【課題】ヒト上皮成長因子受容体（EGFR）に特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体、及び関連する抗体ベースの組成物及び分子を提供する。
【解決手段】V-D-J組換え及びアイソタイプ・スイッチングを起こすことにより作製した、またトランスフェクトーマ又はトランスジェニックマウスなどの非ヒトトランスジェニック動物により作製した、複数のアイソタイプの抗ＥＧＦＲヒトモノクローナル抗体。さらに、該抗体を含む医薬組成物や、該抗体を産生する非ヒトトランスジェニック動物及びハイブリドーマ、並びに該抗体を用いるＥＧＦＲ発現癌細胞の成長阻害方法及び診断方法。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトEGFRに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体であって、IgG1、IgA、IgE、IgM、IgG4、及びIgD 抗体から成る群より選択される、ヒトモノクローナル抗体。
【請求項２】
前記抗体がIgG1抗体である、請求項１に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項３】
前記抗体がEGFRリガンドのヒトEGFRへの結合を阻害する、請求項１に記載のヒト抗体。
【請求項４】
前記EGFRリガンドがEGF又はTGF-αである、請求項１に記載のヒト抗体。
【請求項５】
前記抗体が、少なくとも約10⁸M^-1の平衡結合定数（K_A）でヒトEGFRに結合する、請求項１に記載のヒト抗体。
【請求項６】
前記抗体が、少なくとも約10⁹M^-1の平衡結合定数（K_A）でヒトEGFRに結合する、請求項１に記載のヒト抗体。
【請求項７】
前記抗体が、EGFRリガンドのヒトEGFRへの結合を少なくとも約５０％、遮断する、請求項１に記載のヒト抗体。
【請求項８】
IgG1重鎖由来の可変領域と、カッパ軽鎖由来の可変領域とを含む、請求項２に記載のヒト抗体。
【請求項９】
それぞれSEQ ID NO:1 及びSEQ ID NO:3に記載されたヌクレオチド配列及びその保存的配列改変をそれらの可変領域に含む、ヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖核酸にコードされた請求項１に記載のヒト抗体。
【請求項１０】
それぞれSEQ ID NO:2及びSEQ ID NO:4に示すアミノ酸配列及びその保存的配列改変を含む重鎖及びカッパ軽鎖可変領域を有する、請求項１に記載のヒト抗体。
【請求項１１】
抗体2F8により規定されるEGFRのエピトープに結合する、単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項１２】
抗体2F8の結合特性を有する、単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項１３】
補体を活性化しない、請求項１に記載のヒト抗体。
【請求項１４】
少なくとも約10⁸M^-1の親和結合定数（K_A）でEGFRに結合する、請求項１に記載のヒト抗体。
【請求項１５】
EGFRに結合して、EGFRのEGFもしくはTGF-α誘導性自己リン酸化を阻害する、請求項１に記載のヒト抗体。
【請求項１６】
EGFR発現細胞に結合して成長を阻害する、請求項１に記載のヒト抗体。
【請求項１７】
前記細胞が、膀胱細胞、乳房細胞、結腸細胞、腎細胞、卵巣細胞、前立腺細胞、腎細胞、扁平細胞、及び非小肺細胞から成る群より選択される腫瘍細胞である、請求項１６に記載のヒト抗体。
【請求項１８】
前記細胞が滑膜線維芽細胞及びケラチノサイトから成る群より選択される、請求項１６に記載のヒト抗体。
【請求項１９】
EGFR発現細胞に結合して、ヒトエフェクタ細胞の存在下で前記細胞の溶解（ADCC）を誘導する、請求項１に記載のヒト抗体。
【請求項２０】
EGFR発現細胞に結合はするが、前記細胞の補体媒介性溶解は誘導しない、請求項１に記載のヒト抗体。
【請求項２１】
前記抗体がFabフラグメント又は一本鎖抗体である、請求項１に記載の単離されたヒト抗体。
【請求項２２】
ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する非ヒトトランスジェニック動物から得たＢ細胞を不死化細胞に融合させて含むハイブリドーマにより産生される、請求項１に記載の単離されたヒト抗体。
【請求項２３】
ヒト重鎖及びヒト軽鎖をコードする核酸を含むトランスフェクトーマにより産生される、請求項１に記載の単離されたヒト抗体。
【請求項２４】
ヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する非ヒトトランスジェニック動物から得たＢ細胞を不死化細胞に融合させて含むハイブリドーマであって、請求項１に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合部分を検出可能な量、産生する、ハイブリドーマ。
【請求項２５】
ヒト重鎖及びヒト軽鎖をコードする核酸を含むトランスフェクトーマであって、請求項１に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合部分を検出可能な量、産生する、トランスフェクトーマ。
【請求項２６】
それぞれSEQ ID NO:1 及びSEQ ID NO:3に記載されたヌクレオチド配列又はその保存的改変をそれらの可変領域に含む、ヒト重鎖及びヒト軽鎖をコードする核酸を含む、請求項２５に記載のトランスフェクトーマ。
【請求項２７】
請求項１に記載の抗体を発現する非ヒトトランスジェニック動物であって、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項２８】
ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する非ヒトトランスジェニック動物を、EGFR又はEGFR発現細胞で、前記動物のＢ細胞により抗体が産生されるように免疫するステップと；
前記動物のＢ細胞を単離するステップと；
前記Ｂ細胞を骨髄腫細胞に融合させて、前記抗体を分泌する不死のハイブリドーマ細胞を形成するステップと；
を含む、請求項１に記載の抗体を作製する方法。
【請求項２９】
請求項１に記載のヒト抗体と、ヒト抗原提示細胞（APC）に対する結合特異性部分とを含む二重特異的分子。
