二置換フタラジンヘッジホッグ経路アンタゴニスト
本発明は、癌の治療に有用な新規の１，４−二置換フタラジンヘッジホッグ経路アンタゴニストを提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘッジホッグ経路アンタゴニスト、およびより具体的には、新規の１，４−二置換フタラジンおよびその治療的使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヘッジホッグ（Ｈｈ）シグナル伝達経路は、細胞分化および増殖に関わることによって胚パターン形成および成体組織維持に重要な役割を果たす。ソニックヘッジホッグ（Ｓｈｈ）、インディアンヘッジホッグ（Ｉｈｈ）およびデザートヘッジホッグ（Ｄｈｈ）を含むヘッジホッグ（Ｈｈ）タンパク質ファミリーは、自己触媒的切断およびコレステロールのアミノ末端ペプチドへのカップリングを含む翻訳後修飾を受けてシグナル伝達活性を有するフラグメントを生成する、分泌糖タンパク質である。Ｈｈは、１２回膜貫通型タンパク質Ｐｔｃｈ（Ｐｔｃｈ１およびＰｔｃｈ２）と結合し、それによりＰｔｃｈにより媒介されるＳｍｏｏｔｈｅｎｅｄ（Ｓｍｏ）の抑制を軽減する。Ｓｍｏの活性化が一連の細胞間イベントを引き起こし、最終的にＧｌｉの転写因子（Ｇｌｉ１、Ｇｌｉ２およびＧｌｉ３）を安定化し、細胞増殖、細胞生存、血管新生および浸潤に関与するＧｌｉ依存性遺伝子を発現させる。
【０００３】
Ｓｈｈシグナル伝達の異常活性化が種々の腫瘍形成（例えば、膵臓癌、髄芽腫、基底細胞癌、小細胞肺癌および前立腺癌）を引き起こすという発見に基づいて、Ｈｈシグナル伝達は近年顕著に関心を集めている。例えばステロイドアルカロイド化合物ＩＰ−６０９、アミノプロリン化合物ＣＵＲ６１４１４および２，４−二置換チアゾール化合物ＪＫ１８などの複数のＨｈアンタゴニストが当該技術分野で報告されている。特許文献１では、ヘッジホッグアンタゴニストと主張されている特定の１，４−二置換フタラジン化合物が開示されている。同様に、特許文献２では、ヘッジホッグ経路に関連する病状の診断および治療に関連する特定の１，４二置換フタラジン化合物が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００５０３３２８８号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００８１１０６１１号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
有効なヘッジホッグ経路阻害剤、特に望ましい薬力学的、薬物動態学的および毒物学的特性を有するものについての必要性が依然として存在する。本発明は、この経路の有効なアンタゴニストである新規の１，４−二置換フタラジンを提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、式Ｉの化合物
【化１】
（式中、
Ｒ１は、水素、フルオロ、シアノ、トリフルオロメチルまたはメトキシであり、
Ｒ２は、水素、フルオロまたはトリフルオロメチルであり、
Ｒ３は、水素またはクロロであり、ただしＲ２およびＲ３のうちの少なくとも１つは水素であり、
Ｒ４は、クロロ、フルオロ、シアノ、トリフルオロメチル、メトキシ、ジフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシであり、
【化２】
は、
【化３】
からなる群より選択される置換ピペラジン−１，４−ジイルを表す）
またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。
【０００７】
上記のピペラジン環構造において、描かれるようにピペラジン環の左側は二環式フタラジンに結合され、ピペラジン環の右側がカルボニルに結合されることは理解されるだろう。
【０００８】
本発明の化合物は、第三級アミン部分を含み、多くの無機酸および有機酸と反応して、製薬的に許容し得る酸付加塩を生成できることは当業者によって理解されるだろう。そのような製薬的に許容し得る酸付加塩およびそれらを調製するための一般的な方法論は当該技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら，ＨＡＮＤＢＯＯＫ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＡＬＴＳ：ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，ＳＥＬＥＣＴＩＯＮ ＡＮＤ ＵＳＥ，（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」，「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ ６６，Ｎｏ．１，１９７７年，１月」を参照のこと。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の特定の実施形態は、式Ｉの化合物
（式中、
（ａ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、
（ｂ）Ｒ１は、フルオロであり、
（ｃ）Ｒ２は、水素またはフルオロであり、
（ｄ）Ｒ２は、水素であり、
（ｅ）Ｒ３は、水素であり、
（ｆ）Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｇ）Ｒ４は、フルオロまたはシアノであり、
（ｈ）Ｒ４は、フルオロであり、
【化４】
【化５】
【化６】
（ｌ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、
（ｍ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素であり、
（ｎ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、
（ｏ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素であり、
（ｐ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメトキシであり、
（ｑ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｒ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｓ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメトキシであり、
（ｔ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｕ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｖ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｗ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｘ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロであり、
（ｙ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、
【化７】
（ｚ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素であり、
【化８】
（ｚ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、
【化９】
（ａａ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
【化１０】
（ｂｂ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロまたはシアノであり、
【化１１】
）
またはその製薬的に許容し得る塩を含む。
【００１０】
本発明はまた、式１の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩を、製薬的に許容し得る賦形剤、担体または希釈剤とともに含む、医薬組成物を提供する。
【００１１】
本発明の化合物は、好ましくは、種々の経路によって投与される医薬組成物として処方される。好ましくは、そのような組成物は、経口または静脈投与用である。そのような医薬組成物およびそれらを調製するためのプロセスは、当該技術分野において周知である。例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら，ｅｄｓ．，第１９版，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，１９９５）を参照のこと。
【００１２】
本発明はまた、患者における脳腫瘍、基底細胞癌、食道癌、胃癌、膵臓癌、胆道癌、前立腺癌、乳癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、結腸直腸癌、肝臓癌、腎臓癌または黒色腫を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、式Ｉの化合物、またはその製薬的に許容し得る塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。
【００１３】
実際に投与される化合物の量は、治療される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重および反応、ならびに患者の症状の重症度を含む、関連状況下で医師によって決定されることは理解されるだろう。１日あたりの用量は、通常、体重の約０．１〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。一部の例において、上述の範囲の下限以下の用量レベルがより適切であってもよく、一方、他の場合において、さらに多い用量が利用されてもよい。従って、上述の用量範囲は、本発明の範囲を決して限定することを意図しない。本発明はまた、医薬として使用するための、式Ｉの化合物、またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。
【００１４】
さらに、本発明は、癌を治療するための医薬の製造における式Ｉの化合物、またはその製薬的に許容し得る塩の使用を提供する。特に、癌は、脳腫瘍、基底細胞癌、食道癌、胃癌、膵臓癌、胆道癌、前立腺癌、乳癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、結腸直腸癌、肝臓癌、腎臓癌および黒色腫からなる群より選択される。
【００１５】
さらに、本発明は、脳腫瘍、基底細胞癌、食道癌、胃癌、膵臓癌、胆道癌、前立腺癌、乳癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、結腸直腸癌、肝臓癌、腎臓癌または黒色腫を治療するための活性成分として、式Ｉの化合物、またはその製薬的に許容し得る塩を含む、医薬組成物を提供する。
【００１６】
式Ｉの化合物、またはその塩は、当該技術分野において公知の種々の手順、ならびに以下のスキーム、調製物および実施例に記載される手順によって調製され得る。記載される経路の各々についての特定の合成工程は、式Ｉの化合物、またはその塩を調製するために、異なる方法で組合されるか、または異なるスキームからの工程とともに組み合わされてもよい。
【００１７】
他に示さない限り、置換基は前記に定義されたとおりである。試薬および出発物質は、一般に、当業者に容易に利用可能である。他のものは、公知の構造的に類似した化合物の合成と同様である、有機化学および複素環化学の標準的な技術、ならびにいずれかの新規の手順を含む、以下の調製物および実施例に記載される手順によってなされ得る。
【００１８】
本明細書に使用される場合、以下の用語は、示される意味を有する：「Ｅｔ２Ｏ」はジエチルエーテルを指し；「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを指し；「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し；「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し；「ＭｅＯＨ」はメタノールを指し；「ＭＴＢＥ」はメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテルを指し；「ｂｏｃ」または「ｔ−ｂｏｃ」はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルを指し；「ＳＣＸ」は強カチオン交換を指し；「ＩＣ５０」は薬剤について可能な５０％の最大阻害反応を生じるその薬剤の濃度を指す。
【００１９】
【化１２】
式（６ｂ）の化合物は、スキーム１に描かれる反応に従って調製できる。
【００２０】
スキーム１の工程１において、１，４−ジクロロフタラジン（２）は、求核芳香族置換（ＳＮＡｒ）において置換ピペラジン（３ａ）または（３ｂ）と反応して、式（４ａ）または（４ｂ）のピペラジニルフタラジンを得ることができる。反応は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、または炭酸カリウムなどの適切な塩基を有するＤＭＳＯまたはＤＭＦなどの双極性非プロトン溶媒中で起こる。混合物は約７０〜１５０℃で加熱する。当業者は、一部の場合において、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレートなどのように、少しのヒンダード窒素原子の保護を可能にする、式（３ａ）のピペラジンにおいてｔ−ｂｏｃ基などの保護基を使用することは有益であることを認識するだろう。反対に、反応が少しのヒンダード窒素で起こる場合、ｃｉｓ−２，６−ジメチルピペラジンまたはピペラジン−２−イル−メタノールなどの保護されていないピペラジンを使用することが可能であり得る。２，５−ジメチルピペラジンを用いる場合、必要とされる保護はいずれもない。
【００２１】
工程２において、式（４）のフタラジニルクロリドは、Ｓｕｚｕｋｉクロスカップリング条件下でフェニルボロン酸と反応する。当業者は、そのようなクロスカップリング反応を促進するのに有用な種々の条件が存在することを認識するだろう。反応条件は、ジオキサンまたはジオキサン／水などの適切な溶媒を使用する。反応は、炭酸セシウムまたはフッ化セシウムなどの塩基の存在下でなされる。反応は、約８０〜１１０℃の温度にて不活性雰囲気下で、ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４−ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（ＩＩ）、（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィン）フェロセン）パラジウム（ＩＩ）クロリド、または（ＳＰ−４−１）−ビス［ビス（１，１−ジメチルエチル）（４−メトキシフェニル）ホスフィン−κＰ］ジクロロ−パラジウム（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００７，７２，５１０４−５１１２における触媒Ｄの合成に従って調製される）などのパラジウム触媒の存在下で起こり、式（６ａ）または（６ｂ）のフェニルピペラジニルフタラジンを生じる。
