免疫バランス調節剤
【課題】 本発明は、北海道産カラマツの抽出物の新たな用途を提供することを目的とする。
【解決手段】 本発明は、北海道産カラマツ（Ｌａｒｉｘ ｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓ）からの溶媒抽出物を含有する免疫バランス調節剤を提供する。本発明の免疫バランス調節剤は、北海道産カラマツの溶媒抽出物という天然成分を有効成分とした、極めて安全性の高い、生体の免疫バランスを調節して正常化するという効果を有する組成物である。本発明者らは、北海道産カラマツからの溶媒抽出物をマウスに投与することで、タイプ１免疫賦活効果による感染防御や抗腫瘍活性に加えて、免疫バランスを調節することにより、過度のタイプ２免疫応答によって生ずるアレルギー疾患の改善作用を示すことを見いだし、本発明を完成した。
【解決手段】 本発明は、北海道産カラマツ（Ｌａｒｉｘ ｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓ）からの溶媒抽出物を含有する免疫バランス調節剤を提供する。本発明の免疫バランス調節剤は、北海道産カラマツの溶媒抽出物という天然成分を有効成分とした、極めて安全性の高い、生体の免疫バランスを調節して正常化するという効果を有する組成物である。本発明者らは、北海道産カラマツからの溶媒抽出物をマウスに投与することで、タイプ１免疫賦活効果による感染防御や抗腫瘍活性に加えて、免疫バランスを調節することにより、過度のタイプ２免疫応答によって生ずるアレルギー疾患の改善作用を示すことを見いだし、本発明を完成した。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、北海道産カラマツからの溶媒抽出物を含有する免疫バランス調節剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本カラマツ（Ｌａｒｉｘ ｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓ）は、Ｌａｒｉｘ ｋａｅｍｐｆｅｒｉとも呼ばれる、マツ科カラマツ属に属する植物である。日本では、主に中部山岳地帯の山地帯から亜高山帯、東北、北海道などの、比較的寒冷な地域における植林樹種として用いられている。
【０００３】
日本カラマツの主な用途は住宅用あるいは家具用の木材である。特に北海道に植林され、生育した北海道産カラマツは、厳寒期を幾度となく過ごすことにより、強度に優れ、また木目が揃った良好な木材という、本州産カラマツにはない特徴を備えている。
【０００４】
一方、日本カラマツ自体或いはその抽出物の生理学的用途については、カラマツの樹皮の溶媒抽出物を含む美白効果を有する皮膚外用剤に関する発明（特許文献１）、カラマツの抽出成分を含む保湿性及び抗酸化作用を有する化粧料に関する発明（特許文献２）が公開されている程度であり、これまでのところ、注目を集めるには到っていない。
【特許文献１】特開平１０−２５２３８号公報
【特許文献２】特開２００６−５２１９７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、北海道産カラマツの抽出物の新たな用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、北海道産カラマツからの溶媒抽出物をマウスに投与することで、タイプ１免疫賦活効果による感染防御や抗腫瘍活性に加えて、免疫バランスを調節することにより、過度のタイプ２免疫応答によって生ずるアレルギー疾患の改善作用を示すことを見いだし、下記の各発明を完成した。
【０００７】
（１）北海道産カラマツ（Ｌａｒｉｘ ｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓ）からの溶媒抽出物を含有する免疫バランス調節剤。
【０００８】
（２）抗感染症用である、（１）に記載の免疫バランス調節剤。
【０００９】
（３）抗腫瘍用である、（１）に記載の免疫バランス調節剤。
【００１０】
（４）Ｔｈ１系免疫機能強化用である、（１）に記載の免疫バランス調節剤。
【００１１】
（５）ＴＮＦα及び又はインターロイキン１２産生促進用である、（４）に記載の免疫バランス調節剤。
【００１２】
（６）溶媒が水である、（１）〜（５）の何れかに記載の免疫バランス調節剤。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の免疫バランス調節剤は、北海道産カラマツの溶媒抽出物という天然成分を有効成分とした、極めて安全性の高い、生体の免疫バランスを調節して正常化するという効果を有する組成物である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明は、北海道産カラマツ（Ｌａｒｉｘ ｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓ）からの溶媒抽出物を含有する免疫バランス調節剤である。日本において、カラマツ（日本カラマツ）は、中部山岳地帯の山地帯から亜高山帯、東北、北海道などに生育或いは植林された植物であるが、本発明で使用するカラマツは、北海道に植林され、生育した北海道産カラマツである。
【００１５】
本発明の組成物は、北海道産カラマツからの溶媒抽出物を含む。抽出溶媒としては、水、又はメタノールやエタノールなどの低級アルコール、プロピレングリコールや１，３−ブチレングリコールなどの多価アルコールなどの水と混和可能な溶媒などを単独で、あるいは２種以上の混合溶媒を挙げることができる。好ましい抽出溶媒は水、アルコール類、それらの混液であり、水が特に好ましい。かかる溶媒の使用は、抽出時における操作性や安全性に優れるという利点を有する。
【００１６】
溶媒抽出は、北海道産カラマツを大鋸屑程度の適当な大きさに粉砕したものに水を加え、４℃〜５０℃、常圧で、好ましくは室温で数分〜数時間撹拌するか、あるいはプレス機を用いて絞り出し抽出を行ってもよい。水は、添加後に北海道産カラマツの粉砕物を撹拌できる程度の量又はそれ以上を加えればよい。また抽出液は、さらに濾過し、また濃縮して使用してもよく、スプレードライ或いは凍結乾燥によって乾燥させ、粉末として使用してもよい。
【００１７】
本発明にいう免疫バランス調節、すなわち免疫バランスを調節する作用とは、Ｔｈ１免疫系機能とＴｈ２免疫系機能の一方、特にＴｈ２系免疫機能が亢進されている状態を解消して、両免疫系機能が調節された状態に導く作用を意味する。なお、本発明にいう免疫バランスの調節は免疫バランスの調整と交換可能に使用される。
【００１８】
