ＥＧＦＲタンパク質ファミリーのメンバーの過剰発現が関係している様々な形態のガンを処置するために有利に使用することができる、二重特異的単鎖抗体分子が開示される。本発明は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ファミリーのタンパク質を過剰発現する様々なガンの検出および／または処置において有利に使用することができる、二重特異的（または多特異的）抗体分子（例えば、ｂｓ ｓｃＦｖ）の同定に関する。したがって、１つの実施形態においては、本発明により、互いに（直接またはリンカーを介して）結合させられた第１の抗体と第２の抗体が含まれている二重特異的抗体が提供される。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
互いに結合させられた第１の抗体と第２の抗体が含まれている二重特異的抗体であって、ここで、該第１の抗体と該第２の抗体とは異なるエピトープに対して特異的に結合し、該第１の抗体は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４からなる群より選択される上皮成長因子受容体タンパク質ファミリーの１つのメンバーの上にある少なくとも１つのエピトープに対する結合特異性を有しており、そして該第２の抗体は、該第１のエピトープとは異なる、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４からなる群より選択されるタンパク質の上にあるエピトープである、上皮成長因子受容体タンパク質ファミリーの１つのメンバーの上にある第２のエピトープに対する結合特異性を有しており、該抗体は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、および配列番号３７からなる群より選択される核酸配列を含むベクターによってコードされる、二重特異的抗体。
【請求項２】
前記抗体が、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、および配列番号３７からなる群より別々に選択される２つの核酸配列を含むベクターによってコードされる、請求項１に記載の二重特異的抗体。
【請求項３】
前記抗体が、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７からなる群より選択されるポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクターによってコードされる、請求項１に記載の二重特異的抗体。
【請求項４】
前記抗体が、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７からなる群より選択されるポリペプチドをコードする核酸配列からなる群より別々に選択される２つの核酸配列を含むベクターによってコードされる、請求項１に記載の二重特異的抗体。
【請求項５】
前記ベクターはさらに、配列番号３７のポリペプチドをコードする核酸を含む、請求項２に記載の二重特異的抗体。
【請求項６】
請求項１に記載の二重特異的抗体と薬学的に許容される担体とを含む、組成物。
【請求項７】
ガンを処置するための方法であって、治療有効量の請求項６に記載の組成物をそれが必要な患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項８】
前記ガンが、乳ガン、結腸ガン、卵巣ガン、子宮内膜ガン、胃ガン、膵臓ガン、前立腺ガン、および唾液腺ガンからなる群より選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ガンを処置するための方法であって、治療有効量の請求項６に記載の組成物を、化学療法薬、外部線照射、標的化させられた放射性同位元素、およびシグナル伝達阻害因子からなる群より選択される他の細胞毒性薬と組み合わせて、それが必要な患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項１０】
エフェクターに結合させられた請求項１に記載の二重特異的抗体を含む、キメラ部分。
【請求項１１】
前記エフェクターが、細胞毒素、標識、放射性核種、薬物、リポソーム、リガンド、および抗体からなる群より選択される、請求項１０に記載のキメラ部分。
【請求項１２】
前記キメラ部分が融合タンパク質である、請求項１０に記載のキメラ部分。
【請求項１３】
ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４からなる群より選択される上皮成長因子受容体タンパク質ファミリーに由来する受容体を保有している細胞に対してエフェクター分子を特異的に送達する方法であって：
請求項１に記載の抗体に結合させられた該エフェクター分子を含むキメラ部分を提供する工程；ならびに、
該細胞を該キメラ部分と接触させて、それによって該キメラ部分を該細胞に対して特異的に結合させる工程
を含む、方法。
【請求項１４】
前記エフェクター分子が、細胞毒素、標識、放射性核種、薬物、リポソーム、リガンド、および抗体からなる群より選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記キメラ部分が融合タンパク質である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞がガン細胞である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞が、乳ガン、結腸ガン、卵巣ガン、子宮内膜ガン、胃ガン、膵臓ガン、前立腺ガン、および唾液腺ガンからなる群より選択されるガン細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４からなる群より選択される上皮成長因子受容体タンパク質ファミリーに由来する受容体を保有している細胞を特異的に死滅させる方法であって：
細胞毒素、放射性部分、および細胞毒素もしくは細胞増殖抑制因子を含むリポソームからなる群より選択されるエフェクターに結合させられた、請求項１に記載の抗体を含むキメラ部分を提供する工程；ならびに、
該細胞を該キメラ部分と接触させて、それによって該キメラ部分を該細胞に対して特異的に結合させて、該細胞の死滅を生じさせる工程
を含む、方法。
【請求項１９】
前記キメラ部分が融合タンパク質である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞がガン細胞である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記細胞が、乳ガン、結腸ガン、卵巣ガン、子宮内膜ガン、胃ガン、膵臓ガン、前立腺ガン、および唾液腺ガンからなる群より選択されるガン細胞である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
上皮成長因子受容体タンパク質ファミリーの１つ以上のメンバーを発現している細胞または組織を検出する方法であって：
細胞または組織を、検出可能な標識に結合させられた請求項１に記載の二重特異的抗体を含むキメラ部分と接触させる工程；ならびに、
該標識を検出する工程であって、ここで、該細胞または組織と会合した該標識の検出が、上皮成長因子受容体タンパク質ファミリーの１つ以上のメンバーを発現している細胞または組織の存在を示す、工程
が含まれる、方法。
【請求項２３】
前記検出可能な標識が、γ放射体、陽電子放射体、ＭＲＩ標識、および蛍光標識からなる群より選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記検出可能な標識がγ放射体であり、該検出はγ線カメラでの画像化を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記検出可能な標識が陽電子放射体であり、該検出は、陽電子放出型断層撮影法（ＰＥＴ）による画像化を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記検出可能な標識がＭＲＩ標識であり、該検出は核磁気共鳴撮影法による検出を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
上皮成長因子受容体タンパク質ファミリーの１つ以上のメンバーを発現している細胞または組織が、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４からなる群より選択されるタンパク質を過剰発現する細胞または組織である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
上皮成長因子受容体タンパク質ファミリーの１つ以上のメンバーを発現している細胞または組織が、ガン細胞または組織である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２９】
上皮成長因子受容体タンパク質ファミリーの１つ以上のメンバーを発現している細胞または組織が、乳ガン、結腸ガン、卵巣ガン、子宮内膜ガン、胃ガン、膵臓ガン、前立腺ガン、または唾液腺ガンからなる群より選択されるガン細胞あるいは組織である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３０】