【００２２】
あるいは、工程３において、式（５）のフェニルフタラジニルクロリドは、上記の工程１に記載したものと同様の求核芳香族置換（ＳＮＡｒ）において式（３ａ）または（３ｂ）のピペラジンと反応する。
【００２３】
スキーム１、工程４において、式（６ａ）のフェニルピペラジニルフタラジンに存在するものなどのアミン官能性は、（６ｂ）に脱保護され、さらに反応して、本発明の化合物を生じ得る。窒素保護基を除去するための方法は、当該技術分野において周知である（例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）を参照のこと）。例えば、式（６）のフェニルピペラジニルフタラジンのｂｏｃ脱保護は、塩化水素を含むなどの酸性条件の下でなされ得る。得られたＨＣｌ塩は、ＳＣＸカラムまたは炭酸水素ナトリウムなどの無機塩基を用いて遊離アミンに変換され得る。
【００２４】
スキーム１における式（５）の化合物は、商業的に利用可能であるか、あるいは本明細書に記載されるものと同様の方法によって、または当該技術分野で確立された手順を用いて容易に調製され得ることは、当業者によって理解されるだろう。例えば、フェニルマグネシウムブロミドと無水フタル酸とのグリニャール反応から生成された、２−フェニルカルボニル安息香酸は、ヒドラジンと環化して、４−フェニル−２Ｈ−フタラジン−１−オンを生じることができる。オキシ塩化リンでの後の処理により、式（５）の１−クロロ−４−フェニル−フタラジンが生じる。あるいは、１，４−ジクロロフタラジンは、Ｓｕｚｕｋｉクロスカップリング反応においてフェニルボロン酸と反応して、対応する式（５）の１−クロロ−４−フェニル−フタラジンが生じ得る。
【００２５】
【化１３】
スキーム２において、脱保護された式（６ｂ）のピペラジニルフタラジンは、ジクロロメタンなどの不活性溶媒中で置換フェニルイソシアネートを用いてアシル化されて、式（１）の尿素を生じ得る。
【００２６】
以下の調製物および実施例は、さらに詳細に本発明を例示し、式（Ｉ）の化合物の典型的な合成を表すために提供される。本発明の化合物の命名は、一般に、ＣｈｅｍＤｒａｗ Ｕｌｔｒａ（登録商標）１０．０によって提供される。
【００２７】
調製物１
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート
【化１４】
ＤＭＳＯ（９７ｍＬ）中の１−クロロ−４−（４−フルオロフェニル）フタラジン（５．０ｇ，１９．３ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（５．０３ｇ，２５．１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（８．１ｍＬ，５９．０ｍｍｏｌ）の混合物を、３日間、１１５℃にて加熱する。反応混合物を水に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２でリンスする。Ｅｔ２Ｏで抽出する。有機層を水（２×）で洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中の０〜２０％ＥｔＯＡｃの勾配）により精製して、淡黄色の泡状物として標題化合物（７．０５ｇ，８４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４２３．２（Ｍ＋１）。
【００２８】
別法
２５℃にて、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（２７６ｇ，１．３８ｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ（２．５６Ｌ）中の１−クロロ−４−（４−フルオロフェニル）フタラジン（２７５ｇ，１．０６ｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３４６ｍＬ，１．９９ｍｏｌ）のスラリーに加える。混合物を９時間、１０２℃まで加熱する。反応物を２５℃まで冷却し、４８時間攪拌する。混合物をＥｔＯＡｃ（２．５Ｌ）および水（３．５Ｌ）に加える。水相を酢酸エチル（２×２．０Ｌ）で抽出する。有機層を合わせ、水（２．５Ｌ）で洗浄し、茶色の泡状物まで濃縮する。泡状物をアセトニトリル（１．０Ｌ）に溶解し、３０分間、１℃まで冷却する。沈殿物を濾過して、黄褐色の固体を得る。母液を濃縮し、残渣を３０分間、アセトニトリル（５００ｍＬ）中でスラリーにする。混合物を濾過して、黄褐色の固体を得る。固体沈殿物を合わせ、真空オーブン（１４ｔｏｒｒ，２５℃）中で２５時間乾燥させて、黄褐色の固体として標題化合物（４３５ｇ，９６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４２３．０（Ｍ＋１）。
【００２９】
３〜６日間、１１５〜１５０℃の温度にて、１．５当量の適切に置換したピペラジンおよび３〜５当量のトリエチルアミンを用いて、調製物１に記載した手順に本質的に従って、以下の表のピペラジニルフタラジンを調製する。
【００３０】
【表１】
【００３１】
調製物２の別法
１−クロロ−４−（４−フルオロフェニル）フタラジン（２００ｇ，７７３ｍｍｏｌ）を、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（２３２ｇ，１．１６ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（６７４ｍＬ，２８．１ｍｏｌ）、およびＤＭＳＯ（２．０Ｌ）の溶液に加える。混合物を６０時間、１２０℃まで加熱する。混合物を２５℃まで冷却し、氷水（３．０Ｌ）に注ぎ、濾過する。固体を回収し、ＣＨ２Ｃｌ２（２．０Ｌ）に溶解し、水（２．０Ｌ）で抽出する。有機相を濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２中の３％ＴＨＦで溶出するシリカプラグ（３．０ｋｇのシリカ）に加えて、黄色の泡状物（１２６ｇ，３８％）として標題化合物を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４２３．０（Ｍ＋１）。
【００３２】
調製物７
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−エチル−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート
【化１５】
１２０℃にて１日間、ＤＭＳＯ（７５ｍＬ）中の１−クロロ−４−（４−フルオロフェニル）フタラジン（５．０２ｇ，１９．４ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−エチルピペラジン−１−カルボキシレート（５．００ｇ，２３．３ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（５．３８ｇ，３８．９ｍｍｏｌ）の混合物を加熱する。反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃでリンスする。ＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を水（２×）、次いでブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中に２０〜８０％ＥｔＯＡｃの勾配）により精製して、標題化合物（５．１１ｇ，６０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４３７．２（Ｍ＋１）。
【００３３】
ｃｉｓ−２，６−ジメチルピペラジンを用いて、調製物７に記載した手順に本質的に従って、以下の表のピペラジニルフタラジンを調製する。
【００３４】
【表２】
【００３５】
調製物９
（Ｒ）−（４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）ピペラジン−２−イル）メタノール
【化１６】
１−クロロ−４−（４−フルオロフェニル）フタラジン（０．１ｇ，０．３９ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−ピペラジン−２−イルメタノール（０．０７ｇ，０．５８ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．３４ｍＬ，１．９３ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１ｍＬ）に溶解する。反応物を１２０℃にて６４時間攪拌する。反応混合物を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中の０〜１０％の２Ｍアンモニア／ＭｅＯＨ）により精製して、茶色の固体として標題化合物（０．１１ｇ，８４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３３９．０（Ｍ＋１）。
【００３６】
適切に置換されたピペラジンを用いて、調製物９に記載した手順に本質的に従って、以下の表のピペラジニルフタラジンを調製する。
【００３７】
【表３】
【００３８】
調製物１４
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−クロロフタラジン−１−イル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート
【化１７】
１２０℃にて２日間、ＤＭＳＯ（２００ｍＬ）中の１，４−ジクロロフタラジン（１０．０ｇ，５０．２ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（１５．１ｇ，７５．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２１．０ｍＬ，１５０．７ｍｍｍｏｌ）の混合物を加熱する。反応混合物を水に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２でリンスする。Ｅｔ２Ｏで抽出する。有機層を水（２×）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中に０〜２０％ＥｔＯＡｃの勾配）により精製して、淡黄色の固体として標題化合物（６．０ｇ，３３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ （３５Ｃｌ）３６３．０（Ｍ＋１）。
【００３９】
調製物１５
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−クロロフタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート
【化１８】
８０℃にて１８時間、ＤＭＳＯ（１１０ｍＬ）中の１，４−ジクロロフタラジン（７．８０ｇ，３９．２ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（４．９８ｇ，２４．９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１０．３ｍＬ，７３．９ｍｍｏｌ）の混合物を加熱する。反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃでリンスする。ＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を水（２×）およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中に２０％〜８０％ＥｔＯＡｃの勾配）により精製して、標題化合物（４．１３ｇ，４６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ （３５Ｃｌ）３６３．０（Ｍ＋１）。
【００４０】
調製物１６
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（４−シアノフェニル）フタラジン−１−イル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート
【化１９】
９０℃にて一晩、１，４−ジオキサン（８０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）中の（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−クロロフタラジン−１−イル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（４．０ｇ，１１．０ｍｍｏｌ）、４−シアノフェニルボロン酸（２．４３ｇ，１６．５ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１４．４ｇ，４４．１ｍｍｏｌ）、および（ＳＰ−４−１）−ビス［ビス（１，１−ジメチルエチル）（４−メトキシフェニル）ホスフィン−κＰ］ジクロロパラジウム（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００７，７２，５１０４−５１１２）（７５．４ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）の混合物を加熱する。反応混合物を水とＣＨ２Ｃｌ２との間に分離する。水層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中に０〜２０％ＥｔＯＡｃの勾配）により精製して、淡い橙色の泡状物として標題化合物（４．４６ｇ，９４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４３０．２（Ｍ＋１）。
【００４１】
適切な４−クロロフタラジンおよびボロン酸を用いて、調製物１６に記載した手順に本質的に従って、以下の表のピペラジニルフタラジンを調製する。触媒としてビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４−ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（ＩＩ）を加える前に、調製物１９〜２０を脱気し、９０℃にて７２時間、得られた混合物を加熱する。
【００４２】
【表４】
【００４３】
調製物２１
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（４−メトキシフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート
【化２０】
