた呈味性及び保存安定性を有する。
【００４９】
更に、本発明により、甘味剤或いはその成分として、また飲食品等に対する甘味付与成分としても優れた性質を有する新規甘味物質（上記モナティンの非天然型立体異性体塩の結晶）を提供することができる。
【００５０】
故に、本発明は工業的に、特に食品分野において極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】図１は、実施例１３においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図２】図２は、実施例１３においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図３】図３は、実施例１３におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。縦軸には回折強度を、横軸には回折角度２θ[deg]を、それぞれ示す（以下の粉末Ｘ線回折図についても同様である。）。
【図４】図４は、実施例１４においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図５】図５は、実施例１４においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図６】図６は、実施例１４におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図７】図７は、実施例１５においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図８】図８は、実施例１５においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図９】図９は、実施例１５におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図１０】図１０は、比較例１においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図１１】図１１は、比較例１においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図１２】図１２は、比較例１におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図１３】図１３は、比較例２においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩アモルファス固体の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図１４】図１４は、比較例２においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩アモルファス固体の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図１５】図１５は、実施例１７におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図１６】図１６は、実施例１８におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図１７】図１７は、実施例２においてモナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図１８】図１８は、実施例２におけるモナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図１９】図１９は、実施例２においてモナティンの［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図２０】図２０は、実施例２におけるモナティンの［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図２１】図２１は、実施例３においてモナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図２２】図２２は、実施例３におけるモナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図２３】図２３は、実施例４においてモナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体カリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図２４】図２４は、実施例４におけるモナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図２５】図２５は、実施例１１においてモナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図２６】図２６は、実施例１１におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図２７】図２７は、実施例１２においてモナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図２８】図２８は、実施例１２におけるモナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図２９】図２９は、実施例１９におけるモナティン（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩（起晶温度１０℃、３５℃、６０℃）の水蒸気吸着脱着（吸脱着）曲線を示した図である。 縦軸：水分（Moisture）（重量％）；横軸：相対湿度（Relative Humidity）（％）。 △：10℃ 吸着；▲：10℃ 脱着；◇：35℃ 吸着；◆：35℃ 脱着；○：60℃ 吸着；●：60℃ 脱着。
【図３０】図３０は、実施例２０におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図３１】図３１は、実施例Ａにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３２】図３２は、実施例Ｂにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３３】図３３は、実施例Ｃにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３４】図３４は、実施例Ｄにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３５】図３５は、実施例Ｅにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３６】図３６は、実施例Ｆにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３７】図３７は、実施例Ｇにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３８−１】図３８−１は、実施例Ｈにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３８−２】図３８−２は、実施例Ｈにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図３９−１】図３９−１は、実施例Ｉにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３９−２】図３９−２は、実施例Ｉにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図４０−１】図４０−１は、実施例Ｊにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図４０−２】図４０−２は、実施例Ｊにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図４１−１】図４１−１は、実施例Ｋにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図４１−２】図４１−２は、実施例Ｋにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図４２】図４２は、実施例Ｌにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図４３】図４３は、実施例Ｍにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩固体の粉末Ｘ線回折図である。
【図４４】図４４は、実施例Ｎにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図４５】図４５は、実施例Ｏにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図４６】図４６は、実施例Ｐにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図４７】図４７は、実施例Ｑにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
【００５３】
（２Ｓ）体モナティン（モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｓ，４Ｒ）体の混合物）、（２Ｒ）体モナティン（モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体と（２Ｒ，４Ｓ）体の混合物）及び４種立体異性体の混合物については、前述のK. Nakamura等の方法に従って合成することができ、これより各立体異性体を分離することができるが、各種の立体異性体を含むモナティンの合成法としては、別の方法を採用することもでき、前記K. Nakamura等の方法に限るものではない。
【００５４】
以下、各種の立体異性体を含むモナティンから各立体異性体を分離精製する場合の例を簡単に説明する。これらは例として説明されるものであり、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
【００５５】
K. Nakamura等の方法に従って合成した（２Ｓ）体モナティン及び（２Ｒ）体モナティンの立体異性体については、逆相ＨＰＬＣで分離、分取することができるが、モナティンの立体異性体の分割法としては、これに限るものではない。
【００５６】
既報告の方法等に従って合成した４種の立体異性体を分離して各立体異性体を得ることも可能である。例えば、モナティンの４種立体異性体を塩として或いは誘導体として晶析を行う方法や、誘導体を光学異性体分離カラムで分離し、得られた異性体を再びモナティンに戻す方法を用いることができるが、立体異性体の分割法はこれらに限られるものではない。
【００５７】
本発明の結晶を構成する成分は前記モナティン塩であるが、前記の如く、そのラクトン誘導体やラクタム誘導体等、別の形態で使用することもできる。例えば、当該モナティンの塩において分子内で環化したラクトン又はラクタム誘導体を形成するには、分子内で環化したラクトン又はラクタムを形成する方法として知られている方法を利用して行うことができる。また、官能基の少なくとも一つが保護された誘導体を形成する場合にも、官能基保護法として知られている方法を利用して行うことができる。
【００５８】
得られた各立体異性体結晶の光学純度を、光学活性カラムＨＰＬＣ法で決定することができるが、光学純度の決定法はこれに限られるものではない。
【００５９】
得られた各立体異性体結晶の甘味強度（甘味度）を５％ショ糖水溶液と比較して決定することができるが、甘味強度の決定法としてはこれに限るものではない。
【００６０】
次に、各立体異性体の構造と甘味強度、或いは光学純度との関係を表１及び２に示す。表１にはＨＰＬＣで分取し、イオン交換樹脂で精製し、アンモニウム塩として凍結乾燥した試料について、表２にはナトリウム塩として結晶化精製した試料について、それぞれの評価結果を示す。
【００６１】
【表１】
【００６２】
【表２】
【００６３】
表２に示したように、天然に存在する（天然型）モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の甘味強度は約５０倍と従来の報告より低い値であることが分かる。興味深いことに、モナティンの他の３種の立体異性体全てがモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）以上の甘味強度を示し、特にモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体は約２７００倍と最も強い甘味強度を示した。
【００６４】
クロマトグラフィー等により分離したり、合成法等によって得た各種立体異性体から、更に晶析法により各立体異性体の塩を高純度に結晶として分離することができる。
【００６５】
前記表１と表２に示した評価結果の比較から、（２Ｒ）体については結晶化によって光学純度を含めた純度が高くなっており、塩の結晶とすることの有用性が示されている。
【００６６】
尚、本発明の非天然型立体異性体塩（水和物、溶媒和物等含む。）の結晶（当該立体異性体には分子内で環化したラクトン又はラクタムの形態、含まれる官能基の少なくとも一つが保護された形態等を含む。）を甘味剤として使用する場合、特別の支障が無い限り、他の甘味剤と併用してもよいことは勿論である。
【００６７】
本発明の立体異性体塩（水和物、溶媒和物等含む。）の結晶を甘味剤として使用する場合、必要により担体及び／又は増量剤を使用してもよく、例えば従来から知られ、又は使用されている甘味剤用の担体、増量剤等を使用することができる。
【００６８】
本発明の立体異性体塩（水和物、溶媒和物等含む。）の結晶を甘味剤又は甘味剤成分として使用することができるが、更に甘味の付与を必要とする飲食品等の製品、例えば菓子、チューインガム、衛生製品、化粧品、薬品及びヒト以外の動物用製品等の各種製品の中に甘味剤や甘味成分として、当該結晶を含有せしめて使用することができる。更に、本発明の非天然型立体異性体塩結晶を含有又は使用し甘味が付与された製品の形態として、また甘味の付与を必要とする当該製品に対する甘味付与方法における甘味付与成分として、本発明の非天然型立体異性体塩の結晶を使用することができ、その使用方法等については、甘味剤の使用方法として慣用されている従来法その他公知の方法に従うことができる。
【００６９】
好適な実施の形態
以下、実施例及び比較例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００７０】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルについては、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ４００（４００ＭＨｚ）により、ＭＳスペクトルについては、Ｔｈｅｒｍｏ Ｑｕｅｓｔ ＴＳＱ７００により、それぞれ測定した。陽イオン交換樹脂として、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ ＩＲ１２０Ｂ Ｈ ＡＧ 及びＤＩＡＩＯＮ ＰＫ２２８を使用した。粉末Ｘ線解析については、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ社製 ＰＷ３０５０で測定した。融点については、Ｙａｎａｃｏ社 ＭＩＣＲＯ ＭＥＬＴＩＮＧ ＰＯＩＮＴ ＡＰＰＡＲＡＴＵＳで測定した。旋光度については、日本分光社製（ＪＡＳＣＯ ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ社）ＤＩＰ−３７０ Ｄｅｇｉｔａｌ Ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒで測定した。
【００７１】
［実施例１］
K. Nakamura等の方法（K. Nakamura et. al., Organic Letters, 2, 2967-2970 (2000)参照。）に従ってモナティンの合成を行い、最後に陽イオン交換樹脂（Ｈ＋型）に吸着、３％アンモニア水での溶出、及び凍結乾燥による精製を行い、（２Ｓ）体モナティンのアンモニウム塩（モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｓ，４Ｒ）体の混合物）２．９２ｇと（２Ｒ）体モナティンのアンモニウム塩（モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体と（２Ｒ，４Ｓ）体の混合物）７１１ｍｇを得た。
【００７２】
以下の分取条件で（２Ｓ）体モナティン６６０ｍｇと（２Ｒ）体モナティン７１１ｍｇからそれぞれを分割し、モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体２０７ｍｇ、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体２３３ｍｇ、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体２６１ｍｇ及びモナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体２５４ｍｇを、アンモニウム塩の形態でアモルファス固体として得た。
【００７３】
（分取条件）
ガードカラム：Inertsil ODS-3 30x50mm；
カラム ：Inertsil ODS-3 30x250mm；
検出 ：UV 210nm；
溶離液 ：<Ａ> アセトニトリル 0.05%TFA <Ｂ> Ｈ２Ｏ 0.05%TFA；
流速 ：28ml/min；
グラジエント：25minで<Ａ>12%から18%；
負荷量 ：10〜13mg；及び
作業温度 ：２５℃。
【００７４】
（分取後の処理）
分取画分をアンモニア水で中和し、濃縮した。分取画分を合わせて濃縮した後、陽イオン交換樹脂（AMBERLITE IR120B H AGのH+型）に吸着させた。５％アンモニア水で溶出し、溶出画分を凍結乾燥した。
【００７５】
次に示す分析条件で各立体異性体の光学純度（エナンチオマー純度）を検定した。
（分析条件）
カラム：CROWNPAK CR(+) 4x150mm；
検出 ：UV 210nm；
溶離液：過塩素酸水（pH2.0）／メタノール＝９０／１０；
流速 ：1.2ml/min；及び
分析温度：25℃。
【００７６】
各立体異性体の光学純度は以下の通りであった。( )内には各ピークの溶出時間を示す。
モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体：９４％（45.0min）；
モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体：９４％（26.1min）；
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体：９４％（20.9min）；及び
モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体：９６％（16.1min）。
【００７７】
それぞれの立体異性体に含まれる不純物の主なものは、それぞれの鏡像体であった。例えば、モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体には少量のモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体が含まれていた。
【００７８】
得られた各立体異性体の甘味強度を以下の方法で測定した。
【００７９】
各立体異性体の０．０５％水溶液を調製し、これを適宜希釈して、所定の濃度の試料水溶液を調製した。別途、ショ糖の５％水溶液を調製し標準液とした。希釈した試料の水溶液と標準のショ糖水溶液を交互に味わい、それらの甘味強度が同等であると感じた時の試料濃度から甘味倍率を求めた。この評価は７人のパネリストによって行った。
【００８０】
各立体異性体の甘味強度は以下のように決定された。
モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体：約３００倍；
モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体：約３００倍；
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体：約２０００倍；及び
モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体：約８００倍。
【００８１】
各立体異性体の旋光度（［α］Ｄ２５（c=0.5））を測定した結果は以下の通りであった。
モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体：-44.1（H2O）、-7.5（3%アンモニア水）；
モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体：-7.8（H2O）；
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体：+3.7（H2O）、 +8.7（3%アンモニア水）；及び
モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体：+11.1（H2O）。
【００８２】
各立体異性体の１H-NMRは以下の通りであった（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）。
モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体及び（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩：
１．９６（１Ｈ, ｄｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ），２．５７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ=１．９Ｈｚ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ），３．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ），３．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ），３．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ），７．０４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．１０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．１０（１Ｈ，ｓ），７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）。
【００８３】
モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体アンモニウム塩：
２．１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ），２．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），３．１３（２Ｈ，ｓ），３．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），７．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．１４（２Ｈ，ｓ），７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．６３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ）。