一般に、Ｔｈ１免疫系は、抗原提示細胞である樹状細胞やマクロファージからの抗原ペプチドの提示とＩＬ−１２の作用によって誘導されるＴｈ１細胞（Ｔヘルパー１細胞）が関与する細胞性免疫として理解されている。Ｔｈ１細胞は、ＩＦＮ−γなどＴｈ２細胞の分化阻害やＢ細胞の成熟阻害を介したＩｇＥ抗体の産生を抑制するサイトカインの他に、ＩＬ−２やＴＮＦ−αなどを産生し、キラーＴ細胞の活性化や樹状細胞やマクロファージなどの抗原提示細胞の活性を高める働きを有する。一方のＴｈ２免疫系は、抗原提示細胞であるマクロファージからの抗原ペプチドの提示とＩＬ−４の作用によって誘導されるＴｈ２細胞（Ｔヘルパー２細胞）が関与する液性免疫として理解されている。Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−４やＩＬ−１３などのＢ細胞の成熟を介したＩｇＥ抗体の産生を増加させるサイトカインの他に、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０を産生する。
【００１９】
Ｔｈ２細胞から産生されるＩＬ−４、ＩＬ−１０は、Ｔｈ１細胞からのＩＦＮ−γの産生を抑制するように、互いにその作用を調節し合うことが知られており、またＴｈ２免疫系機能が優性であると細胞性免疫が抑制され、感染症が重症化し易く、またＢ細胞の成熟を介したＩｇＥ抗体産生が増加し、アレルギー体質に陥りやすいと考えられている。従って、Ｔｈ１免疫系機能とＴｈ２免疫系機能のバランスの崩壊、特に行き過ぎたＴｈ２免疫系機能の亢進ないし優性は、必ずしも生体にとって好ましいものとは言えない。
【００２０】
本発明で使用する北海道産カラマツの溶媒抽出物は、マウス個体に対してＴＮＦ−αの産生を促進する作用、ＩＬ−１２の産生を促進する作用、またＬＰＳと同程度のマクロファージ凝集促進作用を示す。従って、本発明の免疫バランス調節剤を、特にＴｈ２系免疫機能が亢進している個体に投与することによって、Ｔｈ１系免疫機能を強化することができ、その結果、免疫バランスを調節することができる。この様に、本発明で使用する北海道産カラマツの溶媒抽出物は、Ｔｈ１免疫系機能を強化するＴｈ１免疫系機能強化剤として利用することもでき、またＴＮＦ−α産生促進剤、ＩＬ−１２産生促進剤としても利用することができる。
【００２１】
なお、上記の本発明で使用する北海道産カラマツの溶媒抽出物が示す生理活性は、全く意外なことに、同じマツ科カラマツ属に属する植物である北米産カラマツからの溶媒抽出物では確認することができない。
【００２２】
また、本発明で使用する北海道産カラマツの溶媒抽出物は、Ｔｈ１系免疫機能を強化することにより、Ｔｈ２免疫系機能が優位にある状態、例えばアレルギーを緩和することができ、あるいは感染症や悪性腫瘍などの細胞性免疫の亢進が求められる疾患の治療に対して有効である。
【００２３】
また、本発明で使用する北海道産カラマツの溶媒抽出物は、これを服用することで、平常時からＴｈ１免疫系機能とＴｈ２免疫系機能のバランスが保つことができ、感染症などの外的異物の侵入に対する抵抗性を高め、さらに行き過ぎた免疫応答反応であるアレルギーや自己免疫疾患に対しても、これを緩和する作用を有するものと期待することができる。
【００２４】
具体的には、本発明の免疫バランス調節剤には、ウイルスや細菌等による感染症抗腫瘍、炎症、アトピー性皮膚炎、肌荒れ、敏感肌、花粉症、喘息、気管支喘息、鼻炎、蕁麻疹等のアレルギー性疾患などの予防、治療あるいは症状の改善効果を期待することができる。
【００２５】
本発明における北海道産カラマツの溶媒抽出物は、そのまま免疫バランス調節剤として利用できる他、一般的な賦形剤と組み合わせることで組成物とし、さらに皮膚外用剤、内服剤、注射剤その他の一般的な剤型に製剤化して使用することも可能である。
【００２６】
組成物あるいは剤型における北海道産カラマツの溶媒抽出物の配合量は特に規定されるものではなく、剤形の種類、品質、期待される効果の程度によって若干異なるが、組成物或いは製剤全量中、乾燥固形分として１％〜９９重量％、好ましくは１０〜９９重量％、更に好ましくは５０〜９９重量％配合させるのが良い。
【００２７】
上記組成物あるいは各種の剤型は、北海道産カラマツの抽出物の他に、ビタミン、生薬、抗炎症剤、抗ヒスタミン剤その他の医薬を有効成分として必要に応じて配合し、医薬品、医薬部外品の形態としても差し支えない。
【００２８】
また製剤化において使用される賦形剤は、例えば、錠剤やカプセル等の経口固形剤、水性液剤や懸濁液剤などの内服液剤、軟膏、貼付剤、ローション、クリーム、スプレー、座剤その他の、剤型毎に当業者に広く知られ、また用いられている成分を適宜組み合わせて使用することができる。
【００２９】
本発明の免疫バランス調節剤は、適当な食品素材と組み合わせることで、食品、健康食品或いはサプリメントとして製造し、利用することができる。
【００３０】
以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明はかかる実施例に限定的に解釈されるものではない。
【実施例】
【００３１】
＜実施例１＞
北海道産カラマツの芯材１４９ｋｇ（含水率約４５％）の粉砕物に水８４０Ｌを加え、１８０分間浸漬抽出後、スクリュープレスで粉砕物を絞り、水抽出液８００Ｌを得た。この水抽出液をＭＦ膜で濾過した後に凍結乾燥して、北海道産カラマツの水抽出物（乾燥）２．８ｋｇを得た。
【００３２】
＜比較例＞
実施例１の北海道産カラマツを北米産カラマツ（Ｌａｒｉｘ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）に置き換えた他は、実施例１と同様にして、北米産カラマツの水抽出物（乾燥）２．５ｋｇを得た。
【００３３】
＜試験例＞
（１）ＴＮＦ−α産生促進作用
Ｃ５７ＢＬ／６マウスより腹腔内細胞を回収し、９６穴プレートに１×１０５ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加えた。３７℃で５％ＣＯ２の条件で３時間インキュベートした後に、非接着性の細胞を除去した。接着性腹腔内細胞に対して、最終濃度０．２ｍｇ／ｍＬあるいは２ｍｇ／ｍＬで、実施例１で調製した北海道産カラマツの水抽出物（以下、実施例１の抽出物と表す）及び比較例で調製した北米産カラマツの水抽出物（以下、比較例の抽出物と表す）を添加した。３７℃で５％ＣＯ２の条件で４８時間培養した後、無添加の条件（コントロール）とともに、培養上清中に産生されたＴＮＦ−αについて、市販のＥＬＩＳＡキットを使用して測定した。
【００３４】
その結果、コントロールと比較して、比較例の抽出物を添加した群ではＴＮＦ−αレベルの増強は確認されなかったが、実施例１の抽出物を添加した群において、有意なＴＮＦ−αの産生促進作用が確認された（図１）。
【００３５】
（２）腹腔滲出細胞（ＰＥＣ）マクロファージ凝集作用