１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）中の（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−クロロフタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（０．８１ｇ，２．２３ｍｍｏｌ）、４−メトキシベンゼンボロン酸（１．０７ｇ，７．０５ｍｍｏｌ）およびフッ化セシウム（１．０５ｇ，６．９４ｍｍｏｌ）の脱気した混合物を（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィン）フェロセン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（０．２７ｇ，０．３３ｍｍｏｌ）で処理する。９５℃にて一晩、得られた混合物を加熱する。反応混合物を、水とＥｔＯＡｃとの間に分離する。水層をＥｔＯＡｃで抽出する。有機部分を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中に１５〜７０％ＥｔＯＡｃの勾配）により精製して、標題化合物（０．９４ｇ，９６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４３５．２（Ｍ＋１）。
【００４４】
調製物２２
（Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）フタラジン
【化２１】
１，４−ジオキサン（５０ｍＬ）中の（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（７．０５ｇ，１６．２ｍｍｏｌ）の溶液を１，４−ジオキサン（２５ｍＬ）中の４Ｍ ＨＣｌで処理する。ＭｅＯＨを加えて、得られた沈殿物を溶解し、周囲温度にて２時間攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮する。残渣をＭｅＯＨに溶解し、５０ｇのＶａｒｉａｎ（登録商標）ＳＣＸカラムに注ぐ。ＭｅＯＨおよびＣＨ２Ｃｌ２でリンスし、次いでＭｅＯＨ中の１：１のＣＨ２Ｃｌ２：２Ｍアンモニアで生成物を溶出する。減圧下で溶出液を濃縮して、淡い黄色の泡状物として標題化合物（４．８３ｇ，９３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３２３．２（Ｍ＋１）。
【００４５】
調製物２２についての別法
メタノール（２．８２Ｌ）を、ドライアイスを含む１：１アセトン／水浴槽により０℃まで冷却し、３０分にわたって塩化アセチル（１４２ｍＬ，２．０ｍｏｌ）を滴下し、添加の間、温度を１５℃以下に維持する。混合物を１５分間攪拌する。（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（２８２ｇ，６６７ｍｍｏｌ）を一度に加える。２５℃にて１２時間、混合物を攪拌する。濃縮し、残渣を水（３．０Ｌ）に溶解する。ｐＨが７になるまで固体のＮａＨＣＯ３を加える。生成物をＣＨ２Ｃｌ２（２×２．０Ｌ）で抽出し、有機層を合わせ、濃縮して、定量的収率（２３６ｇ，＞１００％）で茶色の押しつぶせる泡状物として標題化合物を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３２３．０（Ｍ＋１）。
【００４６】
２時間〜一晩の反応時間で、適切なｂｏｃ保護ピペラジニルフタラジンを用いて、調製物２２に記載した手順に本質的に従って、以下の表のピペラジニルフタラジンを調製する。調製物３０〜３４に関して、溶媒としてＭｅＯＨを使用する。
【００４７】
【表５−１】
【表５−２】
【００４８】
調製物３５
３−フルオロ−４−イソシアネートベンゾニトリル
【化２２】
氷水浴槽中のトルエン（２０ｍＬ）中のトリホスゲン（１．０９ｇ，３．６７ｍｍｏｌ）の溶液を冷却する。トルエン（３０ｍＬ）中の４−アミノ−３−フルオロベンゾニトリル（１．３６ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２．８ｍＬ，２０．０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して処理する。７０℃にて５時間、得られた混合物を加熱する。反応混合物を周囲温度まで冷却し、固体を濾過する。減圧下で濾液を濃縮して、白色固体（１．４４ｇ，８４％）を得て、それをさらに精製せずに使用する。ＧＣ／ＭＳ ｍ／ｚ １６２（Ｍ＋）。
【００４９】
調製物３５に記載した手順に本質的に従って、適切なアニリンから以下の表の既知のイソシアネートを調製する。
【００５０】
【表６】
【実施例】
【００５１】
実施例１
（Ｓ）−Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシアミド塩酸塩
【化２３】
ＣＨ２Ｃｌ２（３１ｍＬ）中の（Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）フタラジン（１．０ｇ，３．１ｍｍｏｌ）の溶液を、１−フルオロ−４−イソシアネートベンゼン（０．４２ｍＬ，３．７２ｍｍｏｌ）で処理する。周囲温度にて３日間攪拌する。減圧下で反応混合物を濃縮する。残渣をＥｔ２Ｏで粉砕し、濾過する。固体をペンタンでリンスし、次いで４５℃にて真空オーブン中で乾燥させる。固体をＣＨ２Ｃｌ２およびＭｅＯＨの混合物に溶解し、Ｅｔ２Ｏ中の３当量の１Ｍ ＨＣｌで処理する。得られた混合物を攪拌し、減圧下で濃縮し、４５℃にて真空オーブン中で乾燥させて、黄色の泡状物として標題の塩酸塩（１．５ｇ，９８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４６０．０（Ｍ＋１）。
【００５２】
実施例１の別法
２５℃にて、１−フルオロ−４−イソシアネートベンゼン（１０５ｍＬ，９３０ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（４．５Ｌ）中の（Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）フタラジン（３００ｇ，９３０ｍｍｏｌ）の溶液に１時間にわたって滴下する。混合物を２５分間攪拌し、泡状物まで濃縮する。泡状物をＭＴＢＥ（３．０Ｌ）中でスラリーにし、湿ったケーキをＭＴＢＥ（５００ｍＬ）で洗浄する。母液を油状物まで濃縮する。油状物を酢酸エチル（２．０Ｌ）中でスラリーにして、固体を得、濾過する。濾過した固体を合わせ、乾燥させて、黄褐色の固体（３４４ｇ，８０％）として標題化合物を得る。４２℃にて、固体（３２７ｇ，７１１ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（３．２７Ｌ）中でスラリーにして、１，４−ジオキサン（１７７ｍＬ，７１１ｍｍｏｌ）中の４Ｍ ＨＣｌで処理する。得られた混合物を３０分間、６０℃まで加熱する。２時間にわたって２５℃までゆっくりと冷却する。濾過し、湿ったケーキをイソプロパノール（２００ｍＬ）およびヘプタン（２００ｍＬ）で洗浄する。真空オーブン（１２ｔｏｒｒ，３５℃，２時間）中でケーキを乾燥させて、淡い黄色の固体として標題化合物（３０８ｇ，８７％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４６０．０（Ｍ＋１）。
【００５３】
実施例２
（Ｓ）−Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシアミド塩酸塩
【化２４】
ＣＨ２Ｃｌ２（１５．５ｍＬ）中の（Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）−４−（２−メチルピペラジン−１−イル）フタラジン（０．５ｇ，１．５５ｍｍｏｌ）の溶液を、１−フルオロ−４−イソシアネートベンゼン（０．１９４ｍＬ，１．７１ｍｍｏｌ）で処理する。周囲温度にて一晩攪拌する。反応混合物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中の０〜３％の２Ｍアンモニア／ＭｅＯＨの勾配）により精製する。精製した遊離塩基をＣＨ２Ｃｌ２およびＭｅＯＨの混合物に溶解し、Ｅｔ２Ｏ中の３当量の１Ｍ ＨＣｌで処理する。得られた混合物を攪拌し、減圧下で濃縮し、４５℃にて真空オーブン中で乾燥させて、黄色の泡状物として塩酸塩（０．７２ｇ，９４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４６０．０（Ｍ＋１）。
【００５４】
実施例２についての別法
２５℃にて、１−フルオロ−４−イソシアネートベンゼン（２７．９ｍＬ，２４５ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中の（Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）−４−（２−メチルピペラジン−１−イル）フタラジン（７２ｇ，２２３ｍｍｏｌ）の溶液に１時間にわたって滴下する。混合物を２５分間攪拌し、泡状物まで濃縮する。０℃にて塩化アセチル（１６．５ｍＬ，２３１ｍｍｏｌ）をメタノールに加え、５分間攪拌する。泡状物をメタノール溶液に加え、１時間攪拌する。溶液を泡状物まで濃縮する。泡状物をアセトニトリル（２００ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中でスラリーにし、濾過し、黄色の固体として標題化合物（９１ｇ，８６％）を収集する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４６０．０（Ｍ＋１）。
【００５５】
適切なピペラジニルフタラジンおよびわずかに過剰の適切なイソシアネートを用いて、実施例１または実施例２に記載した手順に本質的に従って以下の表の尿素を調製する。反応時間を０．５時間〜３日に変化させる。粉砕（Ｅｔ２Ｏまたは１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ヘキサンで）またはフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより化合物を精製する。実施例５７〜６０および６６〜６９に関して、質量誘導逆相クロマトグラフィー（Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８ ＯＤＢ ＭＳ ＨＰＬＣカラム、３０×７５ｍｍ、５μｍ粒径、水中に２０〜７０％アセトニトリルの勾配、０．０１Ｍ炭酸アンモニウム含有、８分間８５ｍＬ／分の流速にて）により精製する。実施例７５〜８２に関して、１．５〜２倍過剰で粗イソシアネート（調製物３５〜３６）を使用する。実施例１８、２９および３８に関して、ＨＣｌ塩形成プロセスからＭｅＯＨを除く。
【００５６】
【表７−１】
【表７−２】
【表７−３】
【表７−４】
【表７−５】
【表７−６】
【表７−７】
【表７−８】
【表７−９】
【表７−１０】
【表７−１１】
【表７−１２】
【表７−１３】
【表７−１４】
【００５７】
実施例９０
（Ｒ）−Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボキシアミド塩酸塩
【化２５】
ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍｌ）中の（Ｒ）−（４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）ピペラジン−２−イル）−メタノール（０．１５ｇ，０．４４ｍｍｏｌ）の溶液を、１−フルオロ−４−イソシアネートベンゼン（０．０４ｇ，０．３１ｍｍｏｌ）で処理する。反応物を周囲温度で３０分間攪拌し、次いで反応混合物を濃縮する。得られた残留物を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中に０〜５０％ＥｔＯＡｃ、次いでＣＨ２Ｃｌ２中に３％ＭｅＯＨに交換する）により精製して、固体を得る。固体をＭｅＯＨ（１ｍＬ）に溶解し、１ＮのＨＣｌ水溶液（０．１３ｍＬ，０．１３ｍｍｏｌ）で処理する。溶液を濃縮して、固体として標題化合物（０．０６５ｇ，２９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４７６．０（Ｍ＋１）。
【００５８】
適切なピペラジニルフタラジンおよびイソシアネートを用いて、実施例９０に記載した手順に本質的に従って以下の表のピペラジニルフタラジン尿素を調製する。
【００５９】
【表８】
【００６０】
実施例９４および９５
Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−２，５−ジメチルピペラジン−１−カルボキシアミド塩酸塩、異性体１および異性体２
【化２６】
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中の１−（ｔｒａｎｓ−２，５−ジメチルピペラジン−１−イル）−４−（４−フルオロフェニル）フタラジン（０．３ｇ，０．８９ｍｍｏｌ）の溶液を、１−フルオロ−４−イソシアネートベンゼン（０．１７ｇ，１．２５ｍｍｏｌ）で処理する。反応物を周囲温度で１時間攪拌する。反応混合物を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中に０〜５０％ＥｔＯＡｃ）により精製する。適切な画分をプールし、濃縮する。Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−２，５−ジメチルピペラジン−１−カルボキシアミド異性体（０．３ｇ，０．５９ｍｍｏｌ）の混合物をＭｅＯＨ（２ｍＬ）に溶解する。キラルクロマトグラフィー（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ−Ｈ、流速３０ｍＬ／分、検出２２５ｎｍ、６：４のＭｅＯＨ：アセトニトリル）によりｔｒａｎｓ−異性体の混合物を分離する。異性体１として第１の溶出ピークおよび異性体２として第２の溶出ピークを収集する。適切な画分をプールし、濃縮する。分離した異性体をＭｅＯＨ（１ｍＬ）に溶解し、各溶液を１当量の１ＮのＨＣｌ水溶液で処理する。濃縮して、異性体１（０．１３１ｇ，４４％）および異性体２（０．１２９ｇ，４３％）の塩酸塩を得る。異性体１：ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４７４．２（Ｍ＋１），９９％ｅｅ。異性体２：ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４７４．２（Ｍ＋１），９９％ｅｅ。
【００６１】
実施例９６および９７
Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−ｃｉｓ−２，５−ジメチルピペラジン−１−カルボキシアミド塩酸塩、異性体１および異性体２
【化２７】
調製物１２からのｃｉｓ−ジメチルピペラジンの混合物を用いて、実施例９４および９５に記載した手順に本質的に従って、実施例９６および９７を調製する。キラルＨＰＬＣによってｃｉｓ−異性体の混合物を分離し、ＨＣｌ塩を生成して、異性体１（０．２１ｇ，３４％）および異性体２（０．２０ｇ，３３％）を得る。異性体１：ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４７４．２（Ｍ＋１），９５％ｅｅ。異性体２：ＥＳ／ＭＥ ｍ／ｚ ４７４．２（Ｍ＋１），９２％ｅｅ。
【００６２】
生物学
