新規ユビキチン活性化酵素Ｕｂａ６を提供する。Ｕｂａ６経路を介してユビキチンを阻害するための組成物および方法を提供する。ユビキチン化の新規阻害剤を同定する方法も提供する。新規ＲＮＡｉ分子も提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｕｂａ６活性を阻害する方法であって、Ｕｂａ６を、ユビキチン−アデニル酸中間体の形成を阻害する化合物と接触させることを含む方法。
【請求項２】
前記化合物が、Ｕｂａ６のアデニル化ドメインと結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
インビトロまたはインビボで行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
組織培養細胞内で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
Ｕｂａ６活性を阻害する方法であって、Ｕｂａ６を、Ｕｂａ６のチオールエステル化を阻害する化合物と接触させることを含む方法。
【請求項６】
インビトロまたはインビボで行われる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
組織培養細胞内で行われる、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
Ｕｂａ６活性を阻害する方法であって、Ｕｂａ６を、ユビキチン結合酵素へのユビキチン転移を阻害する化合物と接触させることを含む方法。
【請求項９】
前記化合物が、Ｕｂａ６のＵｂｌドメインと結合する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
インビトロまたはインビボで行われる、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
組織培養細胞内で行われる、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記ユビキチン結合酵素が、Ｅ２Ｃ、Ｅ２Ｄ１、Ｅ２Ｄ２、Ｅ２Ｄ３、Ｅ２Ｄ４、Ｅ２Ｅ１、Ｅ２Ｇ、Ｅ２Ｓ、Ｅ２Ｔ、およびＥ２Ｚから成る群より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記ユビキチン結合酵素が、Ｅ２Ｚである、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
ユビキチン活性化を阻害する方法であって、Ｕｂａ６を、Ｕｂａ６の触媒性システインドメインを阻害する化合物と接触させることを含む方法。
【請求項１５】
インビトロまたはインビボで行われる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
組織培養細胞内で行われる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
Ｕｂａ６活性を必要とする生物内で、Ｕｂａ６活性を低下させる方法であって、
Ｕｂａ６のｍＲＮＡの一部と相補的な１種または複数種のｓｉＲＮＡを前記生物へ投与することを含む方法。
【請求項１８】
前記ｓｉＲＮＡが、配列番号１、配列番号２、および配列番号３から成る群より選択されるＲＮＡ配列である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記Ｕｂａ６のｍＲＮＡの一部が、ＴｈｉＦドメイン、触媒性システインドメイン、アデニル化ドメイン、またはユビキチン様ドメインをコードする、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記生物が、ヒトである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
ユビキチン化を必要とする生物内で、ユビキチン化を低下させる方法であって、
前記生物内でＵｂａ６活性の１種または複数種を阻害する１種または複数種の化合物を前記生物へ投与することを含む方法。
【請求項２２】
前記化合物が、抗体またはｓｉＲＮＡである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記生物が、ヒトである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
Ｅ２Ｚのチャージングを阻害する化合物を同定する方法であって、
Ｅ２Ｚおよびユビキチンを含む試料を提供することと、
前記試料を前記化合物と接触させることと、
前記試料をＵｂａ６またはその生物活性部分と接触させることと、
前記化合物の存在下にて、ユビキチンがＥ２Ｚと結合しているかどうかを決定することとを含み、
前記化合物がＥ２Ｚのチャージングを阻害する場合は、ユビキチンがＥ２Ｚと結合していない、方法。
【請求項２５】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上でＥ２Ｚを視覚化することをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
Ｕｂａ６活性を阻害する化合物を同定する方法であって、
ユビキチン結合酵素およびユビキチンを含む試料を提供することと、
前記試料を前記化合物と接触させることと、
前記試料をＵｂａ６またはその生物活性部分と接触させることと、
前記化合物の存在下にて、ユビキチンが前記ユビキチン結合酵素と結合しているかどうかを決定することとを含み、
前記化合物がＵｂａ６活性を阻害する場合は、ユビキチンが前記ユビキチン結合酵素と結合していない、方法。
【請求項２７】
前記ユビキチン結合酵素が、Ｅ２Ｃ、Ｅ２Ｄ１、Ｅ２Ｄ２、Ｅ２Ｄ３、Ｅ２Ｄ４、Ｅ２Ｅ１、Ｅ２Ｇ、Ｅ２Ｓ、Ｅ２Ｔ、およびＥ２Ｚから成る群より選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ユビキチン結合酵素が、Ｅ２Ｚである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
Ｕｂａ６活性を阻害する化合物を同定する方法であって、
ユビキチンを含む試料を提供することと、
前記試料を前記化合物と接触させることと、
前記試料をＵｂａ６またはその生物活性部分と接触させることと、
前記化合物の存在下にて、ユビキチンが、Ｕｂａ６またはその生物活性部分と結合しているかどうかを決定することとを含み、
前記化合物がＵｂａ６活性を阻害する場合は、ユビキチンがＵｂａ６と結合していない、方法。
【請求項３０】
ユビキチンが、チオール結合を介して、Ｕｂａ６またはその生物活性部分と結合している、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ユビキチンが、固定化される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
配列番号１、配列番号２、および配列番号３から成る群より選択される核酸配列と少なくとも約７０％の同一性を有するＲＮＡ配列であって、前記ＲＮＡ配列が、Ｕｂａ６活性を阻害することができる、ＲＮＡ配列。
【請求項３３】
前記Ｕｂａ６活性が、ユビキチンの活性化、ユビキチン−アデニル酸中間体の形成、ユビキチンのチオールエステル化、ユビキチン結合酵素へのユビキチン転移、および標的ポリペプチドのユビキチン化から成る群より選択される、請求項３２に記載のＲＮＡ配列。
【請求項３４】
前記ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項３２に記載のＲＮＡ配列。
【請求項３５】
配列番号１、配列番号２、および配列番号３から成る群より選択される、ＲＮＡ配列。
【請求項３６】
前記ＲＮＡ配列が、Ｕｂａ６活性を阻害することができる、請求項３５に記載のＲＮＡ配列。
【請求項３７】
前記Ｕｂａ６活性が、ユビキチンの活性化、ユビキチン−アデニル酸中間体の形成、ユビキチンのチオールエステル化、ユビキチン結合酵素へのユビキチン転移、および標的ポリペプチドのユビキチン化から成る群より選択される、請求項３６に記載のＲＮＡ配列。
【請求項３８】
前記ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項３５に記載のＲＮＡ配列。