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにチオグリコレートを腹腔内投与し、５日後に回収された腹腔滲出細胞（ＰＥＣ）を、９６穴プレートに１×１０５ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加え、３７℃で５％ＣＯ２の条件で３時間インキュベートした後に、非接着性の細胞を除去した。得られたマクロファージに対して、最終濃度２０ｍｇ／ｍＬの実施例１の抽出物を添加した。対照群として最終濃度が１μｇ／ｍＬになるようにリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を添加したものを用意し、４８時間後に位相差顕微鏡を用いて、細胞の形態観察を行った。
【００３６】
その結果、無添加群（コントロール）に比べて、実施例１の抽出物を添加した群では著しい細胞の凝集が確認されたが、ＬＰＳ対照群では確認されなかった（図２）。
【００３７】
（３）脾臓細胞凝集作用
Ｃ５７ＢＬ／６マウスより回収した脾臓細胞を、９６穴プレートに５×１０５ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加え、さらに最終濃度２０ｍｇ／ｍＬの実施例１の抽出物を添加した。対照群として最終濃度が１μｇ／ｍＬになるようにリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を添加したものを用意した。４８時間後に位相差顕微鏡を用いて細胞の形態観察を行った。
【００３８】
その結果、無添加群（コントロール）に比べて、実施例１の抽出物を添加した群において細胞の凝集が確認されたが、ＬＰＳ対照群ではさらに著しい細胞の凝集が確認された（図３）。
【００３９】
（４）骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）からのＩＬ−１２およびＴＮＦ−α産生誘導作用
Ｃ５７ＢＬ／６マウスより回収した骨髄細胞を、６穴プレートに１×１０６ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加え、ＧＭ−ＣＳＦの存在下で６日間培養することでＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を分化誘導した。誘導されたＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞に、最終濃度０．５、２、１０ｍｇ／ｍＬとなるように実施例１の抽出物を添加した。６時間後にＢＦＡを添加し、さらに６時間培養を行った後に細胞を回収した。ＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞からのＩＬ−１２およびＴＮＦ−α産生について、細胞内染色法を用いたフローサイトメトリーにより評価した。
【００４０】
その結果、無添加群（コントロール）に比べて、実施例１の抽出物を添加した群において、樹状細胞からのＩＬ−１２及びＴＮＦ−αの産生促進作用が確認された（図４）。
【００４１】
（５）ＢＭＤＣからのＴＬＲ２およびＴＬＲ４を介したＴＮＦ−α産生誘導作用
野生型、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ２ノックアウト（ＴＬＲ２ＫＯ、株式会社オリエンタルバイオサービス）、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ４ノックアウト（ＴＬＲ４ＫＯ、株式会社オリエンタルバイオサービス）及びＴｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ９ノックアウト（ＴＬＲ９ＫＯ、株式会社オリエンタルバイオサービス）の各マウス（Ｃ５７ＢＬ／６マウス）よりそれぞれ回収された骨髄細胞を、６穴プレートに１×１０６ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加え、ＧＭ−ＣＳＦの存在下で６日間培養することでそれぞれのＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を分化誘導した。誘導されたＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞に、最終濃度１０ｍｇ／ｍＬ又は２０ｍｇ／ｍＬで実施例１の抽出物を添加し、１４時間培養を行った後に、培養上清中に産生されたＴＮＦ−αレベルをＥＬＩＳＡ法により評価した。
【００４２】
その結果、野生型に比べて、ＴＬＲ２ＫＯおよびＴＬＲ４ＫＯ由来のＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を刺激した場合においてＴＮＦ−αの産生の減弱が認められ、実施例１の抽出物はＢＭＤＣのＴＬＲ２およびＴＬＲ４分子を介してＴＮＦ−αの産生を誘導することが確認された（図５）。
【００４３】
（６）ＬＰＳを除去した実施例１の抽出物によるＢＭＤＣからのＩＬ−１２及びＴＮＦ−α産生誘導作用
Ｃ５７ＢＬ／６マウスより回収した骨髄細胞を、６穴プレートに１×１０６ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加え、ＧＭ−ＣＳＦの存在下で６日間培養することでＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を分化誘導した。誘導されたＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞に、市販のエンドトキシン除去キット（Ｄｅｔｏｘｉ−Ｇｅｌ ＡｆｆｉｎｉｔｙＰａｋ Ｃｏｌｕｍｎｓ タカラバイオ株式会社）を用いてＬＰＳを除去した実施例１の抽出物を０．４５μｍポアサイズ又は０．２２μｍポアサイズのフィルターでそれぞれ濾過滅菌した後、最終濃度が１０ｍｇ／ｍＬになるように調製して添加した。２４時間培養を行った後に培養上清中に産生されたＩＬ−１２およびＴＮＦ−αレベルをＥＬＩＳＡ法によりそれぞれ評価した。
【００４４】
その結果、ＬＰＳを除去した実施例１の抽出物を用いてＢＭＤＣを刺激した場合においても、ＩＬ−１２（図６ａ）及びＴＮＦ−α（図６ｂ）の産生が確認された。
【００４５】
（７）ＬＰＳを除去した実施例１の抽出物によるＢＭＤＣからのＩＬ−１２及びＴＮＦ−α産生誘導能
Ｃ５７ＢＬ／６マウスより回収した骨髄細胞を、６穴プレートに１×１０６ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加え、ＧＭ−ＣＳＦの存在下で６日間培養することでＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を分化誘導した。誘導されたＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を回収し、氷中にて４０分間インキュベートした。その後、ＦＩＴＣ標識した実施例１の抽出物を０．１ｍｇ／ｍＬになるように添加し、そのまま氷中あるいは３７℃でそれぞれ１５分間インキュベートした。遊離の状態にあるＦＩＴＣ標識された実施例１の抽出物を洗浄除去した後に、樹状細胞に取り込まれた実施例１の抽出物レベルを、ＦＩＴＣの蛍光強度を指標としたフローサイトメトリーによりそれぞれ評価した。