ヘッジホッグは以下の癌についての生存因子として関与する：基底細胞癌；上部消化管癌（食道、胃、膵臓、および胆道）；前立腺癌；乳癌；小細胞肺癌；非小細胞肺癌；Ｂ細胞リンパ腫；多発性骨髄腫；胃癌；卵巣癌；結腸直腸癌；肝臓癌；黒色腫；腎臓癌；および脳腫瘍。
【００６３】
ヘッジホッグ経路の要素は癌の治療のための潜在的な薬剤標的であるとされている。骨芽腫から確立されたＤａｏｙ細胞株（ＡＴＣＣ，ＨＴＢ−１８６）はＨｈリガンドに応答する。これらの細胞を外から加えられたＳｈｈ馴化培地で処理する場合、Ｈｈシグナル伝達経路は活性化され、Ｇｌｉｌの増大された発現を生じる。コーンリリー（ｃｏｒｎ ｌｉｌｙ）Ｖｅｒａｔｒｕｍ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍから単離されたアルカロイドであるシクロパミンは弱いヘッジホッグアンタゴニストであり、Ｓｈｈ刺激に応答するＧｌｉｌの発現を抑制することが示されている。最近の観測により、シクロパミンが、培養された髄芽腫細胞および同種移植片の増殖を阻害することが示唆されている。このＤａｏｙ細胞モデルシステムを用いて、ヘッジホッグシグナル伝達経路の潜在的な阻害剤が同定され得る。本発明の化合物はヘッジホッグアンタゴニストであるため、それらは上述の腫瘍タイプを治療するのに適している。
【００６４】
生物学的活性ＩＣ５０の測定
以下のアッセイプロトコルおよびその結果は、本発明の化合物および方法の有用性および効果をさらに実証する。機能的アッセイは、本発明の化合物がＳｈｈシグナル伝達を阻害する能力を示すという支持を提供する。以下のアッセイに利用される全てのリガンド、溶媒、および試薬は、市販の供給業者から容易に入手可能であるか、または当業者により容易に調製され得る。
【００６５】
生物活性を、ＤＡｏｙニューロン癌細胞において機能的アッセイを用いて測定し、ｂＤＮＡ（分枝デオキシリボ核酸）アッセイ系（Ｐａｎｏｍｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）によってＧｌｉｌリボ核酸のレベルを測定する。Ｇｌｉは最初に膠芽腫細胞株において発見され、Ｓｈｈシグナル伝達によって活性化される亜鉛フィンガータンパク質をコードする。最大反応は、２４時間、馴化培地を用いてＤａｏｙ細胞（ヒト胎児腎臓細胞である、組み換えＳｈｈを安定発現するＨＥＫ−２９３細胞）におけるＧｌｉｌ転写を誘発することによって得られ、次いで、刺激されたＧｌｉｌ転写産物の量を測定する。最小反応は、２４時間、馴化培地で刺激されているＤａｏｙ細胞（ヒト胎児腎臓細胞である、組み換えＳｈｈを安定発現するＨＥＫ−２９３細胞）においてコントロール化合物で阻害されるＧｌｉｌ転写産物の量である。
【００６６】
Ｄａｏｙ細胞におけるＧｌｉｌの阻害を測定するための機能的アッセイ
ｂＤＮＡアッセイ系は、標的リボ核酸（転写産物）の増幅を可能にする分枝鎖ＤＮＡの技術を利用する。この技術は、ハイブリダイゼーションシグナルを増幅するために標的転写産物との複合体としてハイブリダイズする標的転写産物の特異性を測定する３種類の合成ハイブリッド短Ｇｌｉｌ−特異的ｃＤＮＡプローブ［捕捉増量剤（ＣＥ）、標識増量剤（ＬＥ）および遮断剤（ＢＬ）］を利用する。増幅工程の間の化学発光基質の添加により、発光を用いる検出が可能となる。
【００６７】
アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から得たＤａｏｙ細胞株は、Ｓｈｈ反応ヒトニューロン腫瘍細胞株であり、生理学的に関連する腫瘍細胞株である、線維形成小脳髄芽腫から１９８５年に確立された。Ｇｌｉｌ転写産物レベルの内因性レベルはＤａｏｙ細胞において低いが、ヒトＳｈｈを安定に過剰発現する細胞（ｈＳｈｈで安定にトランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞株）から得た馴化培地を用いることによって刺激され得る。
【００６８】
Ｄａｏｙ細胞を、０．１ｎＭの非必須アミノ酸および１ｍＭのピルビン酸ナトリウムを有する最小必須培地（ＭＥＭ）および１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含有するＤａｏｙ増殖培地中で組織培養Ｔ２２５フラスコにおいてコンフルエンシーまで増殖させる。細胞を、トリプシンエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を用いてＴ２２５フラスコから除去し、遠心分離し、培地に再懸濁し、次いで計数した。
【００６９】
次いで、Ｄａｏｙ細胞を、Ｃｏｓｔａｒ９６ウェル透明組織培養プレートにおいて増殖培地中で１ウェルあたり５０，０００細胞にて播種し、５％二酸化炭素（ＣＯ２）下で３７℃にて一晩、インキュベートする。細胞を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で１度洗浄し、続いて、１００μＬのＳｈｈ馴化培地（Ｓｈｈ−ＣＭ）を加えて、Ｇｌｉｌ発現のレベルを刺激する。Ｓｈｈ−ＣＭを希釈して、コントロール増殖培地−０．１％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地）を用いて最大刺激を達成する。次いで、Ｓｈｈ−ＣＭで処理したＤａｏｙ細胞を、約１μＭ〜０．１ｎＭの範囲の種々の濃度のヘッジホッグ阻害剤で処理する。試験化合物を、５％ＣＯ２下で３７℃にて２４時間インキュベートする。
【００７０】
Ｇｌｉｌ転写産物の測定を、製造業者（Ｐａｎｏｍｉｃｓ，Ｉｎｃ．）によって記載されるＱｕａｎｔｉｇｅｎｅ２．０ Ｇｌｉｌアッセイを用いて実施する。プロテイナーゼＫを含む、希釈した溶解混合物（ＤＬＭ）緩衝液を調製する。化合物との２４時間のインキュベーション後、細胞をＰＢＳで１度洗浄し、１８０μＬのＤＬＭを細胞に加える。溶解緩衝液を含有する細胞プレートを密閉し、５５℃にて３０〜４５分間、静置させる。次いで、得られた細胞溶解物を５回粉砕する。Ｇｌｉｌプローブを含有する作業プローブセットを、製造業者の指示に従って、ＤＬＭ中でプローブを希釈することによって作製し、次いで、２０μＬの作業プローブセットを、８０μＬのＤａｏｙ溶解物とともにｂＤＮＡアッセイプレートに加える。プレートを密閉し、５５℃にて一晩インキュベートする。次いで、ｂＤＮＡプレートを、製造業者の指示に従って処理する。シグナルを、発光を検出するＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎリーダーでプレートを読み取ることによって定量化する。発光シグナルは、サンプルに存在する標的転写産物の量と正比例する。
【００７１】
機能的アッセイからの発光シグナルデータを、インビトロでのアッセイに関するＩＣ５０を算出するために使用する。データを、最大コントロール値（Ｓｈｈ−ＣＭで処理したＤａｏｙ細胞）および最小コントロール値（Ｓｈｈ−ＣＭで処理したＤａｏｙ細胞およびコントロール化合物、１μＭのＮ−（３−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−４−クロロフェニル）−３，５−ジメトキシベンズアミドの阻害濃度）に基づき算出する。４パラメーターロジスティック曲線フィットを使用して、ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅソフトウェアプログラムバージョン５．３、等式２０５（Ａｓｓａｙ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｍａｎｕａｌ Ｖｅｒｓｉｏｎ５．０，２００８，Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ ａｎｄ ＮＩＨ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｃｅｎｔｅｒ）を用いてＩＣ５０値を生成する。
【００７２】
記載されるプロトコルによれば、本明細書に例示した本発明の化合物は、４０ｎＭ未満のＩＣ５０を示す。例えば、実施例２の化合物は、上記のアッセイにおいて０．２１（ｎ＝２）の標準誤差で約０．４２ｎＭのＩＣ５０を有する。これらの結果は、本発明の化合物がヘッジホッグアンタゴニストであり、例えば抗癌剤として有用であるという証拠を与える。
【００７３】
ＣＹＰ３Ａ４阻害アッセイ
インキュベーションサンプルを、ヒト肝ミクロソーム調製物を試験阻害剤（最終濃度０．０５ｍｇ／ｍＬタンパク質、１００ｍＭのＮａＰＯ４中の１０μＭの阻害剤、ｐＨ７．４緩衝液）に加えることによって調製し、混合する。サンプルを、３７℃にて約５分間、プレインキュベートする。プレインキュベートの時間後、反応を、ＮＡＤＰＨおよび酵素基質としてミダゾラム（最終濃度、１ｍＭのＮＡＤＰＨ、５μＭのミダゾラム）を含有する溶液の添加により開始する。ＮＡＤＰＨ溶液の添加後、サンプルを、約３７℃にて３分間、インキュベートする。インキュベーション時間の後、反応を、５０μＬのメタノール（およびクロマトグラフィーについての内部標準物）を添加することによってクエンチし、サンプルを十分に混合する。反応をクエンチした後、混合物を、約５℃、約４０００ｒｐｍにて１５分間、遠心分離し、ＬＣ／ＭＳ解析により解析する。
【００７４】
サンプルを、短い従来のＣ１８カラム（負荷移動相−１％酢酸を有する９５／５ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ Ｈ２Ｏ／メタノール（ｖ／ｖ））で勾配溶出を用いてＨＰＬＣ／ＭＳを用いて解析する。移動相Ｂ−１％酢酸を有する８０／２０ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ Ｈ２Ｏ／メタノール（ｖ／ｖ）。移動相Ｃ−１％酢酸を有する５／９５ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ Ｈ２Ｏ／メタノール（ｖ／ｖ）。移動相−７５／２５ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ Ｈ２Ｏ／アセトニトリル（ｖ／ｖ）をリンスする。
【００７５】
サンプルを、陽性条件下でターボイオンスプレーを用いて、３４２．１（１−ＯＨ−ミダゾラム）および３４６．１（α−ヒドロキシミダゾラム−ｄ４内部標準物）の質量で選択イオンモニタリング（ＳＩＭ）のために質量スペクトル分析器に注入する。データを、１０μＭの阻害濃度の存在下での１−ＯＨ−ミダゾラム生成の阻害％として報告する。
【００７６】
記載したプロトコルによれば、本明細書に例示した本発明の以下の化合物（実施例１〜１８、２６、３３〜３５、４４〜５１、５７〜６０、６６〜６９および８５〜９４）は、４５％未満の阻害を示す。さらに、実施例１〜５、７〜１７、３３〜３５、４４、４６、４９〜５１、５７〜５９、６６〜６８、８５および８９〜９４の化合物は、１０％未満の阻害を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘッジホッグ経路アンタゴニスト、およびより具体的には、新規の１，４−二置換フタラジンおよびその治療的使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヘッジホッグ（Ｈｈ）シグナル伝達経路は、細胞分化および増殖に関わることによって胚パターン形成および成体組織維持に重要な役割を果たす。ソニックヘッジホッグ（Ｓｈｈ）、インディアンヘッジホッグ（Ｉｈｈ）およびデザートヘッジホッグ（Ｄｈｈ）を含むヘッジホッグ（Ｈｈ）タンパク質ファミリーは、自己触媒的切断およびコレステロールのアミノ末端ペプチドへのカップリングを含む翻訳後修飾を受けてシグナル伝達活性を有するフラグメントを生成する、分泌糖タンパク質である。Ｈｈは、１２回膜貫通型タンパク質Ｐｔｃｈ（Ｐｔｃｈ１およびＰｔｃｈ２）と結合し、それによりＰｔｃｈにより媒介されるＳｍｏｏｔｈｅｎｅｄ（Ｓｍｏ）の抑制を軽減する。Ｓｍｏの活性化が一連の細胞間イベントを引き起こし、最終的にＧｌｉの転写因子（Ｇｌｉ１、Ｇｌｉ２およびＧｌｉ３）を安定化し、細胞増殖、細胞生存、血管新生および浸潤に関与するＧｌｉ依存性遺伝子を発現させる。
【０００３】
Ｓｈｈシグナル伝達の異常活性化が種々の腫瘍形成（例えば、膵臓癌、髄芽腫、基底細胞癌、小細胞肺癌および前立腺癌）を引き起こすという発見に基づいて、Ｈｈシグナル伝達は近年顕著に関心を集めている。例えばステロイドアルカロイド化合物ＩＰ−６０９、アミノプロリン化合物ＣＵＲ６１４１４および２，４−二置換チアゾール化合物ＪＫ１８などの複数のＨｈアンタゴニストが当該技術分野で報告されている。特許文献１では、ヘッジホッグアンタゴニストと主張されている特定の１，４−二置換フタラジン化合物が開示されている。同様に、特許文献２では、ヘッジホッグ経路に関連する病状の診断および治療に関連する特定の１，４二置換フタラジン化合物が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００５０３３２８８号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００８１１０６１１号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
有効なヘッジホッグ経路阻害剤、特に望ましい薬力学的、薬物動態学的および毒物学的特性を有するものについての必要性が依然として存在する。本発明は、この経路の有効なアンタゴニストである新規の１，４−二置換フタラジンを提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、式Ｉの化合物
【化１】
（式中、
Ｒ１は、水素、フルオロ、シアノ、トリフルオロメチルまたはメトキシであり、
Ｒ２は、水素、フルオロまたはトリフルオロメチルであり、
Ｒ３は、水素またはクロロであり、ただしＲ２およびＲ３のうちの少なくとも１つは水素であり、
Ｒ４は、クロロ、フルオロ、シアノ、トリフルオロメチル、メトキシ、ジフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシであり、
【化２】
は、
【化３】
からなる群より選択される置換ピペラジン−１，４−ジイルを表す）
またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。
【０００７】
上記のピペラジン環構造において、描かれるようにピペラジン環の左側は二環式フタラジンに結合され、ピペラジン環の右側がカルボニルに結合されることは理解されるだろう。
【０００８】
本発明の化合物は、第三級アミン部分を含み、多くの無機酸および有機酸と反応して、製薬的に許容し得る酸付加塩を生成できることは当業者によって理解されるだろう。そのような製薬的に許容し得る酸付加塩およびそれらを調製するための一般的な方法論は当該技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら，ＨＡＮＤＢＯＯＫ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＡＬＴＳ：ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，ＳＥＬＥＣＴＩＯＮ ＡＮＤ ＵＳＥ，（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」，「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ ６６，Ｎｏ．１，１９７７年，１月」を参照のこと。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の特定の実施形態は、式Ｉの化合物