前記検出は非侵襲的画像化技術を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項３１】
前記検出は免疫組織化学を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項３２】
前記検出は、組織試料または生検における検出を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項３３】
前記検出は、組織切片の中での検出を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項３４】
前記検出は、ヒトの中での前記細胞または組織の検出を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項３５】
前記検出は、ヒトから採取された生物学的試料中の前記細胞または組織の検出を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項３６】
２つの異なるエピトープに対して特異的に結合し、タンパク質切断部位が含まれていないリンカー分子を介して作動可能に連結させられた第１のアームと第２のアームとを有している二重特異的単鎖Ｆｖ抗体であって、該アームの一方は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４からなる群より選択される上皮成長因子受容体タンパク質ファミリーの１つのメンバーの上にある少なくとも１つのエピトープに対する結合特異性を有しており、そして他方のアームは、第１のエピトープとは異なる、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４からなる群より選択される上皮成長因子受容体タンパク質ファミリーの１つのメンバーの上にある第２のエピトープに対する結合特異性を有している、二重特異的単鎖Ｆｖ抗体。
【請求項３７】
前記第１のアームと前記第２のアームとが、Ｃ６．５、Ｃ６ＭＬ３−９、Ｃ６ＭＨ３−Ｂ１、Ｃ６−Ｂ１Ｄ２、Ｆ５、ＨＥＲ３．Ａ５、ＨＥＲ３．Ｆ４、ＨＥＲ３．Ｈ１、ＨＥＲ３．Ｈ３、ＨＥＲ３．Ｅ１２、ＨＥＲ３．Ｂ１２、ＥＧＦＲ．Ｅ１２、ＥＧＦＲ．Ｃ１０、ＥＧＦＲ．Ｂ１１、ＥＧＦＲ．Ｅ８、ＨＥＲ４．Ｂ４、ＨＥＲ４．Ｇ４、ＨＥＲ４．Ｆ４、ＨＥＲ４．Ａ８、ＨＥＲ４．Ｂ６、ＨＥＲ４．Ｄ４、ＨＥＲ４．Ｄ７、ＨＥＲ４．Ｄ１１、ＨＥＲ４．Ｄ１２、ＨＥＲ４．Ｅ３、ＨＥＲ４．Ｅ７、ＨＥＲ４．Ｆ８、およびＨＥＲ４．Ｃ７からなる群より選択される、請求項３６に記載の二重特異的単鎖Ｆｖ抗体
【請求項３８】
組み換えによって生産された、請求項３６に記載の二重特異的単鎖Ｆｖ抗体。
【請求項３９】
二重特異的単鎖Ｆｖ抗体の第１のアームと第２のアームとを作動可能に連結させるために適しているリンカー分子であって、該リンカーは、約３個から約３０個のアミノ酸の長さの範囲のアミノ酸配列から構成されており、タンパク質切断部位を含まない、リンカー分子。
【請求項４０】
二重特異的単鎖Ｆｖ抗体の第１のアームと第２のアームとを作動可能に連結させるために適しているリンカー分子であって、配列番号１１のアミノ酸配列を有している、リンカー分子。
【請求項４１】
２つの異なるエピトープに対して特異的に結合し、そして請求項４０または４１のいずれか１項に記載のリンカー分子によって作動可能に連結させられた第１のアームと第２のアームとを有している二重特異的単鎖Ｆｖ抗体であって、該第１のアームと該第２のアームとは、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４からなる群より選択される上皮成長因子受容体タンパク質ファミリーの１つのメンバーの上にある２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有している、二重特異的単鎖Ｆｖ抗体。
【請求項４２】
前記第１のアームと前記第２のアームとが、Ｃ６．５、Ｃ６ＭＬ３−９、Ｃ６ＭＨ３−Ｂ１、Ｃ６−Ｂ１Ｄ２、Ｆ５、ＨＥＲ３．Ａ５、ＨＥＲ３．Ｆ４、ＨＥＲ３．Ｈ１、ＨＥＲ３．Ｈ３、ＨＥＲ３．Ｅ１２、ＨＥＲ３．Ｂ１２、ＥＧＦＲ．Ｅ１２、ＥＧＦＲ．Ｃ１０、ＥＧＦＲ．Ｂ１１、ＥＧＦＲ．Ｅ８、ＨＥＲ４．Ｂ４、ＨＥＲ４．Ｇ４、ＨＥＲ４．Ｆ４、ＨＥＲ４．Ａ８、ＨＥＲ４．Ｂ６、ＨＥＲ４．Ｄ４、ＨＥＲ４．Ｄ７、ＨＥＲ４．Ｄ１１、ＨＥＲ４．Ｄ１２、ＨＥＲ４．Ｅ３、ＨＥＲ４．Ｅ７、ＨＥＲ４．Ｆ８、およびＨＥＲ４．Ｃ７からなる群より選択される、請求項４１に記載の二重特異的単鎖Ｆｖ抗体。