【００４６】
その結果、実施例１の抽出物はＢＭＤＣに直接取り込まれることが確認された（図７）。
【００４７】
（８）抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞の誘導
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに卵白アルブミン（ＯＶＡ）蛋白質を２００μｇ／マウスで単独投与した群、ＯＶＡに加えて実施例１の抽出物５ｍｇ／マウスを投与した群、ＯＶＡに加えてＢＭＤＣ５×１０５ｃｅｌｌｓ／マウスを投与した群、ＯＶＡと実施例１の抽出物とＢＭＤＣを全て前記の量で投与した群を用意した。投与はマウスフットパットに皮内注射により行った。投与７日後、更に同様の条件で繰り返し投与を行った。繰り返し投与から５日後に、投与したフットパット近傍の所属リンパ節を回収し、ＯＶＡペプチド抗原と結合できるＴ細胞受容体を持つＣＤ８＋Ｔ細胞（ＯＶＡ抗原特異的細胞傷害活性Ｔ細胞）の誘導能を、ＦＡＣＳ解析により評価した。
【００４８】
その結果、ＯＶＡ単独投与に比べて、実施例１の抽出物を併用することにより、抗原特異的細胞傷害活性Ｔ細胞の効率的な誘導が確認された。さらにＢＭＤＣとの併用投与においても、実施例１の抽出物を用いることにより、抗原特異的細胞傷害活性Ｔ細胞の効率的な誘導が確認された（図８）。
【００４９】
（９）免疫賦活作用による抗腫瘍活性
ＯＶＡを仮想腫瘍抗原として産生する癌細胞（ＥＧ７）２×１０６ｃｅｌｌｓをＣ５７ＢＬ／６マウスに皮内接種後、５日目、８日目及び１１日目にそれぞれＯＶＡ２００μｇ、５×１０５ｃｅｌｌｓのＢＭＤＣ及び実施例１の抽出物１０ｍｇ／マウス又は２０ｍｇ／マウスを、腫瘍の所属リンパ節近傍に皮内投与した。何も処置を行わないマウスをコントロールとし、形成される癌組織の体積を癌細胞の皮内接種後５日目〜２１日目まで計測した。
【００５０】
その結果、実施例１の北海道産カラマツの抽出物を投与した群において、コントロールと比べて癌組織の体積増加が著しく抑制されることが確認された（図９）。
【００５１】
（１０）免疫賦活作用による抗腫瘍活性
ＯＶＡを仮想腫瘍抗原として産生する癌細胞（ＥＧ７）２×１０６ｃｅｌｌｓをＣ５７ＢＬ／６マウスに皮内接種後、５日目、８日目及び１１日目に、ＯＶＡ２００μｇと２×１０６ｃｅｌｌｓのＢＭＤＣ、２×１０６ｃｅｌｌｓのＢＭＤＣと実施例１の抽出物２０ｍｇ／マウス、ＯＶＡ２００μｇと実施例１の抽出物２０ｍｇ／マウス、又はＯＶＡ２００μｇと実施例１の抽出物２０ｍｇ／マウスと２×１０６ｃｅｌｌｓのＢＭＤＣを、それぞれ腫瘍の所属リンパ節近傍に皮下投与した。何も処置を行わないマウスをコントロールとし、形成される癌組織の体積を癌細胞の皮内接種後５日目〜２７日目まで計測した。
【００５２】
その結果、ＯＶＡとＢＭＤＣと実施例１の北海道産カラマツの抽出物とを投与した群において、コントロール又はその他の群と比べて癌組織の体積増加が著しく抑制されることが確認された（図１０、図１１）。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】実施例１の抽出物のＴＮＦ−α産生促進作用を示すグラフである。縦軸はＴＮＦ−α産生量を表す。
【図２】実施例１の抽出物の腹腔滲出細胞（ＰＥＣ）マクロファージ凝集作用を示す写真である。図中、左上はコントロール、中上は実施例１の抽出物、右上はＬＰＳ（対照群）であり、それぞれの下の写真は上の写真の倍率を変えたものである。
【図３】実施例１の抽出物の脾臓細胞凝集作用を示す写真である。図中、左上はコントロール、中上は実施例１の抽出物、右上はＬＰＳ（対照群）であり、それぞれの下の写真は上の写真の倍率を変えたものである。
【図４】実施例１の抽出物の骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）に対するＩＬ−１２およびＴＮＦ−α産生誘導作用をフローサイトメトリーで測定した結果を示すグラフである。
【図５】実施例１の抽出物がＢＭＤＣのＴＬＲ２およびＴＬＲ４分子を介してＴＮＦ−αを産生誘導することを示すグラフである。
【図６ａ】ＬＰＳを除去した実施例１の抽出物による、ＢＭＤＣからのＩＬ−１２産生誘導作用を示すグラフである。
【図６ｂ】ＬＰＳを除去した実施例１の抽出物による、ＢＭＤＣからのＴＮＦ−α産生誘導作用を示すグラフである。
【図７】ＦＩＴＣ標識された実施例１の抽出物が樹状細胞に取り込まれたことを表した、ＦＩＴＣの蛍光強度を指標としたフローサイトメトリー測定の結果を示すグラフである。グラフ上が氷中インキュベーション、グラフ下が３７℃インキュベーションである。
【図８】実施例１の抽出物の抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞の誘導作用を表した、ＦＡＣＳ解析の結果を示すグラフである。
【図９】実施例１の抽出物の投与により、癌細胞移植マウスでの癌組織の体積増加が抑制されることを示すグラフである。
【図１０】ＯＶＡ、ＢＭＤＣ及び実施例１の抽出物の投与により、癌細胞移植マウスでの癌組織の体積増加が抑制されることを示すグラフである。
【図１１】ＯＶＡ、ＢＭＤＣ、実施例１の抽出物を投与した癌細胞移植マウスの癌組織（癌細胞移植後２１日目）の様子を示す写真である。写真は左からコントロール（無処置群）、ＢＭＤＣと実施例１の抽出物、ＢＭＤＣとＯＶＡ、ＯＶＡと実施例１の抽出物、ＢＭＤＣとＯＶＡと実施例１の抽出物をそれぞれ投与したマウスの癌組織である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、北海道産カラマツからの溶媒抽出物を含有する免疫バランス調節剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本カラマツ（Ｌａｒｉｘ ｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓ）は、Ｌａｒｉｘ ｋａｅｍｐｆｅｒｉとも呼ばれる、マツ科カラマツ属に属する植物である。日本では、主に中部山岳地帯の山地帯から亜高山帯、東北、北海道などの、比較的寒冷な地域における植林樹種として用いられている。
【０００３】
日本カラマツの主な用途は住宅用あるいは家具用の木材である。特に北海道に植林され、生育した北海道産カラマツは、厳寒期を幾度となく過ごすことにより、強度に優れ、また木目が揃った良好な木材という、本州産カラマツにはない特徴を備えている。