（式中、
（ａ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、
（ｂ）Ｒ１は、フルオロであり、
（ｃ）Ｒ２は、水素またはフルオロであり、
（ｄ）Ｒ２は、水素であり、
（ｅ）Ｒ３は、水素であり、
（ｆ）Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｇ）Ｒ４は、フルオロまたはシアノであり、
（ｈ）Ｒ４は、フルオロであり、
【化４】
【化５】
【化６】
（ｌ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、
（ｍ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素であり、
（ｎ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、
（ｏ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素であり、
（ｐ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメトキシであり、
（ｑ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｒ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｓ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメトキシであり、
（ｔ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｕ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｖ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｗ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
（ｘ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロであり、
（ｙ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、
【化７】
（ｚ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素であり、
【化８】
（ｚ）Ｒ１は、フルオロであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、
【化９】
（ａａ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素またはフルオロであり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチルであり、
【化１０】
（ｂｂ）Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノであり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、フルオロまたはシアノであり、
【化１１】
）
またはその製薬的に許容し得る塩を含む。
【００１０】
本発明はまた、式１の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩を、製薬的に許容し得る賦形剤、担体または希釈剤とともに含む、医薬組成物を提供する。
【００１１】
本発明の化合物は、好ましくは、種々の経路によって投与される医薬組成物として処方される。好ましくは、そのような組成物は、経口または静脈投与用である。そのような医薬組成物およびそれらを調製するためのプロセスは、当該技術分野において周知である。例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら，ｅｄｓ．，第１９版，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，１９９５）を参照のこと。
【００１２】
本発明はまた、患者における脳腫瘍、基底細胞癌、食道癌、胃癌、膵臓癌、胆道癌、前立腺癌、乳癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、結腸直腸癌、肝臓癌、腎臓癌または黒色腫を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、式Ｉの化合物、またはその製薬的に許容し得る塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。
【００１３】
実際に投与される化合物の量は、治療される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重および反応、ならびに患者の症状の重症度を含む、関連状況下で医師によって決定されることは理解されるだろう。１日あたりの用量は、通常、体重の約０．１〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。一部の例において、上述の範囲の下限以下の用量レベルがより適切であってもよく、一方、他の場合において、さらに多い用量が利用されてもよい。従って、上述の用量範囲は、本発明の範囲を決して限定することを意図しない。本発明はまた、医薬として使用するための、式Ｉの化合物、またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。
【００１４】
さらに、本発明は、癌を治療するための医薬の製造における式Ｉの化合物、またはその製薬的に許容し得る塩の使用を提供する。特に、癌は、脳腫瘍、基底細胞癌、食道癌、胃癌、膵臓癌、胆道癌、前立腺癌、乳癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、結腸直腸癌、肝臓癌、腎臓癌および黒色腫からなる群より選択される。
【００１５】
さらに、本発明は、脳腫瘍、基底細胞癌、食道癌、胃癌、膵臓癌、胆道癌、前立腺癌、乳癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、結腸直腸癌、肝臓癌、腎臓癌または黒色腫を治療するための活性成分として、式Ｉの化合物、またはその製薬的に許容し得る塩を含む、医薬組成物を提供する。
【００１６】
式Ｉの化合物、またはその塩は、当該技術分野において公知の種々の手順、ならびに以下のスキーム、調製物および実施例に記載される手順によって調製され得る。記載される経路の各々についての特定の合成工程は、式Ｉの化合物、またはその塩を調製するために、異なる方法で組合されるか、または異なるスキームからの工程とともに組み合わされてもよい。
【００１７】
他に示さない限り、置換基は前記に定義されたとおりである。試薬および出発物質は、一般に、当業者に容易に利用可能である。他のものは、公知の構造的に類似した化合物の合成と同様である、有機化学および複素環化学の標準的な技術、ならびにいずれかの新規の手順を含む、以下の調製物および実施例に記載される手順によってなされ得る。
【００１８】
本明細書に使用される場合、以下の用語は、示される意味を有する：「Ｅｔ２Ｏ」はジエチルエーテルを指し；「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを指し；「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し；「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し；「ＭｅＯＨ」はメタノールを指し；「ＭＴＢＥ」はメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテルを指し；「ｂｏｃ」または「ｔ−ｂｏｃ」はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルを指し；「ＳＣＸ」は強カチオン交換を指し；「ＩＣ５０」は薬剤について可能な５０％の最大阻害反応を生じるその薬剤の濃度を指す。
【００１９】
【化１２】
式（６ｂ）の化合物は、スキーム１に描かれる反応に従って調製できる。
【００２０】
スキーム１の工程１において、１，４−ジクロロフタラジン（２）は、求核芳香族置換（ＳＮＡｒ）において置換ピペラジン（３ａ）または（３ｂ）と反応して、式（４ａ）または（４ｂ）のピペラジニルフタラジンを得ることができる。反応は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、または炭酸カリウムなどの適切な塩基を有するＤＭＳＯまたはＤＭＦなどの双極性非プロトン溶媒中で起こる。混合物は約７０〜１５０℃で加熱する。当業者は、一部の場合において、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレートなどのように、少しのヒンダード窒素原子の保護を可能にする、式（３ａ）のピペラジンにおいてｔ−ｂｏｃ基などの保護基を使用することは有益であることを認識するだろう。反対に、反応が少しのヒンダード窒素で起こる場合、ｃｉｓ−２，６−ジメチルピペラジンまたはピペラジン−２−イル−メタノールなどの保護されていないピペラジンを使用することが可能であり得る。２，５−ジメチルピペラジンを用いる場合、必要とされる保護はいずれもない。
【００２１】
工程２において、式（４）のフタラジニルクロリドは、Ｓｕｚｕｋｉクロスカップリング条件下でフェニルボロン酸と反応する。当業者は、そのようなクロスカップリング反応を促進するのに有用な種々の条件が存在することを認識するだろう。反応条件は、ジオキサンまたはジオキサン／水などの適切な溶媒を使用する。反応は、炭酸セシウムまたはフッ化セシウムなどの塩基の存在下でなされる。反応は、約８０〜１１０℃の温度にて不活性雰囲気下で、ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４−ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（ＩＩ）、（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィン）フェロセン）パラジウム（ＩＩ）クロリド、または（ＳＰ−４−１）−ビス［ビス（１，１−ジメチルエチル）（４−メトキシフェニル）ホスフィン−κＰ］ジクロロ−パラジウム（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００７，７２，５１０４−５１１２における触媒Ｄの合成に従って調製される）などのパラジウム触媒の存在下で起こり、式（６ａ）または（６ｂ）のフェニルピペラジニルフタラジンを生じる。
【００２２】
あるいは、工程３において、式（５）のフェニルフタラジニルクロリドは、上記の工程１に記載したものと同様の求核芳香族置換（ＳＮＡｒ）において式（３ａ）または（３ｂ）のピペラジンと反応する。
【００２３】
スキーム１、工程４において、式（６ａ）のフェニルピペラジニルフタラジンに存在するものなどのアミン官能性は、（６ｂ）に脱保護され、さらに反応して、本発明の化合物を生じ得る。窒素保護基を除去するための方法は、当該技術分野において周知である（例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）を参照のこと）。例えば、式（６）のフェニルピペラジニルフタラジンのｂｏｃ脱保護は、塩化水素を含むなどの酸性条件の下でなされ得る。得られたＨＣｌ塩は、ＳＣＸカラムまたは炭酸水素ナトリウムなどの無機塩基を用いて遊離アミンに変換され得る。
【００２４】
スキーム１における式（５）の化合物は、商業的に利用可能であるか、あるいは本明細書に記載されるものと同様の方法によって、または当該技術分野で確立された手順を用いて容易に調製され得ることは、当業者によって理解されるだろう。例えば、フェニルマグネシウムブロミドと無水フタル酸とのグリニャール反応から生成された、２−フェニルカルボニル安息香酸は、ヒドラジンと環化して、４−フェニル−２Ｈ−フタラジン−１−オンを生じることができる。オキシ塩化リンでの後の処理により、式（５）の１−クロロ−４−フェニル−フタラジンが生じる。あるいは、１，４−ジクロロフタラジンは、Ｓｕｚｕｋｉクロスカップリング反応においてフェニルボロン酸と反応して、対応する式（５）の１−クロロ−４−フェニル−フタラジンが生じ得る。
【００２５】
【化１３】
スキーム２において、脱保護された式（６ｂ）のピペラジニルフタラジンは、ジクロロメタンなどの不活性溶媒中で置換フェニルイソシアネートを用いてアシル化されて、式（１）の尿素を生じ得る。
【００２６】
以下の調製物および実施例は、さらに詳細に本発明を例示し、式（Ｉ）の化合物の典型的な合成を表すために提供される。本発明の化合物の命名は、一般に、ＣｈｅｍＤｒａｗ Ｕｌｔｒａ（登録商標）１０．０によって提供される。
【００２７】
調製物１
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート
【化１４】
ＤＭＳＯ（９７ｍＬ）中の１−クロロ−４−（４−フルオロフェニル）フタラジン（５．０ｇ，１９．３ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（５．０３ｇ，２５．１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（８．１ｍＬ，５９．０ｍｍｏｌ）の混合物を、３日間、１１５℃にて加熱する。反応混合物を水に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２でリンスする。Ｅｔ２Ｏで抽出する。有機層を水（２×）で洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中の０〜２０％ＥｔＯＡｃの勾配）により精製して、淡黄色の泡状物として標題化合物（７．０５ｇ，８４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４２３．２（Ｍ＋１）。
【００２８】
別法