【００８４】
各立体異性体のＭＳスペクトルは以下の通りであった。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１（Ｍ−Ｈ）−。
【００８５】
［実施例２］
［モナティン４種立体異性体混合物のアンモニウム塩の（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｒ，４Ｒ）体とのラセミ体結晶及び（２Ｓ，４Ｒ）体と（２Ｒ，４Ｓ）体とのラセミ体結晶への分割］
モナティンの立体（光学）異性体混合物（モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体：モナティン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体＝６：４）のアンモニウム塩１０．００ｇ（３２．３３ミリモル）を、２．５％アンモニア水１００ｍｌに溶解し、得られた溶液を２０ｍｌになるまで濃縮した。新たに、５％アンモニア水３ｍｌを加え均一にした後、室温にて３０分静置した。結晶析出後、５％アンモニア水／エタノール＝２５／７５の水溶液８０ｍｌを加えてスラリー状にし、モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩の結晶を濾取した。得られた結晶を再び２．５％アンモニア水３０ｍｌに溶解し濃縮した後、５％アンモニア水０．５ｍｌとエタノール３０ｍｌにて再結晶し、モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩結晶 ４．８０ｇ（１５．５２ミリモル，逆相HPLC純度（以下、「HPLC純度」と称する。）：９８．０％）を得た。
【００８６】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：１．９５−２．０２（ｍ，１Ｈ），２．５８−２．６２（ｍ，１Ｈ），３．０１−３．０５（ｍ，１Ｈ），３．２１−３．２４（ｍ，１Ｈ），３．５５−３．５８（ｍ，１Ｈ），７．０７−７．１１（ｍ，１Ｈ），７．１４−７．１８（ｍ，２Ｈ），７．４２−７．４４（ｄ，１Ｈ），７．６６−７．６８（ｄ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．３９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：１８２〜１８６℃。
甘味度：約１３００倍（５％ショ糖水溶液と比較）。
【００８７】
図１７には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【００８８】
図１８には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。６．０°、１２．１°、１５．２°、１８．６°、２１．３°、２３．２°及び２５．０°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【００８９】
前述の操作で得た濾液（モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体：モナティン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体＝３：１０）を５ｍｌになるまで濃縮した。新たに、５％アンモニア水３ｍｌを加えて均一にした後、室温にて１０分静置した。結晶析出後、エタノール８０ｍｌを加えてスラリー状にし、モナティン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］アンモニウム塩の結晶を濾取した。得られた結晶を再び２．５％アンモニア水３０ｍｌに溶解し濃縮した後、５％アンモニア水０．５ｍｌとエタノール３０ｍｌによる再結晶を３回行い、モナティン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体アンモニウム塩結晶３．１０ｇ（１０．０２ミリモル，HPLC純度９８．２％）を得た。総回収率は７９．０％であった。
【００９０】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：２．１１−２．１７（ｍ，１Ｈ），２．３８−２．４３（ｍ，１Ｈ），３．１６（ｓ，２Ｈ），３．９０−３．９３（ｍ，１Ｈ），７．０６−７．１０（ｍ，１Ｈ），７．１３−７．１７（ｍ，２Ｈ），７．４１−７．４３（ｄ，１Ｈ），７．６６−７．６８（ｄ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．１９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：１６７．２〜１６８．４℃。
甘味度：約８００倍（５％ショ糖水溶液と比較）。
【００９１】
図１９には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【００９２】
図２０には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。５．４°、１０．２°、１９．７°、２１．０°及び２１．８°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【００９３】
［実施例３］
［モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｒ，４Ｒ）体とのラセミ体のナトリウム塩結晶の調製］
モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩１．００ｇ（３．２３ミリモル，HPLC純度１００％）を水１０ｍｌに溶解し、これに水酸化ナトリウム水溶液（２０当量）を加えて濃縮した。水２０ｍｌを加えて濃縮する操作を３回繰り返した後、再び水２０ｍｌに溶解し、イオン交換樹脂（ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ ＩＲ１２０Ｂ Ｈ ＡＧ（Ｈ＋））を溶液が弱アルカリ性になるまで加えて攪拌し、過剰のナトリウムを除去した。樹脂を濾取した後、濾液を減圧下に濃縮した。室温下に、９５％エタノール水溶液にて結晶化して、モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体ナトリウム塩結晶・０．０５エタノール和物 ０．６８０ｇ（２．１４ミリモル）を、収率６６．３％で得た。
【００９４】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：実施例２と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．１９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：２０１．７〜２０３．２℃。
【００９５】
図２１には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【００９６】
図２２には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。４．４°、１３．６°、１５．２°、１６．７°、２２．２°及び２４．４°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【００９７】
［実施例４］
［モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｒ，４Ｒ）体とのラセミ体のカリウム塩結晶の調製］
水酸化ナトリウム水溶液の替わりに、水酸化カリウム水溶液を用いること以外は実施例３と同様にして、モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体カリウム塩結晶・０．０５エタノール和物０．７１ｇ（２．１３ミリモル）を、収率６５．９％で得た。
【００９８】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：実施例２と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．４９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：２２３．８〜２２４．７℃。
【００９９】
図２３には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体カリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１００】
図２４には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。５．９°、１８．７°、２０．１°及び２３．８°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１０１】
［実施例５］
［モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｒ，４Ｒ）体とのラセミ体Ｚ−ラクトン（2-Benzyloxycarbonylamino-4-(3-indolylmethyl)-4-carboxy-γ-butyrolactone）の調製］
モナティン ［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩１９．５１ｇ（６３．０７ミリモル，HPLC純度：９９．２％）を、２Ｎ-水酸化ナトリウム水溶液９４．６ｍｌ（１８９．２ミリモル）と水９０ｍｌに溶解した。ベンジルオキシカルボニルクロライド１２．６１ｍｌ（８８．３０ミリモル）を加えて室温で２時間攪拌後、更に２Ｎ-水酸化ナトリウム水溶液１５．８ｍｌ（３１．５４ミリモル）とベンジルオキシカルボニルクロライド４．５０ｍｌ（３１．５４ミリモル）を加えて、室温にて１夜攪拌した。得られた反応水溶液は、エーテル５０ｍｌでの抽出操作を３回行い、過剰なベンジルオキシカルボニルクロライドを除去した。反応液を塩酸にてｐＨ３に調整し、酢酸エチル１００ｍｌで３回抽出操作を行った後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。硫酸マグネシウムを濾過して除き、濾液を減圧下に濃縮して、Ｚ−モナティン（2-Benzyloxycarbonylamino-4-hydroxy-4-carboxy-5-(3-indolyl)pentanoic acid）［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体２７．９３ｇ（６５．５０ミリモル）を得た。Ｚ−モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体２７．９３ｇ（６５．５０ミリモル）を酢酸エチル４００ｍｌに溶解し、ｐ-トルエンスルホン酸１．２５ｇ（６．５５ミリモル）を加えて７５℃で３時間加熱した。得られた反応液を水と飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。硫酸マグネシウムを濾過して除き、濾液を減圧下に濃縮した。残渣にクロロホルム１００ｍｌを加えて析出した結晶を濾過して集め、Ｚ-ラクトン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体１７．６４ｇ（４３．１９ミリモル，HPLC純度：９９．６％）を総収率６８．５％で得た。
【０１０２】
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．３６−２．４２（ｍ，１Ｈ），２．６４−２．７０（ｍ，１Ｈ），３．２４−３．４１（ｍ，２Ｈ），３．７１−３．８１（ｍ，１Ｈ），４．９８（ｓ，２Ｈ），６．９７−７．００（ｍ，１Ｈ），７．０４−７．０９（ｍ，１Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），７．３０−７．３３（ｍ，５Ｈ），７．５４−７．５６（ｄ，１Ｈ），７．６６−７．６９（ｄ，１Ｈ），１１．０３（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：４０９．６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
融点：１９５．５〜１９６．９℃。
【０１０３】
［実施例６］
［モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体と（２Ｒ，４Ｓ）体とのラセミ体Ｚ−ラクトン（2-Benzyloxycarbonylamino-4-(3-indolylmethyl)-4-carboxy-γ-butyrolactone）の調製］
モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩の替わりに、モナティン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体アンモニウム塩１５．００ｇ（４８．４９ミリモル，HPLC純度：９９．５％）を使用し、ｐ-トルエンスルホン酸を加えて７５℃で２時間加熱する以外は実施例５と同様にして、Ｚ−ラクトン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体１２．１０ｇ（２９．６４ミリモル，HPLC純度１００％）を総収率６１．１％で得た。
【０１０４】
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．３１−２．３７（ｍ，１Ｈ），２．７１−２．７６（ｍ，１Ｈ），３．１９−３．２３（ｍ，１Ｈ），３．４３−３．４７（ｍ，１Ｈ），４．３４−４．４１（ｍ，１Ｈ），５．０５（ｓ，１Ｈ），６．９６−７．００（ｍ，１Ｈ），７．０４−７．０８（ｍ，１Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），７．３２−７．３７（ｍ，５Ｈ），７．５３−７．５５（ｄ，１Ｈ），７．８５−７．８７（ｄ，１Ｈ），１０．９５（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：４０９．５８（Ｍ＋Ｈ）＋。
融点：１５６．７〜１５９．１℃。
【０１０５】
［実施例７］
［Ｚ-ラクトン（２Ｓ，４Ｓ）体とＺ-ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体との分割］
Ｚ-ラクトン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体１．１７ｇ（２．８６ミリモル，HPLC純度：９９．７％）から、光学異性体分割カラムにて分割を行った。このとき、ガードカラムにCHIRALPAK AS ２０×５０ｍｍ、分取カラムにCHIRALPAK AS ２０×２５０ｍｍを使用した。溶離液：ヘキサン／エタノール／酢酸＝４０／６０／０．５、流速：１０ｍｌ／分、検出：UV２１０ｎｍ、温度：４０℃、負荷量：２５ｍｇで分取した。溶出時間については、それぞれＺ-ラクトン（２Ｓ，４Ｓ）体が１３分、Ｚ-ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体が２３分であった。分取画分をそれぞれ濃縮後、酢酸エチル５０ｍｌに溶解し再び濃縮した。残渣をクロロホルム３０ｍｌで結晶化し、Ｚ-ラクトン（２Ｓ，４Ｓ）体４２８ｍｇ（１．０５ミリモル）、及びＺ-ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体３９９ｍｇ（０．９７７ミリモル）を得た（総回収率：７０．７％）。
【０１０６】
（Ｚ-ラクトン（２Ｓ，４Ｓ）体）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：実施例５と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：４０９．６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
融点：１７９．８〜１８２．０℃。
【０１０７】
（Ｚ-ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：実施例５と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：４０９．８８（Ｍ＋Ｈ）＋。
融点：１７９．２〜１８２．８℃。
【０１０８】
［実施例８］
［Ｚ-ラクトン（２Ｓ，４Ｒ）体とＺ-ラクトン（２Ｒ，４Ｓ）体との分割］
Ｚ-ラクトン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体９．８９ｇ（２４．２２ミリモル，HPLC純度：１００％）から、光学異性体分割カラムにて分割を行った。このとき、ガードカラムにCHIRALCEL OJ ２０×５０ｍｍ、分取カラムにCHIRALCEL OJ ２０×２５０ｍｍを使用した。溶離液：ヘキサン／エタノール／トリフルオロ酢酸＝４０／６０／０．１、流速：８ｍｌ／分、検出：UV２１０ｎｍ、温度：４０℃、負荷量：５０ｍｇで分取した。溶出時間については、それぞれＺ-ラクトン（２Ｒ，４Ｓ）体が１６分、Ｚ-ラクトン（２Ｓ，４Ｒ）体が２１分であった。分取画分をそれぞれアンモニア水で中和後に濃縮した。酢酸エチル１５０ｍｌに溶解し、ｐＨ３に調整した塩酸水溶液にて洗浄後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。硫酸マグネシウムを濾過して除き、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をヘキサン１００ｍｌで結晶化し、Ｚ-ラクトン（２Ｒ，４Ｓ）体・０．２酢酸エチル和物４．８８ｇ（１１．４５ミリモル，HPLC純度：９７．３％）、及びＺ-ラクトン（２Ｓ，４Ｒ）体・０．２酢酸エチル和物５．４１ｇ（１２．７０ミリモル，HPLC純度：９６．９％）を得た（総回収率：９９．７％）。
【０１０９】
（Ｚ-ラクトン（２Ｒ，４Ｓ）体・０．２酢酸エチル和物）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．２１−２．２８（ｍ，１Ｈ），２．６４−２．７０（ｍ，１Ｈ），３．１８−３．２２（ｍ，１Ｈ），３．４０−３．４４（ｍ，１Ｈ），４．４２−４．４５（ｍ，１Ｈ），５．０４（ｓ，２Ｈ），６．９５−７．００（ｍ，１Ｈ），７．０３−７．０７（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），７．３２−７．３５（ｍ，５Ｈ），７．５２−７．５５（ｄ，１Ｈ），７．８０−７．８２（ｄ，１Ｈ），１０．９２（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：４０９．５８（Ｍ＋Ｈ）＋。
融点：１０９．１〜１１０．８℃。
【０１１０】
（Ｚ-ラクトン（２Ｓ，４Ｒ）体・０．２酢酸エチル和物）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：上記（２Ｒ，４Ｓ）体と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：４０９．５８（Ｍ＋Ｈ）＋。
融点：１１６．１〜１１６．８℃。
【０１１１】
［実施例９］
［Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体のモナティン（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶への変換（ナトリウム塩結晶の調製その１）］
Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体１４．２４ｇ（３４．８５ミリモル，HPLC純度：９９．５％）をメタノール４００ｍｌ、水４０ｍｌに溶解し、１０％パラジウム−炭素３ｇを加え、水素雰囲気下に室温で２時間還元した。還元後、水１００ｍｌと４Ｎ-水酸化ナトリウム水溶液１９．２ｍｌ（７６．６７ミリモル）を加えてしばらく攪拌した後、触媒を濾過により除去して濾液を濃縮した。残渣を水１６０ｍｌに溶解後、イオン交換樹脂 AMBERLITE IR120B H AG（H＋）を溶液が弱酸性になるまで少量ずつ加えて過剰なナトリウムを除去した。２８％アンモニア水３４．８ｍｌを加え、イオン交換樹脂を濾過して除いた。このイオン交換樹脂を５％アンモニア水で洗い、濾液を合わせて濃縮した。濃縮した残渣を水１００ｍｌに溶解し、この溶液に活性炭１ｇを加えて1０分間攪拌した。活性炭を濾過して除き、濾液を濃縮後、これに、室温で９０％エタノール水溶液を加えて結晶化し、モナティン（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶・０．２エタノール和物６．５５ｇ（２０．１９ミリモル、光学活性カラムHPLC純度：９９．３％）を、総収率５７．９％で得た。
【０１１２】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：１．９５−２．０２（ｍ，１Ｈ），２．５８−２．６２（ｍ，１Ｈ），３．０１−３．０５（ｍ，１Ｈ），３．２１−３．２４（ｍ，１Ｈ），３．５５−３．５８（ｍ，１Ｈ），７．０７−７．１１（ｍ，１Ｈ），７．１４−７．１８（ｍ，２Ｈ），７．４２−７．４４（ｄ，１Ｈ），７．６６−７．６８（ｄ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．４９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：１９７．１〜１９８．３℃。
比旋光度（５％ＮＨ３水、Ｃ＝０．５）：[α]Ｄ２５＝＋０．６４。
甘味度：約２７００倍（５％ショ糖水溶液との比較）。
【０１１３】
［実施例１０］
［Ｚ−ラクトン（２Ｓ，４Ｓ）体のモナティン（２Ｓ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶への変換］
Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体の替わりに、Ｚ−ラクトン（２Ｓ，４Ｓ）体５．００ｇ（１２．２５ミリモル，HPLC純度：９９．８％）を使用し、水素雰囲気下、室温で１時間還元する以外は実施例９と同様にして、モナティン（２Ｓ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶・０．２エタノール和物３．１５ｇ（９．７１ミリモル，光学活性カラムHPLC純度：９９．８％）を、総収率７９．３％で得た。
【０１１４】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ））δ：実施例９と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．５９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：１９６．１〜１９７．９℃。
比旋光度（５％ＮＨ３水、Ｃ＝０．５）：[α]Ｄ２５＝−１．６７。
甘味度：約５０倍（５％ショ糖水溶液との比較）。
【０１１５】
［実施例１１］
［Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｓ）体のモナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶への変換］
Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体の替わりに、Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｓ）体・０．２酢酸エチル和物 ３．６６ｇ（８．５９ミリモル，HPLC純度：９７．３％）を使用し、水素雰囲気下に室温で１時間還元すること以外は実施例９と同様にして、モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶２．２３ｇ（７．０７ミリモル，光学活性カラムHPLC純度：９９．２％）を、総収率８２．３％で得た。