【０００４】
一方、日本カラマツ自体或いはその抽出物の生理学的用途については、カラマツの樹皮の溶媒抽出物を含む美白効果を有する皮膚外用剤に関する発明（特許文献１）、カラマツの抽出成分を含む保湿性及び抗酸化作用を有する化粧料に関する発明（特許文献２）が公開されている程度であり、これまでのところ、注目を集めるには到っていない。
【特許文献１】特開平１０−２５２３８号公報
【特許文献２】特開２００６−５２１９７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、北海道産カラマツの抽出物の新たな用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、北海道産カラマツからの溶媒抽出物をマウスに投与することで、タイプ１免疫賦活効果による感染防御や抗腫瘍活性に加えて、免疫バランスを調節することにより、過度のタイプ２免疫応答によって生ずるアレルギー疾患の改善作用を示すことを見いだし、下記の各発明を完成した。
【０００７】
（１）北海道産カラマツ（Ｌａｒｉｘ ｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓ）からの溶媒抽出物を含有する免疫バランス調節剤。
【０００８】
（２）抗感染症用である、（１）に記載の免疫バランス調節剤。
【０００９】
（３）抗腫瘍用である、（１）に記載の免疫バランス調節剤。
【００１０】
（４）Ｔｈ１系免疫機能強化用である、（１）に記載の免疫バランス調節剤。
【００１１】
（５）ＴＮＦα及び又はインターロイキン１２産生促進用である、（４）に記載の免疫バランス調節剤。
【００１２】
（６）溶媒が水である、（１）〜（５）の何れかに記載の免疫バランス調節剤。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の免疫バランス調節剤は、北海道産カラマツの溶媒抽出物という天然成分を有効成分とした、極めて安全性の高い、生体の免疫バランスを調節して正常化するという効果を有する組成物である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明は、北海道産カラマツ（Ｌａｒｉｘ ｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓ）からの溶媒抽出物を含有する免疫バランス調節剤である。日本において、カラマツ（日本カラマツ）は、中部山岳地帯の山地帯から亜高山帯、東北、北海道などに生育或いは植林された植物であるが、本発明で使用するカラマツは、北海道に植林され、生育した北海道産カラマツである。
【００１５】
本発明の組成物は、北海道産カラマツからの溶媒抽出物を含む。抽出溶媒としては、水、又はメタノールやエタノールなどの低級アルコール、プロピレングリコールや１，３−ブチレングリコールなどの多価アルコールなどの水と混和可能な溶媒などを単独で、あるいは２種以上の混合溶媒を挙げることができる。好ましい抽出溶媒は水、アルコール類、それらの混液であり、水が特に好ましい。かかる溶媒の使用は、抽出時における操作性や安全性に優れるという利点を有する。
【００１６】
溶媒抽出は、北海道産カラマツを大鋸屑程度の適当な大きさに粉砕したものに水を加え、４℃〜５０℃、常圧で、好ましくは室温で数分〜数時間撹拌するか、あるいはプレス機を用いて絞り出し抽出を行ってもよい。水は、添加後に北海道産カラマツの粉砕物を撹拌できる程度の量又はそれ以上を加えればよい。また抽出液は、さらに濾過し、また濃縮して使用してもよく、スプレードライ或いは凍結乾燥によって乾燥させ、粉末として使用してもよい。
【００１７】
本発明にいう免疫バランス調節、すなわち免疫バランスを調節する作用とは、Ｔｈ１免疫系機能とＴｈ２免疫系機能の一方、特にＴｈ２系免疫機能が亢進されている状態を解消して、両免疫系機能が調節された状態に導く作用を意味する。なお、本発明にいう免疫バランスの調節は免疫バランスの調整と交換可能に使用される。
【００１８】
一般に、Ｔｈ１免疫系は、抗原提示細胞である樹状細胞やマクロファージからの抗原ペプチドの提示とＩＬ−１２の作用によって誘導されるＴｈ１細胞（Ｔヘルパー１細胞）が関与する細胞性免疫として理解されている。Ｔｈ１細胞は、ＩＦＮ−γなどＴｈ２細胞の分化阻害やＢ細胞の成熟阻害を介したＩｇＥ抗体の産生を抑制するサイトカインの他に、ＩＬ−２やＴＮＦ−αなどを産生し、キラーＴ細胞の活性化や樹状細胞やマクロファージなどの抗原提示細胞の活性を高める働きを有する。一方のＴｈ２免疫系は、抗原提示細胞であるマクロファージからの抗原ペプチドの提示とＩＬ−４の作用によって誘導されるＴｈ２細胞（Ｔヘルパー２細胞）が関与する液性免疫として理解されている。Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−４やＩＬ−１３などのＢ細胞の成熟を介したＩｇＥ抗体の産生を増加させるサイトカインの他に、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０を産生する。
【００１９】
Ｔｈ２細胞から産生されるＩＬ−４、ＩＬ−１０は、Ｔｈ１細胞からのＩＦＮ−γの産生を抑制するように、互いにその作用を調節し合うことが知られており、またＴｈ２免疫系機能が優性であると細胞性免疫が抑制され、感染症が重症化し易く、またＢ細胞の成熟を介したＩｇＥ抗体産生が増加し、アレルギー体質に陥りやすいと考えられている。従って、Ｔｈ１免疫系機能とＴｈ２免疫系機能のバランスの崩壊、特に行き過ぎたＴｈ２免疫系機能の亢進ないし優性は、必ずしも生体にとって好ましいものとは言えない。
【００２０】
本発明で使用する北海道産カラマツの溶媒抽出物は、マウス個体に対してＴＮＦ−αの産生を促進する作用、ＩＬ−１２の産生を促進する作用、またＬＰＳと同程度のマクロファージ凝集促進作用を示す。従って、本発明の免疫バランス調節剤を、特にＴｈ２系免疫機能が亢進している個体に投与することによって、Ｔｈ１系免疫機能を強化することができ、その結果、免疫バランスを調節することができる。この様に、本発明で使用する北海道産カラマツの溶媒抽出物は、Ｔｈ１免疫系機能を強化するＴｈ１免疫系機能強化剤として利用することもでき、またＴＮＦ−α産生促進剤、ＩＬ−１２産生促進剤としても利用することができる。
【００２１】
なお、上記の本発明で使用する北海道産カラマツの溶媒抽出物が示す生理活性は、全く意外なことに、同じマツ科カラマツ属に属する植物である北米産カラマツからの溶媒抽出物では確認することができない。
【００２２】