２５℃にて、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（２７６ｇ，１．３８ｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ（２．５６Ｌ）中の１−クロロ−４−（４−フルオロフェニル）フタラジン（２７５ｇ，１．０６ｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３４６ｍＬ，１．９９ｍｏｌ）のスラリーに加える。混合物を９時間、１０２℃まで加熱する。反応物を２５℃まで冷却し、４８時間攪拌する。混合物をＥｔＯＡｃ（２．５Ｌ）および水（３．５Ｌ）に加える。水相を酢酸エチル（２×２．０Ｌ）で抽出する。有機層を合わせ、水（２．５Ｌ）で洗浄し、茶色の泡状物まで濃縮する。泡状物をアセトニトリル（１．０Ｌ）に溶解し、３０分間、１℃まで冷却する。沈殿物を濾過して、黄褐色の固体を得る。母液を濃縮し、残渣を３０分間、アセトニトリル（５００ｍＬ）中でスラリーにする。混合物を濾過して、黄褐色の固体を得る。固体沈殿物を合わせ、真空オーブン（１４ｔｏｒｒ，２５℃）中で２５時間乾燥させて、黄褐色の固体として標題化合物（４３５ｇ，９６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４２３．０（Ｍ＋１）。
【００２９】
３〜６日間、１１５〜１５０℃の温度にて、１．５当量の適切に置換したピペラジンおよび３〜５当量のトリエチルアミンを用いて、調製物１に記載した手順に本質的に従って、以下の表のピペラジニルフタラジンを調製する。
【００３０】
【表１】
【００３１】
調製物２の別法
１−クロロ−４−（４−フルオロフェニル）フタラジン（２００ｇ，７７３ｍｍｏｌ）を、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（２３２ｇ，１．１６ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（６７４ｍＬ，２８．１ｍｏｌ）、およびＤＭＳＯ（２．０Ｌ）の溶液に加える。混合物を６０時間、１２０℃まで加熱する。混合物を２５℃まで冷却し、氷水（３．０Ｌ）に注ぎ、濾過する。固体を回収し、ＣＨ２Ｃｌ２（２．０Ｌ）に溶解し、水（２．０Ｌ）で抽出する。有機相を濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２中の３％ＴＨＦで溶出するシリカプラグ（３．０ｋｇのシリカ）に加えて、黄色の泡状物（１２６ｇ，３８％）として標題化合物を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４２３．０（Ｍ＋１）。
【００３２】
調製物７
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−エチル−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート
【化１５】
１２０℃にて１日間、ＤＭＳＯ（７５ｍＬ）中の１−クロロ−４−（４−フルオロフェニル）フタラジン（５．０２ｇ，１９．４ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−エチルピペラジン−１−カルボキシレート（５．００ｇ，２３．３ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（５．３８ｇ，３８．９ｍｍｏｌ）の混合物を加熱する。反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃでリンスする。ＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を水（２×）、次いでブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中に２０〜８０％ＥｔＯＡｃの勾配）により精製して、標題化合物（５．１１ｇ，６０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４３７．２（Ｍ＋１）。
【００３３】
ｃｉｓ−２，６−ジメチルピペラジンを用いて、調製物７に記載した手順に本質的に従って、以下の表のピペラジニルフタラジンを調製する。
【００３４】
【表２】
【００３５】
調製物９
（Ｒ）−（４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）ピペラジン−２−イル）メタノール
【化１６】
１−クロロ−４−（４−フルオロフェニル）フタラジン（０．１ｇ，０．３９ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−ピペラジン−２−イルメタノール（０．０７ｇ，０．５８ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．３４ｍＬ，１．９３ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１ｍＬ）に溶解する。反応物を１２０℃にて６４時間攪拌する。反応混合物を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中の０〜１０％の２Ｍアンモニア／ＭｅＯＨ）により精製して、茶色の固体として標題化合物（０．１１ｇ，８４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３３９．０（Ｍ＋１）。
【００３６】
適切に置換されたピペラジンを用いて、調製物９に記載した手順に本質的に従って、以下の表のピペラジニルフタラジンを調製する。
【００３７】
【表３】
【００３８】
調製物１４
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−クロロフタラジン−１−イル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート
【化１７】
１２０℃にて２日間、ＤＭＳＯ（２００ｍＬ）中の１，４−ジクロロフタラジン（１０．０ｇ，５０．２ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（１５．１ｇ，７５．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２１．０ｍＬ，１５０．７ｍｍｍｏｌ）の混合物を加熱する。反応混合物を水に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２でリンスする。Ｅｔ２Ｏで抽出する。有機層を水（２×）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中に０〜２０％ＥｔＯＡｃの勾配）により精製して、淡黄色の固体として標題化合物（６．０ｇ，３３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ （３５Ｃｌ）３６３．０（Ｍ＋１）。
【００３９】
調製物１５
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−クロロフタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート
【化１８】
８０℃にて１８時間、ＤＭＳＯ（１１０ｍＬ）中の１，４−ジクロロフタラジン（７．８０ｇ，３９．２ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（４．９８ｇ，２４．９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１０．３ｍＬ，７３．９ｍｍｏｌ）の混合物を加熱する。反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃでリンスする。ＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を水（２×）およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中に２０％〜８０％ＥｔＯＡｃの勾配）により精製して、標題化合物（４．１３ｇ，４６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ （３５Ｃｌ）３６３．０（Ｍ＋１）。
【００４０】
調製物１６
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（４−シアノフェニル）フタラジン−１−イル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート
【化１９】
９０℃にて一晩、１，４−ジオキサン（８０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）中の（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−クロロフタラジン−１−イル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（４．０ｇ，１１．０ｍｍｏｌ）、４−シアノフェニルボロン酸（２．４３ｇ，１６．５ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１４．４ｇ，４４．１ｍｍｏｌ）、および（ＳＰ−４−１）−ビス［ビス（１，１−ジメチルエチル）（４−メトキシフェニル）ホスフィン−κＰ］ジクロロパラジウム（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００７，７２，５１０４−５１１２）（７５．４ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）の混合物を加熱する。反応混合物を水とＣＨ２Ｃｌ２との間に分離する。水層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中に０〜２０％ＥｔＯＡｃの勾配）により精製して、淡い橙色の泡状物として標題化合物（４．４６ｇ，９４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４３０．２（Ｍ＋１）。
【００４１】
適切な４−クロロフタラジンおよびボロン酸を用いて、調製物１６に記載した手順に本質的に従って、以下の表のピペラジニルフタラジンを調製する。触媒としてビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４−ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（ＩＩ）を加える前に、調製物１９〜２０を脱気し、９０℃にて７２時間、得られた混合物を加熱する。
【００４２】
【表４】
【００４３】
調製物２１
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（４−メトキシフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート
【化２０】
１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）中の（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−クロロフタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（０．８１ｇ，２．２３ｍｍｏｌ）、４−メトキシベンゼンボロン酸（１．０７ｇ，７．０５ｍｍｏｌ）およびフッ化セシウム（１．０５ｇ，６．９４ｍｍｏｌ）の脱気した混合物を（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィン）フェロセン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（０．２７ｇ，０．３３ｍｍｏｌ）で処理する。９５℃にて一晩、得られた混合物を加熱する。反応混合物を、水とＥｔＯＡｃとの間に分離する。水層をＥｔＯＡｃで抽出する。有機部分を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中に１５〜７０％ＥｔＯＡｃの勾配）により精製して、標題化合物（０．９４ｇ，９６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４３５．２（Ｍ＋１）。
【００４４】
調製物２２
（Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）フタラジン
【化２１】
１，４−ジオキサン（５０ｍＬ）中の（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（７．０５ｇ，１６．２ｍｍｏｌ）の溶液を１，４−ジオキサン（２５ｍＬ）中の４Ｍ ＨＣｌで処理する。ＭｅＯＨを加えて、得られた沈殿物を溶解し、周囲温度にて２時間攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮する。残渣をＭｅＯＨに溶解し、５０ｇのＶａｒｉａｎ（登録商標）ＳＣＸカラムに注ぐ。ＭｅＯＨおよびＣＨ２Ｃｌ２でリンスし、次いでＭｅＯＨ中の１：１のＣＨ２Ｃｌ２：２Ｍアンモニアで生成物を溶出する。減圧下で溶出液を濃縮して、淡い黄色の泡状物として標題化合物（４．８３ｇ，９３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３２３．２（Ｍ＋１）。
【００４５】
調製物２２についての別法
メタノール（２．８２Ｌ）を、ドライアイスを含む１：１アセトン／水浴槽により０℃まで冷却し、３０分にわたって塩化アセチル（１４２ｍＬ，２．０ｍｏｌ）を滴下し、添加の間、温度を１５℃以下に維持する。混合物を１５分間攪拌する。（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（２８２ｇ，６６７ｍｍｏｌ）を一度に加える。２５℃にて１２時間、混合物を攪拌する。濃縮し、残渣を水（３．０Ｌ）に溶解する。ｐＨが７になるまで固体のＮａＨＣＯ３を加える。生成物をＣＨ２Ｃｌ２（２×２．０Ｌ）で抽出し、有機層を合わせ、濃縮して、定量的収率（２３６ｇ，＞１００％）で茶色の押しつぶせる泡状物として標題化合物を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３２３．０（Ｍ＋１）。
【００４６】
２時間〜一晩の反応時間で、適切なｂｏｃ保護ピペラジニルフタラジンを用いて、調製物２２に記載した手順に本質的に従って、以下の表のピペラジニルフタラジンを調製する。調製物３０〜３４に関して、溶媒としてＭｅＯＨを使用する。
【００４７】
【表５−１】
【表５−２】
【００４８】
調製物３５
３−フルオロ−４−イソシアネートベンゾニトリル
【化２２】
氷水浴槽中のトルエン（２０ｍＬ）中のトリホスゲン（１．０９ｇ，３．６７ｍｍｏｌ）の溶液を冷却する。トルエン（３０ｍＬ）中の４−アミノ−３−フルオロベンゾニトリル（１．３６ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２．８ｍＬ，２０．０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して処理する。７０℃にて５時間、得られた混合物を加熱する。反応混合物を周囲温度まで冷却し、固体を濾過する。減圧下で濾液を濃縮して、白色固体（１．４４ｇ，８４％）を得て、それをさらに精製せずに使用する。ＧＣ／ＭＳ ｍ／ｚ １６２（Ｍ＋）。
【００４９】
調製物３５に記載した手順に本質的に従って、適切なアニリンから以下の表の既知のイソシアネートを調製する。
【００５０】
【表６】
【実施例】