【０１１６】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：２．１１−２．１７（ｍ，１Ｈ），２．３８−２．４３（ｍ，１Ｈ），３．１６（ｓ，２Ｈ），３．９０−３．９３（ｍ，１Ｈ），７．０６−７．１０（ｍ，１Ｈ），７．１３−７．１７（ｍ，２Ｈ），７．４１−７．４３（ｄ，１Ｈ），７．６６−７．６８（ｄ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．１９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：２２７．５〜２２９．２℃。
比旋光度（５％ＮＨ３水、Ｃ＝０．５）：[α]Ｄ２５＝＋１１．０８。
甘味度：約１３００倍（５％ショ糖水溶液との比較）。
【０１１７】
図２５には、モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１１８】
図２６には、モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。４．４°、１３．７°、１６．６°、１７．９°、１８．６°、２０．２°及び２２．６°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１１９】
［実施例１２］
［Ｚ−ラクトン（２Ｓ，４Ｒ）体のモナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶への変換］
Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体の替わりに、Ｚ−ラクトン（２Ｓ，４Ｒ）体・０．２酢酸エチル和物 ５．２３ｇ（１２．２８ミリモル，HPLC純度：９６．９％）を使用し、水素雰囲気下に室温で１時間還元し、９０％エタノール水溶液による再結晶を２回行った以外は実施例９と同様にして、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶２．５７ｇ（８．１４ミリモル，光学活性カラムHPLC純度：９９．４％）を、総収率６６．３％で得た。
【０１２０】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：実施例１１と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．４９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：２２７．１〜２２９．４℃。
比旋光度（５％ＮＨ３水、Ｃ＝０．５）：[α]Ｄ２５＝−９．５７。
甘味度：約３００倍（５％ショ糖水溶液との比較）。
【０１２１】
図２７には、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１２２】
図２８には、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。４．４°、１３．７°、１６．６°、１７．９°、１８．６°、２０．２°及び２２．６°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１２３】
［実施例１３］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製（その１）］
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩１．５ｇを水１０ｍｌに溶解し、２５ｍｌの陽イオン交換樹脂 DIAION PK228（カリウム型、三菱化学製）を充填したカラムに通液して所望のイオンに交換した後、溶出液を１１．５ｇまで濃縮した。得られた濃縮液を６０℃まで加熱しエタノール６０ｍｌを添加した。このエタノール水溶液を１０℃まで５℃/Hrで冷却した後、１０℃で一晩攪拌した。得られた晶析液から結晶を分離した後、湿結晶を減圧乾燥器にて乾燥して、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶１．１ｇを得た。
【０１２４】
融点：２１３．３〜２１４．７℃。
【０１２５】
図１には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１２６】
図２には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１２７】
図３には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、６．６°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１３．９°、１７．２°、１８．３°、２０．６°、２２．９°、２４．５°及び２６．３°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１２８】
［実施例１４］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の調製（その２）］
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩１．５ｇを水１０ｍｌに溶解し、25ｍｌの陽イオン交換樹脂 DIAION PK228（Na型、三菱化学製）を充填したカラムに通液して所望のイオンに交換した後、溶出液を１１．５ｇまで濃縮した。得られた濃縮液を６０℃まで加熱しエタノール６０ｍｌを添加した。このエタノール水溶液を１０℃まで５℃/Hrで冷却した後、１０℃で一晩攪拌した。得られた晶析液から結晶を分離した後、湿結晶を減圧乾燥器にて乾燥して、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶０．２エタノール和物１．２ｇを得た。
【０１２９】
融点：１９３．５〜１９５．１℃。
【０１３０】
図４には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１３１】
図５には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１３２】
図６には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。４．４°、１５．３°、１７．５°、１９．１°及び２４．６°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１３３】
［実施例１５］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の調製］
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩１．５ｇを水１０ｍｌに溶解した。この溶解液を６０℃まで加熱しエタノール６０ｍｌを添加した。このエタノール水溶液を１０℃まで５℃/Hrで冷却した後、１０℃で一晩攪拌した。得られた晶析液から結晶を分離した後、湿結晶を減圧乾燥器にて乾燥して、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）アンモニウム塩結晶０．７７ｇを得た。
【０１３４】
融点：１７２．１〜１７２．８℃。
【０１３５】
図７には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１３６】
図８には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１３７】
図９には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。６．１°、１１．６°、１８．１°、１９．６°及び２５．０°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１３８】
［比較例１］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の調製］
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩０．５ｇを５０％酢酸水溶液１０ｍｌに溶解後、２５℃にてエタノール２５ｍｌを１時間かけて添加した。更に、２５℃で４．５時間攪拌した。得られた晶析液から結晶を分離した後、湿結晶を減圧乾燥器にて乾燥して、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶０．３８ｇを得た。
【０１３９】
融点：１７５．２〜１７６．１℃。
【０１４０】
図１０には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１４１】
図１１には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１４２】
図１２には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。５．９°、１７．９°、１９．２°、２３．９°及び２７．８°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１４３】
［比較例２］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩アモルファス固体の調製］
実施例１３に従って製造したモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩１．０ｇを水１０ｍｌに溶解し、凍結乾燥を行い（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩アモルファス固体０．９７ｇを得た。
【０１４４】
融点：１８３．２〜１８４．８℃。
【０１４５】
図１３には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩アモルファス固体の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１４６】
図１４には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩アモルファス固体の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。この図から明らかな如く、この固体はアモルファスであった。
【０１４７】
［実施例１６］
［結晶の熱安定性の比較］
上記の方法により得られた結晶或いはアモルファス固体５０ｍｇをそれぞれ４ｍｌのバイアル瓶に入れ、温度１２０℃で保存（保持）した。このとき、バイアル瓶は開放した状態とした。保持時間として３時間、７時間、及び２４時間後に、それぞれサンプル２ｍｇを抜き取り、HPLC（高速液体クロマトグラフィー）で分解物の割合（比率）を求めた。このときの保持時間と分解物の割合の関係を下記表３及び表４に示す。
【０１４８】
【表３】
【０１４９】
【表４】
【０１５０】
上記表の結果から、分解物A及びBの生成はカリウム塩が最も少なく、他の結晶に比べて格段に安定性が優れていることが分かる。分解物Bについては、遊離体結晶やアモルファス固体に比べて各種塩の結晶においてその生成が少ないことから、これらの塩の結晶が安定性において優れていることが分かる。
【０１５１】
［実施例１７］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製（その２）］
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩１０ｇを水２０ｍｌに溶解し、５０ｍｌの陽イオン交換樹脂 DIAION PK228（カリウム型、三菱化学製）を充填したカラムに通液して所望のイオンに交換した後、溶出液を２３．４８ｇまで濃縮した。得られた濃縮液を３５℃まで加熱しエタノール８４ｍｌ約3時間かけて滴下した。このエタノール水溶液を１０℃まで５℃/Hrで冷却した後、１０℃で一晩攪拌した。得られた晶析液から結晶を分離した後、湿結晶を減圧乾燥器にて乾燥して、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶９．３ｇを得た。
【０１５２】
融点：２２０．０〜２２２．３℃。
【０１５３】
図１５には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、１１．５°、１２．２°、１８．３°、２０．６°及び２４．５°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１５４】
［実施例１８］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製（その３）］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶１．５ｇを水１０ｍｌに溶解した後、溶解液を１０℃まで冷却しエタノール６０ｍｌを約２．５時間かけて滴下した。このエタノール水溶液を１０℃で一晩攪拌した。得られた晶析液から結晶を分離した後、湿結晶を減圧乾燥器にて乾燥して、（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶１．２ｇを得た。
【０１５５】
融点：２１３．２〜２１５．６℃。
【０１５６】
図１６には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．６°、１１．５°、１１．８°、１７．２°、２２．９°及び２３．１°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１５７】
［実施例１９］
［結晶の水蒸気吸着脱着曲線］
上記の方法により得られたモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶（１０℃、３５℃、６０℃で起晶）それぞれの水蒸気吸着脱着（吸脱着）曲線を求めた。この測定値を図２９に示す。測定条件は以下の通りである。
【０１５８】
装置 ：日本ベル株式会社製 自動蒸気吸着量測定装置BELSORP18
測定方式 ：定容量式ガス吸着法
測定条件 ：
吸着ガス ：Ｈ２Ｏ
空気恒温槽温度 ：３２３Ｋ
吸着温度 ：２９８Ｋ
初期導入圧力 ：１．０torr
導入圧力差 ：０torr
飽和蒸気圧 ：２３．７６torr
吸着断面積 ：０．１２５nm2
最大吸着圧 ：０．９０
最小吸着圧 ：０．１０
平衡時間 ：３００sec
【０１５９】
［実施例２０］
実施例１４で得られたモナティンの（２Ｒ, ４Ｒ）体ナトリウム塩を、温度４０℃及び湿度７５％の恒温恒湿機中で２日間保存することにより結晶中のエタノールが消失した結晶が得られた。
【０１６０】
図３０には、得られた結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。４．４°、１５．２°、１７．８°、２０．６°及び２４．１°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１６１】
［実施例Ａ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶４００ｍｇを水２．５ｍｌに溶解した後、溶解液を４０℃まで加熱し、撹拌下でメタノール１５ｍｌをゆっくり滴下した。このメタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶１．０３ｇを得た。
【０１６２】
図３１には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１６３】
［実施例Ｂ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
メタノールの替わりに、エタノールを用いること以外は実施例Ａと同様にして、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．３８ｇ（水分：５．９７％）を得た。
【０１６４】
図３２には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１７．２°、１８．３°、２０．６°、２３．１°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１６５】
［実施例Ｃ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
メタノールの替わりに、イソプロピルアルコールを用いること以外は実施例Ａと同様にして、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．３８ｇ（水分：９．８５％）を得た。
【０１６６】
図３３には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１６７】
［実施例Ｄ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
メタノールの替わりに、アセトンを用いること以外は実施例Ａと同様にして、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．３０ｇ（水分：１０．６４％）を得た。
【０１６８】
図３４には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１６９】
［実施例Ｅ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶４００ｍｇを水５ｍｌに溶解した後、溶解液を３５℃まで加熱し、撹拌下でエタノール３０ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．２８ｇ（水分：９．７５％）を得た。
【０１７０】
図３５には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１７１】
［実施例Ｆ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶４００ｍｇを水１．７ｍｌに溶解した後、溶解液を３５℃まで加熱し、撹拌下でエタノール１０ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．３８ｇ（水分：９．４５％）を得た。
【０１７２】
図３６には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１７３】
［実施例Ｇ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶４００ｍｇを水１．２５ｍｌに溶解した後、溶解液を３５℃まで加熱し、撹拌下でエタノール７．５ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．４２ｇ（水分：９．６７％）を得た。
【０１７４】
図３７には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１７５】
［実施例Ｈ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶４７５ｍｇを水５ｍｌに溶解した後、溶解液を１０℃まで冷却し、撹拌下でエタノール３０ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．３６ｇ（水分：８．２６％）を得た。
【０１７６】
図３８−１には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１７．２°、１８．３°、２０．６°、２３．１°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１７７】
この結晶を６０℃で減圧乾燥し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：２．１１％）を得た。
図３８−２には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。６．１°、６．６°、１２．２°、１３．９°、１８．３°、２０．６°、２２．９°、２４．５°及び２６．３°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１７８】
［実施例Ｉ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶４００ｍｇを水２．５ｍｌに溶解した後、溶解液を２５℃まで加熱し、撹拌下でエタノール１５ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．４０ｇ（水分：１０．３９％）を得た。
【０１７９】
図３９−１には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１７．２°、１８．３°、２０．６°、２３．１°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１８０】
この結晶を６０℃で減圧乾燥し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：１．６９％）を得た。
【０１８１】
図３９−２には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、６．６°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１３．９°、１８．３°、２０．６°、２２．９°、２４．５°及び２６．３°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１８２】
［実施例Ｊ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶２１３ｍｇを水１．２５ｍｌに溶解した後、溶解液を４０℃まで加熱し、撹拌下でエタノール７．５ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．１９ｇ（水分：６．４３％）を得た。
【０１８３】
図４０−１には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１７．２°、１８．３°、２０．６°、２３．１°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１８４】
この結晶を６０℃で減圧乾燥し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：５．４３％）を得た。
【０１８５】
図４０−２には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。６．１°、６．６°、１１．５°、１２．２°、１３．９°、１８．３°、２０．６°、２２．９°、２４．５°及び２６．３°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１８６】
［実施例Ｋ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶２１７ｍｇを水１．２５ｍｌに溶解した後、溶解液を６０℃まで加熱し、撹拌下でエタノール７．５ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．２０ｇ（水分：７．２５％）を得た。
【０１８７】
図４１−１には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１７．２°、１８．３°、２０．６°、２３．１°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１８８】