【図１Ａ】

【図１３Ｅ】

【図２２−１】

【図２２−２】

【図１Ｃ】

【図１Ｄ】

【図１Ｆ】

【図１Ｇ】

【図１Ｈ−１】

【図１Ｈ−２】

【図１Ｈ−３】

【図１Ｈ−４】

【図１Ｈ−５】

【図１Ｈ−６】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図２Ｃ】

【図２Ｄ】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図４Ｃ】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１１Ｃ】

【図１２】

【図１３Ｂ】

【図１３Ｃ】

【図１３Ｄ】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１４Ｃ】

【図１４Ｄ】

【図１５Ｂ】

【図１５Ｃ】

【図１６Ａ】

【図１６Ｃ】

【図１８Ｂ】

【図１８Ｃ】

【図１８Ｄ】

【図１８Ｅ】

【図１８Ｆ】

【図１９Ａ】

【図１９Ｂ】

【図２０Ｃ】

【図２０Ｄ】

【図２０Ｅ】

【図２０Ｆ】

【図２０Ｇ】

【図２０Ｈ】

【図２１Ｃ】

【図２１Ｄ】

【図２１Ｅ】

【公表番号】特表２０１０−５１６２５４（Ｐ２０１０−５１６２５４Ａ）
【公表日】平成２２年５月２０日（２０１０．５．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５４６５０７（Ｐ２００９−５４６５０７）
【出願日】平成２０年１月１７日（２００８．１．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５１３１２
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０８９３２９
【国際公開日】平成２０年７月２４日（２００８．７．２４）
【出願人】（５０４０００４１０）プレジデント　アンド　フェローズ　オブ　ハーバード　カレッジ (10)
【Ｆターム（参考）】