【００５１】
実施例１
（Ｓ）−Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシアミド塩酸塩
【化２３】
ＣＨ２Ｃｌ２（３１ｍＬ）中の（Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）フタラジン（１．０ｇ，３．１ｍｍｏｌ）の溶液を、１−フルオロ−４−イソシアネートベンゼン（０．４２ｍＬ，３．７２ｍｍｏｌ）で処理する。周囲温度にて３日間攪拌する。減圧下で反応混合物を濃縮する。残渣をＥｔ２Ｏで粉砕し、濾過する。固体をペンタンでリンスし、次いで４５℃にて真空オーブン中で乾燥させる。固体をＣＨ２Ｃｌ２およびＭｅＯＨの混合物に溶解し、Ｅｔ２Ｏ中の３当量の１Ｍ ＨＣｌで処理する。得られた混合物を攪拌し、減圧下で濃縮し、４５℃にて真空オーブン中で乾燥させて、黄色の泡状物として標題の塩酸塩（１．５ｇ，９８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４６０．０（Ｍ＋１）。
【００５２】
実施例１の別法
２５℃にて、１−フルオロ−４−イソシアネートベンゼン（１０５ｍＬ，９３０ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（４．５Ｌ）中の（Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）フタラジン（３００ｇ，９３０ｍｍｏｌ）の溶液に１時間にわたって滴下する。混合物を２５分間攪拌し、泡状物まで濃縮する。泡状物をＭＴＢＥ（３．０Ｌ）中でスラリーにし、湿ったケーキをＭＴＢＥ（５００ｍＬ）で洗浄する。母液を油状物まで濃縮する。油状物を酢酸エチル（２．０Ｌ）中でスラリーにして、固体を得、濾過する。濾過した固体を合わせ、乾燥させて、黄褐色の固体（３４４ｇ，８０％）として標題化合物を得る。４２℃にて、固体（３２７ｇ，７１１ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（３．２７Ｌ）中でスラリーにして、１，４−ジオキサン（１７７ｍＬ，７１１ｍｍｏｌ）中の４Ｍ ＨＣｌで処理する。得られた混合物を３０分間、６０℃まで加熱する。２時間にわたって２５℃までゆっくりと冷却する。濾過し、湿ったケーキをイソプロパノール（２００ｍＬ）およびヘプタン（２００ｍＬ）で洗浄する。真空オーブン（１２ｔｏｒｒ，３５℃，２時間）中でケーキを乾燥させて、淡い黄色の固体として標題化合物（３０８ｇ，８７％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４６０．０（Ｍ＋１）。
【００５３】
実施例２
（Ｓ）−Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシアミド塩酸塩
【化２４】
ＣＨ２Ｃｌ２（１５．５ｍＬ）中の（Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）−４−（２−メチルピペラジン−１−イル）フタラジン（０．５ｇ，１．５５ｍｍｏｌ）の溶液を、１−フルオロ−４−イソシアネートベンゼン（０．１９４ｍＬ，１．７１ｍｍｏｌ）で処理する。周囲温度にて一晩攪拌する。反応混合物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中の０〜３％の２Ｍアンモニア／ＭｅＯＨの勾配）により精製する。精製した遊離塩基をＣＨ２Ｃｌ２およびＭｅＯＨの混合物に溶解し、Ｅｔ２Ｏ中の３当量の１Ｍ ＨＣｌで処理する。得られた混合物を攪拌し、減圧下で濃縮し、４５℃にて真空オーブン中で乾燥させて、黄色の泡状物として塩酸塩（０．７２ｇ，９４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４６０．０（Ｍ＋１）。
【００５４】
実施例２についての別法
２５℃にて、１−フルオロ−４−イソシアネートベンゼン（２７．９ｍＬ，２４５ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中の（Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）−４−（２−メチルピペラジン−１−イル）フタラジン（７２ｇ，２２３ｍｍｏｌ）の溶液に１時間にわたって滴下する。混合物を２５分間攪拌し、泡状物まで濃縮する。０℃にて塩化アセチル（１６．５ｍＬ，２３１ｍｍｏｌ）をメタノールに加え、５分間攪拌する。泡状物をメタノール溶液に加え、１時間攪拌する。溶液を泡状物まで濃縮する。泡状物をアセトニトリル（２００ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中でスラリーにし、濾過し、黄色の固体として標題化合物（９１ｇ，８６％）を収集する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４６０．０（Ｍ＋１）。
【００５５】
適切なピペラジニルフタラジンおよびわずかに過剰の適切なイソシアネートを用いて、実施例１または実施例２に記載した手順に本質的に従って以下の表の尿素を調製する。反応時間を０．５時間〜３日に変化させる。粉砕（Ｅｔ２Ｏまたは１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ヘキサンで）またはフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより化合物を精製する。実施例５７〜６０および６６〜６９に関して、質量誘導逆相クロマトグラフィー（Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８ ＯＤＢ ＭＳ ＨＰＬＣカラム、３０×７５ｍｍ、５μｍ粒径、水中に２０〜７０％アセトニトリルの勾配、０．０１Ｍ炭酸アンモニウム含有、８分間８５ｍＬ／分の流速にて）により精製する。実施例７５〜８２に関して、１．５〜２倍過剰で粗イソシアネート（調製物３５〜３６）を使用する。実施例１８、２９および３８に関して、ＨＣｌ塩形成プロセスからＭｅＯＨを除く。
【００５６】
【表７−１】
【表７−２】
【表７−３】
【表７−４】
【表７−５】
【表７−６】
【表７−７】
【表７−８】
【表７−９】
【表７−１０】
【表７−１１】
【表７−１２】
【表７−１３】
【表７−１４】
【００５７】
実施例９０
（Ｒ）−Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボキシアミド塩酸塩
【化２５】
ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍｌ）中の（Ｒ）−（４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）ピペラジン−２−イル）−メタノール（０．１５ｇ，０．４４ｍｍｏｌ）の溶液を、１−フルオロ−４−イソシアネートベンゼン（０．０４ｇ，０．３１ｍｍｏｌ）で処理する。反応物を周囲温度で３０分間攪拌し、次いで反応混合物を濃縮する。得られた残留物を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中に０〜５０％ＥｔＯＡｃ、次いでＣＨ２Ｃｌ２中に３％ＭｅＯＨに交換する）により精製して、固体を得る。固体をＭｅＯＨ（１ｍＬ）に溶解し、１ＮのＨＣｌ水溶液（０．１３ｍＬ，０．１３ｍｍｏｌ）で処理する。溶液を濃縮して、固体として標題化合物（０．０６５ｇ，２９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４７６．０（Ｍ＋１）。
【００５８】
適切なピペラジニルフタラジンおよびイソシアネートを用いて、実施例９０に記載した手順に本質的に従って以下の表のピペラジニルフタラジン尿素を調製する。
【００５９】
【表８】
【００６０】
実施例９４および９５
Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−２，５−ジメチルピペラジン−１−カルボキシアミド塩酸塩、異性体１および異性体２
【化２６】
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中の１−（ｔｒａｎｓ−２，５−ジメチルピペラジン−１−イル）−４−（４−フルオロフェニル）フタラジン（０．３ｇ，０．８９ｍｍｏｌ）の溶液を、１−フルオロ−４−イソシアネートベンゼン（０．１７ｇ，１．２５ｍｍｏｌ）で処理する。反応物を周囲温度で１時間攪拌する。反応混合物を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中に０〜５０％ＥｔＯＡｃ）により精製する。適切な画分をプールし、濃縮する。Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−２，５−ジメチルピペラジン−１−カルボキシアミド異性体（０．３ｇ，０．５９ｍｍｏｌ）の混合物をＭｅＯＨ（２ｍＬ）に溶解する。キラルクロマトグラフィー（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ−Ｈ、流速３０ｍＬ／分、検出２２５ｎｍ、６：４のＭｅＯＨ：アセトニトリル）によりｔｒａｎｓ−異性体の混合物を分離する。異性体１として第１の溶出ピークおよび異性体２として第２の溶出ピークを収集する。適切な画分をプールし、濃縮する。分離した異性体をＭｅＯＨ（１ｍＬ）に溶解し、各溶液を１当量の１ＮのＨＣｌ水溶液で処理する。濃縮して、異性体１（０．１３１ｇ，４４％）および異性体２（０．１２９ｇ，４３％）の塩酸塩を得る。異性体１：ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４７４．２（Ｍ＋１），９９％ｅｅ。異性体２：ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４７４．２（Ｍ＋１），９９％ｅｅ。
【００６１】
実施例９６および９７
Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−ｃｉｓ−２，５−ジメチルピペラジン−１−カルボキシアミド塩酸塩、異性体１および異性体２
【化２７】
調製物１２からのｃｉｓ−ジメチルピペラジンの混合物を用いて、実施例９４および９５に記載した手順に本質的に従って、実施例９６および９７を調製する。キラルＨＰＬＣによってｃｉｓ−異性体の混合物を分離し、ＨＣｌ塩を生成して、異性体１（０．２１ｇ，３４％）および異性体２（０．２０ｇ，３３％）を得る。異性体１：ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４７４．２（Ｍ＋１），９５％ｅｅ。異性体２：ＥＳ／ＭＥ ｍ／ｚ ４７４．２（Ｍ＋１），９２％ｅｅ。
【００６２】
生物学
ヘッジホッグは以下の癌についての生存因子として関与する：基底細胞癌；上部消化管癌（食道、胃、膵臓、および胆道）；前立腺癌；乳癌；小細胞肺癌；非小細胞肺癌；Ｂ細胞リンパ腫；多発性骨髄腫；胃癌；卵巣癌；結腸直腸癌；肝臓癌；黒色腫；腎臓癌；および脳腫瘍。
【００６３】
ヘッジホッグ経路の要素は癌の治療のための潜在的な薬剤標的であるとされている。骨芽腫から確立されたＤａｏｙ細胞株（ＡＴＣＣ，ＨＴＢ−１８６）はＨｈリガンドに応答する。これらの細胞を外から加えられたＳｈｈ馴化培地で処理する場合、Ｈｈシグナル伝達経路は活性化され、Ｇｌｉｌの増大された発現を生じる。コーンリリー（ｃｏｒｎ ｌｉｌｙ）Ｖｅｒａｔｒｕｍ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍから単離されたアルカロイドであるシクロパミンは弱いヘッジホッグアンタゴニストであり、Ｓｈｈ刺激に応答するＧｌｉｌの発現を抑制することが示されている。最近の観測により、シクロパミンが、培養された髄芽腫細胞および同種移植片の増殖を阻害することが示唆されている。このＤａｏｙ細胞モデルシステムを用いて、ヘッジホッグシグナル伝達経路の潜在的な阻害剤が同定され得る。本発明の化合物はヘッジホッグアンタゴニストであるため、それらは上述の腫瘍タイプを治療するのに適している。
【００６４】
生物学的活性ＩＣ５０の測定
以下のアッセイプロトコルおよびその結果は、本発明の化合物および方法の有用性および効果をさらに実証する。機能的アッセイは、本発明の化合物がＳｈｈシグナル伝達を阻害する能力を示すという支持を提供する。以下のアッセイに利用される全てのリガンド、溶媒、および試薬は、市販の供給業者から容易に入手可能であるか、または当業者により容易に調製され得る。
【００６５】
生物活性を、ＤＡｏｙニューロン癌細胞において機能的アッセイを用いて測定し、ｂＤＮＡ（分枝デオキシリボ核酸）アッセイ系（Ｐａｎｏｍｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）によってＧｌｉｌリボ核酸のレベルを測定する。Ｇｌｉは最初に膠芽腫細胞株において発見され、Ｓｈｈシグナル伝達によって活性化される亜鉛フィンガータンパク質をコードする。最大反応は、２４時間、馴化培地を用いてＤａｏｙ細胞（ヒト胎児腎臓細胞である、組み換えＳｈｈを安定発現するＨＥＫ−２９３細胞）におけるＧｌｉｌ転写を誘発することによって得られ、次いで、刺激されたＧｌｉｌ転写産物の量を測定する。最小反応は、２４時間、馴化培地で刺激されているＤａｏｙ細胞（ヒト胎児腎臓細胞である、組み換えＳｈｈを安定発現するＨＥＫ−２９３細胞）においてコントロール化合物で阻害されるＧｌｉｌ転写産物の量である。
【００６６】
Ｄａｏｙ細胞におけるＧｌｉｌの阻害を測定するための機能的アッセイ
ｂＤＮＡアッセイ系は、標的リボ核酸（転写産物）の増幅を可能にする分枝鎖ＤＮＡの技術を利用する。この技術は、ハイブリダイゼーションシグナルを増幅するために標的転写産物との複合体としてハイブリダイズする標的転写産物の特異性を測定する３種類の合成ハイブリッド短Ｇｌｉｌ−特異的ｃＤＮＡプローブ［捕捉増量剤（ＣＥ）、標識増量剤（ＬＥ）および遮断剤（ＢＬ）］を利用する。増幅工程の間の化学発光基質の添加により、発光を用いる検出が可能となる。
【００６７】
アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から得たＤａｏｙ細胞株は、Ｓｈｈ反応ヒトニューロン腫瘍細胞株であり、生理学的に関連する腫瘍細胞株である、線維形成小脳髄芽腫から１９８５年に確立された。Ｇｌｉｌ転写産物レベルの内因性レベルはＤａｏｙ細胞において低いが、ヒトＳｈｈを安定に過剰発現する細胞（ｈＳｈｈで安定にトランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞株）から得た馴化培地を用いることによって刺激され得る。
【００６８】
Ｄａｏｙ細胞を、０．１ｎＭの非必須アミノ酸および１ｍＭのピルビン酸ナトリウムを有する最小必須培地（ＭＥＭ）および１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含有するＤａｏｙ増殖培地中で組織培養Ｔ２２５フラスコにおいてコンフルエンシーまで増殖させる。細胞を、トリプシンエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を用いてＴ２２５フラスコから除去し、遠心分離し、培地に再懸濁し、次いで計数した。