この結晶を６０℃で減圧乾燥し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：４．７９％）を得た。
【０１８９】
図４１−２には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。６．１°、６．６°、１１．５°、１２．２°、１３．９°、１８．３°、２０．６°、２２．９°、２４．５°及び２６．３°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１９０】
［実施例Ｌ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体アンモニウム塩４２０ｍｇをメタノール２５ｍｌに４５℃で溶解した後、撹拌下で２０ｗｔ％水酸化カリウム／メタノール溶液０．３ｍｌをゆっくり滴下した。このメタノール溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．２２ｇ（水分：５．６４％）を得た。
【０１９１】
図４２には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、６．６°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１３．９°、１７．２°、１８．３°、２２．９°、２３．１°及び２６．３°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１９２】
［実施例Ｍ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
メタノール２５ｍｌと２０ｗｔ％水酸化カリウム／メタノール溶液０．３８ｍｌを混合し、この中にモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体アンモニウム塩４００ｍｇを添加した。このメタノール溶液を室温下で一晩撹拌した。得られたスラリーを分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩固体０．２５ｇ（水分：５．４２％）を得た。
【０１９３】
図４３には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩固体の粉末Ｘ線回折図を示す。この図から明らかな如く、この固体はアモルファスであった。
【０１９４】
［実施例Ｎ］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶１５０ｍｇを、６０℃の恒温槽内で一晩放置した。
【０１９５】
図４４には、６０℃で保存したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：７．０４％）の粉末Ｘ線回折図を示す。６．１°、１２．２°、１８．３°、２０．６°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１９６】
［比較例Ｎ］
６０℃の恒温槽の替わりに、１０℃の冷蔵庫を用いること以外は実施例Ｎと同様にして、前記結晶を一晩放置した。この結晶（水分：６．９６％）の粉末Ｘ線回折図は図１５と同様であった。
【０１９７】
［実施例Ｏ］
６０℃の恒温槽の替わりに、１２０℃の恒温槽を用いること以外は実施例Ｎと同様にして、前記結晶を一晩放置した。
【０１９８】
図４５には、１２０℃で保存したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：４．７３％）の粉末Ｘ線回折図を示す。６．１°、１２．２°、１８．３°、２０．６°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１９９】
［実施例Ｐ］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶１５０ｍｇを、相対湿度９７％に保ったデシケーター内で一晩放置した。
【０２００】
図４６には、相対湿度９７％で保存したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：８．６１％）の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０２０１】
［比較例Ｐ１］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶１５０ｍｇを、相対湿度７５％の恒温恒湿機中で一晩放置した。この結晶（水分：５．４３％）の粉末Ｘ線回折図は図１５と同様であった。
【０２０２】
［比較例Ｐ２］
実施例Ｇに従って得られたモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶２００ｍｇを、相対湿度１０％に保ったデシケーター内で一晩放置した。この結晶の粉末Ｘ線回折図は図３７と同様であった。
【０２０３】
［実施例Ｑ］
実施例Ｆに従って得られたモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶２４０ｍｇを、６０℃で減圧乾燥した。
【０２０４】
図４７には、６０℃で減圧乾燥したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：１．０４％）の粉末Ｘ線回折図を示す。６．６°、１３．９°、２２．９°及び２６．３°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０２０５】
［比較例Ｑ］
実施例Ｆに従って得られたモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶１５０ｍｇを、４０℃で減圧乾燥した。この結晶の粉末Ｘ線回折図は図３６と同様であった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、モナティンの非天然型立体異性体塩の結晶及びその使用に関し、更に詳しくは甘味剤又はその有効成分（甘味料）として優れている、天然型モナティン（Monatin）（（２Ｓ，４Ｓ）体）の立体異性体塩（非天然型立体異性体塩）の結晶、当該非天然型立体異性体塩の混合物の結晶、このような非天然型立体異性体塩のうち少なくとも１種と天然型モナティン（（２Ｓ、４Ｓ）体）塩を含む混合物の結晶、並びにこれらの塩の結晶の使用に関する。この非天然型立体異性体塩には、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体等非天然型の各種立体異性体の塩が含まれ、このような塩の代表例として、このような塩の単独品（当該非天然型立体異性体の何れか１種の塩）、その複数種の塩混合物、これら少なくとも１種の塩を含む混合物（組成物）等を挙げることができる。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の高度化に伴い、特に糖分の摂取過多による肥満及びこれに伴う各種疾病が問題となっており、砂糖に代わる低カロリー甘味剤の開発が強く望まれている。求められる甘味剤には甘味強度以外に、低カロリー、安全性、熱や酸に対する安定性、甘味質、コスト等、多くの諸特性、要件が求められる。
【０００３】
現在、各種の甘味剤が使用又は提案されている。例えば、甘味強度（甘味度）が強く工業的に大量生産可能な甘味剤として実用化され、広範に使用されているものとして、安全性と甘味質の面で優れているアスパルテームが存在する。更に、アスパルテームの誘導体についての研究も盛んに行われている。これら以外にも、甘味剤として各種の特性を有する甘味物質が提案され、実用化に向けた検討がなされている。また、天然に存在し大量に採取できる植物由来のソーマチン、グリチルリチン、ステビオシド等が天然甘味剤として現在使用されている。このような情況下に、甘味剤としての実用化が期待でき、甘味度が強い甘味物質の開発が求められている。
【０００４】
モナティンは南アフリカの北部トランスバール（northern Transvaal）地方に自生する植物シュレロチトン イリシホリアス（Schlerochiton ilicifolius）の根皮から単離された天然由来のアミノ酸誘導体であり、R. Vleggaar等により、その構造に関し、(2S,4S)-2-amino-4-carboxy-4-hydroxy-5-(3-indolyl)-pentanoic acid（(2S,4S)-4-hydroxy-4-(3-indolylmethyl)-glutamic acid；後述の構造式（１）参照。）と報告されている（R. Vleggaar et. Al., J. Chem. Soc. Perkin Trans., 3095-3098, (1992)参照。）。また、この天然植物由来の（２Ｓ，４Ｓ）体（天然型モナティン）の甘味強度は、同文献等によると、ショ糖の８００倍〜１４００倍と報告されている。モナティンの合成法については、幾つかの方法が報告されているものの、それらの多くは立体異性体混合物の合成法に関するものであり、天然型モナティンと同一化学構造式を有する４種の立体異性体それぞれを純品として合成、単離し、それらの諸性質を詳細に調べ、報告した例は殆ど無い。（その合成例については、P. J. van Wyk et. al., ZA 87/4288, ZA 88/4220、Holzapfel et. al., Synthetic Communications, 24(22), 3197-3211 (1994)、 E. Abushanab et. al., US 5,994,559 (1999)、K. Nakamura et. al., Organic Letters, 2, 2967-2970 (2000)等を参照することができる。）
【０００５】
先ず、最初にモナティンについて言及しているP. J. van Wyk等の特許文献によると、彼等はＸ線結晶構造解析で天然に存在し強い甘味を持つ立体異性体が（２Ｓ，４Ｓ）体か或いは（２Ｒ，４Ｒ）体であることをつきとめているが、（２Ｓ）−アスパラギン酸から（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｓ，４Ｒ）体との混合物を合成した結果と総合して、天然に存在して強い甘味を持つ立体異性体は（２Ｓ，４Ｓ）体の可能性が高いと報告している。次に、前述のR. Vleggaar等の文献によると天然植物に存在するモナティンの立体異性体（立体構造）は唯一（２Ｓ，４Ｓ）体であり、その甘味強度はショ糖の８００〜１４００倍であると報告している。これらの情報を基にすると、天然に存在し強い甘味の本体であるモナティンの立体異性体（立体構造）は（２Ｓ，４Ｓ）体と考えるのが妥当である。
【０００６】
K. Nakamura等は前記引例の文献で、モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体とモナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体の塩酸塩を単離しこれらの甘味強度について、それぞれ天然標品のモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）と同等の甘味、及び恐らくは不純物として混在すると考えられるモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）に由来するものと思われる僅かな甘味を呈したと報告しているが、具体的な甘味強度についての報告は無い。即ち、この文献はモナティンの非天然型立体異性体（（２Ｓ，４Ｓ）体以外）の甘味強度について言及した初めての例であるが、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体塩酸塩には殆ど甘味が無いと報告している。
【０００７】
一方、T. Kitahara等は甘味料としてモナティンの各立体異性体の選択的合成法について報告しているが、各立体異性体の甘味度については報告していない（T. Kitahara等、日本農芸化学会、２０００年度大会 講演要旨集、３Ｂ１２８β（２２１ページ）参照。）。
【０００８】
これらの情報を総合すると、下記のことが判明している：
（１）天然に存在し、８００〜１４００倍の甘味強度を持つモナティンの立体異性体（立体構造）は（２Ｓ，４Ｓ）体である；及び
（２）モナティンの他の非天然型立体異性体については、その一部について少量を単離した例はあるがその純品を単離精製し、甘味効果を確認した例は無い。
【０００９】
即ち、これまで、５〜１０％のショ糖濃度に相当する実用濃度での、モナティンの各立体異性体の甘味強度については、天然由来のモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）を除いて、明確なデータは無い。従って、モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）以外のモナティンの非天然型立体異性体が甘味剤として使用可能かどうか既存の文献、特許文献等からは知り得ない。換言すれば、天然由来のモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）を除き、甘味度（甘味強度）についての信頼できる情報に乏しく、先行技術情報を総合判断した場合には、モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）以外の非天然型モナティン立体異性体については甘味度が低く、甘味剤としての有用性が期待できないと考えざるを得ない情況にあった。
【００１０】
この一因として、これまで前記各種立体異性体を合成し、単離精製する方法が見出されていなかったことが挙げられる。
【００１１】
従って、少なくとも数百ｍｇ以上の天然型モナティン及びその３種の非天然型立体異性体それぞれを純品として単離精製し、それぞれの光学純度と甘味強度を明らかにし、更にモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）及びその立体異性体（即ち、非天然型立体異性体）の甘味剤としての有用性を明らかにし、その結果有用性の高い成分を含む甘味剤を開発することが求められている。
【００１２】
モナティンの各種立体異性体を高純度に分離する方法として、先ず結晶化の方法が考えられる。そこで、モナティンの結晶（遊離体、塩等の形態を含む。）について若干説明すると、以下の通りである。
【００１３】
従来の報告では、前述のR. Vleggaar等の文献にモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の遊離体の結晶を水、酢酸及びエタノール（１：１：５）の混合溶媒から得たと報告されており、その融点は２１６℃〜２２０℃と記載されている。また、P. J. van Wyk等の特許文献には、モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の遊離体（crystalline solid）の融点は２４７℃〜２６５℃（分解）であると記載されているが、各種塩に関してはアモルファス状固体（amorphous solid）であると報告されている。前述のC. W. Holzapfel等の文献には合成モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｒ，４Ｒ）体混合物の遊離体の結晶を水及び酢酸（１０：１）の混合溶媒から２度の晶析により得て、その融点が２１２℃〜２１４℃であると報告されている。従って、モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体の遊離体等これら２例以外のモナティンの非天然型立体異性体及びそれら複数の立体異性体混合物については、遊離体はもとより、各種塩に関しても結晶状態で単離されたことは無く、従って物性値その他の情報は全く知られていない。即ち、モナティンに関しては、従来のイオン交換クロマトグラフィー等による精製法に比べて、精製手段として最も簡便かつ有効な方法である晶析法及びそれによって得られる結晶についての知見はモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の遊離体及びモナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｒ，４Ｒ）体の遊離体混合物の２例を除いては無く、特に塩の結晶については皆無である。即ち、モナティンの各種立体異性体を甘味剤として実用化する観点からこのような結晶についてその諸物性を明らかにすることが、先ず求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】ZA 87/4288
【特許文献２】ZA 88/4220
【特許文献３】US 5,994,559
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Holzapfel et. al., Synthetic Communications, 24(22), 3197-3211 (1994)
【非特許文献２】K. Nakamura et. al., Organic Letters, 2, 2967-2970 (2000)
【非特許文献３】T. Kitahara等、日本農芸化学会、２０００年度大会 講演要旨集、３Ｂ１２８β（２２１ページ）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明が解決しようとする課題は甘味剤としての実用化が期待でき、甘味強度が強い甘味物質を提供することにある。具体的には、天然型モナティン及びその３種の非天然型立体異性体をそれぞれ純品、特に結晶として分離精製し、これらの光学純度を確認する方法を確立し、更に、ショ糖の８００倍〜１４００倍と言われている天然型モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の甘味強度（甘味度）を確認すると共に、他の３種の立体異性体の甘味強度を決定し、これらの立体異性体の甘味剤としての実用性を明らかにすることにある。更に、これらの立体異性体の各種塩の結晶に関して、諸物性を始めとする特徴を明らかにし、物性面からの実用性を明らかにすることも重要な課題である。
【００１７】
尚、前述の通り、天然型モナティンはその立体構造において（２Ｓ，４Ｓ）体を示すが、本発明においては、それと同一の化学構造式を有する化合物を全て「モナティン」と総称し、従って、モナティンの非天然型立体異性体を、「天然型モナティンの立体異性体」、「非天然型モナティン」、「モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体」、「モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体」、或いは「モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体」等と称する。また、これらの立体異性体に、モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）を加えて、これらを「４種の立体異性体」と称したり、特に天然型モナティンを、「モナティン」、「モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）」或いは「モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体」等と称する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明者等は上記課題を解決すべくモナティンについて鋭意検討を行った。先ず、K. Nakamura等の方法に従って、モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体とモナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体との、及びモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体と（２Ｒ，４Ｓ）体との立体異性体（異性体混合物）を合成し、これらの立体異性体混合物から逆相ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）で目的とする立体異性体を分離、取得した。これらの方法によって得た立体異性体は後述の方法で各種塩基との塩として結晶化して更に高純度の結晶を得ることもできた。次に、これらの立体異性体の光学純度を光学活性カラムＨＰＬＣ法で確認した。更に、得られたモナティンの４種立体異性体の甘味強度をショ糖を標準液として測定して決定した。
【００１９】
その結果、天然型モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の甘味強度は、従来報告されている値よりもはるかに低いものであることが判明し、これ以外の非天然型立体異性体については何れもモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）以上の甘味強度を有し、その中には（２Ｓ，４Ｓ）体に比較して格段に優れた甘味強度を有するものも存在し、これらが甘味物質として優れていることを見出した。
【００２０】
即ち、モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体が５％のショ糖水溶液と比較して約１３００倍、またモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体が５％のショ糖水溶液と比較して約２７００倍の甘味強度をそれぞれ有することを新たに見出し、非天然型立体異性体のうち（２Ｒ）体が特に甘味剤として優れているとの新知見を得た。
【００２１】
次に、前述の合成法等によって得たモナティンの立体異性体混合物を各種塩基との塩として晶析する方法、誘導体として晶析する方法、誘導体を光学異性体分離カラムで分離する方法等を検討し、これらの方法によっても各立体異性体を光学的に純品として得ることに成功した。このようにして得られたそれぞれの立体異性体及びそれらの混合物の各種晶析条件を見出し、各種塩の結晶を初めて取得することに成功し、甘味強度を始め種々の物性値を測定することができた。特に、今回初めて得ることができたこれらの塩基との塩の結晶、特にモナティンの非天然型立体異性体塩の結晶が、従来知られていたR. Vleggaar等の報告にある（２Ｓ，４Ｓ）体の遊離体結晶や、P. J. van Wyk等の特許文献でアモルファス状固体としてのみ知られていた各種塩の非晶形物質に比べ、単離精製の容易さや結晶状態での安定性等の点で優れた諸性質を持つことを見出した。特に、甘味強度の強いモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体のカリウム塩は、結晶化の際に用いる有機溶媒を付着溶媒として含まない点、加熱安定性に優れている点、酸性条件下で晶析を行って得る遊離体に比べて着色し難い点等で最も実用的な製品形態として優れている。
【００２２】
更に、このモナティンの非天然型立体異性体塩の結晶を使用して、甘味剤或いは飲食品等を提供できることを見出した。
【００２３】
以上のような各種の知見に基づいて本発明が完成されるに到った。
【００２４】
以上、本発明においては、天然の立体異性体であるモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）を始めとして、これを含めてそれと同一化学構造式を有する４種の立体（光学）異性体の分離精製及びこれらの光学純度の確認を初めて行うと共に、モナティンの全立体異性体（４種）のより正確な甘味強度を明らかにした。この結果、モナティンの非天然型立体異性体塩の新規な結晶が、従来得られている（２Ｓ，４Ｓ）体等の遊離体の結晶や前述特許記載の塩のアモルファス状固体に比べて甘味物質及び甘味物質としての実用的な製品形態として優れていること、即ちモナティンの非天然型立体異性体塩の結晶が甘味剤として有用性を有することが見出され、中でもモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩結晶が４立体異性体の中で最も強力で、従来の知見からは予測し得ない甘味強度を有し、実用に供する甘味剤又はその成分として最も適していることも確認された。