また、本発明で使用する北海道産カラマツの溶媒抽出物は、Ｔｈ１系免疫機能を強化することにより、Ｔｈ２免疫系機能が優位にある状態、例えばアレルギーを緩和することができ、あるいは感染症や悪性腫瘍などの細胞性免疫の亢進が求められる疾患の治療に対して有効である。
【００２３】
また、本発明で使用する北海道産カラマツの溶媒抽出物は、これを服用することで、平常時からＴｈ１免疫系機能とＴｈ２免疫系機能のバランスが保つことができ、感染症などの外的異物の侵入に対する抵抗性を高め、さらに行き過ぎた免疫応答反応であるアレルギーや自己免疫疾患に対しても、これを緩和する作用を有するものと期待することができる。
【００２４】
具体的には、本発明の免疫バランス調節剤には、ウイルスや細菌等による感染症抗腫瘍、炎症、アトピー性皮膚炎、肌荒れ、敏感肌、花粉症、喘息、気管支喘息、鼻炎、蕁麻疹等のアレルギー性疾患などの予防、治療あるいは症状の改善効果を期待することができる。
【００２５】
本発明における北海道産カラマツの溶媒抽出物は、そのまま免疫バランス調節剤として利用できる他、一般的な賦形剤と組み合わせることで組成物とし、さらに皮膚外用剤、内服剤、注射剤その他の一般的な剤型に製剤化して使用することも可能である。
【００２６】
組成物あるいは剤型における北海道産カラマツの溶媒抽出物の配合量は特に規定されるものではなく、剤形の種類、品質、期待される効果の程度によって若干異なるが、組成物或いは製剤全量中、乾燥固形分として１％〜９９重量％、好ましくは１０〜９９重量％、更に好ましくは５０〜９９重量％配合させるのが良い。
【００２７】
上記組成物あるいは各種の剤型は、北海道産カラマツの抽出物の他に、ビタミン、生薬、抗炎症剤、抗ヒスタミン剤その他の医薬を有効成分として必要に応じて配合し、医薬品、医薬部外品の形態としても差し支えない。
【００２８】
また製剤化において使用される賦形剤は、例えば、錠剤やカプセル等の経口固形剤、水性液剤や懸濁液剤などの内服液剤、軟膏、貼付剤、ローション、クリーム、スプレー、座剤その他の、剤型毎に当業者に広く知られ、また用いられている成分を適宜組み合わせて使用することができる。
【００２９】
本発明の免疫バランス調節剤は、適当な食品素材と組み合わせることで、食品、健康食品或いはサプリメントとして製造し、利用することができる。
【００３０】
以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明はかかる実施例に限定的に解釈されるものではない。
【実施例】
【００３１】
＜実施例１＞
北海道産カラマツの芯材１４９ｋｇ（含水率約４５％）の粉砕物に水８４０Ｌを加え、１８０分間浸漬抽出後、スクリュープレスで粉砕物を絞り、水抽出液８００Ｌを得た。この水抽出液をＭＦ膜で濾過した後に凍結乾燥して、北海道産カラマツの水抽出物（乾燥）２．８ｋｇを得た。
【００３２】
＜比較例＞
実施例１の北海道産カラマツを北米産カラマツ（Ｌａｒｉｘ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）に置き換えた他は、実施例１と同様にして、北米産カラマツの水抽出物（乾燥）２．５ｋｇを得た。
【００３３】
＜試験例＞
（１）ＴＮＦ−α産生促進作用
Ｃ５７ＢＬ／６マウスより腹腔内細胞を回収し、９６穴プレートに１×１０５ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加えた。３７℃で５％ＣＯ２の条件で３時間インキュベートした後に、非接着性の細胞を除去した。接着性腹腔内細胞に対して、最終濃度０．２ｍｇ／ｍＬあるいは２ｍｇ／ｍＬで、実施例１で調製した北海道産カラマツの水抽出物（以下、実施例１の抽出物と表す）及び比較例で調製した北米産カラマツの水抽出物（以下、比較例の抽出物と表す）を添加した。３７℃で５％ＣＯ２の条件で４８時間培養した後、無添加の条件（コントロール）とともに、培養上清中に産生されたＴＮＦ−αについて、市販のＥＬＩＳＡキットを使用して測定した。
【００３４】
その結果、コントロールと比較して、比較例の抽出物を添加した群ではＴＮＦ−αレベルの増強は確認されなかったが、実施例１の抽出物を添加した群において、有意なＴＮＦ−αの産生促進作用が確認された（図１）。
【００３５】
（２）腹腔滲出細胞（ＰＥＣ）マクロファージ凝集作用
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにチオグリコレートを腹腔内投与し、５日後に回収された腹腔滲出細胞（ＰＥＣ）を、９６穴プレートに１×１０５ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加え、３７℃で５％ＣＯ２の条件で３時間インキュベートした後に、非接着性の細胞を除去した。得られたマクロファージに対して、最終濃度２０ｍｇ／ｍＬの実施例１の抽出物を添加した。対照群として最終濃度が１μｇ／ｍＬになるようにリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を添加したものを用意し、４８時間後に位相差顕微鏡を用いて、細胞の形態観察を行った。
【００３６】
その結果、無添加群（コントロール）に比べて、実施例１の抽出物を添加した群では著しい細胞の凝集が確認されたが、ＬＰＳ対照群では確認されなかった（図２）。
【００３７】
（３）脾臓細胞凝集作用
Ｃ５７ＢＬ／６マウスより回収した脾臓細胞を、９６穴プレートに５×１０５ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加え、さらに最終濃度２０ｍｇ／ｍＬの実施例１の抽出物を添加した。対照群として最終濃度が１μｇ／ｍＬになるようにリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を添加したものを用意した。４８時間後に位相差顕微鏡を用いて細胞の形態観察を行った。
【００３８】
その結果、無添加群（コントロール）に比べて、実施例１の抽出物を添加した群において細胞の凝集が確認されたが、ＬＰＳ対照群ではさらに著しい細胞の凝集が確認された（図３）。
【００３９】
（４）骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）からのＩＬ−１２およびＴＮＦ−α産生誘導作用
Ｃ５７ＢＬ／６マウスより回収した骨髄細胞を、６穴プレートに１×１０６ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加え、ＧＭ−ＣＳＦの存在下で６日間培養することでＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を分化誘導した。誘導されたＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞に、最終濃度０．５、２、１０ｍｇ／ｍＬとなるように実施例１の抽出物を添加した。６時間後にＢＦＡを添加し、さらに６時間培養を行った後に細胞を回収した。ＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞からのＩＬ−１２およびＴＮＦ−α産生について、細胞内染色法を用いたフローサイトメトリーにより評価した。