【請求項４３】
組み換えによって生産された、請求項４１に記載の二重特異的単鎖Ｆｖ抗体。
【請求項４４】
前記第１のアームと前記第２のアームとが腫瘍細胞の上に発現させられた異なるエピトープに対して特異的に結合し、そして該二重特異的単鎖Ｆｖ抗体の該エピトープに対する結合によって、該腫瘍細胞の生存の減少が生じる、請求項４１に記載の二重特異的単鎖Ｆｖ抗体。
【請求項４５】
前記第１のアームと前記第２のアームが、Ｃ６．５、Ｃ６ＭＬ３−９、Ｃ６ＭＨ３−Ｂ１、Ｃ６−Ｂ１Ｄ２、Ｆ５、ＨＥＲ３．Ａ５、ＨＥＲ３．Ｆ４、ＨＥＲ３．Ｈ１、ＨＥＲ３．Ｈ３、ＨＥＲ３．Ｅ１２、ＨＥＲ３．Ｂ１２、ＥＧＦＲ．Ｅ１２、ＥＧＦＲ．Ｃ１０、ＥＧＦＲ．Ｂ１１、ＥＧＦＲ．Ｅ８、ＨＥＲ４．Ｂ４、ＨＥＲ４．Ｇ４、ＨＥＲ４．Ｆ４、ＨＥＲ４．Ａ８、ＨＥＲ４．Ｂ６、ＨＥＲ４．Ｄ４、ＨＥＲ４．Ｄ７、ＨＥＲ４．Ｄ１１、ＨＥＲ４．Ｄ１２、ＨＥＲ４．Ｅ３、ＨＥＲ４．Ｅ７、ＨＥＲ４．Ｆ８、およびＨＥＲ４．Ｃ７からなる群より選択される、請求項４４に記載の二重特異的単鎖Ｆｖ抗体。
【請求項４６】
請求項８に記載の二重特異的単鎖Ｆｖ抗体と薬学的に許容される担体とを含む、組成物。
【請求項４７】
ガンを処置するための方法であって、治療有効量の請求項４６に記載の組成物をそれが必要な被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項４８】
前記ガンが、乳ガン、結腸ガン、卵巣ガン、子宮内膜ガン、胃ガン、膵臓ガン、前立腺ガン、および唾液腺ガンからなる群より選択される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
ガンを処置するための方法であって、治療有効量の請求項１０に記載の組成物を、化学療法薬、外部線照射、標的化させられた放射性同位元素、およびシグナル伝達阻害因子からなる群より選択される他の細胞毒性薬と組み合わせて、それが必要な患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項５０】
請求項３６に記載の二重特異的単鎖Ｆｖ抗体をコードする核酸配列を含む、ベクター。
【請求項５１】
プラスミド、コスミド、ファージ、およびウイルスからなる群より選択される、請求項５０に記載のベクター。
【請求項５２】
前記ベクターが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、および配列番号１４からなる群より選択される核酸配列を含む、請求項５０に記載のベクター。
【請求項５３】
前記ベクターが、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、および配列番号３７からなる群より選択されるポリペプチドをコードする核酸配列を含む、請求項５０に記載のベクター。
【請求項５４】
請求項５０に記載のベクターで形質転換された、宿主細胞。
【請求項５５】
腫瘍細胞である、請求項５２に記載の宿主細胞。
【請求項５６】
ＨＥＲ３に対する結合特異性を有している第１のアームと、ＨＥＲ２／ｎｅｕに対する結合特異性を有している第２のアームを含む、二重特異的単鎖Ｆｖ抗体ＡＬＭ。
【請求項５７】
ＨＥＲ３の上にある２つの異なるエピトープに対する結合親和性を有している第１のアームと第２のアームとを含む、二重特異的単鎖Ｆｖ抗体ＡＬＦ。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１１Ｃ】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【公表番号】特表２００９−５００００５（Ｐ２００９−５００００５Ａ）
【公表日】平成２１年１月８日（２００９．１．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５１７１３９（Ｐ２００８−５１７１３９）
【出願日】平成１８年６月１４日（２００６．６．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２３４７９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０８４１８１
【国際公開日】平成１９年７月２６日（２００７．７．２６）
【出願人】（５０００２５５０３）ザ　リージェンツ　オブ　ザ　ユニバーシティ　オブ　カリフォルニア (26)
【出願人】（５０７４１００１０）
【Ｆターム（参考）】