【００２５】
即ち、本発明は、一つの形態として、モナティンの非天然型立体異性体塩の結晶に存する。本発明はアミノ酸系甘味物質、モナティン（Monatin）の非天然型立体異性体塩の結晶に関し、この立体異性体塩にはモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩、（２Ｒ，４Ｓ）体塩及び（２Ｓ，４Ｒ）体塩の少なくとも１種が含まれる。
【００２６】
本発明において、当該立体異性体塩の結晶を構成する化合物は前記非天然型立体異性体の塩であり、その水和物、溶媒和物等の形態でもよい。更に、この化合物はこのようなモナティンの塩で、分子内で環化したラクトン又はラクタムの形態、及び／又は含まれる官能基の少なくとも一つが保護された形態でもよい。
【００２７】
本発明の結晶に含まれる塩の種類、形態等には、特に制限は無い。最終的製品としての食品用として使用される場合には当然食品用に使用可能な塩が採用される。その他、中間体として適した塩も有用である。これらのこと（上記結晶の形態及び塩の種類、形態等）は、モナティンの非天然型立体異性体塩（結晶）の形態の場合に限らず、後述するように混合して使用される場合のモナティンの天然型立体異性体塩（結晶）の形態についても同様に適用される。
【００２８】
このような塩の形態としては、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アンモニア等とのアンモニウム塩、リジン、アルギニン等のアミノ酸との塩、塩酸、硫酸等の無機酸との塩、クエン酸、酢酸等の有機酸との塩及びサッカリン（ｓａｃｃｈａｒｉｎ）、アセスルフェーム（ａｃｅｓｕｌｆａｍｅ）、シクラミン酸（ｃｙｃｌａｍｉｃ ａｃｉｄ）、グリチルリチン酸（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃ ａｃｉｄ）、アスパルテーム（ａｓｐａｒｔａｍｅ）等の他の甘味剤又はその成分との塩が挙げられ、これらも前述の通り前記本発明に使用する当該立体異性体の塩や、使用される場合の天然型モナティンの塩に適用することができる。
【００２９】
上記塩の形成方法については、本発明についての説明（実施例等）に基いて、必要により慣用され又は公知の造塩方法を利用して、目的とする塩を調製することができる。
【００３０】
前記立体異性体の中には、使用される場合の天然型モナティンを含めて、カルボキシル基、水酸基、アミノ基、インドリル（インドール）基等の官能基が含まれているが、これらの官能基は保護されていてもよい。保護基としては、有機化学、特にアミノ酸やペプチド化学においてそれぞれの保護基として常用される保護基を使用することができる。
【００３１】
本発明の結晶には、下記の内容[１]−[６]が含まれる。
【００３２】
尚、天然型モナティンである（２Ｓ，４Ｓ）体、並びに非天然型モナティンである（２Ｓ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体は下記の構造式（１）、（２）、（３）及び（４）で示される。
【００３３】
[１]
当該非天然型立体異性体塩として、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体塩、（２Ｒ，４Ｒ）体塩及び（２Ｒ，４Ｓ）体塩を挙げることができる。当該塩の結晶としては水和物及び溶媒和物等の形態でもよい。
これら立体異性体塩の中では、モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体及び（２Ｒ，４Ｒ）体がより好ましく、更にモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体が最も好ましい。このような本発明に含まれる塩の結晶は、単離精製の容易さ及び保存安定性に優れていること等から好ましい。
【００３４】
[２]
上記本発明の非天然型立体異性体塩の結晶は、当該立体異性体の塩（水和物、溶媒和物等の形態を含む。）を、好ましくは少なくとも９５％程度、より好ましくは少なくとも９７％程度の化学純度で有することができる。
【００３５】
[３]
上記本発明の非天然型立体異性体塩の結晶は、好ましくは少なくとも９０％程度、より好ましくは少なくとも９４％程度、更に好ましくは少なくとも９８％程度の光学純度を有することができる。例えば、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体の塩（水和物、溶媒和物、それら塩混合物の形態等を含む。）の高光学純度品を挙げることができる。
【００３６】
[４]
上記本発明の立体異性体塩の結晶として、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体の立体異性体塩の中から選択される、少なくとも２種の混合物結晶を採用することができる。
【００３７】
[５]
上記本発明の非天然型立体異性体塩の結晶としては、５〜１０％の実用濃度のショ糖の、好ましくは少なくとも２００倍程度、より好ましくは少なくとも１０００倍程度の甘味強度を示すものを採用することができる。
【００３８】
[６]
上記本発明の立体異性体塩の結晶は、天然型モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の塩の結晶との混合状態で使用することができる。この場合、全モナティンに対して、当該モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体を、好ましくは多くとも７０％程度、より好ましくは多くとも５０％程度含有することができる。
【００３９】
当該天然型モナティン塩の結晶を構成する化合物は天然型モナティンの塩であり、その水和物、溶媒和物等の形態で使用することもできる。更に、この化合物を、このようなモナティンの塩で、分子内で環化したラクトン又はラクタムの形態、及び／又は含まれる官能基の少なくとも一つが保護された形態で使用することができる。
【００４０】
この場合にも、当該天然型立体異性体を含む塩の結晶状態での、混合物結晶の甘味強度として、上記実用濃度のショ糖の、好ましくは少なくとも２００倍程度、より好ましくは少なくとも１０００倍程度のものを好ましいものとして、目的とする混合物結晶を調製することができる。
【００４１】
上記好ましい例として、モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体とモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体との塩の混合物結晶、特にモナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体塩とモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩との比率（重量）が１：０．５〜２程度、特に好ましくは１：１程度である塩の混合物結晶を挙げることができる。
【００４２】
本発明は、別の形態として、上記本発明（前記[１]から[６]を含む。）の非天然型立体異性体塩の結晶を含有することに特徴を有する甘味剤にも存する。
【００４３】
当該甘味剤には、甘味剤用の担体及び／又は増量剤等を含んでいてもよい。
【００４４】
甘味剤用に使用できることが知られ、また今後そのために開発される担体や、増量剤を含んでいてもよい。更に、甘味剤のために使用され得る添加剤を含むことも当然できる。甘味剤は動物用、例えば哺乳動物用、特にヒト用に使用される。
【００４５】
本発明は、更に別の形態として、上記本発明（前記[１]から[６]を含む。）の非天然型立体異性体の塩の結晶を含有することに特徴を有する甘味が付与された飲食品等の製品にも存する。
【００４６】
甘味が求められる動物用製品、特にヒト用の飲食品で甘味が求められる飲食品等に甘味剤の少なくとも一部として、当該結晶を使用することができる。その他、歯磨き、薬品等口内の衛生目的で、或いは経口的に使用される製品で甘味を付与すべき製品に当該結晶が使用され得る。
【００４７】
前記本発明の甘味剤及び飲食品等の製品には、更に他の甘味剤成分（甘味料）、特に糖類、並びに他の人工甘味料及び天然の甘味料の少なくとも１種を含有することができる。例えば、ショ糖、アスパルテーム、アセスルフェーム、スクラロース、サッカリン、ステビオサイド、キシロース、トレハロース、ソルビトール、マルチトール等を併用することができる。
【発明の効果】
【００４８】
本発明により、新規甘味物質、モナティンの非天然型立体異性体塩の結晶を有効成分として使用することにより新規甘味剤又は甘味を付与した飲食品等の製品を提供することができる。当該立体異性体塩の結晶は、特に保存安定性に優れ、強い甘味強度を示し、甘味剤として優れた呈味性を発現する。その中でも当該非天然型立体異性体塩の結晶として、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩（カリウム塩等）の結晶が好ましく、特に優れた呈味性及び保存安定性を有する。
【００４９】
更に、本発明により、甘味剤或いはその成分として、また飲食品等に対する甘味付与成分としても優れた性質を有する新規甘味物質（上記モナティンの非天然型立体異性体塩の結晶）を提供することができる。
【００５０】
故に、本発明は工業的に、特に食品分野において極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】図１は、実施例１３においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図２】図２は、実施例１３においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図３】図３は、実施例１３におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。縦軸には回折強度を、横軸には回折角度２θ[deg]を、それぞれ示す（以下の粉末Ｘ線回折図についても同様である。）。
【図４】図４は、実施例１４においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図５】図５は、実施例１４においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図６】図６は、実施例１４におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図７】図７は、実施例１５においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図８】図８は、実施例１５においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図９】図９は、実施例１５におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図１０】図１０は、比較例１においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図１１】図１１は、比較例１においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図１２】図１２は、比較例１におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図１３】図１３は、比較例２においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩アモルファス固体の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図１４】図１４は、比較例２においてモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩アモルファス固体の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図１５】図１５は、実施例１７におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図１６】図１６は、実施例１８におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図１７】図１７は、実施例２においてモナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図１８】図１８は、実施例２におけるモナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図１９】図１９は、実施例２においてモナティンの［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図２０】図２０は、実施例２におけるモナティンの［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図２１】図２１は、実施例３においてモナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図２２】図２２は、実施例３におけるモナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図２３】図２３は、実施例４においてモナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体カリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図２４】図２４は、実施例４におけるモナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図２５】図２５は、実施例１１においてモナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図２６】図２６は、実施例１１におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図２７】図２７は、実施例１２においてモナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示したものである（倍率２００倍）。
【図２８】図２８は、実施例１２におけるモナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図２９】図２９は、実施例１９におけるモナティン（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩（起晶温度１０℃、３５℃、６０℃）の水蒸気吸着脱着（吸脱着）曲線を示した図である。 縦軸：水分（Moisture）（重量％）；横軸：相対湿度（Relative Humidity）（％）。 △：10℃ 吸着；▲：10℃ 脱着；◇：35℃ 吸着；◆：35℃ 脱着；○：60℃ 吸着；●：60℃ 脱着。
【図３０】図３０は、実施例２０におけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図３１】図３１は、実施例Ａにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３２】図３２は、実施例Ｂにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３３】図３３は、実施例Ｃにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３４】図３４は、実施例Ｄにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３５】図３５は、実施例Ｅにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３６】図３６は、実施例Ｆにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３７】図３７は、実施例Ｇにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３８−１】図３８−１は、実施例Ｈにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３８−２】図３８−２は、実施例Ｈにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図３９−１】図３９−１は、実施例Ｉにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図３９−２】図３９−２は、実施例Ｉにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図４０−１】図４０−１は、実施例Ｊにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図４０−２】図４０−２は、実施例Ｊにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図４１−１】図４１−１は、実施例Ｋにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図４１−２】図４１−２は、実施例Ｋにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図である。
【図４２】図４２は、実施例Ｌにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図４３】図４３は、実施例Ｍにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩固体の粉末Ｘ線回折図である。
【図４４】図４４は、実施例Ｎにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図４５】図４５は、実施例Ｏにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図４６】図４６は、実施例Ｐにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【図４７】図４７は、実施例Ｑにおけるモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図である。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
【００５３】
（２Ｓ）体モナティン（モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｓ，４Ｒ）体の混合物）、（２Ｒ）体モナティン（モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体と（２Ｒ，４Ｓ）体の混合物）及び４種立体異性体の混合物については、前述のK. Nakamura等の方法に従って合成することができ、これより各立体異性体を分離することができるが、各種の立体異性体を含むモナティンの合成法としては、別の方法を採用することもでき、前記K. Nakamura等の方法に限るものではない。
【００５４】
以下、各種の立体異性体を含むモナティンから各立体異性体を分離精製する場合の例を簡単に説明する。これらは例として説明されるものであり、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
【００５５】
K. Nakamura等の方法に従って合成した（２Ｓ）体モナティン及び（２Ｒ）体モナティンの立体異性体については、逆相ＨＰＬＣで分離、分取することができるが、モナティンの立体異性体の分割法としては、これに限るものではない。
【００５６】
既報告の方法等に従って合成した４種の立体異性体を分離して各立体異性体を得ることも可能である。例えば、モナティンの４種立体異性体を塩として或いは誘導体として晶析を行う方法や、誘導体を光学異性体分離カラムで分離し、得られた異性体を再びモナティンに戻す方法を用いることができるが、立体異性体の分割法はこれらに限られるものではない。
【００５７】
本発明の結晶を構成する成分は前記モナティン塩であるが、前記の如く、そのラクトン誘導体やラクタム誘導体等、別の形態で使用することもできる。例えば、当該モナティンの塩において分子内で環化したラクトン又はラクタム誘導体を形成するには、分子内で環化したラクトン又はラクタムを形成する方法として知られている方法を利用して行うことができる。また、官能基の少なくとも一つが保護された誘導体を形成する場合にも、官能基保護法として知られている方法を利用して行うことができる。
【００５８】
得られた各立体異性体結晶の光学純度を、光学活性カラムＨＰＬＣ法で決定することができるが、光学純度の決定法はこれに限られるものではない。
【００５９】
得られた各立体異性体結晶の甘味強度（甘味度）を５％ショ糖水溶液と比較して決定することができるが、甘味強度の決定法としてはこれに限るものではない。
【００６０】
次に、各立体異性体の構造と甘味強度、或いは光学純度との関係を表１及び２に示す。表１にはＨＰＬＣで分取し、イオン交換樹脂で精製し、アンモニウム塩として凍結乾燥した試料について、表２にはナトリウム塩として結晶化精製した試料について、それぞれの評価結果を示す。
【００６１】
【表１】
【００６２】
【表２】
【００６３】
表２に示したように、天然に存在する（天然型）モナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）の甘味強度は約５０倍と従来の報告より低い値であることが分かる。興味深いことに、モナティンの他の３種の立体異性体全てがモナティン（（２Ｓ，４Ｓ）体）以上の甘味強度を示し、特にモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体は約２７００倍と最も強い甘味強度を示した。
【００６４】
クロマトグラフィー等により分離したり、合成法等によって得た各種立体異性体から、更に晶析法により各立体異性体の塩を高純度に結晶として分離することができる。
【００６５】
前記表１と表２に示した評価結果の比較から、（２Ｒ）体については結晶化によって光学純度を含めた純度が高くなっており、塩の結晶とすることの有用性が示されている。
【００６６】
尚、本発明の非天然型立体異性体塩（水和物、溶媒和物等含む。）の結晶（当該立体異性体には分子内で環化したラクトン又はラクタムの形態、含まれる官能基の少なくとも一つが保護された形態等を含む。）を甘味剤として使用する場合、特別の支障が無い限り、他の甘味剤と併用してもよいことは勿論である。
【００６７】
本発明の立体異性体塩（水和物、溶媒和物等含む。）の結晶を甘味剤として使用する場合、必要により担体及び／又は増量剤を使用してもよく、例えば従来から知られ、又は使用されている甘味剤用の担体、増量剤等を使用することができる。
【００６８】
本発明の立体異性体塩（水和物、溶媒和物等含む。）の結晶を甘味剤又は甘味剤成分として使用することができるが、更に甘味の付与を必要とする飲食品等の製品、例えば菓子、チューインガム、衛生製品、化粧品、薬品及びヒト以外の動物用製品等の各種製品の中に甘味剤や甘味成分として、当該結晶を含有せしめて使用することができる。更に、本発明の非天然型立体異性体塩結晶を含有又は使用し甘味が付与された製品の形態として、また甘味の付与を必要とする当該製品に対する甘味付与方法における甘味付与成分として、本発明の非天然型立体異性体塩の結晶を使用することができ、その使用方法等については、甘味剤の使用方法として慣用されている従来法その他公知の方法に従うことができる。
【００６９】
好適な実施の形態