【００４０】
その結果、無添加群（コントロール）に比べて、実施例１の抽出物を添加した群において、樹状細胞からのＩＬ−１２及びＴＮＦ−αの産生促進作用が確認された（図４）。
【００４１】
（５）ＢＭＤＣからのＴＬＲ２およびＴＬＲ４を介したＴＮＦ−α産生誘導作用
野生型、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ２ノックアウト（ＴＬＲ２ＫＯ、株式会社オリエンタルバイオサービス）、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ４ノックアウト（ＴＬＲ４ＫＯ、株式会社オリエンタルバイオサービス）及びＴｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ９ノックアウト（ＴＬＲ９ＫＯ、株式会社オリエンタルバイオサービス）の各マウス（Ｃ５７ＢＬ／６マウス）よりそれぞれ回収された骨髄細胞を、６穴プレートに１×１０６ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加え、ＧＭ−ＣＳＦの存在下で６日間培養することでそれぞれのＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を分化誘導した。誘導されたＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞に、最終濃度１０ｍｇ／ｍＬ又は２０ｍｇ／ｍＬで実施例１の抽出物を添加し、１４時間培養を行った後に、培養上清中に産生されたＴＮＦ−αレベルをＥＬＩＳＡ法により評価した。
【００４２】
その結果、野生型に比べて、ＴＬＲ２ＫＯおよびＴＬＲ４ＫＯ由来のＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を刺激した場合においてＴＮＦ−αの産生の減弱が認められ、実施例１の抽出物はＢＭＤＣのＴＬＲ２およびＴＬＲ４分子を介してＴＮＦ−αの産生を誘導することが確認された（図５）。
【００４３】
（６）ＬＰＳを除去した実施例１の抽出物によるＢＭＤＣからのＩＬ−１２及びＴＮＦ−α産生誘導作用
Ｃ５７ＢＬ／６マウスより回収した骨髄細胞を、６穴プレートに１×１０６ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加え、ＧＭ−ＣＳＦの存在下で６日間培養することでＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を分化誘導した。誘導されたＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞に、市販のエンドトキシン除去キット（Ｄｅｔｏｘｉ−Ｇｅｌ ＡｆｆｉｎｉｔｙＰａｋ Ｃｏｌｕｍｎｓ タカラバイオ株式会社）を用いてＬＰＳを除去した実施例１の抽出物を０．４５μｍポアサイズ又は０．２２μｍポアサイズのフィルターでそれぞれ濾過滅菌した後、最終濃度が１０ｍｇ／ｍＬになるように調製して添加した。２４時間培養を行った後に培養上清中に産生されたＩＬ−１２およびＴＮＦ−αレベルをＥＬＩＳＡ法によりそれぞれ評価した。
【００４４】
その結果、ＬＰＳを除去した実施例１の抽出物を用いてＢＭＤＣを刺激した場合においても、ＩＬ−１２（図６ａ）及びＴＮＦ−α（図６ｂ）の産生が確認された。
【００４５】
（７）ＬＰＳを除去した実施例１の抽出物によるＢＭＤＣからのＩＬ−１２及びＴＮＦ−α産生誘導能
Ｃ５７ＢＬ／６マウスより回収した骨髄細胞を、６穴プレートに１×１０６ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように加え、ＧＭ−ＣＳＦの存在下で６日間培養することでＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を分化誘導した。誘導されたＣＤ１１ｃ陽性樹状細胞を回収し、氷中にて４０分間インキュベートした。その後、ＦＩＴＣ標識した実施例１の抽出物を０．１ｍｇ／ｍＬになるように添加し、そのまま氷中あるいは３７℃でそれぞれ１５分間インキュベートした。遊離の状態にあるＦＩＴＣ標識された実施例１の抽出物を洗浄除去した後に、樹状細胞に取り込まれた実施例１の抽出物レベルを、ＦＩＴＣの蛍光強度を指標としたフローサイトメトリーによりそれぞれ評価した。
【００４６】
その結果、実施例１の抽出物はＢＭＤＣに直接取り込まれることが確認された（図７）。
【００４７】
（８）抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞の誘導
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに卵白アルブミン（ＯＶＡ）蛋白質を２００μｇ／マウスで単独投与した群、ＯＶＡに加えて実施例１の抽出物５ｍｇ／マウスを投与した群、ＯＶＡに加えてＢＭＤＣ５×１０５ｃｅｌｌｓ／マウスを投与した群、ＯＶＡと実施例１の抽出物とＢＭＤＣを全て前記の量で投与した群を用意した。投与はマウスフットパットに皮内注射により行った。投与７日後、更に同様の条件で繰り返し投与を行った。繰り返し投与から５日後に、投与したフットパット近傍の所属リンパ節を回収し、ＯＶＡペプチド抗原と結合できるＴ細胞受容体を持つＣＤ８＋Ｔ細胞（ＯＶＡ抗原特異的細胞傷害活性Ｔ細胞）の誘導能を、ＦＡＣＳ解析により評価した。
【００４８】
その結果、ＯＶＡ単独投与に比べて、実施例１の抽出物を併用することにより、抗原特異的細胞傷害活性Ｔ細胞の効率的な誘導が確認された。さらにＢＭＤＣとの併用投与においても、実施例１の抽出物を用いることにより、抗原特異的細胞傷害活性Ｔ細胞の効率的な誘導が確認された（図８）。
【００４９】
（９）免疫賦活作用による抗腫瘍活性
ＯＶＡを仮想腫瘍抗原として産生する癌細胞（ＥＧ７）２×１０６ｃｅｌｌｓをＣ５７ＢＬ／６マウスに皮内接種後、５日目、８日目及び１１日目にそれぞれＯＶＡ２００μｇ、５×１０５ｃｅｌｌｓのＢＭＤＣ及び実施例１の抽出物１０ｍｇ／マウス又は２０ｍｇ／マウスを、腫瘍の所属リンパ節近傍に皮内投与した。何も処置を行わないマウスをコントロールとし、形成される癌組織の体積を癌細胞の皮内接種後５日目〜２１日目まで計測した。
【００５０】
その結果、実施例１の北海道産カラマツの抽出物を投与した群において、コントロールと比べて癌組織の体積増加が著しく抑制されることが確認された（図９）。
【００５１】
（１０）免疫賦活作用による抗腫瘍活性