【００６９】
次いで、Ｄａｏｙ細胞を、Ｃｏｓｔａｒ９６ウェル透明組織培養プレートにおいて増殖培地中で１ウェルあたり５０，０００細胞にて播種し、５％二酸化炭素（ＣＯ２）下で３７℃にて一晩、インキュベートする。細胞を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で１度洗浄し、続いて、１００μＬのＳｈｈ馴化培地（Ｓｈｈ−ＣＭ）を加えて、Ｇｌｉｌ発現のレベルを刺激する。Ｓｈｈ−ＣＭを希釈して、コントロール増殖培地−０．１％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地）を用いて最大刺激を達成する。次いで、Ｓｈｈ−ＣＭで処理したＤａｏｙ細胞を、約１μＭ〜０．１ｎＭの範囲の種々の濃度のヘッジホッグ阻害剤で処理する。試験化合物を、５％ＣＯ２下で３７℃にて２４時間インキュベートする。
【００７０】
Ｇｌｉｌ転写産物の測定を、製造業者（Ｐａｎｏｍｉｃｓ，Ｉｎｃ．）によって記載されるＱｕａｎｔｉｇｅｎｅ２．０ Ｇｌｉｌアッセイを用いて実施する。プロテイナーゼＫを含む、希釈した溶解混合物（ＤＬＭ）緩衝液を調製する。化合物との２４時間のインキュベーション後、細胞をＰＢＳで１度洗浄し、１８０μＬのＤＬＭを細胞に加える。溶解緩衝液を含有する細胞プレートを密閉し、５５℃にて３０〜４５分間、静置させる。次いで、得られた細胞溶解物を５回粉砕する。Ｇｌｉｌプローブを含有する作業プローブセットを、製造業者の指示に従って、ＤＬＭ中でプローブを希釈することによって作製し、次いで、２０μＬの作業プローブセットを、８０μＬのＤａｏｙ溶解物とともにｂＤＮＡアッセイプレートに加える。プレートを密閉し、５５℃にて一晩インキュベートする。次いで、ｂＤＮＡプレートを、製造業者の指示に従って処理する。シグナルを、発光を検出するＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎリーダーでプレートを読み取ることによって定量化する。発光シグナルは、サンプルに存在する標的転写産物の量と正比例する。
【００７１】
機能的アッセイからの発光シグナルデータを、インビトロでのアッセイに関するＩＣ５０を算出するために使用する。データを、最大コントロール値（Ｓｈｈ−ＣＭで処理したＤａｏｙ細胞）および最小コントロール値（Ｓｈｈ−ＣＭで処理したＤａｏｙ細胞およびコントロール化合物、１μＭのＮ−（３−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−４−クロロフェニル）−３，５−ジメトキシベンズアミドの阻害濃度）に基づき算出する。４パラメーターロジスティック曲線フィットを使用して、ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅソフトウェアプログラムバージョン５．３、等式２０５（Ａｓｓａｙ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｍａｎｕａｌ Ｖｅｒｓｉｏｎ５．０，２００８，Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ ａｎｄ ＮＩＨ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｃｅｎｔｅｒ）を用いてＩＣ５０値を生成する。
【００７２】
記載されるプロトコルによれば、本明細書に例示した本発明の化合物は、４０ｎＭ未満のＩＣ５０を示す。例えば、実施例２の化合物は、上記のアッセイにおいて０．２１（ｎ＝２）の標準誤差で約０．４２ｎＭのＩＣ５０を有する。これらの結果は、本発明の化合物がヘッジホッグアンタゴニストであり、例えば抗癌剤として有用であるという証拠を与える。
【００７３】
ＣＹＰ３Ａ４阻害アッセイ
インキュベーションサンプルを、ヒト肝ミクロソーム調製物を試験阻害剤（最終濃度０．０５ｍｇ／ｍＬタンパク質、１００ｍＭのＮａＰＯ４中の１０μＭの阻害剤、ｐＨ７．４緩衝液）に加えることによって調製し、混合する。サンプルを、３７℃にて約５分間、プレインキュベートする。プレインキュベートの時間後、反応を、ＮＡＤＰＨおよび酵素基質としてミダゾラム（最終濃度、１ｍＭのＮＡＤＰＨ、５μＭのミダゾラム）を含有する溶液の添加により開始する。ＮＡＤＰＨ溶液の添加後、サンプルを、約３７℃にて３分間、インキュベートする。インキュベーション時間の後、反応を、５０μＬのメタノール（およびクロマトグラフィーについての内部標準物）を添加することによってクエンチし、サンプルを十分に混合する。反応をクエンチした後、混合物を、約５℃、約４０００ｒｐｍにて１５分間、遠心分離し、ＬＣ／ＭＳ解析により解析する。
【００７４】
サンプルを、短い従来のＣ１８カラム（負荷移動相−１％酢酸を有する９５／５ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ Ｈ２Ｏ／メタノール（ｖ／ｖ））で勾配溶出を用いてＨＰＬＣ／ＭＳを用いて解析する。移動相Ｂ−１％酢酸を有する８０／２０ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ Ｈ２Ｏ／メタノール（ｖ／ｖ）。移動相Ｃ−１％酢酸を有する５／９５ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ Ｈ２Ｏ／メタノール（ｖ／ｖ）。移動相−７５／２５ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ Ｈ２Ｏ／アセトニトリル（ｖ／ｖ）をリンスする。
【００７５】
サンプルを、陽性条件下でターボイオンスプレーを用いて、３４２．１（１−ＯＨ−ミダゾラム）および３４６．１（α−ヒドロキシミダゾラム−ｄ４内部標準物）の質量で選択イオンモニタリング（ＳＩＭ）のために質量スペクトル分析器に注入する。データを、１０μＭの阻害濃度の存在下での１−ＯＨ−ミダゾラム生成の阻害％として報告する。
【００７６】
記載したプロトコルによれば、本明細書に例示した本発明の以下の化合物（実施例１〜１８、２６、３３〜３５、４４〜５１、５７〜６０、６６〜６９および８５〜９４）は、４５％未満の阻害を示す。さらに、実施例１〜５、７〜１７、３３〜３５、４４、４６、４９〜５１、５７〜５９、６６〜６８、８５および８９〜９４の化合物は、１０％未満の阻害を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物
【化１】
（式中、
Ｒ１は、水素、フルオロ、シアノ、トリフルオロメチルまたはメトキシであり、
Ｒ２は、水素、フルオロまたはトリメチルフルオロであり、
Ｒ３は、水素またはクロロであり、ただしＲ２およびＲ３のうちの少なくとも１つは水素であり、
Ｒ４は、クロロ、フルオロ、シアノ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、メトキシまたはトリフルオロメトキシであり、
【化２】
は、
【化３】
からなる群より選択される置換ピペラジン−１，４−ジイルを表す）
またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノである、請求項１に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項３】
Ｒ１は、フルオロである、請求項１または２に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項４】
Ｒ２は、水素またはフルオロである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項５】
Ｒ２は、水素である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項６】
Ｒ３は、水素である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項７】
Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチルまたはジフルオロメチルである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項８】
Ｒ４は、フルオロまたはシアノである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項９】
【化４】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
（Ｓ）−Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシアミドである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項１１】
（Ｓ）−Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシアミド塩酸塩である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩を、製薬的に許容し得る担体、希釈剤または賦形剤とともに含む、医薬組成物。
【請求項１３】
哺乳動物における脳腫瘍、基底細胞癌、食道癌、胃癌、膵臓癌、胆道癌、前立腺癌、乳癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、結腸直腸癌、肝臓癌、腎臓癌または黒色腫を治療する方法であって、そのような治療を必要とする哺乳動物に、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩の有効量を投与する工程を含む、方法。
【請求項１４】
医薬として使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項１５】
癌の治療に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項１】
以下の式の化合物
【化１】
（式中、
Ｒ１は、水素、フルオロ、シアノ、トリフルオロメチルまたはメトキシであり、
Ｒ２は、水素、フルオロまたはトリメチルフルオロであり、
Ｒ３は、水素またはクロロであり、ただしＲ２およびＲ３のうちの少なくとも１つは水素であり、
Ｒ４は、クロロ、フルオロ、シアノ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、メトキシまたはトリフルオロメトキシであり、
【化２】
は、
【化３】
からなる群より選択される置換ピペラジン−１，４−ジイルを表す）
またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｒ１は、水素、フルオロまたはシアノである、請求項１に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項３】
Ｒ１は、フルオロである、請求項１または２に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項４】
Ｒ２は、水素またはフルオロである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項５】
Ｒ２は、水素である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項６】
Ｒ３は、水素である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項７】
Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチルまたはジフルオロメチルである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項８】
Ｒ４は、フルオロまたはシアノである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項９】
【化４】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
（Ｓ）−Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシアミドである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項１１】
（Ｓ）−Ｎ−（４−フルオロフェニル）−４−（４−（４−フルオロフェニル）フタラジン−１−イル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシアミド塩酸塩である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩を、製薬的に許容し得る担体、希釈剤または賦形剤とともに含む、医薬組成物。
【請求項１３】
哺乳動物における脳腫瘍、基底細胞癌、食道癌、胃癌、膵臓癌、胆道癌、前立腺癌、乳癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、結腸直腸癌、肝臓癌、腎臓癌または黒色腫を治療する方法であって、そのような治療を必要とする哺乳動物に、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩の有効量を投与する工程を含む、方法。
【請求項１４】
医薬として使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項１５】
癌の治療に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその製薬的に許容し得る塩。
【公表番号】特表２０１２−５０７５３５（Ｐ２０１２−５０７５３５Ａ）
【公表日】平成２４年３月２９日（２０１２．３．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３４６２４（Ｐ２０１１−５３４６２４）
【出願日】平成２１年１０月２２日（２００９．１０．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６１５７３
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６２５０７
【国際公開日】平成２２年６月３日（２０１０．６．３）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年３月２９日（２０１２．３．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１０月２２日（２００９．１０．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６１５７３
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６２５０７
【国際公開日】平成２２年６月３日（２０１０．６．３）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
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