以下、実施例及び比較例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００７０】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルについては、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ４００（４００ＭＨｚ）により、ＭＳスペクトルについては、Ｔｈｅｒｍｏ Ｑｕｅｓｔ ＴＳＱ７００により、それぞれ測定した。陽イオン交換樹脂として、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ ＩＲ１２０Ｂ Ｈ ＡＧ 及びＤＩＡＩＯＮ ＰＫ２２８を使用した。粉末Ｘ線解析については、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ社製 ＰＷ３０５０で測定した。融点については、Ｙａｎａｃｏ社 ＭＩＣＲＯ ＭＥＬＴＩＮＧ ＰＯＩＮＴ ＡＰＰＡＲＡＴＵＳで測定した。旋光度については、日本分光社製（ＪＡＳＣＯ ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ社）ＤＩＰ−３７０ Ｄｅｇｉｔａｌ Ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒで測定した。
【００７１】
［実施例１］
K. Nakamura等の方法（K. Nakamura et. al., Organic Letters, 2, 2967-2970 (2000)参照。）に従ってモナティンの合成を行い、最後に陽イオン交換樹脂（Ｈ＋型）に吸着、３％アンモニア水での溶出、及び凍結乾燥による精製を行い、（２Ｓ）体モナティンのアンモニウム塩（モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｓ，４Ｒ）体の混合物）２．９２ｇと（２Ｒ）体モナティンのアンモニウム塩（モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体と（２Ｒ，４Ｓ）体の混合物）７１１ｍｇを得た。
【００７２】
以下の分取条件で（２Ｓ）体モナティン６６０ｍｇと（２Ｒ）体モナティン７１１ｍｇからそれぞれを分割し、モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体２０７ｍｇ、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体２３３ｍｇ、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体２６１ｍｇ及びモナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体２５４ｍｇを、アンモニウム塩の形態でアモルファス固体として得た。
【００７３】
（分取条件）
ガードカラム：Inertsil ODS-3 30x50mm；
カラム ：Inertsil ODS-3 30x250mm；
検出 ：UV 210nm；
溶離液 ：<Ａ> アセトニトリル 0.05%TFA <Ｂ> Ｈ２Ｏ 0.05%TFA；
流速 ：28ml/min；
グラジエント：25minで<Ａ>12%から18%；
負荷量 ：10〜13mg；及び
作業温度 ：２５℃。
【００７４】
（分取後の処理）
分取画分をアンモニア水で中和し、濃縮した。分取画分を合わせて濃縮した後、陽イオン交換樹脂（AMBERLITE IR120B H AGのH+型）に吸着させた。５％アンモニア水で溶出し、溶出画分を凍結乾燥した。
【００７５】
次に示す分析条件で各立体異性体の光学純度（エナンチオマー純度）を検定した。
（分析条件）
カラム：CROWNPAK CR(+) 4x150mm；
検出 ：UV 210nm；
溶離液：過塩素酸水（pH2.0）／メタノール＝９０／１０；
流速 ：1.2ml/min；及び
分析温度：25℃。
【００７６】
各立体異性体の光学純度は以下の通りであった。( )内には各ピークの溶出時間を示す。
モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体：９４％（45.0min）；
モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体：９４％（26.1min）；
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体：９４％（20.9min）；及び
モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体：９６％（16.1min）。
【００７７】
それぞれの立体異性体に含まれる不純物の主なものは、それぞれの鏡像体であった。例えば、モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体には少量のモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体が含まれていた。
【００７８】
得られた各立体異性体の甘味強度を以下の方法で測定した。
【００７９】
各立体異性体の０．０５％水溶液を調製し、これを適宜希釈して、所定の濃度の試料水溶液を調製した。別途、ショ糖の５％水溶液を調製し標準液とした。希釈した試料の水溶液と標準のショ糖水溶液を交互に味わい、それらの甘味強度が同等であると感じた時の試料濃度から甘味倍率を求めた。この評価は７人のパネリストによって行った。
【００８０】
各立体異性体の甘味強度は以下のように決定された。
モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体：約３００倍；
モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体：約３００倍；
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体：約２０００倍；及び
モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体：約８００倍。
【００８１】
各立体異性体の旋光度（［α］Ｄ２５（c=0.5））を測定した結果は以下の通りであった。
モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体：-44.1（H2O）、-7.5（3%アンモニア水）；
モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体：-7.8（H2O）；
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体：+3.7（H2O）、 +8.7（3%アンモニア水）；及び
モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体：+11.1（H2O）。
【００８２】
各立体異性体の１H-NMRは以下の通りであった（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）。
モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体及び（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩：
１．９６（１Ｈ, ｄｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ），２．５７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ=１．９Ｈｚ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ），３．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ），３．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ），３．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ），７．０４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．１０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．１０（１Ｈ，ｓ），７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）。
【００８３】
モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体アンモニウム塩：
２．１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ），２．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），３．１３（２Ｈ，ｓ），３．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），７．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．１４（２Ｈ，ｓ），７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．６３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ）。
【００８４】
各立体異性体のＭＳスペクトルは以下の通りであった。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１（Ｍ−Ｈ）−。
【００８５】
［実施例２］
［モナティン４種立体異性体混合物のアンモニウム塩の（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｒ，４Ｒ）体とのラセミ体結晶及び（２Ｓ，４Ｒ）体と（２Ｒ，４Ｓ）体とのラセミ体結晶への分割］
モナティンの立体（光学）異性体混合物（モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体：モナティン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体＝６：４）のアンモニウム塩１０．００ｇ（３２．３３ミリモル）を、２．５％アンモニア水１００ｍｌに溶解し、得られた溶液を２０ｍｌになるまで濃縮した。新たに、５％アンモニア水３ｍｌを加え均一にした後、室温にて３０分静置した。結晶析出後、５％アンモニア水／エタノール＝２５／７５の水溶液８０ｍｌを加えてスラリー状にし、モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩の結晶を濾取した。得られた結晶を再び２．５％アンモニア水３０ｍｌに溶解し濃縮した後、５％アンモニア水０．５ｍｌとエタノール３０ｍｌにて再結晶し、モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩結晶 ４．８０ｇ（１５．５２ミリモル，逆相HPLC純度（以下、「HPLC純度」と称する。）：９８．０％）を得た。
【００８６】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：１．９５−２．０２（ｍ，１Ｈ），２．５８−２．６２（ｍ，１Ｈ），３．０１−３．０５（ｍ，１Ｈ），３．２１−３．２４（ｍ，１Ｈ），３．５５−３．５８（ｍ，１Ｈ），７．０７−７．１１（ｍ，１Ｈ），７．１４−７．１８（ｍ，２Ｈ），７．４２−７．４４（ｄ，１Ｈ），７．６６−７．６８（ｄ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．３９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：１８２〜１８６℃。
甘味度：約１３００倍（５％ショ糖水溶液と比較）。
【００８７】
図１７には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【００８８】
図１８には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。６．０°、１２．１°、１５．２°、１８．６°、２１．３°、２３．２°及び２５．０°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【００８９】
前述の操作で得た濾液（モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体：モナティン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体＝３：１０）を５ｍｌになるまで濃縮した。新たに、５％アンモニア水３ｍｌを加えて均一にした後、室温にて１０分静置した。結晶析出後、エタノール８０ｍｌを加えてスラリー状にし、モナティン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］アンモニウム塩の結晶を濾取した。得られた結晶を再び２．５％アンモニア水３０ｍｌに溶解し濃縮した後、５％アンモニア水０．５ｍｌとエタノール３０ｍｌによる再結晶を３回行い、モナティン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体アンモニウム塩結晶３．１０ｇ（１０．０２ミリモル，HPLC純度９８．２％）を得た。総回収率は７９．０％であった。
【００９０】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：２．１１−２．１７（ｍ，１Ｈ），２．３８−２．４３（ｍ，１Ｈ），３．１６（ｓ，２Ｈ），３．９０−３．９３（ｍ，１Ｈ），７．０６−７．１０（ｍ，１Ｈ），７．１３−７．１７（ｍ，２Ｈ），７．４１−７．４３（ｄ，１Ｈ），７．６６−７．６８（ｄ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．１９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：１６７．２〜１６８．４℃。
甘味度：約８００倍（５％ショ糖水溶液と比較）。
【００９１】
図１９には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【００９２】
図２０には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体アンモニウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。５．４°、１０．２°、１９．７°、２１．０°及び２１．８°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【００９３】
［実施例３］
［モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｒ，４Ｒ）体とのラセミ体のナトリウム塩結晶の調製］
モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩１．００ｇ（３．２３ミリモル，HPLC純度１００％）を水１０ｍｌに溶解し、これに水酸化ナトリウム水溶液（２０当量）を加えて濃縮した。水２０ｍｌを加えて濃縮する操作を３回繰り返した後、再び水２０ｍｌに溶解し、イオン交換樹脂（ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ ＩＲ１２０Ｂ Ｈ ＡＧ（Ｈ＋））を溶液が弱アルカリ性になるまで加えて攪拌し、過剰のナトリウムを除去した。樹脂を濾取した後、濾液を減圧下に濃縮した。室温下に、９５％エタノール水溶液にて結晶化して、モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体ナトリウム塩結晶・０．０５エタノール和物 ０．６８０ｇ（２．１４ミリモル）を、収率６６．３％で得た。
【００９４】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：実施例２と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．１９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：２０１．７〜２０３．２℃。
【００９５】
図２１には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【００９６】
図２２には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。４．４°、１３．６°、１５．２°、１６．７°、２２．２°及び２４．４°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【００９７】
［実施例４］
［モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｒ，４Ｒ）体とのラセミ体のカリウム塩結晶の調製］
水酸化ナトリウム水溶液の替わりに、水酸化カリウム水溶液を用いること以外は実施例３と同様にして、モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体カリウム塩結晶・０．０５エタノール和物０．７１ｇ（２．１３ミリモル）を、収率６５．９％で得た。
【００９８】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：実施例２と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．４９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：２２３．８〜２２４．７℃。
【００９９】
図２３には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体カリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１００】
図２４には、モナティンの［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。５．９°、１８．７°、２０．１°及び２３．８°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１０１】
［実施例５］
［モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体と（２Ｒ，４Ｒ）体とのラセミ体Ｚ−ラクトン（2-Benzyloxycarbonylamino-4-(3-indolylmethyl)-4-carboxy-γ-butyrolactone）の調製］
モナティン ［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩１９．５１ｇ（６３．０７ミリモル，HPLC純度：９９．２％）を、２Ｎ-水酸化ナトリウム水溶液９４．６ｍｌ（１８９．２ミリモル）と水９０ｍｌに溶解した。ベンジルオキシカルボニルクロライド１２．６１ｍｌ（８８．３０ミリモル）を加えて室温で２時間攪拌後、更に２Ｎ-水酸化ナトリウム水溶液１５．８ｍｌ（３１．５４ミリモル）とベンジルオキシカルボニルクロライド４．５０ｍｌ（３１．５４ミリモル）を加えて、室温にて１夜攪拌した。得られた反応水溶液は、エーテル５０ｍｌでの抽出操作を３回行い、過剰なベンジルオキシカルボニルクロライドを除去した。反応液を塩酸にてｐＨ３に調整し、酢酸エチル１００ｍｌで３回抽出操作を行った後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。硫酸マグネシウムを濾過して除き、濾液を減圧下に濃縮して、Ｚ−モナティン（2-Benzyloxycarbonylamino-4-hydroxy-4-carboxy-5-(3-indolyl)pentanoic acid）［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体２７．９３ｇ（６５．５０ミリモル）を得た。Ｚ−モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体２７．９３ｇ（６５．５０ミリモル）を酢酸エチル４００ｍｌに溶解し、ｐ-トルエンスルホン酸１．２５ｇ（６．５５ミリモル）を加えて７５℃で３時間加熱した。得られた反応液を水と飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。硫酸マグネシウムを濾過して除き、濾液を減圧下に濃縮した。残渣にクロロホルム１００ｍｌを加えて析出した結晶を濾過して集め、Ｚ-ラクトン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体１７．６４ｇ（４３．１９ミリモル，HPLC純度：９９．６％）を総収率６８．５％で得た。
【０１０２】
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．３６−２．４２（ｍ，１Ｈ），２．６４−２．７０（ｍ，１Ｈ），３．２４−３．４１（ｍ，２Ｈ），３．７１−３．８１（ｍ，１Ｈ），４．９８（ｓ，２Ｈ），６．９７−７．００（ｍ，１Ｈ），７．０４−７．０９（ｍ，１Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），７．３０−７．３３（ｍ，５Ｈ），７．５４−７．５６（ｄ，１Ｈ），７．６６−７．６９（ｄ，１Ｈ），１１．０３（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：４０９．６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
融点：１９５．５〜１９６．９℃。
【０１０３】
［実施例６］
［モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体と（２Ｒ，４Ｓ）体とのラセミ体Ｚ−ラクトン（2-Benzyloxycarbonylamino-4-(3-indolylmethyl)-4-carboxy-γ-butyrolactone）の調製］
モナティン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体アンモニウム塩の替わりに、モナティン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体アンモニウム塩１５．００ｇ（４８．４９ミリモル，HPLC純度：９９．５％）を使用し、ｐ-トルエンスルホン酸を加えて７５℃で２時間加熱する以外は実施例５と同様にして、Ｚ−ラクトン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体１２．１０ｇ（２９．６４ミリモル，HPLC純度１００％）を総収率６１．１％で得た。
【０１０４】
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．３１−２．３７（ｍ，１Ｈ），２．７１−２．７６（ｍ，１Ｈ），３．１９−３．２３（ｍ，１Ｈ），３．４３−３．４７（ｍ，１Ｈ），４．３４−４．４１（ｍ，１Ｈ），５．０５（ｓ，１Ｈ），６．９６−７．００（ｍ，１Ｈ），７．０４−７．０８（ｍ，１Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），７．３２−７．３７（ｍ，５Ｈ），７．５３−７．５５（ｄ，１Ｈ），７．８５−７．８７（ｄ，１Ｈ），１０．９５（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：４０９．５８（Ｍ＋Ｈ）＋。
融点：１５６．７〜１５９．１℃。
【０１０５】
［実施例７］