【請求項３０】
請求項１に記載のヒト抗体と、ヒトFc受容体に対する結合特異性部分とを含む二重特異的分子。
【請求項３１】
前記Fc受容体がヒトFcγRI又はヒトFcα受容体である、請求項３０に記載の二重特異的分子。
【請求項３２】
Fc受容体に、前記受容体の免疫グロブリン結合部位とは異なる部位で結合する、請求項３０に記載の二重特異的分子。
【請求項３３】
請求項１に記載のヒト抗体と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
【請求項３４】
請求項１に記載の２種以上のヒト抗体又はその抗原結合部分の組合せを含む組成物であって、前記抗体又はその抗原結合部分のそれぞれが、EGFRの異なるエピトープに結合する、組成物。
【請求項３５】
請求項１に記載のヒト抗体及び化学療法薬を含む組成物。
【請求項３６】
請求項１に記載のヒト抗体を細胞毒に連結して含むイムノトキシン。
【請求項３７】
EGFR発現細胞の成長が阻害されるように、該細胞を、有効量の請求項１に記載の抗体に接触させるステップを含む、EGFR発現細胞の成長を阻害する方法であって、但し前記抗体がEGFRリガンドのヒトEGFRへの結合を阻害する、方法。
【請求項３８】
前記細胞が、膀胱細胞、乳房細胞、結腸細胞、腎細胞、卵巣細胞、前立腺細胞、腎細胞、扁平細胞、非小肺細胞、滑膜線維芽細胞、及びケラチノサイトから成る群より選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
EGFR発現細胞の細胞溶解を誘導する方法であって、EGFR発現細胞の細胞溶解が起きるように、エフェクタ細胞の存在下で、請求項１に記載の抗体にEGFR発現細胞を接触させるステップを含む、方法。
【請求項４０】
前記細胞が、膀胱細胞、乳房細胞、結腸細胞、腎細胞、卵巣細胞、前立腺細胞、腎細胞、扁平細胞、非小肺細胞、滑膜線維芽細胞、及びケラチノサイトから成る群より選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
EGFRの発現が媒介する疾患を治療又は予防する方法であって、請求項１に記載のヒト抗体を、EGFR媒介疾患を治療又は予防するのに有効量、対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項４２】
前記疾患が癌である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記疾患が自己免疫疾患である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記ヒト抗体が、Fc受容体に対する結合特異性部分に結合されている、請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
前記ヒト抗体が細胞毒に結合されている、請求項４１に記載の方法。
【請求項４６】
治療薬の同時投与をさらに含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４７】
前記治療薬がドキソルビシン（アドリアマイシン）、シスプラチンブレオマイシンスルフェート、カルムスチン、クロラムブシル、及びシクロホスファミドヒドロキシウレア、から成る群より選択される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記癌が膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎臓癌、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌、並びに頭部及び頸部の癌からなる群より選択される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４９】
前記疾患が上皮の過増殖を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項５０】
前記疾患が炎症性関節炎である、請求項４１に記載の方法。
【請求項５１】
試料中のEGFR抗原又はEGFR発現細胞の存在を検出する方法であって、
前記試料を、請求項１に記載の抗体に、前記抗体又はその部分とEGFRとの間で複合体形成が可能な条件下で、接触させるステップと、
複合体の形成を検出するステップと
を含む、方法。
【請求項５２】
EGFRに結合するヒト抗体の軽鎖、重鎖、又は軽鎖及び重鎖の両方、の可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクタ。
【請求項５３】
EGFRに結合するヒト抗体の軽鎖、重鎖、又は軽鎖及び重鎖の両方、の定常領域をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項５２に記載の発現ベクタ。
【請求項５４】
それぞれSEQ ID NO:2 及びSEQ ID NO:4に示すアミノ酸配列及びその保存的配列改変を含む重鎖及び軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクタ。
【請求項５５】
請求項５２の発現ベクタを含むトランスフェクトーマ。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図４Ｃ】

【図４Ｄ】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１１Ｃ】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【公開番号】特開２００９−１４８２８２（Ｐ２００９−１４８２８２Ａ）
【公開日】平成２１年７月９日（２００９．７．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−３５８９５（Ｐ２００９−３５８９５）
【出願日】平成２１年２月１８日（２００９．２．１８）
【分割の表示】特願２００３−５０３１７４（Ｐ２００３−５０３１７４）の分割
【原出願日】平成１４年６月１３日（２００２．６．１３）
【出願人】（５０３４５８２６１）ゲンマブ　エー／エス (3)
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＭＡＢ　Ａ／Ｓ
【Ｆターム（参考）】