ＯＶＡを仮想腫瘍抗原として産生する癌細胞（ＥＧ７）２×１０６ｃｅｌｌｓをＣ５７ＢＬ／６マウスに皮内接種後、５日目、８日目及び１１日目に、ＯＶＡ２００μｇと２×１０６ｃｅｌｌｓのＢＭＤＣ、２×１０６ｃｅｌｌｓのＢＭＤＣと実施例１の抽出物２０ｍｇ／マウス、ＯＶＡ２００μｇと実施例１の抽出物２０ｍｇ／マウス、又はＯＶＡ２００μｇと実施例１の抽出物２０ｍｇ／マウスと２×１０６ｃｅｌｌｓのＢＭＤＣを、それぞれ腫瘍の所属リンパ節近傍に皮下投与した。何も処置を行わないマウスをコントロールとし、形成される癌組織の体積を癌細胞の皮内接種後５日目〜２７日目まで計測した。
【００５２】
その結果、ＯＶＡとＢＭＤＣと実施例１の北海道産カラマツの抽出物とを投与した群において、コントロール又はその他の群と比べて癌組織の体積増加が著しく抑制されることが確認された（図１０、図１１）。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】実施例１の抽出物のＴＮＦ−α産生促進作用を示すグラフである。縦軸はＴＮＦ−α産生量を表す。
【図２】実施例１の抽出物の腹腔滲出細胞（ＰＥＣ）マクロファージ凝集作用を示す写真である。図中、左上はコントロール、中上は実施例１の抽出物、右上はＬＰＳ（対照群）であり、それぞれの下の写真は上の写真の倍率を変えたものである。
【図３】実施例１の抽出物の脾臓細胞凝集作用を示す写真である。図中、左上はコントロール、中上は実施例１の抽出物、右上はＬＰＳ（対照群）であり、それぞれの下の写真は上の写真の倍率を変えたものである。
【図４】実施例１の抽出物の骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）に対するＩＬ−１２およびＴＮＦ−α産生誘導作用をフローサイトメトリーで測定した結果を示すグラフである。
【図５】実施例１の抽出物がＢＭＤＣのＴＬＲ２およびＴＬＲ４分子を介してＴＮＦ−αを産生誘導することを示すグラフである。
【図６ａ】ＬＰＳを除去した実施例１の抽出物による、ＢＭＤＣからのＩＬ−１２産生誘導作用を示すグラフである。
【図６ｂ】ＬＰＳを除去した実施例１の抽出物による、ＢＭＤＣからのＴＮＦ−α産生誘導作用を示すグラフである。
【図７】ＦＩＴＣ標識された実施例１の抽出物が樹状細胞に取り込まれたことを表した、ＦＩＴＣの蛍光強度を指標としたフローサイトメトリー測定の結果を示すグラフである。グラフ上が氷中インキュベーション、グラフ下が３７℃インキュベーションである。
【図８】実施例１の抽出物の抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞の誘導作用を表した、ＦＡＣＳ解析の結果を示すグラフである。
【図９】実施例１の抽出物の投与により、癌細胞移植マウスでの癌組織の体積増加が抑制されることを示すグラフである。
【図１０】ＯＶＡ、ＢＭＤＣ及び実施例１の抽出物の投与により、癌細胞移植マウスでの癌組織の体積増加が抑制されることを示すグラフである。
【図１１】ＯＶＡ、ＢＭＤＣ、実施例１の抽出物を投与した癌細胞移植マウスの癌組織（癌細胞移植後２１日目）の様子を示す写真である。写真は左からコントロール（無処置群）、ＢＭＤＣと実施例１の抽出物、ＢＭＤＣとＯＶＡ、ＯＶＡと実施例１の抽出物、ＢＭＤＣとＯＶＡと実施例１の抽出物をそれぞれ投与したマウスの癌組織である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
北海道産カラマツ（Ｌａｒｉｘ ｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓ）からの溶媒抽出物を含有する免疫バランス調節剤。
【請求項２】
抗感染症用である、請求項１に記載の免疫バランス調節剤。
【請求項３】
抗腫瘍用である、請求項１に記載の免疫バランス調節剤。
【請求項４】
Ｔｈ１系免疫機能強化用である、請求項１に記載の免疫バランス調節剤。
【請求項５】
ＴＮＦα及び又はインターロイキン１２産生促進用である、請求項４に記載の免疫バランス調節剤。
【請求項６】
溶媒が水である、請求項１〜５の何れかに記載の免疫バランス調節剤。
【請求項１】
北海道産カラマツ（Ｌａｒｉｘ ｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓ）からの溶媒抽出物を含有する免疫バランス調節剤。
【請求項２】
抗感染症用である、請求項１に記載の免疫バランス調節剤。
【請求項３】
抗腫瘍用である、請求項１に記載の免疫バランス調節剤。
【請求項４】
Ｔｈ１系免疫機能強化用である、請求項１に記載の免疫バランス調節剤。
【請求項５】
ＴＮＦα及び又はインターロイキン１２産生促進用である、請求項４に記載の免疫バランス調節剤。
【請求項６】
溶媒が水である、請求項１〜５の何れかに記載の免疫バランス調節剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６ａ】
【図６ｂ】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６ａ】
【図６ｂ】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【公開番号】特開２００９−２５６３１０（Ｐ２００９−２５６３１０Ａ）
【公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２８４４４９（Ｐ２００８−２８４４４９）
【出願日】平成２０年１１月５日（２００８．１１．５）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２０年度 文部科学省 委託事業「さっぽろバイオクラスター構想“Ｂｉｏ−Ｓ”」委託研究，産業技術強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５０４１７３４７１）国立大学法人 北海道大学 (971)
【出願人】（５０１１２３５４７）北海道三井化学株式会社 (8)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１１月５日（２００８．１１．５）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２０年度 文部科学省 委託事業「さっぽろバイオクラスター構想“Ｂｉｏ−Ｓ”」委託研究，産業技術強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５０４１７３４７１）国立大学法人 北海道大学 (971)
【出願人】（５０１１２３５４７）北海道三井化学株式会社 (8)
【Ｆターム（参考）】
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