［Ｚ-ラクトン（２Ｓ，４Ｓ）体とＺ-ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体との分割］
Ｚ-ラクトン［（２Ｓ，４Ｓ）＋（２Ｒ，４Ｒ）］体１．１７ｇ（２．８６ミリモル，HPLC純度：９９．７％）から、光学異性体分割カラムにて分割を行った。このとき、ガードカラムにCHIRALPAK AS ２０×５０ｍｍ、分取カラムにCHIRALPAK AS ２０×２５０ｍｍを使用した。溶離液：ヘキサン／エタノール／酢酸＝４０／６０／０．５、流速：１０ｍｌ／分、検出：UV２１０ｎｍ、温度：４０℃、負荷量：２５ｍｇで分取した。溶出時間については、それぞれＺ-ラクトン（２Ｓ，４Ｓ）体が１３分、Ｚ-ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体が２３分であった。分取画分をそれぞれ濃縮後、酢酸エチル５０ｍｌに溶解し再び濃縮した。残渣をクロロホルム３０ｍｌで結晶化し、Ｚ-ラクトン（２Ｓ，４Ｓ）体４２８ｍｇ（１．０５ミリモル）、及びＺ-ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体３９９ｍｇ（０．９７７ミリモル）を得た（総回収率：７０．７％）。
【０１０６】
（Ｚ-ラクトン（２Ｓ，４Ｓ）体）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：実施例５と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：４０９．６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
融点：１７９．８〜１８２．０℃。
【０１０７】
（Ｚ-ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：実施例５と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：４０９．８８（Ｍ＋Ｈ）＋。
融点：１７９．２〜１８２．８℃。
【０１０８】
［実施例８］
［Ｚ-ラクトン（２Ｓ，４Ｒ）体とＺ-ラクトン（２Ｒ，４Ｓ）体との分割］
Ｚ-ラクトン［（２Ｓ，４Ｒ）＋（２Ｒ，４Ｓ）］体９．８９ｇ（２４．２２ミリモル，HPLC純度：１００％）から、光学異性体分割カラムにて分割を行った。このとき、ガードカラムにCHIRALCEL OJ ２０×５０ｍｍ、分取カラムにCHIRALCEL OJ ２０×２５０ｍｍを使用した。溶離液：ヘキサン／エタノール／トリフルオロ酢酸＝４０／６０／０．１、流速：８ｍｌ／分、検出：UV２１０ｎｍ、温度：４０℃、負荷量：５０ｍｇで分取した。溶出時間については、それぞれＺ-ラクトン（２Ｒ，４Ｓ）体が１６分、Ｚ-ラクトン（２Ｓ，４Ｒ）体が２１分であった。分取画分をそれぞれアンモニア水で中和後に濃縮した。酢酸エチル１５０ｍｌに溶解し、ｐＨ３に調整した塩酸水溶液にて洗浄後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。硫酸マグネシウムを濾過して除き、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をヘキサン１００ｍｌで結晶化し、Ｚ-ラクトン（２Ｒ，４Ｓ）体・０．２酢酸エチル和物４．８８ｇ（１１．４５ミリモル，HPLC純度：９７．３％）、及びＺ-ラクトン（２Ｓ，４Ｒ）体・０．２酢酸エチル和物５．４１ｇ（１２．７０ミリモル，HPLC純度：９６．９％）を得た（総回収率：９９．７％）。
【０１０９】
（Ｚ-ラクトン（２Ｒ，４Ｓ）体・０．２酢酸エチル和物）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．２１−２．２８（ｍ，１Ｈ），２．６４−２．７０（ｍ，１Ｈ），３．１８−３．２２（ｍ，１Ｈ），３．４０−３．４４（ｍ，１Ｈ），４．４２−４．４５（ｍ，１Ｈ），５．０４（ｓ，２Ｈ），６．９５−７．００（ｍ，１Ｈ），７．０３−７．０７（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），７．３２−７．３５（ｍ，５Ｈ），７．５２−７．５５（ｄ，１Ｈ），７．８０−７．８２（ｄ，１Ｈ），１０．９２（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：４０９．５８（Ｍ＋Ｈ）＋。
融点：１０９．１〜１１０．８℃。
【０１１０】
（Ｚ-ラクトン（２Ｓ，４Ｒ）体・０．２酢酸エチル和物）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：上記（２Ｒ，４Ｓ）体と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：４０９．５８（Ｍ＋Ｈ）＋。
融点：１１６．１〜１１６．８℃。
【０１１１】
［実施例９］
［Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体のモナティン（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶への変換（ナトリウム塩結晶の調製その１）］
Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体１４．２４ｇ（３４．８５ミリモル，HPLC純度：９９．５％）をメタノール４００ｍｌ、水４０ｍｌに溶解し、１０％パラジウム−炭素３ｇを加え、水素雰囲気下に室温で２時間還元した。還元後、水１００ｍｌと４Ｎ-水酸化ナトリウム水溶液１９．２ｍｌ（７６．６７ミリモル）を加えてしばらく攪拌した後、触媒を濾過により除去して濾液を濃縮した。残渣を水１６０ｍｌに溶解後、イオン交換樹脂 AMBERLITE IR120B H AG（H＋）を溶液が弱酸性になるまで少量ずつ加えて過剰なナトリウムを除去した。２８％アンモニア水３４．８ｍｌを加え、イオン交換樹脂を濾過して除いた。このイオン交換樹脂を５％アンモニア水で洗い、濾液を合わせて濃縮した。濃縮した残渣を水１００ｍｌに溶解し、この溶液に活性炭１ｇを加えて1０分間攪拌した。活性炭を濾過して除き、濾液を濃縮後、これに、室温で９０％エタノール水溶液を加えて結晶化し、モナティン（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶・０．２エタノール和物６．５５ｇ（２０．１９ミリモル、光学活性カラムHPLC純度：９９．３％）を、総収率５７．９％で得た。
【０１１２】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：１．９５−２．０２（ｍ，１Ｈ），２．５８−２．６２（ｍ，１Ｈ），３．０１−３．０５（ｍ，１Ｈ），３．２１−３．２４（ｍ，１Ｈ），３．５５−３．５８（ｍ，１Ｈ），７．０７−７．１１（ｍ，１Ｈ），７．１４−７．１８（ｍ，２Ｈ），７．４２−７．４４（ｄ，１Ｈ），７．６６−７．６８（ｄ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．４９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：１９７．１〜１９８．３℃。
比旋光度（５％ＮＨ３水、Ｃ＝０．５）：[α]Ｄ２５＝＋０．６４。
甘味度：約２７００倍（５％ショ糖水溶液との比較）。
【０１１３】
［実施例１０］
［Ｚ−ラクトン（２Ｓ，４Ｓ）体のモナティン（２Ｓ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶への変換］
Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体の替わりに、Ｚ−ラクトン（２Ｓ，４Ｓ）体５．００ｇ（１２．２５ミリモル，HPLC純度：９９．８％）を使用し、水素雰囲気下、室温で１時間還元する以外は実施例９と同様にして、モナティン（２Ｓ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶・０．２エタノール和物３．１５ｇ（９．７１ミリモル，光学活性カラムHPLC純度：９９．８％）を、総収率７９．３％で得た。
【０１１４】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ））δ：実施例９と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．５９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：１９６．１〜１９７．９℃。
比旋光度（５％ＮＨ３水、Ｃ＝０．５）：[α]Ｄ２５＝−１．６７。
甘味度：約５０倍（５％ショ糖水溶液との比較）。
【０１１５】
［実施例１１］
［Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｓ）体のモナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶への変換］
Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体の替わりに、Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｓ）体・０．２酢酸エチル和物 ３．６６ｇ（８．５９ミリモル，HPLC純度：９７．３％）を使用し、水素雰囲気下に室温で１時間還元すること以外は実施例９と同様にして、モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶２．２３ｇ（７．０７ミリモル，光学活性カラムHPLC純度：９９．２％）を、総収率８２．３％で得た。
【０１１６】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：２．１１−２．１７（ｍ，１Ｈ），２．３８−２．４３（ｍ，１Ｈ），３．１６（ｓ，２Ｈ），３．９０−３．９３（ｍ，１Ｈ），７．０６−７．１０（ｍ，１Ｈ），７．１３−７．１７（ｍ，２Ｈ），７．４１−７．４３（ｄ，１Ｈ），７．６６−７．６８（ｄ，１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．１９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：２２７．５〜２２９．２℃。
比旋光度（５％ＮＨ３水、Ｃ＝０．５）：[α]Ｄ２５＝＋１１．０８。
甘味度：約１３００倍（５％ショ糖水溶液との比較）。
【０１１７】
図２５には、モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１１８】
図２６には、モナティンの（２Ｒ，４Ｓ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。４．４°、１３．７°、１６．６°、１７．９°、１８．６°、２０．２°及び２２．６°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１１９】
［実施例１２］
［Ｚ−ラクトン（２Ｓ，４Ｒ）体のモナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶への変換］
Ｚ−ラクトン（２Ｒ，４Ｒ）体の替わりに、Ｚ−ラクトン（２Ｓ，４Ｒ）体・０．２酢酸エチル和物 ５．２３ｇ（１２．２８ミリモル，HPLC純度：９６．９％）を使用し、水素雰囲気下に室温で１時間還元し、９０％エタノール水溶液による再結晶を２回行った以外は実施例９と同様にして、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶２．５７ｇ（８．１４ミリモル，光学活性カラムHPLC純度：９９．４％）を、総収率６６．３％で得た。
【０１２０】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：実施例１１と同様。
ＥＳＩ−ＭＳ：２９１．４９（Ｍ−Ｈ）−。
融点：２２７．１〜２２９．４℃。
比旋光度（５％ＮＨ３水、Ｃ＝０．５）：[α]Ｄ２５＝−９．５７。
甘味度：約３００倍（５％ショ糖水溶液との比較）。
【０１２１】
図２７には、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１２２】
図２８には、モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。４．４°、１３．７°、１６．６°、１７．９°、１８．６°、２０．２°及び２２．６°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１２３】
［実施例１３］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製（その１）］
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩１．５ｇを水１０ｍｌに溶解し、２５ｍｌの陽イオン交換樹脂 DIAION PK228（カリウム型、三菱化学製）を充填したカラムに通液して所望のイオンに交換した後、溶出液を１１．５ｇまで濃縮した。得られた濃縮液を６０℃まで加熱しエタノール６０ｍｌを添加した。このエタノール水溶液を１０℃まで５℃/Hrで冷却した後、１０℃で一晩攪拌した。得られた晶析液から結晶を分離した後、湿結晶を減圧乾燥器にて乾燥して、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶１．１ｇを得た。
【０１２４】
融点：２１３．３〜２１４．７℃。
【０１２５】
図１には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１２６】
図２には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１２７】
図３には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、６．６°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１３．９°、１７．２°、１８．３°、２０．６°、２２．９°、２４．５°及び２６．３°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１２８】
［実施例１４］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の調製（その２）］
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩１．５ｇを水１０ｍｌに溶解し、25ｍｌの陽イオン交換樹脂 DIAION PK228（Na型、三菱化学製）を充填したカラムに通液して所望のイオンに交換した後、溶出液を１１．５ｇまで濃縮した。得られた濃縮液を６０℃まで加熱しエタノール６０ｍｌを添加した。このエタノール水溶液を１０℃まで５℃/Hrで冷却した後、１０℃で一晩攪拌した。得られた晶析液から結晶を分離した後、湿結晶を減圧乾燥器にて乾燥して、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶０．２エタノール和物１．２ｇを得た。
【０１２９】
融点：１９３．５〜１９５．１℃。
【０１３０】
図４には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１３１】
図５には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１３２】
図６には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体ナトリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。４．４°、１５．３°、１７．５°、１９．１°及び２４．６°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１３３】
［実施例１５］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の調製］
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩１．５ｇを水１０ｍｌに溶解した。この溶解液を６０℃まで加熱しエタノール６０ｍｌを添加した。このエタノール水溶液を１０℃まで５℃/Hrで冷却した後、１０℃で一晩攪拌した。得られた晶析液から結晶を分離した後、湿結晶を減圧乾燥器にて乾燥して、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）アンモニウム塩結晶０．７７ｇを得た。
【０１３４】
融点：１７２．１〜１７２．８℃。
【０１３５】
図７には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１３６】
図８には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１３７】
図９には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。６．１°、１１．６°、１８．１°、１９．６°及び２５．０°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１３８】
［比較例１］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の調製］
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩０．５ｇを５０％酢酸水溶液１０ｍｌに溶解後、２５℃にてエタノール２５ｍｌを１時間かけて添加した。更に、２５℃で４．５時間攪拌した。得られた晶析液から結晶を分離した後、湿結晶を減圧乾燥器にて乾燥して、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶０．３８ｇを得た。
【０１３９】
融点：１７５．２〜１７６．１℃。
【０１４０】
図１０には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の晶析液分離直前の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１４１】
図１１には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１４２】
図１２には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体遊離体結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。５．９°、１７．９°、１９．２°、２３．９°及び２７．８°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１４３】
［比較例２］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩アモルファス固体の調製］
実施例１３に従って製造したモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩１．０ｇを水１０ｍｌに溶解し、凍結乾燥を行い（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩アモルファス固体０．９７ｇを得た。
【０１４４】
融点：１８３．２〜１８４．８℃。
【０１４５】
図１３には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩アモルファス固体の乾燥後の光学顕微鏡写真を図示する（倍率２００倍）。
【０１４６】
図１４には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩アモルファス固体の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。この図から明らかな如く、この固体はアモルファスであった。
【０１４７】
［実施例１６］
［結晶の熱安定性の比較］
上記の方法により得られた結晶或いはアモルファス固体５０ｍｇをそれぞれ４ｍｌのバイアル瓶に入れ、温度１２０℃で保存（保持）した。このとき、バイアル瓶は開放した状態とした。保持時間として３時間、７時間、及び２４時間後に、それぞれサンプル２ｍｇを抜き取り、HPLC（高速液体クロマトグラフィー）で分解物の割合（比率）を求めた。このときの保持時間と分解物の割合の関係を下記表３及び表４に示す。
【０１４８】
【表３】
【０１４９】
【表４】
【０１５０】
上記表の結果から、分解物A及びBの生成はカリウム塩が最も少なく、他の結晶に比べて格段に安定性が優れていることが分かる。分解物Bについては、遊離体結晶やアモルファス固体に比べて各種塩の結晶においてその生成が少ないことから、これらの塩の結晶が安定性において優れていることが分かる。
【０１５１】
［実施例１７］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製（その２）］
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体アンモニウム塩１０ｇを水２０ｍｌに溶解し、５０ｍｌの陽イオン交換樹脂 DIAION PK228（カリウム型、三菱化学製）を充填したカラムに通液して所望のイオンに交換した後、溶出液を２３．４８ｇまで濃縮した。得られた濃縮液を３５℃まで加熱しエタノール８４ｍｌ約3時間かけて滴下した。このエタノール水溶液を１０℃まで５℃/Hrで冷却した後、１０℃で一晩攪拌した。得られた晶析液から結晶を分離した後、湿結晶を減圧乾燥器にて乾燥して、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶９．３ｇを得た。
【０１５２】
融点：２２０．０〜２２２．３℃。
【０１５３】
図１５には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、１１．５°、１２．２°、１８．３°、２０．６°及び２４．５°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１５４】
［実施例１８］
［モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製（その３）］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶１．５ｇを水１０ｍｌに溶解した後、溶解液を１０℃まで冷却しエタノール６０ｍｌを約２．５時間かけて滴下した。このエタノール水溶液を１０℃で一晩攪拌した。得られた晶析液から結晶を分離した後、湿結晶を減圧乾燥器にて乾燥して、（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶１．２ｇを得た。
【０１５５】
融点：２１３．２〜２１５．６℃。
【０１５６】
図１６には、モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶の乾燥後の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．６°、１１．５°、１１．８°、１７．２°、２２．９°及び２３．１°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１５７】
［実施例１９］
［結晶の水蒸気吸着脱着曲線］
上記の方法により得られたモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体カリウム塩結晶（１０℃、３５℃、６０℃で起晶）それぞれの水蒸気吸着脱着（吸脱着）曲線を求めた。この測定値を図２９に示す。測定条件は以下の通りである。
【０１５８】
装置 ：日本ベル株式会社製 自動蒸気吸着量測定装置BELSORP18
測定方式 ：定容量式ガス吸着法
測定条件 ：
吸着ガス ：Ｈ２Ｏ
空気恒温槽温度 ：３２３Ｋ
吸着温度 ：２９８Ｋ
初期導入圧力 ：１．０torr
導入圧力差 ：０torr
飽和蒸気圧 ：２３．７６torr
吸着断面積 ：０．１２５nm2
最大吸着圧 ：０．９０
最小吸着圧 ：０．１０
平衡時間 ：３００sec
【０１５９】
［実施例２０］
実施例１４で得られたモナティンの（２Ｒ, ４Ｒ）体ナトリウム塩を、温度４０℃及び湿度７５％の恒温恒湿機中で２日間保存することにより結晶中のエタノールが消失した結晶が得られた。
【０１６０】
図３０には、得られた結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。４．４°、１５．２°、１７．８°、２０．６°及び２４．１°の回折角度（２θ、CuKα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１６１】
［実施例Ａ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶４００ｍｇを水２．５ｍｌに溶解した後、溶解液を４０℃まで加熱し、撹拌下でメタノール１５ｍｌをゆっくり滴下した。このメタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶１．０３ｇを得た。
【０１６２】
図３１には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１６３】
［実施例Ｂ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
メタノールの替わりに、エタノールを用いること以外は実施例Ａと同様にして、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．３８ｇ（水分：５．９７％）を得た。
【０１６４】
図３２には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１７．２°、１８．３°、２０．６°、２３．１°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１６５】
［実施例Ｃ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
メタノールの替わりに、イソプロピルアルコールを用いること以外は実施例Ａと同様にして、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．３８ｇ（水分：９．８５％）を得た。
【０１６６】
図３３には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１６７】
［実施例Ｄ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
メタノールの替わりに、アセトンを用いること以外は実施例Ａと同様にして、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．３０ｇ（水分：１０．６４％）を得た。
【０１６８】
図３４には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１６９】
［実施例Ｅ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶４００ｍｇを水５ｍｌに溶解した後、溶解液を３５℃まで加熱し、撹拌下でエタノール３０ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．２８ｇ（水分：９．７５％）を得た。
【０１７０】
図３５には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１７１】
［実施例Ｆ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶４００ｍｇを水１．７ｍｌに溶解した後、溶解液を３５℃まで加熱し、撹拌下でエタノール１０ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．３８ｇ（水分：９．４５％）を得た。
【０１７２】
図３６には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１７３】
［実施例Ｇ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶４００ｍｇを水１．２５ｍｌに溶解した後、溶解液を３５℃まで加熱し、撹拌下でエタノール７．５ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．４２ｇ（水分：９．６７％）を得た。
【０１７４】
図３７には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１７５】
［実施例Ｈ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶４７５ｍｇを水５ｍｌに溶解した後、溶解液を１０℃まで冷却し、撹拌下でエタノール３０ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．３６ｇ（水分：８．２６％）を得た。
【０１７６】
図３８−１には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１７．２°、１８．３°、２０．６°、２３．１°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１７７】
この結晶を６０℃で減圧乾燥し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：２．１１％）を得た。
図３８−２には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。６．１°、６．６°、１２．２°、１３．９°、１８．３°、２０．６°、２２．９°、２４．５°及び２６．３°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１７８】
［実施例Ｉ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶４００ｍｇを水２．５ｍｌに溶解した後、溶解液を２５℃まで加熱し、撹拌下でエタノール１５ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．４０ｇ（水分：１０．３９％）を得た。
【０１７９】
図３９−１には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１７．２°、１８．３°、２０．６°、２３．１°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１８０】
この結晶を６０℃で減圧乾燥し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：１．６９％）を得た。
【０１８１】
図３９−２には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、６．６°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１３．９°、１８．３°、２０．６°、２２．９°、２４．５°及び２６．３°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１８２】
［実施例Ｊ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶２１３ｍｇを水１．２５ｍｌに溶解した後、溶解液を４０℃まで加熱し、撹拌下でエタノール７．５ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．１９ｇ（水分：６．４３％）を得た。
【０１８３】
図４０−１には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１７．２°、１８．３°、２０．６°、２３．１°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１８４】
この結晶を６０℃で減圧乾燥し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：５．４３％）を得た。
【０１８５】
図４０−２には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。６．１°、６．６°、１１．５°、１２．２°、１３．９°、１８．３°、２０．６°、２２．９°、２４．５°及び２６．３°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１８６】
［実施例Ｋ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶２１７ｍｇを水１．２５ｍｌに溶解した後、溶解液を６０℃まで加熱し、撹拌下でエタノール７．５ｍｌをゆっくり滴下した。このエタノール水溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．２０ｇ（水分：７．２５％）を得た。
【０１８７】
図４１−１には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１７．２°、１８．３°、２０．６°、２３．１°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１８８】
この結晶を６０℃で減圧乾燥し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：４．７９％）を得た。
【０１８９】
図４１−２には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。６．１°、６．６°、１１．５°、１２．２°、１３．９°、１８．３°、２０．６°、２２．９°、２４．５°及び２６．３°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１９０】
［実施例Ｌ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体アンモニウム塩４２０ｍｇをメタノール２５ｍｌに４５℃で溶解した後、撹拌下で２０ｗｔ％水酸化カリウム／メタノール溶液０．３ｍｌをゆっくり滴下した。このメタノール溶液を１０℃の冷蔵庫内で一晩放置した。得られた結晶を分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶０．２２ｇ（水分：５．６４％）を得た。
【０１９１】
図４２には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩湿結晶の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、６．１°、６．６°、１１．５°、１１．８°、１２．２°、１３．９°、１７．２°、１８．３°、２２．９°、２３．１°及び２６．３°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１９２】
［実施例Ｍ］
［モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶の調製］
メタノール２５ｍｌと２０ｗｔ％水酸化カリウム／メタノール溶液０．３８ｍｌを混合し、この中にモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体アンモニウム塩４００ｍｇを添加した。このメタノール溶液を室温下で一晩撹拌した。得られたスラリーを分離し、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩固体０．２５ｇ（水分：５．４２％）を得た。
【０１９３】
図４３には、モナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩固体の粉末Ｘ線回折図を示す。この図から明らかな如く、この固体はアモルファスであった。
【０１９４】
［実施例Ｎ］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶１５０ｍｇを、６０℃の恒温槽内で一晩放置した。
【０１９５】
図４４には、６０℃で保存したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：７．０４％）の粉末Ｘ線回折図を示す。６．１°、１２．２°、１８．３°、２０．６°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１９６】
［比較例Ｎ］
６０℃の恒温槽の替わりに、１０℃の冷蔵庫を用いること以外は実施例Ｎと同様にして、前記結晶を一晩放置した。この結晶（水分：６．９６％）の粉末Ｘ線回折図は図１５と同様であった。
【０１９７】
［実施例Ｏ］
６０℃の恒温槽の替わりに、１２０℃の恒温槽を用いること以外は実施例Ｎと同様にして、前記結晶を一晩放置した。
【０１９８】
図４５には、１２０℃で保存したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：４．７３％）の粉末Ｘ線回折図を示す。６．１°、１２．２°、１８．３°、２０．６°及び２４．５°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０１９９】
［実施例Ｐ］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶１５０ｍｇを、相対湿度９７％に保ったデシケーター内で一晩放置した。
【０２００】
図４６には、相対湿度９７％で保存したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：８．６１％）の粉末Ｘ線回折図を示す。５．７°、１１．５°、１１．８°、１７．２°及び２３．１°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０２０１】
［比較例Ｐ１］
実施例１７に従って製造したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶１５０ｍｇを、相対湿度７５％の恒温恒湿機中で一晩放置した。この結晶（水分：５．４３％）の粉末Ｘ線回折図は図１５と同様であった。
【０２０２】
［比較例Ｐ２］
実施例Ｇに従って得られたモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶２００ｍｇを、相対湿度１０％に保ったデシケーター内で一晩放置した。この結晶の粉末Ｘ線回折図は図３７と同様であった。
【０２０３】
［実施例Ｑ］
実施例Ｆに従って得られたモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶２４０ｍｇを、６０℃で減圧乾燥した。
【０２０４】
図４７には、６０℃で減圧乾燥したモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶（水分：１．０４％）の粉末Ｘ線回折図を示す。６．６°、１３．９°、２２．９°及び２６．３°の回折角度（２θ、ＣｕＫα線）に特徴的な回折Ｘ線のピークを示した。
【０２０５】
［比較例Ｑ］
実施例Ｆに従って得られたモナティンの（２Ｒ、４Ｒ）体カリウム塩結晶１５０ｍｇを、４０℃で減圧乾燥した。この結晶の粉末Ｘ線回折図は図３６と同様であった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
モナティンの非天然型立体異性体塩の結晶。
【請求項２】
モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体の塩の何れかの結晶である請求の範囲１記載の結晶。
【請求項３】
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩の結晶である請求の範囲２記載の結晶。
【請求項４】
当該塩がアンモニウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩から選択される請求の範囲１記載の結晶。
【請求項５】
当該立体異性体塩を、少なくとも９５％の化学純度で有する請求の範囲１又は３記載の結晶。
【請求項６】
少なくとも９４％の光学純度を有する請求の範囲１、３又は５記載の結晶。
【請求項７】
モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体から成る立体異性体の中から選択される、少なくとも２種異性体混合物の塩の結晶である請求の範囲１記載の結晶。
【請求項８】
ショ糖の少なくとも１０００倍の甘味強度を有する請求の範囲１記載の結晶。
【請求項９】
モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体塩と混合状態にある請求の範囲１又は３記載の結晶。
【請求項１０】
全モナティン塩に対して、当該モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体塩を多くとも７０％含有する請求の範囲９記載の結晶。
【請求項１１】
当該モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体塩とモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩との混合物結晶の状態にある請求の範囲９記載の結晶。
【請求項１２】
当該モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体塩と当該モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩との比率が１：１である請求の範囲１１記載の結晶。
【請求項１３】
請求の範囲１〜１２何れか記載の結晶を含有することを特徴とする甘味剤。
甘味剤用の担体及び／又は増量剤を含んでいてもよい。
【請求項１４】
請求の範囲１〜１２何れか記載の結晶を含有し、又は使用して得られたことを特徴とする甘味が付与された飲食品等の製品。
【請求項１５】
糖類、並びに他の人工甘味料及び天然の甘味料の少なくとも１種を含有する請求の範囲１３又は１４記載の甘味剤又は飲食品等の製品。
【請求項１】
モナティンの非天然型立体異性体塩の結晶。
【請求項２】
モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体の塩の何れかの結晶である請求の範囲１記載の結晶。
【請求項３】
モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩の結晶である請求の範囲２記載の結晶。
【請求項４】
当該塩がアンモニウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩から選択される請求の範囲１記載の結晶。
【請求項５】
当該立体異性体塩を、少なくとも９５％の化学純度で有する請求の範囲１又は３記載の結晶。
【請求項６】
少なくとも９４％の光学純度を有する請求の範囲１、３又は５記載の結晶。
【請求項７】
モナティンの（２Ｓ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｒ）体及び（２Ｒ，４Ｓ）体から成る立体異性体の中から選択される、少なくとも２種異性体混合物の塩の結晶である請求の範囲１記載の結晶。
【請求項８】
ショ糖の少なくとも１０００倍の甘味強度を有する請求の範囲１記載の結晶。
【請求項９】
モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体塩と混合状態にある請求の範囲１又は３記載の結晶。
【請求項１０】
全モナティン塩に対して、当該モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体塩を多くとも７０％含有する請求の範囲９記載の結晶。
【請求項１１】
当該モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体塩とモナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩との混合物結晶の状態にある請求の範囲９記載の結晶。
【請求項１２】
当該モナティンの（２Ｓ，４Ｓ）体塩と当該モナティンの（２Ｒ，４Ｒ）体塩との比率が１：１である請求の範囲１１記載の結晶。
【請求項１３】
請求の範囲１〜１２何れか記載の結晶を含有することを特徴とする甘味剤。
甘味剤用の担体及び／又は増量剤を含んでいてもよい。
【請求項１４】
請求の範囲１〜１２何れか記載の結晶を含有し、又は使用して得られたことを特徴とする甘味が付与された飲食品等の製品。
【請求項１５】
糖類、並びに他の人工甘味料及び天然の甘味料の少なくとも１種を含有する請求の範囲１３又は１４記載の甘味剤又は飲食品等の製品。
【図３】
【図６】
【図９】
【図１２】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１８】
【図２０】
【図２２】
【図２４】
【図２６】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８−１】
【図３８−２】
【図３９−１】
【図３９−２】
【図４０−１】
【図４０−２】
【図４１−１】
【図４１−２】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図１】
【図２】
【図４】
【図５】
【図７】
【図８】
【図１０】
【図１１】
【図１３】
【図１７】
【図１９】
【図２１】
【図２３】
【図２５】
【図２７】
【図６】
【図９】
【図１２】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１８】
【図２０】
【図２２】
【図２４】
【図２６】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８−１】
【図３８−２】
【図３９−１】
【図３９−２】
【図４０−１】
【図４０−２】
【図４１−１】
【図４１−２】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図１】
【図２】
【図４】
【図５】
【図７】
【図８】
【図１０】
【図１１】
【図１３】
【図１７】
【図１９】
【図２１】
【図２３】
【図２５】
【図２７】
【公開番号】特開２００９−２９８８０７（Ｐ２００９−２９８８０７Ａ）
【公開日】平成２１年１２月２４日（２００９．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２１４３４３（Ｐ２００９−２１４３４３）
【出願日】平成２１年９月１６日（２００９．９．１６）
【分割の表示】特願２００３−５４７３６６（Ｐ２００３−５４７３６６）の分割
【原出願日】平成１４年１１月２９日（２００２．１１．２９）
【出願人】（０００００００６６）味の素株式会社 (887)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１２月２４日（２００９．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年９月１６日（２００９．９．１６）
【分割の表示】特願２００３−５４７３６６（Ｐ２００３−５４７３６６）の分割
【原出願日】平成１４年１１月２９日（２００２．１１．２９）
【出願人】（０００００００６６）味の素株式会社 (887)
【Ｆターム（参考）】
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